本発明は、標的リガンドに対する第1結合特異性を有する第1免疫グロブリン可変ドメインと、該標的リガンドの受容体に対する第2結合特異性を有する相補的または非相補的免疫グロブリン可変ドメインとを含む二重特異性リガンドを提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的リガンドに特異的な第1 dAbと、該標的リガンドの受容体に特異的な第2 dAbとを含んでなる二重特異性リガンド。
【請求項２】
開いたコンホメーションのリガンドであり、標的リガンドと標的リガンド受容体との両方に同時に結合しうる、請求項1記載の二重特異性リガンド。
【請求項３】
標的リガンドがTNFαである、請求項1または請求項2記載の二重特異性リガンド。
【請求項４】
TNFαに特異的なdAbが、表面プラズモン共鳴による測定で、50nM〜20pMの解離定数（K_d）および5×10^-1〜1×10^-7 S^-1のK_off速度定数でヒトTNFαから解離する、請求項3記載の二重特異性リガンド。
【請求項５】
TNFαに特異的なdAbがVκである、請求項3または請求項4記載の二重特異性リガンド。
【請求項６】
TNFαに特異的なdAbがTAR1-5-19のアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも80％相同な配列を含む、請求項5記載の二重特異性リガンド。
【請求項７】
TNFαに特異的なdAbがTAR1-5のアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも80％相同な配列を含む、請求項5記載の二重特異性リガンド。
【請求項８】
TNFαに特異的なdAbがTAR1-27のアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも80％相同な配列を含む、請求項5記載の二重特異性リガンド。
【請求項９】
標的リガンド受容体がTNF受容体1（p55）である、請求項1〜3のいずれか1項記載の二重特異性リガンド。
【請求項１０】
TNF受容体1（p55）に特異的なdAbが、表面プラズモン共鳴による測定で、50nM〜20pMの解離定数（K_d）および5×10^-1〜1×10^-7 S^-1のK_off速度定数でヒトTNF受容体1から解離する、請求項9記載の二重特異性リガンド。
【請求項１１】
TNF受容体1（p55）に特異的なdAbが、標準的な細胞アッセイにおいて、500nM〜50pMのND50でヒトTNFαまたはTNF受容体1を中和する、請求項10記載の二重特異性リガンド。
【請求項１２】
TNF受容体1（p55）に特異的なdAbが、標準的な細胞アッセイにおいて、100nM以下のND₅₀でTNF受容体1の活性に拮抗し、該dAbが、10μM以下の濃度で、TNF受容体1の活性を該アッセイにおいて5％以下しか作動させない、請求項10または請求項11記載の二重特異性リガンド。
【請求項１３】
TNF受容体1（p55）に特異的なdAbがTAR2h-10のアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも80％相同な配列を含む、請求項10〜12のいずれか1項記載の二重特異性リガンド。
【請求項１４】
TNF受容体1（p55）に特異的なdAbがTAR2h-10のアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも90％相同な配列を含む、請求項10〜12のいずれか1項記載の二重特異性リガンド。
【請求項１５】
TNF受容体1（p55）に特異的なdAbがTAR2h-5のアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも80％相同な配列を含む、請求項10〜12のいずれか1項記載の二重特異性リガンド。
【請求項１６】
TNF受容体1（p55）に特異的なdAbがTAR2h-5のアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも90％相同な配列を含む、請求項10〜12のいずれか1項記載の二重特異性リガンド。
【請求項１７】
TNF受容体1（p55）に特異的なdAbがTAR2h-10-27のアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも80％相同な配列を含む、請求項10〜12のいずれか1項記載の二重特異性リガンド。
【請求項１８】
TNF受容体1（p55）に特異的なdAbがTAR2h-10-27のアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも90％相同な配列を含む、請求項10〜12のいずれか1項記載の二重特異性リガンド。
【請求項１９】
TNFαおよび／またはTNF受容体1（p55）がヒト形態である、請求項3〜18のいずれか1項記載の二重特異性リガンド。
【請求項２０】
1以上のdAbが更に、末端Cys残基を含む、請求項1〜19のいずれか1項記載の二重特異性リガンド。
【請求項２１】
標的リガンドがTNFαであり、標的リガンド受容体がTNF受容体1（p55）である、請求項1または請求項2記載の二重特異性リガンド。
【請求項２２】
TAR1-5-19 V_κドメインまたはそれに対して少なくとも80％相同な配列、およびTAR2h-10-27 V_Hドメインまたはそれに対して少なくとも80％相同な配列を含む、請求項21記載の二重特異性リガンド。
【請求項２３】
TAR1-5-19 V_κドメインおよびTAR2h-10-27 V_Hドメイン、またはそれらのホモログが、結合部位内の相補的ドメインとして配置されている、請求項22記載の二重特異性リガンド。
【請求項２４】
二量体である、請求項1〜23のいずれか1項記載の二重特異性リガンド。
【請求項２５】
三量体である、請求項1〜23のいずれか1項記載の二重特異性リガンド。
【請求項２６】
TNFαに特異的な2つのリガンド、およびTNF受容体1（p55）に特異的な1つのリガンドを含む、請求項23記載の二重特異性リガンド。
【請求項２７】
Fab、F(ab')₂およびIgG免疫グロブリンよりなる群から選ばれる、請求項1〜26のいずれか1項記載の二重特異性リガンド。
【請求項２８】
二重特異性リガンドが、開いたコンホメーションを有し、2以上の標的に同時に結合することが可能であり、二重特異性リガンドが、TAR1-5-19またはそれに対して少なくとも80％相同な配列であるTNFαに特異的な少なくとも1つのdAbを含む、Fab、F(ab')₂およびIgG免疫グロブリンよりなる群から選ばれる二重特異性リガンド。
【請求項２９】
少なくとも1つの更なるdAbを含み、その更なるdAbがV_Hドメインである、請求項28記載の二重特異性リガンド。
【請求項３０】
二重特異性リガンドが、開いたコンホメーションを有し、2以上の標的に同時に結合することが可能であり、二重特異性リガンドが、TAR2h-10-27またはそれに対して少なくとも80％相同な配列であるTNF受容体1（p55）に特異的な少なくとも1つのdAbを含む、Fab、F(ab')₂およびIgG免疫グロブリンよりなる群から選ばれる二重特異性リガンド。
【請求項３１】
少なくとも1つの更なるdAbを含み、その更なるdAbがV_κドメインである、請求項28記載の二重特異性リガンド。
【請求項３２】
更なるdAbが血清アルブミン（SA）に結合する、請求項29または請求項31記載の二重特異性リガンド。
【請求項３３】
血清アルブミン（SA）に特異的なdAbが、表面プラズモン共鳴による測定で、1nM〜500μMの解離定数（K_d）でSAから解離する、請求項32記載の二重特異性リガンド。
【請求項３４】
血清アルブミン（SA）に特異的なdAbが、標準的なリガンド結合アッセイにおいて、1nM〜500μMのIC50でSAに結合する、請求項32または請求項33記載の二重特異性リガンド。
【請求項３５】
血清アルブミン（SA）に特異的なdAbがMSA-16のアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも80％相同な配列を含む、請求項32〜34のいずれか1項記載の二重特異性リガンド。
【請求項３６】
血清アルブミン（SA）に特異的なdAbがMSA-26のアミノ酸配列またはそれに対して少なくとも80％相同な配列を含む、請求項32〜34のいずれか1項記載の二重特異性リガンド。
【請求項３７】
二重特異性リガンドが、開いたコンホメーションを有し、2以上の標的に同時に結合することが可能であり、二重特異性リガンドが、TAR2h-10-27またはそれに対して少なくとも80％相同な配列であるTNF受容体1（p55）に特異的な少なくとも1つのdAb、およびTAR1-5-19またはそれに対して少なくとも80％相同な配列であるTNFαに特異的な少なくとも1つのdAbを含む、Fab、F(ab')₂およびIgG免疫グロブリンよりなる群から選ばれる二重特異性リガンド。
【請求項３８】
汎用フレームワークを含む、請求項27〜37のいずれか1項記載の二重特異性リガンド。
【請求項３９】
汎用フレームワークが、DP47、DP45およびDP38よりなる群から選ばれるV_Hフレームワーク、および／またはDPK9であるV_Lフレームワークを含む、請求項38記載の二重特異性リガンド。
【請求項４０】
一般的リガンドへの結合部位を含む、請求項27〜39のいずれか1項記載の二重特異性リガンド。
【請求項４１】
一般的リガンド結合部位が、プロテインA、プロテインLおよびプロテインGよりなる群から選ばれる、請求項40記載の二重特異性リガンド。
【請求項４２】
請求項27〜41のいずれか1項記載の二重特異性リガンドであって、該リガンドが、ヒト生殖系列抗体遺伝子セグメントによりコードされる対応フレームワーク領域のアミノ酸配列と同じアミノ酸配列を含む1以上のフレームワーク領域を有する可変ドメインを含む、あるいは、該フレームワーク領域の1以上のアミノ酸配列が、ヒト生殖系列抗体遺伝子セグメントによりコードされる対応フレームワーク領域のアミノ酸配列と比較して、合わせて5アミノ酸までの相違を含む、前記二重特異性リガンド。
【請求項４３】
請求項27〜41のいずれか1項記載の二重特異性リガンドであって、該リガンドが可変ドメインを含み、FW1、FW2、FW3およびFW4のアミノ酸配列が、ヒト生殖系列抗体遺伝子セグメントによりコードされる対応フレームワーク領域のアミノ酸配列と同じである、あるいは、FW1、FW2、FW3およびFW4のアミノ酸配列が、該ヒト生殖系列抗体遺伝子セグメントによりコードされる対応フレームワーク領域のアミノ酸配列と比較して、合わせて10アミノ酸までの相違を含有する、前記二重特異性リガンド。
【請求項４４】
請求項42または請求項43記載の二重特異性リガンドであって、該リガンドが、FW1、FW2およびFW3領域を含む抗体可変ドメインを含み、該FW1、FW2およびFW3のアミノ酸配列が、ヒト生殖系列抗体遺伝子セグメントによりコードされる対応フレームワーク領域のアミノ酸配列と同じである、前記二重特異性リガンド。
【請求項４５】
ヒト生殖系列抗体遺伝子セグメントが、DP47、DP45、DP48およびDPK9よりなる群から選ばれる、請求項42〜請求項44のいずれか1項記載の二重特異性リガンド。
【請求項４６】
ラクダ科動物免疫グロブリン可変ドメインではないV_Hドメインを含む、請求項1〜46のいずれか1項記載の二重特異性リガンド。
【請求項４７】
ヒトV_Hドメインと比較してラクダ科動物免疫グロブリン可変ドメインに特異的な1以上のアミノ酸を含有しないV_Hドメインを含む、請求項46記載のリガンド。
【請求項４８】
TAR2h-10-27またはそれに対して少なくとも80％相同な配列であるTNF受容体1（p55）に特異的なdAb単量体dAb。
【請求項４９】
請求項48記載のdAb単量体をコードする核酸。
【請求項５０】
請求項49記載の核酸を含んでなる核酸ベクター。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７−１】

【図１７−２】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９−１】

【図２９−２】

【図３０】

【図３１】

【公表番号】特表２００６−５２３０９０（Ｐ２００６−５２３０９０Ａ）
【公表日】平成１８年１０月１２日（２００６．１０．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−５０９７１７（Ｐ２００５−５０９７１７）
【出願日】平成１５年１２月２４日（２００３．１２．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００３／００５６４６
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０５８８２１
【国際公開日】平成１６年７月１５日（２００４．７．１５）
【出願人】（５０２１９７０４６）ドマンティス　リミテッド (47)
【Ｆターム（参考）】