リン酸アルミニウムを生成するためのプロセス
本発明は、アルミニウムアジュバントＡｌＰＯ４を生成する改良された方法を提供する。一態様において、本発明は、リン酸アルミニウムを生成する方法であって、塩化アルミニウムの溶液と第三リン酸ナトリウムの溶液を混合して、リン酸アルミニウム沈殿物を生成するステップを含み、改良は、リン酸アルミニウム沈殿物を約５０℃〜約７０℃の範囲の温度で沈降させることを含む方法を提供する。別の態様において、本発明は、リン酸アルミニウムを閉鎖系内で生成する方法を対象にする。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
一部のワクチンおよび他の医薬品は、ワクチン抗原の免疫原性を増強し、それによってワクチンをより有効にするように機能するアジュバントと呼ばれる１種または複数の成分を含有する。研究によって、多くのアルミニウム含有ワクチンは、アジュバントなしで製剤された同じワクチンより高くかつ長期の抗体応答を引き出すことがわかった。ワクチンアジュバントとして機能するアルミニウム含有塩（「ミョウバンとも呼ばれる」）には、いくつかのタイプ：（ｉ）リン酸アルミニウムまたはＡｌＰＯ４、（ｉｉ）水酸化アルミニウムまたはＡｌ（ＯＨ）３、および（ｉｉｉ）硫酸アルミニウムカリウムＡｌＫ（ＳＯ４）２がある。各アルミニウム含有アジュバントの有効性は、しばしば特定のワクチンの特性、および製造業者のワクチン調製方法に依存する（非特許文献１）。アジュバントとして機能するために、典型的には、抗原をアルミニウムに吸着させて、抗原を注射部位に維持する必要がある。
【０００２】
米国が認可している小児用アルミニウムアジュバント含有ワクチンとしては、ジフテリア−破傷風−無細胞百日咳（ＤＴａＰ）ワクチン、一部のＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ型結合型（Ｈｉｂ）ワクチン、肺炎球菌結合型ワクチン、Ｂ型肝炎ワクチン、ＤＴａＰとＴｄａｐとＡ型肝炎ワクチンとヒトＰａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓワクチンとの組合せが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０００３】
Ｗｙｅｔｈから市販されているＰｒｅｖｎａｒ（登録商標）は、アジュバントとしてリン酸アルミニウムを含有する結合型肺炎球菌ワクチンである。Ｐｒｅｖｎａｒ（登録商標）の抗原は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ細菌の異なる血清型７種に由来する多糖体の混合物であり、それぞれ担体タンパク質ＣＲＭ１９７に結合している。Ｐｒｅｖｎａｒ（登録商標）は、アルミニウムアジュバントＡｌＰＯ４に吸着させた特異的防御免疫応答を刺激する物質である抗原のコロイド懸濁液を含有する清澄な水性液体として製剤される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｂａｙｌｏｒら、「Ａｌｕｍｉｎｕｍ ｓａｌｔｓ ｉｎ ｖａｃｃｉｎｅｓ−ＵＳ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ」、Ｖａｃｃｉｎｅ、２０巻：Ｓ１８〜２３頁、２００２年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
リン酸アルミニウムアジュバントを生成する方法は記述されているが、より効率的でかつ／または無菌である方法、特に工業規模の方法が当技術分野でまだ求められている。さらに、すでに商業利用されている、例えばＰｒｅｖｎａｒ（登録商標）のリン酸アルミニウムアジュバントと同様の物理的、化学的、および機能的特性を有するリン酸アルミニウムアジュバントを生成する新規方法があれば望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、アルミニウムアジュバントＡｌＰＯ４を生成する改良された方法を提供する。これらの改良された製造方法は、他の方法に比べて効率の向上および／または無菌性の向上によって利益を受け、特に工業規模で有用である。
【０００７】
したがって、一態様において、本発明は、リン酸アルミニウムを生成する方法であって、塩化アルミニウムの溶液と第三リン酸ナトリウムの溶液を混合して、リン酸アルミニウム沈殿物を生成するステップを含み、改良は、リン酸アルミニウム沈殿物を約５０℃〜約７０℃の範囲の温度で沈降させることを含む方法を提供する。
【０００８】
別の態様において、本発明は、リン酸アルミニウムを生成する方法であって、（ｉ）塩化アルミニウムの溶液と第三リン酸ナトリウムの溶液を混合して、リン酸アルミニウム懸濁液および上澄み液を生成するステップと、（ｉｉ）リン酸アルミニウム懸濁液を沈降させて、リン酸アルミニウム沈殿物を生成するステップと、（ｉｉｉ）上澄み液を除去するステップとを含み、混合、沈降、および除去のステップは閉鎖系内で行われる方法を対象にする。
【０００９】
本発明の上記その他の態様は、以下の説明および特許請求の範囲から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ＡｌＰＯ４を生成する方法の流れ図を示す。
【図１Ａ】ＡｌＰＯ４を生成する方法の流れ図を示す。
【図１Ｂ】ＡｌＰＯ４を生成する方法の流れ図を示す。
【図１Ｃ】ＡｌＰＯ４を生成する方法の流れ図を示す。
【図２】ＡｌＰＯ４を生成する改良された方法の流れ図を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、アルミニウムアジュバントＡｌＰＯ４を製造するための改良された方法を提供する。これらの方法は、特に工業規模のＡｌＰＯ４製造に有用である。
【００１２】
図１は、リン酸アルミニウムを生成する方法を示し、まず、塩化アルミニウム（ＡｌＣｌ３）と第三リン酸ナトリウム（Ｎａ３ＰＯ４）が、別々に調製される。塩化アルミニウムは、塩化アルミニウム六水和物の形とすることができる。次いで、これらの試薬を製剤容器に無菌的に移送し、水（例えば、Ｗａｔｅｒ−ｆｏｒ−Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（商標）またはＷＦＩ（商標））と組み合わせる。これらの試薬間の反応によって、ＡｌＰＯ４懸濁液が生成する。次いで、懸濁液を２５℃で沈降用ドラムに移し込む。このプロセスの沈降時間（すなわち、ドラム中でＡｌＰＯ４沈殿物の沈降が可能になるのに要する時間）は約７〜１０日であり、これは全プロセスで最も遅いステップである。沈降後、上澄み液を各ドラムから除去し、沈殿したＡｌＰＯ４を製剤容器に移し込み、定置滅菌（例えば、≧１２１℃、４５分）およびｐＨ調整を行う。次いで、最終ＡｌＰＯ４を貯蔵用ドラムに移し込む。工業規模における本方法の全バッチサイクル時間は、約１０〜１２日である。さらに、本方法の開かれた特性では、複数の無菌操作を清浄な空気環境（例えば、クラス１００）で行う必要がある。これはコストがかかり、かつ無菌性試験も必要とする。
【００１３】
図１に示す方法の効率は、とりわけ沈降ステップをより高い温度で行うことによって大幅に改善されている。図２に示す改良された方法では、塩化アルミニウム、第三リン酸ナトリウム、および水を混合して、ＡｌＰＯ４懸濁液を生成した後、懸濁液を約５０℃〜約７０℃（例えば、６０℃）で沈降させる。これらのより高い温度での沈降時間は、約７〜１０日から約２〜５日に短縮される。
【００１４】
図１の方法に比べて別の改良は、プロセスステップのすべてを閉鎖系内で行うものである。これには、（例えば、細菌などによる）汚染のリスクを低減し、それによって最終生成物の無菌性保証を高め、かつ無菌性試験の必要性を低減する利点がある。したがって、図２において、（例えば、浸漬用管を使用して）上澄み液を製剤容器から除去し、（まだ同じ反応容器に）残存しているＡｌＰＯ４懸濁液を定置滅菌（例えば、≧１２１．１℃、３０分）した後、ｐＨを調整する。次いで、最終ＡｌＰＯ４生成物を貯蔵用ドラムに移し込むことができる。工業規模における本方法の全バッチサイクル時間は、約３〜６日（すなわち、図１の方法のサイクル時間の半分）である。サイクル時間の短縮によって、効率が促進される。表２では、図１と２に示した方法間の相違点を並列に並べて比較する。
【００１５】
幾分かはこれらの知見に基づいて、本発明は、リン酸アルミニウムを生成する方法であって、塩化アルミニウムの溶液と第三リン酸ナトリウムの溶液を混合して、リン酸アルミニウム沈殿物を生成するステップを含み、改良は、リン酸アルミニウム沈殿物を約５０℃〜約７０℃の範囲の温度で沈降させることを含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、改良は、リン酸アルミニウム沈殿物を約５５℃〜約６５℃の範囲の温度で沈降させることを含む。別の実施形態において、改良は、リン酸アルミニウム沈殿物を約６２℃の温度で沈降させることを含む。さらに別の実施形態において、改良は、リン酸アルミニウム沈殿物を約６０℃の温度で沈降させることを含む。
【００１６】
上述されたように、これらの改良は、リン酸アルミニウムの沈降時間を大幅にかつ予想外に短縮する。例えば、いくつかの実施形態において、沈降ステップは、より低い温度での約７〜１０日間に比べて約２〜５日間で行うことができる。実施形態の一組においては、沈降ステップは、約２〜４日間、例えば約２〜３日間または約３〜４日間で行うことができる。沈降ステップは、これらの範囲内で必要に応じて長く、またはより長い（例えば、５日以上）もしくはより短い（例えば、２日未満）期間でさえ行うことができることを理解されたい。より長い沈降期間は、より短い沈降期間に比べて、一般に収率が高くなる。しかし、製造プロセス全体の時間が増加する結果として、効率とのトレードオフも存在する。したがって、最適の沈降時間は、両因子を考慮に入れる必要があり、正確な沈降温度にも依存する。
【００１７】
別の態様において、本発明は、閉鎖系内でリン酸アルミニウムを生成する方法を対象にする。閉鎖系を使用すると、プロセスの無菌性保証が大幅に改善される。これによって、実施する必要がある無菌性試験の数は低減され、かつ清浄な空気環境内で実施するべきプロセスはもはや必要とされないので、プロセス全体がより効率的になる。本明細書では、「閉鎖系」という用語は、１個または複数の容器の内部に入っている反応混合物の外部環境（例えば、空気、酸素、微生物など）への曝露を低減または防止している系を意味する。この態様によれば、本発明の方法は、（ｉ）塩化アルミニウムの溶液と第三リン酸ナトリウムの溶液を混合して、リン酸アルミニウム懸濁液および上澄み液を生成するステップと、（ｉｉ）リン酸アルミニウム懸濁液を沈降させて、リン酸アルミニウム沈殿物を生成するステップと、（ｉｉｉ）上澄み液を除去するステップとを含み、混合、沈降、および除去のステップは閉鎖系内で行われる。
【００１８】
いくつかの実施形態において、上記の方法の混合ステップでは、第三リン酸ナトリウムの溶液を塩化アルミニウムの溶液に添加する。典型的には、第三リン酸ナトリウムの溶液を、ｐＨが約５．０〜約５．４の範囲（すなわち、約５．２±０．２）になるまで塩化アルミニウムの溶液に添加する。いくつかの実施形態において、第三リン酸ナトリウムの溶液を、ｐＨが約５．１〜約５．３の範囲になるまで塩化アルミニウムの溶液に添加する。
【００１９】
いくつかの実施形態において、上記の方法の混合ステップは、約２０℃〜約３０℃の範囲の温度で行われる。いくつかの実施形態において、混合ステップは約２５℃の温度で行われる。
【００２０】
いくつかの実施形態において、上記の方法の混合ステップは、約１５０ｒｐｍ〜約３５０ｒｐｍで回転するインペラーで、塩化アルミニウムの溶液と第三リン酸ナトリウムの溶液を混合することを含む。いくつかの実施形態において、上記の方法の混合ステップは、約２００ｒｐｍ〜約３００ｒｐｍで回転するインペラーで、塩化アルミニウムの溶液と第三リン酸ナトリウムの溶液を混合することを含む。さらに他の実施形態において、上記の方法の混合ステップは、約２５０ｒｐｍで回転するインペラーで、塩化アルミニウムの溶液と第三リン酸ナトリウムの溶液を混合することを含む。
【００２１】
いくつかの実施形態において、上記の方法の沈降ステップは、約５０℃〜約７０℃の範囲の温度で、すなわち本発明の第１の態様に記載されているように行われる。いくつかの実施形態において、上記の方法の沈降ステップは、約５５℃〜約６５℃の範囲の温度で行われる。別の実施形態において、沈降ステップは約６２℃の温度で行われる。さらに他の実施形態において、沈降ステップは約６０℃の温度で行われる。
【００２２】
いくつかの実施形態において、沈降ステップは、約２〜５日間で行うことができる。例えば、沈降ステップは、約２〜４日間、例えば約２〜３日間または約３〜４日間で行うことができる。沈降ステップは、これらの範囲内で必要に応じて長く、またはより長い（例えば、５日以上）もしくはより短い（例えば、２日未満）期間でさえ行うことができることを理解されたい。
【００２３】
いくつかの実施形態において、除去ステップは、上澄み液をデカンテーションすることを含む。いくつかの実施形態において、除去ステップは、浸漬用管を用いて、上澄み液を除去することを含む。
【００２４】
いくつかの実施形態において、上記の方法は、リン酸アルミニウム沈殿物を無菌化するステップをさらに含み、混合、沈降、除去、および無菌化のステップはすべて、閉鎖系内で行われる。いくつかの実施形態において、無菌化ステップは、リン酸アルミニウム沈殿物を約１１０℃を超える温度に加熱することを含む。いくつかの実施形態において、無菌化ステップは、リン酸アルミニウム沈殿物を約１２１℃を超える温度に加熱することを含む。
【００２５】
いくつかの実施形態において、上記の方法は、リン酸アルミニウム沈殿物のｐＨを調整するステップをさらに含み、混合、沈降、除去、無菌化、および調整のステップはすべて、閉鎖系内で行われる。いくつかの実施形態において、調整ステップは、リン酸アルミニウム沈殿物のｐＨを約５．６〜約６．０の範囲になるように調整することを含む。いくつかの実施形態において、調整ステップは、リン酸アルミニウム沈殿物のｐＨを約５．７〜約６．０の範囲になるように調整することを含む。いくつかの実施形態において、調整ステップは、リン酸アルミニウム沈殿物のｐＨを約５．８〜約６．０の範囲になるように調整することを含む。いくつかの実施形態において、調整ステップは、リン酸アルミニウム沈殿物のｐＨを約５．９〜約６．０の範囲になるように調整することを含む。
【００２６】
本発明の方法を使用して、種々の濃度のリン酸アルミニウムを生成することができる。しかし、いくつかの実施形態において、上記の混合ステップ後のリン酸アルミニウムの濃度は約９．０〜１６．５ｍｇ／ｍｌの範囲である。
【００２７】
いくつかの実施形態において、上記のｐＨを調整するステップの後に、リン酸アルミニウム沈殿物は、約３．０μｍ〜約９．０μｍの範囲、または約４．５μｍ〜約６．５μｍの範囲のＤ［ｖ，０．５］（具体的なサイズ分布値の定義は、下記の実施例１に記載する）を有するサイズ分布の粒子を含む。いくつかの実施形態において、上記のｐＨを調整するステップの後に、リン酸アルミニウム沈殿物は、約１．５μｍを超える、または約２．０μｍを超えるＤ［ｖ，０．１］を有するサイズ分布の粒子を含む。いくつかの実施形態において、上記のｐＨを調整するステップの後に、リン酸アルミニウム沈殿物は、約２５μｍ未満、約２４μｍ未満、約２３μｍ未満、約２２μｍ未満、約２１μｍ未満、または約２０μｍ未満のＤ［ｖ，０．９］を有するサイズ分布の粒子を含む。
【００２８】
以下の実施例を参照して、本発明をさらに具体的に説明する。しかし、本発明は、決してこれらの実施例によって限定されるものではないと理解されたい。
【実施例】
【００２９】
（実施例１）
系／プロセスの説明
この実施例は、図２に示すものなど本明細書に記載する方法のいくつかを行うための系およびプロセスの例を説明する。この実施例では、ＡｌＰＯ４の製造プロセスの調製およびバッチングは、Ｍｅｄｉａ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（ＭＰＳまたはＭｅｄｉａ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｓｋｉｄ）によって制御される。ＭＰＳは、３個のバッチング容器（５０Ｌ、２００Ｌ、および８００Ｌ）、フィルターハウジング、およびサニタリーコネクションを備えたパイピングからなる。製造プロセスでは、２００Ｌ（Ｖ１２）および８００Ｌ（Ｖ１３）の両方の容器を利用する。それによって、ＡｌＰＯ４を８００Ｌ（全容積）のバッチで生成し、３５０Ｋｇのリン酸アルミニウム沈殿物を得る。最終沈殿物を５０Ｌのドラムにダウンロードする。
【００３０】
このプロセスで使用する原材料には、下記が含まれた。
・第三リン酸ナトリウム（２０．４Ｋｇ）
・ＷＦＩ（商標）（第三リン酸ナトリウムを溶解するため）（１０７．４Ｌ）
・塩化アルミニウム六水和物（１０．１Ｋｇ）
・ＷＦＩ（商標）（塩化アルミニウム六水和物を溶解するため）（９１．６Ｌ）
・５Ｎ 水酸化ナトリウム（ｐＨ調整用）
プロセスの第１のステップは、２０．４Ｋｇの第三リン酸ナトリウムを原材料保持容器に計量し、別にしておくことであった。次に、１０．１Ｋｇの塩化アルミニウム六水和物を原材料保持容器に計量し、別にしておいた。
【００３１】
リン酸アルミニウムの自動化処方を開始し、系に圧力試験を施した。次いで、Ｖ１２容器、Ｖ１３容器、および連結した移送ラインをＷＦＩ（商標）で予備すすぎした。ＷＦＩ（商標）ですすいだ後、粒子制御フィルターを、Ｖ１２とＶ１３の間の移送ラインの「濾過側」と「清澄側」の両側にインラインで配置した。バルクをサンプリングする前に、Ｃ−Ｆｌｅｘを備えた予め無菌化したサンプルポートをＶ１３容器に連結した。
【００３２】
次いで、系に別の圧力保持試験を施した。圧力保持の終了時に、系を清浄な蒸気でフラッシュした。蒸気でフラッシュした後、予め設置したフィルターを合計５０ＬのＷＦＩでフラッシュした。
【００３３】
次いで、目標である１６２．０ＬのＷＦＩをＶ１２に添加した。次いで、ＷＦＩをＶ１３に移送した。さらに、１００ＬのＷＦＩをＶ１２に添加し、次いでＶ１３に移送した。最終の臨界反応温度２５℃をＶ１３で確立した。
【００３４】
目標である６３．０ＬのＷＦＩをＶ１２容器に添加した。Ｖ１２に連結した撹拌装置を始動し、目標である３５０ｒｐｍに制御した。予め計量した塩化アルミニウムを、（溶解温度である３５〜４５℃に到達した後）Ｖ１２に添加した。最初に塩化アルミニウムが溶解した後、Ｖ１２を目標である９１．６ＬのＷＦＩまで引き上げ、５〜３５分間混合した後、塩化アルミニウムが溶解していることを肉眼で検証した。次いで、Ｖ１３容器では、ＷＦＩの撹拌を設定値２５０ｒｐｍで開始した。次いで、塩化アルミニウムを、Ｖ１２からＶ１３に移送した。
【００３５】
目標である１５０ＬのＷＦＩをＶ１２に添加した。次いで、ＷＦＩをＶ１３に移送し、さらに１５０ＬのＷＦＩをＶ１２に添加し、再びＶ１３に移送した。最終の臨界反応温度２５℃をＶ１３で確立した。
【００３６】
目標である７０ＬのＷＦＩをＶ１２に添加した。Ｖ１２に連結した撹拌装置を始動し、目標である３５０ｒｐｍに制御した。予め計量した第三リン酸ナトリウムを、（溶解温度である３５〜４５℃に到達した後）Ｖ１２に添加した。最初に第三リン酸ナトリウムが溶解した後、Ｖ１２を目標である１０７．４ＬのＷＦＩまで引き上げ、５〜３５分間混合した後、第三リン酸ナトリウムが溶解していることを肉眼で検証した。
【００３７】
次いで、第三リン酸ナトリウムをＶ１２からＶ１３に移送し、目標のｐＨ５．２０が実現するまで塩化アルミニウムと混合した。１時間後、第三リン酸ナトリウムを添加することによって、ｐＨを再び目標のｐＨ５．２０に調整した。ｐＨが安定したら、撹拌装置を１５０ｒｐｍに減速し、温度設定値を６０℃に変更した。１時間混合した後、撹拌装置を止めた。残留している第三リン酸ナトリウムをＶ１２から排出し、次いで粒子フィルターを取り外し、ＣＩＰキャップに取り換え、Ｖ１２および移送ラインにＣＩＰ手順を施した。
【００３８】
リン酸アルミニウムは、Ｖ１３中、目標温度の６０℃で浸漬用管の下に沈降した。（浸漬用管の下に）沈降が終了したら、上澄み液をＶ１３から浸漬用管によってデカンテーションする。次いで、Ｖ１３の試料用バルブを、≧１２１．１℃で１５分間手動で無菌化した。試料用バルブを無菌化し、６０℃未満に冷却したら、２５ｍＬの生物汚染試料２個を採取した。
【００３９】
次いで、Ｖ１３中のリン酸アルミニウムを≧１２１．１℃で３０分間無菌化し、続いて塩基添加ラインの無菌化（≧１２１．１℃の温度で１５分）を行った。無菌の連結装置を使用して、５Ｎ ＮａＯＨの１Ｌビンを塩基添加ラインに連結した。
【００４０】
リン酸アルミニウムが目標温度の２５℃に冷却したら、リン酸アルミニウムのｐＨを目標である５．９５に調整した。予め清浄および無菌化した５０Ｌのドラムを１６本まで、それぞれの充填ステーションの位置に連結した。
【００４１】
次いで、移送ラインを≧１２１．１℃で１５分間無菌化した。次いで、Ｖ１３の試料用バルブを≧１２１．１℃で１５分間無菌化した。試料用バルブを無菌化し、６０℃未満に冷却したら、粒径、ｐＨ、アルミニウム濃度、および無菌性のために、３０ｍＬのバルク試料を２個採取した。
【００４２】
試料を採取した後、リン酸アルミニウムを５０Ｌのドラムにダウンロードした。ダウンロードが終了したら、Ｖ１３および移送ラインに完全な化学的ＣＩＰを施した。次いで、アルミニウム濃度および無菌性のために、５０Ｌのドラムのすべてから試料を採取した（しかし、無菌性のためには、実際には最初と最後のドラムだけから試料を採取した）。磁気式安定器を各ドラムに固定し、ドラムを２〜８℃の冷蔵室で貯蔵した。
【００４３】
（実施例２）
ＡｌＰＯ４の物理的、化学的、および機能的特性のアッセイ
図１のプロセスに従って生成したＡｌＰＯ４ ３ロット、および図２（および実施例１）のプロセスに従って生成した材料３ロットを分析して、両方のプロセスに従って生成した材料が類似していることを確実にした。使用するアッセイは、ＡｌＰＯ４の物理的、化学的、および機能的特性に基づいて選択した。これらのキャラクタリゼーション試験を、放出試験に加えて行い、すべてのロットが、ＡｌＰＯ４の放出基準を満たした。同等性試験のデータを以下の通りまとめる：
粒径分析：バルクのアジュバントおよび製剤したワクチンの粒径分析は、Ｍａｌｖｅｒｎ粒径分析器（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ、Ｓｅｒｉａｌ ２．１５）を用いて、レーザー光散乱によって行った。溶媒（例えば、イソプロパノール）中の粉末の懸濁液を低角レーザー光線で測定し、粒径分布を算出した。体積メジアン径Ｄ［ｖ，０．５］は、分布の５０％がメジアンを超え、５０％がメジアン未満である直径である。好ましくは、平均粒径の２つの測定は、相対的に５％を超えて異なるべきでない。２つの測定曲線の形状も、好ましくは同じであるべきである。Ｄ［ｖ，０．９］は、体積分布の９０％がこの値未満である直径である。Ｄ［ｖ，０．１］は、体積分布の１０％がこの値未満である直径である。スパンは、１０％、５０％、および９０％の分位値に基づく分布の幅である（スパン＝｛Ｄ［ｖ，０．９］−Ｄ［ｖ，０．１］｝／Ｄ［ｖ，０．５］）。各測定に先立って、２μｍおよび１０μｍを表す既知の分子サイズのビーズを使用することによって、機器を標準化した。両方のプロセスで作製したＡｌＰＯ４の粒径（Ｐｒｅｖｎａｒ（登録商標）への製剤前およびその後）は類似し、表１に列挙する仕様の範囲内であることが確定した。
【００４４】
【表１】
タンパク質結合アッセイ：アルミニウムペレットと接触させる前とアルミニウムペレットで処理した後に全タンパク質濃度を測定することによって、ＡｌＰＯ４に結合しているタンパク質（％）を決定した。生理食塩水に再懸濁した後、ペレット中のタンパク質含有量を測定した。担体タンパク質ＣＲＭ１９７の平均結合率（％）について、図１のプロセスによるＡｌＰＯ４で製剤した場合（９７．５±０．８）と図２のプロセスによるＡｌＰＯ４で製剤した場合（９６．１±１．４）は類似していた。Ｐｒｅｖｎａｒ（登録商標）の平均結合率（％）についても、図１のプロセスによるＡｌＰＯ４で製剤した場合（９１．５±１．６）と図２のプロセスによるＡｌＰＯ４で製剤した場合（９１．７±１．９）は類似していた。
【００４５】
比濁アッセイ：アルミニウムペレットを可溶化するための方法としてクエン酸化を使用して、ワクチンＰｒｅｖｎａｒ（登録商標）を比濁法で、抗原性について分析した。以前の研究に基づいて、複合多糖だけがアルミニウムに結合し、遊離多糖または活性化糖は結合しないことが知られている。抗原性がペレットと関連していることは、多糖が複合化していることを表す。比濁測定は、抗体を用いて、Ｂｅｃｋｍａｎ Ａｒｒａｙ ３６０ Ｓｙｓｔｅｍで実施し、ウサギにおいて産生された。比濁法を用いて、個々のＰｒｅｖｎａｒ（登録商標）コンジュゲートのＡｌＰＯ４への結合を測定し、図１および２のプロセスを使用して作製した材料に関するデータは、類似していることがわかった。
【００４６】
ゼータ電位／電気泳動移動度：ゼータサイザーを使用して、ゼータ電位および電気泳動移動度を決定した。図１のプロセスによるＡｌＰＯ４のゼータ電位は、平均して４．７±０．２ｍＶ（５．１±０．１、３．５±０．２、および５．５±０．２ｍＶ）であった。図２のプロセスによるＡｌＰＯ４のゼータ電位は、平均して３．３±０．３ｍＶ（３．６±０．３、２．６±０．４、および３．７±０．１ｍＶ）であった。
【００４７】
沈降時間：分光光度計（Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＵＶ１６０−ＩＰＣ）で、波長６４５ｎｍにおいて、光学密度の変化を３０分間にわたって、測定することによって、沈降時間を監視した。図１のプロセスによるＡｌＰＯ４の沈降時間／速度（Ａ６４５／分）は、０．０２４、０．０２５、および０．０２３であった。図２のプロセスによるＡｌＰＯ４の沈降時間／速度（Ａ６４５／分）は、０．０２７、０．０２６、および０．０２６であった。
【００４８】
表２では、図１および２の方法で使用するパラメータの一部を比較する。示されたように、リン酸アルミニウム沈殿物の沈降時間は、沈降温度を２５℃から６０℃に上げることによって、約７〜１０日から約２〜５日に短縮された。これは、効率が大幅に改善されたことを意味する。実施例１に記載したように、両方の方法で生成したリン酸アルミニウム試料は、同様の物理的、化学的、および機能的特性を有する。
【００４９】
【表２】
（実施例３）
培地シミュレーション
トリプシンダイズブロス（ＴＳＢ）を使用して、実施例１のＭｅｄｉａ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｓｋｉｄ（ＭＰＳ）について、培地シミュレーション試験を行った。これらの試験は、ＭＰＳの無菌化操作が無菌性を維持し、無菌溶液の製造、ｐＨ調整、サンプリング、次いでドラムへの移送時に、微生物進入から保護することを極めて確実に実証した。各培地試験トライアルは、無菌化、５Ｎ水酸化ナトリウムを使用した無菌的ｐＨ調整、およびドラム１６本へのＴＳＢの無菌的移送からなった。無菌的移送は、≧１０時間無菌保持した後に起こる。無菌保持は、無菌化操作を行った（１１時間）後に系を保持することができる全時間量を確立した。ＴＳＢを、充填ステーションの位置１６か所すべてから１Ｌビンに回収し、完全なインキュベーションにかけた。位置＃１および＃１６から採取した試料は、溶液をドラムに移送するプロセス全体を代表する。実施例１のＭｅｄｉａ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｓｋｉｄの閉鎖系設計およびこの試験の好結果のため、無菌性試験は、図１に示す方法で必要とされたように、商業生産時に、各ドラムについてではなく、最初と最後のドラムについて行うだけでよい。
【００５０】
均等形態
本明細書に引用した資料（特許および特許出願が挙げられるが、これらに限定されるものではない）は、このような文献および同様の資料の形式にかかわらずすべて、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。組み込まれた文献および同様の資料のうちの１つまたは複数が、本明細書（定義した用語、用語の用い方、記載した技法などが挙げられるが、これらに限定されるものではない）と異なるかまたは矛盾する場合、本願が優先する。
【００５１】
本明細書で使用したセクションの見出しは、構成上の目的にすぎず、決して記載した対象を限定するものと解釈されるべきでない。
【００５２】
本発明を様々な実施形態および実施例と共に説明してきたが、本発明をこのような実施形態または実施例に限定するものではない。これに反して、本発明は、当業者によって理解されるような様々な代替形態、修正形態、および均等形態を包含する。
【００５３】
具体的には、特定の例示的実施形態を参照して、本発明を示し、かつ説明してきたが、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、形態および詳細について様々に変更を行うことができると理解されたい。したがって、本発明の範囲および趣旨に入るすべての実施形態、およびその均等形態は、特許請求されるよう意図されている。本発明の特許請求の範囲および明細書は、別段の記述のない限り、要素の記載順序に限定するものと理解されるべきでない。
【背景技術】
【０００１】
一部のワクチンおよび他の医薬品は、ワクチン抗原の免疫原性を増強し、それによってワクチンをより有効にするように機能するアジュバントと呼ばれる１種または複数の成分を含有する。研究によって、多くのアルミニウム含有ワクチンは、アジュバントなしで製剤された同じワクチンより高くかつ長期の抗体応答を引き出すことがわかった。ワクチンアジュバントとして機能するアルミニウム含有塩（「ミョウバンとも呼ばれる」）には、いくつかのタイプ：（ｉ）リン酸アルミニウムまたはＡｌＰＯ４、（ｉｉ）水酸化アルミニウムまたはＡｌ（ＯＨ）３、および（ｉｉｉ）硫酸アルミニウムカリウムＡｌＫ（ＳＯ４）２がある。各アルミニウム含有アジュバントの有効性は、しばしば特定のワクチンの特性、および製造業者のワクチン調製方法に依存する（非特許文献１）。アジュバントとして機能するために、典型的には、抗原をアルミニウムに吸着させて、抗原を注射部位に維持する必要がある。
【０００２】
米国が認可している小児用アルミニウムアジュバント含有ワクチンとしては、ジフテリア−破傷風−無細胞百日咳（ＤＴａＰ）ワクチン、一部のＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ型結合型（Ｈｉｂ）ワクチン、肺炎球菌結合型ワクチン、Ｂ型肝炎ワクチン、ＤＴａＰとＴｄａｐとＡ型肝炎ワクチンとヒトＰａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓワクチンとの組合せが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０００３】
Ｗｙｅｔｈから市販されているＰｒｅｖｎａｒ（登録商標）は、アジュバントとしてリン酸アルミニウムを含有する結合型肺炎球菌ワクチンである。Ｐｒｅｖｎａｒ（登録商標）の抗原は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ細菌の異なる血清型７種に由来する多糖体の混合物であり、それぞれ担体タンパク質ＣＲＭ１９７に結合している。Ｐｒｅｖｎａｒ（登録商標）は、アルミニウムアジュバントＡｌＰＯ４に吸着させた特異的防御免疫応答を刺激する物質である抗原のコロイド懸濁液を含有する清澄な水性液体として製剤される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｂａｙｌｏｒら、「Ａｌｕｍｉｎｕｍ ｓａｌｔｓ ｉｎ ｖａｃｃｉｎｅｓ−ＵＳ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ」、Ｖａｃｃｉｎｅ、２０巻：Ｓ１８〜２３頁、２００２年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
リン酸アルミニウムアジュバントを生成する方法は記述されているが、より効率的でかつ／または無菌である方法、特に工業規模の方法が当技術分野でまだ求められている。さらに、すでに商業利用されている、例えばＰｒｅｖｎａｒ（登録商標）のリン酸アルミニウムアジュバントと同様の物理的、化学的、および機能的特性を有するリン酸アルミニウムアジュバントを生成する新規方法があれば望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、アルミニウムアジュバントＡｌＰＯ４を生成する改良された方法を提供する。これらの改良された製造方法は、他の方法に比べて効率の向上および／または無菌性の向上によって利益を受け、特に工業規模で有用である。
【０００７】
したがって、一態様において、本発明は、リン酸アルミニウムを生成する方法であって、塩化アルミニウムの溶液と第三リン酸ナトリウムの溶液を混合して、リン酸アルミニウム沈殿物を生成するステップを含み、改良は、リン酸アルミニウム沈殿物を約５０℃〜約７０℃の範囲の温度で沈降させることを含む方法を提供する。
【０００８】
別の態様において、本発明は、リン酸アルミニウムを生成する方法であって、（ｉ）塩化アルミニウムの溶液と第三リン酸ナトリウムの溶液を混合して、リン酸アルミニウム懸濁液および上澄み液を生成するステップと、（ｉｉ）リン酸アルミニウム懸濁液を沈降させて、リン酸アルミニウム沈殿物を生成するステップと、（ｉｉｉ）上澄み液を除去するステップとを含み、混合、沈降、および除去のステップは閉鎖系内で行われる方法を対象にする。
【０００９】
本発明の上記その他の態様は、以下の説明および特許請求の範囲から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ＡｌＰＯ４を生成する方法の流れ図を示す。
【図１Ａ】ＡｌＰＯ４を生成する方法の流れ図を示す。
【図１Ｂ】ＡｌＰＯ４を生成する方法の流れ図を示す。
【図１Ｃ】ＡｌＰＯ４を生成する方法の流れ図を示す。
【図２】ＡｌＰＯ４を生成する改良された方法の流れ図を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、アルミニウムアジュバントＡｌＰＯ４を製造するための改良された方法を提供する。これらの方法は、特に工業規模のＡｌＰＯ４製造に有用である。
【００１２】
図１は、リン酸アルミニウムを生成する方法を示し、まず、塩化アルミニウム（ＡｌＣｌ３）と第三リン酸ナトリウム（Ｎａ３ＰＯ４）が、別々に調製される。塩化アルミニウムは、塩化アルミニウム六水和物の形とすることができる。次いで、これらの試薬を製剤容器に無菌的に移送し、水（例えば、Ｗａｔｅｒ−ｆｏｒ−Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（商標）またはＷＦＩ（商標））と組み合わせる。これらの試薬間の反応によって、ＡｌＰＯ４懸濁液が生成する。次いで、懸濁液を２５℃で沈降用ドラムに移し込む。このプロセスの沈降時間（すなわち、ドラム中でＡｌＰＯ４沈殿物の沈降が可能になるのに要する時間）は約７〜１０日であり、これは全プロセスで最も遅いステップである。沈降後、上澄み液を各ドラムから除去し、沈殿したＡｌＰＯ４を製剤容器に移し込み、定置滅菌（例えば、≧１２１℃、４５分）およびｐＨ調整を行う。次いで、最終ＡｌＰＯ４を貯蔵用ドラムに移し込む。工業規模における本方法の全バッチサイクル時間は、約１０〜１２日である。さらに、本方法の開かれた特性では、複数の無菌操作を清浄な空気環境（例えば、クラス１００）で行う必要がある。これはコストがかかり、かつ無菌性試験も必要とする。
【００１３】
図１に示す方法の効率は、とりわけ沈降ステップをより高い温度で行うことによって大幅に改善されている。図２に示す改良された方法では、塩化アルミニウム、第三リン酸ナトリウム、および水を混合して、ＡｌＰＯ４懸濁液を生成した後、懸濁液を約５０℃〜約７０℃（例えば、６０℃）で沈降させる。これらのより高い温度での沈降時間は、約７〜１０日から約２〜５日に短縮される。
【００１４】
図１の方法に比べて別の改良は、プロセスステップのすべてを閉鎖系内で行うものである。これには、（例えば、細菌などによる）汚染のリスクを低減し、それによって最終生成物の無菌性保証を高め、かつ無菌性試験の必要性を低減する利点がある。したがって、図２において、（例えば、浸漬用管を使用して）上澄み液を製剤容器から除去し、（まだ同じ反応容器に）残存しているＡｌＰＯ４懸濁液を定置滅菌（例えば、≧１２１．１℃、３０分）した後、ｐＨを調整する。次いで、最終ＡｌＰＯ４生成物を貯蔵用ドラムに移し込むことができる。工業規模における本方法の全バッチサイクル時間は、約３〜６日（すなわち、図１の方法のサイクル時間の半分）である。サイクル時間の短縮によって、効率が促進される。表２では、図１と２に示した方法間の相違点を並列に並べて比較する。
【００１５】
幾分かはこれらの知見に基づいて、本発明は、リン酸アルミニウムを生成する方法であって、塩化アルミニウムの溶液と第三リン酸ナトリウムの溶液を混合して、リン酸アルミニウム沈殿物を生成するステップを含み、改良は、リン酸アルミニウム沈殿物を約５０℃〜約７０℃の範囲の温度で沈降させることを含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、改良は、リン酸アルミニウム沈殿物を約５５℃〜約６５℃の範囲の温度で沈降させることを含む。別の実施形態において、改良は、リン酸アルミニウム沈殿物を約６２℃の温度で沈降させることを含む。さらに別の実施形態において、改良は、リン酸アルミニウム沈殿物を約６０℃の温度で沈降させることを含む。
【００１６】
上述されたように、これらの改良は、リン酸アルミニウムの沈降時間を大幅にかつ予想外に短縮する。例えば、いくつかの実施形態において、沈降ステップは、より低い温度での約７〜１０日間に比べて約２〜５日間で行うことができる。実施形態の一組においては、沈降ステップは、約２〜４日間、例えば約２〜３日間または約３〜４日間で行うことができる。沈降ステップは、これらの範囲内で必要に応じて長く、またはより長い（例えば、５日以上）もしくはより短い（例えば、２日未満）期間でさえ行うことができることを理解されたい。より長い沈降期間は、より短い沈降期間に比べて、一般に収率が高くなる。しかし、製造プロセス全体の時間が増加する結果として、効率とのトレードオフも存在する。したがって、最適の沈降時間は、両因子を考慮に入れる必要があり、正確な沈降温度にも依存する。
【００１７】
別の態様において、本発明は、閉鎖系内でリン酸アルミニウムを生成する方法を対象にする。閉鎖系を使用すると、プロセスの無菌性保証が大幅に改善される。これによって、実施する必要がある無菌性試験の数は低減され、かつ清浄な空気環境内で実施するべきプロセスはもはや必要とされないので、プロセス全体がより効率的になる。本明細書では、「閉鎖系」という用語は、１個または複数の容器の内部に入っている反応混合物の外部環境（例えば、空気、酸素、微生物など）への曝露を低減または防止している系を意味する。この態様によれば、本発明の方法は、（ｉ）塩化アルミニウムの溶液と第三リン酸ナトリウムの溶液を混合して、リン酸アルミニウム懸濁液および上澄み液を生成するステップと、（ｉｉ）リン酸アルミニウム懸濁液を沈降させて、リン酸アルミニウム沈殿物を生成するステップと、（ｉｉｉ）上澄み液を除去するステップとを含み、混合、沈降、および除去のステップは閉鎖系内で行われる。
【００１８】
いくつかの実施形態において、上記の方法の混合ステップでは、第三リン酸ナトリウムの溶液を塩化アルミニウムの溶液に添加する。典型的には、第三リン酸ナトリウムの溶液を、ｐＨが約５．０〜約５．４の範囲（すなわち、約５．２±０．２）になるまで塩化アルミニウムの溶液に添加する。いくつかの実施形態において、第三リン酸ナトリウムの溶液を、ｐＨが約５．１〜約５．３の範囲になるまで塩化アルミニウムの溶液に添加する。
【００１９】
いくつかの実施形態において、上記の方法の混合ステップは、約２０℃〜約３０℃の範囲の温度で行われる。いくつかの実施形態において、混合ステップは約２５℃の温度で行われる。
【００２０】
いくつかの実施形態において、上記の方法の混合ステップは、約１５０ｒｐｍ〜約３５０ｒｐｍで回転するインペラーで、塩化アルミニウムの溶液と第三リン酸ナトリウムの溶液を混合することを含む。いくつかの実施形態において、上記の方法の混合ステップは、約２００ｒｐｍ〜約３００ｒｐｍで回転するインペラーで、塩化アルミニウムの溶液と第三リン酸ナトリウムの溶液を混合することを含む。さらに他の実施形態において、上記の方法の混合ステップは、約２５０ｒｐｍで回転するインペラーで、塩化アルミニウムの溶液と第三リン酸ナトリウムの溶液を混合することを含む。
【００２１】
いくつかの実施形態において、上記の方法の沈降ステップは、約５０℃〜約７０℃の範囲の温度で、すなわち本発明の第１の態様に記載されているように行われる。いくつかの実施形態において、上記の方法の沈降ステップは、約５５℃〜約６５℃の範囲の温度で行われる。別の実施形態において、沈降ステップは約６２℃の温度で行われる。さらに他の実施形態において、沈降ステップは約６０℃の温度で行われる。
【００２２】
いくつかの実施形態において、沈降ステップは、約２〜５日間で行うことができる。例えば、沈降ステップは、約２〜４日間、例えば約２〜３日間または約３〜４日間で行うことができる。沈降ステップは、これらの範囲内で必要に応じて長く、またはより長い（例えば、５日以上）もしくはより短い（例えば、２日未満）期間でさえ行うことができることを理解されたい。
【００２３】
いくつかの実施形態において、除去ステップは、上澄み液をデカンテーションすることを含む。いくつかの実施形態において、除去ステップは、浸漬用管を用いて、上澄み液を除去することを含む。
【００２４】
いくつかの実施形態において、上記の方法は、リン酸アルミニウム沈殿物を無菌化するステップをさらに含み、混合、沈降、除去、および無菌化のステップはすべて、閉鎖系内で行われる。いくつかの実施形態において、無菌化ステップは、リン酸アルミニウム沈殿物を約１１０℃を超える温度に加熱することを含む。いくつかの実施形態において、無菌化ステップは、リン酸アルミニウム沈殿物を約１２１℃を超える温度に加熱することを含む。
【００２５】
いくつかの実施形態において、上記の方法は、リン酸アルミニウム沈殿物のｐＨを調整するステップをさらに含み、混合、沈降、除去、無菌化、および調整のステップはすべて、閉鎖系内で行われる。いくつかの実施形態において、調整ステップは、リン酸アルミニウム沈殿物のｐＨを約５．６〜約６．０の範囲になるように調整することを含む。いくつかの実施形態において、調整ステップは、リン酸アルミニウム沈殿物のｐＨを約５．７〜約６．０の範囲になるように調整することを含む。いくつかの実施形態において、調整ステップは、リン酸アルミニウム沈殿物のｐＨを約５．８〜約６．０の範囲になるように調整することを含む。いくつかの実施形態において、調整ステップは、リン酸アルミニウム沈殿物のｐＨを約５．９〜約６．０の範囲になるように調整することを含む。
【００２６】
本発明の方法を使用して、種々の濃度のリン酸アルミニウムを生成することができる。しかし、いくつかの実施形態において、上記の混合ステップ後のリン酸アルミニウムの濃度は約９．０〜１６．５ｍｇ／ｍｌの範囲である。
【００２７】
いくつかの実施形態において、上記のｐＨを調整するステップの後に、リン酸アルミニウム沈殿物は、約３．０μｍ〜約９．０μｍの範囲、または約４．５μｍ〜約６．５μｍの範囲のＤ［ｖ，０．５］（具体的なサイズ分布値の定義は、下記の実施例１に記載する）を有するサイズ分布の粒子を含む。いくつかの実施形態において、上記のｐＨを調整するステップの後に、リン酸アルミニウム沈殿物は、約１．５μｍを超える、または約２．０μｍを超えるＤ［ｖ，０．１］を有するサイズ分布の粒子を含む。いくつかの実施形態において、上記のｐＨを調整するステップの後に、リン酸アルミニウム沈殿物は、約２５μｍ未満、約２４μｍ未満、約２３μｍ未満、約２２μｍ未満、約２１μｍ未満、または約２０μｍ未満のＤ［ｖ，０．９］を有するサイズ分布の粒子を含む。
【００２８】
以下の実施例を参照して、本発明をさらに具体的に説明する。しかし、本発明は、決してこれらの実施例によって限定されるものではないと理解されたい。
【実施例】
【００２９】
（実施例１）
系／プロセスの説明
この実施例は、図２に示すものなど本明細書に記載する方法のいくつかを行うための系およびプロセスの例を説明する。この実施例では、ＡｌＰＯ４の製造プロセスの調製およびバッチングは、Ｍｅｄｉａ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（ＭＰＳまたはＭｅｄｉａ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｓｋｉｄ）によって制御される。ＭＰＳは、３個のバッチング容器（５０Ｌ、２００Ｌ、および８００Ｌ）、フィルターハウジング、およびサニタリーコネクションを備えたパイピングからなる。製造プロセスでは、２００Ｌ（Ｖ１２）および８００Ｌ（Ｖ１３）の両方の容器を利用する。それによって、ＡｌＰＯ４を８００Ｌ（全容積）のバッチで生成し、３５０Ｋｇのリン酸アルミニウム沈殿物を得る。最終沈殿物を５０Ｌのドラムにダウンロードする。
【００３０】
このプロセスで使用する原材料には、下記が含まれた。
・第三リン酸ナトリウム（２０．４Ｋｇ）
・ＷＦＩ（商標）（第三リン酸ナトリウムを溶解するため）（１０７．４Ｌ）
・塩化アルミニウム六水和物（１０．１Ｋｇ）
・ＷＦＩ（商標）（塩化アルミニウム六水和物を溶解するため）（９１．６Ｌ）
・５Ｎ 水酸化ナトリウム（ｐＨ調整用）
プロセスの第１のステップは、２０．４Ｋｇの第三リン酸ナトリウムを原材料保持容器に計量し、別にしておくことであった。次に、１０．１Ｋｇの塩化アルミニウム六水和物を原材料保持容器に計量し、別にしておいた。
【００３１】
リン酸アルミニウムの自動化処方を開始し、系に圧力試験を施した。次いで、Ｖ１２容器、Ｖ１３容器、および連結した移送ラインをＷＦＩ（商標）で予備すすぎした。ＷＦＩ（商標）ですすいだ後、粒子制御フィルターを、Ｖ１２とＶ１３の間の移送ラインの「濾過側」と「清澄側」の両側にインラインで配置した。バルクをサンプリングする前に、Ｃ−Ｆｌｅｘを備えた予め無菌化したサンプルポートをＶ１３容器に連結した。
【００３２】
次いで、系に別の圧力保持試験を施した。圧力保持の終了時に、系を清浄な蒸気でフラッシュした。蒸気でフラッシュした後、予め設置したフィルターを合計５０ＬのＷＦＩでフラッシュした。
【００３３】
次いで、目標である１６２．０ＬのＷＦＩをＶ１２に添加した。次いで、ＷＦＩをＶ１３に移送した。さらに、１００ＬのＷＦＩをＶ１２に添加し、次いでＶ１３に移送した。最終の臨界反応温度２５℃をＶ１３で確立した。
【００３４】
目標である６３．０ＬのＷＦＩをＶ１２容器に添加した。Ｖ１２に連結した撹拌装置を始動し、目標である３５０ｒｐｍに制御した。予め計量した塩化アルミニウムを、（溶解温度である３５〜４５℃に到達した後）Ｖ１２に添加した。最初に塩化アルミニウムが溶解した後、Ｖ１２を目標である９１．６ＬのＷＦＩまで引き上げ、５〜３５分間混合した後、塩化アルミニウムが溶解していることを肉眼で検証した。次いで、Ｖ１３容器では、ＷＦＩの撹拌を設定値２５０ｒｐｍで開始した。次いで、塩化アルミニウムを、Ｖ１２からＶ１３に移送した。
【００３５】
目標である１５０ＬのＷＦＩをＶ１２に添加した。次いで、ＷＦＩをＶ１３に移送し、さらに１５０ＬのＷＦＩをＶ１２に添加し、再びＶ１３に移送した。最終の臨界反応温度２５℃をＶ１３で確立した。
【００３６】
目標である７０ＬのＷＦＩをＶ１２に添加した。Ｖ１２に連結した撹拌装置を始動し、目標である３５０ｒｐｍに制御した。予め計量した第三リン酸ナトリウムを、（溶解温度である３５〜４５℃に到達した後）Ｖ１２に添加した。最初に第三リン酸ナトリウムが溶解した後、Ｖ１２を目標である１０７．４ＬのＷＦＩまで引き上げ、５〜３５分間混合した後、第三リン酸ナトリウムが溶解していることを肉眼で検証した。
【００３７】
次いで、第三リン酸ナトリウムをＶ１２からＶ１３に移送し、目標のｐＨ５．２０が実現するまで塩化アルミニウムと混合した。１時間後、第三リン酸ナトリウムを添加することによって、ｐＨを再び目標のｐＨ５．２０に調整した。ｐＨが安定したら、撹拌装置を１５０ｒｐｍに減速し、温度設定値を６０℃に変更した。１時間混合した後、撹拌装置を止めた。残留している第三リン酸ナトリウムをＶ１２から排出し、次いで粒子フィルターを取り外し、ＣＩＰキャップに取り換え、Ｖ１２および移送ラインにＣＩＰ手順を施した。
【００３８】
リン酸アルミニウムは、Ｖ１３中、目標温度の６０℃で浸漬用管の下に沈降した。（浸漬用管の下に）沈降が終了したら、上澄み液をＶ１３から浸漬用管によってデカンテーションする。次いで、Ｖ１３の試料用バルブを、≧１２１．１℃で１５分間手動で無菌化した。試料用バルブを無菌化し、６０℃未満に冷却したら、２５ｍＬの生物汚染試料２個を採取した。
【００３９】
次いで、Ｖ１３中のリン酸アルミニウムを≧１２１．１℃で３０分間無菌化し、続いて塩基添加ラインの無菌化（≧１２１．１℃の温度で１５分）を行った。無菌の連結装置を使用して、５Ｎ ＮａＯＨの１Ｌビンを塩基添加ラインに連結した。
【００４０】
リン酸アルミニウムが目標温度の２５℃に冷却したら、リン酸アルミニウムのｐＨを目標である５．９５に調整した。予め清浄および無菌化した５０Ｌのドラムを１６本まで、それぞれの充填ステーションの位置に連結した。
【００４１】
次いで、移送ラインを≧１２１．１℃で１５分間無菌化した。次いで、Ｖ１３の試料用バルブを≧１２１．１℃で１５分間無菌化した。試料用バルブを無菌化し、６０℃未満に冷却したら、粒径、ｐＨ、アルミニウム濃度、および無菌性のために、３０ｍＬのバルク試料を２個採取した。
【００４２】
試料を採取した後、リン酸アルミニウムを５０Ｌのドラムにダウンロードした。ダウンロードが終了したら、Ｖ１３および移送ラインに完全な化学的ＣＩＰを施した。次いで、アルミニウム濃度および無菌性のために、５０Ｌのドラムのすべてから試料を採取した（しかし、無菌性のためには、実際には最初と最後のドラムだけから試料を採取した）。磁気式安定器を各ドラムに固定し、ドラムを２〜８℃の冷蔵室で貯蔵した。
【００４３】
（実施例２）
ＡｌＰＯ４の物理的、化学的、および機能的特性のアッセイ
図１のプロセスに従って生成したＡｌＰＯ４ ３ロット、および図２（および実施例１）のプロセスに従って生成した材料３ロットを分析して、両方のプロセスに従って生成した材料が類似していることを確実にした。使用するアッセイは、ＡｌＰＯ４の物理的、化学的、および機能的特性に基づいて選択した。これらのキャラクタリゼーション試験を、放出試験に加えて行い、すべてのロットが、ＡｌＰＯ４の放出基準を満たした。同等性試験のデータを以下の通りまとめる：
粒径分析：バルクのアジュバントおよび製剤したワクチンの粒径分析は、Ｍａｌｖｅｒｎ粒径分析器（Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ、Ｓｅｒｉａｌ ２．１５）を用いて、レーザー光散乱によって行った。溶媒（例えば、イソプロパノール）中の粉末の懸濁液を低角レーザー光線で測定し、粒径分布を算出した。体積メジアン径Ｄ［ｖ，０．５］は、分布の５０％がメジアンを超え、５０％がメジアン未満である直径である。好ましくは、平均粒径の２つの測定は、相対的に５％を超えて異なるべきでない。２つの測定曲線の形状も、好ましくは同じであるべきである。Ｄ［ｖ，０．９］は、体積分布の９０％がこの値未満である直径である。Ｄ［ｖ，０．１］は、体積分布の１０％がこの値未満である直径である。スパンは、１０％、５０％、および９０％の分位値に基づく分布の幅である（スパン＝｛Ｄ［ｖ，０．９］−Ｄ［ｖ，０．１］｝／Ｄ［ｖ，０．５］）。各測定に先立って、２μｍおよび１０μｍを表す既知の分子サイズのビーズを使用することによって、機器を標準化した。両方のプロセスで作製したＡｌＰＯ４の粒径（Ｐｒｅｖｎａｒ（登録商標）への製剤前およびその後）は類似し、表１に列挙する仕様の範囲内であることが確定した。
【００４４】
【表１】
タンパク質結合アッセイ：アルミニウムペレットと接触させる前とアルミニウムペレットで処理した後に全タンパク質濃度を測定することによって、ＡｌＰＯ４に結合しているタンパク質（％）を決定した。生理食塩水に再懸濁した後、ペレット中のタンパク質含有量を測定した。担体タンパク質ＣＲＭ１９７の平均結合率（％）について、図１のプロセスによるＡｌＰＯ４で製剤した場合（９７．５±０．８）と図２のプロセスによるＡｌＰＯ４で製剤した場合（９６．１±１．４）は類似していた。Ｐｒｅｖｎａｒ（登録商標）の平均結合率（％）についても、図１のプロセスによるＡｌＰＯ４で製剤した場合（９１．５±１．６）と図２のプロセスによるＡｌＰＯ４で製剤した場合（９１．７±１．９）は類似していた。
【００４５】
比濁アッセイ：アルミニウムペレットを可溶化するための方法としてクエン酸化を使用して、ワクチンＰｒｅｖｎａｒ（登録商標）を比濁法で、抗原性について分析した。以前の研究に基づいて、複合多糖だけがアルミニウムに結合し、遊離多糖または活性化糖は結合しないことが知られている。抗原性がペレットと関連していることは、多糖が複合化していることを表す。比濁測定は、抗体を用いて、Ｂｅｃｋｍａｎ Ａｒｒａｙ ３６０ Ｓｙｓｔｅｍで実施し、ウサギにおいて産生された。比濁法を用いて、個々のＰｒｅｖｎａｒ（登録商標）コンジュゲートのＡｌＰＯ４への結合を測定し、図１および２のプロセスを使用して作製した材料に関するデータは、類似していることがわかった。
【００４６】
ゼータ電位／電気泳動移動度：ゼータサイザーを使用して、ゼータ電位および電気泳動移動度を決定した。図１のプロセスによるＡｌＰＯ４のゼータ電位は、平均して４．７±０．２ｍＶ（５．１±０．１、３．５±０．２、および５．５±０．２ｍＶ）であった。図２のプロセスによるＡｌＰＯ４のゼータ電位は、平均して３．３±０．３ｍＶ（３．６±０．３、２．６±０．４、および３．７±０．１ｍＶ）であった。
【００４７】
沈降時間：分光光度計（Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＵＶ１６０−ＩＰＣ）で、波長６４５ｎｍにおいて、光学密度の変化を３０分間にわたって、測定することによって、沈降時間を監視した。図１のプロセスによるＡｌＰＯ４の沈降時間／速度（Ａ６４５／分）は、０．０２４、０．０２５、および０．０２３であった。図２のプロセスによるＡｌＰＯ４の沈降時間／速度（Ａ６４５／分）は、０．０２７、０．０２６、および０．０２６であった。
【００４８】
表２では、図１および２の方法で使用するパラメータの一部を比較する。示されたように、リン酸アルミニウム沈殿物の沈降時間は、沈降温度を２５℃から６０℃に上げることによって、約７〜１０日から約２〜５日に短縮された。これは、効率が大幅に改善されたことを意味する。実施例１に記載したように、両方の方法で生成したリン酸アルミニウム試料は、同様の物理的、化学的、および機能的特性を有する。
【００４９】
【表２】
（実施例３）
培地シミュレーション
トリプシンダイズブロス（ＴＳＢ）を使用して、実施例１のＭｅｄｉａ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｓｋｉｄ（ＭＰＳ）について、培地シミュレーション試験を行った。これらの試験は、ＭＰＳの無菌化操作が無菌性を維持し、無菌溶液の製造、ｐＨ調整、サンプリング、次いでドラムへの移送時に、微生物進入から保護することを極めて確実に実証した。各培地試験トライアルは、無菌化、５Ｎ水酸化ナトリウムを使用した無菌的ｐＨ調整、およびドラム１６本へのＴＳＢの無菌的移送からなった。無菌的移送は、≧１０時間無菌保持した後に起こる。無菌保持は、無菌化操作を行った（１１時間）後に系を保持することができる全時間量を確立した。ＴＳＢを、充填ステーションの位置１６か所すべてから１Ｌビンに回収し、完全なインキュベーションにかけた。位置＃１および＃１６から採取した試料は、溶液をドラムに移送するプロセス全体を代表する。実施例１のＭｅｄｉａ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｓｋｉｄの閉鎖系設計およびこの試験の好結果のため、無菌性試験は、図１に示す方法で必要とされたように、商業生産時に、各ドラムについてではなく、最初と最後のドラムについて行うだけでよい。
【００５０】
均等形態
本明細書に引用した資料（特許および特許出願が挙げられるが、これらに限定されるものではない）は、このような文献および同様の資料の形式にかかわらずすべて、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。組み込まれた文献および同様の資料のうちの１つまたは複数が、本明細書（定義した用語、用語の用い方、記載した技法などが挙げられるが、これらに限定されるものではない）と異なるかまたは矛盾する場合、本願が優先する。
【００５１】
本明細書で使用したセクションの見出しは、構成上の目的にすぎず、決して記載した対象を限定するものと解釈されるべきでない。
【００５２】
本発明を様々な実施形態および実施例と共に説明してきたが、本発明をこのような実施形態または実施例に限定するものではない。これに反して、本発明は、当業者によって理解されるような様々な代替形態、修正形態、および均等形態を包含する。
【００５３】
具体的には、特定の例示的実施形態を参照して、本発明を示し、かつ説明してきたが、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、形態および詳細について様々に変更を行うことができると理解されたい。したがって、本発明の範囲および趣旨に入るすべての実施形態、およびその均等形態は、特許請求されるよう意図されている。本発明の特許請求の範囲および明細書は、別段の記述のない限り、要素の記載順序に限定するものと理解されるべきでない。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リン酸アルミニウムを生成する方法であって、塩化アルミニウムの溶液と第三リン酸ナトリウムの溶液を混合して、リン酸アルミニウム沈殿物を生成するステップを含み、前記リン酸アルミニウム沈殿物が約５０℃〜約７０℃の範囲の温度で沈降することを特徴とする方法。
【請求項２】
前記沈降ステップが約５５℃〜約６５℃の範囲の温度で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記沈降ステップが約６０℃の温度で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
リン酸アルミニウムを生成する方法であって、
塩化アルミニウムの溶液と第三リン酸ナトリウムの溶液を混合して、リン酸アルミニウム懸濁液および上澄み液を生成するステップと、
前記リン酸アルミニウム懸濁液を沈降させて、リン酸アルミニウム沈殿物を生成するステップと、
前記上澄み液を除去するステップと
を含み、前記混合、沈降、および除去のステップは閉鎖系内で行われる方法。
【請求項５】
前記第三リン酸ナトリウムの溶液を前記塩化アルミニウムの溶液に添加する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記第三リン酸ナトリウムの溶液を、ｐＨが約５．０〜約５．４の範囲になるまで前記塩化アルミニウムの溶液に添加する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ｐＨが約５．１〜約５．３の範囲である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記混合ステップが約２０℃〜約３０℃の範囲の温度で行われる、請求項４から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記混合ステップが約２５℃の温度で行われる、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記混合ステップが、約１５０ｒｐｍ〜約３５０ｒｐｍで回転するインペラーで、前記塩化アルミニウムの溶液と前記第三リン酸ナトリウムの溶液を混合することを含む、請求項４から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記混合ステップが、約２００ｒｐｍ〜約３００ｒｐｍで回転するインペラーで、前記塩化アルミニウムの溶液と前記第三リン酸ナトリウムの溶液を混合することを含む、請求項４から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記混合ステップが、約２５０ｒｐｍで回転するインペラーで、前記塩化アルミニウムの溶液と前記第三リン酸ナトリウムの溶液を混合することを含む、請求項４から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記沈降ステップが約５０℃〜約７０℃の範囲の温度で行われる、請求項４から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記沈降ステップが約５５℃〜約６５℃の範囲の温度で行われる、請求項４から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記沈降ステップが約６０℃の範囲の温度で行われる、請求項４から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記沈降ステップが約２日〜約５日の期間行われる、請求項４から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記沈降ステップが約３日〜約４日の期間行われる、請求項４から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記除去ステップが、浸漬用管を使用して、前記上澄み液を除去することを含む、請求項４から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記リン酸アルミニウム沈殿物を無菌化するステップをさらに含み、前記混合、沈降、除去、および無菌化のステップは閉鎖系内で行われる、請求項４から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記無菌化ステップが、前記リン酸アルミニウム沈殿物を約１１０℃を超える温度に加熱することを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記無菌化ステップが、前記リン酸アルミニウム沈殿物を約１２１℃を超える温度に加熱することを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記リン酸アルミニウム沈殿物のｐＨを調整するステップをさらに含み、前記混合、沈降、除去、無菌化、および調整のステップは閉鎖系内で行われる、請求項１９から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記調整ステップが、前記リン酸アルミニウム沈殿物のｐＨを約５．６〜約６．０の範囲になるように調整することを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ｐＨを約５．８〜約６．０の範囲になるように調整する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ｐＨを約５．９〜約６．０の範囲になるように調整する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
混合ステップ後のリン酸アルミニウムの濃度が約９．０〜約１６．５ｍｇ／ｍｌの範囲である、請求項４から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記ｐＨを調整するステップの後に、前記リン酸アルミニウム沈殿物が、約３．０μｍ〜約９．０μｍの範囲のＤ［ｖ，０．５］を有するサイズ分布の粒子を含む、請求項２２から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記ｐＨを調整するステップの後に、前記リン酸アルミニウム沈殿物が、約４．５μｍ〜約６．５μｍの範囲のＤ［ｖ，０．５］を有するサイズ分布の粒子を含む、請求項２２から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記ｐＨを調整するステップの後に、前記リン酸アルミニウム沈殿物が、約１．５μｍを超えるＤ［ｖ，０．１］を有するサイズ分布の粒子を含む、請求項２２から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ｐＨを調整するステップの後に、前記リン酸アルミニウム沈殿物が、約２．０μｍを超えるＤ［ｖ，０．１］を有するサイズ分布の粒子を含む、請求項２２から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ｐＨを調整するステップの後に、前記リン酸アルミニウム沈殿物が、２５μｍ未満のＤ［ｖ，０．９］を有するサイズ分布の粒子を含む、請求項２２から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記ｐＨを調整するステップの後に、前記リン酸アルミニウム沈殿物が、約２０μｍ未満のＤ［ｖ，０．９］を有するサイズ分布の粒子を含む、請求項２２から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１】
リン酸アルミニウムを生成する方法であって、塩化アルミニウムの溶液と第三リン酸ナトリウムの溶液を混合して、リン酸アルミニウム沈殿物を生成するステップを含み、前記リン酸アルミニウム沈殿物が約５０℃〜約７０℃の範囲の温度で沈降することを特徴とする方法。
【請求項２】
前記沈降ステップが約５５℃〜約６５℃の範囲の温度で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記沈降ステップが約６０℃の温度で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
リン酸アルミニウムを生成する方法であって、
塩化アルミニウムの溶液と第三リン酸ナトリウムの溶液を混合して、リン酸アルミニウム懸濁液および上澄み液を生成するステップと、
前記リン酸アルミニウム懸濁液を沈降させて、リン酸アルミニウム沈殿物を生成するステップと、
前記上澄み液を除去するステップと
を含み、前記混合、沈降、および除去のステップは閉鎖系内で行われる方法。
【請求項５】
前記第三リン酸ナトリウムの溶液を前記塩化アルミニウムの溶液に添加する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記第三リン酸ナトリウムの溶液を、ｐＨが約５．０〜約５．４の範囲になるまで前記塩化アルミニウムの溶液に添加する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ｐＨが約５．１〜約５．３の範囲である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記混合ステップが約２０℃〜約３０℃の範囲の温度で行われる、請求項４から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記混合ステップが約２５℃の温度で行われる、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記混合ステップが、約１５０ｒｐｍ〜約３５０ｒｐｍで回転するインペラーで、前記塩化アルミニウムの溶液と前記第三リン酸ナトリウムの溶液を混合することを含む、請求項４から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記混合ステップが、約２００ｒｐｍ〜約３００ｒｐｍで回転するインペラーで、前記塩化アルミニウムの溶液と前記第三リン酸ナトリウムの溶液を混合することを含む、請求項４から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記混合ステップが、約２５０ｒｐｍで回転するインペラーで、前記塩化アルミニウムの溶液と前記第三リン酸ナトリウムの溶液を混合することを含む、請求項４から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記沈降ステップが約５０℃〜約７０℃の範囲の温度で行われる、請求項４から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記沈降ステップが約５５℃〜約６５℃の範囲の温度で行われる、請求項４から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記沈降ステップが約６０℃の範囲の温度で行われる、請求項４から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記沈降ステップが約２日〜約５日の期間行われる、請求項４から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記沈降ステップが約３日〜約４日の期間行われる、請求項４から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記除去ステップが、浸漬用管を使用して、前記上澄み液を除去することを含む、請求項４から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記リン酸アルミニウム沈殿物を無菌化するステップをさらに含み、前記混合、沈降、除去、および無菌化のステップは閉鎖系内で行われる、請求項４から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記無菌化ステップが、前記リン酸アルミニウム沈殿物を約１１０℃を超える温度に加熱することを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記無菌化ステップが、前記リン酸アルミニウム沈殿物を約１２１℃を超える温度に加熱することを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記リン酸アルミニウム沈殿物のｐＨを調整するステップをさらに含み、前記混合、沈降、除去、無菌化、および調整のステップは閉鎖系内で行われる、請求項１９から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記調整ステップが、前記リン酸アルミニウム沈殿物のｐＨを約５．６〜約６．０の範囲になるように調整することを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ｐＨを約５．８〜約６．０の範囲になるように調整する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ｐＨを約５．９〜約６．０の範囲になるように調整する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
混合ステップ後のリン酸アルミニウムの濃度が約９．０〜約１６．５ｍｇ／ｍｌの範囲である、請求項４から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記ｐＨを調整するステップの後に、前記リン酸アルミニウム沈殿物が、約３．０μｍ〜約９．０μｍの範囲のＤ［ｖ，０．５］を有するサイズ分布の粒子を含む、請求項２２から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記ｐＨを調整するステップの後に、前記リン酸アルミニウム沈殿物が、約４．５μｍ〜約６．５μｍの範囲のＤ［ｖ，０．５］を有するサイズ分布の粒子を含む、請求項２２から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記ｐＨを調整するステップの後に、前記リン酸アルミニウム沈殿物が、約１．５μｍを超えるＤ［ｖ，０．１］を有するサイズ分布の粒子を含む、請求項２２から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ｐＨを調整するステップの後に、前記リン酸アルミニウム沈殿物が、約２．０μｍを超えるＤ［ｖ，０．１］を有するサイズ分布の粒子を含む、請求項２２から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ｐＨを調整するステップの後に、前記リン酸アルミニウム沈殿物が、２５μｍ未満のＤ［ｖ，０．９］を有するサイズ分布の粒子を含む、請求項２２から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記ｐＨを調整するステップの後に、前記リン酸アルミニウム沈殿物が、約２０μｍ未満のＤ［ｖ，０．９］を有するサイズ分布の粒子を含む、請求項２２から２５のいずれか一項に記載の方法。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図２】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図２】
【公表番号】特表２０１０−５３３１２３（Ｐ２０１０−５３３１２３Ａ）
【公表日】平成２２年１０月２１日（２０１０．１０．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５１６２３４（Ｐ２０１０−５１６２３４）
【出願日】平成２０年７月１０日（２００８．７．１０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６９５８４
【国際公開番号】ＷＯ２００９／００９６２９
【国際公開日】平成２１年１月１５日（２００９．１．１５）
【出願人】（３０９０４０７０１）ワイス・エルエルシー (181)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１０月２１日（２０１０．１０．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年７月１０日（２００８．７．１０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６９５８４
【国際公開番号】ＷＯ２００９／００９６２９
【国際公開日】平成２１年１月１５日（２００９．１．１５）
【出願人】（３０９０４０７０１）ワイス・エルエルシー (181)
【Ｆターム（参考）】
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