乾癬を処置するためのＣＤ４０アンタゴニスト
【課題】自己免疫疾患および新形成疾患を処置するための組成物、ならびに１つ以上のＣＤ４０アンタゴニストを哺乳動物に投与することによるこれらの疾患の処置の方法を提供すること。
【解決手段】本発明は、治療有効量のＣＤ４０アンタゴニストを含む組成物（その薬学的組成物を含む）を提供する。本発明によって、ＣＤ４０アンタゴニストは、モノクローナル抗体であってもポリクローナル抗体であってもよく、ヒト化抗体またはヒト抗体を含む。あるいは、本発明のＣＤ４０アンタゴニストとしては、ＣＤ４０に結合し、これによってＣＤ４０とそのリガンド（ＣＤ４０Ｌ）との相互作用を阻害する、適切なタンパク質またはペプチドあるいは低分子が挙げられる。ＣＤ４０アンタゴニスト組成物は、乾癬を含む１つ以上の自己免疫疾患を逆行させるかまたはこの疾患の重篤度を軽減するに十分な量で、処方され得る。
【解決手段】本発明は、治療有効量のＣＤ４０アンタゴニストを含む組成物（その薬学的組成物を含む）を提供する。本発明によって、ＣＤ４０アンタゴニストは、モノクローナル抗体であってもポリクローナル抗体であってもよく、ヒト化抗体またはヒト抗体を含む。あるいは、本発明のＣＤ４０アンタゴニストとしては、ＣＤ４０に結合し、これによってＣＤ４０とそのリガンド（ＣＤ４０Ｌ）との相互作用を阻害する、適切なタンパク質またはペプチドあるいは低分子が挙げられる。ＣＤ４０アンタゴニスト組成物は、乾癬を含む１つ以上の自己免疫疾患を逆行させるかまたはこの疾患の重篤度を軽減するに十分な量で、処方され得る。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の技術分野）
本発明は、自己免疫疾患および新形成疾患を処置するための組成物、ならびに１つ以上のＣＤ４０アンタゴニストを哺乳動物に投与することによるこれらの疾患の処置の方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
乾癬は、ヒトにおいて最も流行している、依然として難解な、慢性的な炎症性皮膚障害の１つであり、集団の約２％を苦しめている。処置を開発するための集中的な努力にもかかわらず、この自己免疫疾患は、治療に対して実質的に不応性であるままである。従って、乾癬および他の関連する自己免疫疾患の処置のための、新たな薬剤および方法を同定するという、重要な必要性が残っている。本発明の組成物および方法は、これらおよび他の関連する必要性を満足する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
（発明の要旨）
本発明は、１つの実施形態において、治療有効量のＣＤ４０アンタゴニストを含む組成物（その薬学的組成物を含む）を提供する。本発明によって、ＣＤ４０アンタゴニストは、モノクローナル抗体であってもポリクローナル抗体であってもよく、ヒト化抗体またはヒト抗体を含む。あるいは、本発明のＣＤ４０アンタゴニストとしては、ＣＤ４０に結合し、これによってＣＤ４０とそのリガンド（ＣＤ４０Ｌ）との相互作用を阻害する、適切なタンパク質またはペプチドあるいは他の低分子が挙げられる。ＣＤ４０アンタゴニスト組成物は、乾癬を含む１つ以上の自己免疫疾患を逆行させるかまたはこの疾患の重篤度を軽減するに十分な量で、処方され得る。本発明の組成物は、さらに、インビボ投与に適した薬学的に受容可能なキャリアまたは安定剤を含み得る。いくつかの実施形態において、これらの組成物は、さらに、自己免疫疾患に対して効能のあるさらなる薬剤と組み合わせられ得る。
【０００４】
他の実施形態において、本発明は、自己免疫疾患を処置するための方法を提供し、この方法は、ＣＤ４０アンタゴニストおよびその薬学的組成物の投与を包含する。より特定すると、自己免疫疾患を阻害または予防するために十分な量の本発明の組成物がＣＤ４０発現細胞に投与され、これによってＣＤ４０発現細胞と接触される。本発明の方法の範囲内に含まれる自己免疫疾患としては、橋本甲状腺炎、原発性粘液水腫 甲状腺中毒症、悪性貧血、アディソン病、インスリン依存性真性糖尿病、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症、皮膚筋炎、強皮症および乾癬が挙げられるが、これらに限定されない。ＣＤ４０アンタゴニストは、経口的、局所的および非経口的を含む、種々の様式で投与され得る。
【０００５】
さらなる実施形態は、新形成疾患を処置するための方法を提供する。より特定すると、いくつかの実施形態によって、新脈管形成を減少させるに十分な量の本発明の組成物がＣＤ４０発現細胞に投与され、そしてＣＤ４０発現細胞と接触され、これによって、新形成疾患の重篤度を低下させるか、またはこの疾患を完全に逆行させる。
【０００６】
本発明のなおさらなる実施形態において、これらの方法は、エキソビボまたはインビトロのいずれで実施されてもよい。例えば、ＣＤ４０アンタゴニストは、抗自己免疫疾患治療を必要とする被験体から単離された末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）に適用され得、その後、これらのＰＢＭＣがインビボで再導入される。あるいは、本発明は、ＣＤ４０アンタゴニストが、例えば、他の潜在的な自己免疫疾患治療剤の効力についての診断アッセイにおいて、インビトロで用途を見出され得ることを提供する。
【０００７】
従って、本発明は、当該分野に、自己免疫疾患の処置において、より特定すると、乾癬により例示されるような炎症性皮膚病の処置において、一般的に効果的である組成物および方法を提供する。
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１） 自己免疫疾患を処置するための組成物であって、該組成物は、薬学的に受容可能なキャリア中のＣＤ４０アンタゴニストの治療的有効量を含む、組成物。
（項目２） 前記ＣＤ４０アンタゴニストが、低分子である、項目１に記載の組成物。
（項目３） 前記ＣＤ４０アンタゴニストが、タンパク質である、項目１に記載の組成物。
（項目４） 前記ＣＤ４０アンタゴニストが、抗体である、項目１に記載の組成物。
（項目５） 前記ＣＤ４０アンタゴニストが、モノクローナル抗体である、項目１に記載の組成物。
（項目６） 前記ＣＤ４０アンタゴニストが、ヒト化モノクローナル抗体である、項目１に記載の組成物。
（項目７） 前記ＣＤ４０アンタゴニストが、ヒトモノクローナル抗体である、項目１に記載の組成物。
（項目８） 前記ＣＤ４０アンタゴニストが、抗体５Ｈ７である、項目１に記載の組成物。
（項目９） 前記自己免疫疾患が乾癬である、項目１に記載の組成物。
（項目１０） 自己免疫疾患に罹患した哺乳動物を処置する方法であって、該方法は、ＣＤ４０アンタゴニストの治療的有効量を、該哺乳動物に投与して、それにより該自己免疫疾患の重篤度を低下させる工程を包含する、方法。
（項目１１） 前記アンタゴニストが、ＣＤ４０とＣＤ４０Ｌとの間の相互作用をブロックする、項目１０に記載の方法。
（項目１２） 前記アンタゴニストが、ＣＤ４０に結合する抗体である、項目１０に記載の方法。
（項目１３） 前記抗体が、モノクローナル抗体である、項目１０に記載の方法。
（項目１４） 前記抗体が、ヒト化モノクローナル抗体である、項目１０に記載の方法。
（項目１５） 前記抗体が、ヒトモノクローナル抗体である、項目１０に記載の方法。
（項目１６） 前記抗体が、５Ｈ７である、項目１０に記載の方法。
（項目１７） 前記アンタゴニストが、抗体５Ｈ７のフラグメントである、項目１０に記載の方法。
（項目１８） 前記自己免疫疾患が、Ｔ細胞媒介炎症性皮膚疾患である、項目１０に記載の方法。
（項目１９） 前記自己免疫疾患が、乾癬である、項目１０に記載の方法。
（項目２０） 前記哺乳動物が、ヒトである、項目１０に記載の方法。
（項目２１） 前記ＣＤ４０アンタゴニストが、腹腔内投与または皮内投与される、項目１０に記載の方法。
（項目２２） 新形成疾患に罹患した哺乳動物を処置する方法であって、該方法は、ＣＤ４０アンタゴニストの治療的有効量を、該哺乳動物に投与して、それにより該新形成疾患の重篤度を低下させる工程を包含する、方法。
（項目２３） 乾癬に罹患した哺乳動物を処置する方法であって、該方法は、ＣＤ４０アンタゴニストの治療的有効量を、該哺乳動物に投与する工程を包含する、方法。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
（発明の詳細な説明）
乾癬とは、Ｔ細胞媒介性の自己免疫疾患であり、細菌性スーパー抗原のような、遺伝的誘発因子と環境的誘発因子との両方に関連すると考えられている。例えば、Ｖａｌｄｉｍａｒｓｓｏｎ，Ｈ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１６（３），１４５−９（１９９５年３月）；Ｂｏｅｈｎｃｋｅ，Ｗ．Ｈ．ら、Ｎａｔｕｒｅ，３７９（６５６８）：７７７（１９９６年２月２９日）；Ｂｏｅｈｎｃｋｅ，Ｗ．Ｈ．、Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、４（１２）：４８５−９（１９９６年１２月）を参照のこと。この疾患は、種々の細胞型の複雑な変更（錯角化症、表皮ケラチノサイトの過剰増殖および分化、ならびに表皮肥厚症（ａｋａｎｔｈｏｓｉｓ）（ケラチノサイトの過剰増殖から生じる表皮の厚みの増加）が挙げられる）により特徴付けられる。さらに、乾癬の病変は、活性化Ｔリンパ球、真皮および表皮の微小膿瘍内の好中球、管壁マクロファージならびに皮膚の肥満細胞からなる混合白血球の浸潤を示す。Ｓｃｈｏｎ，Ｍ．Ｐ．，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍ．，１１２（４）：４０５−４１０（１９９９）。
【０００９】
ＣＤ４０は、ＴＮＦ−Ｒファミリーに属する４０〜５０ｋＤａのＩ型膜糖タンパク質であり、そしてＢリンパ球ならびに単球、樹状細胞、内皮細胞および上皮細胞において、構成的に発現される。ｖａｎ Ｋｏｏｔｅｎ，Ｃ．ら、Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１３：３９３−３９９（１９９７）；Ｄａｔｔａ，Ｓ．Ｋ．ら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ，４０（１０）：１７３５−４５（１９９７）を参照のこと。ＣＤ４０リガンド（様々にＣＤ４０Ｌ、ｇｐ３９またはＣＤ１５４と称される）は、３３ｋＤのＩＩ型膜糖タンパク質であり、主として活性化したＣＤ４+Ｔ細胞の表面で一時的に発現される。Ｄａｔｔａ，前出。
【００１０】
本発明の一部として、ＣＤ４０アンタゴニストが、乾癬のための動物モデル系における自己免疫疾患の重症度を減少させることが発見された。従って、本発明は、罹患した哺乳動物における自己免疫疾患を処置するための組成物および方法を提供する。この組成物は、ＣＤ４０アンタゴニストを含み、そしてこの方法は、ＣＤ４０アンタゴニストを含む組成物の投与を含む。本発明のＣＤ４０アンタゴニストは、処置された病変における新脈管形成の程度を減少させることもまた、発見された。この発見は、種々の新生物疾患の処置におけるＣＤ４０アンタゴニストの効力を示唆する。
【００１１】
本明細書中で使用される場合、用語「アンタゴニスト」は、一般的に、例えば、立体障害、立体配置的変化または他の生化学的機構のいずれかによって、ある分子の別の分子との結合または別の細胞によるある細胞の刺激を妨げる、分子、化合物または他の薬剤の特性をいう。１つの関連においては、用語アンタゴニストは、レセプターのそのリガンドへの結合（例えば、ＣＤ４０のＣＤ４０Ｌとの結合）を妨げ、それによってそれぞれのＢ細胞集団またはＴ細胞集団の活性化を阻害する、薬剤の特性をいう。用語アンタゴニストは、いかなる特定の作用機構によっても限定されないが、むしろ一般的に、現在定義される機能的特性をいう。本発明のアンタゴニストとしては、ＣＤ４０に結合する抗体またはペプチドおよび他の分子が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１２】
有効な治療は、有意な毒性のない有効な薬剤を同定することに依存する。乾癬および他の自己免疫疾患を処置する際に潜在的に有用な化合物は、多くの系においてスクリーニングされ得る。動物モデルは、インビボで治療的活性を有し、そして受容可能なレベルの宿主毒性を有する化合物を同定するために使用される。このモデルは、好ましくは、表皮肥厚（ａｋａｎｔｈｏｓｉｓ）および錯角化ならびに炎症性リンパ球浸潤などの乾癬の特徴を評価する。あるいは、動物モデルはまた、他の自己免疫疾患（例えば、全身性エリテマトーデス、関節リウマチおよび多発性硬化症など）の処置または種々の新生物疾患に対する処置において有効である化合物を同定するために有用である。
【００１３】
所定のＣＤ４０アンタゴニストの効力は、当業者によく知られた任意の動物モデル系において試験され得る。自己免疫疾患のための動物モデル系は、Ｒｏｉｔｔ，Ｉ．ら、「Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｎｄ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅ」、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第２８章（１９９８）に記載され；乾癬の研究のために利用可能な動物モデル系は、特に、Ｓｃｈｏｎ，Ｍ．Ｐ．（前出）に記載される。当業者は、適切な動物モデル系の選択は、処置されている特定の疾患に依存することを理解する。従って、以下の動物モデル系は、限定の目的ではなく例示の目的で提供される。
【００１４】
自己免疫は、自己抗原（すなわち、自己の抗原）を、フロイントアジュバントと共に注射することによって、実験動物に導入され得る。従って、このような動物モデル系を使用して、例えば、サイログロブリンを注射することによって、甲状腺の炎症性疾患を誘導し得る。このようなモデル系によって、甲状腺自己抗体が産生されるだけでなく、この腺が単核細胞で浸潤されそして腺房構築物が悪化するようにもなる。この動物モデルは、橋本甲状腺炎として知られるヒトの状態をモデリングするために使用されてきた。類似の様式において、ミエリン塩基性タンパク質、またはミエリン塩基性タンパク質に特異的なＴ細胞をマウスまたはラットに注射して、自己アレルギー脳脊髄炎を誘導し得る。
【００１５】
本発明の範囲内の化合物および処置レジメンを試験するために使用され得る、代替の動物モデル系としては、自発的な自己免疫疾患を示す動物が挙げられる。限定ではなく例示の目的として、ニワトリのＯｂｅｓｅ系統（ＯＳ）は、自己抗体の自発的な発生によって、ならびに甲状腺の進行性の破壊および慢性的な炎症によって特徴付けられる。ＯＳニワトリは、甲状腺の病変および種々の甲状腺構成要素に対する抗体の産生を示すことにおいて、ヒトの自己免疫甲状腺疾患と類似する。
【００１６】
ヒトの乾癬性の皮膚の、ヌードマウス、マウスのａｓｅｂｉａ（ａｂ／ａｂ）系統またはＨＬＡ−Ｂ２７トランスジェニックラットへの移植、ならびに鱗状皮膚のマウス由来の皮膚のヌードマウスへの移植を含む、乾癬のための多くの動物モデル系が記載されてきた。Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ，Ｂ．Ｊ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．，１４６（３）：５８０−５８８（１９９５）；Ｓｃｈｏｎ（前出）。ａｓｅｂｉａマウスモデルは、上皮の表皮肥厚、増加した皮膚血管分布ならびにマクロファージおよびマスト細胞の皮膚浸潤を特徴とするが、Ｔ細胞および好中球の浸潤を含まない。Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ（前出）。従って、ａｂ／ａｂマウスにおける皮膚変化は、乾癬性の病変のすべての生物学的特徴を正確に反映するわけではない。
【００１７】
上記の動物モデル系に加えて、ＳＣＩＤマウスは乾癬のインビボモデルとして広く使用される。ＳＣＩＤモデルにおける効力の標準の尺度は、表皮肥厚および不全角化の重篤度を低下する能力、ならびに乾癬の皮膚を移植された動物における単核細胞浸潤を軽減する能力である。本明細書中で記載される実験において、抗体調製物は、動物における乾癬の重篤度を実質的に阻害する。これらの知見は、乾癬の症状が、抗体またはＣＤ４０に対してアンタゴニスト効果を有する他の物質を投与することによって、阻害されるかまたは完全に予防され得ることを示す。
【００１８】
近年、ヒト皮膚細胞を長期の移植生存期間を有する重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスに移植し得ることが観察された。このＳＣＩＤマウスはまた、ヒト免疫系の成分の養子移植に受け入れられる。例えば、Ｂｏｅｈｎｃｋｅ，Ｗ．Ｈ．ら、Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．，２８６：３２５〜３３０（１９９４）を参照のこと。マウスにおけるＳＣＩＤ表現型の原因となる常染色体の劣性変異は、Ｔ細胞およびＢ細胞の内在性欠失を生じる抗原レセプター遺伝子の再配列を妨げる。Ｂｏｔｓｍａ，Ｍ．Ｊ．ら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：３２３〜３５０（１９９１）。Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ（前出）は、乾癬斑皮膚（ＰＰ）、健康な個体由来の正常なヒト皮膚（ＮＮ）、および乾癬を有する患者由来の無症状の皮膚（ＰＮ）は、臨床的、組織学的および免疫学的表現型特性の保持されたＳＣＩＤマウスに移植され得ることを報告した。
【００１９】
乾癬の様々な動物モデルは、Ｍ．Ｐ．Ｓｃｈｏｎ（前出）によって検討された。Ｓｃｈｏｎは、ＳＣＩＤマウス異種皮膚移植モデル系が、天然に存在するヒト乾癬の形態学的特性および病理学的特性を示すことを報告した。例えば、ＳＣＩＤマウスに移植された乾癬のヒト皮膚は、表皮肥厚および過剰増殖によって証明されるような乾癬表現型を保持する。また移植された皮膚は、変化されたケラチノサイト分化、ＭＨＣクラスＩＩおよびＩＣＡＭ−１の誘導、増加した血管分布、Ｔ細胞および好中球の浸潤、ならびに表皮内微小膿瘍によって特徴付けられる。従って、Ｓｃｈｏｎは、抗乾癬処置の研究のためのＳＣＩＤマウスを示し、詳細にはこの動物モデルの誘引性は実際のヒト組織に対するその依存性に起因することを示す。
【００２０】
ＳＣＩＤマウス異種移植モデルを用いて、研究者らは、乾癬の病因および病態生理学への免疫系の様々な成分の相対的な寄与を研究した。Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ（前出）は、１９９５年に、ＳＣＩＤマウス動物モデルシステムの効力を報告し、そして乾癬に関連する遺伝的異常および病原学的異常が存在する機構を解明し、そして疾患の病態生理学的基礎を例示するために設計された研究において有用性を開示した。同上文献。Ｗｒｏｎｅ−Ｓｍｉｔｈ，Ｔ．らは、機構の研究において、ＳＣＩＤ動物モデル系の有用性をさらに実証し、この研究から、乾癬は循環から誘導される免疫細胞によって媒介さること、および活性化された免疫応答細胞はケラチノサイトおよび内皮細胞の増殖を二次的に誘導することが報告された。Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９８（８）：１８７８〜１８８７（１９９６）。より最近では、Ｇｉｌｈａｒ，Ａ．らが、ＳＣＩＤマウス動物モデル系を使用して、乾癬の病状におけるＴリンパ球の役割を研究し（Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍ．，１０９（３）：２８３〜２８８（１９９７））、このことは、末梢血由来のＴ細胞ではなく、皮膚浸潤Ｔリンパ球がＳＣＩＤマウスに移植されたヒト皮膚の乾癬の表現型を保持することを示した。そして最も最近では、Ｔｏｒｒｅｓ，Ｂ．Ａ．らが、ＳＣＩＤマウスモデルを使用して、乾癬の進行における細菌およびウイルスのスーパー抗原の役割を研究した。Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１０（４）：４６５〜４７０（１９９８）。
【００２１】
ＣＤ４０アンタゴニストは、ＣＤ４+Ｔ細胞上の活性化マーカー（例えば、ＣＤ２５およびＣＤ６９）の上方制御を、未処置のコントロール細胞の約１０％と３０％との間まで阻害し得る。さらに、本発明のＣＤ４０アンタゴニストは、ＳＣＩＤマウス異種移植動物モデル系において、乾癬の形態学的特性（例えば、表皮の肥厚化および過剰増殖、すなわちそれぞれ、表皮肥厚および不全角化）を阻害する際に有効である。さらに、本願で開示されているＣＤ４０アンタゴニストを乾癬皮膚移植片を移植されたＳＣＩＤマウスに投与することによって、これらのマウスの真皮の上部における単核細胞浸潤の程度が実質的に減少した。これらの知見は、ＣＤ４０アンタゴニストの投与は一般に、慢性斑病期の乾癬により確立される病変の処置において有効であることを証明する。より詳細には、本発明は、ＣＤ４０アンタゴニスト抗体５Ｈ７が乾癬の処置において有効であることを証明する。
【００２２】
本発明のＣＤ４０アンタゴニストはまた、ＳＣＩＤマウス異種移植モデル系における新脈管形成の程度を減少し、これらの分子は腫瘍性疾患の処置に有効であり得ることを示唆する。
【００２３】
本明細書中で記載されるＣＤ４０アンタゴニストは、そのリガンドＣＤ４０ＬとのＣＤ４０との相互作用によって特徴付けられる他の自己免疫疾患を処置するために使用され得る。本明細書中で使用される場合、句「自己免疫疾患」は、１つ以上のＢ細胞および／またはＴ細胞集団、あるいはその遺伝子産物の、自己および非自己抗原決定基との間を区別することの不全によって特徴付けられる疾患を一般的にいう。自己免疫疾患は、しばしば、炎症性リンパ系細胞（例えば、単核食細胞、リンパ球および形質細胞ならびに二次リンパ系小胞）を有する標的細胞の浸潤によって特徴付けられる。例示的な自己免疫疾患は、以下を含むがこれらに限定されない：器官特異的障害（例えば、橋本甲状腺炎、一次粘膜水腫（ｍｕｘｏｅｄｅｍａ）甲状腺中毒、悪性貧血、アディソン病およびインスリン依存性糖尿病）、ならびに非器官特異的障害（例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症、皮膚筋炎、強皮症および乾癬）。
【００２４】
本明細書中に提供されるように、自己免疫疾患を処置するための組成物および方法は、単独で、または目的の自己免疫疾患の所望の軽減を達成するための他の治療剤と組合せて使用される１つ以上の抗体を利用し得る。本発明に従う抗体は、環境抗原との直接的な接触または抗原での免疫のいずれかの結果として抗体を産生する動物から単離され得る。あるいは、抗体は、当該分野で周知の抗体発現系の１つを使用して、組換えＤＮＡ方法論によって産生され得る。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）を参照のこと。このような抗体は、組換えＩｇＧ、キメラ融合タンパク質（免疫グロブリン由来配列を有する）または「ヒト化抗体」（これらは、全て本発明に従って自己免疫疾患の処置のために使用され得る）を含み得る。インタクトな全長分子に加えて、抗体という用語はまた、そのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆｄ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ）’2フラグメント）またはマルチマーまたはＣＤ４０に結合するインタクトな分子および／またフラグメントの凝集体をいう。これらの抗体フラグメントは抗原に結合し、そして例えばガラクトース残基の組み込みによるクリアランスおよび取り込みを容易にする構造的特徴を示すように誘導体化され得る。
【００２５】
本発明の１つの実施形態において、ＣＤ４０アンタゴニストは、ｄｅ Ｂｏｅｒらの米国特許第５，６７７，１６５（１９９７）（ｄｅ Ｂｏｅｒ‘１６５）（この特許は、本明細書中で参考として援用される）に記載されるように実質的に調製されたモノクローナル抗体である。この方法によって、ＣＤ４０またはそのフラグメントをコードするＤＮＡは、細胞性ｃＤＮＡの混合物からＰＣＲ増幅される。このＰＣＲ産物は、適切な末端を作製するために１つ以上の制限エンドヌクレアーゼで消化され、そしてバキュロウイルスプラスミドまたは他の発現系に結合される。バキュロウイルス発現系の場合において、ＣＤ４０またはそのフラグメントをコードするプラスミドは、例えば、Ｓｆ９細胞に導入されて、タンパク質産生を容易にする。ＣＤ４０を発現するＳｆ９細胞のクローンが、例えば、ｄｅ Ｂｏｅｒ‘１６５に記載されるようにＥＬＩＳＡによって同定され、そして腹腔内で、ＢＡＬＢ／ｃマウスに注入されて、抗体産生を誘導する。血清が特定の抗体の産生について試験され、そして正の特定の抗体力価を有する動物からの脾細胞をハイブリドーマクローンを生成するために骨髄腫細胞との細胞融合のために使用される。ハイブリドーマクローン由来の上清を、ＥＢＶ形質転換Ｂ細胞の蛍光細胞染色を介して、ＣＤ４０に対する特異性を有するモノクローナル抗体の存在について試験する。
【００２６】
本発明の別の実施形態において、ＣＤ４０アンタゴニストは、ヒト化抗ＣＤ４０モノクローナル抗体である。句「ヒト化抗体」は、非ヒト抗体（代表的に、マウスモノクローナル抗体）由来の抗体をいう。あるいは、ヒト化抗体は、親の非ヒト抗体の抗原結合特性を保持するかまたは実質的に保持するが、ヒトに投与された場合に親抗体に比較して減少した免疫原性を示すキメラ抗体から誘導され得る。本明細書中で使用される句「キメラ抗体」は、２つの異なる抗体（これらは、代表的に異なる種に起源する）由来の配列を含む抗体（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）をいう。最も代表的に、キメラ抗体は、ヒトおよびマウス抗体フラグメント、一般的には、ヒト定常領域およびマウス可変領域を含む。
【００２７】
ヒト化抗体は、例えば、以下を含む種々の方法によって達成され得る：（１）ヒトフレームワークおよび定常領域を有する非ヒト相補性決定領域（ＣＤＲ）を用いる工程（当該分野で「ヒト化」と呼ばれるプロセス）、あるいは（２）非ヒト可変ドメイン全体を移植し、ただし、表面残基の置換によってヒト様表面でそのドメインを「覆い隠す（ｃｌｏａｋｉｎｇ）」工程（当該分野では「ベニヤリング（化粧張り）（ｖｅｎｎｅｒｉｎｇ）」と呼ばれるプロセス）。本発明においては、ヒト化抗体は、「ヒト化された」抗体、および「ベニヤリングされた」抗体の両方を含む。これらの方法は、例えば、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２〜５２５（１９８６）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８１：６８５１〜６８５５（１９８４）；ＭｏｒｒｉｓｏｎおよびＯｉ，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４４：６５〜９２（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４〜１５３６（１９８８）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．２８：４８９〜４９８（１９９１）；ならびにＰａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１（３）：１６９〜２１７（１９９４）（これらの方法の各々は参考として本明細書に援用されている）に開示されている。
【００２８】
句「相補性決定領域」とは、ネイティブの免疫グロブリン結合部位の天然のＦｖ領域の結合親和性および特異性をともに規定するアミノ酸配列をいう。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７（１９８７）；Ｋａｂａｔら、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１−３２４２（１９９１）を参照のこと。句「定常領域」とは、エフェクター機能を付与する抗体分子の部分をいう。本発明の抗体の１つの実施形態において、マウス定常領域は、ヒト定常領域で置換される。本発明のヒト化抗体の定常領域は、ヒト免疫グロブリンに由来する。重鎖定常領域は、以下の５つのアイソタイプのいずれかから選択され得る：α、δ、ε、γ、またはμ。
【００２９】
抗体をヒト化する方法の１つは、ヒト重鎖および軽鎖の配列に対して非ヒト重鎖および軽鎖を整列させる工程、このような整列に基づいて、非ヒトフレームワークを選択し、そしてヒトフレームワークで置換する工程、ヒト化した配列のコンフォーメーションを予測するための分子モデリング、および親抗体のコンフォーメーションと比較する工程、を包含する。このプロセスに、ＣＤＲ領域中の残基の反復される復帰突然変異が続き、この変異は、ヒト化配列モデルの予測されるコンフォーメーションが親非ヒト抗体の非ヒトＣＤＲのコンフォーメーションに近接するまで、ＣＤＲの構造を妨害する。このようなヒト化抗体を、さらに誘導体化して、例えば、Ａｓｈｗｅｌｌレセプターを介して、または他のレセプター媒介クリアランス機構（例えば、ガラクトース残基または他のヘキソースの取り込みにより）、取り込みおよびクリアランスを容易にし得る。例えば、米国特許第５，５３０，１０１号および５，５８５，０８９号（これらの特許は参考として本明細書に援用される）を参照のこと。
【００３０】
あるいは、ヒト化抗体は、本質的に、ｄｅ Ｂｏｅｒ、米国特許第５，８７４，０８２号（１９９９）（ｄｅ Ｂｏｅｒ ’０８２）（この特許は参考として本明細書に援用される）に記載の様に、調製され得る。簡略には、ｍＲＮＡは、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体を発現するハイブリドーマから調製される。重鎖および軽鎖の可変領域をコードするｃＤＮＡを、縮重したオリゴヌクレオチドプライマーを使用するＲＴ−ＰＣＲを用いて増幅する。ｄｅ Ｂｏｅｒ’０８２に記載のように、ＲＴ−ＰＣＲ技術は、当該分野で周知であり、そしてＭｙｅｒｓら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３０：７６６１〜７６６６（１９９１）ならびに米国特許第５，３１０，６５２号および同第５，４０７，８００号を参照することにより、本明細書に援用される。ＰＣＲ産物を、配列決定するプラスミドにクローニングし、このクローンから可変重鎖および軽鎖ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を決定し、この配列から可変重鎖および軽鎖のコンセンサスアミノ酸配列を誘導する。
【００３１】
推定アミノ酸配列を用いて、モノクローナル抗体に対して最高程度の配列類似性を有するヒト抗体配列についてデータベースを検索する（ｄｅ Ｂｏｅｒ ’０８２）。同定された相同なヒト配列に基づいて、示された残基をマウスからヒトに変更するように、突然変異誘発プライマーを設計し、これを用いる。ヒト化可変重鎖および軽鎖をコードするｃＤＮＡは、ヒトＩｇＧ重鎖の定常領域および完全なヒト定常軽鎖の一部分を含むバキュロウイルス発現プラスミドで発現される。ヒト化重鎖および軽鎖をＳｆ９昆虫細胞で同時発現し、そして得られた培養上清を、ウエスタンブロットおよび蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）分析を用いて抗体発現について分析する（ｄｅ Ｂｏｅｒ’０８２）。
【００３２】
本発明のモノクローナル抗体はまた、ヒト免疫グロブリン座を含むように操作されたトランスジェニック動物を使用して産生され得る。例えば、ＷＯ９８／２４８９３は、ヒトＩｇ座を有するトランスジェニック動物を開示し、ここでこの動物は、内因性重鎖座および軽鎖座の不活化に起因して、機能的内因性免疫グロブリンを産生しない。ＷＯ９１／１０７４１はまた、免疫原に対する免疫応答を備え得るトランスジェニック非霊長類哺乳動物宿主を開示し、ここで抗体は霊長類定常領域および／または可変領域を有し、そして内因性免疫グロブリンコード座は、置換されるかまたは不活化される。ＷＯ９６／３０４９８は、哺乳動物における免疫グロブリン座を改変するため（例えば、定常領域または可変領域の全てまたは一部を置換して改変された抗体分子を形成するため）のＣｒｅ／Ｌｏｘ系の使用を開示する。ＷＯ９４／０２６０２は、不活化内因性Ｉｇ座および機能的ヒトＩｇ座を有する非ヒト哺乳動物宿主を開示する。米国特許第５，９３９，５９８号は、トランスジェニックマウスを作製する方法を開示し、ここでこのマウスは、内因性重鎖（ｃｌａｉｍｓ）を欠き、そして１つ以上の異種の定常領域を含む外因性免疫グロブリン座を発現する。
【００３３】
上記のトランスジェニック動物を使用して、免疫応答を、選択された抗原性分子（この場合ＣＤ４０）に対して生じさせ得、そして抗体産生細胞を、この動物から除去し得、そしてヒトモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを産生するために使用し得る。免疫プロトコル、アジュバントなどは、当該分野で公知であり、そして例えば、ＷＯ９６／３３７３５に記載されるようなトランスジェニックマウスの免疫において使用される。モノクローナル抗体は、対応するタンパク質の生物学的活性または生理学的効果を、阻害または中和する能力について試験され得る。
【００３４】
適切なヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体の例は、「Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉ−ＣＤ４０ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」と題する出願人らの同時係属中出願（２０００年１０月２日出願、出願番号第 、これは本明細書中に参考として援用される）に開示される。この出願は、ヒト免疫グロブリン座についてトランスジェニックなマウスにおいて惹起されるＣＤ４０抗体を開示する。これらの抗体は、種々の細胞により発現されるＣＤ４０に特異的に結合し、そして本発明の方法における使用に適切である。
【００３５】
本発明のＣＤ４０アンタゴニストは、それらがＣＤ４０に、約１０4Ｍ-1以上のＫaで、好ましくは約１０5Ｍ-1以上、より好ましくは約１０6Ｍ-1以上そしてなおより好ましくは約１０7Ｍ-1以上のＫaで結合する場合、免疫特異的である、または特異的に結合すると言われる。このようなアフィニティは、従来の技術使用して（例えば、平衡透析により；製造者により概説される一般的な手順を使用するＢＩＡｃｏｒｅ ２０００装置を使用することにより；125Ｉ標識ＣＤ４０を使用する放射免疫アッセイにより；または当業者に公知の別の方法により）容易に決定され得る。このアフィニティデータは、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄら、Ａｎｎ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，５１：６６０（１９４９）の方法により分析され得る。従って、好ましいＣＤ４０アンタゴニストが、ＣＤ４０に対する高度な特異性を示し、かつ他の分子に対して実質的により低いアフィニティで結合することが明らかである。
【００３６】
さらなるＣＤ４０アンタゴニストの同定は、他のタンパク質またはポリペプチドと特異的に相互作用するタンパク質を同定するためおよび得るための多数の公知の方法（例えば、米国特許第５，２８３，１７３号および米国特許第５，４６８，６１４号に記載されるような酵母ツーハイブリッドスクリーニング系）の何れかまたは利用され得る等価物を使用することにより達成され得る。本発明の１つの実施形態において、ＣＤ４０をコードするｃＤＮＡまたはそのフラグメントは、ツーハイブリッドベイト（ｂａｉｔ）ベクターにクローニングされ得、そしてＣＤ４０結合活性を有するタンパク質について相補的標的ライブラリーをスクリーニングするために使用され得る。
【００３７】
本明細書中で使用される場合、用語「タンパク質」は、タンパク質、オリゴペプチド、ポリペプチド、ペプチドなどを含む。さらに、タンパク質という用語はまた、フラグメント、マルチマーまたはインタクトな分子および／またはフラグメントの凝集体をいい得る。タンパク質は、天然に存在するものでも、組換えＤＮＡ手段を介してまたは化学的合成および／または酵素的合成により産生されてもよい。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（第２版、１９８９）を参照のこと。
【００３８】
抗体および他のタンパク質に加え、本発明はまた、代替ＣＤ４０アンタゴニストを包含し、これらとしては、種々の自己免疫疾患および／または新形成疾患を処置する際に効果的でもある低分子が挙げられるが、これらに限定されない。このような低分子は、そのＣＤ４０に結合する能力および／またはＣＤ４０とＣＤ４０Ｌとの間の相互作用を阻害する能力をアッセイすることにより同定され得る。
【００３９】
低分子とのＣＤ４０の結合を測定するための方法は、当該分野で用意に利用可能であり、これらには、例えば、低分子が、ＣＤ４０とそのリガンド（ＣＤ４０Ｌ）または抗ＣＤ４０抗体との間の相互作用を干渉することによる、競合アッセイが挙げられる。あるいは、直接結合アッセイを利用して、ＣＤ４０との低分子の相互作用を測定し得る。例えば、ＥＬＩＳＡアッセイが使用され得る。これは、ＣＤ４０またはＣＤ４０の細胞外ドメインを、不溶性マトリクス（例えば、組織培養プレートまたはビーズ）上へ吸着させることによる。標識したＣＤ４０Ｌまたは抗ＣＤ４０抗体は、目的の低分子を含めることによって、ＣＤ４０への結合をブロックされる。あるいは、ＣＤ４０への低分子の結合を、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）アッセイによって決定し得る。この方法によって、ＣＤ４０を発現する細胞を、蛍光タグ化した抗ＣＤ４０抗体とインキュベートするか、または蛍光タグ化した二次抗体の存在下で抗ＣＤ４０抗体とインキュベートする。ＣＤ４０への低分子の結合は、ＣＤ４０発現細胞に結合する蛍光における用量依存性の減少によって評価され得る。同様に、低分子の直接結合が、この低分子を標識（例えば、放射性標識または蛍光タグ化）して、固定したＣＤ４０またはＣＤ４０発現細胞と共にインキュベートし、そしてその結合した低分子の放射活性または蛍光についてアッセイすることによって、評価され得る。
【００４０】
本発明のＣＤ４０アンタゴニストには、適用可能である場合、機能的等価物が含まれる。例えば、分子は、長さ、構造、構成要素などによって異なり得るが、１以上の規定の機能をなお保持し得る。より詳細には、本発明の抗体、抗体フラグメントまたはペプチドの機能的等価物は、模倣化合物、すなわち、抗原結合のための適切な立体配置および／または配向を模倣するよう設計された構築物を含み得る。
【００４１】
好ましいＣＤ４０アンタゴニストは、必要に応じて、側鎖基の付加など（例えば、アミノ末端アシル化、カルボキシ末端アミド生成またはアミノ酸側鎖へのさらなる基の結合）によって改変され得る。アンタゴニストはまた、１以上の保存的アミノ酸置換を含み得る。「保存的アミノ酸置換」によって、その置換されるアミノ酸の全体の電荷、疎水性／親水性および／または立体容積（ｂｕｌｋ）を保存する、アミノ酸配列における変化が意味される。例えば、以下の基間の置換が保存的である：Ｇｌｙ／Ａｌａ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ／Ｌｅｕ、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｎ／Ｇｌｎ、Ｓｅｒ／Ｃｙｓ／ＴｈｒおよびＰｈｅ／Ｔｒｐ／Ｔｙｒ。このような改変は、ＣＤ４０アンタゴニストの効力を実質的に減少せず、そして例えば、インビボ半減期の増加または毒性の減少のような、所望の特性を付与し得る。
【００４２】
動物モデルにおいて効果的である１より多いＣＤ４０アンタゴニストを同定して、２以上のこのようなＣＤ４０アンタゴニストを共に混合し、自己免疫疾患に対するさらに改善された効力を提供することがさらに有利であり得る。１以上のＣＤ４０アンタゴニストを含む組成物は、自己免疫疾患を罹患しているかまたは自己免疫疾患に罹患する素因を有する、ヒトまたは哺乳動物に投与され得る。ＣＤ４０アンタゴニストは、炎症性のリンパ系細胞（例えば、単核食細胞、リンパ球、形質細胞および二次リンパ系小胞）を有する標的細胞の浸潤を減少することによって、および乾癬の特定の場合において、表皮肥厚および錯角化の重篤度を減少させることによって、自己免疫疾患の重篤度を最小化すると考えられる。
【００４３】
本発明の方法によって、ＣＤ４０アンタゴニストを含む組成物は、治療処置のために、非経口的、局所的、経口的または局部的に投与され得る。好ましくは、これらの組成物は、経口的または非経口的（例えば、静脈内、腹腔内、皮内または筋内）に投与される。従って、本発明は、薬学的に受容可能なキャリア（好ましくは、水性キャリア）中に１以上のＣＤ４０アンタゴニストを含む、投与用組成物を使用する方法を提供する。種々の水性キャリア（例えば、水、緩衝化水、０．４％食塩水、０．３％グリシンなど）が使用され得、そして安定性を増強するための他のタンパク質（例えば、アルブミン、リポタンパク質、グロブリンなど（これらは、穏やかな化学的改変などに供される））を含み得る。
【００４４】
自己免疫疾患のための治療剤として有用なＣＤ４０アンタゴニストは、しばしば、天然に存在する免疫グロブリンまたは他の生物学的分子を実質的に含まずに調製される。好ましいＣＤ４０アンタゴニストはまた、自己免疫疾患を患う哺乳動物に投与された場合に、最少の毒性を示す。
【００４５】
本発明の組成物は、従来の周知の滅菌技術によって滅菌され得る。得られる溶液は、使用のためにパッケージされ得るか、または無菌条件下で濾過され、そして凍結乾燥され、この凍結乾燥調製物は、投与前に滅菌溶液と合わされる。これらの組成物は、適切な生理学的条件に必要とされるような、薬学的に受容可能な補助物質（例えば、ｐＨ調整剤および緩衝剤、張度調整剤など（例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム）および安定剤（例えば、１〜２０％マルトースなど））を含み得る。
【００４６】
本発明のＣＤ４０アンタゴニストはまた、リポソームを介して投与され得る。リポソームとしては、エマルジョン、フォーム、ミセル、不溶性単層、リン脂質分散系、層状層などが挙げられ、これらは、ＣＤ４０アンタゴニストを特定の組織に標的化しそしてこの組成物の半減期を増加するための、ビヒクルとして機能し得る。種々の方法が、リポソームの調製のために利用可能である（例えば、米国特許第４，８３７，０２８号および同第５，０１９，３６９号（これらの特許は、本明細書中に参考として援用される）に記載される）。
【００４７】
これらの組成物中のＣＤ４０アンタゴニストの濃度は、選択される特定の投与形態および処置される自己免疫疾患に従って、広範に変化し得（すなわち、約１０重量％未満から、通常少なくとも約２５重量％から、７５重量％または９０重量％程度まで）、そして液体の容量、粘性などによって主に選択される。経口的、局所的および非経口的に投与可能な組成物を調製するための実際の方法は、当業者に公知であるかまたは明らかであり、そして例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｃｅ、第１９版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９９５）（本明細書中に参考として援用される）に詳細に記載される。
【００４８】
患者における自己免疫疾患を処置するための、本発明の組成物の有効量の決定は、当該分野で周知の標準的な経験的方法によって達成され得る。例えば、乾癬の場合、表皮肥厚および錯角化の逆転ならびにケラチノサイトにおけるリンパ球浸潤の減少が、測定され得る。
【００４９】
本発明の組成物は、自己免疫疾患に既に罹患している哺乳動物または自己免疫疾患に対する素因を有する哺乳動物に対して、この自己免疫疾患の発症を妨げるかまたは少なくとも部分的に阻止するのに十分な量で投与される。同様に、本発明の組成物は、新形成疾患を患う哺乳動物に、その疾患の重篤度を減少するために投与され得る。これを達成するために十分な量を、「治療的有効用量」として定義する。ＣＤ４０アンタゴニストの有効量は多様であり、疾患の重篤度ならびに処置される患者の体重および全身状態に依存するが、一般には、約１．０μｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であり、１回の適用あたり約２０μｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの投薬量が、より一般に使用される。投与は、疾患に対する応答および治療の患者耐性に依存して必要なように、毎日、毎週またはより低頻度である。長期間にわたる維持投薬が必要とされ得、そして投薬量が、必要なように調整され得る。
【００５０】
組成物の単回投与または複数回の投与が、主治医によって選択された用量レベルおよびパターンで行われ得る。いずれにしろ、処方物は、自己免疫疾患を効果的に予防するかまたはその重篤度を最小化するのに十分な量のＣＤ４０アンタゴニストを提供するべきである。本発明の組成物は、単独で投与されるか、あるいは乾癬または他の自己免疫疾患の処置のための当該分野で周知の他の治療剤と組み合わせの補助治療剤として、投与され得る。
【００５１】
本発明の方法はまた、自己免疫疾患に対するエキソビボ治療または体外治療のために使用され得、これは、体外で末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）に対して治療的操作を行うことによる。例えば、ＰＢＭＣを、被験体から取り出しそして本発明のＣＤ４０アンタゴニストで処理し得る。これらの細胞は、その後被験体に投与され、ＣＤ４+Ｔ細胞の活性化をブロックし得るかまたは実質的に減少させ得る。被験体の体外でＣＤ４０アンタゴニストの投与を行うことによって、インビボ投与を介して寛容化される濃度よりも、有意により高濃度のＣＤ４０アンタゴニストが使用され得る。本発明の方法のエキソビボ適用はさらに、自己免疫疾患に対する治療活性の増加を共に提供する、さらなる薬剤の投与を包含し得る。
本発明の組成物はまた、インビトロでの使用を見い出す。例えば、ＣＤ４０アンタゴニストは、自己免疫疾患または新形成性疾患のための治療または他の処置の有効なレベルを評価するためのスクリーニングアッセイにおいて使用され得る。他の実施形態において、本発明の組成物は、種々の可能な処置様式(例えば、乾癬または他の自己免疫疾患の処置のための方法）の設計あるいはスクリーニングにおいて使用され得る。従って、例えば、自己免疫治療の有効性を評価するための診療方法もまた、本発明によって提供される。自己免疫疾患または新形成性疾患の逆転と平行するインビトロでの変化の検出は、本発明に従う処置のために意図されるＣＤ４０アンタゴニストにおけるインビボ活性の指標を提供する。
【００５２】
以下の実施例は例示のために提供され、限定のために提供されない。
【実施例】
【００５３】
（実施例１）
この実施例は、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウス異種移植モデル系において、乾癬を処置するためのヒト化マウスモノクローナル抗体５Ｈ７の使用を記載する。
【００５４】
ＳＣＩＤは、Ｃ．Ｂ−１７マウスにおける常染色体の劣性変異であり、これは、Ｔ細胞およびＢ細胞の内因性欠陥を導く抗原レセプター遺伝子の再配列を引き起こさない。Ｂｏｅｈｎｃｋｅ，Ｗ．−Ｈ．ら、Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．，２８６(６）：３２５−３０（１９９４）。Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ（前出）は、正常（ＮＮ）；非病変、前乾癬性（ｐｒｅ−ｐｓｏｒｉａｔｉｃ）（ＰＮ）；および病変乾癬性（ＰＰ）の皮膚は、高い生存率（すなわち、＞８５％）でＳＣＩＤマウス上に移植され得ることを示した。移植後、正常な皮膚および乾癬性皮膚は、これらの代表的な形態学的特徴を保持するが、前乾癬性皮膚はいくぶんより厚くなる。この動物モデルは、乾癬に対する遺伝学的／病因学的および病態生理学的基礎を明らかにするために設計された機構型の研究を行うための実用的なモデルとして、実質的な注目を受けた。ＳＣＩＤマウスの異種移植モデルの有効性は、とりわけ、減少した表皮の厚さ、角質化の標準化、顆粒層の再確立および炎症性浸潤の減少を測定することによって決定される。
【００５５】
ＳＣＩＤマウスの異種移植モデル系を使用して、慢性の斑病期の乾癬に羅患した３人の患者由来の冒されていない非病変（ＰＮ）ヒト皮膚、冒されている病変（ＰＰ）ヒト皮膚を本明細書中でその全体が参考として援用されるＢｏｅｈｎｃｋｅ、Ｗ．−Ｈ．ら、Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．，上掲の手順に従って、マウスに移植した。各々のヒトドナーから、６つのＰＮ皮膚の移植片および６つのＰＰ皮膚の移植片を単離し、そして全部で１２匹のマウスに移植した。３つの群のマウスを以下の治療レジメンの１つに供する前に移植片を４週間治癒させた：（１）処置群−病変ＰＰ皮膚を移植したマウスを２週間の間１日おきに２０ｍｇ／ｋｇの投薬で抗体５Ｈ７を腹腔内（ｉ．ｐ．）注射することにより処置した；（２）処置コントロール群−病変ＰＰ皮膚を移植したマウスをアイソタイプ抗体ＭｓＩｇＧ1をｉ．ｐ．注射することにより処置した；（３）予防群−非病変ＰＮ皮膚を移植したマウスを本明細書中でその全体が参考として援用されるＷｒｏｎｅ−Ｓｍｉｔｈ，Ｔ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．、９８：１８７８−１８８７（１９９６）の方法に従って抗体５Ｈ７の存在下でｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌスーパー抗原を用いてエキソビボにおいて事前に活性化した２×１０6個の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を皮内（ｉ．ｄ．）注射することにより処置した。ＰＢＭＣ注射後、群（３）のマウスを、「処置群」あたりと同様にインビボで、抗体５Ｈ７の投与によりさらに処置した；そして（４）予防コントロール群−非病変ＰＮ皮膚を移植したマウスを「予防群」と同様にｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌスーパー抗原を用いてエキソビボで事前に活性化した２×１０6個のＰＢＭＣのｉ．ｄ．注射で処置し、次に抗体ＭｓＩｇＧ1を投与した。この処置の４週間後、移植片を収集し、ホルムアルデヒドで固定し、そして慣用的なヘマトキシリンおよびエオシンＨ＋Ｅ染色に基づいて形態学的に分析するために用いた。
【００５６】
群の間の比較性を保証するために、移植片を操作を始める前に迅速に巨視的に評価し、巨視的びらんを有する移植片を別個の群に分離するように群を分類した。これらの予備的な評価は、ほとんどの皮膚移植片が拒絶の証拠なしに採取されたことを示した。
（５Ｈ７のインビトロでの投与がＰＢＭＣのスーパー抗原活性化を阻害する）
細菌のスーパー抗原のエキソビボでの投与による５Ｈ７がＰＢＭＣの活性化をブロックする能力を評価するために、ＰＮ皮膚を移植されたマウスに注射されたＰＢＭＣのアリコートを二色蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）により分析した。結果を表１に要約した。表１は、ドナーＢにおけるＣＤ２５の発現の１つを除き、５Ｈ７が、ＣＤ４+Ｔ細胞上の活性化マーカーＣＤ２５およびマーカーＣＤ６９の上方制御を非処置のコントロール細胞のレベルに対し１０〜３０％の間で阻害したことを示す。
（表１：インビボにおける５Ｈ７の存在下または非存在下でのＰＢＭＣのスーパー抗原活性化の効果）
【００５７】
【表１】
（インビボでの乾癬処置に対する５Ｈ７の影響）
病変ＰＰ乾癬皮膚を移植されアイソタイプコントロール抗体ＭｓＩｇＧ1で処置したマウスは、上皮の持続性の過増殖から生じる約１９０〜３４０μｍの増加した上皮の厚さにより特徴付けられる表皮肥厚を示した。さらに、ＰＰ皮膚を移植されＭｓＩｇＧ1で処置されたマウスはまた、乾癬に代表的な角質生成過程における持続的な変化を示す顆粒層の部分的な完全欠如により特徴付けられる不全角化を示した。さらに、高密度単核浸潤がこれらのマウスの真皮の上方の位置で見られた。
【００５８】
ＰＰ皮膚を移植されたマウスのインビボにおける５Ｈ７での処置は、ヒトドナーＷおよびＢにおける３０％からヒトドナーＲにおける５０％の範囲で表皮厚の測定可能な減少をもたらした。このような表皮厚の減少は表皮の過増殖の減少に由来した。角質化パターンの標準化は、顆粒層の再構築を反映し、時折角膜層の規則的な網状構造を観察し得た。さらに、炎症性の浸潤を約５０％にまで減少させた。
【００５９】
これらの知見は、５Ｈ７投与が、ＳＣＩＤマウスモデル系における慢性斑病期（ｐｌａｑｕｅ−ｓｔａｇｅ）の乾癬由来の確立した病変の処置に有効であることを証明する。
【００６０】
（実施例２）
実験の第２のセットでは、実施例１に記載の皮膚移植片を有するマウスを、４つの処置群に分けた。
１． 低用量５Ｄ１２処置群：移植の２週間後、抗ＣＤ４０ＡＢを、０．５ｍｇ／ｋｇ用量にて、２日ごとに、２週間（６用量）、ｉｐ投与した。２〜４週間後、移植片を収集した。
２． 高用量５Ｄ１２処置群：移植の２週間後、抗ＣＤ４０ＡＢを、５ｍｇ／ｋｇ用量にて、２日ごとに、２週間（６用量）、ｉｐ投与した。２〜４週間後、移植片を収集した。
３． ５Ｃ８（抗ＣＤ４０Ｌ）処置群：移植の２週間後、抗ＣＤ４０ＡＢを、０．５ｍｇ／ｋｇ用量にて、２日ごとに、２週間（６用量）、ｉｐ投与した。２〜４週間後、移植片を収集した。
４． アイソタイプ抗体処置コントロール群：上記群２についての、コントロールＡＢ処置についての３つの病変移植片。
【００６１】
抗ＣＤ４０抗体処置は、３０％〜５０％の表皮厚の減少、および角質化パターンの標準化（角膜層の網状構造、顆粒層の再構成）、ならびに浸潤の密度により判定した炎症のわずかな低下（約２０％〜４０％の減少、マンロー微小膿瘍なし）を生じた。抗ＣＤ４０Ｌ抗体は、このモデルにおける抗ＣＤ４０抗体に類似する結果を生じる。盲検者は、陰性コントロール以外、組織学を処置プロトコルに割り当てることができなかった。
【００６２】
（実施例３）
（低用量および高用量のＣＤ４０抗体５Ｄ１２の評価）
本実験を、実施例１に記載のマウスモデルを用いて行い、抗ＣＤ４０抗体の低用量の抗乾癬効果を定量した。抗体５Ｄ１２を用いる低用量処置は、０．５ｍｇ／ｋｇ５Ｄ１２を用いる、隔日で２週間の、マウスの腹腔内注入からなった。高用量処置は、５ｍｇ／ｋｇ５Ｄ１２を用いる、隔日で２週間の、マウスの腹腔内注入からなった。５Ｃ８処置について、５ｍｇ／ｋｇ５Ｄ１２を用いる腹腔内注入を、隔日で２週間行った。処置コントロール群は、アイソタイプコントロール抗体を用いて、２週間、腹腔内注入したマウスからなった。
【００６３】
処置の終了の４週間後、移植片を収集し、そしてホルムアルデヒド中に固定するか、または素早く凍結（ｓｎａｐ−ｆｒｏｚｅｎ）した。固定した材料を、Ｈ＋Ｅ染色に基づく形態学的分析に用い、そして素早く凍結した材料をさらなる免疫組織化学的分析に用いた。これらの結果を以下に記載する。
【００６４】
（アイソタイプコントロールの効果）アイソタイプコントロール抗体を用いて処置した病変乾癬皮膚は、ドナーに依存して、３００〜５７０ｍｍの表皮厚を示した。結果を表２〜７に示す。非病変表皮または正常な表皮と比較した場合、この肥厚は、表皮肥厚症（ａｋａｎｔｈｏｓｉｓ）と呼ばれ、そしてケラチノサイトの過剰増殖（病変乾癬表皮の顕著な特徴）を持続することに起因する。肥厚表皮は、真皮乳頭を覆う表皮の狭小化と共に乳頭間隆起の明白な伸長を示した。これは波状表皮−類皮縁（ｅｐｉｄｅｒｍｏ−ｄｅｒｍａｌ ｂｏｒｄｅｒ）を生じる；この現象を乳頭腫症という。
【００６５】
ケラチノサイトの混乱した分化はまた、乾癬に特徴的であり、そして顆粒層の部分的または完全な欠如（錯角化症として公知の現象）を生じる。ケラチノサイト核の影は、コントロール層において観察され得ない。ケラチノサイト核の影は、通常、目に見えない（異常角化症）；角膜層自体は代表的な網様構造を欠き、そして代わりに緻密に見える。さらに、高密度の単核浸潤が真皮の上部に位置するところに見出した。これらの特徴は、多かれ少なかれ全てのコントロール移植片に存在したが、（８週間と対照的に）１０週間にわたりマウス上で維持されたこれらの移植片は、病変乾癬皮膚の代表的な外観の低下を示した。上記の特徴は、明白な様式の低下（例えば、顆粒層がより完全に再生した、網状様角膜層の伸張が生じた、および異常角化症の斑の頻度が低下した）に存在した。これらの結果は、比較的安定な表現型にもかかわらず、経時的な乾癬の特徴のいくつかの消滅（おそらく、寛解を示す）が存在することを示唆する。これは、慢性の再発過程により特徴付けられる、疾患の自然の流れと似ている。
【００６６】
（抗体５Ｄ１２を用いる処置の効果）
５ｍｇ／ｋｇの用量（高用量）での抗ＣＤ４０抗体５Ｄ１２を用いる処置は、ドナーに依存して２０％〜５０％の範囲の表皮厚の減少を生じた（表２〜４）。角質化パターンの標準化は、顆粒層の再樹立とよく似ており、そして時折、規則的な角膜層の網状様構造が観察され得る。異角化性の斑は観察され得なかった。さらに、炎症性浸潤は明らかに低下した。
【００６７】
０．５ｍｇ／ｋｇの用量（低用量）で５Ｄ１２抗体を与えた移植片は、高用量５Ｄ１２で処置した移植片と比較する場合、盲検者は、これらの群を識別し得なかった。このことは、組織学的特徴が、同様に見えることを示している。表皮厚さの定量化は、高用量群と比較可能な効果（２０〜４０％の減少、表２〜４）を立証する。しかし、並べて比較すると、その効果は、特に、網状様角膜層のより長い伸張、およびより少ない異角化を高用量群においてさらに明白に現した。
【００６８】
（抗体５Ｃ８での処置の効果）
抗ＣＤ４０リガンド抗体５Ｃ８の抗乾癬の効果を、５ｍｇ／ｍｌの用量で分析した。高用量および低用量５Ｄ１２処置の場合では、正常な表皮組織学の部分的修復に伴って上皮厚さのかなりの減少が、引き起こされ得た。この群と他の２つの処置レジメンの１つを与えた移植片との明らかな相違を、盲検者によって再現的に明らかにし得なかった（表２〜４）。
【００６９】
これらの結果は、上記の実施例１および実施例２に示される結果を確認しそして広げる。その中で、抗ＣＤ４０抗体は、ＳＣＩＤ−ｈｕ異種移植モデルにおいて測定可能な抗乾癬の効果を示す。
【００７０】
【表２】
【００７１】
【表３】
【００７２】
【表４】
（実施例４）
（５Ｄ１２と組み合わせるメトトレキサート処置の評価）
メトトレキサート処置単独、または低用量（０．５ｍｇ／ｋｇ）５Ｄ１２処置と組み合わせた効果を、評価した。増加投与レジメンを選択し、０．１ｍｇ／ｋｇで始めて、そして０．４ｍｇ／ｋｇに達するまで毎週０．０５ｍｇ／ｋｇずつ用量を増加させた。スキームを、アイソタイプコントロール抗体の適用または低用量５Ｄ１２処置スケジュールと組み合わせた。アイソタイプコントロール処置は、陰性コントロールとして、そして低用量５Ｄ１２処置は、陽性コントロールとして取り扱った。
【００７３】
アイソタイプコントロール抗体と組み合わせるメトトレキサートは、上皮厚みに対して最小の効果を有するのみであり、そして組織学的特徴の標準化は、観察され得なかった（表５〜７）。従って、このスケジュールに従って与えられるメトトレキサート単独は、ＳＣＩＤマウスへ移植した病変乾癬皮膚の治療のために適切なレジメンを示さない。
【００７４】
低用量５Ｄ１２と組み合わせた場合、陰性コントロールと比較して引き起こされる変化は、低用量５Ｄ１２のみを受ける陽性コントロール群において見出される変化に類似した（表５〜７）。
【００７５】
【表５】
【００７６】
【表６】
【００７７】
【表７】
表５〜７に示すように、５Ｄ１２のメトトレキサートとの組み合わせは、５Ｄ１２単独より優れた変化を引き起こすことに失敗した。再度、５Ｄ１２処置移植片において見出された変化は、この抗体が、有効な処置様式であることを確認した。０．５ｍｇ／ｋｇほどに低い用量の抗体は、有効であったが、より高用量（１ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．４ｍｇ／ｋｇ、１．６ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．２ｍｇ／ｋｇ、２．３ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇまたは２．５ｍｇ／ｋｇなど）は、あまりに低い投与量の潜在性を回避するため好ましくあり得る。
【００７８】
前述から、本発明の特定実施形態が、例示目的のために本明細書中に記載されているのもかかわらず、種々の改変は、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなくなされ得ることは、正しく認識される。従って、本発明は、添付の特許請求の範囲によるものを除いては、限定されない。
【技術分野】
【０００１】
（発明の技術分野）
本発明は、自己免疫疾患および新形成疾患を処置するための組成物、ならびに１つ以上のＣＤ４０アンタゴニストを哺乳動物に投与することによるこれらの疾患の処置の方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
乾癬は、ヒトにおいて最も流行している、依然として難解な、慢性的な炎症性皮膚障害の１つであり、集団の約２％を苦しめている。処置を開発するための集中的な努力にもかかわらず、この自己免疫疾患は、治療に対して実質的に不応性であるままである。従って、乾癬および他の関連する自己免疫疾患の処置のための、新たな薬剤および方法を同定するという、重要な必要性が残っている。本発明の組成物および方法は、これらおよび他の関連する必要性を満足する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
（発明の要旨）
本発明は、１つの実施形態において、治療有効量のＣＤ４０アンタゴニストを含む組成物（その薬学的組成物を含む）を提供する。本発明によって、ＣＤ４０アンタゴニストは、モノクローナル抗体であってもポリクローナル抗体であってもよく、ヒト化抗体またはヒト抗体を含む。あるいは、本発明のＣＤ４０アンタゴニストとしては、ＣＤ４０に結合し、これによってＣＤ４０とそのリガンド（ＣＤ４０Ｌ）との相互作用を阻害する、適切なタンパク質またはペプチドあるいは他の低分子が挙げられる。ＣＤ４０アンタゴニスト組成物は、乾癬を含む１つ以上の自己免疫疾患を逆行させるかまたはこの疾患の重篤度を軽減するに十分な量で、処方され得る。本発明の組成物は、さらに、インビボ投与に適した薬学的に受容可能なキャリアまたは安定剤を含み得る。いくつかの実施形態において、これらの組成物は、さらに、自己免疫疾患に対して効能のあるさらなる薬剤と組み合わせられ得る。
【０００４】
他の実施形態において、本発明は、自己免疫疾患を処置するための方法を提供し、この方法は、ＣＤ４０アンタゴニストおよびその薬学的組成物の投与を包含する。より特定すると、自己免疫疾患を阻害または予防するために十分な量の本発明の組成物がＣＤ４０発現細胞に投与され、これによってＣＤ４０発現細胞と接触される。本発明の方法の範囲内に含まれる自己免疫疾患としては、橋本甲状腺炎、原発性粘液水腫 甲状腺中毒症、悪性貧血、アディソン病、インスリン依存性真性糖尿病、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症、皮膚筋炎、強皮症および乾癬が挙げられるが、これらに限定されない。ＣＤ４０アンタゴニストは、経口的、局所的および非経口的を含む、種々の様式で投与され得る。
【０００５】
さらなる実施形態は、新形成疾患を処置するための方法を提供する。より特定すると、いくつかの実施形態によって、新脈管形成を減少させるに十分な量の本発明の組成物がＣＤ４０発現細胞に投与され、そしてＣＤ４０発現細胞と接触され、これによって、新形成疾患の重篤度を低下させるか、またはこの疾患を完全に逆行させる。
【０００６】
本発明のなおさらなる実施形態において、これらの方法は、エキソビボまたはインビトロのいずれで実施されてもよい。例えば、ＣＤ４０アンタゴニストは、抗自己免疫疾患治療を必要とする被験体から単離された末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）に適用され得、その後、これらのＰＢＭＣがインビボで再導入される。あるいは、本発明は、ＣＤ４０アンタゴニストが、例えば、他の潜在的な自己免疫疾患治療剤の効力についての診断アッセイにおいて、インビトロで用途を見出され得ることを提供する。
【０００７】
従って、本発明は、当該分野に、自己免疫疾患の処置において、より特定すると、乾癬により例示されるような炎症性皮膚病の処置において、一般的に効果的である組成物および方法を提供する。
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１） 自己免疫疾患を処置するための組成物であって、該組成物は、薬学的に受容可能なキャリア中のＣＤ４０アンタゴニストの治療的有効量を含む、組成物。
（項目２） 前記ＣＤ４０アンタゴニストが、低分子である、項目１に記載の組成物。
（項目３） 前記ＣＤ４０アンタゴニストが、タンパク質である、項目１に記載の組成物。
（項目４） 前記ＣＤ４０アンタゴニストが、抗体である、項目１に記載の組成物。
（項目５） 前記ＣＤ４０アンタゴニストが、モノクローナル抗体である、項目１に記載の組成物。
（項目６） 前記ＣＤ４０アンタゴニストが、ヒト化モノクローナル抗体である、項目１に記載の組成物。
（項目７） 前記ＣＤ４０アンタゴニストが、ヒトモノクローナル抗体である、項目１に記載の組成物。
（項目８） 前記ＣＤ４０アンタゴニストが、抗体５Ｈ７である、項目１に記載の組成物。
（項目９） 前記自己免疫疾患が乾癬である、項目１に記載の組成物。
（項目１０） 自己免疫疾患に罹患した哺乳動物を処置する方法であって、該方法は、ＣＤ４０アンタゴニストの治療的有効量を、該哺乳動物に投与して、それにより該自己免疫疾患の重篤度を低下させる工程を包含する、方法。
（項目１１） 前記アンタゴニストが、ＣＤ４０とＣＤ４０Ｌとの間の相互作用をブロックする、項目１０に記載の方法。
（項目１２） 前記アンタゴニストが、ＣＤ４０に結合する抗体である、項目１０に記載の方法。
（項目１３） 前記抗体が、モノクローナル抗体である、項目１０に記載の方法。
（項目１４） 前記抗体が、ヒト化モノクローナル抗体である、項目１０に記載の方法。
（項目１５） 前記抗体が、ヒトモノクローナル抗体である、項目１０に記載の方法。
（項目１６） 前記抗体が、５Ｈ７である、項目１０に記載の方法。
（項目１７） 前記アンタゴニストが、抗体５Ｈ７のフラグメントである、項目１０に記載の方法。
（項目１８） 前記自己免疫疾患が、Ｔ細胞媒介炎症性皮膚疾患である、項目１０に記載の方法。
（項目１９） 前記自己免疫疾患が、乾癬である、項目１０に記載の方法。
（項目２０） 前記哺乳動物が、ヒトである、項目１０に記載の方法。
（項目２１） 前記ＣＤ４０アンタゴニストが、腹腔内投与または皮内投与される、項目１０に記載の方法。
（項目２２） 新形成疾患に罹患した哺乳動物を処置する方法であって、該方法は、ＣＤ４０アンタゴニストの治療的有効量を、該哺乳動物に投与して、それにより該新形成疾患の重篤度を低下させる工程を包含する、方法。
（項目２３） 乾癬に罹患した哺乳動物を処置する方法であって、該方法は、ＣＤ４０アンタゴニストの治療的有効量を、該哺乳動物に投与する工程を包含する、方法。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
（発明の詳細な説明）
乾癬とは、Ｔ細胞媒介性の自己免疫疾患であり、細菌性スーパー抗原のような、遺伝的誘発因子と環境的誘発因子との両方に関連すると考えられている。例えば、Ｖａｌｄｉｍａｒｓｓｏｎ，Ｈ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１６（３），１４５−９（１９９５年３月）；Ｂｏｅｈｎｃｋｅ，Ｗ．Ｈ．ら、Ｎａｔｕｒｅ，３７９（６５６８）：７７７（１９９６年２月２９日）；Ｂｏｅｈｎｃｋｅ，Ｗ．Ｈ．、Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、４（１２）：４８５−９（１９９６年１２月）を参照のこと。この疾患は、種々の細胞型の複雑な変更（錯角化症、表皮ケラチノサイトの過剰増殖および分化、ならびに表皮肥厚症（ａｋａｎｔｈｏｓｉｓ）（ケラチノサイトの過剰増殖から生じる表皮の厚みの増加）が挙げられる）により特徴付けられる。さらに、乾癬の病変は、活性化Ｔリンパ球、真皮および表皮の微小膿瘍内の好中球、管壁マクロファージならびに皮膚の肥満細胞からなる混合白血球の浸潤を示す。Ｓｃｈｏｎ，Ｍ．Ｐ．，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍ．，１１２（４）：４０５−４１０（１９９９）。
【０００９】
ＣＤ４０は、ＴＮＦ−Ｒファミリーに属する４０〜５０ｋＤａのＩ型膜糖タンパク質であり、そしてＢリンパ球ならびに単球、樹状細胞、内皮細胞および上皮細胞において、構成的に発現される。ｖａｎ Ｋｏｏｔｅｎ，Ｃ．ら、Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１３：３９３−３９９（１９９７）；Ｄａｔｔａ，Ｓ．Ｋ．ら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ，４０（１０）：１７３５−４５（１９９７）を参照のこと。ＣＤ４０リガンド（様々にＣＤ４０Ｌ、ｇｐ３９またはＣＤ１５４と称される）は、３３ｋＤのＩＩ型膜糖タンパク質であり、主として活性化したＣＤ４+Ｔ細胞の表面で一時的に発現される。Ｄａｔｔａ，前出。
【００１０】
本発明の一部として、ＣＤ４０アンタゴニストが、乾癬のための動物モデル系における自己免疫疾患の重症度を減少させることが発見された。従って、本発明は、罹患した哺乳動物における自己免疫疾患を処置するための組成物および方法を提供する。この組成物は、ＣＤ４０アンタゴニストを含み、そしてこの方法は、ＣＤ４０アンタゴニストを含む組成物の投与を含む。本発明のＣＤ４０アンタゴニストは、処置された病変における新脈管形成の程度を減少させることもまた、発見された。この発見は、種々の新生物疾患の処置におけるＣＤ４０アンタゴニストの効力を示唆する。
【００１１】
本明細書中で使用される場合、用語「アンタゴニスト」は、一般的に、例えば、立体障害、立体配置的変化または他の生化学的機構のいずれかによって、ある分子の別の分子との結合または別の細胞によるある細胞の刺激を妨げる、分子、化合物または他の薬剤の特性をいう。１つの関連においては、用語アンタゴニストは、レセプターのそのリガンドへの結合（例えば、ＣＤ４０のＣＤ４０Ｌとの結合）を妨げ、それによってそれぞれのＢ細胞集団またはＴ細胞集団の活性化を阻害する、薬剤の特性をいう。用語アンタゴニストは、いかなる特定の作用機構によっても限定されないが、むしろ一般的に、現在定義される機能的特性をいう。本発明のアンタゴニストとしては、ＣＤ４０に結合する抗体またはペプチドおよび他の分子が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１２】
有効な治療は、有意な毒性のない有効な薬剤を同定することに依存する。乾癬および他の自己免疫疾患を処置する際に潜在的に有用な化合物は、多くの系においてスクリーニングされ得る。動物モデルは、インビボで治療的活性を有し、そして受容可能なレベルの宿主毒性を有する化合物を同定するために使用される。このモデルは、好ましくは、表皮肥厚（ａｋａｎｔｈｏｓｉｓ）および錯角化ならびに炎症性リンパ球浸潤などの乾癬の特徴を評価する。あるいは、動物モデルはまた、他の自己免疫疾患（例えば、全身性エリテマトーデス、関節リウマチおよび多発性硬化症など）の処置または種々の新生物疾患に対する処置において有効である化合物を同定するために有用である。
【００１３】
所定のＣＤ４０アンタゴニストの効力は、当業者によく知られた任意の動物モデル系において試験され得る。自己免疫疾患のための動物モデル系は、Ｒｏｉｔｔ，Ｉ．ら、「Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｎｄ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅ」、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第２８章（１９９８）に記載され；乾癬の研究のために利用可能な動物モデル系は、特に、Ｓｃｈｏｎ，Ｍ．Ｐ．（前出）に記載される。当業者は、適切な動物モデル系の選択は、処置されている特定の疾患に依存することを理解する。従って、以下の動物モデル系は、限定の目的ではなく例示の目的で提供される。
【００１４】
自己免疫は、自己抗原（すなわち、自己の抗原）を、フロイントアジュバントと共に注射することによって、実験動物に導入され得る。従って、このような動物モデル系を使用して、例えば、サイログロブリンを注射することによって、甲状腺の炎症性疾患を誘導し得る。このようなモデル系によって、甲状腺自己抗体が産生されるだけでなく、この腺が単核細胞で浸潤されそして腺房構築物が悪化するようにもなる。この動物モデルは、橋本甲状腺炎として知られるヒトの状態をモデリングするために使用されてきた。類似の様式において、ミエリン塩基性タンパク質、またはミエリン塩基性タンパク質に特異的なＴ細胞をマウスまたはラットに注射して、自己アレルギー脳脊髄炎を誘導し得る。
【００１５】
本発明の範囲内の化合物および処置レジメンを試験するために使用され得る、代替の動物モデル系としては、自発的な自己免疫疾患を示す動物が挙げられる。限定ではなく例示の目的として、ニワトリのＯｂｅｓｅ系統（ＯＳ）は、自己抗体の自発的な発生によって、ならびに甲状腺の進行性の破壊および慢性的な炎症によって特徴付けられる。ＯＳニワトリは、甲状腺の病変および種々の甲状腺構成要素に対する抗体の産生を示すことにおいて、ヒトの自己免疫甲状腺疾患と類似する。
【００１６】
ヒトの乾癬性の皮膚の、ヌードマウス、マウスのａｓｅｂｉａ（ａｂ／ａｂ）系統またはＨＬＡ−Ｂ２７トランスジェニックラットへの移植、ならびに鱗状皮膚のマウス由来の皮膚のヌードマウスへの移植を含む、乾癬のための多くの動物モデル系が記載されてきた。Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ，Ｂ．Ｊ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．，１４６（３）：５８０−５８８（１９９５）；Ｓｃｈｏｎ（前出）。ａｓｅｂｉａマウスモデルは、上皮の表皮肥厚、増加した皮膚血管分布ならびにマクロファージおよびマスト細胞の皮膚浸潤を特徴とするが、Ｔ細胞および好中球の浸潤を含まない。Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ（前出）。従って、ａｂ／ａｂマウスにおける皮膚変化は、乾癬性の病変のすべての生物学的特徴を正確に反映するわけではない。
【００１７】
上記の動物モデル系に加えて、ＳＣＩＤマウスは乾癬のインビボモデルとして広く使用される。ＳＣＩＤモデルにおける効力の標準の尺度は、表皮肥厚および不全角化の重篤度を低下する能力、ならびに乾癬の皮膚を移植された動物における単核細胞浸潤を軽減する能力である。本明細書中で記載される実験において、抗体調製物は、動物における乾癬の重篤度を実質的に阻害する。これらの知見は、乾癬の症状が、抗体またはＣＤ４０に対してアンタゴニスト効果を有する他の物質を投与することによって、阻害されるかまたは完全に予防され得ることを示す。
【００１８】
近年、ヒト皮膚細胞を長期の移植生存期間を有する重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスに移植し得ることが観察された。このＳＣＩＤマウスはまた、ヒト免疫系の成分の養子移植に受け入れられる。例えば、Ｂｏｅｈｎｃｋｅ，Ｗ．Ｈ．ら、Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．，２８６：３２５〜３３０（１９９４）を参照のこと。マウスにおけるＳＣＩＤ表現型の原因となる常染色体の劣性変異は、Ｔ細胞およびＢ細胞の内在性欠失を生じる抗原レセプター遺伝子の再配列を妨げる。Ｂｏｔｓｍａ，Ｍ．Ｊ．ら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：３２３〜３５０（１９９１）。Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ（前出）は、乾癬斑皮膚（ＰＰ）、健康な個体由来の正常なヒト皮膚（ＮＮ）、および乾癬を有する患者由来の無症状の皮膚（ＰＮ）は、臨床的、組織学的および免疫学的表現型特性の保持されたＳＣＩＤマウスに移植され得ることを報告した。
【００１９】
乾癬の様々な動物モデルは、Ｍ．Ｐ．Ｓｃｈｏｎ（前出）によって検討された。Ｓｃｈｏｎは、ＳＣＩＤマウス異種皮膚移植モデル系が、天然に存在するヒト乾癬の形態学的特性および病理学的特性を示すことを報告した。例えば、ＳＣＩＤマウスに移植された乾癬のヒト皮膚は、表皮肥厚および過剰増殖によって証明されるような乾癬表現型を保持する。また移植された皮膚は、変化されたケラチノサイト分化、ＭＨＣクラスＩＩおよびＩＣＡＭ−１の誘導、増加した血管分布、Ｔ細胞および好中球の浸潤、ならびに表皮内微小膿瘍によって特徴付けられる。従って、Ｓｃｈｏｎは、抗乾癬処置の研究のためのＳＣＩＤマウスを示し、詳細にはこの動物モデルの誘引性は実際のヒト組織に対するその依存性に起因することを示す。
【００２０】
ＳＣＩＤマウス異種移植モデルを用いて、研究者らは、乾癬の病因および病態生理学への免疫系の様々な成分の相対的な寄与を研究した。Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ（前出）は、１９９５年に、ＳＣＩＤマウス動物モデルシステムの効力を報告し、そして乾癬に関連する遺伝的異常および病原学的異常が存在する機構を解明し、そして疾患の病態生理学的基礎を例示するために設計された研究において有用性を開示した。同上文献。Ｗｒｏｎｅ−Ｓｍｉｔｈ，Ｔ．らは、機構の研究において、ＳＣＩＤ動物モデル系の有用性をさらに実証し、この研究から、乾癬は循環から誘導される免疫細胞によって媒介さること、および活性化された免疫応答細胞はケラチノサイトおよび内皮細胞の増殖を二次的に誘導することが報告された。Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９８（８）：１８７８〜１８８７（１９９６）。より最近では、Ｇｉｌｈａｒ，Ａ．らが、ＳＣＩＤマウス動物モデル系を使用して、乾癬の病状におけるＴリンパ球の役割を研究し（Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍ．，１０９（３）：２８３〜２８８（１９９７））、このことは、末梢血由来のＴ細胞ではなく、皮膚浸潤Ｔリンパ球がＳＣＩＤマウスに移植されたヒト皮膚の乾癬の表現型を保持することを示した。そして最も最近では、Ｔｏｒｒｅｓ，Ｂ．Ａ．らが、ＳＣＩＤマウスモデルを使用して、乾癬の進行における細菌およびウイルスのスーパー抗原の役割を研究した。Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１０（４）：４６５〜４７０（１９９８）。
【００２１】
ＣＤ４０アンタゴニストは、ＣＤ４+Ｔ細胞上の活性化マーカー（例えば、ＣＤ２５およびＣＤ６９）の上方制御を、未処置のコントロール細胞の約１０％と３０％との間まで阻害し得る。さらに、本発明のＣＤ４０アンタゴニストは、ＳＣＩＤマウス異種移植動物モデル系において、乾癬の形態学的特性（例えば、表皮の肥厚化および過剰増殖、すなわちそれぞれ、表皮肥厚および不全角化）を阻害する際に有効である。さらに、本願で開示されているＣＤ４０アンタゴニストを乾癬皮膚移植片を移植されたＳＣＩＤマウスに投与することによって、これらのマウスの真皮の上部における単核細胞浸潤の程度が実質的に減少した。これらの知見は、ＣＤ４０アンタゴニストの投与は一般に、慢性斑病期の乾癬により確立される病変の処置において有効であることを証明する。より詳細には、本発明は、ＣＤ４０アンタゴニスト抗体５Ｈ７が乾癬の処置において有効であることを証明する。
【００２２】
本発明のＣＤ４０アンタゴニストはまた、ＳＣＩＤマウス異種移植モデル系における新脈管形成の程度を減少し、これらの分子は腫瘍性疾患の処置に有効であり得ることを示唆する。
【００２３】
本明細書中で記載されるＣＤ４０アンタゴニストは、そのリガンドＣＤ４０ＬとのＣＤ４０との相互作用によって特徴付けられる他の自己免疫疾患を処置するために使用され得る。本明細書中で使用される場合、句「自己免疫疾患」は、１つ以上のＢ細胞および／またはＴ細胞集団、あるいはその遺伝子産物の、自己および非自己抗原決定基との間を区別することの不全によって特徴付けられる疾患を一般的にいう。自己免疫疾患は、しばしば、炎症性リンパ系細胞（例えば、単核食細胞、リンパ球および形質細胞ならびに二次リンパ系小胞）を有する標的細胞の浸潤によって特徴付けられる。例示的な自己免疫疾患は、以下を含むがこれらに限定されない：器官特異的障害（例えば、橋本甲状腺炎、一次粘膜水腫（ｍｕｘｏｅｄｅｍａ）甲状腺中毒、悪性貧血、アディソン病およびインスリン依存性糖尿病）、ならびに非器官特異的障害（例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症、皮膚筋炎、強皮症および乾癬）。
【００２４】
本明細書中に提供されるように、自己免疫疾患を処置するための組成物および方法は、単独で、または目的の自己免疫疾患の所望の軽減を達成するための他の治療剤と組合せて使用される１つ以上の抗体を利用し得る。本発明に従う抗体は、環境抗原との直接的な接触または抗原での免疫のいずれかの結果として抗体を産生する動物から単離され得る。あるいは、抗体は、当該分野で周知の抗体発現系の１つを使用して、組換えＤＮＡ方法論によって産生され得る。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）を参照のこと。このような抗体は、組換えＩｇＧ、キメラ融合タンパク質（免疫グロブリン由来配列を有する）または「ヒト化抗体」（これらは、全て本発明に従って自己免疫疾患の処置のために使用され得る）を含み得る。インタクトな全長分子に加えて、抗体という用語はまた、そのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆｄ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ）’2フラグメント）またはマルチマーまたはＣＤ４０に結合するインタクトな分子および／またフラグメントの凝集体をいう。これらの抗体フラグメントは抗原に結合し、そして例えばガラクトース残基の組み込みによるクリアランスおよび取り込みを容易にする構造的特徴を示すように誘導体化され得る。
【００２５】
本発明の１つの実施形態において、ＣＤ４０アンタゴニストは、ｄｅ Ｂｏｅｒらの米国特許第５，６７７，１６５（１９９７）（ｄｅ Ｂｏｅｒ‘１６５）（この特許は、本明細書中で参考として援用される）に記載されるように実質的に調製されたモノクローナル抗体である。この方法によって、ＣＤ４０またはそのフラグメントをコードするＤＮＡは、細胞性ｃＤＮＡの混合物からＰＣＲ増幅される。このＰＣＲ産物は、適切な末端を作製するために１つ以上の制限エンドヌクレアーゼで消化され、そしてバキュロウイルスプラスミドまたは他の発現系に結合される。バキュロウイルス発現系の場合において、ＣＤ４０またはそのフラグメントをコードするプラスミドは、例えば、Ｓｆ９細胞に導入されて、タンパク質産生を容易にする。ＣＤ４０を発現するＳｆ９細胞のクローンが、例えば、ｄｅ Ｂｏｅｒ‘１６５に記載されるようにＥＬＩＳＡによって同定され、そして腹腔内で、ＢＡＬＢ／ｃマウスに注入されて、抗体産生を誘導する。血清が特定の抗体の産生について試験され、そして正の特定の抗体力価を有する動物からの脾細胞をハイブリドーマクローンを生成するために骨髄腫細胞との細胞融合のために使用される。ハイブリドーマクローン由来の上清を、ＥＢＶ形質転換Ｂ細胞の蛍光細胞染色を介して、ＣＤ４０に対する特異性を有するモノクローナル抗体の存在について試験する。
【００２６】
本発明の別の実施形態において、ＣＤ４０アンタゴニストは、ヒト化抗ＣＤ４０モノクローナル抗体である。句「ヒト化抗体」は、非ヒト抗体（代表的に、マウスモノクローナル抗体）由来の抗体をいう。あるいは、ヒト化抗体は、親の非ヒト抗体の抗原結合特性を保持するかまたは実質的に保持するが、ヒトに投与された場合に親抗体に比較して減少した免疫原性を示すキメラ抗体から誘導され得る。本明細書中で使用される句「キメラ抗体」は、２つの異なる抗体（これらは、代表的に異なる種に起源する）由来の配列を含む抗体（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）をいう。最も代表的に、キメラ抗体は、ヒトおよびマウス抗体フラグメント、一般的には、ヒト定常領域およびマウス可変領域を含む。
【００２７】
ヒト化抗体は、例えば、以下を含む種々の方法によって達成され得る：（１）ヒトフレームワークおよび定常領域を有する非ヒト相補性決定領域（ＣＤＲ）を用いる工程（当該分野で「ヒト化」と呼ばれるプロセス）、あるいは（２）非ヒト可変ドメイン全体を移植し、ただし、表面残基の置換によってヒト様表面でそのドメインを「覆い隠す（ｃｌｏａｋｉｎｇ）」工程（当該分野では「ベニヤリング（化粧張り）（ｖｅｎｎｅｒｉｎｇ）」と呼ばれるプロセス）。本発明においては、ヒト化抗体は、「ヒト化された」抗体、および「ベニヤリングされた」抗体の両方を含む。これらの方法は、例えば、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２〜５２５（１９８６）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８１：６８５１〜６８５５（１９８４）；ＭｏｒｒｉｓｏｎおよびＯｉ，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４４：６５〜９２（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４〜１５３６（１９８８）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．２８：４８９〜４９８（１９９１）；ならびにＰａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１（３）：１６９〜２１７（１９９４）（これらの方法の各々は参考として本明細書に援用されている）に開示されている。
【００２８】
句「相補性決定領域」とは、ネイティブの免疫グロブリン結合部位の天然のＦｖ領域の結合親和性および特異性をともに規定するアミノ酸配列をいう。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７（１９８７）；Ｋａｂａｔら、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１−３２４２（１９９１）を参照のこと。句「定常領域」とは、エフェクター機能を付与する抗体分子の部分をいう。本発明の抗体の１つの実施形態において、マウス定常領域は、ヒト定常領域で置換される。本発明のヒト化抗体の定常領域は、ヒト免疫グロブリンに由来する。重鎖定常領域は、以下の５つのアイソタイプのいずれかから選択され得る：α、δ、ε、γ、またはμ。
【００２９】
抗体をヒト化する方法の１つは、ヒト重鎖および軽鎖の配列に対して非ヒト重鎖および軽鎖を整列させる工程、このような整列に基づいて、非ヒトフレームワークを選択し、そしてヒトフレームワークで置換する工程、ヒト化した配列のコンフォーメーションを予測するための分子モデリング、および親抗体のコンフォーメーションと比較する工程、を包含する。このプロセスに、ＣＤＲ領域中の残基の反復される復帰突然変異が続き、この変異は、ヒト化配列モデルの予測されるコンフォーメーションが親非ヒト抗体の非ヒトＣＤＲのコンフォーメーションに近接するまで、ＣＤＲの構造を妨害する。このようなヒト化抗体を、さらに誘導体化して、例えば、Ａｓｈｗｅｌｌレセプターを介して、または他のレセプター媒介クリアランス機構（例えば、ガラクトース残基または他のヘキソースの取り込みにより）、取り込みおよびクリアランスを容易にし得る。例えば、米国特許第５，５３０，１０１号および５，５８５，０８９号（これらの特許は参考として本明細書に援用される）を参照のこと。
【００３０】
あるいは、ヒト化抗体は、本質的に、ｄｅ Ｂｏｅｒ、米国特許第５，８７４，０８２号（１９９９）（ｄｅ Ｂｏｅｒ ’０８２）（この特許は参考として本明細書に援用される）に記載の様に、調製され得る。簡略には、ｍＲＮＡは、抗ＣＤ４０モノクローナル抗体を発現するハイブリドーマから調製される。重鎖および軽鎖の可変領域をコードするｃＤＮＡを、縮重したオリゴヌクレオチドプライマーを使用するＲＴ−ＰＣＲを用いて増幅する。ｄｅ Ｂｏｅｒ’０８２に記載のように、ＲＴ−ＰＣＲ技術は、当該分野で周知であり、そしてＭｙｅｒｓら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３０：７６６１〜７６６６（１９９１）ならびに米国特許第５，３１０，６５２号および同第５，４０７，８００号を参照することにより、本明細書に援用される。ＰＣＲ産物を、配列決定するプラスミドにクローニングし、このクローンから可変重鎖および軽鎖ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を決定し、この配列から可変重鎖および軽鎖のコンセンサスアミノ酸配列を誘導する。
【００３１】
推定アミノ酸配列を用いて、モノクローナル抗体に対して最高程度の配列類似性を有するヒト抗体配列についてデータベースを検索する（ｄｅ Ｂｏｅｒ ’０８２）。同定された相同なヒト配列に基づいて、示された残基をマウスからヒトに変更するように、突然変異誘発プライマーを設計し、これを用いる。ヒト化可変重鎖および軽鎖をコードするｃＤＮＡは、ヒトＩｇＧ重鎖の定常領域および完全なヒト定常軽鎖の一部分を含むバキュロウイルス発現プラスミドで発現される。ヒト化重鎖および軽鎖をＳｆ９昆虫細胞で同時発現し、そして得られた培養上清を、ウエスタンブロットおよび蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）分析を用いて抗体発現について分析する（ｄｅ Ｂｏｅｒ’０８２）。
【００３２】
本発明のモノクローナル抗体はまた、ヒト免疫グロブリン座を含むように操作されたトランスジェニック動物を使用して産生され得る。例えば、ＷＯ９８／２４８９３は、ヒトＩｇ座を有するトランスジェニック動物を開示し、ここでこの動物は、内因性重鎖座および軽鎖座の不活化に起因して、機能的内因性免疫グロブリンを産生しない。ＷＯ９１／１０７４１はまた、免疫原に対する免疫応答を備え得るトランスジェニック非霊長類哺乳動物宿主を開示し、ここで抗体は霊長類定常領域および／または可変領域を有し、そして内因性免疫グロブリンコード座は、置換されるかまたは不活化される。ＷＯ９６／３０４９８は、哺乳動物における免疫グロブリン座を改変するため（例えば、定常領域または可変領域の全てまたは一部を置換して改変された抗体分子を形成するため）のＣｒｅ／Ｌｏｘ系の使用を開示する。ＷＯ９４／０２６０２は、不活化内因性Ｉｇ座および機能的ヒトＩｇ座を有する非ヒト哺乳動物宿主を開示する。米国特許第５，９３９，５９８号は、トランスジェニックマウスを作製する方法を開示し、ここでこのマウスは、内因性重鎖（ｃｌａｉｍｓ）を欠き、そして１つ以上の異種の定常領域を含む外因性免疫グロブリン座を発現する。
【００３３】
上記のトランスジェニック動物を使用して、免疫応答を、選択された抗原性分子（この場合ＣＤ４０）に対して生じさせ得、そして抗体産生細胞を、この動物から除去し得、そしてヒトモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを産生するために使用し得る。免疫プロトコル、アジュバントなどは、当該分野で公知であり、そして例えば、ＷＯ９６／３３７３５に記載されるようなトランスジェニックマウスの免疫において使用される。モノクローナル抗体は、対応するタンパク質の生物学的活性または生理学的効果を、阻害または中和する能力について試験され得る。
【００３４】
適切なヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体の例は、「Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉ−ＣＤ４０ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」と題する出願人らの同時係属中出願（２０００年１０月２日出願、出願番号第 、これは本明細書中に参考として援用される）に開示される。この出願は、ヒト免疫グロブリン座についてトランスジェニックなマウスにおいて惹起されるＣＤ４０抗体を開示する。これらの抗体は、種々の細胞により発現されるＣＤ４０に特異的に結合し、そして本発明の方法における使用に適切である。
【００３５】
本発明のＣＤ４０アンタゴニストは、それらがＣＤ４０に、約１０4Ｍ-1以上のＫaで、好ましくは約１０5Ｍ-1以上、より好ましくは約１０6Ｍ-1以上そしてなおより好ましくは約１０7Ｍ-1以上のＫaで結合する場合、免疫特異的である、または特異的に結合すると言われる。このようなアフィニティは、従来の技術使用して（例えば、平衡透析により；製造者により概説される一般的な手順を使用するＢＩＡｃｏｒｅ ２０００装置を使用することにより；125Ｉ標識ＣＤ４０を使用する放射免疫アッセイにより；または当業者に公知の別の方法により）容易に決定され得る。このアフィニティデータは、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄら、Ａｎｎ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，５１：６６０（１９４９）の方法により分析され得る。従って、好ましいＣＤ４０アンタゴニストが、ＣＤ４０に対する高度な特異性を示し、かつ他の分子に対して実質的により低いアフィニティで結合することが明らかである。
【００３６】
さらなるＣＤ４０アンタゴニストの同定は、他のタンパク質またはポリペプチドと特異的に相互作用するタンパク質を同定するためおよび得るための多数の公知の方法（例えば、米国特許第５，２８３，１７３号および米国特許第５，４６８，６１４号に記載されるような酵母ツーハイブリッドスクリーニング系）の何れかまたは利用され得る等価物を使用することにより達成され得る。本発明の１つの実施形態において、ＣＤ４０をコードするｃＤＮＡまたはそのフラグメントは、ツーハイブリッドベイト（ｂａｉｔ）ベクターにクローニングされ得、そしてＣＤ４０結合活性を有するタンパク質について相補的標的ライブラリーをスクリーニングするために使用され得る。
【００３７】
本明細書中で使用される場合、用語「タンパク質」は、タンパク質、オリゴペプチド、ポリペプチド、ペプチドなどを含む。さらに、タンパク質という用語はまた、フラグメント、マルチマーまたはインタクトな分子および／またはフラグメントの凝集体をいい得る。タンパク質は、天然に存在するものでも、組換えＤＮＡ手段を介してまたは化学的合成および／または酵素的合成により産生されてもよい。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（第２版、１９８９）を参照のこと。
【００３８】
抗体および他のタンパク質に加え、本発明はまた、代替ＣＤ４０アンタゴニストを包含し、これらとしては、種々の自己免疫疾患および／または新形成疾患を処置する際に効果的でもある低分子が挙げられるが、これらに限定されない。このような低分子は、そのＣＤ４０に結合する能力および／またはＣＤ４０とＣＤ４０Ｌとの間の相互作用を阻害する能力をアッセイすることにより同定され得る。
【００３９】
低分子とのＣＤ４０の結合を測定するための方法は、当該分野で用意に利用可能であり、これらには、例えば、低分子が、ＣＤ４０とそのリガンド（ＣＤ４０Ｌ）または抗ＣＤ４０抗体との間の相互作用を干渉することによる、競合アッセイが挙げられる。あるいは、直接結合アッセイを利用して、ＣＤ４０との低分子の相互作用を測定し得る。例えば、ＥＬＩＳＡアッセイが使用され得る。これは、ＣＤ４０またはＣＤ４０の細胞外ドメインを、不溶性マトリクス（例えば、組織培養プレートまたはビーズ）上へ吸着させることによる。標識したＣＤ４０Ｌまたは抗ＣＤ４０抗体は、目的の低分子を含めることによって、ＣＤ４０への結合をブロックされる。あるいは、ＣＤ４０への低分子の結合を、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）アッセイによって決定し得る。この方法によって、ＣＤ４０を発現する細胞を、蛍光タグ化した抗ＣＤ４０抗体とインキュベートするか、または蛍光タグ化した二次抗体の存在下で抗ＣＤ４０抗体とインキュベートする。ＣＤ４０への低分子の結合は、ＣＤ４０発現細胞に結合する蛍光における用量依存性の減少によって評価され得る。同様に、低分子の直接結合が、この低分子を標識（例えば、放射性標識または蛍光タグ化）して、固定したＣＤ４０またはＣＤ４０発現細胞と共にインキュベートし、そしてその結合した低分子の放射活性または蛍光についてアッセイすることによって、評価され得る。
【００４０】
本発明のＣＤ４０アンタゴニストには、適用可能である場合、機能的等価物が含まれる。例えば、分子は、長さ、構造、構成要素などによって異なり得るが、１以上の規定の機能をなお保持し得る。より詳細には、本発明の抗体、抗体フラグメントまたはペプチドの機能的等価物は、模倣化合物、すなわち、抗原結合のための適切な立体配置および／または配向を模倣するよう設計された構築物を含み得る。
【００４１】
好ましいＣＤ４０アンタゴニストは、必要に応じて、側鎖基の付加など（例えば、アミノ末端アシル化、カルボキシ末端アミド生成またはアミノ酸側鎖へのさらなる基の結合）によって改変され得る。アンタゴニストはまた、１以上の保存的アミノ酸置換を含み得る。「保存的アミノ酸置換」によって、その置換されるアミノ酸の全体の電荷、疎水性／親水性および／または立体容積（ｂｕｌｋ）を保存する、アミノ酸配列における変化が意味される。例えば、以下の基間の置換が保存的である：Ｇｌｙ／Ａｌａ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ／Ｌｅｕ、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｎ／Ｇｌｎ、Ｓｅｒ／Ｃｙｓ／ＴｈｒおよびＰｈｅ／Ｔｒｐ／Ｔｙｒ。このような改変は、ＣＤ４０アンタゴニストの効力を実質的に減少せず、そして例えば、インビボ半減期の増加または毒性の減少のような、所望の特性を付与し得る。
【００４２】
動物モデルにおいて効果的である１より多いＣＤ４０アンタゴニストを同定して、２以上のこのようなＣＤ４０アンタゴニストを共に混合し、自己免疫疾患に対するさらに改善された効力を提供することがさらに有利であり得る。１以上のＣＤ４０アンタゴニストを含む組成物は、自己免疫疾患を罹患しているかまたは自己免疫疾患に罹患する素因を有する、ヒトまたは哺乳動物に投与され得る。ＣＤ４０アンタゴニストは、炎症性のリンパ系細胞（例えば、単核食細胞、リンパ球、形質細胞および二次リンパ系小胞）を有する標的細胞の浸潤を減少することによって、および乾癬の特定の場合において、表皮肥厚および錯角化の重篤度を減少させることによって、自己免疫疾患の重篤度を最小化すると考えられる。
【００４３】
本発明の方法によって、ＣＤ４０アンタゴニストを含む組成物は、治療処置のために、非経口的、局所的、経口的または局部的に投与され得る。好ましくは、これらの組成物は、経口的または非経口的（例えば、静脈内、腹腔内、皮内または筋内）に投与される。従って、本発明は、薬学的に受容可能なキャリア（好ましくは、水性キャリア）中に１以上のＣＤ４０アンタゴニストを含む、投与用組成物を使用する方法を提供する。種々の水性キャリア（例えば、水、緩衝化水、０．４％食塩水、０．３％グリシンなど）が使用され得、そして安定性を増強するための他のタンパク質（例えば、アルブミン、リポタンパク質、グロブリンなど（これらは、穏やかな化学的改変などに供される））を含み得る。
【００４４】
自己免疫疾患のための治療剤として有用なＣＤ４０アンタゴニストは、しばしば、天然に存在する免疫グロブリンまたは他の生物学的分子を実質的に含まずに調製される。好ましいＣＤ４０アンタゴニストはまた、自己免疫疾患を患う哺乳動物に投与された場合に、最少の毒性を示す。
【００４５】
本発明の組成物は、従来の周知の滅菌技術によって滅菌され得る。得られる溶液は、使用のためにパッケージされ得るか、または無菌条件下で濾過され、そして凍結乾燥され、この凍結乾燥調製物は、投与前に滅菌溶液と合わされる。これらの組成物は、適切な生理学的条件に必要とされるような、薬学的に受容可能な補助物質（例えば、ｐＨ調整剤および緩衝剤、張度調整剤など（例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム）および安定剤（例えば、１〜２０％マルトースなど））を含み得る。
【００４６】
本発明のＣＤ４０アンタゴニストはまた、リポソームを介して投与され得る。リポソームとしては、エマルジョン、フォーム、ミセル、不溶性単層、リン脂質分散系、層状層などが挙げられ、これらは、ＣＤ４０アンタゴニストを特定の組織に標的化しそしてこの組成物の半減期を増加するための、ビヒクルとして機能し得る。種々の方法が、リポソームの調製のために利用可能である（例えば、米国特許第４，８３７，０２８号および同第５，０１９，３６９号（これらの特許は、本明細書中に参考として援用される）に記載される）。
【００４７】
これらの組成物中のＣＤ４０アンタゴニストの濃度は、選択される特定の投与形態および処置される自己免疫疾患に従って、広範に変化し得（すなわち、約１０重量％未満から、通常少なくとも約２５重量％から、７５重量％または９０重量％程度まで）、そして液体の容量、粘性などによって主に選択される。経口的、局所的および非経口的に投与可能な組成物を調製するための実際の方法は、当業者に公知であるかまたは明らかであり、そして例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｃｅ、第１９版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９９５）（本明細書中に参考として援用される）に詳細に記載される。
【００４８】
患者における自己免疫疾患を処置するための、本発明の組成物の有効量の決定は、当該分野で周知の標準的な経験的方法によって達成され得る。例えば、乾癬の場合、表皮肥厚および錯角化の逆転ならびにケラチノサイトにおけるリンパ球浸潤の減少が、測定され得る。
【００４９】
本発明の組成物は、自己免疫疾患に既に罹患している哺乳動物または自己免疫疾患に対する素因を有する哺乳動物に対して、この自己免疫疾患の発症を妨げるかまたは少なくとも部分的に阻止するのに十分な量で投与される。同様に、本発明の組成物は、新形成疾患を患う哺乳動物に、その疾患の重篤度を減少するために投与され得る。これを達成するために十分な量を、「治療的有効用量」として定義する。ＣＤ４０アンタゴニストの有効量は多様であり、疾患の重篤度ならびに処置される患者の体重および全身状態に依存するが、一般には、約１．０μｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であり、１回の適用あたり約２０μｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの投薬量が、より一般に使用される。投与は、疾患に対する応答および治療の患者耐性に依存して必要なように、毎日、毎週またはより低頻度である。長期間にわたる維持投薬が必要とされ得、そして投薬量が、必要なように調整され得る。
【００５０】
組成物の単回投与または複数回の投与が、主治医によって選択された用量レベルおよびパターンで行われ得る。いずれにしろ、処方物は、自己免疫疾患を効果的に予防するかまたはその重篤度を最小化するのに十分な量のＣＤ４０アンタゴニストを提供するべきである。本発明の組成物は、単独で投与されるか、あるいは乾癬または他の自己免疫疾患の処置のための当該分野で周知の他の治療剤と組み合わせの補助治療剤として、投与され得る。
【００５１】
本発明の方法はまた、自己免疫疾患に対するエキソビボ治療または体外治療のために使用され得、これは、体外で末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）に対して治療的操作を行うことによる。例えば、ＰＢＭＣを、被験体から取り出しそして本発明のＣＤ４０アンタゴニストで処理し得る。これらの細胞は、その後被験体に投与され、ＣＤ４+Ｔ細胞の活性化をブロックし得るかまたは実質的に減少させ得る。被験体の体外でＣＤ４０アンタゴニストの投与を行うことによって、インビボ投与を介して寛容化される濃度よりも、有意により高濃度のＣＤ４０アンタゴニストが使用され得る。本発明の方法のエキソビボ適用はさらに、自己免疫疾患に対する治療活性の増加を共に提供する、さらなる薬剤の投与を包含し得る。
本発明の組成物はまた、インビトロでの使用を見い出す。例えば、ＣＤ４０アンタゴニストは、自己免疫疾患または新形成性疾患のための治療または他の処置の有効なレベルを評価するためのスクリーニングアッセイにおいて使用され得る。他の実施形態において、本発明の組成物は、種々の可能な処置様式(例えば、乾癬または他の自己免疫疾患の処置のための方法）の設計あるいはスクリーニングにおいて使用され得る。従って、例えば、自己免疫治療の有効性を評価するための診療方法もまた、本発明によって提供される。自己免疫疾患または新形成性疾患の逆転と平行するインビトロでの変化の検出は、本発明に従う処置のために意図されるＣＤ４０アンタゴニストにおけるインビボ活性の指標を提供する。
【００５２】
以下の実施例は例示のために提供され、限定のために提供されない。
【実施例】
【００５３】
（実施例１）
この実施例は、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウス異種移植モデル系において、乾癬を処置するためのヒト化マウスモノクローナル抗体５Ｈ７の使用を記載する。
【００５４】
ＳＣＩＤは、Ｃ．Ｂ−１７マウスにおける常染色体の劣性変異であり、これは、Ｔ細胞およびＢ細胞の内因性欠陥を導く抗原レセプター遺伝子の再配列を引き起こさない。Ｂｏｅｈｎｃｋｅ，Ｗ．−Ｈ．ら、Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．，２８６(６）：３２５−３０（１９９４）。Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ（前出）は、正常（ＮＮ）；非病変、前乾癬性（ｐｒｅ−ｐｓｏｒｉａｔｉｃ）（ＰＮ）；および病変乾癬性（ＰＰ）の皮膚は、高い生存率（すなわち、＞８５％）でＳＣＩＤマウス上に移植され得ることを示した。移植後、正常な皮膚および乾癬性皮膚は、これらの代表的な形態学的特徴を保持するが、前乾癬性皮膚はいくぶんより厚くなる。この動物モデルは、乾癬に対する遺伝学的／病因学的および病態生理学的基礎を明らかにするために設計された機構型の研究を行うための実用的なモデルとして、実質的な注目を受けた。ＳＣＩＤマウスの異種移植モデルの有効性は、とりわけ、減少した表皮の厚さ、角質化の標準化、顆粒層の再確立および炎症性浸潤の減少を測定することによって決定される。
【００５５】
ＳＣＩＤマウスの異種移植モデル系を使用して、慢性の斑病期の乾癬に羅患した３人の患者由来の冒されていない非病変（ＰＮ）ヒト皮膚、冒されている病変（ＰＰ）ヒト皮膚を本明細書中でその全体が参考として援用されるＢｏｅｈｎｃｋｅ、Ｗ．−Ｈ．ら、Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．，上掲の手順に従って、マウスに移植した。各々のヒトドナーから、６つのＰＮ皮膚の移植片および６つのＰＰ皮膚の移植片を単離し、そして全部で１２匹のマウスに移植した。３つの群のマウスを以下の治療レジメンの１つに供する前に移植片を４週間治癒させた：（１）処置群−病変ＰＰ皮膚を移植したマウスを２週間の間１日おきに２０ｍｇ／ｋｇの投薬で抗体５Ｈ７を腹腔内（ｉ．ｐ．）注射することにより処置した；（２）処置コントロール群−病変ＰＰ皮膚を移植したマウスをアイソタイプ抗体ＭｓＩｇＧ1をｉ．ｐ．注射することにより処置した；（３）予防群−非病変ＰＮ皮膚を移植したマウスを本明細書中でその全体が参考として援用されるＷｒｏｎｅ−Ｓｍｉｔｈ，Ｔ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．、９８：１８７８−１８８７（１９９６）の方法に従って抗体５Ｈ７の存在下でｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌスーパー抗原を用いてエキソビボにおいて事前に活性化した２×１０6個の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を皮内（ｉ．ｄ．）注射することにより処置した。ＰＢＭＣ注射後、群（３）のマウスを、「処置群」あたりと同様にインビボで、抗体５Ｈ７の投与によりさらに処置した；そして（４）予防コントロール群−非病変ＰＮ皮膚を移植したマウスを「予防群」と同様にｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌスーパー抗原を用いてエキソビボで事前に活性化した２×１０6個のＰＢＭＣのｉ．ｄ．注射で処置し、次に抗体ＭｓＩｇＧ1を投与した。この処置の４週間後、移植片を収集し、ホルムアルデヒドで固定し、そして慣用的なヘマトキシリンおよびエオシンＨ＋Ｅ染色に基づいて形態学的に分析するために用いた。
【００５６】
群の間の比較性を保証するために、移植片を操作を始める前に迅速に巨視的に評価し、巨視的びらんを有する移植片を別個の群に分離するように群を分類した。これらの予備的な評価は、ほとんどの皮膚移植片が拒絶の証拠なしに採取されたことを示した。
（５Ｈ７のインビトロでの投与がＰＢＭＣのスーパー抗原活性化を阻害する）
細菌のスーパー抗原のエキソビボでの投与による５Ｈ７がＰＢＭＣの活性化をブロックする能力を評価するために、ＰＮ皮膚を移植されたマウスに注射されたＰＢＭＣのアリコートを二色蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）により分析した。結果を表１に要約した。表１は、ドナーＢにおけるＣＤ２５の発現の１つを除き、５Ｈ７が、ＣＤ４+Ｔ細胞上の活性化マーカーＣＤ２５およびマーカーＣＤ６９の上方制御を非処置のコントロール細胞のレベルに対し１０〜３０％の間で阻害したことを示す。
（表１：インビボにおける５Ｈ７の存在下または非存在下でのＰＢＭＣのスーパー抗原活性化の効果）
【００５７】
【表１】
（インビボでの乾癬処置に対する５Ｈ７の影響）
病変ＰＰ乾癬皮膚を移植されアイソタイプコントロール抗体ＭｓＩｇＧ1で処置したマウスは、上皮の持続性の過増殖から生じる約１９０〜３４０μｍの増加した上皮の厚さにより特徴付けられる表皮肥厚を示した。さらに、ＰＰ皮膚を移植されＭｓＩｇＧ1で処置されたマウスはまた、乾癬に代表的な角質生成過程における持続的な変化を示す顆粒層の部分的な完全欠如により特徴付けられる不全角化を示した。さらに、高密度単核浸潤がこれらのマウスの真皮の上方の位置で見られた。
【００５８】
ＰＰ皮膚を移植されたマウスのインビボにおける５Ｈ７での処置は、ヒトドナーＷおよびＢにおける３０％からヒトドナーＲにおける５０％の範囲で表皮厚の測定可能な減少をもたらした。このような表皮厚の減少は表皮の過増殖の減少に由来した。角質化パターンの標準化は、顆粒層の再構築を反映し、時折角膜層の規則的な網状構造を観察し得た。さらに、炎症性の浸潤を約５０％にまで減少させた。
【００５９】
これらの知見は、５Ｈ７投与が、ＳＣＩＤマウスモデル系における慢性斑病期（ｐｌａｑｕｅ−ｓｔａｇｅ）の乾癬由来の確立した病変の処置に有効であることを証明する。
【００６０】
（実施例２）
実験の第２のセットでは、実施例１に記載の皮膚移植片を有するマウスを、４つの処置群に分けた。
１． 低用量５Ｄ１２処置群：移植の２週間後、抗ＣＤ４０ＡＢを、０．５ｍｇ／ｋｇ用量にて、２日ごとに、２週間（６用量）、ｉｐ投与した。２〜４週間後、移植片を収集した。
２． 高用量５Ｄ１２処置群：移植の２週間後、抗ＣＤ４０ＡＢを、５ｍｇ／ｋｇ用量にて、２日ごとに、２週間（６用量）、ｉｐ投与した。２〜４週間後、移植片を収集した。
３． ５Ｃ８（抗ＣＤ４０Ｌ）処置群：移植の２週間後、抗ＣＤ４０ＡＢを、０．５ｍｇ／ｋｇ用量にて、２日ごとに、２週間（６用量）、ｉｐ投与した。２〜４週間後、移植片を収集した。
４． アイソタイプ抗体処置コントロール群：上記群２についての、コントロールＡＢ処置についての３つの病変移植片。
【００６１】
抗ＣＤ４０抗体処置は、３０％〜５０％の表皮厚の減少、および角質化パターンの標準化（角膜層の網状構造、顆粒層の再構成）、ならびに浸潤の密度により判定した炎症のわずかな低下（約２０％〜４０％の減少、マンロー微小膿瘍なし）を生じた。抗ＣＤ４０Ｌ抗体は、このモデルにおける抗ＣＤ４０抗体に類似する結果を生じる。盲検者は、陰性コントロール以外、組織学を処置プロトコルに割り当てることができなかった。
【００６２】
（実施例３）
（低用量および高用量のＣＤ４０抗体５Ｄ１２の評価）
本実験を、実施例１に記載のマウスモデルを用いて行い、抗ＣＤ４０抗体の低用量の抗乾癬効果を定量した。抗体５Ｄ１２を用いる低用量処置は、０．５ｍｇ／ｋｇ５Ｄ１２を用いる、隔日で２週間の、マウスの腹腔内注入からなった。高用量処置は、５ｍｇ／ｋｇ５Ｄ１２を用いる、隔日で２週間の、マウスの腹腔内注入からなった。５Ｃ８処置について、５ｍｇ／ｋｇ５Ｄ１２を用いる腹腔内注入を、隔日で２週間行った。処置コントロール群は、アイソタイプコントロール抗体を用いて、２週間、腹腔内注入したマウスからなった。
【００６３】
処置の終了の４週間後、移植片を収集し、そしてホルムアルデヒド中に固定するか、または素早く凍結（ｓｎａｐ−ｆｒｏｚｅｎ）した。固定した材料を、Ｈ＋Ｅ染色に基づく形態学的分析に用い、そして素早く凍結した材料をさらなる免疫組織化学的分析に用いた。これらの結果を以下に記載する。
【００６４】
（アイソタイプコントロールの効果）アイソタイプコントロール抗体を用いて処置した病変乾癬皮膚は、ドナーに依存して、３００〜５７０ｍｍの表皮厚を示した。結果を表２〜７に示す。非病変表皮または正常な表皮と比較した場合、この肥厚は、表皮肥厚症（ａｋａｎｔｈｏｓｉｓ）と呼ばれ、そしてケラチノサイトの過剰増殖（病変乾癬表皮の顕著な特徴）を持続することに起因する。肥厚表皮は、真皮乳頭を覆う表皮の狭小化と共に乳頭間隆起の明白な伸長を示した。これは波状表皮−類皮縁（ｅｐｉｄｅｒｍｏ−ｄｅｒｍａｌ ｂｏｒｄｅｒ）を生じる；この現象を乳頭腫症という。
【００６５】
ケラチノサイトの混乱した分化はまた、乾癬に特徴的であり、そして顆粒層の部分的または完全な欠如（錯角化症として公知の現象）を生じる。ケラチノサイト核の影は、コントロール層において観察され得ない。ケラチノサイト核の影は、通常、目に見えない（異常角化症）；角膜層自体は代表的な網様構造を欠き、そして代わりに緻密に見える。さらに、高密度の単核浸潤が真皮の上部に位置するところに見出した。これらの特徴は、多かれ少なかれ全てのコントロール移植片に存在したが、（８週間と対照的に）１０週間にわたりマウス上で維持されたこれらの移植片は、病変乾癬皮膚の代表的な外観の低下を示した。上記の特徴は、明白な様式の低下（例えば、顆粒層がより完全に再生した、網状様角膜層の伸張が生じた、および異常角化症の斑の頻度が低下した）に存在した。これらの結果は、比較的安定な表現型にもかかわらず、経時的な乾癬の特徴のいくつかの消滅（おそらく、寛解を示す）が存在することを示唆する。これは、慢性の再発過程により特徴付けられる、疾患の自然の流れと似ている。
【００６６】
（抗体５Ｄ１２を用いる処置の効果）
５ｍｇ／ｋｇの用量（高用量）での抗ＣＤ４０抗体５Ｄ１２を用いる処置は、ドナーに依存して２０％〜５０％の範囲の表皮厚の減少を生じた（表２〜４）。角質化パターンの標準化は、顆粒層の再樹立とよく似ており、そして時折、規則的な角膜層の網状様構造が観察され得る。異角化性の斑は観察され得なかった。さらに、炎症性浸潤は明らかに低下した。
【００６７】
０．５ｍｇ／ｋｇの用量（低用量）で５Ｄ１２抗体を与えた移植片は、高用量５Ｄ１２で処置した移植片と比較する場合、盲検者は、これらの群を識別し得なかった。このことは、組織学的特徴が、同様に見えることを示している。表皮厚さの定量化は、高用量群と比較可能な効果（２０〜４０％の減少、表２〜４）を立証する。しかし、並べて比較すると、その効果は、特に、網状様角膜層のより長い伸張、およびより少ない異角化を高用量群においてさらに明白に現した。
【００６８】
（抗体５Ｃ８での処置の効果）
抗ＣＤ４０リガンド抗体５Ｃ８の抗乾癬の効果を、５ｍｇ／ｍｌの用量で分析した。高用量および低用量５Ｄ１２処置の場合では、正常な表皮組織学の部分的修復に伴って上皮厚さのかなりの減少が、引き起こされ得た。この群と他の２つの処置レジメンの１つを与えた移植片との明らかな相違を、盲検者によって再現的に明らかにし得なかった（表２〜４）。
【００６９】
これらの結果は、上記の実施例１および実施例２に示される結果を確認しそして広げる。その中で、抗ＣＤ４０抗体は、ＳＣＩＤ−ｈｕ異種移植モデルにおいて測定可能な抗乾癬の効果を示す。
【００７０】
【表２】
【００７１】
【表３】
【００７２】
【表４】
（実施例４）
（５Ｄ１２と組み合わせるメトトレキサート処置の評価）
メトトレキサート処置単独、または低用量（０．５ｍｇ／ｋｇ）５Ｄ１２処置と組み合わせた効果を、評価した。増加投与レジメンを選択し、０．１ｍｇ／ｋｇで始めて、そして０．４ｍｇ／ｋｇに達するまで毎週０．０５ｍｇ／ｋｇずつ用量を増加させた。スキームを、アイソタイプコントロール抗体の適用または低用量５Ｄ１２処置スケジュールと組み合わせた。アイソタイプコントロール処置は、陰性コントロールとして、そして低用量５Ｄ１２処置は、陽性コントロールとして取り扱った。
【００７３】
アイソタイプコントロール抗体と組み合わせるメトトレキサートは、上皮厚みに対して最小の効果を有するのみであり、そして組織学的特徴の標準化は、観察され得なかった（表５〜７）。従って、このスケジュールに従って与えられるメトトレキサート単独は、ＳＣＩＤマウスへ移植した病変乾癬皮膚の治療のために適切なレジメンを示さない。
【００７４】
低用量５Ｄ１２と組み合わせた場合、陰性コントロールと比較して引き起こされる変化は、低用量５Ｄ１２のみを受ける陽性コントロール群において見出される変化に類似した（表５〜７）。
【００７５】
【表５】
【００７６】
【表６】
【００７７】
【表７】
表５〜７に示すように、５Ｄ１２のメトトレキサートとの組み合わせは、５Ｄ１２単独より優れた変化を引き起こすことに失敗した。再度、５Ｄ１２処置移植片において見出された変化は、この抗体が、有効な処置様式であることを確認した。０．５ｍｇ／ｋｇほどに低い用量の抗体は、有効であったが、より高用量（１ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．４ｍｇ／ｋｇ、１．６ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．２ｍｇ／ｋｇ、２．３ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇまたは２．５ｍｇ／ｋｇなど）は、あまりに低い投与量の潜在性を回避するため好ましくあり得る。
【００７８】
前述から、本発明の特定実施形態が、例示目的のために本明細書中に記載されているのもかかわらず、種々の改変は、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなくなされ得ることは、正しく認識される。従って、本発明は、添付の特許請求の範囲によるものを除いては、限定されない。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書中に記載の発明。
【請求項１】
明細書中に記載の発明。
【公開番号】特開２０１１−２６３５６（Ｐ２０１１−２６３５６Ａ）
【公開日】平成２３年２月１０日（２０１１．２．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−２５４３２８（Ｐ２０１０−２５４３２８）
【出願日】平成２２年１１月１２日（２０１０．１１．１２）
【分割の表示】特願２００１−５２７８２２（Ｐ２００１−５２７８２２）の分割
【原出願日】平成１２年１０月２日（２０００．１０．２）
【出願人】（５９１０７６８１１）ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド (265)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年２月１０日（２０１１．２．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１１月１２日（２０１０．１１．１２）
【分割の表示】特願２００１−５２７８２２（Ｐ２００１−５２７８２２）の分割
【原出願日】平成１２年１０月２日（２０００．１０．２）
【出願人】（５９１０７６８１１）ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド (265)
【Ｆターム（参考）】
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