低出生体重児において使用するための組成物
本発明は、低出生体重児において使用するための組成物に関する。特に、組成物は、低出生体重児において完全経腸栄養を達成するために使用されるプロバイオティクス組成物である。本発明はまた、低出生体重児用製剤の製造における特定のプロバイオティクスの使用にも関する。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の分野］
本発明は、低出生体重児において使用するための組成物に関する。特に、本組成物は、低出生体重児において完全経腸栄養を達成するために使用されるプロバイオティクス組成物である。本発明はまた、低出生体重児用製剤の製造における特定のプロバイオティクスの使用にも関する。
【０００２】
［発明の背景］
新生児集中治療室において、腸管機能が未成熟であること、広域スペクトルの抗生物質の頻繁な使用、経腸栄養開始の遅れ、感染管理手順、及びミルクの殺菌は、早産児の正常な共生微生物への曝露を制限する。結果として、低出生体重（≦１５００ｇ）早産児では、特に、健康な正期産児において通常優勢なビフィズス菌及び乳酸菌に関して、遅い時期に異常なパターンで消化管にコロニーが形成される。この腸管のコロニー形成障害は、早産児を、壊死性腸炎、バクテリアルトランスロケーションのリスク増加などの好ましくない状態にかかりやすくする可能性がある。
【０００３】
そのような段階で、腸管機能が未成熟であれば、完全経腸栄養はほとんど不可能となる。結果として、すべての低出生体重の新生児は、数週間、経静脈栄養を日常的に受ける。しかしながら、これは、カテーテル関連敗血症、血栓症、及び胆汁鬱滞を含む合併症の高いリスクを伴う、非常に侵襲的な技術である。
【０００４】
プロバイオティクスの経腸補給は、例えば、Ｌａｎｃｅｔ、２００７、３６９、１６１４〜１６２０においてＤｅｓｈｐａｎｄｅ，Ｇ．らによって、Ｃｏｃｈｒａｎｅ Ｄａｔａｂａｓｅ Ｓｙｓｔ．Ｒｅｖ．、２００８、（１）、ＣＤ００５４９６においてＡｌｆａｌｅｈ，Ｋ．らによって、又はＡｒｃｈ．Ｄｉｓ．Ｃｈｉｌｄ、１９９７、７６、Ｆ１０１〜１０７においてＫｉｔａｊｉｍａ，Ｈ．らによって記述された試験から結論付けられたように、超早産児において壊死性腸炎の発生を低減させることが分かっている。
【０００５】
Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ、２００８、８０１〜８０６においてＩｎｄｒｉｏ，Ｆ．らもまた、人工栄養を受けている健康な早産児において、栄養摂取耐性及び胃腸の運動性に対する、食事によるプロバイオティクス補給の影響を記述している。しかしながら、この研究は、１５００ｇ以下の出生体重を有する早産児の要求には対処していない。加えて、プロバイオティクスの補給は、経腸栄養摂取量を増加させなかった。
【０００６】
したがって、最近の報告は、プロバイオティクスの補給が低出生体重未熟児において腸管機能を強化させ得ることを示唆しているが、経腸栄養摂取率は向上していない。
【０００７】
したがって、経静脈栄養を減らす又はさらには止めることができるように、低出生体重児において完全経腸栄養に到達する時間を短縮することが依然として必要である。したがって、非経口的栄養摂取の継続期間の推定される減少は、非常に多数の低出生体重児にとって潜在的に有益であるだろう。
【０００８】
［本発明の目的］
したがって、低出生体重児における非経口的栄養摂取の頻度及び／又は継続期間を減少させることが本発明の目的である。
【０００９】
［発明の概要］
この目的は、独立請求項によって達成される。従属請求項は、本発明の中心となる概念をさらに発展させる。
【００１０】
したがって、第１の態様において本発明は、１５００ｇ以下の出生体重を有する乳幼児において完全経腸栄養を達成するのに使用するためのプロバイオティクス組成物に関する。
【００１１】
さらなる態様において、本発明はまた、早産児用製剤の製造におけるラクトバチルス・ラムノサス及びビフィドバクテリウム・ロンガムの使用にも関する。
【００１２】
以下に、添付の図面を参照して本発明をさらに記述する。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】試験プロファイルを示す図である。
【図２】完全経腸栄養に到達する時間を示す図である。詳細には、すべての乳幼児（上部）及び出生体重が１５００ｇ以下の乳幼児の２つの処置群における完全経腸栄養に対するカプランマイヤー（Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ）曲線を示す。
【００１４】
［発明の詳細な説明］
本発明において、プロバイオティクス微生物は、宿主の腸管微生物バランスを改善することによって宿主に有益な影響を与える微生物であるとみなされる（Ｆｕｌｌｅｒ，Ｒ；１９８９；Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、６６：３６５〜３７８）。
【００１５】
本発明によると、プロバイオティクス組成物を、１５００ｇ以下の出生体重を有する乳幼児において完全経腸栄養を達成するために使用することができることが判明した。
【００１６】
一般に、１５００ｇ以下の出生体重を有する乳幼児は、早産児及び／又は子宮内発育遅延があった乳幼児である。
【００１７】
早産児は、在胎週齢３７週より前に生まれた新生児である。特定の実施形態において、本発明は、在胎週齢が３２週未満の早産児に特に対処する。
【００１８】
「完全経腸栄養を達成すること」は、乳幼児が、その健康状態に対して何の悪影響もなく食物を摂取することができることを意味する。完全経腸栄養は、乳幼児が、好ましくは下痢及び／又は逆流などの悪影響がなく、食事を吸収及び消化することができる場合に達成される。完全経腸栄養はまた、食事によって、必要とされるすべてのエネルギー及び栄養素を、胃腸管を介して乳幼児に提供することができる場合に達成される。
【００１９】
したがって、組成物はまた、低出生体重児において経腸栄養管理を改善するために使用されてもよい。
【００２０】
完全経腸栄養は、前記乳幼児の胃腸耐性を改善することによって達成することができる。これは、未成熟の消化及び運動機能を有し、出生時に完全にコロニー形成されている腸を有さない低出生体重児において、特に難題である。
【００２１】
したがって、本発明の組成物は、低出生体重児の経腸栄養に対する耐性を改善するために使用されてもよい。
【００２２】
特定の実施形態において、本発明の組成物は、低出生体重児の胃腸耐性を改善するために使用することができる。
【００２３】
驚くべきことに、本発明の組成物は、完全経腸栄養を達成するのに役立つだけでなく、経腸栄養摂取率を向上させ、完全経腸栄養までの時間を減少させる能力も有することが判明した。
【００２４】
したがって、本発明の組成物は、非経口的栄養摂取が必要な出産後の時間の長さを減少させるために使用することができる。
【００２５】
低出生体重児は、出生時の体重が１５００ｇ以下の乳幼児を意味する。
【００２６】
プロバイオティクスが超未熟児において腸管機能を向上させることができる機構（複数可）は、依然として解明されていない。理論に拘束されることは望まないが、この機構は、消化管粘膜への細菌の付着の減少、腸管バリア機能の向上、虚血性傷害に対する保護、又はＮＦ−ｋＢを介する炎症反応の減少を含む可能性がある。
【００２７】
適したプロバイオティクス微生物の例は、サッカロマイセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、デバロマイセス属（Ｄｅｂａｒｏｍｙｃｅｓ）、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、ピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）及びトルロプシス属（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ）などの酵母、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、リゾプス属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）、ムコール属（Ｍｕｃｏｒ）、及びペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）及びトルロプシス属などのカビ、並びにビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、フゾバクテリウム属（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、メリソコッカス属（Ｍｅｌｉｓｓｏｃｏｃｃｕｓ）、プロピオニバクテリウム属（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ペプトストレプトコッカス属（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｏｃｏｃｃｕｓ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ペディオコッカス属（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）、ミクロコッカス属（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ロイコノストック属（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、ワイセラ属（Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ）、アエロコッカス属（Ａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、オエノコッカス属（Ｏｅｎｏｃｏｃｃｕｓ）及びラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）などの細菌を含む。
【００２８】
本発明において使用することができる、適したプロバイオティクス微生物の具体的な例は、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｅａｅ）、バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・アリメンタリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｉｍｅｎｔａｒｉｕｓ）、ラクトバチルス・カゼイ亜種カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ｓｕｂｓｐ．ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・カゼイ・シロタ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ Ｓｈｉｒｏｔａ）、ラクトバチルス・カルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス・デルブルッキー亜種ラクティス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチルス・ファルシミナス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆａｒｃｉｍｉｎｕｓ）、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）（ラクトバチルスＧＧ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ＧＧ））、ラクトバチルス・サケ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｋｅ）、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、ミクロコッカス・バリアンス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｖａｒｉａｎｓ）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）、ペディオコッカス・ハロフィラス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｈａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、ストレプトコッカス・フェカリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、スタフィロコッカス・カルノサス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｃａｒｎｏｓｕｓ）、及びスタフィロコッカス・キシロサス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｘｙｌｏｓｕｓ）を含む。
【００２９】
理論に拘束されることは望まないが、ラクトバチルスＧＧは特に、ヒートショックシャペロンタンパク質の発現を誘導すること、及び腸細胞におけるシグナル伝達経路を活性化することによって、腸上皮細胞を酸化ストレスから保護する可能性があると考えられる。
【００３０】
ラクトバチルス・アシドフィルスは、腸細胞中のオピオイド及びカンナビノイド受容体の誘導によって、Ｒｏｕｓｓｅａｕｘ，Ｃ．ら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、２００７、１３、３５〜３７において示唆されているように、腹痛を和らげることができる。
【００３１】
本発明において、プロバイオティクスは、ラクトバチルス・ラムノサス、ビフィドバクテリウム・ロンガム又はそれらの混合物から選択されることが好ましいことが判明した。より好ましくは、プロバイオティクスは、ラクトバチルス・ラムノサスＧＧ ＡＴＣＣ５３１０３又はラクトバチルス・ラムノサスＣＧＭＣＣ１．３７２４及びＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９で登録されているビフィドバクテリウム・ロンガムＢＢ５３６である。これらの微生物株は市販されている。
【００３２】
一実施形態において本発明は、バイオガイアＡＢ（Ｂｉｏｇａｉａ ＡＢ）（Ｋｕｎｇｓｂｒｏｐｌａｎ ３Ａ、ストックホルム、スウェーデン）から市販されているラクトバチルス・ロイテリＡＴＣＣ５５７３０株、ラクトバチルス・ロイテリＤＳＭ−１７９３８株を含む。
【００３３】
プロバイオティクスは、粉末化形態、乾燥形態であってもよい。さらに、所望であれば、プロバイオティクス微生物は、例えば、糖マトリックス、脂肪マトリックス又は多糖マトリックス中にカプセル化して、生存確率をさらに増加させることができる。
【００３４】
本発明のプロバイオティクス組成物は、１５００ｇ以下の出生体重を有する乳幼児において完全経腸栄養を達成するのに有用であることが分かった。
【００３５】
特に、本発明のプロバイオティクス組成物は、体重が１５００ｇ以下の乳幼児において使用するために有益であることが分かった。好ましくは、乳幼児は１０００〜１５００ｇの間の出生体重を有する。実際に、この体重群において、本発明の利益がより迅速に及び／又はより高い水準まで達成されることが分かった。
【００３６】
好ましくは、本発明において、完全経腸栄養を達成するための時間は、５０日未満、より好ましくは４０日未満、最も好ましくは３０日未満である。
【００３７】
したがって、本発明の組成物によって、非経口的栄養摂取に伴う合併症をより迅速に緩和することができる。
【００３８】
したがって、本発明の組成物は、低出生体重児における経腸栄養管理を改善するのに使用することができる。
【００３９】
本発明のプロバイオティクス組成物は、乳幼児用経口製剤の一部であってもよい。この製剤は、乳幼児用製剤において、特に低出生体重児用製剤において一般的に使用される成分を含んでいてもよい。例えば、製剤は、典型的には、脂肪、タンパク質、炭水化物、ミネラル及び微量栄養素を含む。
【００４０】
脂肪は、必須脂肪酸、ＭＣＴ油などの油などから選択することができる。タンパク質は、好ましくは、乳タンパク質から選択される。炭水化物は、マルトデキストリン、ラクトースなどから選択することができる。微量栄養素は、ビタミンなどを含み得る。
【００４１】
製剤は、溶液であってもよく、又は再構成される粉末の形態であってもよい。そのような製剤は、前記プロバイオティクスを含む粉ミルクであってもよい。再構成のうえ、製剤を早産児に摂取させ、このようにしてその経腸栄養管理を改善することができる。
【００４２】
プロバイオティクスの量は、好ましくは組成物１グラム当たり少なくとも１０７〜１０９ｃｆｕ、好ましくは１グラム当たり２×１０８〜８×１０８ｃｆｕである。好ましい一実施形態において、母乳へのサプリメントとして与えられる場合、製剤は組成物１グラム当たり４×１０８ｃｆｕを含有することができる。別の実施形態において、製剤は、早産児用調製乳に組み込まれる場合、１グラム当たり２×１０８ｃｆｕを含むことができる。
【００４３】
製剤は、毎日使用されることが好ましい。したがって、低出生体重児の非経口的栄養摂取への、毎日の経腸サプリメントとして使用されてもよい。これは、例えば、早産児の要求に応じて、１日１回から１日５回まで使用することができる。
【００４４】
好ましくは、乳幼児は、約１０６〜１０１０ｃｆｕ／日、より好ましくは約１０９ｃｆｕ／日を摂取するべきである。これらの量であれば、十分な微生物細胞が乳幼児の胃腸管に到達して有益な影響を達成することが確実である。
【００４５】
体重が１５００ｇ以下の乳幼児において完全経腸栄養を達成するのにプロバイオティクスが有用であるという本発明の発見は、Ｃｌｉｎ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．、２００６、４２、１７３５〜１７４２においてＭａｎｚｏｎｉ，Ｐ．らによって立証されたように、プロバイオティクス菌株が消化管にコロニー形成する確率は出生体重の減少とともに低下するという事実から考えて、驚くべきことである。
【００４６】
そのような低出生体重児において出生後に抗生物質処置を頻繁に使用すること、及び経腸栄養を頻繁に差し控える必要があることによって、経口プロバイオティクスの有効性は通常、制限されるため、この発見はなおさら予想外である。
【００４７】
したがって、本発明の主な利益は、非経口的栄養摂取から経腸栄養への転換の促進にある。このことは、侵襲性の非経口的技術を回避すること又は非経口的栄養摂取を行わなければならない時間を少なくとも減少させることによって、問題の乳幼児にとって大きな負担軽減をもたらす。図２は、プラセボ組成物を摂取させた乳幼児と本発明の組成物を摂取させた乳幼児との間の、完全経腸栄養に到達する時間の差異を示している。図２はさらに、影響が、体重が１５００ｇ以下の乳幼児において顕著であることを示している。
【００４８】
さらなる態様において、本発明はまた、低出生体重児用製剤の製造におけるラクトバチルス・ラムノサス及びビフィドバクテリウム・ロンガムの使用に関する。好ましくは、乳幼児用製剤は、１５００ｇ以下の出生体重を有する乳幼児用である。
【００４９】
好ましくは、ラクトバチルス・ラムノサスＧＧ ＡＴＣＣ５３１０３、ラクトバチルス・ラムノサスＣＧＭＣＣ１．３７２４、ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９で寄託されているビフィドバクテリウム・ロンガムＢＢ５３６又はそれらの混合物から選択されるプロバイオティクス菌株が、前記製剤の製造において使用される。
【００５０】
製剤は、溶液であってもよく、又は再構成される粉末の形態であってもよい。そのような製剤は、前記プロバイオティクスを含む粉ミルクであり得る。再構成のうえ、製剤を低出生体重児に摂取させ、このようにして完全経腸栄養を達成することによってそれらの経腸栄養管理を改善することができる。
【００５１】
プロバイオティクス組成物を、好ましくは１０９ｃｆｕ／日の量で栄養摂取させるステップを含む、低出生体重児において完全経腸栄養を達成するための方法もまた、本発明の一部となる。
【実施例】
【００５２】
本発明を、以下の実施例によってさらに説明する。
【００５３】
実施例１
研究集団
２つのセンター（フランス、ナントのＭｅｒｅ小児病院（Ｍｅｒｅ−Ｅｎｆａｎｔ Ｈｏｓｐｉｔａｌ）及びフランス、パリの育児学研究所（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ ｄｅ Ｐｕｅｒｉｃｕｌｔｕｒｅ））が、この試験に参加した。プロトコルは、ナントの医療倫理委員会により承認され、参照番号ＮＣＴ００２９０５７６で登録されている。組み入れ前に、各乳幼児について、書面による親のインフォームドコンセントを得た。この研究における登録者として適格となるためには、乳幼児は、以下の組み入れ基準を満たさなければならないとした：在胎週齢が３２週未満、出生体重が１５００ｇ以下、出生後週齢が２週間以下、早産に関連するもの以外の疾患がないこと、及び組み入れ前に経腸栄養が開始されていなければならない。
【００５４】
手順
試験プロファイルを図１にまとめている。乳幼児を、インハウスソフトウェア（ナント大学病院（Ｎａｎｔｅｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌ）、フランス）の助けを借りてプラセボ又はプロバイオティクス群に無作為化し、無作為化は、ＮＩＣＵ（ナント又はパリ）及び出生体重カテゴリ（１５００ｇ以下、及び１５００ｇ超）に基づいて層別化した。乳幼児に、ヒト（自身の母親の搾乳された乳又はバンク乳）及び／又は早産児用調製乳を摂取させ、無作為に割り当てて、経腸栄養の開始時からＮＩＣＵの退院まで、（ａ）マルトデキストリンのみ（プラセボ群と称する）、又は（ｂ）１単位当たり１０８個の凍結乾燥細胞のラクトバチルス・ラムノサスＧＧ（ＡＴＣＣ５３１０３）及びビフィドバクテリウム・ロンガムＢＢ５３６（森永乳業株式会社（Ｍｏｒｉｎａｇａ Ｍｉｌｋ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．）、日本）並びにマルトデキストリン（プロバイオティクス群と称する）のいずれかを含有するサプリメントを１日４カプセル摂取させた。ネスレ中央研究所（Ｎｅｓｔｌｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ）（ローザンヌ、スイス）により調製されたプラセボ及びプロバイオティクスは、密閉されたカプセルとして供給され、使用するまで４℃で保存した。カプセルを開封して、補給の日に、経腸栄養を受ける乳幼児へ投与する直前に１ｍＬの滅菌水と混合した。
【００５５】
腸管の微生物叢及び便中カルプロテクチンを追跡するために、各ＮＩＣＵにおいて登録された最初の２４人の乳幼児に対して糞便採取を行った。糞便試料は、出生から病院を退院するまで１週間に１回採取した。腸管の微生物叢は、早産児の糞便の微生物叢において見られる主な属を単離することができる培養によって、１週間に１回解析した。並行して、腸管の微生物叢の優勢な細菌の多様性を、ＰＣＲ−ＴＴＧＥによって解析した。シーケンシング後に、ＢＩＢＩ（登録商標）、ブラスト（Ｂｌａｓｔ）（登録商標）、マルチアライン（Ｍｕｌｔａｌｉｎ）（登録商標）及びクラスタルＷ（Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ）（登録商標）ソフトウェアなどの適切なソフトウェアを使用して、細菌の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列をデータベース中のエントリと比較することによって、最も優勢な分子種を同定した。本研究において使用された２つのプロバイオティクス菌株が、培養−ＰＣＲ法によって糞便試料において特異的に検出された。糞便のカルプロテクチン濃度は、市販の酵素結合免疫測定法（カルプレスト（Ｃａｌｐｒｅｓｔ）（登録商標）、Ｅｕｒｏｓｐｉｔａｌ、トリエステ、イタリア）を使用して２連で２週おきに決定した。
【００５６】
統計解析
主要評価項目は、出生後日齢１４日で全体の半分を超える栄養要求を腸経路から摂取していた乳幼児のパーセントとした。主要評価項目の解析のための症例数の算出は、プロバイオティクス群で７０％に対してプラセボ群で５０％という予測率に基づいて行った。８０％検出力及び５％αリスクを有するような差異を検出するために、１つの群当たり１０４人の患者が必要とされると算出された。潜在的な有害作用事象におけるプロバイオティクスの推定リスクに過度の人数の超未熟児を曝すことを回避するため、ホワイトヘッド（Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ）３点試験法（Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ Ｊ．、Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｉｎ ｐｒａｃｔｉｃｅ、第２版、改訂、チチェスター、イングランド：Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ １９９７を参照）を使用して逐次試験を行った。患者２０人毎に視診及びデータの暫定的な解析を計画し、ペスト（Ｐｅｓｔ）３．０（登録商標）ソフトウェアを使用して実施した。最終的な統計解析は、ＳＰＳＳ（登録商標）１５．０ソフトウェアを使用して実施した。スチューデントのｔ検定、又は適切な場合はマンホイットニー（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ）を、連続変数の比較のために使用し、カイ２乗（Ｋｈｉ−２）検定、又は適切な場合はフィッシャーの正確確率検定（Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ ｅｘａｃｔ ｔｅｓｔ）を、カテゴリ変数の比較のために使用した。「完全経腸栄養に到達する時間」曲線をカプランマイヤー法に従ってコンピュータで計算し、ログランク（ｌｏｇ−ｒａｎｋ）検定を使用して統計学的比較を行った。コックス（Ｃｏｘ）回帰モデルを用いて、潜在的な交絡因子：在胎週齢、センター、経腸栄養の種類について調整した。ロジスティック回帰を行って、因子がプロバイオティクスによるコロニー形成と関連しているかどうかを解析した。すべての検定は両側検定であった。０．０５未満のＰ値を有意であるとみなした。
【００５７】
結果
研究の結果を、図２に示している。
【００５８】
１５００ｇ以下の出生体重を有する早産児において、完全経腸栄養が達成されるまでの時間が大幅に減少していることが分かる。
【００５９】
実施例２
【００６０】
【表１】
【００６１】
【表２】
【００６２】
本発明による典型的な組成物を、上記の表に示している。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の分野］
本発明は、低出生体重児において使用するための組成物に関する。特に、本組成物は、低出生体重児において完全経腸栄養を達成するために使用されるプロバイオティクス組成物である。本発明はまた、低出生体重児用製剤の製造における特定のプロバイオティクスの使用にも関する。
【０００２】
［発明の背景］
新生児集中治療室において、腸管機能が未成熟であること、広域スペクトルの抗生物質の頻繁な使用、経腸栄養開始の遅れ、感染管理手順、及びミルクの殺菌は、早産児の正常な共生微生物への曝露を制限する。結果として、低出生体重（≦１５００ｇ）早産児では、特に、健康な正期産児において通常優勢なビフィズス菌及び乳酸菌に関して、遅い時期に異常なパターンで消化管にコロニーが形成される。この腸管のコロニー形成障害は、早産児を、壊死性腸炎、バクテリアルトランスロケーションのリスク増加などの好ましくない状態にかかりやすくする可能性がある。
【０００３】
そのような段階で、腸管機能が未成熟であれば、完全経腸栄養はほとんど不可能となる。結果として、すべての低出生体重の新生児は、数週間、経静脈栄養を日常的に受ける。しかしながら、これは、カテーテル関連敗血症、血栓症、及び胆汁鬱滞を含む合併症の高いリスクを伴う、非常に侵襲的な技術である。
【０００４】
プロバイオティクスの経腸補給は、例えば、Ｌａｎｃｅｔ、２００７、３６９、１６１４〜１６２０においてＤｅｓｈｐａｎｄｅ，Ｇ．らによって、Ｃｏｃｈｒａｎｅ Ｄａｔａｂａｓｅ Ｓｙｓｔ．Ｒｅｖ．、２００８、（１）、ＣＤ００５４９６においてＡｌｆａｌｅｈ，Ｋ．らによって、又はＡｒｃｈ．Ｄｉｓ．Ｃｈｉｌｄ、１９９７、７６、Ｆ１０１〜１０７においてＫｉｔａｊｉｍａ，Ｈ．らによって記述された試験から結論付けられたように、超早産児において壊死性腸炎の発生を低減させることが分かっている。
【０００５】
Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ、２００８、８０１〜８０６においてＩｎｄｒｉｏ，Ｆ．らもまた、人工栄養を受けている健康な早産児において、栄養摂取耐性及び胃腸の運動性に対する、食事によるプロバイオティクス補給の影響を記述している。しかしながら、この研究は、１５００ｇ以下の出生体重を有する早産児の要求には対処していない。加えて、プロバイオティクスの補給は、経腸栄養摂取量を増加させなかった。
【０００６】
したがって、最近の報告は、プロバイオティクスの補給が低出生体重未熟児において腸管機能を強化させ得ることを示唆しているが、経腸栄養摂取率は向上していない。
【０００７】
したがって、経静脈栄養を減らす又はさらには止めることができるように、低出生体重児において完全経腸栄養に到達する時間を短縮することが依然として必要である。したがって、非経口的栄養摂取の継続期間の推定される減少は、非常に多数の低出生体重児にとって潜在的に有益であるだろう。
【０００８】
［本発明の目的］
したがって、低出生体重児における非経口的栄養摂取の頻度及び／又は継続期間を減少させることが本発明の目的である。
【０００９】
［発明の概要］
この目的は、独立請求項によって達成される。従属請求項は、本発明の中心となる概念をさらに発展させる。
【００１０】
したがって、第１の態様において本発明は、１５００ｇ以下の出生体重を有する乳幼児において完全経腸栄養を達成するのに使用するためのプロバイオティクス組成物に関する。
【００１１】
さらなる態様において、本発明はまた、早産児用製剤の製造におけるラクトバチルス・ラムノサス及びビフィドバクテリウム・ロンガムの使用にも関する。
【００１２】
以下に、添付の図面を参照して本発明をさらに記述する。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】試験プロファイルを示す図である。
【図２】完全経腸栄養に到達する時間を示す図である。詳細には、すべての乳幼児（上部）及び出生体重が１５００ｇ以下の乳幼児の２つの処置群における完全経腸栄養に対するカプランマイヤー（Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ）曲線を示す。
【００１４】
［発明の詳細な説明］
本発明において、プロバイオティクス微生物は、宿主の腸管微生物バランスを改善することによって宿主に有益な影響を与える微生物であるとみなされる（Ｆｕｌｌｅｒ，Ｒ；１９８９；Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、６６：３６５〜３７８）。
【００１５】
本発明によると、プロバイオティクス組成物を、１５００ｇ以下の出生体重を有する乳幼児において完全経腸栄養を達成するために使用することができることが判明した。
【００１６】
一般に、１５００ｇ以下の出生体重を有する乳幼児は、早産児及び／又は子宮内発育遅延があった乳幼児である。
【００１７】
早産児は、在胎週齢３７週より前に生まれた新生児である。特定の実施形態において、本発明は、在胎週齢が３２週未満の早産児に特に対処する。
【００１８】
「完全経腸栄養を達成すること」は、乳幼児が、その健康状態に対して何の悪影響もなく食物を摂取することができることを意味する。完全経腸栄養は、乳幼児が、好ましくは下痢及び／又は逆流などの悪影響がなく、食事を吸収及び消化することができる場合に達成される。完全経腸栄養はまた、食事によって、必要とされるすべてのエネルギー及び栄養素を、胃腸管を介して乳幼児に提供することができる場合に達成される。
【００１９】
したがって、組成物はまた、低出生体重児において経腸栄養管理を改善するために使用されてもよい。
【００２０】
完全経腸栄養は、前記乳幼児の胃腸耐性を改善することによって達成することができる。これは、未成熟の消化及び運動機能を有し、出生時に完全にコロニー形成されている腸を有さない低出生体重児において、特に難題である。
【００２１】
したがって、本発明の組成物は、低出生体重児の経腸栄養に対する耐性を改善するために使用されてもよい。
【００２２】
特定の実施形態において、本発明の組成物は、低出生体重児の胃腸耐性を改善するために使用することができる。
【００２３】
驚くべきことに、本発明の組成物は、完全経腸栄養を達成するのに役立つだけでなく、経腸栄養摂取率を向上させ、完全経腸栄養までの時間を減少させる能力も有することが判明した。
【００２４】
したがって、本発明の組成物は、非経口的栄養摂取が必要な出産後の時間の長さを減少させるために使用することができる。
【００２５】
低出生体重児は、出生時の体重が１５００ｇ以下の乳幼児を意味する。
【００２６】
プロバイオティクスが超未熟児において腸管機能を向上させることができる機構（複数可）は、依然として解明されていない。理論に拘束されることは望まないが、この機構は、消化管粘膜への細菌の付着の減少、腸管バリア機能の向上、虚血性傷害に対する保護、又はＮＦ−ｋＢを介する炎症反応の減少を含む可能性がある。
【００２７】
適したプロバイオティクス微生物の例は、サッカロマイセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、デバロマイセス属（Ｄｅｂａｒｏｍｙｃｅｓ）、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、ピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）及びトルロプシス属（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ）などの酵母、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、リゾプス属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）、ムコール属（Ｍｕｃｏｒ）、及びペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）及びトルロプシス属などのカビ、並びにビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、フゾバクテリウム属（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、メリソコッカス属（Ｍｅｌｉｓｓｏｃｏｃｃｕｓ）、プロピオニバクテリウム属（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ペプトストレプトコッカス属（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｏｃｏｃｃｕｓ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ペディオコッカス属（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）、ミクロコッカス属（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ロイコノストック属（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、ワイセラ属（Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ）、アエロコッカス属（Ａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、オエノコッカス属（Ｏｅｎｏｃｏｃｃｕｓ）及びラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）などの細菌を含む。
【００２８】
本発明において使用することができる、適したプロバイオティクス微生物の具体的な例は、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｅａｅ）、バチルス・コアギュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バチルス・リケニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルス・サブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・アリメンタリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｉｍｅｎｔａｒｉｕｓ）、ラクトバチルス・カゼイ亜種カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ｓｕｂｓｐ．ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・カゼイ・シロタ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ Ｓｈｉｒｏｔａ）、ラクトバチルス・カルバタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス・デルブルッキー亜種ラクティス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチルス・ファルシミナス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆａｒｃｉｍｉｎｕｓ）、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）（ラクトバチルスＧＧ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ＧＧ））、ラクトバチルス・サケ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｋｅ）、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、ミクロコッカス・バリアンス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｖａｒｉａｎｓ）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）、ペディオコッカス・ハロフィラス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｈａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、ストレプトコッカス・フェカリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、スタフィロコッカス・カルノサス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｃａｒｎｏｓｕｓ）、及びスタフィロコッカス・キシロサス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｘｙｌｏｓｕｓ）を含む。
【００２９】
理論に拘束されることは望まないが、ラクトバチルスＧＧは特に、ヒートショックシャペロンタンパク質の発現を誘導すること、及び腸細胞におけるシグナル伝達経路を活性化することによって、腸上皮細胞を酸化ストレスから保護する可能性があると考えられる。
【００３０】
ラクトバチルス・アシドフィルスは、腸細胞中のオピオイド及びカンナビノイド受容体の誘導によって、Ｒｏｕｓｓｅａｕｘ，Ｃ．ら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、２００７、１３、３５〜３７において示唆されているように、腹痛を和らげることができる。
【００３１】
本発明において、プロバイオティクスは、ラクトバチルス・ラムノサス、ビフィドバクテリウム・ロンガム又はそれらの混合物から選択されることが好ましいことが判明した。より好ましくは、プロバイオティクスは、ラクトバチルス・ラムノサスＧＧ ＡＴＣＣ５３１０３又はラクトバチルス・ラムノサスＣＧＭＣＣ１．３７２４及びＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９で登録されているビフィドバクテリウム・ロンガムＢＢ５３６である。これらの微生物株は市販されている。
【００３２】
一実施形態において本発明は、バイオガイアＡＢ（Ｂｉｏｇａｉａ ＡＢ）（Ｋｕｎｇｓｂｒｏｐｌａｎ ３Ａ、ストックホルム、スウェーデン）から市販されているラクトバチルス・ロイテリＡＴＣＣ５５７３０株、ラクトバチルス・ロイテリＤＳＭ−１７９３８株を含む。
【００３３】
プロバイオティクスは、粉末化形態、乾燥形態であってもよい。さらに、所望であれば、プロバイオティクス微生物は、例えば、糖マトリックス、脂肪マトリックス又は多糖マトリックス中にカプセル化して、生存確率をさらに増加させることができる。
【００３４】
本発明のプロバイオティクス組成物は、１５００ｇ以下の出生体重を有する乳幼児において完全経腸栄養を達成するのに有用であることが分かった。
【００３５】
特に、本発明のプロバイオティクス組成物は、体重が１５００ｇ以下の乳幼児において使用するために有益であることが分かった。好ましくは、乳幼児は１０００〜１５００ｇの間の出生体重を有する。実際に、この体重群において、本発明の利益がより迅速に及び／又はより高い水準まで達成されることが分かった。
【００３６】
好ましくは、本発明において、完全経腸栄養を達成するための時間は、５０日未満、より好ましくは４０日未満、最も好ましくは３０日未満である。
【００３７】
したがって、本発明の組成物によって、非経口的栄養摂取に伴う合併症をより迅速に緩和することができる。
【００３８】
したがって、本発明の組成物は、低出生体重児における経腸栄養管理を改善するのに使用することができる。
【００３９】
本発明のプロバイオティクス組成物は、乳幼児用経口製剤の一部であってもよい。この製剤は、乳幼児用製剤において、特に低出生体重児用製剤において一般的に使用される成分を含んでいてもよい。例えば、製剤は、典型的には、脂肪、タンパク質、炭水化物、ミネラル及び微量栄養素を含む。
【００４０】
脂肪は、必須脂肪酸、ＭＣＴ油などの油などから選択することができる。タンパク質は、好ましくは、乳タンパク質から選択される。炭水化物は、マルトデキストリン、ラクトースなどから選択することができる。微量栄養素は、ビタミンなどを含み得る。
【００４１】
製剤は、溶液であってもよく、又は再構成される粉末の形態であってもよい。そのような製剤は、前記プロバイオティクスを含む粉ミルクであってもよい。再構成のうえ、製剤を早産児に摂取させ、このようにしてその経腸栄養管理を改善することができる。
【００４２】
プロバイオティクスの量は、好ましくは組成物１グラム当たり少なくとも１０７〜１０９ｃｆｕ、好ましくは１グラム当たり２×１０８〜８×１０８ｃｆｕである。好ましい一実施形態において、母乳へのサプリメントとして与えられる場合、製剤は組成物１グラム当たり４×１０８ｃｆｕを含有することができる。別の実施形態において、製剤は、早産児用調製乳に組み込まれる場合、１グラム当たり２×１０８ｃｆｕを含むことができる。
【００４３】
製剤は、毎日使用されることが好ましい。したがって、低出生体重児の非経口的栄養摂取への、毎日の経腸サプリメントとして使用されてもよい。これは、例えば、早産児の要求に応じて、１日１回から１日５回まで使用することができる。
【００４４】
好ましくは、乳幼児は、約１０６〜１０１０ｃｆｕ／日、より好ましくは約１０９ｃｆｕ／日を摂取するべきである。これらの量であれば、十分な微生物細胞が乳幼児の胃腸管に到達して有益な影響を達成することが確実である。
【００４５】
体重が１５００ｇ以下の乳幼児において完全経腸栄養を達成するのにプロバイオティクスが有用であるという本発明の発見は、Ｃｌｉｎ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．、２００６、４２、１７３５〜１７４２においてＭａｎｚｏｎｉ，Ｐ．らによって立証されたように、プロバイオティクス菌株が消化管にコロニー形成する確率は出生体重の減少とともに低下するという事実から考えて、驚くべきことである。
【００４６】
そのような低出生体重児において出生後に抗生物質処置を頻繁に使用すること、及び経腸栄養を頻繁に差し控える必要があることによって、経口プロバイオティクスの有効性は通常、制限されるため、この発見はなおさら予想外である。
【００４７】
したがって、本発明の主な利益は、非経口的栄養摂取から経腸栄養への転換の促進にある。このことは、侵襲性の非経口的技術を回避すること又は非経口的栄養摂取を行わなければならない時間を少なくとも減少させることによって、問題の乳幼児にとって大きな負担軽減をもたらす。図２は、プラセボ組成物を摂取させた乳幼児と本発明の組成物を摂取させた乳幼児との間の、完全経腸栄養に到達する時間の差異を示している。図２はさらに、影響が、体重が１５００ｇ以下の乳幼児において顕著であることを示している。
【００４８】
さらなる態様において、本発明はまた、低出生体重児用製剤の製造におけるラクトバチルス・ラムノサス及びビフィドバクテリウム・ロンガムの使用に関する。好ましくは、乳幼児用製剤は、１５００ｇ以下の出生体重を有する乳幼児用である。
【００４９】
好ましくは、ラクトバチルス・ラムノサスＧＧ ＡＴＣＣ５３１０３、ラクトバチルス・ラムノサスＣＧＭＣＣ１．３７２４、ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９で寄託されているビフィドバクテリウム・ロンガムＢＢ５３６又はそれらの混合物から選択されるプロバイオティクス菌株が、前記製剤の製造において使用される。
【００５０】
製剤は、溶液であってもよく、又は再構成される粉末の形態であってもよい。そのような製剤は、前記プロバイオティクスを含む粉ミルクであり得る。再構成のうえ、製剤を低出生体重児に摂取させ、このようにして完全経腸栄養を達成することによってそれらの経腸栄養管理を改善することができる。
【００５１】
プロバイオティクス組成物を、好ましくは１０９ｃｆｕ／日の量で栄養摂取させるステップを含む、低出生体重児において完全経腸栄養を達成するための方法もまた、本発明の一部となる。
【実施例】
【００５２】
本発明を、以下の実施例によってさらに説明する。
【００５３】
実施例１
研究集団
２つのセンター（フランス、ナントのＭｅｒｅ小児病院（Ｍｅｒｅ−Ｅｎｆａｎｔ Ｈｏｓｐｉｔａｌ）及びフランス、パリの育児学研究所（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ ｄｅ Ｐｕｅｒｉｃｕｌｔｕｒｅ））が、この試験に参加した。プロトコルは、ナントの医療倫理委員会により承認され、参照番号ＮＣＴ００２９０５７６で登録されている。組み入れ前に、各乳幼児について、書面による親のインフォームドコンセントを得た。この研究における登録者として適格となるためには、乳幼児は、以下の組み入れ基準を満たさなければならないとした：在胎週齢が３２週未満、出生体重が１５００ｇ以下、出生後週齢が２週間以下、早産に関連するもの以外の疾患がないこと、及び組み入れ前に経腸栄養が開始されていなければならない。
【００５４】
手順
試験プロファイルを図１にまとめている。乳幼児を、インハウスソフトウェア（ナント大学病院（Ｎａｎｔｅｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌ）、フランス）の助けを借りてプラセボ又はプロバイオティクス群に無作為化し、無作為化は、ＮＩＣＵ（ナント又はパリ）及び出生体重カテゴリ（１５００ｇ以下、及び１５００ｇ超）に基づいて層別化した。乳幼児に、ヒト（自身の母親の搾乳された乳又はバンク乳）及び／又は早産児用調製乳を摂取させ、無作為に割り当てて、経腸栄養の開始時からＮＩＣＵの退院まで、（ａ）マルトデキストリンのみ（プラセボ群と称する）、又は（ｂ）１単位当たり１０８個の凍結乾燥細胞のラクトバチルス・ラムノサスＧＧ（ＡＴＣＣ５３１０３）及びビフィドバクテリウム・ロンガムＢＢ５３６（森永乳業株式会社（Ｍｏｒｉｎａｇａ Ｍｉｌｋ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．）、日本）並びにマルトデキストリン（プロバイオティクス群と称する）のいずれかを含有するサプリメントを１日４カプセル摂取させた。ネスレ中央研究所（Ｎｅｓｔｌｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ）（ローザンヌ、スイス）により調製されたプラセボ及びプロバイオティクスは、密閉されたカプセルとして供給され、使用するまで４℃で保存した。カプセルを開封して、補給の日に、経腸栄養を受ける乳幼児へ投与する直前に１ｍＬの滅菌水と混合した。
【００５５】
腸管の微生物叢及び便中カルプロテクチンを追跡するために、各ＮＩＣＵにおいて登録された最初の２４人の乳幼児に対して糞便採取を行った。糞便試料は、出生から病院を退院するまで１週間に１回採取した。腸管の微生物叢は、早産児の糞便の微生物叢において見られる主な属を単離することができる培養によって、１週間に１回解析した。並行して、腸管の微生物叢の優勢な細菌の多様性を、ＰＣＲ−ＴＴＧＥによって解析した。シーケンシング後に、ＢＩＢＩ（登録商標）、ブラスト（Ｂｌａｓｔ）（登録商標）、マルチアライン（Ｍｕｌｔａｌｉｎ）（登録商標）及びクラスタルＷ（Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ）（登録商標）ソフトウェアなどの適切なソフトウェアを使用して、細菌の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列をデータベース中のエントリと比較することによって、最も優勢な分子種を同定した。本研究において使用された２つのプロバイオティクス菌株が、培養−ＰＣＲ法によって糞便試料において特異的に検出された。糞便のカルプロテクチン濃度は、市販の酵素結合免疫測定法（カルプレスト（Ｃａｌｐｒｅｓｔ）（登録商標）、Ｅｕｒｏｓｐｉｔａｌ、トリエステ、イタリア）を使用して２連で２週おきに決定した。
【００５６】
統計解析
主要評価項目は、出生後日齢１４日で全体の半分を超える栄養要求を腸経路から摂取していた乳幼児のパーセントとした。主要評価項目の解析のための症例数の算出は、プロバイオティクス群で７０％に対してプラセボ群で５０％という予測率に基づいて行った。８０％検出力及び５％αリスクを有するような差異を検出するために、１つの群当たり１０４人の患者が必要とされると算出された。潜在的な有害作用事象におけるプロバイオティクスの推定リスクに過度の人数の超未熟児を曝すことを回避するため、ホワイトヘッド（Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ）３点試験法（Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ Ｊ．、Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｉｎ ｐｒａｃｔｉｃｅ、第２版、改訂、チチェスター、イングランド：Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ １９９７を参照）を使用して逐次試験を行った。患者２０人毎に視診及びデータの暫定的な解析を計画し、ペスト（Ｐｅｓｔ）３．０（登録商標）ソフトウェアを使用して実施した。最終的な統計解析は、ＳＰＳＳ（登録商標）１５．０ソフトウェアを使用して実施した。スチューデントのｔ検定、又は適切な場合はマンホイットニー（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ）を、連続変数の比較のために使用し、カイ２乗（Ｋｈｉ−２）検定、又は適切な場合はフィッシャーの正確確率検定（Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ ｅｘａｃｔ ｔｅｓｔ）を、カテゴリ変数の比較のために使用した。「完全経腸栄養に到達する時間」曲線をカプランマイヤー法に従ってコンピュータで計算し、ログランク（ｌｏｇ−ｒａｎｋ）検定を使用して統計学的比較を行った。コックス（Ｃｏｘ）回帰モデルを用いて、潜在的な交絡因子：在胎週齢、センター、経腸栄養の種類について調整した。ロジスティック回帰を行って、因子がプロバイオティクスによるコロニー形成と関連しているかどうかを解析した。すべての検定は両側検定であった。０．０５未満のＰ値を有意であるとみなした。
【００５７】
結果
研究の結果を、図２に示している。
【００５８】
１５００ｇ以下の出生体重を有する早産児において、完全経腸栄養が達成されるまでの時間が大幅に減少していることが分かる。
【００５９】
実施例２
【００６０】
【表１】
【００６１】
【表２】
【００６２】
本発明による典型的な組成物を、上記の表に示している。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１５００ｇ以下の出生体重を有する乳幼児において完全経腸栄養を達成するのに使用するためのプロバイオティクス組成物。
【請求項２】
完全経腸栄養が、前記乳幼児の胃腸耐性を改善することによって達成される、請求項１に記載のプロバイオティクス組成物。
【請求項３】
非経口的栄養摂取が必要な出産後の時間が減少する、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
完全経腸栄養を達成するための時間が、出生後５０日未満、好ましくは４０日未満、より好ましくは３０日未満である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
乳幼児が、１０００〜１５００ｇの出生体重を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
早産児が３２週未満の在胎週齢を有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
プロバイオティクスが、サッカロマイセス属、デバロマイセス属、カンジダ属、ピキア属及びトルロプシス属などの酵母、アスペルギルス属、リゾプス属、ムコール属、ペニシリウム属及びトルロプシス属などのカビ、ビフィドバクテリウム属、バクテロイデス属、クロストリジウム属、フゾバクテリウム属、メリソコッカス属、プロピオニバクテリウム属、ストレプトコッカス属、エンテロコッカス属、ラクトコッカス属、スタフィロコッカス属、ペプトストレプトコッカス属（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｏｃｏｃｃｕｓ）、バチルス属、ペディオコッカス属、ミクロコッカス属、ロイコノストック属、ワイセラ属、アエロコッカス属、オエノコッカス属及びラクトバチルス属などの細菌又は任意のそれらの混合物から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
プロバイオティクスが、ラクトバチルス・ラムノサス、ラクトバチルス・ロイテリ、ビフィドバクテリウム・ロンガム又はそれらの混合物から選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
プロバイオティクスが、ラクトバチルス・ラムノサスＧＧ ＡＴＣＣ５３１０３、ラクトバチルス・ラムノサスＣＧＭＣＣ１．３７２４、ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９で寄託されているビフィドバクテリウム・ロンガムＢＢ５３６、ラクトバチルス・ロイテリＡＴＣＣ５５７３０、ラクトバチルス・ロイテリＤＳＭ−１７９３８又はそれらの混合物から選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
乳幼児用経口製剤の一部である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
製剤が、マルトデキストリン、ラクトースなどの炭水化物、必須脂肪酸、油などの脂肪、乳タンパク質などのタンパク質、ミネラル、微量栄養素又は任意のそれらの混合物から選択されるさらなる成分を含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
プロバイオティクスの量が、組成物１グラム当たり少なくとも１０７〜１０９ｃｆｕ、好ましくは２×１０８〜８×１０８ｃｆｕである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
乳幼児に毎日摂取させる、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
乳幼児に１日１回から１日５回まで摂取させる、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
プロバイオティクスの１日用量が、１０６〜１０１０ｃｆｕ／日、好ましくは１０９ｃｆｕ／日である、請求項１３又は１４に記載の組成物。
【請求項１６】
乳幼児用製剤の製造における、ラクトバチルス・ラムノサス、好ましくはラクトバチルス・ラムノサスＧＧ ＡＴＣＣ５３１０３及び／又はラクトバチルス・ラムノサスＣＧＭＣＣ１．３７２４、ビフィドバクテリウム・ロンガム、好ましくはＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９で寄託されているビフィドバクテリウム・ロンガムＢＢ５３６又はそれらの混合物の使用。
【請求項１】
１５００ｇ以下の出生体重を有する乳幼児において完全経腸栄養を達成するのに使用するためのプロバイオティクス組成物。
【請求項２】
完全経腸栄養が、前記乳幼児の胃腸耐性を改善することによって達成される、請求項１に記載のプロバイオティクス組成物。
【請求項３】
非経口的栄養摂取が必要な出産後の時間が減少する、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
完全経腸栄養を達成するための時間が、出生後５０日未満、好ましくは４０日未満、より好ましくは３０日未満である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
乳幼児が、１０００〜１５００ｇの出生体重を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
早産児が３２週未満の在胎週齢を有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
プロバイオティクスが、サッカロマイセス属、デバロマイセス属、カンジダ属、ピキア属及びトルロプシス属などの酵母、アスペルギルス属、リゾプス属、ムコール属、ペニシリウム属及びトルロプシス属などのカビ、ビフィドバクテリウム属、バクテロイデス属、クロストリジウム属、フゾバクテリウム属、メリソコッカス属、プロピオニバクテリウム属、ストレプトコッカス属、エンテロコッカス属、ラクトコッカス属、スタフィロコッカス属、ペプトストレプトコッカス属（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｏｃｏｃｃｕｓ）、バチルス属、ペディオコッカス属、ミクロコッカス属、ロイコノストック属、ワイセラ属、アエロコッカス属、オエノコッカス属及びラクトバチルス属などの細菌又は任意のそれらの混合物から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
プロバイオティクスが、ラクトバチルス・ラムノサス、ラクトバチルス・ロイテリ、ビフィドバクテリウム・ロンガム又はそれらの混合物から選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
プロバイオティクスが、ラクトバチルス・ラムノサスＧＧ ＡＴＣＣ５３１０３、ラクトバチルス・ラムノサスＣＧＭＣＣ１．３７２４、ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９で寄託されているビフィドバクテリウム・ロンガムＢＢ５３６、ラクトバチルス・ロイテリＡＴＣＣ５５７３０、ラクトバチルス・ロイテリＤＳＭ−１７９３８又はそれらの混合物から選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
乳幼児用経口製剤の一部である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
製剤が、マルトデキストリン、ラクトースなどの炭水化物、必須脂肪酸、油などの脂肪、乳タンパク質などのタンパク質、ミネラル、微量栄養素又は任意のそれらの混合物から選択されるさらなる成分を含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
プロバイオティクスの量が、組成物１グラム当たり少なくとも１０７〜１０９ｃｆｕ、好ましくは２×１０８〜８×１０８ｃｆｕである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
乳幼児に毎日摂取させる、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
乳幼児に１日１回から１日５回まで摂取させる、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
プロバイオティクスの１日用量が、１０６〜１０１０ｃｆｕ／日、好ましくは１０９ｃｆｕ／日である、請求項１３又は１４に記載の組成物。
【請求項１６】
乳幼児用製剤の製造における、ラクトバチルス・ラムノサス、好ましくはラクトバチルス・ラムノサスＧＧ ＡＴＣＣ５３１０３及び／又はラクトバチルス・ラムノサスＣＧＭＣＣ１．３７２４、ビフィドバクテリウム・ロンガム、好ましくはＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９で寄託されているビフィドバクテリウム・ロンガムＢＢ５３６又はそれらの混合物の使用。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２０１２−５１０８００（Ｐ２０１２−５１０８００Ａ）
【公表日】平成２４年５月１７日（２０１２．５．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５３８９４２（Ｐ２０１１−５３８９４２）
【出願日】平成２１年１１月２３日（２００９．１１．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０６５６３４
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６３６０１
【国際公開日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【出願人】（５９９１３２９０４）ネステク ソシエテ アノニム (637)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年５月１７日（２０１２．５．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１１月２３日（２００９．１１．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０６５６３４
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６３６０１
【国際公開日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【出願人】（５９９１３２９０４）ネステク ソシエテ アノニム (637)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]