修飾されたプロ（ＰＲＯ）領域をもつプロテアーゼ
本願発明は細菌宿主細胞における成熟プロテアーゼを産生する方法と組成物を提供する。本組成物は、修飾されたプロテアーゼをコードする修飾されたポリヌクレオチド（これは、プロ領域に１つ以上の変異を有する）；当該修飾されたポリヌクレオチドによりコードされた当該修飾されたセリンプロテアーゼ、発現カセット、DNA構造体、及び修飾されたプロテアーゼをコードする当該修飾されたポリヌクレオチドを含むベクター；及び本発明のベクターにより形質転換された細菌宿主細胞を含む。本方法は細菌宿主細胞中、例えばバシルス属の種の宿主細胞中に、成熟プロテアーゼの産生を増強する方法を含む。産生されたプロテアーゼは酵素の工業的生産に使用され、洗浄、動物飼料及び繊維処理産業等の種々の産業での使用に適している。
Notice: Undefined index: DEJ in /mnt/www/gzt_disp.php on line 298
【特許請求の範囲】
【請求項１】
修飾されたプロテアーゼをコードする単離され、修飾されたポリヌクレオチドであって、前記単離され、修飾されたポリヌクレオチドは、シグナルペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含み、前記第１のポリヌクレオチドは配列番号７に表されたプロ領域をコードする第２のポリヌクレオチドに機能的に連結され、前記プロ領域は、前記プロ領域の位置6、30及び32から選ばれた位置で２個以上のアミノ酸の置換の組み合わせを含み、前記第２のポリヌクレオチドは、配列番号９の成熟プロテアーゼと約60%以上同一であるプロテアーゼの成熟領域をコードする第３のポリヌクレオチドと機能的に連結しており、当該位置は、配列番号７のプロポリペプチドのアミノ酸配列との対応により番号が付されているものである、ポリヌクレオチド。
【請求項２】
請求項１の単離され、修飾されたポリヌクレオチドであって、前記成熟プロテアーゼは、バシルス・クラウシ(Bacillus clausii)又はバシルス・レンツス(Bacillus lentus)由来の、野生型又は変異アルカリセリンプロテアーゼである、ポリヌクレオチド。
【請求項３】
請求項１または２の単離され、修飾されたポリヌクレオチドであって、前記成熟プロテアーゼは配列番号9、11、13、15、17、19及び21から選ばれるアミノ酸配列を有する、ポリヌクレオチド。
【請求項４】
請求項１−３のいずれか１請求項の単離されたポリヌクレオチドであって、前記シグナルペプチドは配列番号３と５から選ばれるアミノ酸配列を有するものである、ポリヌクレオチド。
【請求項５】
請求項１−４のいずれかの１請求項の単離され、修飾されたポリヌクレオチドであって、前記置換の組み合わせはE6X-E30G、E6X-E30S、E6X-A32K、E30X-A32K、E30G-A32X、E30S-A32X及びE6G-E30G-A32Xから選ばれるものである、ポリヌクレオチド。
【請求項６】
請求項1-4のいずれかの１請求項の単離され、修飾されたポリヌクレオチドであって、置換の前記組み合わせは、
E6R-A32K, E6N-A32K,E6D-A32K, E6I-A32K, E6K-A32K, E6M-A32K, E6P- A32K, E6S-A32K, E6T-A32K, E6N-A32K, E30W-A32K, E30V-A32K, E6A-E30G, E6R-E30G, E6C-E30G, E6Q-E30G, E6G-E30G, E6H-E30G, E6K-E30G, E6S-E30G, E6W-E30G, E30G-A32R, E30G-A32Q, E30G-A32E, E30G-A32G, E30G-A32H, E30G-A32I, E30G-A32K, E30G-A32S, E30G-A32T, E30G- A32W, E30G-A32V, E6G-E30G-A32E, E6G-E30G-A32S, E6G-E30G-A32T, E6G-E30G-A32W, E6A- E30G, E6R-E30G, E6N-E30G, E6D-E30G, E6C-E30G, E6Q-E30G, E6G-E30G, E6H-E30G, E6K-E30G, E6M-E30G, E6F-E30G, E6P-E30G, E6S-E30G, E6T-E30G, E6W-E30G, E6V-E30G, E6Y-E30G, E6A- E30S, E6G-E30S, E6L-E30S, E6K-E30S, E6F-E30S, E6P-E30S, E6Y-E30S, E6V-E30S, E30S-A32R, E30S-A32N, E30S-A32D, E30S-A32C, E30S-A32Q, E30S-A32E, E30S-A32G, E30S-A32H, E30S-A32L, E30S-A32K, E30S-A32M, E30S-A32F, E30S-A32P, E30S-A32S, E30S-A32T, E30S-A32W, E30S-A32Y, 及びE30S-A32V.
から選ばれるものである、ポリヌクレオチド。
【請求項７】
請求項１−６のいずれか１請求項の単離されたポリヌクレオチドであって、前記置換はバシルス属の種の宿主細胞による前記成熟プロテアーゼの産生を強化するものである、ポリヌクレオチド。
【請求項８】
請求項７の単離されたポリヌクレオチドであって、前記バシルス属の種の宿主細胞はバシルス・スブチリス(Bacillus subtilis)宿主細胞である、ポリヌクレオチド。
【請求項９】
請求項１の単離され、修飾されたポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項１０】
請求項９の発現ベクターであって、さらにAprEプロモーターを含むものである発現ベクター。
【請求項１１】
請求項９または１０の発現ベクターを含むバシルス属の種である宿主細胞。
【請求項１２】
前記宿主細胞がB・スブチリス(B.subtilis)宿主細胞である、請求項１１の宿主細胞。
【請求項１３】
バシルス属の種の宿主細胞で成熟プロテアーゼを産生する方法であって、前記方法は、
a) 請求項10の発現ベクターを提供し
b) 前記発現ベクターによりバシルス属の種の宿主細胞を形質転換し、
c) 適当な条件で前記宿主細胞を培養し、その結果前記プロテアーゼが前記宿主細胞により産生される
工程を含む、成熟プロテアーゼを産生する方法。
【請求項１４】
請求項１３の方法であって、前記バシルス属の種の宿主細胞はバシルス・スブチリス宿主細胞である、方法。
【請求項１５】
請求項13または14の方法であって、前記成熟プロテアーゼは、野生型バシルス・クラウシ(Bacillus clausii)又はバシルス・レンツス(Bacillus lentus)アルカリセリンプロテアーゼ、またはそれらの変異体または相同体である、方法。
【請求項１６】
請求項１３−１５のいずれかの１請求項の方法であって、前記第１のポリヌクレオチドは配列番号３のシグナルペプチドをコードし、前記プロ領域をコードする前記第２のポリヌクレオチドは、
E6R-A32K, E6N-A32K, E6D-A32K, E6I-A32K, E6K-A32K, E6M-A32K, E6P-A32K, E6S-A32K, E6T-A32K, E6N-A32K, E30W-A32K, 及び E30V-A32Kから選択される置換の組み合わせを含み、前記第３のポリヌクレオチドが配列番号９から選択される成熟プロテアーゼをコードするものである、方法。
【請求項１７】
請求項１３−１５のいずれかの１請求項の方法であって、前記第１のポリヌクレオチドは、配列番号３のシグナルペプチドをコードし、前記プロ領域をコードする前記第２のポリヌクレオチドは、
E6A-E30G, E6R-E30G, E6C-E30G, E6Q-E30G, E6G-E30G, E6H-E30G, E6K-E30G, E6S-E30G, E6W-E30G, E30G-A32R, E30G-A32Q, E30G-A32E, E30G-A32G,
E30G-A32H, E30G-A32I, E30G-A32K, E30G-A32S, E30G-A32T, E30G-A32W, E30G-A32V, E6G-E30G- A32E, E6G-E30G-A32S, E6G-E30G-A32T, 及びE6G-E30G-A32Wから選択される置換の組合せを含み、前記第３のポリヌクレオチドは配列番号17から選択される成熟プロテアーゼをコードするものである、方法。
【請求項１８】
請求項１３−１５のいずれかの１請求項の方法であって、前記第１のポリヌクレオチドは配列番号３のシグナルペプチドをコードし、前記プロ領域をコードする前記第２のポリヌクレオチドは、
E6A-E30G, E6R-E30G, E6N-E30G, E6D-E30G, E6C-E30G, E6Q-E30G, E6G-E30G, E6H-E30G, E6K-E30G, E6M-E30G, E6F-E30G, E6P-E30G, E6S-E30G, E6T- E30G, E6W-E30G, E6V-E30G及びE6Y-E30G,
から選ばれる置換の組み合わせを含み、前記第３のポリヌクレオチドは配列番号19から選ばれた成熟プロテアーゼをコードするものである、方法。
【請求項１９】
請求項１３−１５のいずれか１請求項の方法であって、前記第１のポリヌクレオチドは配列番号３のシグナルペプチドをコードし、前記プロ領域をコードする前記第２のポリヌクレオチドは、
E6A-E30S,E6G-E30S, E6L-E30S, E6K-E30S, E6F-E30S, E6P- E30S, E6Y-E30S, E6V-E30S, E30S-A32R, E30S-A32N, E30S-A32D, E30S-A32C, E30S-A32Q, E30S- A32E, E30S-A32G, E30S-A32H, E30S-A32L, E30S-A32K, E30S-A32M, E30S-A32F, E30S-A32P, E30S- A32S, E30S-A32T, E30S-A32W, E30S-A32Y及び E30S-A32Vから選ばれた置換の組み合わせを含み、前記第３のポリヌクレオチドは配列番号21から選ばれた成熟プロテアーゼをコードするものである、方法。
【請求項２０】
修飾されたプロテアーゼをコードする単離されたポリヌクレオチドであって、前記単離され、修飾されたポリヌクレオチドは配列番号３のシグナルペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含み、前記第１のポリヌクレオチドは配列番号７に表されたプロ領域をコードする第２のポリヌクレオチドに機能的に連結し、前記プロ領域はE6A、E6C、E6Y、E30A、E30L、E30P、E30T、E30Y、E30V、A32C、A32E、A32G、A32K及びA32Tから選ばれたアミノ酸の置換を含み、前記第２のポリヌクレオチドは、配列番号17のプロテアーゼの成熟領域をコードする第３のポリヌクレオチドと機能的に連結している、ポリヌクレオチド。
【請求項２１】
修飾されたプロテアーゼをコードする単離されたポリヌクレオチドであって、前記単離され、修飾されたポリヌクレオチドは、配列番号３のシグナルペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含み、前記第１のポリヌクレオチドは、配列番号７に表されたプロ領域をコードする第２のポリヌクレオチドに機能的に連結しており、前記プロ領域はE6A、E6C、E6F、E6P、E6T、E6W、E6V、A32K及びA32Tから選ばれたアミノ酸の置換を含み、前記第２のポリヌクレオチドは配列番号９のプロテアーゼの成熟領域をコードする第３のポリヌクレオチドに機能的に連結しているものである、ポリヌクレオチド。
【請求項２２】
修飾されたプロテアーゼをコードする単離されたポリヌクレオチドであって、前記単離され、修飾されたポリヌクレオチドは、配列番号３のシグナルペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含み、前記第１のポリヌクレオチドは、配列番号７に表されたプロ領域をコードする第２のポリヌクレオチドに機能的に連結し、前記プロ領域はE6A、E30A、E30L、E30T及びE30Vから選ばれたアミノ酸の置換を含み、前記第２のポリヌクレオチドは、配列番号19のプロテアーゼの成熟領域をコードする第３のポリヌクレオチドと機能的に連結しているものである、ポリヌクレオチド。
【請求項２３】
修飾されたプロテアーゼをコードする単離されたポリヌクレオチドであり、前記単離され、修飾されたポリヌクレオチドは配列番号３のシグナルペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含み、前記第１のポリヌクレオチドは配列番号７に表されたプロ領域をコードする第２のポリヌクレオチドと機能的に連結し、前記プロ領域はE6A、E6L、E6F、E6T、E6V、E30I、E30L、E30P、E30T、E30Y、E30V、A32Q、A32S及びA32Tから選ばれるアミノ酸の置換を含み、前記第２のポリヌクレオチドは配列番号11のプロテアーゼの成熟領域をコードする第３のポリヌクレオチドと機能的に連結しているものである、ポリヌクレオチド。
【請求項２４】
修飾されたプロテアーゼをコードする単離されたポリヌクレオチドであり、前記単離され、修飾されたポリヌクレオチドは配列番号３のシグナルペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含み、前記第１のポリヌクレオチドは配列番号７に表されたプロ領域をコードする第２のポリヌクレオチドと機能的に連結し、前記プロ領域はE30Aのアミノ酸の置換を含み、前記第２のポリヌクレオチドが配列番号21のプロテアーゼの成熟領域をコードする第３のポリヌクレオチドと機能的に連結しているものである、ポリヌクレオチド。
【請求項２５】
バシルス・スブチリス宿主細胞で成熟プロテアーゼを産生する方法であって、前記方法は、
a) 請求項20、21、22、23及び24の単離されたポリヌクレオチドから選ばれた単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供し、
b) 前記発現ベクターにより前記バシルス・スブチリス宿主細胞を形質転換し、
c) 適した条件で前記宿主細胞を培養し、その結果前記成熟プロテアーゼが前記宿主細胞により産生される
工程、を含むものである、方法。
【請求項１】
修飾されたプロテアーゼをコードする単離され、修飾されたポリヌクレオチドであって、前記単離され、修飾されたポリヌクレオチドは、シグナルペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含み、前記第１のポリヌクレオチドは配列番号７に表されたプロ領域をコードする第２のポリヌクレオチドに機能的に連結され、前記プロ領域は、前記プロ領域の位置6、30及び32から選ばれた位置で２個以上のアミノ酸の置換の組み合わせを含み、前記第２のポリヌクレオチドは、配列番号９の成熟プロテアーゼと約60%以上同一であるプロテアーゼの成熟領域をコードする第３のポリヌクレオチドと機能的に連結しており、当該位置は、配列番号７のプロポリペプチドのアミノ酸配列との対応により番号が付されているものである、ポリヌクレオチド。
【請求項２】
請求項１の単離され、修飾されたポリヌクレオチドであって、前記成熟プロテアーゼは、バシルス・クラウシ(Bacillus clausii)又はバシルス・レンツス(Bacillus lentus)由来の、野生型又は変異アルカリセリンプロテアーゼである、ポリヌクレオチド。
【請求項３】
請求項１または２の単離され、修飾されたポリヌクレオチドであって、前記成熟プロテアーゼは配列番号9、11、13、15、17、19及び21から選ばれるアミノ酸配列を有する、ポリヌクレオチド。
【請求項４】
請求項１−３のいずれか１請求項の単離されたポリヌクレオチドであって、前記シグナルペプチドは配列番号３と５から選ばれるアミノ酸配列を有するものである、ポリヌクレオチド。
【請求項５】
請求項１−４のいずれかの１請求項の単離され、修飾されたポリヌクレオチドであって、前記置換の組み合わせはE6X-E30G、E6X-E30S、E6X-A32K、E30X-A32K、E30G-A32X、E30S-A32X及びE6G-E30G-A32Xから選ばれるものである、ポリヌクレオチド。
【請求項６】
請求項1-4のいずれかの１請求項の単離され、修飾されたポリヌクレオチドであって、置換の前記組み合わせは、
E6R-A32K, E6N-A32K,E6D-A32K, E6I-A32K, E6K-A32K, E6M-A32K, E6P- A32K, E6S-A32K, E6T-A32K, E6N-A32K, E30W-A32K, E30V-A32K, E6A-E30G, E6R-E30G, E6C-E30G, E6Q-E30G, E6G-E30G, E6H-E30G, E6K-E30G, E6S-E30G, E6W-E30G, E30G-A32R, E30G-A32Q, E30G-A32E, E30G-A32G, E30G-A32H, E30G-A32I, E30G-A32K, E30G-A32S, E30G-A32T, E30G- A32W, E30G-A32V, E6G-E30G-A32E, E6G-E30G-A32S, E6G-E30G-A32T, E6G-E30G-A32W, E6A- E30G, E6R-E30G, E6N-E30G, E6D-E30G, E6C-E30G, E6Q-E30G, E6G-E30G, E6H-E30G, E6K-E30G, E6M-E30G, E6F-E30G, E6P-E30G, E6S-E30G, E6T-E30G, E6W-E30G, E6V-E30G, E6Y-E30G, E6A- E30S, E6G-E30S, E6L-E30S, E6K-E30S, E6F-E30S, E6P-E30S, E6Y-E30S, E6V-E30S, E30S-A32R, E30S-A32N, E30S-A32D, E30S-A32C, E30S-A32Q, E30S-A32E, E30S-A32G, E30S-A32H, E30S-A32L, E30S-A32K, E30S-A32M, E30S-A32F, E30S-A32P, E30S-A32S, E30S-A32T, E30S-A32W, E30S-A32Y, 及びE30S-A32V.
から選ばれるものである、ポリヌクレオチド。
【請求項７】
請求項１−６のいずれか１請求項の単離されたポリヌクレオチドであって、前記置換はバシルス属の種の宿主細胞による前記成熟プロテアーゼの産生を強化するものである、ポリヌクレオチド。
【請求項８】
請求項７の単離されたポリヌクレオチドであって、前記バシルス属の種の宿主細胞はバシルス・スブチリス(Bacillus subtilis)宿主細胞である、ポリヌクレオチド。
【請求項９】
請求項１の単離され、修飾されたポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項１０】
請求項９の発現ベクターであって、さらにAprEプロモーターを含むものである発現ベクター。
【請求項１１】
請求項９または１０の発現ベクターを含むバシルス属の種である宿主細胞。
【請求項１２】
前記宿主細胞がB・スブチリス(B.subtilis)宿主細胞である、請求項１１の宿主細胞。
【請求項１３】
バシルス属の種の宿主細胞で成熟プロテアーゼを産生する方法であって、前記方法は、
a) 請求項10の発現ベクターを提供し
b) 前記発現ベクターによりバシルス属の種の宿主細胞を形質転換し、
c) 適当な条件で前記宿主細胞を培養し、その結果前記プロテアーゼが前記宿主細胞により産生される
工程を含む、成熟プロテアーゼを産生する方法。
【請求項１４】
請求項１３の方法であって、前記バシルス属の種の宿主細胞はバシルス・スブチリス宿主細胞である、方法。
【請求項１５】
請求項13または14の方法であって、前記成熟プロテアーゼは、野生型バシルス・クラウシ(Bacillus clausii)又はバシルス・レンツス(Bacillus lentus)アルカリセリンプロテアーゼ、またはそれらの変異体または相同体である、方法。
【請求項１６】
請求項１３−１５のいずれかの１請求項の方法であって、前記第１のポリヌクレオチドは配列番号３のシグナルペプチドをコードし、前記プロ領域をコードする前記第２のポリヌクレオチドは、
E6R-A32K, E6N-A32K, E6D-A32K, E6I-A32K, E6K-A32K, E6M-A32K, E6P-A32K, E6S-A32K, E6T-A32K, E6N-A32K, E30W-A32K, 及び E30V-A32Kから選択される置換の組み合わせを含み、前記第３のポリヌクレオチドが配列番号９から選択される成熟プロテアーゼをコードするものである、方法。
【請求項１７】
請求項１３−１５のいずれかの１請求項の方法であって、前記第１のポリヌクレオチドは、配列番号３のシグナルペプチドをコードし、前記プロ領域をコードする前記第２のポリヌクレオチドは、
E6A-E30G, E6R-E30G, E6C-E30G, E6Q-E30G, E6G-E30G, E6H-E30G, E6K-E30G, E6S-E30G, E6W-E30G, E30G-A32R, E30G-A32Q, E30G-A32E, E30G-A32G,
E30G-A32H, E30G-A32I, E30G-A32K, E30G-A32S, E30G-A32T, E30G-A32W, E30G-A32V, E6G-E30G- A32E, E6G-E30G-A32S, E6G-E30G-A32T, 及びE6G-E30G-A32Wから選択される置換の組合せを含み、前記第３のポリヌクレオチドは配列番号17から選択される成熟プロテアーゼをコードするものである、方法。
【請求項１８】
請求項１３−１５のいずれかの１請求項の方法であって、前記第１のポリヌクレオチドは配列番号３のシグナルペプチドをコードし、前記プロ領域をコードする前記第２のポリヌクレオチドは、
E6A-E30G, E6R-E30G, E6N-E30G, E6D-E30G, E6C-E30G, E6Q-E30G, E6G-E30G, E6H-E30G, E6K-E30G, E6M-E30G, E6F-E30G, E6P-E30G, E6S-E30G, E6T- E30G, E6W-E30G, E6V-E30G及びE6Y-E30G,
から選ばれる置換の組み合わせを含み、前記第３のポリヌクレオチドは配列番号19から選ばれた成熟プロテアーゼをコードするものである、方法。
【請求項１９】
請求項１３−１５のいずれか１請求項の方法であって、前記第１のポリヌクレオチドは配列番号３のシグナルペプチドをコードし、前記プロ領域をコードする前記第２のポリヌクレオチドは、
E6A-E30S,E6G-E30S, E6L-E30S, E6K-E30S, E6F-E30S, E6P- E30S, E6Y-E30S, E6V-E30S, E30S-A32R, E30S-A32N, E30S-A32D, E30S-A32C, E30S-A32Q, E30S- A32E, E30S-A32G, E30S-A32H, E30S-A32L, E30S-A32K, E30S-A32M, E30S-A32F, E30S-A32P, E30S- A32S, E30S-A32T, E30S-A32W, E30S-A32Y及び E30S-A32Vから選ばれた置換の組み合わせを含み、前記第３のポリヌクレオチドは配列番号21から選ばれた成熟プロテアーゼをコードするものである、方法。
【請求項２０】
修飾されたプロテアーゼをコードする単離されたポリヌクレオチドであって、前記単離され、修飾されたポリヌクレオチドは配列番号３のシグナルペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含み、前記第１のポリヌクレオチドは配列番号７に表されたプロ領域をコードする第２のポリヌクレオチドに機能的に連結し、前記プロ領域はE6A、E6C、E6Y、E30A、E30L、E30P、E30T、E30Y、E30V、A32C、A32E、A32G、A32K及びA32Tから選ばれたアミノ酸の置換を含み、前記第２のポリヌクレオチドは、配列番号17のプロテアーゼの成熟領域をコードする第３のポリヌクレオチドと機能的に連結している、ポリヌクレオチド。
【請求項２１】
修飾されたプロテアーゼをコードする単離されたポリヌクレオチドであって、前記単離され、修飾されたポリヌクレオチドは、配列番号３のシグナルペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含み、前記第１のポリヌクレオチドは、配列番号７に表されたプロ領域をコードする第２のポリヌクレオチドに機能的に連結しており、前記プロ領域はE6A、E6C、E6F、E6P、E6T、E6W、E6V、A32K及びA32Tから選ばれたアミノ酸の置換を含み、前記第２のポリヌクレオチドは配列番号９のプロテアーゼの成熟領域をコードする第３のポリヌクレオチドに機能的に連結しているものである、ポリヌクレオチド。
【請求項２２】
修飾されたプロテアーゼをコードする単離されたポリヌクレオチドであって、前記単離され、修飾されたポリヌクレオチドは、配列番号３のシグナルペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含み、前記第１のポリヌクレオチドは、配列番号７に表されたプロ領域をコードする第２のポリヌクレオチドに機能的に連結し、前記プロ領域はE6A、E30A、E30L、E30T及びE30Vから選ばれたアミノ酸の置換を含み、前記第２のポリヌクレオチドは、配列番号19のプロテアーゼの成熟領域をコードする第３のポリヌクレオチドと機能的に連結しているものである、ポリヌクレオチド。
【請求項２３】
修飾されたプロテアーゼをコードする単離されたポリヌクレオチドであり、前記単離され、修飾されたポリヌクレオチドは配列番号３のシグナルペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含み、前記第１のポリヌクレオチドは配列番号７に表されたプロ領域をコードする第２のポリヌクレオチドと機能的に連結し、前記プロ領域はE6A、E6L、E6F、E6T、E6V、E30I、E30L、E30P、E30T、E30Y、E30V、A32Q、A32S及びA32Tから選ばれるアミノ酸の置換を含み、前記第２のポリヌクレオチドは配列番号11のプロテアーゼの成熟領域をコードする第３のポリヌクレオチドと機能的に連結しているものである、ポリヌクレオチド。
【請求項２４】
修飾されたプロテアーゼをコードする単離されたポリヌクレオチドであり、前記単離され、修飾されたポリヌクレオチドは配列番号３のシグナルペプチドをコードする第１のポリヌクレオチドを含み、前記第１のポリヌクレオチドは配列番号７に表されたプロ領域をコードする第２のポリヌクレオチドと機能的に連結し、前記プロ領域はE30Aのアミノ酸の置換を含み、前記第２のポリヌクレオチドが配列番号21のプロテアーゼの成熟領域をコードする第３のポリヌクレオチドと機能的に連結しているものである、ポリヌクレオチド。
【請求項２５】
バシルス・スブチリス宿主細胞で成熟プロテアーゼを産生する方法であって、前記方法は、
a) 請求項20、21、22、23及び24の単離されたポリヌクレオチドから選ばれた単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供し、
b) 前記発現ベクターにより前記バシルス・スブチリス宿主細胞を形質転換し、
c) 適した条件で前記宿主細胞を培養し、その結果前記成熟プロテアーゼが前記宿主細胞により産生される
工程、を含むものである、方法。
【公表番号】特表２０１２−５２４５４２（Ｐ２０１２−５２４５４２Ａ）
【公表日】平成２４年１０月１８日（２０１２．１０．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５０７２７１（Ｐ２０１２−５０７２７１）
【出願日】平成２２年４月１５日（２０１０．４．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３１２６９
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１２３７５４
【国際公開日】平成２２年１０月２８日（２０１０．１０．２８）
【出願人】（５０９２４０４７９）ダニスコ・ユーエス・インク (81)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１０月１８日（２０１２．１０．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年４月１５日（２０１０．４．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３１２６９
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１２３７５４
【国際公開日】平成２２年１０月２８日（２０１０．１０．２８）
【出願人】（５０９２４０４７９）ダニスコ・ユーエス・インク (81)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]