免疫原性組成物で使用するためのナノ粒子
少なくとも１つの生分解性ポリマー、少なくとも１つの界面活性剤、少なくとも１つの凍結保護剤および少なくとも１つの抗原を含む滅菌ろ過凍結乾燥ナノ粒子組成物が本明細書で開示される。また、そのような組成物を作製し、使用する方法およびそのような組成物を供給するキットも開示される。一部の実施形態では、凍結乾燥粒子は、２５０ｎｍ未満、たとえば２５０ｎｍ−２００ｎｍ−１５０ｎｍ−１００ｎｍまたはそれ以下の範囲にわたるＺ平均またはＤ（ｖ，０．５）値を有する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願についての陳述）
この出願は、２００５年１２月２日に出願された、表題「Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ Ｆｏｒ Ｕｓｅ Ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ」の米国仮特許出願第６０／７４１，８６０号の利益を主張する。この出願はまた、２００６年２月２１日に出願された、表題「Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ Ｆｏｒ Ｕｓｅ Ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ」の米国仮特許出願第６０／７７５，２６５号の利益を主張する。これらの先の出願の両方は、その全体が参考として本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
微粒子担体は、適切な免疫応答を惹起することを目指して吸着または捕獲抗原と共に使用されてきた。そのような担体は、選択抗原の多数のコピーを免疫系に提示し、局所リンパ節における抗原の捕捉と保持を促進すると考えられている。粒子はマクロファージによって貪食されることができ、サイトカイン放出を通して抗原提示を増強し得る。
【０００３】
たとえば所有者が共通する特許文献１および同時継続出願の特許文献２は、細胞媒介性免疫応答を含む免疫応答を刺激するための抗原吸着および抗原被包ミクロ粒子の使用、ならびにミクロ粒子を作製する方法を述べている。ミクロ粒子を形成するために使用されるポリマーは、ポリ（ラクチド）およびポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）を含む。
【０００４】
所有者が共通する特許文献３および特許文献４および特許文献５は、ポリヌクレオチドおよびポリペプチド抗原を含む、高分子が吸着されたミクロ粒子を作製する方法を開示する。ミクロ粒子は、たとえば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）（たとえばＰＬＧ、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物等）などのポリマーを含み、たとえば陽イオン、陰イオンまたは非イオン界面活性剤を使用して形成される。ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を含むＰＬＧミクロ粒子などの、陰イオン界面活性剤を含むミクロ粒子は、ポリペプチドなどの正に荷電した高分子と共に使用できる。ＣＴＡＢ（セトリミドまたは臭化セチルトリメチルアンモニウムとしても知られる）を含むＰＬＧミクロ粒子などの、陽イオン界面活性剤を含むミクロ粒子は、ＤＮＡなどの負に荷電した高分子と共に使用できる。細胞媒介性免疫応答を含む免疫応答を刺激するためのそのようなミクロ粒子の使用も開示されている。
【特許文献１】国際公開第９８／３３４８７号パンフレット
【特許文献２】米国特許出願公開第２００３／００４９２９８号明細書
【特許文献３】国際公開第００／０６１２３号パンフレット
【特許文献４】国際公開第０１／３６５９９号パンフレット
【特許文献５】米国特許第６，８８４，４３５号明細書
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（要旨）
１つの態様では、本発明は、少なくとも１つの生分解性ポリマー、少なくとも１つの界面活性剤、少なくとも１つの凍結保護剤および少なくとも１つの抗原を含む滅菌凍結乾燥ナノ粒子組成物を提供する。
【０００６】
一部の実施形態では、凍結乾燥粒子は、２５０ｎｍ未満、たとえば２５０ｎｍ−２００ｎｍ−１５０ｎｍ−１００ｎｍまたはそれ以下の範囲にわたるＺ平均またはＤ（ｖ，０．５）値を有する。
【０００７】
そのような組成物は、たとえばそれらが免疫原性であることおよび容易にナノ粒子懸濁物を形成するという点で有用である。たとえば本発明の凍結乾燥ナノ粒子組成物を０．００５ｇ／ｍｌ（５−１０ｍｇ／ｍｌの範囲）の濃度で蒸留水と混合したとき、免疫原性ナノ粒子懸濁物が自然に形成され、前記懸濁ナノ粒子のＺ平均またはＤ（ｖ，０．５）値は２５０ｎｍ未満、たとえば２５０ｎｍ−２００ｎｍ−１５０ｎｍ−１００ｎｍまたはそれ以下の範囲にわたる。
【０００８】
ある実施形態では、生分解性ポリマーは、たとえば、中でも特にポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリシアノアクリレート、およびそれらの組合せから選択される、合成生分解性ポリマーである。
【０００９】
凍結保護剤の例は、中でも特に、ポリオール、炭水化物およびそれらの組合せを含む。
【００１０】
界面活性剤の例は、中でも特に、非イオン界面活性剤、陽イオン界面活性剤および陰イオン界面活性剤を含む。
【００１１】
抗原は、たとえばナノ粒子の表面に吸着され得るか、ナノ粒子内に封入され得るかまたはその両方であり得る。抗原の例は、中でも特に、ポリペプチド含有抗原、多糖含有抗原、およびポリヌクレオチド含有抗原を含む。抗原は、たとえば腫瘍細胞、およびウイルス、細菌、真菌および寄生生物などの病原生物に由来し得る。
【００１２】
ある実施形態では、本発明の組成物は、たとえばナノ粒子の表面に吸着され得る、ナノ粒子内に封入され得る、またはその両方であり得る、免疫アジュバントなどの補助成分を含有し得る。補足免疫アジュバントの例は、中でも特に、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、二本鎖ＲＮＡ、大腸菌非耐熱性毒素、ミョウバン、リポ糖リン酸塩化合物およびリポ糖リン酸塩ミメティック（ｍｉｍｅｔｉｃ）を含む。
【００１３】
２つの抗原、２つの免疫アジュバント、あるいは１つの抗原と１つの免疫アジュバントを使用する場合、それらはたとえば、（ａ）ナノ粒子の同じ集団に吸着される、（ｂ）各々がナノ粒子の別々の集団に吸着される、（ｃ）１つがナノ粒子に吸着され、その他が溶液中に存在する、（ｄ）１つがナノ粒子に吸着され、その他がナノ粒子の同じ集団内に封入される、（ｅ）１つがナノ粒子の１番目の集団に吸着され、その他がナノ粒子の２番目の集団内に封入される、等であり得る。
【００１４】
他の態様では、本発明は、前記のようなナノ粒子組成物を生産する方法を提供する。
【００１５】
さらなる他の態様では、本発明は、ナノ粒子組成物を宿主動物に送達する（たとえば治療、予防または診断目的のため）方法を提供する。宿主動物は、好ましくは脊椎動物、より好ましくは哺乳動物、さらに一層好ましくはヒトである。本発明のナノ粒子組成物の送達は、何らかの公知の方法によって実施できる。
【００１６】
さらなる態様では、本発明は、本発明のナノ粒子組成物を含むキットを提供する。
【００１７】
発明の背景において上述したようなミクロ粒子に基づく技術と比較して、本発明の利点は、数ある中でも特に、作製の容易さ（たとえば高せん断均質化は必要なく、またナノ粒子は滅菌ろ過され得るので、ナノ粒子製造工程は厳格に無菌である必要はない）、およびより高レベルの抗原および他の種をナノ粒子の表面に吸着する能力を含む。
【００１８】
本発明のこれらや他の態様、実施形態および利点は、ここでの開示を考慮して当業者により容易に明らかになる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
（発明の詳細な説明）
本発明の実施は、異なる指示がない限り、技術水準内での、化学、高分子化学、生化学、分子生物学、免疫学および薬理学の従来の方法を使用する。そのような手法は文献において詳細に説明されている。たとえばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）；Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．ＣｏｌｏｗｉｃｋとＮ．Ｋａｐｌａｎ編集、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｗｅｉｒ，Ｄ．Ｍ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｉ−ＩＶ巻、第５版（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９６）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第３版（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２００１）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第５版（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２００２）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｄ Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｂｉｒｄｉ，Ｋ．Ｓ．編集、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９７）およびＳｅｙｍｏｕｒ／Ｃａｒｒａｈｅｒ’ｓ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第５版（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ．，２０００）参照。
【００２０】
上記または下記の、ここで引用するすべての公表文献、特許および特許出願は、それらの全体が参照によりここに組み込まれる。
【００２１】
本明細書および付属の特許請求の範囲において使用する、単数形態の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、その内容が明らかに異なる指示を与えない限り、複数の言及を包含する。それ故、たとえば「ナノ粒子」という用語は１またはそれ以上のナノ粒子を指す、等である。
【００２２】
異なる記述がない限りまたは文脈が明らかに異なる指示を与えない限り、ここでのすべてのパーセンテージおよび比率は重量ベースで与えられる。
【００２３】
Ａ．定義
本発明を説明するとき、以下の用語が使用され、以下で指示するように定義されるものとする。
【００２４】
ここで使用される「ナノ粒子」という用語は、直径１，０００ｎｍ未満の粒子を指す。本発明の組成物内のナノ粒子は、典型的には、Ｚ平均および／またはＤ（ｖ，０．５）値が２５０ｎｍ未満、より典型的には１５０ｎｍ未満であり、およびＺ平均および／またはＤ（ｖ，０．９）値が３５０ｎｍ未満、より典型的には２００ｎｍ未満である粒径分布を有する。
【００２５】
粒径は当技術分野で使用可能な方法を用いて測定することができる。たとえば粒径は、光子相関分光法、動的光散乱または準弾性光散乱を用いて測定できる。これらの方法は、ブラウン運動測定から得られる粒子の拡散特性と粒径の相関に基づく。ブラウン運動は、粒子を取り巻く溶媒分子による衝突に起因する粒子のランダムな運動である。粒子が大きいほど、ブラウン運動はより緩やかである。速度は並進拡散係数（Ｄ）によって定義される。測定される数値は、粒子が液体内でどのように運動するか（流体力学的直径）を表わす。得られる直径は、粒子と同じ並進拡散係数を有する球の直径である。
【００２６】
粒径はまた、単一時間に溶液中の粒子によって散乱される光の強度を測定する、静的光散乱を用いて測定することもできる。静的光散乱は、光強度を散乱角度と溶質濃度の関数として測定する。光源、たとえばレーザー光を通過する粒子は、それらの大きさに逆比例する角度で光を散乱させる。大きな粒子は高い強度を有する低散乱角度での回折パターンを生じ、一方小さな粒子は広い角度の低強度シグナルを生じる。試料から散乱される光の強度が角度の関数として測定される場合、粒径分布が算定できる。粒径分布を算定するために角度情報を散乱モデル（たとえばミー理論）と比較する。
【００２７】
一般に、粒径は室温で測定され、粒子直径についての平均値を求めるために対象とする試料の多数の分析（たとえば同じ試料に関して少なくとも３回の反復測定）を含む。
【００２８】
光子相関分光法に関して、Ｚ平均（キュミュラント平均または流体力学的直径とも呼ばれる）は、典型的にはキュミュラント（単峰性）分析から算定される。
【００２９】
静的光散乱測定に関して（および一部の実施形態では光子相関分光法に関しても）、容積に基づくサイズパラメータを測定し得る。たとえばＤ（ｖ，０．５）（ｖは容積を意味する）は、その数値が、測定したとき、組成物中の粒子の５０％（容積ベース）がＤ（ｖ，０．５）値未満の粒径を有し、および組成物中の粒子の５０％がＤ（ｖ，０．５）値より大きい粒径を有する点と定義されるサイズパラメータである。同様に、Ｄ（ｖ，０．９）は、その数値が、組成物中の粒子の９０％（容積ベース）がＤ（ｖ，０．９）値未満の粒径を有し、および組成物中の粒子の１０％がＤ（ｖ，０．９）値より大きい粒径を有する点と定義されるサイズパラメータである。
【００３０】
ここで定義する、「ナノ粒子懸濁物」は、ナノ粒子を含む液相である。「水溶液］は、水を含有する溶液、典型的には５０重量％以上の水、たとえば５０−７５−９０−９５重量％またはそれ以上の水を含む溶液である。「水性ナノ粒子懸濁物」は、ナノ粒子を含む水含有液相である。本発明に従った水性ナノ粒子懸濁物は、典型的には５０重量％以上の水、たとえば５０−７５−９０−９５重量％またはそれ以上の水を含む。
【００３１】
ここでの使用のためのナノ粒子は、典型的には、滅菌可能で、実質的に非毒性であり、生分解性であるポリマーから形成される。そのような材料は、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、およびポリシアノアクリレート（たとえばポリアルキルシアノアクリレートまたは「ＰＡＣＡ」）を含む。より典型的には、本発明に関する使用のためのナノ粒子は、ポリ（α−ヒドロキシ酸）から、たとえばポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）などのポリ（ラクチド）（「ＰＬＡ」、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（「ＰＬＧ」）などのラクチドとグリコリドのコポリマー、またはＤ，Ｌ−ラクチドとカプロラクトンのコポリマーから誘導されるポリマーナノ粒子である。ポリマーナノ粒子は、様々な分子量を有し、およびＰＬＧなどのコポリマーの場合は様々なモノマー（たとえばラクチド：グリコリド）比を有する、種々のポリマー出発物質のいずれかから誘導でき、その選択は、一部には同時投与される種に依存するが、主として選択の問題である。これらのパラメータを以下でさらに論じる。
【００３２】
「界面活性剤」という用語は、「表面活性物質」という語句に由来する。界面活性剤は界面（たとえば液体−液体、液体−固体および／または液体−気体界面）に蓄積し、その界面の性質を変化させる。ここで使用する、界面活性剤は、洗浄剤、分散剤、懸濁化剤、乳化安定剤等を包含する。
【００３３】
ここで定義する、「炭水化物」は、単糖、オリゴ糖および多糖、ならびにたとえば還元によって（たとえばアルジトール）、１またはそれ以上の末端基のカルボン酸への酸化によって（たとえばグルクロン酸）、あるいは水素原子またはアミノ基による１またはそれ以上のヒドロキシ基の置換によって（たとえばβ−Ｄ−グルコサミンおよびβ−Ｄ−ガラクトサミン）、単糖から誘導される物質を含む。
【００３４】
ここで使用する、「単糖」は、多価アルコール、すなわちアルデヒド基（この場合単糖はアルドースである）またはケト基（この場合単糖はケトースである）のいずれかをさらに含むアルコールである。単糖は、典型的には３−１０個の炭素を含む。さらに、単糖は一般に実験式（ＣＨ２Ｏ）ｎ［式中、ｎは３またはそれ以上の整数、典型的には３−１０である］を有する。炭素数３−６のアルドースの例は、グリセルアルデヒド、エリトロース、トレオース、リボース、２−デオキシリボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトースおよびタロースを含む。炭素数３−６のケトースの例は、ジヒドロキシアセトン、エリトルロース、リブロース、キシルロース、プシコース、フルクトース、ソルボースおよびタガトースを含む。天然に生じる単糖は、通常はＬ−形態ではなくＤ−異性体として認められる。
【００３５】
「オリゴ糖」は、比較的短い単糖ポリマー、すなわち２−３０の単糖単位を含むものを指す。「多糖」は、オリゴ糖の長さを超える（すなわち３０単糖単位以上を含むもの）単糖ポリマーである。さらに、ここで使用する、「多糖」という用語はまた、２またはそれ以上の連結された単糖を含む単糖ポリマーを指す。あいまいさを避けるため、２番目の定義は、矛盾する明白な指示がない限り、すべての場合に適用されるものとする。「多糖」という用語はまた、数ある中でも特に、アミノ官能基化およびカルボキシル官能基化多糖誘導体などの多糖誘導体を含む。単糖は、典型的にはグリコシド結合によって連結される。特定例は、二糖（スクロース、ラクトース、トレハロース、マルトース、ゲンチオビオースおよびセロビオースなど）、三糖（ラフィノースなど）、四糖（スタキオースなど）、および五糖（ベルバスコースなど）を含む。
【００３６】
ここで使用する、「糖」という用語は、単糖、オリゴ糖および多糖を包含する。「糖含有種」は、少なくともその一部が糖である分子である。例は、糖凍結保護剤、糖抗原、担体ペプチドに複合した糖を含む抗原等を包含する。
【００３７】
ここで使用する、「凍結保護剤」は、凍結および解凍時に有害な作用を受けることから組成物を保護する物質である。たとえば本発明では、本発明の凍結乾燥組成物を再懸濁したとき実質的なナノ粒子凝集が起こるのを防ぐために凍結保護剤を添加し得る。
【００３８】
「ポリヌクレオチド」は核酸ポリマーである。ここで使用する、「ポリヌクレオチド」は、わずかに５、６、７または８個のヌクレオチドを含み得る。
【００３９】
さらに、「ポリヌクレオチド」は二本鎖および一本鎖配列の両方を含むことができ、ウイルスからのｃＤＮＡ、原核生物または真核生物ｍＲＮＡ、ウイルスからのゲノムＲＮＡおよびＤＮＡ配列（たとえばＲＮＡおよびＤＮＡウイルスおよびレトロウイルス）または原核生物ＤＮＡ、および合成ＤＮＡ配列を指すが、これらに限定されない。この用語はまた、ＤＮＡおよびＲＮＡの公知の塩基類似体のいずれかを含む配列を包含する。この用語はさらに、たとえば核酸分子が抗原タンパク質をコードする場合、天然配列への、欠失、付加および置換（一般に本来は保存的）などの修飾を含む。これらの修飾は、部位指定突然変異誘発を通してのように、故意であり得るか、または抗原を産生する宿主の突然変異を通してのように、偶発的であり得る。
【００４０】
ここで定義する「オリゴヌクレオチド」は、５−１００、より好ましくは５−３０ヌクレオチドの範囲内の大きさを有するポリヌクレオチドである。
【００４１】
ここで使用する、「核酸」という語句は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはそれらから形成されるキメラを指す。
【００４２】
「ポリヌクレオチド含有種」は、少なくともその一部がポリヌクレオチドである分子である。例は、ＲＮＡベクター構築物、ＤＮＡベクター構築物等を含む。
【００４３】
「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指し、生成物の最小限の長さに限定されない。それゆえペプチド、オリゴペプチド、ダイマー、マルチマー等が定義に包含される。完全長タンパク質およびそのフラグメントの両方が定義に包含される。これらの用語はまた、たとえば、タンパク質が、免疫応答を惹起するまたはタンパク質が投与される被験体に治療作用を及ぼす能力を保持するように、天然配列への、欠失、付加および置換（一般に本来は保存的）などの修飾を含む。
【００４４】
「ポリペプチド含有種」は、少なくともその一部がポリペプチドである分子である。例は、ポリペプチド、糖タンパク質を含むタンパク質、輸送タンパク質に複合した糖抗原等を含む。
【００４５】
「薬剤」という用語は、抗生物質、抗ウイルス薬、増殖因子、ホルモン、抗原等のような生物学的に活性な化合物を指す。
【００４６】
「アジュバント」という用語は、抗原に対する免疫応答を高めるまたは多様化する免疫アジュバントを含むが、これらに限定されない、薬剤の作用を助けるまたは改変する物質を指す。それ故、免疫アジュバントは、抗原に対する免疫応答を増強することができる化合物である。免疫アジュバントは、体液性および／または細胞性免疫を増強することができる。
【００４７】
「抗原」により、抗原が提示されたとき細胞性抗原特異的免疫応答または体液性抗体応答を生じるように宿主の免疫系を刺激することができる１またはそれ以上のエピトープを含む分子が意味される。抗原は、単独でまたはもう１つ別の分子を組み合わせて存在するとき、細胞性および／または体液性応答を惹起することができる。
【００４８】
「エピトープ」は、その免疫学的特異性を決定する抗原分子または抗原複合体の部分である。エピトープは、本発明における抗原の定義の範囲内である。一般に、エピトープは、天然に生じる抗原ではポリペプチドまたは多糖である。人工抗原では、アルサニル酸誘導体などの低分子量物質であり得る。エピトープは、たとえば同種抗体またはＴリンパ球と、インビボまたはインビトロで特異的に反応する。選択的記述語は、抗原決定基、抗原構造群およびハプテン群である。
【００４９】
しばしば、エピトープは約５−１５アミノ酸を含む。所与のタンパク質のエピトープは、当技術分野において周知の、多くのエピトープマッピング手法を用いて同定される。たとえばＥｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第６６巻（Ｇｌｅｎｎ Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ編集、１９９６）Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ参照。たとえば線状エピトープは、たとえば固体支持体上で、タンパク質分子の部分に対応する多数のペプチドを同時に合成し、ペプチドを支持体に結合したままで、ペプチドを抗体と反応させることによって決定し得る。そのような手法は当技術分野で公知であり、たとえば米国特許第４，７０８，８７１号；Ｇｅｙｓｅｎら（１９８４）（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：３９９８−４００２）；Ｇｅｙｓｅｎら（１９８６）（Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：７０９−７１５）に述べられている。同様に、立体エピトープは、たとえばｘ線結晶学および二次元核磁気共鳴などにより、アミノ酸の空間立体配座を決定することによって容易に同定される。たとえばＥｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，前出参照。
【００５０】
ここで使用する「抗原」という用語は、サブユニット抗原、すなわち抗原が本来結合している全生物から離れた不連続な抗原、ならび死滅、弱毒化または不活性化細菌、ウイルス、寄生生物または他の病原体または腫瘍細胞の両方を表わす。抗イディオタイプ抗体などの抗体またはそのフラグメント、および抗原または抗原決定基を模倣し得る合成ペプチドミモトープも、ここで使用する抗原の定義に包含される。
【００５１】
同様に、核酸免疫適用などにおいて、インビボで免疫原性タンパク質または抗原決定基を発現するオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドも、ここでの抗原の定義に包含される。
【００５２】
さらに、本発明に関して、「抗原」は、そのタンパク質が免疫応答を惹起する能力を保持する限り、天然配列への、欠失、付加および置換（一般に本来は保存的）などの修飾を有するタンパク質を指す。これらの修飾は、部位指定突然変異誘発を通してのように、故意であり得るか、または抗原を産生する宿主の突然変異を通してのように、偶発的であり得る。
【００５３】
抗原または組成物に対する「免疫学的応答」または「免疫応答」は、被験体における、対象組成物中に存在する分子に対する体液性および／または細胞性免疫応答の発現である。本発明に関して、「体液性免疫応答」は、抗体分子によって媒介される免疫応答を指し、一方「細胞性免疫応答」は、Ｔリンパ球および／または他の白血球によって媒介されるものである。細胞性免疫の１つの重要な態様は、細胞傷害性Ｔ細胞（「ＣＴＬ」）による抗原特異的応答を含む。ＣＴＬは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）によってコードされ、細胞の表面で発現されるタンパク質に関連して提示されるペプチド抗原に対して特異性を有する。ＣＴＬは、細胞内微生物の細胞内破壊、またはそのような微生物に感染した細胞の溶解を誘導し、促進するのを助ける。細胞性免疫のもう１つの態様は、ヘルパーＴ細胞による抗原特異的応答を含む。ヘルパーＴ細胞は、その表面のＭＨＣ分子に関連してペプチド抗原を提示する細胞に対する非特異的エフェクター細胞の機能を刺激し、その活性を集中させるのを助けるように働く。「細胞性免疫応答」はまた、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞に由来するものを含む、活性化Ｔ細胞および／または他の白血球によって産生されるサイトカイン、ケモカインおよび他のそのような分子の産生を指す。
【００５４】
細胞性免疫応答を惹起する免疫原性組成物またはワクチンなどの組成物は、細胞表面でのＭＨＣ分子に関連する抗原の提示により脊椎動物被験体を感作する働きをし得る。細胞媒介性免疫応答は、それらの表面で抗原を提示する細胞または細胞の近くに向けられる。加えて、抗原特異的Ｔリンパ球は、免疫宿主の将来の防御を可能にするために生成され得る。
【００５５】
細胞媒介性免疫応答を刺激する特定抗原または組成物の能力は、リンパ球増殖（リンパ球活性化）アッセイ、ＣＴＬ細胞傷害性細胞アッセイなどの当技術分野で公知の多くのアッセイによって、または感作被験体における抗原に特異的なＴリンパ球を検定することによって、または抗原による再刺激に応答したＴ細胞によるサイトカイン産生の測定によって決定し得る。たとえばＥｒｉｃｋｓｏｎら（１９９３）（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：４１８９−４１９９）；Ｄｏｅら（１９９４）（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２３６９−２３７６）；および以下の実施例参照。
【００５６】
それゆえ、免疫学的応答は、たとえば以下の作用：Ｂ細胞による抗体の産生；および／または対象組成物またはワクチン中に存在する抗原（１またはそれ以上）を特異的に対象とするサプレッサーＴ細胞および／またはγδＴ細胞の活性化の１またはそれ以上を含み得る。これらの応答は、感染を中和する、および／または免疫宿主に対する防御を提供する抗体−補体または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する働きをし得る。そのような応答は、当技術分野で周知の、標準免疫検定法および中和アッセイ、たとえば放射免疫測定法およびＥＬＩＳＡを用いて測定できる。
【００５７】
本発明の免疫原性組成物は、異なる組成物において等量の抗原によって惹起される免疫応答より大きな免疫応答を惹起する能力を有するとき、「高い免疫原性」を示す。すなわち組成物は、たとえば組成物がより強力な免疫応答を生じさせるので、または抗原が投与される被験体において免疫応答を達成するためにより低用量の抗原しか必要としないため、「高い免疫原性」を示し得る。そのような高い免疫原性は、たとえば本発明の組成物と抗原対照を動物に投与し、２つの検定結果を比較することによって測定できる。
【００５８】
ここで使用する、「治療」（その様々な変形、たとえば「治療する」または「治療される」を含む）は、（ｉ）問題の病原体または疾患（たとえば癌または伝統的なワクチンにおけるように、病原菌感染）の予防、（ｉｉ）症状の軽減または排除、および（ｉｉｉ）問題の病原体または疾患の実質的または完全な排除のいずれかを指す。治療は、予防的に（問題の病原体または疾患の出現以前に）または治療的に（問題の病原体または疾患の出現後に）実施され得る。
【００５９】
本発明の免疫原性組成物の「有効量」または「医薬的に有効な量」という用語は、ここでは対象とする状態を治療するまたは診断するために十分な免疫原性組成物の量を指す。必要とされる正確な量は、数ある因子の中でも特に、たとえば被験体の種、年齢および全般的状態；治療される状態の重症度；対象とする特定抗原；免疫学的応答の場合は、たとえば抗体を合成する被験体の免疫系の能力および所望する防御の程度；および投与方式に依存して、被験体ごとに異なる。個々の場合の適切な「有効」量は、当業者によって決定され得る。それゆえ「治療有効量」は、典型的には常套的治験を通して決定され得る比較的広い範囲に属する。
【００６０】
「脊椎動物被験体」または「脊椎動物」により、限定を伴わずに、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウマおよびヒトなどの哺乳動物；イヌおよびネコなどの愛玩動物；およびニワトリ、シチメンチョウおよび他の家禽を含むオンドリおよびメンドリなどの家禽、野鳥および狩猟鳥を含む鳥類を含む、脊索動物亜門の何らかの成員が意味される。この用語は特定の年齢を意味しない。それ故成体および新生児動物の両方が含まれる。
【００６１】
「医薬的に許容される」または「薬理的に許容される」により、生物学的に有害でない物質、すなわち物質が、個体において過度の望ましくない生物学的作用を引き起こさずにまたは含有される組成物の成分のいずれかと過度に有害に相互作用せずに個体に投与され得ることが意味される。
【００６２】
「賦形剤」という用語は、最終投与形態中に存在し得る基本的に付属的な物質を指す。たとえば「賦形剤」という用語は、ビヒクル、結合剤、崩壊剤、充填剤（希釈剤）、潤滑剤、流動促進剤、圧縮補助剤、着色料、甘味料、防腐剤、懸濁化／分散剤、薄膜形成剤／被覆剤、着香料および印刷インクを含む。
【００６３】
「生理的ｐＨ」または「生理的範囲内のｐＨ」により、約７．２−８．０（両端を含む）の範囲内、より典型的には約７．２−７．６（両端を含む）の範囲内のｐＨが意味される。
【００６４】
ここで使用する、「ベクター構築物」という語句は、対象とする核酸配列または遺伝子の発現を指令することができる何らかの集合物（ａｓｓｅｍｂｌｙ）を指す。ベクター構築物は、典型的には転写プロモーター／エンハンサーまたは遺伝子座規定エレメント、または選択的スプライシング、ＲＮＡ核外輸送、メッセンジャーの翻訳後修飾またはタンパク質の転写後修飾などの他の手段によって遺伝子発現を制御する他のエレメントを含む。加えて、ベクター構築物は、典型的には、転写されたとき、対象配列または遺伝子に作動可能に連結され、翻訳開始配列として働く配列を含む。ベクター構築物はまた、場合によりポリアデニル化を指令するシグナル、選択マーカー、ならびに１またはそれ以上の制限部位および翻訳終結配列を含む。加えて、ベクター構築物がレトロウイルスに導入される場合、ベクター構築物は、パッケージングシグナル、ロングターミナルリピート（ＬＴＲ）、および使用されるレトロウイルスに適切な正鎖および負鎖プライマー結合部位を含み得る（これらが既に存在していない場合）。
【００６５】
「ＤＮＡベクター構築物」は、対象とする核酸配列または遺伝子の発現を指令することができるＤＮＡ分子を指す。
【００６６】
ＤＮＡベクター構築物の１つの特定型はプラスミドであり、プラスミドは、宿主細胞内で自律複製することができる環状エピソームＤＮＡ分子である。典型的には、プラスミドは、その中に付加的なＤＮＡセグメントを連結することができる環状二本鎖ＤＮＡループである。ｐＣＭＶは当技術分野において周知の１つの特定プラスミドである。好ましいｐＣＭＶベクターは、ＣＭＶの最初期エンハンサー／プロモーターおよびウシ成長ホルモンターミネーターを含む。特定例は、Ｃｈａｐｍａｎ，Ｂ．Ｓ．ら（１９９１）（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９：３９７９−３９８６）の中で詳細に述べられている。
【００６７】
他のＤＮＡベクター構築物は公知であり、それらはＲＮＡウイルスに基づく。これらのＤＮＡベクター構築物は、典型的には真核細胞において機能するプロモーター、転写産物がＲＮＡベクター構築物（たとえばアルファウイルスＲＮＡベクターレプリコン）であるｃＤＮＡ配列の５’末端領域、および３’末端領域を含む。ＲＮＡベクター構築物は、好ましくは、対象生成物をコードする選択された異種核酸配列による１またはそれ以上の構造タンパク質遺伝子の置換によって修飾された、ピコルナウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、コロナウイルス、パラミクソウイルス、黄熱病ウイルスまたはアルファウイルス（たとえばシンドビスウイルス、セムリキ森林ウイルス、ベネズエラウマ脳脊髄炎ウイルスまたはロスリバーウイルス）からのＲＮＡゲノムを含む。ＲＮＡベクター構築物は、ＤＮＡ鋳型からのインビトロ転写によって入手できる。特定例は、たとえば米国特許第５，８１４，４８２号および同第６，０１５，６８６号、ならびに国際公開公報第ＷＯ９７／３８０８７号、同第ＷＯ９９／１８２２６号および同第ＷＯ０２／２６２０９号に述べられている、ｐＳＩＮＣＰなどのシンドビスウイルスに基づくプラスミド（ｐＳＩＮ）を含む。そのようなベクターの構築は、一般に、米国特許第５，８１４，４８２号および同第６，０１５，６８６号に述べられている。
【００６８】
ベクター構築物の他の例は、ＲＮＡベクター構築物（（たとえばアルファウイルスベクター構築物）等を含む。ここで使用する、「ＲＮＡベクター構築物」、「ＲＮＡベクターレプリコン」および「レプリコン」は、インビボで、典型的には標的細胞内で、それ自身の増幅または自己複製を指令することができるＲＮＡ分子を指す。ＲＮＡベクター構築物は、細胞へのＤＮＡの導入および転写が起こる核内への輸送を必要とせずに、直接使用される。宿主細胞の細胞質への直接送達のためにＲＮＡベクターを使用することにより、異種核酸配列の自律複製と翻訳が効率的に起こる。
【００６９】
Ｂ．一般的方法
上述したように、本発明のナノ粒子組成物は、１またはそれ以上の生分解性ポリマー、１またはそれ以上の界面活性剤、１またはそれ以上の凍結保護剤、１またはそれ以上の抗原、および場合により１またはそれ以上の補助成分、たとえば、中でも特に、１またはそれ以上の免疫アジュバントを含む。
【００７０】
１．ナノ粒子組成物
ここで述べる免疫原性ナノ粒子組成物を形成するために有用なポリマーは、天然および合成の、ホモポリマー、コポリマーおよびポリマー混合物を含む。そのようなポリマーは、たとえば以下のものから誘導され得る：ポリヒドロキシ酪酸（ポリヒドロキシブチレートとしても知られる）；ポリヒドロキシ吉草酸（ポリヒドロキシバレレートとしても知られる）；ポリグリコール酸（ＰＧＡ）（ポリグリコリドとしても知られる）；ポリ乳酸（ＰＬＡ）（ポリラクチドとしても知られる）；ポリジオキサノン；ポリカプロラクトン；ポリオルトエステル；ポリシアノアクリレート、ポリ無水物；およびそれらの組合せ。ポリ（Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（どちらもここではＰＬＡと称する）、ポリ（ヒドロキシブチレート）などのポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ここでは「ＰＬＧ」と称する）などのラクチドとグリコリドのコポリマー、またはＤ，Ｌ−ラクチドとカプロラクトンのコポリマーがより典型的である。
【００７１】
上記ポリマーは様々な分子量で入手可能であり、所与の用途のための適切な分子量は当業者によって容易に決定される。そこで、たとえばＰＬＡについての適切な分子量は、約２，０００−５，０００であり得る。ＰＬＧについての適切な分子量は、約５，０００−約２００，０００の範囲であり得る。
【００７２】
コポリマーを使用する場合、様々なモノマー比のコポリマーが使用可能であり得る。たとえばナノ粒子を形成するためにＰＬＧを使用する場合、様々なラクチド：グリコリドのモル比がここで使用でき、その比率は、一部には同時投与される吸着および／または封入種および所望分解速度に依存するが、主として選択の問題である。たとえば５０％Ｄ，Ｌ−ラクチドと５０％グリコリドを含む５０：５０ＰＬＧポリマーはより速やかな吸収性コポリマーを提供し、一方７５：２５ＰＬＧはより緩やかに分解し、８５：１５および９０：１０は、ラクチド成分の上昇により、さらに一層緩やかに分解する。多様なラクチド：グリコリド比を有するナノ粒子の混合物も、所望放出速度を達成するためにここで使用され得る。本発明のナノ粒子の分解速度はまた、ポリマーの分子量およびポリマーの結晶度などの因子によっても制御できる。
【００７３】
ＰＬＧコポリマーが使用される場合、それらは典型的には、中でも特に、たとえば２０：８０−２５：７５−４０：６０−４５：５５−５５：４５−６０：４０−７５：２５−８０：２０の範囲にわたるラクチド／グリコリドモル比を有し、およびたとえば５，０００−１０，０００−２０，０００−４０，０００−５０，０００−７０，０００−１００，０００−２００，０００ダルトンの範囲にわたる分子量を有するＰＬＧコポリマーである。
【００７４】
多様なラクチド：グリコリド比と分子量を有するＰＬＧコポリマーは、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ，ＧｅｒｍａｎｙおよびＢｉｒｍｉｎｇｈａｍ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ，ＵＳＡを含む多くの供給源から市販のものを容易に入手し得る。一部の例示的なＰＬＧコポリマーは、（ａ）ＲＧ ５０２、５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および約１２，０００ダルトンの分子量を有するＰＬＧ；（ｂ）ＲＧ ５０３、５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および約３４，０００ダルトンの分子量を有するＰＬＧ；（ｃ）ＲＧ ５０４、５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および約４８，０００ダルトンの分子量を有するＰＬＧ；（ｄ）ＲＧ７５２、７５：２５のラクチド／グリコリドモル比および約２２，０００ダルトンの分子量を有するＰＬＧ；および（ｅ）ＲＧ７５５、７５：２５のラクチド／グリコリドモル比および約６８，０００ダルトンの分子量を有するＰＬＧを含む。ＰＬＧポリマーはまた、Ｔａｂａｔａら（１９８８）（Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．２２：８３７−８５８）に述べられているような当技術分野で周知の手法を使用して乳酸成分の簡単な重縮合によって合成できる。
【００７５】
本発明に従ったナノ粒子は、任意の適切な方法を用いて製造される。
【００７６】
たとえば溶媒置換法とも称されるナノ沈殿法は、本発明における使用のためのナノ粒子を形成するための適切な方法の一例である。たとえば“Ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｓｐｅｒｓｉｂｌｅ ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｓｙｓｔｅｍｓ ｏｆ ａ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｒｍ ｏｆ ｎａｎｏｃａｐｓｕｌｅｓ，”と題する欧州特許第０２７４９６１Ｂ１号、Ｄｅｖｉｓｓａｇｕｅｔら、同じ表題による米国特許第５，０４９，３２２号、およびＦｅｓｓｉら、米国特許第５，１１８，５２８号、“Ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｓｐｅｒｓｉｂｌｅ ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｓｙｓｔｅｍｓ ｏｆ ａ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｒｍ ｏｆ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ”参照。
【００７７】
本発明に適合させるときは、ポリマーを有機溶媒（たとえばアセトン、エタノール等のような親水性有機溶媒）に溶解する。生じた有機溶液を、有機溶媒と混和性であるがポリマーに対しては非溶媒であるさらなる溶媒、典型的には水溶液と組み合わせる。水溶液は、たとえば脱イオン水、生理食塩水、たとえばリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）またはクエン酸ナトリウム／エチレンジアミン四酢酸（クエン酸ナトリウム／ＥＤＴＡ）緩衝液などの、緩衝液であり得る。後者の溶液は、（ａ）通常の生理的液体と基本的に同じ張度、すなわち浸透圧を提供し、および（ｂ）通常の生理的条件と適合性のｐＨを維持することができる。特定実施形態では、本発明の組成物の張度および／またはｐＨ特徴はナノ粒子形成後に調整できる。
【００７８】
有機溶液と水溶液を、その後、適切な相対容積で（たとえば１：１０−１：５−１：２−１：１−２：１−５：１−１０：１、典型的には１：２−２：１、より典型的には約１：１）組み合わせる。たとえば有機溶液を、攪拌しながら非溶媒に注ぐまたは注入し得るか、またはその逆であり得る。ポリマーが有機溶媒には可溶性であるが、有機溶媒と非溶媒の混和性混合物には有意により難溶である系を選択することにより、ナノ粒子の懸濁物が実際上即座に形成され得る。その後、たとえば周囲条件下での蒸発または減圧下または高温下での蒸発によって、有機溶媒を懸濁物から除去できる。
【００７９】
有機溶媒、水溶液またはその両方が、所望に応じて様々な他の種も同時に含み得る。たとえば一部の実施形態では、１またはそれ以上の追加種をナノ粒子に封入することあるいは１またはそれ以上の追加種を粒子−液体界面で提供することが望ましい。そのような追加種は、たとえば抗原、界面活性剤、凍結保護剤、免疫アジュバント等を含み得る。これらの種は、典型的には（ａ）油溶性または油分散性形態であれば、有機溶液に、または（ｂ）水溶性または水分散性形態であれば、水溶液に添加される。
【００８０】
一部の実施形態では、１またはそれ以上の追加種は、ナノ粒子形成の後に（および典型的には有機溶媒の除去後、ならびに、実施される場合は、洗浄工程後に）添加される。たとえば張度またはｐＨを調整するための物質、抗原、界面活性剤、凍結保護剤、免疫アジュバント等が添加できる。しばしば、これらの追加種は水溶液または分散としてナノ粒子に添加される。これらの種は、たとえば溶液中に存在し得るか、または、たとえばナノ粒子表面に吸着されて（たとえば様々な抗原がナノ粒子表面に吸着される、下記の実施例参照）、粒子−溶液界面に蓄積し得る。吸着される種の含量は、標準的手法を用いて測定できる。
【００８１】
ひとたび所望組成物の懸濁物が提供されれば、そのまま使用し得るかまたはさらなる使用のために凍結乾燥し得る。
【００８２】
本発明に従った組成物は、ナノ粒子形成後に滅菌ろ過することができる。たとえば組成物は、ナノ粒子形成後のいずれの時点でも、たとえばナノ粒子形成後であるが免疫学的種（たとえば免疫アジュバントおよび／または抗原）の吸着前に、免疫学的種の吸着後で凍結乾燥の前等に滅菌ろ過することができる。
【００８３】
一般に、組成物内のミクロ粒子は、凍結乾燥の前および後に、２５０ｎｍ未満、たとえば２５０ｎｍ−２００ｎｍ−１５０ｎｍ−１００ｎｍまたはそれ以下の範囲にわたるＺ平均および／またはＤ（ｖ，０．５）サイズを有する。
【００８４】
一例としてＰＬＧを使用して形成されるナノ粒子を考慮すると、ミクロ粒子形成手法（たとえば前記の発明の背景の章で引用した参考文献およびＳｉｎｇｈ，Ｍ．ら（２００４）（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９３（２）：２７３−２８２）に述べられているもの）と比較して、本発明の手法にはいくつかの利点がある。最初の利点は製造の容易さである。ナノ粒子法は単一工程手法であり、高せん断均質化を必要とせず、磁気攪拌しか必要としない。加えて、ミクロ粒子製造工程全体が典型的には無菌であるが、ナノ粒子は、それらの小さなサイズの故に、粒子製造後に滅菌ろ過することができ、生産必要条件にはより厳密さが求められない。
【００８５】
さらに２つの方法に関して使用される有機溶媒の種類が異なる。ナノ粒子法はアセトンを使用して実施できるが、ミクロ粒子法は、典型的には溶媒としてジクロロメタン（ＤＣＭ）の使用を含む。米国食品医薬品局（ＦＤＡ）はＤＣＭをクラス２溶媒として分類しており、医薬品中に存在し得る許容される残留溶媒の量に制限を定めているが、アセトンは、ＦＤＡが許容量により高い制限を定めているクラス３溶媒である。
【００８６】
２．界面活性剤
上述したように、本発明における使用のための界面活性剤は、洗浄剤、分散剤、懸濁化剤、乳化安定剤等を含む。
【００８７】
界面活性剤は、陽イオン、陰イオンまたは非イオン界面活性剤を含む。陽イオン界面活性剤は、中でも特に、たとえば臭化セチルトリメチルアンモニウムまたは「ＣＴＡＢ」（たとえばセトリミド）、塩化ベンザルコニウム、ＤＤＡ（臭化ジメチルジオクタデシルアンモニウム）、およびＤＯＴＡＰ（ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン）を含む。陰イオン界面活性剤は、中でも特に、たとえばＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）、ＳＬＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）、ＤＳＳ（ジスルホスクシネート）、および硫酸化脂肪アルコールを含む。非イオン界面活性剤は、中でも特に、たとえばＰＶＡ（ポリビニルアルコール）、ポビドン（ポリビニルピロリドンまたはＰＶＰとしても知られる）、ソルビタンエステル、ポリソルベート、ポリオキシエチル化グリコールモノエステル、ポリオキシエチル化アルキルフェノール、およびポロキサマーを含む。
【００８８】
本発明に従った組成物は、極めて多様な量の界面活性剤を含み得る。一般に、界面活性剤の量は、許容されるナノ粒子懸濁（および凍結乾燥後の再懸濁）を促進するために有効である。界面活性剤対生分解性ポリマーの重量比は、数ある比率の中でも特に、たとえば０．００１：１未満から０．５：１またはそれ以上まで、たとえば０．００５：１−０．１：１の範囲にわたり得る。一般にイオン性界面活性剤は非イオン界面活性剤よりも低い比率で使用される。
【００８９】
３．凍結保護剤
上述したように、凍結保護剤は、本発明に従った凍結乾燥組成物を再懸濁したときに実質的なナノ粒子凝集が起こるのを防ぐために添加し得る。
【００９０】
一般的な凍結保護剤は、（ａ）中でも特にグルタミン酸およびアルギニンなどのアミノ酸；（ｂ）エチレングリコールなどのジオール、１，２−プロピレングリコールおよび１，３−プロピレングリコールなどのプロパンジオール、および、中でも特に２，３−ブチレングリコールなどのブタンジオール、中でも特にグリセロールなどのトリオール、ならびに他のより高いポリオールを含む、ポリオール；および（ｃ）たとえば（ｉ）単糖（たとえば、中でも特にグルコース、ガラクトースおよびフルクトース）、（ｉｉ）二糖（たとえば、中でも特にスクロース、ラクトース、トレハロース、マルトース、ゲンチオビオースおよびセロビオースなど）、三糖（たとえば、中でも特にラフィノース）、四糖（たとえば、中でも特にスタキオース）、および五糖（ベルバスコースなど）、ならびに数多くの他のより高い多糖を含む、多糖、および（ｉｉｉ）中でも特にキシリトール、ソルビトールおよびマンニトールなどのアルジトール（これに関して、アルジトールは炭水化物であると同時に、より高いポリオールである）、を含む炭水化物を包含する。
【００９１】
本発明に従った組成物は、本発明の凍結乾燥組成物を再懸濁したときに実質的なナノ粒子凝集が起こるのを防ぐために有効な量に依存して、極めて多様な量の凍結保護剤を含有し得る。界面活性剤対生分解性ポリマーの重量比は、中でも特に、たとえば０．０１：１未満から０．５：１またはそれ以上まで、たとえば０．０５：１−０．１：１の範囲にわたり得る。
【００９２】
４．抗原
本発明の組成物は、各々が有効量（たとえば本発明に従った治療、予防または診断方法における使用のために有効な量）である１またはそれ以上の抗原を含む。たとえば本発明の組成物は、以下に列挙する病原体のいずれかによって引き起こされる感染を治療するまたは予防するために使用し得る。
【００９３】
本発明に関する使用のための抗原は、以下に示す抗原、あるいは以下に示す病原体の１またはそれ以上に由来する抗原の１またはそれ以上を含むが、これらに限定されない。
【００９４】
Ａ．細菌抗原
本発明における使用に適する細菌抗原は、細菌から単離され得る、精製され得るまたは細菌に由来し得るタンパク質、多糖、リポ多糖および外膜小胞を含む。加えて、細菌抗原は細菌溶解産物および不活性化細菌製剤を含む。細菌抗原は組換え発現によって生産できる。細菌抗原は、好ましくはその生活環の少なくとも１つの段階の間に細菌の表面に曝露されるエピトープを含む。細菌抗原は、好ましくは多数の血清型にわたって保存されている。細菌抗原は、以下に示す細菌の１またはそれ以上に由来する抗原ならびに以下で特定する特異抗原の例を包含する。
【００９５】
髄膜炎菌：髄膜炎菌抗原は、Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙおよび／またはＢなどの髄膜炎菌血清群から精製されるまたはそれらに由来するタンパク質（国際公開公報第ＷＯ９９／２４５７８号；同第ＷＯ９９／３６５４４号；同第ＷＯ９９／５７２８０号；同第ＷＯ００／２２４３０号；Ｔｅｔｔｅｌｉｎら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７：１８０９−１８１５；国際公開公報第ＷＯ９６／２９４１２号；およびＰｉｚｚａら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７：１８１６−１８２０の中で特定されるものなど）、糖（多糖、オリゴ糖またはリポ多糖を含む）、または外膜小胞（国際公開公報第ＷＯ０１／５２８８５号；Ｂｊｕｎｅら（１９９１）Ｌａｎｃｅｔ ３３８（８７７５）：１０９３−１０９６；Ｆｕｓｋａｓａｗａら（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ １７：２９５１−２９５８；およびＲｏｓｅｎｑｉｓｔら（１９９８）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔｒａｎｄ ９２：３２３−３３３）を含む。髄膜炎菌タンパク質抗原は、接着タンパク質、自己輸送体、毒素、鉄獲得タンパク質、および膜関連タンパク質（好ましくは内在性外膜タンパク質）から選択できる。
【００９６】
肺炎連鎖球菌：肺炎連鎖球菌抗原は、肺炎連鎖球菌抗原からの糖（多糖またはオリゴ糖を含む）および／またはタンパク質を含む。糖抗原は、血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆから選択できる。タンパク質抗原は、国際公開公報第ＷＯ９８／１８９３１号；同第ＷＯ９８／１８９３０号；米国特許第６，６９９，７０３号；同第６，８００，７４４号；国際公開公報第ＷＯ９７／４３３０３号；および同第ＷＯ９７／３７０２６号において特定されるタンパク質から選択できる。肺炎連鎖球菌タンパク質は、ポリヒスチジントリアドファミリー（ＰｈｔＸ）、コリン結合タンパク質ファミリー（ＣｂｐＸ）、トランケート型ＣｂｐＸ、ＬｙｔＸファミリー、トランケート型ＬｙｔＸ、トランケート型ＣｂｐＸ−トランケート型ＬｙｔＸキメラタンパク質、ニューモリシン（Ｐｌｙ）、ＰｓｐＡ、ＰｓａＡ、Ｓｐ１２８、Ｓｐ１０１、Ｓｐ１３０、Ｓｐ１２５またはＳｐ１３３から選択できる。
【００９７】
化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）：Ａ群連鎖球菌抗原は、国際公開公報第ＷＯ０２／３４７７１号および同第ＷＯ２００５／０３２５８２号（ＧＡＳ４０を含む）において特定されるタンパク質、ＧＡＳ Ｍタンパク質のフラグメントの融合物（国際公開公報第ＷＯ０２／０９４８５１号；およびＤａｌｅ（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ １７：１９３−２００、およびＤａｌｅ（１９９６）Ｖａｃｃｉｎｅ １４（１０）：９４４−９４８に述べられているものを含む）、フィブロネクチン結合タンパク質（Ｓｆｂ１）、連鎖球菌ヘム関連タンパク質（Ｓｈｐ）、およびストレプトリシンＳ（ＳａｇＡ）を含む。
【００９８】
Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ：モラクセラ属抗原は、国際公開公報第ＷＯ０２／１８５９５号；および同第ＷＯ９９／５８５６２号において特定される抗原、外膜タンパク質抗原（ＨＭＷ−ＯＭＰ）、Ｃ抗原および／またはＬＰＳを含む。
【００９９】
百日咳菌：百日咳抗原は、場合によりペルタクチンおよび／またはアグルチノーゲン２および３抗原と組み合わせた、百日咳ホロ毒素（ＰＴ）および百日咳菌からの線維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）を含む。
【０１００】
黄色ブドウ球菌：黄色ブドウ球菌抗原は、ＳｔａｐｈＶＡＸ（商標）などの、場合により非毒性組換え緑膿菌体外毒素Ａに複合された黄色ブドウ球菌５型および８型莢膜多糖、および表面タンパク質に由来する抗原、インベイシン（ロイコシジン、キナーゼ、ヒアルロニダーゼ）、食細胞貪食を阻害する表面因子（莢膜、プロテインＡ）、カロチノイド、カタラーゼ産生、プロテインＡ、コアグラーゼ、凝固因子、および真核細胞膜を溶解する膜傷害毒素（場合により無毒化された）（溶血素、ロイコトキシン、ロイコシジン）を含む。
【０１０１】
表皮ブドウ球菌：表皮ブドウ球菌抗原は、粘液関連抗原（ＳＡＡ）を含む。
【０１０２】
破傷風菌（破傷風）：破傷風抗原は、好ましくは本発明の組成物と共に／本発明の組成物と複合した輸送タンパク質として使用される、破傷風トキソイド（ＴＴ）を含む。
【０１０３】
ジフテリア菌（ジフテリア）：ジフテリア抗原は、ＣＲＭ１９７などの、好ましくは無毒化された、ジフテリア毒素を含む。加えて、ＡＤＰリボシル化を調節するまたは阻害するまたはＡＤＰリボシル化に関連する抗原が、本発明の組成物との組合せ／同時投与／複合のために考慮される。ジフテリアトキソイドは輸送タンパク質として使用し得る。
【０１０４】
インフルエンザ菌Ｂ型（Ｈｉｂ）：Ｈｉｂ抗原は、Ｈｉｂ糖抗原を含む。
【０１０５】
緑膿菌：シュードモナス属抗原は、内毒素Ａ、Ｗｚｚタンパク質、緑膿菌ＬＰＳ、より詳細にはＰＡＯ１（Ｏ５血清型）から単離されるＬＰＳ、および外膜タンパク質Ｆ（ＯｐｒＦ）を含む外膜タンパク質（Ｐｒｉｃｅら（２００１）Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．６９（５）：３５１０−３５１５）を含む。
【０１０６】
Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ：細菌抗原は、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａに由来し得る。
【０１０７】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群連鎖球菌）：Ｂ群連鎖球菌抗原は、国際公開公報第０２／３４７７１号；同第０３／０９３３０６号；同第０４／０４１１５７号；および同第２００５／００２６１９号において特定されるもののような、タンパク質または糖抗原（タンパク質ＧＢＳ５９、ＧＢＳ６７、ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ３２２を含み、および血清型Ｉａ、Ｉｂ、Ｉａ／ｃ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩおよびＶＩＩＩに由来する糖抗原を含む）を含む。
【０１０８】
淋菌：淋病抗原は、ＰｏｒＢなどのＰｏｒ（またはポーリン）タンパク質（たとえばＺｈｕら（２００４）Ｖａｃｃｉｎｅ ２２：６６０−６６９参照）、ＴｂｐＡおよびＴｂｐＢなどのトランスフェリン結合タンパク質（たとえばＰｒｉｃｅら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７１（１）：２７７−２８３参照）、不透過性タンパク質（ｏｐａｃｉｔｙ ｐｒｏｔｅｉｎ）（Ｏｐａなど）、還元調節性タンパク質（Ｒｍｐ）、および外膜小胞（ＯＭＶ）製剤（たとえばＰｌａｎｔｅら（２０００）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８２：８４８−８５５；国際公開公報第ＷＯ９９／２４５７８号；同第ＷＯ９９／３６５４４号；同第ＷＯ９９／５７２８０号；および同第ＷＯ０２／０７９２４３号参照）を含む。
【０１０９】
トラコーマクラミジア：トラコーマクラミジア抗原は、血清型Ａ、Ｂ、ＢａおよびＣ（トラコーマの病原因子、失明の原因）、血清型Ｌ１、Ｌ２およびＬ３（性病性リンパ肉芽腫に関連する）、および血清型Ｄ−Ｋに由来する抗原を含む。トラコーマクラミジア抗原はまた、ＰｅｐＡ（ＣＴ０４５）、ＬｃｒＥ（ＣＴ０８９）、ＡｒｔＪ（ＣＴ３８１）、ＤｎａＫ（ＣＴ３９６）、ＣＴ３９８、ＯｍｐＨ様（ＣＴ２４２）、Ｌ７／Ｌ１２（ＣＴ３１６）、ＯｍｃＡ（ＣＴ４４４）、ＡｔｏｓＳ（ＣＴ４６７）、ＣＴ５４７、Ｅｎｏ（ＣＴ５８７）、ＨｒｔＡ（ＣＴ８２３）、ＭｕｒＧ（ＣＴ７６１）、ＣＴ３９６およびＣＴ７６１を含む、国際公開公報第ＷＯ００／３７４９４号；同第ＷＯ０３／０４９７６２号；同第ＷＯ０３／０６８８１１号；および同第ＷＯ０５／００２６１９号において特定される抗原、およびこれらの抗原の特定の組合せを含む。
【０１１０】
梅毒トレポネーマ（梅毒）：梅毒抗原はＴｍｐＡ抗原を含む。
【０１１１】
軟性下疳菌（軟性下疳を引き起こす）：デュクレー抗原は、外膜タンパク質（ＤｓｒＡ）を含む。
【０１１２】
Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ：抗原は、三糖反復単位および米国特許第６，７５６，３６１号において提供される他のエンテロコッカス属由来の抗原を含む。
【０１１３】
ピロリ菌：ピロリ菌抗原は、Ｃａｇ、Ｖａｃ、Ｎａｐ、ＨｏｐＸ、ＨｏｐＹおよびウレアーゼ抗原を含む。
【０１１４】
腐性ブドウ球菌：抗原は、腐性ブドウ球菌抗原の１６０ｋＤａ赤血球凝集素を含む。
【０１１５】
Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ：抗原は、ＬＰＳ（Ｘｕら（２００２）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７０（８）：４４１４−４４２３）を含む。
【０１１６】
大腸菌：大腸菌抗原は、腸管毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）、腸管凝集性大腸菌（ＥＡｇｇＥＣ）、分散接着性大腸菌（ＤＡＥＣ）、腸管病原性大腸菌（ＥＰＥＣ）または腸管出血性大腸菌（ＥＨＥＣ）に由来し得る。
【０１１７】
炭疽菌（炭疽）：炭疽菌抗原は、場合により無毒化され、Ａ成分（どちらも、防御抗原（ＰＡ）として知られる共通のＢ成分を共有し得る、致死因子（ＬＦ）および浮腫因子（ＥＦ））から選択され得る。ある実施形態では、本発明の組成物は炭疽抗原を含まない。
【０１１８】
ペスト菌（ペスト）：ペスト抗原は、Ｆ１莢膜抗原（（Ｇｏｓｆｅｌｄら（２００３）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７１（１））：３７４−３８３）、ＬＰＳ（Ｆｉｅｌｄｓら（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６７（１０）：５３９５−５４０８）、ペスト菌Ｖ抗原（Ｈｉｌｌら（１９９７）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６５（１１）：４４７６−４４８２）を含む。
【０１１９】
ヒト結核菌：結核抗原は、リポタンパク質、ＬＰＳ、ＢＣＧ抗原、場合により陽イオン性脂質小胞中に製剤された抗原８５Ｂ（Ａｇ８５Ｂ）とＥＳＡＴ−６の融合タンパク質（Ｏｌｓｅｎら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７２（１０）：６１４８−６１５０）、ヒト結核菌（Ｍｔｂ）イソクエン酸デヒドロゲナーゼ関連抗原（Ｂａｎｅｒｊｅｅら（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２６５２−１２６５７）、およびＭＰＴ５１抗原（Ｓｕｚｕｋｉら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７２（７）：３８２９−３８３７）を含む。
【０１２０】
リケッチア：抗原は、外膜タンパク質Ａおよび／またはＢ（ＯｍｐＢ）（Ｃｈａｏら（２００４）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１７０２（２）：１４５−１５２）を含む外膜タンパク質、ＬＰＳ、および表面タンパク質抗原（ＳＰＡ）（Ｃａｒｌら（１９８９）Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．２ Ｓｕｐｐｌ：８１−９１）を含む。
【０１２１】
リステリア菌：細菌抗原はリステリア菌に由来し得る。
【０１２２】
Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ：抗原は、ＣＰｎ０３２４、Ｃｐｎ０３０１、Ｃｐｎ０４８２、Ｃｐｎ０５０３、Ｃｐｎ０５２５、Ｃｐｎ０５５８、Ｃｐｎ０５８４、Ｃｐｎ０８００、Ｃｐｎ０９７９、Ｃｐｎ０４９８、Ｃｐｎ０３００、Ｃｐｎ００４２、Ｃｐｎ００１３、Ｃｐｎ４５０、Ｃｐｎ０６６１、Ｃｐｎ０５５７、Ｃｐｎ０９０４、Ｃｌｐｎ０７９５、Ｃｐｎ０１８６およびＣｐｎ０６０４を含む、国際公開公報第ＷＯ０２／０２６０６号および同第ＷＯ０５／０８４３０６号において特定されるもの、およびこれらの抗原の特定の組合せを含む。
【０１２３】
コレラ菌：抗原は、プロテイナーゼ抗原、ＬＰＳ、特にコレラ菌ＩＩのリポ多糖、Ｏ１ Ｉｎａｂａ Ｏ特異的多糖、コレラ菌Ｏ１３９、ＩＥＭ１０８ワクチンの抗原（Ｌｉａｎｇら（２００３）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７１（１０）：５４９８−５５０４）、および閉鎖帯毒素（Ｚｏｔ）を含む。
【０１２４】
腸チフス菌（腸チフス）：抗原は、莢膜多糖、好ましくは複合体（Ｖｉ、すなわちｖａｘ−ＴｙＶｉ）を含む。
【０１２５】
Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ（ライム病）：抗原は、リポタンパク質（ＯｓｐＡ、ＯｓｐＢ、ＯｓｐＣおよびＯｓｐＤなど）、ＯｓｐＥ関連タンパク質（Ｅｒｐｓ）などの他の表面タンパク質、デコリン結合タンパク質（ＤｂｐＡなど）、およびＰ３９およびＰ１３に関連する抗原などの抗原多様性ＶＩタンパク質（内在性膜タンパク質、Ｎｏｐｐａら（２００１）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６９（５）：３３２３−３３３４）、ＶｌｓＥ抗原性変異タンパク質（Ｌａｗｒｅｎｚら（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３７（１２）：３９９７−４００４）を含む。
【０１２６】
Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ：抗原は、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ外膜タンパク質（ＯＭＰ）を含む。
【０１２７】
Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ：抗原は、ＯＭＰ Ａを含むＯＭＰ、および場合により破傷風トキソイドに複合された多糖を含む。
【０１２８】
他の細菌抗原は、上記のいずれかの莢膜抗原、多糖抗原またはタンパク質抗原を含む。さらなる細菌抗原はまた、外膜小胞（ＯＭＶ）製剤を含む。加えて、抗原は、上記細菌のいずれかの生、弱毒化および／または精製形態を含む。抗原は、グラム陰性またはグラム陽性菌に由来し得る。抗原は、好気性または嫌気性細菌に由来し得る。
【０１２９】
加えて、上記細菌由来の糖（多糖、ＬＰＳ、ＬＯＳまたはオリゴ糖）のいずれもが、輸送タンパク質（たとえばＣＲＭ１９７）などのもう１つ別の物質または抗原に複合することができる。そのような複合は、米国特許第５，３６０，８９７号；およびＲｏｙら（１９８４）Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．６２（５）：２７０−２７５において提供されるような、糖鎖上のカルボニル部分の、タンパク質上のアミノ基への還元的アミノ化によって実施される直接複合であり得る。もう１つの実施形態では、糖は、リンカーを通して、たとえばスクシンアミドで、またはＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，第１版、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ （１９９６）およびＷｏｎｇ，Ｓ．Ｓ．，ＣＲＣ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ，第１版、ＣＲＣ−Ｐｒｅｓｓ（１９９１）において提供される他の結合を通して複合され得る。
【０１３０】
Ｂ．ウイルス抗原
本発明における使用に適するウイルス抗原は、不活性化（または死滅）ウイルス、弱毒化ウイルス、スプリットウイルス製剤、精製サブユニット製剤、ウイルスから単離、精製または誘導され得るウイルスタンパク質、およびウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む。ウイルス抗原は、細胞培養または他の基質で増殖させたウイルスまたは組換え発現させたウイルスに由来し得る。ウイルス抗原は、好ましくはその生活環の少なくとも１つの段階の間にウイルスの表面に曝露されるエピトープを含む。ウイルス抗原は、好ましくは多数の血清型または単離物にわたって保存されている。ウイルス抗原は、以下に示すウイルスの１またはそれ以上に由来する抗原ならびに以下で特定する特異抗原の例を含む。
【０１３１】
オルトミクソウイルス：ウイルス抗原は、インフルエンザＡ、ＢおよびＣ型などのオルトミクソウイルスに由来し得る。オルトミクソウイルス抗原は、赤血球凝集素（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、ヌクレオタンパク質（ＮＰ）、基質タンパク質（Ｍ１）、膜タンパク質（Ｍ２）、１またはそれ以上の転写酵素成分（ＰＢ１、ＰＢ２およびＰＡ）を含む、ウイルスタンパク質の１またはそれ以上から選択され得る。好ましい抗原はＨＡおよびＮＡを含む。
【０１３２】
インフルエンザ抗原は、汎流行間期（毎年）のインフルエンザ菌株に由来し得る。インフルエンザ抗原は、汎流行性発生を引き起こす潜在的可能性を有する菌株（すなわち現在流行中である菌株における赤血球凝集素と比較して新しい赤血球凝集素を有するインフルエンザ菌株、または鳥類において病原性であり、ヒト母集団において水平伝播する潜在的可能性を有するインフルエンザ菌株、またはヒトに対して病原性であるインフルエンザ菌株）に由来し得る。インフルエンザ抗原は、卵または細胞培養において増殖するウイルスに由来し得る。
【０１３３】
パラミクソウイルス科ウイルス：ウイルス抗原は、肺炎ウイルス属（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス属（ＰＩＶ）および麻疹ウイルス属（麻疹）などのパラミクソウイルス科ウイルスに由来し得る。
【０１３４】
肺炎ウイルス：ウイルス抗原は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ウシＲＳウイルス、マウス肺炎ウイルス、およびシチメンチョウ鼻気管炎ウイルスなどの肺炎ウイルスに由来し得る。好ましくは、肺炎ウイルスはＲＳＶである。肺炎ウイルス抗原は、以下のタンパク質：表面タンパク質融合物（Ｆ）、糖タンパク質（Ｇ）および低分子疎水性タンパク質（ＳＨ）、基質タンパク質ＭおよびＭ２、ヌクレオキャプシドタンパク質Ｎ、ＰおよびＬ、および非構造タンパク質ＮＳ１およびＮＳ２の１またはそれ以上から選択され得る。好ましい肺炎ウイルス抗原は、Ｆ、ＧおよびＭを含む。たとえばＪｏｈｎｓｔｏｎｅら（２００４）Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８５（Ｐｔ１１）：３２２９−３２３８参照。肺炎ウイルス抗原はまた、キメラウイルスにおいて製剤し得るまたはキメラウイルスに由来し得る。たとえばキメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶとＰＩＶとの両方の成分を含み得る。
【０１３５】
パラミクソウイルス：ウイルス抗原は、パラインフルエンザウイルス１−４型（ＰＩＶ）、流行性耳下腺炎ウイルス、センダイウイルス、シミアンウイルス５、ウシパラインフルエンザウイルスおよびニューカッスル病ウイルス等のパラミクソウイルスに由来し得る。好ましくは、パラミクソウイルスはＰＩＶまたは流行性耳下腺炎ウイルスである。パラミクソウイルス抗原は、以下のタンパク質：赤血球凝集素ノイラミニダーゼ（ＨＮ）、融合タンパク質Ｆ１およびＦ２、ヌクレオタンパク質（ＮＰ）、リンタンパク質（Ｐ）、大型タンパク質（Ｌ）および基質タンパク質（Ｍ）の１またはそれ以上から選択され得る。好ましいパラミクソウイルスタンパク質は、ＨＮ、Ｆ１およびＦ２を含む。パラミクソウイルス抗原はまた、キメラウイルスにおいて製剤し得るまたはキメラウイルスに由来し得る。たとえばキメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶとＰＩＶとの両方の成分を含み得る。市販されている流行性耳下腺炎ワクチンは、一価形態のまたは麻疹および風疹ワクチンと組み合わせた（ＭＭＲ）、生弱毒化流行性耳下腺ウイルスを含む。
【０１３６】
麻疹ウイルス：ウイルス抗原は、麻疹などの麻疹ウイルス属に由来し得る。麻疹ウイルス抗原は、以下のタンパク質：赤血球凝集素（Ｈ）、糖タンパク質（Ｇ）、融合因子（Ｆ）、大型タンパク質（Ｌ）、ヌクレオタンパク質（ＮＰ）、ポリメラーゼリンタンパク質（Ｐ）、および基質タンパク質（Ｍ）の１またはそれ以上から選択され得る。市販されている麻疹ワクチンは、典型的には流行性耳下腺炎および風疹ワクチンと組み合わせた（ＭＭＲ）、生弱毒化麻疹ウイルスを含む。
【０１３７】
ピコルナウイルス：ウイルス抗原は、エンテロウイルス、ライノウイルス、ヘパルナウイルス、カルジオウイルスおよびアフトウイルスなどのピコルナウイルス属に由来し得る。ポリオウイルスなどのエンテロウイルスに由来する抗原が好ましい。
【０１３８】
エンテロウイルス：ウイルス抗原は、ポリオウイルス１、２または３型、コクサッキーＡウイルス１−２２および２４型、コクサッキーＢウイルス１−６型、エコーウイルス（ＥＣＨＯ）１−９、１１−２７および２９−３４型、ならびにエンテロウイルス６８−７１型などのエンテロウイルスに由来し得る。好ましくは、エンテロウイルスはポリオウイルスである。エンテロウイルス抗原は、好ましくはキャプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３およびＶＰ４の１またはそれ以上から選択される。市販されているポリオワクチンは、不活性化ポリオワクチン（ＩＰＶ）および経口ポリオウイルスワクチン（ＯＰＶ）を含む。
【０１３９】
ヘパルナウイルス：ウイルス抗原は、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）などのヘパルナウイルスに由来し得る。市販されているＨＡＶワクチンは、不活性化ＨＡＶワクチンを含む。
【０１４０】
トガウイルス：ウイルス抗原は、ルビウイルス、アルファウイルスまたはアルテリウイルスなどのトガウイルスに由来し得る。風疹ウイルスなどのルビウイルスに由来する抗原が好ましい。トガウイルス抗原は、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｃ、ＮＳＰ−１、ＮＳＰＯ−２、ＮＳＰ−３またはＮＳＰ−４から選択され得る。トガウイルス抗原は、好ましくはＥ１、Ｅ２またはＥ３から選択される。市販されている風疹ワクチンは、典型的には流行性耳下腺炎および麻疹ワクチンと組み合わせた（ＭＭＲ）、生低温適合性ウイルスを含む。
【０１４１】
フラビウイルス：ウイルス抗原は、ダニ媒介脳炎（ＴＢＥ）、デング熱（１、２、３または４型）、黄熱病、日本脳炎、西ナイル脳炎、セントルイス脳炎、ロシア春夏脳炎、ポーワッサン脳炎などのフラビウイルスに由来し得る。フラビウイルス抗原は、ＰｒＭ、Ｍ、Ｃ、Ｅ、ＮＳ−１、ＮＳ−２ａ、ＮＳ２ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ４ｂおよびＮＳ５から選択され得る。フラビウイルス抗原は、好ましくはＰｒＭ、ＭおよびＥから選択される。市販されているＴＢＥワクチンは、不活性化ウイルスワクチンを含む。
【０１４２】
ペスチウイルス：ウイルス抗原は、ウシのウイルス性下痢（ＢＶＤＶ）、古典的豚コレラ（ＣＳＦＶ）またはボーダー病（ＢＤＶ）などのペスチウイルスに由来し得る。
【０１４３】
ヘパドナウイルス：ウイルス抗原は、Ｂ型肝炎ウイルスなどのヘパドナウイルスに由来し得る。ヘパドナウイルス抗原は、表面抗原（Ｌ、ＭおよびＳ）、コア抗原（ＨＢｃ、ＨＢｅ）から選択され得る。市販されているＨＢＶワクチンは、表面抗原Ｓタンパク質を含有するサブユニットワクチンを含む。
【０１４４】
Ｃ型肝炎ウイルス：ウイルス抗原は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に由来し得る。ＨＣＶ抗原は、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ１／Ｅ２、ＮＳ３４５ポリタンパク質、ＮＳ３４５コアポリタンパク質、コア、および／または非構造領域からのペプチドの１またはそれ以上から選択され得る（Ｈｏｕｇｈｔｏｎら（１９９１）Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ １４：３８１−３８８）。
【０１４５】
ラブドウイルス：ウイルス抗原は、リッサウイルス（狂犬病ウイルス）およびベシクロウイルス（ＶＳＶ）などのラブドウイルスに由来し得る。ラブドウイルス抗原は、糖タンパク質（Ｇ）、ヌクレオタンパク質（Ｎ）、大型タンパク質（Ｌ）および非構造タンパク質（ＮＳ）から選択され得る。市販されている狂犬病ウイルスワクチンは、ヒト二倍体細胞または胎仔アカゲザル肺細胞で増殖させた死滅ウイルスを含む。
【０１４６】
カルシウイルス科ウイルス：ウイルス抗原は、ノーウォークウイルス、およびハワイウイルスやスノーマウンテンウイルスなどのノーウォーク様ウイルスのようなカルシウイルス科に由来し得る。
【０１４７】
コロナウイルス：ウイルス抗原は、コロナウイルス、ＳＡＲＳ、ヒト呼吸器コロナウイルス、鳥類伝染性気管支炎（ＩＢＶ）、マウス肝炎ウイルス（ＭＨＶ）およびブタ伝染性胃腸炎ウイルス（ＴＧＥＶ）に由来し得る。コロナウイルス抗原は、スパイク（Ｓ）、エンベロープ（Ｅ）、基質（Ｍ）、ヌクレオキャプシド（Ｎ）タンパク質、および赤血球凝集素エステラーゼ糖タンパク質（ＨＥ）から選択され得る。好ましくは、コロナウイルス抗原はＳＡＲＳウイルスに由来する。ＳＡＲＳウイルス抗原は国際公開公報第ＷＯ０４／９２３６０号に述べられている。
【０１４８】
レトロウイルス：ウイルス抗原は、オンコウイルス、レンチウイルスまたはスプマウイルスなどのレトロウイルスに由来し得る。オンコウイルス抗原は、ＨＴＬＶ−１、ＨＴＬＶ−２またはＨＴＬＶ−５に由来し得る。レンチウイルス抗原は、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２に由来し得る。レトロウイルス抗原は、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、ｔａｘ、ｔａｔ、ｒｅｘ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、ｖｐｕおよびｖｐｒから選択され得る。ＨＩＶ抗原は、ｇａｇ（ｐ２４ｇａｇおよびｐ５５ｇａｇ）、ｅｎｖ（ｇｐ１６０およびｇｐ４１）、ｐｏｌ、ｔａｔ、ｎｅｆ、ｒｅｖ、ｖｐｕ、ミニタンパク質（好ましくはｐ５５ｇａｇおよびｇｐ１４０ｖ欠失型）から選択され得る。ＨＩＶ抗原は、以下の菌株：ＨＩＶＩＩＩｂ、ＨＩＶＳＦ２、ＨＩＶＬＡＶ、ＨＩＶＬＡＩ、ＨＩＶＭＮ、ＨＩＶ−１ＣＭ２３５、ＨＩＶ−１ＵＳ４の１またはそれ以上から選択され得る。
【０１４９】
レオウイルス：ウイルス抗原は、オルトレオウイルス、ロタウイルス、オルビウイルスまたはコルチウイルスなどのレオウイルスに由来し得る。レオウイルス抗原は、構造タンパク質λ１、λ２、λ３、μ１、μ２、σ１、σ２またはσ３、あるいは非構造タンパク質σＮＳ、μＮＳまたはσ１ｓから選択され得る。好ましいレオウイルス抗原はロタウイルスに由来し得る。ロタウイルス抗原は、ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４（または切断産物ＶＰ５およびＶＰ８）、ＮＳＰ１、ＶＰ６、ＮＳＰ３、ＮＳＰ２、ＶＰ７、ＮＳＰ４またはＮＳＰ５から選択され得る。好ましいロタウイルス抗原は、ＶＰ４（または切断産物ＶＰ５およびＶＰ８）およびＶＰ７を含む。
【０１５０】
パルボウイルス：ウイルス抗原は、パルボウイルスＢ１９などのパルボウイルスに由来し得る。パルボウイルス抗原は、ＶＰ−１、ＶＰ−２、ＶＰ−３、ＮＳ−１およびＮＳ−２から選択され得る。好ましくは、パルボウイルス抗原はキャプシドタンパク質ＶＰ−２である。
【０１５１】
デルタ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）：ウイルス抗原は、ＨＤＶ、特にＨＤＶからのδ抗原に由来し得る（たとえば米国特許第５，３７８，８１４号参照）。
【０１５２】
Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）：ウイルス抗原はＨＥＶに由来し得る。
【０１５３】
Ｇ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）：ウイルス抗原はＨＧＶに由来し得る。
【０１５４】
ヒトヘルペスウイルス：ウイルス抗原は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、水痘−帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ６）、ヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ７）およびヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ８）などのヒトヘルペスウイルスに由来し得る。ヒトヘルペスウイルス抗原は、最初期タンパク質（α）、初期タンパク質（β）および後期タンパク質（γ）から選択され得る。ＨＳＶ抗原は、ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２菌株に由来し得る。ＨＳＶ抗原は、糖タンパク質ｇＢ、ｇＣ、ｇＤおよびｇＨ、融合タンパク質（ｇＢ）、または免疫回避タンパク質（ｇＣ、ｇＥまたはｇＩ）から選択され得る。ＶＺＶ抗原は、コア、ヌクレオキャプシド、テグメントまたはエンベロープタンパク質から選択され得る。生弱毒化ＶＺＶワクチンが市販されている。ＥＢＶ抗原は、初期抗原（ＥＡ）タンパク質、ウイルスキャプシド抗原（ＶＣＡ）、および膜抗原（ＭＡ）の糖タンパク質から選択され得る。ＣＭＶ抗原は、キャプシドタンパク質、エンベロープ糖タンパク質（ｇＢおよびｇＨなど）およびテグメントタンパク質から選択され得る。
【０１５５】
パポバウイルス：抗原は、パピローマウイルスおよびポリオーマウイルスなどのパポバウイルスに由来し得る。パピローマウイルスは、ＨＰＶ血清型１、２、４、５、６、８、１１、１３、１６、１８、３１、３３、３５、３９、４１、４２、４７、５１、５７、５８、６３および６５を含む。好ましくは、ＨＰＶ抗原は血清型６、１１、１６または１８に由来する。ＨＰＶ抗原は、キャプシドタンパク質（Ｌ１）および（Ｌ２）、またはＥ１−Ｅ７、またはそれらの融合物から選択され得る。ＨＰＶ抗原は、好ましくはウイルス様粒子（ＶＬＰ）に製剤される。ポリオーマウイルスは、ＢＫウイルスおよびＪＫウイルスを含む。ポリオーマウイルス抗原は、ＶＰ１、ＶＰ２またはＶＰ３から選択され得る。
【０１５６】
本発明における使用のための他の抗原、組成物、方法および微生物は、Ｐｌｏｔｋｉｎ，Ｓ．Ａ．ら、Ｖａｃｃｉｎｅｓ，第４版、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．（２００４）；Ｍｕｒｒａｙ，Ｐ．Ｒ．ら、Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、第５版、Ｍｏｓｂｙ Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（２００５）；Ｊｏｋｌｉｋ，Ｗ．Ｋ．（編集），Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第３版、Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ（１９８８）；Ｈｏｗｌｅｙ，Ｐ．Ｍ．ら（編集），Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第４版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（１９９１）；およびＦｉｅｌｄｓ，Ｂ．Ｎ．ら（編集） Ｆｉｅｌｄｓ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第４版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００１）に述べられている。
【０１５７】
Ｃ．真菌抗原
本発明における使用のための真菌抗原は、以下に示す真菌の１またはそれ以上に由来し得る。
【０１５８】
真菌抗原は、Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ ｆｌｏｃｃｕｓｕｍ、オードアン小胞子菌、イヌ小胞子菌、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｄｉｓｔｏｒｔｕｍ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｅｑｕｉｎｕｍ、石膏状小胞子菌、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｎｕｍ、渦状白癬菌、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｅｑｕｉｎｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｇａｌｌｉｎａｅ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｇｙｐｓｅｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｇｎｉｎｉ、毛瘡白癬菌、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｑｕｉｎｃｋｅａｎｕｍ、紅色白癬菌、シェーンライン白癬菌、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｔｏｎｓｕｒａｎｓ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ、Ｔ．ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ ｖａｒ．ａｌｂｕｍ、ｖａｒ．ｄｉｓｃｏｉｄｅｓ、ｖａｒ．ｏｃｈｒａｃｅｕｍ、紫色白癬菌および／またはＴｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｆａｖｉｆｏｒｍｅを含む、皮膚糸状菌に由来し得る。
【０１５９】
真菌病原体は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、黄色アスペルギルス、黒色アスペルギルス、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｌａｕｃｕｓ、Ｂｌａｓｔｏｓｃｈｉｚｏｍｙｃｅｓ ｃａｐｉｔａｔｕｓ、鵞口瘡カンジダ、Ｃａｎｄｉｄａ ｅｎｏｌａｓｅ、Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ、Ｃａｎｄｉｄａ ｋｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｋｗｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、Ｃａｎｄｉｄａ ｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉ、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃａｒｒｉｏｎｉｉ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｄｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃｌａｖａｔｕｍ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、肺炎杆菌、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、ニューモシスティス・カリニ、Ｐｙｔｈｉｕｍｎ ｉｎｓｉｄｉｏｓｕｍ、Ｐｉｔｙｒｏｓｐｏｒｕｍ ｏｖａｌｅ、Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｓｃｅｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ａｐｉｏｓｐｅｒｕｍ、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｂｅｉｇｅｌｉｉ、トキソプラスマ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ、マラセジア属、フォンセセア属、Ｗａｎｇｉｅｌｌａ属、スポロトリクス属、バシディオボールス属、コニディオボルス属、クモノスカビ属、ケカビ属、アブシディア属、モルティエラ属、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ属、Ｓａｋｓｅｎａｅａ属、アルテルナリア属、Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ属、ヘルミントスポリウム属、フザリウム属、アスペルギルス属、ペニシリウム属、モノリニア種、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属、ペシロミセス属、Ｐｉｔｈｏｍｙｃｅｓ属およびクラドスポリウム属に由来し得る。
真菌抗原を生産するための方法は当技術分野において周知である（米国特許第６，３３３，１６４号参照）。好ましい方法では、細胞壁が実質的に除去されたまたは少なくとも部分的に除去された真菌細胞から入手し得る不溶性分画から可溶化分画を抽出して分離し、前記方法は、生真菌細胞を得ること；細胞壁が実質的に除去されたまたは少なくとも部分的に除去された真菌細胞を得ること；細胞壁が実質的に除去されたまたは少なくとも部分的に除去された真菌細胞を破裂させること；不溶性分画を得ること；および不溶性分画から可溶化分画を抽出して分離すること、の工程を含むことを特徴とする。
【０１６０】
Ｄ．ＳＴＤ抗原
本発明の組成物は、性感染症（ＳＴＤ）に由来する１またはそれ以上の抗原を含み得る。そのような抗原は、クラミジア、陰部ヘルペス、肝炎（ＨＣＶなど）、性器いぼ、淋病、梅毒および／または軟性下疳（国際公開公報第ＷＯ００／１５２５５号参照）などのＳＴＤに対する予防または治療を提供し得る。抗原は、１またはそれ以上のウイルスまたは細菌ＳＴＤに由来し得る。本発明における使用のためのウイルスＳＴＤ抗原は、たとえばＨＩＶ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）および肝炎（ＨＣＶ）に由来し得る。本発明における使用のための細菌ＳＴＤ抗原は、たとえば淋菌、トラコーマクラミジア、梅毒トレポネーマ、軟性下疳菌、大腸菌およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅに由来し得る。これらの病原体に由来する特異抗原の例は上述されている。
【０１６１】
Ｅ．呼吸器系抗原
本発明の組成物は、呼吸器系疾患を引き起こす病原体に由来する１またはそれ以上の抗原を含み得る。たとえば呼吸器系抗原は、オルトミクソウイルス（インフルエンザ）、肺炎ウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ）、麻疹ウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、ＶＺＶおよびコロナウイルス（ＳＡＲＳ）などの呼吸器系ウイルスに由来し得る。呼吸器系抗原は、肺炎連鎖球菌、緑膿菌、百日咳菌、ヒト結核菌、肺炎マイコプラスマ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、炭疽菌およびＭｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓなどの、呼吸器疾患を引き起こす細菌に由来し得る。これらの病原体に由来する特異抗原の例は上述されている。
【０１６２】
Ｆ．小児用ワクチン抗原
本発明の組成物は、小児被験体における使用に適する１またはそれ以上の抗原を含み得る。小児被験体は、典型的には約３歳未満、または約２歳未満、または約１歳未満である。小児用抗原は、６ヶ月、１、２または３年間にわたって複数回投与され得る。小児用抗原は、小児個体群を標的し得るウイルスおよび／または小児個体群が感染しやすいウイルスに由来し得る。小児用ウイルス抗原は、オルトミクソウイルス（インフルエンザ）、肺炎ウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよび流行性耳下腺炎）、麻疹ウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、および水痘−帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）の１またはそれ以上に由来する抗原を含む。小児用細菌抗原は、肺炎連鎖球菌、髄膜炎菌、化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、百日咳菌、黄色ブドウ球菌、破傷風菌（破傷風）、ジフテリア菌（ジフテリア）、インフルエンザ菌Ｂ型（Ｈｉｂ）、緑膿菌、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群連鎖球菌）および大腸菌の１またはそれ以上に由来する抗原を含む。これらの病原体に由来する特異抗原の例は上述されている。
【０１６３】
Ｇ．高齢者または免疫無防備状態個体における使用に適する抗原
本発明の組成物は、高齢者または免疫無防備状態個体における使用に適する１またはそれ以上の抗原を含み得る。そのような個体は、標的抗原に対する免疫応答を改善するためにより頻繁に、より高用量でまたはアジュバント添加製剤でワクチン接種する必要があり得る。高齢者または免疫無防備状態個体における使用のために標的し得る抗原は、以下の病原体の１またはそれ以上に由来する抗原を含む：髄膜炎菌、肺炎連鎖球菌、化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、百日咳菌、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、破傷風菌（破傷風）、ジフテリア菌（ジフテリア）、インフルエンザ菌Ｂ型（Ｈｉｂ）、緑膿菌、レジオネラ・ニューモフィラ菌、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群連鎖球菌）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、ピロリ菌、Ｃｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、オルトミクソウイルス（インフルエンザ）、肺炎ウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよび流行性耳下腺炎）、麻疹ウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、水痘−帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）。これらの病原体に由来する特異抗原の例は上述されている。
【０１６４】
Ｈ．青年用ワクチンにおける使用に適する抗原
本発明の組成物は、青年期被験体における使用に適する１またはそれ以上の抗原を含み得る。青年は、以前に投与された小児用抗原の追加免疫を必要とし得る。青年における使用に適すると考えられる小児用抗原は上述されている。加えて、青年は、性活動の開始前に防御または治療免疫を確実にするためにＳＴＤ病原体に由来する抗原を受容する標的であり得る。青年における使用に適し得るＳＴＤ抗原は上述されている。
【０１６５】
Ｉ．腫瘍抗原
本発明の組成物は、１またはそれ以上の腫瘍または癌抗原を含み得る。腫瘍抗原は、たとえばポリペプチド腫瘍抗原または糖タンパク質腫瘍抗原などのペプチド含有腫瘍抗原であり得る。腫瘍抗原はまた、たとえば、糖脂質腫瘍抗原またはガングリオシド腫瘍抗原などの糖含有腫瘍抗原であり得る。腫瘍抗原はさらに、たとえば、ポリペプチド含有腫瘍抗原、たとえばＲＮＡベクター構築物またはプラスミドＤＮＡなどのＤＮＡベクター構築物を発現するポリヌクレオチド含有腫瘍抗原であり得る。
【０１６６】
腫瘍抗原は、（ａ）ポリペプチド（たとえば８−２０アミノ酸長にわたり得るが、この範囲外の長さも一般的である）、リポポリペプチドおよび糖タンパク質を含む、ポリペプチド含有腫瘍抗原、（ｂ）多糖、ムチン、ガングリオシド、糖脂質および糖タンパク質を含む、糖含有腫瘍抗原、および（ｃ）抗原性ポリペプチドを発現するポリヌクレオチドを含む。
【０１６７】
腫瘍抗原は、たとえば（ａ）癌細胞に関連する完全長分子、（ｂ）欠失、付加および／または置換部分を有する分子を含む、前記完全長分子のホモログおよび修飾形態、および（ｃ）前記完全長分子のフラグメントであり得る。腫瘍抗原は組換え形態で提供され得る。腫瘍抗原は、たとえばＣＤ８＋リンパ球によって認識されるクラスＩ拘束性抗原またはＣＤ４＋リンパ球によって認識されるクラスＩＩ拘束性抗原を含む。
【０１６８】
以下を含む、数多くの腫瘍抗原が当技術分野において公知である：（ａ）ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＳＳＸ２、ＳＣＰ１などの癌精巣抗原ならびにＲＡＧＥ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥおよびＭＡＧＥファミリーポリペプチド、たとえばＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６およびＭＡＧＥ−１２（たとえば黒色腫、肺、頭頸部、ＮＳＣＬＣ、乳房、胃腸および膀胱腫瘍に対して使用できる）、（ｂ）突然変異抗原、たとえばｐ５３（様々な固形腫瘍、たとえば結腸直腸、肺、頭頸部癌に関連する）、ｐ２１／Ｒａｓ（たとえば黒色腫、膵癌および結腸直腸癌に関連する）、ＣＤＫ４（たとえば黒色腫に関連する）、ＭＵＭ１（たとえば黒色腫に関連する）、カスパーゼ−８（たとえば頭頸部癌に関連する）、ＣＩＡ０２０５（たとえば膀胱癌に関連する）、ＨＬＡ−Ａ２−Ｒ１７０１、βカテニン（たとえば黒色腫に関連する）、ＴＣＲ（たとえばＴ細胞非ホジキンリンパ腫に関連する）、ＢＣＲ−ａｂｌ（たとえば慢性骨髄性白血病に関連する）、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＫＩＡ０２０５、ＣＤＣ−２７およびＬＤＬＲ−ＦＵＴ、（ｃ）過剰発現抗原、たとえばガレクチン４（たとえば結腸直腸癌に関連する）、ガレクチン９（たとえばホジキン病に関連する）、プロテイナーゼ３（たとえば慢性骨髄性白血病に関連する）、ＷＴ１（たとえば様々な白血病に関連する）、カルボニックアンヒドラーゼ（たとえば腎癌に関連する）、アルドラーゼＡ（たとえば肺癌に関連する）、ＰＲＡＭＥ（たとえば黒色腫に関連する）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ（たとえば乳房、結腸、肺および卵巣癌に関連する）、αフェトプロテイン（たとえば肝細胞癌に関連する）、ＫＳＡ（たとえば結腸直腸癌に関連する）、ガストリン（たとえば膵癌および胃癌に関連する）、テロメラーゼ触媒タンパク質、ＭＵＣ−１（たとえば乳癌および卵巣癌に関連する）、Ｇ−２５０（たとえば腎細胞癌に関連する）、ｐ５３（たとえば乳癌、結腸癌に関連する）、および癌胎児性抗原（たとえば乳癌、肺癌、および結腸直腸癌などの胃腸管の癌に関連する）、（ｄ）共有抗原、たとえばＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ Ａなどの黒色腫−メラノサイト分化抗原、ｇｐ１００、ＭＣ１Ｒ、メラノサイト刺激ホルモン受容体、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質−１／ＴＲＰ１およびチロシナーゼ関連タンパク質−２／ＴＲＰ２（たとえば黒色腫に関連する）、（ｅ）たとえば前立腺癌に関連する、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＰＳＨ−Ｐ１、ＰＳＭ−Ｐ１、ＰＳＭ−Ｐ２などの前立腺関連抗原、（ｆ）免疫グロブリンイディオタイプ（たとえば骨髄腫およびＢ細胞リンパ腫に関連する）、および（ｇ）（ｉ）シアリルＴｎおよびシアリルＬｅＸ（たとえば乳癌および結腸直腸癌に関連する）ならびに様々なムチンなどの糖タンパク質；糖タンパク質は輸送タンパク質に結合していてもよい（たとえばＭＵＣ−１はＫＬＨに結合し得る）；（ｉｉ）リポポリペプチド（たとえば脂質部分に連結されたＭＵＣ−１）；（ｉｉｉ）輸送タンパク質に（たとえばＫＬＨに）結合していてもよい、多糖（たとえばＧｌｏｂｏ Ｈ合成六糖）；（ｉｖ）輸送タンパク質（たとえばＫＬＨ）に結合していてもよい、ＧＭ２、ＧＭ１２、ＧＤ２、ＧＤ３などのガングリオシド（たとえば脳、肺癌、黒色腫に関連する）を含む、ポリペプチドおよび糖含有抗原などの他の腫瘍抗原。
【０１６９】
他の腫瘍抗原は、ｐ１５、Ｈｏｍ／Ｍｅｌ−４０、Ｈ−Ｒａｓ、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ、エプスタインバーウイルス抗原、ＥＢＮＡ、Ｅ６およびＥ７を含むヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、Ｂ型およびＣ型肝炎ウイルス抗原、ヒトＴリンパ球向性ウイルス抗原、ＴＳＰ−１８０、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｍｎ−２３Ｈ１、ＴＡＧ−７２−４、ＣＡ１９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、ｐ１６、ＴＡＧＥ、ＰＳＣＡ、ＣＴ７、４３−９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、β−ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３（ＣＡ２７．２９／ＢＣＡＡ）、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８／ＫＰ１、ＣＯ−０２９、ＦＧＦ−５、Ｇａ７３３（ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ−ＣＯ−１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０（Ｍａｃ−２結合タンパク質／シクロフィリンＣ関連タンパク質）、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳ等を含む。これらならびに他の細胞成分は、たとえば米国特許出願第２００２／０００７１７３号およびその中で引用される参考文献に述べられている。
【０１７０】
本発明に従ったポリヌクレオチド含有抗原は、典型的には上記で列記したようなポリペプチド癌抗原をコードするポリヌクレオチドを含む。好ましいポリヌクレオチド含有抗原は、ポリペプチド癌抗原をインビボで発現することができる、プラスミドベクター（たとえばｐＣＭＶ）などのＤＮＡまたはＲＮＡベクター構築物を含む。
【０１７１】
腫瘍抗原は、たとえば突然変異したまたは変化した細胞成分に由来し得る。変化後、細胞成分はもはやそれらの調節機能を果たさず、それ故細胞は制御されない増殖を経験し得る。変化した細胞成分の代表的な例は、ｒａｓ、ｐ５３、Ｒｂ、ウィルムス腫瘍遺伝子によってコードされる変化したタンパク質、ユビキチン、ムチン、ＤＣＣ、ＡＰＣおよびＭＣＣ遺伝子によってコードされるタンパク質、ならびにｎｅｕ、甲状腺ホルモン受容体、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）受容体、インスリン受容体、上皮増殖因子（ＥＧＦ）受容体およびコロニー刺激因子（ＣＳＦ）受容体などの受容体または受容体様構造を含む。これらならびに他の細胞成分は、たとえば米国特許第５，６９３，５２２号およびその中で引用される参考文献に述べられている。
【０１７２】
細菌およびウイルス抗原は、癌の治療のために本発明の組成物と共に使用し得る。特に、ＣＲＭ１９７などの輸送タンパク質、破傷風トキソイドまたはネズミチフス菌抗原は、癌の治療のために本発明の化合物と共に／本発明の化合物と複合して使用し得る。癌抗原併用療法は、既存の治療法と比較して効果およびバイオアベイラビリティーの上昇を示す。
【０１７３】
癌または腫瘍抗原に関するさらなる情報は、たとえばＭｏｉｎｇｅｏｎ（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ １９：１３０５−１３２６；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（２００１）Ｎａｔｕｒｅ ４１１：３８０−３８４；Ｄｅｒｍｉｎｅら（２００２）Ｂｒｉｔ．Ｍｅｄ．Ｂｕｌｌ．６２：１４９−１６２；Ｅｓｐｉｎｏｚａ−Ｄｅｌｇａｄｏ（２００２）Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ ７（補遺３）：２０−３３；Ｄａｖｉｓら（２００３）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌ．２３：３−２９；Ｖａｎ ｄｅｎ Ｅｙｎｄｅら（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：６７４−６８１；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １８：１７５−１８２；Ｏｆｆｒｉｎｇａら（２０００）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：５７６−５８２；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（１９９９）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １０：２８１−２８７；Ｓａｈｉｎら（１９９７）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：７０９−７１６；Ｏｌｄら（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７：１１６３−１１６７；Ｃｈａｕｘら（１９９９）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８９：７６７−７７８；Ｇｏｌｄら（１９６５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１２２：４６７−４６８；Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎら（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．４５：１−６；Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎら（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．４５：１０−１９；Ｔａｙｌｏｒ−Ｐａｐａｄｉｍｉｔｒｉｏｕ（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １８：１０５−１０７；Ｚｈａｏら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：６７−７４；Ｔｈｅｏｂａｌｄら（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９２：１１９９３−１１９９７；Ｇａｕｄｅｒｎａｃｋ（１９９６）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２：３−９；国際公開公報第ＷＯ９１／０２０６２号；米国特許第６，０１５，５６７号；国際公開公報第ＷＯ０１／０８６３６号；国際公開公報第ＷＯ９６／３０５１４号；米国特許第５，８４６，５３８号；および米国特許第５，８６９，４４５号に認められる。
【０１７４】
さらなる抗原はまた、外膜小胞（ＯＭＶ）製剤を含み得る。
【０１７５】
さらなる製剤方法および抗原（特に腫瘍抗原）は、米国特許出願第２００４／０２０２６８０号において提供される。米国特許第６，８８４，４３５号も参照のこと。
【０１７６】
Ｊ．抗原参考文献
本発明の組成物は、以下の参考文献のいずれかにおいて記述される抗原を含み得る：
【０１７７】
【化１】
【０１７８】
【化２】
上記で引用したすべての特許、特許出願および学術論文の内容は、ここで完全に記述されているかのごとくに参照して組み込まれる。
【０１７９】
５．免疫アジュバントを含む、任意の補助成分
本発明の免疫原性組成物は、極めて多様な任意の補助成分を含み得る。
【０１８０】
そのような補助成分は、たとえば同じ組成物中でまたは別個の組成物中で、ナノ粒子含有組成物と同時に投与され得る。もう１つの実施形態では、補助成分は、ナノ粒子含有組成物の投与の前または投与の後に投与され得る。同じ組成物中で投与されるとき、補助成分は、ナノ粒子の表面に吸着され得るか、ナノ粒子内に封入され得るか、ナノ粒子に結合しないまま溶液中に溶解または分散し得るか、別の群のナノ粒子に吸着されるかまたはその中に封入され得る、等である。
【０１８１】
そのような補助成分は以下を含む：（ａ）抗生物質および抗ウイルス薬、非ステロイド系抗炎症薬、鎮痛薬、血管拡張薬、心臓血管薬、向精神薬、神経弛緩薬、抗うつ薬、抗パーキンソン薬、β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、ブラジキニン阻害薬、ＡＣＥ阻害薬、血管拡張薬、プロラクチン阻害薬、ステロイド、ホルモン拮抗物質、抗ヒスタミン薬、セロトニン拮抗物質、ヘパリン、化学療法剤、ＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＫＧＦ、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２、ＦＧＦを含むがこれらに限定されない抗腫瘍薬および増殖因子などの薬剤、（ｂ）インスリン、プロインスリン、成長ホルモン、ＧＨＲＨ、ＬＨＲＨ、ＥＧＦ、ソマトスタチン、ＳＮＸ−１１１、ＢＮＰ、インスリノトロピン、ＡＮＰ、ＦＳＨ、ＬＨ、ＰＳＨおよびｈＣＧ、性腺ステロイドホルモン（アンドロゲン、エストロゲンおよびプロゲステロン）、甲状腺刺激ホルモン、インヒビン、コレシストキニン、ＡＣＴＨ、ＣＲＦ、ダイノルフィン、エンドルフィン、エンドセリン、フィブロネクチンフラグメント、ガラニン、ガストリン、インスリノトロピン、グルカゴン、ＧＴＰ結合タンパク質フラグメント、グアニリン、ロイコキニン、マガイニン、マストパラン、デルマセプチン、システミン、ニューロメジン、ニューロテンシン、パンクレアスタチン、膵ポリペプチド、サブスタンスＰ、セクレチン、チモシン等のようなペプチドホルモンを含むホルモン、（ｃ）酵素、（ｄ）転写または翻訳メディエイタ、（ｅ）代謝経路における中間体、および（ｆ）インターロイキン１、インターロイキン２、インターロイキン３．インターロイキン４およびγ−インターフェロンを含む様々なサイトカインのいずれかのような、免疫調節剤。
【０１８２】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は免疫アジュバントを含む。本発明に関する使用のためのアジュバントは、以下に示すものの１またはそれ以上を含むが、これらに限定されない：
Ａ．無機質含有組成物
アジュバントとしての使用に適する無機質含有組成物は、アルミニウム塩およびカルシウム塩などの無機塩を含む。本発明は、水酸化物（たとえばオキシ水酸化物）、リン酸塩（たとえばヒドロキシリン酸塩、オルトリン酸塩）、硫酸塩等のような無機塩（たとえばＶａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．とＮｅｗｍａｎ，ＭＪ．編集）（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ）１９９５，第８および９章参照）、または種々の無機化合物の混合物（たとえば、場合によりリン酸塩過剰の、リン酸塩と水酸化物アジュバントの混合物）を含み、それらの化合物は何らかの適切な形態（たとえばゲル、結晶、非晶質等）をとり、塩に吸着することが好ましい。無機質含有組成物はまた、金属塩の粒子としても製剤され得る（国際公開公報第ＷＯ００／２３１０５号）。
【０１８３】
アルミニウム塩は、Ａｌ３＋の用量が０．２−１．０ｍｇ／用量であるように本発明のワクチンに含まれ得る。
【０１８４】
１つの実施形態では、本発明における使用のためのアルミニウムに基づくアジュバントは、ミョウバン（硫酸カリウムアルミニウム（ＡｌＫ（ＳＯ４）２））、または、リン酸緩衝液中の抗原をミョウバンと混合し、その後水酸化アンモニウムまたは水酸化ナトリウムなどの塩基で滴定および沈殿させることによってインサイチューで形成されるような、ミョウバン誘導体である。
【０１８５】
本発明のワクチン製剤における使用のためのもう１つのアルミニウムベースのアジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバント（Ａｌ（ＯＨ）３）または、約５００ｍ２／ｇの表面積を有する、優れた吸着剤である結晶性オキシ水酸化アルミニウム（ＡｌＯＯＨ）である。もう１つの実施形態では、アルミニウムベースのアジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバントのヒドロキシル基の一部または全部の代わりにリン酸基を含む、リン酸アルミニウムアジュバント（ＡｌＰＯ４）またはヒドロキシリン酸アルミニウムである。ここで提供される好ましいリン酸アルミニウムアジュバントは、非晶質であり、酸性、塩基性および中性媒質に可溶性である。
【０１８６】
もう１つの実施形態では、アジュバントは、リン酸アルミニウムと水酸化アルミニウムの両方を含む。そのより特定の実施形態では、アジュバントは、リン酸アルミニウム対水酸化アルミニウムの重量比で２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１または９：１以上の比率のような、水酸化アルミニウムを上回る量のリン酸アルミニウムを有する。もう１つの実施形態では、ワクチン中のアルミニウム塩は、ワクチン用量当たり０．４−１．０ｍｇ、またはワクチン用量当たり０．４−０．８ｍｇ、またはワクチン用量当たり０．５−０．７ｍｇ、またはワクチン用量当たり約０．６ｍｇで存在する。
【０１８７】
一般に、好ましいアルミニウムベースのアジュバント、またはリン酸アルミニウム対水酸化アルミニウムのような複数のアルミニウムベースのアジュバントの比率は、抗原が所望ｐＨでアジュバントと反対の電荷を担持するように分子間の静電引力の最適化によって選択される。たとえばリン酸アルミニウムアジュバント（等電点＝４）はｐＨ７．４でリゾチームを吸着するが、アルブミンは吸着しない。アルブミンが標的である場合は、水酸化アルミニウムアジュバントが選択される（等電点＝１１．４）。あるいは、リン酸塩による水酸化アルミニウムの前処理はその等電点を低下させ、より塩基性の抗原にとって好ましいアジュバントにする。
【０１８８】
Ｂ．油性乳剤
（ムラミルペプチドまたは細菌細胞壁成分などの他の特異的免疫刺激剤と共にまたは他の免疫刺激剤なしで）アジュバントとしての使用に適する油性乳剤組成物および製剤は、ＭＦ５９（マイクロフルイダイザーを用いてサブミクロン粒子に製剤された、５％スクアレン、０．５％トゥイーン８０および０．５％スパン８５）などのスクアレン−水乳剤を含む。国際公開公報第ＷＯ９０／１４８３７号参照。また、Ｐｏｄｄａ（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ １９：２６７３−２６８０；Ｆｒｅｙら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅ ２１ ：４２３４−４２３７も参照のこと。ＭＦ５９は、ＦＬＵＡＤ（商標）インフルエンザウイルス三価サブユニットワクチンにおいてアジュバントとして使用されている。
【０１８９】
組成物における使用のための特に好ましいアジュバントは、サブミクロンの水中油型乳剤である。ここでの使用のための好ましいサブミクロン水中油型乳剤は、４−５％ｗ／ｖスクアレン、０．２５−１．０％ｗ／ｖトゥイーン８０（商標）（モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン）および／または０．２５−１．０％スパン８５（商標）（トリオレイン酸ソルビタン）、および場合によりＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）を含むサブミクロン水中油型乳剤などの、場合により様々な量のＭＴＰ−ＰＥを含むスクアレン／水乳剤、たとえば「ＭＦ５９」として知られるサブミクロン水中油型乳剤（国際公開公報第ＷＯ９０／１４８３７号；米国特許第６，２９９，８８４号；同第６，４５１，３２５号；およびＯｔｔら、“ＭＦ５９――Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｓａｆｅ ａｎｄ Ｐｏｔｅｎｔ Ａｄｊｕｖａｎｔ ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ”ｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．とＮｅｗｍａｎ，Ｍ．Ｊ．編集）（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ）１９９５，ｐ．２７７−２９６）である。ＭＦ５９は、１１０Ｙ型マイクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，Ｎｅｗｔｏｎ，ＭＡ）などのマイクロフルイダイザーを用いてサブミクロン粒子に製剤された、４−５％ｗ／ｖスクアレン（たとえば４．３％）、０．２５−０．５％ｗ／ｖトゥイーン８０（商標）および０．５％ｗ／ｖスパン８５（商標）を含み、および場合により様々な量のＭＴＰ−ＰＥを含む。たとえばＭＴＰ−ＰＥは、約０−５００μｇ／用量、より好ましくは０−２５０μｇ／用量、最も好ましくは０−１００μｇ／用量の量で存在し得る。ここで使用する、「ＭＦ５９−０」という用語は、ＭＴＰ−ＰＥを含まない上記サブミクロン水中油型乳剤を指し、ＭＦ５９−ＭＴＰは、ＭＴＰ−ＰＥを含む製剤を表わす。たとえば「ＭＦ５９−１００」は、ＭＴＰ−ＰＥ１００μｇ／用量を含む、等である。ここでの使用のもう１つのサブミクロン水中油型乳剤、ＭＦ６９は、４．３％ｗ／ｖスクアレン、０．２５％ｗ／ｖトゥイーン８０（商標）および０．７５％ｗ／ｖスパン８５（商標）、および場合によりＭＴＰ−ＰＥを含む。さらにもう１つのサブミクロン水中油型乳剤は、やはりサブミクロン乳剤にマイクロフルイダイズされた、１０％スクアレン、０．４％トゥイーン８０（商標）、５％プルロニックブロックポリマーＬ１２１およびｔｈｒ−ＭＤＰを含む、ＳＡＦとしても知られるＭＦ７５である。ＭＦ７５−ＭＴＰは、ＭＴＰ−ＰＥ１００−４００μｇ／用量のような、ＭＴＰを含むＭＦ７５製剤を表わす。
【０１９０】
組成物における使用のための、サブミクロン水中油型乳剤、その製造方法およびムラミルペプチドなどの免疫刺激剤は、国際公開公報第ＷＯ９０／１４８３７号；米国特許第６，２９９，８８４号；および同第６，４５１，３２５号に詳述されている。
【０１９１】
フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）およびフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）も、本発明におけるアジュバントとして使用し得る。
【０１９２】
Ｃ．サポニン製剤
サポニン製剤も、本発明におけるアジュバントとしての使用に適する。サポニンは、広範囲の植物種の樹皮、葉、幹、根、さらには花において認められるステロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドの異種群である。Ｑｕｉｌｌａｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａの木の樹皮から単離されるサポニンは、アジュバントとして広く研究されてきた。サポニンはまた、Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔａ（サルサパリラ）、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（ブライダルベール）およびＳａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉａｎａｌｉｓ（サボンソウの根）から商業的に入手できる。サポニンアジュバント製剤は、ＱＳ２１などの精製製剤、ならびにＩＳＣＯＭなどの脂質製剤を含む。サポニンアジュバント製剤は、ＳＴＩＭＵＬＯＮ（登録商標）アジュバント（Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）を含む。
【０１９３】
サポニン組成物は、高速薄層クロマトグラフィー（ＨＰ−ＴＬＣ）および逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を用いて精製されてきた。ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−ＢおよびＱＨ−Ｃを含む、これらの手法を用いた特定精製画分が同定されている。好ましくは、サポニンはＱＳ２１である。ＱＳ２１の生産方法は、米国特許第５，０５７，５４０号に開示されている。サポニン製剤はまた、コレステロールなどのステロールを含み得る（国際公開公報第ＷＯ９６／３３７３９号参照）。
【０１９４】
サポニンとコレステロールとの組合せは、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる独特の粒子を形成するために使用できる。ＩＳＣＯＭはまた、典型的にはホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンなどのリン脂質も含む。いかなる公知のサポニンもＩＳＣＯＭにおいて使用できる。好ましくは、ＩＳＣＯＭは、Ｑｕｉｌ Ａ、ＱＨＡおよびＱＨＣの１またはそれ以上を含む。ＩＳＣＯＭはさらに、欧州特許第０１０９９４２号、国際公開公報第ＷＯ９６／１１７１１号および同第ＷＯ９６／３３７３９号に述べられている。場合により、ＩＳＣＯＭは付加的な界面活性剤を含まなくてもよい。国際公開公報第ＷＯ００／０７６２１号参照。
【０１９５】
サポニンベースのアジュバントの開発の総説は、Ｂａｒｒら、（１９９８）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．３２：２４７−２７１に認められる。Ｓｊｏｌａｎｄｅｒら（１９９８）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．３２：３２１−３３８も参照のこと。
【０１９６】
Ｄ．ビロゾームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）
ビロゾームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）もアジュバントとして適切である。これらの構造は一般に、場合によりリン脂質と組み合わせたまたはリン脂質と共に製剤された、ウイルスからの１またはそれ以上のタンパク質を含む。それらは一般に非病原性、非複製性であり、一般にいかなる天然ウイルスゲノムも含まない。ウイルスタンパク質は、組換え生産され得るかまたは全ウイルスから単離され得る。ビロゾームまたはＶＬＰにおける使用に適するこれらのウイルスタンパク質は、インフルエンザウイルス（ＨＡまたはＮＡなど）、Ｂ型肝炎ウイルス（コアまたはキャプシドタンパク質など）、Ｅ型肝炎ウイルス、麻疹ウイルス、シンドビスウイルス、ロタウイルス、口蹄疫ウイルス、レトロウイルス、ノーウォークウイルス、ヒトパピローマウイルス、ＨＩＶ、ＲＮＡファージ、Ｑβファージ（コートタンパク質など）、ＧＡファージ、ｆｒファージ、ＡＰ２０５ファージ、およびＴｙ（レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１など）に由来するタンパク質を含む。ＶＬＰは、国際公開公報第ＷＯ０３／０２４４８０号；同第ＷＯ０３／０２４４８１号；Ｎｉｉｋｕｒａら（２００２）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２９３：２７３−２８０；Ｌｅｎｚら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６（９）５３４６−５３５５；Ｐｉｎｔｏら（２００３）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８８：３２７−３３８；およびＧｅｒｂｅｒら（２００１）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５（１０）：４７５２−４７６０においてさらに論じられている。ビロゾームは、たとえばＧｌｕｃｋら（２００２）Ｖａｃｃｉｎｅ ２０：Ｂ１０−Ｂ１６においてさらに論じられている。免疫増強性再溶解インフルエンザビロゾーム（ＩＲＩＶ）が、鼻内三価ＩＮＦＬＥＸＡＬ（商標）製品（ＭｉｓｃｈｌｅｒとＭｅｔｃａｌｆｅ（２００２）Ｖａｃｃｉｎｅ ２０、補遺５：Ｂ１７−２３）およびＩＮＦＬＵＶＡＣ ＰＬＵＳ（商標）製品におけるサブユニット抗原送達システムとして使用されている。
【０１９７】
Ｅ．細菌または微生物誘導体
本発明における使用に適するアジュバントは、以下のような細菌または微生物誘導体を含む：
（１）腸内細菌リポ多糖（ＬＰＳ）の非毒性誘導体：そのような誘導体は、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）を含む。３ｄＭＰＬは、４、５または６本のアシル化された鎖と３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａの混合物である。３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａの好ましい「微小粒子」形態は、欧州特許第０６８９４５４号に開示されている。そのような３ｄＭＰＬの「微小粒子」は、０．２２ミクロンの膜を通して滅菌ろ過されるのに十分な程度に小さい（欧州特許第０６８９４５４号参照）。他の非毒性ＬＰＳ誘導体は、リン酸アミノアルキルグルコサミニド誘導体、たとえばＲＣ−５２９などのモノホスホリル脂質Ａミミックを含む。Ｊｏｈｎｓｏｎら（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２７３−２２７８参照。
【０１９８】
（２）脂質Ａ誘導体：脂質Ａ誘導体は、ＯＭ−１７４などの大腸菌からの脂質Ａの誘導体を含む。ＯＭ−１７４は、たとえばＭｅｒａｌｄｉら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅ ２１：２４８５−２４９１；およびＰａｊａｋら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅ ２１：８３６−８４２に述べられている。
【０１９９】
（３）免疫刺激オリゴヌクレオチド：本発明におけるアジュバントとしての使用に適する免疫刺激オリゴヌクレオチドまたはポリマー分子は、ＣｐＧモチーフ（非メチル化シトシンとそれに続くグアノシンを含む、リン酸結合によって連結された配列）を含むヌクレオチド配列を含む。パリンドロームまたはポリ（ｄＧ）配列を含む細菌二本鎖ＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドも、免疫刺激性であることが示されている。ＣｐＧは、ホスホロチオエート修飾などのヌクレオチド修飾／類似体を含むことができ、二本鎖または一本鎖であり得る。場合により、グアノシンは、２’−デオキシ−７−デアザグアノシンなどの類似体で置換されていてもよい。可能な類似体置換の例に関しては、Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３１（９）：２３９３−２４００；国際公開公報第ＷＯ０２／２６７５７号；および同第ＷＯ９９／６２９２３号参照。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント作用はさらに、Ｋｒｉｅｇ（２００３）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９（７）：８３１−８３５；ＭｃＣｌｕｓｋｉｅら（２００２）ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３２：１７９−１８５；国際公開公報第ＷＯ９８／４０１００号；米国特許第６，２０７，６４６号；同第６，２３９，１１６号；および同第６，４２９，１９９号において論じられている。
【０２００】
ＣｐＧ配列は、モチーフＧＴＣＧＴＴまたはＴＴＣＧＴＴなどのＴＬＲ９を対象とし得る。Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３１（第３部）：６５４−６５８参照。ＣｐＧ配列は、ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮなどのＴｈ１免疫応答を誘導することに特異的であり得るか、またはＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮなどのＢ細胞応答を誘導することにより特異的であり得る。ＣｐＧ−ＡおよびＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮは、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌら（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｎｏｌ．１７０（８）：４０６１−４０６８；Ｋｒｉｅｇ（２００２）ＴＲＥＮＤＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３（２）：６４−６５；および国際公開公報第ＷＯ０１／９５９３５号において論じられている。好ましくは、ＣｐＧはＣｐＧ−Ａ ＯＤＮである。
【０２０１】
好ましくは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’末端が受容体認識のためにアクセス可能であるように構築される。場合により、２個のＣｐＧオリゴヌクレオチド配列がそれらの３’末端で結合して、「イムノマー（ｉｍｍｕｎｏｍｅｒｓ）」を形成し得る。たとえばＫａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）ＢＢＲＣ ３０６：９４８−９５３；Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３１（第３部）：６５４−６５８；Ｂｈａｇａｔら（２００３）ＢＢＲＣ ３００：８５３−８６１；および国際公開公報第ＷＯ０３／０３５８３６号参照。
【０２０２】
免疫刺激オリゴヌクレオチドおよびポリマー分子はまた、ポリビニル骨格（Ｐｉｔｈａら（１９７０）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ２０４（１）：３９−４８；Ｐｉｔｈａら（１９７０）Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ９（８）：９６５−９７７）、およびモルホリノ骨格（米国特許第５，１４２，０４７号；同第５，１８５，４４４号）などの、しかしこれらに限定されない、選択的ポリマー骨格構造を含む。様々な他の荷電および非荷電ポリヌクレオチド類似体が当技術分野において公知である。非荷電結合（たとえばメチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメート）および荷電結合（たとえばホスホロチオエートおよびホスホロジチオエート）を含むが、これらに限定されない、数多くの骨格修飾が当技術分野において公知である。
【０２０３】
（４）ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその無毒化誘導体：細菌ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその無毒化誘導体は、本発明におけるアジュバントとして使用し得る。好ましくは、タンパク質は、大腸菌（すなわち大腸菌易熱性エンテロトキシン「ＬＴ」）、コレラ菌（「ＣＴ」）または百日咳菌（「ＰＴ」）に由来する。粘膜アジュバントとしての無毒化ＡＤＰ−リボシル化毒素の使用は国際公開公報第ＷＯ９５／１７２１１号に、および非経口アジュバントとしての使用は国際公開公報第ＷＯ９８／４２３７５号に述べられている。好ましくは、アジュバントは、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２およびＬＴＲ１９２Ｇなどの無毒化ＬＴ突然変異体である。ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその無毒化誘導体、特にＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２のアジュバントとしての使用は、以下の参考文献に認められる：Ｂｅｉｇｎｏｎら（２００２）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７０（６）：３０１２−３０１９；Ｐｉｚｚａら（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ １９：２５３４−２５４１；Ｐｉｚｚａら（２０００）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２９０（４−５）：４５５−４６１；Ｓｃｈａｒｔｏｎ−Ｋｅｒｓｔｅｎら（２０００）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６８（９）：５３０６−５３１３；Ｒｙａｎら（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６７（１２）：６２７０−６２８０；Ｐａｒｔｉｄｏｓら（１９９９）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．６７（３）：２０９−２１６；Ｐｅｐｐｏｌｏｎｉら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅｓ ２（２）：２８５−２９３；およびＰｉｎｅら（２００２）Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ ８５（１−３）：２６３−２７０。アミノ酸置換についての数字参照は、好ましくは、Ｄｏｍｅｎｉｇｈｉｎｉら（１９９５）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１５（６）：１１６５−１１６７に示されているＡＤＰ−リボシル化毒素のＡおよびＢサブユニットのアラインメントに基づく。
【０２０４】
‘ＥＲ ８０３０５８’、‘ＥＲ ８０３７３２’、‘ＥＲ ８０４０５３’、‘ＥＲ ８０４０５８’、‘ＥＲ ８０４０５９’、‘ＥＲ ８０４４４２’、‘ＥＲ ８０４６８０’、‘ＥＲ ８０４７６４’、‘ＥＲ ８０３０２２’または‘ＥＲ ８０４０５７’などの、国際公開公報第ＷＯ０３／０１１２２３において定義される、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物、またはそれらの塩：
【０２０５】
【化３】
たとえば：
【０２０６】
【化４】
も、アジュバントとして使用できる。
【０２０７】
Ｆ．ヒト免疫調節剤
アジュバントとしての使用に適するヒト免疫調節剤は、インターロイキン（たとえば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２等）、インターフェロン（たとえばインターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのサイトカインを含む。
【０２０８】
Ｇ．生体接着剤および粘膜接着剤
生体接着剤および粘膜接着剤もアジュバントとして使用し得る。適切な生体接着剤は、エステル化ヒアルロン酸ミクロスフェア（Ｓｉｎｇｈら（２００１）Ｊ．Ｃｏｎｔ．Ｒｅｌｅａｓｅ．７０：２６７−２７６）またはポリアクリル酸の架橋誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、多糖およびカルボキシメチルセルロースなどの粘膜接着剤を含む。キトサンおよびその誘導体も、本発明におけるアジュバントとして使用し得る（国際公開公報第ＷＯ９９／２７９６０号参照）。
【０２０９】
Ｈ．リポソーム
アジュバントとしての使用に適するリポソーム製剤の例は、米国特許第６，０９０，４０６号；同第５，９１６，５８８号；および欧州特許公開第０６２６１６９号に述べられている。
【０２１０】
Ｉ．ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル製剤
本発明における使用に適するアジュバントは、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルを含む（たとえば国際公開公報第ＷＯ９９／５２５４９号参照）。そのような製剤はさらに、オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（国際公開公報第ＷＯ０１／２１２０７号）ならびにオクトキシノールなどの少なくとも１つの付加的な非イオン界面活性剤と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステル界面活性剤（国際公開公報第ＷＯ０１／２１１５２号）を包含する。
【０２１１】
好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ラウレス９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテル、およびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテルから選択される。
【０２１２】
Ｊ．ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ）
ＰＣＰＰ製剤は、たとえばＡｎｄｒｉａｎｏｖら（１９９８）Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ １９（１−３）：１０９−１１５；およびＰａｙｎｅら（１９９８）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌ． Ｒｅｖ．３１（３）：１８５−１９６に述べられている。
【０２１３】
Ｋ．ムラミルペプチド
アジュバントとしての使用に適するムラミルペプチドの例は、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−ｌ−アラニル−ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、およびＮ−アセチルムラミル−ｌ−アラニル−ｄ−イソグルタミニル−ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）を含む。
【０２１４】
Ｌ．イミダゾキノリン化合物
アジュバントとしての使用に適するイミダゾキノリン化合物の例は、Ｓｔａｎｌｅｙ（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２７（７）：５７１−５７７；Ｊｏｎｅｓ（２００３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ ４（２）：２１４−２１８；および米国特許第４，６８９，３３８号；同第５，３８９，６４０号；同第５，２６８，３７６号；同第４，９２９，６２４号；同第５，２６６，５７５号；同第５，３５２，７８４号；同第５，４９４，９１６号；同第５，４８２，９３６号；同第５，３４６，９０５号；同第５，３９５，９３７号；同第５，２３８，９４４号；および同第５，５２５，６１２号においてさらに説明されている、イミキモドおよびその類似体を含む。
【０２１５】
Ｍ．チオセミカルバゾン化合物
アジュバントとしての使用に適するチオセミカルバゾン化合物の例、ならびにそのような化合物を製剤する、製造する、およびスクリーニングする方法は、国際公開公報第ＷＯ０４／６０３０８号に述べられているものを含む。チオセミカルバゾンは、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの生産のためのヒト末梢血単核細胞の刺激において特に有効である。
Ｎ．トリプタントリン化合物
アジュバントとしての使用に適するトリプタントリン化合物の例、ならびにそのような化合物を製剤する、製造する、およびスクリーニングする方法は、国際公開公報第ＷＯ０４／６４７５９号に述べられているものを含む。トリプタントリン化合物は、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの生産のためのヒト末梢血単核細胞の刺激において特に有効である。
【０２１６】
Ｏ．ヌクレオシド類似体
様々なヌクレオシド類似体、たとえば（ａ）イサトラビン（Ｉｓａｔｏｒａｂｉｎｅ）（ＡＮＡ−２４５；７−チア−８−オキソグアノシン）：
【０２１７】
【化５】
およびそのプロドラッグ；（ｂ）ＡＮＡ９７５；（ｃ）ＡＮＡ−０２５−１；（ｄ）ＡＮＡ３８０；（ｅ）米国特許第６，９２４，２７１号；米国特許公開第２００５／００７０５５６号；および米国特許第５，６５８，７３１号に開示されている化合物；（ｆ）式：
【０２１８】
【化６】
［式中、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立してＨ、ハロ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、置換Ｃ１−６アルコキシ、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、Ｃ１−６アリール、置換Ｃ１−６アリール、Ｃ１−６アルキル、または置換Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ３は、存在しないか、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリール、置換Ｃ６−１０アリール、ヘテロシクリル、または置換ヘテロシクリルであり；
Ｒ４およびＲ５は、各々独立してＨ、ハロ、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、−Ｃ（Ｏ）−Ｒｄ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキルであるか、または一緒に結合してＲ４−５：
【０２１９】
【化７】
［結合は
【０２２０】
【化８】
によって示される結合で達成される］
として５員環を形成し；
Ｘ１およびＸ２は、各々独立してＮ、Ｃ、ＯまたはＳであり；
Ｒ８は、Ｈ、ハロ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、−ＯＨ、−ＮＲａＲｂ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−Ｒｃ、−Ｏ−（Ｃ１−６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｐＲｅ、または−Ｃ（Ｏ）−Ｒｄであり；
Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリルまたはＲ９ａであり、Ｒ９ａは：
【０２２１】
【化９】
［結合は
【０２２２】
【化１０】
によって示される結合で達成される］
であり；
Ｒ１０およびＲ１１は、各々独立してＨ、ハロ、Ｃ１−６アルコキシ、置換Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲａＲｂ、または−ＯＨであり；
各々のＲａおよびＲｂは、独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒｄ、Ｃ６−１０アリールであり；
各々のＲｃは、独立してＨ、リン酸塩、二リン酸塩、三リン酸塩、Ｃ１−６アルキル、または置換Ｃ１−６アルキルであり；
各々のＲｄは、独立してＨ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、置換Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨ（置換Ｃ１−６アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−Ｎ（置換Ｃ１−６アルキル）２、Ｃ６−１０アリール、またはヘテロシクリルであり；
各々のＲｅは、独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリール、置換Ｃ６−１０アリール、ヘテロシクリル、または置換ヘテロシクリルであり；
各々のＲｆは、独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒｄ、リン酸塩、二リン酸塩、または三リン酸塩であり；
各々のｎは、独立して０、１、２または３であり；
各々のｐは、独立して０、１または２である］
を有する化合物；または（ｇ）（ａ）−（ｆ）のいずれかの医薬的に許容される塩、（ａ）−（ｆ）のいずれかの互変異性体、または互変異性体の医薬的に許容される塩
が、アジュバントとして使用できる。
【０２２３】
Ｐ．リン酸含有非環式骨格に連結された脂質
リン酸含有非環式骨格に連結された脂質を含むアジュバントは、ＴＬＲ４拮抗物質Ｅ５５６４（Ｗｏｎｇら（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４３（７）：７３５−７４２；米国特許出願第２００５／０２１５５１７号）：
【０２２４】
【化１１】
を含む。
【０２２５】
Ｑ．低分子免疫増強剤（ＳＭＩＰ）
ＳＭＩＰは以下を含む：
・Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−エチル−Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ２−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・１−（２−メチルプロピル）−Ｎ２−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−ブチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−ブチル−Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ２−ペンチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ２−プロプ−２−エニル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・１−（２−メチルプロピル）−２−［（フェニルメチル）チオ］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；
・１−（２−メチルプロピル）−２−（プロピルチオ）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；
・２−［［４−アミノ−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−イル］（メチル）アミノ］エタノール；
・２−［［４−アミノ−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−イル］（メチル）アミノ］エチルアセテート；
・４−アミノ−１−（２−メチルプロピル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン；
・Ｎ２−ブチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ４，Ｎ４−ビス（フェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−ブチル−Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ４，Ｎ４−ビス（フェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ４，Ｎ４−ビス（フェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ４，Ｎ４−ビス（フェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・１−｛４−アミノ−２−［メチル（プロピル）アミノ］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル｝−２−メチルプロパン−２−オール；
・１−［４−アミノ−２−（プロピルアミノ）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−２−メチルプロパン−２−オール；
・Ｎ４，Ｎ４−ジベンジル−１−（２−メトキシ−２−メチルプロピル）−Ｎ２−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン。
【０２２６】
Ｒ．プロテオソーム
１つのアジュバントは、第二グラム陰性細菌に由来するリポ糖製剤と組み合わせた第一グラム陰性細菌に由来する外膜タンパク質プロテオソーム製剤であり、外膜タンパク質プロテオソームとリポ糖製剤は安定な非共有結合アジュバント複合体を形成する。そのような複合体は、髄膜炎菌外膜とリポ多糖からなる複合体、「ＩＶＸ−９０８」を含む。それらはインフルエンザワクチンのためのアジュバントとして使用されてきた（国際公開公報第ＷＯ０２／０７２０１２号）。
【０２２７】
Ｓ．他のアジュバント
免疫刺激剤として働く他の物質は、Ｂｕｒｄｍａｎ，Ｊ．Ｒ．ら（編集）（１９９５）（Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）（第７章）およびＯ’Ｈａｇａｎ，Ｄ．Ｔ．（２０００）（Ｖａｃｃｉｎｅ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ）（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅシリーズの第４２巻））に開示されている。
【０２２８】
さらなる有用なアジュバント物質は以下を含む：
・メチルイノシン５’−一リン酸（“ＭＩＭＰ”）（Ｓｉｇｎｏｒｅｌｌｉ ＆ Ｈａｄｄｅｎ（２００３）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．３（８）：１１７７−１１８６）。
・式：
【０２２９】
【化１２】
［式中、Ｒは、水素、直鎖または分枝、非置換または置換、飽和または不飽和アシル、アルキル（たとえばシクロアルキル）、アルケニル、アルキニルおよびアリール基、あるいはそれらの医薬的に許容される塩または誘導体から成る群より選択される］
を有するものなどの、ポリヒドロキシル化ピロリジジン化合物（国際公開公報第ＷＯ２００４／０６４７１５号）。例は、カジュアリン（ｃａｓｕａｒｉｎｅ）、カジュアリン−６−α−Ｄ−グルコピラノース、３−エピ−カジュアリン、７−エピ−カジュアリン、３，７−ジエピ−カジュアリン等を含む。
・γイヌリン（Ｃｏｏｐｅｒ（１９９５）Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６：５５９−５８０）またはアルガムリンなどのその誘導体。
・国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２２７６９号に開示されている化合物。
・アシルピペラジン化合物、インドールジオン化合物、テトラヒドロイソキノリン（ＴＨＩＱ）化合物、ベンゾシクロジオン化合物、アミノアザビニル化合物、アミノベンズイミダゾールキノリノン（ＡＢＩＱ）化合物（米国特許第６，６０５，６１７号；国際公開公報第ＷＯ０２／１８３８３号）、ヒドロフタルアミド化合物、ベンゾフェノン化合物、イソキサゾール化合物、ステロール化合物、キナジリノン化合物、ピロール化合物（国際公開公報第ＷＯ２００４／０１８４５５号）、アントラキノン化合物、キノキサリン化合物、トリアジン化合物、ピラゾロピリミジン化合物、およびベンズアゾール化合物（国際公開公報第ＷＯ０３／０８２２７２号）を含む、国際公開公報第ＷＯ２００４／８７１５３号に開示されている化合物。
・ロキソリビン（７−アリル−８−オキソグアノシン（米国特許第５，０１１，８２８号）。
・アミノプロピル−ジメチル−ミリストレイルオキシ−プロパナミニウムブロマイド−ジフィタノイルホスファチジル−エタノールアミン（「Ｖａｘｆｅｃｔｉｎ（商標）」）またはアミノプロピル−ジメチル−ビス−ドデシルオキシ−プロパナミニウムブロマイド−ジオレオイルホスファチジル−エタノールアミン（「ＧＡＰ−ＤＬＲＩＥ：ＤＯＰＥ」）などの、陽イオン脂質と（通常は中性の）共脂質の製剤。（±）−Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ビス（シン−９−テトラデセネイルオキシ）−１−プロパナミニウム塩を含む製剤が好ましい（米国特許第６，５８６，４０９号）。
【０２３０】
本発明はまた、上記で特定したアジュバントの１またはそれ以上の態様の組合せを含み得る。たとえば以下のアジュバント組成物が本発明において使用し得る：（１）サポニンおよび水中油型乳剤（国際公開公報第ＷＯ９９／１１２４１号）；（２）サポニン（たとえばＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（たとえば３ｄＭＰＬ）（国際公開公報第ＷＯ９４／００１５３号参照）；（３）サポニン（たとえばＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（たとえば３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；（４）サポニン（たとえばＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（場合により＋ステロール）（国際公開公報第ＷＯ９８／５７６５９号）；（５）たとえばＱＳ２１および／または水中油型乳剤と３ｄＭＰＬの組合せ（欧州特許第０８３５３１８号；同第０７３５８９８号；および同第０７６１２３１号参照）；（６）１０％ スクアレン、０．４％トゥイーン８０、５％プルロニックブロックポリマーＬ１２１、およびサブミクロン乳剤にマイクロフルイダイズされるかまたはより大きな粒径の乳剤を生成するために渦攪拌されたｔｈｒ−ＭＤＰを含む、ＳＡＦ；（７）２％スクアレン、０．２％トゥイーン８０、およびモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）および細胞壁骨格（ＣＷＳ）から成る群からの１またはそれ以上の細菌細胞壁成分、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ（商標））を含有する、Ｒｉｂｉ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）；（８）１またはそれ以上の無機塩（アルミニウム塩など）＋ＬＰＳの非毒素誘導体（たとえば３ｄＰＭＬ）；（９）１またはそれ以上の無機塩（アルミニウム塩など）＋免疫刺激オリゴヌクレオチド（ＣｐＧモチーフを含むヌクレオチド配列など）。
【０２３１】
アルミニウム塩およびＭＦ５９は、注射用インフルエンザワクチンに関する使用のための好ましいアジュバントである。細菌毒素および生体接着剤は、鼻内ワクチンなどの経粘膜送達ワクチンに関する使用のための好ましいアジュバントである。
【０２３２】
６．投与
ひとたび製剤（および必要に応じて再懸濁）されれば、本発明のナノ粒子組成物は非経口的に、たとえば注射によって（無針でもよい）投与することができる。これに関して、ナノ粒子組成物は、再懸濁媒質（たとえば注射用蒸留水）を供給するためおよび生じた懸濁物を回収するための隔壁または他の適切な手段と共に供給される、バイアルまたは他の容器において凍結乾燥形態で供給され得る。適切な注射器も注射のために供給され得る。
【０２３３】
組成物は、たとえば皮下、皮内、筋肉内、静脈内、動脈内、または腹腔内経路で注入され得る。他の投与方法は、鼻、粘膜、眼内、直腸、膣、経口および肺投与、および経皮適用を含む。
【０２３４】
一部の実施形態では、本発明の組成物は部位指定標的送達のために使用できる。たとえば組成物の静脈内投与は、肺、肝臓、脾臓、血液循環または骨髄を標的するために使用できる。
【０２３５】
本発明のナノ粒子組成物は、一般に１またはそれ以上の医薬的に許容される賦形剤を含む。たとえば水、食塩水、グリセロール、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸、エタノール等のようなビヒクルを使用し得る。湿潤剤または乳化剤、生物学的緩衝物質等のような他の賦形剤も存在し得る。生物学的緩衝剤は、薬理的に許容され、所望ｐＨ、すなわち生理的範囲内のｐＨを有する製剤を提供する、実質上いかなる溶液でもあり得る。例は、食塩水、リン酸緩衝食塩水、トリス緩衝食塩水、ハンクス緩衝食塩水等を含む。最終投与形態に依存して、結合剤、崩壊剤、充填剤（希釈剤）、潤滑剤、流動促進剤、圧縮補助剤、着色料、甘味料、防腐剤、懸濁化／分散剤、薄膜形成剤／被覆剤、着香料および印刷インクを含む、当技術分野で公知の他の賦形剤も導入できる。
【０２３６】
治療は、単回投与スケジュールまたは複数回投与スケジュールに従って実施し得る。複数回投与スケジュールは、最初の投与課程をたとえば１−１０回の別個の投与で実施し、その後、治療応答を維持するおよび／または増強するように選択される時間間隔を置いて、たとえば２回目の投与については１−４ヵ月後に、別途の投与を行い、必要に応じて数ヵ月後にその後の投与を実施するものである。投与計画はまた、少なくとも一部には、被験体の必要性によって決定され、医師の判断に依存する。
【０２３７】
さらに、疾患の予防を所望する場合、組成物は一般に、対象とする感染または疾患の一次発生の出現前に投与される。他の治療形態、たとえば症状または再発の軽減または排除を所望する場合は、組成物は一般に、対象とする感染または疾患の一次発生の出現後に投与される。
【０２３８】
７．キット
本発明は、被験体への適切な量の有効成分の投与を簡単にすることができるキットを含む。典型的な本発明のキットは、好ましくは密封容器中の、本発明の凍結乾燥ナノ粒子組成物の単位投与形態を含む。本発明のキットは、１またはそれ以上の有効成分を投与するために使用できる、医薬的に許容されるビヒクルをさらに含み得る。そこで、特定実施形態では、キットは、投与に適する微粒子不含無菌溶液を形成するためにナノ粒子組成物を溶解することができる適切なビヒクルの密封容器、および有効成分を投与するために使用できる装置をさらに含む。そのような装置の例は、注射器、点滴袋、パッチおよび吸入器を含むが、これらに限定されない。
【実施例】
【０２３９】
Ｃ．実験
以下は、本発明を実施するための特定実施形態の例である。これらの例は説明のためにのみ提供されるものであり、いかなる意味においても本発明の範囲を限定することは意図されていない。
【０２４０】
使用する数（たとえば量、温度等）に関しては正確さを保証するように努力を払ったが、ある程度の実験誤差および偏差は、言うまでもなく、許容されるべきである。
【０２４１】
スクロース、マンニトール、グルコース、トレハロース、デキストラン（分子量＝７０，０００）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）およびオボアルブミン、鶏卵の卵白（オボアルブミンまたはＯＶＡ）、ポリビニルピロリドン（分子量＝４０，０００）、カルボキシメチルセルロース（分子量＝９０，０００）、プルロニックＦ６８（ポロキサマー１８８としても知られる）、および他のすべての化学物質は、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）からであった。ポリビニルアルコール（分子量＝１５，０００）はＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ（現在はＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ）からであった。アセトンはＥＭＤ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）からであった。
【０２４２】
インフルエンザ抗原（ＦＩｕＣＣ）および髄膜炎菌血清型Ｂ抗原（ＭｅｎＢ ２８７）はＣｈｉｒｏｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓからであった。大腸菌由来の組換え髄膜炎菌血清型Ｂワクチン候補物質、ＭｅｎＢ ２８７（Ｃｈｉｒｏｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ，ＩＲＩＳ，Ｃｈｉｒｏｎ，Ｓ．ｒ．ｌ．，Ｓｉｅｎａ，Ｉｔａｌｙ）は、先に記述されているように（Ｍ．Ｃｏｍａｎｄｕｃｃｉら（２００２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９５：１４４５−１４５４）単離および精製した．ＧＢＳ１はＣｈｉｒｏｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓからであり、先に記述されているように（Ｄ．Ｍａｉｏｎｅら（２００５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３０９：１４８−１５０）同定し、精製した。
【０２４３】
（実施例１）
ナノ粒子およびミクロ粒子製剤
ナノ沈殿法（Ｆｅｓｓｉ，Ｈ．，Ｆ．ＰｕｉｓｉｅｕｘとＪ．Ｐ．Ｄｅｖｉｓｓａｇｕｅｔ，“Ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｓｐｅｒｓｉｂｌｅ ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｓｙｓｔｅｍｓ ｏｆ ａ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｒｍ ｏｆ ｎａｎｏｃａｐｓｕｌｅｓ，”Ｄｅｖｉｓｓａｇｕｅｔらの米国特許第５，０４９，３２２号に対応する、欧州特許第０２７４９６１Ｂ１号参照）により、粒径１００ｎｍ−５００ｎｍの範囲にわたる粒子を作製した。詳細には、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍより入手可能な、５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および〜３０ｋＤａの分子量を有するＰＬＧポリマー、ＲＧ５０３をアセトン（０．５％ｗ／ｖ）に溶解し、この溶液を６００ｒｐｍで磁気攪拌しながら等容量の水に滴下して、アセトンを蒸発させることにより、〜１００−〜１２０ｎｍ粒子を作製した。Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍより入手可能な、７５：２５のラクチド／グリコリドモル比および〜２０ｋＤａの分子量を有するＰＬＧ、ＲＧ７５２も、１つの場合に使用した。
【０２４４】
種々の大きさのナノ粒子を、有機相中の初期ＰＬＧ濃度を調節することによってまたは溶媒をアセトンからＴＨＦに切り替えることによって作製した。ＰＬＧ濃度の上昇は粒径を上昇させ、アセトンからＴＨＦへの切り替えも粒径を上昇させた。様々な大きさのナノ粒子の調製を可能にするパラメータを論じたいくつかの文献報告がある（Ｐ．Ｄ．Ｓｃｈｏｌｅｓら（１９９３）Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ ２５：１４５−１５３；Ｌ．Ｐｅｌｔｏｎｅｎら（２００２）ＡＡＰＳ ＰｈａｒｍＳｃｉＴｅｃｈ ３：Ｅ３２；Ｐ．Ｗｅｈｒｌｅら（１９９５）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．４１：１９−２６）。たとえば微小粒子（〜１２０ｎｍ）は、水２５ｍＬを添加したアセトン中の０．５％（ｗ／ｖ）ＰＬＧ２５ｍＬで調製した。中間サイズの粒子（〜１８０ｎｍ）は、水２５ｍＬを添加したテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中の０．５％（ｗ／ｖ）ＰＬＧ２５ｍＬで作製した。大型粒子（〜２３０ｎｍ）は、水４０ｍＬを添加したアセトン中の４％（ｗ／ｖ）ＰＬＧ１２．５ｍＬで調製した。
〜１μｍの大きさの、０．０５％スルホコハク酸ジオクチルナトリウム（ＤＳＳ）を有するミクロ粒子を、ナノ粒子調製法とは有意に異なる、これまでに確立されている二重乳化溶媒蒸発法（Ｓｉｎｇｈ，Ｍ．ら（２００４）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，９３（２）：２７３−２８２）によって調製した。詳細には、水／油／水乳剤手法を使用してミクロ粒子を形成した。ＰＬＧをジクロロメタン（ＤＣＭ）（６％ｗ／ｖ）に溶解し、リン酸緩衝食塩水の水相（１：４ 水：油）（ｖ：ｖ）に添加して、２分間均質化した。この油中水型乳剤を、次に、ＤＳＳを含む水（１：４ 油中水型乳剤：水）（ｖ：ｖ）に添加し、氷浴にて高速で１０分間均質化した。生じた懸濁物を磁気攪拌してＤＣＭを蒸発させた。ミクロ粒子は、０．８３μｍ（Ｄ（容積、５０％））および１．２４μｍ（Ｄ（容積、９０％））の平均粒径を有していた。
【０２４５】
ミクロ粒子と比較してナノ粒子の１つの利点は作製の容易さであった。ナノ粒子法は、単一相に基づき、高せん断均質化を必要とせず、磁気攪拌しか必要としなかった。２つの方法で使用される有機溶媒の種類は異なっていた。ミクロ粒子法ではより毒性のＤＣＭが使用されるのに比べて、ナノ粒子法はアセトンを使用した。食品医薬品局（ＦＤＡ）はＤＣＭをクラス２溶媒と分類し、医薬品におけるその使用を制限している。アセトンはクラス３溶媒であり、ＦＤＡは許容残留溶媒の量により高い制限を与えている。
【０２４６】
（実施例２）
ナノ粒子の滅菌ろ過
先に示したように、より小さなナノ粒子の１つの利点は、それらが粒子作製後に滅菌ろ過できることである。この実施例では、ナノ粒子を１１０−２３０ｎｍの範囲内で作製し、Ｐａｌｌ Ａｃｒｏｄｉｓｃ ０．２μｍフィルターで滅菌ろ過した。ナノ粒子の大きさは、５００ｎｍ以下の粒子についてはＺｅｔａｓｉｚｅｒ ３０００ＨＳＡ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ＵＫ）で測定した。より大きな粒子および凝集物はＨｏｒｉｂａ ＬＡ−９３０（Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）で測定した。この装置は粒径を測定するために静的光散乱に基づき、一方Ｚｅｔａｓｉｚｅｒは、より小さな粒子を検出するために動的光散乱を使用した。
【０２４７】
ζ電位は、特定希釈剤中０．２ｍｇ／ｍｌＰＬＧの典型的希釈濃度でＺｅｔａｓｉｚｅｒによって測定した。１２０ｎｍナノ粒子に関して、１０ｍＭクエン酸ナトリウム中のζ電位は−３９ｍＶであり、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ＝７．０中では−４８ｍＶであった。ζ電位は陰イオン性ＰＬＧに関して予想された範囲内であった。
【０２４８】
凍結乾燥した各々の試料１ｍＬをあらかじめ計量したバイアルに入れて、滅菌ろ過の前および後にＰＬＧ濃度を測定し、残存する質量によってＰＬＧ含量を決定した。一般に、より小さなナノ粒子（〜１２０ｎｍ）だけが滅菌ろ過前の値に匹敵するＰＬＧ濃度を有しており、実質的に粒径の変化は認められなかった。表１参照。滅菌ろ過したナノ粒子の内毒素レベル（ＬＡＬ）は０．４８−０．９６ＥＵ／ｍＬの範囲内であった。表からわかるように、小さなミクロ粒子（〜１２０ｎｍ）だけが滅菌ろ過前の値に匹敵するＰＬＧ濃度を有しており、粒径の変化はなかった。滅菌ろ過した１８１ｎｍ粒子の大きさは測定されなかった。
【０２４９】
【表１】
（実施例３）
凍結乾燥後のナノ粒子の再懸濁
ミクロ粒子と比較してナノ粒子の１つの不利な点は、凍結乾燥後、それらが必ずしも凍結前の大きさに再懸濁しないことである。本実施例では、界面活性剤および／または凍結保護剤を、凍結乾燥の直前にナノ粒子懸濁物にピペットで分注した。懸濁物をガラスバイアルに入れ、−８０℃で３０分間凍結した。凍結乾燥は、−４９℃および１３３×１０−３ｍＢａｒ未満の真空で操作する、Ｌａｂｃｏｎｃｏ Ｆｒｅｅｚｅ Ｄｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｆｒｅｅｚｏｎｅ ４．５（Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ，ＭＯ，ＵＳＡ）において実施した。凍結乾燥後、ナノ粒子５−１０ｍｇを水１ｍｌに再懸濁し、粒径を測定した。ナノ粒子の粒径測定前に、試料を２ｍＬ中５０μｌに希釈した。
【０２５０】
以下の表２からわかるように、許容されない粒径上昇を伴わずに（たとえば有意の凝集を伴わずに）、凍結乾燥ナノ粒子が再懸濁されることを可能にする賦形剤を添加することができる。たとえばナノ粒子を再懸濁するために界面活性剤が使用できる（たとえばＰＶＡ、１３１％ｗ／ｗ（ｗＰＶＡ／ｗＰＬＧ）、さらに、界面活性剤と凍結保護剤の組合せを使用することによって界面活性剤の量を低減することができる。そのような製剤の例は、３％（ｗ／ｖ）スクロースおよび４％（ｗ／ｖ）マンニトールと１０％（ｗ／ｗ）ＰＶＡ、５％（ｗ／ｖ）トレハロースおよび２．５％（ｗ／ｖ）マンニトールと１０％（ｗ／ｗ）ＰＶＡ、および５％（ｗ／ｖ）トレハロースおよび２．５％（ｗ／ｖ）マンニトールと０．５％（ｗ／ｗ）ＤＳＳを含む。
【０２５１】
【表２】
より詳細には、糖単独はナノ粒子凝集を生じさせた。界面活性剤単独（すなわちＰＶＡ）はナノ粒子再懸濁を可能にした。改善された再懸濁結果が、糖と界面活性剤を含む製剤で達成された。糖は、凍結乾燥ワクチン製剤のために付加的に２つの重要な機能を果たす。タンパク質抗原に関して、スクロースおよびトレハロースは、凍結乾燥工程の間タンパク質を安定化するのを助けることが示された（Ｊ．Ｆ．Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら（１９９７）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１４：９６９−９７５）。マンニトールは、凍結乾燥工程の間ケークの崩壊を回避するための足場として使用される充填剤である（Ｘ．ＴａｎｇとＭ．Ｊ．Ｐｉｋａｌ（２００４）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２１：１９１−２００）。適切な糖、たとえばスクロースとマンニトールまたはトレハロースとマンニトールの添加により、必要とされるＰＶＡの量が１０％（ｗ／ｗ）に低減された。１０−２０ｍｇ／ｍＬＰＬＧを含む典型的製剤に関して、これは１−２ｍｇ／ｍＬＰＶＡに等しい。１０％（ｗ／ｗ）ＣＭＣ、ＰＶＰまたはプルロニックＦ６８およびスクロースとマンニトールに関しては、粒子は凝集した。糖の組合せと濃度は、等張性必要条件を満たし、凍結乾燥後に洗練されたケークを形成し、タンパク質抗原を安定するのに役立つ。ワクチン生成物の浸透圧モル濃度は、２８０−３３０ｍＯｓｍ／Ｌの範囲内であるべきである。ＰＶＡと共に使用したスクロースとマンニトールまたはトレハロースとマンニトールの濃度は、適切な浸透圧モル濃度範囲内であり、初期液体容積と同じ大きさの凍結乾燥を導く。ＤＳＳも、トレハロースとマンニトール中、十分な濃度で適切な再懸濁を提供することが認められた。
【０２５２】
大型（２２１ｎｍ）および小型（１２２ｎｍ）ナノ粒子をまた、様々な濃度のＰＶＡ（ｗ／ｗＰＬＧ）プラス４％スクロース（ｗ／ｖ）および３％マンニトール（ｗ／ｖ）を使用した再懸濁後に分析した。ＰＬＧ含量は５ｍｇ／ｍＬであった。ペレットに結合したポリビニルアルコール（ＰＶＡ）の量と溶液中の遊離ＰＶＡの量を、最初に遠心分離によって（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ５４１５Ｄ、１３２００ｒｐｍで２０分間）懸濁物の固相を分離し、上清画分を取り出すことによって測定した。両方の混合物を２Ｎ ＮａＯＨ中で一晩加水分解し、ｐＨを中和して、先に述べられている方法（Ｊ．Ｈ．Ｆｉｎｌｅｙ（１９６１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．３３：１９２５−１９２７）；Ｅ．Ａｌｌｅｍａｎｎら（１９９８）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．３４：１７１−１８９）に従って透明な溶液のアリコートを分析した。前記方法では、試験溶液０．２ｍＬを４％ｗ／ｗホウ酸１．００ｍＬおよびヨウ素溶液（１．２７％ｗ／ｗＩ２および２．５％ｗ／ｗＫＩ）０．２０ｍＬと混合し、吸光度を６４４ｎｍで読み取って、直線性＞０．９９５（Ｒ２）を有する検量曲線と比較した。
【０２５３】
結果を表３に示す。理論に縛れるのは望むところではないが、より小さなナノ粒子を再懸濁するために必要とされる付加的なＰＶＡは、おそらく、主としてより大きなナノ粒子と比較したときのそれらの大きな表面積によるものと考えられるが、表面と溶液の間でのＰＶＡの分配による作用も存在した可能性がある。
【０２５４】
【表３】
（実施例３）
ナノ粒子およびミクロ粒子に関するタンパク質吸着効率
同じ粒子質量に関して、ナノ粒子はミクロ粒子に比べてはるかに大きな表面積を有する。この場合、ナノ粒子は、１μｍミクロ粒子と比較してより効率的な粒子質量当たりのタンパク質負荷を可能にする。これは、より少ないＰＬＧで（およびその結果としてより少ない総界面活性剤で）同じ量のタンパク質抗原の送達を可能にする。
【０２５５】
モデル抗原であるウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を、適切な緩衝液と共にナノ粒子またはミクロ粒子懸濁物に添加し、実験室用揺動器（ｌａｂ ｒｏｃｋｅｒ）にて４℃で一晩攪拌した。ナノ粒子を遠心分離によって分離した。ペレットを０．２Ｎ ＮａＯＨにて２５℃で一晩加水分解した。上清中および加水分解したペレット中のタンパク質濃度をＢＣＡ（商標）アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡより）によって定量した。図１に示すように、ＢＳＡは、２４時間の吸着後、２つのｐＨ値で、ミクロ粒子と比較してナノ粒子への高い負荷効率を示した。高い負荷効率は、ミクロ粒子についての１．５％（ｗＢＳＣ／ｗＰＬＧ）の最大負荷と比較して、ナノ粒子への３．５％までの吸着（ｗＢＳＡ／ｗＰＬＧ）を可能にした。
【０２５６】
この吸着増強は、ミクロ粒子は基本的に吸着に抵抗性であるが、ナノ粒子は有意の吸着が起こることを可能にする、ｐＨ＝７で特に著明であった。それ故、ナノ粒子は、さもなければ不利な条件下で有意の吸着を可能にしたことがわかる。これは、たとえば、数ある理由の中でも特に、抗原安定性を高めるために、ｐＨを特定の値に設定する必要がある粒子製剤のために有用であり得る。
【０２５７】
髄膜炎菌血清型Ｂからの抗原（すなわちＭｅｎＢ ２８７）も、ナノ粒子とミクロ粒子に吸着させた。特に、ＭｅｎＢ ２８７抗原を、ｐＨ＝５．０の１０ｍＭクエン酸緩衝液中のナノ粒子またはミクロ粒子懸濁物に添加し、実験室用揺動器にて４℃で一晩攪拌した。粒子を遠心分離によって分離した。ペレットを０．２Ｎ ＮａＯＨにて２５℃で一晩加水分解した。上清中および加水分解したペレット中のタンパク質濃度をＢＣＡ（商標）アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ）によって定量した。図２からわかるように、ＢＳＡに関して、ナノ粒子はミクロ粒子に比べてＭｅｎＢ ２８７の高い吸着を示した。
【０２５８】
抗原吸着後の再懸濁と凍結乾燥も、本発明の一部の組成物の重要な特徴であった。この実施例では、タンパク質、詳細にはＢＳＡ、オボアルブミン、ＦｌｕＣＣ、ＭｅｎＢ ２８７、ＭｅｎＢ ２８７またはＧＢＳ１を、ｐＨ５のヒスチジン緩衝液中のナノ粒子懸濁物に添加し、実験室用揺動器にて４℃で一晩攪拌した。初期粒径は〜１２０ｎｍであった。界面活性剤および凍結保護剤を表３に従って添加し、混合物を凍結乾燥した。凍結乾燥後、ナノ粒子５−１０ｍｇを水１ｍｌ中に再懸濁し、粒径測定した。ナノ粒子を遠心分離によって分離した。上清中に残存する（吸着されなかった）量を、２１４ｎｍの吸光度でＨＰＬＣサイズ排除クロマトグラフィーによって測定した。表４からわかるように、吸着タンパク質を有するナノ粒子はそれらの小さなサイズを実質的に保持しており、１％（ｗ／ｗ）および５％（ｗ／ｗ）の標的負荷に関して高いタンパク質吸着効率を有する。
【０２５９】
【表４】
凍結乾燥後にナノ粒子に結合していたタンパク質の量（吸着されたタンパク質の％）は高く、タンパク質濃度の作用の検査において７１％から１００％の範囲であり、タンパク質負荷レベル（ｗタンパク質／ｗＰＬＧ）が高いほどより容易に再懸濁されることが認められた。ＰＶＡ賦形剤混合物はより低い負荷レベルでＭｅｎＢ ２８７抗原を有するナノ粒子を再懸濁し、ＤＳＳ賦形剤混合物は再懸濁しなかった。同様に、ＧＢＳ１抗原についても、ＤＳＳ賦形剤混合物はより高い５％タンパク質負荷製剤を再懸濁したが、より低い１％負荷製剤は再懸濁しなかった。ＢＳＡは低負荷および高負荷の両方で再懸濁した。タンパク質吸着に関する再懸濁は、それ故、タンパク質依存性であると思われ、各々のタンパク質抗原に関して評価することができる。１つの組合せが特定タンパク質に関して十分でない場合は、多数の異なる賦形剤の組合せのアベイラビリティーが柔軟性を提供する。
【０２６０】
（実施例４）
インビボ試験
ミクロ粒子懸濁物を実施例１で前述したように調製した。以下の表５および６の群３−６および９−１２に関しては、ＭｅｎＢ ２８７を、ｐＨ５．５の１０ｍＭヒスチジン緩衝液中１％または５％（ｗ２８７／ｗＰＬＧ）の標的負荷でミクロ粒子またはナノ粒子懸濁物に添加し、実験室用揺動器にて４℃で一晩攪拌した。界面活性剤および凍結保護剤を添加し、混合物を凍結乾燥した。
【０２６１】
群３および９に関しては、ＭｅｎＢ ２８７は、界面活性剤として初期粒子試料からの０．０５％ＤＳＳ（ｗ／ｗＰＬＧ）および凍結保護剤として４％スクロース（ｗ／ｖ）および３％マンニトール（ｗ／ｖ）だけで１％（ｗ２８７／ｗＰＬＧ）吸着された。群４および１０に関しては、ＭｅｎＢ ２８７は、１０％ＰＶＡ（ｗＰＶＡ／ｗＰＬＧ）プラス４％スクロース（ｗ／ｖ）および３％マンニトール（ｗ／ｖ）の添加により１％（ｗ２８７／ｗＰＬＧ）吸着された。群５および１１に関しては、ＭｅｎＢ ２８７は、０．５％ＤＳＳ（ｗＤＳＳ／ｗＰＬＧ）プラス５％トレハロース（ｗ／ｖ）および２．５％マンニトール（ｗ／ｖ）の添加により５％（ｗ２８７／ｗＰＬＧ）吸着された。群６および１２に関しては、ＭｅｎＢ ２８７は、１０％ＰＶＡ（ｗＰＶＡ／ｗＰＬＧ）プラス４％スクロース（ｗ／ｖ）および３％マンニトール（ｗ／ｖ）の添加により５％（ｗ２８７／ｗＰＬＧ）吸着された。凍結乾燥後、それぞれＭｅｎＢ ２８７ １μｇおよび１０μｇの総用量に相当するミクロ粒子を注射用蒸留水１．２ｍｌで再溶解した。再溶解した試料を、ナノ粒子についてはＺｅｔａｓｉｚｅｒ ３０００ＨＳＡで、およびミクロ粒子についてはＨｏｒｉｂａ ＬＡ ９３０で粒径測定した。結果を表５に示す。
【０２６２】
群２および８については、免疫の直前にＭＦ５９乳剤（Ｃｈｉｒｏｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ）を２×ＰＢＳおよびＭｅｎＢ ２８７ １μｇまたは１０μｇのいずれかと混合した。
【０２６３】
群１および７に関しては、ＭｅｎＢ ２８７を、ｐＨ５．５の１０ｍＭヒスチジン緩衝液プラス９ｍｇ／ｍＬ ＮａＣｌ中の水酸化アルミニウム（Ｃｈｉｒｏｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ）に添加し、２ｍｇ／ｍＬのミョウバン濃度で実験室用揺動器にて４℃で一晩攪拌した。
【０２６４】
すべての群について、０、２１および３５日目に１０匹の雌性ＣＤ−１マウスの群に試料を筋肉内注射した。群３−６および９−１２に関しては、凍結乾燥ミクロ粒子またはナノ粒子を注射用蒸留水で再溶解した。群１、２、７および８は上記のように使用した。４９日目に、血清ＥＬＩＳＡ力価（ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ）をＳｉｎｇｈ，Ｍ．ら（２００４）（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９３（２）：２７３−２８２）に述べられているように分析し、血清殺菌活性（ＳＢＡ）をＰｉｚｚａ，Ｍ．ら（２０００）（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７（５４５９）：１８１６−１８２０）に述べられているように分析した。２９９６は、ＳＢＡ分析のために使用したＭｅｎＢの菌株であった。結果を以下の表６に示す。
【０２６５】
インビボ試験は、ナノ粒子とミクロ粒子が、血清力価およびＳＢＡに基づき両方の用量に関して同等であることを明らかにする。高用量のＭＦ５９は、ＩｇＧに関して他のすべての群と有意に異なる（不等分散を仮定した両側スチューデントｔ検定でｐ＜０．０５）。群１および４のＩｇＧ力価は群６と有意に異なったが（不等分散を仮定した両側スチューデントｔ検定でｐ＜０．０５）、この結果は、試験のより重要なエンドポイントであるＳＢＡには当てはまらない。
【０２６６】
【表５】
＊粒径は凍結乾燥後である。
【０２６７】
【表６】
本発明の好ましい実施形態を少し詳しく説明したが、本発明の精神と範囲から逸脱することなく明らかな変更を行い得ることは了解される。
【図面の簡単な説明】
【０２６８】
【図１】図１は、ｐＨ＝５およびｐＨ＝７でのＰＬＧミクロ粒子およびナノ粒子へのＢＳＡ負荷のグラフを示す。
【図２】図２は、ｐＨ＝５でのＰＬＧミクロ粒子およびナノ粒子へのＭｅｎＢ ２８７負荷のグラフを示す。
【技術分野】
【０００１】
（関連出願についての陳述）
この出願は、２００５年１２月２日に出願された、表題「Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ Ｆｏｒ Ｕｓｅ Ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ」の米国仮特許出願第６０／７４１，８６０号の利益を主張する。この出願はまた、２００６年２月２１日に出願された、表題「Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ Ｆｏｒ Ｕｓｅ Ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ」の米国仮特許出願第６０／７７５，２６５号の利益を主張する。これらの先の出願の両方は、その全体が参考として本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
微粒子担体は、適切な免疫応答を惹起することを目指して吸着または捕獲抗原と共に使用されてきた。そのような担体は、選択抗原の多数のコピーを免疫系に提示し、局所リンパ節における抗原の捕捉と保持を促進すると考えられている。粒子はマクロファージによって貪食されることができ、サイトカイン放出を通して抗原提示を増強し得る。
【０００３】
たとえば所有者が共通する特許文献１および同時継続出願の特許文献２は、細胞媒介性免疫応答を含む免疫応答を刺激するための抗原吸着および抗原被包ミクロ粒子の使用、ならびにミクロ粒子を作製する方法を述べている。ミクロ粒子を形成するために使用されるポリマーは、ポリ（ラクチド）およびポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）を含む。
【０００４】
所有者が共通する特許文献３および特許文献４および特許文献５は、ポリヌクレオチドおよびポリペプチド抗原を含む、高分子が吸着されたミクロ粒子を作製する方法を開示する。ミクロ粒子は、たとえば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）（たとえばＰＬＧ、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物等）などのポリマーを含み、たとえば陽イオン、陰イオンまたは非イオン界面活性剤を使用して形成される。ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を含むＰＬＧミクロ粒子などの、陰イオン界面活性剤を含むミクロ粒子は、ポリペプチドなどの正に荷電した高分子と共に使用できる。ＣＴＡＢ（セトリミドまたは臭化セチルトリメチルアンモニウムとしても知られる）を含むＰＬＧミクロ粒子などの、陽イオン界面活性剤を含むミクロ粒子は、ＤＮＡなどの負に荷電した高分子と共に使用できる。細胞媒介性免疫応答を含む免疫応答を刺激するためのそのようなミクロ粒子の使用も開示されている。
【特許文献１】国際公開第９８／３３４８７号パンフレット
【特許文献２】米国特許出願公開第２００３／００４９２９８号明細書
【特許文献３】国際公開第００／０６１２３号パンフレット
【特許文献４】国際公開第０１／３６５９９号パンフレット
【特許文献５】米国特許第６，８８４，４３５号明細書
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（要旨）
１つの態様では、本発明は、少なくとも１つの生分解性ポリマー、少なくとも１つの界面活性剤、少なくとも１つの凍結保護剤および少なくとも１つの抗原を含む滅菌凍結乾燥ナノ粒子組成物を提供する。
【０００６】
一部の実施形態では、凍結乾燥粒子は、２５０ｎｍ未満、たとえば２５０ｎｍ−２００ｎｍ−１５０ｎｍ−１００ｎｍまたはそれ以下の範囲にわたるＺ平均またはＤ（ｖ，０．５）値を有する。
【０００７】
そのような組成物は、たとえばそれらが免疫原性であることおよび容易にナノ粒子懸濁物を形成するという点で有用である。たとえば本発明の凍結乾燥ナノ粒子組成物を０．００５ｇ／ｍｌ（５−１０ｍｇ／ｍｌの範囲）の濃度で蒸留水と混合したとき、免疫原性ナノ粒子懸濁物が自然に形成され、前記懸濁ナノ粒子のＺ平均またはＤ（ｖ，０．５）値は２５０ｎｍ未満、たとえば２５０ｎｍ−２００ｎｍ−１５０ｎｍ−１００ｎｍまたはそれ以下の範囲にわたる。
【０００８】
ある実施形態では、生分解性ポリマーは、たとえば、中でも特にポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリシアノアクリレート、およびそれらの組合せから選択される、合成生分解性ポリマーである。
【０００９】
凍結保護剤の例は、中でも特に、ポリオール、炭水化物およびそれらの組合せを含む。
【００１０】
界面活性剤の例は、中でも特に、非イオン界面活性剤、陽イオン界面活性剤および陰イオン界面活性剤を含む。
【００１１】
抗原は、たとえばナノ粒子の表面に吸着され得るか、ナノ粒子内に封入され得るかまたはその両方であり得る。抗原の例は、中でも特に、ポリペプチド含有抗原、多糖含有抗原、およびポリヌクレオチド含有抗原を含む。抗原は、たとえば腫瘍細胞、およびウイルス、細菌、真菌および寄生生物などの病原生物に由来し得る。
【００１２】
ある実施形態では、本発明の組成物は、たとえばナノ粒子の表面に吸着され得る、ナノ粒子内に封入され得る、またはその両方であり得る、免疫アジュバントなどの補助成分を含有し得る。補足免疫アジュバントの例は、中でも特に、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、二本鎖ＲＮＡ、大腸菌非耐熱性毒素、ミョウバン、リポ糖リン酸塩化合物およびリポ糖リン酸塩ミメティック（ｍｉｍｅｔｉｃ）を含む。
【００１３】
２つの抗原、２つの免疫アジュバント、あるいは１つの抗原と１つの免疫アジュバントを使用する場合、それらはたとえば、（ａ）ナノ粒子の同じ集団に吸着される、（ｂ）各々がナノ粒子の別々の集団に吸着される、（ｃ）１つがナノ粒子に吸着され、その他が溶液中に存在する、（ｄ）１つがナノ粒子に吸着され、その他がナノ粒子の同じ集団内に封入される、（ｅ）１つがナノ粒子の１番目の集団に吸着され、その他がナノ粒子の２番目の集団内に封入される、等であり得る。
【００１４】
他の態様では、本発明は、前記のようなナノ粒子組成物を生産する方法を提供する。
【００１５】
さらなる他の態様では、本発明は、ナノ粒子組成物を宿主動物に送達する（たとえば治療、予防または診断目的のため）方法を提供する。宿主動物は、好ましくは脊椎動物、より好ましくは哺乳動物、さらに一層好ましくはヒトである。本発明のナノ粒子組成物の送達は、何らかの公知の方法によって実施できる。
【００１６】
さらなる態様では、本発明は、本発明のナノ粒子組成物を含むキットを提供する。
【００１７】
発明の背景において上述したようなミクロ粒子に基づく技術と比較して、本発明の利点は、数ある中でも特に、作製の容易さ（たとえば高せん断均質化は必要なく、またナノ粒子は滅菌ろ過され得るので、ナノ粒子製造工程は厳格に無菌である必要はない）、およびより高レベルの抗原および他の種をナノ粒子の表面に吸着する能力を含む。
【００１８】
本発明のこれらや他の態様、実施形態および利点は、ここでの開示を考慮して当業者により容易に明らかになる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
（発明の詳細な説明）
本発明の実施は、異なる指示がない限り、技術水準内での、化学、高分子化学、生化学、分子生物学、免疫学および薬理学の従来の方法を使用する。そのような手法は文献において詳細に説明されている。たとえばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）；Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．ＣｏｌｏｗｉｃｋとＮ．Ｋａｐｌａｎ編集、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｗｅｉｒ，Ｄ．Ｍ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｉ−ＩＶ巻、第５版（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９６）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第３版（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２００１）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第５版（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２００２）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｄ Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｂｉｒｄｉ，Ｋ．Ｓ．編集、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９７）およびＳｅｙｍｏｕｒ／Ｃａｒｒａｈｅｒ’ｓ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第５版（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ．，２０００）参照。
【００２０】
上記または下記の、ここで引用するすべての公表文献、特許および特許出願は、それらの全体が参照によりここに組み込まれる。
【００２１】
本明細書および付属の特許請求の範囲において使用する、単数形態の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、その内容が明らかに異なる指示を与えない限り、複数の言及を包含する。それ故、たとえば「ナノ粒子」という用語は１またはそれ以上のナノ粒子を指す、等である。
【００２２】
異なる記述がない限りまたは文脈が明らかに異なる指示を与えない限り、ここでのすべてのパーセンテージおよび比率は重量ベースで与えられる。
【００２３】
Ａ．定義
本発明を説明するとき、以下の用語が使用され、以下で指示するように定義されるものとする。
【００２４】
ここで使用される「ナノ粒子」という用語は、直径１，０００ｎｍ未満の粒子を指す。本発明の組成物内のナノ粒子は、典型的には、Ｚ平均および／またはＤ（ｖ，０．５）値が２５０ｎｍ未満、より典型的には１５０ｎｍ未満であり、およびＺ平均および／またはＤ（ｖ，０．９）値が３５０ｎｍ未満、より典型的には２００ｎｍ未満である粒径分布を有する。
【００２５】
粒径は当技術分野で使用可能な方法を用いて測定することができる。たとえば粒径は、光子相関分光法、動的光散乱または準弾性光散乱を用いて測定できる。これらの方法は、ブラウン運動測定から得られる粒子の拡散特性と粒径の相関に基づく。ブラウン運動は、粒子を取り巻く溶媒分子による衝突に起因する粒子のランダムな運動である。粒子が大きいほど、ブラウン運動はより緩やかである。速度は並進拡散係数（Ｄ）によって定義される。測定される数値は、粒子が液体内でどのように運動するか（流体力学的直径）を表わす。得られる直径は、粒子と同じ並進拡散係数を有する球の直径である。
【００２６】
粒径はまた、単一時間に溶液中の粒子によって散乱される光の強度を測定する、静的光散乱を用いて測定することもできる。静的光散乱は、光強度を散乱角度と溶質濃度の関数として測定する。光源、たとえばレーザー光を通過する粒子は、それらの大きさに逆比例する角度で光を散乱させる。大きな粒子は高い強度を有する低散乱角度での回折パターンを生じ、一方小さな粒子は広い角度の低強度シグナルを生じる。試料から散乱される光の強度が角度の関数として測定される場合、粒径分布が算定できる。粒径分布を算定するために角度情報を散乱モデル（たとえばミー理論）と比較する。
【００２７】
一般に、粒径は室温で測定され、粒子直径についての平均値を求めるために対象とする試料の多数の分析（たとえば同じ試料に関して少なくとも３回の反復測定）を含む。
【００２８】
光子相関分光法に関して、Ｚ平均（キュミュラント平均または流体力学的直径とも呼ばれる）は、典型的にはキュミュラント（単峰性）分析から算定される。
【００２９】
静的光散乱測定に関して（および一部の実施形態では光子相関分光法に関しても）、容積に基づくサイズパラメータを測定し得る。たとえばＤ（ｖ，０．５）（ｖは容積を意味する）は、その数値が、測定したとき、組成物中の粒子の５０％（容積ベース）がＤ（ｖ，０．５）値未満の粒径を有し、および組成物中の粒子の５０％がＤ（ｖ，０．５）値より大きい粒径を有する点と定義されるサイズパラメータである。同様に、Ｄ（ｖ，０．９）は、その数値が、組成物中の粒子の９０％（容積ベース）がＤ（ｖ，０．９）値未満の粒径を有し、および組成物中の粒子の１０％がＤ（ｖ，０．９）値より大きい粒径を有する点と定義されるサイズパラメータである。
【００３０】
ここで定義する、「ナノ粒子懸濁物」は、ナノ粒子を含む液相である。「水溶液］は、水を含有する溶液、典型的には５０重量％以上の水、たとえば５０−７５−９０−９５重量％またはそれ以上の水を含む溶液である。「水性ナノ粒子懸濁物」は、ナノ粒子を含む水含有液相である。本発明に従った水性ナノ粒子懸濁物は、典型的には５０重量％以上の水、たとえば５０−７５−９０−９５重量％またはそれ以上の水を含む。
【００３１】
ここでの使用のためのナノ粒子は、典型的には、滅菌可能で、実質的に非毒性であり、生分解性であるポリマーから形成される。そのような材料は、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、およびポリシアノアクリレート（たとえばポリアルキルシアノアクリレートまたは「ＰＡＣＡ」）を含む。より典型的には、本発明に関する使用のためのナノ粒子は、ポリ（α−ヒドロキシ酸）から、たとえばポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）などのポリ（ラクチド）（「ＰＬＡ」、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（「ＰＬＧ」）などのラクチドとグリコリドのコポリマー、またはＤ，Ｌ−ラクチドとカプロラクトンのコポリマーから誘導されるポリマーナノ粒子である。ポリマーナノ粒子は、様々な分子量を有し、およびＰＬＧなどのコポリマーの場合は様々なモノマー（たとえばラクチド：グリコリド）比を有する、種々のポリマー出発物質のいずれかから誘導でき、その選択は、一部には同時投与される種に依存するが、主として選択の問題である。これらのパラメータを以下でさらに論じる。
【００３２】
「界面活性剤」という用語は、「表面活性物質」という語句に由来する。界面活性剤は界面（たとえば液体−液体、液体−固体および／または液体−気体界面）に蓄積し、その界面の性質を変化させる。ここで使用する、界面活性剤は、洗浄剤、分散剤、懸濁化剤、乳化安定剤等を包含する。
【００３３】
ここで定義する、「炭水化物」は、単糖、オリゴ糖および多糖、ならびにたとえば還元によって（たとえばアルジトール）、１またはそれ以上の末端基のカルボン酸への酸化によって（たとえばグルクロン酸）、あるいは水素原子またはアミノ基による１またはそれ以上のヒドロキシ基の置換によって（たとえばβ−Ｄ−グルコサミンおよびβ−Ｄ−ガラクトサミン）、単糖から誘導される物質を含む。
【００３４】
ここで使用する、「単糖」は、多価アルコール、すなわちアルデヒド基（この場合単糖はアルドースである）またはケト基（この場合単糖はケトースである）のいずれかをさらに含むアルコールである。単糖は、典型的には３−１０個の炭素を含む。さらに、単糖は一般に実験式（ＣＨ２Ｏ）ｎ［式中、ｎは３またはそれ以上の整数、典型的には３−１０である］を有する。炭素数３−６のアルドースの例は、グリセルアルデヒド、エリトロース、トレオース、リボース、２−デオキシリボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトースおよびタロースを含む。炭素数３−６のケトースの例は、ジヒドロキシアセトン、エリトルロース、リブロース、キシルロース、プシコース、フルクトース、ソルボースおよびタガトースを含む。天然に生じる単糖は、通常はＬ−形態ではなくＤ−異性体として認められる。
【００３５】
「オリゴ糖」は、比較的短い単糖ポリマー、すなわち２−３０の単糖単位を含むものを指す。「多糖」は、オリゴ糖の長さを超える（すなわち３０単糖単位以上を含むもの）単糖ポリマーである。さらに、ここで使用する、「多糖」という用語はまた、２またはそれ以上の連結された単糖を含む単糖ポリマーを指す。あいまいさを避けるため、２番目の定義は、矛盾する明白な指示がない限り、すべての場合に適用されるものとする。「多糖」という用語はまた、数ある中でも特に、アミノ官能基化およびカルボキシル官能基化多糖誘導体などの多糖誘導体を含む。単糖は、典型的にはグリコシド結合によって連結される。特定例は、二糖（スクロース、ラクトース、トレハロース、マルトース、ゲンチオビオースおよびセロビオースなど）、三糖（ラフィノースなど）、四糖（スタキオースなど）、および五糖（ベルバスコースなど）を含む。
【００３６】
ここで使用する、「糖」という用語は、単糖、オリゴ糖および多糖を包含する。「糖含有種」は、少なくともその一部が糖である分子である。例は、糖凍結保護剤、糖抗原、担体ペプチドに複合した糖を含む抗原等を包含する。
【００３７】
ここで使用する、「凍結保護剤」は、凍結および解凍時に有害な作用を受けることから組成物を保護する物質である。たとえば本発明では、本発明の凍結乾燥組成物を再懸濁したとき実質的なナノ粒子凝集が起こるのを防ぐために凍結保護剤を添加し得る。
【００３８】
「ポリヌクレオチド」は核酸ポリマーである。ここで使用する、「ポリヌクレオチド」は、わずかに５、６、７または８個のヌクレオチドを含み得る。
【００３９】
さらに、「ポリヌクレオチド」は二本鎖および一本鎖配列の両方を含むことができ、ウイルスからのｃＤＮＡ、原核生物または真核生物ｍＲＮＡ、ウイルスからのゲノムＲＮＡおよびＤＮＡ配列（たとえばＲＮＡおよびＤＮＡウイルスおよびレトロウイルス）または原核生物ＤＮＡ、および合成ＤＮＡ配列を指すが、これらに限定されない。この用語はまた、ＤＮＡおよびＲＮＡの公知の塩基類似体のいずれかを含む配列を包含する。この用語はさらに、たとえば核酸分子が抗原タンパク質をコードする場合、天然配列への、欠失、付加および置換（一般に本来は保存的）などの修飾を含む。これらの修飾は、部位指定突然変異誘発を通してのように、故意であり得るか、または抗原を産生する宿主の突然変異を通してのように、偶発的であり得る。
【００４０】
ここで定義する「オリゴヌクレオチド」は、５−１００、より好ましくは５−３０ヌクレオチドの範囲内の大きさを有するポリヌクレオチドである。
【００４１】
ここで使用する、「核酸」という語句は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはそれらから形成されるキメラを指す。
【００４２】
「ポリヌクレオチド含有種」は、少なくともその一部がポリヌクレオチドである分子である。例は、ＲＮＡベクター構築物、ＤＮＡベクター構築物等を含む。
【００４３】
「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指し、生成物の最小限の長さに限定されない。それゆえペプチド、オリゴペプチド、ダイマー、マルチマー等が定義に包含される。完全長タンパク質およびそのフラグメントの両方が定義に包含される。これらの用語はまた、たとえば、タンパク質が、免疫応答を惹起するまたはタンパク質が投与される被験体に治療作用を及ぼす能力を保持するように、天然配列への、欠失、付加および置換（一般に本来は保存的）などの修飾を含む。
【００４４】
「ポリペプチド含有種」は、少なくともその一部がポリペプチドである分子である。例は、ポリペプチド、糖タンパク質を含むタンパク質、輸送タンパク質に複合した糖抗原等を含む。
【００４５】
「薬剤」という用語は、抗生物質、抗ウイルス薬、増殖因子、ホルモン、抗原等のような生物学的に活性な化合物を指す。
【００４６】
「アジュバント」という用語は、抗原に対する免疫応答を高めるまたは多様化する免疫アジュバントを含むが、これらに限定されない、薬剤の作用を助けるまたは改変する物質を指す。それ故、免疫アジュバントは、抗原に対する免疫応答を増強することができる化合物である。免疫アジュバントは、体液性および／または細胞性免疫を増強することができる。
【００４７】
「抗原」により、抗原が提示されたとき細胞性抗原特異的免疫応答または体液性抗体応答を生じるように宿主の免疫系を刺激することができる１またはそれ以上のエピトープを含む分子が意味される。抗原は、単独でまたはもう１つ別の分子を組み合わせて存在するとき、細胞性および／または体液性応答を惹起することができる。
【００４８】
「エピトープ」は、その免疫学的特異性を決定する抗原分子または抗原複合体の部分である。エピトープは、本発明における抗原の定義の範囲内である。一般に、エピトープは、天然に生じる抗原ではポリペプチドまたは多糖である。人工抗原では、アルサニル酸誘導体などの低分子量物質であり得る。エピトープは、たとえば同種抗体またはＴリンパ球と、インビボまたはインビトロで特異的に反応する。選択的記述語は、抗原決定基、抗原構造群およびハプテン群である。
【００４９】
しばしば、エピトープは約５−１５アミノ酸を含む。所与のタンパク質のエピトープは、当技術分野において周知の、多くのエピトープマッピング手法を用いて同定される。たとえばＥｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第６６巻（Ｇｌｅｎｎ Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ編集、１９９６）Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ参照。たとえば線状エピトープは、たとえば固体支持体上で、タンパク質分子の部分に対応する多数のペプチドを同時に合成し、ペプチドを支持体に結合したままで、ペプチドを抗体と反応させることによって決定し得る。そのような手法は当技術分野で公知であり、たとえば米国特許第４，７０８，８７１号；Ｇｅｙｓｅｎら（１９８４）（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：３９９８−４００２）；Ｇｅｙｓｅｎら（１９８６）（Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：７０９−７１５）に述べられている。同様に、立体エピトープは、たとえばｘ線結晶学および二次元核磁気共鳴などにより、アミノ酸の空間立体配座を決定することによって容易に同定される。たとえばＥｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，前出参照。
【００５０】
ここで使用する「抗原」という用語は、サブユニット抗原、すなわち抗原が本来結合している全生物から離れた不連続な抗原、ならび死滅、弱毒化または不活性化細菌、ウイルス、寄生生物または他の病原体または腫瘍細胞の両方を表わす。抗イディオタイプ抗体などの抗体またはそのフラグメント、および抗原または抗原決定基を模倣し得る合成ペプチドミモトープも、ここで使用する抗原の定義に包含される。
【００５１】
同様に、核酸免疫適用などにおいて、インビボで免疫原性タンパク質または抗原決定基を発現するオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドも、ここでの抗原の定義に包含される。
【００５２】
さらに、本発明に関して、「抗原」は、そのタンパク質が免疫応答を惹起する能力を保持する限り、天然配列への、欠失、付加および置換（一般に本来は保存的）などの修飾を有するタンパク質を指す。これらの修飾は、部位指定突然変異誘発を通してのように、故意であり得るか、または抗原を産生する宿主の突然変異を通してのように、偶発的であり得る。
【００５３】
抗原または組成物に対する「免疫学的応答」または「免疫応答」は、被験体における、対象組成物中に存在する分子に対する体液性および／または細胞性免疫応答の発現である。本発明に関して、「体液性免疫応答」は、抗体分子によって媒介される免疫応答を指し、一方「細胞性免疫応答」は、Ｔリンパ球および／または他の白血球によって媒介されるものである。細胞性免疫の１つの重要な態様は、細胞傷害性Ｔ細胞（「ＣＴＬ」）による抗原特異的応答を含む。ＣＴＬは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）によってコードされ、細胞の表面で発現されるタンパク質に関連して提示されるペプチド抗原に対して特異性を有する。ＣＴＬは、細胞内微生物の細胞内破壊、またはそのような微生物に感染した細胞の溶解を誘導し、促進するのを助ける。細胞性免疫のもう１つの態様は、ヘルパーＴ細胞による抗原特異的応答を含む。ヘルパーＴ細胞は、その表面のＭＨＣ分子に関連してペプチド抗原を提示する細胞に対する非特異的エフェクター細胞の機能を刺激し、その活性を集中させるのを助けるように働く。「細胞性免疫応答」はまた、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞に由来するものを含む、活性化Ｔ細胞および／または他の白血球によって産生されるサイトカイン、ケモカインおよび他のそのような分子の産生を指す。
【００５４】
細胞性免疫応答を惹起する免疫原性組成物またはワクチンなどの組成物は、細胞表面でのＭＨＣ分子に関連する抗原の提示により脊椎動物被験体を感作する働きをし得る。細胞媒介性免疫応答は、それらの表面で抗原を提示する細胞または細胞の近くに向けられる。加えて、抗原特異的Ｔリンパ球は、免疫宿主の将来の防御を可能にするために生成され得る。
【００５５】
細胞媒介性免疫応答を刺激する特定抗原または組成物の能力は、リンパ球増殖（リンパ球活性化）アッセイ、ＣＴＬ細胞傷害性細胞アッセイなどの当技術分野で公知の多くのアッセイによって、または感作被験体における抗原に特異的なＴリンパ球を検定することによって、または抗原による再刺激に応答したＴ細胞によるサイトカイン産生の測定によって決定し得る。たとえばＥｒｉｃｋｓｏｎら（１９９３）（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：４１８９−４１９９）；Ｄｏｅら（１９９４）（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２３６９−２３７６）；および以下の実施例参照。
【００５６】
それゆえ、免疫学的応答は、たとえば以下の作用：Ｂ細胞による抗体の産生；および／または対象組成物またはワクチン中に存在する抗原（１またはそれ以上）を特異的に対象とするサプレッサーＴ細胞および／またはγδＴ細胞の活性化の１またはそれ以上を含み得る。これらの応答は、感染を中和する、および／または免疫宿主に対する防御を提供する抗体−補体または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する働きをし得る。そのような応答は、当技術分野で周知の、標準免疫検定法および中和アッセイ、たとえば放射免疫測定法およびＥＬＩＳＡを用いて測定できる。
【００５７】
本発明の免疫原性組成物は、異なる組成物において等量の抗原によって惹起される免疫応答より大きな免疫応答を惹起する能力を有するとき、「高い免疫原性」を示す。すなわち組成物は、たとえば組成物がより強力な免疫応答を生じさせるので、または抗原が投与される被験体において免疫応答を達成するためにより低用量の抗原しか必要としないため、「高い免疫原性」を示し得る。そのような高い免疫原性は、たとえば本発明の組成物と抗原対照を動物に投与し、２つの検定結果を比較することによって測定できる。
【００５８】
ここで使用する、「治療」（その様々な変形、たとえば「治療する」または「治療される」を含む）は、（ｉ）問題の病原体または疾患（たとえば癌または伝統的なワクチンにおけるように、病原菌感染）の予防、（ｉｉ）症状の軽減または排除、および（ｉｉｉ）問題の病原体または疾患の実質的または完全な排除のいずれかを指す。治療は、予防的に（問題の病原体または疾患の出現以前に）または治療的に（問題の病原体または疾患の出現後に）実施され得る。
【００５９】
本発明の免疫原性組成物の「有効量」または「医薬的に有効な量」という用語は、ここでは対象とする状態を治療するまたは診断するために十分な免疫原性組成物の量を指す。必要とされる正確な量は、数ある因子の中でも特に、たとえば被験体の種、年齢および全般的状態；治療される状態の重症度；対象とする特定抗原；免疫学的応答の場合は、たとえば抗体を合成する被験体の免疫系の能力および所望する防御の程度；および投与方式に依存して、被験体ごとに異なる。個々の場合の適切な「有効」量は、当業者によって決定され得る。それゆえ「治療有効量」は、典型的には常套的治験を通して決定され得る比較的広い範囲に属する。
【００６０】
「脊椎動物被験体」または「脊椎動物」により、限定を伴わずに、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウマおよびヒトなどの哺乳動物；イヌおよびネコなどの愛玩動物；およびニワトリ、シチメンチョウおよび他の家禽を含むオンドリおよびメンドリなどの家禽、野鳥および狩猟鳥を含む鳥類を含む、脊索動物亜門の何らかの成員が意味される。この用語は特定の年齢を意味しない。それ故成体および新生児動物の両方が含まれる。
【００６１】
「医薬的に許容される」または「薬理的に許容される」により、生物学的に有害でない物質、すなわち物質が、個体において過度の望ましくない生物学的作用を引き起こさずにまたは含有される組成物の成分のいずれかと過度に有害に相互作用せずに個体に投与され得ることが意味される。
【００６２】
「賦形剤」という用語は、最終投与形態中に存在し得る基本的に付属的な物質を指す。たとえば「賦形剤」という用語は、ビヒクル、結合剤、崩壊剤、充填剤（希釈剤）、潤滑剤、流動促進剤、圧縮補助剤、着色料、甘味料、防腐剤、懸濁化／分散剤、薄膜形成剤／被覆剤、着香料および印刷インクを含む。
【００６３】
「生理的ｐＨ」または「生理的範囲内のｐＨ」により、約７．２−８．０（両端を含む）の範囲内、より典型的には約７．２−７．６（両端を含む）の範囲内のｐＨが意味される。
【００６４】
ここで使用する、「ベクター構築物」という語句は、対象とする核酸配列または遺伝子の発現を指令することができる何らかの集合物（ａｓｓｅｍｂｌｙ）を指す。ベクター構築物は、典型的には転写プロモーター／エンハンサーまたは遺伝子座規定エレメント、または選択的スプライシング、ＲＮＡ核外輸送、メッセンジャーの翻訳後修飾またはタンパク質の転写後修飾などの他の手段によって遺伝子発現を制御する他のエレメントを含む。加えて、ベクター構築物は、典型的には、転写されたとき、対象配列または遺伝子に作動可能に連結され、翻訳開始配列として働く配列を含む。ベクター構築物はまた、場合によりポリアデニル化を指令するシグナル、選択マーカー、ならびに１またはそれ以上の制限部位および翻訳終結配列を含む。加えて、ベクター構築物がレトロウイルスに導入される場合、ベクター構築物は、パッケージングシグナル、ロングターミナルリピート（ＬＴＲ）、および使用されるレトロウイルスに適切な正鎖および負鎖プライマー結合部位を含み得る（これらが既に存在していない場合）。
【００６５】
「ＤＮＡベクター構築物」は、対象とする核酸配列または遺伝子の発現を指令することができるＤＮＡ分子を指す。
【００６６】
ＤＮＡベクター構築物の１つの特定型はプラスミドであり、プラスミドは、宿主細胞内で自律複製することができる環状エピソームＤＮＡ分子である。典型的には、プラスミドは、その中に付加的なＤＮＡセグメントを連結することができる環状二本鎖ＤＮＡループである。ｐＣＭＶは当技術分野において周知の１つの特定プラスミドである。好ましいｐＣＭＶベクターは、ＣＭＶの最初期エンハンサー／プロモーターおよびウシ成長ホルモンターミネーターを含む。特定例は、Ｃｈａｐｍａｎ，Ｂ．Ｓ．ら（１９９１）（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９：３９７９−３９８６）の中で詳細に述べられている。
【００６７】
他のＤＮＡベクター構築物は公知であり、それらはＲＮＡウイルスに基づく。これらのＤＮＡベクター構築物は、典型的には真核細胞において機能するプロモーター、転写産物がＲＮＡベクター構築物（たとえばアルファウイルスＲＮＡベクターレプリコン）であるｃＤＮＡ配列の５’末端領域、および３’末端領域を含む。ＲＮＡベクター構築物は、好ましくは、対象生成物をコードする選択された異種核酸配列による１またはそれ以上の構造タンパク質遺伝子の置換によって修飾された、ピコルナウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、コロナウイルス、パラミクソウイルス、黄熱病ウイルスまたはアルファウイルス（たとえばシンドビスウイルス、セムリキ森林ウイルス、ベネズエラウマ脳脊髄炎ウイルスまたはロスリバーウイルス）からのＲＮＡゲノムを含む。ＲＮＡベクター構築物は、ＤＮＡ鋳型からのインビトロ転写によって入手できる。特定例は、たとえば米国特許第５，８１４，４８２号および同第６，０１５，６８６号、ならびに国際公開公報第ＷＯ９７／３８０８７号、同第ＷＯ９９／１８２２６号および同第ＷＯ０２／２６２０９号に述べられている、ｐＳＩＮＣＰなどのシンドビスウイルスに基づくプラスミド（ｐＳＩＮ）を含む。そのようなベクターの構築は、一般に、米国特許第５，８１４，４８２号および同第６，０１５，６８６号に述べられている。
【００６８】
ベクター構築物の他の例は、ＲＮＡベクター構築物（（たとえばアルファウイルスベクター構築物）等を含む。ここで使用する、「ＲＮＡベクター構築物」、「ＲＮＡベクターレプリコン」および「レプリコン」は、インビボで、典型的には標的細胞内で、それ自身の増幅または自己複製を指令することができるＲＮＡ分子を指す。ＲＮＡベクター構築物は、細胞へのＤＮＡの導入および転写が起こる核内への輸送を必要とせずに、直接使用される。宿主細胞の細胞質への直接送達のためにＲＮＡベクターを使用することにより、異種核酸配列の自律複製と翻訳が効率的に起こる。
【００６９】
Ｂ．一般的方法
上述したように、本発明のナノ粒子組成物は、１またはそれ以上の生分解性ポリマー、１またはそれ以上の界面活性剤、１またはそれ以上の凍結保護剤、１またはそれ以上の抗原、および場合により１またはそれ以上の補助成分、たとえば、中でも特に、１またはそれ以上の免疫アジュバントを含む。
【００７０】
１．ナノ粒子組成物
ここで述べる免疫原性ナノ粒子組成物を形成するために有用なポリマーは、天然および合成の、ホモポリマー、コポリマーおよびポリマー混合物を含む。そのようなポリマーは、たとえば以下のものから誘導され得る：ポリヒドロキシ酪酸（ポリヒドロキシブチレートとしても知られる）；ポリヒドロキシ吉草酸（ポリヒドロキシバレレートとしても知られる）；ポリグリコール酸（ＰＧＡ）（ポリグリコリドとしても知られる）；ポリ乳酸（ＰＬＡ）（ポリラクチドとしても知られる）；ポリジオキサノン；ポリカプロラクトン；ポリオルトエステル；ポリシアノアクリレート、ポリ無水物；およびそれらの組合せ。ポリ（Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（どちらもここではＰＬＡと称する）、ポリ（ヒドロキシブチレート）などのポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ここでは「ＰＬＧ」と称する）などのラクチドとグリコリドのコポリマー、またはＤ，Ｌ−ラクチドとカプロラクトンのコポリマーがより典型的である。
【００７１】
上記ポリマーは様々な分子量で入手可能であり、所与の用途のための適切な分子量は当業者によって容易に決定される。そこで、たとえばＰＬＡについての適切な分子量は、約２，０００−５，０００であり得る。ＰＬＧについての適切な分子量は、約５，０００−約２００，０００の範囲であり得る。
【００７２】
コポリマーを使用する場合、様々なモノマー比のコポリマーが使用可能であり得る。たとえばナノ粒子を形成するためにＰＬＧを使用する場合、様々なラクチド：グリコリドのモル比がここで使用でき、その比率は、一部には同時投与される吸着および／または封入種および所望分解速度に依存するが、主として選択の問題である。たとえば５０％Ｄ，Ｌ−ラクチドと５０％グリコリドを含む５０：５０ＰＬＧポリマーはより速やかな吸収性コポリマーを提供し、一方７５：２５ＰＬＧはより緩やかに分解し、８５：１５および９０：１０は、ラクチド成分の上昇により、さらに一層緩やかに分解する。多様なラクチド：グリコリド比を有するナノ粒子の混合物も、所望放出速度を達成するためにここで使用され得る。本発明のナノ粒子の分解速度はまた、ポリマーの分子量およびポリマーの結晶度などの因子によっても制御できる。
【００７３】
ＰＬＧコポリマーが使用される場合、それらは典型的には、中でも特に、たとえば２０：８０−２５：７５−４０：６０−４５：５５−５５：４５−６０：４０−７５：２５−８０：２０の範囲にわたるラクチド／グリコリドモル比を有し、およびたとえば５，０００−１０，０００−２０，０００−４０，０００−５０，０００−７０，０００−１００，０００−２００，０００ダルトンの範囲にわたる分子量を有するＰＬＧコポリマーである。
【００７４】
多様なラクチド：グリコリド比と分子量を有するＰＬＧコポリマーは、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ，ＧｅｒｍａｎｙおよびＢｉｒｍｉｎｇｈａｍ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ，ＵＳＡを含む多くの供給源から市販のものを容易に入手し得る。一部の例示的なＰＬＧコポリマーは、（ａ）ＲＧ ５０２、５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および約１２，０００ダルトンの分子量を有するＰＬＧ；（ｂ）ＲＧ ５０３、５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および約３４，０００ダルトンの分子量を有するＰＬＧ；（ｃ）ＲＧ ５０４、５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および約４８，０００ダルトンの分子量を有するＰＬＧ；（ｄ）ＲＧ７５２、７５：２５のラクチド／グリコリドモル比および約２２，０００ダルトンの分子量を有するＰＬＧ；および（ｅ）ＲＧ７５５、７５：２５のラクチド／グリコリドモル比および約６８，０００ダルトンの分子量を有するＰＬＧを含む。ＰＬＧポリマーはまた、Ｔａｂａｔａら（１９８８）（Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．２２：８３７−８５８）に述べられているような当技術分野で周知の手法を使用して乳酸成分の簡単な重縮合によって合成できる。
【００７５】
本発明に従ったナノ粒子は、任意の適切な方法を用いて製造される。
【００７６】
たとえば溶媒置換法とも称されるナノ沈殿法は、本発明における使用のためのナノ粒子を形成するための適切な方法の一例である。たとえば“Ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｓｐｅｒｓｉｂｌｅ ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｓｙｓｔｅｍｓ ｏｆ ａ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｒｍ ｏｆ ｎａｎｏｃａｐｓｕｌｅｓ，”と題する欧州特許第０２７４９６１Ｂ１号、Ｄｅｖｉｓｓａｇｕｅｔら、同じ表題による米国特許第５，０４９，３２２号、およびＦｅｓｓｉら、米国特許第５，１１８，５２８号、“Ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｓｐｅｒｓｉｂｌｅ ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｓｙｓｔｅｍｓ ｏｆ ａ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｒｍ ｏｆ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ”参照。
【００７７】
本発明に適合させるときは、ポリマーを有機溶媒（たとえばアセトン、エタノール等のような親水性有機溶媒）に溶解する。生じた有機溶液を、有機溶媒と混和性であるがポリマーに対しては非溶媒であるさらなる溶媒、典型的には水溶液と組み合わせる。水溶液は、たとえば脱イオン水、生理食塩水、たとえばリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）またはクエン酸ナトリウム／エチレンジアミン四酢酸（クエン酸ナトリウム／ＥＤＴＡ）緩衝液などの、緩衝液であり得る。後者の溶液は、（ａ）通常の生理的液体と基本的に同じ張度、すなわち浸透圧を提供し、および（ｂ）通常の生理的条件と適合性のｐＨを維持することができる。特定実施形態では、本発明の組成物の張度および／またはｐＨ特徴はナノ粒子形成後に調整できる。
【００７８】
有機溶液と水溶液を、その後、適切な相対容積で（たとえば１：１０−１：５−１：２−１：１−２：１−５：１−１０：１、典型的には１：２−２：１、より典型的には約１：１）組み合わせる。たとえば有機溶液を、攪拌しながら非溶媒に注ぐまたは注入し得るか、またはその逆であり得る。ポリマーが有機溶媒には可溶性であるが、有機溶媒と非溶媒の混和性混合物には有意により難溶である系を選択することにより、ナノ粒子の懸濁物が実際上即座に形成され得る。その後、たとえば周囲条件下での蒸発または減圧下または高温下での蒸発によって、有機溶媒を懸濁物から除去できる。
【００７９】
有機溶媒、水溶液またはその両方が、所望に応じて様々な他の種も同時に含み得る。たとえば一部の実施形態では、１またはそれ以上の追加種をナノ粒子に封入することあるいは１またはそれ以上の追加種を粒子−液体界面で提供することが望ましい。そのような追加種は、たとえば抗原、界面活性剤、凍結保護剤、免疫アジュバント等を含み得る。これらの種は、典型的には（ａ）油溶性または油分散性形態であれば、有機溶液に、または（ｂ）水溶性または水分散性形態であれば、水溶液に添加される。
【００８０】
一部の実施形態では、１またはそれ以上の追加種は、ナノ粒子形成の後に（および典型的には有機溶媒の除去後、ならびに、実施される場合は、洗浄工程後に）添加される。たとえば張度またはｐＨを調整するための物質、抗原、界面活性剤、凍結保護剤、免疫アジュバント等が添加できる。しばしば、これらの追加種は水溶液または分散としてナノ粒子に添加される。これらの種は、たとえば溶液中に存在し得るか、または、たとえばナノ粒子表面に吸着されて（たとえば様々な抗原がナノ粒子表面に吸着される、下記の実施例参照）、粒子−溶液界面に蓄積し得る。吸着される種の含量は、標準的手法を用いて測定できる。
【００８１】
ひとたび所望組成物の懸濁物が提供されれば、そのまま使用し得るかまたはさらなる使用のために凍結乾燥し得る。
【００８２】
本発明に従った組成物は、ナノ粒子形成後に滅菌ろ過することができる。たとえば組成物は、ナノ粒子形成後のいずれの時点でも、たとえばナノ粒子形成後であるが免疫学的種（たとえば免疫アジュバントおよび／または抗原）の吸着前に、免疫学的種の吸着後で凍結乾燥の前等に滅菌ろ過することができる。
【００８３】
一般に、組成物内のミクロ粒子は、凍結乾燥の前および後に、２５０ｎｍ未満、たとえば２５０ｎｍ−２００ｎｍ−１５０ｎｍ−１００ｎｍまたはそれ以下の範囲にわたるＺ平均および／またはＤ（ｖ，０．５）サイズを有する。
【００８４】
一例としてＰＬＧを使用して形成されるナノ粒子を考慮すると、ミクロ粒子形成手法（たとえば前記の発明の背景の章で引用した参考文献およびＳｉｎｇｈ，Ｍ．ら（２００４）（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９３（２）：２７３−２８２）に述べられているもの）と比較して、本発明の手法にはいくつかの利点がある。最初の利点は製造の容易さである。ナノ粒子法は単一工程手法であり、高せん断均質化を必要とせず、磁気攪拌しか必要としない。加えて、ミクロ粒子製造工程全体が典型的には無菌であるが、ナノ粒子は、それらの小さなサイズの故に、粒子製造後に滅菌ろ過することができ、生産必要条件にはより厳密さが求められない。
【００８５】
さらに２つの方法に関して使用される有機溶媒の種類が異なる。ナノ粒子法はアセトンを使用して実施できるが、ミクロ粒子法は、典型的には溶媒としてジクロロメタン（ＤＣＭ）の使用を含む。米国食品医薬品局（ＦＤＡ）はＤＣＭをクラス２溶媒として分類しており、医薬品中に存在し得る許容される残留溶媒の量に制限を定めているが、アセトンは、ＦＤＡが許容量により高い制限を定めているクラス３溶媒である。
【００８６】
２．界面活性剤
上述したように、本発明における使用のための界面活性剤は、洗浄剤、分散剤、懸濁化剤、乳化安定剤等を含む。
【００８７】
界面活性剤は、陽イオン、陰イオンまたは非イオン界面活性剤を含む。陽イオン界面活性剤は、中でも特に、たとえば臭化セチルトリメチルアンモニウムまたは「ＣＴＡＢ」（たとえばセトリミド）、塩化ベンザルコニウム、ＤＤＡ（臭化ジメチルジオクタデシルアンモニウム）、およびＤＯＴＡＰ（ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン）を含む。陰イオン界面活性剤は、中でも特に、たとえばＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）、ＳＬＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）、ＤＳＳ（ジスルホスクシネート）、および硫酸化脂肪アルコールを含む。非イオン界面活性剤は、中でも特に、たとえばＰＶＡ（ポリビニルアルコール）、ポビドン（ポリビニルピロリドンまたはＰＶＰとしても知られる）、ソルビタンエステル、ポリソルベート、ポリオキシエチル化グリコールモノエステル、ポリオキシエチル化アルキルフェノール、およびポロキサマーを含む。
【００８８】
本発明に従った組成物は、極めて多様な量の界面活性剤を含み得る。一般に、界面活性剤の量は、許容されるナノ粒子懸濁（および凍結乾燥後の再懸濁）を促進するために有効である。界面活性剤対生分解性ポリマーの重量比は、数ある比率の中でも特に、たとえば０．００１：１未満から０．５：１またはそれ以上まで、たとえば０．００５：１−０．１：１の範囲にわたり得る。一般にイオン性界面活性剤は非イオン界面活性剤よりも低い比率で使用される。
【００８９】
３．凍結保護剤
上述したように、凍結保護剤は、本発明に従った凍結乾燥組成物を再懸濁したときに実質的なナノ粒子凝集が起こるのを防ぐために添加し得る。
【００９０】
一般的な凍結保護剤は、（ａ）中でも特にグルタミン酸およびアルギニンなどのアミノ酸；（ｂ）エチレングリコールなどのジオール、１，２−プロピレングリコールおよび１，３−プロピレングリコールなどのプロパンジオール、および、中でも特に２，３−ブチレングリコールなどのブタンジオール、中でも特にグリセロールなどのトリオール、ならびに他のより高いポリオールを含む、ポリオール；および（ｃ）たとえば（ｉ）単糖（たとえば、中でも特にグルコース、ガラクトースおよびフルクトース）、（ｉｉ）二糖（たとえば、中でも特にスクロース、ラクトース、トレハロース、マルトース、ゲンチオビオースおよびセロビオースなど）、三糖（たとえば、中でも特にラフィノース）、四糖（たとえば、中でも特にスタキオース）、および五糖（ベルバスコースなど）、ならびに数多くの他のより高い多糖を含む、多糖、および（ｉｉｉ）中でも特にキシリトール、ソルビトールおよびマンニトールなどのアルジトール（これに関して、アルジトールは炭水化物であると同時に、より高いポリオールである）、を含む炭水化物を包含する。
【００９１】
本発明に従った組成物は、本発明の凍結乾燥組成物を再懸濁したときに実質的なナノ粒子凝集が起こるのを防ぐために有効な量に依存して、極めて多様な量の凍結保護剤を含有し得る。界面活性剤対生分解性ポリマーの重量比は、中でも特に、たとえば０．０１：１未満から０．５：１またはそれ以上まで、たとえば０．０５：１−０．１：１の範囲にわたり得る。
【００９２】
４．抗原
本発明の組成物は、各々が有効量（たとえば本発明に従った治療、予防または診断方法における使用のために有効な量）である１またはそれ以上の抗原を含む。たとえば本発明の組成物は、以下に列挙する病原体のいずれかによって引き起こされる感染を治療するまたは予防するために使用し得る。
【００９３】
本発明に関する使用のための抗原は、以下に示す抗原、あるいは以下に示す病原体の１またはそれ以上に由来する抗原の１またはそれ以上を含むが、これらに限定されない。
【００９４】
Ａ．細菌抗原
本発明における使用に適する細菌抗原は、細菌から単離され得る、精製され得るまたは細菌に由来し得るタンパク質、多糖、リポ多糖および外膜小胞を含む。加えて、細菌抗原は細菌溶解産物および不活性化細菌製剤を含む。細菌抗原は組換え発現によって生産できる。細菌抗原は、好ましくはその生活環の少なくとも１つの段階の間に細菌の表面に曝露されるエピトープを含む。細菌抗原は、好ましくは多数の血清型にわたって保存されている。細菌抗原は、以下に示す細菌の１またはそれ以上に由来する抗原ならびに以下で特定する特異抗原の例を包含する。
【００９５】
髄膜炎菌：髄膜炎菌抗原は、Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙおよび／またはＢなどの髄膜炎菌血清群から精製されるまたはそれらに由来するタンパク質（国際公開公報第ＷＯ９９／２４５７８号；同第ＷＯ９９／３６５４４号；同第ＷＯ９９／５７２８０号；同第ＷＯ００／２２４３０号；Ｔｅｔｔｅｌｉｎら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７：１８０９−１８１５；国際公開公報第ＷＯ９６／２９４１２号；およびＰｉｚｚａら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７：１８１６−１８２０の中で特定されるものなど）、糖（多糖、オリゴ糖またはリポ多糖を含む）、または外膜小胞（国際公開公報第ＷＯ０１／５２８８５号；Ｂｊｕｎｅら（１９９１）Ｌａｎｃｅｔ ３３８（８７７５）：１０９３−１０９６；Ｆｕｓｋａｓａｗａら（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ １７：２９５１−２９５８；およびＲｏｓｅｎｑｉｓｔら（１９９８）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔｒａｎｄ ９２：３２３−３３３）を含む。髄膜炎菌タンパク質抗原は、接着タンパク質、自己輸送体、毒素、鉄獲得タンパク質、および膜関連タンパク質（好ましくは内在性外膜タンパク質）から選択できる。
【００９６】
肺炎連鎖球菌：肺炎連鎖球菌抗原は、肺炎連鎖球菌抗原からの糖（多糖またはオリゴ糖を含む）および／またはタンパク質を含む。糖抗原は、血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆから選択できる。タンパク質抗原は、国際公開公報第ＷＯ９８／１８９３１号；同第ＷＯ９８／１８９３０号；米国特許第６，６９９，７０３号；同第６，８００，７４４号；国際公開公報第ＷＯ９７／４３３０３号；および同第ＷＯ９７／３７０２６号において特定されるタンパク質から選択できる。肺炎連鎖球菌タンパク質は、ポリヒスチジントリアドファミリー（ＰｈｔＸ）、コリン結合タンパク質ファミリー（ＣｂｐＸ）、トランケート型ＣｂｐＸ、ＬｙｔＸファミリー、トランケート型ＬｙｔＸ、トランケート型ＣｂｐＸ−トランケート型ＬｙｔＸキメラタンパク質、ニューモリシン（Ｐｌｙ）、ＰｓｐＡ、ＰｓａＡ、Ｓｐ１２８、Ｓｐ１０１、Ｓｐ１３０、Ｓｐ１２５またはＳｐ１３３から選択できる。
【００９７】
化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）：Ａ群連鎖球菌抗原は、国際公開公報第ＷＯ０２／３４７７１号および同第ＷＯ２００５／０３２５８２号（ＧＡＳ４０を含む）において特定されるタンパク質、ＧＡＳ Ｍタンパク質のフラグメントの融合物（国際公開公報第ＷＯ０２／０９４８５１号；およびＤａｌｅ（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ １７：１９３−２００、およびＤａｌｅ（１９９６）Ｖａｃｃｉｎｅ １４（１０）：９４４−９４８に述べられているものを含む）、フィブロネクチン結合タンパク質（Ｓｆｂ１）、連鎖球菌ヘム関連タンパク質（Ｓｈｐ）、およびストレプトリシンＳ（ＳａｇＡ）を含む。
【００９８】
Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ：モラクセラ属抗原は、国際公開公報第ＷＯ０２／１８５９５号；および同第ＷＯ９９／５８５６２号において特定される抗原、外膜タンパク質抗原（ＨＭＷ−ＯＭＰ）、Ｃ抗原および／またはＬＰＳを含む。
【００９９】
百日咳菌：百日咳抗原は、場合によりペルタクチンおよび／またはアグルチノーゲン２および３抗原と組み合わせた、百日咳ホロ毒素（ＰＴ）および百日咳菌からの線維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）を含む。
【０１００】
黄色ブドウ球菌：黄色ブドウ球菌抗原は、ＳｔａｐｈＶＡＸ（商標）などの、場合により非毒性組換え緑膿菌体外毒素Ａに複合された黄色ブドウ球菌５型および８型莢膜多糖、および表面タンパク質に由来する抗原、インベイシン（ロイコシジン、キナーゼ、ヒアルロニダーゼ）、食細胞貪食を阻害する表面因子（莢膜、プロテインＡ）、カロチノイド、カタラーゼ産生、プロテインＡ、コアグラーゼ、凝固因子、および真核細胞膜を溶解する膜傷害毒素（場合により無毒化された）（溶血素、ロイコトキシン、ロイコシジン）を含む。
【０１０１】
表皮ブドウ球菌：表皮ブドウ球菌抗原は、粘液関連抗原（ＳＡＡ）を含む。
【０１０２】
破傷風菌（破傷風）：破傷風抗原は、好ましくは本発明の組成物と共に／本発明の組成物と複合した輸送タンパク質として使用される、破傷風トキソイド（ＴＴ）を含む。
【０１０３】
ジフテリア菌（ジフテリア）：ジフテリア抗原は、ＣＲＭ１９７などの、好ましくは無毒化された、ジフテリア毒素を含む。加えて、ＡＤＰリボシル化を調節するまたは阻害するまたはＡＤＰリボシル化に関連する抗原が、本発明の組成物との組合せ／同時投与／複合のために考慮される。ジフテリアトキソイドは輸送タンパク質として使用し得る。
【０１０４】
インフルエンザ菌Ｂ型（Ｈｉｂ）：Ｈｉｂ抗原は、Ｈｉｂ糖抗原を含む。
【０１０５】
緑膿菌：シュードモナス属抗原は、内毒素Ａ、Ｗｚｚタンパク質、緑膿菌ＬＰＳ、より詳細にはＰＡＯ１（Ｏ５血清型）から単離されるＬＰＳ、および外膜タンパク質Ｆ（ＯｐｒＦ）を含む外膜タンパク質（Ｐｒｉｃｅら（２００１）Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．６９（５）：３５１０−３５１５）を含む。
【０１０６】
Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ：細菌抗原は、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａに由来し得る。
【０１０７】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群連鎖球菌）：Ｂ群連鎖球菌抗原は、国際公開公報第０２／３４７７１号；同第０３／０９３３０６号；同第０４／０４１１５７号；および同第２００５／００２６１９号において特定されるもののような、タンパク質または糖抗原（タンパク質ＧＢＳ５９、ＧＢＳ６７、ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ２７６、ＧＢＳ３２２を含み、および血清型Ｉａ、Ｉｂ、Ｉａ／ｃ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩおよびＶＩＩＩに由来する糖抗原を含む）を含む。
【０１０８】
淋菌：淋病抗原は、ＰｏｒＢなどのＰｏｒ（またはポーリン）タンパク質（たとえばＺｈｕら（２００４）Ｖａｃｃｉｎｅ ２２：６６０−６６９参照）、ＴｂｐＡおよびＴｂｐＢなどのトランスフェリン結合タンパク質（たとえばＰｒｉｃｅら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７１（１）：２７７−２８３参照）、不透過性タンパク質（ｏｐａｃｉｔｙ ｐｒｏｔｅｉｎ）（Ｏｐａなど）、還元調節性タンパク質（Ｒｍｐ）、および外膜小胞（ＯＭＶ）製剤（たとえばＰｌａｎｔｅら（２０００）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８２：８４８−８５５；国際公開公報第ＷＯ９９／２４５７８号；同第ＷＯ９９／３６５４４号；同第ＷＯ９９／５７２８０号；および同第ＷＯ０２／０７９２４３号参照）を含む。
【０１０９】
トラコーマクラミジア：トラコーマクラミジア抗原は、血清型Ａ、Ｂ、ＢａおよびＣ（トラコーマの病原因子、失明の原因）、血清型Ｌ１、Ｌ２およびＬ３（性病性リンパ肉芽腫に関連する）、および血清型Ｄ−Ｋに由来する抗原を含む。トラコーマクラミジア抗原はまた、ＰｅｐＡ（ＣＴ０４５）、ＬｃｒＥ（ＣＴ０８９）、ＡｒｔＪ（ＣＴ３８１）、ＤｎａＫ（ＣＴ３９６）、ＣＴ３９８、ＯｍｐＨ様（ＣＴ２４２）、Ｌ７／Ｌ１２（ＣＴ３１６）、ＯｍｃＡ（ＣＴ４４４）、ＡｔｏｓＳ（ＣＴ４６７）、ＣＴ５４７、Ｅｎｏ（ＣＴ５８７）、ＨｒｔＡ（ＣＴ８２３）、ＭｕｒＧ（ＣＴ７６１）、ＣＴ３９６およびＣＴ７６１を含む、国際公開公報第ＷＯ００／３７４９４号；同第ＷＯ０３／０４９７６２号；同第ＷＯ０３／０６８８１１号；および同第ＷＯ０５／００２６１９号において特定される抗原、およびこれらの抗原の特定の組合せを含む。
【０１１０】
梅毒トレポネーマ（梅毒）：梅毒抗原はＴｍｐＡ抗原を含む。
【０１１１】
軟性下疳菌（軟性下疳を引き起こす）：デュクレー抗原は、外膜タンパク質（ＤｓｒＡ）を含む。
【０１１２】
Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ：抗原は、三糖反復単位および米国特許第６，７５６，３６１号において提供される他のエンテロコッカス属由来の抗原を含む。
【０１１３】
ピロリ菌：ピロリ菌抗原は、Ｃａｇ、Ｖａｃ、Ｎａｐ、ＨｏｐＸ、ＨｏｐＹおよびウレアーゼ抗原を含む。
【０１１４】
腐性ブドウ球菌：抗原は、腐性ブドウ球菌抗原の１６０ｋＤａ赤血球凝集素を含む。
【０１１５】
Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ：抗原は、ＬＰＳ（Ｘｕら（２００２）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７０（８）：４４１４−４４２３）を含む。
【０１１６】
大腸菌：大腸菌抗原は、腸管毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）、腸管凝集性大腸菌（ＥＡｇｇＥＣ）、分散接着性大腸菌（ＤＡＥＣ）、腸管病原性大腸菌（ＥＰＥＣ）または腸管出血性大腸菌（ＥＨＥＣ）に由来し得る。
【０１１７】
炭疽菌（炭疽）：炭疽菌抗原は、場合により無毒化され、Ａ成分（どちらも、防御抗原（ＰＡ）として知られる共通のＢ成分を共有し得る、致死因子（ＬＦ）および浮腫因子（ＥＦ））から選択され得る。ある実施形態では、本発明の組成物は炭疽抗原を含まない。
【０１１８】
ペスト菌（ペスト）：ペスト抗原は、Ｆ１莢膜抗原（（Ｇｏｓｆｅｌｄら（２００３）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７１（１））：３７４−３８３）、ＬＰＳ（Ｆｉｅｌｄｓら（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６７（１０）：５３９５−５４０８）、ペスト菌Ｖ抗原（Ｈｉｌｌら（１９９７）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６５（１１）：４４７６−４４８２）を含む。
【０１１９】
ヒト結核菌：結核抗原は、リポタンパク質、ＬＰＳ、ＢＣＧ抗原、場合により陽イオン性脂質小胞中に製剤された抗原８５Ｂ（Ａｇ８５Ｂ）とＥＳＡＴ−６の融合タンパク質（Ｏｌｓｅｎら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７２（１０）：６１４８−６１５０）、ヒト結核菌（Ｍｔｂ）イソクエン酸デヒドロゲナーゼ関連抗原（Ｂａｎｅｒｊｅｅら（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２６５２−１２６５７）、およびＭＰＴ５１抗原（Ｓｕｚｕｋｉら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７２（７）：３８２９−３８３７）を含む。
【０１２０】
リケッチア：抗原は、外膜タンパク質Ａおよび／またはＢ（ＯｍｐＢ）（Ｃｈａｏら（２００４）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１７０２（２）：１４５−１５２）を含む外膜タンパク質、ＬＰＳ、および表面タンパク質抗原（ＳＰＡ）（Ｃａｒｌら（１９８９）Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．２ Ｓｕｐｐｌ：８１−９１）を含む。
【０１２１】
リステリア菌：細菌抗原はリステリア菌に由来し得る。
【０１２２】
Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ：抗原は、ＣＰｎ０３２４、Ｃｐｎ０３０１、Ｃｐｎ０４８２、Ｃｐｎ０５０３、Ｃｐｎ０５２５、Ｃｐｎ０５５８、Ｃｐｎ０５８４、Ｃｐｎ０８００、Ｃｐｎ０９７９、Ｃｐｎ０４９８、Ｃｐｎ０３００、Ｃｐｎ００４２、Ｃｐｎ００１３、Ｃｐｎ４５０、Ｃｐｎ０６６１、Ｃｐｎ０５５７、Ｃｐｎ０９０４、Ｃｌｐｎ０７９５、Ｃｐｎ０１８６およびＣｐｎ０６０４を含む、国際公開公報第ＷＯ０２／０２６０６号および同第ＷＯ０５／０８４３０６号において特定されるもの、およびこれらの抗原の特定の組合せを含む。
【０１２３】
コレラ菌：抗原は、プロテイナーゼ抗原、ＬＰＳ、特にコレラ菌ＩＩのリポ多糖、Ｏ１ Ｉｎａｂａ Ｏ特異的多糖、コレラ菌Ｏ１３９、ＩＥＭ１０８ワクチンの抗原（Ｌｉａｎｇら（２００３）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７１（１０）：５４９８−５５０４）、および閉鎖帯毒素（Ｚｏｔ）を含む。
【０１２４】
腸チフス菌（腸チフス）：抗原は、莢膜多糖、好ましくは複合体（Ｖｉ、すなわちｖａｘ−ＴｙＶｉ）を含む。
【０１２５】
Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ（ライム病）：抗原は、リポタンパク質（ＯｓｐＡ、ＯｓｐＢ、ＯｓｐＣおよびＯｓｐＤなど）、ＯｓｐＥ関連タンパク質（Ｅｒｐｓ）などの他の表面タンパク質、デコリン結合タンパク質（ＤｂｐＡなど）、およびＰ３９およびＰ１３に関連する抗原などの抗原多様性ＶＩタンパク質（内在性膜タンパク質、Ｎｏｐｐａら（２００１）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６９（５）：３３２３−３３３４）、ＶｌｓＥ抗原性変異タンパク質（Ｌａｗｒｅｎｚら（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３７（１２）：３９９７−４００４）を含む。
【０１２６】
Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ：抗原は、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ外膜タンパク質（ＯＭＰ）を含む。
【０１２７】
Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ：抗原は、ＯＭＰ Ａを含むＯＭＰ、および場合により破傷風トキソイドに複合された多糖を含む。
【０１２８】
他の細菌抗原は、上記のいずれかの莢膜抗原、多糖抗原またはタンパク質抗原を含む。さらなる細菌抗原はまた、外膜小胞（ＯＭＶ）製剤を含む。加えて、抗原は、上記細菌のいずれかの生、弱毒化および／または精製形態を含む。抗原は、グラム陰性またはグラム陽性菌に由来し得る。抗原は、好気性または嫌気性細菌に由来し得る。
【０１２９】
加えて、上記細菌由来の糖（多糖、ＬＰＳ、ＬＯＳまたはオリゴ糖）のいずれもが、輸送タンパク質（たとえばＣＲＭ１９７）などのもう１つ別の物質または抗原に複合することができる。そのような複合は、米国特許第５，３６０，８９７号；およびＲｏｙら（１９８４）Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．６２（５）：２７０−２７５において提供されるような、糖鎖上のカルボニル部分の、タンパク質上のアミノ基への還元的アミノ化によって実施される直接複合であり得る。もう１つの実施形態では、糖は、リンカーを通して、たとえばスクシンアミドで、またはＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，第１版、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ （１９９６）およびＷｏｎｇ，Ｓ．Ｓ．，ＣＲＣ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ，第１版、ＣＲＣ−Ｐｒｅｓｓ（１９９１）において提供される他の結合を通して複合され得る。
【０１３０】
Ｂ．ウイルス抗原
本発明における使用に適するウイルス抗原は、不活性化（または死滅）ウイルス、弱毒化ウイルス、スプリットウイルス製剤、精製サブユニット製剤、ウイルスから単離、精製または誘導され得るウイルスタンパク質、およびウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む。ウイルス抗原は、細胞培養または他の基質で増殖させたウイルスまたは組換え発現させたウイルスに由来し得る。ウイルス抗原は、好ましくはその生活環の少なくとも１つの段階の間にウイルスの表面に曝露されるエピトープを含む。ウイルス抗原は、好ましくは多数の血清型または単離物にわたって保存されている。ウイルス抗原は、以下に示すウイルスの１またはそれ以上に由来する抗原ならびに以下で特定する特異抗原の例を含む。
【０１３１】
オルトミクソウイルス：ウイルス抗原は、インフルエンザＡ、ＢおよびＣ型などのオルトミクソウイルスに由来し得る。オルトミクソウイルス抗原は、赤血球凝集素（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、ヌクレオタンパク質（ＮＰ）、基質タンパク質（Ｍ１）、膜タンパク質（Ｍ２）、１またはそれ以上の転写酵素成分（ＰＢ１、ＰＢ２およびＰＡ）を含む、ウイルスタンパク質の１またはそれ以上から選択され得る。好ましい抗原はＨＡおよびＮＡを含む。
【０１３２】
インフルエンザ抗原は、汎流行間期（毎年）のインフルエンザ菌株に由来し得る。インフルエンザ抗原は、汎流行性発生を引き起こす潜在的可能性を有する菌株（すなわち現在流行中である菌株における赤血球凝集素と比較して新しい赤血球凝集素を有するインフルエンザ菌株、または鳥類において病原性であり、ヒト母集団において水平伝播する潜在的可能性を有するインフルエンザ菌株、またはヒトに対して病原性であるインフルエンザ菌株）に由来し得る。インフルエンザ抗原は、卵または細胞培養において増殖するウイルスに由来し得る。
【０１３３】
パラミクソウイルス科ウイルス：ウイルス抗原は、肺炎ウイルス属（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス属（ＰＩＶ）および麻疹ウイルス属（麻疹）などのパラミクソウイルス科ウイルスに由来し得る。
【０１３４】
肺炎ウイルス：ウイルス抗原は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ウシＲＳウイルス、マウス肺炎ウイルス、およびシチメンチョウ鼻気管炎ウイルスなどの肺炎ウイルスに由来し得る。好ましくは、肺炎ウイルスはＲＳＶである。肺炎ウイルス抗原は、以下のタンパク質：表面タンパク質融合物（Ｆ）、糖タンパク質（Ｇ）および低分子疎水性タンパク質（ＳＨ）、基質タンパク質ＭおよびＭ２、ヌクレオキャプシドタンパク質Ｎ、ＰおよびＬ、および非構造タンパク質ＮＳ１およびＮＳ２の１またはそれ以上から選択され得る。好ましい肺炎ウイルス抗原は、Ｆ、ＧおよびＭを含む。たとえばＪｏｈｎｓｔｏｎｅら（２００４）Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８５（Ｐｔ１１）：３２２９−３２３８参照。肺炎ウイルス抗原はまた、キメラウイルスにおいて製剤し得るまたはキメラウイルスに由来し得る。たとえばキメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶとＰＩＶとの両方の成分を含み得る。
【０１３５】
パラミクソウイルス：ウイルス抗原は、パラインフルエンザウイルス１−４型（ＰＩＶ）、流行性耳下腺炎ウイルス、センダイウイルス、シミアンウイルス５、ウシパラインフルエンザウイルスおよびニューカッスル病ウイルス等のパラミクソウイルスに由来し得る。好ましくは、パラミクソウイルスはＰＩＶまたは流行性耳下腺炎ウイルスである。パラミクソウイルス抗原は、以下のタンパク質：赤血球凝集素ノイラミニダーゼ（ＨＮ）、融合タンパク質Ｆ１およびＦ２、ヌクレオタンパク質（ＮＰ）、リンタンパク質（Ｐ）、大型タンパク質（Ｌ）および基質タンパク質（Ｍ）の１またはそれ以上から選択され得る。好ましいパラミクソウイルスタンパク質は、ＨＮ、Ｆ１およびＦ２を含む。パラミクソウイルス抗原はまた、キメラウイルスにおいて製剤し得るまたはキメラウイルスに由来し得る。たとえばキメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶとＰＩＶとの両方の成分を含み得る。市販されている流行性耳下腺炎ワクチンは、一価形態のまたは麻疹および風疹ワクチンと組み合わせた（ＭＭＲ）、生弱毒化流行性耳下腺ウイルスを含む。
【０１３６】
麻疹ウイルス：ウイルス抗原は、麻疹などの麻疹ウイルス属に由来し得る。麻疹ウイルス抗原は、以下のタンパク質：赤血球凝集素（Ｈ）、糖タンパク質（Ｇ）、融合因子（Ｆ）、大型タンパク質（Ｌ）、ヌクレオタンパク質（ＮＰ）、ポリメラーゼリンタンパク質（Ｐ）、および基質タンパク質（Ｍ）の１またはそれ以上から選択され得る。市販されている麻疹ワクチンは、典型的には流行性耳下腺炎および風疹ワクチンと組み合わせた（ＭＭＲ）、生弱毒化麻疹ウイルスを含む。
【０１３７】
ピコルナウイルス：ウイルス抗原は、エンテロウイルス、ライノウイルス、ヘパルナウイルス、カルジオウイルスおよびアフトウイルスなどのピコルナウイルス属に由来し得る。ポリオウイルスなどのエンテロウイルスに由来する抗原が好ましい。
【０１３８】
エンテロウイルス：ウイルス抗原は、ポリオウイルス１、２または３型、コクサッキーＡウイルス１−２２および２４型、コクサッキーＢウイルス１−６型、エコーウイルス（ＥＣＨＯ）１−９、１１−２７および２９−３４型、ならびにエンテロウイルス６８−７１型などのエンテロウイルスに由来し得る。好ましくは、エンテロウイルスはポリオウイルスである。エンテロウイルス抗原は、好ましくはキャプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３およびＶＰ４の１またはそれ以上から選択される。市販されているポリオワクチンは、不活性化ポリオワクチン（ＩＰＶ）および経口ポリオウイルスワクチン（ＯＰＶ）を含む。
【０１３９】
ヘパルナウイルス：ウイルス抗原は、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）などのヘパルナウイルスに由来し得る。市販されているＨＡＶワクチンは、不活性化ＨＡＶワクチンを含む。
【０１４０】
トガウイルス：ウイルス抗原は、ルビウイルス、アルファウイルスまたはアルテリウイルスなどのトガウイルスに由来し得る。風疹ウイルスなどのルビウイルスに由来する抗原が好ましい。トガウイルス抗原は、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｃ、ＮＳＰ−１、ＮＳＰＯ−２、ＮＳＰ−３またはＮＳＰ−４から選択され得る。トガウイルス抗原は、好ましくはＥ１、Ｅ２またはＥ３から選択される。市販されている風疹ワクチンは、典型的には流行性耳下腺炎および麻疹ワクチンと組み合わせた（ＭＭＲ）、生低温適合性ウイルスを含む。
【０１４１】
フラビウイルス：ウイルス抗原は、ダニ媒介脳炎（ＴＢＥ）、デング熱（１、２、３または４型）、黄熱病、日本脳炎、西ナイル脳炎、セントルイス脳炎、ロシア春夏脳炎、ポーワッサン脳炎などのフラビウイルスに由来し得る。フラビウイルス抗原は、ＰｒＭ、Ｍ、Ｃ、Ｅ、ＮＳ−１、ＮＳ−２ａ、ＮＳ２ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ４ｂおよびＮＳ５から選択され得る。フラビウイルス抗原は、好ましくはＰｒＭ、ＭおよびＥから選択される。市販されているＴＢＥワクチンは、不活性化ウイルスワクチンを含む。
【０１４２】
ペスチウイルス：ウイルス抗原は、ウシのウイルス性下痢（ＢＶＤＶ）、古典的豚コレラ（ＣＳＦＶ）またはボーダー病（ＢＤＶ）などのペスチウイルスに由来し得る。
【０１４３】
ヘパドナウイルス：ウイルス抗原は、Ｂ型肝炎ウイルスなどのヘパドナウイルスに由来し得る。ヘパドナウイルス抗原は、表面抗原（Ｌ、ＭおよびＳ）、コア抗原（ＨＢｃ、ＨＢｅ）から選択され得る。市販されているＨＢＶワクチンは、表面抗原Ｓタンパク質を含有するサブユニットワクチンを含む。
【０１４４】
Ｃ型肝炎ウイルス：ウイルス抗原は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に由来し得る。ＨＣＶ抗原は、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ１／Ｅ２、ＮＳ３４５ポリタンパク質、ＮＳ３４５コアポリタンパク質、コア、および／または非構造領域からのペプチドの１またはそれ以上から選択され得る（Ｈｏｕｇｈｔｏｎら（１９９１）Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ １４：３８１−３８８）。
【０１４５】
ラブドウイルス：ウイルス抗原は、リッサウイルス（狂犬病ウイルス）およびベシクロウイルス（ＶＳＶ）などのラブドウイルスに由来し得る。ラブドウイルス抗原は、糖タンパク質（Ｇ）、ヌクレオタンパク質（Ｎ）、大型タンパク質（Ｌ）および非構造タンパク質（ＮＳ）から選択され得る。市販されている狂犬病ウイルスワクチンは、ヒト二倍体細胞または胎仔アカゲザル肺細胞で増殖させた死滅ウイルスを含む。
【０１４６】
カルシウイルス科ウイルス：ウイルス抗原は、ノーウォークウイルス、およびハワイウイルスやスノーマウンテンウイルスなどのノーウォーク様ウイルスのようなカルシウイルス科に由来し得る。
【０１４７】
コロナウイルス：ウイルス抗原は、コロナウイルス、ＳＡＲＳ、ヒト呼吸器コロナウイルス、鳥類伝染性気管支炎（ＩＢＶ）、マウス肝炎ウイルス（ＭＨＶ）およびブタ伝染性胃腸炎ウイルス（ＴＧＥＶ）に由来し得る。コロナウイルス抗原は、スパイク（Ｓ）、エンベロープ（Ｅ）、基質（Ｍ）、ヌクレオキャプシド（Ｎ）タンパク質、および赤血球凝集素エステラーゼ糖タンパク質（ＨＥ）から選択され得る。好ましくは、コロナウイルス抗原はＳＡＲＳウイルスに由来する。ＳＡＲＳウイルス抗原は国際公開公報第ＷＯ０４／９２３６０号に述べられている。
【０１４８】
レトロウイルス：ウイルス抗原は、オンコウイルス、レンチウイルスまたはスプマウイルスなどのレトロウイルスに由来し得る。オンコウイルス抗原は、ＨＴＬＶ−１、ＨＴＬＶ−２またはＨＴＬＶ−５に由来し得る。レンチウイルス抗原は、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２に由来し得る。レトロウイルス抗原は、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、ｔａｘ、ｔａｔ、ｒｅｘ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、ｖｐｕおよびｖｐｒから選択され得る。ＨＩＶ抗原は、ｇａｇ（ｐ２４ｇａｇおよびｐ５５ｇａｇ）、ｅｎｖ（ｇｐ１６０およびｇｐ４１）、ｐｏｌ、ｔａｔ、ｎｅｆ、ｒｅｖ、ｖｐｕ、ミニタンパク質（好ましくはｐ５５ｇａｇおよびｇｐ１４０ｖ欠失型）から選択され得る。ＨＩＶ抗原は、以下の菌株：ＨＩＶＩＩＩｂ、ＨＩＶＳＦ２、ＨＩＶＬＡＶ、ＨＩＶＬＡＩ、ＨＩＶＭＮ、ＨＩＶ−１ＣＭ２３５、ＨＩＶ−１ＵＳ４の１またはそれ以上から選択され得る。
【０１４９】
レオウイルス：ウイルス抗原は、オルトレオウイルス、ロタウイルス、オルビウイルスまたはコルチウイルスなどのレオウイルスに由来し得る。レオウイルス抗原は、構造タンパク質λ１、λ２、λ３、μ１、μ２、σ１、σ２またはσ３、あるいは非構造タンパク質σＮＳ、μＮＳまたはσ１ｓから選択され得る。好ましいレオウイルス抗原はロタウイルスに由来し得る。ロタウイルス抗原は、ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４（または切断産物ＶＰ５およびＶＰ８）、ＮＳＰ１、ＶＰ６、ＮＳＰ３、ＮＳＰ２、ＶＰ７、ＮＳＰ４またはＮＳＰ５から選択され得る。好ましいロタウイルス抗原は、ＶＰ４（または切断産物ＶＰ５およびＶＰ８）およびＶＰ７を含む。
【０１５０】
パルボウイルス：ウイルス抗原は、パルボウイルスＢ１９などのパルボウイルスに由来し得る。パルボウイルス抗原は、ＶＰ−１、ＶＰ−２、ＶＰ−３、ＮＳ−１およびＮＳ−２から選択され得る。好ましくは、パルボウイルス抗原はキャプシドタンパク質ＶＰ−２である。
【０１５１】
デルタ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）：ウイルス抗原は、ＨＤＶ、特にＨＤＶからのδ抗原に由来し得る（たとえば米国特許第５，３７８，８１４号参照）。
【０１５２】
Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）：ウイルス抗原はＨＥＶに由来し得る。
【０１５３】
Ｇ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）：ウイルス抗原はＨＧＶに由来し得る。
【０１５４】
ヒトヘルペスウイルス：ウイルス抗原は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、水痘−帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ６）、ヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ７）およびヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ８）などのヒトヘルペスウイルスに由来し得る。ヒトヘルペスウイルス抗原は、最初期タンパク質（α）、初期タンパク質（β）および後期タンパク質（γ）から選択され得る。ＨＳＶ抗原は、ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２菌株に由来し得る。ＨＳＶ抗原は、糖タンパク質ｇＢ、ｇＣ、ｇＤおよびｇＨ、融合タンパク質（ｇＢ）、または免疫回避タンパク質（ｇＣ、ｇＥまたはｇＩ）から選択され得る。ＶＺＶ抗原は、コア、ヌクレオキャプシド、テグメントまたはエンベロープタンパク質から選択され得る。生弱毒化ＶＺＶワクチンが市販されている。ＥＢＶ抗原は、初期抗原（ＥＡ）タンパク質、ウイルスキャプシド抗原（ＶＣＡ）、および膜抗原（ＭＡ）の糖タンパク質から選択され得る。ＣＭＶ抗原は、キャプシドタンパク質、エンベロープ糖タンパク質（ｇＢおよびｇＨなど）およびテグメントタンパク質から選択され得る。
【０１５５】
パポバウイルス：抗原は、パピローマウイルスおよびポリオーマウイルスなどのパポバウイルスに由来し得る。パピローマウイルスは、ＨＰＶ血清型１、２、４、５、６、８、１１、１３、１６、１８、３１、３３、３５、３９、４１、４２、４７、５１、５７、５８、６３および６５を含む。好ましくは、ＨＰＶ抗原は血清型６、１１、１６または１８に由来する。ＨＰＶ抗原は、キャプシドタンパク質（Ｌ１）および（Ｌ２）、またはＥ１−Ｅ７、またはそれらの融合物から選択され得る。ＨＰＶ抗原は、好ましくはウイルス様粒子（ＶＬＰ）に製剤される。ポリオーマウイルスは、ＢＫウイルスおよびＪＫウイルスを含む。ポリオーマウイルス抗原は、ＶＰ１、ＶＰ２またはＶＰ３から選択され得る。
【０１５６】
本発明における使用のための他の抗原、組成物、方法および微生物は、Ｐｌｏｔｋｉｎ，Ｓ．Ａ．ら、Ｖａｃｃｉｎｅｓ，第４版、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．（２００４）；Ｍｕｒｒａｙ，Ｐ．Ｒ．ら、Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、第５版、Ｍｏｓｂｙ Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（２００５）；Ｊｏｋｌｉｋ，Ｗ．Ｋ．（編集），Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第３版、Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ（１９８８）；Ｈｏｗｌｅｙ，Ｐ．Ｍ．ら（編集），Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第４版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（１９９１）；およびＦｉｅｌｄｓ，Ｂ．Ｎ．ら（編集） Ｆｉｅｌｄｓ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第４版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００１）に述べられている。
【０１５７】
Ｃ．真菌抗原
本発明における使用のための真菌抗原は、以下に示す真菌の１またはそれ以上に由来し得る。
【０１５８】
真菌抗原は、Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ ｆｌｏｃｃｕｓｕｍ、オードアン小胞子菌、イヌ小胞子菌、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｄｉｓｔｏｒｔｕｍ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｅｑｕｉｎｕｍ、石膏状小胞子菌、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｎｕｍ、渦状白癬菌、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｅｑｕｉｎｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｇａｌｌｉｎａｅ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｇｙｐｓｅｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｇｎｉｎｉ、毛瘡白癬菌、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｑｕｉｎｃｋｅａｎｕｍ、紅色白癬菌、シェーンライン白癬菌、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｔｏｎｓｕｒａｎｓ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ、Ｔ．ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ ｖａｒ．ａｌｂｕｍ、ｖａｒ．ｄｉｓｃｏｉｄｅｓ、ｖａｒ．ｏｃｈｒａｃｅｕｍ、紫色白癬菌および／またはＴｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｆａｖｉｆｏｒｍｅを含む、皮膚糸状菌に由来し得る。
【０１５９】
真菌病原体は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、黄色アスペルギルス、黒色アスペルギルス、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｌａｕｃｕｓ、Ｂｌａｓｔｏｓｃｈｉｚｏｍｙｃｅｓ ｃａｐｉｔａｔｕｓ、鵞口瘡カンジダ、Ｃａｎｄｉｄａ ｅｎｏｌａｓｅ、Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ、Ｃａｎｄｉｄａ ｋｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｋｗｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、Ｃａｎｄｉｄａ ｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉ、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃａｒｒｉｏｎｉｉ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｄｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃｌａｖａｔｕｍ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、肺炎杆菌、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、ニューモシスティス・カリニ、Ｐｙｔｈｉｕｍｎ ｉｎｓｉｄｉｏｓｕｍ、Ｐｉｔｙｒｏｓｐｏｒｕｍ ｏｖａｌｅ、Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｓｃｅｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ａｐｉｏｓｐｅｒｕｍ、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｂｅｉｇｅｌｉｉ、トキソプラスマ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ、マラセジア属、フォンセセア属、Ｗａｎｇｉｅｌｌａ属、スポロトリクス属、バシディオボールス属、コニディオボルス属、クモノスカビ属、ケカビ属、アブシディア属、モルティエラ属、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ属、Ｓａｋｓｅｎａｅａ属、アルテルナリア属、Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ属、ヘルミントスポリウム属、フザリウム属、アスペルギルス属、ペニシリウム属、モノリニア種、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属、ペシロミセス属、Ｐｉｔｈｏｍｙｃｅｓ属およびクラドスポリウム属に由来し得る。
真菌抗原を生産するための方法は当技術分野において周知である（米国特許第６，３３３，１６４号参照）。好ましい方法では、細胞壁が実質的に除去されたまたは少なくとも部分的に除去された真菌細胞から入手し得る不溶性分画から可溶化分画を抽出して分離し、前記方法は、生真菌細胞を得ること；細胞壁が実質的に除去されたまたは少なくとも部分的に除去された真菌細胞を得ること；細胞壁が実質的に除去されたまたは少なくとも部分的に除去された真菌細胞を破裂させること；不溶性分画を得ること；および不溶性分画から可溶化分画を抽出して分離すること、の工程を含むことを特徴とする。
【０１６０】
Ｄ．ＳＴＤ抗原
本発明の組成物は、性感染症（ＳＴＤ）に由来する１またはそれ以上の抗原を含み得る。そのような抗原は、クラミジア、陰部ヘルペス、肝炎（ＨＣＶなど）、性器いぼ、淋病、梅毒および／または軟性下疳（国際公開公報第ＷＯ００／１５２５５号参照）などのＳＴＤに対する予防または治療を提供し得る。抗原は、１またはそれ以上のウイルスまたは細菌ＳＴＤに由来し得る。本発明における使用のためのウイルスＳＴＤ抗原は、たとえばＨＩＶ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）および肝炎（ＨＣＶ）に由来し得る。本発明における使用のための細菌ＳＴＤ抗原は、たとえば淋菌、トラコーマクラミジア、梅毒トレポネーマ、軟性下疳菌、大腸菌およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅに由来し得る。これらの病原体に由来する特異抗原の例は上述されている。
【０１６１】
Ｅ．呼吸器系抗原
本発明の組成物は、呼吸器系疾患を引き起こす病原体に由来する１またはそれ以上の抗原を含み得る。たとえば呼吸器系抗原は、オルトミクソウイルス（インフルエンザ）、肺炎ウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ）、麻疹ウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、ＶＺＶおよびコロナウイルス（ＳＡＲＳ）などの呼吸器系ウイルスに由来し得る。呼吸器系抗原は、肺炎連鎖球菌、緑膿菌、百日咳菌、ヒト結核菌、肺炎マイコプラスマ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、炭疽菌およびＭｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓなどの、呼吸器疾患を引き起こす細菌に由来し得る。これらの病原体に由来する特異抗原の例は上述されている。
【０１６２】
Ｆ．小児用ワクチン抗原
本発明の組成物は、小児被験体における使用に適する１またはそれ以上の抗原を含み得る。小児被験体は、典型的には約３歳未満、または約２歳未満、または約１歳未満である。小児用抗原は、６ヶ月、１、２または３年間にわたって複数回投与され得る。小児用抗原は、小児個体群を標的し得るウイルスおよび／または小児個体群が感染しやすいウイルスに由来し得る。小児用ウイルス抗原は、オルトミクソウイルス（インフルエンザ）、肺炎ウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよび流行性耳下腺炎）、麻疹ウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、および水痘−帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）の１またはそれ以上に由来する抗原を含む。小児用細菌抗原は、肺炎連鎖球菌、髄膜炎菌、化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、百日咳菌、黄色ブドウ球菌、破傷風菌（破傷風）、ジフテリア菌（ジフテリア）、インフルエンザ菌Ｂ型（Ｈｉｂ）、緑膿菌、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群連鎖球菌）および大腸菌の１またはそれ以上に由来する抗原を含む。これらの病原体に由来する特異抗原の例は上述されている。
【０１６３】
Ｇ．高齢者または免疫無防備状態個体における使用に適する抗原
本発明の組成物は、高齢者または免疫無防備状態個体における使用に適する１またはそれ以上の抗原を含み得る。そのような個体は、標的抗原に対する免疫応答を改善するためにより頻繁に、より高用量でまたはアジュバント添加製剤でワクチン接種する必要があり得る。高齢者または免疫無防備状態個体における使用のために標的し得る抗原は、以下の病原体の１またはそれ以上に由来する抗原を含む：髄膜炎菌、肺炎連鎖球菌、化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、百日咳菌、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、破傷風菌（破傷風）、ジフテリア菌（ジフテリア）、インフルエンザ菌Ｂ型（Ｈｉｂ）、緑膿菌、レジオネラ・ニューモフィラ菌、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群連鎖球菌）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、ピロリ菌、Ｃｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、オルトミクソウイルス（インフルエンザ）、肺炎ウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよび流行性耳下腺炎）、麻疹ウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、水痘−帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）。これらの病原体に由来する特異抗原の例は上述されている。
【０１６４】
Ｈ．青年用ワクチンにおける使用に適する抗原
本発明の組成物は、青年期被験体における使用に適する１またはそれ以上の抗原を含み得る。青年は、以前に投与された小児用抗原の追加免疫を必要とし得る。青年における使用に適すると考えられる小児用抗原は上述されている。加えて、青年は、性活動の開始前に防御または治療免疫を確実にするためにＳＴＤ病原体に由来する抗原を受容する標的であり得る。青年における使用に適し得るＳＴＤ抗原は上述されている。
【０１６５】
Ｉ．腫瘍抗原
本発明の組成物は、１またはそれ以上の腫瘍または癌抗原を含み得る。腫瘍抗原は、たとえばポリペプチド腫瘍抗原または糖タンパク質腫瘍抗原などのペプチド含有腫瘍抗原であり得る。腫瘍抗原はまた、たとえば、糖脂質腫瘍抗原またはガングリオシド腫瘍抗原などの糖含有腫瘍抗原であり得る。腫瘍抗原はさらに、たとえば、ポリペプチド含有腫瘍抗原、たとえばＲＮＡベクター構築物またはプラスミドＤＮＡなどのＤＮＡベクター構築物を発現するポリヌクレオチド含有腫瘍抗原であり得る。
【０１６６】
腫瘍抗原は、（ａ）ポリペプチド（たとえば８−２０アミノ酸長にわたり得るが、この範囲外の長さも一般的である）、リポポリペプチドおよび糖タンパク質を含む、ポリペプチド含有腫瘍抗原、（ｂ）多糖、ムチン、ガングリオシド、糖脂質および糖タンパク質を含む、糖含有腫瘍抗原、および（ｃ）抗原性ポリペプチドを発現するポリヌクレオチドを含む。
【０１６７】
腫瘍抗原は、たとえば（ａ）癌細胞に関連する完全長分子、（ｂ）欠失、付加および／または置換部分を有する分子を含む、前記完全長分子のホモログおよび修飾形態、および（ｃ）前記完全長分子のフラグメントであり得る。腫瘍抗原は組換え形態で提供され得る。腫瘍抗原は、たとえばＣＤ８＋リンパ球によって認識されるクラスＩ拘束性抗原またはＣＤ４＋リンパ球によって認識されるクラスＩＩ拘束性抗原を含む。
【０１６８】
以下を含む、数多くの腫瘍抗原が当技術分野において公知である：（ａ）ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＳＳＸ２、ＳＣＰ１などの癌精巣抗原ならびにＲＡＧＥ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥおよびＭＡＧＥファミリーポリペプチド、たとえばＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６およびＭＡＧＥ−１２（たとえば黒色腫、肺、頭頸部、ＮＳＣＬＣ、乳房、胃腸および膀胱腫瘍に対して使用できる）、（ｂ）突然変異抗原、たとえばｐ５３（様々な固形腫瘍、たとえば結腸直腸、肺、頭頸部癌に関連する）、ｐ２１／Ｒａｓ（たとえば黒色腫、膵癌および結腸直腸癌に関連する）、ＣＤＫ４（たとえば黒色腫に関連する）、ＭＵＭ１（たとえば黒色腫に関連する）、カスパーゼ−８（たとえば頭頸部癌に関連する）、ＣＩＡ０２０５（たとえば膀胱癌に関連する）、ＨＬＡ−Ａ２−Ｒ１７０１、βカテニン（たとえば黒色腫に関連する）、ＴＣＲ（たとえばＴ細胞非ホジキンリンパ腫に関連する）、ＢＣＲ−ａｂｌ（たとえば慢性骨髄性白血病に関連する）、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＫＩＡ０２０５、ＣＤＣ−２７およびＬＤＬＲ−ＦＵＴ、（ｃ）過剰発現抗原、たとえばガレクチン４（たとえば結腸直腸癌に関連する）、ガレクチン９（たとえばホジキン病に関連する）、プロテイナーゼ３（たとえば慢性骨髄性白血病に関連する）、ＷＴ１（たとえば様々な白血病に関連する）、カルボニックアンヒドラーゼ（たとえば腎癌に関連する）、アルドラーゼＡ（たとえば肺癌に関連する）、ＰＲＡＭＥ（たとえば黒色腫に関連する）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ（たとえば乳房、結腸、肺および卵巣癌に関連する）、αフェトプロテイン（たとえば肝細胞癌に関連する）、ＫＳＡ（たとえば結腸直腸癌に関連する）、ガストリン（たとえば膵癌および胃癌に関連する）、テロメラーゼ触媒タンパク質、ＭＵＣ−１（たとえば乳癌および卵巣癌に関連する）、Ｇ−２５０（たとえば腎細胞癌に関連する）、ｐ５３（たとえば乳癌、結腸癌に関連する）、および癌胎児性抗原（たとえば乳癌、肺癌、および結腸直腸癌などの胃腸管の癌に関連する）、（ｄ）共有抗原、たとえばＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ Ａなどの黒色腫−メラノサイト分化抗原、ｇｐ１００、ＭＣ１Ｒ、メラノサイト刺激ホルモン受容体、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質−１／ＴＲＰ１およびチロシナーゼ関連タンパク質−２／ＴＲＰ２（たとえば黒色腫に関連する）、（ｅ）たとえば前立腺癌に関連する、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＰＳＨ−Ｐ１、ＰＳＭ−Ｐ１、ＰＳＭ−Ｐ２などの前立腺関連抗原、（ｆ）免疫グロブリンイディオタイプ（たとえば骨髄腫およびＢ細胞リンパ腫に関連する）、および（ｇ）（ｉ）シアリルＴｎおよびシアリルＬｅＸ（たとえば乳癌および結腸直腸癌に関連する）ならびに様々なムチンなどの糖タンパク質；糖タンパク質は輸送タンパク質に結合していてもよい（たとえばＭＵＣ−１はＫＬＨに結合し得る）；（ｉｉ）リポポリペプチド（たとえば脂質部分に連結されたＭＵＣ−１）；（ｉｉｉ）輸送タンパク質に（たとえばＫＬＨに）結合していてもよい、多糖（たとえばＧｌｏｂｏ Ｈ合成六糖）；（ｉｖ）輸送タンパク質（たとえばＫＬＨ）に結合していてもよい、ＧＭ２、ＧＭ１２、ＧＤ２、ＧＤ３などのガングリオシド（たとえば脳、肺癌、黒色腫に関連する）を含む、ポリペプチドおよび糖含有抗原などの他の腫瘍抗原。
【０１６９】
他の腫瘍抗原は、ｐ１５、Ｈｏｍ／Ｍｅｌ−４０、Ｈ−Ｒａｓ、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ、エプスタインバーウイルス抗原、ＥＢＮＡ、Ｅ６およびＥ７を含むヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、Ｂ型およびＣ型肝炎ウイルス抗原、ヒトＴリンパ球向性ウイルス抗原、ＴＳＰ−１８０、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｍｎ−２３Ｈ１、ＴＡＧ−７２−４、ＣＡ１９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、ｐ１６、ＴＡＧＥ、ＰＳＣＡ、ＣＴ７、４３−９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、β−ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３（ＣＡ２７．２９／ＢＣＡＡ）、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８／ＫＰ１、ＣＯ−０２９、ＦＧＦ−５、Ｇａ７３３（ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ−ＣＯ−１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０（Ｍａｃ−２結合タンパク質／シクロフィリンＣ関連タンパク質）、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳ等を含む。これらならびに他の細胞成分は、たとえば米国特許出願第２００２／０００７１７３号およびその中で引用される参考文献に述べられている。
【０１７０】
本発明に従ったポリヌクレオチド含有抗原は、典型的には上記で列記したようなポリペプチド癌抗原をコードするポリヌクレオチドを含む。好ましいポリヌクレオチド含有抗原は、ポリペプチド癌抗原をインビボで発現することができる、プラスミドベクター（たとえばｐＣＭＶ）などのＤＮＡまたはＲＮＡベクター構築物を含む。
【０１７１】
腫瘍抗原は、たとえば突然変異したまたは変化した細胞成分に由来し得る。変化後、細胞成分はもはやそれらの調節機能を果たさず、それ故細胞は制御されない増殖を経験し得る。変化した細胞成分の代表的な例は、ｒａｓ、ｐ５３、Ｒｂ、ウィルムス腫瘍遺伝子によってコードされる変化したタンパク質、ユビキチン、ムチン、ＤＣＣ、ＡＰＣおよびＭＣＣ遺伝子によってコードされるタンパク質、ならびにｎｅｕ、甲状腺ホルモン受容体、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）受容体、インスリン受容体、上皮増殖因子（ＥＧＦ）受容体およびコロニー刺激因子（ＣＳＦ）受容体などの受容体または受容体様構造を含む。これらならびに他の細胞成分は、たとえば米国特許第５，６９３，５２２号およびその中で引用される参考文献に述べられている。
【０１７２】
細菌およびウイルス抗原は、癌の治療のために本発明の組成物と共に使用し得る。特に、ＣＲＭ１９７などの輸送タンパク質、破傷風トキソイドまたはネズミチフス菌抗原は、癌の治療のために本発明の化合物と共に／本発明の化合物と複合して使用し得る。癌抗原併用療法は、既存の治療法と比較して効果およびバイオアベイラビリティーの上昇を示す。
【０１７３】
癌または腫瘍抗原に関するさらなる情報は、たとえばＭｏｉｎｇｅｏｎ（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ １９：１３０５−１３２６；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（２００１）Ｎａｔｕｒｅ ４１１：３８０−３８４；Ｄｅｒｍｉｎｅら（２００２）Ｂｒｉｔ．Ｍｅｄ．Ｂｕｌｌ．６２：１４９−１６２；Ｅｓｐｉｎｏｚａ−Ｄｅｌｇａｄｏ（２００２）Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ ７（補遺３）：２０−３３；Ｄａｖｉｓら（２００３）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌ．２３：３−２９；Ｖａｎ ｄｅｎ Ｅｙｎｄｅら（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：６７４−６８１；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １８：１７５−１８２；Ｏｆｆｒｉｎｇａら（２０００）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：５７６−５８２；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（１９９９）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １０：２８１−２８７；Ｓａｈｉｎら（１９９７）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：７０９−７１６；Ｏｌｄら（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７：１１６３−１１６７；Ｃｈａｕｘら（１９９９）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８９：７６７−７７８；Ｇｏｌｄら（１９６５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１２２：４６７−４６８；Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎら（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．４５：１−６；Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎら（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．４５：１０−１９；Ｔａｙｌｏｒ−Ｐａｐａｄｉｍｉｔｒｉｏｕ（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １８：１０５−１０７；Ｚｈａｏら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：６７−７４；Ｔｈｅｏｂａｌｄら（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９２：１１９９３−１１９９７；Ｇａｕｄｅｒｎａｃｋ（１９９６）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２：３−９；国際公開公報第ＷＯ９１／０２０６２号；米国特許第６，０１５，５６７号；国際公開公報第ＷＯ０１／０８６３６号；国際公開公報第ＷＯ９６／３０５１４号；米国特許第５，８４６，５３８号；および米国特許第５，８６９，４４５号に認められる。
【０１７４】
さらなる抗原はまた、外膜小胞（ＯＭＶ）製剤を含み得る。
【０１７５】
さらなる製剤方法および抗原（特に腫瘍抗原）は、米国特許出願第２００４／０２０２６８０号において提供される。米国特許第６，８８４，４３５号も参照のこと。
【０１７６】
Ｊ．抗原参考文献
本発明の組成物は、以下の参考文献のいずれかにおいて記述される抗原を含み得る：
【０１７７】
【化１】
【０１７８】
【化２】
上記で引用したすべての特許、特許出願および学術論文の内容は、ここで完全に記述されているかのごとくに参照して組み込まれる。
【０１７９】
５．免疫アジュバントを含む、任意の補助成分
本発明の免疫原性組成物は、極めて多様な任意の補助成分を含み得る。
【０１８０】
そのような補助成分は、たとえば同じ組成物中でまたは別個の組成物中で、ナノ粒子含有組成物と同時に投与され得る。もう１つの実施形態では、補助成分は、ナノ粒子含有組成物の投与の前または投与の後に投与され得る。同じ組成物中で投与されるとき、補助成分は、ナノ粒子の表面に吸着され得るか、ナノ粒子内に封入され得るか、ナノ粒子に結合しないまま溶液中に溶解または分散し得るか、別の群のナノ粒子に吸着されるかまたはその中に封入され得る、等である。
【０１８１】
そのような補助成分は以下を含む：（ａ）抗生物質および抗ウイルス薬、非ステロイド系抗炎症薬、鎮痛薬、血管拡張薬、心臓血管薬、向精神薬、神経弛緩薬、抗うつ薬、抗パーキンソン薬、β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、ブラジキニン阻害薬、ＡＣＥ阻害薬、血管拡張薬、プロラクチン阻害薬、ステロイド、ホルモン拮抗物質、抗ヒスタミン薬、セロトニン拮抗物質、ヘパリン、化学療法剤、ＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＫＧＦ、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２、ＦＧＦを含むがこれらに限定されない抗腫瘍薬および増殖因子などの薬剤、（ｂ）インスリン、プロインスリン、成長ホルモン、ＧＨＲＨ、ＬＨＲＨ、ＥＧＦ、ソマトスタチン、ＳＮＸ−１１１、ＢＮＰ、インスリノトロピン、ＡＮＰ、ＦＳＨ、ＬＨ、ＰＳＨおよびｈＣＧ、性腺ステロイドホルモン（アンドロゲン、エストロゲンおよびプロゲステロン）、甲状腺刺激ホルモン、インヒビン、コレシストキニン、ＡＣＴＨ、ＣＲＦ、ダイノルフィン、エンドルフィン、エンドセリン、フィブロネクチンフラグメント、ガラニン、ガストリン、インスリノトロピン、グルカゴン、ＧＴＰ結合タンパク質フラグメント、グアニリン、ロイコキニン、マガイニン、マストパラン、デルマセプチン、システミン、ニューロメジン、ニューロテンシン、パンクレアスタチン、膵ポリペプチド、サブスタンスＰ、セクレチン、チモシン等のようなペプチドホルモンを含むホルモン、（ｃ）酵素、（ｄ）転写または翻訳メディエイタ、（ｅ）代謝経路における中間体、および（ｆ）インターロイキン１、インターロイキン２、インターロイキン３．インターロイキン４およびγ−インターフェロンを含む様々なサイトカインのいずれかのような、免疫調節剤。
【０１８２】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は免疫アジュバントを含む。本発明に関する使用のためのアジュバントは、以下に示すものの１またはそれ以上を含むが、これらに限定されない：
Ａ．無機質含有組成物
アジュバントとしての使用に適する無機質含有組成物は、アルミニウム塩およびカルシウム塩などの無機塩を含む。本発明は、水酸化物（たとえばオキシ水酸化物）、リン酸塩（たとえばヒドロキシリン酸塩、オルトリン酸塩）、硫酸塩等のような無機塩（たとえばＶａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．とＮｅｗｍａｎ，ＭＪ．編集）（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ）１９９５，第８および９章参照）、または種々の無機化合物の混合物（たとえば、場合によりリン酸塩過剰の、リン酸塩と水酸化物アジュバントの混合物）を含み、それらの化合物は何らかの適切な形態（たとえばゲル、結晶、非晶質等）をとり、塩に吸着することが好ましい。無機質含有組成物はまた、金属塩の粒子としても製剤され得る（国際公開公報第ＷＯ００／２３１０５号）。
【０１８３】
アルミニウム塩は、Ａｌ３＋の用量が０．２−１．０ｍｇ／用量であるように本発明のワクチンに含まれ得る。
【０１８４】
１つの実施形態では、本発明における使用のためのアルミニウムに基づくアジュバントは、ミョウバン（硫酸カリウムアルミニウム（ＡｌＫ（ＳＯ４）２））、または、リン酸緩衝液中の抗原をミョウバンと混合し、その後水酸化アンモニウムまたは水酸化ナトリウムなどの塩基で滴定および沈殿させることによってインサイチューで形成されるような、ミョウバン誘導体である。
【０１８５】
本発明のワクチン製剤における使用のためのもう１つのアルミニウムベースのアジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバント（Ａｌ（ＯＨ）３）または、約５００ｍ２／ｇの表面積を有する、優れた吸着剤である結晶性オキシ水酸化アルミニウム（ＡｌＯＯＨ）である。もう１つの実施形態では、アルミニウムベースのアジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバントのヒドロキシル基の一部または全部の代わりにリン酸基を含む、リン酸アルミニウムアジュバント（ＡｌＰＯ４）またはヒドロキシリン酸アルミニウムである。ここで提供される好ましいリン酸アルミニウムアジュバントは、非晶質であり、酸性、塩基性および中性媒質に可溶性である。
【０１８６】
もう１つの実施形態では、アジュバントは、リン酸アルミニウムと水酸化アルミニウムの両方を含む。そのより特定の実施形態では、アジュバントは、リン酸アルミニウム対水酸化アルミニウムの重量比で２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１または９：１以上の比率のような、水酸化アルミニウムを上回る量のリン酸アルミニウムを有する。もう１つの実施形態では、ワクチン中のアルミニウム塩は、ワクチン用量当たり０．４−１．０ｍｇ、またはワクチン用量当たり０．４−０．８ｍｇ、またはワクチン用量当たり０．５−０．７ｍｇ、またはワクチン用量当たり約０．６ｍｇで存在する。
【０１８７】
一般に、好ましいアルミニウムベースのアジュバント、またはリン酸アルミニウム対水酸化アルミニウムのような複数のアルミニウムベースのアジュバントの比率は、抗原が所望ｐＨでアジュバントと反対の電荷を担持するように分子間の静電引力の最適化によって選択される。たとえばリン酸アルミニウムアジュバント（等電点＝４）はｐＨ７．４でリゾチームを吸着するが、アルブミンは吸着しない。アルブミンが標的である場合は、水酸化アルミニウムアジュバントが選択される（等電点＝１１．４）。あるいは、リン酸塩による水酸化アルミニウムの前処理はその等電点を低下させ、より塩基性の抗原にとって好ましいアジュバントにする。
【０１８８】
Ｂ．油性乳剤
（ムラミルペプチドまたは細菌細胞壁成分などの他の特異的免疫刺激剤と共にまたは他の免疫刺激剤なしで）アジュバントとしての使用に適する油性乳剤組成物および製剤は、ＭＦ５９（マイクロフルイダイザーを用いてサブミクロン粒子に製剤された、５％スクアレン、０．５％トゥイーン８０および０．５％スパン８５）などのスクアレン−水乳剤を含む。国際公開公報第ＷＯ９０／１４８３７号参照。また、Ｐｏｄｄａ（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ １９：２６７３−２６８０；Ｆｒｅｙら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅ ２１ ：４２３４−４２３７も参照のこと。ＭＦ５９は、ＦＬＵＡＤ（商標）インフルエンザウイルス三価サブユニットワクチンにおいてアジュバントとして使用されている。
【０１８９】
組成物における使用のための特に好ましいアジュバントは、サブミクロンの水中油型乳剤である。ここでの使用のための好ましいサブミクロン水中油型乳剤は、４−５％ｗ／ｖスクアレン、０．２５−１．０％ｗ／ｖトゥイーン８０（商標）（モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン）および／または０．２５−１．０％スパン８５（商標）（トリオレイン酸ソルビタン）、および場合によりＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）を含むサブミクロン水中油型乳剤などの、場合により様々な量のＭＴＰ−ＰＥを含むスクアレン／水乳剤、たとえば「ＭＦ５９」として知られるサブミクロン水中油型乳剤（国際公開公報第ＷＯ９０／１４８３７号；米国特許第６，２９９，８８４号；同第６，４５１，３２５号；およびＯｔｔら、“ＭＦ５９――Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｓａｆｅ ａｎｄ Ｐｏｔｅｎｔ Ａｄｊｕｖａｎｔ ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ”ｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．とＮｅｗｍａｎ，Ｍ．Ｊ．編集）（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ）１９９５，ｐ．２７７−２９６）である。ＭＦ５９は、１１０Ｙ型マイクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，Ｎｅｗｔｏｎ，ＭＡ）などのマイクロフルイダイザーを用いてサブミクロン粒子に製剤された、４−５％ｗ／ｖスクアレン（たとえば４．３％）、０．２５−０．５％ｗ／ｖトゥイーン８０（商標）および０．５％ｗ／ｖスパン８５（商標）を含み、および場合により様々な量のＭＴＰ−ＰＥを含む。たとえばＭＴＰ−ＰＥは、約０−５００μｇ／用量、より好ましくは０−２５０μｇ／用量、最も好ましくは０−１００μｇ／用量の量で存在し得る。ここで使用する、「ＭＦ５９−０」という用語は、ＭＴＰ−ＰＥを含まない上記サブミクロン水中油型乳剤を指し、ＭＦ５９−ＭＴＰは、ＭＴＰ−ＰＥを含む製剤を表わす。たとえば「ＭＦ５９−１００」は、ＭＴＰ−ＰＥ１００μｇ／用量を含む、等である。ここでの使用のもう１つのサブミクロン水中油型乳剤、ＭＦ６９は、４．３％ｗ／ｖスクアレン、０．２５％ｗ／ｖトゥイーン８０（商標）および０．７５％ｗ／ｖスパン８５（商標）、および場合によりＭＴＰ−ＰＥを含む。さらにもう１つのサブミクロン水中油型乳剤は、やはりサブミクロン乳剤にマイクロフルイダイズされた、１０％スクアレン、０．４％トゥイーン８０（商標）、５％プルロニックブロックポリマーＬ１２１およびｔｈｒ−ＭＤＰを含む、ＳＡＦとしても知られるＭＦ７５である。ＭＦ７５−ＭＴＰは、ＭＴＰ−ＰＥ１００−４００μｇ／用量のような、ＭＴＰを含むＭＦ７５製剤を表わす。
【０１９０】
組成物における使用のための、サブミクロン水中油型乳剤、その製造方法およびムラミルペプチドなどの免疫刺激剤は、国際公開公報第ＷＯ９０／１４８３７号；米国特許第６，２９９，８８４号；および同第６，４５１，３２５号に詳述されている。
【０１９１】
フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）およびフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）も、本発明におけるアジュバントとして使用し得る。
【０１９２】
Ｃ．サポニン製剤
サポニン製剤も、本発明におけるアジュバントとしての使用に適する。サポニンは、広範囲の植物種の樹皮、葉、幹、根、さらには花において認められるステロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドの異種群である。Ｑｕｉｌｌａｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａの木の樹皮から単離されるサポニンは、アジュバントとして広く研究されてきた。サポニンはまた、Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔａ（サルサパリラ）、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（ブライダルベール）およびＳａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉａｎａｌｉｓ（サボンソウの根）から商業的に入手できる。サポニンアジュバント製剤は、ＱＳ２１などの精製製剤、ならびにＩＳＣＯＭなどの脂質製剤を含む。サポニンアジュバント製剤は、ＳＴＩＭＵＬＯＮ（登録商標）アジュバント（Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）を含む。
【０１９３】
サポニン組成物は、高速薄層クロマトグラフィー（ＨＰ−ＴＬＣ）および逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を用いて精製されてきた。ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−ＢおよびＱＨ−Ｃを含む、これらの手法を用いた特定精製画分が同定されている。好ましくは、サポニンはＱＳ２１である。ＱＳ２１の生産方法は、米国特許第５，０５７，５４０号に開示されている。サポニン製剤はまた、コレステロールなどのステロールを含み得る（国際公開公報第ＷＯ９６／３３７３９号参照）。
【０１９４】
サポニンとコレステロールとの組合せは、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる独特の粒子を形成するために使用できる。ＩＳＣＯＭはまた、典型的にはホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンなどのリン脂質も含む。いかなる公知のサポニンもＩＳＣＯＭにおいて使用できる。好ましくは、ＩＳＣＯＭは、Ｑｕｉｌ Ａ、ＱＨＡおよびＱＨＣの１またはそれ以上を含む。ＩＳＣＯＭはさらに、欧州特許第０１０９９４２号、国際公開公報第ＷＯ９６／１１７１１号および同第ＷＯ９６／３３７３９号に述べられている。場合により、ＩＳＣＯＭは付加的な界面活性剤を含まなくてもよい。国際公開公報第ＷＯ００／０７６２１号参照。
【０１９５】
サポニンベースのアジュバントの開発の総説は、Ｂａｒｒら、（１９９８）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．３２：２４７−２７１に認められる。Ｓｊｏｌａｎｄｅｒら（１９９８）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．３２：３２１−３３８も参照のこと。
【０１９６】
Ｄ．ビロゾームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）
ビロゾームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）もアジュバントとして適切である。これらの構造は一般に、場合によりリン脂質と組み合わせたまたはリン脂質と共に製剤された、ウイルスからの１またはそれ以上のタンパク質を含む。それらは一般に非病原性、非複製性であり、一般にいかなる天然ウイルスゲノムも含まない。ウイルスタンパク質は、組換え生産され得るかまたは全ウイルスから単離され得る。ビロゾームまたはＶＬＰにおける使用に適するこれらのウイルスタンパク質は、インフルエンザウイルス（ＨＡまたはＮＡなど）、Ｂ型肝炎ウイルス（コアまたはキャプシドタンパク質など）、Ｅ型肝炎ウイルス、麻疹ウイルス、シンドビスウイルス、ロタウイルス、口蹄疫ウイルス、レトロウイルス、ノーウォークウイルス、ヒトパピローマウイルス、ＨＩＶ、ＲＮＡファージ、Ｑβファージ（コートタンパク質など）、ＧＡファージ、ｆｒファージ、ＡＰ２０５ファージ、およびＴｙ（レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１など）に由来するタンパク質を含む。ＶＬＰは、国際公開公報第ＷＯ０３／０２４４８０号；同第ＷＯ０３／０２４４８１号；Ｎｉｉｋｕｒａら（２００２）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２９３：２７３−２８０；Ｌｅｎｚら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６（９）５３４６−５３５５；Ｐｉｎｔｏら（２００３）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８８：３２７−３３８；およびＧｅｒｂｅｒら（２００１）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５（１０）：４７５２−４７６０においてさらに論じられている。ビロゾームは、たとえばＧｌｕｃｋら（２００２）Ｖａｃｃｉｎｅ ２０：Ｂ１０−Ｂ１６においてさらに論じられている。免疫増強性再溶解インフルエンザビロゾーム（ＩＲＩＶ）が、鼻内三価ＩＮＦＬＥＸＡＬ（商標）製品（ＭｉｓｃｈｌｅｒとＭｅｔｃａｌｆｅ（２００２）Ｖａｃｃｉｎｅ ２０、補遺５：Ｂ１７−２３）およびＩＮＦＬＵＶＡＣ ＰＬＵＳ（商標）製品におけるサブユニット抗原送達システムとして使用されている。
【０１９７】
Ｅ．細菌または微生物誘導体
本発明における使用に適するアジュバントは、以下のような細菌または微生物誘導体を含む：
（１）腸内細菌リポ多糖（ＬＰＳ）の非毒性誘導体：そのような誘導体は、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）を含む。３ｄＭＰＬは、４、５または６本のアシル化された鎖と３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａの混合物である。３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａの好ましい「微小粒子」形態は、欧州特許第０６８９４５４号に開示されている。そのような３ｄＭＰＬの「微小粒子」は、０．２２ミクロンの膜を通して滅菌ろ過されるのに十分な程度に小さい（欧州特許第０６８９４５４号参照）。他の非毒性ＬＰＳ誘導体は、リン酸アミノアルキルグルコサミニド誘導体、たとえばＲＣ−５２９などのモノホスホリル脂質Ａミミックを含む。Ｊｏｈｎｓｏｎら（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２７３−２２７８参照。
【０１９８】
（２）脂質Ａ誘導体：脂質Ａ誘導体は、ＯＭ−１７４などの大腸菌からの脂質Ａの誘導体を含む。ＯＭ−１７４は、たとえばＭｅｒａｌｄｉら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅ ２１：２４８５−２４９１；およびＰａｊａｋら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅ ２１：８３６−８４２に述べられている。
【０１９９】
（３）免疫刺激オリゴヌクレオチド：本発明におけるアジュバントとしての使用に適する免疫刺激オリゴヌクレオチドまたはポリマー分子は、ＣｐＧモチーフ（非メチル化シトシンとそれに続くグアノシンを含む、リン酸結合によって連結された配列）を含むヌクレオチド配列を含む。パリンドロームまたはポリ（ｄＧ）配列を含む細菌二本鎖ＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドも、免疫刺激性であることが示されている。ＣｐＧは、ホスホロチオエート修飾などのヌクレオチド修飾／類似体を含むことができ、二本鎖または一本鎖であり得る。場合により、グアノシンは、２’−デオキシ−７−デアザグアノシンなどの類似体で置換されていてもよい。可能な類似体置換の例に関しては、Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３１（９）：２３９３−２４００；国際公開公報第ＷＯ０２／２６７５７号；および同第ＷＯ９９／６２９２３号参照。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント作用はさらに、Ｋｒｉｅｇ（２００３）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９（７）：８３１−８３５；ＭｃＣｌｕｓｋｉｅら（２００２）ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３２：１７９−１８５；国際公開公報第ＷＯ９８／４０１００号；米国特許第６，２０７，６４６号；同第６，２３９，１１６号；および同第６，４２９，１９９号において論じられている。
【０２００】
ＣｐＧ配列は、モチーフＧＴＣＧＴＴまたはＴＴＣＧＴＴなどのＴＬＲ９を対象とし得る。Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３１（第３部）：６５４−６５８参照。ＣｐＧ配列は、ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮなどのＴｈ１免疫応答を誘導することに特異的であり得るか、またはＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮなどのＢ細胞応答を誘導することにより特異的であり得る。ＣｐＧ−ＡおよびＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮは、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌら（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｎｏｌ．１７０（８）：４０６１−４０６８；Ｋｒｉｅｇ（２００２）ＴＲＥＮＤＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３（２）：６４−６５；および国際公開公報第ＷＯ０１／９５９３５号において論じられている。好ましくは、ＣｐＧはＣｐＧ−Ａ ＯＤＮである。
【０２０１】
好ましくは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’末端が受容体認識のためにアクセス可能であるように構築される。場合により、２個のＣｐＧオリゴヌクレオチド配列がそれらの３’末端で結合して、「イムノマー（ｉｍｍｕｎｏｍｅｒｓ）」を形成し得る。たとえばＫａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）ＢＢＲＣ ３０６：９４８−９５３；Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３１（第３部）：６５４−６５８；Ｂｈａｇａｔら（２００３）ＢＢＲＣ ３００：８５３−８６１；および国際公開公報第ＷＯ０３／０３５８３６号参照。
【０２０２】
免疫刺激オリゴヌクレオチドおよびポリマー分子はまた、ポリビニル骨格（Ｐｉｔｈａら（１９７０）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ２０４（１）：３９−４８；Ｐｉｔｈａら（１９７０）Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ９（８）：９６５−９７７）、およびモルホリノ骨格（米国特許第５，１４２，０４７号；同第５，１８５，４４４号）などの、しかしこれらに限定されない、選択的ポリマー骨格構造を含む。様々な他の荷電および非荷電ポリヌクレオチド類似体が当技術分野において公知である。非荷電結合（たとえばメチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメート）および荷電結合（たとえばホスホロチオエートおよびホスホロジチオエート）を含むが、これらに限定されない、数多くの骨格修飾が当技術分野において公知である。
【０２０３】
（４）ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその無毒化誘導体：細菌ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその無毒化誘導体は、本発明におけるアジュバントとして使用し得る。好ましくは、タンパク質は、大腸菌（すなわち大腸菌易熱性エンテロトキシン「ＬＴ」）、コレラ菌（「ＣＴ」）または百日咳菌（「ＰＴ」）に由来する。粘膜アジュバントとしての無毒化ＡＤＰ−リボシル化毒素の使用は国際公開公報第ＷＯ９５／１７２１１号に、および非経口アジュバントとしての使用は国際公開公報第ＷＯ９８／４２３７５号に述べられている。好ましくは、アジュバントは、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２およびＬＴＲ１９２Ｇなどの無毒化ＬＴ突然変異体である。ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその無毒化誘導体、特にＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２のアジュバントとしての使用は、以下の参考文献に認められる：Ｂｅｉｇｎｏｎら（２００２）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７０（６）：３０１２−３０１９；Ｐｉｚｚａら（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ １９：２５３４−２５４１；Ｐｉｚｚａら（２０００）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２９０（４−５）：４５５−４６１；Ｓｃｈａｒｔｏｎ−Ｋｅｒｓｔｅｎら（２０００）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６８（９）：５３０６−５３１３；Ｒｙａｎら（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６７（１２）：６２７０−６２８０；Ｐａｒｔｉｄｏｓら（１９９９）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．６７（３）：２０９−２１６；Ｐｅｐｐｏｌｏｎｉら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅｓ ２（２）：２８５−２９３；およびＰｉｎｅら（２００２）Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ ８５（１−３）：２６３−２７０。アミノ酸置換についての数字参照は、好ましくは、Ｄｏｍｅｎｉｇｈｉｎｉら（１９９５）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１５（６）：１１６５−１１６７に示されているＡＤＰ−リボシル化毒素のＡおよびＢサブユニットのアラインメントに基づく。
【０２０４】
‘ＥＲ ８０３０５８’、‘ＥＲ ８０３７３２’、‘ＥＲ ８０４０５３’、‘ＥＲ ８０４０５８’、‘ＥＲ ８０４０５９’、‘ＥＲ ８０４４４２’、‘ＥＲ ８０４６８０’、‘ＥＲ ８０４７６４’、‘ＥＲ ８０３０２２’または‘ＥＲ ８０４０５７’などの、国際公開公報第ＷＯ０３／０１１２２３において定義される、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物、またはそれらの塩：
【０２０５】
【化３】
たとえば：
【０２０６】
【化４】
も、アジュバントとして使用できる。
【０２０７】
Ｆ．ヒト免疫調節剤
アジュバントとしての使用に適するヒト免疫調節剤は、インターロイキン（たとえば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２等）、インターフェロン（たとえばインターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのサイトカインを含む。
【０２０８】
Ｇ．生体接着剤および粘膜接着剤
生体接着剤および粘膜接着剤もアジュバントとして使用し得る。適切な生体接着剤は、エステル化ヒアルロン酸ミクロスフェア（Ｓｉｎｇｈら（２００１）Ｊ．Ｃｏｎｔ．Ｒｅｌｅａｓｅ．７０：２６７−２７６）またはポリアクリル酸の架橋誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、多糖およびカルボキシメチルセルロースなどの粘膜接着剤を含む。キトサンおよびその誘導体も、本発明におけるアジュバントとして使用し得る（国際公開公報第ＷＯ９９／２７９６０号参照）。
【０２０９】
Ｈ．リポソーム
アジュバントとしての使用に適するリポソーム製剤の例は、米国特許第６，０９０，４０６号；同第５，９１６，５８８号；および欧州特許公開第０６２６１６９号に述べられている。
【０２１０】
Ｉ．ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル製剤
本発明における使用に適するアジュバントは、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルを含む（たとえば国際公開公報第ＷＯ９９／５２５４９号参照）。そのような製剤はさらに、オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（国際公開公報第ＷＯ０１／２１２０７号）ならびにオクトキシノールなどの少なくとも１つの付加的な非イオン界面活性剤と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステル界面活性剤（国際公開公報第ＷＯ０１／２１１５２号）を包含する。
【０２１１】
好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ラウレス９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテル、およびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテルから選択される。
【０２１２】
Ｊ．ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ）
ＰＣＰＰ製剤は、たとえばＡｎｄｒｉａｎｏｖら（１９９８）Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ １９（１−３）：１０９−１１５；およびＰａｙｎｅら（１９９８）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌ． Ｒｅｖ．３１（３）：１８５−１９６に述べられている。
【０２１３】
Ｋ．ムラミルペプチド
アジュバントとしての使用に適するムラミルペプチドの例は、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−ｌ−アラニル−ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、およびＮ−アセチルムラミル−ｌ−アラニル−ｄ−イソグルタミニル−ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）を含む。
【０２１４】
Ｌ．イミダゾキノリン化合物
アジュバントとしての使用に適するイミダゾキノリン化合物の例は、Ｓｔａｎｌｅｙ（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２７（７）：５７１−５７７；Ｊｏｎｅｓ（２００３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ ４（２）：２１４−２１８；および米国特許第４，６８９，３３８号；同第５，３８９，６４０号；同第５，２６８，３７６号；同第４，９２９，６２４号；同第５，２６６，５７５号；同第５，３５２，７８４号；同第５，４９４，９１６号；同第５，４８２，９３６号；同第５，３４６，９０５号；同第５，３９５，９３７号；同第５，２３８，９４４号；および同第５，５２５，６１２号においてさらに説明されている、イミキモドおよびその類似体を含む。
【０２１５】
Ｍ．チオセミカルバゾン化合物
アジュバントとしての使用に適するチオセミカルバゾン化合物の例、ならびにそのような化合物を製剤する、製造する、およびスクリーニングする方法は、国際公開公報第ＷＯ０４／６０３０８号に述べられているものを含む。チオセミカルバゾンは、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの生産のためのヒト末梢血単核細胞の刺激において特に有効である。
Ｎ．トリプタントリン化合物
アジュバントとしての使用に適するトリプタントリン化合物の例、ならびにそのような化合物を製剤する、製造する、およびスクリーニングする方法は、国際公開公報第ＷＯ０４／６４７５９号に述べられているものを含む。トリプタントリン化合物は、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの生産のためのヒト末梢血単核細胞の刺激において特に有効である。
【０２１６】
Ｏ．ヌクレオシド類似体
様々なヌクレオシド類似体、たとえば（ａ）イサトラビン（Ｉｓａｔｏｒａｂｉｎｅ）（ＡＮＡ−２４５；７−チア−８−オキソグアノシン）：
【０２１７】
【化５】
およびそのプロドラッグ；（ｂ）ＡＮＡ９７５；（ｃ）ＡＮＡ−０２５−１；（ｄ）ＡＮＡ３８０；（ｅ）米国特許第６，９２４，２７１号；米国特許公開第２００５／００７０５５６号；および米国特許第５，６５８，７３１号に開示されている化合物；（ｆ）式：
【０２１８】
【化６】
［式中、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立してＨ、ハロ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、置換Ｃ１−６アルコキシ、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、Ｃ１−６アリール、置換Ｃ１−６アリール、Ｃ１−６アルキル、または置換Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ３は、存在しないか、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリール、置換Ｃ６−１０アリール、ヘテロシクリル、または置換ヘテロシクリルであり；
Ｒ４およびＲ５は、各々独立してＨ、ハロ、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、−Ｃ（Ｏ）−Ｒｄ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキルであるか、または一緒に結合してＲ４−５：
【０２１９】
【化７】
［結合は
【０２２０】
【化８】
によって示される結合で達成される］
として５員環を形成し；
Ｘ１およびＸ２は、各々独立してＮ、Ｃ、ＯまたはＳであり；
Ｒ８は、Ｈ、ハロ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、−ＯＨ、−ＮＲａＲｂ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−Ｒｃ、−Ｏ−（Ｃ１−６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｐＲｅ、または−Ｃ（Ｏ）−Ｒｄであり；
Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリルまたはＲ９ａであり、Ｒ９ａは：
【０２２１】
【化９】
［結合は
【０２２２】
【化１０】
によって示される結合で達成される］
であり；
Ｒ１０およびＲ１１は、各々独立してＨ、ハロ、Ｃ１−６アルコキシ、置換Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲａＲｂ、または−ＯＨであり；
各々のＲａおよびＲｂは、独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒｄ、Ｃ６−１０アリールであり；
各々のＲｃは、独立してＨ、リン酸塩、二リン酸塩、三リン酸塩、Ｃ１−６アルキル、または置換Ｃ１−６アルキルであり；
各々のＲｄは、独立してＨ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、置換Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨ（置換Ｃ１−６アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−Ｎ（置換Ｃ１−６アルキル）２、Ｃ６−１０アリール、またはヘテロシクリルであり；
各々のＲｅは、独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリール、置換Ｃ６−１０アリール、ヘテロシクリル、または置換ヘテロシクリルであり；
各々のＲｆは、独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒｄ、リン酸塩、二リン酸塩、または三リン酸塩であり；
各々のｎは、独立して０、１、２または３であり；
各々のｐは、独立して０、１または２である］
を有する化合物；または（ｇ）（ａ）−（ｆ）のいずれかの医薬的に許容される塩、（ａ）−（ｆ）のいずれかの互変異性体、または互変異性体の医薬的に許容される塩
が、アジュバントとして使用できる。
【０２２３】
Ｐ．リン酸含有非環式骨格に連結された脂質
リン酸含有非環式骨格に連結された脂質を含むアジュバントは、ＴＬＲ４拮抗物質Ｅ５５６４（Ｗｏｎｇら（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４３（７）：７３５−７４２；米国特許出願第２００５／０２１５５１７号）：
【０２２４】
【化１１】
を含む。
【０２２５】
Ｑ．低分子免疫増強剤（ＳＭＩＰ）
ＳＭＩＰは以下を含む：
・Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−エチル−Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ２−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・１−（２−メチルプロピル）−Ｎ２−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−ブチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−ブチル−Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ２−ペンチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ２−プロプ−２−エニル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・１−（２−メチルプロピル）−２−［（フェニルメチル）チオ］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；
・１−（２−メチルプロピル）−２−（プロピルチオ）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；
・２−［［４−アミノ−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−イル］（メチル）アミノ］エタノール；
・２−［［４−アミノ−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−イル］（メチル）アミノ］エチルアセテート；
・４−アミノ−１−（２−メチルプロピル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン；
・Ｎ２−ブチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ４，Ｎ４−ビス（フェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−ブチル−Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ４，Ｎ４−ビス（フェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ４，Ｎ４−ビス（フェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ４，Ｎ４−ビス（フェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・１−｛４−アミノ−２−［メチル（プロピル）アミノ］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル｝−２−メチルプロパン−２−オール；
・１−［４−アミノ−２−（プロピルアミノ）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−２−メチルプロパン−２−オール；
・Ｎ４，Ｎ４−ジベンジル−１−（２−メトキシ−２−メチルプロピル）−Ｎ２−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン。
【０２２６】
Ｒ．プロテオソーム
１つのアジュバントは、第二グラム陰性細菌に由来するリポ糖製剤と組み合わせた第一グラム陰性細菌に由来する外膜タンパク質プロテオソーム製剤であり、外膜タンパク質プロテオソームとリポ糖製剤は安定な非共有結合アジュバント複合体を形成する。そのような複合体は、髄膜炎菌外膜とリポ多糖からなる複合体、「ＩＶＸ−９０８」を含む。それらはインフルエンザワクチンのためのアジュバントとして使用されてきた（国際公開公報第ＷＯ０２／０７２０１２号）。
【０２２７】
Ｓ．他のアジュバント
免疫刺激剤として働く他の物質は、Ｂｕｒｄｍａｎ，Ｊ．Ｒ．ら（編集）（１９９５）（Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）（第７章）およびＯ’Ｈａｇａｎ，Ｄ．Ｔ．（２０００）（Ｖａｃｃｉｎｅ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ）（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅシリーズの第４２巻））に開示されている。
【０２２８】
さらなる有用なアジュバント物質は以下を含む：
・メチルイノシン５’−一リン酸（“ＭＩＭＰ”）（Ｓｉｇｎｏｒｅｌｌｉ ＆ Ｈａｄｄｅｎ（２００３）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．３（８）：１１７７−１１８６）。
・式：
【０２２９】
【化１２】
［式中、Ｒは、水素、直鎖または分枝、非置換または置換、飽和または不飽和アシル、アルキル（たとえばシクロアルキル）、アルケニル、アルキニルおよびアリール基、あるいはそれらの医薬的に許容される塩または誘導体から成る群より選択される］
を有するものなどの、ポリヒドロキシル化ピロリジジン化合物（国際公開公報第ＷＯ２００４／０６４７１５号）。例は、カジュアリン（ｃａｓｕａｒｉｎｅ）、カジュアリン−６−α−Ｄ−グルコピラノース、３−エピ−カジュアリン、７−エピ−カジュアリン、３，７−ジエピ−カジュアリン等を含む。
・γイヌリン（Ｃｏｏｐｅｒ（１９９５）Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６：５５９−５８０）またはアルガムリンなどのその誘導体。
・国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２２７６９号に開示されている化合物。
・アシルピペラジン化合物、インドールジオン化合物、テトラヒドロイソキノリン（ＴＨＩＱ）化合物、ベンゾシクロジオン化合物、アミノアザビニル化合物、アミノベンズイミダゾールキノリノン（ＡＢＩＱ）化合物（米国特許第６，６０５，６１７号；国際公開公報第ＷＯ０２／１８３８３号）、ヒドロフタルアミド化合物、ベンゾフェノン化合物、イソキサゾール化合物、ステロール化合物、キナジリノン化合物、ピロール化合物（国際公開公報第ＷＯ２００４／０１８４５５号）、アントラキノン化合物、キノキサリン化合物、トリアジン化合物、ピラゾロピリミジン化合物、およびベンズアゾール化合物（国際公開公報第ＷＯ０３／０８２２７２号）を含む、国際公開公報第ＷＯ２００４／８７１５３号に開示されている化合物。
・ロキソリビン（７−アリル−８−オキソグアノシン（米国特許第５，０１１，８２８号）。
・アミノプロピル−ジメチル−ミリストレイルオキシ−プロパナミニウムブロマイド−ジフィタノイルホスファチジル−エタノールアミン（「Ｖａｘｆｅｃｔｉｎ（商標）」）またはアミノプロピル−ジメチル−ビス−ドデシルオキシ−プロパナミニウムブロマイド−ジオレオイルホスファチジル−エタノールアミン（「ＧＡＰ−ＤＬＲＩＥ：ＤＯＰＥ」）などの、陽イオン脂質と（通常は中性の）共脂質の製剤。（±）−Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ビス（シン−９−テトラデセネイルオキシ）−１−プロパナミニウム塩を含む製剤が好ましい（米国特許第６，５８６，４０９号）。
【０２３０】
本発明はまた、上記で特定したアジュバントの１またはそれ以上の態様の組合せを含み得る。たとえば以下のアジュバント組成物が本発明において使用し得る：（１）サポニンおよび水中油型乳剤（国際公開公報第ＷＯ９９／１１２４１号）；（２）サポニン（たとえばＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（たとえば３ｄＭＰＬ）（国際公開公報第ＷＯ９４／００１５３号参照）；（３）サポニン（たとえばＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（たとえば３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；（４）サポニン（たとえばＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（場合により＋ステロール）（国際公開公報第ＷＯ９８／５７６５９号）；（５）たとえばＱＳ２１および／または水中油型乳剤と３ｄＭＰＬの組合せ（欧州特許第０８３５３１８号；同第０７３５８９８号；および同第０７６１２３１号参照）；（６）１０％ スクアレン、０．４％トゥイーン８０、５％プルロニックブロックポリマーＬ１２１、およびサブミクロン乳剤にマイクロフルイダイズされるかまたはより大きな粒径の乳剤を生成するために渦攪拌されたｔｈｒ−ＭＤＰを含む、ＳＡＦ；（７）２％スクアレン、０．２％トゥイーン８０、およびモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）および細胞壁骨格（ＣＷＳ）から成る群からの１またはそれ以上の細菌細胞壁成分、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ（商標））を含有する、Ｒｉｂｉ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）；（８）１またはそれ以上の無機塩（アルミニウム塩など）＋ＬＰＳの非毒素誘導体（たとえば３ｄＰＭＬ）；（９）１またはそれ以上の無機塩（アルミニウム塩など）＋免疫刺激オリゴヌクレオチド（ＣｐＧモチーフを含むヌクレオチド配列など）。
【０２３１】
アルミニウム塩およびＭＦ５９は、注射用インフルエンザワクチンに関する使用のための好ましいアジュバントである。細菌毒素および生体接着剤は、鼻内ワクチンなどの経粘膜送達ワクチンに関する使用のための好ましいアジュバントである。
【０２３２】
６．投与
ひとたび製剤（および必要に応じて再懸濁）されれば、本発明のナノ粒子組成物は非経口的に、たとえば注射によって（無針でもよい）投与することができる。これに関して、ナノ粒子組成物は、再懸濁媒質（たとえば注射用蒸留水）を供給するためおよび生じた懸濁物を回収するための隔壁または他の適切な手段と共に供給される、バイアルまたは他の容器において凍結乾燥形態で供給され得る。適切な注射器も注射のために供給され得る。
【０２３３】
組成物は、たとえば皮下、皮内、筋肉内、静脈内、動脈内、または腹腔内経路で注入され得る。他の投与方法は、鼻、粘膜、眼内、直腸、膣、経口および肺投与、および経皮適用を含む。
【０２３４】
一部の実施形態では、本発明の組成物は部位指定標的送達のために使用できる。たとえば組成物の静脈内投与は、肺、肝臓、脾臓、血液循環または骨髄を標的するために使用できる。
【０２３５】
本発明のナノ粒子組成物は、一般に１またはそれ以上の医薬的に許容される賦形剤を含む。たとえば水、食塩水、グリセロール、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸、エタノール等のようなビヒクルを使用し得る。湿潤剤または乳化剤、生物学的緩衝物質等のような他の賦形剤も存在し得る。生物学的緩衝剤は、薬理的に許容され、所望ｐＨ、すなわち生理的範囲内のｐＨを有する製剤を提供する、実質上いかなる溶液でもあり得る。例は、食塩水、リン酸緩衝食塩水、トリス緩衝食塩水、ハンクス緩衝食塩水等を含む。最終投与形態に依存して、結合剤、崩壊剤、充填剤（希釈剤）、潤滑剤、流動促進剤、圧縮補助剤、着色料、甘味料、防腐剤、懸濁化／分散剤、薄膜形成剤／被覆剤、着香料および印刷インクを含む、当技術分野で公知の他の賦形剤も導入できる。
【０２３６】
治療は、単回投与スケジュールまたは複数回投与スケジュールに従って実施し得る。複数回投与スケジュールは、最初の投与課程をたとえば１−１０回の別個の投与で実施し、その後、治療応答を維持するおよび／または増強するように選択される時間間隔を置いて、たとえば２回目の投与については１−４ヵ月後に、別途の投与を行い、必要に応じて数ヵ月後にその後の投与を実施するものである。投与計画はまた、少なくとも一部には、被験体の必要性によって決定され、医師の判断に依存する。
【０２３７】
さらに、疾患の予防を所望する場合、組成物は一般に、対象とする感染または疾患の一次発生の出現前に投与される。他の治療形態、たとえば症状または再発の軽減または排除を所望する場合は、組成物は一般に、対象とする感染または疾患の一次発生の出現後に投与される。
【０２３８】
７．キット
本発明は、被験体への適切な量の有効成分の投与を簡単にすることができるキットを含む。典型的な本発明のキットは、好ましくは密封容器中の、本発明の凍結乾燥ナノ粒子組成物の単位投与形態を含む。本発明のキットは、１またはそれ以上の有効成分を投与するために使用できる、医薬的に許容されるビヒクルをさらに含み得る。そこで、特定実施形態では、キットは、投与に適する微粒子不含無菌溶液を形成するためにナノ粒子組成物を溶解することができる適切なビヒクルの密封容器、および有効成分を投与するために使用できる装置をさらに含む。そのような装置の例は、注射器、点滴袋、パッチおよび吸入器を含むが、これらに限定されない。
【実施例】
【０２３９】
Ｃ．実験
以下は、本発明を実施するための特定実施形態の例である。これらの例は説明のためにのみ提供されるものであり、いかなる意味においても本発明の範囲を限定することは意図されていない。
【０２４０】
使用する数（たとえば量、温度等）に関しては正確さを保証するように努力を払ったが、ある程度の実験誤差および偏差は、言うまでもなく、許容されるべきである。
【０２４１】
スクロース、マンニトール、グルコース、トレハロース、デキストラン（分子量＝７０，０００）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）およびオボアルブミン、鶏卵の卵白（オボアルブミンまたはＯＶＡ）、ポリビニルピロリドン（分子量＝４０，０００）、カルボキシメチルセルロース（分子量＝９０，０００）、プルロニックＦ６８（ポロキサマー１８８としても知られる）、および他のすべての化学物質は、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）からであった。ポリビニルアルコール（分子量＝１５，０００）はＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ（現在はＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ）からであった。アセトンはＥＭＤ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）からであった。
【０２４２】
インフルエンザ抗原（ＦＩｕＣＣ）および髄膜炎菌血清型Ｂ抗原（ＭｅｎＢ ２８７）はＣｈｉｒｏｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓからであった。大腸菌由来の組換え髄膜炎菌血清型Ｂワクチン候補物質、ＭｅｎＢ ２８７（Ｃｈｉｒｏｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ，ＩＲＩＳ，Ｃｈｉｒｏｎ，Ｓ．ｒ．ｌ．，Ｓｉｅｎａ，Ｉｔａｌｙ）は、先に記述されているように（Ｍ．Ｃｏｍａｎｄｕｃｃｉら（２００２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９５：１４４５−１４５４）単離および精製した．ＧＢＳ１はＣｈｉｒｏｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓからであり、先に記述されているように（Ｄ．Ｍａｉｏｎｅら（２００５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３０９：１４８−１５０）同定し、精製した。
【０２４３】
（実施例１）
ナノ粒子およびミクロ粒子製剤
ナノ沈殿法（Ｆｅｓｓｉ，Ｈ．，Ｆ．ＰｕｉｓｉｅｕｘとＪ．Ｐ．Ｄｅｖｉｓｓａｇｕｅｔ，“Ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｓｐｅｒｓｉｂｌｅ ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｓｙｓｔｅｍｓ ｏｆ ａ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｒｍ ｏｆ ｎａｎｏｃａｐｓｕｌｅｓ，”Ｄｅｖｉｓｓａｇｕｅｔらの米国特許第５，０４９，３２２号に対応する、欧州特許第０２７４９６１Ｂ１号参照）により、粒径１００ｎｍ−５００ｎｍの範囲にわたる粒子を作製した。詳細には、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍより入手可能な、５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および〜３０ｋＤａの分子量を有するＰＬＧポリマー、ＲＧ５０３をアセトン（０．５％ｗ／ｖ）に溶解し、この溶液を６００ｒｐｍで磁気攪拌しながら等容量の水に滴下して、アセトンを蒸発させることにより、〜１００−〜１２０ｎｍ粒子を作製した。Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍより入手可能な、７５：２５のラクチド／グリコリドモル比および〜２０ｋＤａの分子量を有するＰＬＧ、ＲＧ７５２も、１つの場合に使用した。
【０２４４】
種々の大きさのナノ粒子を、有機相中の初期ＰＬＧ濃度を調節することによってまたは溶媒をアセトンからＴＨＦに切り替えることによって作製した。ＰＬＧ濃度の上昇は粒径を上昇させ、アセトンからＴＨＦへの切り替えも粒径を上昇させた。様々な大きさのナノ粒子の調製を可能にするパラメータを論じたいくつかの文献報告がある（Ｐ．Ｄ．Ｓｃｈｏｌｅｓら（１９９３）Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ ２５：１４５−１５３；Ｌ．Ｐｅｌｔｏｎｅｎら（２００２）ＡＡＰＳ ＰｈａｒｍＳｃｉＴｅｃｈ ３：Ｅ３２；Ｐ．Ｗｅｈｒｌｅら（１９９５）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．４１：１９−２６）。たとえば微小粒子（〜１２０ｎｍ）は、水２５ｍＬを添加したアセトン中の０．５％（ｗ／ｖ）ＰＬＧ２５ｍＬで調製した。中間サイズの粒子（〜１８０ｎｍ）は、水２５ｍＬを添加したテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中の０．５％（ｗ／ｖ）ＰＬＧ２５ｍＬで作製した。大型粒子（〜２３０ｎｍ）は、水４０ｍＬを添加したアセトン中の４％（ｗ／ｖ）ＰＬＧ１２．５ｍＬで調製した。
〜１μｍの大きさの、０．０５％スルホコハク酸ジオクチルナトリウム（ＤＳＳ）を有するミクロ粒子を、ナノ粒子調製法とは有意に異なる、これまでに確立されている二重乳化溶媒蒸発法（Ｓｉｎｇｈ，Ｍ．ら（２００４）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，９３（２）：２７３−２８２）によって調製した。詳細には、水／油／水乳剤手法を使用してミクロ粒子を形成した。ＰＬＧをジクロロメタン（ＤＣＭ）（６％ｗ／ｖ）に溶解し、リン酸緩衝食塩水の水相（１：４ 水：油）（ｖ：ｖ）に添加して、２分間均質化した。この油中水型乳剤を、次に、ＤＳＳを含む水（１：４ 油中水型乳剤：水）（ｖ：ｖ）に添加し、氷浴にて高速で１０分間均質化した。生じた懸濁物を磁気攪拌してＤＣＭを蒸発させた。ミクロ粒子は、０．８３μｍ（Ｄ（容積、５０％））および１．２４μｍ（Ｄ（容積、９０％））の平均粒径を有していた。
【０２４５】
ミクロ粒子と比較してナノ粒子の１つの利点は作製の容易さであった。ナノ粒子法は、単一相に基づき、高せん断均質化を必要とせず、磁気攪拌しか必要としなかった。２つの方法で使用される有機溶媒の種類は異なっていた。ミクロ粒子法ではより毒性のＤＣＭが使用されるのに比べて、ナノ粒子法はアセトンを使用した。食品医薬品局（ＦＤＡ）はＤＣＭをクラス２溶媒と分類し、医薬品におけるその使用を制限している。アセトンはクラス３溶媒であり、ＦＤＡは許容残留溶媒の量により高い制限を与えている。
【０２４６】
（実施例２）
ナノ粒子の滅菌ろ過
先に示したように、より小さなナノ粒子の１つの利点は、それらが粒子作製後に滅菌ろ過できることである。この実施例では、ナノ粒子を１１０−２３０ｎｍの範囲内で作製し、Ｐａｌｌ Ａｃｒｏｄｉｓｃ ０．２μｍフィルターで滅菌ろ過した。ナノ粒子の大きさは、５００ｎｍ以下の粒子についてはＺｅｔａｓｉｚｅｒ ３０００ＨＳＡ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ＵＫ）で測定した。より大きな粒子および凝集物はＨｏｒｉｂａ ＬＡ−９３０（Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）で測定した。この装置は粒径を測定するために静的光散乱に基づき、一方Ｚｅｔａｓｉｚｅｒは、より小さな粒子を検出するために動的光散乱を使用した。
【０２４７】
ζ電位は、特定希釈剤中０．２ｍｇ／ｍｌＰＬＧの典型的希釈濃度でＺｅｔａｓｉｚｅｒによって測定した。１２０ｎｍナノ粒子に関して、１０ｍＭクエン酸ナトリウム中のζ電位は−３９ｍＶであり、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ＝７．０中では−４８ｍＶであった。ζ電位は陰イオン性ＰＬＧに関して予想された範囲内であった。
【０２４８】
凍結乾燥した各々の試料１ｍＬをあらかじめ計量したバイアルに入れて、滅菌ろ過の前および後にＰＬＧ濃度を測定し、残存する質量によってＰＬＧ含量を決定した。一般に、より小さなナノ粒子（〜１２０ｎｍ）だけが滅菌ろ過前の値に匹敵するＰＬＧ濃度を有しており、実質的に粒径の変化は認められなかった。表１参照。滅菌ろ過したナノ粒子の内毒素レベル（ＬＡＬ）は０．４８−０．９６ＥＵ／ｍＬの範囲内であった。表からわかるように、小さなミクロ粒子（〜１２０ｎｍ）だけが滅菌ろ過前の値に匹敵するＰＬＧ濃度を有しており、粒径の変化はなかった。滅菌ろ過した１８１ｎｍ粒子の大きさは測定されなかった。
【０２４９】
【表１】
（実施例３）
凍結乾燥後のナノ粒子の再懸濁
ミクロ粒子と比較してナノ粒子の１つの不利な点は、凍結乾燥後、それらが必ずしも凍結前の大きさに再懸濁しないことである。本実施例では、界面活性剤および／または凍結保護剤を、凍結乾燥の直前にナノ粒子懸濁物にピペットで分注した。懸濁物をガラスバイアルに入れ、−８０℃で３０分間凍結した。凍結乾燥は、−４９℃および１３３×１０−３ｍＢａｒ未満の真空で操作する、Ｌａｂｃｏｎｃｏ Ｆｒｅｅｚｅ Ｄｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｆｒｅｅｚｏｎｅ ４．５（Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ，ＭＯ，ＵＳＡ）において実施した。凍結乾燥後、ナノ粒子５−１０ｍｇを水１ｍｌに再懸濁し、粒径を測定した。ナノ粒子の粒径測定前に、試料を２ｍＬ中５０μｌに希釈した。
【０２５０】
以下の表２からわかるように、許容されない粒径上昇を伴わずに（たとえば有意の凝集を伴わずに）、凍結乾燥ナノ粒子が再懸濁されることを可能にする賦形剤を添加することができる。たとえばナノ粒子を再懸濁するために界面活性剤が使用できる（たとえばＰＶＡ、１３１％ｗ／ｗ（ｗＰＶＡ／ｗＰＬＧ）、さらに、界面活性剤と凍結保護剤の組合せを使用することによって界面活性剤の量を低減することができる。そのような製剤の例は、３％（ｗ／ｖ）スクロースおよび４％（ｗ／ｖ）マンニトールと１０％（ｗ／ｗ）ＰＶＡ、５％（ｗ／ｖ）トレハロースおよび２．５％（ｗ／ｖ）マンニトールと１０％（ｗ／ｗ）ＰＶＡ、および５％（ｗ／ｖ）トレハロースおよび２．５％（ｗ／ｖ）マンニトールと０．５％（ｗ／ｗ）ＤＳＳを含む。
【０２５１】
【表２】
より詳細には、糖単独はナノ粒子凝集を生じさせた。界面活性剤単独（すなわちＰＶＡ）はナノ粒子再懸濁を可能にした。改善された再懸濁結果が、糖と界面活性剤を含む製剤で達成された。糖は、凍結乾燥ワクチン製剤のために付加的に２つの重要な機能を果たす。タンパク質抗原に関して、スクロースおよびトレハロースは、凍結乾燥工程の間タンパク質を安定化するのを助けることが示された（Ｊ．Ｆ．Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら（１９９７）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１４：９６９−９７５）。マンニトールは、凍結乾燥工程の間ケークの崩壊を回避するための足場として使用される充填剤である（Ｘ．ＴａｎｇとＭ．Ｊ．Ｐｉｋａｌ（２００４）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２１：１９１−２００）。適切な糖、たとえばスクロースとマンニトールまたはトレハロースとマンニトールの添加により、必要とされるＰＶＡの量が１０％（ｗ／ｗ）に低減された。１０−２０ｍｇ／ｍＬＰＬＧを含む典型的製剤に関して、これは１−２ｍｇ／ｍＬＰＶＡに等しい。１０％（ｗ／ｗ）ＣＭＣ、ＰＶＰまたはプルロニックＦ６８およびスクロースとマンニトールに関しては、粒子は凝集した。糖の組合せと濃度は、等張性必要条件を満たし、凍結乾燥後に洗練されたケークを形成し、タンパク質抗原を安定するのに役立つ。ワクチン生成物の浸透圧モル濃度は、２８０−３３０ｍＯｓｍ／Ｌの範囲内であるべきである。ＰＶＡと共に使用したスクロースとマンニトールまたはトレハロースとマンニトールの濃度は、適切な浸透圧モル濃度範囲内であり、初期液体容積と同じ大きさの凍結乾燥を導く。ＤＳＳも、トレハロースとマンニトール中、十分な濃度で適切な再懸濁を提供することが認められた。
【０２５２】
大型（２２１ｎｍ）および小型（１２２ｎｍ）ナノ粒子をまた、様々な濃度のＰＶＡ（ｗ／ｗＰＬＧ）プラス４％スクロース（ｗ／ｖ）および３％マンニトール（ｗ／ｖ）を使用した再懸濁後に分析した。ＰＬＧ含量は５ｍｇ／ｍＬであった。ペレットに結合したポリビニルアルコール（ＰＶＡ）の量と溶液中の遊離ＰＶＡの量を、最初に遠心分離によって（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ５４１５Ｄ、１３２００ｒｐｍで２０分間）懸濁物の固相を分離し、上清画分を取り出すことによって測定した。両方の混合物を２Ｎ ＮａＯＨ中で一晩加水分解し、ｐＨを中和して、先に述べられている方法（Ｊ．Ｈ．Ｆｉｎｌｅｙ（１９６１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．３３：１９２５−１９２７）；Ｅ．Ａｌｌｅｍａｎｎら（１９９８）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．３４：１７１−１８９）に従って透明な溶液のアリコートを分析した。前記方法では、試験溶液０．２ｍＬを４％ｗ／ｗホウ酸１．００ｍＬおよびヨウ素溶液（１．２７％ｗ／ｗＩ２および２．５％ｗ／ｗＫＩ）０．２０ｍＬと混合し、吸光度を６４４ｎｍで読み取って、直線性＞０．９９５（Ｒ２）を有する検量曲線と比較した。
【０２５３】
結果を表３に示す。理論に縛れるのは望むところではないが、より小さなナノ粒子を再懸濁するために必要とされる付加的なＰＶＡは、おそらく、主としてより大きなナノ粒子と比較したときのそれらの大きな表面積によるものと考えられるが、表面と溶液の間でのＰＶＡの分配による作用も存在した可能性がある。
【０２５４】
【表３】
（実施例３）
ナノ粒子およびミクロ粒子に関するタンパク質吸着効率
同じ粒子質量に関して、ナノ粒子はミクロ粒子に比べてはるかに大きな表面積を有する。この場合、ナノ粒子は、１μｍミクロ粒子と比較してより効率的な粒子質量当たりのタンパク質負荷を可能にする。これは、より少ないＰＬＧで（およびその結果としてより少ない総界面活性剤で）同じ量のタンパク質抗原の送達を可能にする。
【０２５５】
モデル抗原であるウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を、適切な緩衝液と共にナノ粒子またはミクロ粒子懸濁物に添加し、実験室用揺動器（ｌａｂ ｒｏｃｋｅｒ）にて４℃で一晩攪拌した。ナノ粒子を遠心分離によって分離した。ペレットを０．２Ｎ ＮａＯＨにて２５℃で一晩加水分解した。上清中および加水分解したペレット中のタンパク質濃度をＢＣＡ（商標）アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡより）によって定量した。図１に示すように、ＢＳＡは、２４時間の吸着後、２つのｐＨ値で、ミクロ粒子と比較してナノ粒子への高い負荷効率を示した。高い負荷効率は、ミクロ粒子についての１．５％（ｗＢＳＣ／ｗＰＬＧ）の最大負荷と比較して、ナノ粒子への３．５％までの吸着（ｗＢＳＡ／ｗＰＬＧ）を可能にした。
【０２５６】
この吸着増強は、ミクロ粒子は基本的に吸着に抵抗性であるが、ナノ粒子は有意の吸着が起こることを可能にする、ｐＨ＝７で特に著明であった。それ故、ナノ粒子は、さもなければ不利な条件下で有意の吸着を可能にしたことがわかる。これは、たとえば、数ある理由の中でも特に、抗原安定性を高めるために、ｐＨを特定の値に設定する必要がある粒子製剤のために有用であり得る。
【０２５７】
髄膜炎菌血清型Ｂからの抗原（すなわちＭｅｎＢ ２８７）も、ナノ粒子とミクロ粒子に吸着させた。特に、ＭｅｎＢ ２８７抗原を、ｐＨ＝５．０の１０ｍＭクエン酸緩衝液中のナノ粒子またはミクロ粒子懸濁物に添加し、実験室用揺動器にて４℃で一晩攪拌した。粒子を遠心分離によって分離した。ペレットを０．２Ｎ ＮａＯＨにて２５℃で一晩加水分解した。上清中および加水分解したペレット中のタンパク質濃度をＢＣＡ（商標）アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ）によって定量した。図２からわかるように、ＢＳＡに関して、ナノ粒子はミクロ粒子に比べてＭｅｎＢ ２８７の高い吸着を示した。
【０２５８】
抗原吸着後の再懸濁と凍結乾燥も、本発明の一部の組成物の重要な特徴であった。この実施例では、タンパク質、詳細にはＢＳＡ、オボアルブミン、ＦｌｕＣＣ、ＭｅｎＢ ２８７、ＭｅｎＢ ２８７またはＧＢＳ１を、ｐＨ５のヒスチジン緩衝液中のナノ粒子懸濁物に添加し、実験室用揺動器にて４℃で一晩攪拌した。初期粒径は〜１２０ｎｍであった。界面活性剤および凍結保護剤を表３に従って添加し、混合物を凍結乾燥した。凍結乾燥後、ナノ粒子５−１０ｍｇを水１ｍｌ中に再懸濁し、粒径測定した。ナノ粒子を遠心分離によって分離した。上清中に残存する（吸着されなかった）量を、２１４ｎｍの吸光度でＨＰＬＣサイズ排除クロマトグラフィーによって測定した。表４からわかるように、吸着タンパク質を有するナノ粒子はそれらの小さなサイズを実質的に保持しており、１％（ｗ／ｗ）および５％（ｗ／ｗ）の標的負荷に関して高いタンパク質吸着効率を有する。
【０２５９】
【表４】
凍結乾燥後にナノ粒子に結合していたタンパク質の量（吸着されたタンパク質の％）は高く、タンパク質濃度の作用の検査において７１％から１００％の範囲であり、タンパク質負荷レベル（ｗタンパク質／ｗＰＬＧ）が高いほどより容易に再懸濁されることが認められた。ＰＶＡ賦形剤混合物はより低い負荷レベルでＭｅｎＢ ２８７抗原を有するナノ粒子を再懸濁し、ＤＳＳ賦形剤混合物は再懸濁しなかった。同様に、ＧＢＳ１抗原についても、ＤＳＳ賦形剤混合物はより高い５％タンパク質負荷製剤を再懸濁したが、より低い１％負荷製剤は再懸濁しなかった。ＢＳＡは低負荷および高負荷の両方で再懸濁した。タンパク質吸着に関する再懸濁は、それ故、タンパク質依存性であると思われ、各々のタンパク質抗原に関して評価することができる。１つの組合せが特定タンパク質に関して十分でない場合は、多数の異なる賦形剤の組合せのアベイラビリティーが柔軟性を提供する。
【０２６０】
（実施例４）
インビボ試験
ミクロ粒子懸濁物を実施例１で前述したように調製した。以下の表５および６の群３−６および９−１２に関しては、ＭｅｎＢ ２８７を、ｐＨ５．５の１０ｍＭヒスチジン緩衝液中１％または５％（ｗ２８７／ｗＰＬＧ）の標的負荷でミクロ粒子またはナノ粒子懸濁物に添加し、実験室用揺動器にて４℃で一晩攪拌した。界面活性剤および凍結保護剤を添加し、混合物を凍結乾燥した。
【０２６１】
群３および９に関しては、ＭｅｎＢ ２８７は、界面活性剤として初期粒子試料からの０．０５％ＤＳＳ（ｗ／ｗＰＬＧ）および凍結保護剤として４％スクロース（ｗ／ｖ）および３％マンニトール（ｗ／ｖ）だけで１％（ｗ２８７／ｗＰＬＧ）吸着された。群４および１０に関しては、ＭｅｎＢ ２８７は、１０％ＰＶＡ（ｗＰＶＡ／ｗＰＬＧ）プラス４％スクロース（ｗ／ｖ）および３％マンニトール（ｗ／ｖ）の添加により１％（ｗ２８７／ｗＰＬＧ）吸着された。群５および１１に関しては、ＭｅｎＢ ２８７は、０．５％ＤＳＳ（ｗＤＳＳ／ｗＰＬＧ）プラス５％トレハロース（ｗ／ｖ）および２．５％マンニトール（ｗ／ｖ）の添加により５％（ｗ２８７／ｗＰＬＧ）吸着された。群６および１２に関しては、ＭｅｎＢ ２８７は、１０％ＰＶＡ（ｗＰＶＡ／ｗＰＬＧ）プラス４％スクロース（ｗ／ｖ）および３％マンニトール（ｗ／ｖ）の添加により５％（ｗ２８７／ｗＰＬＧ）吸着された。凍結乾燥後、それぞれＭｅｎＢ ２８７ １μｇおよび１０μｇの総用量に相当するミクロ粒子を注射用蒸留水１．２ｍｌで再溶解した。再溶解した試料を、ナノ粒子についてはＺｅｔａｓｉｚｅｒ ３０００ＨＳＡで、およびミクロ粒子についてはＨｏｒｉｂａ ＬＡ ９３０で粒径測定した。結果を表５に示す。
【０２６２】
群２および８については、免疫の直前にＭＦ５９乳剤（Ｃｈｉｒｏｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ）を２×ＰＢＳおよびＭｅｎＢ ２８７ １μｇまたは１０μｇのいずれかと混合した。
【０２６３】
群１および７に関しては、ＭｅｎＢ ２８７を、ｐＨ５．５の１０ｍＭヒスチジン緩衝液プラス９ｍｇ／ｍＬ ＮａＣｌ中の水酸化アルミニウム（Ｃｈｉｒｏｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ）に添加し、２ｍｇ／ｍＬのミョウバン濃度で実験室用揺動器にて４℃で一晩攪拌した。
【０２６４】
すべての群について、０、２１および３５日目に１０匹の雌性ＣＤ−１マウスの群に試料を筋肉内注射した。群３−６および９−１２に関しては、凍結乾燥ミクロ粒子またはナノ粒子を注射用蒸留水で再溶解した。群１、２、７および８は上記のように使用した。４９日目に、血清ＥＬＩＳＡ力価（ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ）をＳｉｎｇｈ，Ｍ．ら（２００４）（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９３（２）：２７３−２８２）に述べられているように分析し、血清殺菌活性（ＳＢＡ）をＰｉｚｚａ，Ｍ．ら（２０００）（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７（５４５９）：１８１６−１８２０）に述べられているように分析した。２９９６は、ＳＢＡ分析のために使用したＭｅｎＢの菌株であった。結果を以下の表６に示す。
【０２６５】
インビボ試験は、ナノ粒子とミクロ粒子が、血清力価およびＳＢＡに基づき両方の用量に関して同等であることを明らかにする。高用量のＭＦ５９は、ＩｇＧに関して他のすべての群と有意に異なる（不等分散を仮定した両側スチューデントｔ検定でｐ＜０．０５）。群１および４のＩｇＧ力価は群６と有意に異なったが（不等分散を仮定した両側スチューデントｔ検定でｐ＜０．０５）、この結果は、試験のより重要なエンドポイントであるＳＢＡには当てはまらない。
【０２６６】
【表５】
＊粒径は凍結乾燥後である。
【０２６７】
【表６】
本発明の好ましい実施形態を少し詳しく説明したが、本発明の精神と範囲から逸脱することなく明らかな変更を行い得ることは了解される。
【図面の簡単な説明】
【０２６８】
【図１】図１は、ｐＨ＝５およびｐＨ＝７でのＰＬＧミクロ粒子およびナノ粒子へのＢＳＡ負荷のグラフを示す。
【図２】図２は、ｐＨ＝５でのＰＬＧミクロ粒子およびナノ粒子へのＭｅｎＢ ２８７負荷のグラフを示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生分解性ポリマー、界面活性剤、凍結保護剤および抗原を含む滅菌ろ過凍結乾燥ナノ粒子組成物。
【請求項２】
本発明の凍結乾燥ナノ粒子組成物を０．００５ｇ／ｍｌの濃度で蒸留水と混合した際に、懸濁ナノ粒子のＺ平均粒径が２５０ｎｍ未満である免疫原性ナノ粒子懸濁物が自然に形成される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記懸濁ナノ粒子のＺ平均粒径が２００ｎｍ未満である、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記懸濁ナノ粒子のＺ平均粒径が１５０ｎｍ未満である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記凍結保護剤が、ポリオール、炭水化物およびそれらの組合せから選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記凍結保護剤がポリオールと炭水化物を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記凍結保護剤がアルジトールと糖を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記界面活性剤が非イオン界面活性剤である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記界面活性剤がポリ（ビニルアルコール）である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記界面活性剤がイオン界面活性剤である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記界面活性剤がスルホコハク酸ジオクチルナトリウムである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記抗原がポリペプチド含有抗原を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記抗原がサブユニット抗原を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記抗原が多糖含有抗原を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記抗原が結合体抗原を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記抗原がポリヌクレオチド含有抗原を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記ポリヌクレオチド含有抗原が、ポリペプチド含有抗原をコードするベクター構築物を含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記抗原が腫瘍細胞由来抗原を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記抗原が病原生物由来抗原を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記抗原が、ウイルス、細菌、真菌および寄生生物から選択される病原生物に由来する、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記抗原が、肝炎ウイルス、水痘ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、風疹ウイルス、インフルエンザウイルス、髄膜炎菌、百日咳菌、インフルエンザ菌ｂ型、ＨＩＶおよび肺炎連鎖球菌から選択される病原生物に由来する、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
前記抗原が前記ナノ粒子の表面上に吸着される、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記抗原が前記ナノ粒子内に捕捉される、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記組成物が、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリシアノアクリレートおよびそれらの組合せから選択される生分解性ポリマーを含む、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記組成物が、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）およびそれらの組合せから選択されるポリ（α−ヒドロキシ酸）を含む、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物が、４０：６０から６０：４０までの範囲にわたるラクチド：グリコリドモル比を有するポリ（ラクチド−コ−グリコリド）を含む、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２７】
免疫アジュバントをさらに含む、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記免疫アジュバントが前記懸濁ナノ粒子の表面に吸着されている、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記免疫アジュバントが前記懸濁ナノ粒子内に捕捉されている、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３０】
前記免疫アジュバントが、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、二本鎖ＲＮＡ、大腸菌非耐熱性毒素、ミョウバン、リポ糖リン酸塩化合物、およびリポ糖リン酸塩ミメティックから選択される、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３１】
前記免疫原性組成物が、凍結乾燥の前にろ過によって滅菌される、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３２】
脊椎動物宿主において免疫応答を刺激する方法であって、該方法は、
請求項１〜３１のいずれか１項に記載の組成物を水性流体と組み合わせて懸濁物を形成する工程；および
免疫応答を誘導するために有効な量で該懸濁物を該宿主に投与する工程を含む、方法。
【請求項３３】
脊椎動物宿主を腫瘍または病原生物に対して免疫する方法であって、該方法は、
請求項１〜３１のいずれか１項に記載の組成物を水性流体と組み合わせて懸濁物を形成する工程；および
防御応答を誘導するために有効な量で該懸濁物を該宿主に投与する工程を含む、方法。
【請求項３４】
脊椎動物宿主において腫瘍または病原生物感染を治療する方法であって、該方法は、
請求項１〜３１のいずれか１項に記載の組成物を水性流体と組み合わせて懸濁物を形成する工程；および
治療応答を誘導するために有効な量で該懸濁物を該宿主に投与する工程を含む、方法。
【請求項３５】
前記懸濁物が前記脊椎動物宿主に注射される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記脊椎動物宿主がヒトである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
前記免疫応答が細胞性免疫応答を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３８】
前記免疫応答がＴｈ１免疫応答を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３９】
前記免疫応答がＣＴＬ免疫応答を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項４０】
前記免疫応答が、ウイルス、細菌、真菌または寄生生物感染に対して惹起される、請求項３２に記載の方法。
【請求項４１】
請求項１〜３１のいずれか１項に記載の組成物を生産する方法であって、該方法は、
（ａ）（ｉ）有機溶媒に溶解された生分解性ポリマーを含む第一液体を、（ｉｉ）水を含む第二液体と組み合わせる工程であって、そのときに該生分解性ポリマーを含むナノ粒子の懸濁物が形成される、工程、
（ｂ）抗原をナノ粒子に吸着させ、抗原吸着ナノ粒子懸濁物を形成する工程、および
（ｃ）該抗原吸着ナノ粒子懸濁物を凍結乾燥する工程を包含する、
方法。
【請求項４２】
前記凍結保護剤が凍結乾燥の直前に添加される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記抗原を前記ナノ粒子に吸着させる工程の前に、前記ナノ粒子懸濁物と該抗原を滅菌ろ過する工程をさらに含む、請求項４１または請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
凍結乾燥の前に前記抗原吸着ナノ粒子懸濁物を滅菌ろ過する工程をさらに含む、請求項４１〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
請求項１〜３１のいずれか１項に記載の凍結乾燥ナノ粒子組成物を含む第一容器を含むキット。
【請求項４６】
前記第一容器中の凍結乾燥ナノ粒子組成物を再懸濁するために有用な滅菌液体媒質を含む第二容器をさらに含む、請求項４５に記載のキット。
【請求項４７】
注射器をさらに含む、請求項４５または請求項４６に記載のキット。
【請求項１】
生分解性ポリマー、界面活性剤、凍結保護剤および抗原を含む滅菌ろ過凍結乾燥ナノ粒子組成物。
【請求項２】
本発明の凍結乾燥ナノ粒子組成物を０．００５ｇ／ｍｌの濃度で蒸留水と混合した際に、懸濁ナノ粒子のＺ平均粒径が２５０ｎｍ未満である免疫原性ナノ粒子懸濁物が自然に形成される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記懸濁ナノ粒子のＺ平均粒径が２００ｎｍ未満である、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記懸濁ナノ粒子のＺ平均粒径が１５０ｎｍ未満である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記凍結保護剤が、ポリオール、炭水化物およびそれらの組合せから選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記凍結保護剤がポリオールと炭水化物を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記凍結保護剤がアルジトールと糖を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記界面活性剤が非イオン界面活性剤である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記界面活性剤がポリ（ビニルアルコール）である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記界面活性剤がイオン界面活性剤である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記界面活性剤がスルホコハク酸ジオクチルナトリウムである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記抗原がポリペプチド含有抗原を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記抗原がサブユニット抗原を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記抗原が多糖含有抗原を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記抗原が結合体抗原を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記抗原がポリヌクレオチド含有抗原を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記ポリヌクレオチド含有抗原が、ポリペプチド含有抗原をコードするベクター構築物を含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記抗原が腫瘍細胞由来抗原を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記抗原が病原生物由来抗原を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記抗原が、ウイルス、細菌、真菌および寄生生物から選択される病原生物に由来する、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記抗原が、肝炎ウイルス、水痘ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、風疹ウイルス、インフルエンザウイルス、髄膜炎菌、百日咳菌、インフルエンザ菌ｂ型、ＨＩＶおよび肺炎連鎖球菌から選択される病原生物に由来する、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
前記抗原が前記ナノ粒子の表面上に吸着される、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記抗原が前記ナノ粒子内に捕捉される、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記組成物が、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリシアノアクリレートおよびそれらの組合せから選択される生分解性ポリマーを含む、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記組成物が、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）およびそれらの組合せから選択されるポリ（α−ヒドロキシ酸）を含む、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物が、４０：６０から６０：４０までの範囲にわたるラクチド：グリコリドモル比を有するポリ（ラクチド−コ−グリコリド）を含む、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２７】
免疫アジュバントをさらに含む、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記免疫アジュバントが前記懸濁ナノ粒子の表面に吸着されている、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記免疫アジュバントが前記懸濁ナノ粒子内に捕捉されている、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３０】
前記免疫アジュバントが、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、二本鎖ＲＮＡ、大腸菌非耐熱性毒素、ミョウバン、リポ糖リン酸塩化合物、およびリポ糖リン酸塩ミメティックから選択される、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３１】
前記免疫原性組成物が、凍結乾燥の前にろ過によって滅菌される、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３２】
脊椎動物宿主において免疫応答を刺激する方法であって、該方法は、
請求項１〜３１のいずれか１項に記載の組成物を水性流体と組み合わせて懸濁物を形成する工程；および
免疫応答を誘導するために有効な量で該懸濁物を該宿主に投与する工程を含む、方法。
【請求項３３】
脊椎動物宿主を腫瘍または病原生物に対して免疫する方法であって、該方法は、
請求項１〜３１のいずれか１項に記載の組成物を水性流体と組み合わせて懸濁物を形成する工程；および
防御応答を誘導するために有効な量で該懸濁物を該宿主に投与する工程を含む、方法。
【請求項３４】
脊椎動物宿主において腫瘍または病原生物感染を治療する方法であって、該方法は、
請求項１〜３１のいずれか１項に記載の組成物を水性流体と組み合わせて懸濁物を形成する工程；および
治療応答を誘導するために有効な量で該懸濁物を該宿主に投与する工程を含む、方法。
【請求項３５】
前記懸濁物が前記脊椎動物宿主に注射される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記脊椎動物宿主がヒトである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
前記免疫応答が細胞性免疫応答を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３８】
前記免疫応答がＴｈ１免疫応答を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３９】
前記免疫応答がＣＴＬ免疫応答を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項４０】
前記免疫応答が、ウイルス、細菌、真菌または寄生生物感染に対して惹起される、請求項３２に記載の方法。
【請求項４１】
請求項１〜３１のいずれか１項に記載の組成物を生産する方法であって、該方法は、
（ａ）（ｉ）有機溶媒に溶解された生分解性ポリマーを含む第一液体を、（ｉｉ）水を含む第二液体と組み合わせる工程であって、そのときに該生分解性ポリマーを含むナノ粒子の懸濁物が形成される、工程、
（ｂ）抗原をナノ粒子に吸着させ、抗原吸着ナノ粒子懸濁物を形成する工程、および
（ｃ）該抗原吸着ナノ粒子懸濁物を凍結乾燥する工程を包含する、
方法。
【請求項４２】
前記凍結保護剤が凍結乾燥の直前に添加される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記抗原を前記ナノ粒子に吸着させる工程の前に、前記ナノ粒子懸濁物と該抗原を滅菌ろ過する工程をさらに含む、請求項４１または請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
凍結乾燥の前に前記抗原吸着ナノ粒子懸濁物を滅菌ろ過する工程をさらに含む、請求項４１〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
請求項１〜３１のいずれか１項に記載の凍結乾燥ナノ粒子組成物を含む第一容器を含むキット。
【請求項４６】
前記第一容器中の凍結乾燥ナノ粒子組成物を再懸濁するために有用な滅菌液体媒質を含む第二容器をさらに含む、請求項４５に記載のキット。
【請求項４７】
注射器をさらに含む、請求項４５または請求項４６に記載のキット。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２００９−５１８３０６（Ｐ２００９−５１８３０６Ａ）
【公表日】平成２１年５月７日（２００９．５．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５４３５２８（Ｐ２００８−５４３５２８）
【出願日】平成１８年１２月１日（２００６．１２．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４６２１２
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０５１２４５
【国際公開日】平成２０年５月２日（２００８．５．２）
【出願人】（５０４３８９９９１）ノバルティス アーゲー (806)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年５月７日（２００９．５．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１２月１日（２００６．１２．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４６２１２
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０５１２４５
【国際公開日】平成２０年５月２日（２００８．５．２）
【出願人】（５０４３８９９９１）ノバルティス アーゲー (806)
【Ｆターム（参考）】
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