多血小板血漿分離キット及び多血小板血漿分離方法
【課題】中空針を取り付けた第２シリンジで第１シリンジのガスケットを基端側より貫通する際に、ガスケットをうまく貫通できない、貫通できたとしてもガスケットとシリンジ筒とで密封された血液が漏れ出すなどの問題がある。
【解決手段】第１プランジャロッドは、先端から基端に渡る挿通孔を有し、挿通孔の基端から第２中空針を挿通した際に、第２中空針が第１ガスケットを貫通することを特徴とする多血小板血漿分離キットである。
【解決手段】第１プランジャロッドは、先端から基端に渡る挿通孔を有し、挿通孔の基端から第２中空針を挿通した際に、第２中空針が第１ガスケットを貫通することを特徴とする多血小板血漿分離キットである。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液を吸引するために用いられるシリンジと、そのシリンジから血小板及び血漿を含む遠心分離区分を吸引するために用いられるシリンジと、を有する多血小板血漿分離キット、及び多血小板血漿分離方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
多血小板血漿（以下、「ＰＲＰ」とも称される。）とは、血小板を多く含む血漿である。血球成分を含む全血においては、赤血球が約９５％、白血球が３％、血小板が約１％の割合で含まれる。これに対し、多血小板血漿においては、血小板が高い割合で含まれる。ＰＲＰにおける血小板の割合は特に定義がない。一般に、全血における血漿の割合が約５５％であることを考慮すると、血球成分が除去された血漿に含まれる血小板の割合は約２％程度と考えられる。この約２％程度より明らかに高い割合の血小板が、ＰＲＰに含まれる。
【０００３】
ＰＲＰは、全血を遠心分離することにより得られる。詳細に説明すると、まず、全血を弱遠心して赤血球を分離して血漿を得る。この血漿には白血球及び血小板が含まれる。さらに、得られた血漿を強遠心する。これにより、血小板は遠心力が加わる方向（以下、本明細書において遠心分離方向とも称する。）に集中し、上清には血小板がほぼ含まれない。強遠心された血漿から上清を取り除き、或いは遠心分離方向（下側）の所定量のみを取り出して、ＰＲＰを得る（特許文献１参照）。
【０００４】
血小板のα顆粒中には、ＰＤＧＦ、ＴＧＦ−β、ＩＬＧＦなどの成長因子が存在することが知られている。これら成長因子が創傷治癒や組織再生に効果的な役割を果たすことが着目されている。例えば、歯周組織再生法などの再生医療において、ＰＲＰの利用が期待されている（特許文献２、特許文献３及び非特許文献１参照）。
【０００５】
ＰＲＰを再生医療に用いる場合には、安全性の観点から、ＰＲＰを調整する器具はすべてγ線滅菌を施すことが要求される。しかしながら、例えば特許文献１に記載されている真空採血管のように、ゴム栓を使用した容器に対してγ線滅菌を施すと、ゴム栓が劣化するという問題がある。ゴム栓の劣化は、ゴム栓に含まれる添加物の滲出、破断片や砕片の発生を惹起し、これら添加物や破断片などが血液やＰＲＰに混入するおそれがある。また、エチレンオキサイドガス滅菌については、真空採血管の管内までガスが注入できず、血液の接触部に対して滅菌できないおそれがある。
本発明者らは、上述の現状を鑑み、鋭意検討の結果、多血小板血漿分離キット及び多血小板血漿分離方法を発明するに至っている（特許文献４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００６−７８４２８号公報
【特許文献２】特開２００６−２３２８３４号公報
【特許文献３】特開２００５−２７８９１０号公報
【特許文献４】ＷＯ２００８／０５０６８８
【非特許文献１】多血小板血漿の口腔への応用、ロバート・Ｅ・マルクス著、クィーン・テッセンス出版社出版
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
引用文献４に記載の発明においては、血液を吸引するために用いられ第１シリンジ及び該第１シリンジから血小板及び血漿を含む遠心分離区分を吸引するために用いられる第２シリンジを用いて、多血小板血漿を分離する方法である。第１シリンジに満たされた血液を遠心分離し、第１シリンジのプランジャロッドを取り外し、第１シリンジのガスケット基端側より、中空針を取り付けた第２シリンジを挿入し、ガスケットを貫通後、分離された白血球及び血小板を含む血漿画分を吸引するものである。そのため、第１シリンジのガスケット基端側より、中空針を取り付けた第２シリンジを挿入し、ガスケットを貫通する際に、ガスケットの側面に中空針が刺さり、ガスケットがうまく貫通できないという問題点があった。さらに、あるいはガスケットとシリンジ筒とで密封された血液が漏れ出す、また第２シリンジによる貫通が深すぎて、遠心により分離された血漿画分層より深い位置に中空心が到達し、血漿画分が吸引できないという問題点もある。
【０００８】
本発明は、上述の事情に問題に鑑みてなされたものであり、多血小板血漿の分離を簡便に且つ失敗することなく行うことができる血小板血漿分離キット及び多血小板血漿分離方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本願請求項１に係る多血小板血漿分離キットは、血液を吸引するために用いられる第１シリンジと、該第１シリンジから血小板及び血漿を含む遠心分離区分を吸引するために用いられる第２シリンジと、該第１シリンジに脱着可能な第１中空針及び第１キャップと、該第２シリンジに脱着可能な第２中空針及び第２キャップと、を具備する多血小板血漿分離キットであって、前記第１シリンジは、先端に前記第１中空針及び前記第１キャップが脱着可能な第１ポートと、開放した基端と、を有する第１シリンジ筒と、前記第１シリンジ筒内を液密に封止して前記第１シリンジ筒内を往復動される第１ガスケットと、前記第１ガスケットの基端に先端が接続される第１プランジャロッドと、を備え、前記第２シリンジは、先端に前記第２中空針及び前記第２キャップが脱着可能な第２ポートと、開放した基端と、を有する第２シリンジ筒と、前記第２シリンジ筒内を液密に封止して前記第２シリンジ筒内を往復動される第２ガスケットと、前記第２ガスケットの基端に先端が接続される第２プランジャロッドと、を備え、前記第１プランジャロッドは、先端から基端に渡る挿通孔を有し、前記挿通孔の基端から前記第２中空針を挿通した際に、前記第２中空針が前記第１ガスケットを貫通することを特徴とする多血小板血漿分離キットである。
【００１０】
本願請求項２に係る多血小板血漿分離キットは、前記挿通孔の径が、前記第１プランジャロッドの基端から先端に向かい小さくなるものであって、前記挿通孔の先端側開口部が、前記第１プランジャロッドの先端面の中心部に位置することを特徴とする多血小板血漿分離キットである。
【００１１】
本願請求項３に係る多血小板血漿分離キットは、請求項１または２に記載の多血小板血漿分離キットであって、さらに、前記第２シリンジから遠心分離区分を吸引するために用いられる第３シリンジを具備する多血小板血漿分離キットであって、前記第３シリンジは、先端に第３中空針が設けられた第３ポートと、開放した基端と、を有する第３シリンジ筒と、前記第３シリンジ筒内を液密に封止して前記第３シリンジ筒内を往復動される第３ガスケットと、前記第３ガスケットの基端に先端が接続される第３プランジャロッドと、を備え、前記第２プランジャロッドは、先端から基端に渡る挿通孔を有し、前記挿通孔の基端から前記第３中空針を挿通した際に、前記第３中空針が前記第２ガスケットを貫通することを特徴とする多血小板血漿分離キットである。
【００１２】
本願請求項４に係る多血小板血漿分離キットは、血液を吸引するために用いられる第１シリンジと、該第１シリンジから血小板及び血漿を含む遠心分離区分を吸引するために用いられる第２シリンジと、該第１シリンジに脱着可能な第１中空針及び第１キャップと、該第２シリンジに脱着可能な第２中空針及び第２キャップと、を具備する多血小板血漿分離キットであって、前記第１シリンジは、先端に前記第１中空針及び前記第１キャップが脱着可能な第１ポートと、開放した基端と、を有する第１シリンジ筒と、前記第１シリンジ筒内を液密に封止して前記第１シリンジ筒内を往復動される第１ガスケットと、前記第１ガスケットの基端に先端が脱着可能に接続される第１プランジャロッドと、を備え、前記第２シリンジは、先端に前記第２中空針及び前記第２キャップが脱着可能な第２ポートと、開放した基端と、を有する第２シリンジ筒と、前記第２シリンジ筒内を液密に封止して前記第２シリンジ筒内を往復動される第２ガスケットと、前記第２ガスケットの基端に先端が接続される第２プランジャロッドと、を備え、前記第１プランジャロッドを取り外した後に、前記第１シリンジ筒の基端から挿入可能で、挿入した際に前記第１ガスケットに当接するガイド部材を有し、前記ガイド部材は、前記第２中空針を挿通するための先端から基端に渡る挿通孔を有し、前記挿通孔の基端から前記第２中空針を挿通した際に、前記第２中空針が前記第１ガスケットを貫通することを特徴とする多血小板血漿分離キットである。
【００１３】
本願請求項５に係る多血小板血漿分離キットは、前記挿通孔の径が、前記ガイド部材の基端から先端に向かい小さくなるものであって、前記挿通孔の先端側開口部が、前記ガイド部材の先端面の中心部に位置することを特徴とする請求項に記載の多血小板血漿分離キットである。
【００１４】
本願請求項６に係る多血小板血漿分離キットは、請求項４または５に記載の多血小板血漿分離キットであって、さらに、前記第２シリンジから遠心分離区分を吸引するために用いられる第３シリンジを具備する多血小板血漿分離キットであって、前記第３シリンジは、先端に第３中空針が設けられた第３ポートと、開放した基端と、を有する第３シリンジ筒と、前記第３シリンジ筒内を液密に封止して前記第３シリンジ筒内を往復動される第３ガスケットと、前記第３ガスケットの基端に先端が接続される第３プランジャロッドと、を備え、前記ガイド部材の挿通孔の基端から前記第３中空針を挿通した際に、前記第３中空針が前記第２ガスケットを貫通することを特徴とする多血小板血漿分離キットである。
【００１５】
本願請求項７に係る多血小板血漿分離方法は、先端に第１中空針及び第１キャップが脱着可能な第１ポートと開放した基端とを有する第１シリンジ筒と、前記第１シリンジ筒内を液密に封止して前記第１シリンジ筒内を往復動される第１ガスケットと、前記第１ガスケットの基端に先端が脱着可能に接続される第１プランジャロッドと、を備える前記第１シリンジと、先端に前記第２中空針及び前記第２キャップが脱着可能な第２ポートと開放した基端とを有する第２シリンジ筒と、前記第２シリンジ筒内を液密に封止して前記第２シリンジ筒内を往復動される第２ガスケットと、前記第２ガスケットの基端に先端が接続される第２プランジャロッドと、を備える前記第２シリンジと、前記第１シリンジ筒に挿入可能で、前記第２中空針を挿通するための先端から基端に渡る挿通孔を有するガイド部材と、を用いた多血小板血漿分離方法であって、前記第１シリンジ筒の前記第１プランジャロッドを取り外し、前記ガイド部材を挿入した後に、前記ガイド部材の前記挿通孔の基端側に前記第２シリンジに装着した前記第２中空針を挿通し、前記第２中空針で前記第１ガスケットを貫通するステップを含む多血小板血漿分離方法である。
【００１６】
本願請求項８に係る多血小板血漿分離方法は、請求項７に記載の多血小板血漿分離方法であって、さらに、先端に第３中空針及び第３中空針が設けられた第３ポートと開放した基端とを有する第３シリンジ筒と、前記第３シリンジ筒内を液密に封止して前記第３シリンジ筒内を往復動される第３ガスケットと、前記第３ガスケットの基端に先端が接続される第３プランジャロッドとを備える前記第３シリンジを用いる多血小板血漿分離方法であって、前記第２シリンジ筒の前記第２プランジャロッドを取り外し、前記ガイド部材を挿入した後に、前記ガイド部材の前記挿通孔の基端側に前記第３シリンジに装着した前記第３中空針を挿通し、前記第３中空針で前記第２ガスケットを貫通するステップを含む多血小板血漿分離方法である。
【００１７】
本発明に係る多血小板血漿分離キット及び多血小板血漿分離方法は、第１シリンジ及び第２シリンジを備えるものである。必要に応じて、第３シリンジを用いるものである。本発明において、基端とはシリンジのポート側を指すものであり、基端とはシリンジのプランジャロッドを挿入する側を指すものである。
第１シリンジは、血液を吸引するために用いられるものである。第１シリンジは、先端に第１中空針及び第１キャップが脱着可能な第１ポートと開放した基端とを有する第１シリンジ筒と、第１シリンジ筒内を液密に封止して第１シリンジ筒内を往復動される第１ガスケットと、第１ガスケットの基端に先端が接続される第１プランジャロッドとを備えるものである。血液を吸引する方法は、特に限定されないが、第１ポートへ第１中空針を取り付けた第１シリンジを用いて採血する方法や、第１シリンジを用いて血液回路に設けられたサンプリングポートなどから血液を吸引する方法などがある。第１ポートへ第１中空針が脱着可能であるとは、第１中空針が直接に第１ポートに取り付けられる態様や、第１中空針がエクステンションチューブなどの他の部材を介して第１ポートに取り付けられる態様が含まれる。
血液を吸引し、血液が満たされた第１シリンジは、第１シリンジ筒から第１中空針が取り外され、第１ポートが第１キャップにより封止される。これにより、第１シリンジ筒内に血液が密封される。さらに、遠心分離を行う。第１シリンジは、第１ガスケットに第１プランジャロッドが取り付けられた状態、あるいは第１ガスケットから第１プランジャロッドが取り外された状態で遠心分離が行うことができる。遠心分離により、血液が赤血球画分（第１区分）と、白血球及び血小板を含む血漿画分（第２区分）に分離される。この遠心分離では、赤血球画分が第１シリンジ筒内の第１ポート側に、血漿画分が第１ガスケット側に分離される。
【００１８】
第２シリンジは、遠心分離された第１シリンジ筒から血漿画分を吸引するために用いられる。第２シリンジは、先端に第２中空針及び第２キャップが脱着可能な第２ポートと開放した基端とを有する第２シリンジ筒と、第２シリンジ筒内を液密に封止して第２シリンジ筒内を往復動される第２ガスケットと、第２ガスケットの基端に先端が接続される第２プランジャロッドとを備えるものである。第２ポートへ第２中空針が脱着可能であるとは、第２中空針が直接に第２ポートに取り付けられる態様や、第２中空針がエクステンションチューブなどの他の部材を介して第２ポートに取り付けられる態様が含まれる。
【００１９】
第１プランジャロッドは、先端から基端に渡る挿通孔を有するものである。挿通孔は、第２シリンジに取り付けられた第２中空針を挿通するためのものであって、第２中空針は、挿通孔の基端から第２中空針を挿通した際に、第１ガスケットを貫通するものである。また、第１シリンジの第１プランジャロッドは、上述の様に、第２中空針を挿通するための挿通孔を有するものであってもよいし、挿通孔を有さないものであってもよい。挿通孔を有さない場合は、第１プランジャロッドに替わって取り付け可能で、挿通孔を有するガイド部材を別途設けるようにする。挿通孔を有するガイド部材は、第１プランジャロッドを取り外した後に、第１シリンジ筒の基端から挿入可能で、挿入した際に第１ガスケットに当接するものである。さらに、ガイド部材は、第２中空針を挿通するための先端から基端に渡る挿通孔を有し、第２中空針は、挿通孔の基端から第２中空針を挿通した際に、第１ガスケットを貫通するものである。
【００２０】
第１プランジャロッドまたはガイド部材に設けられた挿通孔の径は、基端から先端に向かい小さくなるものである。第１プランジャロッドまたはガイド部材に設けられた挿通孔の径は、基端から先端に向かい小さくなるものであれば、特に形状は問わないが、径が基端から先端に向けて漸次小さくなる形状など基端から先端に向けて第２中空針を挿通し易い形状が適宜選択される。上述の形状により、先端部では第２中空針を第１ガスケットの貫通させたい位置への誘導する効果を奏する。また、第１挿通孔は、第２中空針が挿入できる径を有するものである。
挿通孔の先端側開口部は、第１プランジャロッドまたはガイド部材に設けられた先端面の中心部に位置するものである。そのため、第２中空針を第１ガスケットに貫通させる場合に、第１ガスケットが第１シリンジ筒内の血液と接触している先端部を貫通することが可能となり、例えば、第１ガスケットが第１シリンジ筒と接触している肉厚か箇所を貫通する恐れがなくなる。
【００２１】
第２中空針が第１プランジャロッドの挿通孔に進入されて、第２中空針が第１ガスケットに貫通される。第２中空針の先端は、第１ガスケット側の血漿画分中に到達する。第２シリンジの第２プランジャロッドを基端側引くと、第２ガスケットが第２シリンジ筒を移動し、これにより、第２中空針を通じて血漿画分が第２シリンジ筒内に吸引される。
【００２２】
血漿画分を吸引した後、第２シリンジと共に第２中空針が、又は第２中空針とエクステンションチューブが、第１プランジャロッドから引き出される。第２シリンジ筒から第２中空針が取り外され、第２ポートが第２キャップにより封止される。これにより、第２シリンジ筒内に血漿画分が密封される。さらに、遠心分離を行う。第２シリンジは、第２ガスケットに第２プランジャロッドが取り付けられた状態、あるいは第２ガスケットから第２プランジャロッドが取り外された状態で遠心分離が行うことができる。遠心分離により、血漿画分は、基端側がほぼ血漿成分のみの上清となり、先端側が血小板が多い多血小板血漿となる。第２シリンジ筒から第２キャップが外され、第２ガスケットに第２プランジャロッドが取り付けられて、多血小板血漿が、第２シリンジ筒の第２ポートから排出される。
【００２３】
第３シリンジは、第２シリンジの第２プランジャロッドに挿通孔が設けられた場合、あるいは第２シリンジの第２プランジャロッドが第２ガスケットから脱着可能に設けられ、ガイド部材と交換可能である場合に、遠心分離された第２シリンジ筒から上清を吸引するために用いられる。第３ポートへ第３中空針が取付可能であるとは、第３中空針が直接に第３ポートに取り付けられる態様や、第３中空針がエクステンションチューブなどの他の部材を介して第３ポートに取り付けられる態様が含まれる。第３中空針は、第２プランジャロッドの挿通孔に進入されて、第３中空針が第２ガスケットに貫通される。第３中空針の先端は、第２ガスケット側の上清に到達する。第３シリンジの第３プランジャロッドを基端側に引くと、第３ガスケットが第３シリンジ筒を移動し、これにより、第３中空針を通じて上清が第２シリンジ筒内に吸引される。その後、第２シリンジ筒から第２キャップが外され、第２ガスケットに第２プランジャロッドが取り付けられて、多血小板血漿が、第２シリンジ筒の第２ポートから排出される。
【００２４】
ガイド部材を用いる場合、第１シリンジ筒及び第２シリンジ筒の内径がほぼ同じであれば、同じガイド部材を用いてもよいし、２個のガイド部材を設けてもよい。また、第１シリンジ筒及び第２シリンジ筒の内径が異なる場合、２個のガイド部材を設けることが好ましい。
【００２５】
第１シリンジに満たされた血液を遠心分離により、赤血球画分（第１区分）と、白血球及び血小板を含む血漿画分（第２区分）に分離させた後の第１シリンジにおいて、第１シリンジの第１ガスケットから第１プランジャロッドを取り外した後、第１ガスケットに当接する様にガイド部材を挿入する。さらに、ガイド部材の挿通孔の基端から第２シリンジに装着した第２中空針を挿通し、第２中空針で第１ガスケットを貫通する。貫通した第２中空針の先端は、第１シリンジ内の血漿画分中に到達する。第２シリンジの第２プランジャロッドを基端側に引くと、第２ガスケットが第２シリンジ筒を移動し、これにより、第２中空針を通じて血漿画分が第２シリンジ筒内に吸引される。
【発明の効果】
【００２６】
本発明に係る多血小板血漿分離キット及び多血小板血漿分離方法によれば、挿通孔を有する部材を用いることで、多血小板血漿の分離を簡便に且つ失敗することなく行うことができ、高濃度の多血小板血漿を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】本発明の第１実施形態に係る多血小板血漿分離キットの第１シリンジまたは第２シリンジの外観構成を示す分解斜視図である。
【図２】図１における第１シリンジまたは第２シリンジの内部構成を示す縦断面図である。
【図３】本発明の第１実施形態に係る多血小板血漿分離キットの第３シリンジの外観構成を示す分解斜視図である。
【図４】図３における第３シリンジの内部構成を示す縦断面図である。
【図５】第１実施形態による多血小板血漿分離方法において、第１シリンジに満たされた血液を遠心分離するステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【図６】第１実施形態による多血小板血漿分離方法において、第１シリンジ内で遠心分離された第２区分を第２シリンジにより吸引するステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【図７】第１実施形態による多血小板血漿分離方法において、第２シリンジに満たされた第２区分を遠心分離するステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【図８】第１実施形態による多血小板血漿分離方法において、第２シリンジ内で遠心分離された上清を第３シリンジにより吸引するステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【図９】本発明の第２実施形態に係る多血小板血漿分離キットの第１シリンジまたは第２シリンジの外観構成を示す分解斜視図である。
【図１０】図９における第１シリンジまたは第２シリンジの内部構成を示す縦断面図である。
【図１１】本発明の第２実施形態に係る多血小板血漿分離キットのガイド部材の外観構成を示す分解斜視図である。
【図１２】図１０におけるガイド部材の内部構成を示す縦断面図及びガイド部材を第１シリンジに挿入した際の内部構成を示す縦断面図である。
【図１３】第２実施形態による多血小板血漿分離方法において、第１シリンジに満たされた血液を遠心分離するステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【図１４】第２実施形態による多血小板血漿分離方法において、遠心分離後の第１シリンジにガイド部材を挿入するステップ、及び第１シリンジ内で遠心分離された第２区分を第２シリンジにより吸引するステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【図１５】第２実施形態による多血小板血漿分離方法において、第２シリンジに満たされた第２区分を遠心分離するステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【図１６】第２実施形態による多血小板血漿分離方法において、遠心分離後の第２シリンジにガイド部材を挿入するステップ、及び第２シリンジ内で遠心分離された上清を第３シリンジにより吸引するステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【符号の説明】
【００２８】
１：第１シリンジ
１１：第１中空針
１１１：カヌラ
１１２：ハブ
１２：第１キャップ
１３：第１シリンジ筒
１３１：第１ポート
１３２：鍔
１４：第１ガスケット
１４１：取付口
１５：第１プランジャロッド
１５１：第１雄ネジ部
１５２：軸部
１５３：端板
１５４：第１挿通孔
１５５：第１先端開口部
１５６：第１基端開口部
１６：第１プランジャロッド
１６１：第１雄ネジ部
１６２：軸部
１６３：端板
２：第２シリンジ
２１：第２中空針
２１１：カヌラ
２１２：ハブ
２２：第２キャップ
２３：第２シリンジ筒
２３１：第２ポート
２４：第２ガスケット
２５：第２プランジャロッド
２５１：第２雄ネジ部
２５４：第２挿通孔
２５５：第２先端開口部
２５６：第２基端開口部
２６：第２プランジャロッド
２６１：第２雄ネジ部
３：第３シリンジ
３１：第３中空針
３１１：カヌラ
３１２；ハブ
３３：第３シリンジ筒
３３１：第３ポート
３３２：鍔
３４：第３ガスケット
３５：第３プランジャロッド
４１：血液
４２：第１区分
４３：第２区分
４４：上清
４５：多血小板血漿
５：ガイド部材
５１：先端ポート
５２：先端板
５３：軸部
５４：基端板
５５：挿通孔
５６：先端開口部
５７：基端開口部
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
以下、本発明の実施態様について、図面を参照しつつ説明する。なお、本実施形態は本発明の一実施態様にすぎず、これに限定されるものではない。
【００３０】
［第１実施形態］
図１は、本発明の第１実施形態に係る多血小板血漿分離キットの第１シリンジ１の外観構成を示す分解斜視図である。図２は、第１シリンジ１の内部構成を示す縦断面図である。図３は、本発明の第１実施形態に係る多血小板血漿分離キットの第３シリンジ３の外観構成を示す分解斜視図である。図４は、第３シリンジ３の内部構成を示す縦断面図である。なお、図注の括弧内の番号は、第２シリンジ２の構成を示すものである。
【００３１】
本第１実施形態に係る多血小板血漿分離キットは、第１シリンジ１、第２シリンジ２と第３シリンジ３とを具備する。第１シリンジ１は、血液を吸引するために用いられる。血液の吸引とは、具体的には採血が挙げられるが、血液回路などからの吸引や既に採血された血液を吸引などであってもよい。第２シリンジ２は、遠心分離により第１シリンジ１に形成された白血球、血小板、及び血漿を含む画分（本発明の第２区分に相当する。）を吸引するために用いられる。第３シリンジ３は、第２シリンジ２に吸引した第２区分を遠心分離することで得られる上清を吸引除去するために用いられる。
また、第１実施形態における第１シリンジ１と第２シリンジ２は、第１プランジャロッド１５に第１挿通孔１５４、第２プランジャロッド２５に第２挿通孔２５４を有するものである。
【００３２】
図１及び図２に示されるように、第１シリンジ１は、第１中空針１１及び第１キャップ１２が脱着可能な第１ポート１３１と、開放した基端と、を有する第１シリンジ筒１３と、第１シリンジ筒１３内を液密に封止して、第１シリンジ筒１３内を往復動される第１ガスケット１４と、第１ガスケット１４に脱着可能に設けられた第１プランジャロッド１５とを備える。
【００３３】
第１シリンジ筒１３は、ほぼ円筒形状であり、先端が縮径されて第１ポート１３１が形成されている。第１ポート１３１の内部空間は、第１シリンジ筒１３の内部空間と連続している。第１シリンジ筒１３の基端は、縮径されることなく開口されている。基端から第１シリンジ筒１３の内部空間へ第１プランジャロッド１５が進退される。第１シリンジ筒１３の基端には、第１シリンジ筒１３の外周側へ突出する鍔１３２が形成されている。鍔１３２はハンドリングを向上させるためのものであり、第１シリンジ筒１３及び第１プランジャロッド１５の操作の際に鍔１３２に指が掛けられる。
【００３４】
第１シリンジ筒１３のγ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が可能なものであれば素材は特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離キットがディスポーザル品とされることや、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が施されることを考慮すると、第１シリンジ筒１３をポリプロピレンの成形品とすることが好ましい。第１シリンジ筒１３の内部空間に満たされた血液や血漿などを目視確認するために、第１シリンジ筒１３は、透明ないし半透明であることが好ましい。第１シリンジ筒１３の容量は特に限定されない。第１シリンジ筒１３に容量を示す目盛りが付されていると、内部空間に満たされた液体の量などが容易に把握できるので好ましい。
【００３５】
第１中空針１１は、採血などをする際に使用するためのものである。第１中空針１１は、先端側に刃面が形成されたカヌラ１１１と、カヌラ１１１の基端と接続されたハブ１１２とを有する。第１キャップ１２は、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１を封止するためのものである。第１中空針１１及び第１キャップ１２は、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１に取り付け及び取り外し可能なものであって、通常シリンジに用いられるルアーテーパーやルアーロックなどによって取り付けられるものである。第１キャップ１２の素材はγ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が可能ものであれば特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離キットがディスポーザル品とされることや、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が施されることを考慮すると、第１キャップ１２としてポリプロピレンやエラストマーの成形品が採用されうる。
【００３６】
第１ガスケット１４は、第１シリンジ筒１３の内部に挿入されて第１シリンジ筒１３を液密に封止する。第１ガスケット１４は、液密状態を維持したまま、第１シリンジ筒１３内を往復動可能である。第１ガスケット１４の往復動により、第１シリンジ筒１３の内部に密封可能な液体の容量が変化する。図１に示されるように、第１ガスケット１４は、第１シリンジ筒１３の内径に対応した径の円柱形状である。図２に示されるように、第１ガスケット１４の先端は円錐形状に突出されている。この先端の形状は、第１シリンジ筒１３内面の先端形状に対応している。第１プランジャロッド１５と接続される第１ガスケット１４の基端には、取付口１４１が形成されている。取付口１４１は第１ガスケット１４の円形の基端面の中心に形成されている。取付口１４１は円孔で、内周面には雌ネジが形成されている。
【００３７】
第１ガスケット１４の素材はγ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が可能なものであれば特に限定されず、合成樹脂やエラストマーなどが採用されうる。多血小板血漿分離キットがディスポーザル品とされることや、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が施されることを考慮すると、第１ガスケット１４としてエラストマーの成形品が採用されうる。
【００３８】
第１プランジャロッド１５は、ねじ込み式により第１ガスケット１４に対して脱着可能なものである。第１プランジャロッド１５の全体形状は、第１シリンジ筒１３の内部空間に挿入可能な外形であって、第１シリンジ筒１３の軸方向の長さより十分に長い。したがって、第１ガスケット１４を第１シリンジ筒１３の先端まで押し込んだ状態で、第１プランジャロッド１５の一部が第１シリンジ筒１３の基端から突出する。
【００３９】
第１プランジャロッド１５は、第１雄ネジ部１５１、軸部１５２と端板１５３を有し、先端から基端に渡って第１挿通孔１５４を有している。第１雄ネジ部１５１は、第１ガスケット１４の取付口１４１にねじ込まれる。取付口１４１の雌ネジと第１雄ネジ部１５１とは噛合する。これにより、第１プランジャロッド１５が第１ガスケット１４に対してねじ込み式により脱着される。この脱着は繰り返し行うことができる。遠心分離する際に取り外してもよいし、取り付けたままでもよい。
【００４０】
軸部１５２は、横断面において、中央に円形の第１挿通孔１５４が設けられ、その周囲に十字形状のリブを有するものである。軸部１５２の断面形状は成形加工の容易性や強度などを考慮して適宜選択されうる。軸部１５２の先端に第１雄ネジ部１５１が配置され、基端に端板１５３が配置されている。端板１５３は、円板形状の平板であり、軸部２０の軸方向に対して垂直に接続されている。端板１５３は第１プランジャロッド１５のハンドリングを向上させるためのものであり、第１プランジャロッド１５が第１シリンジ筒１３に対して押し込まれる際に指が押し当てられ、第１シリンジ筒１３から第１プランジャロッド１５を基端側に引く際に持ち手となる。
【００４１】
さらに、第１プランジャロッド１５は、先端から基端に渡る第１挿通孔１５４を有している。第１挿通孔１５４は、第１雄ネジ部１５１の先端から端板１５３の基端面に渡って設けられ、
第１先端開口部１５５及び第１基端開口部１５６を有している。第１挿通孔１５４の径は、第１プランジャロッド１５の基端である第１基端開口部１５６から先端である第１先端開口部１５５に向かい小さくなるものである。第１挿通孔１５４の径は、第１基端開口部１５６から第１先端開口部１５５に向かい小さくなるものであれは、特に形状は問わないが、第１挿通孔１５４の径が第１基端開口部１５６から第１先端開口部１５５に向けて漸次小さくなる形状、または図２で示される第１挿通孔１５４の径が第１挿通孔１５４の一部分で縮径する形状など基端から先端に向けて第２中空針２１を挿通し易い形状が適宜選択される。上述の形状により、先端部では第２中空針を第１ガスケットの貫通させたい位置への誘導する効果を奏する。
【００４２】
加えて、第１挿通孔１５４の第１先端開口部１５５は、第１プランジャロッド１５の先端面の中心部に位置するものである。第１挿通孔１５４の第１先端開口部１５５が、第１プランジャロッド１５の先端面の中心部に位置することで、第１ガスケットの取付口１４１を通して、第１ガスケット１４を基端側から貫通することができる。
第１プランジャロッド１５の素材はγ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が可能なものであれば特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離キットがディスポーザル品とされることや、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が施されることを考慮すると、第１プランジャロッド１５をポリプロピレンの成形品とすることが好ましい。
【００４３】
第２シリンジ２においては、カヌラ２１１以外の構成は、図１及び図２の括弧で示されるように、第１シリンジ１と同じ構成である。ただし、第２シリンジ２は、遠心分離により第１シリンジ１に形成された白血球、血小板、及び血漿を含む画分（本発明の第２区分に相当する。）を吸引するために用いられるものであるため、第２シリンジ２における第２中空針２１のカヌラ２１１の軸方向の長さは、第１シリンジ１の第１プランジャロッド１４の基端から、第２中空針２１を挿入した際に、第１ガスケット１４を貫通するに必要な長さに設定される。この様な構成によって、第１ガスケット１４を貫通した第２中空針２１は、遠心分離された第２区分４３を吸引することができる。
【００４４】
図３及び図４に示されるように、第３シリンジ３は、第３中空針３１と、第３中空針３１が取付可能な第３ポート３３１を有する第３シリンジ筒３３と、第３シリンジ筒３３内を往復動される第３ガスケット３４と、第３ガスケット３４に設けられた第３プランジャロッド３５とを具備する。
【００４５】
第３中空針３１は、中空管の先端側に刃面が形成されたカヌラ３１１と、カヌラ３１１の基端と接続されたハブ３１２とを有する。カヌラ３１１の軸方向の長さは、第２シリンジ２の第２ガスケット２４を貫通するに必要な長さに設定される。ハブ３１２は、ほぼ円筒形状であり、第３シリンジ筒３３の第３ポート３３１に外嵌されるに必要な内径及び軸方向の長さに設定される。カヌラ３１１とハブ３１２とは接着剤等により固定されている。ハブ３１２において、第３ポート３３１と接続される側の端部は開口されている。カヌラ３１１の基端側の開口は、ハブ３１２の内部空間と通じている。したがって、カヌラ３１１の先端側の開口からカヌラ３１１内に進入した液体等は、カヌラ３１１の基端側の開口からハ３１２ブの内部空間へ流入する。この内部空間は、ハブ３１２が第３ポート３３１に外嵌されることにより、第３ポート３３１と連続する。さらに、第３シリンジ３は、遠心分離により第３シリンジ３に形成された上清４４を吸引するために用いられるものであるため、第３シリンジ３における第３中空針３１のカヌラ３１１の軸方向の長さは、第２シリンジ２の第２プランジャロッド２４の基端から、第３中空針３１を挿入した際に、第２ガスケット２４を貫通するに必要な長さに設定される。この様な構成によって、第２ガスケット２４を貫通した第３中空針３１は、遠心分離された上清４４を吸引することができる。
【００４６】
第３シリンジ筒３３は、ほぼ円筒形状であり、先端が縮径されて第３ポート３３１が形成されている。第３ポート３３１の内部空間は、第３シリンジ筒３３の内部空間と連続している。第３シリンジ筒３３の基端は、縮径されることなく開口されている。基端から第３シリンジ筒３３の内部空間へ第３プランジャ５５が進退される。第３シリンジ筒３３の基端には、第３シリンジ筒３３の外周側へ突出する鍔３３２が形成されている。鍔３３２はハンドリングを向上させるためのものであり、第３シリンジ筒３３及び第３プランジャロッド３５の操作の際に鍔３３２に指が掛けられる。
【００４７】
第３シリンジ筒３３のγ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が可能なものであれば素材は特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離キットがディスポーザル品とされることや、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が施されることを考慮すると、第３シリンジ筒３３をポリプロピレンの成形品とすることが好ましい。第３シリンジ筒３３の内部空間に満たされた上清などを目視確認するために、第３シリンジ筒３３は、透明ないし半透明であることが好ましい。第３シリンジ筒３３の容量は特に限定されない。第３シリンジ筒３３に容量を示す目盛りが付されていると、内部空間に満たされた液体の量などが容易に把握できるので好ましい。
【００４８】
第３ガスケット３４は、第３シリンジ筒３３の内部に挿入されて第３シリンジ筒３３を液密に封止する。第３ガスケット３４は、液密状態を維持したまま、第３シリンジ筒３３内を往復動可能である。第３ガスケット３４の往復動により、第３シリンジ筒３３の内部に密封可能な液体の容量が変化する。図３に示されるように、第３ガスケット３４は、第３シリンジ筒３３の内径に対応した径の円柱形状である。図４に示されるように、第３ガスケット３４の先端は円錐形状に突出されている。この先端の形状は、第３シリンジ筒３３内面の先端形状に対応している。第３ガスケット３４は、第３プランジャロッド３５と接続されている。
【００４９】
第１実施形態において、第３プランジャロッド３５は、取り外しができない様に第３ガスケット３４に接続されるものである。第３ガスケット３４と第３プランジャロッド３５と接続については、取り外しができない形状であってもよいし、脱着可能な形状であってもよく、特に限定されるものではない。脱着可能な形状については、図１及び図２で示される第１シリンジ１の形状が挙げられる。第３プランジャロッド３５の全体形状は、第３シリンジ筒３３の内部空間に挿入可能な外形であって、第３シリンジ筒３３の軸方向の長さより十分に長い。したがって、第３ガスケット３４を第３シリンジ筒３３の先端まで押し込んだ状態で、第３プランジャロッド３５の一部が第３シリンジ筒３３の基端から突出する。第３プランジャロッド３５は、横断面において、十字形状のリブを有するものである。軸部の断面形状は成形加工の容易性や強度などを考慮して適宜選択されうる。
【００５０】
第３ガスケット３４の素材はγ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が可能なものであれば特に限定されず、合成樹脂やエラストマーなどが採用されうる。多血小板血漿分離キットがディスポーザル品とされることや、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が施されることを考慮すると、第３ガスケット３４としてエラストマーの成形品が採用されうる。
第３プランジャロッド３５の素材はγ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が可能なものであれば特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離キットがディスポーザル品とされることや、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が施されることを考慮すると、第３プランジャロッド３５をポリプロピレンの成形品とすることが好ましい。
【００５１】
再生医療に適した多血小板血漿が得ることを考慮すると、多血小板血漿分離キットを構成する各部材のうち、採血された血液と接触する少なくとも第１中空針１１、第１キャップ１２、第１シリンジ筒１３、第１ガスケット１４、第２中空針２１、第２キャップ２２、第２シリンジ筒２３、第２ガスケット２４、第３中空針３１、第３シリンジ筒３３、及び第３ガスケット３４は、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌される。また、第１シリンジ１、第２シリンジ２及び第３シリンジ３を滅菌袋に密封してキットとすることにより、多血小板血漿分離キットの使い勝手が向上する。
【００５２】
また、本実施形態に係る第１シリンジ１、第２シリンジ２及び第３シリンジ３の各部材の構成は一例であり、本発明の要旨を変更しない範囲において、各部材の構成の一部を他の公知の部材の構成に変更しうる。
【００５３】
以下に、本発明に係る多血小板血漿分離方法を説明する。本実施形態に係る多血小板血漿分離方法は、上記多血小板血漿分離キットを用いて行われ、５つの主要なステップからなる。第１ステップでは、採血された血液４１が満たされた第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１を封止し、第１シリンジ筒１３の先端側を遠心移動方向として、第１シリンジ筒１３内の血液４１を、赤血球を含む第１区分４２と、白血球、血小板、及び血漿を含む第２区分４３とに遠心分離する。第２ステップでは、第１シリンジ筒１３内の第１ガスケット１４に第２中空針２１を貫通し、第２区分４３を第２シリンジ筒２３に吸引する。第３ステップでは、第２区分４３が満たされた第２シリンジ筒２３の第２ポート２３１を封止し、第２シリンジ筒２３の先端側を遠心移動方向として、第２シリンジ筒３０内の第２区分４３に対して遠心分離を行う。第４ステップでは、第２シリンジ筒２３内の第２ガスケット２４に第３中空針３１を貫通し、上清４４を第３シリンジ筒３３に吸引する。第５ステップでは、第２シリンジ筒２３内の第２ガスケット２４を先端側に移動させて、遠心分離された多血小板血漿４５を第２ポート２３１から排出する。これら各ステップが、図５から図８を用いて以下に詳細に説明する。図５から図８は、多血小板血漿分離方法の各ステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【００５４】
第１ステップでは、図５（ａ）に示されるように、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１を第１キャップ１２で封止して第１シリンジ筒１３を密封状態にする。第１シリンジ１は、採血に使用される。採血する際には、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１に採血針が取り付けられる。もちろん、エクステンションチューブなどを介して採血針が第１ポート１３１に取り付けられてもよい。また、第１プランジャロッド１５は第１ガスケット１４に取り付けられる。採血は通常の方法であり、詳細な説明は省略する。この採血により、第１シリンジ筒１３は血液４１で満たされる。血液４１は全血であり、赤血球、白血球、血小板、血漿などを含む。採血後に、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１から採血針を取り外して、第１キャップ１２を用いて第１ポート１３１を封止する。これにより、図５（ａ）に示されるように、第１シリンジ筒１３が密封状態となる。
【００５５】
続いて、密封したシリンジを用いて１回目の遠心分離を行う。この遠心分離に先だって、図５（ｂ）に示されるように、第１プランジャロッド１５を第１ガスケット１４から取り外す。第１プランジャロッド１５は、遠心分離する際に取り外してもよいし、取り付けたままでもよい。しかしながら、第１プランジャロッド１５を第１ガスケット１４から取り外すことで、第１シリンジ筒１３から第１プランジャロッド１５が突出しないので、遠心分離において第１シリンジ筒１３の取り扱いが容易である。また、遠心分離において、第１プランジャロッド１５が不用意に操作されることがない。さらに、遠心分離において第１プランジャロッド１５の重量が第１ガスケット１４に作用しないので、第１シリンジ筒１３から第１キャップ１２が外れるおそれを軽減できるなどの理由から、第１プランジャロッド１５を取り外すことが好ましい。
【００５６】
この遠心分離において、第１シリンジ筒１３の先端側を遠心移動方向とする。ここで、「遠心移動方向」とは、遠心分離において遠心力が作用する方向であり、本発明においては先端である。また、第１ステップにおける遠心分離は、弱遠心である。弱遠心とは、血液の遠心分離において慣用されており、一般に、「全血を赤血球とその他（白血球、血小板、血漿）に分離する遠心分離」（非特許文献１参照）と定義される。具体的には、遠心分離条件が約５００〜２５００ｒｐｍの範囲における遠心分離が弱遠心とされる。遠心分離装置としては一般的なものが用いられる。
【００５７】
この遠心分離により、第１シリンジ筒１３に密封された血液４１は、第１区分４２と第２区分４３とに分離される。第１区分４２は、赤血球画分である。第２区分４３は白血球、血小板、及び血漿を含む画分である。図５（ｃ）に示されるように、第１区分４２は、遠心分離により遠心移動方向、つまり第１シリンジ筒１３の先端に分離される。
【００５８】
第２ステップでは、第１シリンジ筒１３内の第２区分４３を第２シリンジ筒２３に吸引する。１回目の遠心分離を行った後、図６（ａ）に示されるように、第１シリンジ１の第１プランジャロッド１５の第１基端開口部１５６から第２シリンジ３８に取り付けた第２中空針２１を第１挿通孔２６に挿通させる。さらに、第２中空針２１を推し進めると、第２中空針２１は第１ガスケット１４を貫通する。これにより、第２中空針２１の先端は第１シリンジ筒１３内の第２区分４３に到達する。この状態で、第２シリンジ２の第２プランジャロッド２５を第２シリンジ筒２３から引いて、第１シリンジ筒１３内の第２区分４３を第２シリンジ筒２３内へ吸引する。第２中空針２１で第１ガスケット１４を貫通させた後、第２区分４３を吸引する際は、第２中空針２１が第１ガスケット１４から突出しすぎると、第１区分４２に到達し、第２区分４３を吸引できなくなる恐れがある。そのため、第２中空針２１が第１ガスケット１４を貫通し、第２区分４３に到達した後、それ以上の突出を制限する構成を有することが好ましい。本発明においては、図６（ａ）に示されるように、第１挿通孔１５４の第１基端開口部１５６と第２シリンジ２の第２ポート２３１の先端が当接し、それ以上挿通できない形状であるが、特にこの形状に限定されるものではなく、例えば第１挿通孔１５４の内面と第２中空針２１のハブ２１２が係止される構造、第１挿通孔１５４の第１基端開口部１５６と第２中空針２１のハブ２１２が当接する構造などであってもよい。
【００５９】
図６（ｂ）に示されるように、第２シリンジ筒２３から第２プランジャロッド２５を引くと、第１シリンジ筒１３内の第２区分４３が第２シリンジ筒２３へ吸引されるとともに、第１ガスケット１４が、第１シリンジ筒１３内を先端側へ移動する。第１ガスケット１４の移動に伴って、第２シリンジ筒２３が、第１シリンジ１の先端方向にさらに移動する。これにより、第１シリンジ筒１３から第２シリンジ筒２３への第２区分４３の吸引が連続的かつ円滑に行われる。なお、第１シリンジ筒１３には、第１区分４２及び若干量の第２区分４３が残るが、これらは廃棄するか、別目的に使用する。
【００６０】
第１ステップにおける遠心分離を弱遠心とすることにより、血液４１を第１区分４２と第２区分４３とに分離するとともに、第２区分４３においては血小板をほぼ均等に分散させることができる。つまり、第１区分４２との境界付近に血小板が集中することがない。これにより、第２区分４３を第１シリンジ筒１３から第２シリンジ筒２３へ吸引する際に生ずる第２区分４３の若干のロスにより失われる血小板の量を少なくすることができる。
【００６１】
第３ステップでは、図７（ａ）に示されるように、第２シリンジ筒２３の第２ポート２３１を第２キャップ２２で封止して第２シリンジ筒２３を密封状態にした後、密封したシリンジを用いて２回目の遠心分離を行う。この遠心分離に先だって、図７（ｂ）に示されるように、第２プランジャロッド２５を第２ガスケット２４から取り外す。第２プランジャロッド２５は、遠心分離する際に取り外してもよいし、取り付けたままでもよい。しかしながら、第２プランジャロッド２５を第２ガスケット２４から取り外すことで、第２シリンジ筒２３から第２プランジャロッド２５が突出しないので、遠心分離において第２シリンジ筒２３の取り扱いが容易である。また、遠心分離において、第２プランジャロッド２５が不用意に操作されることがない。さらに、遠心分離において第２プランジャロッド２５の重量が第２ガスケット２４に作用しないので、第２シリンジ筒２３から第２キャップ２２が外れるおそれを軽減できるなどの理由から、第２プランジャロッド２５を取り外すことが好ましい。
【００６２】
この遠心分離において、第２シリンジ筒２３の先端側を遠心移動方向とする。また、第３ステップにおける遠心分離は、強遠心である。強遠心とは、血液の遠心分離において慣用されており、一般に、「血小板、白血球と残留赤血球を血漿から分離する遠心分離」（非特許文献１参照）と定義される。本発明では、第２区分の下方に血小板を濃縮する遠心分離を強遠心という。具体的には、遠心分離条件が約３０００〜４０００ｒｐｍの範囲における遠心分離が強遠心とされる。この遠心分離により、図７（ｃ）に示されるように、第２区分４３が遠心分離され、血小板が遠心移動方向、つまり第２シリンジ筒２３の先端に移動する。また、この遠心分離を強遠心とすることにより、第２区分４３から高濃度の多血小板血漿４５を分離することができる。
【００６３】
第４ステップでは、第２シリンジ筒２３内の上清４４を第３シリンジ筒３３に吸引する。２回目の遠心分離を行った後、図８（ａ）に示されるように、第２シリンジ２の第２プランジャロッド２５の第２基端開口部２５６から第３シリンジ３に取り付けた第３中空針３１を第３挿通孔３５に挿通させる。さらに、第３中空針３１を推し進めると、第３中空針３１は第２ガスケット２４を貫通する。これにより、第３中空針３１の先端は第２シリンジ筒２３内の上清４４に到達する。この状態で、第３シリンジ３の第３プランジャロッド３５を第３シリンジ筒３３から引いて、第２シリンジ筒２３内の上清４４を第３シリンジ筒３３内へ吸引する。第３中空針３１で第２ガスケット２４を貫通させた後、上清４４を吸引する際は、第３中空針３１が第２ガスケット２４から突出しすぎると、多血小板血漿４５に到達し、上清４４を吸引できなくなる恐れがある。そのため、第３中空針３１が第２ガスケット２４を貫通し、上清４４に到達した後、それ以上の突出を制限する構成を有することが好ましい。本発明においては、図８（ａ）に示されるように、第２挿通孔２５４の第２基端開口部２５６と第３シリンジ３の第３ポート３３１の先端が当接し、それ以上挿通できない形状であるが、特にこの形状に限定されるものではなく、例えば第２挿通孔２５４の内面と第３中空針３１のハブ３１２が係止される構造、第２挿通孔２５４の第２基端開口部２５６と第３中空針３１のハブ３１２が当接する構造などであってもよい。
【００６４】
図８（ｂ）に示されるように、第３シリンジ筒３３から第３プランジャロッド３５を引くと、第２シリンジ筒２３内の上清４４が第３シリンジ筒３３へ吸引されるとともに、第２ガスケット２４が、第２シリンジ筒２３内を先端側へ移動する。第２ガスケット２４と第２シリンジ筒２３とは嵌合状態にあるので、第２ガスケット２４の移動に伴って、第３シリンジ筒３３が、第２シリンジ筒２３にさらに進入する。これにより、第２シリンジ筒２３から第３シリンジ筒３３への上清４４の吸引が連続的かつ円滑に行われる。これにより、採血された血液４１から多血小板血漿４５が分離される。
【００６５】
なお、本実施形態では、高濃度の多血小板血漿４５を得るために、第４ステップにおいて、第２シリンジ筒２３内の上清４４を第３シリンジ筒３３に吸引し、多血小板血漿４５を分離することとした。しかしながら、操作行程の増加などを考慮して、第３ステップで遠心分離した後、上清４４を除去せずに多血小板血漿４５を第２シリンジ筒２３から排出してもよい。
【００６６】
このように、本発明に係る多血小板血漿分離キット及び多血小板血漿分離方法によれば、採血に使用した第１シリンジ１を用いて遠心分離を行って、血液４１から多血小板血漿４５を得ることができる。これにより、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌がされた少数の器具で多血小板血漿４５の分離を実現できる。また、３つのシリンジ１，２，３を用いることにより、第１区分４２と第２区分４３とを確実に分離して、高濃度の多血小板血漿４５を得ることができる。
【００６７】
［第２実施形態］
図９は、本発明の第２実施形態に係る多血小板血漿分離キットの第１シリンジ１の外観構成を示す分解斜視図である。図１０は、第１シリンジ１の内部構成を示す縦断面図である。図１１は、本発明の第２実施形態に係る多血小板血漿分離キットのガイド部材５の外観構成を示す分解斜視図である。図１２は、ガイド部材５の内部構成を示す縦断面図である。
【００６８】
本発明の第２実施形態に係る多血小板血漿分離キットは、第１シリンジ１、第２シリンジ２、第３シリンジ３とガイド部材５とを具備する。第１シリンジ１は、血液を吸引するために用いられる。血液の吸引とは、具体的には採血が挙げられるが、血液回路などからの吸引や既に採血された血液を吸引などであってもよい。第２シリンジ２は、遠心分離により第１シリンジ１に形成された白血球、血小板、及び血漿を含む画分（本発明の第２区分４３に相当する。）を吸引するために用いられる。第３シリンジ３は、第２シリンジ２に吸引した第２区分４３を遠心分離することで得られる上清４４を吸引除去するために用いられる。ガイド部材５は、第１シリンジ１から第２シリンジ２を用いて第２区分４３を吸引する際、及び第２シリンジ２から第３シリンジ３を用いて第２区分４３を吸引する際に操作を補助するために使用するものである。
【００６９】
本発明の第２実施形態に係る多血小板血漿分離キットにおける第１シリンジ１は、
本発明の第１実施形態における第１シリンジ１に対して、第１プランジャロッドの形状のみが異なるものである。
【００７０】
図９に示す様に、第１プランジャロッド１６は、ねじ込み式により第１ガスケット１４に対して脱着可能なものである。第１プランジャロッド１６の全体形状は、第１シリンジ筒１３の内部空間に挿入可能な外形であって、第１シリンジ筒１３の軸方向の長さより十分に長い。したがって、第１ガスケット１４を第１シリンジ筒１３の先端まで押し込んだ状態で、第１プランジャロッド１６の一部が第１シリンジ筒１３の基端から突出する。
【００７１】
第１プランジャロッド１６は、第１雄ネジ部１６１、軸部１６２と端板１６３を有している。第１雄ネジ部１６１は、第１ガスケット１４の取付口１４１にねじ込まれる。取付口１４１の雌ネジと第１雄ネジ部１６１とは噛合する。これにより、第１プランジャロッド１６が第１ガスケット１４に対してねじ込み式により脱着される。この脱着は繰り返し行うことができる。遠心分離する際に取り外してもよいし、取り付けたままでもよい。
【００７２】
軸部１６２は、横断面において、十字形状のリブを有するものである。軸部１６２の断面形状は成形加工の容易性や強度などを考慮して適宜選択されうる。軸部１６２の先端に第１雄ネジ部１６１が配置され、基端に端板１６３が配置されている。端板１６３は、円板形状の平板であり、軸部１６２の軸方向に対して垂直に接続されている。端板１６３は第１プランジャロッド１６のハンドリングを向上させるためのものであり、第１プランジャロッド１６が第１シリンジ筒１３に対して押し込まれる際に指が押し当てられ、第１シリンジ筒１３から第１プランジャロッド１６を基端側に引く際に持ち手となる。
【００７３】
第２シリンジ２においては、カヌラ２１１以外の構成は、図９及び図１０の括弧で示されるように、第１シリンジ１と同じ構成である。ただし、第２シリンジ２は、遠心分離により第１シリンジ１に形成された白血球、血小板、及び血漿を含む画分（本発明の第２区分に相当する。）を吸引するために用いられるものであるため、第２シリンジ２における第２中空針２１のカヌラ２１１の軸方向の長さは、ガイド部材５の基端から、第２中空針２１を挿入した際に、第１ガスケット１４を貫通するに必要な長さに設定される。この様な構成によって、第１ガスケット１４を貫通した第２中空針２１は、遠心分離された第２区分４３を吸引することができる。
【００７４】
第３シリンジ３は、第２シリンジ２に吸引した第２区分４３を遠心分離することで得られる上清４４を吸引除去するために用いられる。第２実施形態における第３シリンジ３は、第１実施形態における第３シリンジ３と同じ構成である。ただし、第３シリンジ３は、遠心分離により第３シリンジ３に形成された上清４４を吸引するために用いられるものであるため、第３シリンジ３における第３中空針３１のカヌラ３１１の軸方向の長さは、ガイド部材５の基端から、第３中空針３１を挿入した際に、第２ガスケット２４を貫通するに必要な長さに設定される。この様な構成によって、第２ガスケット２４を貫通した第３中空針３１は、遠心分離された上清４４を吸引することができる。
【００７５】
図１１に示すように、ガイド部材５は、第１シリンジ１から第２シリンジ２を用いて第２区分４３を吸引する際、及び第２シリンジ２から第３シリンジ３を用いて第２区分４３を吸引する際に操作を補助するために使用するものである。ガイド部材５は、第１プランジャロッド１６を取り外した後の第１シリンジ筒１３、あるいは第２プランジャロッド２６を取り外した後の第２シリンジ筒２３に挿入可能なものである。ガイド部材５は、第１シリンジ１及び第２シリンジの形状が異なる場合、または血液の付着などによる衛生面での問題を考慮して、各シリンジ毎に設けてもよい。ガイド部材５の全体形状は、第１シリンジ筒１３の内部空間に挿入可能な外形であって、第１シリンジ筒１３の軸方向の長さより十分に長い。したがって、第１ガスケット１４を第１シリンジ筒１３の先端まで押し込んだ状態で、第１プランジャロッド１６の一部が第１シリンジ筒１３の基端から突出する。
【００７６】
ガイド部材５は、先端ポート５１、先端板５２、軸部５３と基端板５４を有し、先端から基端に渡って挿通孔５５を有している。第１ガスケット１４から第１プランジャロッド１６を取り外した後、ガイド部材５を第１シリンジ筒１３に挿入した際、先端ポート５１は第１ガスケット１４の取付口１４１に挿入され、先端板５２は第１ガスケット１４の基端と当接する。軸部５３は、横断面において、中央に円形の挿通孔５５が設けられ、その周囲に十字形状のリブを有するものである。軸部５３の断面形状は成形加工の容易性や強度などを考慮して適宜選択されうる。軸部５３の基端に基端板５４が配置されている。基端板５４は、円板形状の平板であり、軸部５３の軸方向に対して垂直に接続されている。基端板５４はガイド部材５のハンドリングを向上させるためのものであり、第１シリンジ筒１３からガイド部材５を基端側に引く際に持ち手となる。
【００７７】
さらに、ガイド部材５は、先端から基端に渡る挿通孔５５を有している。挿通孔５５は、ガイド部材５の先端ポート５１の先端から基端に渡って設けられ、先端開口部５６及び基端開口部５７を有している。挿通孔５５の径は、ガイド部材５の基端である基端開口部５７から先端である先端開口部５６に向かい小さくなるものである。挿通孔５５の径は、基端開口部５７から先端開口部５６に向かい小さくなるものであれば、特に形状は問わないが、挿通孔５５の径が基端開口部５７から先端開口部５６に向けて漸次小さくなる形状、または図１２（ａ）で示される挿通孔５５の径が挿通孔５５の一部分で縮径する形状など基端から先端に向けて第２中空針を挿通し易い形状が適宜選択される。上述の形状により、先端部では第２中空針を第１ガスケットの貫通させたい位置への誘導する効果を奏する。
【００７８】
加えて、挿通孔５５の先端開口部５６は、ガイド部材５の先端面の中心部に位置するものである。挿通孔５５の先端開口部５６が、ガイド部材５の先端面の中心部に位置することで、第１ガスケット１４の取付口１４１を通して、第１ガスケット１４を基端側から貫通することができる。
ガイド部材５の素材はγ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が可能なものであれば特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離キットがディスポーザル品とされることや、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が施されることを考慮すると、ガイド部材５をポリプロピレンの成形品とすることが好ましい。
【００７９】
再生医療に適した多血小板血漿が得ることを考慮すると、多血小板血漿分離キットを構成する各部材のうち、採血された血液と接触する少なくとも第１中空針１１、第１キャップ１２、第１シリンジ筒１３、第１ガスケット１４、第２中空針２１、第２キャップ２２、第２シリンジ筒２３、第２ガスケット２４、第３中空針３１、第３シリンジ筒３３、第３ガスケット３４、及びガイド部材５は、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌される。また、第１シリンジ１、第２シリンジ２、第３シリンジ３及びガイド部材５を滅菌袋に密封してキットとすることにより、多血小板血漿分離キットの使い勝手が向上する。
【００８０】
また、本実施形態に係る第１シリンジ１、第２シリンジ２、第３シリンジ３及びガイド部材５の各部材の構成は一例であり、本発明の要旨を変更しない範囲において、各部材の構成の一部を他の公知の部材の構成に変更しうる。
【００８１】
以下に、本発明に係る多血小板血漿分離方法を説明する。本実施形態に係る多血小板血漿分離方法は、上記多血小板血漿分離キットを用いて行われ、７つの主要なステップからなる。第１ステップでは、採血された血液４１が満たされた第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１を封止し、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１側を遠心移動方向として、第１シリンジ筒１３内の血液４１を、赤血球を含む第１区分４２と、白血球、血小板、及び血漿を含む第２区分４３とに遠心分離する。第２ステップでは、第１プランジャロッド１６を第１ガスケット１４から取り外した第１シリンジ筒１３内に、ガイド部材５を挿入後、ガイド部材５の基端開口部５７から第２中空針２１を挿通し、さらに押し込むことで第２中空針２１が第１ガスケット１４を貫通する。第３ステップでは、第１シリンジ筒１３内の第１ガスケット１４を貫通した第２中空針２１で、第２区分４３を第２シリンジ筒２３内に吸引する。第４ステップでは、第２区分４３が満たされた第２シリンジ筒２３の第２ポート２３１を封止し、第２シリンジ筒２３の第２ポート２３１側を遠心移動方向として、第２シリンジ筒２３内の第２区分４３に対して遠心分離を行う。第５ステップでは、第２プランジャロッド２６を第２ガスケット２４から取り外した第２シリンジ筒２３内に、ガイド部材５を挿入後、ガイド部材５の基端開口部５７から第３中空針３１を挿入し、さらに押し込むことで第３中空針３１で第３ガスケット３４を貫通する。第６ステップでは、第２シリンジ筒２３内の第２ガスケット２４を貫通した第３中空針３１で上清４４を第３シリンジ筒３３内に吸引する。第７ステップでは、第２シリンジ筒２３内の第２ガスケット２４を先端側に移動させて、遠心分離された多血小板血漿４５を第２ポート２３１から排出する。これら各ステップを図１３から図１６を用いて以下に詳細に説明する。図１３から図１６は、多血小板血漿分離方法の各ステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【００８２】
第１ステップでは、図１３（ａ）に示されるように、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１を第１キャップ１２で封止して第１シリンジ筒１３を密封状態にする。第１シリンジ１は、採血に使用される。採血する際には、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１に採血針が取り付けられる。もちろん、エクステンションチューブなどを介して採血針が第１ポート１３１に取り付けられてもよい。また、第１プランジャロッド１６は第１ガスケット１４に取り付けられる。採血は通常の方法であり、詳細な説明は省略する。この採血により、第１シリンジ筒１３は血液４１で満たされる。血液４１は全血であり、赤血球、白血球、血小板、血漿などを含む。採血後に、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１から採血針を取り外して、第１キャップ１２を用いて第１ポート１３１を封止する。これにより、図１３（ａ）に示されるように、第１シリンジ筒１３が密封状態となる。
【００８３】
続いて、密封したシリンジを用いて１回目の遠心分離を行う。この遠心分離に先だって、図１３（ｂ）に示されるように、第１プランジャロッド１６を第１ガスケット１４から取り外す。第１プランジャロッド１６は、遠心分離する際に取り外してもよいし、取り付けたままでもよい。しかしながら、第１プランジャロッド１６を第１ガスケット１４から取り外すことで、第１シリンジ筒１３から第１プランジャロッド１６が突出しないので、遠心分離において第１シリンジ筒１３の取り扱いが容易である。また、遠心分離において、第１プランジャロッド１６が不用意に操作されることがない。さらに、遠心分離において第１プランジャロッド１６の重量が第１ガスケット１４に作用しないので、第１シリンジ筒１３から第１キャップ１２が外れるおそれを軽減できるなどの理由から、第１プランジャロッド１６を取り外すことが好ましい。
【００８４】
この遠心分離において、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１側を遠心移動方向とする。ここで、「遠心移動方向」とは、遠心分離において遠心力が作用する方向であり、本発明においては先端である。また、第１ステップにおける遠心分離は、弱遠心である。弱遠心とは、血液の遠心分離において慣用されており、一般に、「全血を赤血球とその他（白血球、血小板、血漿）に分離する遠心分離」（非特許文献１参照）と定義される。具体的には、遠心分離条件が約５００〜２５００ｒｐｍの範囲における遠心分離が弱遠心とされる。遠心分離装置としては一般的なものが用いられる。
【００８５】
この遠心分離により、第１シリンジ筒１３に密封された血液４１は、第１区分４２と第２区分４３とに分離される。第１区分４２は、赤血球画分である。第２区分４３は白血球、血小板、及び血漿を含む画分である。図１３（ｃ）に示されるように、第１区分４２は、遠心分離により遠心移動方向、つまり第１シリンジ筒１３の先端に分離される。
【００８６】
第２ステップでは、図１４（ａ）に示されるように、第１シリンジ筒１３内にガイド部材５を挿入後、ガイド部材５の基端開口部５７から第２中空針２１を挿通し、さらに押し込むことで第２中空針２１で第１ガスケット１４を貫通させる。１回目の遠心分離を行う際に、第１プランジャロッド１６を取り外した場合は、遠心分離した後の第１シリンジ筒１３内にそのままガイド部材５を挿入すればよい。ガイド部材５を挿入後、ガイド部材５の基端開口部５７から第２シリンジ２に取り付けた第２中空針２１を挿通孔５５に挿通させる。さらに、第２中空針２１を推し進めると、第２中空針２１は第１ガスケット１４を貫通する。これにより、第２中空針２１の先端は第１シリンジ筒１３内の第２区分４３に到達する。
【００８７】
第３ステップでは、第１シリンジ筒１３内の第２区分４３を第２シリンジ筒２３に吸引する。図１４（ａ）に示されるように、第２中空針２１が第１ガスケット１４を貫通し、第２中空針２１の先端は第１シリンジ筒１３内の第２区分４３に到達した状態で、第２シリンジ２の第２プランジャロッド２６を第２シリンジ筒２３から引いて、第１シリンジ筒１３内の第２区分４３を第２シリンジ筒２３内へ吸引する。第２中空針２１で第１ガスケット１４を貫通させた後、第２区分４３を吸引する際は、第２中空針２１が第１ガスケット１４から突出しすぎると、第１区分４２に到達し、第２区分４３を吸引できなくなる恐れがある。そのため、第２中空針２１が第１ガスケット１４を貫通し、第２区分４３に到達した後、それ以上の突出を制限する構成を有することが好ましい。本発明においては、図１４（ａ）に示されるように挿通孔５５の基端開口部５７と第２シリンジ２の第２ポート２３１の先端が当接し、それ以上挿通できない形状であるが、特にこの形状に限定されるものではなく、例えば挿通孔５５の内面と第２中空針２１のハブ２１２が係止される構造、挿通孔５５の基端開口部５７と第２中空針２１の２１２が当接する構造などであってもよい。
【００８８】
図１４（ｂ）に示されるように、第２シリンジ筒２３から第２プランジャロッド２６を引くと、第１シリンジ筒１３内の第２区分４３が第２シリンジ筒２３へ吸引されるとともに、第１ガスケット１４が、第１シリンジ筒１３内を第１ポート１３１側へ移動する。第１ガスケット１４の移動に伴って、第２シリンジ筒５３が、第１シリンジ１の方向にさらに移動する。これにより、第１シリンジ筒１３から第２シリンジ筒２３への第２区分４３の吸引が連続的かつ円滑に行われる。なお、第１シリンジ筒１３には、第１区分４２及び若干量の第２区分４３が残るが、これらは廃棄するか、別目的に使用する。
【００８９】
第１ステップにおける遠心分離を弱遠心とすることにより、血液４１を第１区分４２と第２区分４３とに分離するとともに、第２区分４３においては血小板をほぼ均等に分散させることができる。つまり、第１区分４２との境界付近に血小板が集中することがない。これにより、第２区分４３を第１シリンジ筒１３から第２シリンジ筒２３へ吸引する際に生ずる第２区分４３の若干のロスにより失われる血小板の量を少なくすることができる。
【００９０】
第４ステップでは、図１５（ａ）に示されるように、第２シリンジ筒２３の第２ポート２３１を第２キャップ２２で封止して第２シリンジ筒２３を密封状態にした後、密封したシリンジを用いて２回目の遠心分離を行う。この遠心分離に先だって、図１５（ｂ）に示されるように、第２プランジャロッド２６を第２ガスケット２４から取り外す。第２プランジャロッド２６は、遠心分離する際に取り外してもよいし、取り付けたままでもよい。しかしながら、第２プランジャロッド２６を第２ガスケット２４から取り外すことで、第２シリンジ筒２３から第２プランジャロッド２６が突出しないので、遠心分離において第２シリンジ筒２３の取り扱いが容易である。また、遠心分離において、第２プランジャロッド２６が不用意に操作されることがない。さらに、遠心分離において第２プランジャロッド２６の重量が第２ガスケット２４に作用しないので、第２シリンジ筒２３から第２キャップ２２が外れるおそれを軽減できるなどの理由から、第２プランジャロッド２６を取り外すことが好ましい。
【００９１】
この遠心分離において、第２シリンジ筒２３の先端側を遠心移動方向とする。また、第４ステップにおける遠心分離は、強遠心である。強遠心とは、血液の遠心分離において慣用されており、一般に、「血小板、白血球と残留赤血球を血漿から分離する遠心分離」（非特許文献１参照）と定義される。本発明では、第２区分の下方に血小板を濃縮する遠心分離を強遠心という。具体的には、遠心分離条件が約３０００〜４０００ｒｐｍの範囲における遠心分離が強遠心とされる。この遠心分離により、図１５（ｃ）に示されるように、第２区分４３が遠心分離され、血小板が遠心移動方向、つまり第２シリンジ筒２３の先端に移動する。また、この遠心分離を強遠心とすることにより、第２区分４３から高濃度の多血小板血漿４５を分離することができる。
【００９２】
第５ステップでは、図１６（ａ）に示されるように、第２シリンジ筒２３内にガイド部材５を挿入後、ガイド部材５の基端開口部７４から第３中空針３１を挿通し、さらに押し込むことで第３中空針３１で第２ガスケット２４を貫通させる。２回目の遠心分離を行う際に、第２プランジャロッド２６を取り外した場合は、遠心分離した後の第２シリンジ筒２３内にそのままガイド部材５を挿入すればよい。ガイド部材５を挿入後、ガイド部材５の基端開口部５７から第３シリンジ３９に取り付けた第３中空針３１を挿通孔５５に挿通させる。さらに、第３中空針３１を推し進めると、第３中空針３１は第２ガスケット２４を貫通する。これにより、第３中空針３１の先端は第２シリンジ筒２３内の上清４４に到達する。
【００９３】
第６ステップでは、第２シリンジ筒２３内の上清４４を第３シリンジ筒３３に吸引する。図１６（ａ）に示されるように、第３中空針３１が第２ガスケット２４を貫通し、第３中空針３１の先端は第２シリンジ筒２３内の第上清４４に到達した状態で、第３シリンジ３の第３プランジャロッド３５を第３シリンジ筒３３から引いて、第２シリンジ筒２３内の上清４４を第３シリンジ筒３３内へ吸引する。第３中空針３１で第２ガスケット２４を貫通させた後、上清４４を吸引する際は、第３中空針３１が第２ガスケット２４から突出しすぎると、多血小板血漿４５に到達し、上清４４を吸引できなくなる恐れがある。そのため、第３中空針３１が第２ガスケット２４を貫通し、上清４４に到達した後、それ以上の突出を制限する構成を有することが好ましい。本発明においては、図１６（ａ）に示されるように、挿通孔５５の基端開口部５７と第３シリンジ３の第３ポート３３１の先端が当接し、それ以上挿通できない形状であるが、特にこの形状に限定されるものではなく、例えば挿通孔５５の内面と第３中空針３１の３１２が係止される構造、挿通孔５５の基端開口部５７と第３中空針３１のハブ３１２が当接する構造などであってもよい。
【００９４】
図１６（ｂ）に示されるように、第３シリンジ筒３３から第３プランジャロッド３５を引くと、第２シリンジ筒２３内の上清４４が第３シリンジ筒３３へ吸引されるとともに、第２ガスケット２４が、第２シリンジ筒２３内を第２ポート２３１側へ移動する。第２ガスケット２４の移動に伴って、第３シリンジ筒３３が、第２シリンジ２の方向にさらに移動する。これにより、第２シリンジ筒２３から第３シリンジ筒３３への第２区分４３の吸引が連続的かつ円滑に行われる。これにより、採血された血液４１から多血小板血漿４５が分離される。
【００９５】
なお、本実施形態では、より高濃度の多血小板血漿４５を得るために、４ステップにおいて、第２シリンジ筒２３内の上清４４を第３シリンジ筒３３に吸引し、多血小板血漿４５を分離することとした。しかしながら、操作行程の増加などを考慮して、第３ステップで遠心分離した後、上清４４を除去せずに多血小板血漿４５を第２シリンジ筒２３から排出してもよい。
【００９６】
このように、本発明に係る多血小板血漿分離キット及び多血小板血漿分離方法によれば、多血小板血漿の分離を簡便に且つ失敗することなく行うことができる。
【産業上の利用可能性】
【００９７】
本発明は、全血を遠心分離することにより多血小板血漿を得るための多血小板血漿分離キット及び多血小板血漿分離方法に適用できる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液を吸引するために用いられるシリンジと、そのシリンジから血小板及び血漿を含む遠心分離区分を吸引するために用いられるシリンジと、を有する多血小板血漿分離キット、及び多血小板血漿分離方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
多血小板血漿（以下、「ＰＲＰ」とも称される。）とは、血小板を多く含む血漿である。血球成分を含む全血においては、赤血球が約９５％、白血球が３％、血小板が約１％の割合で含まれる。これに対し、多血小板血漿においては、血小板が高い割合で含まれる。ＰＲＰにおける血小板の割合は特に定義がない。一般に、全血における血漿の割合が約５５％であることを考慮すると、血球成分が除去された血漿に含まれる血小板の割合は約２％程度と考えられる。この約２％程度より明らかに高い割合の血小板が、ＰＲＰに含まれる。
【０００３】
ＰＲＰは、全血を遠心分離することにより得られる。詳細に説明すると、まず、全血を弱遠心して赤血球を分離して血漿を得る。この血漿には白血球及び血小板が含まれる。さらに、得られた血漿を強遠心する。これにより、血小板は遠心力が加わる方向（以下、本明細書において遠心分離方向とも称する。）に集中し、上清には血小板がほぼ含まれない。強遠心された血漿から上清を取り除き、或いは遠心分離方向（下側）の所定量のみを取り出して、ＰＲＰを得る（特許文献１参照）。
【０００４】
血小板のα顆粒中には、ＰＤＧＦ、ＴＧＦ−β、ＩＬＧＦなどの成長因子が存在することが知られている。これら成長因子が創傷治癒や組織再生に効果的な役割を果たすことが着目されている。例えば、歯周組織再生法などの再生医療において、ＰＲＰの利用が期待されている（特許文献２、特許文献３及び非特許文献１参照）。
【０００５】
ＰＲＰを再生医療に用いる場合には、安全性の観点から、ＰＲＰを調整する器具はすべてγ線滅菌を施すことが要求される。しかしながら、例えば特許文献１に記載されている真空採血管のように、ゴム栓を使用した容器に対してγ線滅菌を施すと、ゴム栓が劣化するという問題がある。ゴム栓の劣化は、ゴム栓に含まれる添加物の滲出、破断片や砕片の発生を惹起し、これら添加物や破断片などが血液やＰＲＰに混入するおそれがある。また、エチレンオキサイドガス滅菌については、真空採血管の管内までガスが注入できず、血液の接触部に対して滅菌できないおそれがある。
本発明者らは、上述の現状を鑑み、鋭意検討の結果、多血小板血漿分離キット及び多血小板血漿分離方法を発明するに至っている（特許文献４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００６−７８４２８号公報
【特許文献２】特開２００６−２３２８３４号公報
【特許文献３】特開２００５−２７８９１０号公報
【特許文献４】ＷＯ２００８／０５０６８８
【非特許文献１】多血小板血漿の口腔への応用、ロバート・Ｅ・マルクス著、クィーン・テッセンス出版社出版
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
引用文献４に記載の発明においては、血液を吸引するために用いられ第１シリンジ及び該第１シリンジから血小板及び血漿を含む遠心分離区分を吸引するために用いられる第２シリンジを用いて、多血小板血漿を分離する方法である。第１シリンジに満たされた血液を遠心分離し、第１シリンジのプランジャロッドを取り外し、第１シリンジのガスケット基端側より、中空針を取り付けた第２シリンジを挿入し、ガスケットを貫通後、分離された白血球及び血小板を含む血漿画分を吸引するものである。そのため、第１シリンジのガスケット基端側より、中空針を取り付けた第２シリンジを挿入し、ガスケットを貫通する際に、ガスケットの側面に中空針が刺さり、ガスケットがうまく貫通できないという問題点があった。さらに、あるいはガスケットとシリンジ筒とで密封された血液が漏れ出す、また第２シリンジによる貫通が深すぎて、遠心により分離された血漿画分層より深い位置に中空心が到達し、血漿画分が吸引できないという問題点もある。
【０００８】
本発明は、上述の事情に問題に鑑みてなされたものであり、多血小板血漿の分離を簡便に且つ失敗することなく行うことができる血小板血漿分離キット及び多血小板血漿分離方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本願請求項１に係る多血小板血漿分離キットは、血液を吸引するために用いられる第１シリンジと、該第１シリンジから血小板及び血漿を含む遠心分離区分を吸引するために用いられる第２シリンジと、該第１シリンジに脱着可能な第１中空針及び第１キャップと、該第２シリンジに脱着可能な第２中空針及び第２キャップと、を具備する多血小板血漿分離キットであって、前記第１シリンジは、先端に前記第１中空針及び前記第１キャップが脱着可能な第１ポートと、開放した基端と、を有する第１シリンジ筒と、前記第１シリンジ筒内を液密に封止して前記第１シリンジ筒内を往復動される第１ガスケットと、前記第１ガスケットの基端に先端が接続される第１プランジャロッドと、を備え、前記第２シリンジは、先端に前記第２中空針及び前記第２キャップが脱着可能な第２ポートと、開放した基端と、を有する第２シリンジ筒と、前記第２シリンジ筒内を液密に封止して前記第２シリンジ筒内を往復動される第２ガスケットと、前記第２ガスケットの基端に先端が接続される第２プランジャロッドと、を備え、前記第１プランジャロッドは、先端から基端に渡る挿通孔を有し、前記挿通孔の基端から前記第２中空針を挿通した際に、前記第２中空針が前記第１ガスケットを貫通することを特徴とする多血小板血漿分離キットである。
【００１０】
本願請求項２に係る多血小板血漿分離キットは、前記挿通孔の径が、前記第１プランジャロッドの基端から先端に向かい小さくなるものであって、前記挿通孔の先端側開口部が、前記第１プランジャロッドの先端面の中心部に位置することを特徴とする多血小板血漿分離キットである。
【００１１】
本願請求項３に係る多血小板血漿分離キットは、請求項１または２に記載の多血小板血漿分離キットであって、さらに、前記第２シリンジから遠心分離区分を吸引するために用いられる第３シリンジを具備する多血小板血漿分離キットであって、前記第３シリンジは、先端に第３中空針が設けられた第３ポートと、開放した基端と、を有する第３シリンジ筒と、前記第３シリンジ筒内を液密に封止して前記第３シリンジ筒内を往復動される第３ガスケットと、前記第３ガスケットの基端に先端が接続される第３プランジャロッドと、を備え、前記第２プランジャロッドは、先端から基端に渡る挿通孔を有し、前記挿通孔の基端から前記第３中空針を挿通した際に、前記第３中空針が前記第２ガスケットを貫通することを特徴とする多血小板血漿分離キットである。
【００１２】
本願請求項４に係る多血小板血漿分離キットは、血液を吸引するために用いられる第１シリンジと、該第１シリンジから血小板及び血漿を含む遠心分離区分を吸引するために用いられる第２シリンジと、該第１シリンジに脱着可能な第１中空針及び第１キャップと、該第２シリンジに脱着可能な第２中空針及び第２キャップと、を具備する多血小板血漿分離キットであって、前記第１シリンジは、先端に前記第１中空針及び前記第１キャップが脱着可能な第１ポートと、開放した基端と、を有する第１シリンジ筒と、前記第１シリンジ筒内を液密に封止して前記第１シリンジ筒内を往復動される第１ガスケットと、前記第１ガスケットの基端に先端が脱着可能に接続される第１プランジャロッドと、を備え、前記第２シリンジは、先端に前記第２中空針及び前記第２キャップが脱着可能な第２ポートと、開放した基端と、を有する第２シリンジ筒と、前記第２シリンジ筒内を液密に封止して前記第２シリンジ筒内を往復動される第２ガスケットと、前記第２ガスケットの基端に先端が接続される第２プランジャロッドと、を備え、前記第１プランジャロッドを取り外した後に、前記第１シリンジ筒の基端から挿入可能で、挿入した際に前記第１ガスケットに当接するガイド部材を有し、前記ガイド部材は、前記第２中空針を挿通するための先端から基端に渡る挿通孔を有し、前記挿通孔の基端から前記第２中空針を挿通した際に、前記第２中空針が前記第１ガスケットを貫通することを特徴とする多血小板血漿分離キットである。
【００１３】
本願請求項５に係る多血小板血漿分離キットは、前記挿通孔の径が、前記ガイド部材の基端から先端に向かい小さくなるものであって、前記挿通孔の先端側開口部が、前記ガイド部材の先端面の中心部に位置することを特徴とする請求項に記載の多血小板血漿分離キットである。
【００１４】
本願請求項６に係る多血小板血漿分離キットは、請求項４または５に記載の多血小板血漿分離キットであって、さらに、前記第２シリンジから遠心分離区分を吸引するために用いられる第３シリンジを具備する多血小板血漿分離キットであって、前記第３シリンジは、先端に第３中空針が設けられた第３ポートと、開放した基端と、を有する第３シリンジ筒と、前記第３シリンジ筒内を液密に封止して前記第３シリンジ筒内を往復動される第３ガスケットと、前記第３ガスケットの基端に先端が接続される第３プランジャロッドと、を備え、前記ガイド部材の挿通孔の基端から前記第３中空針を挿通した際に、前記第３中空針が前記第２ガスケットを貫通することを特徴とする多血小板血漿分離キットである。
【００１５】
本願請求項７に係る多血小板血漿分離方法は、先端に第１中空針及び第１キャップが脱着可能な第１ポートと開放した基端とを有する第１シリンジ筒と、前記第１シリンジ筒内を液密に封止して前記第１シリンジ筒内を往復動される第１ガスケットと、前記第１ガスケットの基端に先端が脱着可能に接続される第１プランジャロッドと、を備える前記第１シリンジと、先端に前記第２中空針及び前記第２キャップが脱着可能な第２ポートと開放した基端とを有する第２シリンジ筒と、前記第２シリンジ筒内を液密に封止して前記第２シリンジ筒内を往復動される第２ガスケットと、前記第２ガスケットの基端に先端が接続される第２プランジャロッドと、を備える前記第２シリンジと、前記第１シリンジ筒に挿入可能で、前記第２中空針を挿通するための先端から基端に渡る挿通孔を有するガイド部材と、を用いた多血小板血漿分離方法であって、前記第１シリンジ筒の前記第１プランジャロッドを取り外し、前記ガイド部材を挿入した後に、前記ガイド部材の前記挿通孔の基端側に前記第２シリンジに装着した前記第２中空針を挿通し、前記第２中空針で前記第１ガスケットを貫通するステップを含む多血小板血漿分離方法である。
【００１６】
本願請求項８に係る多血小板血漿分離方法は、請求項７に記載の多血小板血漿分離方法であって、さらに、先端に第３中空針及び第３中空針が設けられた第３ポートと開放した基端とを有する第３シリンジ筒と、前記第３シリンジ筒内を液密に封止して前記第３シリンジ筒内を往復動される第３ガスケットと、前記第３ガスケットの基端に先端が接続される第３プランジャロッドとを備える前記第３シリンジを用いる多血小板血漿分離方法であって、前記第２シリンジ筒の前記第２プランジャロッドを取り外し、前記ガイド部材を挿入した後に、前記ガイド部材の前記挿通孔の基端側に前記第３シリンジに装着した前記第３中空針を挿通し、前記第３中空針で前記第２ガスケットを貫通するステップを含む多血小板血漿分離方法である。
【００１７】
本発明に係る多血小板血漿分離キット及び多血小板血漿分離方法は、第１シリンジ及び第２シリンジを備えるものである。必要に応じて、第３シリンジを用いるものである。本発明において、基端とはシリンジのポート側を指すものであり、基端とはシリンジのプランジャロッドを挿入する側を指すものである。
第１シリンジは、血液を吸引するために用いられるものである。第１シリンジは、先端に第１中空針及び第１キャップが脱着可能な第１ポートと開放した基端とを有する第１シリンジ筒と、第１シリンジ筒内を液密に封止して第１シリンジ筒内を往復動される第１ガスケットと、第１ガスケットの基端に先端が接続される第１プランジャロッドとを備えるものである。血液を吸引する方法は、特に限定されないが、第１ポートへ第１中空針を取り付けた第１シリンジを用いて採血する方法や、第１シリンジを用いて血液回路に設けられたサンプリングポートなどから血液を吸引する方法などがある。第１ポートへ第１中空針が脱着可能であるとは、第１中空針が直接に第１ポートに取り付けられる態様や、第１中空針がエクステンションチューブなどの他の部材を介して第１ポートに取り付けられる態様が含まれる。
血液を吸引し、血液が満たされた第１シリンジは、第１シリンジ筒から第１中空針が取り外され、第１ポートが第１キャップにより封止される。これにより、第１シリンジ筒内に血液が密封される。さらに、遠心分離を行う。第１シリンジは、第１ガスケットに第１プランジャロッドが取り付けられた状態、あるいは第１ガスケットから第１プランジャロッドが取り外された状態で遠心分離が行うことができる。遠心分離により、血液が赤血球画分（第１区分）と、白血球及び血小板を含む血漿画分（第２区分）に分離される。この遠心分離では、赤血球画分が第１シリンジ筒内の第１ポート側に、血漿画分が第１ガスケット側に分離される。
【００１８】
第２シリンジは、遠心分離された第１シリンジ筒から血漿画分を吸引するために用いられる。第２シリンジは、先端に第２中空針及び第２キャップが脱着可能な第２ポートと開放した基端とを有する第２シリンジ筒と、第２シリンジ筒内を液密に封止して第２シリンジ筒内を往復動される第２ガスケットと、第２ガスケットの基端に先端が接続される第２プランジャロッドとを備えるものである。第２ポートへ第２中空針が脱着可能であるとは、第２中空針が直接に第２ポートに取り付けられる態様や、第２中空針がエクステンションチューブなどの他の部材を介して第２ポートに取り付けられる態様が含まれる。
【００１９】
第１プランジャロッドは、先端から基端に渡る挿通孔を有するものである。挿通孔は、第２シリンジに取り付けられた第２中空針を挿通するためのものであって、第２中空針は、挿通孔の基端から第２中空針を挿通した際に、第１ガスケットを貫通するものである。また、第１シリンジの第１プランジャロッドは、上述の様に、第２中空針を挿通するための挿通孔を有するものであってもよいし、挿通孔を有さないものであってもよい。挿通孔を有さない場合は、第１プランジャロッドに替わって取り付け可能で、挿通孔を有するガイド部材を別途設けるようにする。挿通孔を有するガイド部材は、第１プランジャロッドを取り外した後に、第１シリンジ筒の基端から挿入可能で、挿入した際に第１ガスケットに当接するものである。さらに、ガイド部材は、第２中空針を挿通するための先端から基端に渡る挿通孔を有し、第２中空針は、挿通孔の基端から第２中空針を挿通した際に、第１ガスケットを貫通するものである。
【００２０】
第１プランジャロッドまたはガイド部材に設けられた挿通孔の径は、基端から先端に向かい小さくなるものである。第１プランジャロッドまたはガイド部材に設けられた挿通孔の径は、基端から先端に向かい小さくなるものであれば、特に形状は問わないが、径が基端から先端に向けて漸次小さくなる形状など基端から先端に向けて第２中空針を挿通し易い形状が適宜選択される。上述の形状により、先端部では第２中空針を第１ガスケットの貫通させたい位置への誘導する効果を奏する。また、第１挿通孔は、第２中空針が挿入できる径を有するものである。
挿通孔の先端側開口部は、第１プランジャロッドまたはガイド部材に設けられた先端面の中心部に位置するものである。そのため、第２中空針を第１ガスケットに貫通させる場合に、第１ガスケットが第１シリンジ筒内の血液と接触している先端部を貫通することが可能となり、例えば、第１ガスケットが第１シリンジ筒と接触している肉厚か箇所を貫通する恐れがなくなる。
【００２１】
第２中空針が第１プランジャロッドの挿通孔に進入されて、第２中空針が第１ガスケットに貫通される。第２中空針の先端は、第１ガスケット側の血漿画分中に到達する。第２シリンジの第２プランジャロッドを基端側引くと、第２ガスケットが第２シリンジ筒を移動し、これにより、第２中空針を通じて血漿画分が第２シリンジ筒内に吸引される。
【００２２】
血漿画分を吸引した後、第２シリンジと共に第２中空針が、又は第２中空針とエクステンションチューブが、第１プランジャロッドから引き出される。第２シリンジ筒から第２中空針が取り外され、第２ポートが第２キャップにより封止される。これにより、第２シリンジ筒内に血漿画分が密封される。さらに、遠心分離を行う。第２シリンジは、第２ガスケットに第２プランジャロッドが取り付けられた状態、あるいは第２ガスケットから第２プランジャロッドが取り外された状態で遠心分離が行うことができる。遠心分離により、血漿画分は、基端側がほぼ血漿成分のみの上清となり、先端側が血小板が多い多血小板血漿となる。第２シリンジ筒から第２キャップが外され、第２ガスケットに第２プランジャロッドが取り付けられて、多血小板血漿が、第２シリンジ筒の第２ポートから排出される。
【００２３】
第３シリンジは、第２シリンジの第２プランジャロッドに挿通孔が設けられた場合、あるいは第２シリンジの第２プランジャロッドが第２ガスケットから脱着可能に設けられ、ガイド部材と交換可能である場合に、遠心分離された第２シリンジ筒から上清を吸引するために用いられる。第３ポートへ第３中空針が取付可能であるとは、第３中空針が直接に第３ポートに取り付けられる態様や、第３中空針がエクステンションチューブなどの他の部材を介して第３ポートに取り付けられる態様が含まれる。第３中空針は、第２プランジャロッドの挿通孔に進入されて、第３中空針が第２ガスケットに貫通される。第３中空針の先端は、第２ガスケット側の上清に到達する。第３シリンジの第３プランジャロッドを基端側に引くと、第３ガスケットが第３シリンジ筒を移動し、これにより、第３中空針を通じて上清が第２シリンジ筒内に吸引される。その後、第２シリンジ筒から第２キャップが外され、第２ガスケットに第２プランジャロッドが取り付けられて、多血小板血漿が、第２シリンジ筒の第２ポートから排出される。
【００２４】
ガイド部材を用いる場合、第１シリンジ筒及び第２シリンジ筒の内径がほぼ同じであれば、同じガイド部材を用いてもよいし、２個のガイド部材を設けてもよい。また、第１シリンジ筒及び第２シリンジ筒の内径が異なる場合、２個のガイド部材を設けることが好ましい。
【００２５】
第１シリンジに満たされた血液を遠心分離により、赤血球画分（第１区分）と、白血球及び血小板を含む血漿画分（第２区分）に分離させた後の第１シリンジにおいて、第１シリンジの第１ガスケットから第１プランジャロッドを取り外した後、第１ガスケットに当接する様にガイド部材を挿入する。さらに、ガイド部材の挿通孔の基端から第２シリンジに装着した第２中空針を挿通し、第２中空針で第１ガスケットを貫通する。貫通した第２中空針の先端は、第１シリンジ内の血漿画分中に到達する。第２シリンジの第２プランジャロッドを基端側に引くと、第２ガスケットが第２シリンジ筒を移動し、これにより、第２中空針を通じて血漿画分が第２シリンジ筒内に吸引される。
【発明の効果】
【００２６】
本発明に係る多血小板血漿分離キット及び多血小板血漿分離方法によれば、挿通孔を有する部材を用いることで、多血小板血漿の分離を簡便に且つ失敗することなく行うことができ、高濃度の多血小板血漿を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】本発明の第１実施形態に係る多血小板血漿分離キットの第１シリンジまたは第２シリンジの外観構成を示す分解斜視図である。
【図２】図１における第１シリンジまたは第２シリンジの内部構成を示す縦断面図である。
【図３】本発明の第１実施形態に係る多血小板血漿分離キットの第３シリンジの外観構成を示す分解斜視図である。
【図４】図３における第３シリンジの内部構成を示す縦断面図である。
【図５】第１実施形態による多血小板血漿分離方法において、第１シリンジに満たされた血液を遠心分離するステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【図６】第１実施形態による多血小板血漿分離方法において、第１シリンジ内で遠心分離された第２区分を第２シリンジにより吸引するステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【図７】第１実施形態による多血小板血漿分離方法において、第２シリンジに満たされた第２区分を遠心分離するステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【図８】第１実施形態による多血小板血漿分離方法において、第２シリンジ内で遠心分離された上清を第３シリンジにより吸引するステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【図９】本発明の第２実施形態に係る多血小板血漿分離キットの第１シリンジまたは第２シリンジの外観構成を示す分解斜視図である。
【図１０】図９における第１シリンジまたは第２シリンジの内部構成を示す縦断面図である。
【図１１】本発明の第２実施形態に係る多血小板血漿分離キットのガイド部材の外観構成を示す分解斜視図である。
【図１２】図１０におけるガイド部材の内部構成を示す縦断面図及びガイド部材を第１シリンジに挿入した際の内部構成を示す縦断面図である。
【図１３】第２実施形態による多血小板血漿分離方法において、第１シリンジに満たされた血液を遠心分離するステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【図１４】第２実施形態による多血小板血漿分離方法において、遠心分離後の第１シリンジにガイド部材を挿入するステップ、及び第１シリンジ内で遠心分離された第２区分を第２シリンジにより吸引するステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【図１５】第２実施形態による多血小板血漿分離方法において、第２シリンジに満たされた第２区分を遠心分離するステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【図１６】第２実施形態による多血小板血漿分離方法において、遠心分離後の第２シリンジにガイド部材を挿入するステップ、及び第２シリンジ内で遠心分離された上清を第３シリンジにより吸引するステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【符号の説明】
【００２８】
１：第１シリンジ
１１：第１中空針
１１１：カヌラ
１１２：ハブ
１２：第１キャップ
１３：第１シリンジ筒
１３１：第１ポート
１３２：鍔
１４：第１ガスケット
１４１：取付口
１５：第１プランジャロッド
１５１：第１雄ネジ部
１５２：軸部
１５３：端板
１５４：第１挿通孔
１５５：第１先端開口部
１５６：第１基端開口部
１６：第１プランジャロッド
１６１：第１雄ネジ部
１６２：軸部
１６３：端板
２：第２シリンジ
２１：第２中空針
２１１：カヌラ
２１２：ハブ
２２：第２キャップ
２３：第２シリンジ筒
２３１：第２ポート
２４：第２ガスケット
２５：第２プランジャロッド
２５１：第２雄ネジ部
２５４：第２挿通孔
２５５：第２先端開口部
２５６：第２基端開口部
２６：第２プランジャロッド
２６１：第２雄ネジ部
３：第３シリンジ
３１：第３中空針
３１１：カヌラ
３１２；ハブ
３３：第３シリンジ筒
３３１：第３ポート
３３２：鍔
３４：第３ガスケット
３５：第３プランジャロッド
４１：血液
４２：第１区分
４３：第２区分
４４：上清
４５：多血小板血漿
５：ガイド部材
５１：先端ポート
５２：先端板
５３：軸部
５４：基端板
５５：挿通孔
５６：先端開口部
５７：基端開口部
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
以下、本発明の実施態様について、図面を参照しつつ説明する。なお、本実施形態は本発明の一実施態様にすぎず、これに限定されるものではない。
【００３０】
［第１実施形態］
図１は、本発明の第１実施形態に係る多血小板血漿分離キットの第１シリンジ１の外観構成を示す分解斜視図である。図２は、第１シリンジ１の内部構成を示す縦断面図である。図３は、本発明の第１実施形態に係る多血小板血漿分離キットの第３シリンジ３の外観構成を示す分解斜視図である。図４は、第３シリンジ３の内部構成を示す縦断面図である。なお、図注の括弧内の番号は、第２シリンジ２の構成を示すものである。
【００３１】
本第１実施形態に係る多血小板血漿分離キットは、第１シリンジ１、第２シリンジ２と第３シリンジ３とを具備する。第１シリンジ１は、血液を吸引するために用いられる。血液の吸引とは、具体的には採血が挙げられるが、血液回路などからの吸引や既に採血された血液を吸引などであってもよい。第２シリンジ２は、遠心分離により第１シリンジ１に形成された白血球、血小板、及び血漿を含む画分（本発明の第２区分に相当する。）を吸引するために用いられる。第３シリンジ３は、第２シリンジ２に吸引した第２区分を遠心分離することで得られる上清を吸引除去するために用いられる。
また、第１実施形態における第１シリンジ１と第２シリンジ２は、第１プランジャロッド１５に第１挿通孔１５４、第２プランジャロッド２５に第２挿通孔２５４を有するものである。
【００３２】
図１及び図２に示されるように、第１シリンジ１は、第１中空針１１及び第１キャップ１２が脱着可能な第１ポート１３１と、開放した基端と、を有する第１シリンジ筒１３と、第１シリンジ筒１３内を液密に封止して、第１シリンジ筒１３内を往復動される第１ガスケット１４と、第１ガスケット１４に脱着可能に設けられた第１プランジャロッド１５とを備える。
【００３３】
第１シリンジ筒１３は、ほぼ円筒形状であり、先端が縮径されて第１ポート１３１が形成されている。第１ポート１３１の内部空間は、第１シリンジ筒１３の内部空間と連続している。第１シリンジ筒１３の基端は、縮径されることなく開口されている。基端から第１シリンジ筒１３の内部空間へ第１プランジャロッド１５が進退される。第１シリンジ筒１３の基端には、第１シリンジ筒１３の外周側へ突出する鍔１３２が形成されている。鍔１３２はハンドリングを向上させるためのものであり、第１シリンジ筒１３及び第１プランジャロッド１５の操作の際に鍔１３２に指が掛けられる。
【００３４】
第１シリンジ筒１３のγ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が可能なものであれば素材は特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離キットがディスポーザル品とされることや、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が施されることを考慮すると、第１シリンジ筒１３をポリプロピレンの成形品とすることが好ましい。第１シリンジ筒１３の内部空間に満たされた血液や血漿などを目視確認するために、第１シリンジ筒１３は、透明ないし半透明であることが好ましい。第１シリンジ筒１３の容量は特に限定されない。第１シリンジ筒１３に容量を示す目盛りが付されていると、内部空間に満たされた液体の量などが容易に把握できるので好ましい。
【００３５】
第１中空針１１は、採血などをする際に使用するためのものである。第１中空針１１は、先端側に刃面が形成されたカヌラ１１１と、カヌラ１１１の基端と接続されたハブ１１２とを有する。第１キャップ１２は、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１を封止するためのものである。第１中空針１１及び第１キャップ１２は、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１に取り付け及び取り外し可能なものであって、通常シリンジに用いられるルアーテーパーやルアーロックなどによって取り付けられるものである。第１キャップ１２の素材はγ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が可能ものであれば特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離キットがディスポーザル品とされることや、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が施されることを考慮すると、第１キャップ１２としてポリプロピレンやエラストマーの成形品が採用されうる。
【００３６】
第１ガスケット１４は、第１シリンジ筒１３の内部に挿入されて第１シリンジ筒１３を液密に封止する。第１ガスケット１４は、液密状態を維持したまま、第１シリンジ筒１３内を往復動可能である。第１ガスケット１４の往復動により、第１シリンジ筒１３の内部に密封可能な液体の容量が変化する。図１に示されるように、第１ガスケット１４は、第１シリンジ筒１３の内径に対応した径の円柱形状である。図２に示されるように、第１ガスケット１４の先端は円錐形状に突出されている。この先端の形状は、第１シリンジ筒１３内面の先端形状に対応している。第１プランジャロッド１５と接続される第１ガスケット１４の基端には、取付口１４１が形成されている。取付口１４１は第１ガスケット１４の円形の基端面の中心に形成されている。取付口１４１は円孔で、内周面には雌ネジが形成されている。
【００３７】
第１ガスケット１４の素材はγ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が可能なものであれば特に限定されず、合成樹脂やエラストマーなどが採用されうる。多血小板血漿分離キットがディスポーザル品とされることや、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が施されることを考慮すると、第１ガスケット１４としてエラストマーの成形品が採用されうる。
【００３８】
第１プランジャロッド１５は、ねじ込み式により第１ガスケット１４に対して脱着可能なものである。第１プランジャロッド１５の全体形状は、第１シリンジ筒１３の内部空間に挿入可能な外形であって、第１シリンジ筒１３の軸方向の長さより十分に長い。したがって、第１ガスケット１４を第１シリンジ筒１３の先端まで押し込んだ状態で、第１プランジャロッド１５の一部が第１シリンジ筒１３の基端から突出する。
【００３９】
第１プランジャロッド１５は、第１雄ネジ部１５１、軸部１５２と端板１５３を有し、先端から基端に渡って第１挿通孔１５４を有している。第１雄ネジ部１５１は、第１ガスケット１４の取付口１４１にねじ込まれる。取付口１４１の雌ネジと第１雄ネジ部１５１とは噛合する。これにより、第１プランジャロッド１５が第１ガスケット１４に対してねじ込み式により脱着される。この脱着は繰り返し行うことができる。遠心分離する際に取り外してもよいし、取り付けたままでもよい。
【００４０】
軸部１５２は、横断面において、中央に円形の第１挿通孔１５４が設けられ、その周囲に十字形状のリブを有するものである。軸部１５２の断面形状は成形加工の容易性や強度などを考慮して適宜選択されうる。軸部１５２の先端に第１雄ネジ部１５１が配置され、基端に端板１５３が配置されている。端板１５３は、円板形状の平板であり、軸部２０の軸方向に対して垂直に接続されている。端板１５３は第１プランジャロッド１５のハンドリングを向上させるためのものであり、第１プランジャロッド１５が第１シリンジ筒１３に対して押し込まれる際に指が押し当てられ、第１シリンジ筒１３から第１プランジャロッド１５を基端側に引く際に持ち手となる。
【００４１】
さらに、第１プランジャロッド１５は、先端から基端に渡る第１挿通孔１５４を有している。第１挿通孔１５４は、第１雄ネジ部１５１の先端から端板１５３の基端面に渡って設けられ、
第１先端開口部１５５及び第１基端開口部１５６を有している。第１挿通孔１５４の径は、第１プランジャロッド１５の基端である第１基端開口部１５６から先端である第１先端開口部１５５に向かい小さくなるものである。第１挿通孔１５４の径は、第１基端開口部１５６から第１先端開口部１５５に向かい小さくなるものであれは、特に形状は問わないが、第１挿通孔１５４の径が第１基端開口部１５６から第１先端開口部１５５に向けて漸次小さくなる形状、または図２で示される第１挿通孔１５４の径が第１挿通孔１５４の一部分で縮径する形状など基端から先端に向けて第２中空針２１を挿通し易い形状が適宜選択される。上述の形状により、先端部では第２中空針を第１ガスケットの貫通させたい位置への誘導する効果を奏する。
【００４２】
加えて、第１挿通孔１５４の第１先端開口部１５５は、第１プランジャロッド１５の先端面の中心部に位置するものである。第１挿通孔１５４の第１先端開口部１５５が、第１プランジャロッド１５の先端面の中心部に位置することで、第１ガスケットの取付口１４１を通して、第１ガスケット１４を基端側から貫通することができる。
第１プランジャロッド１５の素材はγ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が可能なものであれば特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離キットがディスポーザル品とされることや、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が施されることを考慮すると、第１プランジャロッド１５をポリプロピレンの成形品とすることが好ましい。
【００４３】
第２シリンジ２においては、カヌラ２１１以外の構成は、図１及び図２の括弧で示されるように、第１シリンジ１と同じ構成である。ただし、第２シリンジ２は、遠心分離により第１シリンジ１に形成された白血球、血小板、及び血漿を含む画分（本発明の第２区分に相当する。）を吸引するために用いられるものであるため、第２シリンジ２における第２中空針２１のカヌラ２１１の軸方向の長さは、第１シリンジ１の第１プランジャロッド１４の基端から、第２中空針２１を挿入した際に、第１ガスケット１４を貫通するに必要な長さに設定される。この様な構成によって、第１ガスケット１４を貫通した第２中空針２１は、遠心分離された第２区分４３を吸引することができる。
【００４４】
図３及び図４に示されるように、第３シリンジ３は、第３中空針３１と、第３中空針３１が取付可能な第３ポート３３１を有する第３シリンジ筒３３と、第３シリンジ筒３３内を往復動される第３ガスケット３４と、第３ガスケット３４に設けられた第３プランジャロッド３５とを具備する。
【００４５】
第３中空針３１は、中空管の先端側に刃面が形成されたカヌラ３１１と、カヌラ３１１の基端と接続されたハブ３１２とを有する。カヌラ３１１の軸方向の長さは、第２シリンジ２の第２ガスケット２４を貫通するに必要な長さに設定される。ハブ３１２は、ほぼ円筒形状であり、第３シリンジ筒３３の第３ポート３３１に外嵌されるに必要な内径及び軸方向の長さに設定される。カヌラ３１１とハブ３１２とは接着剤等により固定されている。ハブ３１２において、第３ポート３３１と接続される側の端部は開口されている。カヌラ３１１の基端側の開口は、ハブ３１２の内部空間と通じている。したがって、カヌラ３１１の先端側の開口からカヌラ３１１内に進入した液体等は、カヌラ３１１の基端側の開口からハ３１２ブの内部空間へ流入する。この内部空間は、ハブ３１２が第３ポート３３１に外嵌されることにより、第３ポート３３１と連続する。さらに、第３シリンジ３は、遠心分離により第３シリンジ３に形成された上清４４を吸引するために用いられるものであるため、第３シリンジ３における第３中空針３１のカヌラ３１１の軸方向の長さは、第２シリンジ２の第２プランジャロッド２４の基端から、第３中空針３１を挿入した際に、第２ガスケット２４を貫通するに必要な長さに設定される。この様な構成によって、第２ガスケット２４を貫通した第３中空針３１は、遠心分離された上清４４を吸引することができる。
【００４６】
第３シリンジ筒３３は、ほぼ円筒形状であり、先端が縮径されて第３ポート３３１が形成されている。第３ポート３３１の内部空間は、第３シリンジ筒３３の内部空間と連続している。第３シリンジ筒３３の基端は、縮径されることなく開口されている。基端から第３シリンジ筒３３の内部空間へ第３プランジャ５５が進退される。第３シリンジ筒３３の基端には、第３シリンジ筒３３の外周側へ突出する鍔３３２が形成されている。鍔３３２はハンドリングを向上させるためのものであり、第３シリンジ筒３３及び第３プランジャロッド３５の操作の際に鍔３３２に指が掛けられる。
【００４７】
第３シリンジ筒３３のγ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が可能なものであれば素材は特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離キットがディスポーザル品とされることや、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が施されることを考慮すると、第３シリンジ筒３３をポリプロピレンの成形品とすることが好ましい。第３シリンジ筒３３の内部空間に満たされた上清などを目視確認するために、第３シリンジ筒３３は、透明ないし半透明であることが好ましい。第３シリンジ筒３３の容量は特に限定されない。第３シリンジ筒３３に容量を示す目盛りが付されていると、内部空間に満たされた液体の量などが容易に把握できるので好ましい。
【００４８】
第３ガスケット３４は、第３シリンジ筒３３の内部に挿入されて第３シリンジ筒３３を液密に封止する。第３ガスケット３４は、液密状態を維持したまま、第３シリンジ筒３３内を往復動可能である。第３ガスケット３４の往復動により、第３シリンジ筒３３の内部に密封可能な液体の容量が変化する。図３に示されるように、第３ガスケット３４は、第３シリンジ筒３３の内径に対応した径の円柱形状である。図４に示されるように、第３ガスケット３４の先端は円錐形状に突出されている。この先端の形状は、第３シリンジ筒３３内面の先端形状に対応している。第３ガスケット３４は、第３プランジャロッド３５と接続されている。
【００４９】
第１実施形態において、第３プランジャロッド３５は、取り外しができない様に第３ガスケット３４に接続されるものである。第３ガスケット３４と第３プランジャロッド３５と接続については、取り外しができない形状であってもよいし、脱着可能な形状であってもよく、特に限定されるものではない。脱着可能な形状については、図１及び図２で示される第１シリンジ１の形状が挙げられる。第３プランジャロッド３５の全体形状は、第３シリンジ筒３３の内部空間に挿入可能な外形であって、第３シリンジ筒３３の軸方向の長さより十分に長い。したがって、第３ガスケット３４を第３シリンジ筒３３の先端まで押し込んだ状態で、第３プランジャロッド３５の一部が第３シリンジ筒３３の基端から突出する。第３プランジャロッド３５は、横断面において、十字形状のリブを有するものである。軸部の断面形状は成形加工の容易性や強度などを考慮して適宜選択されうる。
【００５０】
第３ガスケット３４の素材はγ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が可能なものであれば特に限定されず、合成樹脂やエラストマーなどが採用されうる。多血小板血漿分離キットがディスポーザル品とされることや、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が施されることを考慮すると、第３ガスケット３４としてエラストマーの成形品が採用されうる。
第３プランジャロッド３５の素材はγ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が可能なものであれば特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離キットがディスポーザル品とされることや、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が施されることを考慮すると、第３プランジャロッド３５をポリプロピレンの成形品とすることが好ましい。
【００５１】
再生医療に適した多血小板血漿が得ることを考慮すると、多血小板血漿分離キットを構成する各部材のうち、採血された血液と接触する少なくとも第１中空針１１、第１キャップ１２、第１シリンジ筒１３、第１ガスケット１４、第２中空針２１、第２キャップ２２、第２シリンジ筒２３、第２ガスケット２４、第３中空針３１、第３シリンジ筒３３、及び第３ガスケット３４は、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌される。また、第１シリンジ１、第２シリンジ２及び第３シリンジ３を滅菌袋に密封してキットとすることにより、多血小板血漿分離キットの使い勝手が向上する。
【００５２】
また、本実施形態に係る第１シリンジ１、第２シリンジ２及び第３シリンジ３の各部材の構成は一例であり、本発明の要旨を変更しない範囲において、各部材の構成の一部を他の公知の部材の構成に変更しうる。
【００５３】
以下に、本発明に係る多血小板血漿分離方法を説明する。本実施形態に係る多血小板血漿分離方法は、上記多血小板血漿分離キットを用いて行われ、５つの主要なステップからなる。第１ステップでは、採血された血液４１が満たされた第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１を封止し、第１シリンジ筒１３の先端側を遠心移動方向として、第１シリンジ筒１３内の血液４１を、赤血球を含む第１区分４２と、白血球、血小板、及び血漿を含む第２区分４３とに遠心分離する。第２ステップでは、第１シリンジ筒１３内の第１ガスケット１４に第２中空針２１を貫通し、第２区分４３を第２シリンジ筒２３に吸引する。第３ステップでは、第２区分４３が満たされた第２シリンジ筒２３の第２ポート２３１を封止し、第２シリンジ筒２３の先端側を遠心移動方向として、第２シリンジ筒３０内の第２区分４３に対して遠心分離を行う。第４ステップでは、第２シリンジ筒２３内の第２ガスケット２４に第３中空針３１を貫通し、上清４４を第３シリンジ筒３３に吸引する。第５ステップでは、第２シリンジ筒２３内の第２ガスケット２４を先端側に移動させて、遠心分離された多血小板血漿４５を第２ポート２３１から排出する。これら各ステップが、図５から図８を用いて以下に詳細に説明する。図５から図８は、多血小板血漿分離方法の各ステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【００５４】
第１ステップでは、図５（ａ）に示されるように、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１を第１キャップ１２で封止して第１シリンジ筒１３を密封状態にする。第１シリンジ１は、採血に使用される。採血する際には、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１に採血針が取り付けられる。もちろん、エクステンションチューブなどを介して採血針が第１ポート１３１に取り付けられてもよい。また、第１プランジャロッド１５は第１ガスケット１４に取り付けられる。採血は通常の方法であり、詳細な説明は省略する。この採血により、第１シリンジ筒１３は血液４１で満たされる。血液４１は全血であり、赤血球、白血球、血小板、血漿などを含む。採血後に、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１から採血針を取り外して、第１キャップ１２を用いて第１ポート１３１を封止する。これにより、図５（ａ）に示されるように、第１シリンジ筒１３が密封状態となる。
【００５５】
続いて、密封したシリンジを用いて１回目の遠心分離を行う。この遠心分離に先だって、図５（ｂ）に示されるように、第１プランジャロッド１５を第１ガスケット１４から取り外す。第１プランジャロッド１５は、遠心分離する際に取り外してもよいし、取り付けたままでもよい。しかしながら、第１プランジャロッド１５を第１ガスケット１４から取り外すことで、第１シリンジ筒１３から第１プランジャロッド１５が突出しないので、遠心分離において第１シリンジ筒１３の取り扱いが容易である。また、遠心分離において、第１プランジャロッド１５が不用意に操作されることがない。さらに、遠心分離において第１プランジャロッド１５の重量が第１ガスケット１４に作用しないので、第１シリンジ筒１３から第１キャップ１２が外れるおそれを軽減できるなどの理由から、第１プランジャロッド１５を取り外すことが好ましい。
【００５６】
この遠心分離において、第１シリンジ筒１３の先端側を遠心移動方向とする。ここで、「遠心移動方向」とは、遠心分離において遠心力が作用する方向であり、本発明においては先端である。また、第１ステップにおける遠心分離は、弱遠心である。弱遠心とは、血液の遠心分離において慣用されており、一般に、「全血を赤血球とその他（白血球、血小板、血漿）に分離する遠心分離」（非特許文献１参照）と定義される。具体的には、遠心分離条件が約５００〜２５００ｒｐｍの範囲における遠心分離が弱遠心とされる。遠心分離装置としては一般的なものが用いられる。
【００５７】
この遠心分離により、第１シリンジ筒１３に密封された血液４１は、第１区分４２と第２区分４３とに分離される。第１区分４２は、赤血球画分である。第２区分４３は白血球、血小板、及び血漿を含む画分である。図５（ｃ）に示されるように、第１区分４２は、遠心分離により遠心移動方向、つまり第１シリンジ筒１３の先端に分離される。
【００５８】
第２ステップでは、第１シリンジ筒１３内の第２区分４３を第２シリンジ筒２３に吸引する。１回目の遠心分離を行った後、図６（ａ）に示されるように、第１シリンジ１の第１プランジャロッド１５の第１基端開口部１５６から第２シリンジ３８に取り付けた第２中空針２１を第１挿通孔２６に挿通させる。さらに、第２中空針２１を推し進めると、第２中空針２１は第１ガスケット１４を貫通する。これにより、第２中空針２１の先端は第１シリンジ筒１３内の第２区分４３に到達する。この状態で、第２シリンジ２の第２プランジャロッド２５を第２シリンジ筒２３から引いて、第１シリンジ筒１３内の第２区分４３を第２シリンジ筒２３内へ吸引する。第２中空針２１で第１ガスケット１４を貫通させた後、第２区分４３を吸引する際は、第２中空針２１が第１ガスケット１４から突出しすぎると、第１区分４２に到達し、第２区分４３を吸引できなくなる恐れがある。そのため、第２中空針２１が第１ガスケット１４を貫通し、第２区分４３に到達した後、それ以上の突出を制限する構成を有することが好ましい。本発明においては、図６（ａ）に示されるように、第１挿通孔１５４の第１基端開口部１５６と第２シリンジ２の第２ポート２３１の先端が当接し、それ以上挿通できない形状であるが、特にこの形状に限定されるものではなく、例えば第１挿通孔１５４の内面と第２中空針２１のハブ２１２が係止される構造、第１挿通孔１５４の第１基端開口部１５６と第２中空針２１のハブ２１２が当接する構造などであってもよい。
【００５９】
図６（ｂ）に示されるように、第２シリンジ筒２３から第２プランジャロッド２５を引くと、第１シリンジ筒１３内の第２区分４３が第２シリンジ筒２３へ吸引されるとともに、第１ガスケット１４が、第１シリンジ筒１３内を先端側へ移動する。第１ガスケット１４の移動に伴って、第２シリンジ筒２３が、第１シリンジ１の先端方向にさらに移動する。これにより、第１シリンジ筒１３から第２シリンジ筒２３への第２区分４３の吸引が連続的かつ円滑に行われる。なお、第１シリンジ筒１３には、第１区分４２及び若干量の第２区分４３が残るが、これらは廃棄するか、別目的に使用する。
【００６０】
第１ステップにおける遠心分離を弱遠心とすることにより、血液４１を第１区分４２と第２区分４３とに分離するとともに、第２区分４３においては血小板をほぼ均等に分散させることができる。つまり、第１区分４２との境界付近に血小板が集中することがない。これにより、第２区分４３を第１シリンジ筒１３から第２シリンジ筒２３へ吸引する際に生ずる第２区分４３の若干のロスにより失われる血小板の量を少なくすることができる。
【００６１】
第３ステップでは、図７（ａ）に示されるように、第２シリンジ筒２３の第２ポート２３１を第２キャップ２２で封止して第２シリンジ筒２３を密封状態にした後、密封したシリンジを用いて２回目の遠心分離を行う。この遠心分離に先だって、図７（ｂ）に示されるように、第２プランジャロッド２５を第２ガスケット２４から取り外す。第２プランジャロッド２５は、遠心分離する際に取り外してもよいし、取り付けたままでもよい。しかしながら、第２プランジャロッド２５を第２ガスケット２４から取り外すことで、第２シリンジ筒２３から第２プランジャロッド２５が突出しないので、遠心分離において第２シリンジ筒２３の取り扱いが容易である。また、遠心分離において、第２プランジャロッド２５が不用意に操作されることがない。さらに、遠心分離において第２プランジャロッド２５の重量が第２ガスケット２４に作用しないので、第２シリンジ筒２３から第２キャップ２２が外れるおそれを軽減できるなどの理由から、第２プランジャロッド２５を取り外すことが好ましい。
【００６２】
この遠心分離において、第２シリンジ筒２３の先端側を遠心移動方向とする。また、第３ステップにおける遠心分離は、強遠心である。強遠心とは、血液の遠心分離において慣用されており、一般に、「血小板、白血球と残留赤血球を血漿から分離する遠心分離」（非特許文献１参照）と定義される。本発明では、第２区分の下方に血小板を濃縮する遠心分離を強遠心という。具体的には、遠心分離条件が約３０００〜４０００ｒｐｍの範囲における遠心分離が強遠心とされる。この遠心分離により、図７（ｃ）に示されるように、第２区分４３が遠心分離され、血小板が遠心移動方向、つまり第２シリンジ筒２３の先端に移動する。また、この遠心分離を強遠心とすることにより、第２区分４３から高濃度の多血小板血漿４５を分離することができる。
【００６３】
第４ステップでは、第２シリンジ筒２３内の上清４４を第３シリンジ筒３３に吸引する。２回目の遠心分離を行った後、図８（ａ）に示されるように、第２シリンジ２の第２プランジャロッド２５の第２基端開口部２５６から第３シリンジ３に取り付けた第３中空針３１を第３挿通孔３５に挿通させる。さらに、第３中空針３１を推し進めると、第３中空針３１は第２ガスケット２４を貫通する。これにより、第３中空針３１の先端は第２シリンジ筒２３内の上清４４に到達する。この状態で、第３シリンジ３の第３プランジャロッド３５を第３シリンジ筒３３から引いて、第２シリンジ筒２３内の上清４４を第３シリンジ筒３３内へ吸引する。第３中空針３１で第２ガスケット２４を貫通させた後、上清４４を吸引する際は、第３中空針３１が第２ガスケット２４から突出しすぎると、多血小板血漿４５に到達し、上清４４を吸引できなくなる恐れがある。そのため、第３中空針３１が第２ガスケット２４を貫通し、上清４４に到達した後、それ以上の突出を制限する構成を有することが好ましい。本発明においては、図８（ａ）に示されるように、第２挿通孔２５４の第２基端開口部２５６と第３シリンジ３の第３ポート３３１の先端が当接し、それ以上挿通できない形状であるが、特にこの形状に限定されるものではなく、例えば第２挿通孔２５４の内面と第３中空針３１のハブ３１２が係止される構造、第２挿通孔２５４の第２基端開口部２５６と第３中空針３１のハブ３１２が当接する構造などであってもよい。
【００６４】
図８（ｂ）に示されるように、第３シリンジ筒３３から第３プランジャロッド３５を引くと、第２シリンジ筒２３内の上清４４が第３シリンジ筒３３へ吸引されるとともに、第２ガスケット２４が、第２シリンジ筒２３内を先端側へ移動する。第２ガスケット２４と第２シリンジ筒２３とは嵌合状態にあるので、第２ガスケット２４の移動に伴って、第３シリンジ筒３３が、第２シリンジ筒２３にさらに進入する。これにより、第２シリンジ筒２３から第３シリンジ筒３３への上清４４の吸引が連続的かつ円滑に行われる。これにより、採血された血液４１から多血小板血漿４５が分離される。
【００６５】
なお、本実施形態では、高濃度の多血小板血漿４５を得るために、第４ステップにおいて、第２シリンジ筒２３内の上清４４を第３シリンジ筒３３に吸引し、多血小板血漿４５を分離することとした。しかしながら、操作行程の増加などを考慮して、第３ステップで遠心分離した後、上清４４を除去せずに多血小板血漿４５を第２シリンジ筒２３から排出してもよい。
【００６６】
このように、本発明に係る多血小板血漿分離キット及び多血小板血漿分離方法によれば、採血に使用した第１シリンジ１を用いて遠心分離を行って、血液４１から多血小板血漿４５を得ることができる。これにより、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌がされた少数の器具で多血小板血漿４５の分離を実現できる。また、３つのシリンジ１，２，３を用いることにより、第１区分４２と第２区分４３とを確実に分離して、高濃度の多血小板血漿４５を得ることができる。
【００６７】
［第２実施形態］
図９は、本発明の第２実施形態に係る多血小板血漿分離キットの第１シリンジ１の外観構成を示す分解斜視図である。図１０は、第１シリンジ１の内部構成を示す縦断面図である。図１１は、本発明の第２実施形態に係る多血小板血漿分離キットのガイド部材５の外観構成を示す分解斜視図である。図１２は、ガイド部材５の内部構成を示す縦断面図である。
【００６８】
本発明の第２実施形態に係る多血小板血漿分離キットは、第１シリンジ１、第２シリンジ２、第３シリンジ３とガイド部材５とを具備する。第１シリンジ１は、血液を吸引するために用いられる。血液の吸引とは、具体的には採血が挙げられるが、血液回路などからの吸引や既に採血された血液を吸引などであってもよい。第２シリンジ２は、遠心分離により第１シリンジ１に形成された白血球、血小板、及び血漿を含む画分（本発明の第２区分４３に相当する。）を吸引するために用いられる。第３シリンジ３は、第２シリンジ２に吸引した第２区分４３を遠心分離することで得られる上清４４を吸引除去するために用いられる。ガイド部材５は、第１シリンジ１から第２シリンジ２を用いて第２区分４３を吸引する際、及び第２シリンジ２から第３シリンジ３を用いて第２区分４３を吸引する際に操作を補助するために使用するものである。
【００６９】
本発明の第２実施形態に係る多血小板血漿分離キットにおける第１シリンジ１は、
本発明の第１実施形態における第１シリンジ１に対して、第１プランジャロッドの形状のみが異なるものである。
【００７０】
図９に示す様に、第１プランジャロッド１６は、ねじ込み式により第１ガスケット１４に対して脱着可能なものである。第１プランジャロッド１６の全体形状は、第１シリンジ筒１３の内部空間に挿入可能な外形であって、第１シリンジ筒１３の軸方向の長さより十分に長い。したがって、第１ガスケット１４を第１シリンジ筒１３の先端まで押し込んだ状態で、第１プランジャロッド１６の一部が第１シリンジ筒１３の基端から突出する。
【００７１】
第１プランジャロッド１６は、第１雄ネジ部１６１、軸部１６２と端板１６３を有している。第１雄ネジ部１６１は、第１ガスケット１４の取付口１４１にねじ込まれる。取付口１４１の雌ネジと第１雄ネジ部１６１とは噛合する。これにより、第１プランジャロッド１６が第１ガスケット１４に対してねじ込み式により脱着される。この脱着は繰り返し行うことができる。遠心分離する際に取り外してもよいし、取り付けたままでもよい。
【００７２】
軸部１６２は、横断面において、十字形状のリブを有するものである。軸部１６２の断面形状は成形加工の容易性や強度などを考慮して適宜選択されうる。軸部１６２の先端に第１雄ネジ部１６１が配置され、基端に端板１６３が配置されている。端板１６３は、円板形状の平板であり、軸部１６２の軸方向に対して垂直に接続されている。端板１６３は第１プランジャロッド１６のハンドリングを向上させるためのものであり、第１プランジャロッド１６が第１シリンジ筒１３に対して押し込まれる際に指が押し当てられ、第１シリンジ筒１３から第１プランジャロッド１６を基端側に引く際に持ち手となる。
【００７３】
第２シリンジ２においては、カヌラ２１１以外の構成は、図９及び図１０の括弧で示されるように、第１シリンジ１と同じ構成である。ただし、第２シリンジ２は、遠心分離により第１シリンジ１に形成された白血球、血小板、及び血漿を含む画分（本発明の第２区分に相当する。）を吸引するために用いられるものであるため、第２シリンジ２における第２中空針２１のカヌラ２１１の軸方向の長さは、ガイド部材５の基端から、第２中空針２１を挿入した際に、第１ガスケット１４を貫通するに必要な長さに設定される。この様な構成によって、第１ガスケット１４を貫通した第２中空針２１は、遠心分離された第２区分４３を吸引することができる。
【００７４】
第３シリンジ３は、第２シリンジ２に吸引した第２区分４３を遠心分離することで得られる上清４４を吸引除去するために用いられる。第２実施形態における第３シリンジ３は、第１実施形態における第３シリンジ３と同じ構成である。ただし、第３シリンジ３は、遠心分離により第３シリンジ３に形成された上清４４を吸引するために用いられるものであるため、第３シリンジ３における第３中空針３１のカヌラ３１１の軸方向の長さは、ガイド部材５の基端から、第３中空針３１を挿入した際に、第２ガスケット２４を貫通するに必要な長さに設定される。この様な構成によって、第２ガスケット２４を貫通した第３中空針３１は、遠心分離された上清４４を吸引することができる。
【００７５】
図１１に示すように、ガイド部材５は、第１シリンジ１から第２シリンジ２を用いて第２区分４３を吸引する際、及び第２シリンジ２から第３シリンジ３を用いて第２区分４３を吸引する際に操作を補助するために使用するものである。ガイド部材５は、第１プランジャロッド１６を取り外した後の第１シリンジ筒１３、あるいは第２プランジャロッド２６を取り外した後の第２シリンジ筒２３に挿入可能なものである。ガイド部材５は、第１シリンジ１及び第２シリンジの形状が異なる場合、または血液の付着などによる衛生面での問題を考慮して、各シリンジ毎に設けてもよい。ガイド部材５の全体形状は、第１シリンジ筒１３の内部空間に挿入可能な外形であって、第１シリンジ筒１３の軸方向の長さより十分に長い。したがって、第１ガスケット１４を第１シリンジ筒１３の先端まで押し込んだ状態で、第１プランジャロッド１６の一部が第１シリンジ筒１３の基端から突出する。
【００７６】
ガイド部材５は、先端ポート５１、先端板５２、軸部５３と基端板５４を有し、先端から基端に渡って挿通孔５５を有している。第１ガスケット１４から第１プランジャロッド１６を取り外した後、ガイド部材５を第１シリンジ筒１３に挿入した際、先端ポート５１は第１ガスケット１４の取付口１４１に挿入され、先端板５２は第１ガスケット１４の基端と当接する。軸部５３は、横断面において、中央に円形の挿通孔５５が設けられ、その周囲に十字形状のリブを有するものである。軸部５３の断面形状は成形加工の容易性や強度などを考慮して適宜選択されうる。軸部５３の基端に基端板５４が配置されている。基端板５４は、円板形状の平板であり、軸部５３の軸方向に対して垂直に接続されている。基端板５４はガイド部材５のハンドリングを向上させるためのものであり、第１シリンジ筒１３からガイド部材５を基端側に引く際に持ち手となる。
【００７７】
さらに、ガイド部材５は、先端から基端に渡る挿通孔５５を有している。挿通孔５５は、ガイド部材５の先端ポート５１の先端から基端に渡って設けられ、先端開口部５６及び基端開口部５７を有している。挿通孔５５の径は、ガイド部材５の基端である基端開口部５７から先端である先端開口部５６に向かい小さくなるものである。挿通孔５５の径は、基端開口部５７から先端開口部５６に向かい小さくなるものであれば、特に形状は問わないが、挿通孔５５の径が基端開口部５７から先端開口部５６に向けて漸次小さくなる形状、または図１２（ａ）で示される挿通孔５５の径が挿通孔５５の一部分で縮径する形状など基端から先端に向けて第２中空針を挿通し易い形状が適宜選択される。上述の形状により、先端部では第２中空針を第１ガスケットの貫通させたい位置への誘導する効果を奏する。
【００７８】
加えて、挿通孔５５の先端開口部５６は、ガイド部材５の先端面の中心部に位置するものである。挿通孔５５の先端開口部５６が、ガイド部材５の先端面の中心部に位置することで、第１ガスケット１４の取付口１４１を通して、第１ガスケット１４を基端側から貫通することができる。
ガイド部材５の素材はγ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が可能なものであれば特に限定されず、ガラスや合成樹脂などが採用されうる。多血小板血漿分離キットがディスポーザル品とされることや、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌が施されることを考慮すると、ガイド部材５をポリプロピレンの成形品とすることが好ましい。
【００７９】
再生医療に適した多血小板血漿が得ることを考慮すると、多血小板血漿分離キットを構成する各部材のうち、採血された血液と接触する少なくとも第１中空針１１、第１キャップ１２、第１シリンジ筒１３、第１ガスケット１４、第２中空針２１、第２キャップ２２、第２シリンジ筒２３、第２ガスケット２４、第３中空針３１、第３シリンジ筒３３、第３ガスケット３４、及びガイド部材５は、γ線滅菌やエチレンオキサイドガス滅菌される。また、第１シリンジ１、第２シリンジ２、第３シリンジ３及びガイド部材５を滅菌袋に密封してキットとすることにより、多血小板血漿分離キットの使い勝手が向上する。
【００８０】
また、本実施形態に係る第１シリンジ１、第２シリンジ２、第３シリンジ３及びガイド部材５の各部材の構成は一例であり、本発明の要旨を変更しない範囲において、各部材の構成の一部を他の公知の部材の構成に変更しうる。
【００８１】
以下に、本発明に係る多血小板血漿分離方法を説明する。本実施形態に係る多血小板血漿分離方法は、上記多血小板血漿分離キットを用いて行われ、７つの主要なステップからなる。第１ステップでは、採血された血液４１が満たされた第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１を封止し、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１側を遠心移動方向として、第１シリンジ筒１３内の血液４１を、赤血球を含む第１区分４２と、白血球、血小板、及び血漿を含む第２区分４３とに遠心分離する。第２ステップでは、第１プランジャロッド１６を第１ガスケット１４から取り外した第１シリンジ筒１３内に、ガイド部材５を挿入後、ガイド部材５の基端開口部５７から第２中空針２１を挿通し、さらに押し込むことで第２中空針２１が第１ガスケット１４を貫通する。第３ステップでは、第１シリンジ筒１３内の第１ガスケット１４を貫通した第２中空針２１で、第２区分４３を第２シリンジ筒２３内に吸引する。第４ステップでは、第２区分４３が満たされた第２シリンジ筒２３の第２ポート２３１を封止し、第２シリンジ筒２３の第２ポート２３１側を遠心移動方向として、第２シリンジ筒２３内の第２区分４３に対して遠心分離を行う。第５ステップでは、第２プランジャロッド２６を第２ガスケット２４から取り外した第２シリンジ筒２３内に、ガイド部材５を挿入後、ガイド部材５の基端開口部５７から第３中空針３１を挿入し、さらに押し込むことで第３中空針３１で第３ガスケット３４を貫通する。第６ステップでは、第２シリンジ筒２３内の第２ガスケット２４を貫通した第３中空針３１で上清４４を第３シリンジ筒３３内に吸引する。第７ステップでは、第２シリンジ筒２３内の第２ガスケット２４を先端側に移動させて、遠心分離された多血小板血漿４５を第２ポート２３１から排出する。これら各ステップを図１３から図１６を用いて以下に詳細に説明する。図１３から図１６は、多血小板血漿分離方法の各ステップにおける多血小板血漿分離キットの状態を示す断面図である。
【００８２】
第１ステップでは、図１３（ａ）に示されるように、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１を第１キャップ１２で封止して第１シリンジ筒１３を密封状態にする。第１シリンジ１は、採血に使用される。採血する際には、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１に採血針が取り付けられる。もちろん、エクステンションチューブなどを介して採血針が第１ポート１３１に取り付けられてもよい。また、第１プランジャロッド１６は第１ガスケット１４に取り付けられる。採血は通常の方法であり、詳細な説明は省略する。この採血により、第１シリンジ筒１３は血液４１で満たされる。血液４１は全血であり、赤血球、白血球、血小板、血漿などを含む。採血後に、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１から採血針を取り外して、第１キャップ１２を用いて第１ポート１３１を封止する。これにより、図１３（ａ）に示されるように、第１シリンジ筒１３が密封状態となる。
【００８３】
続いて、密封したシリンジを用いて１回目の遠心分離を行う。この遠心分離に先だって、図１３（ｂ）に示されるように、第１プランジャロッド１６を第１ガスケット１４から取り外す。第１プランジャロッド１６は、遠心分離する際に取り外してもよいし、取り付けたままでもよい。しかしながら、第１プランジャロッド１６を第１ガスケット１４から取り外すことで、第１シリンジ筒１３から第１プランジャロッド１６が突出しないので、遠心分離において第１シリンジ筒１３の取り扱いが容易である。また、遠心分離において、第１プランジャロッド１６が不用意に操作されることがない。さらに、遠心分離において第１プランジャロッド１６の重量が第１ガスケット１４に作用しないので、第１シリンジ筒１３から第１キャップ１２が外れるおそれを軽減できるなどの理由から、第１プランジャロッド１６を取り外すことが好ましい。
【００８４】
この遠心分離において、第１シリンジ筒１３の第１ポート１３１側を遠心移動方向とする。ここで、「遠心移動方向」とは、遠心分離において遠心力が作用する方向であり、本発明においては先端である。また、第１ステップにおける遠心分離は、弱遠心である。弱遠心とは、血液の遠心分離において慣用されており、一般に、「全血を赤血球とその他（白血球、血小板、血漿）に分離する遠心分離」（非特許文献１参照）と定義される。具体的には、遠心分離条件が約５００〜２５００ｒｐｍの範囲における遠心分離が弱遠心とされる。遠心分離装置としては一般的なものが用いられる。
【００８５】
この遠心分離により、第１シリンジ筒１３に密封された血液４１は、第１区分４２と第２区分４３とに分離される。第１区分４２は、赤血球画分である。第２区分４３は白血球、血小板、及び血漿を含む画分である。図１３（ｃ）に示されるように、第１区分４２は、遠心分離により遠心移動方向、つまり第１シリンジ筒１３の先端に分離される。
【００８６】
第２ステップでは、図１４（ａ）に示されるように、第１シリンジ筒１３内にガイド部材５を挿入後、ガイド部材５の基端開口部５７から第２中空針２１を挿通し、さらに押し込むことで第２中空針２１で第１ガスケット１４を貫通させる。１回目の遠心分離を行う際に、第１プランジャロッド１６を取り外した場合は、遠心分離した後の第１シリンジ筒１３内にそのままガイド部材５を挿入すればよい。ガイド部材５を挿入後、ガイド部材５の基端開口部５７から第２シリンジ２に取り付けた第２中空針２１を挿通孔５５に挿通させる。さらに、第２中空針２１を推し進めると、第２中空針２１は第１ガスケット１４を貫通する。これにより、第２中空針２１の先端は第１シリンジ筒１３内の第２区分４３に到達する。
【００８７】
第３ステップでは、第１シリンジ筒１３内の第２区分４３を第２シリンジ筒２３に吸引する。図１４（ａ）に示されるように、第２中空針２１が第１ガスケット１４を貫通し、第２中空針２１の先端は第１シリンジ筒１３内の第２区分４３に到達した状態で、第２シリンジ２の第２プランジャロッド２６を第２シリンジ筒２３から引いて、第１シリンジ筒１３内の第２区分４３を第２シリンジ筒２３内へ吸引する。第２中空針２１で第１ガスケット１４を貫通させた後、第２区分４３を吸引する際は、第２中空針２１が第１ガスケット１４から突出しすぎると、第１区分４２に到達し、第２区分４３を吸引できなくなる恐れがある。そのため、第２中空針２１が第１ガスケット１４を貫通し、第２区分４３に到達した後、それ以上の突出を制限する構成を有することが好ましい。本発明においては、図１４（ａ）に示されるように挿通孔５５の基端開口部５７と第２シリンジ２の第２ポート２３１の先端が当接し、それ以上挿通できない形状であるが、特にこの形状に限定されるものではなく、例えば挿通孔５５の内面と第２中空針２１のハブ２１２が係止される構造、挿通孔５５の基端開口部５７と第２中空針２１の２１２が当接する構造などであってもよい。
【００８８】
図１４（ｂ）に示されるように、第２シリンジ筒２３から第２プランジャロッド２６を引くと、第１シリンジ筒１３内の第２区分４３が第２シリンジ筒２３へ吸引されるとともに、第１ガスケット１４が、第１シリンジ筒１３内を第１ポート１３１側へ移動する。第１ガスケット１４の移動に伴って、第２シリンジ筒５３が、第１シリンジ１の方向にさらに移動する。これにより、第１シリンジ筒１３から第２シリンジ筒２３への第２区分４３の吸引が連続的かつ円滑に行われる。なお、第１シリンジ筒１３には、第１区分４２及び若干量の第２区分４３が残るが、これらは廃棄するか、別目的に使用する。
【００８９】
第１ステップにおける遠心分離を弱遠心とすることにより、血液４１を第１区分４２と第２区分４３とに分離するとともに、第２区分４３においては血小板をほぼ均等に分散させることができる。つまり、第１区分４２との境界付近に血小板が集中することがない。これにより、第２区分４３を第１シリンジ筒１３から第２シリンジ筒２３へ吸引する際に生ずる第２区分４３の若干のロスにより失われる血小板の量を少なくすることができる。
【００９０】
第４ステップでは、図１５（ａ）に示されるように、第２シリンジ筒２３の第２ポート２３１を第２キャップ２２で封止して第２シリンジ筒２３を密封状態にした後、密封したシリンジを用いて２回目の遠心分離を行う。この遠心分離に先だって、図１５（ｂ）に示されるように、第２プランジャロッド２６を第２ガスケット２４から取り外す。第２プランジャロッド２６は、遠心分離する際に取り外してもよいし、取り付けたままでもよい。しかしながら、第２プランジャロッド２６を第２ガスケット２４から取り外すことで、第２シリンジ筒２３から第２プランジャロッド２６が突出しないので、遠心分離において第２シリンジ筒２３の取り扱いが容易である。また、遠心分離において、第２プランジャロッド２６が不用意に操作されることがない。さらに、遠心分離において第２プランジャロッド２６の重量が第２ガスケット２４に作用しないので、第２シリンジ筒２３から第２キャップ２２が外れるおそれを軽減できるなどの理由から、第２プランジャロッド２６を取り外すことが好ましい。
【００９１】
この遠心分離において、第２シリンジ筒２３の先端側を遠心移動方向とする。また、第４ステップにおける遠心分離は、強遠心である。強遠心とは、血液の遠心分離において慣用されており、一般に、「血小板、白血球と残留赤血球を血漿から分離する遠心分離」（非特許文献１参照）と定義される。本発明では、第２区分の下方に血小板を濃縮する遠心分離を強遠心という。具体的には、遠心分離条件が約３０００〜４０００ｒｐｍの範囲における遠心分離が強遠心とされる。この遠心分離により、図１５（ｃ）に示されるように、第２区分４３が遠心分離され、血小板が遠心移動方向、つまり第２シリンジ筒２３の先端に移動する。また、この遠心分離を強遠心とすることにより、第２区分４３から高濃度の多血小板血漿４５を分離することができる。
【００９２】
第５ステップでは、図１６（ａ）に示されるように、第２シリンジ筒２３内にガイド部材５を挿入後、ガイド部材５の基端開口部７４から第３中空針３１を挿通し、さらに押し込むことで第３中空針３１で第２ガスケット２４を貫通させる。２回目の遠心分離を行う際に、第２プランジャロッド２６を取り外した場合は、遠心分離した後の第２シリンジ筒２３内にそのままガイド部材５を挿入すればよい。ガイド部材５を挿入後、ガイド部材５の基端開口部５７から第３シリンジ３９に取り付けた第３中空針３１を挿通孔５５に挿通させる。さらに、第３中空針３１を推し進めると、第３中空針３１は第２ガスケット２４を貫通する。これにより、第３中空針３１の先端は第２シリンジ筒２３内の上清４４に到達する。
【００９３】
第６ステップでは、第２シリンジ筒２３内の上清４４を第３シリンジ筒３３に吸引する。図１６（ａ）に示されるように、第３中空針３１が第２ガスケット２４を貫通し、第３中空針３１の先端は第２シリンジ筒２３内の第上清４４に到達した状態で、第３シリンジ３の第３プランジャロッド３５を第３シリンジ筒３３から引いて、第２シリンジ筒２３内の上清４４を第３シリンジ筒３３内へ吸引する。第３中空針３１で第２ガスケット２４を貫通させた後、上清４４を吸引する際は、第３中空針３１が第２ガスケット２４から突出しすぎると、多血小板血漿４５に到達し、上清４４を吸引できなくなる恐れがある。そのため、第３中空針３１が第２ガスケット２４を貫通し、上清４４に到達した後、それ以上の突出を制限する構成を有することが好ましい。本発明においては、図１６（ａ）に示されるように、挿通孔５５の基端開口部５７と第３シリンジ３の第３ポート３３１の先端が当接し、それ以上挿通できない形状であるが、特にこの形状に限定されるものではなく、例えば挿通孔５５の内面と第３中空針３１の３１２が係止される構造、挿通孔５５の基端開口部５７と第３中空針３１のハブ３１２が当接する構造などであってもよい。
【００９４】
図１６（ｂ）に示されるように、第３シリンジ筒３３から第３プランジャロッド３５を引くと、第２シリンジ筒２３内の上清４４が第３シリンジ筒３３へ吸引されるとともに、第２ガスケット２４が、第２シリンジ筒２３内を第２ポート２３１側へ移動する。第２ガスケット２４の移動に伴って、第３シリンジ筒３３が、第２シリンジ２の方向にさらに移動する。これにより、第２シリンジ筒２３から第３シリンジ筒３３への第２区分４３の吸引が連続的かつ円滑に行われる。これにより、採血された血液４１から多血小板血漿４５が分離される。
【００９５】
なお、本実施形態では、より高濃度の多血小板血漿４５を得るために、４ステップにおいて、第２シリンジ筒２３内の上清４４を第３シリンジ筒３３に吸引し、多血小板血漿４５を分離することとした。しかしながら、操作行程の増加などを考慮して、第３ステップで遠心分離した後、上清４４を除去せずに多血小板血漿４５を第２シリンジ筒２３から排出してもよい。
【００９６】
このように、本発明に係る多血小板血漿分離キット及び多血小板血漿分離方法によれば、多血小板血漿の分離を簡便に且つ失敗することなく行うことができる。
【産業上の利用可能性】
【００９７】
本発明は、全血を遠心分離することにより多血小板血漿を得るための多血小板血漿分離キット及び多血小板血漿分離方法に適用できる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液を吸引するために用いられる第１シリンジと、該第１シリンジから血小板及び血漿を含む遠心分離区分を吸引するために用いられる第２シリンジと、該第１シリンジに脱着可能な第１中空針及び第１キャップと、該第２シリンジに脱着可能な第２中空針及び第２キャップと、を具備する多血小板血漿分離キットであって、
前記第１シリンジは、
先端に前記第１中空針及び前記第１キャップが脱着可能な第１ポートと、開放した基端と、を有する第１シリンジ筒と、
前記第１シリンジ筒内を液密に封止して前記第１シリンジ筒内を往復動される第１ガスケットと、
前記第１ガスケットの基端に先端が接続される第１プランジャロッドと、を備え、
前記第２シリンジは、
先端に前記第２中空針及び前記第２キャップが脱着可能な第２ポートと、開放した基端と、を有する第２シリンジ筒と、
前記第２シリンジ筒内を液密に封止して前記第２シリンジ筒内を往復動される第２ガスケットと、
前記第２ガスケットの基端に先端が接続される第２プランジャロッドと、を備え、
前記第１プランジャロッドは、先端から基端に渡る挿通孔を有し、
前記挿通孔の基端から前記第２中空針を挿通した際に、前記第２中空針が前記第１ガスケットを貫通することを特徴とする多血小板血漿分離キット。
【請求項２】
前記挿通孔の径が、前記第１プランジャロッドの基端から先端に向かい小さくなるものであって、
前記挿通孔の先端側開口部が、前記第１プランジャロッドの先端面の中心部に位置することを特徴とする請求項１に記載の多血小板血漿分離キット。
【請求項３】
請求項１または２に記載の多血小板血漿分離キットであって、
さらに、前記第２シリンジから遠心分離区分を吸引するために用いられる第３シリンジを具備し、
前記第３シリンジは、
先端に第３中空針が設けられた第３ポートと、開放した基端と、を有する第３シリンジ筒と、
前記第３シリンジ筒内を液密に封止して前記第３シリンジ筒内を往復動される第３ガスケットと、
前記第３ガスケットの基端に先端が接続される第３プランジャロッドと、を備え、
前記第２プランジャロッドは、先端から基端に渡る挿通孔を有し、
前記挿通孔の基端から前記第３中空針を挿通した際に、前記第３中空針が前記第２ガスケットを貫通することを特徴とする多血小板血漿分離キット。
【請求項４】
血液を吸引するために用いられる第１シリンジと、該第１シリンジから血小板及び血漿を含む遠心分離区分を吸引するために用いられる第２シリンジと、該第１シリンジに脱着可能な第１中空針及び第１キャップと、該第２シリンジに脱着可能な第２中空針及び第２キャップと、を具備する多血小板血漿分離キットであって、
前記第１シリンジは、
先端に前記第１中空針及び前記第１キャップが脱着可能な第１ポートと、開放した基端と、を有する第１シリンジ筒と、
前記第１シリンジ筒内を液密に封止して前記第１シリンジ筒内を往復動される第１ガスケットと、
前記第１ガスケットの基端に先端が脱着可能に接続される第１プランジャロッドと、を備え、
前記第２シリンジは、
先端に前記第２中空針及び前記第２キャップが脱着可能な第２ポートと、開放した基端と、を有する第２シリンジ筒と、
前記第２シリンジ筒内を液密に封止して前記第２シリンジ筒内を往復動される第２ガスケットと、
前記第２ガスケットの基端に先端が接続される第２プランジャロッドと、を備え、
前記第１プランジャロッドを取り外した後に、前記第１シリンジ筒の基端から挿入可能で、挿入した際に前記第１ガスケットに当接するガイド部材を有し、
前記ガイド部材は、前記第２中空針を挿通するための先端から基端に渡る挿通孔を有し、
前記挿通孔の基端から前記第２中空針を挿通した際に、前記第２中空針が前記第１ガスケットを貫通することを特徴とする多血小板血漿分離キット。
【請求項５】
前記挿通孔の径が、前記ガイド部材の基端から先端に向かい小さくなるものであって、
前記挿通孔の先端側開口部が、前記ガイド部材の先端面の中心部に位置することを特徴とする請求項に記載の多血小板血漿分離キット。
【請求項６】
請求項４または５に記載の多血小板血漿分離キットであって、
さらに、前記第２シリンジから遠心分離区分を吸引するために用いられる第３シリンジを具備し、
前記第３シリンジは、
先端に第３中空針が設けられた第３ポートと、開放した基端と、を有する第３シリンジ筒と、
前記第３シリンジ筒内を液密に封止して前記第３シリンジ筒内を往復動される第３ガスケットと、
前記第３ガスケットの基端に先端が接続される第３プランジャロッドと、を備え、
前記ガイド部材の挿通孔の基端から前記第３中空針を挿通した際に、前記第３中空針が前記第２ガスケットを貫通することを特徴とする多血小板血漿分離キット。
【請求項７】
先端に第１中空針及び第１キャップが脱着可能な第１ポートと開放した基端とを有する第１シリンジ筒と、前記第１シリンジ筒内を液密に封止して前記第１シリンジ筒内を往復動される第１ガスケットと、前記第１ガスケットの基端に先端が脱着可能に接続される第１プランジャロッドと、を備える前記第１シリンジと、
先端に前記第２中空針及び前記第２キャップが脱着可能な第２ポートと開放した基端とを有する第２シリンジ筒と、前記第２シリンジ筒内を液密に封止して前記第２シリンジ筒内を往復動される第２ガスケットと、前記第２ガスケットの基端に先端が接続される第２プランジャロッドと、を備える前記第２シリンジと、
前記第１シリンジ筒に挿入可能で、前記第２中空針を挿通するための先端から基端に渡る挿通孔を有するガイド部材と、を用いた多血小板血漿分離方法であって、
前記第１シリンジ筒の前記第１プランジャロッドを取り外し、前記ガイド部材を挿入した後に、前記ガイド部材の前記挿通孔の基端側に前記第２シリンジに装着した前記第２中空針を挿通し、前記第２中空針で前記第１ガスケットを貫通するステップを含む多血小板血漿分離方法。
【請求項８】
請求項７に記載の多血小板血漿分離方法であって、
さらに、先端に第３中空針及び第３中空針が設けられた第３ポートと開放した基端とを有する第３シリンジ筒と、前記第３シリンジ筒内を液密に封止して前記第３シリンジ筒内を往復動される第３ガスケットと、前記第３ガスケットの基端に先端が接続される第３プランジャロッドとを備える前記第３シリンジを用いる多血小板血漿分離方法であって、
前記第２シリンジ筒の前記第２プランジャロッドを取り外し、前記ガイド部材を挿入した後に、前記ガイド部材の前記挿通孔の基端側に前記第３シリンジに装着した前記第３中空針を挿通し、前記第３中空針で前記第２ガスケットを貫通するステップを含む多血小板血漿分離方法。
【請求項１】
血液を吸引するために用いられる第１シリンジと、該第１シリンジから血小板及び血漿を含む遠心分離区分を吸引するために用いられる第２シリンジと、該第１シリンジに脱着可能な第１中空針及び第１キャップと、該第２シリンジに脱着可能な第２中空針及び第２キャップと、を具備する多血小板血漿分離キットであって、
前記第１シリンジは、
先端に前記第１中空針及び前記第１キャップが脱着可能な第１ポートと、開放した基端と、を有する第１シリンジ筒と、
前記第１シリンジ筒内を液密に封止して前記第１シリンジ筒内を往復動される第１ガスケットと、
前記第１ガスケットの基端に先端が接続される第１プランジャロッドと、を備え、
前記第２シリンジは、
先端に前記第２中空針及び前記第２キャップが脱着可能な第２ポートと、開放した基端と、を有する第２シリンジ筒と、
前記第２シリンジ筒内を液密に封止して前記第２シリンジ筒内を往復動される第２ガスケットと、
前記第２ガスケットの基端に先端が接続される第２プランジャロッドと、を備え、
前記第１プランジャロッドは、先端から基端に渡る挿通孔を有し、
前記挿通孔の基端から前記第２中空針を挿通した際に、前記第２中空針が前記第１ガスケットを貫通することを特徴とする多血小板血漿分離キット。
【請求項２】
前記挿通孔の径が、前記第１プランジャロッドの基端から先端に向かい小さくなるものであって、
前記挿通孔の先端側開口部が、前記第１プランジャロッドの先端面の中心部に位置することを特徴とする請求項１に記載の多血小板血漿分離キット。
【請求項３】
請求項１または２に記載の多血小板血漿分離キットであって、
さらに、前記第２シリンジから遠心分離区分を吸引するために用いられる第３シリンジを具備し、
前記第３シリンジは、
先端に第３中空針が設けられた第３ポートと、開放した基端と、を有する第３シリンジ筒と、
前記第３シリンジ筒内を液密に封止して前記第３シリンジ筒内を往復動される第３ガスケットと、
前記第３ガスケットの基端に先端が接続される第３プランジャロッドと、を備え、
前記第２プランジャロッドは、先端から基端に渡る挿通孔を有し、
前記挿通孔の基端から前記第３中空針を挿通した際に、前記第３中空針が前記第２ガスケットを貫通することを特徴とする多血小板血漿分離キット。
【請求項４】
血液を吸引するために用いられる第１シリンジと、該第１シリンジから血小板及び血漿を含む遠心分離区分を吸引するために用いられる第２シリンジと、該第１シリンジに脱着可能な第１中空針及び第１キャップと、該第２シリンジに脱着可能な第２中空針及び第２キャップと、を具備する多血小板血漿分離キットであって、
前記第１シリンジは、
先端に前記第１中空針及び前記第１キャップが脱着可能な第１ポートと、開放した基端と、を有する第１シリンジ筒と、
前記第１シリンジ筒内を液密に封止して前記第１シリンジ筒内を往復動される第１ガスケットと、
前記第１ガスケットの基端に先端が脱着可能に接続される第１プランジャロッドと、を備え、
前記第２シリンジは、
先端に前記第２中空針及び前記第２キャップが脱着可能な第２ポートと、開放した基端と、を有する第２シリンジ筒と、
前記第２シリンジ筒内を液密に封止して前記第２シリンジ筒内を往復動される第２ガスケットと、
前記第２ガスケットの基端に先端が接続される第２プランジャロッドと、を備え、
前記第１プランジャロッドを取り外した後に、前記第１シリンジ筒の基端から挿入可能で、挿入した際に前記第１ガスケットに当接するガイド部材を有し、
前記ガイド部材は、前記第２中空針を挿通するための先端から基端に渡る挿通孔を有し、
前記挿通孔の基端から前記第２中空針を挿通した際に、前記第２中空針が前記第１ガスケットを貫通することを特徴とする多血小板血漿分離キット。
【請求項５】
前記挿通孔の径が、前記ガイド部材の基端から先端に向かい小さくなるものであって、
前記挿通孔の先端側開口部が、前記ガイド部材の先端面の中心部に位置することを特徴とする請求項に記載の多血小板血漿分離キット。
【請求項６】
請求項４または５に記載の多血小板血漿分離キットであって、
さらに、前記第２シリンジから遠心分離区分を吸引するために用いられる第３シリンジを具備し、
前記第３シリンジは、
先端に第３中空針が設けられた第３ポートと、開放した基端と、を有する第３シリンジ筒と、
前記第３シリンジ筒内を液密に封止して前記第３シリンジ筒内を往復動される第３ガスケットと、
前記第３ガスケットの基端に先端が接続される第３プランジャロッドと、を備え、
前記ガイド部材の挿通孔の基端から前記第３中空針を挿通した際に、前記第３中空針が前記第２ガスケットを貫通することを特徴とする多血小板血漿分離キット。
【請求項７】
先端に第１中空針及び第１キャップが脱着可能な第１ポートと開放した基端とを有する第１シリンジ筒と、前記第１シリンジ筒内を液密に封止して前記第１シリンジ筒内を往復動される第１ガスケットと、前記第１ガスケットの基端に先端が脱着可能に接続される第１プランジャロッドと、を備える前記第１シリンジと、
先端に前記第２中空針及び前記第２キャップが脱着可能な第２ポートと開放した基端とを有する第２シリンジ筒と、前記第２シリンジ筒内を液密に封止して前記第２シリンジ筒内を往復動される第２ガスケットと、前記第２ガスケットの基端に先端が接続される第２プランジャロッドと、を備える前記第２シリンジと、
前記第１シリンジ筒に挿入可能で、前記第２中空針を挿通するための先端から基端に渡る挿通孔を有するガイド部材と、を用いた多血小板血漿分離方法であって、
前記第１シリンジ筒の前記第１プランジャロッドを取り外し、前記ガイド部材を挿入した後に、前記ガイド部材の前記挿通孔の基端側に前記第２シリンジに装着した前記第２中空針を挿通し、前記第２中空針で前記第１ガスケットを貫通するステップを含む多血小板血漿分離方法。
【請求項８】
請求項７に記載の多血小板血漿分離方法であって、
さらに、先端に第３中空針及び第３中空針が設けられた第３ポートと開放した基端とを有する第３シリンジ筒と、前記第３シリンジ筒内を液密に封止して前記第３シリンジ筒内を往復動される第３ガスケットと、前記第３ガスケットの基端に先端が接続される第３プランジャロッドとを備える前記第３シリンジを用いる多血小板血漿分離方法であって、
前記第２シリンジ筒の前記第２プランジャロッドを取り外し、前記ガイド部材を挿入した後に、前記ガイド部材の前記挿通孔の基端側に前記第３シリンジに装着した前記第３中空針を挿通し、前記第３中空針で前記第２ガスケットを貫通するステップを含む多血小板血漿分離方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【公開番号】特開２０１２−１６１４３７（Ｐ２０１２−１６１４３７Ａ）
【公開日】平成２４年８月３０日（２０１２．８．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−２３３９５（Ｐ２０１１−２３３９５）
【出願日】平成２３年２月４日（２０１１．２．４）
【出願人】（０００１３５０３６）ニプロ株式会社 (583)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年８月３０日（２０１２．８．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年２月４日（２０１１．２．４）
【出願人】（０００１３５０３６）ニプロ株式会社 (583)
【Ｆターム（参考）】
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