抗アレルギー用組成物及びそれを含有する抗アレルギー剤および抗アレルギー食品
【課題】日常的に摂取することによりＩ型アレルギー症状の改善が期待でき、且つ摂取中止後もその改善効果の持続が期待される抗アレルギー用組成物及びそれを含有する抗アレルギー剤および抗アレルギー食品の提供。
【解決手段】ラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株の菌体を含む培養物と、酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株の菌体を含む培養物を共に有効成分として含有し、且つ含まれるＬ−５５株の生菌数が５×１０9 個以上５０×１０9 個以下であり、Ｓ４−Ａ株の生菌数が２×１０8個以上２０×１０8 個以下であることを特徴とする抗アレルギー用組成物により課題を解決できる。
【解決手段】ラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株の菌体を含む培養物と、酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株の菌体を含む培養物を共に有効成分として含有し、且つ含まれるＬ−５５株の生菌数が５×１０9 個以上５０×１０9 個以下であり、Ｓ４−Ａ株の生菌数が２×１０8個以上２０×１０8 個以下であることを特徴とする抗アレルギー用組成物により課題を解決できる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗アレルギー作用を有するラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株の菌体と抗アレルギー作用を有する酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株の菌体を、共に有効成分として含有する抗アレルギー用組成物及びそれを含有する抗アレルギー剤および抗アレルギー食品に関するものであり、更に詳細には、Ｉ型アレルギー症状の改善に優れた効果を発揮し、且つ摂取中止後もその改善効果の持続が期待される抗アレルギー用組成物及びそれを含有する抗アレルギー剤および抗アレルギー食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、先進国を中心に、花粉症、食物アレルギー、アトピー性皮膚炎の一部といった免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）依存性のＩ型アレルギー疾患の患者が年々増加している。
このような現状に対して、アレルギーに関する研究が精力的に行われ、数々のアレルギー治療薬が開発されてきているが、一般に抗アレルギー剤には、一過性の症状緩和をもたらす効果は期待できるが、投与後代謝・排泄により薬の効果が薄れ、そのために継続して薬を服用し続けなければならないという問題がある。
これは患者にとって、服用し続けることによる薬の副作用や経済面を考えると大きな負担であるといえる。そのために既存の薬に替わって、副作用の心配が無く、安価で、且つ抗アレルギー作用の持続性が期待できる、新たな治療剤が望まれている。
【０００３】
このような既存の薬に替わる新たな治療剤として、最近微生物が注目されており、特に乳酸菌や酵母といったプロバイオティクスと呼ばれる微生物の経口摂取により、アレルギー症状を改善する試みが、数多くなされている。
一例として、エンテロコッカス・フェカリス（特許文献１、２参照）、ラクトバチルス・ロイテリ（特許文献３参照）、ラクトバチルス・アシドフィルス（特許文献４参照）、ラクトバチルス・パラカゼイ（特許文献５参照）といった抗アレルギー作用を有する乳酸菌を添加した機能性食品が提案されている。 また、サッカロミセス酵母の菌体、あるいは菌体構成成分を添加した抗アレルギー改善食品なるものも提案されている（特許文献６〜１０参照）。
【０００４】
これら乳酸菌や酵母菌は、古来より人間が発酵食品として摂取してきた経緯があり、副作用面においては何ら問題のない安全な食品といえる。
また、薬に比べて安価であることから、経済的にも充分満足できるものである。しかしながら、乳酸菌あるいは酵母菌を用いた抗アレルギー食品の場合、アレルギー改善効果が薬に比べて弱いという欠点がある。
更に抗アレルギー作用の持続性については、調べられた報告例がほとんどなく、未だに満足できる抗アレルギー食品を提供するには至っていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平１１−１９９４９５号公報
【特許文献２】特開２０００−０９５６９７号公報
【特許文献３】特開２０００−０９５６９７号公報
【特許文献４】特開２００４−０２６７２９号公報
【特許文献５】特開２００８−２４５５６９号公報
【特許文献６】特開２００４−２２４７７２号公報
【特許文献７】特開２００６−１８７２５８号公報
【特許文献８】特開２００７−１９７３３３号公報
【特許文献９】特開２００７−２１７４３５号公報
【特許文献１０】特開２００８−１８２９００号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２００７； ３０（１１）： ２１６３−２１６６，ＩｎｔＩｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００８；８（１３−１４）：１７６１−１７６６，２００７年第５７回日本アレルギー学会秋季学術大会抄録集 アレルギー．２００７；５６（８−９）：１０９８）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の第１の目的は、抗アレルギー作用を有する乳酸菌と酵母菌について、両菌体あるいは両菌体を含む培養液を混合した組成物であって、種々の形態で、その抗アレルギー作用を相乗的に増加せしめ、更に摂取を中止した後もその効果が持続して発揮される抗アレルギー用組成物を提供することである。
本発明の第２の目的は、本発明の抗アレルギー用組成物を含有する抗アレルギー剤を提供することである。
本発明の第３の目的は、本発明の抗アレルギー用組成物を含有する抗アレルギー食品を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決するために、本発明者らは、創意工夫を重ねた結果、抗アレルギー作用を有するラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株（特許寄託センター寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１８６５２）の菌体と抗アレルギー作用を有する酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株（特許寄託センター寄託番号ＦＥＲＭ ＡＰ−２１１２４）の菌体を、共に有効成分として含有せしめた組成物は、それぞれ単独で含有せしめた組成物に比べて抗アレルギー作用が高まり、更に摂取を中止した後もその効果が持続することを見出し、またそれを含有する抗アレルギー剤および抗アレルギー食品が抗アレルギー作用が高く、更に摂取を中止した後もその効果が持続することを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００９】
すでにラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株および酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株については、それぞれ単独に摂取することでアトピー性皮膚炎、花粉症、通年性鼻炎などＩ型アレルギーの症状を抑制することはわかっているが（非特許文献１参照）、本発明者らの長年の研究により、上記２種の異なる微生物種を併用摂取することで、それぞれ単独摂取するよりも相乗効果的にアレルギー症状が軽減されることが判明し、その結果、両菌体を有効成分として含有する組成物を完成させることによって課題の解決が図れたのである。
【００１０】
すなわち、請求項１記載の本発明は、抗アレルギー用組成物において、ラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株の菌体を含む培養物と酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株の菌体を含む培養物を共に有効成分として含有し、且つ含まれるＬ−５５株の生菌数が５×１０9 個以上５０×１０9 個以下であり、Ｓ４−Ａ株の生菌数が２×１０8 個以上２０×１０8個以下であることを特徴とする。
【００１１】
請求項２記載の本発明は、抗アレルギー用組成物においてラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株の菌体と酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株の菌体を共に有効成分として含有し、且つ含まれるＬ−５５株の菌量が５ｍｇ以上５０ｍｇ以下であり、Ｓ４−Ａ株の菌量が５ｍｇ以上５０ｍｇ以下であることを特徴とする。
【００１２】
請求項３記載の本発明は、抗アレルギー剤において、請求項１あるいは請求項２記載の抗アレルギー用組成物を含有することを特徴とする。
【００１３】
請求項４記載の本発明は、抗アレルギー食品において、請求項１あるいは請求項２記載の抗アレルギー用組成物を含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の請求項１記載の抗アレルギー用組成物は、抗アレルギー作用を有するラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株の菌体を含む培養物と抗アレルギー作用を有する酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株の菌体を含む培養物を共に所定量含有することを特徴とするものであり、且つ製造が容易であり、Ｌ−５５株の生菌数およびＳ４−Ａ株の生菌数を所定の範囲内として本発明の組成物を日常的に摂取することにより、Ｉ型アレルギー症状の改善が期待でき、且つ摂取中止後もその改善効果の持続が期待されるという顕著な効果を奏す。
【００１５】
本発明の請求項２記載の抗アレルギー用組成物は、抗アレルギー作用を有するラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株の菌体と酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株の菌体を共に有効成分として所定量含有することを特徴とするものであり、且つ製造が容易であり、Ｌ−５５株の菌体（死菌でもよく、死菌と生菌の混合物でもよい）の菌量およびＳ４−Ａ株の菌体（死菌でもよく、死菌と生菌の混合物でもよい）の菌量を所定の範囲内として本発明の組成物を日常的に摂取することにより、Ｉ型アレルギー症状の改善が期待でき、且つ摂取中止後もその改善効果の持続が期待されるという顕著な効果を奏す。
【００１６】
本発明の請求項３記載の抗アレルギー剤は、請求項１あるいは請求項２記載の抗アレルギー用組成物を含有することを特徴とするものであり、日常的に摂取することにより、Ｉ型アレルギー症状の改善が期待でき、且つ摂取中止後もその改善効果の持続が期待されるという顕著な効果を奏す。
【００１７】
本発明の請求項４記載の抗アレルギー食品は、請求項１あるいは請求項２記載の抗アレルギー用組成物を含有することを特徴とするものであり、日常的に摂取することにより、Ｉ型アレルギー症状の改善が期待でき、且つ摂取中止後もその改善効果の持続が期待されるという顕著な効果を奏す。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】（イ）は、本発明の実施例において、くしゃみ反応に対するＬ−５５株とＳ４−Ａ株投与の効果を示す図であり、（ロ）は鼻掻き行動に対するＬ−５５株とＳ４−Ａ株投与の効果を示す図である。
【図２】本発明の実施例において、血清総ＩｇＥ濃度に対するＬ−５５株とＳ４−Ａ株投与の効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明に使用される抗アレルギー作用を有するラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株は、本発明者らがヒトの糞便より分離したヒト腸内生息性の乳酸菌であり、ヨーグルト製造にも用いられることから、安全性には何ら問題の無い乳酸菌である。
【００２０】
Ｌ−５５株は、市販の乳酸菌用合成培地、例えばＭＲＳ培地で培養できるほか、野菜汁、果物汁、豆乳、獣乳、脱脂乳などを原料として培養でき、適宜、大豆ペプチド、酵母エキスまたは乳蛋白の加水分解物など市販の生育促進物質を添加することで、より菌濃度の高い培養液が調製できる。
そして、これらのＬ−５５株培養液は、そのまま原料として使用できるのはもちろんであるが、培養液から遠心分離法や膜濃縮法などの濃縮処理を施して得られる菌体塊を使用することもできる。
なお、菌体塊は凍結乾燥を施した後、菌体粉末として用いることもできる。 培養例を挙げると、Ｌ−５５株を０．１％濃度の酵母エキスを含む１０％還元脱脂乳培地に接種して、３７℃で１６時間培養することによって、生菌数が約５×１０8 コロニー数／ｍｌのＬ−５５株培養液が得られる。
【００２１】
一方、本発明に使用される抗アレルギー作用を有する酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株は、本発明者らが中華人民共和国・内蒙古自治区において昔から伝統的製法で作られている馬乳酒から分離した酵母菌であるが、自然界あるいはさまざまな発酵食品の中からも分離されるので、抗アレルギー作用を有する菌株であれば特に限定されるものではない。
本菌株は、試料を適宜希釈した後、その希釈液をポテトデキストロース寒天培地上に塗沫することによって分離できる。そしてこのようにして得られる酵母菌サッカロミセス・セレビシエは、古来よりパンや酒作りに用いられており、食経験が豊富な微生物であることから、安全性には何ら問題がない。
【００２２】
Ｓ４−Ａ株は、市販の酵母菌用培地、例えばポテトデキストロース培地で培養できるほか、酵母エキス１〜２％及びぶどう糖１〜５％から成る培地であれば安価に培養できる。
また本菌株は、野菜汁、果物汁、豆乳、獣乳、脱脂乳などを原料としても培養でき、その場合、適宜、大豆ペプチド、酵母エキスまたは乳蛋白の加水分解物など市販の生育促進物質ならびにサッカロミセス・セレビシエの資化できる糖、例えばグルコース、ガラクトース或いはスクロースなどを１〜５％の範囲で任意に添加すればよい。
【００２３】
このようにして得られるＳ４−Ａ株培養液はそのまま原料に使用できるが、Ｌ−５５株と同様、培養液から遠心分離法や膜濃縮法などの濃縮処理を施して得られる菌体塊を使用することもできる。
なお、菌体塊は凍結乾燥を施したのち、菌体粉末として用いることもできる。
培養例を挙げると、サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株を酵母エキス２％及びぶどう糖５％から成る液体培地に接種し、３７℃で２４時間通気培養することで、生菌数がおよそ１×１０7 コロニー数／ｍｌの培養液が得られる。
【００２４】
本発明は、ラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株の菌体と酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株の菌体を共に有効成分として含有せしめることを特徴とする抗アレルギー用組成物であり、両菌体を含有せしめることでＩ型アレルギー症状の改善に優れた効果を発揮し、且つ摂取中止後もその改善効果の持続が期待される。
したがって、どちらか一方の菌体だけを含んだ組成物では望みどおりの抗アレルギー効果は発揮されない。
【００２５】
そのため、上記のようにして調製された乳酸菌と酵母菌の両培養液（あるいは菌体塊や菌体粉末）は、混合することで目的とする効果が発揮される組成物が完成する。
具体的には本発明における混合物の場合、１日にヒト体重１ｋｇあたり、それぞれの菌体が共に乾燥重量（菌体そのものの乾燥重量）で５ｍｇ以上摂取できるよう混合することが必要である。
【００２６】
しかしながら、両菌体の混合量が多くなると菌体由来の渋みや塩味が強くなり、食品として味覚的な問題が生じるので、両菌体の混合量はそれぞれ５０ｍｇを上限とすることが望ましい。
その際に混合する割合は特に限定されるものではなく、それぞれの菌体が乾燥重量で５ｍｇ以上５０ｍｇ以下の範囲、好ましくは６ｍｇ以上４５ｍｇ以下の範囲、特に好ましくは７ｍｇ以上４０ｍｇ以下の範囲であれば、両菌の配合量割合は任意に設定できる。
【００２７】
これを生菌数で示すと、Ｌ−５５株は５×１０9 個以上５０×１０9 個以下、好ましくは６×１０9 個以上４５×１０9 個以下、特に好ましくは７×１０9 個以上４０×１０9 個以下、Ｓ４−Ａ株は２×１０8 個以上２０×１０8 個以下、好ましくは３×１０8 個以上１８×１０8 個以下、特に好ましくは４×１０8 個以上１６×１０8 個以下含まれる混合物であることが必要である。
そしてそれぞれの培養液を混合する場合は、あらかじめ培養液の生菌数を常法に従って測定したうえで、任意の菌数割合になるよう培養液を混合すればよい。
Ｌ−５５株およびＳ４−Ａ株の生菌数が前記下限値未満では目的とする効果が発揮されない恐れがあり、前記上限値を超えると渋みや塩味が強くなり、食品として味覚的な問題が生じる恐れがある。
また、本発明の混合物には、有効成分である菌体以外に他の食原料も配合することができる。
【００２８】
また本発明の組成物はラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株と酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株を、共培養することによっても得られ、その場合に使用できる培養原料としては、野菜汁、果物汁、豆乳、獣乳、脱脂乳などが挙げられる。
【００２９】
更にラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株と酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株については、死菌体でも抗アレルギー効果が認められることから、両菌株を含む培養物あるいは菌体そのものは、通常実施される条件にて殺菌処理を施したものでもよい。
【００３０】
（本発明の抗アレルギー用組成物の利用）
本発明により製造された乳酸菌Ｌ−５５株と酵母菌Ｓ４−Ａ株の菌体を共に含有する抗アレルギー用組成物は、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、花粉症、アレルギー性鼻炎などＩ型アレルギー症状の改善に効果を発揮し、しかも摂取を中止した後も効果の持続性が保たれる。
したがって、当該組成物は賦形剤、結合剤、希釈剤などと混合し、加工することで、抗アレルギー剤として用いることができる。
具体的な製剤形態としては、タブレット状、カプセル状、顆粒状、粉末状、懸濁液状、液状が挙げられる。
【００３１】
また、本発明により製造された乳酸菌Ｌ−５５株と酵母菌Ｓ４−Ａ株の菌体を共に含有する抗アレルギー用組成物は、飲食品に配合することで抗アレルギー効果を有する飲食品として用いることも可能である。
かかる飲食品としての具体例としては、アイスクリーム、プリン、クッキー、クラッカー、チョコレート、キャンディー、ゼリーなどのデザート・菓子類、チーズ、ヨーグルトなどの乳製品類、うどん、そば、ラーメンなどの麺類、かまぼこ、ハム、ソーセージ、ハンバーグなどの魚肉畜肉製品、果汁、野菜汁、清涼飲料、牛乳、コーヒー、茶、スポーツ飲料、ミネラルウォーター、栄養ドリンクなどの各種飲料類が挙げられるが、これらは特に制限されることはない。
なお、これらの飲食品の製造に際しては、通常飲食品の配合設計に用いられる糖類、香料、果汁、食品添加物など、いずれの添加物も使用することができる。
【００３２】
（本発明の抗アレルギー用組成物の配合）
本発明により製造された乳酸菌Ｌ−５５株と酵母菌Ｓ４−Ａ株の菌体を共に含有する抗アレルギー用組成物を、抗アレルギー製剤、健康食品製剤あるいは飲食品に配合して用いる際には、一日あたり摂取される抗アレルギー製剤、健康食品製剤、あるいは飲食品の量に合わせて含有させる乳酸菌Ｌ−５５株および酵母菌Ｓ４−Ａ株の菌体量もしくは菌体数が決定され、有効成分であるＬ−５５株およびＳ４−Ａ株の菌体が共に有効量含有するように当該組成物を添加・配合させなければならない。
【００３３】
具体的には、本発明における有効成分であるＬ−５５株とＳ４−Ａ株の菌体は、成人の場合、１日に体重１ｋｇあたりそれぞれ５ｍｇ以上摂取できるよう混合することが必要であるが、両菌体の混合量が多くなると菌体由来の渋みや塩味が強くなり、味覚面で食品としての品質を損なうので、混合する両菌量はそれぞれ５０ｍｇを上限とすることが必要である。
その際に混合する割合は特に限定されるものではなく、それぞれの菌体が乾燥重量で５ｍｇ以上５０ｍｇ以下の範囲であれば、両菌の配合量割合は任意に設定できる。
【００３４】
これを生菌数で示すと、Ｌ−５５株は５×１０9 個以上５０×１０9 個以下、Ｓ４−Ａ株は２×１０8 個以上２０×１０8 個以下含まれる混合物であることが望ましい。
そしてそれぞれの培養液を混合する場合は、あらかじめ培養液の生菌数を常法に従って測定したうえで、任意の菌数割合になるよう培養液を混合すればよい。
【実施例】
【００３５】
次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。
【００３６】
（実施例１）
試験方法：アレルギー抑制効果
（Ｌ−５５株菌体の調製）ＭＲＳ寒天培地上で増殖したラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株のコロニーを、ＭＲＳ液体培地１００ｍｌに接種し、３７℃で２４時間静置培養した。続いてこの培養液を同じくＭＲＳ液体培地１０リットルに移し、３７℃で４８時間静置培養した。
培養終了後、遠心分離によって菌体を集め、さらに蒸留水で２回洗浄した。得られた菌体塊は１００℃で１０分間殺菌処理を施し、その後凍結乾燥処理することで粉末化し、試験菌体としてマウス投与試験に供した。
【００３７】
（Ｓ４−Ａ株菌体の調製）
ポテトデキストロース寒天培地上で増殖したサッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株のコロニーを、バクトトリプトン１．０％、酵母エキス０．５％、麦芽エキス０．３％、ぶどう糖５．０％から成る液体培地１００ｍｌに接種し、３０℃で２４時間振とう培養した。
続いてこの培養液を同じ成分組成の液体培地１０リットルに移し、３０℃で２４時間通気攪拌培養した。培養終了後、遠心分離によって菌体を集め、さらに蒸留水で２回洗浄した。
得られた菌体塊は１００℃で１０分間殺菌処理を施し、その後、凍結乾燥処理することで粉末化し、試験菌体としてマウス投与試験に供した。
【００３８】
（動物種）
ＢＡＬＢ／ｃマウス 雌性 ６週齢 ４８匹
実験には，ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌性６週齢）を用いた。動物は室温２４±２℃、湿度５５±１５％に保たれた動物室で、おがくずを敷いたプラスチックケージの中で飼育した。マウスには飼育期間中、飼料および水は自由に摂取させた。
【００３９】
（区分け）
各群のマウスには、固型飼料（オリエンタル酵母工業（株））及び水を自由摂取させた。
（１）対照群：蒸留水０．３ｍｌ／匹／日を１４日間強制経口投与した群（１２匹）
（２）Ｌ−５５株単独投与群：Ｌ−５５株菌体 ０．２ｍｇ／匹／日を１４日間強制経口投与した群（１２匹）
（３）Ｓ４−Ａ株単独投与群：Ｓ４−Ａ株菌体 ０．２ｍｇ／匹／日を１４日間強制経口投与した群（１２匹）
（４）併用投与群：Ｌ−５５株菌体０．１ｍｇ ＋ Ｓ４−Ａ株菌体０．１ｍｇ／匹／日を１４日間強制経口投与した群（１２匹）
【００４０】
（試験菌体の投与方法及び投与期間）
Ｌ−５５株およびＳ４−Ａ株の粉末菌体は蒸留水で懸濁した後、経口ゾンデでマウスに強制投与した。
Ｌ−５５株単独投与群にはＬ−５５株菌体を０．２ｍｇ（０．２ｍｇ／匹）、Ｓ４−Ａ株単独投与群にはＳ４−Ａ株菌体０．２ｍｇ（０．２ｍｇ／匹）、併用投与群にはＬ−５５株菌体とＳ４−Ａ株菌体をそれぞれ０．１ｍｇずつ、合計０．２ｍｇ（０．２ｍｇ／匹）を０．３ｍＬの蒸留水に懸濁して投与した。
【００４１】
投与期間は、初回感作２５日目以降，試験菌体を投与直前に蒸留水に懸濁して１日１回，２週間，連続経口投与した。また対照群には，０．３ｍＬの蒸留水を投与した。
【００４２】
（マウス鼻アレルギーモデルの作製）
卵白アルブミン（ＯＶＡ）０．１ｍｇ、水酸化アルミニウムゲル１ｍｇおよび百日咳毒素３００ｎｇを生理食塩液０．２ｍＬに溶解して、マウスに腹腔内注射し、初回感作とした。初回感作５日後に、追加感作としてＯＶＡ５０μｇを生理食塩液０．１ｍＬに溶解し、マウスの背部皮下に注射した。
さらに初回感作１８日目以降、局所感作として１日１回４週間ＯＶＡ５０ｍｇ／ｍＬの溶液を１μＬずつマイクロピペットで両側鼻腔に点鼻投与した。
【００４３】
（抗原誘発鼻炎症状の測定）
くしゃみ反応および鼻掻き行動（鼻炎症状）の測定１時間前に、試験食を投与した。測定開始前に、マウスを環境に慣らすため、観察用ケージ（３２×２２×１０ｃｍ）内に１０分間置き馴化させた。ＯＶＡ溶液（５０ｍｇ／ｍＬ）を１μＬずつ両側鼻腔に点鼻投与した直後より、マウスは観察用ケージに１匹ずつ入れ、誘発されるくしゃみ反応および鼻掻き行動の回数を６０分間測定した。
鼻炎症状の測定は、試験菌体投与期間には１週毎に初回感作２５，３２，３９日後に行い、試験菌体投与中止期間には、初回感作４２日後（中止３日目）および４６日後（中止１週目）に行った．
【００４４】
（血清総ＩｇＥ濃度の測定）
血液は，感作２５，３２，３９，４２，４６日目に尾静脈より採取し、４℃，７５５×ｇで１０分間遠心分離して血清を得た。血清は使用するまで−２０℃で保存した。
血清総ＩｇＥ濃度は、ｍｏｕｓｅ ＩｇＥ ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ （ＥＬＩＳＡ） ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｋｉｔ （ＢｅｔｈｙｌＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．）を用いて測定した。
【００４５】
試験結果：アレルギー抑制効果
（鼻炎症状の緩和）
抗原誘発鼻炎症状の測定結果を図１（イ）、図１（ロ）に示した。図１から明らかなように、Ｌ−５５株とＳ４−Ａ株のそれぞれ単独投与群では、投与２週目で対照群に比べ、鼻炎症状（くしゃみ反応と鼻掻き行動）が有意に抑制された。
一方Ｌ−５５株とＳ４−Ａ株の併用投与群では、投与１週目以降、対照群に比べ鼻炎症状が有意に抑制された。なお、図１中の*は有意水準０．０５未満（ｐ＜０．０５）、***は有意水準０．００５未満（ｐ＜０．００５）、****は有意水準０．００１未満（ｐ＜０．００１）であることを示している。
【００４６】
これらの結果から、Ｌ−５５株とＳ４−Ａ株を同時に摂取したときの方が、各菌体をそれぞれ単独で摂取したときよりも、鼻炎症状がより早く、そして強く緩和さることが明らかとなった。
さらに、試験菌体投与２週間後より１週間、試験菌体の投与を中止したところ、両菌体を同時に摂取したマウスでは、摂取を中止した３日後でも、鼻炎症状がより強く抑えられていた。
【００４７】
血清総ＩｇＥ濃度の測定結果は図２に示した。
図２から明らかなように、Ｌ−５５株あるいはＳ４−Ａ株の単独投与群と両菌体の併用投与群では、共に投与１週目以降、対照群に比べ血清総ＩｇＥ濃度が有意に低値を示したが、Ｌ−５５株とＳ４−Ａ株を同時に摂取したときの方が、血清総ＩｇＥ濃度がより低く抑えられていた。
なお、図２中の*は有意水準０．０５未満（ｐ＜０．０５）、**は有意水準０．０１未満（ｐ＜０．０１）、***は有意水準０．００５未満（ｐ＜０．００５）であることを示している。さらに、試験菌体投与２週間後より１週間、試験菌体の投与を中止したところ、両菌体を同時に摂取したマウスでは、摂取を中止した３日後でも、血清総ＩｇＥ濃度がより低く抑えられていた。
【００４８】
上記の結果より、Ｌ−５５株とＳ４−Ａ株の菌体は血清ＩｇＥ濃度の減少を介して、アレルギー性鼻炎の症状を緩和することが示唆された。
マウスの体重は約２０ｇであり、マウス１匹あたりの有効摂取量は、Ｌ−５５株およびＳ４−Ａ株の菌体が０．１ｍｇづつであることから、ヒト成人では、両菌体を同時に１日に体重１ｋｇあたりそれぞれ５ｍｇ以上摂取することにより、各菌体を単独で摂取したときよりも、より早くそして強く鼻炎症状が緩和されることになる。
さらに、摂取を中止した後でも、両菌体による抗アレルギー効果は一過性ではなく、数日間は持続することも期待できる。
【００４９】
（実施例２）
次にＬ−５５株とＳ４−Ａ株の菌体を共に含む組成物の製造方法について、その一例を記載するが、本発明は本発明の主旨を逸脱しない限り、実施例に限定されるものではない。
【００５０】
（Ｌ−５５株菌体の調製）
Ｌ−５５株のコロニーを、２％ペプトン、１％酵母エキス、２％ブドウ糖、０．０５％アスコルビン酸Ｎａ、０．１％ツイン８０、０．５％酢酸Ｎａ、０．２％リン酸二カリウムからなる液体培地１００ｍｌに接種し、３７℃で４８時間静置培養した。
続いて、この培養液を上記と同じ組成の液体培地１０リットルに移し、３７℃で４８時間静置培養した。培養終了後、遠心分離操作によって菌体を集め、さらに蒸留水で菌体を２回洗浄した。得られた菌体は１００ｍｌの蒸留水で再懸濁し、その後１２１℃、１０分間の殺菌処理を施したのち、凍結乾燥処理することによって粉末化した。
【００５１】
（Ｓ４−Ａ株菌体の調製）
ポテトデキストロース寒天培地上で増殖したサッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株のコロニーを、酵母エキス１％、ぶどう糖５％から成る液体培地１００ｍｌに接種し、３０℃で２４時間振とう培養した。
続いてこの培養液を上記と同じ組成の液体培地１０リットルに移し、３０℃で２４時間通気攪拌培養した。培養終了後、遠心分離によって菌体を集め、さらに蒸留水で菌体を２回洗浄した。
得られた菌体は１００ｍｌの蒸留水で再懸濁し、その後１２１℃、１０分間の殺菌処理を施したのち、凍結乾燥処理することによって粉末化した。
【００５２】
（乳酸菌と酵母菌の混合組成物の作製）
得られたＬ−５５株の乾燥菌体１０ｇとＳ４−Ａ株の乾燥菌体１０ｇをきれいな容器に測り取り、よく混ぜ合わせて目的の混合組成物を得た。
【００５３】
（実施例３）
次に、実施例２で得られたＬ−５５株の菌体とＳ４−Ａ株の菌体を共に含む組成物を使った抗アレルギー剤の製造方法について、その実施例を記載する。ソルビトール ８５ｇ
賦形剤 １０ｇ
実施例２で調製した菌体粉末 ５ｇ
合 計 １００ｇ
上記の混合物を、常法に従い打錠機にて硬度８０Ｎ（ニュートン）の錠剤（２５０ｍｇ／１錠）に加工した。
【００５４】
（実施例４）
次に、実施例２で得られたＬ−５５株の菌体とＳ４−Ａ株の菌体を共に含む組成物を使った抗アレルギー用果汁飲料の製造方法について、その実施例を記載する。
液糖（果糖５５％） １３００ｇ
濃縮パイン果汁（Ｂｘ６０） １２０ｇ
クエン酸（無水） ３０ｇ
パイン香料 １０ｇ
実施例２で調製した菌体粉末 １ｇ
水 ８５３９ｇ
上記の混合物を、常法に従いＨＴＳＴ殺菌後、容器に充填（１００ｇ／１本）した。
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明の抗アレルギー用組成物は、製造が容易であり、Ｌ−５５株の菌体およびＳ４−Ａ株の菌体を含有量を所定の範囲内とすることにより、日常的に摂取すると、Ｉ型アレルギー症状の改善が期待でき、且つ摂取中止後もその改善効果の持続が期待されるという顕著な効果を奏し、また本発明の抗アレルギー用組成物を含有する抗アレルギー剤および抗アレルギー食品は日常的に摂取することにより、Ｉ型アレルギー症状の改善が期待でき、且つ摂取中止後もその改善効果の持続が期待されるという顕著な効果を奏するので、産業上の利用価値は甚だ大きい。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗アレルギー作用を有するラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株の菌体と抗アレルギー作用を有する酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株の菌体を、共に有効成分として含有する抗アレルギー用組成物及びそれを含有する抗アレルギー剤および抗アレルギー食品に関するものであり、更に詳細には、Ｉ型アレルギー症状の改善に優れた効果を発揮し、且つ摂取中止後もその改善効果の持続が期待される抗アレルギー用組成物及びそれを含有する抗アレルギー剤および抗アレルギー食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、先進国を中心に、花粉症、食物アレルギー、アトピー性皮膚炎の一部といった免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）依存性のＩ型アレルギー疾患の患者が年々増加している。
このような現状に対して、アレルギーに関する研究が精力的に行われ、数々のアレルギー治療薬が開発されてきているが、一般に抗アレルギー剤には、一過性の症状緩和をもたらす効果は期待できるが、投与後代謝・排泄により薬の効果が薄れ、そのために継続して薬を服用し続けなければならないという問題がある。
これは患者にとって、服用し続けることによる薬の副作用や経済面を考えると大きな負担であるといえる。そのために既存の薬に替わって、副作用の心配が無く、安価で、且つ抗アレルギー作用の持続性が期待できる、新たな治療剤が望まれている。
【０００３】
このような既存の薬に替わる新たな治療剤として、最近微生物が注目されており、特に乳酸菌や酵母といったプロバイオティクスと呼ばれる微生物の経口摂取により、アレルギー症状を改善する試みが、数多くなされている。
一例として、エンテロコッカス・フェカリス（特許文献１、２参照）、ラクトバチルス・ロイテリ（特許文献３参照）、ラクトバチルス・アシドフィルス（特許文献４参照）、ラクトバチルス・パラカゼイ（特許文献５参照）といった抗アレルギー作用を有する乳酸菌を添加した機能性食品が提案されている。 また、サッカロミセス酵母の菌体、あるいは菌体構成成分を添加した抗アレルギー改善食品なるものも提案されている（特許文献６〜１０参照）。
【０００４】
これら乳酸菌や酵母菌は、古来より人間が発酵食品として摂取してきた経緯があり、副作用面においては何ら問題のない安全な食品といえる。
また、薬に比べて安価であることから、経済的にも充分満足できるものである。しかしながら、乳酸菌あるいは酵母菌を用いた抗アレルギー食品の場合、アレルギー改善効果が薬に比べて弱いという欠点がある。
更に抗アレルギー作用の持続性については、調べられた報告例がほとんどなく、未だに満足できる抗アレルギー食品を提供するには至っていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平１１−１９９４９５号公報
【特許文献２】特開２０００−０９５６９７号公報
【特許文献３】特開２０００−０９５６９７号公報
【特許文献４】特開２００４−０２６７２９号公報
【特許文献５】特開２００８−２４５５６９号公報
【特許文献６】特開２００４−２２４７７２号公報
【特許文献７】特開２００６−１８７２５８号公報
【特許文献８】特開２００７−１９７３３３号公報
【特許文献９】特開２００７−２１７４３５号公報
【特許文献１０】特開２００８−１８２９００号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２００７； ３０（１１）： ２１６３−２１６６，ＩｎｔＩｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００８；８（１３−１４）：１７６１−１７６６，２００７年第５７回日本アレルギー学会秋季学術大会抄録集 アレルギー．２００７；５６（８−９）：１０９８）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の第１の目的は、抗アレルギー作用を有する乳酸菌と酵母菌について、両菌体あるいは両菌体を含む培養液を混合した組成物であって、種々の形態で、その抗アレルギー作用を相乗的に増加せしめ、更に摂取を中止した後もその効果が持続して発揮される抗アレルギー用組成物を提供することである。
本発明の第２の目的は、本発明の抗アレルギー用組成物を含有する抗アレルギー剤を提供することである。
本発明の第３の目的は、本発明の抗アレルギー用組成物を含有する抗アレルギー食品を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決するために、本発明者らは、創意工夫を重ねた結果、抗アレルギー作用を有するラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株（特許寄託センター寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１８６５２）の菌体と抗アレルギー作用を有する酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株（特許寄託センター寄託番号ＦＥＲＭ ＡＰ−２１１２４）の菌体を、共に有効成分として含有せしめた組成物は、それぞれ単独で含有せしめた組成物に比べて抗アレルギー作用が高まり、更に摂取を中止した後もその効果が持続することを見出し、またそれを含有する抗アレルギー剤および抗アレルギー食品が抗アレルギー作用が高く、更に摂取を中止した後もその効果が持続することを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００９】
すでにラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株および酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株については、それぞれ単独に摂取することでアトピー性皮膚炎、花粉症、通年性鼻炎などＩ型アレルギーの症状を抑制することはわかっているが（非特許文献１参照）、本発明者らの長年の研究により、上記２種の異なる微生物種を併用摂取することで、それぞれ単独摂取するよりも相乗効果的にアレルギー症状が軽減されることが判明し、その結果、両菌体を有効成分として含有する組成物を完成させることによって課題の解決が図れたのである。
【００１０】
すなわち、請求項１記載の本発明は、抗アレルギー用組成物において、ラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株の菌体を含む培養物と酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株の菌体を含む培養物を共に有効成分として含有し、且つ含まれるＬ−５５株の生菌数が５×１０9 個以上５０×１０9 個以下であり、Ｓ４−Ａ株の生菌数が２×１０8 個以上２０×１０8個以下であることを特徴とする。
【００１１】
請求項２記載の本発明は、抗アレルギー用組成物においてラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株の菌体と酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株の菌体を共に有効成分として含有し、且つ含まれるＬ−５５株の菌量が５ｍｇ以上５０ｍｇ以下であり、Ｓ４−Ａ株の菌量が５ｍｇ以上５０ｍｇ以下であることを特徴とする。
【００１２】
請求項３記載の本発明は、抗アレルギー剤において、請求項１あるいは請求項２記載の抗アレルギー用組成物を含有することを特徴とする。
【００１３】
請求項４記載の本発明は、抗アレルギー食品において、請求項１あるいは請求項２記載の抗アレルギー用組成物を含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の請求項１記載の抗アレルギー用組成物は、抗アレルギー作用を有するラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株の菌体を含む培養物と抗アレルギー作用を有する酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株の菌体を含む培養物を共に所定量含有することを特徴とするものであり、且つ製造が容易であり、Ｌ−５５株の生菌数およびＳ４−Ａ株の生菌数を所定の範囲内として本発明の組成物を日常的に摂取することにより、Ｉ型アレルギー症状の改善が期待でき、且つ摂取中止後もその改善効果の持続が期待されるという顕著な効果を奏す。
【００１５】
本発明の請求項２記載の抗アレルギー用組成物は、抗アレルギー作用を有するラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株の菌体と酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株の菌体を共に有効成分として所定量含有することを特徴とするものであり、且つ製造が容易であり、Ｌ−５５株の菌体（死菌でもよく、死菌と生菌の混合物でもよい）の菌量およびＳ４−Ａ株の菌体（死菌でもよく、死菌と生菌の混合物でもよい）の菌量を所定の範囲内として本発明の組成物を日常的に摂取することにより、Ｉ型アレルギー症状の改善が期待でき、且つ摂取中止後もその改善効果の持続が期待されるという顕著な効果を奏す。
【００１６】
本発明の請求項３記載の抗アレルギー剤は、請求項１あるいは請求項２記載の抗アレルギー用組成物を含有することを特徴とするものであり、日常的に摂取することにより、Ｉ型アレルギー症状の改善が期待でき、且つ摂取中止後もその改善効果の持続が期待されるという顕著な効果を奏す。
【００１７】
本発明の請求項４記載の抗アレルギー食品は、請求項１あるいは請求項２記載の抗アレルギー用組成物を含有することを特徴とするものであり、日常的に摂取することにより、Ｉ型アレルギー症状の改善が期待でき、且つ摂取中止後もその改善効果の持続が期待されるという顕著な効果を奏す。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】（イ）は、本発明の実施例において、くしゃみ反応に対するＬ−５５株とＳ４−Ａ株投与の効果を示す図であり、（ロ）は鼻掻き行動に対するＬ−５５株とＳ４−Ａ株投与の効果を示す図である。
【図２】本発明の実施例において、血清総ＩｇＥ濃度に対するＬ−５５株とＳ４−Ａ株投与の効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明に使用される抗アレルギー作用を有するラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株は、本発明者らがヒトの糞便より分離したヒト腸内生息性の乳酸菌であり、ヨーグルト製造にも用いられることから、安全性には何ら問題の無い乳酸菌である。
【００２０】
Ｌ−５５株は、市販の乳酸菌用合成培地、例えばＭＲＳ培地で培養できるほか、野菜汁、果物汁、豆乳、獣乳、脱脂乳などを原料として培養でき、適宜、大豆ペプチド、酵母エキスまたは乳蛋白の加水分解物など市販の生育促進物質を添加することで、より菌濃度の高い培養液が調製できる。
そして、これらのＬ−５５株培養液は、そのまま原料として使用できるのはもちろんであるが、培養液から遠心分離法や膜濃縮法などの濃縮処理を施して得られる菌体塊を使用することもできる。
なお、菌体塊は凍結乾燥を施した後、菌体粉末として用いることもできる。 培養例を挙げると、Ｌ−５５株を０．１％濃度の酵母エキスを含む１０％還元脱脂乳培地に接種して、３７℃で１６時間培養することによって、生菌数が約５×１０8 コロニー数／ｍｌのＬ−５５株培養液が得られる。
【００２１】
一方、本発明に使用される抗アレルギー作用を有する酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株は、本発明者らが中華人民共和国・内蒙古自治区において昔から伝統的製法で作られている馬乳酒から分離した酵母菌であるが、自然界あるいはさまざまな発酵食品の中からも分離されるので、抗アレルギー作用を有する菌株であれば特に限定されるものではない。
本菌株は、試料を適宜希釈した後、その希釈液をポテトデキストロース寒天培地上に塗沫することによって分離できる。そしてこのようにして得られる酵母菌サッカロミセス・セレビシエは、古来よりパンや酒作りに用いられており、食経験が豊富な微生物であることから、安全性には何ら問題がない。
【００２２】
Ｓ４−Ａ株は、市販の酵母菌用培地、例えばポテトデキストロース培地で培養できるほか、酵母エキス１〜２％及びぶどう糖１〜５％から成る培地であれば安価に培養できる。
また本菌株は、野菜汁、果物汁、豆乳、獣乳、脱脂乳などを原料としても培養でき、その場合、適宜、大豆ペプチド、酵母エキスまたは乳蛋白の加水分解物など市販の生育促進物質ならびにサッカロミセス・セレビシエの資化できる糖、例えばグルコース、ガラクトース或いはスクロースなどを１〜５％の範囲で任意に添加すればよい。
【００２３】
このようにして得られるＳ４−Ａ株培養液はそのまま原料に使用できるが、Ｌ−５５株と同様、培養液から遠心分離法や膜濃縮法などの濃縮処理を施して得られる菌体塊を使用することもできる。
なお、菌体塊は凍結乾燥を施したのち、菌体粉末として用いることもできる。
培養例を挙げると、サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株を酵母エキス２％及びぶどう糖５％から成る液体培地に接種し、３７℃で２４時間通気培養することで、生菌数がおよそ１×１０7 コロニー数／ｍｌの培養液が得られる。
【００２４】
本発明は、ラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株の菌体と酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株の菌体を共に有効成分として含有せしめることを特徴とする抗アレルギー用組成物であり、両菌体を含有せしめることでＩ型アレルギー症状の改善に優れた効果を発揮し、且つ摂取中止後もその改善効果の持続が期待される。
したがって、どちらか一方の菌体だけを含んだ組成物では望みどおりの抗アレルギー効果は発揮されない。
【００２５】
そのため、上記のようにして調製された乳酸菌と酵母菌の両培養液（あるいは菌体塊や菌体粉末）は、混合することで目的とする効果が発揮される組成物が完成する。
具体的には本発明における混合物の場合、１日にヒト体重１ｋｇあたり、それぞれの菌体が共に乾燥重量（菌体そのものの乾燥重量）で５ｍｇ以上摂取できるよう混合することが必要である。
【００２６】
しかしながら、両菌体の混合量が多くなると菌体由来の渋みや塩味が強くなり、食品として味覚的な問題が生じるので、両菌体の混合量はそれぞれ５０ｍｇを上限とすることが望ましい。
その際に混合する割合は特に限定されるものではなく、それぞれの菌体が乾燥重量で５ｍｇ以上５０ｍｇ以下の範囲、好ましくは６ｍｇ以上４５ｍｇ以下の範囲、特に好ましくは７ｍｇ以上４０ｍｇ以下の範囲であれば、両菌の配合量割合は任意に設定できる。
【００２７】
これを生菌数で示すと、Ｌ−５５株は５×１０9 個以上５０×１０9 個以下、好ましくは６×１０9 個以上４５×１０9 個以下、特に好ましくは７×１０9 個以上４０×１０9 個以下、Ｓ４−Ａ株は２×１０8 個以上２０×１０8 個以下、好ましくは３×１０8 個以上１８×１０8 個以下、特に好ましくは４×１０8 個以上１６×１０8 個以下含まれる混合物であることが必要である。
そしてそれぞれの培養液を混合する場合は、あらかじめ培養液の生菌数を常法に従って測定したうえで、任意の菌数割合になるよう培養液を混合すればよい。
Ｌ−５５株およびＳ４−Ａ株の生菌数が前記下限値未満では目的とする効果が発揮されない恐れがあり、前記上限値を超えると渋みや塩味が強くなり、食品として味覚的な問題が生じる恐れがある。
また、本発明の混合物には、有効成分である菌体以外に他の食原料も配合することができる。
【００２８】
また本発明の組成物はラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株と酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株を、共培養することによっても得られ、その場合に使用できる培養原料としては、野菜汁、果物汁、豆乳、獣乳、脱脂乳などが挙げられる。
【００２９】
更にラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株と酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株については、死菌体でも抗アレルギー効果が認められることから、両菌株を含む培養物あるいは菌体そのものは、通常実施される条件にて殺菌処理を施したものでもよい。
【００３０】
（本発明の抗アレルギー用組成物の利用）
本発明により製造された乳酸菌Ｌ−５５株と酵母菌Ｓ４−Ａ株の菌体を共に含有する抗アレルギー用組成物は、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、花粉症、アレルギー性鼻炎などＩ型アレルギー症状の改善に効果を発揮し、しかも摂取を中止した後も効果の持続性が保たれる。
したがって、当該組成物は賦形剤、結合剤、希釈剤などと混合し、加工することで、抗アレルギー剤として用いることができる。
具体的な製剤形態としては、タブレット状、カプセル状、顆粒状、粉末状、懸濁液状、液状が挙げられる。
【００３１】
また、本発明により製造された乳酸菌Ｌ−５５株と酵母菌Ｓ４−Ａ株の菌体を共に含有する抗アレルギー用組成物は、飲食品に配合することで抗アレルギー効果を有する飲食品として用いることも可能である。
かかる飲食品としての具体例としては、アイスクリーム、プリン、クッキー、クラッカー、チョコレート、キャンディー、ゼリーなどのデザート・菓子類、チーズ、ヨーグルトなどの乳製品類、うどん、そば、ラーメンなどの麺類、かまぼこ、ハム、ソーセージ、ハンバーグなどの魚肉畜肉製品、果汁、野菜汁、清涼飲料、牛乳、コーヒー、茶、スポーツ飲料、ミネラルウォーター、栄養ドリンクなどの各種飲料類が挙げられるが、これらは特に制限されることはない。
なお、これらの飲食品の製造に際しては、通常飲食品の配合設計に用いられる糖類、香料、果汁、食品添加物など、いずれの添加物も使用することができる。
【００３２】
（本発明の抗アレルギー用組成物の配合）
本発明により製造された乳酸菌Ｌ−５５株と酵母菌Ｓ４−Ａ株の菌体を共に含有する抗アレルギー用組成物を、抗アレルギー製剤、健康食品製剤あるいは飲食品に配合して用いる際には、一日あたり摂取される抗アレルギー製剤、健康食品製剤、あるいは飲食品の量に合わせて含有させる乳酸菌Ｌ−５５株および酵母菌Ｓ４−Ａ株の菌体量もしくは菌体数が決定され、有効成分であるＬ−５５株およびＳ４−Ａ株の菌体が共に有効量含有するように当該組成物を添加・配合させなければならない。
【００３３】
具体的には、本発明における有効成分であるＬ−５５株とＳ４−Ａ株の菌体は、成人の場合、１日に体重１ｋｇあたりそれぞれ５ｍｇ以上摂取できるよう混合することが必要であるが、両菌体の混合量が多くなると菌体由来の渋みや塩味が強くなり、味覚面で食品としての品質を損なうので、混合する両菌量はそれぞれ５０ｍｇを上限とすることが必要である。
その際に混合する割合は特に限定されるものではなく、それぞれの菌体が乾燥重量で５ｍｇ以上５０ｍｇ以下の範囲であれば、両菌の配合量割合は任意に設定できる。
【００３４】
これを生菌数で示すと、Ｌ−５５株は５×１０9 個以上５０×１０9 個以下、Ｓ４−Ａ株は２×１０8 個以上２０×１０8 個以下含まれる混合物であることが望ましい。
そしてそれぞれの培養液を混合する場合は、あらかじめ培養液の生菌数を常法に従って測定したうえで、任意の菌数割合になるよう培養液を混合すればよい。
【実施例】
【００３５】
次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。
【００３６】
（実施例１）
試験方法：アレルギー抑制効果
（Ｌ−５５株菌体の調製）ＭＲＳ寒天培地上で増殖したラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株のコロニーを、ＭＲＳ液体培地１００ｍｌに接種し、３７℃で２４時間静置培養した。続いてこの培養液を同じくＭＲＳ液体培地１０リットルに移し、３７℃で４８時間静置培養した。
培養終了後、遠心分離によって菌体を集め、さらに蒸留水で２回洗浄した。得られた菌体塊は１００℃で１０分間殺菌処理を施し、その後凍結乾燥処理することで粉末化し、試験菌体としてマウス投与試験に供した。
【００３７】
（Ｓ４−Ａ株菌体の調製）
ポテトデキストロース寒天培地上で増殖したサッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株のコロニーを、バクトトリプトン１．０％、酵母エキス０．５％、麦芽エキス０．３％、ぶどう糖５．０％から成る液体培地１００ｍｌに接種し、３０℃で２４時間振とう培養した。
続いてこの培養液を同じ成分組成の液体培地１０リットルに移し、３０℃で２４時間通気攪拌培養した。培養終了後、遠心分離によって菌体を集め、さらに蒸留水で２回洗浄した。
得られた菌体塊は１００℃で１０分間殺菌処理を施し、その後、凍結乾燥処理することで粉末化し、試験菌体としてマウス投与試験に供した。
【００３８】
（動物種）
ＢＡＬＢ／ｃマウス 雌性 ６週齢 ４８匹
実験には，ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌性６週齢）を用いた。動物は室温２４±２℃、湿度５５±１５％に保たれた動物室で、おがくずを敷いたプラスチックケージの中で飼育した。マウスには飼育期間中、飼料および水は自由に摂取させた。
【００３９】
（区分け）
各群のマウスには、固型飼料（オリエンタル酵母工業（株））及び水を自由摂取させた。
（１）対照群：蒸留水０．３ｍｌ／匹／日を１４日間強制経口投与した群（１２匹）
（２）Ｌ−５５株単独投与群：Ｌ−５５株菌体 ０．２ｍｇ／匹／日を１４日間強制経口投与した群（１２匹）
（３）Ｓ４−Ａ株単独投与群：Ｓ４−Ａ株菌体 ０．２ｍｇ／匹／日を１４日間強制経口投与した群（１２匹）
（４）併用投与群：Ｌ−５５株菌体０．１ｍｇ ＋ Ｓ４−Ａ株菌体０．１ｍｇ／匹／日を１４日間強制経口投与した群（１２匹）
【００４０】
（試験菌体の投与方法及び投与期間）
Ｌ−５５株およびＳ４−Ａ株の粉末菌体は蒸留水で懸濁した後、経口ゾンデでマウスに強制投与した。
Ｌ−５５株単独投与群にはＬ−５５株菌体を０．２ｍｇ（０．２ｍｇ／匹）、Ｓ４−Ａ株単独投与群にはＳ４−Ａ株菌体０．２ｍｇ（０．２ｍｇ／匹）、併用投与群にはＬ−５５株菌体とＳ４−Ａ株菌体をそれぞれ０．１ｍｇずつ、合計０．２ｍｇ（０．２ｍｇ／匹）を０．３ｍＬの蒸留水に懸濁して投与した。
【００４１】
投与期間は、初回感作２５日目以降，試験菌体を投与直前に蒸留水に懸濁して１日１回，２週間，連続経口投与した。また対照群には，０．３ｍＬの蒸留水を投与した。
【００４２】
（マウス鼻アレルギーモデルの作製）
卵白アルブミン（ＯＶＡ）０．１ｍｇ、水酸化アルミニウムゲル１ｍｇおよび百日咳毒素３００ｎｇを生理食塩液０．２ｍＬに溶解して、マウスに腹腔内注射し、初回感作とした。初回感作５日後に、追加感作としてＯＶＡ５０μｇを生理食塩液０．１ｍＬに溶解し、マウスの背部皮下に注射した。
さらに初回感作１８日目以降、局所感作として１日１回４週間ＯＶＡ５０ｍｇ／ｍＬの溶液を１μＬずつマイクロピペットで両側鼻腔に点鼻投与した。
【００４３】
（抗原誘発鼻炎症状の測定）
くしゃみ反応および鼻掻き行動（鼻炎症状）の測定１時間前に、試験食を投与した。測定開始前に、マウスを環境に慣らすため、観察用ケージ（３２×２２×１０ｃｍ）内に１０分間置き馴化させた。ＯＶＡ溶液（５０ｍｇ／ｍＬ）を１μＬずつ両側鼻腔に点鼻投与した直後より、マウスは観察用ケージに１匹ずつ入れ、誘発されるくしゃみ反応および鼻掻き行動の回数を６０分間測定した。
鼻炎症状の測定は、試験菌体投与期間には１週毎に初回感作２５，３２，３９日後に行い、試験菌体投与中止期間には、初回感作４２日後（中止３日目）および４６日後（中止１週目）に行った．
【００４４】
（血清総ＩｇＥ濃度の測定）
血液は，感作２５，３２，３９，４２，４６日目に尾静脈より採取し、４℃，７５５×ｇで１０分間遠心分離して血清を得た。血清は使用するまで−２０℃で保存した。
血清総ＩｇＥ濃度は、ｍｏｕｓｅ ＩｇＥ ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ （ＥＬＩＳＡ） ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｋｉｔ （ＢｅｔｈｙｌＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．）を用いて測定した。
【００４５】
試験結果：アレルギー抑制効果
（鼻炎症状の緩和）
抗原誘発鼻炎症状の測定結果を図１（イ）、図１（ロ）に示した。図１から明らかなように、Ｌ−５５株とＳ４−Ａ株のそれぞれ単独投与群では、投与２週目で対照群に比べ、鼻炎症状（くしゃみ反応と鼻掻き行動）が有意に抑制された。
一方Ｌ−５５株とＳ４−Ａ株の併用投与群では、投与１週目以降、対照群に比べ鼻炎症状が有意に抑制された。なお、図１中の*は有意水準０．０５未満（ｐ＜０．０５）、***は有意水準０．００５未満（ｐ＜０．００５）、****は有意水準０．００１未満（ｐ＜０．００１）であることを示している。
【００４６】
これらの結果から、Ｌ−５５株とＳ４−Ａ株を同時に摂取したときの方が、各菌体をそれぞれ単独で摂取したときよりも、鼻炎症状がより早く、そして強く緩和さることが明らかとなった。
さらに、試験菌体投与２週間後より１週間、試験菌体の投与を中止したところ、両菌体を同時に摂取したマウスでは、摂取を中止した３日後でも、鼻炎症状がより強く抑えられていた。
【００４７】
血清総ＩｇＥ濃度の測定結果は図２に示した。
図２から明らかなように、Ｌ−５５株あるいはＳ４−Ａ株の単独投与群と両菌体の併用投与群では、共に投与１週目以降、対照群に比べ血清総ＩｇＥ濃度が有意に低値を示したが、Ｌ−５５株とＳ４−Ａ株を同時に摂取したときの方が、血清総ＩｇＥ濃度がより低く抑えられていた。
なお、図２中の*は有意水準０．０５未満（ｐ＜０．０５）、**は有意水準０．０１未満（ｐ＜０．０１）、***は有意水準０．００５未満（ｐ＜０．００５）であることを示している。さらに、試験菌体投与２週間後より１週間、試験菌体の投与を中止したところ、両菌体を同時に摂取したマウスでは、摂取を中止した３日後でも、血清総ＩｇＥ濃度がより低く抑えられていた。
【００４８】
上記の結果より、Ｌ−５５株とＳ４−Ａ株の菌体は血清ＩｇＥ濃度の減少を介して、アレルギー性鼻炎の症状を緩和することが示唆された。
マウスの体重は約２０ｇであり、マウス１匹あたりの有効摂取量は、Ｌ−５５株およびＳ４−Ａ株の菌体が０．１ｍｇづつであることから、ヒト成人では、両菌体を同時に１日に体重１ｋｇあたりそれぞれ５ｍｇ以上摂取することにより、各菌体を単独で摂取したときよりも、より早くそして強く鼻炎症状が緩和されることになる。
さらに、摂取を中止した後でも、両菌体による抗アレルギー効果は一過性ではなく、数日間は持続することも期待できる。
【００４９】
（実施例２）
次にＬ−５５株とＳ４−Ａ株の菌体を共に含む組成物の製造方法について、その一例を記載するが、本発明は本発明の主旨を逸脱しない限り、実施例に限定されるものではない。
【００５０】
（Ｌ−５５株菌体の調製）
Ｌ−５５株のコロニーを、２％ペプトン、１％酵母エキス、２％ブドウ糖、０．０５％アスコルビン酸Ｎａ、０．１％ツイン８０、０．５％酢酸Ｎａ、０．２％リン酸二カリウムからなる液体培地１００ｍｌに接種し、３７℃で４８時間静置培養した。
続いて、この培養液を上記と同じ組成の液体培地１０リットルに移し、３７℃で４８時間静置培養した。培養終了後、遠心分離操作によって菌体を集め、さらに蒸留水で菌体を２回洗浄した。得られた菌体は１００ｍｌの蒸留水で再懸濁し、その後１２１℃、１０分間の殺菌処理を施したのち、凍結乾燥処理することによって粉末化した。
【００５１】
（Ｓ４−Ａ株菌体の調製）
ポテトデキストロース寒天培地上で増殖したサッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株のコロニーを、酵母エキス１％、ぶどう糖５％から成る液体培地１００ｍｌに接種し、３０℃で２４時間振とう培養した。
続いてこの培養液を上記と同じ組成の液体培地１０リットルに移し、３０℃で２４時間通気攪拌培養した。培養終了後、遠心分離によって菌体を集め、さらに蒸留水で菌体を２回洗浄した。
得られた菌体は１００ｍｌの蒸留水で再懸濁し、その後１２１℃、１０分間の殺菌処理を施したのち、凍結乾燥処理することによって粉末化した。
【００５２】
（乳酸菌と酵母菌の混合組成物の作製）
得られたＬ−５５株の乾燥菌体１０ｇとＳ４−Ａ株の乾燥菌体１０ｇをきれいな容器に測り取り、よく混ぜ合わせて目的の混合組成物を得た。
【００５３】
（実施例３）
次に、実施例２で得られたＬ−５５株の菌体とＳ４−Ａ株の菌体を共に含む組成物を使った抗アレルギー剤の製造方法について、その実施例を記載する。ソルビトール ８５ｇ
賦形剤 １０ｇ
実施例２で調製した菌体粉末 ５ｇ
合 計 １００ｇ
上記の混合物を、常法に従い打錠機にて硬度８０Ｎ（ニュートン）の錠剤（２５０ｍｇ／１錠）に加工した。
【００５４】
（実施例４）
次に、実施例２で得られたＬ−５５株の菌体とＳ４−Ａ株の菌体を共に含む組成物を使った抗アレルギー用果汁飲料の製造方法について、その実施例を記載する。
液糖（果糖５５％） １３００ｇ
濃縮パイン果汁（Ｂｘ６０） １２０ｇ
クエン酸（無水） ３０ｇ
パイン香料 １０ｇ
実施例２で調製した菌体粉末 １ｇ
水 ８５３９ｇ
上記の混合物を、常法に従いＨＴＳＴ殺菌後、容器に充填（１００ｇ／１本）した。
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明の抗アレルギー用組成物は、製造が容易であり、Ｌ−５５株の菌体およびＳ４−Ａ株の菌体を含有量を所定の範囲内とすることにより、日常的に摂取すると、Ｉ型アレルギー症状の改善が期待でき、且つ摂取中止後もその改善効果の持続が期待されるという顕著な効果を奏し、また本発明の抗アレルギー用組成物を含有する抗アレルギー剤および抗アレルギー食品は日常的に摂取することにより、Ｉ型アレルギー症状の改善が期待でき、且つ摂取中止後もその改善効果の持続が期待されるという顕著な効果を奏するので、産業上の利用価値は甚だ大きい。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株の菌体を含む培養物と、酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株の菌体を含む培養物を共に有効成分として含有し、且つ含まれるＬ−５５株の生菌数が５×１０9 個以上５０×１０9 個以下であり、Ｓ４−Ａ株の生菌数が２×１０8 個以上２０×１０8 個以下であることを特徴とする抗アレルギー用組成物。
【請求項２】
ラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株の菌体と酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株の菌体を、共に有効成分として含有し、且つ含まれるＬ−５５株の菌量が乾燥重量で５ｍｇ以上５０ｍｇ以下であり、Ｓ４−Ａ株の菌量が５ｍｇ以上５０ｍｇ以下であることを特徴とする抗アレルギー用組成物。
【請求項３】
請求項１あるいは請求項２記載の抗アレルギー用組成物を含有することを特徴とする抗アレルギー剤。
【請求項４】
請求項１あるいは請求項２記載の抗アレルギー用組成物を含有することを特徴とする抗アレルギー食品。
【請求項１】
ラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株の菌体を含む培養物と、酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株の菌体を含む培養物を共に有効成分として含有し、且つ含まれるＬ−５５株の生菌数が５×１０9 個以上５０×１０9 個以下であり、Ｓ４−Ａ株の生菌数が２×１０8 個以上２０×１０8 個以下であることを特徴とする抗アレルギー用組成物。
【請求項２】
ラクトバチルス・アシドフィルスグループ乳酸菌Ｌ−５５株の菌体と酵母菌サッカロミセス・セレビシエＳ４−Ａ株の菌体を、共に有効成分として含有し、且つ含まれるＬ−５５株の菌量が乾燥重量で５ｍｇ以上５０ｍｇ以下であり、Ｓ４−Ａ株の菌量が５ｍｇ以上５０ｍｇ以下であることを特徴とする抗アレルギー用組成物。
【請求項３】
請求項１あるいは請求項２記載の抗アレルギー用組成物を含有することを特徴とする抗アレルギー剤。
【請求項４】
請求項１あるいは請求項２記載の抗アレルギー用組成物を含有することを特徴とする抗アレルギー食品。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１０−２０９０１５（Ｐ２０１０−２０９０１５Ａ）
【公開日】平成２２年９月２４日（２０１０．９．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５８１８６（Ｐ２００９−５８１８６）
【出願日】平成２１年３月１１日（２００９．３．１１）
【出願人】（５９１０３３２８３）オハヨー乳業株式会社 (3)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年９月２４日（２０１０．９．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年３月１１日（２００９．３．１１）
【出願人】（５９１０３３２８３）オハヨー乳業株式会社 (3)
【Ｆターム（参考）】
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