抗セレクチン剤を用いる感染の治療および予防のための方法
肺感染症の治療および予防のための方法、特に、肺感染症と診断された患者に対する１種以上の抗セレクチン剤の投与を含む方法を開示する。肺への白血球動員を阻害する抗セレクチン剤は、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺炎、間質性肺炎、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、重症急性呼吸器候群（ＳＡＲＳ）、サルコイドーシス、嚢胞性線維症（ＣＦ）、気腫、喘息、喫煙者の咳、アレルギー、アレルギー性鼻炎、洞炎または肺線維症と関連する感染症などの肺感染症の治療に有益であることが判明している。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、抗セレクチン剤の投与により感染症、特に肺感染症を治療および予防するための方法を提供する。
【０００２】
政府権利の表明
本発明は、一部、アメリカ国立衛生研究所（助成金番号ＡＩ４３７８９）からの援助により成された。政府は、本発明に所定の権利を有し得る。
【背景技術】
【０００３】
背景
呼吸器感染後、気道上皮細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球および好中球などの炎症細胞型の動員および活性化を促進する、ケモカイン類などの一連のサイトカイン類を産生する。メッセージおよびジョンソン（Ｍｅｓｓａｇｅ ａｎｄ Ｊｏｈｎｓｏｎ）、２００４年、Ｊ．Ｌｅｕｋ．Ｂｉｏｌ．７５：５−１７頁。例えば、嚢胞性線維症の肺疾患は、しばしば慢性緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染に関連する過度の炎症応答を特徴とする。健常者と嚢胞性線維症の肺疾患の罹患者における気管支肺胞洗浄により、嚢胞性線維症患者では、炎症誘発性サイトカイン類が上昇するが、抗炎症性サイトカインであるインターロイキン−１０は無視できる量であることが示されている。クミール（Ｃｈｍｉｅｌ）ら、１９９９年、Ａｍ．Ｊ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１６０：２０４０−２０４７頁。他の炎症誘発性サイトカイン類もまた、肺感染症の病理に関係している。例えば、インターロイキン−１は、好中球浸潤をもたらし、ＩＬ−１のレベル上昇が気腫患者の胸膜液に見られた。シラ・メジアス（Ｓｉｌａ−Ｍｅｊｉａｓ）ら、１９９５年、Ｃｈｅｓｔ １０８：９４２−９４５頁。血液からの炎症細胞の浸潤は、白血球、内皮細胞および血小板上の細胞表面に発現される種々の接着分子により制御される。
【０００４】
細胞表面の糖タンパク質の一ファミリーである「セレクチン類」は、幾つかの例において、炎症領域に対する白血球の動員と遊走のメディエータとして確認されている。ラスキー（Ｌａｓｋｙ）、１９９２年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５８（５０８４）：９６４−９頁。例えば、セレクチン類は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）（ノグエラ（Ｎｏｇｕｅｒａ）ら、２００４年、Ｃｈｅｓｔ、１２５（５）：１８３７−４２頁）、喘息（スジョスワード（Ｓｊｏｓｗａｒｄ）ら、２００４年、Ｒｅｓｐｉｒａｔｉｏｎ ７１（３）：２４１−５頁）、反応性関節炎、リウマチ様関節炎（ＲＡ）および敗血症（クーリアラ（Ｋｕｕｌｉａｌａ）ら、２００４年、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．３３（１）：１３−８頁）などの病態の炎症過程に関係しており、ならびに皮膚、肺および消化管（レイおよびカンサス（Ｌｅｙ ａｎｄ Ｋａｎｓａｓ）、２００４年、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４（５）：３２５−３６頁）の炎症過程に関係している。さらに、炎症は、抗セレクチンブロッキングなどの抗接着ブロッキングによって減少することが示されている（米国特許第６，０３０，９４７号明細書を参照）。炎症誘発性サイトカイン類はまた、感染症治療に有益であることが示されている。（一般に、デューブ（Ｄｕｂｅ）ら、２００４年、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７２（６）：３５６１−７０頁、リベイロ（Ｒｉｂｅｉｒｏ）ら、２００４年、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７２（６）：３３９１−７頁、ケーデル（Ｋｏｅｄｅｌ）ら、２００４年、Ｂｒａｉｎ、４月２８日［印刷前の電子出版］を参照）。例えば、ＩＬ−１はまた、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、リーシュマニア属メジャー（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｍａｊｏｒ）、および結核菌（Ｍｙｏｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）による感染の封じ込めに関係している。例えば、ジャファーマンズ（Ｊｕｆｆｅｒｍａｎｓ）ら、２０００年、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８２（３）：９０２−８頁を参照されたい。
【０００５】
白血球動員はまた、感染症の根絶を助けるためにも有益である。例えば、創傷または感染部位への白血球動員は、感染範囲を制限することにより創傷または感染の寛解または根絶を助けるとの仮説が立てられている（米国特許第６，７１３，６０５号明細書、メッセージおよびジョンソン（Ｍｅｓｓａｇｅ ａｎｄ Ｊｏｈｎｓｏｎ）、２００４年、Ｊ．Ｌｅｕｋ．Ｂｉｏｌ．７５：５−１７頁）。したがって、抗炎症治療および抗接着ブロッキングはいずれも炎症の軽減に有益であることが示されているものの、炎症誘発活性は抗炎症活性よりも感染症の治療に有益であるとの本分野の専門家によるこれまでの結論を前提とすると、感染症自体の根絶のために上記治療を使用することは、逆であるように感じられるであろう。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
肺感染症は、致命的になり得る。１９７９年〜１９９４年まで、米国における肺炎およびインフルエンザに関する全体の死亡率は、おおむね１００，０００人当り２０．０人から３１．８人へと５９％増加した。１９７９年〜１９９２年までに、１９８０年の標準的人口に対する調整年令における肺炎およびインフルエンザの死亡率は、２０．４人から２４．８人へと２２％増加した。Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ ａｎｄ Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ Ｗｅａｋｌｙ Ｒｅｐｏｒｔ、１９９５年７月２１日。結核、肺真菌感染症および非定型肺感染症の発生率は、約２０年前のＡＩＤＳの出現以来、着実に上昇している。肺感染症を治療する新規な方法が必要である。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
概要
本発明者らは、驚くべきことに白血球動員を阻害する抗セレクチン剤が、感染症、特に肺感染症の治療および予防に有用であることを見出した。本発明は、抗セレクチン剤の治療的有効量を、肺感染症の治療または予防を必要とする患者に投与することを含む、肺感染症を治療または予防する方法を提供し、前記治療は肺内の病原体負荷を減少させる。
【０００８】
一実施形態において、本発明は、該抗セレクチン剤が、Ｅ−セレクチン、Ｌ−セレクチンまたはＰ−セレクチンもしくはそれらの組み合わせに結合する競合的結合剤である、肺感染症を治療する方法を提供する。一実施形態において、該抗セレクチン剤は、Ｅ−セレクチン、Ｐ−セレクチンまたはＬ−セレクチンもしくはそれらの組み合わせに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントである。好ましい実施形態において、該抗セレクチン剤は、０．０５ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの用量範囲で有効であるモノクローナル抗体である。該抗セレクチン剤は、約１ｍｇ／ｋｇの濃度で有効なモノクローナル抗体であることがより好ましい。好ましい一実施形態において、該抗セレクチン剤は、モノクローナル抗体、ＥＬ２４６である。
【０００９】
ある実施形態において、本発明は、病原菌により引き起こされた肺感染症を治療する方法を提供する。ある実施形態において、本発明は、細菌、ウィルス、真菌またはそれらの組み合わせにより引き起こされた肺感染症を治療する方法を提供する。好ましい実施形態において、本発明は、緑膿菌により引き起こされた細菌性肺感染症の治療方法および予防方法を提供する。より好ましい実施形態において、本発明は、肺疾患の急性増悪の頻度または重症度を予防または軽減する方法を提供する。
【００１０】
ある実施形態において、本発明は、対象の肺感染症を治療する方法を提供する。本発明の方法が有効であると思われる哺乳動物は、ウシ、ウマ、ヒツジおよびブタなどの農業用動物および家畜、ならびにイヌおよびネコなどのペット、また動物園で展示飼育されている外来動物を含む。より好ましい実施形態において、対象はヒトである。
【００１１】
ある実施形態において、本発明は、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺炎、間質性肺炎、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、サルコイドーシス、嚢胞性線維症（ＣＦ）、気腫、喘息、喫煙者の咳、アレルギー、アレルギー性鼻炎、洞炎または肺線維症を患っている対象における肺感染症を治療する方法を提供する。本発明はまた、接触伝染性および病原性が高い感染症の治療および予防のための抗テロリズムプラットフォームにおいて有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
発明の詳細な説明
定義。以下の用語は、本明細書に記載された意味を有する。
【００１３】
用語「肺」とは、肺組織、特に気道上皮における任意の部分を意味する。
【００１４】
用語「感染」とは、少なくとも１種の病原体の症候性コロニー化を意味する。症候性コロニー形成は、発熱、咳、痰の産生、痰の色の変化（通常透明から緑色）、痰の粘度増加、白血球数の増加、呼吸困難、倦怠感、胸の締付け、低酸素および／または胸膜炎胸痛など、感染症の他覚的または自覚的指標として顕れ得る。肺感染症は、例えば、パルス酸素飽和度測定法および動脈血ガスにより測定された血液のガス交換および酸素負荷の他覚的指標により評価できる。肺感染症はまた、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）時に回収された指標の存在および数により評価できる。指標は、肺感染症を患っているか、またはその疑いのある対象からＢＡＬを用いて回収された細胞、サイトカインまたはタンパク質であり得る。例えば、指標は、好中球、インターロイキン−８、インターロイキン−１ベータ、ミエロペルオキシダーゼ、タンパク質および全細胞数であり得る。
【００１５】
用語「症候性」は、感染した対象によって、または通常医療提供者若しくは介護者である他者によって、観察された、または認められた疾患または傷害の徴候である。
【００１６】
用語「コロニー形成」は、肺組織における病原体の確立である。
【００１７】
用語「治療する」、「処置する」、「治療すること」および「治療」とは、感染症の根絶、寛解、または軽減が意図されている処置または適用である。
【００１８】
用語「肺の病原体負荷を軽減する」または「肺の病原体負荷を減少させる」とは、コロニーの形成された対象における症状を引き起こす対象の気道内の病原微生物（細菌、ウィルスまたは真菌）数の相対的減少を意味する。病原微生物数の相対的減少とは、治療前の病原体負荷と比較して、治療後の罹患対象における病原体負荷の減少を意味する。
【００１９】
用語「ＩＣ５０」とは、増殖または活性が５０パーセント（５０％）阻害される阻害濃度を意味する。用語「ＥＣ５０」とは、ベースラインと最大応答との間で中間の応答を引き起こす有効濃度を意味する。
【００２０】
用語「急性増悪」および「複数の急性増悪」とは、肺疾患の重症度の急激な増大を意味する。急性増悪は、疾患症状の悪化、肺機能の有意な低下、咳嗽の増加、呼吸困難、痰の産生または痰の化膿として典型的に顕れる。ＣＯＰＤの急性増悪の約８０％は、例えば、環境の変化、汚染、医療措置のノンコンプライアンスなどの非感染性原因を伴う感染源（例えば、細菌またはウィルスにより引き起こされる）のものであり、他の約２０％がアレルギー因子によるものと推定されている。セチ（Ｓｅｔｈｉ）、２００２年、Ｊ．Ｒｅｓｐ．Ｄｉｓ．２３（４）：２１７−２５頁。
【００２１】
用語「動員」とは、白血球が、ローリング、シグナリングおよびスティッキングにより内皮細胞と相互作用する段階的過程を意味し、内皮細胞を介して感染部位への遊走をもたらす。白血球は、リンパ球、マクロファージ、単球、好中球、好酸球またはそれらの組み合わせであり得る。
【００２２】
本発明は、肺感染症の治療を必要とする対象に、治療的有効量の抗セレクチン剤を投与することを含む対象の肺感染症を治療する方法であって、前記治療が肺内の病原体負荷を減少させる方法を提供する。本発明は、抗感染治療をより少なくまたはまったく使用せずに、感染症を除去する身体能力を増加させることにより肺生理機能を改善させる方法を提供する。さらに本発明は、肺疾患の急性増悪の頻度または重症度を予防するかまたは軽減させる方法を提供する。
【００２３】
哺乳動物系における感染性病原生物の存在は、多くの宿主応答を開始させる。第１の防御系は、皮膚、粘膜および絨毛などの物理的障壁に由来する。この防御に続いて、一般に病原体を直接溶解し、病原体を破壊する多数のメディエーターが放出される。動員された炎症細胞は、オプソニン作用化および非オプソニン作用化細胞の食作用を介して病原体のクリアランスまたは分解をも促進する。適応される免疫応答には、中和抗体の産生およびリンパ球、マクロファージ、単球、好中球および好酸球などの種々の免疫細胞の応答が含まれる。
【００２４】
しかしながら、炎症応答は、全体的に役立たない。免疫細胞の流入はまた、さらなる炎症を誘導する種々のサイトカイン、および反応性酸素種などの毒性化合物の放出により組織損傷を負わせ得る。気道において、この炎症過程は、特に破壊的であり得る。肺の構造は、下記により詳細に考察されているように薄い肺胞膜を通過してガス交換を可能にする。過度のまたは不適切な炎症応答の代償として、肺胞表面積が減少し、ガス交換が減少され得る。したがって、呼吸器感染症に対する免疫応答は、迅速かつ効率的でなければならない。
【００２５】
多くの場合、炎症減少および正常な細胞生理機能へ回復後、身体は感染症を除去するであろう。例えば、ハンタウィルスの病原学的原因による感染は、好中球の動員を引き起こす。好中球の流入により、血管壁が損傷され、肺の胸膜腔への血清漏れおよび肺内における体液蓄積を生じさせる。ハンタウィルスに関して許容される療法は、身体が感染ウィルスを消去する一方での対症療法からなる。
【００２６】
同様の病理が、カリニ肺炎（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ）による感染中に働く。カリニ肺炎感染の際、好中球は迅速に動員され、肺内の液体蓄積のために肺損傷が生じる。身体が感染ウィルスを消去する間やはり、対症療法が施される。しかしながら、これらの例のいずれの場合も、対症療法を攻撃的に遂行しなければならず、死亡が生じることが依然として多い。
【００２７】
肺解剖学および生理機能
肺は、ガス交換を担っており、その重要な機能により、精密な構造が要求される。肺の各々は、肺胞として知られている二重の膜に囲まれている。右肺は、より大きく、３枚の葉に分けられるが、左肺は、２枚の葉に分けられている。これらの葉は、気管支区域にさらに分けられ、その各々は、区域気管支を有する。気管は、肺の２つの主要管−右気管支および左気管支に分岐する。肺内の気管支は、再び分岐され、第２および第３の気管支を形成し、次いでより小型の細気管支、最後に末端細気管支を形成する。末端気管支の末端に肺胞がある。全体で気管と肺胞との間に約２５の区分があり、管構造は、気管から末端細気管支へ漸次変化している。（メルク（Ｍｅｒｃｋ）マニュアル、第１７版、６３章、Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、第１０版、グイトンおよびホール（Ｇｕｙｔｏｎ ａｎｄ Ｈａｌｌ）編集、２０００年、エルセビア（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）、Ｈｕｍａｎ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、シルバーソーン（Ｓｉｌｖｅｒｔｈｏｒｎ）、２０００年、プレンティス・ホール（Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ）、およびＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ａｎａｔｏｍｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、第１０版、トートラ（Ｔｏｒｔｏｒａ）ら編集、２００２年、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ）を参照）。
【００２８】
上気道は、軟骨および平滑筋を含む壁、絨毛および粘膜分泌ゴブレット細胞を有する上皮内層、ならびに内分泌細胞がある。下気道には、軟骨はなく、漸次薄くなる筋肉層、絨毛細胞の単層はなく、ゴブレット細胞および界面活性剤様物質を産生する粒状クラーラ細胞はごくわずかしかない。
【００２９】
肺胞嚢は、末端細気管支の末端に肺胞群から形成される。各肺は、約３億の肺胞を含有し、全表面積は約４０〜８０ｍ２となる。肺胞の上皮内層は、主としてガス交換のための薄層を備えるＩ型肺細胞からなる。それらは、密な結合によりＩＩ型肺細胞に結合している。これらの密な結合により、肺胞内外の流体移動が制限される。ＩＩ型肺細胞は、Ｉ型肺細胞よりも多いが、覆っている上皮はより少ない。それらは、肺界面活性剤を産生する液胞を含有する。肺胞はまた、マクロファージを含有する。（メルク（Ｍｅｒｃｋ）マニュアル、第１７版、６３章、Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、第１０版、グイトンおよびホール（Ｇｕｙｔｏｎ ａｎｄ Ｈａｌｌ）編集、２０００年、エルセビア（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）、Ｈｕｍａｎ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、シルバーソーン（Ｓｉｌｖｅｒｔｈｏｒｎ）、２０００年、プレンティス・ホール（Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ）、およびＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ａｎａｔｏｍｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、第１０版、トートラ（Ｔｏｒｔｏｒａ）ら編集、２００２年、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ）を参照されたく、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される）。
【００３０】
ガス交換は、細気管支のレベルで生じる。肺胞には、ガス交換のために約３０ｍ２の大きな表面積を供するキャピラリの拡散ネットワークが備わっている。（一般に、米国特許第６，１７５，７５５号明細書、ラビリスおよびドロビッチ（Ｌａｂｉｒｉｓ ａｎｄ Ｄｏｌｏｖｉｃｈ）、２００３年、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５６（６）：５８８−９９頁、ラビリスおよびドロビッチ（Ｌａｂｉｒｉｓ ａｎｄ Ｄｏｌｏｖｉｃｈ）、２００３年、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５６（６）：６００−１２頁を参照）。
【００３１】
吸入された空気からの酸素は、肺胞を通過して血流内に入る。次に血液は、肺静脈を経て心臓の左側に入り、そこから全身にポンプで送り込まれる。身体の全ての領域から心臓右側に戻る脱酸素化された血液は、肺動脈を経て肺にポンプで戻る。二酸化炭素は、肺胞を囲んでいる毛細管を通って肺胞空間内に入り、呼気される。
【００３２】
対象の酸素負荷度は、肉眼観察および客観的手段の双方により評価できる。肉眼観察としては、特に四肢および爪床における色の変化を挙げることができる。客観的手段としては、パルス酸素飽和度測定法または動脈血ガスレベルによる酸素飽和度判定を挙げることができる。パルス酸素飽和度測定法および動脈血ガス（ＡＢＧ）の双方とも、血中酸素の部分大気圧（ＰａＯ２）の目安である。パルス酸素飽和度測定法は、ＰａＯ２を測定する好適な間接的方法であり、一般に利用できる。肺疾患のない安静状態の個体は、一般に約９５〜１００％のパルス酸素飽和度測定器の読取を有する。９７％のパルス酸素飽和度測定器の指標は、約９７ｍｍＨｇのＰａＯ２に相関する。９０％のパルス酸素飽和度測定器の指標は、危険な低さである約６０ｍｍＨｇのＰａＯ２に相関する。８０％のパルス酸素飽和度測定器の指標は、重篤な低酸素症を示す約４５ｍｍＨｇのＰａＯ２に相関する。（一般に、ビアマン（Ｂｉｅｒｍａｎ）ら、１９９２年、Ｃｈｅｓｔ、１０２（５）：１３６７−７０頁、ゲイ（Ｇａｙ）、２００４年、Ｒｅｓｐ．Ｃａｒｅ ４９（１）：３９−５１頁、デイビーズ（Ｄａｖｉｅｓ）ら、２００３年、Ｎ．Ｚ．Ｍｅｄ．Ｊ．１１６（１１６８）：Ｕ２９７頁、ケイシー（Ｃａｓｅｙ）、１９９７年、Ｎｕｒｓ．Ｓｔａｎｄ．１５（４７）：４６−５３頁およびミドルトンおよびヘンリー（Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｈｅｎｒｙ）、２０００年、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｒａｃｔ．５４（７）：４３８−４４頁を参照されたく、それらの各々は参照としてそれらの全体が本明細書に援用される）。
【００３３】
ある実施形態において、肺感染症の治療により、感染対象における≧約９０％、≧約９３％、≧約９５％、≧約９７％のパルス酸素飽和度測定レベルを提供できる。ある実施形態において、肺感染症の治療により、約６０ｍｍＨｇ、約７０ｍｍＨｇ、約７５ｍｍＨｇ、約８０ｍｍＨｇ、約８５ｍｍＨｇ、約９０ｍｍＨｇ、約９５ｍｍＨｇ、または約９７ｍｍＨｇのＰａＯ２を提供できる。
【００３４】
気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）は、光ファイバースコープを対象の肺に入れ、滅菌水（生理食塩水）を肺に注入し、引き続き水を除去することによって実施される診断法および治療法である。除去された滅菌水は、下気道からの分泌物、細胞、およびタンパク質を含有する。ＢＡＬにより得られたサンプルは、下記の実施例１に記載されているように、肺で進行する可能な疾患過程についてさらなる情報を得るために分析できる。さらに、確認される炎症細胞および免疫細胞の補体ならびに炎症伝達物質もまた、肺の病態を評価する上で有用であり得る。（一般に、サンチェズ・ニート（Ｓａｎｃｈｅｚ Ｎｉｅｔｏ）ら、１９９５年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１４（１０）：８３９−５０頁、アロラ（Ａｒｏｒａ）ら、２００２年、Ａｎａｅｓｔｈ．Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｒｅ ３０（１）：１１−２０頁、フィオリニ（Ｆｉｏｒｉｎｉ）ら、２０００年、Ｂｉｏｍｅｄ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．５４（５）：２７４−８頁、ジャージョア（Ｊａｒｊｏｕｒ）ら、２０００年、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０５：１１６９−７７頁、およびバレス（Ｖａｌｌｅｓ）ら、１９９４年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１３（７）：５４９−５８を参照されたく、それらの各々は参照としてその全体が本明細書に援用される）。
【００３５】
肺活量測定法は、本発明の方法と関連して肺機能をモニターするために使用できる。肺活量測定法は、対象が周期性呼吸から全肺容量（ＴＬＣ）まで最大に吸引し、次いで、さらなる容量が、残容量（ＲＶ）で吐き出されなくなるまで素早く最大限に吐き出す操作である。この操作は、努力肺活量（ＦＶＣ）測定を生じさせる強制様式で、または緩徐肺活量（ＳＶＣ）測定を生じさせる緩和様式で実施する。正常な個人において、吸気性肺活量、呼気性ＳＶＣ、および呼気性ＦＶＣは、本質的に等しい。しかしながら、閉塞性気道疾患患者においては、呼気性ＳＶＣは、一般にＦＶＣよりも高い。肺容量曲線から生じた値により、空気流量（１秒間の強制呼気容量、または他の時限容量でのＦＥＶ１）および呼息肺容量（ＦＶＣまたはＳＶＣ）など、肺の力学的性質に関するデータを提供する。この測定は、一般的に容量に関してはリットルまたは流量に関しては１秒当りのリットルで表され、体温および水蒸気で飽和されるガス圧に関しては補正できる。（Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ｔｅｓｔｉｎｇ：Ｂａｓｉｃｓ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎ、ギルデア（Ｇｉｌｄｅａ）ら編集、クリーブランド・クリニック出版社（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）２００２年、Ａｎｅｒｉｃａｎ Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｏｃｉｅｔｙ、１９９５年、Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｐｉｒｏｍｅｔｒｙ、１９９４年Ｕｐｄａｔｅ，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１５２：１１０７−１１３６頁、Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ｔｅｓｔｉｎｇ，Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｖｅｒｓｉｅｓ：Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ，Ｍｅｔｈｏｄｓ，ａｎｄ Ｎｏｒｍａｌ Ｖａｌｕｅｓ、クラウセンおよびザリンス（Ｃｌａｕｓｅｎ ａｎｄ Ｚａｒｉｎｓ）編集、ニューヨーク：アカデミックプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）、１９８２年、ベックレーク（Ｂｅｃｋｌａｋｅ）ら、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．１４４：１２０２−１２１８頁、クラポ（Ｃｒａｐｏ）ら、１９８１年、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．１２３：６５９−６６４頁およびクヌードソン（Ｋｎｕｄｓｏｎ）ら、１９８３年、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．１２７：７２５−３４頁を参照されたく、それらの各々は参照としてその全体が本明細書に援用される）。
【００３６】
痰サンプリングおよび培養もまた、診断を補助し、治療を導くために、本発明の方法と関連して使用できる。痰サンプルは、喀痰法または痰誘導法により採取できる。さらに、呼気凝縮法は、炎症伝達物質などの呼気の非ガス状成分の非侵襲的採取に有用であり得る（エコスクリーン（ＥｃｏＳｃｒｅｅｎ）；Ｊａｅｇｅｒ，Ｗｕｅｒｚｂｕｒｇ、独国））。採取痰からの微生物単離体は、当業界に周知である標準的な方法により同定できる。（ボガート（Ｂｏｇａｅｒｔ）ら、２００４年、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７２（２）：８１８−２３頁、クソマ（Ｃｓｏｍａ）ら、２００２年、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１６６（１０）：１３４５−１３４９頁、ヘニッグ（Ｈｅｎｉｇ）ら、２００１年、Ｔｈｏｒａｘ ５６（４）：３０６−１１頁、ギブソン（Ｇｉｂｓｏｎ）、１９９８年、Ｃａｎ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．５ Ｓｕｐｐｌ Ａ：２２Ａ−６Ａを参照されたく、それらの各々は参照としてその全体が本明細書に援用される）。
【００３７】
肺感染症
ある実施形態において、本発明は、肺感染症を治療する方法を提供する。肺感染症は、任意の病原体または肺感染症を引き起こす病原体の組み合わせに由来し得る。ある実施形態において、病原体は、細菌、ウィルス、真菌またはそれらの組合せであり得る。
【００３８】
本発明の方法により処置される細菌病原体は、地域感染型、日和見感染性またはバイオテロリストの薬剤であり得る。グラム陽性、グラム陰性、桿菌、球菌および異型細菌として分類された細菌は、本発明の範囲に包含される。このような細菌病原体としては、限定はしないが、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、表在性ブドウ球菌（Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、サプロフィチカスブドウ球菌（Ｓ．ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ）などのブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）種；肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、サングイス連鎖球菌（Ｓ．ｓａｎｇｕｉｓ）、オラリス連鎖球菌（Ｓ．ｏｒａｌｉｓ）、唾液連鎖球菌（Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、ミュータンス連鎖球菌（Ｓ．ｍｕｔａｎｓ）、化膿連鎖球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）などの連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）種；バークホルデリラ・セパシア（Ｂｕｒｋｈｏｌｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）、肺炎クラミジア（Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）などのクラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）種、アクチノバチルス・アクチノミセテムコミタンス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ）などのアシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）種；カルジオバクテリウム・ホミニス（Ｃａｒｄｉｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈｏｍｉｎｉｓ）、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、カタル球菌（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）（また時には、モラクセラ・カタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）として分類される）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）などのシュードモナス菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種；大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）種、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）種、霊菌（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）およびパラインフルエンザ菌（Ｈ．ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）などのヘモフィラス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）種；レジオネラ・ニューモフィラ菌（Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、エル・ミクダデイ（Ｌ．ｍｉｃｄａｄｅｉ）、エル・ボゼマニ（Ｌ．ｂｏｚｅｍａｎｉｉ）およびエル・デュモフィ（Ｌ．ｄｕｍｏｆｆｉｉ）などのレジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）種；肺炎マイコプラズマ（Ｍ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）およびウシ型結核菌（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）などのマイコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種；およびアリカリゲネス（Ａｌｋａｌｉｇｅｎｅｓ）種、カルジオバクテリウム（Ｃａｒｄｉｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種およびエイケネラ（Ｅｉｋｅｎｅｌｌａ）種などのグラム陰性桿菌、が挙げられる。また、例えば、肺炎マイコプラズマ（Ｍ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を含むマイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）種などの異型細菌が挙げられる。（メルク（Ｍｅｒｃｋ）マニュアル、第１７版、ビアーズおよびバーコウ（Ｂｅｅｒｓ ａｎｄ Ｂｅｒｋｏｗ）編集、２００４年、メルク（Ｍｅｒｃｋ）社、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｃａｒｅ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ、グローエンウェーゲンおよびウォーターズ（Ｇｒｏｅｎｅｗｅｇｅｎ ａｎｄ Ｗｏｕｔｅｒｓ）、２００３年、Ｒｅｓｐｉｒ．Ｍｅｄ．９７（７）：７７０−７頁、レロ（Ｒｅｌｌｏ）ら編集、２００１年、クルーワー・アカデミック出版社（Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）、ボストン、Ｋｒｕｇｍａｎ’ｓ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ、第１０版、カッツ（Ｋａｔｚ）ら編集、モスビー（Ｍｏｓｂｙ）、セントルイス、これらは、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される）。
【００３９】
本発明の方法に包含されているウィルス感染症としては、限定はしないが、リノウィルス、呼吸器合胞体ウィルス、パラインフルエンザウィルス、インフルエンザＡおよびＢウィルス、アデノウィルス、ピコルナウィルス、水痘帯状疱疹ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、コクサッキーウイルス、ＳＡＲＳ−関連コロナウィルス（ＳＡＲＳ−ＣｏＶ）などのコロナウィルス、シン・ノブレ（Ｓｉｎ Ｎｏｍｂｒｅ）ウィルス、（ハンタウィルスに関する原因物質）およびサイトメガロウィルスが挙げられる。（フィートおよびノイエス（Ｆｅｔｅ ａｎｄ Ｎｏｙｅｓ）１９９６年、Ｐｅｄｉａｔｒ．Ａｎｎ．２５：５７７−８４頁；フェルドマンおよびストークス（Ｆｅｌｄｍａｎ ａｎｄ Ｓｔｏｋｅｓ）、１９８７年、Ｓｅｍｉｎ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｉｎｆｅｃｔ．２：８４−９４頁；フランクおよびフリードマン（Ｆｒａｎｋ ａｎｄ Ｆｒｉｅｄｍａｎ）１９８８年Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１０９：７６９−７１頁；グラマンおよびホール（Ｇｒａｍａｎ ａｎｄ Ｈａｌｌ）、１９８９年、Ｓｅｍｉｎ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｉｎｆｅｃｔ．４：２５３−６０頁；グリーンバーグ（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ）１９９１年、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．５：６０３−２１頁；ジャコブソンおよびミルズ（Ｊａｃｏｂｓｏｎ ａｎｄ Ｍｉｌｌｓ）、１９８８年、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｓｔ Ｍｅｄ．９：４４３−８頁；ラタム・サドラーおよびモレル（Ｌａｔｈａｍ−Ｓａｄｌｅｒ ａｎｄ Ｍｏｒｅｌｌ）１９９６年、Ｐｒｉｍ．Ｃａｒｅ．２３：８３７−４８頁；リュングマン（Ｌｊｕｎｇｍａｎ）１９９５年、Ｓｅｍｉｎ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｉｎｆｅｃｔ．１０：２０９−１５頁；ｗｅｂｓｉｔｅ ｆｏｒ Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ；セチ（Ｓｅｔｈｉ）、２００２年、Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．２３（４）：２１７−２５頁、タン（Ｔａｎ）ら、２００３年、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．１１５（４）：２７２−７頁、ホッグ（Ｈｏｇｇ）、２００１年、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１６４（１０Ｐｔ２）：Ｓ７１−５頁を参照されたく、それら各々の内容は、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される）。
【００４０】
ある実施形態において、本発明の方法により処置された肺感染症は、真菌により引き起こされる。本発明の方法により包含される真菌類としては、カリニ肺炎（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉ）（現在、原虫よりも真菌として考慮されている）、ブラストミセス・デルマティティディス（Ｂ．ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）などのブラストミセス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ）種；クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）種、カンジダアルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）などのカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）種；アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、エイチ・カプスラーツム（Ｈ．ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）などのヒストプラズマ（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）種；コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、スポロトリクス・シェンキー（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｋｉｉ）およびアンフィビオラム（ａｍｐｈｉｂｉｏｒｕｍ）ケカビ、シルシネロイデス（ｃｉｒｃｉｎｅｌｌｏｉｄｅｓ）ケカビ、ヒエマリス（ｈｉｅｍａｌｉｓ）ケカビ、インジカス（ｉｎｄｉｃｕｓ）ケカビ、ラセモサス（ｒａｃｅｍｏｓｕｓ）ケカビ、およびラモシッシムス（ｒａｍｏｓｉｓｓｉｍｕｓ）ケカビなどのケカビ（Ｍｕｃｏｒ）種が挙げられる。（アルノウ（Ａｒｎｏｗ）ら、１９９１年、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１６４：９９８−１００２頁；レンチノ（Ｌｅｎｔｉｎｏ）ら、１９８２年、Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１１６：４３０−４３７頁；ディクソン（Ｄｉｘｏｎ）ら、２００４年、Ｐｈａｒｍａｃｏｅｃｏｎｏｍｉｃｓ ２２（７）：４２１−３３頁；チラー（Ｃｈｉｌｌｅｒ）ら、２００３年、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．１７（１）：４１−５７頁、ｖｉｉｉ；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｏｒｙ Ｍｙｃｏｌｏｇｙ第４版アレクソポウロス（Ａｌｅｘｏｐｏｕｌｏｓ）ら編集、１９９６年、ジョン・ワイリー（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ）、ニューヨーク；アナイシー（Ａｎａｉｓｓｉｅ）ら編集、１９８６年、Ｃａｎｃｅｒ、５７：２１４１−２１４５頁；デレシンスキー（Ｄｅｒｅｓｉｎｓｕｋｉ）２００３年、Ｓｅｍｉｎ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｉｎｆｅｃｔ．１８（３）：２１６−９頁を参照されたく、それら各々の内容は、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される）。
【００４１】
本発明の方法は、バイオテロリズムの行動によって与えられる肺感染症の治療に使用できる。バイオテロリストの薬剤となる可能性のあると確認された作用物質は、バイオテロリズムの脅威より前から知られているものであるが、それらの患者数は、高い病原性にもかかわらず比較的低かった。このような感染作用物質としては、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、天然痘、サル痘ウィルス、ブルセラ症（Ｂｒｕｃｅｌｌａｓｉｓ）種、野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）（野兎病の原因物質）、ペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ）（ペストの原因物質）およびエボラ（Ｅｂｏｌａ）ウィルスが挙げられる。ジョーンズ（Ｊｏｎｅｓ）ら、２００３年、Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．９（９）：９８４−６頁、シュリーワー（Ｓｃｈｒｉｅｗｅｒ）２００４年、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６９：２８９−３０８頁、グイホット（Ｇｕｉｈｏｔ）、２００４年、Ｐｒｅｓｓ Ｍｅｄ．３３（２）：１１９−２２頁、ハンおよびズント（Ｈａｎ ａｎｄ Ｚｕｎｔ）、２００３年、Ｃｕｒｒ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｐ．（３）：４７６−８２頁、クルグ（Ｋｒｕｇ）２００３年、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．２００３年、５７（１〜２）：１４７−５０頁、ホィットリー（Ｗｈｉｔｌｅｙ）、２００３年、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．５７（１〜２）：７−１２頁およびクンハ（Ｃｕｎｈａ）、２００２年、Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．（８）：４８９−５０３頁を参照されたく、それらの各々は、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される。
【００４２】
本発明の方法は、肺感染症の治療を提供し、該治療は、肺中の病原体負荷を減少させる。一定の肺疾患およびアレルギーは、対象が彼らの病態を悪化させ得る肺感染症に罹りやすくする。これらの肺疾患およびアレルギーを有する対象は、本発明の方法により利益を得ることができる。例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）または慢性気管支炎に患っている対象は、感染症になると疾患の急性増悪を経験する可能性がある。これらの疾患における急性増悪は、しばしば対象の生活の質および肺機能に重大な負の影響を与える。例えば、ＣＯＰＤに患っている対象は、典型的に１年に１回から３回の悪化を経験し、米国だけで毎年約５００，０００人の入院の原因となっている。急性増悪は、細菌、真菌またはウィルス病原体、またはそれらの組合せにより発生し得る。ＣＯＰＤまたは慢性気管支炎の対象においてこのような急性増悪の原因となる細菌病原体としては、典型的にインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）および緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）が挙げられ、一方、ウィルス病原体としては、典型的にリノウィルス、呼吸器合胞体ウイルスおよびインフルエンザウィルスが挙げられる。アーロン（Ａａｒｏｎ）ら、２０００年、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１６３：３４９−３５５頁、バンジ（Ｂａｎｄｉ）ら、２００３年、ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３７（１）：６９−７５頁、ボガート（Ｂｏｇａｅｒｔ）ら、２００４年、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７２（２）：８１８−２３頁、カーン（Ｋｈａｎ）ら、２００３年、Ｊ．Ｐａｋ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．５３（８）：３３８−４５頁、グローエンウェーゲンおよびウォーターズ（Ｇｒｏｅｎｅｗｅｇｅｎ ａｎｄ Ｗｏｕｔｅｒｓ）、２００３年、Ｒｅｓｐｉｒ．Ｍｅｄ．９７（７）：７７０−７頁、ソトおよびバーキー（Ｓｏｔｏ ａｎｄ Ｖａｒｋｅｙ）、２００３年年Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｕｌ．Ｍｅｄ．２００３年、９（２）：１１７−２４頁、ミラビトルズ（Ｍｉｒａｖｉｔｔｌｅｓ）、２００２年、Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．Ｓｕｐｐｌ．３６：９ｓ−１９ｓ頁、リーバーマン（Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ）ら、２００２年、Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．１９（３）：３９２−７頁を参照されたく、それらの各々は、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される。
【００４３】
急性増悪はまた、多くの場合、呼吸器ウィルス（リノウィルス、アデノウィルス、ピコルナウィルスおよびインフルエンザウィルス）または細菌（肺炎クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびレジオネラ・ニューモフィラ菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ））感染により引き起こされる喘息に患っている対象に生じる。喘息に患っている対象における急性増悪は、肺への好中球および好酸球双方の浸出に関係するが、好中球応答が典型的に優勢である。ワーク（Ｗａｒｋ）ら、２００１年、Ｍｏｎａｌｄｉ Ａｒｃｈ．Ｃｈｅｓｔ．Ｄｉｓ．５６（５）：４２９−３５頁、ジャージャー（Ｊａｒｊｏｕｒ）ら、２０００年、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０５：１１６９−７７頁、ワーク（Ｗａｒｋ）ら、２００２年、Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．１９（１）：６８−７５頁、ワーク（Ｗａｒｋ）ら、２００２年、Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．２０（４）：８３４−４０頁、ギブソン（Ｇｉｂｓｏｎ）ら、１９９９年、Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｐｕｌｍｏｎｏｌ．２８（４）：２６１−７０、タン（Ｔａｎ）ら、２００３年、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．１１５（４）：２７２−７頁、ツワッデル（Ｔｗａｄｄｅｌｌ）ら、１９９６年、Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．９（１０）：２１０−８頁を参照されたく、それらの各々は、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される。
【００４４】
嚢胞性線維症肺疾患は、過度の炎症応答を特徴とし、慢性緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染を伴うことが多い。健常な対象および嚢胞性線維症に患っている肺疾患対象における気管支肺胞洗浄液で、嚢胞性線維症に患っている対象では、炎症誘発性サイトカイン類が上昇するが、抗炎症サイトカインインターロイキン−１０の量は無視できるものであることが示された。チミール（Ｃｈｍｉｅｌ）ら、１９９９年、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１６０：２０４０−２０４７頁、また、シルバ・メジアス（Ｓｉｌｖａ−Ｍｅｊｉａｓ）ら、１９９５年、Ｃｈｅｓｔ １０８：９４２−９４５頁を参照されたい。
【００４５】
ある実施形態において、本発明の方法は、ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、肺炎、間質性肺炎、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、重症の急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、サルコイドーシス、嚢胞性線維症、気腫、喘息、喫煙者の咳、アレルギー、アレルギー性鼻炎、洞炎または肺線維症に患っている対象の治療を提供する。
【００４６】
本発明のある実施形態において、該方法は、ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、肺炎、間質性肺炎、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、重症の急性呼吸困難症候群（ＳＡＲＳ）、サルコイドーシス、嚢胞性線維症、気腫、喘息、喫煙者の咳、アレルギー、アレルギー性鼻炎、洞炎または肺線維症に患っている対象における肺症状の急性増悪の軽減を提供する。
【００４７】
肺感染症の指標としては、気管支肺胞洗浄液中のインターロイキン−１、インターロイキン−８、インターロイキン−１０、タンパク質およびミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）細胞の増加を挙げることができる。ある実施形態において、本発明の方法は、処置がＢＡＬを介して評価できる肺感染症の治療を提供する。ある実施形態において、該方法により、感染対象からの気管支肺胞洗浄液中のインターロイキン−１、インターロイキン−８、タンパク質およびＭＰＯ細胞の減少が提供される。ある実施形態において、該方法により、咳の減少、痰着色の消去、痰量の減少、呼吸困難の減少または除去、皮膚または爪床の色またはパルス酸素飽和度測定により示される酸素負荷の改善により顕れる、肺疾患における急性増悪の減少が提供される。
【００４８】
抗セレクチン剤
多くの細胞接着分子は、炎症過程に関与していることが知られている。炎症部位において、白血球は、血管外遊出の前に先ず血管内皮細胞に結合する。糖タンパク質細胞接着ファミリーのメンバーであるセレクチン類は、内皮細胞に対する白血球の最初の接着に重要な役割を演じるが、インテグリン類およびＩｇスーパーファミリーのメンバーなどの他の接着分子は、後期過程に関与すると考えられている。セレクチン類およびそれらの炭水化物リガンド類により媒介される細胞接着は、内皮層への白血球の結合およびローリングを引き起こすことにより、第２の堅固な接着および内皮細胞表面に存在するインターロイキン（ＩＬ−８）またはＭＩＰ１−ベータなどの炎症ケモカイン類の作用により活性化されるインテグリン類により媒介されるシグナル伝達がもたらされる。（ラスキー（Ｌａｓｋｙ）、１９９２年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５８（５０８４）：９６４−９頁）。
【００４９】
該セレクチン類は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）（ノグエラ（Ｎｏｇｕｅｒａ）ら、２００４年、Ｃｈｅｓｔ １２５（５）：１８３７−４２頁）、喘息（スジョスワード（Ｓｊｏｓｗａｒｄ）ら、２００４年、Ｒｅｓｐｉｒａｔｉｏｎ ７１（３）：２４１−５頁）、反応性関節炎、リウマチ様関節炎（ＲＡ）、および敗血症（クーリアラ（Ｋｕｕｌｉａｒａ）ら、２００４年、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．３３（１）：１３−８頁）などの疾患状態の炎症過程、ならびに皮膚、肺および腸管の炎症過程（また、レイおよびカンサス（Ｌｅｙ ａｎｄ Ｋａｎｓａｓ）、２００４年、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４（５）：３２５−３６頁、クーリアラ（Ｋｕｕｌｉａｒａ）ら、２００４年、Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．２００４年３月３日［印刷前の電子出版］を参照）に関係があるとされている。
【００５０】
セレクチンファミリーは、３つのメンバーＥ−、Ｐ−およびＬ−セレクチンからなる。Ｅ−セレクチンリガンドとＰ−セレクチンリガンドとの間には特性に幾つかの重要な違いがある。例えば、白血球上のＰ−セレクチンリガンドはプロテアーゼ感受性であるが、一方、Ｅ−セレクチンは、プロテアーゼ処理に対して高い耐性がある。Ｌ−セレクチンが、炎症での白血球動員においてＥ−およびＰ−セレクチンと同じように重要な役割を演じるかどうかは依然として論争の的になっている。Ｌ−セレクチンは、主として白血球の末端リンパ節への生理的ホーミングに関与することが示唆されている。Ｐ−セレクチンは軽症喘息の感受性マーカーとして使用できる。（ノグエラ（Ｎｏｇｕｅｒａ）ら、２００４年、Ｒｅｓｐｉｒａｔｉｏｎ ７１（３）：２４１−５頁、スジョスワード（Ｓｊｏｓｗａｒｄ）ら、２００４年、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．３３（１）：１３−８頁、米国特許第６，２０４，００７号明細書）。
【００５１】
本発明の方法は、抗セレクチン剤の投与による肺感染症の治療を提供する。本発明のある実施形態において、抗セレクチン剤は、好中球、単球および好酸球の動員および遊走など、白血球の動員または遊走を阻害する。本発明のある実施形態において、抗セレクチン剤は、セレクチンとそのリガンドとの相互作用をさえぎるためにセレクチンに競合的に結合する薬剤であり得る。本発明のある実施形態において、抗セレクチン剤は、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、小型分子、セレクチンアンタゴニストの遺伝子送達またはそれらの組み合わせであり得る。
【００５２】
白血球の動員または遊走の阻害は、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにより測定できる。一実施形態において、該アッセイは、下記に詳細に記載されているＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）アッセイであり得る。ある実施形態において、該方法は、約４０％のローリング阻害、約５０％のローリング阻害、約６０％のローリング阻害または約７０％のローリング阻害を提供する。
【００５３】
ある実施形態において、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）を、本発明の方法に使用できる。Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）アッセイは、表面プラズモン共鳴技術を用いて生体分子結合の検出およびモニタリングを提供する。これらのアッセイにより、生体分子間の結合相互作用に関するリアルタイム定量データが提供される。Ｂｉａｃｏｒ ＡＢ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ニュージャージ州。
【００５４】
ある実施形態において、抗セレクチン剤は、抗セレクチン抗体またはそのフラグメントである。抗セレクチン抗体は、モノクローナル、ポリクローナル、またはそれらの組み合わせであり得る。抗セレクチン抗体は、ヒト化、キメラまたはそれらの組み合わせであり得る。抗体類およびそれらのフラグメントを作製または製造する方法は、当業界に公知であり、本明細書に記載された抗セレクチン抗体を作製するために使用できる。
【００５５】
好ましい実施形態において、抗セレクチン抗体はＥＬ２４６であり、ハイブリドーマにより分泌されたモノクローナル抗体が、抗セレクチン剤として選択される。ＥＬ２４６を分泌するハイブリドーマのサンプルは、ＡＴＣＣ登録番号ＨＢ １１０４９としてブダペスト条約に従って寄託されており、参照としてその全体が本明細書に援用される米国特許第５，７５６，０９５号明細書に記載されている。本発明の方法に有用な他の抗セレクチン抗体としては、米国特許第６，２０４，００７号明細書と米国特許第５，６３２，９９１号明細書に記載されているＥ−セレクチン抗体および米国特許第６，２１０，６７１号明細書に記載されているＬ−セレクチン抗体が挙げられる。本発明の方法に有用な他の抗セレクチン剤としては、米国特許第６，１１１，０６５号明細書に記載されているペプチド類およびペプチド類縁体、米国特許第５，９６２，６６０号明細書と米国特許第５，８３０，８７１号明細書に記載されている炭水化物および炭水化物類縁体、または米国特許第６，２８０，９３２号明細書に記載されている核酸リガンド類が挙げられる。前述の特許の各々の教示は、参照としてその全体が本明細書に援用される。
【００５６】
幾つかの場合において、マウス、げっ歯類、霊長類、ヒトなどの種々の哺乳動物宿主からモノクローナル抗体を調製することが好ましい。このようなモノクローナル抗体の調製方法の記載は、例えば、スチテス（Ｓｔｉｔｅｓ）ら編集、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４版）、ランジメディカル（Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ）出版社、ロスアルトス、カリフォルニア州、およびそれに引用されている文献；ハーローおよびレーン（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ）（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ；ゴーディング（Ｇｏｄｉｎｇ）（１９８６）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（第２版）アカデミックプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク；および特にコーラーおよびミルステイン（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ）（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９７−４９７頁に見ることができ、モノクローナル抗体を生成する方法の一方法を考察している。これらの引用文献の各々は、参照として本明細書に援用される。簡単に要約すると、この方法は、動物に免疫原を注入することを含む。次に動物を殺処理し、次いでその脾細胞を単離し、骨髄腫細胞と融合する。これにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏで再生できるハイブリッド細胞または「ハイブリドーマ」が生じる。次にハイブリドーマの集団を、個々のクローンを単離するためにスクリーニングし、それらの各々は、免疫原に反応性の単一抗体種を分泌する。この様式で得られた個々の抗体種は、免疫原性物質上で認識された特異的部位に応答して生成される免疫動物からの固定されたクローン化単一Ｂ細胞の産物である。
【００５７】
他の好適な技術は、抗原種あるいはファージまたは類似のベクターにおける抗体ライブラリーの選択物に対する、リンパ球のｉｎ ｖｉｔｒｏ曝露を含む。ヒューズ（Ｈｕｓｅ）ら、１９８９年、「Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｌａｒｇｅ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ｉｎ Ｐｈａｒｇｅ Ｌａｍｄａ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１頁；およびワード（Ｗａｒｄ）ら、１９８９年、Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６頁を参照されたく、それらの各々は、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される。本発明の抗セレクチン抗体は、改変を有しても有しなくてもよく、キメラ抗体またはヒト化抗体を含む。種々のモノクローナル抗体の作製を教示する特許としては、米国特許第４，８２８，９９１号明細書、米国特許第５，６６５，３５７号明細書、米国特許第４，７４１，９９８号明細書、米国特許第５，８６３，７９６号明細書および米国特許第６，０５６，９５７号明細書が挙げられる。これらの特許は、参照として本明細書に援用される。
【００５８】
抗セレクチン抗体は、抗体全体（例えば、ＦａｂおよびＦｃの双方）を含む組成物または抗体の抗原結合性フラグメントを含む組成物であり得る。抗体またはその一部は、例えば、Ｅ−セレクチンおよび／またはＬ−セレクチンなど、１種以上のセレクチン上の抗原決定基に結合する。あるいは、抗セレクチン抗体は、モノクローナル抗体ＥＬ２４６と同じセレクチン（例えば、Ｅ−セレクチンおよび／またはＬ−セレクチン）上のエピトープに結合できる。
【００５９】
投与方法および製薬組成物
本発明の方法は、抗セレクチン剤を含む製薬組成物の投与による肺感染の治療を提供する。本発明の方法は、感染部位（例えば、肺および下部気道）に抗セレクチン剤の有効量を供する任意の投与経路により実施できる。抗セレクチン剤の用量は、感染部位（例えば、肺および下部気道）に抗セレクチン化合物の有効量を提供するのに十分である。
【００６０】
本発明の方法は、抗セレクチン剤の投与を提供する。該投与は、抗セレクチン剤の薬物動態パラメータ、対象における同時罹患病態の存在、投与経路および疾病の重症度など、多くのパラメータによって、毎日の単回投与または毎日の分割投与とすることができる。（Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、第５版、ジピロ（ＤｉＰｉｒｏ）ら編集、２００２年、ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、コダ・キンブル（Ｋｏｄａ−Ｋｉｍｂｌｅ）ら編集、第７版、リッピンコット（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ）、ウィリアムス（Ｗｉｌｌｉａｍｓ）およびウィルキンス（Ｗｉｌｋｉｎｓ）を参照されたく、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される）。数日毎または数週毎の薬剤の周期的投与を含む措置もまた、本発明の範囲に包含されている。
【００６１】
医師は、臨床技術および本明細書に提供された説明により適量を見分けることができる。典型的な毎日の用量は、１日当り約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重から、１日当り約１００ｍｇ／ｋｇ体重までであり得る。ある実施形態において、毎日の用量は、１日当り約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重から、１日当り約１０ｍｇ／ｋｇ体重までであり得る。ある実施形態において、毎日の用量は、１日当り約０．１ｍｇ／ｋｇ体重から、１日当り約１ｇｍ／ｋｇ体重までであり得る。例えば、ＣＯＰＤに患っている対象における急性増悪時の、呼吸作用の増加、効果のない咳、粘液分泌抑制、進行性低酸素血症または高炭酸血症、錯乱、および疲労は、過剰医療または過少医療という結果になり得るが、これらは、医師により用量調整を行うことによって防ぐことができる。
【００６２】
記載された方法は、肺感染症を治療するために十分な期間、抗選択剤の投与を提供する。ある実施形態において、治療期間は、１回投与または一定期間の計画投与であり得る。ある実施形態において、治療期間は、複数日、複数週またはさらに複数月であり得る。ある実施形態において、該治療は、ルーチン（例えば、毎日、３日毎、毎週、２週毎など）または定期的（例えば、急性増悪時または危険性の増加した期間、例えば、インフルエンザ時期）に投与できる。ある実施形態において、抗セレクチン剤の「パルス化」または「ボーラス」用量を、特に例えば、急性増悪の際、必要とする対象に投与することができる。このようなパルス化またはボーラス用量およびその期間は、医師により決定できる。
【００６３】
本発明の方法は、抗セレクチン剤が、他の薬物、療法および治療と共に投与することができるように提供する。ある実施形態において、抗セレクチン剤は、セファロスポリン類、ペニシリン類、フルオロキノロン類、エリスロマイシン類、テトラサイクリン類薬、抗ウィルス薬（アマンチジン類、リバビリンなど）および抗真菌剤（アゾール抗真菌剤およびアンホテリシンなど）などの抗感染薬と共に投与できる。ある実施形態において、ベータアゴニスト類（アルブテロール）、ステロイド類、抗不安薬、および鎮痛剤などの呼吸困難の症状を治療または寛解する薬物または療法と共に、抗セレクチン剤を投与できる。さらに、呼吸療法は、肺感染症の治療を提供するために抗セレクチン剤の投与と関連して使用できる。（Ｄｒｕｇ Ｆａｃｔｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ、最新の月刊誌、ウォルターズ・クルワー（Ｗｏｌｔｅｒｓ Ｋｌｕｗｅｒ）社、セントルイス、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ、第５８版、メディカルエコノミックス（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ）社、２００３年、を参照されたく、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される）。
【００６４】
投与経路は、典型的に活性化合物の製薬製剤により規定される。本発明により、製薬製剤が、ｉｎ ｖｉｖｏ投与およびｉｎ ｖｉｖｏ送達に好適な製薬的に許容できる担体中に活性成分として抗セレクチン剤を含むことができるように提供する。抗体タンパク質は、酸性および／または塩基性末端および／または側鎖を含有し得ることから、該タンパク質を、遊離酸または塩基の形態で、または製薬的に許容できる塩類の形態で製剤中に含ませることができる。（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１９版、レミントンおよびジェンナロ（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｎａｒｏ）編集、１９９０年を参照されたく、参照としてその全体が本明細書に援用される）。
【００６５】
注射製剤としては、水性または油性媒体中、抗セレクチン剤の滅菌した懸濁剤、液剤または乳濁剤を挙げることができる。該組成物はまた、懸濁化剤、安定化剤および／または分散剤などの製剤化剤を含むことができる。注射用製剤は、単位剤形、例えば、アンプルまたは複数用量容器中に提供され、添加の保存剤を含有できる。
【００６６】
あるいは、注射製剤は、限定はしないが、滅菌した無発熱物質水、緩衝液、デキストロース液などの好適な媒体によって使用前に再構成するために粉末形態で提供できる。最後に、抗セレクチン剤は、凍結乾燥できる。保存製剤は、単位剤形で供給でき、ｉｎ ｖｉｖｏ使用前に再構成できる。
【００６７】
送達の時間を延長するために、活性成分は、移植、例えば、皮下注射、皮内注射、または筋肉内注射による投与のため、デポー製剤として製剤化できる。したがって、例えば、活性成分は、好適なポリマーまたは疎水性材料（例えば、許容できる油中の乳濁剤として）またはイオン交換樹脂と共に、あるいは少溶解誘導体として、例えば、抗セレクチン剤の少溶解塩形態として製剤化できる。
【００６８】
一実施形態において、抗セレクチン剤は、鼻腔または経口吸入を経て肺に投与できる。吸入による投与のため、活性成分は、加圧パックまたは吸入器、例えば、慢性疾患の周期的治療のために都合よく使用できる計量吸入器、または急性増悪をきたしている対象の治療のために使用できる噴霧器による送達のためにエアロゾルスプレーの形態で好適に送達できる。このような吸入器または加圧パックは、好適な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の好適なガスを使用できる。加圧エアロゾルの場合、計量装置は、計量を送達させるためにバルブを備えることによって定量できる（例えば、計量吸入器）。吸入器または注入器に使用のため、送達媒体、例えば、ゼラチンのカプセルおよびカートリッジは、化合物とラクトースまたは澱粉などの好適な粉末基剤との粉末混合物を含有して製剤化できる。（また、クーリエ（Ｃｏｕｒｒｉｅｒ）ら、２００２年Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ．１９（４〜５）：４２５−９８頁を参照されたく、参照としてその全体が本明細書に援用される）。
【００６９】
あるいは、経皮吸入のために抗セレクチン剤を、徐々に放出する接着ディスクまたはパッチとして製造された経皮送達系を使用できる。最後に、活性成分の経皮透過を促進させるために透過エンハンサーを使用できる。
【００７０】
経口投与のため、製薬組成物は、例えば、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシ澱粉、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、微結晶セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモ澱粉または澱粉グリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの製薬的に許容できる賦形剤を用いる従来の手段により調製された錠剤またはカプセル剤の形態をとることができる。錠剤は、当業界に周知の方法によりコーティングできる。経口投与のための液体製剤は、例えば、液剤、シロップ剤または懸濁剤の形態をとることができるか、使用前に水または他の好適な媒体よる構成のために乾燥製品として提供できる。このような液体製剤は、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または水素化食用油）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアラビアゴム）；非水媒体（例えば、アーモンド油、油性エステル類、エチルアルコールまたは分画植物油）；および保存剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはプロピルまたはソルビン酸）などの製薬的に許容できる添加物と共に従来の手段により調製できる。該製剤は、適切な場合、緩衝剤塩類、風味剤、着色剤および甘味剤も含有できる。経口投与のための製剤は、活性化合物を制御放出させるために好適に製剤化できる。
【００７１】
舌下錠投与に関して、該組成物は、従来の様式で製剤化された錠剤または舐剤の形態をとることができる。直腸および膣の投与経路に関して、活性剤は、液剤（保持浣腸に関して）座薬または軟膏として製剤化できる。
【００７２】
該組成物は、所望ならば、活性成分を含有する１種以上の単位剤形を含有できるパックまたはディスペンサー装置内に提供できる。該パックは、例えば、ブリスターパックなどの金属またはプラスチックフォイルを含み得る。パックまたはディスペンサー装置には、投与に関する取扱い説明書を添付することができる。
【００７３】
好ましい実施形態において、抗セレクチン剤は、再構成に利用できる凍結乾燥散剤の複数回使用または単回使用バイアルにおいて提供できる。単回使用バイアルは、平均サイズの成人または小児対象に適切かつ好適な用量を含有できることが好ましい。
【００７４】
ある実施形態において、抗セレクチン剤は、抗セレクチン剤の１個以上のバイアルおよびシリンジ、または抗セレクチン剤の典型的な用量（例えば、単位用量または使用単位）を予め充填したシリンジを含むキットに用いることができる。該キットは、抗セレクチン剤の他の組成物、例えば、噴霧器または注入器による使用のために液剤または散剤の１つ以上の計量吸入器またはパッケージを含むことができる。該キットは、専門家による使用およびシリンジの適切な廃棄のための教育用ビデオ類、ＤＶＤ類または取扱い説明書をさらに提供できる。
【実施例】
【００７５】
実施例
実施例１：ヒツジ肺における緑膿菌のクリアランスに対するＥＬ２４６の効果
序文
ＥＬ２４６ｍＡｂは、エンドトキシンにより誘導された肺炎症を効果的にブロックすることから、肺炎症疾患の治療のために有効な薬物であり得ることが示唆される。抗炎症薬の使用で懸念されることは、それによって患者が二次感染に罹り易くなることである。ＥＬ２４６が、緑膿菌による肺感染症を除去するヒツジの能力を変化させるかどうかを判定するために、それを試験した。この実験的方法は、ヒツジにおける肺感染症を確立し、試験抗体または対照抗体による静脈内処置をし、１週間にわたって採取された肺洗浄サンプルにおける白血球浸出レベルおよびシュードモナス数の双方をモニターすることであった。
【００７６】
方法
生物および培養条件。緑膿菌株ＰＡＯ１（モンタナ州立大学Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｆｉｌｍ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇから得られたＣＦ臨床単離体）ストック培養物を−８０℃に維持した。接種製剤に関して、新鮮なＲ２Ａ寒天（ジフコ（Ｄｉｆｃｏ）＃１８２６−１７）線条接種からの１つから２つのコロニーを、５０ｍｌの滅菌Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ Ｓｏｙ Ｂｒｏｔｈに移し、エアレーションしながら一晩インキュベートした（１６〜１８時間、１８０ｒｐｍ、３７℃）。培養物を遠心分離し（５，０００ｘｇで１０分、４℃）、滅菌ダルベッコ燐酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）で１回洗浄し、ｓｔ−ＤＰＢＳに懸濁した。懸濁液中のコロニー形成単位（ＣＦＵ）数は、Ｒ２Ａ寒天プレート上に二重に接種した連続１０倍希釈液（０．５００ｍｌを４．５ｍｌの希釈ブランクに移し、４５〜６０秒間ヴォルテックスで撹拌した）からの表面塗抹法を経て測定された。一晩インキュベーション（３７℃）後、コロニーをカウントし、一晩冷凍保存した元のシュードモナス懸濁液を、０日目にヒツジに投与するために所望の接種濃度にするためにさらに希釈した。
【００７７】
気管支鏡接種および洗浄サンプリング
動物は１才のヒツジとした。好中球細胞数の初期値を測定するために各動物から気管支鏡を用いてベースライン洗浄サンプルを採取した。予め存在する感染症の存在を、下記のようにベースライン洗浄サンプルを平板培養することにより判定した。好中球数が少なく、予め存在する感染のない全動物を、少なくとも１週間休息させてから、０．２５％（最終濃度）寒天に乳濁させた上記シュードモナス属単離体の５×１０１０ＣＦＵを肺の各下部葉内に感染させた。感染後、１日目、３日目および６日目に洗浄サンプルを採取した。血液サンプルもまた採取した。
【００７８】
リンパ球分析のための肺洗浄サンプルの処理
総白血球数を、各サンプルについて測定し、好中球のパーセンテージは、ヒツジ好中球に対して特異的なｍＡｂｓを用いてＦＡＣｓにより測定した。
【００７９】
微生物数に関する肺洗浄サンプルの処理
各ヒツジからの２つの肺洗浄サンプル（気管支鏡アシストにより１つは右肺および１つは左肺）を、移送用の氷上に置き、採取４時間以内で処理した。サンプルを連続希釈し（０．５００ｍｌを４．５ｍｌの希釈ブランクに移した）、Ｒ２Ａ寒天プレート上に二重に接種し、プレートを３７℃で一晩インキュベートした。生じた微生物コロニーを評価し、外観により緑膿菌（ＰＡＯ１単離体はＲ２Ａ上緑黄色に出現）または非シュードモナス属（グラム染色により確認）として分類した。細菌ｃｆｕ／ｍｌ洗浄液は、可能ならばいつでも３０〜３００のコロニーを含有するＲ２Ａ寒天プレートから測定した。各ヒツジの洗浄液サンプルは、実験前（例えば、６日前から０日目）、１日目、３日目、および６日目に処理した。
【００８０】
抗体投与
１日目の細菌数が、２日目に利用できるようになったら、緑膿菌感染の確立したヒツジを、２日目に１ｍｇ／ｋｇ ｍＡｂ ＥＬ２４６で静脈内処置するか、対照の無関係なｍＡｂ（ＧＤ３．５）で静脈内処置するか、またはなにも処置をしなかった。
【００８１】
結果
感染後、全ての動物で数時間以内に体温が上昇し、不活発になった。感染後少なくとも３日間、体温が上昇したままであった。接種後、最初の２，３時間内の発熱応答は、全ての動物は２４時間目で感染活性状態の予測とはならなかった。そのため、２４時間目での洗浄サンプル中のＣＦＵ数が、動物における感染の確立を確認する唯一の方法であり、これらの動物を引き続きｍＡｂで処置した。
【００８２】
感染洗浄サンプル中の白血球数は、各葉のサンプリングのばらつきのために、極めて変動が大きかった（データ非表示）。そのため、好中球のパーセンテージの変化が、種々のサンプルにおける炎症の比較に用いられた。動物は、ＥＬ２４６処置後、細菌のクリアランスの増強を示した（図１）。さらに、感染６日後、対照と比較してＥＬ２４６処置群における好中球のパーセンテージが僅かに減少した。
【００８３】
ｍＡｂ ＥＬ２４６処置群は悪化せず、幾つかの場合において、肺からの緑膿菌のクリアランスを促進した。全てのＥＬ２４６処置動物が、感染を除去し、６日目までには、感染の明らかな臨床的徴候を示さなかった。
【００８４】
統計
ヒツジ肺における緑膿菌のクリアランスに対する抗炎症ｍＡｂ ＥＬ２４６の効果
これらのデータ（図１）は、日と処置は固定効果として考慮され、ヒツジとヒツジ内の側面はランダム効果として考慮される混合効果線形モデルを用いて解析した。実験前の洗浄液のカウントは、すべての値がゼロであるという事実から解析に含めなかった。統計的有意性を求めるために直線の勾配を処置群間で比較した。このモデルを用いて、抗炎症ｍＡｂ ＥＬ２４６に対応する直線は、未処置に対応する直線の勾配（ｐ＝０．０００１）および無関係なｍＡｂ処置に対応する直線の勾配（ｐ＝０．０００７）双方とは統計的に有意に異なる極めて強い負の勾配を有する。
【００８５】
要約
本出願人らは、１ｍｇ／ｋｇ用量でのＥＬ２４６が、驚くべきことにヒツジ肺において確立された緑膿菌感染のクリアランスを増強させることを本明細書に示す。ＥＬ２４６処置動物は、未処置動物またはイソタイプ−マッチド陰性対照ｍＡｂ処置動物と比較して、統計的有意性を有して感染を除去した。
【００８６】
実施例２ ヒツジにおける非緑膿菌細菌のクリアランスに対するＥＬ２４６の効果
肺からの緑膿菌以外の細菌生物のクリアランスに対するＥＬ２４６処置の効果が、ヒツジにおいて認められた。ヒツジのシュードモナス属接種による肺感染症モデルおよび微生物表面塗抹法による細菌数モニタリングは、実施例１のとおりで行った。緑膿菌ＰＡＯ１株コロニーは、Ｒ２Ａ寒天上の塗抹縁に明瞭な半透明の緑青色コロニー増殖として出現した。他の細菌コロニーの出現が、幾つかのヒツジ洗浄液サンプルに見られ、他の属の細菌生物も同様であることを示した。これら他のコロニーを、抗体処理の存在下でのこれら非緑膿菌細菌タイプのクリアランスを評価するために別個にカウントし、記録した。幾つかの場合において、特定の洗浄液サンプルから単離された細菌は、非シュードモナス属だけであった。コロニータイプの２つの例、およびサンプル中に見出された非シュードモナス属生物について記録されたグラム染色反応が以下に記載されている。これら試験に利用された緑膿菌ＰＡＯ１単離体のグラム染色は、シュードモナス属に予想された古典的グラム陰性形態：白色断続小円形コロニー−細長いスレンダーグラム陽性桿菌；白色星状で粘液性のコロニー−サフラニンカウンター染色によりピンクに染色する極めて明らかなエキソポリサッカライドハロを有する極めて大型の長いグラム陽性桿菌を示した。洗浄サンプルからの強いエキソポリサッカライド産生株の単離により、ｉｎ ｖｉｖｏで生体膜を形成する可能性が示唆されている。
【００８７】
結果
ｍＡｂ ＥＬ２４６処置により、シュードモナス属のクリアランスと同様に感染ヒツジからの非シュードモナス属生物のクリアランスが促進された。対照抗体または緩衝剤のみで処理したヒツジは通常、ｍＡｂ ＥＬ２４６で処理されたヒツジよりも多い非シュードモナス数および実験過程の後期に多い数を示した。これら非シュードモナス属クリアランス効果を示す結果を、図２に示す。例えば、図２に示された７匹の対照動物（無関係ｍＡｂまたは未処置）のうちの５匹は、１日目または３日目と比較して６日目に細菌数の増加を示したが、一方、ＥＬ２４６処置の動物全ては、１日目または３日目と比較して６日目により少ないｃｆｕ／ｍｌ洗浄液を示した。
【００８８】
実施例３ 非ヒト霊長類の急性肺悪化モデル
要約
カニクイザルの肺への急性増悪関連炎症細胞の動員に対するＥＬ２４６処置の有効性を評価するために肺におけるＬＰＳエアロゾル誘発応答を使用した。
【００８９】
背景
ＣＯＰＤおよび喘息の急性増悪時に、好中球およびマクロファージが肺に動員されることが知られている。大腸菌のリポ多糖類（ＬＰＳ）を用いるこのモデルにより、一次的エンドポイントとして気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）中の炎症細胞の量および相対数の評価を提供する。このために、炎症細胞、好中球およびマクロファージの全数を、１２時間時点で測定した。さらに、ＩＬ−８、ミエロペルオキシダーゼ、血清タンパク質およびＩＬ−１ベータなどの他の二次的パラメータを測定した。ＩＬ−８は、炎症細胞動員を促進するケモカインの；ミエロペルオキシダーゼは、好中球駆動組織損傷の可能性の程度；血清タンパク質は、肺への血清漏れを生じる実際の血管壁損傷；およびＩＬ−１ベータは、全体的前炎症状態の測定値を提供する。総括して、これらの測定値は、炎症の相対的重症度指標を提供し、肺の前炎症状態を示す。
【００９０】
実験デザインおよび方法
ＬＰＳ誘発の１５分前に、また再度ＬＰＳ誘発１時間後に１ｍｇ／ｋｇ ｍＡｂ ＥＬ２４６でサルを処置した。大腸菌ＬＰＳを、エアロゾルを介して「０」時間目に０．４ｍｇ／ｋｇの濃度で送達した。サルは、ｍＡｂ処置をせずにＬＰＳにより１ヵ月前に誘発された彼ら自身の内部対照として用いた。一次的および二次的パラメータの測定のためにＢＡＬをＬＰＳ誘発１２時間後に採取した。炎症細胞を、フローサイトメトリーによりカウントし、二次的指標は、ＥＬＩＳＡおよび生化学的アッセイにおいて定量した。
【００９１】
結果
ＢＡＬ判定に関する１２時間の結果を図３に示す。一次的エンドポイントの測定は、対照に比して炎症細胞動員の大きな減少を示した。細胞全体では、２／３超、好中球では７０％、マクロファージでは８０％超減少した。この減少は、ミエロペルオキシダーゼもまた、約７０％減少することが示された二次的パラメータで支持される肺に対する細胞媒介の酸化的損傷の可能性の大きな減少を示している。他の二次的指標であるＩＬ−８および血清タンパク質もまた、６０〜７０％減少した。驚くべきことに、ＩＬ−１ベータもまた２５％減少し、炎症細胞動員減少が、前炎症状態の増幅減少も促進し得ることを示した。
【００９２】
要約
ＥＬ２４６は、ＣＯＰＤおよび喘息のような疾患の急性増悪に通常見られる、好中球およびマクロファージの動員を減少させるのに極めて有効である。これは、ＥＬ２４６を用いるＥ−およびＬ−セレクチンブロッキング法が、急性増悪の重症度の軽減に大いに寄与し得ることを示唆している。
【００９３】
実施例４ 接着分子およびケモカイン阻害剤を検証するためのリアルタイムのｉｎ ｖｉｔｒｏせん断アッセイ、生理的関連アッセイシステムであるＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）
本出願人らは、白血球接着のアンタゴニストおよびケモカインシグナリングの確認および検証のために、進行性スクリーニングプラットホームであるＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）を記載する。血管を模擬するために毛細管の内面に固定した接着分子、毛細管内で増殖した形質移入体を発現する内皮細胞または組換え接着分子を用いる。生理的せん断速度で、これらの基質は、ヒト細胞および細胞系の結合およびローリングを媒介する。このアッセイは、白血球輸送を妨害する可能性のある新規な薬物化合物の予防的（接着前処置）および治療的（接着後処置）有効性を試験するために有用である。ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）システムの有用性の例として、炎症性内皮細胞に対するケモカイン誘導Ｔ細胞接着を確立することにより達成できる商標付きセレクチン阻害剤の有効性および複雑さのレベルにおける僅かな差を識別する能力を本出願人は立証する。最初の例において、本出願人は、抗Ｅ＋Ｌセレクチン抗体（ＥＬ２４６）が、Ｅ−セレクチンを発現するＣＨＯ細胞系と比較した場合よりも、精製Ｅ−セレクチンキメラ上のヒトミエロイドＵ９３７細胞ローリングの反転においてより有効（ＩＣ５０＜１μｇ／ｍｌ）であったことを示す。ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）システムが、完全にヒトのものである場合、すなわち、ＨＵＶＥＣ類上のヒト好中球ローリングである場合、ＩＣ５０は、２μｇ／ｍｌ超であった。ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）システムの有用性の第２の例において、ケモカイン、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ−１α）の固定化により、α４インテグリン類を介してＴＮＦα活性化ＨＵＶＥＣ類へのジャーカット細胞の接着が誘導された。これらの実施例において立証されたように、ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）システムは、候補薬物の有効性をランク付けするために肉視上でかつ定量可能な証拠を提供でき、ＩＣ５０などの用量評価を判定できる。
【００９４】
白血球の血管外遊出物は、効率的な免疫的監視にとって必要な正常な生理的過程であり、かつ傷害、感染ならびにアレルギーに対する炎症応答の必須成分である（バッチャーおよびピッカー（Ｂｕｔｃｈｅｒ ａｎｄ Ｐｉｃｋｅｒ）、１９９６年Ｓｃｉｅｎｃｅ２７２：６０−６６頁、フォン・アンドリアンおよびマッケイ（Ｖｏｎ Ａｎｄｒｉａｎ ａｎｄ Ｍａｃｋａｙ）、２０００年Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１０２０−１０３４頁）。血中白血球および内皮細胞の双方により発現される接着タンパク質は、これらの相互作用を制御する（バッチャー（Ｂｕｔｃｈｅｒ）、１９９１年Ｃｅｌｌ ６７：１０３３−１０３６頁、ベビラッカ（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ）１９９３年、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：７６７−８０４頁）。ｉｎ ｖｉｖｏ測定により、血中細胞は、驚くべきことに高速度で移動することが示されている。毛細管および毛細管後のベッドに関連する減少した流量でも、５００〜５０００μｍ／秒の速度が普通である。白血球／内皮細胞相互作用の分析により、接着タンパク質の特定のクラスは、静止条件下に対して、せん断条件下で優先的に結合を媒介することが実証されている。（バッチャー（Ｂｕｔｃｈｅｒ）、１９９１年Ｃｅｌｌ ６７：１０３３−１０３６頁、レイ（Ｌｅｙ）ら。１９９１年、Ｂｌｏｏｄ ７７：２５５３−２５５５頁、ラスキー（Ｌａｓｋｙ）、１９９２年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５８：９６４−９６９頁、アバッシ（Ａｂｂａｓｓｉ）ら、１９９３年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９２：２７１９−２７３０頁、フォン・アンドリアン（Ｖｏｎ Ａｎｄｒｉａｎ）ら、１９９１年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：７５３８−７５４２頁、ローレンスおよびスプリンガー（Ｌａｗｒｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）、１９９１年、Ｃｅｌｌ ６５：８５９−８７３頁、スプリンガー、１９９０年、Ｎａｔｕｒｅ３４６：４２５−４３４、ローレンスおよびスプリンガー（Ｌａｗｒｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）、１９９３年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：６３３８−６３４６頁、トゼレンおよびレイ（Ｔｏｚｅｒｅｎ ａｎｄ Ｌｅｙ）、１９９２年、Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．６３：７００−７０９頁）。例えば、血流を反映するためにデザインされた高せん断条件下でのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイで白血球と内皮細胞との間、十分に特性化された静的接着性相互作用の多くは、ベータ−２インテグリン類（ＬＦＡ−１、ＭＡＣ−１）により媒介されるものであるが、セレクチン相互作用が先行しない限り、起こらないことが判明した（ローレンスおよびスプリンガー（Ｌａｗｒｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）、１９９１年、Ｃｅｌｌ ６５：８５９−８７３頁、フォン・アンドリアン（Ｖｏｎ Ａｎｄｒｉａｎ）ら、１９９２年、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．：Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６３：Ｈ１０３４−Ｈ１０４４頁）。対照的に、せん断下で優先的に機能する接着分子が確認されている。
【００９５】
せん断依存の接着タンパク質の最良の例は、セレクチン類と呼ばれる、白血球および内皮細胞分子のファミリーである（ベビラッカ（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ）１９９３年、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：７６７−８０４頁、ラスキー（Ｌａｓｋｙ）、１９９２年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５８：９６４−９６９頁、ベビラッカ（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ）ら、１９９１年、Ｃｅｌｌ ６７：２３３頁）。１種の白血球セレクチン（Ｌ−セレクチン）および２種の血管セレクチン（Ｅ−およびＰ−セレクチン）が確定されている。内皮細胞に加えて、血小板もまたＰ−セレクチンを発現する。Ｌ−セレクチンは、白血球により構成的に発現されるが、一方、Ｅ−およびＰ−セレクチンを誘導するためには、免疫サイトカイン類、ヒスタミンまたは外傷性侵襲による内皮細胞の刺激が必要とされる。セレクチン類に加えて、サイトカインに刺激された内皮細胞上のＶＣＡＭ−１（ベルリン（Ｂｅｒｌｉｎ）ら、１９９５年、Ｃｅｌｌ ８０：４１３−４２２頁）、消化管の高内皮小葉脈上のＭＡＤＣＡＭ−１、抹消リンパ節の高内皮小葉脈上のＰＮＡｄ−１（ベルリン（Ｂｅｒｌｉｎ）、１９９３年Ｃｅｌｌ ７４：１−２０頁）、高炭水化物含有ムチン様分子（レビノビッツ（Ｌｅｖｉｎｏｖｉｔｚ）ら、１９９３年、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１２１：４４９−４５９頁、ムーア（Ｍｏｏｒｅ）ら、１９９２年、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１１８：４４５−４５６頁）、および幾つかのインテグリン類（α４β１およびα４β７）（バーグ（Ｂｅｒｇ）ら、１９９３年、Ｎａｔｕｒｅ ３６６：６９５−６９８頁、アロン（Ａｌｏｎ）ら、１９９５年、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１２８：１２４３−１２５３頁）などの他の接着タンパク質もまた、せん断依存相互作用を媒介する。多くの場合、内皮単層に沿った白血球のローリングは、せん断依存の接着相互作用を示す。これらのローリング相互作用は、白血球速度の＞１０００倍の減少を引き起こすことができる。血管内皮に沿う白血球のローリングは、内皮細胞の提示した、ケモカインをその同族受容体に結合させることによって、他の接着相互作用を誘導し、血管内皮に白血球の結合を「固定化する」と仮定されている（スプリンガー（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）、１９９４年、Ｃｅｌｌ ７６：３０１−３１４頁）。次に血管内層を介して遊走が生じる。したがって、以下の３つの段階が、血管壁に沿った白血球の首尾よい捕捉に関与している：１）せん断依存性捕捉およびローリング、２）活性依存性接着強化（緩徐なローリング）、次いで堅固な接着、および３）経内皮遊走。内皮上の誘導可能な接着分子は、これらの段階の各々に関与している。３つの段階全てが、炎症白血球の傷害または感染部位への有効な動員、またはリンパ組織の接種にとって必要である（スプリンガー（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）、１９９４年、Ｃｅｌｌ ７６：３０１−３１４頁およびボックナー（Ｂｏｃｈｎｅｒ）、２０００年、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０６：８１７−８２８頁）。このモデルは、一部労多く費用がかかる動物実験から確立されたものである。
【００９６】
動物実験の難しさおよび費用のため、幾つかの実験室では、ｉｎ ｖｉｔｒｏせん断アッセイの開発を追究している。大部分の研究室では、内皮細胞を増殖させるために平面チャンバを用いており、次いでこのチャンバをシリンジポンプに接続して細胞または他の試薬を送達する（ジョーンズ（Ｊｏｎｅｓ）ら、１９９４年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９４：２４４３−２４５０頁、ルシンスカス（Ｌｕｓｃｉｎｓｋａｓ）ら、１９９４年、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１２５：１４１７頁、アロン（Ａｌｏｎ）ら、１９９４年、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１２７：１４８５−１４９５頁）。ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）は、下記のとおり、また以前の刊行物（ベルリン（Ｂｅｒｌｉｎ）ら、１９９５年、Ｃｅｌｌ ８０：４１３−４２２頁、バーグ（Ｂｅｒｇ）ら、１９９３年、Ｎａｔｕｒｅ ３６６：６９５−６９８頁、バルガツエ（Ｂａｒｇａｔｚｅ）ら、１９９４年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５８１４−５８２５頁、エーガー（Ｅｇｇｅｒ）ら、２００２年、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．３０２：１５３−１６２頁、グリー（Ｇｌｅｅ）ら、２００１年、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６９：２８１５−２８２０頁、バルガツエ（Ｂａｒｇａｔｚｅ）ら、１９９４年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８０：１７８５−１７９２頁、ジュチラ（Ｊｕｔｉｌａ）ら、１９９４年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３：３９１７−３９２８頁、これらは参照としてそれらの全体が本明細書に援用される）に記載されたプロトコルに従ってヒトの血管流条件を正確にシミュレートするｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイシステムである。このシミュレートされた微小環境は、炎症および感染性疾患に関連する分子、細胞、および血管表面の相互作用を評価するための優れた手段である。
【００９７】
ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗシステム
ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）せん断アッセイシステムの中心的な特徴は、内皮細胞の増殖、単独または複数接着分子を発現する形質移入細胞系の増殖、または小径のガラスキャピラリ管の内面に精製接着分子を接着することにより創製される人工血管である。該「血管」は、液体が蠕動運動ポンプを経て再循環できるループシステムに援用される（図４）。細胞をシステムに注入し、内皮細胞の単層とそれらの相互作用が、ビデオ顕微鏡によりモニターされる。薬剤をアッセイに注入し、白血球−内皮細胞の相互作用に対するそれらの効果を容易に測定できる。キャピラリ管内で発生したせん断力は、血管で測定されたせん断因子と同様である（ペリーおよびグランガー（Ｐｅｒｒｙ ａｎｄ Ｇｒａｎｇｅｒ）１９９１年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８７：１７９８−１８０４頁）。
【００９８】
アッセイの設定
白血球／内皮細胞の相互作用：白血球／内皮細胞せん断に依る相互作用の分析を、先に記載されたとおり実施した（バーグ（Ｂｅｒｇ）ら、１９９３年、Ｎａｔｕｒｅ ３６６：６９５−６９８頁、バルガツエ（Ｂａｒｇａｔｚｅ）ら、１９９４年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５８１４−５８２５頁、バーグ（Ｂｅｒｇ）ら、１９９１年、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１４：３４３−３４９頁、これらは参照としてそれらの全体が本明細書に援用される）。ヒト前単球細胞系、Ｕ９３７（ＡＴＣＣ）は、ヒト白血球を試験するための代用物として広範に使用される。Ｕ９３７細胞は、Ｅ−、Ｐ−およびＬ−セレクチンリガンドＰＳＧＬを発現し、セレクチン上でロールする（ノルガード（Ｎｏｒｇａｒｄ）ら、１９９３年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１２７６４−１２７７４頁、ヒラタ（Ｈｉｒａｔａ）ら、２０００年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：１６６９−１６７６頁、ヤング（Ｙａｎｇ）ら、１９９９年、Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８１：１−７頁、ラーセン（Ｌａｒｓｅｎ）ら、１９９２年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１１１０４−１１１１０頁）。ＥＬ２４６は、Ｌ−およびＥ−セレクチン双方上の保存エピトープに結合する新規な抗体である（ジュチラ（Ｊｕｔｉｌａ）ら、１９９２年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：１５６５−１５７３頁）。因子ＶＩＩＩおよびＬＤＬ−受容体陽性［内皮細胞増殖培地（クローンティックス（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ）、ＥＧＭ）中で培養］またはＰ−またはＥ−セレクチンｃＤＮＡ形質移入されたＣＨＯ細胞である、ヒト臍帯内皮細胞（ＨＵＶＥＣ；キャンブレックス（Ｃａｍｂｒｅｘ）社）を、せん断実験２４時間前に滅菌ガラスキャピラリ管（ドラモンド・サイエンティフィック（Ｄｒｕｍｍｏｎｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、Ｂｒｏｏｍａｌｌ，ペンシルバニア州）の内面に集密するように増殖させた。アッセイ４時間前に、内皮細胞を、ＴＮＦα（１μｇ／ｍｌ）で処理してＥ−セレクチン、ＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１発現を誘導した。ガラスキャピラリ管の末端に結合した配管により、培地および細胞が再循環できる閉鎖ループを形成し；次に管を倒立顕微鏡に据えた。種々のスピードの蠕動運動ポンプを用いて（図４を参照）、流量を制御してｉｎ ｖｉｖｏ血流せん断条件（１〜３ダイン／ｃｍ２）をシミュレートした。循環ループにより、ＨＵＶＥＣの相互作用面を通過して白血球の連続再循環中、注入ポートを介した種々のｍＡｂｓ／他の試験化合物の複数注入が可能になる。
【００９９】
倒立顕微鏡−ビデオ捕捉システム（図４）が、ＨＵＶＥＣ単層の全長を測定するために用いられ、相互作用領域を記録する高分解能相コントラストを次の分析のために実施した。滅菌Ｃａ＋＋、Ｍｇ＋＋含有ＨＥＰＥＳ緩衝（２０ｍＭ）ＤＭＥＭまたはＲＰＭＩ（ｐＨ７．０）プラス２％ＦＢＳまたはヒト血漿中、白血球細胞系を４ｘ１０６細胞／ｍｌ濃度でこのシステムに注入した。ローリング相互作用を確立し、ビデオテープをとりながら少なくとも８分間連続モニターし；その時間中、対照条件または実験条件を確立し、維持した。白血球／内皮細胞の相互作用を観察し、さらに８分間ビデオテープをとった。基質（キメラ接着細胞）上にローリングする細胞数を、接着修飾因子の注入前後にモニターし、その記録を個々のフレーム分析により測定した。セレクチン形質移入体および活性化ＨＵＶＥＣによる実験において、対照または試験化合物を、相互作用する細胞に注入し、その相互作用を全部で１０分間モニターした。データを、視野内のローリング細胞数の実地検分対時間として記録した。
【０１００】
結果と考察
ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗシステムにおけるＵ９３７細胞のＥ−セレクチン媒介ローリング
組換えキメラ上のＵ９３７のローリングに対する抗Ｅ−プラスＬ−セレクチンｍＡｂ、ＥＬ２４６の効果：生理的再循環およびインフレーム部位への遊走双方における白血球の動員において早期段階の１つは、流れの速い白血球の捕捉および緩徐なローリング相互作用の確立である（バッチャー（Ｂｕｔｃｈｅｒ）、１９９１年、Ｃｅｌｌ ６７：１０３３−１０３６頁）。この捕捉およびローリングは、接着分子のセレクチンファミリーにより媒介される（ベビラッカ（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ）１９９３年、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：７６７−８０４頁、ラスキー（Ｌａｓｋｙ）、１９９２年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５８：９６４−９６９頁）。この第１の段階の阻害により、内皮層を通って堅固に接着し、遊出する白血球の能力が抑止され、したがって治療標的を提供する（フォン・アンドリアン（Ｖｏｎ Ａｎｄｒｉａｎ）ら、１９９１年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：７５３８−７５４２頁、バルガツエ（Ｂａｒｇａｔｚｅ）ら、１９９５年、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３：９９−１０８頁）。ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）システムは、この最初のｉｎ ｖｉｔｒｏ相互作用をモデル化し、この相互作用のモジュレーターを評価することを可能にする。Ｅ−セレクチンリガンド、ＰＳＧＬ３４（ノルガード（Ｎｏｒｇａｒｄ）ら、１９９３年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１２７６４−１２７７４頁、ヒラタ（Ｈｉｒａｔａ）ら、２０００年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：１６６９−１６７６頁、ヤング（Ｙａｎｇ）ら、１９９９年、Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８１：１−７頁、ラーセン（Ｌａｒｓｅｎ）ら、１９９２年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１１１０４−１１１１０頁）を発現するヒト前単球細胞系、Ｕ９３７をせん断下で、組換えヒトＥ−セレクチンと相互作用する能力に関して評価した。組換えＥ−セレクチンヒトＩｇＧキメラ（Ｒ＆Ｄシステムズ）を、抗ヒトＩｇＧによりコーティングされたガラスキャピラリ管の内面に固定化した。キャピラリ管を、図４に記載されたようにＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）システムに援用された。
【０１０１】
流動は、２ダイン／ｃｍ２の生理的細静脈のせん断応力を生じさせるように確立した。ループに注入されたＵ９３７細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏで生じることが知られている「ローリング」挙動を示す固定化Ｅ−セレクチンと相互作用した。ローリング細胞数は、注入時間から約６分まで次いでプラトーまで増加する（図５）。ＥＬ２４６ｍＡｂまたはイソタイプ対照ｍＡｂを、細胞注入８分後に注入し、さらに８分間相互作用をモニターした。代表的な実験を図５に示し、図６に要約しているように、ＥＬ２４６は、５μｇ／ｍｌでローリング相互作用を完全に反転させた。この反転は、用量依存であり、イソタイプのマッチド無関係ｍＡｂにより影響を受けなかった。ＥＬ２４６は、約０．６μｇ／ｍｌのＩＣ５０で組換えＥ−セレクチン上のＵ９３７のローリングを反転させた（図６）。したがって、ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）システムは、セレクチン媒介白血球のローリングの視覚化およびこの相互作用のモジュレーターの評価を可能にする。基質として規定されたセレクチンキメラを用いるこのｉｎ ｖｉｔｒｏ設定において、Ｌ−およびＥ−セレクチンの阻害剤は、非常に効力があると思われる。
【０１０２】
ヒトＥ−セレクチンを発現するＣＨＯ細胞上のＵ９３７細胞ローリングに対するｍＡｂ ＥＬ２４６の効果：Ｅ−セレクチンは、活性化された内皮細胞の内面に発現する（ラスキー（Ｌａｓｋｙ）、１９９２年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５８：９６４−９６９頁）。したがって、ｉｎ ｖｉｖｏで生じると想定されるセレクチン−白血球相互作用を、より現実的に反映させるために、ヒトＥ−セレクチンｃＤＮＡを形質移入したＣＨＯ細胞を、ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）ループ内の基質として用いた。ヒトＥ−セレクチンを安定に発現するＣＨＯ細胞を、ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）システム内の滅菌ガラスキャピラリ管の内面に増殖させた。Ｕ９３７細胞とＣＨＯ細胞に発現されたＥ−セレクチンとの相互作用は、組換えセレクチンに生じるものとは異なる。Ｕ９３７細胞がロールされ、次いでそれらの大部分が形質移入されたＣＨＯ細胞に固着する。この固着は、恐らくＣＨＯ細胞上のカウンター受容体に結合するＵ９３７細胞に対するヒトインテグリン類の交差反応性のためであった。抗セレクチン抗体は、インテグリン媒介接着を反転させないことから、Ｕ９３７細胞は、ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）ループ内への注入前にｍＡｂ ＥＬ２４６で前処理した。図７に示されるように、ｍＡｂ ＥＬ２４６は、ＣＨＯ−Ｅ−セレクチン形質移入体へのＵ９３７細胞の結合を阻害した。しかしながら、阻害ＩＣ５０は、精製接着分子（約０．６μｇ／ｍｌ）に対する結合反転と対比すると、細胞ベース接着事象の阻害に関してより大きかった（１μｇ／ｍｌ超）。これらのデータは、接着分子阻害剤の有効性が、せん断下で試験された場合、評価に選択された接着分子の提示の性質およびタイプに依って変わり得ることを示唆している。
【０１０３】
活性化ＨＵＶＥＣ上のヒト好中球ローリングに対する抗Ｅ−セレクチンｍＡｂの効果：白血球と内皮との間の重要な接着相互作用は、セレクチン媒介ローリング、次いでインテグリン媒介固着の双方を含み、その双方とも、遊出に必須である（バッチャー（Ｂｕｔｃｈｅｒ）、１９９１年、Ｃｅｌｌ ６７：１０３３−１０３６頁、フォン・アンドリアン（Ｖｏｎ Ａｎｄｒｉａｎ）ら、１９９２年、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６３：Ｈ１０３４−Ｈ１０４４頁）。上記の２つのｉｎ ｖｉｔｒｏせん断アッセイは、ｉｎ ｖｉｖｏで生じる白血球と内皮との相互作用に必要な接着分子の完全補体を有さない。したがって、アッセイは、ＨＵＶＥＣを「血管」に似せたガラスキャピラリ管の内面に増殖させ、代用炎症刺激として４時間ＴＮＦα（１ｎｇ／ｍｌ）で細胞を活性化させるように設定した。４時間の活性化により、Ｅ−セレクチンならびにＨＵＶＥＣ上のインテグリンリガンドＩＣＡＭおよびＶＣＡＭ−１の発現が誘導される（データは示さず）。ｉｎ ｖｉｖｏでの白血球−内皮相互作用を完全にシミュレートするために、末端血好中球（ＰＭＮｓ）を、健全なドナーから単離し、活性化ＨＵＶＥＣを含有するＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）ループ内へ注入した。次にこのｉｎ ｖｉｔｒｏシステムにおける抗Ｅ−／Ｌ−セレクチンｍＡｂ ＥＬ２４６の有効性を、ｉｎ ｖｉｖｏで生じる条件に、より現実的に似せて試験した。ＣＨＯ形質移入体に関して記載（上記）されたように、ＰＭＮｓは、暫時ロールし、活性化ＨＵＶＥＣに固着した。ＥＬ２４６は、用量依存様式でＨＵＶＥＣへのＰＭＮ結合を阻害した（図８）。無関係なマッチドｍＡｂは、ＰＭＮ−ＨＵＶＥＣ相互作用に対して効果はなかった。しかしながら、ＰＭＮ−ＨＵＶＥＣ相互作用を阻害するＩＣ５０は、＞２μｇ／ｍｌであった（図８）。このように、ｉｎ ｖｉｖｏで白血球−内皮相互作用にとって必要であることが知られている大部分の接着成分の再現により、薬物有効性における微差の識別を可能にする。これらのデータは、同じ阻害剤が、異なるＩＣ５０値（約０．６μｇ／ｍｌから約２μｇ／ｍｌ）を有し、ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）は、ｉｎ ｖｉｖｏで生じると考えられる条件により典型的にシステムが複雑になるにつれて、その有効性がより低くなることを示している。
【０１０４】
結論
極めて重要な細胞−細胞相互作用が生じる最も動的な微小環境の１つは、動物の血管系である。細胞−細胞接着分析における現行のアプローチは、多くの場合、ｉｎ ｖｉｖｏ微小環境を反映していない古典的なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイおよび／または公的な支持が急速に失いつつある時間と経費がかかる動物試験に頼っている。古典的なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイは、主として静的アッセイにおける接着を測定するが、発生する相互作用の十分な理解を得るためには、ｉｎ ｖｉｖｏで規定されたものに近似した、せん断力下で測定する必要があることが現在知られている。
【０１０５】
最近のｉｎ ｖｉｔｒｏせん断法が、研究室で用いられるまで、所与の接着事象の生理的関連性を判定する主要な手段は、広範な動物試験を実施することであった。このｉｎ ｖｉｖｏ法での結果は、間接的なエンドポイント測定値のみを提供するか、または直接的なｉｎ ｓａｉｔｕ視覚化を用いる場合は、統計的に有意な結果を得るためにさらに多くの動物を必要とする。しかしながら、これら困難なｉｎ ｖｉｖｏ試験から、血中の細胞−細胞相互作用の十分な理解を得るためには、血流に伴うせん断力下で相互作用を調べなければならないことが極めて明白となった。静的条件下で規定された多くの例の接着システムがあるが、せん断が適用される場合、機能しないことが後に示された。本明細書には、進歩的薬物スクリーニング手段であるＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）が記載されているが、これは、ヒトの血管流条件を正確にシミュレートするｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイシステムである。このシミュレートされた微小環境は、炎症疾患および感染性疾患に関連する分子、細胞、および血管表面の相互作用を評価するための優れた手段である。
【０１０６】
シミュレートされた血管流動モデルにおけるヒトの生細胞の使用により、ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗシステムは、候補薬物の有効性について肉視により、かつ定量可能な証拠を提供できる。この微小環境における候補化合物を調べることによって、研究者は、極めて低コスト様式で薬物有効性を迅速かつ正確に判定できる。ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）は、炎症疾患および感染性疾患のために候補化合物を迅速かつ低コストで確認および最適化できる。
【０１０７】
実施例５ 推定されたヒト静脈内投与量の判定
ヒトにおける好中球駆動の肺感染症をヒト化ＥＬ２４６ ｍＡｂにより治療する上で有効と考えられる投与量レベルの推定値を提供するために霊長類に吸入されたＬＰＳ肺炎症全身モデルと関連させてヒト好中球ＨＵＶＥＣ動員ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）分析モデルが共に使用された。
【０１０８】
ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）における実験操作により、ＥＬ２４６の有効量は、シミュレートされた生理的血流条件下で好中球のローリング動員を完全に中断させるためにｉｎ ｖｉｔｒｏで達成できることが確立された。用量応答プロトコルにおいてこの同じ方法を用いて、ＥＬ２４６ ｍＡｂに関して２．５μｇ／ｍｌのＩＣ５０を確立できた。並行して、１ｍｇ／ｋｇの用量で霊長類の肺炎症モデルで試験されたＥＬ２４６は、ＬＰＳ炎症刺激に応答して、好中球肺動員を平均５０％阻害することが示された。
【０１０９】
これら双方の試験からの推定用量の比較により、決定されたＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）の有効量対確立された霊長類のｉｎ ｖｉｖｏ有効量比の確立が可能になった。ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）システムの測定値は、薬物量／単位容量に基づくので、この比率の確立は、血液量／霊長類の体重の推定値に大いに依存する。許容される基準値（霊長類体重（ｋｇ）ｘ６０＝ｍＬｓ全血液容量）に基づく推定方法を用いると、算出された比率は６．７５である。したがって、ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）ＩＣ５０および６．７５の算出された乗数を確立することによって、該手段は、ヒト肺感染症の治療のために用いられるＥＬ２４６に由来するヒト化抗体のＥＣ５０を予測するための手段が確立されている。ヒト対霊長類では血液容量推定値に対する標準体重が変わるので（ヒト体重（ｋｇ）×７１．４３＝ｍＬｓ全血液容量）、ヒトＥＣ５０を確立するためにヒト変換因子は、ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）ＩＣ５０の測定値の５．６倍の比率で僅かに低下すると考えられる。
【０１１０】
【表１】
【０１１１】
上記の実施例を参照にして本発明を詳細に記載したが、種々の修飾が、本発明の趣旨から逸脱することなく成し得ることが解される。したがって、本発明は、以下の特許請求の範囲によってのみ限定される。本出願に参照された全ての引用された特許、特許出願および刊行物は、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される。
【図面の簡単な説明】
【０１１２】
【図１】ヒツジ肺からの緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）のクリアランスに対するモノクローナルＥＬ２４６の効果を示すグラフである。
【図２】ヒツジ肺からの非シュードモナス（ｎｏｎ−Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）菌のクリアランスに対するＥＬ２４６の効果を示すグラフである。
【図３】ＬＰＳ誘導炎症後のサルにおける全細胞、好中球、マクロファージ、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、ミエロペルオキシダーゼ、タンパク質およびインターロイキン−１ベータに対するＥＬ２４６の効果を示す７つのグラフである。
【図４】ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）のせん断アッセイシステムを示す系統図である。
【図５】ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）アッセイにおける種々の用量のＥＬ２４６のローリング相互作用を示すグラフである。
【図６】ＥＬ２４６用量の関数として組換えＥ−セレクチンに対するＵ９３７細胞の平均阻害パーセントを示すグラフである。
【図７】ＥＬ２４６用量の関数としてＣＨＯ Ｅ−セレクチンに対するＵ９３７細胞の平均阻害パーセントを示すグラフである。
【図８】ＥＬ２４６用量の関数として活性化ＨＵＶＥＣ類に対するＵ９３７細胞の平均阻害パーセントを示すグラフである。
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、抗セレクチン剤の投与により感染症、特に肺感染症を治療および予防するための方法を提供する。
【０００２】
政府権利の表明
本発明は、一部、アメリカ国立衛生研究所（助成金番号ＡＩ４３７８９）からの援助により成された。政府は、本発明に所定の権利を有し得る。
【背景技術】
【０００３】
背景
呼吸器感染後、気道上皮細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球および好中球などの炎症細胞型の動員および活性化を促進する、ケモカイン類などの一連のサイトカイン類を産生する。メッセージおよびジョンソン（Ｍｅｓｓａｇｅ ａｎｄ Ｊｏｈｎｓｏｎ）、２００４年、Ｊ．Ｌｅｕｋ．Ｂｉｏｌ．７５：５−１７頁。例えば、嚢胞性線維症の肺疾患は、しばしば慢性緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染に関連する過度の炎症応答を特徴とする。健常者と嚢胞性線維症の肺疾患の罹患者における気管支肺胞洗浄により、嚢胞性線維症患者では、炎症誘発性サイトカイン類が上昇するが、抗炎症性サイトカインであるインターロイキン−１０は無視できる量であることが示されている。クミール（Ｃｈｍｉｅｌ）ら、１９９９年、Ａｍ．Ｊ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１６０：２０４０−２０４７頁。他の炎症誘発性サイトカイン類もまた、肺感染症の病理に関係している。例えば、インターロイキン−１は、好中球浸潤をもたらし、ＩＬ−１のレベル上昇が気腫患者の胸膜液に見られた。シラ・メジアス（Ｓｉｌａ−Ｍｅｊｉａｓ）ら、１９９５年、Ｃｈｅｓｔ １０８：９４２−９４５頁。血液からの炎症細胞の浸潤は、白血球、内皮細胞および血小板上の細胞表面に発現される種々の接着分子により制御される。
【０００４】
細胞表面の糖タンパク質の一ファミリーである「セレクチン類」は、幾つかの例において、炎症領域に対する白血球の動員と遊走のメディエータとして確認されている。ラスキー（Ｌａｓｋｙ）、１９９２年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５８（５０８４）：９６４−９頁。例えば、セレクチン類は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）（ノグエラ（Ｎｏｇｕｅｒａ）ら、２００４年、Ｃｈｅｓｔ、１２５（５）：１８３７−４２頁）、喘息（スジョスワード（Ｓｊｏｓｗａｒｄ）ら、２００４年、Ｒｅｓｐｉｒａｔｉｏｎ ７１（３）：２４１−５頁）、反応性関節炎、リウマチ様関節炎（ＲＡ）および敗血症（クーリアラ（Ｋｕｕｌｉａｌａ）ら、２００４年、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．３３（１）：１３−８頁）などの病態の炎症過程に関係しており、ならびに皮膚、肺および消化管（レイおよびカンサス（Ｌｅｙ ａｎｄ Ｋａｎｓａｓ）、２００４年、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４（５）：３２５−３６頁）の炎症過程に関係している。さらに、炎症は、抗セレクチンブロッキングなどの抗接着ブロッキングによって減少することが示されている（米国特許第６，０３０，９４７号明細書を参照）。炎症誘発性サイトカイン類はまた、感染症治療に有益であることが示されている。（一般に、デューブ（Ｄｕｂｅ）ら、２００４年、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７２（６）：３５６１−７０頁、リベイロ（Ｒｉｂｅｉｒｏ）ら、２００４年、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７２（６）：３３９１−７頁、ケーデル（Ｋｏｅｄｅｌ）ら、２００４年、Ｂｒａｉｎ、４月２８日［印刷前の電子出版］を参照）。例えば、ＩＬ−１はまた、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、リーシュマニア属メジャー（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｍａｊｏｒ）、および結核菌（Ｍｙｏｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）による感染の封じ込めに関係している。例えば、ジャファーマンズ（Ｊｕｆｆｅｒｍａｎｓ）ら、２０００年、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８２（３）：９０２−８頁を参照されたい。
【０００５】
白血球動員はまた、感染症の根絶を助けるためにも有益である。例えば、創傷または感染部位への白血球動員は、感染範囲を制限することにより創傷または感染の寛解または根絶を助けるとの仮説が立てられている（米国特許第６，７１３，６０５号明細書、メッセージおよびジョンソン（Ｍｅｓｓａｇｅ ａｎｄ Ｊｏｈｎｓｏｎ）、２００４年、Ｊ．Ｌｅｕｋ．Ｂｉｏｌ．７５：５−１７頁）。したがって、抗炎症治療および抗接着ブロッキングはいずれも炎症の軽減に有益であることが示されているものの、炎症誘発活性は抗炎症活性よりも感染症の治療に有益であるとの本分野の専門家によるこれまでの結論を前提とすると、感染症自体の根絶のために上記治療を使用することは、逆であるように感じられるであろう。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
肺感染症は、致命的になり得る。１９７９年〜１９９４年まで、米国における肺炎およびインフルエンザに関する全体の死亡率は、おおむね１００，０００人当り２０．０人から３１．８人へと５９％増加した。１９７９年〜１９９２年までに、１９８０年の標準的人口に対する調整年令における肺炎およびインフルエンザの死亡率は、２０．４人から２４．８人へと２２％増加した。Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ ａｎｄ Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ Ｗｅａｋｌｙ Ｒｅｐｏｒｔ、１９９５年７月２１日。結核、肺真菌感染症および非定型肺感染症の発生率は、約２０年前のＡＩＤＳの出現以来、着実に上昇している。肺感染症を治療する新規な方法が必要である。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
概要
本発明者らは、驚くべきことに白血球動員を阻害する抗セレクチン剤が、感染症、特に肺感染症の治療および予防に有用であることを見出した。本発明は、抗セレクチン剤の治療的有効量を、肺感染症の治療または予防を必要とする患者に投与することを含む、肺感染症を治療または予防する方法を提供し、前記治療は肺内の病原体負荷を減少させる。
【０００８】
一実施形態において、本発明は、該抗セレクチン剤が、Ｅ−セレクチン、Ｌ−セレクチンまたはＰ−セレクチンもしくはそれらの組み合わせに結合する競合的結合剤である、肺感染症を治療する方法を提供する。一実施形態において、該抗セレクチン剤は、Ｅ−セレクチン、Ｐ−セレクチンまたはＬ−セレクチンもしくはそれらの組み合わせに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントである。好ましい実施形態において、該抗セレクチン剤は、０．０５ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの用量範囲で有効であるモノクローナル抗体である。該抗セレクチン剤は、約１ｍｇ／ｋｇの濃度で有効なモノクローナル抗体であることがより好ましい。好ましい一実施形態において、該抗セレクチン剤は、モノクローナル抗体、ＥＬ２４６である。
【０００９】
ある実施形態において、本発明は、病原菌により引き起こされた肺感染症を治療する方法を提供する。ある実施形態において、本発明は、細菌、ウィルス、真菌またはそれらの組み合わせにより引き起こされた肺感染症を治療する方法を提供する。好ましい実施形態において、本発明は、緑膿菌により引き起こされた細菌性肺感染症の治療方法および予防方法を提供する。より好ましい実施形態において、本発明は、肺疾患の急性増悪の頻度または重症度を予防または軽減する方法を提供する。
【００１０】
ある実施形態において、本発明は、対象の肺感染症を治療する方法を提供する。本発明の方法が有効であると思われる哺乳動物は、ウシ、ウマ、ヒツジおよびブタなどの農業用動物および家畜、ならびにイヌおよびネコなどのペット、また動物園で展示飼育されている外来動物を含む。より好ましい実施形態において、対象はヒトである。
【００１１】
ある実施形態において、本発明は、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺炎、間質性肺炎、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、サルコイドーシス、嚢胞性線維症（ＣＦ）、気腫、喘息、喫煙者の咳、アレルギー、アレルギー性鼻炎、洞炎または肺線維症を患っている対象における肺感染症を治療する方法を提供する。本発明はまた、接触伝染性および病原性が高い感染症の治療および予防のための抗テロリズムプラットフォームにおいて有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
発明の詳細な説明
定義。以下の用語は、本明細書に記載された意味を有する。
【００１３】
用語「肺」とは、肺組織、特に気道上皮における任意の部分を意味する。
【００１４】
用語「感染」とは、少なくとも１種の病原体の症候性コロニー化を意味する。症候性コロニー形成は、発熱、咳、痰の産生、痰の色の変化（通常透明から緑色）、痰の粘度増加、白血球数の増加、呼吸困難、倦怠感、胸の締付け、低酸素および／または胸膜炎胸痛など、感染症の他覚的または自覚的指標として顕れ得る。肺感染症は、例えば、パルス酸素飽和度測定法および動脈血ガスにより測定された血液のガス交換および酸素負荷の他覚的指標により評価できる。肺感染症はまた、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）時に回収された指標の存在および数により評価できる。指標は、肺感染症を患っているか、またはその疑いのある対象からＢＡＬを用いて回収された細胞、サイトカインまたはタンパク質であり得る。例えば、指標は、好中球、インターロイキン−８、インターロイキン−１ベータ、ミエロペルオキシダーゼ、タンパク質および全細胞数であり得る。
【００１５】
用語「症候性」は、感染した対象によって、または通常医療提供者若しくは介護者である他者によって、観察された、または認められた疾患または傷害の徴候である。
【００１６】
用語「コロニー形成」は、肺組織における病原体の確立である。
【００１７】
用語「治療する」、「処置する」、「治療すること」および「治療」とは、感染症の根絶、寛解、または軽減が意図されている処置または適用である。
【００１８】
用語「肺の病原体負荷を軽減する」または「肺の病原体負荷を減少させる」とは、コロニーの形成された対象における症状を引き起こす対象の気道内の病原微生物（細菌、ウィルスまたは真菌）数の相対的減少を意味する。病原微生物数の相対的減少とは、治療前の病原体負荷と比較して、治療後の罹患対象における病原体負荷の減少を意味する。
【００１９】
用語「ＩＣ５０」とは、増殖または活性が５０パーセント（５０％）阻害される阻害濃度を意味する。用語「ＥＣ５０」とは、ベースラインと最大応答との間で中間の応答を引き起こす有効濃度を意味する。
【００２０】
用語「急性増悪」および「複数の急性増悪」とは、肺疾患の重症度の急激な増大を意味する。急性増悪は、疾患症状の悪化、肺機能の有意な低下、咳嗽の増加、呼吸困難、痰の産生または痰の化膿として典型的に顕れる。ＣＯＰＤの急性増悪の約８０％は、例えば、環境の変化、汚染、医療措置のノンコンプライアンスなどの非感染性原因を伴う感染源（例えば、細菌またはウィルスにより引き起こされる）のものであり、他の約２０％がアレルギー因子によるものと推定されている。セチ（Ｓｅｔｈｉ）、２００２年、Ｊ．Ｒｅｓｐ．Ｄｉｓ．２３（４）：２１７−２５頁。
【００２１】
用語「動員」とは、白血球が、ローリング、シグナリングおよびスティッキングにより内皮細胞と相互作用する段階的過程を意味し、内皮細胞を介して感染部位への遊走をもたらす。白血球は、リンパ球、マクロファージ、単球、好中球、好酸球またはそれらの組み合わせであり得る。
【００２２】
本発明は、肺感染症の治療を必要とする対象に、治療的有効量の抗セレクチン剤を投与することを含む対象の肺感染症を治療する方法であって、前記治療が肺内の病原体負荷を減少させる方法を提供する。本発明は、抗感染治療をより少なくまたはまったく使用せずに、感染症を除去する身体能力を増加させることにより肺生理機能を改善させる方法を提供する。さらに本発明は、肺疾患の急性増悪の頻度または重症度を予防するかまたは軽減させる方法を提供する。
【００２３】
哺乳動物系における感染性病原生物の存在は、多くの宿主応答を開始させる。第１の防御系は、皮膚、粘膜および絨毛などの物理的障壁に由来する。この防御に続いて、一般に病原体を直接溶解し、病原体を破壊する多数のメディエーターが放出される。動員された炎症細胞は、オプソニン作用化および非オプソニン作用化細胞の食作用を介して病原体のクリアランスまたは分解をも促進する。適応される免疫応答には、中和抗体の産生およびリンパ球、マクロファージ、単球、好中球および好酸球などの種々の免疫細胞の応答が含まれる。
【００２４】
しかしながら、炎症応答は、全体的に役立たない。免疫細胞の流入はまた、さらなる炎症を誘導する種々のサイトカイン、および反応性酸素種などの毒性化合物の放出により組織損傷を負わせ得る。気道において、この炎症過程は、特に破壊的であり得る。肺の構造は、下記により詳細に考察されているように薄い肺胞膜を通過してガス交換を可能にする。過度のまたは不適切な炎症応答の代償として、肺胞表面積が減少し、ガス交換が減少され得る。したがって、呼吸器感染症に対する免疫応答は、迅速かつ効率的でなければならない。
【００２５】
多くの場合、炎症減少および正常な細胞生理機能へ回復後、身体は感染症を除去するであろう。例えば、ハンタウィルスの病原学的原因による感染は、好中球の動員を引き起こす。好中球の流入により、血管壁が損傷され、肺の胸膜腔への血清漏れおよび肺内における体液蓄積を生じさせる。ハンタウィルスに関して許容される療法は、身体が感染ウィルスを消去する一方での対症療法からなる。
【００２６】
同様の病理が、カリニ肺炎（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ）による感染中に働く。カリニ肺炎感染の際、好中球は迅速に動員され、肺内の液体蓄積のために肺損傷が生じる。身体が感染ウィルスを消去する間やはり、対症療法が施される。しかしながら、これらの例のいずれの場合も、対症療法を攻撃的に遂行しなければならず、死亡が生じることが依然として多い。
【００２７】
肺解剖学および生理機能
肺は、ガス交換を担っており、その重要な機能により、精密な構造が要求される。肺の各々は、肺胞として知られている二重の膜に囲まれている。右肺は、より大きく、３枚の葉に分けられるが、左肺は、２枚の葉に分けられている。これらの葉は、気管支区域にさらに分けられ、その各々は、区域気管支を有する。気管は、肺の２つの主要管−右気管支および左気管支に分岐する。肺内の気管支は、再び分岐され、第２および第３の気管支を形成し、次いでより小型の細気管支、最後に末端細気管支を形成する。末端気管支の末端に肺胞がある。全体で気管と肺胞との間に約２５の区分があり、管構造は、気管から末端細気管支へ漸次変化している。（メルク（Ｍｅｒｃｋ）マニュアル、第１７版、６３章、Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、第１０版、グイトンおよびホール（Ｇｕｙｔｏｎ ａｎｄ Ｈａｌｌ）編集、２０００年、エルセビア（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）、Ｈｕｍａｎ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、シルバーソーン（Ｓｉｌｖｅｒｔｈｏｒｎ）、２０００年、プレンティス・ホール（Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ）、およびＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ａｎａｔｏｍｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、第１０版、トートラ（Ｔｏｒｔｏｒａ）ら編集、２００２年、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ）を参照）。
【００２８】
上気道は、軟骨および平滑筋を含む壁、絨毛および粘膜分泌ゴブレット細胞を有する上皮内層、ならびに内分泌細胞がある。下気道には、軟骨はなく、漸次薄くなる筋肉層、絨毛細胞の単層はなく、ゴブレット細胞および界面活性剤様物質を産生する粒状クラーラ細胞はごくわずかしかない。
【００２９】
肺胞嚢は、末端細気管支の末端に肺胞群から形成される。各肺は、約３億の肺胞を含有し、全表面積は約４０〜８０ｍ２となる。肺胞の上皮内層は、主としてガス交換のための薄層を備えるＩ型肺細胞からなる。それらは、密な結合によりＩＩ型肺細胞に結合している。これらの密な結合により、肺胞内外の流体移動が制限される。ＩＩ型肺細胞は、Ｉ型肺細胞よりも多いが、覆っている上皮はより少ない。それらは、肺界面活性剤を産生する液胞を含有する。肺胞はまた、マクロファージを含有する。（メルク（Ｍｅｒｃｋ）マニュアル、第１７版、６３章、Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、第１０版、グイトンおよびホール（Ｇｕｙｔｏｎ ａｎｄ Ｈａｌｌ）編集、２０００年、エルセビア（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）、Ｈｕｍａｎ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、シルバーソーン（Ｓｉｌｖｅｒｔｈｏｒｎ）、２０００年、プレンティス・ホール（Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ）、およびＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ａｎａｔｏｍｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、第１０版、トートラ（Ｔｏｒｔｏｒａ）ら編集、２００２年、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ）を参照されたく、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される）。
【００３０】
ガス交換は、細気管支のレベルで生じる。肺胞には、ガス交換のために約３０ｍ２の大きな表面積を供するキャピラリの拡散ネットワークが備わっている。（一般に、米国特許第６，１７５，７５５号明細書、ラビリスおよびドロビッチ（Ｌａｂｉｒｉｓ ａｎｄ Ｄｏｌｏｖｉｃｈ）、２００３年、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５６（６）：５８８−９９頁、ラビリスおよびドロビッチ（Ｌａｂｉｒｉｓ ａｎｄ Ｄｏｌｏｖｉｃｈ）、２００３年、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５６（６）：６００−１２頁を参照）。
【００３１】
吸入された空気からの酸素は、肺胞を通過して血流内に入る。次に血液は、肺静脈を経て心臓の左側に入り、そこから全身にポンプで送り込まれる。身体の全ての領域から心臓右側に戻る脱酸素化された血液は、肺動脈を経て肺にポンプで戻る。二酸化炭素は、肺胞を囲んでいる毛細管を通って肺胞空間内に入り、呼気される。
【００３２】
対象の酸素負荷度は、肉眼観察および客観的手段の双方により評価できる。肉眼観察としては、特に四肢および爪床における色の変化を挙げることができる。客観的手段としては、パルス酸素飽和度測定法または動脈血ガスレベルによる酸素飽和度判定を挙げることができる。パルス酸素飽和度測定法および動脈血ガス（ＡＢＧ）の双方とも、血中酸素の部分大気圧（ＰａＯ２）の目安である。パルス酸素飽和度測定法は、ＰａＯ２を測定する好適な間接的方法であり、一般に利用できる。肺疾患のない安静状態の個体は、一般に約９５〜１００％のパルス酸素飽和度測定器の読取を有する。９７％のパルス酸素飽和度測定器の指標は、約９７ｍｍＨｇのＰａＯ２に相関する。９０％のパルス酸素飽和度測定器の指標は、危険な低さである約６０ｍｍＨｇのＰａＯ２に相関する。８０％のパルス酸素飽和度測定器の指標は、重篤な低酸素症を示す約４５ｍｍＨｇのＰａＯ２に相関する。（一般に、ビアマン（Ｂｉｅｒｍａｎ）ら、１９９２年、Ｃｈｅｓｔ、１０２（５）：１３６７−７０頁、ゲイ（Ｇａｙ）、２００４年、Ｒｅｓｐ．Ｃａｒｅ ４９（１）：３９−５１頁、デイビーズ（Ｄａｖｉｅｓ）ら、２００３年、Ｎ．Ｚ．Ｍｅｄ．Ｊ．１１６（１１６８）：Ｕ２９７頁、ケイシー（Ｃａｓｅｙ）、１９９７年、Ｎｕｒｓ．Ｓｔａｎｄ．１５（４７）：４６−５３頁およびミドルトンおよびヘンリー（Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｈｅｎｒｙ）、２０００年、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｒａｃｔ．５４（７）：４３８−４４頁を参照されたく、それらの各々は参照としてそれらの全体が本明細書に援用される）。
【００３３】
ある実施形態において、肺感染症の治療により、感染対象における≧約９０％、≧約９３％、≧約９５％、≧約９７％のパルス酸素飽和度測定レベルを提供できる。ある実施形態において、肺感染症の治療により、約６０ｍｍＨｇ、約７０ｍｍＨｇ、約７５ｍｍＨｇ、約８０ｍｍＨｇ、約８５ｍｍＨｇ、約９０ｍｍＨｇ、約９５ｍｍＨｇ、または約９７ｍｍＨｇのＰａＯ２を提供できる。
【００３４】
気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）は、光ファイバースコープを対象の肺に入れ、滅菌水（生理食塩水）を肺に注入し、引き続き水を除去することによって実施される診断法および治療法である。除去された滅菌水は、下気道からの分泌物、細胞、およびタンパク質を含有する。ＢＡＬにより得られたサンプルは、下記の実施例１に記載されているように、肺で進行する可能な疾患過程についてさらなる情報を得るために分析できる。さらに、確認される炎症細胞および免疫細胞の補体ならびに炎症伝達物質もまた、肺の病態を評価する上で有用であり得る。（一般に、サンチェズ・ニート（Ｓａｎｃｈｅｚ Ｎｉｅｔｏ）ら、１９９５年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１４（１０）：８３９−５０頁、アロラ（Ａｒｏｒａ）ら、２００２年、Ａｎａｅｓｔｈ．Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｒｅ ３０（１）：１１−２０頁、フィオリニ（Ｆｉｏｒｉｎｉ）ら、２０００年、Ｂｉｏｍｅｄ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．５４（５）：２７４−８頁、ジャージョア（Ｊａｒｊｏｕｒ）ら、２０００年、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０５：１１６９−７７頁、およびバレス（Ｖａｌｌｅｓ）ら、１９９４年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１３（７）：５４９−５８を参照されたく、それらの各々は参照としてその全体が本明細書に援用される）。
【００３５】
肺活量測定法は、本発明の方法と関連して肺機能をモニターするために使用できる。肺活量測定法は、対象が周期性呼吸から全肺容量（ＴＬＣ）まで最大に吸引し、次いで、さらなる容量が、残容量（ＲＶ）で吐き出されなくなるまで素早く最大限に吐き出す操作である。この操作は、努力肺活量（ＦＶＣ）測定を生じさせる強制様式で、または緩徐肺活量（ＳＶＣ）測定を生じさせる緩和様式で実施する。正常な個人において、吸気性肺活量、呼気性ＳＶＣ、および呼気性ＦＶＣは、本質的に等しい。しかしながら、閉塞性気道疾患患者においては、呼気性ＳＶＣは、一般にＦＶＣよりも高い。肺容量曲線から生じた値により、空気流量（１秒間の強制呼気容量、または他の時限容量でのＦＥＶ１）および呼息肺容量（ＦＶＣまたはＳＶＣ）など、肺の力学的性質に関するデータを提供する。この測定は、一般的に容量に関してはリットルまたは流量に関しては１秒当りのリットルで表され、体温および水蒸気で飽和されるガス圧に関しては補正できる。（Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ｔｅｓｔｉｎｇ：Ｂａｓｉｃｓ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎ、ギルデア（Ｇｉｌｄｅａ）ら編集、クリーブランド・クリニック出版社（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）２００２年、Ａｎｅｒｉｃａｎ Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｏｃｉｅｔｙ、１９９５年、Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｐｉｒｏｍｅｔｒｙ、１９９４年Ｕｐｄａｔｅ，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１５２：１１０７−１１３６頁、Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ｔｅｓｔｉｎｇ，Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｖｅｒｓｉｅｓ：Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ，Ｍｅｔｈｏｄｓ，ａｎｄ Ｎｏｒｍａｌ Ｖａｌｕｅｓ、クラウセンおよびザリンス（Ｃｌａｕｓｅｎ ａｎｄ Ｚａｒｉｎｓ）編集、ニューヨーク：アカデミックプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）、１９８２年、ベックレーク（Ｂｅｃｋｌａｋｅ）ら、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．１４４：１２０２−１２１８頁、クラポ（Ｃｒａｐｏ）ら、１９８１年、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．１２３：６５９−６６４頁およびクヌードソン（Ｋｎｕｄｓｏｎ）ら、１９８３年、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．１２７：７２５−３４頁を参照されたく、それらの各々は参照としてその全体が本明細書に援用される）。
【００３６】
痰サンプリングおよび培養もまた、診断を補助し、治療を導くために、本発明の方法と関連して使用できる。痰サンプルは、喀痰法または痰誘導法により採取できる。さらに、呼気凝縮法は、炎症伝達物質などの呼気の非ガス状成分の非侵襲的採取に有用であり得る（エコスクリーン（ＥｃｏＳｃｒｅｅｎ）；Ｊａｅｇｅｒ，Ｗｕｅｒｚｂｕｒｇ、独国））。採取痰からの微生物単離体は、当業界に周知である標準的な方法により同定できる。（ボガート（Ｂｏｇａｅｒｔ）ら、２００４年、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７２（２）：８１８−２３頁、クソマ（Ｃｓｏｍａ）ら、２００２年、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１６６（１０）：１３４５−１３４９頁、ヘニッグ（Ｈｅｎｉｇ）ら、２００１年、Ｔｈｏｒａｘ ５６（４）：３０６−１１頁、ギブソン（Ｇｉｂｓｏｎ）、１９９８年、Ｃａｎ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．５ Ｓｕｐｐｌ Ａ：２２Ａ−６Ａを参照されたく、それらの各々は参照としてその全体が本明細書に援用される）。
【００３７】
肺感染症
ある実施形態において、本発明は、肺感染症を治療する方法を提供する。肺感染症は、任意の病原体または肺感染症を引き起こす病原体の組み合わせに由来し得る。ある実施形態において、病原体は、細菌、ウィルス、真菌またはそれらの組合せであり得る。
【００３８】
本発明の方法により処置される細菌病原体は、地域感染型、日和見感染性またはバイオテロリストの薬剤であり得る。グラム陽性、グラム陰性、桿菌、球菌および異型細菌として分類された細菌は、本発明の範囲に包含される。このような細菌病原体としては、限定はしないが、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、表在性ブドウ球菌（Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、サプロフィチカスブドウ球菌（Ｓ．ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ）などのブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）種；肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、サングイス連鎖球菌（Ｓ．ｓａｎｇｕｉｓ）、オラリス連鎖球菌（Ｓ．ｏｒａｌｉｓ）、唾液連鎖球菌（Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、ミュータンス連鎖球菌（Ｓ．ｍｕｔａｎｓ）、化膿連鎖球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）などの連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）種；バークホルデリラ・セパシア（Ｂｕｒｋｈｏｌｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）、肺炎クラミジア（Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）などのクラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）種、アクチノバチルス・アクチノミセテムコミタンス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ）などのアシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）種；カルジオバクテリウム・ホミニス（Ｃａｒｄｉｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈｏｍｉｎｉｓ）、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、カタル球菌（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）（また時には、モラクセラ・カタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）として分類される）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）などのシュードモナス菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種；大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）種、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）種、霊菌（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）およびパラインフルエンザ菌（Ｈ．ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）などのヘモフィラス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）種；レジオネラ・ニューモフィラ菌（Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、エル・ミクダデイ（Ｌ．ｍｉｃｄａｄｅｉ）、エル・ボゼマニ（Ｌ．ｂｏｚｅｍａｎｉｉ）およびエル・デュモフィ（Ｌ．ｄｕｍｏｆｆｉｉ）などのレジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）種；肺炎マイコプラズマ（Ｍ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）およびウシ型結核菌（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）などのマイコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種；およびアリカリゲネス（Ａｌｋａｌｉｇｅｎｅｓ）種、カルジオバクテリウム（Ｃａｒｄｉｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種およびエイケネラ（Ｅｉｋｅｎｅｌｌａ）種などのグラム陰性桿菌、が挙げられる。また、例えば、肺炎マイコプラズマ（Ｍ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を含むマイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）種などの異型細菌が挙げられる。（メルク（Ｍｅｒｃｋ）マニュアル、第１７版、ビアーズおよびバーコウ（Ｂｅｅｒｓ ａｎｄ Ｂｅｒｋｏｗ）編集、２００４年、メルク（Ｍｅｒｃｋ）社、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｃａｒｅ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ、グローエンウェーゲンおよびウォーターズ（Ｇｒｏｅｎｅｗｅｇｅｎ ａｎｄ Ｗｏｕｔｅｒｓ）、２００３年、Ｒｅｓｐｉｒ．Ｍｅｄ．９７（７）：７７０−７頁、レロ（Ｒｅｌｌｏ）ら編集、２００１年、クルーワー・アカデミック出版社（Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）、ボストン、Ｋｒｕｇｍａｎ’ｓ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ、第１０版、カッツ（Ｋａｔｚ）ら編集、モスビー（Ｍｏｓｂｙ）、セントルイス、これらは、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される）。
【００３９】
本発明の方法に包含されているウィルス感染症としては、限定はしないが、リノウィルス、呼吸器合胞体ウィルス、パラインフルエンザウィルス、インフルエンザＡおよびＢウィルス、アデノウィルス、ピコルナウィルス、水痘帯状疱疹ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、コクサッキーウイルス、ＳＡＲＳ−関連コロナウィルス（ＳＡＲＳ−ＣｏＶ）などのコロナウィルス、シン・ノブレ（Ｓｉｎ Ｎｏｍｂｒｅ）ウィルス、（ハンタウィルスに関する原因物質）およびサイトメガロウィルスが挙げられる。（フィートおよびノイエス（Ｆｅｔｅ ａｎｄ Ｎｏｙｅｓ）１９９６年、Ｐｅｄｉａｔｒ．Ａｎｎ．２５：５７７−８４頁；フェルドマンおよびストークス（Ｆｅｌｄｍａｎ ａｎｄ Ｓｔｏｋｅｓ）、１９８７年、Ｓｅｍｉｎ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｉｎｆｅｃｔ．２：８４−９４頁；フランクおよびフリードマン（Ｆｒａｎｋ ａｎｄ Ｆｒｉｅｄｍａｎ）１９８８年Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１０９：７６９−７１頁；グラマンおよびホール（Ｇｒａｍａｎ ａｎｄ Ｈａｌｌ）、１９８９年、Ｓｅｍｉｎ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｉｎｆｅｃｔ．４：２５３−６０頁；グリーンバーグ（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ）１９９１年、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．５：６０３−２１頁；ジャコブソンおよびミルズ（Ｊａｃｏｂｓｏｎ ａｎｄ Ｍｉｌｌｓ）、１９８８年、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｓｔ Ｍｅｄ．９：４４３−８頁；ラタム・サドラーおよびモレル（Ｌａｔｈａｍ−Ｓａｄｌｅｒ ａｎｄ Ｍｏｒｅｌｌ）１９９６年、Ｐｒｉｍ．Ｃａｒｅ．２３：８３７−４８頁；リュングマン（Ｌｊｕｎｇｍａｎ）１９９５年、Ｓｅｍｉｎ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｉｎｆｅｃｔ．１０：２０９−１５頁；ｗｅｂｓｉｔｅ ｆｏｒ Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ；セチ（Ｓｅｔｈｉ）、２００２年、Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．２３（４）：２１７−２５頁、タン（Ｔａｎ）ら、２００３年、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．１１５（４）：２７２−７頁、ホッグ（Ｈｏｇｇ）、２００１年、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１６４（１０Ｐｔ２）：Ｓ７１−５頁を参照されたく、それら各々の内容は、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される）。
【００４０】
ある実施形態において、本発明の方法により処置された肺感染症は、真菌により引き起こされる。本発明の方法により包含される真菌類としては、カリニ肺炎（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉ）（現在、原虫よりも真菌として考慮されている）、ブラストミセス・デルマティティディス（Ｂ．ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）などのブラストミセス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ）種；クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）種、カンジダアルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）などのカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）種；アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、エイチ・カプスラーツム（Ｈ．ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）などのヒストプラズマ（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）種；コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、スポロトリクス・シェンキー（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｋｉｉ）およびアンフィビオラム（ａｍｐｈｉｂｉｏｒｕｍ）ケカビ、シルシネロイデス（ｃｉｒｃｉｎｅｌｌｏｉｄｅｓ）ケカビ、ヒエマリス（ｈｉｅｍａｌｉｓ）ケカビ、インジカス（ｉｎｄｉｃｕｓ）ケカビ、ラセモサス（ｒａｃｅｍｏｓｕｓ）ケカビ、およびラモシッシムス（ｒａｍｏｓｉｓｓｉｍｕｓ）ケカビなどのケカビ（Ｍｕｃｏｒ）種が挙げられる。（アルノウ（Ａｒｎｏｗ）ら、１９９１年、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１６４：９９８−１００２頁；レンチノ（Ｌｅｎｔｉｎｏ）ら、１９８２年、Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１１６：４３０−４３７頁；ディクソン（Ｄｉｘｏｎ）ら、２００４年、Ｐｈａｒｍａｃｏｅｃｏｎｏｍｉｃｓ ２２（７）：４２１−３３頁；チラー（Ｃｈｉｌｌｅｒ）ら、２００３年、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．１７（１）：４１−５７頁、ｖｉｉｉ；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｏｒｙ Ｍｙｃｏｌｏｇｙ第４版アレクソポウロス（Ａｌｅｘｏｐｏｕｌｏｓ）ら編集、１９９６年、ジョン・ワイリー（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ）、ニューヨーク；アナイシー（Ａｎａｉｓｓｉｅ）ら編集、１９８６年、Ｃａｎｃｅｒ、５７：２１４１−２１４５頁；デレシンスキー（Ｄｅｒｅｓｉｎｓｕｋｉ）２００３年、Ｓｅｍｉｎ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｉｎｆｅｃｔ．１８（３）：２１６−９頁を参照されたく、それら各々の内容は、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される）。
【００４１】
本発明の方法は、バイオテロリズムの行動によって与えられる肺感染症の治療に使用できる。バイオテロリストの薬剤となる可能性のあると確認された作用物質は、バイオテロリズムの脅威より前から知られているものであるが、それらの患者数は、高い病原性にもかかわらず比較的低かった。このような感染作用物質としては、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、天然痘、サル痘ウィルス、ブルセラ症（Ｂｒｕｃｅｌｌａｓｉｓ）種、野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）（野兎病の原因物質）、ペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ）（ペストの原因物質）およびエボラ（Ｅｂｏｌａ）ウィルスが挙げられる。ジョーンズ（Ｊｏｎｅｓ）ら、２００３年、Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．９（９）：９８４−６頁、シュリーワー（Ｓｃｈｒｉｅｗｅｒ）２００４年、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６９：２８９−３０８頁、グイホット（Ｇｕｉｈｏｔ）、２００４年、Ｐｒｅｓｓ Ｍｅｄ．３３（２）：１１９−２２頁、ハンおよびズント（Ｈａｎ ａｎｄ Ｚｕｎｔ）、２００３年、Ｃｕｒｒ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｐ．（３）：４７６−８２頁、クルグ（Ｋｒｕｇ）２００３年、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．２００３年、５７（１〜２）：１４７−５０頁、ホィットリー（Ｗｈｉｔｌｅｙ）、２００３年、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．５７（１〜２）：７−１２頁およびクンハ（Ｃｕｎｈａ）、２００２年、Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．（８）：４８９−５０３頁を参照されたく、それらの各々は、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される。
【００４２】
本発明の方法は、肺感染症の治療を提供し、該治療は、肺中の病原体負荷を減少させる。一定の肺疾患およびアレルギーは、対象が彼らの病態を悪化させ得る肺感染症に罹りやすくする。これらの肺疾患およびアレルギーを有する対象は、本発明の方法により利益を得ることができる。例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）または慢性気管支炎に患っている対象は、感染症になると疾患の急性増悪を経験する可能性がある。これらの疾患における急性増悪は、しばしば対象の生活の質および肺機能に重大な負の影響を与える。例えば、ＣＯＰＤに患っている対象は、典型的に１年に１回から３回の悪化を経験し、米国だけで毎年約５００，０００人の入院の原因となっている。急性増悪は、細菌、真菌またはウィルス病原体、またはそれらの組合せにより発生し得る。ＣＯＰＤまたは慢性気管支炎の対象においてこのような急性増悪の原因となる細菌病原体としては、典型的にインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）および緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）が挙げられ、一方、ウィルス病原体としては、典型的にリノウィルス、呼吸器合胞体ウイルスおよびインフルエンザウィルスが挙げられる。アーロン（Ａａｒｏｎ）ら、２０００年、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１６３：３４９−３５５頁、バンジ（Ｂａｎｄｉ）ら、２００３年、ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３７（１）：６９−７５頁、ボガート（Ｂｏｇａｅｒｔ）ら、２００４年、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７２（２）：８１８−２３頁、カーン（Ｋｈａｎ）ら、２００３年、Ｊ．Ｐａｋ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．５３（８）：３３８−４５頁、グローエンウェーゲンおよびウォーターズ（Ｇｒｏｅｎｅｗｅｇｅｎ ａｎｄ Ｗｏｕｔｅｒｓ）、２００３年、Ｒｅｓｐｉｒ．Ｍｅｄ．９７（７）：７７０−７頁、ソトおよびバーキー（Ｓｏｔｏ ａｎｄ Ｖａｒｋｅｙ）、２００３年年Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｕｌ．Ｍｅｄ．２００３年、９（２）：１１７−２４頁、ミラビトルズ（Ｍｉｒａｖｉｔｔｌｅｓ）、２００２年、Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．Ｓｕｐｐｌ．３６：９ｓ−１９ｓ頁、リーバーマン（Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ）ら、２００２年、Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．１９（３）：３９２−７頁を参照されたく、それらの各々は、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される。
【００４３】
急性増悪はまた、多くの場合、呼吸器ウィルス（リノウィルス、アデノウィルス、ピコルナウィルスおよびインフルエンザウィルス）または細菌（肺炎クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびレジオネラ・ニューモフィラ菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ））感染により引き起こされる喘息に患っている対象に生じる。喘息に患っている対象における急性増悪は、肺への好中球および好酸球双方の浸出に関係するが、好中球応答が典型的に優勢である。ワーク（Ｗａｒｋ）ら、２００１年、Ｍｏｎａｌｄｉ Ａｒｃｈ．Ｃｈｅｓｔ．Ｄｉｓ．５６（５）：４２９−３５頁、ジャージャー（Ｊａｒｊｏｕｒ）ら、２０００年、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０５：１１６９−７７頁、ワーク（Ｗａｒｋ）ら、２００２年、Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．１９（１）：６８−７５頁、ワーク（Ｗａｒｋ）ら、２００２年、Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．２０（４）：８３４−４０頁、ギブソン（Ｇｉｂｓｏｎ）ら、１９９９年、Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｐｕｌｍｏｎｏｌ．２８（４）：２６１−７０、タン（Ｔａｎ）ら、２００３年、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．１１５（４）：２７２−７頁、ツワッデル（Ｔｗａｄｄｅｌｌ）ら、１９９６年、Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．９（１０）：２１０−８頁を参照されたく、それらの各々は、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される。
【００４４】
嚢胞性線維症肺疾患は、過度の炎症応答を特徴とし、慢性緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染を伴うことが多い。健常な対象および嚢胞性線維症に患っている肺疾患対象における気管支肺胞洗浄液で、嚢胞性線維症に患っている対象では、炎症誘発性サイトカイン類が上昇するが、抗炎症サイトカインインターロイキン−１０の量は無視できるものであることが示された。チミール（Ｃｈｍｉｅｌ）ら、１９９９年、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１６０：２０４０−２０４７頁、また、シルバ・メジアス（Ｓｉｌｖａ−Ｍｅｊｉａｓ）ら、１９９５年、Ｃｈｅｓｔ １０８：９４２−９４５頁を参照されたい。
【００４５】
ある実施形態において、本発明の方法は、ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、肺炎、間質性肺炎、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、重症の急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、サルコイドーシス、嚢胞性線維症、気腫、喘息、喫煙者の咳、アレルギー、アレルギー性鼻炎、洞炎または肺線維症に患っている対象の治療を提供する。
【００４６】
本発明のある実施形態において、該方法は、ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、肺炎、間質性肺炎、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、重症の急性呼吸困難症候群（ＳＡＲＳ）、サルコイドーシス、嚢胞性線維症、気腫、喘息、喫煙者の咳、アレルギー、アレルギー性鼻炎、洞炎または肺線維症に患っている対象における肺症状の急性増悪の軽減を提供する。
【００４７】
肺感染症の指標としては、気管支肺胞洗浄液中のインターロイキン−１、インターロイキン−８、インターロイキン−１０、タンパク質およびミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）細胞の増加を挙げることができる。ある実施形態において、本発明の方法は、処置がＢＡＬを介して評価できる肺感染症の治療を提供する。ある実施形態において、該方法により、感染対象からの気管支肺胞洗浄液中のインターロイキン−１、インターロイキン−８、タンパク質およびＭＰＯ細胞の減少が提供される。ある実施形態において、該方法により、咳の減少、痰着色の消去、痰量の減少、呼吸困難の減少または除去、皮膚または爪床の色またはパルス酸素飽和度測定により示される酸素負荷の改善により顕れる、肺疾患における急性増悪の減少が提供される。
【００４８】
抗セレクチン剤
多くの細胞接着分子は、炎症過程に関与していることが知られている。炎症部位において、白血球は、血管外遊出の前に先ず血管内皮細胞に結合する。糖タンパク質細胞接着ファミリーのメンバーであるセレクチン類は、内皮細胞に対する白血球の最初の接着に重要な役割を演じるが、インテグリン類およびＩｇスーパーファミリーのメンバーなどの他の接着分子は、後期過程に関与すると考えられている。セレクチン類およびそれらの炭水化物リガンド類により媒介される細胞接着は、内皮層への白血球の結合およびローリングを引き起こすことにより、第２の堅固な接着および内皮細胞表面に存在するインターロイキン（ＩＬ−８）またはＭＩＰ１−ベータなどの炎症ケモカイン類の作用により活性化されるインテグリン類により媒介されるシグナル伝達がもたらされる。（ラスキー（Ｌａｓｋｙ）、１９９２年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５８（５０８４）：９６４−９頁）。
【００４９】
該セレクチン類は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）（ノグエラ（Ｎｏｇｕｅｒａ）ら、２００４年、Ｃｈｅｓｔ １２５（５）：１８３７−４２頁）、喘息（スジョスワード（Ｓｊｏｓｗａｒｄ）ら、２００４年、Ｒｅｓｐｉｒａｔｉｏｎ ７１（３）：２４１−５頁）、反応性関節炎、リウマチ様関節炎（ＲＡ）、および敗血症（クーリアラ（Ｋｕｕｌｉａｒａ）ら、２００４年、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．３３（１）：１３−８頁）などの疾患状態の炎症過程、ならびに皮膚、肺および腸管の炎症過程（また、レイおよびカンサス（Ｌｅｙ ａｎｄ Ｋａｎｓａｓ）、２００４年、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４（５）：３２５−３６頁、クーリアラ（Ｋｕｕｌｉａｒａ）ら、２００４年、Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．２００４年３月３日［印刷前の電子出版］を参照）に関係があるとされている。
【００５０】
セレクチンファミリーは、３つのメンバーＥ−、Ｐ−およびＬ−セレクチンからなる。Ｅ−セレクチンリガンドとＰ−セレクチンリガンドとの間には特性に幾つかの重要な違いがある。例えば、白血球上のＰ−セレクチンリガンドはプロテアーゼ感受性であるが、一方、Ｅ−セレクチンは、プロテアーゼ処理に対して高い耐性がある。Ｌ−セレクチンが、炎症での白血球動員においてＥ−およびＰ−セレクチンと同じように重要な役割を演じるかどうかは依然として論争の的になっている。Ｌ−セレクチンは、主として白血球の末端リンパ節への生理的ホーミングに関与することが示唆されている。Ｐ−セレクチンは軽症喘息の感受性マーカーとして使用できる。（ノグエラ（Ｎｏｇｕｅｒａ）ら、２００４年、Ｒｅｓｐｉｒａｔｉｏｎ ７１（３）：２４１−５頁、スジョスワード（Ｓｊｏｓｗａｒｄ）ら、２００４年、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．３３（１）：１３−８頁、米国特許第６，２０４，００７号明細書）。
【００５１】
本発明の方法は、抗セレクチン剤の投与による肺感染症の治療を提供する。本発明のある実施形態において、抗セレクチン剤は、好中球、単球および好酸球の動員および遊走など、白血球の動員または遊走を阻害する。本発明のある実施形態において、抗セレクチン剤は、セレクチンとそのリガンドとの相互作用をさえぎるためにセレクチンに競合的に結合する薬剤であり得る。本発明のある実施形態において、抗セレクチン剤は、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、小型分子、セレクチンアンタゴニストの遺伝子送達またはそれらの組み合わせであり得る。
【００５２】
白血球の動員または遊走の阻害は、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにより測定できる。一実施形態において、該アッセイは、下記に詳細に記載されているＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）アッセイであり得る。ある実施形態において、該方法は、約４０％のローリング阻害、約５０％のローリング阻害、約６０％のローリング阻害または約７０％のローリング阻害を提供する。
【００５３】
ある実施形態において、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）を、本発明の方法に使用できる。Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）アッセイは、表面プラズモン共鳴技術を用いて生体分子結合の検出およびモニタリングを提供する。これらのアッセイにより、生体分子間の結合相互作用に関するリアルタイム定量データが提供される。Ｂｉａｃｏｒ ＡＢ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ニュージャージ州。
【００５４】
ある実施形態において、抗セレクチン剤は、抗セレクチン抗体またはそのフラグメントである。抗セレクチン抗体は、モノクローナル、ポリクローナル、またはそれらの組み合わせであり得る。抗セレクチン抗体は、ヒト化、キメラまたはそれらの組み合わせであり得る。抗体類およびそれらのフラグメントを作製または製造する方法は、当業界に公知であり、本明細書に記載された抗セレクチン抗体を作製するために使用できる。
【００５５】
好ましい実施形態において、抗セレクチン抗体はＥＬ２４６であり、ハイブリドーマにより分泌されたモノクローナル抗体が、抗セレクチン剤として選択される。ＥＬ２４６を分泌するハイブリドーマのサンプルは、ＡＴＣＣ登録番号ＨＢ １１０４９としてブダペスト条約に従って寄託されており、参照としてその全体が本明細書に援用される米国特許第５，７５６，０９５号明細書に記載されている。本発明の方法に有用な他の抗セレクチン抗体としては、米国特許第６，２０４，００７号明細書と米国特許第５，６３２，９９１号明細書に記載されているＥ−セレクチン抗体および米国特許第６，２１０，６７１号明細書に記載されているＬ−セレクチン抗体が挙げられる。本発明の方法に有用な他の抗セレクチン剤としては、米国特許第６，１１１，０６５号明細書に記載されているペプチド類およびペプチド類縁体、米国特許第５，９６２，６６０号明細書と米国特許第５，８３０，８７１号明細書に記載されている炭水化物および炭水化物類縁体、または米国特許第６，２８０，９３２号明細書に記載されている核酸リガンド類が挙げられる。前述の特許の各々の教示は、参照としてその全体が本明細書に援用される。
【００５６】
幾つかの場合において、マウス、げっ歯類、霊長類、ヒトなどの種々の哺乳動物宿主からモノクローナル抗体を調製することが好ましい。このようなモノクローナル抗体の調製方法の記載は、例えば、スチテス（Ｓｔｉｔｅｓ）ら編集、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４版）、ランジメディカル（Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ）出版社、ロスアルトス、カリフォルニア州、およびそれに引用されている文献；ハーローおよびレーン（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ）（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ；ゴーディング（Ｇｏｄｉｎｇ）（１９８６）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（第２版）アカデミックプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク；および特にコーラーおよびミルステイン（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ）（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９７−４９７頁に見ることができ、モノクローナル抗体を生成する方法の一方法を考察している。これらの引用文献の各々は、参照として本明細書に援用される。簡単に要約すると、この方法は、動物に免疫原を注入することを含む。次に動物を殺処理し、次いでその脾細胞を単離し、骨髄腫細胞と融合する。これにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏで再生できるハイブリッド細胞または「ハイブリドーマ」が生じる。次にハイブリドーマの集団を、個々のクローンを単離するためにスクリーニングし、それらの各々は、免疫原に反応性の単一抗体種を分泌する。この様式で得られた個々の抗体種は、免疫原性物質上で認識された特異的部位に応答して生成される免疫動物からの固定されたクローン化単一Ｂ細胞の産物である。
【００５７】
他の好適な技術は、抗原種あるいはファージまたは類似のベクターにおける抗体ライブラリーの選択物に対する、リンパ球のｉｎ ｖｉｔｒｏ曝露を含む。ヒューズ（Ｈｕｓｅ）ら、１９８９年、「Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｌａｒｇｅ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ｉｎ Ｐｈａｒｇｅ Ｌａｍｄａ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１頁；およびワード（Ｗａｒｄ）ら、１９８９年、Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６頁を参照されたく、それらの各々は、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される。本発明の抗セレクチン抗体は、改変を有しても有しなくてもよく、キメラ抗体またはヒト化抗体を含む。種々のモノクローナル抗体の作製を教示する特許としては、米国特許第４，８２８，９９１号明細書、米国特許第５，６６５，３５７号明細書、米国特許第４，７４１，９９８号明細書、米国特許第５，８６３，７９６号明細書および米国特許第６，０５６，９５７号明細書が挙げられる。これらの特許は、参照として本明細書に援用される。
【００５８】
抗セレクチン抗体は、抗体全体（例えば、ＦａｂおよびＦｃの双方）を含む組成物または抗体の抗原結合性フラグメントを含む組成物であり得る。抗体またはその一部は、例えば、Ｅ−セレクチンおよび／またはＬ−セレクチンなど、１種以上のセレクチン上の抗原決定基に結合する。あるいは、抗セレクチン抗体は、モノクローナル抗体ＥＬ２４６と同じセレクチン（例えば、Ｅ−セレクチンおよび／またはＬ−セレクチン）上のエピトープに結合できる。
【００５９】
投与方法および製薬組成物
本発明の方法は、抗セレクチン剤を含む製薬組成物の投与による肺感染の治療を提供する。本発明の方法は、感染部位（例えば、肺および下部気道）に抗セレクチン剤の有効量を供する任意の投与経路により実施できる。抗セレクチン剤の用量は、感染部位（例えば、肺および下部気道）に抗セレクチン化合物の有効量を提供するのに十分である。
【００６０】
本発明の方法は、抗セレクチン剤の投与を提供する。該投与は、抗セレクチン剤の薬物動態パラメータ、対象における同時罹患病態の存在、投与経路および疾病の重症度など、多くのパラメータによって、毎日の単回投与または毎日の分割投与とすることができる。（Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、第５版、ジピロ（ＤｉＰｉｒｏ）ら編集、２００２年、ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、コダ・キンブル（Ｋｏｄａ−Ｋｉｍｂｌｅ）ら編集、第７版、リッピンコット（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ）、ウィリアムス（Ｗｉｌｌｉａｍｓ）およびウィルキンス（Ｗｉｌｋｉｎｓ）を参照されたく、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される）。数日毎または数週毎の薬剤の周期的投与を含む措置もまた、本発明の範囲に包含されている。
【００６１】
医師は、臨床技術および本明細書に提供された説明により適量を見分けることができる。典型的な毎日の用量は、１日当り約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重から、１日当り約１００ｍｇ／ｋｇ体重までであり得る。ある実施形態において、毎日の用量は、１日当り約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重から、１日当り約１０ｍｇ／ｋｇ体重までであり得る。ある実施形態において、毎日の用量は、１日当り約０．１ｍｇ／ｋｇ体重から、１日当り約１ｇｍ／ｋｇ体重までであり得る。例えば、ＣＯＰＤに患っている対象における急性増悪時の、呼吸作用の増加、効果のない咳、粘液分泌抑制、進行性低酸素血症または高炭酸血症、錯乱、および疲労は、過剰医療または過少医療という結果になり得るが、これらは、医師により用量調整を行うことによって防ぐことができる。
【００６２】
記載された方法は、肺感染症を治療するために十分な期間、抗選択剤の投与を提供する。ある実施形態において、治療期間は、１回投与または一定期間の計画投与であり得る。ある実施形態において、治療期間は、複数日、複数週またはさらに複数月であり得る。ある実施形態において、該治療は、ルーチン（例えば、毎日、３日毎、毎週、２週毎など）または定期的（例えば、急性増悪時または危険性の増加した期間、例えば、インフルエンザ時期）に投与できる。ある実施形態において、抗セレクチン剤の「パルス化」または「ボーラス」用量を、特に例えば、急性増悪の際、必要とする対象に投与することができる。このようなパルス化またはボーラス用量およびその期間は、医師により決定できる。
【００６３】
本発明の方法は、抗セレクチン剤が、他の薬物、療法および治療と共に投与することができるように提供する。ある実施形態において、抗セレクチン剤は、セファロスポリン類、ペニシリン類、フルオロキノロン類、エリスロマイシン類、テトラサイクリン類薬、抗ウィルス薬（アマンチジン類、リバビリンなど）および抗真菌剤（アゾール抗真菌剤およびアンホテリシンなど）などの抗感染薬と共に投与できる。ある実施形態において、ベータアゴニスト類（アルブテロール）、ステロイド類、抗不安薬、および鎮痛剤などの呼吸困難の症状を治療または寛解する薬物または療法と共に、抗セレクチン剤を投与できる。さらに、呼吸療法は、肺感染症の治療を提供するために抗セレクチン剤の投与と関連して使用できる。（Ｄｒｕｇ Ｆａｃｔｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ、最新の月刊誌、ウォルターズ・クルワー（Ｗｏｌｔｅｒｓ Ｋｌｕｗｅｒ）社、セントルイス、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ、第５８版、メディカルエコノミックス（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ）社、２００３年、を参照されたく、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される）。
【００６４】
投与経路は、典型的に活性化合物の製薬製剤により規定される。本発明により、製薬製剤が、ｉｎ ｖｉｖｏ投与およびｉｎ ｖｉｖｏ送達に好適な製薬的に許容できる担体中に活性成分として抗セレクチン剤を含むことができるように提供する。抗体タンパク質は、酸性および／または塩基性末端および／または側鎖を含有し得ることから、該タンパク質を、遊離酸または塩基の形態で、または製薬的に許容できる塩類の形態で製剤中に含ませることができる。（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１９版、レミントンおよびジェンナロ（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｎａｒｏ）編集、１９９０年を参照されたく、参照としてその全体が本明細書に援用される）。
【００６５】
注射製剤としては、水性または油性媒体中、抗セレクチン剤の滅菌した懸濁剤、液剤または乳濁剤を挙げることができる。該組成物はまた、懸濁化剤、安定化剤および／または分散剤などの製剤化剤を含むことができる。注射用製剤は、単位剤形、例えば、アンプルまたは複数用量容器中に提供され、添加の保存剤を含有できる。
【００６６】
あるいは、注射製剤は、限定はしないが、滅菌した無発熱物質水、緩衝液、デキストロース液などの好適な媒体によって使用前に再構成するために粉末形態で提供できる。最後に、抗セレクチン剤は、凍結乾燥できる。保存製剤は、単位剤形で供給でき、ｉｎ ｖｉｖｏ使用前に再構成できる。
【００６７】
送達の時間を延長するために、活性成分は、移植、例えば、皮下注射、皮内注射、または筋肉内注射による投与のため、デポー製剤として製剤化できる。したがって、例えば、活性成分は、好適なポリマーまたは疎水性材料（例えば、許容できる油中の乳濁剤として）またはイオン交換樹脂と共に、あるいは少溶解誘導体として、例えば、抗セレクチン剤の少溶解塩形態として製剤化できる。
【００６８】
一実施形態において、抗セレクチン剤は、鼻腔または経口吸入を経て肺に投与できる。吸入による投与のため、活性成分は、加圧パックまたは吸入器、例えば、慢性疾患の周期的治療のために都合よく使用できる計量吸入器、または急性増悪をきたしている対象の治療のために使用できる噴霧器による送達のためにエアロゾルスプレーの形態で好適に送達できる。このような吸入器または加圧パックは、好適な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の好適なガスを使用できる。加圧エアロゾルの場合、計量装置は、計量を送達させるためにバルブを備えることによって定量できる（例えば、計量吸入器）。吸入器または注入器に使用のため、送達媒体、例えば、ゼラチンのカプセルおよびカートリッジは、化合物とラクトースまたは澱粉などの好適な粉末基剤との粉末混合物を含有して製剤化できる。（また、クーリエ（Ｃｏｕｒｒｉｅｒ）ら、２００２年Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ．１９（４〜５）：４２５−９８頁を参照されたく、参照としてその全体が本明細書に援用される）。
【００６９】
あるいは、経皮吸入のために抗セレクチン剤を、徐々に放出する接着ディスクまたはパッチとして製造された経皮送達系を使用できる。最後に、活性成分の経皮透過を促進させるために透過エンハンサーを使用できる。
【００７０】
経口投与のため、製薬組成物は、例えば、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシ澱粉、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、微結晶セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモ澱粉または澱粉グリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの製薬的に許容できる賦形剤を用いる従来の手段により調製された錠剤またはカプセル剤の形態をとることができる。錠剤は、当業界に周知の方法によりコーティングできる。経口投与のための液体製剤は、例えば、液剤、シロップ剤または懸濁剤の形態をとることができるか、使用前に水または他の好適な媒体よる構成のために乾燥製品として提供できる。このような液体製剤は、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または水素化食用油）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアラビアゴム）；非水媒体（例えば、アーモンド油、油性エステル類、エチルアルコールまたは分画植物油）；および保存剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはプロピルまたはソルビン酸）などの製薬的に許容できる添加物と共に従来の手段により調製できる。該製剤は、適切な場合、緩衝剤塩類、風味剤、着色剤および甘味剤も含有できる。経口投与のための製剤は、活性化合物を制御放出させるために好適に製剤化できる。
【００７１】
舌下錠投与に関して、該組成物は、従来の様式で製剤化された錠剤または舐剤の形態をとることができる。直腸および膣の投与経路に関して、活性剤は、液剤（保持浣腸に関して）座薬または軟膏として製剤化できる。
【００７２】
該組成物は、所望ならば、活性成分を含有する１種以上の単位剤形を含有できるパックまたはディスペンサー装置内に提供できる。該パックは、例えば、ブリスターパックなどの金属またはプラスチックフォイルを含み得る。パックまたはディスペンサー装置には、投与に関する取扱い説明書を添付することができる。
【００７３】
好ましい実施形態において、抗セレクチン剤は、再構成に利用できる凍結乾燥散剤の複数回使用または単回使用バイアルにおいて提供できる。単回使用バイアルは、平均サイズの成人または小児対象に適切かつ好適な用量を含有できることが好ましい。
【００７４】
ある実施形態において、抗セレクチン剤は、抗セレクチン剤の１個以上のバイアルおよびシリンジ、または抗セレクチン剤の典型的な用量（例えば、単位用量または使用単位）を予め充填したシリンジを含むキットに用いることができる。該キットは、抗セレクチン剤の他の組成物、例えば、噴霧器または注入器による使用のために液剤または散剤の１つ以上の計量吸入器またはパッケージを含むことができる。該キットは、専門家による使用およびシリンジの適切な廃棄のための教育用ビデオ類、ＤＶＤ類または取扱い説明書をさらに提供できる。
【実施例】
【００７５】
実施例
実施例１：ヒツジ肺における緑膿菌のクリアランスに対するＥＬ２４６の効果
序文
ＥＬ２４６ｍＡｂは、エンドトキシンにより誘導された肺炎症を効果的にブロックすることから、肺炎症疾患の治療のために有効な薬物であり得ることが示唆される。抗炎症薬の使用で懸念されることは、それによって患者が二次感染に罹り易くなることである。ＥＬ２４６が、緑膿菌による肺感染症を除去するヒツジの能力を変化させるかどうかを判定するために、それを試験した。この実験的方法は、ヒツジにおける肺感染症を確立し、試験抗体または対照抗体による静脈内処置をし、１週間にわたって採取された肺洗浄サンプルにおける白血球浸出レベルおよびシュードモナス数の双方をモニターすることであった。
【００７６】
方法
生物および培養条件。緑膿菌株ＰＡＯ１（モンタナ州立大学Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｆｉｌｍ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇから得られたＣＦ臨床単離体）ストック培養物を−８０℃に維持した。接種製剤に関して、新鮮なＲ２Ａ寒天（ジフコ（Ｄｉｆｃｏ）＃１８２６−１７）線条接種からの１つから２つのコロニーを、５０ｍｌの滅菌Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ Ｓｏｙ Ｂｒｏｔｈに移し、エアレーションしながら一晩インキュベートした（１６〜１８時間、１８０ｒｐｍ、３７℃）。培養物を遠心分離し（５，０００ｘｇで１０分、４℃）、滅菌ダルベッコ燐酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）で１回洗浄し、ｓｔ−ＤＰＢＳに懸濁した。懸濁液中のコロニー形成単位（ＣＦＵ）数は、Ｒ２Ａ寒天プレート上に二重に接種した連続１０倍希釈液（０．５００ｍｌを４．５ｍｌの希釈ブランクに移し、４５〜６０秒間ヴォルテックスで撹拌した）からの表面塗抹法を経て測定された。一晩インキュベーション（３７℃）後、コロニーをカウントし、一晩冷凍保存した元のシュードモナス懸濁液を、０日目にヒツジに投与するために所望の接種濃度にするためにさらに希釈した。
【００７７】
気管支鏡接種および洗浄サンプリング
動物は１才のヒツジとした。好中球細胞数の初期値を測定するために各動物から気管支鏡を用いてベースライン洗浄サンプルを採取した。予め存在する感染症の存在を、下記のようにベースライン洗浄サンプルを平板培養することにより判定した。好中球数が少なく、予め存在する感染のない全動物を、少なくとも１週間休息させてから、０．２５％（最終濃度）寒天に乳濁させた上記シュードモナス属単離体の５×１０１０ＣＦＵを肺の各下部葉内に感染させた。感染後、１日目、３日目および６日目に洗浄サンプルを採取した。血液サンプルもまた採取した。
【００７８】
リンパ球分析のための肺洗浄サンプルの処理
総白血球数を、各サンプルについて測定し、好中球のパーセンテージは、ヒツジ好中球に対して特異的なｍＡｂｓを用いてＦＡＣｓにより測定した。
【００７９】
微生物数に関する肺洗浄サンプルの処理
各ヒツジからの２つの肺洗浄サンプル（気管支鏡アシストにより１つは右肺および１つは左肺）を、移送用の氷上に置き、採取４時間以内で処理した。サンプルを連続希釈し（０．５００ｍｌを４．５ｍｌの希釈ブランクに移した）、Ｒ２Ａ寒天プレート上に二重に接種し、プレートを３７℃で一晩インキュベートした。生じた微生物コロニーを評価し、外観により緑膿菌（ＰＡＯ１単離体はＲ２Ａ上緑黄色に出現）または非シュードモナス属（グラム染色により確認）として分類した。細菌ｃｆｕ／ｍｌ洗浄液は、可能ならばいつでも３０〜３００のコロニーを含有するＲ２Ａ寒天プレートから測定した。各ヒツジの洗浄液サンプルは、実験前（例えば、６日前から０日目）、１日目、３日目、および６日目に処理した。
【００８０】
抗体投与
１日目の細菌数が、２日目に利用できるようになったら、緑膿菌感染の確立したヒツジを、２日目に１ｍｇ／ｋｇ ｍＡｂ ＥＬ２４６で静脈内処置するか、対照の無関係なｍＡｂ（ＧＤ３．５）で静脈内処置するか、またはなにも処置をしなかった。
【００８１】
結果
感染後、全ての動物で数時間以内に体温が上昇し、不活発になった。感染後少なくとも３日間、体温が上昇したままであった。接種後、最初の２，３時間内の発熱応答は、全ての動物は２４時間目で感染活性状態の予測とはならなかった。そのため、２４時間目での洗浄サンプル中のＣＦＵ数が、動物における感染の確立を確認する唯一の方法であり、これらの動物を引き続きｍＡｂで処置した。
【００８２】
感染洗浄サンプル中の白血球数は、各葉のサンプリングのばらつきのために、極めて変動が大きかった（データ非表示）。そのため、好中球のパーセンテージの変化が、種々のサンプルにおける炎症の比較に用いられた。動物は、ＥＬ２４６処置後、細菌のクリアランスの増強を示した（図１）。さらに、感染６日後、対照と比較してＥＬ２４６処置群における好中球のパーセンテージが僅かに減少した。
【００８３】
ｍＡｂ ＥＬ２４６処置群は悪化せず、幾つかの場合において、肺からの緑膿菌のクリアランスを促進した。全てのＥＬ２４６処置動物が、感染を除去し、６日目までには、感染の明らかな臨床的徴候を示さなかった。
【００８４】
統計
ヒツジ肺における緑膿菌のクリアランスに対する抗炎症ｍＡｂ ＥＬ２４６の効果
これらのデータ（図１）は、日と処置は固定効果として考慮され、ヒツジとヒツジ内の側面はランダム効果として考慮される混合効果線形モデルを用いて解析した。実験前の洗浄液のカウントは、すべての値がゼロであるという事実から解析に含めなかった。統計的有意性を求めるために直線の勾配を処置群間で比較した。このモデルを用いて、抗炎症ｍＡｂ ＥＬ２４６に対応する直線は、未処置に対応する直線の勾配（ｐ＝０．０００１）および無関係なｍＡｂ処置に対応する直線の勾配（ｐ＝０．０００７）双方とは統計的に有意に異なる極めて強い負の勾配を有する。
【００８５】
要約
本出願人らは、１ｍｇ／ｋｇ用量でのＥＬ２４６が、驚くべきことにヒツジ肺において確立された緑膿菌感染のクリアランスを増強させることを本明細書に示す。ＥＬ２４６処置動物は、未処置動物またはイソタイプ−マッチド陰性対照ｍＡｂ処置動物と比較して、統計的有意性を有して感染を除去した。
【００８６】
実施例２ ヒツジにおける非緑膿菌細菌のクリアランスに対するＥＬ２４６の効果
肺からの緑膿菌以外の細菌生物のクリアランスに対するＥＬ２４６処置の効果が、ヒツジにおいて認められた。ヒツジのシュードモナス属接種による肺感染症モデルおよび微生物表面塗抹法による細菌数モニタリングは、実施例１のとおりで行った。緑膿菌ＰＡＯ１株コロニーは、Ｒ２Ａ寒天上の塗抹縁に明瞭な半透明の緑青色コロニー増殖として出現した。他の細菌コロニーの出現が、幾つかのヒツジ洗浄液サンプルに見られ、他の属の細菌生物も同様であることを示した。これら他のコロニーを、抗体処理の存在下でのこれら非緑膿菌細菌タイプのクリアランスを評価するために別個にカウントし、記録した。幾つかの場合において、特定の洗浄液サンプルから単離された細菌は、非シュードモナス属だけであった。コロニータイプの２つの例、およびサンプル中に見出された非シュードモナス属生物について記録されたグラム染色反応が以下に記載されている。これら試験に利用された緑膿菌ＰＡＯ１単離体のグラム染色は、シュードモナス属に予想された古典的グラム陰性形態：白色断続小円形コロニー−細長いスレンダーグラム陽性桿菌；白色星状で粘液性のコロニー−サフラニンカウンター染色によりピンクに染色する極めて明らかなエキソポリサッカライドハロを有する極めて大型の長いグラム陽性桿菌を示した。洗浄サンプルからの強いエキソポリサッカライド産生株の単離により、ｉｎ ｖｉｖｏで生体膜を形成する可能性が示唆されている。
【００８７】
結果
ｍＡｂ ＥＬ２４６処置により、シュードモナス属のクリアランスと同様に感染ヒツジからの非シュードモナス属生物のクリアランスが促進された。対照抗体または緩衝剤のみで処理したヒツジは通常、ｍＡｂ ＥＬ２４６で処理されたヒツジよりも多い非シュードモナス数および実験過程の後期に多い数を示した。これら非シュードモナス属クリアランス効果を示す結果を、図２に示す。例えば、図２に示された７匹の対照動物（無関係ｍＡｂまたは未処置）のうちの５匹は、１日目または３日目と比較して６日目に細菌数の増加を示したが、一方、ＥＬ２４６処置の動物全ては、１日目または３日目と比較して６日目により少ないｃｆｕ／ｍｌ洗浄液を示した。
【００８８】
実施例３ 非ヒト霊長類の急性肺悪化モデル
要約
カニクイザルの肺への急性増悪関連炎症細胞の動員に対するＥＬ２４６処置の有効性を評価するために肺におけるＬＰＳエアロゾル誘発応答を使用した。
【００８９】
背景
ＣＯＰＤおよび喘息の急性増悪時に、好中球およびマクロファージが肺に動員されることが知られている。大腸菌のリポ多糖類（ＬＰＳ）を用いるこのモデルにより、一次的エンドポイントとして気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）中の炎症細胞の量および相対数の評価を提供する。このために、炎症細胞、好中球およびマクロファージの全数を、１２時間時点で測定した。さらに、ＩＬ−８、ミエロペルオキシダーゼ、血清タンパク質およびＩＬ−１ベータなどの他の二次的パラメータを測定した。ＩＬ−８は、炎症細胞動員を促進するケモカインの；ミエロペルオキシダーゼは、好中球駆動組織損傷の可能性の程度；血清タンパク質は、肺への血清漏れを生じる実際の血管壁損傷；およびＩＬ−１ベータは、全体的前炎症状態の測定値を提供する。総括して、これらの測定値は、炎症の相対的重症度指標を提供し、肺の前炎症状態を示す。
【００９０】
実験デザインおよび方法
ＬＰＳ誘発の１５分前に、また再度ＬＰＳ誘発１時間後に１ｍｇ／ｋｇ ｍＡｂ ＥＬ２４６でサルを処置した。大腸菌ＬＰＳを、エアロゾルを介して「０」時間目に０．４ｍｇ／ｋｇの濃度で送達した。サルは、ｍＡｂ処置をせずにＬＰＳにより１ヵ月前に誘発された彼ら自身の内部対照として用いた。一次的および二次的パラメータの測定のためにＢＡＬをＬＰＳ誘発１２時間後に採取した。炎症細胞を、フローサイトメトリーによりカウントし、二次的指標は、ＥＬＩＳＡおよび生化学的アッセイにおいて定量した。
【００９１】
結果
ＢＡＬ判定に関する１２時間の結果を図３に示す。一次的エンドポイントの測定は、対照に比して炎症細胞動員の大きな減少を示した。細胞全体では、２／３超、好中球では７０％、マクロファージでは８０％超減少した。この減少は、ミエロペルオキシダーゼもまた、約７０％減少することが示された二次的パラメータで支持される肺に対する細胞媒介の酸化的損傷の可能性の大きな減少を示している。他の二次的指標であるＩＬ−８および血清タンパク質もまた、６０〜７０％減少した。驚くべきことに、ＩＬ−１ベータもまた２５％減少し、炎症細胞動員減少が、前炎症状態の増幅減少も促進し得ることを示した。
【００９２】
要約
ＥＬ２４６は、ＣＯＰＤおよび喘息のような疾患の急性増悪に通常見られる、好中球およびマクロファージの動員を減少させるのに極めて有効である。これは、ＥＬ２４６を用いるＥ−およびＬ−セレクチンブロッキング法が、急性増悪の重症度の軽減に大いに寄与し得ることを示唆している。
【００９３】
実施例４ 接着分子およびケモカイン阻害剤を検証するためのリアルタイムのｉｎ ｖｉｔｒｏせん断アッセイ、生理的関連アッセイシステムであるＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）
本出願人らは、白血球接着のアンタゴニストおよびケモカインシグナリングの確認および検証のために、進行性スクリーニングプラットホームであるＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）を記載する。血管を模擬するために毛細管の内面に固定した接着分子、毛細管内で増殖した形質移入体を発現する内皮細胞または組換え接着分子を用いる。生理的せん断速度で、これらの基質は、ヒト細胞および細胞系の結合およびローリングを媒介する。このアッセイは、白血球輸送を妨害する可能性のある新規な薬物化合物の予防的（接着前処置）および治療的（接着後処置）有効性を試験するために有用である。ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）システムの有用性の例として、炎症性内皮細胞に対するケモカイン誘導Ｔ細胞接着を確立することにより達成できる商標付きセレクチン阻害剤の有効性および複雑さのレベルにおける僅かな差を識別する能力を本出願人は立証する。最初の例において、本出願人は、抗Ｅ＋Ｌセレクチン抗体（ＥＬ２４６）が、Ｅ−セレクチンを発現するＣＨＯ細胞系と比較した場合よりも、精製Ｅ−セレクチンキメラ上のヒトミエロイドＵ９３７細胞ローリングの反転においてより有効（ＩＣ５０＜１μｇ／ｍｌ）であったことを示す。ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）システムが、完全にヒトのものである場合、すなわち、ＨＵＶＥＣ類上のヒト好中球ローリングである場合、ＩＣ５０は、２μｇ／ｍｌ超であった。ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）システムの有用性の第２の例において、ケモカイン、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ−１α）の固定化により、α４インテグリン類を介してＴＮＦα活性化ＨＵＶＥＣ類へのジャーカット細胞の接着が誘導された。これらの実施例において立証されたように、ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）システムは、候補薬物の有効性をランク付けするために肉視上でかつ定量可能な証拠を提供でき、ＩＣ５０などの用量評価を判定できる。
【００９４】
白血球の血管外遊出物は、効率的な免疫的監視にとって必要な正常な生理的過程であり、かつ傷害、感染ならびにアレルギーに対する炎症応答の必須成分である（バッチャーおよびピッカー（Ｂｕｔｃｈｅｒ ａｎｄ Ｐｉｃｋｅｒ）、１９９６年Ｓｃｉｅｎｃｅ２７２：６０−６６頁、フォン・アンドリアンおよびマッケイ（Ｖｏｎ Ａｎｄｒｉａｎ ａｎｄ Ｍａｃｋａｙ）、２０００年Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１０２０−１０３４頁）。血中白血球および内皮細胞の双方により発現される接着タンパク質は、これらの相互作用を制御する（バッチャー（Ｂｕｔｃｈｅｒ）、１９９１年Ｃｅｌｌ ６７：１０３３−１０３６頁、ベビラッカ（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ）１９９３年、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：７６７−８０４頁）。ｉｎ ｖｉｖｏ測定により、血中細胞は、驚くべきことに高速度で移動することが示されている。毛細管および毛細管後のベッドに関連する減少した流量でも、５００〜５０００μｍ／秒の速度が普通である。白血球／内皮細胞相互作用の分析により、接着タンパク質の特定のクラスは、静止条件下に対して、せん断条件下で優先的に結合を媒介することが実証されている。（バッチャー（Ｂｕｔｃｈｅｒ）、１９９１年Ｃｅｌｌ ６７：１０３３−１０３６頁、レイ（Ｌｅｙ）ら。１９９１年、Ｂｌｏｏｄ ７７：２５５３−２５５５頁、ラスキー（Ｌａｓｋｙ）、１９９２年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５８：９６４−９６９頁、アバッシ（Ａｂｂａｓｓｉ）ら、１９９３年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９２：２７１９−２７３０頁、フォン・アンドリアン（Ｖｏｎ Ａｎｄｒｉａｎ）ら、１９９１年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：７５３８−７５４２頁、ローレンスおよびスプリンガー（Ｌａｗｒｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）、１９９１年、Ｃｅｌｌ ６５：８５９−８７３頁、スプリンガー、１９９０年、Ｎａｔｕｒｅ３４６：４２５−４３４、ローレンスおよびスプリンガー（Ｌａｗｒｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）、１９９３年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：６３３８−６３４６頁、トゼレンおよびレイ（Ｔｏｚｅｒｅｎ ａｎｄ Ｌｅｙ）、１９９２年、Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．６３：７００−７０９頁）。例えば、血流を反映するためにデザインされた高せん断条件下でのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイで白血球と内皮細胞との間、十分に特性化された静的接着性相互作用の多くは、ベータ−２インテグリン類（ＬＦＡ−１、ＭＡＣ−１）により媒介されるものであるが、セレクチン相互作用が先行しない限り、起こらないことが判明した（ローレンスおよびスプリンガー（Ｌａｗｒｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）、１９９１年、Ｃｅｌｌ ６５：８５９−８７３頁、フォン・アンドリアン（Ｖｏｎ Ａｎｄｒｉａｎ）ら、１９９２年、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．：Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６３：Ｈ１０３４−Ｈ１０４４頁）。対照的に、せん断下で優先的に機能する接着分子が確認されている。
【００９５】
せん断依存の接着タンパク質の最良の例は、セレクチン類と呼ばれる、白血球および内皮細胞分子のファミリーである（ベビラッカ（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ）１９９３年、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：７６７−８０４頁、ラスキー（Ｌａｓｋｙ）、１９９２年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５８：９６４−９６９頁、ベビラッカ（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ）ら、１９９１年、Ｃｅｌｌ ６７：２３３頁）。１種の白血球セレクチン（Ｌ−セレクチン）および２種の血管セレクチン（Ｅ−およびＰ−セレクチン）が確定されている。内皮細胞に加えて、血小板もまたＰ−セレクチンを発現する。Ｌ−セレクチンは、白血球により構成的に発現されるが、一方、Ｅ−およびＰ−セレクチンを誘導するためには、免疫サイトカイン類、ヒスタミンまたは外傷性侵襲による内皮細胞の刺激が必要とされる。セレクチン類に加えて、サイトカインに刺激された内皮細胞上のＶＣＡＭ−１（ベルリン（Ｂｅｒｌｉｎ）ら、１９９５年、Ｃｅｌｌ ８０：４１３−４２２頁）、消化管の高内皮小葉脈上のＭＡＤＣＡＭ−１、抹消リンパ節の高内皮小葉脈上のＰＮＡｄ−１（ベルリン（Ｂｅｒｌｉｎ）、１９９３年Ｃｅｌｌ ７４：１−２０頁）、高炭水化物含有ムチン様分子（レビノビッツ（Ｌｅｖｉｎｏｖｉｔｚ）ら、１９９３年、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１２１：４４９−４５９頁、ムーア（Ｍｏｏｒｅ）ら、１９９２年、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１１８：４４５−４５６頁）、および幾つかのインテグリン類（α４β１およびα４β７）（バーグ（Ｂｅｒｇ）ら、１９９３年、Ｎａｔｕｒｅ ３６６：６９５−６９８頁、アロン（Ａｌｏｎ）ら、１９９５年、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１２８：１２４３−１２５３頁）などの他の接着タンパク質もまた、せん断依存相互作用を媒介する。多くの場合、内皮単層に沿った白血球のローリングは、せん断依存の接着相互作用を示す。これらのローリング相互作用は、白血球速度の＞１０００倍の減少を引き起こすことができる。血管内皮に沿う白血球のローリングは、内皮細胞の提示した、ケモカインをその同族受容体に結合させることによって、他の接着相互作用を誘導し、血管内皮に白血球の結合を「固定化する」と仮定されている（スプリンガー（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）、１９９４年、Ｃｅｌｌ ７６：３０１−３１４頁）。次に血管内層を介して遊走が生じる。したがって、以下の３つの段階が、血管壁に沿った白血球の首尾よい捕捉に関与している：１）せん断依存性捕捉およびローリング、２）活性依存性接着強化（緩徐なローリング）、次いで堅固な接着、および３）経内皮遊走。内皮上の誘導可能な接着分子は、これらの段階の各々に関与している。３つの段階全てが、炎症白血球の傷害または感染部位への有効な動員、またはリンパ組織の接種にとって必要である（スプリンガー（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）、１９９４年、Ｃｅｌｌ ７６：３０１−３１４頁およびボックナー（Ｂｏｃｈｎｅｒ）、２０００年、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０６：８１７−８２８頁）。このモデルは、一部労多く費用がかかる動物実験から確立されたものである。
【００９６】
動物実験の難しさおよび費用のため、幾つかの実験室では、ｉｎ ｖｉｔｒｏせん断アッセイの開発を追究している。大部分の研究室では、内皮細胞を増殖させるために平面チャンバを用いており、次いでこのチャンバをシリンジポンプに接続して細胞または他の試薬を送達する（ジョーンズ（Ｊｏｎｅｓ）ら、１９９４年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９４：２４４３−２４５０頁、ルシンスカス（Ｌｕｓｃｉｎｓｋａｓ）ら、１９９４年、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１２５：１４１７頁、アロン（Ａｌｏｎ）ら、１９９４年、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１２７：１４８５−１４９５頁）。ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）は、下記のとおり、また以前の刊行物（ベルリン（Ｂｅｒｌｉｎ）ら、１９９５年、Ｃｅｌｌ ８０：４１３−４２２頁、バーグ（Ｂｅｒｇ）ら、１９９３年、Ｎａｔｕｒｅ ３６６：６９５−６９８頁、バルガツエ（Ｂａｒｇａｔｚｅ）ら、１９９４年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５８１４−５８２５頁、エーガー（Ｅｇｇｅｒ）ら、２００２年、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．３０２：１５３−１６２頁、グリー（Ｇｌｅｅ）ら、２００１年、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６９：２８１５−２８２０頁、バルガツエ（Ｂａｒｇａｔｚｅ）ら、１９９４年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８０：１７８５−１７９２頁、ジュチラ（Ｊｕｔｉｌａ）ら、１９９４年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３：３９１７−３９２８頁、これらは参照としてそれらの全体が本明細書に援用される）に記載されたプロトコルに従ってヒトの血管流条件を正確にシミュレートするｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイシステムである。このシミュレートされた微小環境は、炎症および感染性疾患に関連する分子、細胞、および血管表面の相互作用を評価するための優れた手段である。
【００９７】
ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗシステム
ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）せん断アッセイシステムの中心的な特徴は、内皮細胞の増殖、単独または複数接着分子を発現する形質移入細胞系の増殖、または小径のガラスキャピラリ管の内面に精製接着分子を接着することにより創製される人工血管である。該「血管」は、液体が蠕動運動ポンプを経て再循環できるループシステムに援用される（図４）。細胞をシステムに注入し、内皮細胞の単層とそれらの相互作用が、ビデオ顕微鏡によりモニターされる。薬剤をアッセイに注入し、白血球−内皮細胞の相互作用に対するそれらの効果を容易に測定できる。キャピラリ管内で発生したせん断力は、血管で測定されたせん断因子と同様である（ペリーおよびグランガー（Ｐｅｒｒｙ ａｎｄ Ｇｒａｎｇｅｒ）１９９１年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８７：１７９８−１８０４頁）。
【００９８】
アッセイの設定
白血球／内皮細胞の相互作用：白血球／内皮細胞せん断に依る相互作用の分析を、先に記載されたとおり実施した（バーグ（Ｂｅｒｇ）ら、１９９３年、Ｎａｔｕｒｅ ３６６：６９５−６９８頁、バルガツエ（Ｂａｒｇａｔｚｅ）ら、１９９４年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５８１４−５８２５頁、バーグ（Ｂｅｒｇ）ら、１９９１年、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１４：３４３−３４９頁、これらは参照としてそれらの全体が本明細書に援用される）。ヒト前単球細胞系、Ｕ９３７（ＡＴＣＣ）は、ヒト白血球を試験するための代用物として広範に使用される。Ｕ９３７細胞は、Ｅ−、Ｐ−およびＬ−セレクチンリガンドＰＳＧＬを発現し、セレクチン上でロールする（ノルガード（Ｎｏｒｇａｒｄ）ら、１９９３年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１２７６４−１２７７４頁、ヒラタ（Ｈｉｒａｔａ）ら、２０００年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：１６６９−１６７６頁、ヤング（Ｙａｎｇ）ら、１９９９年、Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８１：１−７頁、ラーセン（Ｌａｒｓｅｎ）ら、１９９２年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１１１０４−１１１１０頁）。ＥＬ２４６は、Ｌ−およびＥ−セレクチン双方上の保存エピトープに結合する新規な抗体である（ジュチラ（Ｊｕｔｉｌａ）ら、１９９２年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：１５６５−１５７３頁）。因子ＶＩＩＩおよびＬＤＬ−受容体陽性［内皮細胞増殖培地（クローンティックス（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ）、ＥＧＭ）中で培養］またはＰ−またはＥ−セレクチンｃＤＮＡ形質移入されたＣＨＯ細胞である、ヒト臍帯内皮細胞（ＨＵＶＥＣ；キャンブレックス（Ｃａｍｂｒｅｘ）社）を、せん断実験２４時間前に滅菌ガラスキャピラリ管（ドラモンド・サイエンティフィック（Ｄｒｕｍｍｏｎｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、Ｂｒｏｏｍａｌｌ，ペンシルバニア州）の内面に集密するように増殖させた。アッセイ４時間前に、内皮細胞を、ＴＮＦα（１μｇ／ｍｌ）で処理してＥ−セレクチン、ＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１発現を誘導した。ガラスキャピラリ管の末端に結合した配管により、培地および細胞が再循環できる閉鎖ループを形成し；次に管を倒立顕微鏡に据えた。種々のスピードの蠕動運動ポンプを用いて（図４を参照）、流量を制御してｉｎ ｖｉｖｏ血流せん断条件（１〜３ダイン／ｃｍ２）をシミュレートした。循環ループにより、ＨＵＶＥＣの相互作用面を通過して白血球の連続再循環中、注入ポートを介した種々のｍＡｂｓ／他の試験化合物の複数注入が可能になる。
【００９９】
倒立顕微鏡−ビデオ捕捉システム（図４）が、ＨＵＶＥＣ単層の全長を測定するために用いられ、相互作用領域を記録する高分解能相コントラストを次の分析のために実施した。滅菌Ｃａ＋＋、Ｍｇ＋＋含有ＨＥＰＥＳ緩衝（２０ｍＭ）ＤＭＥＭまたはＲＰＭＩ（ｐＨ７．０）プラス２％ＦＢＳまたはヒト血漿中、白血球細胞系を４ｘ１０６細胞／ｍｌ濃度でこのシステムに注入した。ローリング相互作用を確立し、ビデオテープをとりながら少なくとも８分間連続モニターし；その時間中、対照条件または実験条件を確立し、維持した。白血球／内皮細胞の相互作用を観察し、さらに８分間ビデオテープをとった。基質（キメラ接着細胞）上にローリングする細胞数を、接着修飾因子の注入前後にモニターし、その記録を個々のフレーム分析により測定した。セレクチン形質移入体および活性化ＨＵＶＥＣによる実験において、対照または試験化合物を、相互作用する細胞に注入し、その相互作用を全部で１０分間モニターした。データを、視野内のローリング細胞数の実地検分対時間として記録した。
【０１００】
結果と考察
ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗシステムにおけるＵ９３７細胞のＥ−セレクチン媒介ローリング
組換えキメラ上のＵ９３７のローリングに対する抗Ｅ−プラスＬ−セレクチンｍＡｂ、ＥＬ２４６の効果：生理的再循環およびインフレーム部位への遊走双方における白血球の動員において早期段階の１つは、流れの速い白血球の捕捉および緩徐なローリング相互作用の確立である（バッチャー（Ｂｕｔｃｈｅｒ）、１９９１年、Ｃｅｌｌ ６７：１０３３−１０３６頁）。この捕捉およびローリングは、接着分子のセレクチンファミリーにより媒介される（ベビラッカ（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａ）１９９３年、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：７６７−８０４頁、ラスキー（Ｌａｓｋｙ）、１９９２年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５８：９６４−９６９頁）。この第１の段階の阻害により、内皮層を通って堅固に接着し、遊出する白血球の能力が抑止され、したがって治療標的を提供する（フォン・アンドリアン（Ｖｏｎ Ａｎｄｒｉａｎ）ら、１９９１年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：７５３８−７５４２頁、バルガツエ（Ｂａｒｇａｔｚｅ）ら、１９９５年、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３：９９−１０８頁）。ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）システムは、この最初のｉｎ ｖｉｔｒｏ相互作用をモデル化し、この相互作用のモジュレーターを評価することを可能にする。Ｅ−セレクチンリガンド、ＰＳＧＬ３４（ノルガード（Ｎｏｒｇａｒｄ）ら、１９９３年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１２７６４−１２７７４頁、ヒラタ（Ｈｉｒａｔａ）ら、２０００年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：１６６９−１６７６頁、ヤング（Ｙａｎｇ）ら、１９９９年、Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８１：１−７頁、ラーセン（Ｌａｒｓｅｎ）ら、１９９２年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１１１０４−１１１１０頁）を発現するヒト前単球細胞系、Ｕ９３７をせん断下で、組換えヒトＥ−セレクチンと相互作用する能力に関して評価した。組換えＥ−セレクチンヒトＩｇＧキメラ（Ｒ＆Ｄシステムズ）を、抗ヒトＩｇＧによりコーティングされたガラスキャピラリ管の内面に固定化した。キャピラリ管を、図４に記載されたようにＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）システムに援用された。
【０１０１】
流動は、２ダイン／ｃｍ２の生理的細静脈のせん断応力を生じさせるように確立した。ループに注入されたＵ９３７細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏで生じることが知られている「ローリング」挙動を示す固定化Ｅ−セレクチンと相互作用した。ローリング細胞数は、注入時間から約６分まで次いでプラトーまで増加する（図５）。ＥＬ２４６ｍＡｂまたはイソタイプ対照ｍＡｂを、細胞注入８分後に注入し、さらに８分間相互作用をモニターした。代表的な実験を図５に示し、図６に要約しているように、ＥＬ２４６は、５μｇ／ｍｌでローリング相互作用を完全に反転させた。この反転は、用量依存であり、イソタイプのマッチド無関係ｍＡｂにより影響を受けなかった。ＥＬ２４６は、約０．６μｇ／ｍｌのＩＣ５０で組換えＥ−セレクチン上のＵ９３７のローリングを反転させた（図６）。したがって、ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）システムは、セレクチン媒介白血球のローリングの視覚化およびこの相互作用のモジュレーターの評価を可能にする。基質として規定されたセレクチンキメラを用いるこのｉｎ ｖｉｔｒｏ設定において、Ｌ−およびＥ−セレクチンの阻害剤は、非常に効力があると思われる。
【０１０２】
ヒトＥ−セレクチンを発現するＣＨＯ細胞上のＵ９３７細胞ローリングに対するｍＡｂ ＥＬ２４６の効果：Ｅ−セレクチンは、活性化された内皮細胞の内面に発現する（ラスキー（Ｌａｓｋｙ）、１９９２年、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５８：９６４−９６９頁）。したがって、ｉｎ ｖｉｖｏで生じると想定されるセレクチン−白血球相互作用を、より現実的に反映させるために、ヒトＥ−セレクチンｃＤＮＡを形質移入したＣＨＯ細胞を、ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）ループ内の基質として用いた。ヒトＥ−セレクチンを安定に発現するＣＨＯ細胞を、ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）システム内の滅菌ガラスキャピラリ管の内面に増殖させた。Ｕ９３７細胞とＣＨＯ細胞に発現されたＥ−セレクチンとの相互作用は、組換えセレクチンに生じるものとは異なる。Ｕ９３７細胞がロールされ、次いでそれらの大部分が形質移入されたＣＨＯ細胞に固着する。この固着は、恐らくＣＨＯ細胞上のカウンター受容体に結合するＵ９３７細胞に対するヒトインテグリン類の交差反応性のためであった。抗セレクチン抗体は、インテグリン媒介接着を反転させないことから、Ｕ９３７細胞は、ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）ループ内への注入前にｍＡｂ ＥＬ２４６で前処理した。図７に示されるように、ｍＡｂ ＥＬ２４６は、ＣＨＯ−Ｅ−セレクチン形質移入体へのＵ９３７細胞の結合を阻害した。しかしながら、阻害ＩＣ５０は、精製接着分子（約０．６μｇ／ｍｌ）に対する結合反転と対比すると、細胞ベース接着事象の阻害に関してより大きかった（１μｇ／ｍｌ超）。これらのデータは、接着分子阻害剤の有効性が、せん断下で試験された場合、評価に選択された接着分子の提示の性質およびタイプに依って変わり得ることを示唆している。
【０１０３】
活性化ＨＵＶＥＣ上のヒト好中球ローリングに対する抗Ｅ−セレクチンｍＡｂの効果：白血球と内皮との間の重要な接着相互作用は、セレクチン媒介ローリング、次いでインテグリン媒介固着の双方を含み、その双方とも、遊出に必須である（バッチャー（Ｂｕｔｃｈｅｒ）、１９９１年、Ｃｅｌｌ ６７：１０３３−１０３６頁、フォン・アンドリアン（Ｖｏｎ Ａｎｄｒｉａｎ）ら、１９９２年、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６３：Ｈ１０３４−Ｈ１０４４頁）。上記の２つのｉｎ ｖｉｔｒｏせん断アッセイは、ｉｎ ｖｉｖｏで生じる白血球と内皮との相互作用に必要な接着分子の完全補体を有さない。したがって、アッセイは、ＨＵＶＥＣを「血管」に似せたガラスキャピラリ管の内面に増殖させ、代用炎症刺激として４時間ＴＮＦα（１ｎｇ／ｍｌ）で細胞を活性化させるように設定した。４時間の活性化により、Ｅ−セレクチンならびにＨＵＶＥＣ上のインテグリンリガンドＩＣＡＭおよびＶＣＡＭ−１の発現が誘導される（データは示さず）。ｉｎ ｖｉｖｏでの白血球−内皮相互作用を完全にシミュレートするために、末端血好中球（ＰＭＮｓ）を、健全なドナーから単離し、活性化ＨＵＶＥＣを含有するＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）ループ内へ注入した。次にこのｉｎ ｖｉｔｒｏシステムにおける抗Ｅ−／Ｌ−セレクチンｍＡｂ ＥＬ２４６の有効性を、ｉｎ ｖｉｖｏで生じる条件に、より現実的に似せて試験した。ＣＨＯ形質移入体に関して記載（上記）されたように、ＰＭＮｓは、暫時ロールし、活性化ＨＵＶＥＣに固着した。ＥＬ２４６は、用量依存様式でＨＵＶＥＣへのＰＭＮ結合を阻害した（図８）。無関係なマッチドｍＡｂは、ＰＭＮ−ＨＵＶＥＣ相互作用に対して効果はなかった。しかしながら、ＰＭＮ−ＨＵＶＥＣ相互作用を阻害するＩＣ５０は、＞２μｇ／ｍｌであった（図８）。このように、ｉｎ ｖｉｖｏで白血球−内皮相互作用にとって必要であることが知られている大部分の接着成分の再現により、薬物有効性における微差の識別を可能にする。これらのデータは、同じ阻害剤が、異なるＩＣ５０値（約０．６μｇ／ｍｌから約２μｇ／ｍｌ）を有し、ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）は、ｉｎ ｖｉｖｏで生じると考えられる条件により典型的にシステムが複雑になるにつれて、その有効性がより低くなることを示している。
【０１０４】
結論
極めて重要な細胞−細胞相互作用が生じる最も動的な微小環境の１つは、動物の血管系である。細胞−細胞接着分析における現行のアプローチは、多くの場合、ｉｎ ｖｉｖｏ微小環境を反映していない古典的なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイおよび／または公的な支持が急速に失いつつある時間と経費がかかる動物試験に頼っている。古典的なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイは、主として静的アッセイにおける接着を測定するが、発生する相互作用の十分な理解を得るためには、ｉｎ ｖｉｖｏで規定されたものに近似した、せん断力下で測定する必要があることが現在知られている。
【０１０５】
最近のｉｎ ｖｉｔｒｏせん断法が、研究室で用いられるまで、所与の接着事象の生理的関連性を判定する主要な手段は、広範な動物試験を実施することであった。このｉｎ ｖｉｖｏ法での結果は、間接的なエンドポイント測定値のみを提供するか、または直接的なｉｎ ｓａｉｔｕ視覚化を用いる場合は、統計的に有意な結果を得るためにさらに多くの動物を必要とする。しかしながら、これら困難なｉｎ ｖｉｖｏ試験から、血中の細胞−細胞相互作用の十分な理解を得るためには、血流に伴うせん断力下で相互作用を調べなければならないことが極めて明白となった。静的条件下で規定された多くの例の接着システムがあるが、せん断が適用される場合、機能しないことが後に示された。本明細書には、進歩的薬物スクリーニング手段であるＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）が記載されているが、これは、ヒトの血管流条件を正確にシミュレートするｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイシステムである。このシミュレートされた微小環境は、炎症疾患および感染性疾患に関連する分子、細胞、および血管表面の相互作用を評価するための優れた手段である。
【０１０６】
シミュレートされた血管流動モデルにおけるヒトの生細胞の使用により、ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗシステムは、候補薬物の有効性について肉視により、かつ定量可能な証拠を提供できる。この微小環境における候補化合物を調べることによって、研究者は、極めて低コスト様式で薬物有効性を迅速かつ正確に判定できる。ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）は、炎症疾患および感染性疾患のために候補化合物を迅速かつ低コストで確認および最適化できる。
【０１０７】
実施例５ 推定されたヒト静脈内投与量の判定
ヒトにおける好中球駆動の肺感染症をヒト化ＥＬ２４６ ｍＡｂにより治療する上で有効と考えられる投与量レベルの推定値を提供するために霊長類に吸入されたＬＰＳ肺炎症全身モデルと関連させてヒト好中球ＨＵＶＥＣ動員ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）分析モデルが共に使用された。
【０１０８】
ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）における実験操作により、ＥＬ２４６の有効量は、シミュレートされた生理的血流条件下で好中球のローリング動員を完全に中断させるためにｉｎ ｖｉｔｒｏで達成できることが確立された。用量応答プロトコルにおいてこの同じ方法を用いて、ＥＬ２４６ ｍＡｂに関して２．５μｇ／ｍｌのＩＣ５０を確立できた。並行して、１ｍｇ／ｋｇの用量で霊長類の肺炎症モデルで試験されたＥＬ２４６は、ＬＰＳ炎症刺激に応答して、好中球肺動員を平均５０％阻害することが示された。
【０１０９】
これら双方の試験からの推定用量の比較により、決定されたＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）の有効量対確立された霊長類のｉｎ ｖｉｖｏ有効量比の確立が可能になった。ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）システムの測定値は、薬物量／単位容量に基づくので、この比率の確立は、血液量／霊長類の体重の推定値に大いに依存する。許容される基準値（霊長類体重（ｋｇ）ｘ６０＝ｍＬｓ全血液容量）に基づく推定方法を用いると、算出された比率は６．７５である。したがって、ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）ＩＣ５０および６．７５の算出された乗数を確立することによって、該手段は、ヒト肺感染症の治療のために用いられるＥＬ２４６に由来するヒト化抗体のＥＣ５０を予測するための手段が確立されている。ヒト対霊長類では血液容量推定値に対する標準体重が変わるので（ヒト体重（ｋｇ）×７１．４３＝ｍＬｓ全血液容量）、ヒトＥＣ５０を確立するためにヒト変換因子は、ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）ＩＣ５０の測定値の５．６倍の比率で僅かに低下すると考えられる。
【０１１０】
【表１】
【０１１１】
上記の実施例を参照にして本発明を詳細に記載したが、種々の修飾が、本発明の趣旨から逸脱することなく成し得ることが解される。したがって、本発明は、以下の特許請求の範囲によってのみ限定される。本出願に参照された全ての引用された特許、特許出願および刊行物は、参照としてそれらの全体が本明細書に援用される。
【図面の簡単な説明】
【０１１２】
【図１】ヒツジ肺からの緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）のクリアランスに対するモノクローナルＥＬ２４６の効果を示すグラフである。
【図２】ヒツジ肺からの非シュードモナス（ｎｏｎ−Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）菌のクリアランスに対するＥＬ２４６の効果を示すグラフである。
【図３】ＬＰＳ誘導炎症後のサルにおける全細胞、好中球、マクロファージ、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、ミエロペルオキシダーゼ、タンパク質およびインターロイキン−１ベータに対するＥＬ２４６の効果を示す７つのグラフである。
【図４】ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）のせん断アッセイシステムを示す系統図である。
【図５】ＰｒｏｔｅｏＦｌｏｗ（登録商標）アッセイにおける種々の用量のＥＬ２４６のローリング相互作用を示すグラフである。
【図６】ＥＬ２４６用量の関数として組換えＥ−セレクチンに対するＵ９３７細胞の平均阻害パーセントを示すグラフである。
【図７】ＥＬ２４６用量の関数としてＣＨＯ Ｅ−セレクチンに対するＵ９３７細胞の平均阻害パーセントを示すグラフである。
【図８】ＥＬ２４６用量の関数として活性化ＨＵＶＥＣ類に対するＵ９３７細胞の平均阻害パーセントを示すグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療的有効量の抗セレクチン剤を、肺感染症の治療または予防を必要とする患者に投与することを含む、肺感染症を治療または予防する方法であって、前記治療が肺内の病原体負荷を減少させる方法。
【請求項２】
前記薬剤が、Ｅ−セレクチン、Ｌ−セレクチンまたはＰ−セレクチンに特異的に結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記薬剤が、抗体、またはその抗原結合性フラグメントである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記抗体、またはその抗原結合性フラグメントが、Ｅ−セレクチンおよび／またはＬ−セレクチン上の抗原決定基に特異的に結合する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記抗体が、Ｅ−セレクチン上の抗原決定基およびＬ−セレクチン上の抗原決定基に特異的に結合し、前記結合により、Ｅ−セレクチン作用およびＬ−セレクチン作用が同時にまたは個々に阻害される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体が、０．０５ｍｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇの用量範囲で有効である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体が、約１ｍｇ／ｋｇの用量で有効である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記抗体が、ＡＴＣＣ登録番号ＨＢ １１０４９を有するハイブリドーマにより分泌されるモノクローナル抗体ＥＬ２４６である、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記抗体、またはその抗原結合性フラグメントが、Ｌ−セレクチンまたはＥ−セレクチンのいずれかあるいは双方に対してモノクローナル抗体ＥＬ２４６と同等の結合特異性を有する、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体、またはその抗原結合性フラグメントが、Ｅ−セレクチンまたはＬ−セレクチンのいずれかあるいは双方との結合に関してモノクローナル抗体ＥＬ２４６と競合する、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体、またはその抗原結合性フラグメントが、モノクローナル抗体ＥＬ２４６と、Ｅ−セレクチンおよび／またはＬ−セレクチン上の同じエピトープに結合する、請求項５に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体である、請求項３に記載の方法。
【請求項１３】
前記患者が、成人患者である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記患者が、哺乳動物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記感染が、細菌感染、真菌感染またはウィルス感染である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記感染が、細菌性である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記細菌が、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、モラクセラ・カタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、レジオネラ・ニューモフィラ菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、肺炎クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、およびバークホルデリラ・セパシア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）からなる群より選択される請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記患者が、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺炎、間質性肺炎、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、サルコイドーシス、嚢胞性線維症、気腫、喘息、喫煙者の咳（Ｓｍｏｋｅｒ’ｓ Ｃｏｕｇｈ）、アレルギー、アレルギー性鼻炎、洞炎または肺線維症からなる群より選択される疾患と診断された、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記薬剤が、少なくとも約１０μｇ／ｋｇの投与量で前記患者に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
抗菌薬、抗ウィルス薬または抗真菌薬も前記対象に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記患者が、慢性気管支炎、ＣＯＰＤまたは喘息の急性増悪をきたしている、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
Ｅ−セレクチン上の抗原決定基およびＬ−セレクチン上の抗原決定基に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合性フラグメントの治療的有効量を、肺感染症の治療または予防を必要とする患者に投与することを本質的に含む、肺感染症を治療または予防する方法であって、前記結合により、Ｅ−セレクチン作用およびＬ−セレクチン作用が同時にまたは個々に阻害され、前記治療により肺内の病原体負荷が減少する、方法。
【請求項１】
治療的有効量の抗セレクチン剤を、肺感染症の治療または予防を必要とする患者に投与することを含む、肺感染症を治療または予防する方法であって、前記治療が肺内の病原体負荷を減少させる方法。
【請求項２】
前記薬剤が、Ｅ−セレクチン、Ｌ−セレクチンまたはＰ−セレクチンに特異的に結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記薬剤が、抗体、またはその抗原結合性フラグメントである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記抗体、またはその抗原結合性フラグメントが、Ｅ−セレクチンおよび／またはＬ−セレクチン上の抗原決定基に特異的に結合する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記抗体が、Ｅ−セレクチン上の抗原決定基およびＬ−セレクチン上の抗原決定基に特異的に結合し、前記結合により、Ｅ−セレクチン作用およびＬ−セレクチン作用が同時にまたは個々に阻害される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体が、０．０５ｍｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇの用量範囲で有効である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体が、約１ｍｇ／ｋｇの用量で有効である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記抗体が、ＡＴＣＣ登録番号ＨＢ １１０４９を有するハイブリドーマにより分泌されるモノクローナル抗体ＥＬ２４６である、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記抗体、またはその抗原結合性フラグメントが、Ｌ−セレクチンまたはＥ−セレクチンのいずれかあるいは双方に対してモノクローナル抗体ＥＬ２４６と同等の結合特異性を有する、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体、またはその抗原結合性フラグメントが、Ｅ−セレクチンまたはＬ−セレクチンのいずれかあるいは双方との結合に関してモノクローナル抗体ＥＬ２４６と競合する、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体、またはその抗原結合性フラグメントが、モノクローナル抗体ＥＬ２４６と、Ｅ−セレクチンおよび／またはＬ−セレクチン上の同じエピトープに結合する、請求項５に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体である、請求項３に記載の方法。
【請求項１３】
前記患者が、成人患者である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記患者が、哺乳動物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記感染が、細菌感染、真菌感染またはウィルス感染である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記感染が、細菌性である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記細菌が、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、モラクセラ・カタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、レジオネラ・ニューモフィラ菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、肺炎クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、およびバークホルデリラ・セパシア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ）からなる群より選択される請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記患者が、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺炎、間質性肺炎、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、サルコイドーシス、嚢胞性線維症、気腫、喘息、喫煙者の咳（Ｓｍｏｋｅｒ’ｓ Ｃｏｕｇｈ）、アレルギー、アレルギー性鼻炎、洞炎または肺線維症からなる群より選択される疾患と診断された、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記薬剤が、少なくとも約１０μｇ／ｋｇの投与量で前記患者に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
抗菌薬、抗ウィルス薬または抗真菌薬も前記対象に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記患者が、慢性気管支炎、ＣＯＰＤまたは喘息の急性増悪をきたしている、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
Ｅ−セレクチン上の抗原決定基およびＬ−セレクチン上の抗原決定基に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合性フラグメントの治療的有効量を、肺感染症の治療または予防を必要とする患者に投与することを本質的に含む、肺感染症を治療または予防する方法であって、前記結合により、Ｅ−セレクチン作用およびＬ−セレクチン作用が同時にまたは個々に阻害され、前記治療により肺内の病原体負荷が減少する、方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【公表番号】特表２００８−５０８２９３（Ｐ２００８−５０８２９３Ａ）
【公表日】平成２０年３月２１日（２００８．３．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５２３７４１（Ｐ２００７−５２３７４１）
【出願日】平成１７年７月２７日（２００５．７．２７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２６５２９
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０８３３２２
【国際公開日】平成１８年８月１０日（２００６．８．１０）
【出願人】（５０７０２８４７９）リゴサイト ファーマスーティカルズ，インコーポレイテッド (6)
【出願人】（５０４２５６３９４）モンタナ ステート ユニバーシティ (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年３月２１日（２００８．３．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年７月２７日（２００５．７．２７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２６５２９
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０８３３２２
【国際公開日】平成１８年８月１０日（２００６．８．１０）
【出願人】（５０７０２８４７９）リゴサイト ファーマスーティカルズ，インコーポレイテッド (6)
【出願人】（５０４２５６３９４）モンタナ ステート ユニバーシティ (2)
【Ｆターム（参考）】
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