抗ＥＧＦＲ療法に二次的な皮疹の予防および処置のためのビタミンＫ
【課題】 抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法に二次的な皮疹を効果的に処置できる製薬学的製剤の提供
【構成】 前記処置に有効抗成分としてのビタミンＫアナログ若しくはホスファターゼ阻害剤の使用。
【構成】 前記処置に有効抗成分としてのビタミンＫアナログ若しくはホスファターゼ阻害剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、ビタミンＫの製薬学的製剤での使用、特に、皮膚疾患の治療もしくは予防での使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
本出願を通じて、多様な刊行物がカッコ内で引用される。これらの参考文献の完全な引用は、請求の範囲の直前の本明細の最後に見出しうる。これらの刊行物の開示は、ここに、主題の出願が関する技術分野をより完全に記述するために、引用することにより本願にそっくりそのまま組み込まれる。
【０００３】
上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）は、全部の上皮細胞表面で発現される膜貫通タンパク質タンパク質である。それは上皮の修復および再生で重要な生理学的役割を演じる。上皮増殖因子（ＥＧＦ）は、ＥＧＦＲの細胞外ドメインの特定の一領域に結合する上皮表面と会合した唾液腺および他の腺により分泌されるペプチドである。結合に際して、それは細胞の内側に伝達されるシグナルを生成する。ＥＧＦ結合の結果としての第一の細胞内事象は、アデノシン５’−三リン酸（ＡＴＰ）にいわゆるチロシンキナーゼ（ＴＫ）ドメイン（チロシン残基を含有するポケット）に進入させかつ該チロシン残基にリン酸基を供与させるＥＧＦＲの細胞内ドメインのコンホメーション変化である。リン酸化されたチロシンを運搬する細胞内ＥＧＦＲは、他の細胞内タンパク質と会合することが可能になり、そして、非常に複雑なネットワークにより下流に伝播する一連の生化学反応を開始する。このネットワークの最良に知られた部門（ａｒｍ）は、活性化に際して腫瘍細胞分裂をもたらすマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）経路、および、活性化に際して高められた細胞生存をもたらすＡＫＴ経路である。ＥＧＦＲ活性化の結果は、従って、増大された細胞増殖および多様な傷害に対する高められた細胞耐性である。
【０００４】
多くの腫瘍は、それらが発する近隣の正常組織若しくは上皮細胞表面に比較してＥＧＦＲを過剰発現するか、または、本質的に活性化されたか若しくは活性化に対する高められた感受性を伴う変異バージョンのＥＧＦＲを有する。こうした過剰発現は、腫瘍細胞が悪性の表現型の重要な一特徴である増殖の利点を獲得する多くの機構の１つであると考えられている。結果、ＥＧＦＲシグナル伝達経路の阻害は、多くのヒト悪性病変の処置のための合理的一戦略であると考えられる。基本的に、ＥＧＦＲシグナル伝達経路の上流を阻害する２つの方法、すなわち、１）特異的モノクローナル抗体の使用により、ＥＧＦおよび他の天然のペプチドリガンドが細胞外ＥＧＦＲドメインに結合することを予防する、ならびに２）ポケットに構造上非常に良好に嵌る小分子の使用により、ＡＴＰおよび他のリン酸供与体が細胞内ＥＧＦＲドメインのＴＫポケットに進入することを予防する（いわゆるＥＧＦＲ ＴＫ阻害剤）、が存在する。
【０００５】
長年の発見の努力および臨床評価後に、ＥＧＦＲ阻害剤は、限定されるものでないが結腸直腸癌、非小細胞肺癌、頭頚部の癌および悪性神経膠腫を挙げることができる多様な充実性腫瘍に対する活性の抗腫瘍剤であることが最近示された（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４）。症状の解消若しくは生存の延長と定義される臨床上の利敵は、これまで、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（Ｒ））、ならびにＥＧＦＲチロシンキナーゼ（ＴＫ）阻害剤ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（Ｒ））およびエルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（Ｒ））で示されている。この分類に属する多くの付加的な剤が開発されている。今日のところ、ＦＤＡに承認された適応症は、化学療法難治性の結腸直腸癌および非小細胞肺癌、頭頚部の癌、ならびに膵癌を包含する。多様な他の悪性疾患を伴う難治性若しくは化学療法を受けていない患者に対しこれらの剤を単独で若しくは
組合せで使用する多くの臨床試験が進行中である。近い将来、米国で毎年約２０万人の患者がこれらの剤を受けているものと予想される。
【０００６】
これらの剤は生命を脅かす毒性を引き起こさないとは言え、主要な副作用は皮疹であり、６０〜７０％の患者で発生し、主として顔および体躯を冒し、そして多くの症例で不快かつ好ましくない美容上の変化を引き起こす。皮疹により引き起こされる主症状は掻痒感、乾燥および二次感染である。発疹の発生率および強度は明瞭に用量に関係しており、そして発生時間の中央値は療法の開始１０日後である。患者の約１０％が皮膚毒性のため療法を中断する。
【０００７】
大部分の臨床試験は、抗ＥＧＦＲ療法の結果皮疹を発症する大部分の患者がより長く生存する傾向があることを示している。皮疹の発生は、皮膚中での効果的なＥＧＦＲ阻害、および適切な免疫応答でこうした阻害により引き起こされる組織傷害に応答することが可能である適格性の免疫系の双方を必要とすると考えられる。皮疹は抗腫瘍有効性および臨床上の利益の代理指標であるという増大しつつある証拠が存在する（非特許文献５）ため、皮疹を引き起こすように抗ＥＧＦＲ剤の投与を増大させることは一般的実務になりうる。それが真実である場合、皮進の処置もまたますます重要になるであろう。結果として、皮疹の処置はまたますます重要になりつつある。この形態の皮疹の処置に利用可能な合理的な科学的に証明されかつ臨床上有効な方法は存在しない。局所若しくは全身の抗生物質、抗炎症薬、レチノイド、局所潤滑剤および他の型の療法薬が、乏しい若しくは一貫しない結果を伴い、経験的様式で試みられている。今日のところ、非常に近い将来、米国で毎年約１５万人が冒されると期待される状態であるこの新たな皮膚疾患に対する確立された療法若しくは予防は存在しない。
【０００８】
ビタミンＫは皮膚の血管障害の処置、美容的皮膚処置およびレーザー処置後の皮膚処置に使用されている（特許文献１；特許文献２；特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６；非特許文献６；非特許文献７）。しかしながら、ビタミンＫ３の局所投与は皮膚炎（非特許文献８）および皮膚の小水疱形成（非特許文献９）を引き起こし得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許第５，５１０，３９１号
【特許文献２】米国特許出願公開第ＵＳ ２００３／０１７０１８７号
【特許文献３】ＰＣＴ国際公開第ＷＯ ９７／３９７４６号
【特許文献４】ＰＣＴ国際公開第ＷＯ ０２／１３７８０号
【特許文献５】ＰＣＴ国際公開第ＷＯ ０３／１０１４１５号
【特許文献６】ＰＣＴ国際公開第ＷＯ ２００４／０１９９２３号
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｃｏｎｅｎら、２００３
【非特許文献２】Ｌａｇｅら、２００３
【非特許文献３】Ｌｏｒｕｓｓｏ、２００３
【非特許文献４】Ｖａｎｈｏｅｆｅｒら、２００４
【非特許文献５】Ｃｏｈｅｎら、２００３
【非特許文献６】Ｌｏｕら、１９９９
【非特許文献７】Ｓｈａｈら、２００２
【非特許文献８】Ｐａｇｅら、１９４２
【非特許文献９】Ｕｌｂｒｉｃｈ、１９６１
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、ビタミンＫアナログを、皮疹を処置するのに有効な量で皮疹に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の処置方法を提供する。本発明はまた、ビタミンＫアナログを、皮疹を予防するのに有効な量で皮膚に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の予防方法も提供する。
【００１２】
本発明は、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法に二次的な皮疹を処置若しくは予防するのに有効な量のビタミンＫアナログを含んでなる製薬学的組成物を提供する。
【００１３】
本発明はまた、化合物が上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、Ａｋｔおよびシグナル伝達性転写因子３（ＳＴＡＴ−３）のいずれか１種を活性化するかどうかを決定することを含んでなり、該化合物によるＥＧＦＲ、Ａｋｔ若しくはＳｔａｔ−３の活性化は皮疹を処置かつ／若しくは予防するのに該化合物が有効であることを示す、抗ＥＧＦＲ療法に二次的な皮疹を処置かつ／若しくは予防するのに有用でありうる化合物の同定方法も提供する。
【００１４】
本発明はまた、ホスファターゼ阻害剤を、皮疹を処置するのに有効な量で皮疹に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の処置方法にも向けられる。本発明は、さらに、ホスファターゼ阻害剤を、皮疹を予防するのに有効な量で皮膚に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の予防方法を提供する。
【００１５】
本発明はまた、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法に二次的な皮疹を処置若しくは予防するのに有効な量のホスファターゼ阻害剤を含んでなる製薬学的組成物も提供する。
【００１６】
本発明はまた、皮膚若しくは粘膜潰瘍を処置するのに有効な量のビタミンＫアナログを皮膚若しくは粘膜潰瘍に塗布することを含んでなり、ビタミンＫアナログはＥＧＦＲを活性化する、被験者における皮膚若しくは粘膜潰瘍の処置方法も提供する。本発明は、さらに、皮膚若しくは粘膜潰瘍を処置するのに有効な量のホスファターゼ阻害剤を皮膚若しくは粘膜潰瘍に塗布することを含んでなり、ホスファターゼ阻害剤はＥＧＦＲの脱リン酸化を阻害する、被験者における皮膚若しくは粘膜潰瘍の処置方法を提供する。
【００１７】
［発明の詳細な記述］
本発明は、ビタミンＫアナログを、皮疹を処置するのに有効な量で皮疹に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の処置方法に向けられる。
【００１８】
本明細書で使用されるところの抗ＥＧＦＲ療法に二次的な皮疹を「処置する」という用語は、被験者の皮膚の皮疹を低減若しくは排除しかつ／または皮疹の増大若しくは拡大を低下若しくは除外することを意味している。
【００１９】
抗ＥＧＦＲ療法を受けている被験者は、セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）のような抗ＥＧＦＲ抗体および／またはゲフィチニブ（ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）若しくはエルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）のようなＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を用いる処置を受けている患者を包含する。
【００２０】
本明細書で使用されるところの「ビタミンＫアナログ」は、ビタミンＫ１（２−メチル−３−フィチル−１，４−ナフトキノン）、ビタミンＫ２（２−メチル−３−ヘキサプレニル−１，４−ナフトキノン；メナキノン）、ビタミンＫ３（２−メチル−１，４−ナフ
トキノン；メナジオン）、ビタミンＫ４（１，４−ジアセトキシ−２−メチルナフタレン）、ビタミンＫ５（４−アミノ−２−メチル−１−ナフタレノール）、ビタミンＫ６、ビタミンＫ７（３−メチル−４−アミノ−１−ナフトール塩酸塩）、メナジオン二リン酸塩、メナジオン亜硫酸水素ナトリウム、および構造：
【００２１】
【化１】
【００２２】
式中、Ｒ＝Ｈ、または飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水素；ならびにＲ１およびＲ２＝Ｈ若しくはＣＨ３
を有する化合物よりなる群から選択される化合物である。
【００２３】
ビタミンＫ３およびビタミンＫ１が好ましいビタミンＫアナログである。ビタミンＫ３が最も好ましい。ビタミンＫ３は構造：
【００２４】
【化２】
【００２５】
を有する。
【００２６】
ビタミンＫ１は、構造：
【００２７】
【化３】
【００２８】
を有する。
【００２９】
好ましい形態のビタミンＫ１は、ｔｒａｎｓ異性体のビタミンＫ１若しくはｔｒａｎｓおよびｃｉｓ異性体の混合状態である。ｃｉｓ異性体は生物学的活性をほとんど若しくは全く有しないためである（Ｍａｔｓｃｈｉｎｅｒら、１９７２）。
【００３０】
ビタミンＫ１およびＫ２は天然に存在する。ビタミンＫ３、Ｋ４、Ｋ５、Ｋ６およびＫ７は合成アナログである。ビタミンＫアナログの製造方法は記述されている（例えば米国特許第４，３７４，７７５号、同第４，９０６，４１１号、同第５，４１２，１２４号、同第５，６３７，７４１号、同第５，７７０，７７４号および同第６，５７９，９９４号明細書、ならびにＳａｈ（１９４９−５０））。ビタミンＫ１、Ｋ２およびＫ３は例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから入手可能である。
【００３１】
ビタミンＫアナログはＥＧＦＲ、Ａｋｔおよび／若しくはＳｔａｔ−３を活性化し得る。ビタミンＫアナログをスクリーニングして、本出願に記述される手順を使用してＥＧＦＲ、Ａｋｔおよび／若しくはＳｔａｔ−３を活性化するものを同定し得る。本明細書で使用されるところのＥＧＦＲ、Ａｋｔおよび／若しくはＳｔａｔ−３を「活性化する」ことは、リン酸化された形態のＥＧＦＲ、Ａｋｔおよび／若しくはＳｔａｔ−３を増大させることを意味している。
【００３２】
皮疹を処置するために本明細書で使用されるところのビタミンＫアナログは皮膚に局所適用される。ビタミンＫ化合物はエチルアルコールおよび有機溶媒に容易に可溶性であり、そして所望の濃度で局所使用のための製剤に製造し得る。ビタミンＫアナログは、例えばクリーム剤、ゲル剤、乳剤、ローション剤、液剤および／若しくはリポソームを使用して皮膚に塗布しうる。該製剤はビタミンＫアナログの持続放出を提供する製剤であり得る。局所皮膚製剤は、例えば、限定されるものでないが以下すなわちエチルアルコール、イソプロピルアルコール、ベンジルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、レシチン顆粒、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル、プロピルパラベン、メチルパラベン、界面活性剤（例えばＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−１２７ ＮＦ）、Ｄｏｗｉｃｉｌ ２００、鉱物油、天然油、シリコーン油、パラフィン、グリセリン、ステアリン酸ジエステル、ステアリン酸グリセロール、シクロデキストリンのような安定剤、および紫外（ＵＶ）遮蔽物のいずれかを挙げることができる成分を包含し得る。
【００３３】
ビタミンＫアナログは、被験者間で変動することがありかつ処置で使用される特定のビタミンＫアナログに依存する最大耐用量まで皮膚に塗布し得る。最大耐用量は当業者により容易に決定され得る。好ましくは、ビタミンＫアナログは、最低１００μＭすなわち最低１５μｇ／ｍｌの濃度で皮膚に塗布される。好ましくは、ビタミンＫ３は、５０μｇ／ｍｌないし２００μｇ／ｍｌ、より好ましくは７５μｇ／ｍｌないし１００μｇ／ｍｌの濃度で塗布される。好ましくは、ビタミンＫ１は最低４５０μｇ／ｍｌの濃度で皮膚に塗布される。
【００３４】
ビタミンＫアナログを用いる処置は、例えば、抗ＥＧＦＲ剤を用いる療法の開始日に、または皮疹が出現したらすぐ若しくは別の方法で医師により処方される際に開始し得る。ビタミンＫアナログは抗ＥＧＦＲ剤を用いる療法の経過中定期的に投与する。投与頻度は処方により変動することができる（例えば１日２回、１日１回若しくは１日おき、または別の方法で医師により処方されるとおり）。徐放製剤は、ビタミンＫアナログの徐放（ｓｕｓｔａｉｎｅｄ）すなわち徐放（ｓｌｏｗ ｒｅｌｅａｓｅ）を提供しない製剤より少なく頻繁な投与を必要とすることができる。
【００３５】
本発明はさらに、皮疹の処置について本明細書に記述されるとおり、ビタミンＫアナログを、皮疹を予防するのに有効な量で皮膚に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の予防方法
を提供する。抗ＥＧＦＲ療法に二次的な皮疹は一般に顔および体躯で発生する。好ましくは、ビタミンＫアナログは、顔および体躯のような、皮疹が一般に抗ＥＧＦＲ療法に二次的に出現する身体領域、若しくは該被験者が以前の抗ＥＧＦＲ療法の間に皮疹を経験した身体領域に塗布される。皮疹を予防するために、ビタミンＫアナログは、例えば抗ＥＧＦＲ剤を用いる療法の開始日に、若しくは別の方法で医師により処方される際に開始して皮膚に塗布し得る。
【００３６】
本発明はまた、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法に二次的な皮疹を処置かつ／若しくは予防するのに有効な量の本明細書に記述されるビタミンＫアナログのいずれかを含んでなる製薬学的組成物も提供する。該組成物はまた製薬学的に許容できる担体も包含し得る。本明細書で使用されるところの「担体」という用語は、エチルアルコールおよび有機溶媒のような標準的製薬学的担体を包含する。好ましい一態様において、製薬学的組成物は局所投与のため処方される。ビタミンＫアナログは徐放製剤に処方し得る。
【００３７】
本発明はまた、化合物が、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、Ａｋｔおよびシグナル伝達性転写因子３（ＳＴＡＴ−３）のいずれか１種若しくはそれ以上を活性化するかどうかを決定することを含んでなり、該化合物によるＥＧＦＲ、Ａｋｔ若しくはＳｔａｔ−３の活性化は皮疹を処置かつ／若しくは予防するのに該化合物が有効であることを示す、抗ＥＧＦＲ療法に二次的な皮疹を処置かつ／若しくは予防するのに有用でありうる化合物の同定方法も提供する。ＥＧＦＲ、Ａｋｔ若しくはＳｔａｔ−３の活性化は、例えばリン酸化（活性化）された形態のＥＧＦＲ、Ａｋｔ若しくはＳｔａｔ−３に特異的である抗体を使用することにより決定し得る。該化合物は例えばビタミンＫアナログであり得る。該化合物はＥＧＦＲ、Ａｋｔ若しくはＳｔａｔ−３の脱リン酸化を阻害し得る。該化合物はホスファターゼ阻害剤であり得る。
【００３８】
本発明はまた、ホスファターゼ阻害剤を、皮疹を処置するのに有効な量で皮疹に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の処置方法にも向けられる。本発明はさらに、ホスファターゼ阻害剤を、皮疹を予防するのに有効な量で皮膚に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の予防方法を提供する。好ましくは、ホスファターゼ阻害剤はＥＧＦＲの脱リン酸化を阻害する。多様なホスファターゼ阻害剤が記述されている（例えば、Ｂａｅら ２００４、Ｇｅｒｌｉｎｇら ２００４、ＬｅｅとＢｕｒｋｅ ２００３、Ｌｉｅｍら ２００４、米国特許第５，１５５，０３１号および同第６，４２８，９４９ Ｂ１号明細書、米国特許出願公開第ＵＳ ２００４／０１３８２１８ Ａ１号明細書）。ホスファターゼ阻害剤は、例えばクリーム剤、ゲル剤、乳剤、ローション剤、液剤および／若しくはリポソームを使用して皮膚に塗布しうる。該製剤はホスファターゼ阻害剤の持続放出を提供する製剤であり得る。ホスファターゼ阻害剤は、被験者間で変動することがありかつ処置で使用される特定のホスファターゼ阻害剤に依存する最大耐用量まで皮膚に塗布し得る。最大耐用量は当業者により容易に決定され得る。
【００３９】
本発明はまた、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法に二次的な皮疹を処置若しくは予防するのに有効な量のホスファターゼ阻害剤を含んでなる製薬学的組成物も提供する。好ましくは、ホスファターゼ阻害剤はＥＧＦＲの脱リン酸化を阻害する。好ましくは、製薬学的組成物は局所投与のため処方される。ホスファターゼ阻害剤は徐放製剤に処方し得る。
【００４０】
本発明はまた、皮膚若しくは粘膜潰瘍を処置するのに有効な量のビタミンＫアナログを皮膚若しくは粘膜潰瘍に塗布することを含んでなり、ビタミンＫアナログはＥＧＦＲを活性化する、被験者における皮膚若しくは粘膜潰瘍の処置方法も提供する。本発明はさらに
、皮膚若しくは粘膜潰瘍を処置するのに有効な量のホスファターゼ阻害剤を皮膚若しくは粘膜潰瘍に塗布することを含んでなり、ホスファターゼ阻害剤はＥＧＦＲの脱リン酸化を阻害する、被験者における皮膚若しくは粘膜潰瘍の処置方法を提供する。皮膚および粘膜潰瘍の状態は、例えば、化学療法および／若しくは放射線療法により誘発され得る潰瘍性大腸炎および口内粘膜炎を包含する。潰瘍性大腸炎に対しては、ビタミンＫアナログ若しくはホスファターゼ阻害剤は例えば浣腸投与により投与し得る。ステロイドおよび他の抗炎症薬を含む浣腸による局所療法は、現在、潰瘍性大腸炎の療法の標準である。口内粘膜炎に対しては、例えばビタミンＫアナログ若しくはホスファターゼ阻害剤を含有する接着性ゲル剤若しくは口腔洗浄剤を使用し得る。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１Ａ−１Ｃ】ヒトＡ４３１外陰癌細胞でのＥＧＦＲ（Ａ）、ＡＫＴ（Ｂ）およびＳｔａｔ−３（Ｃ）のリン酸化に対するビタミンＫ１、Ｋ２およびＫ３（ＶＫ１、ＶＫ２、ＶＫ３）の影響。Ａ４３１細胞（１×１０６細胞／ウェル）を６ウェルプレートにプレーティングし、そして１０％血清を含むＲＰＭＩ−１６４０培地中で一夜インキュベートした。細胞を指定された濃度のＶＫ１、ＶＫ２およびＶＫ３に２時間曝露した。曝露後、細胞を冷リン酸緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）溶液で２回洗浄し、そして５０μｌの溶解緩衝液で溶解した。等量のライセート（３０μｇタンパク質）を７．５％若しくは１２％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけた。ＥＧＦＲ、ｐｈｏｓ−ＥＧＦＲ、ＡＫＴ、ｐｈｏｓ−ＡＫＴ、Ｓｔａｔ−３およびｐｈｏｓ−Ｓｔａｔ−３を、対応する抗体を使用するイムノブロッティング分析により検出した。ビタミンＫ３はＥＧＦＲ、ＡｋｔおよびＳｔａｔ−３を刺激した。ビタミンＫ１もまたＥＧＦＲを刺激した一方、ビタミンＫ２はほとんど若しくは全く影響を有しなかった。
【図２】ビタミンＫ３（メナジオン）は、Ａ４３１細胞で、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤エルロチニブにより引き起こされるＥＧＦＲリン酸化の阻害を予防する。Ａ４３１細胞（１×１０６細胞／ウェル）を６ウェルプレートにプレーティングし、そしてウシ胎児血清を含まないＲＰＭＩ−１６４０培地中で２４時間インキュベートした。飢餓（ｓｔａｒｖｉｎｇ）後に、細胞を単独若しくは２μＭエルロチニブを伴う多様な濃度のビタミンＫ３（０．０１〜０．５ｍＭ）に２時間曝露したか、または１００ｎｇ／ｍｌのＥＧＦで５分間刺激した。曝露後に細胞を冷ＰＢＳ溶液で２回洗浄し、そして５０μｌの溶解緩衝液で溶解した。等量のライセート（３０μｇタンパク質）を７．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけた。ＥＧＦＲおよびリン酸化されたＥＧＦＲを、対応する抗体を使用するイムノブロッティング分析により検出した。
【図３】Ａ４３１細胞でのエルロチニブ誘発性細胞増殖阻害に対するＶＫ３（メナジオン）の影響。細胞を９６ウェルプレート中で一夜プレーティングした。細胞を単独または５０μＭ若しくは１００μＭのＶＫ３（メナジオン）と組合せの多様な濃度のエルロチニブに７２時間曝露した。曝露後、細胞をトリプシン処理により収集し、そして血球計算板を使用して細胞を計数することにより細胞の生存率を評価した。各点は２回の独立した実験の平均を表す。
【図４Ａ−４Ｂ】ＥＧＦＲのＶＫ３誘発性のリン酸化はＡ４３１細胞で可逆的である。細胞を０．１ｍＭ ＶＫ３に１時間曝露した。曝露後、細胞を冷培地で３回洗浄し、そしてその後、１０％ウシ胎児血清を含むＶＫ３を含まない新鮮培地中で指定された時間再インキュベートした。細胞を収集しそして溶解緩衝液で溶解した。等量の細胞ライセートを７．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけた（Ａ）。全ＥＧＦＲおよびリン酸化されたＥＧＦＲ（ｐ−ＥＧＦＲ）を、対応する抗体を使用するイムノブロット分析により検出した。対照（Ｃｏｎ）は細胞をＶＫ３に曝露しなかったことを意味している。相対ｐ−ＥＧＦＲは、１としての対照中のものと比較した、レーザーデンシトメトリーにより測定した各時間点のｐ−ＥＧＦＲバンドの強度として表した（Ｂ）。
【図５】ビタミンＫ３はホスファターゼ活性を阻害する。Ａ４３１細胞を０．１ｍＭ ＶＫ３に１時間曝露した。曝露後に細胞を冷培地で３回洗浄し、そしてその後、１０％ウシ胎児血清を含むＶＫ３を含まない培地中で指定された時間再インキュベートした。細胞を収集し、そして、基質としてｐＮＰＰ（４−ニトロフェニルリン酸二ナトリウム）を使用するホスファターゼ活性のアッセイのため細胞抽出液を調製した。対照（Ｃｏｎ）はＶＫ３への曝露を伴わない細胞でのホスファターゼ活性を意味している。相対ホスファターゼ活性は１としての対照中でのものに比較して表した。ＶＫ３誘発性のホスファターゼ阻害はＶＫ３の除去後に可逆的である。
【図６】マウス皮膚でのＥＧＦＲリン酸化のエルロチニブ誘発性阻害に対するビタミンＫ３（メナジオン）の影響。ビタミンＫ３は、マウス皮膚組織でのＥＧＦＲリン酸化のエルロチニブ誘発性阻害をレスキューする。マウスに５０ｍｇ／ｋｇのエルロチニブを連日Ｐ．Ｏ．投与し；マウス皮膚にＶＫ３の１５ｍＭエタノール溶液を塗りつけた。処置後にマウスを殺しかつ皮膚組織を採取した。１００ｍｇの皮膚組織を組織抽出液の調製に使用した。等量の皮膚組織抽出液（８０μｇタンパク質）を７．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけた。全ＥＧＦＲおよびｐ−ＥＧＦＲをイムノブロット分析により検出した。
【図７】マウス皮膚組織でのＥＧＦＲリン酸化に対するＶＫ３、クリームＢおよびクリームＶＫの影響。マウスに、３０ｍＭ若しくは１００ｍＭのＶＫ３（エタノール中）または同一用量のクリームＢ若しくはクリームＶＫを塗りつけた。処置後にマウスを殺しかつ組織抽出液の調製のため皮膚組織を採取した。等量の組織抽出液（８０μｇタンパク質）を７．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけた。全ＥＧＦＲおよびｐ−ＥＧＦＲを、ポリクローナル抗ＥＧＦＲおよびｐ−ＥＧＦＲ抗体を使用するイムノブロット分析により検出した。クリームＢは、そのラベルによればビタミンＫ３を含有する一般用医薬品（Ｂａｂｙ Ｃａｋｅｓ）であり；該濃度は明記されていない。クリームＶＫは処方箋なしで入手可能な５％ビタミンＫクリームである。３０ｍＭ若しくは１００ｍＭ ＶＫ３と対照的に、商業的クリームは効果を示さない。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
本発明は後に続く実験の詳細からより良好に理解されるであろう。しかしながら、当業者は、論考される特定の方法および結果が、その後に続く請求の範囲でより完全に記述されるところの本発明を単に具体的に説明することを容易に認識するであろう。
【実施例】
【００４３】
実験の詳細
材料および方法
変異していないＥＧＦＲを過剰発現する２種のヒト細胞株、すなわちＡ４３１外陰癌およびＨＮ５頭頚部癌を使用した。細胞を、３種のＥＧＦＲ阻害剤、すなわち抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（Ｒ））、ならびにＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（Ｒ））およびゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（Ｒ））の１種の存在下で多様な濃度の多様なビタミンＫアナログに曝露した。細胞傷害性を細胞計数により評価した。細胞を溶解し、そして、ＥＧＦＲ、キナーゼＡｋｔ、およびシグナル伝達性転写因子３（ＳＴＡＴ−３）の活性化に対する多様なビタミンＫアナログの影響を、リン酸化（活性化）された形態のＥＧＦＲ、ＡｋｔおよびＳｔａｔ−３に対する抗体を使用するウエスタンブロット分析により評価した。抗ＥＧＦＲ、抗ｐｈｏｓ−ＥＧＦＲ（Ｔｙｒ１０６８）、抗ＡＫＴ、抗ｐｈｏｓ−ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）、抗Ｓｔａｔ−３および抗ｐｈｏｓ−Ｓｔａｔ−３（Ｔｙｒ−７０５）のポリクローナル抗体はＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ（マサチューセッツ州ビバリー）から購入した。ビタミンＫ１、Ｋ２およびＫ３はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（ミズーリ州セントルイス）から購入した。ＥＧＦＲ、ＡｋｔおよびＳｔａｔ−３の活性化を細胞の抗ＥＧＦＲ処理の存在および非存在下で評価した。ビタミンＫアナログによるＥＧＦＲの活性化は、ビタミンＫアナログでの処理後にホモジナイズしかつ溶解したマウス皮膚を使用してもまた評価した。ホスファターゼ活性はｐＮＰＰ（４−ニトロフェニルリン酸二ナトリウム）を基質として使用して測定した。
【００４４】
結果
溶解したＡ４３１細胞から得たＥＧＦＲ、ＡｋｔおよびＳｔａｔ−３の活性化（リン酸化）に対するビタミンＫ１、Ｋ２およびＫ３の影響を図１Ａ−１Ｃに示す。ビタミンＫ３はＥＧＦＲならびに下流の細胞内シグナル伝達成分ＡｋｔおよびＳｔａｔ−３を活性化した。影響は１００μＭすなわち約１７μｇ／ｍｌのビタミンＫ３濃度で明瞭に見られた。ビタミンＫ１は、使用した最高濃度（１０００μＭすなわち約４５０μｇ／ｍｌ）でＥＧＦＲおよびＡｋｔを活性化することについてのみ有効であった。ビタミンＫ２は、使用した濃度（１０００μＭまで）でほとんど若しくは全く影響を有しなかった。従って、ビタミンＫ３は、ビタミンＫ１若しくはビタミンＫ２よりＥＧＦＲ、ＡｒｔおよびＳｔａｔ−３のはるかにより強力な刺激物質である。正常マウス皮膚へのビタミンＫ３の塗布もまたＥＧＦＲを活性化した。
【００４５】
ＥＧＦＲ、Ｓｔａｔ−３およびＡｋｔのビタミンＫ３活性化を抗ＥＧＦＲ処理の存在下で試験した。無血清培地中で保存したＡ４３１細胞若しくはＨＮ５細胞を、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤エルロチニブ（２μＭ）およびビタミンＫ３（０．０１〜０．５ｍＭ）で処理した。ビタミンＫ３は、エルロチニブの存在下で、ＥＧＦＲ（図２）ならびにＳｔａｔ−３（０．１および０．５ｍＭのビタミンＫ３の濃度で）、ならびにＡｋｔ（０．５ｍＭのビタミンＫ３の濃度で）を活性化した。同様に、ビタミンＫ３（０．１および０．５ｍＭ）は、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体セツキシマブの存在下でもまたＥＧＦＲ、Ｓｔａｔ−３およびＡｋｔを活性化した。ビタミンＫ３はまた、図６に示されるとおり、マウス皮膚組織でのＥＧＦＲリン酸化のエルロチニブ誘発性の阻害もレスキューした。
【００４６】
細胞を過剰のＥＧＦで処理して、ＥＧＦが多様な抗ＥＧＦＲ処理によるＥＧＦＲ阻害を予防し得るかどうかを決定した。ＥＧＦは、ＥＧＦＲの細胞外部分に作用する抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体セツキシマブによるＥＧＦＲ阻害の予防において有効であった。対照的に、ＥＧＦ（２μｇ／ｍｌ）での細胞の処理は、ＥＧＦＲの細胞内部分に作用するＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤エルロチニブによるＥＧＦＲ阻害を予防しない（図２）。
【００４７】
ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤エルロチニブへのヒトＡ４３１外陰癌細胞の曝露は細胞死をもたらす。ビタミンＫ３（５０〜１００μＭ）との細胞の共インキュベーションはＥＧＦＲ阻害剤の細胞傷害性を４〜６倍減少させた。図３は、エルロチニブで処理した細胞のレスキューにおける２種の異なる濃度のビタミンＫ３で得られた結果を具体的に説明する。ビタミンＫ３の影響は可逆的である。図４Ａ−４Ｂは、ＥＧＦＲのビタミンＫ３誘発性のリン酸化がＡ４３１細胞で可逆的であることを示す。
【００４８】
ビタミンＫ３は、図５に示されるとおり、少なくとも部分的に、ホスファターゼ活性を阻害することにより作用する。該影響はビタミンＫ３の除去２〜３時間後に可逆的である。
【００４９】
ビタミンＫ３の影響を、ＥＧＦＲ ＴＫ阻害剤エルロチニブ１００ｍｇ／ｋｇ×１０日（第１〜１０日）を受領する動物の皮膚で検査した。エルロチニブを受けていないマウスの対照皮膚と比較して、エルロチニブを受領する動物のビタミンＫ３で処置した皮膚は有意のｐ−ＥＧＦＲ発現を示した一方、同一動物のビタミンＫ３で処置していない皮膚はｐ−ＥＧＦＲの下方制御を示した。（図６）。マウスの皮膚にエタノール中のビタミンＫ３を塗りつけた（第５ないし１０日に１５ｍＭ １日２回×５日）。ビタミンＫ３の影響を２種の一般用皮膚クリーム剤のものと比較した。クリームＢ（Ｂａｂｙ Ｃａｋｅｓ）はそのラベルによればビタミンＫ３を含有する一般用医薬品であり；該濃度は明記されていない。クリームＶＫは処方箋なしで入手可能な５％ビタミンＫクリーム剤である。マウス皮膚組織でのＥＧＦＲリン酸化に対するＶＫ３、クリームＢおよびクリームＶＫの影響を
図７に示す。マウスに、ビタミンＫ３（エタノール中）３０ｍＭ若しくは１００ｍＭ×１２時間ごとに３用量、または同一用量のクリームＢ若しくはクリームＶＫを塗りつけた。ＥＧＦＲを活性化する３０ｍＭ若しくは１００ｍＭのＶＫ３と対照的に、商業的クリーム剤は影響を示さない。
【００５０】
考察
本出願は、ビタミンＫ３が、ＥＧＦＲを過剰発現する上皮細胞起源の腫瘍細胞株で抗ＥＧＦＲ療法のＥＧＦＲ阻害効果を予防し得ることを開示する。これらの細胞でのＥＧＦＲ系（ａｘｉｓ）は皮膚ケラチノサイトのＥＧＦＲ系を代表する。ビタミンＫ３は、ＥＧＦＲの細胞内シグナル伝達経路に対する刺激効果を有し、これは抗ＥＧＦＲ療法の存在下でさえ有効であった。ビタミンＫ３はまた正常哺乳動物（マウス）皮膚からのＥＧＦＲも活性化した。ＥＧＦＲに対するより弱い刺激効果がビタミンＫ１で観察されたが、しかしビタミンＫ２でされなかった。本結果は、抗ＥＧＦＲ療法との闘いにおける、ビタミンＫ１若しくはＫ２、または２種の一般用ビタミンＫ皮膚クリーム剤と比較してのビタミンＫ３の予期されない有効性を示す。本出願に開示されるところの皮疹の処置および予防のためのビタミンＫ３の使用は、ビタミンＫ３の局所投与が皮膚炎（Ｐａｇｅら、１９４２）および皮膚の小水疱形成（Ｕｌｂｒｉｃｈ、１９６１）を引き起こすという以前の報告を鑑みれば直観に反する。ビタミンＫ３が、細胞のホスファターゼ活性を阻害して、従って皮疹および関連する皮膚若しくは粘膜障害の処置および予防のためのホスファターゼ阻害剤の使用を提供することもまた示された。
【００５１】
【表１】
【００５２】
【表２】
【００５３】
【表３】
【００５４】
＜発明の態様＞
限定されるものでないが、本発明の特徴または主たる態様を以下に示す。
態様１： ビタミンＫアナログを、皮疹を処置するのに有効な量で皮疹に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に対する二次的な皮疹の処置方法。
態様２： 抗ＥＧＦＲ療法が抗ＥＧＦＲ抗体を用いる処置である、態様１に記載の方法。態様３： 抗ＥＧＦＲ抗体がセツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）である、態様２に記載の抗体。
態様４： 抗ＥＧＦＲ療法がＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を用いる処置である、態様１に記載の方法。
態様５： ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤がゲフィチニブ（ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）若しくはエルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）である、態様４に記載の方法。
態様６： ビタミンＫアナログがＥＧＦＲを活性化する、態様１に記載の方法。
態様７： ビタミンＫアナログがビタミンＫ３である、態様１に記載の方法。
態様８： ビタミンＫアナログがビタミンＫ１である、態様１に記載の方法。
態様９： ビタミンＫ３が、最低１５μｇ／ｍｌの濃度で皮膚に塗布される、態様７に記載の方法。
態様１０： ビタミンＫ３が、７５μｇ／ｍｌないし１００μｇ／ｍｌの濃度で皮膚に塗布される、態様７に記載の方法。
態様１１： ビタミンＫ１が、最低４５０μｇ／ｍｌの濃度で皮膚に塗布される、態様８に記載の方法。
態様１２： ビタミンＫアナログが局所投与に適する製薬学的製剤に処方されている、態様１に記載の方法。
態様１３： ビタミンＫアナログが徐放製剤に処方されている、態様１２に記載の方法。態様１４： ビタミンＫアナログを、皮疹を予防するのに有効な量で皮膚に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の予防方法。
態様１５： ビタミンＫアナログが顔若しくは体躯に塗布される、態様１４に記載の方法。
態様１６： 抗ＥＧＦＲ療法が抗ＥＧＦＲ抗体を用いる処置である、態様１４に記載の方法。
態様１７： 抗ＥＧＦＲ抗体がセツキシマブである、態様１６に記載の方法。
態様１８： 抗ＥＧＦＲ療法がＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を用いる処置である、態様１４に記載の方法。
態様１９： ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤がゲフィチニブ若しくはエルロチニブである、態様１８に記載の方法。
態様２０： ビタミンＫアナログがＥＧＦＲを活性化する、態様１４に記載の方法。
態様２１： ビタミンＫアナログがビタミンＫ３である、態様１４に記載の方法。
態様２２： ビタミンＫアナログがビタミンＫ１である、態様１４に記載の方法。
態様２３： ビタミンＫ３が、最低１５μｇ／ｍｌの濃度で皮膚に塗布される、態様２１に記載の方法。
態様２４： ビタミンＫ３が、７５μｇ／ｍｌないし１００μｇ／ｍｌの濃度で皮膚に塗布される、態様２１に記載の方法。
態様２５： ビタミンＫ１が、最低４５０μｇ／ｍｌの濃度で皮膚に塗布される、態様２２に記載の方法。
態様２６： ビタミンＫアナログが局所投与に適する製薬学的製剤に処方されている、態様１４に記載の方法。
態様２７： ビタミンＫアナログが徐放製剤に処方されている、態様２６に記載の方法。態様２８： 抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法に二次的な皮疹を処置若しくは予防するのに有効な量のビタミンＫアナログを含んでなる製薬学的組成物。
態様２９： ビタミンＫアナログがＥＧＦＲを活性化する、態様２８に記載の製薬学的組成物。
態様３０： ビタミンＫアナログがビタミンＫ３である、態様２８に記載の製薬学的組成物。
態様３１： ビタミンＫアナログがビタミンＫ１である、態様２８に記載の製薬学的組成物。
態様３２： ビタミンＫ３の濃度が最低１５μｇ／ｍｌである、態様３０に記載の製薬学的組成物。
態様３３： ビタミンＫ３の濃度が７５μｇ／ｍｌないし１００μｇ／ｍｌである、態様３０に記載の製薬学的組成物。
態様３４： ビタミンＫ１の濃度が最低４５０μｇ／ｍｌである、態様３１に記載の製薬学的組成物。
態様３５： 局所投与のため処方されている、態様２８に記載の製薬学的組成物。
態様３６： ビタミンＫアナログが徐放製剤に処方されている、態様３５に記載の製薬学的組成物。
態様３７： 化合物が、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、Ａｋｔおよびシグナル伝達性転写因子３（ＳＴＡＴ−３）のいずれか１種を活性化するかどうかを決定することを含んでなり、該化合物によるＥＧＦＲ、Ａｋｔ若しくはＳｔａｔ−３の活性化は皮疹を処置しそして／若しくは予防するのに該化合物が有効であることの指標である、抗ＥＧＦＲ療法に二次的な皮疹を処置かつ／若しくは予防するのに有用でありうる化合物の同定方法。
態様３８： ＥＧＦＲ、Ａｋｔ若しくはＳｔａｔ−３の活性化が、リン酸化された形態のＥＧＦＲ、Ａｋｔ若しくはＳｔａｔ−３に特異的である抗体を使用して決定される、態様３７に記載の方法。
態様３９： 化合物がビタミンＫアナログである、態様３７に記載の方法。
態様４０： 化合物が、ＥＧＦＲ、Ａｋｔ若しくはＳｔａｔ−３の脱リン酸化を阻害する、態様３７に記載の方法。
態様４１： 化合物がホスファターゼ阻害剤である、態様３７に記載の方法。
態様４２： 皮膚若しくは粘膜潰瘍を処置するのに有効な量のビタミンＫアナログを皮膚若しくは粘膜潰瘍に塗布することを含んでなり、該ビタミンＫアナログがＥＧＦＲを活性化する、被験者における皮膚若しくは粘膜潰瘍の処置方法。
態様４３： 皮膚若しくは粘膜潰瘍が、潰瘍性大腸炎、化学療法誘発性の口内粘膜炎、若しくは放射線療法誘発性の口内粘膜炎である、態様４２に記載の方法。
態様４４： ビタミンＫアナログがビタミンＫ３である、態様４２に記載の方法。
態様４５： ビタミンＫアナログがビタミンＫ１である、態様４２に記載の方法。
態様４６： ビタミンＫ３が、最低１５μｇ／ｍｌの濃度で皮膚若しくは粘膜潰瘍に塗布される、態様４４に記載の方法。
態様４７： ビタミンＫ３が、７５μｇ／ｍｌないし１００μｇ／ｍｌの濃度で皮膚若しくは粘膜潰瘍に塗布される、態様４４に記載の方法。
態様４８： ビタミンＫ１が、最低４５０μｇ／ｍｌの濃度で皮膚若しくは粘膜潰瘍に塗布される、態様４５に記載の方法。
態様４９： ホスファターゼ阻害剤を、皮疹を処置するのに有効な量で皮疹に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の処置方法。
態様５０： ホスファターゼ阻害剤がＥＧＦＲの脱リン酸化を阻害する、態様４９に記載の方法。
態様５１： 抗ＥＧＦＲ療法が抗ＥＧＦＲ抗体を用いる処置である、態様４９に記載の方法。
態様５３： 抗ＥＧＦＲ抗体がセツキシマブである、態様５１に記載の方法。
態様５４： 抗ＥＧＦＲ療法がＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を用いる処置である態様４９に記載の方法。
態様５４： ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤がゲフィチニブ若しくはエルロチニブである、態様５３に記載の方法。
態様５５： ホスファターゼ阻害剤が、局所投与に適する製薬学的製剤に処方されている、態様４９に記載の方法。
態様５６： ホスファターゼ阻害剤が徐放製剤に処方されている、態様５５に記載の方法。
態様５７： ホスファターゼ阻害剤を、皮疹を予防するのに有効な量で皮膚に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の予防方法。
態様５８： ホスファターゼ阻害剤が顔若しくは体躯に塗布される、態様５７に記載の方法。
態様５９： ホスファターゼ阻害剤がＥＧＦＲの脱リン酸化を阻害する、態様５７に記載の方法。
態様６０： 抗ＥＧＦＲ療法が抗ＥＧＦＲ抗体を用いる処置である、態様５７に記載の方法。
態様６１： 抗ＥＧＦＲ抗体がセツキシマブである、態様６０に記載の方法。
態様６２： 抗ＥＧＦＲ療法が、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を用いる処置である、態様５７に記載の方法。
態様６３： ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤がゲフィチニブ若しくはエルロチニブである、態様６２に記載の方法。
態様６４： ビタミンＫアナログが、局所投与に適する製薬学的製剤に処方されている、態様５７に記載の方法。
態様６５： ホスファターゼ阻害剤が徐放製剤に処方されている、態様６４に記載の方法。
態様６６： 抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法に二次的な皮疹を処置若しくは予防するのに有効な量のホスファターゼ阻害剤を含んでなる製薬学的組成物。
態様６７： ホスファターゼ阻害剤がＥＧＦＲの脱リン酸化を阻害する、態様６６に記載の製薬学的組成物。
態様６８： 局所投与のため処方されている態様６６に記載の製薬学的組成物。
態様６９： ホスファターゼ阻害剤が徐放製剤に処方されている、態様６８に記載の製薬学的組成物。
態様７０： 皮膚若しくは粘膜潰瘍を処置するのに有効な量のホスファターゼ阻害剤を皮膚若しくは粘膜潰瘍に塗布することを含んでなり、ホスファターゼ阻害剤はＥＧＦＲの脱リン酸化を阻害する、被験者における皮膚若しくは粘膜潰瘍の処置方法。
態様７１： 皮膚若しくは粘膜潰瘍が、潰瘍性大腸炎、化学療法誘発性の口内粘膜炎、若しくは放射線療法誘発性の口内粘膜炎である、態様７０に記載の方法。
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明に従えば、ビタミンＫ１またはビタミンＫ３を皮膚疾患、特に、皮疹、の治療または予防に効果的に使用できることが確認された。したがって、本発明は、ビタミンＫ１またはビタミンＫ３を有効成分とする製薬学的製剤の製造業で利用できる。
【技術分野】
【０００１】
本出願は、ビタミンＫの製薬学的製剤での使用、特に、皮膚疾患の治療もしくは予防での使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
本出願を通じて、多様な刊行物がカッコ内で引用される。これらの参考文献の完全な引用は、請求の範囲の直前の本明細の最後に見出しうる。これらの刊行物の開示は、ここに、主題の出願が関する技術分野をより完全に記述するために、引用することにより本願にそっくりそのまま組み込まれる。
【０００３】
上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）は、全部の上皮細胞表面で発現される膜貫通タンパク質タンパク質である。それは上皮の修復および再生で重要な生理学的役割を演じる。上皮増殖因子（ＥＧＦ）は、ＥＧＦＲの細胞外ドメインの特定の一領域に結合する上皮表面と会合した唾液腺および他の腺により分泌されるペプチドである。結合に際して、それは細胞の内側に伝達されるシグナルを生成する。ＥＧＦ結合の結果としての第一の細胞内事象は、アデノシン５’−三リン酸（ＡＴＰ）にいわゆるチロシンキナーゼ（ＴＫ）ドメイン（チロシン残基を含有するポケット）に進入させかつ該チロシン残基にリン酸基を供与させるＥＧＦＲの細胞内ドメインのコンホメーション変化である。リン酸化されたチロシンを運搬する細胞内ＥＧＦＲは、他の細胞内タンパク質と会合することが可能になり、そして、非常に複雑なネットワークにより下流に伝播する一連の生化学反応を開始する。このネットワークの最良に知られた部門（ａｒｍ）は、活性化に際して腫瘍細胞分裂をもたらすマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）経路、および、活性化に際して高められた細胞生存をもたらすＡＫＴ経路である。ＥＧＦＲ活性化の結果は、従って、増大された細胞増殖および多様な傷害に対する高められた細胞耐性である。
【０００４】
多くの腫瘍は、それらが発する近隣の正常組織若しくは上皮細胞表面に比較してＥＧＦＲを過剰発現するか、または、本質的に活性化されたか若しくは活性化に対する高められた感受性を伴う変異バージョンのＥＧＦＲを有する。こうした過剰発現は、腫瘍細胞が悪性の表現型の重要な一特徴である増殖の利点を獲得する多くの機構の１つであると考えられている。結果、ＥＧＦＲシグナル伝達経路の阻害は、多くのヒト悪性病変の処置のための合理的一戦略であると考えられる。基本的に、ＥＧＦＲシグナル伝達経路の上流を阻害する２つの方法、すなわち、１）特異的モノクローナル抗体の使用により、ＥＧＦおよび他の天然のペプチドリガンドが細胞外ＥＧＦＲドメインに結合することを予防する、ならびに２）ポケットに構造上非常に良好に嵌る小分子の使用により、ＡＴＰおよび他のリン酸供与体が細胞内ＥＧＦＲドメインのＴＫポケットに進入することを予防する（いわゆるＥＧＦＲ ＴＫ阻害剤）、が存在する。
【０００５】
長年の発見の努力および臨床評価後に、ＥＧＦＲ阻害剤は、限定されるものでないが結腸直腸癌、非小細胞肺癌、頭頚部の癌および悪性神経膠腫を挙げることができる多様な充実性腫瘍に対する活性の抗腫瘍剤であることが最近示された（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４）。症状の解消若しくは生存の延長と定義される臨床上の利敵は、これまで、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（Ｒ））、ならびにＥＧＦＲチロシンキナーゼ（ＴＫ）阻害剤ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（Ｒ））およびエルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（Ｒ））で示されている。この分類に属する多くの付加的な剤が開発されている。今日のところ、ＦＤＡに承認された適応症は、化学療法難治性の結腸直腸癌および非小細胞肺癌、頭頚部の癌、ならびに膵癌を包含する。多様な他の悪性疾患を伴う難治性若しくは化学療法を受けていない患者に対しこれらの剤を単独で若しくは
組合せで使用する多くの臨床試験が進行中である。近い将来、米国で毎年約２０万人の患者がこれらの剤を受けているものと予想される。
【０００６】
これらの剤は生命を脅かす毒性を引き起こさないとは言え、主要な副作用は皮疹であり、６０〜７０％の患者で発生し、主として顔および体躯を冒し、そして多くの症例で不快かつ好ましくない美容上の変化を引き起こす。皮疹により引き起こされる主症状は掻痒感、乾燥および二次感染である。発疹の発生率および強度は明瞭に用量に関係しており、そして発生時間の中央値は療法の開始１０日後である。患者の約１０％が皮膚毒性のため療法を中断する。
【０００７】
大部分の臨床試験は、抗ＥＧＦＲ療法の結果皮疹を発症する大部分の患者がより長く生存する傾向があることを示している。皮疹の発生は、皮膚中での効果的なＥＧＦＲ阻害、および適切な免疫応答でこうした阻害により引き起こされる組織傷害に応答することが可能である適格性の免疫系の双方を必要とすると考えられる。皮疹は抗腫瘍有効性および臨床上の利益の代理指標であるという増大しつつある証拠が存在する（非特許文献５）ため、皮疹を引き起こすように抗ＥＧＦＲ剤の投与を増大させることは一般的実務になりうる。それが真実である場合、皮進の処置もまたますます重要になるであろう。結果として、皮疹の処置はまたますます重要になりつつある。この形態の皮疹の処置に利用可能な合理的な科学的に証明されかつ臨床上有効な方法は存在しない。局所若しくは全身の抗生物質、抗炎症薬、レチノイド、局所潤滑剤および他の型の療法薬が、乏しい若しくは一貫しない結果を伴い、経験的様式で試みられている。今日のところ、非常に近い将来、米国で毎年約１５万人が冒されると期待される状態であるこの新たな皮膚疾患に対する確立された療法若しくは予防は存在しない。
【０００８】
ビタミンＫは皮膚の血管障害の処置、美容的皮膚処置およびレーザー処置後の皮膚処置に使用されている（特許文献１；特許文献２；特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６；非特許文献６；非特許文献７）。しかしながら、ビタミンＫ３の局所投与は皮膚炎（非特許文献８）および皮膚の小水疱形成（非特許文献９）を引き起こし得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許第５，５１０，３９１号
【特許文献２】米国特許出願公開第ＵＳ ２００３／０１７０１８７号
【特許文献３】ＰＣＴ国際公開第ＷＯ ９７／３９７４６号
【特許文献４】ＰＣＴ国際公開第ＷＯ ０２／１３７８０号
【特許文献５】ＰＣＴ国際公開第ＷＯ ０３／１０１４１５号
【特許文献６】ＰＣＴ国際公開第ＷＯ ２００４／０１９９２３号
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｃｏｎｅｎら、２００３
【非特許文献２】Ｌａｇｅら、２００３
【非特許文献３】Ｌｏｒｕｓｓｏ、２００３
【非特許文献４】Ｖａｎｈｏｅｆｅｒら、２００４
【非特許文献５】Ｃｏｈｅｎら、２００３
【非特許文献６】Ｌｏｕら、１９９９
【非特許文献７】Ｓｈａｈら、２００２
【非特許文献８】Ｐａｇｅら、１９４２
【非特許文献９】Ｕｌｂｒｉｃｈ、１９６１
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、ビタミンＫアナログを、皮疹を処置するのに有効な量で皮疹に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の処置方法を提供する。本発明はまた、ビタミンＫアナログを、皮疹を予防するのに有効な量で皮膚に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の予防方法も提供する。
【００１２】
本発明は、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法に二次的な皮疹を処置若しくは予防するのに有効な量のビタミンＫアナログを含んでなる製薬学的組成物を提供する。
【００１３】
本発明はまた、化合物が上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、Ａｋｔおよびシグナル伝達性転写因子３（ＳＴＡＴ−３）のいずれか１種を活性化するかどうかを決定することを含んでなり、該化合物によるＥＧＦＲ、Ａｋｔ若しくはＳｔａｔ−３の活性化は皮疹を処置かつ／若しくは予防するのに該化合物が有効であることを示す、抗ＥＧＦＲ療法に二次的な皮疹を処置かつ／若しくは予防するのに有用でありうる化合物の同定方法も提供する。
【００１４】
本発明はまた、ホスファターゼ阻害剤を、皮疹を処置するのに有効な量で皮疹に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の処置方法にも向けられる。本発明は、さらに、ホスファターゼ阻害剤を、皮疹を予防するのに有効な量で皮膚に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の予防方法を提供する。
【００１５】
本発明はまた、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法に二次的な皮疹を処置若しくは予防するのに有効な量のホスファターゼ阻害剤を含んでなる製薬学的組成物も提供する。
【００１６】
本発明はまた、皮膚若しくは粘膜潰瘍を処置するのに有効な量のビタミンＫアナログを皮膚若しくは粘膜潰瘍に塗布することを含んでなり、ビタミンＫアナログはＥＧＦＲを活性化する、被験者における皮膚若しくは粘膜潰瘍の処置方法も提供する。本発明は、さらに、皮膚若しくは粘膜潰瘍を処置するのに有効な量のホスファターゼ阻害剤を皮膚若しくは粘膜潰瘍に塗布することを含んでなり、ホスファターゼ阻害剤はＥＧＦＲの脱リン酸化を阻害する、被験者における皮膚若しくは粘膜潰瘍の処置方法を提供する。
【００１７】
［発明の詳細な記述］
本発明は、ビタミンＫアナログを、皮疹を処置するのに有効な量で皮疹に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の処置方法に向けられる。
【００１８】
本明細書で使用されるところの抗ＥＧＦＲ療法に二次的な皮疹を「処置する」という用語は、被験者の皮膚の皮疹を低減若しくは排除しかつ／または皮疹の増大若しくは拡大を低下若しくは除外することを意味している。
【００１９】
抗ＥＧＦＲ療法を受けている被験者は、セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）のような抗ＥＧＦＲ抗体および／またはゲフィチニブ（ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）若しくはエルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）のようなＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を用いる処置を受けている患者を包含する。
【００２０】
本明細書で使用されるところの「ビタミンＫアナログ」は、ビタミンＫ１（２−メチル−３−フィチル−１，４−ナフトキノン）、ビタミンＫ２（２−メチル−３−ヘキサプレニル−１，４−ナフトキノン；メナキノン）、ビタミンＫ３（２−メチル−１，４−ナフ
トキノン；メナジオン）、ビタミンＫ４（１，４−ジアセトキシ−２−メチルナフタレン）、ビタミンＫ５（４−アミノ−２−メチル−１−ナフタレノール）、ビタミンＫ６、ビタミンＫ７（３−メチル−４−アミノ−１−ナフトール塩酸塩）、メナジオン二リン酸塩、メナジオン亜硫酸水素ナトリウム、および構造：
【００２１】
【化１】
【００２２】
式中、Ｒ＝Ｈ、または飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水素；ならびにＲ１およびＲ２＝Ｈ若しくはＣＨ３
を有する化合物よりなる群から選択される化合物である。
【００２３】
ビタミンＫ３およびビタミンＫ１が好ましいビタミンＫアナログである。ビタミンＫ３が最も好ましい。ビタミンＫ３は構造：
【００２４】
【化２】
【００２５】
を有する。
【００２６】
ビタミンＫ１は、構造：
【００２７】
【化３】
【００２８】
を有する。
【００２９】
好ましい形態のビタミンＫ１は、ｔｒａｎｓ異性体のビタミンＫ１若しくはｔｒａｎｓおよびｃｉｓ異性体の混合状態である。ｃｉｓ異性体は生物学的活性をほとんど若しくは全く有しないためである（Ｍａｔｓｃｈｉｎｅｒら、１９７２）。
【００３０】
ビタミンＫ１およびＫ２は天然に存在する。ビタミンＫ３、Ｋ４、Ｋ５、Ｋ６およびＫ７は合成アナログである。ビタミンＫアナログの製造方法は記述されている（例えば米国特許第４，３７４，７７５号、同第４，９０６，４１１号、同第５，４１２，１２４号、同第５，６３７，７４１号、同第５，７７０，７７４号および同第６，５７９，９９４号明細書、ならびにＳａｈ（１９４９−５０））。ビタミンＫ１、Ｋ２およびＫ３は例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから入手可能である。
【００３１】
ビタミンＫアナログはＥＧＦＲ、Ａｋｔおよび／若しくはＳｔａｔ−３を活性化し得る。ビタミンＫアナログをスクリーニングして、本出願に記述される手順を使用してＥＧＦＲ、Ａｋｔおよび／若しくはＳｔａｔ−３を活性化するものを同定し得る。本明細書で使用されるところのＥＧＦＲ、Ａｋｔおよび／若しくはＳｔａｔ−３を「活性化する」ことは、リン酸化された形態のＥＧＦＲ、Ａｋｔおよび／若しくはＳｔａｔ−３を増大させることを意味している。
【００３２】
皮疹を処置するために本明細書で使用されるところのビタミンＫアナログは皮膚に局所適用される。ビタミンＫ化合物はエチルアルコールおよび有機溶媒に容易に可溶性であり、そして所望の濃度で局所使用のための製剤に製造し得る。ビタミンＫアナログは、例えばクリーム剤、ゲル剤、乳剤、ローション剤、液剤および／若しくはリポソームを使用して皮膚に塗布しうる。該製剤はビタミンＫアナログの持続放出を提供する製剤であり得る。局所皮膚製剤は、例えば、限定されるものでないが以下すなわちエチルアルコール、イソプロピルアルコール、ベンジルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、レシチン顆粒、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル、プロピルパラベン、メチルパラベン、界面活性剤（例えばＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−１２７ ＮＦ）、Ｄｏｗｉｃｉｌ ２００、鉱物油、天然油、シリコーン油、パラフィン、グリセリン、ステアリン酸ジエステル、ステアリン酸グリセロール、シクロデキストリンのような安定剤、および紫外（ＵＶ）遮蔽物のいずれかを挙げることができる成分を包含し得る。
【００３３】
ビタミンＫアナログは、被験者間で変動することがありかつ処置で使用される特定のビタミンＫアナログに依存する最大耐用量まで皮膚に塗布し得る。最大耐用量は当業者により容易に決定され得る。好ましくは、ビタミンＫアナログは、最低１００μＭすなわち最低１５μｇ／ｍｌの濃度で皮膚に塗布される。好ましくは、ビタミンＫ３は、５０μｇ／ｍｌないし２００μｇ／ｍｌ、より好ましくは７５μｇ／ｍｌないし１００μｇ／ｍｌの濃度で塗布される。好ましくは、ビタミンＫ１は最低４５０μｇ／ｍｌの濃度で皮膚に塗布される。
【００３４】
ビタミンＫアナログを用いる処置は、例えば、抗ＥＧＦＲ剤を用いる療法の開始日に、または皮疹が出現したらすぐ若しくは別の方法で医師により処方される際に開始し得る。ビタミンＫアナログは抗ＥＧＦＲ剤を用いる療法の経過中定期的に投与する。投与頻度は処方により変動することができる（例えば１日２回、１日１回若しくは１日おき、または別の方法で医師により処方されるとおり）。徐放製剤は、ビタミンＫアナログの徐放（ｓｕｓｔａｉｎｅｄ）すなわち徐放（ｓｌｏｗ ｒｅｌｅａｓｅ）を提供しない製剤より少なく頻繁な投与を必要とすることができる。
【００３５】
本発明はさらに、皮疹の処置について本明細書に記述されるとおり、ビタミンＫアナログを、皮疹を予防するのに有効な量で皮膚に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の予防方法
を提供する。抗ＥＧＦＲ療法に二次的な皮疹は一般に顔および体躯で発生する。好ましくは、ビタミンＫアナログは、顔および体躯のような、皮疹が一般に抗ＥＧＦＲ療法に二次的に出現する身体領域、若しくは該被験者が以前の抗ＥＧＦＲ療法の間に皮疹を経験した身体領域に塗布される。皮疹を予防するために、ビタミンＫアナログは、例えば抗ＥＧＦＲ剤を用いる療法の開始日に、若しくは別の方法で医師により処方される際に開始して皮膚に塗布し得る。
【００３６】
本発明はまた、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法に二次的な皮疹を処置かつ／若しくは予防するのに有効な量の本明細書に記述されるビタミンＫアナログのいずれかを含んでなる製薬学的組成物も提供する。該組成物はまた製薬学的に許容できる担体も包含し得る。本明細書で使用されるところの「担体」という用語は、エチルアルコールおよび有機溶媒のような標準的製薬学的担体を包含する。好ましい一態様において、製薬学的組成物は局所投与のため処方される。ビタミンＫアナログは徐放製剤に処方し得る。
【００３７】
本発明はまた、化合物が、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、Ａｋｔおよびシグナル伝達性転写因子３（ＳＴＡＴ−３）のいずれか１種若しくはそれ以上を活性化するかどうかを決定することを含んでなり、該化合物によるＥＧＦＲ、Ａｋｔ若しくはＳｔａｔ−３の活性化は皮疹を処置かつ／若しくは予防するのに該化合物が有効であることを示す、抗ＥＧＦＲ療法に二次的な皮疹を処置かつ／若しくは予防するのに有用でありうる化合物の同定方法も提供する。ＥＧＦＲ、Ａｋｔ若しくはＳｔａｔ−３の活性化は、例えばリン酸化（活性化）された形態のＥＧＦＲ、Ａｋｔ若しくはＳｔａｔ−３に特異的である抗体を使用することにより決定し得る。該化合物は例えばビタミンＫアナログであり得る。該化合物はＥＧＦＲ、Ａｋｔ若しくはＳｔａｔ−３の脱リン酸化を阻害し得る。該化合物はホスファターゼ阻害剤であり得る。
【００３８】
本発明はまた、ホスファターゼ阻害剤を、皮疹を処置するのに有効な量で皮疹に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の処置方法にも向けられる。本発明はさらに、ホスファターゼ阻害剤を、皮疹を予防するのに有効な量で皮膚に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の予防方法を提供する。好ましくは、ホスファターゼ阻害剤はＥＧＦＲの脱リン酸化を阻害する。多様なホスファターゼ阻害剤が記述されている（例えば、Ｂａｅら ２００４、Ｇｅｒｌｉｎｇら ２００４、ＬｅｅとＢｕｒｋｅ ２００３、Ｌｉｅｍら ２００４、米国特許第５，１５５，０３１号および同第６，４２８，９４９ Ｂ１号明細書、米国特許出願公開第ＵＳ ２００４／０１３８２１８ Ａ１号明細書）。ホスファターゼ阻害剤は、例えばクリーム剤、ゲル剤、乳剤、ローション剤、液剤および／若しくはリポソームを使用して皮膚に塗布しうる。該製剤はホスファターゼ阻害剤の持続放出を提供する製剤であり得る。ホスファターゼ阻害剤は、被験者間で変動することがありかつ処置で使用される特定のホスファターゼ阻害剤に依存する最大耐用量まで皮膚に塗布し得る。最大耐用量は当業者により容易に決定され得る。
【００３９】
本発明はまた、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法に二次的な皮疹を処置若しくは予防するのに有効な量のホスファターゼ阻害剤を含んでなる製薬学的組成物も提供する。好ましくは、ホスファターゼ阻害剤はＥＧＦＲの脱リン酸化を阻害する。好ましくは、製薬学的組成物は局所投与のため処方される。ホスファターゼ阻害剤は徐放製剤に処方し得る。
【００４０】
本発明はまた、皮膚若しくは粘膜潰瘍を処置するのに有効な量のビタミンＫアナログを皮膚若しくは粘膜潰瘍に塗布することを含んでなり、ビタミンＫアナログはＥＧＦＲを活性化する、被験者における皮膚若しくは粘膜潰瘍の処置方法も提供する。本発明はさらに
、皮膚若しくは粘膜潰瘍を処置するのに有効な量のホスファターゼ阻害剤を皮膚若しくは粘膜潰瘍に塗布することを含んでなり、ホスファターゼ阻害剤はＥＧＦＲの脱リン酸化を阻害する、被験者における皮膚若しくは粘膜潰瘍の処置方法を提供する。皮膚および粘膜潰瘍の状態は、例えば、化学療法および／若しくは放射線療法により誘発され得る潰瘍性大腸炎および口内粘膜炎を包含する。潰瘍性大腸炎に対しては、ビタミンＫアナログ若しくはホスファターゼ阻害剤は例えば浣腸投与により投与し得る。ステロイドおよび他の抗炎症薬を含む浣腸による局所療法は、現在、潰瘍性大腸炎の療法の標準である。口内粘膜炎に対しては、例えばビタミンＫアナログ若しくはホスファターゼ阻害剤を含有する接着性ゲル剤若しくは口腔洗浄剤を使用し得る。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１Ａ−１Ｃ】ヒトＡ４３１外陰癌細胞でのＥＧＦＲ（Ａ）、ＡＫＴ（Ｂ）およびＳｔａｔ−３（Ｃ）のリン酸化に対するビタミンＫ１、Ｋ２およびＫ３（ＶＫ１、ＶＫ２、ＶＫ３）の影響。Ａ４３１細胞（１×１０６細胞／ウェル）を６ウェルプレートにプレーティングし、そして１０％血清を含むＲＰＭＩ−１６４０培地中で一夜インキュベートした。細胞を指定された濃度のＶＫ１、ＶＫ２およびＶＫ３に２時間曝露した。曝露後、細胞を冷リン酸緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）溶液で２回洗浄し、そして５０μｌの溶解緩衝液で溶解した。等量のライセート（３０μｇタンパク質）を７．５％若しくは１２％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけた。ＥＧＦＲ、ｐｈｏｓ−ＥＧＦＲ、ＡＫＴ、ｐｈｏｓ−ＡＫＴ、Ｓｔａｔ−３およびｐｈｏｓ−Ｓｔａｔ−３を、対応する抗体を使用するイムノブロッティング分析により検出した。ビタミンＫ３はＥＧＦＲ、ＡｋｔおよびＳｔａｔ−３を刺激した。ビタミンＫ１もまたＥＧＦＲを刺激した一方、ビタミンＫ２はほとんど若しくは全く影響を有しなかった。
【図２】ビタミンＫ３（メナジオン）は、Ａ４３１細胞で、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤エルロチニブにより引き起こされるＥＧＦＲリン酸化の阻害を予防する。Ａ４３１細胞（１×１０６細胞／ウェル）を６ウェルプレートにプレーティングし、そしてウシ胎児血清を含まないＲＰＭＩ−１６４０培地中で２４時間インキュベートした。飢餓（ｓｔａｒｖｉｎｇ）後に、細胞を単独若しくは２μＭエルロチニブを伴う多様な濃度のビタミンＫ３（０．０１〜０．５ｍＭ）に２時間曝露したか、または１００ｎｇ／ｍｌのＥＧＦで５分間刺激した。曝露後に細胞を冷ＰＢＳ溶液で２回洗浄し、そして５０μｌの溶解緩衝液で溶解した。等量のライセート（３０μｇタンパク質）を７．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけた。ＥＧＦＲおよびリン酸化されたＥＧＦＲを、対応する抗体を使用するイムノブロッティング分析により検出した。
【図３】Ａ４３１細胞でのエルロチニブ誘発性細胞増殖阻害に対するＶＫ３（メナジオン）の影響。細胞を９６ウェルプレート中で一夜プレーティングした。細胞を単独または５０μＭ若しくは１００μＭのＶＫ３（メナジオン）と組合せの多様な濃度のエルロチニブに７２時間曝露した。曝露後、細胞をトリプシン処理により収集し、そして血球計算板を使用して細胞を計数することにより細胞の生存率を評価した。各点は２回の独立した実験の平均を表す。
【図４Ａ−４Ｂ】ＥＧＦＲのＶＫ３誘発性のリン酸化はＡ４３１細胞で可逆的である。細胞を０．１ｍＭ ＶＫ３に１時間曝露した。曝露後、細胞を冷培地で３回洗浄し、そしてその後、１０％ウシ胎児血清を含むＶＫ３を含まない新鮮培地中で指定された時間再インキュベートした。細胞を収集しそして溶解緩衝液で溶解した。等量の細胞ライセートを７．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけた（Ａ）。全ＥＧＦＲおよびリン酸化されたＥＧＦＲ（ｐ−ＥＧＦＲ）を、対応する抗体を使用するイムノブロット分析により検出した。対照（Ｃｏｎ）は細胞をＶＫ３に曝露しなかったことを意味している。相対ｐ−ＥＧＦＲは、１としての対照中のものと比較した、レーザーデンシトメトリーにより測定した各時間点のｐ−ＥＧＦＲバンドの強度として表した（Ｂ）。
【図５】ビタミンＫ３はホスファターゼ活性を阻害する。Ａ４３１細胞を０．１ｍＭ ＶＫ３に１時間曝露した。曝露後に細胞を冷培地で３回洗浄し、そしてその後、１０％ウシ胎児血清を含むＶＫ３を含まない培地中で指定された時間再インキュベートした。細胞を収集し、そして、基質としてｐＮＰＰ（４−ニトロフェニルリン酸二ナトリウム）を使用するホスファターゼ活性のアッセイのため細胞抽出液を調製した。対照（Ｃｏｎ）はＶＫ３への曝露を伴わない細胞でのホスファターゼ活性を意味している。相対ホスファターゼ活性は１としての対照中でのものに比較して表した。ＶＫ３誘発性のホスファターゼ阻害はＶＫ３の除去後に可逆的である。
【図６】マウス皮膚でのＥＧＦＲリン酸化のエルロチニブ誘発性阻害に対するビタミンＫ３（メナジオン）の影響。ビタミンＫ３は、マウス皮膚組織でのＥＧＦＲリン酸化のエルロチニブ誘発性阻害をレスキューする。マウスに５０ｍｇ／ｋｇのエルロチニブを連日Ｐ．Ｏ．投与し；マウス皮膚にＶＫ３の１５ｍＭエタノール溶液を塗りつけた。処置後にマウスを殺しかつ皮膚組織を採取した。１００ｍｇの皮膚組織を組織抽出液の調製に使用した。等量の皮膚組織抽出液（８０μｇタンパク質）を７．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけた。全ＥＧＦＲおよびｐ−ＥＧＦＲをイムノブロット分析により検出した。
【図７】マウス皮膚組織でのＥＧＦＲリン酸化に対するＶＫ３、クリームＢおよびクリームＶＫの影響。マウスに、３０ｍＭ若しくは１００ｍＭのＶＫ３（エタノール中）または同一用量のクリームＢ若しくはクリームＶＫを塗りつけた。処置後にマウスを殺しかつ組織抽出液の調製のため皮膚組織を採取した。等量の組織抽出液（８０μｇタンパク質）を７．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけた。全ＥＧＦＲおよびｐ−ＥＧＦＲを、ポリクローナル抗ＥＧＦＲおよびｐ−ＥＧＦＲ抗体を使用するイムノブロット分析により検出した。クリームＢは、そのラベルによればビタミンＫ３を含有する一般用医薬品（Ｂａｂｙ Ｃａｋｅｓ）であり；該濃度は明記されていない。クリームＶＫは処方箋なしで入手可能な５％ビタミンＫクリームである。３０ｍＭ若しくは１００ｍＭ ＶＫ３と対照的に、商業的クリームは効果を示さない。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
本発明は後に続く実験の詳細からより良好に理解されるであろう。しかしながら、当業者は、論考される特定の方法および結果が、その後に続く請求の範囲でより完全に記述されるところの本発明を単に具体的に説明することを容易に認識するであろう。
【実施例】
【００４３】
実験の詳細
材料および方法
変異していないＥＧＦＲを過剰発現する２種のヒト細胞株、すなわちＡ４３１外陰癌およびＨＮ５頭頚部癌を使用した。細胞を、３種のＥＧＦＲ阻害剤、すなわち抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（Ｒ））、ならびにＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（Ｒ））およびゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（Ｒ））の１種の存在下で多様な濃度の多様なビタミンＫアナログに曝露した。細胞傷害性を細胞計数により評価した。細胞を溶解し、そして、ＥＧＦＲ、キナーゼＡｋｔ、およびシグナル伝達性転写因子３（ＳＴＡＴ−３）の活性化に対する多様なビタミンＫアナログの影響を、リン酸化（活性化）された形態のＥＧＦＲ、ＡｋｔおよびＳｔａｔ−３に対する抗体を使用するウエスタンブロット分析により評価した。抗ＥＧＦＲ、抗ｐｈｏｓ−ＥＧＦＲ（Ｔｙｒ１０６８）、抗ＡＫＴ、抗ｐｈｏｓ−ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）、抗Ｓｔａｔ−３および抗ｐｈｏｓ−Ｓｔａｔ−３（Ｔｙｒ−７０５）のポリクローナル抗体はＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ（マサチューセッツ州ビバリー）から購入した。ビタミンＫ１、Ｋ２およびＫ３はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（ミズーリ州セントルイス）から購入した。ＥＧＦＲ、ＡｋｔおよびＳｔａｔ−３の活性化を細胞の抗ＥＧＦＲ処理の存在および非存在下で評価した。ビタミンＫアナログによるＥＧＦＲの活性化は、ビタミンＫアナログでの処理後にホモジナイズしかつ溶解したマウス皮膚を使用してもまた評価した。ホスファターゼ活性はｐＮＰＰ（４−ニトロフェニルリン酸二ナトリウム）を基質として使用して測定した。
【００４４】
結果
溶解したＡ４３１細胞から得たＥＧＦＲ、ＡｋｔおよびＳｔａｔ−３の活性化（リン酸化）に対するビタミンＫ１、Ｋ２およびＫ３の影響を図１Ａ−１Ｃに示す。ビタミンＫ３はＥＧＦＲならびに下流の細胞内シグナル伝達成分ＡｋｔおよびＳｔａｔ−３を活性化した。影響は１００μＭすなわち約１７μｇ／ｍｌのビタミンＫ３濃度で明瞭に見られた。ビタミンＫ１は、使用した最高濃度（１０００μＭすなわち約４５０μｇ／ｍｌ）でＥＧＦＲおよびＡｋｔを活性化することについてのみ有効であった。ビタミンＫ２は、使用した濃度（１０００μＭまで）でほとんど若しくは全く影響を有しなかった。従って、ビタミンＫ３は、ビタミンＫ１若しくはビタミンＫ２よりＥＧＦＲ、ＡｒｔおよびＳｔａｔ−３のはるかにより強力な刺激物質である。正常マウス皮膚へのビタミンＫ３の塗布もまたＥＧＦＲを活性化した。
【００４５】
ＥＧＦＲ、Ｓｔａｔ−３およびＡｋｔのビタミンＫ３活性化を抗ＥＧＦＲ処理の存在下で試験した。無血清培地中で保存したＡ４３１細胞若しくはＨＮ５細胞を、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤エルロチニブ（２μＭ）およびビタミンＫ３（０．０１〜０．５ｍＭ）で処理した。ビタミンＫ３は、エルロチニブの存在下で、ＥＧＦＲ（図２）ならびにＳｔａｔ−３（０．１および０．５ｍＭのビタミンＫ３の濃度で）、ならびにＡｋｔ（０．５ｍＭのビタミンＫ３の濃度で）を活性化した。同様に、ビタミンＫ３（０．１および０．５ｍＭ）は、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体セツキシマブの存在下でもまたＥＧＦＲ、Ｓｔａｔ−３およびＡｋｔを活性化した。ビタミンＫ３はまた、図６に示されるとおり、マウス皮膚組織でのＥＧＦＲリン酸化のエルロチニブ誘発性の阻害もレスキューした。
【００４６】
細胞を過剰のＥＧＦで処理して、ＥＧＦが多様な抗ＥＧＦＲ処理によるＥＧＦＲ阻害を予防し得るかどうかを決定した。ＥＧＦは、ＥＧＦＲの細胞外部分に作用する抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体セツキシマブによるＥＧＦＲ阻害の予防において有効であった。対照的に、ＥＧＦ（２μｇ／ｍｌ）での細胞の処理は、ＥＧＦＲの細胞内部分に作用するＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤エルロチニブによるＥＧＦＲ阻害を予防しない（図２）。
【００４７】
ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤エルロチニブへのヒトＡ４３１外陰癌細胞の曝露は細胞死をもたらす。ビタミンＫ３（５０〜１００μＭ）との細胞の共インキュベーションはＥＧＦＲ阻害剤の細胞傷害性を４〜６倍減少させた。図３は、エルロチニブで処理した細胞のレスキューにおける２種の異なる濃度のビタミンＫ３で得られた結果を具体的に説明する。ビタミンＫ３の影響は可逆的である。図４Ａ−４Ｂは、ＥＧＦＲのビタミンＫ３誘発性のリン酸化がＡ４３１細胞で可逆的であることを示す。
【００４８】
ビタミンＫ３は、図５に示されるとおり、少なくとも部分的に、ホスファターゼ活性を阻害することにより作用する。該影響はビタミンＫ３の除去２〜３時間後に可逆的である。
【００４９】
ビタミンＫ３の影響を、ＥＧＦＲ ＴＫ阻害剤エルロチニブ１００ｍｇ／ｋｇ×１０日（第１〜１０日）を受領する動物の皮膚で検査した。エルロチニブを受けていないマウスの対照皮膚と比較して、エルロチニブを受領する動物のビタミンＫ３で処置した皮膚は有意のｐ−ＥＧＦＲ発現を示した一方、同一動物のビタミンＫ３で処置していない皮膚はｐ−ＥＧＦＲの下方制御を示した。（図６）。マウスの皮膚にエタノール中のビタミンＫ３を塗りつけた（第５ないし１０日に１５ｍＭ １日２回×５日）。ビタミンＫ３の影響を２種の一般用皮膚クリーム剤のものと比較した。クリームＢ（Ｂａｂｙ Ｃａｋｅｓ）はそのラベルによればビタミンＫ３を含有する一般用医薬品であり；該濃度は明記されていない。クリームＶＫは処方箋なしで入手可能な５％ビタミンＫクリーム剤である。マウス皮膚組織でのＥＧＦＲリン酸化に対するＶＫ３、クリームＢおよびクリームＶＫの影響を
図７に示す。マウスに、ビタミンＫ３（エタノール中）３０ｍＭ若しくは１００ｍＭ×１２時間ごとに３用量、または同一用量のクリームＢ若しくはクリームＶＫを塗りつけた。ＥＧＦＲを活性化する３０ｍＭ若しくは１００ｍＭのＶＫ３と対照的に、商業的クリーム剤は影響を示さない。
【００５０】
考察
本出願は、ビタミンＫ３が、ＥＧＦＲを過剰発現する上皮細胞起源の腫瘍細胞株で抗ＥＧＦＲ療法のＥＧＦＲ阻害効果を予防し得ることを開示する。これらの細胞でのＥＧＦＲ系（ａｘｉｓ）は皮膚ケラチノサイトのＥＧＦＲ系を代表する。ビタミンＫ３は、ＥＧＦＲの細胞内シグナル伝達経路に対する刺激効果を有し、これは抗ＥＧＦＲ療法の存在下でさえ有効であった。ビタミンＫ３はまた正常哺乳動物（マウス）皮膚からのＥＧＦＲも活性化した。ＥＧＦＲに対するより弱い刺激効果がビタミンＫ１で観察されたが、しかしビタミンＫ２でされなかった。本結果は、抗ＥＧＦＲ療法との闘いにおける、ビタミンＫ１若しくはＫ２、または２種の一般用ビタミンＫ皮膚クリーム剤と比較してのビタミンＫ３の予期されない有効性を示す。本出願に開示されるところの皮疹の処置および予防のためのビタミンＫ３の使用は、ビタミンＫ３の局所投与が皮膚炎（Ｐａｇｅら、１９４２）および皮膚の小水疱形成（Ｕｌｂｒｉｃｈ、１９６１）を引き起こすという以前の報告を鑑みれば直観に反する。ビタミンＫ３が、細胞のホスファターゼ活性を阻害して、従って皮疹および関連する皮膚若しくは粘膜障害の処置および予防のためのホスファターゼ阻害剤の使用を提供することもまた示された。
【００５１】
【表１】
【００５２】
【表２】
【００５３】
【表３】
【００５４】
＜発明の態様＞
限定されるものでないが、本発明の特徴または主たる態様を以下に示す。
態様１： ビタミンＫアナログを、皮疹を処置するのに有効な量で皮疹に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に対する二次的な皮疹の処置方法。
態様２： 抗ＥＧＦＲ療法が抗ＥＧＦＲ抗体を用いる処置である、態様１に記載の方法。態様３： 抗ＥＧＦＲ抗体がセツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）である、態様２に記載の抗体。
態様４： 抗ＥＧＦＲ療法がＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を用いる処置である、態様１に記載の方法。
態様５： ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤がゲフィチニブ（ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）若しくはエルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）である、態様４に記載の方法。
態様６： ビタミンＫアナログがＥＧＦＲを活性化する、態様１に記載の方法。
態様７： ビタミンＫアナログがビタミンＫ３である、態様１に記載の方法。
態様８： ビタミンＫアナログがビタミンＫ１である、態様１に記載の方法。
態様９： ビタミンＫ３が、最低１５μｇ／ｍｌの濃度で皮膚に塗布される、態様７に記載の方法。
態様１０： ビタミンＫ３が、７５μｇ／ｍｌないし１００μｇ／ｍｌの濃度で皮膚に塗布される、態様７に記載の方法。
態様１１： ビタミンＫ１が、最低４５０μｇ／ｍｌの濃度で皮膚に塗布される、態様８に記載の方法。
態様１２： ビタミンＫアナログが局所投与に適する製薬学的製剤に処方されている、態様１に記載の方法。
態様１３： ビタミンＫアナログが徐放製剤に処方されている、態様１２に記載の方法。態様１４： ビタミンＫアナログを、皮疹を予防するのに有効な量で皮膚に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の予防方法。
態様１５： ビタミンＫアナログが顔若しくは体躯に塗布される、態様１４に記載の方法。
態様１６： 抗ＥＧＦＲ療法が抗ＥＧＦＲ抗体を用いる処置である、態様１４に記載の方法。
態様１７： 抗ＥＧＦＲ抗体がセツキシマブである、態様１６に記載の方法。
態様１８： 抗ＥＧＦＲ療法がＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を用いる処置である、態様１４に記載の方法。
態様１９： ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤がゲフィチニブ若しくはエルロチニブである、態様１８に記載の方法。
態様２０： ビタミンＫアナログがＥＧＦＲを活性化する、態様１４に記載の方法。
態様２１： ビタミンＫアナログがビタミンＫ３である、態様１４に記載の方法。
態様２２： ビタミンＫアナログがビタミンＫ１である、態様１４に記載の方法。
態様２３： ビタミンＫ３が、最低１５μｇ／ｍｌの濃度で皮膚に塗布される、態様２１に記載の方法。
態様２４： ビタミンＫ３が、７５μｇ／ｍｌないし１００μｇ／ｍｌの濃度で皮膚に塗布される、態様２１に記載の方法。
態様２５： ビタミンＫ１が、最低４５０μｇ／ｍｌの濃度で皮膚に塗布される、態様２２に記載の方法。
態様２６： ビタミンＫアナログが局所投与に適する製薬学的製剤に処方されている、態様１４に記載の方法。
態様２７： ビタミンＫアナログが徐放製剤に処方されている、態様２６に記載の方法。態様２８： 抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法に二次的な皮疹を処置若しくは予防するのに有効な量のビタミンＫアナログを含んでなる製薬学的組成物。
態様２９： ビタミンＫアナログがＥＧＦＲを活性化する、態様２８に記載の製薬学的組成物。
態様３０： ビタミンＫアナログがビタミンＫ３である、態様２８に記載の製薬学的組成物。
態様３１： ビタミンＫアナログがビタミンＫ１である、態様２８に記載の製薬学的組成物。
態様３２： ビタミンＫ３の濃度が最低１５μｇ／ｍｌである、態様３０に記載の製薬学的組成物。
態様３３： ビタミンＫ３の濃度が７５μｇ／ｍｌないし１００μｇ／ｍｌである、態様３０に記載の製薬学的組成物。
態様３４： ビタミンＫ１の濃度が最低４５０μｇ／ｍｌである、態様３１に記載の製薬学的組成物。
態様３５： 局所投与のため処方されている、態様２８に記載の製薬学的組成物。
態様３６： ビタミンＫアナログが徐放製剤に処方されている、態様３５に記載の製薬学的組成物。
態様３７： 化合物が、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、Ａｋｔおよびシグナル伝達性転写因子３（ＳＴＡＴ−３）のいずれか１種を活性化するかどうかを決定することを含んでなり、該化合物によるＥＧＦＲ、Ａｋｔ若しくはＳｔａｔ−３の活性化は皮疹を処置しそして／若しくは予防するのに該化合物が有効であることの指標である、抗ＥＧＦＲ療法に二次的な皮疹を処置かつ／若しくは予防するのに有用でありうる化合物の同定方法。
態様３８： ＥＧＦＲ、Ａｋｔ若しくはＳｔａｔ−３の活性化が、リン酸化された形態のＥＧＦＲ、Ａｋｔ若しくはＳｔａｔ−３に特異的である抗体を使用して決定される、態様３７に記載の方法。
態様３９： 化合物がビタミンＫアナログである、態様３７に記載の方法。
態様４０： 化合物が、ＥＧＦＲ、Ａｋｔ若しくはＳｔａｔ−３の脱リン酸化を阻害する、態様３７に記載の方法。
態様４１： 化合物がホスファターゼ阻害剤である、態様３７に記載の方法。
態様４２： 皮膚若しくは粘膜潰瘍を処置するのに有効な量のビタミンＫアナログを皮膚若しくは粘膜潰瘍に塗布することを含んでなり、該ビタミンＫアナログがＥＧＦＲを活性化する、被験者における皮膚若しくは粘膜潰瘍の処置方法。
態様４３： 皮膚若しくは粘膜潰瘍が、潰瘍性大腸炎、化学療法誘発性の口内粘膜炎、若しくは放射線療法誘発性の口内粘膜炎である、態様４２に記載の方法。
態様４４： ビタミンＫアナログがビタミンＫ３である、態様４２に記載の方法。
態様４５： ビタミンＫアナログがビタミンＫ１である、態様４２に記載の方法。
態様４６： ビタミンＫ３が、最低１５μｇ／ｍｌの濃度で皮膚若しくは粘膜潰瘍に塗布される、態様４４に記載の方法。
態様４７： ビタミンＫ３が、７５μｇ／ｍｌないし１００μｇ／ｍｌの濃度で皮膚若しくは粘膜潰瘍に塗布される、態様４４に記載の方法。
態様４８： ビタミンＫ１が、最低４５０μｇ／ｍｌの濃度で皮膚若しくは粘膜潰瘍に塗布される、態様４５に記載の方法。
態様４９： ホスファターゼ阻害剤を、皮疹を処置するのに有効な量で皮疹に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の処置方法。
態様５０： ホスファターゼ阻害剤がＥＧＦＲの脱リン酸化を阻害する、態様４９に記載の方法。
態様５１： 抗ＥＧＦＲ療法が抗ＥＧＦＲ抗体を用いる処置である、態様４９に記載の方法。
態様５３： 抗ＥＧＦＲ抗体がセツキシマブである、態様５１に記載の方法。
態様５４： 抗ＥＧＦＲ療法がＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を用いる処置である態様４９に記載の方法。
態様５４： ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤がゲフィチニブ若しくはエルロチニブである、態様５３に記載の方法。
態様５５： ホスファターゼ阻害剤が、局所投与に適する製薬学的製剤に処方されている、態様４９に記載の方法。
態様５６： ホスファターゼ阻害剤が徐放製剤に処方されている、態様５５に記載の方法。
態様５７： ホスファターゼ阻害剤を、皮疹を予防するのに有効な量で皮膚に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に二次的な皮疹の予防方法。
態様５８： ホスファターゼ阻害剤が顔若しくは体躯に塗布される、態様５７に記載の方法。
態様５９： ホスファターゼ阻害剤がＥＧＦＲの脱リン酸化を阻害する、態様５７に記載の方法。
態様６０： 抗ＥＧＦＲ療法が抗ＥＧＦＲ抗体を用いる処置である、態様５７に記載の方法。
態様６１： 抗ＥＧＦＲ抗体がセツキシマブである、態様６０に記載の方法。
態様６２： 抗ＥＧＦＲ療法が、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を用いる処置である、態様５７に記載の方法。
態様６３： ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤がゲフィチニブ若しくはエルロチニブである、態様６２に記載の方法。
態様６４： ビタミンＫアナログが、局所投与に適する製薬学的製剤に処方されている、態様５７に記載の方法。
態様６５： ホスファターゼ阻害剤が徐放製剤に処方されている、態様６４に記載の方法。
態様６６： 抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法に二次的な皮疹を処置若しくは予防するのに有効な量のホスファターゼ阻害剤を含んでなる製薬学的組成物。
態様６７： ホスファターゼ阻害剤がＥＧＦＲの脱リン酸化を阻害する、態様６６に記載の製薬学的組成物。
態様６８： 局所投与のため処方されている態様６６に記載の製薬学的組成物。
態様６９： ホスファターゼ阻害剤が徐放製剤に処方されている、態様６８に記載の製薬学的組成物。
態様７０： 皮膚若しくは粘膜潰瘍を処置するのに有効な量のホスファターゼ阻害剤を皮膚若しくは粘膜潰瘍に塗布することを含んでなり、ホスファターゼ阻害剤はＥＧＦＲの脱リン酸化を阻害する、被験者における皮膚若しくは粘膜潰瘍の処置方法。
態様７１： 皮膚若しくは粘膜潰瘍が、潰瘍性大腸炎、化学療法誘発性の口内粘膜炎、若しくは放射線療法誘発性の口内粘膜炎である、態様７０に記載の方法。
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明に従えば、ビタミンＫ１またはビタミンＫ３を皮膚疾患、特に、皮疹、の治療または予防に効果的に使用できることが確認された。したがって、本発明は、ビタミンＫ１またはビタミンＫ３を有効成分とする製薬学的製剤の製造業で利用できる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビタミンＫアナログを、皮疹を処置するのに有効な量で皮疹に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に対する二次的な皮疹の処置方法。
【請求項１】
ビタミンＫアナログを、皮疹を処置するのに有効な量で皮疹に塗布することを含んでなる、抗上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）療法を受けている被験者における前記療法に対する二次的な皮疹の処置方法。
【図１Ａ−１Ｃ】
【図２】
【図３】
【図４Ａ−４Ｂ】
【図５】
【図６】
【図７】
【図２】
【図３】
【図４Ａ−４Ｂ】
【図５】
【図６】
【図７】
【公開番号】特開２０１２−２３６８５７（Ｐ２０１２−２３６８５７Ａ）
【公開日】平成２４年１２月６日（２０１２．１２．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−１９６２４９（Ｐ２０１２−１９６２４９）
【出願日】平成２４年９月６日（２０１２．９．６）
【分割の表示】特願２００８−５０６７６５（Ｐ２００８−５０６７６５）の分割
【原出願日】平成１８年４月１２日（２００６．４．１２）
【出願人】（５０７３３９６６３）アルバート・アインシユタイン・カレツジ・オブ・メデイシン・オブ・イエシバ・ユニバーシテイ (3)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１２月６日（２０１２．１２．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２４年９月６日（２０１２．９．６）
【分割の表示】特願２００８−５０６７６５（Ｐ２００８−５０６７６５）の分割
【原出願日】平成１８年４月１２日（２００６．４．１２）
【出願人】（５０７３３９６６３）アルバート・アインシユタイン・カレツジ・オブ・メデイシン・オブ・イエシバ・ユニバーシテイ (3)
【Ｆターム（参考）】
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