水性系および物体上における微生物の成育を抑制する方法および組成物
微生物の成育を支える恐れのある水性系または物体上において微生物を殺滅、防止、または成育阻害する方法および組成物を提供するために、ラクトペルオキシダーゼ、過酸化水素または過酸化物源、塩化物以外のハロゲン化物、またはチオシアン酸塩、および任意にアンモニウム源を供給し、その供給の条件として、ラクトペルオキシダーゼ、過酸化水素または過酸化物源由来の過酸化物、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、およびアンモニウム源由来のアンモニウムが相互に反応して水性系または物体に抗菌剤が供給される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水性系または物体上、例えば物体の１つ以上の表面における微生物の成育を抑制する組成物および方法に関する。また本発明は、ラクトペルオキシダーゼと他の成分との相互反応によって抗菌剤を形成することに関する。
【背景技術】
【０００２】
ペルオキシダーゼは自然界に広く分布する酵素群である。自然界における第一の機能は酸化反応への触媒作用であって、その酸化反応の間に過酸化水素或いは他の酸化剤が消費される。その酸化反応を前進させるためには、一般に電子供与体（還元剤）が必要である。
【０００３】
電子供与体としての、過酸化水素の存在下およびハロゲン化物またはチオシアン酸塩の存在下ではペルオキシダーゼによって、範囲の広い抗菌特性を有する生産物が得られる。ペルオキシダーゼの種類が変わる毎にそれらが反応し得るハロゲン化物またはチオシアン酸塩は特定される。例えば、ミエロペルオキシダーゼは電子供与体としてＣｌ−、Ｂｒ−、Ｉ−、またはＳＣＮ−を利用し、それらを酸化して抗菌性のヒポハロゲン化物またはヒポチオシアン酸塩を形成する。しかしラクトペルオキシダーゼはＢｒ−、Ｉ−、またはＳＣＮ−の酸化を触媒して抗菌性の生産物を生ずるが、Ｃｌ−の酸化は触媒しない。ホースラディッシュペルオキシダーゼは電子供与体としてＩ−のみを利用してＩ２、ＨＩＯ、およびＩＯ−を産生する。ペルオキシダーゼ−ハロゲン化物−Ｈ２Ｏ２の抗菌系を利用している応用領域には食品、乳製品、パーソナルケア、および家畜用製品がある。
【０００４】
Allenの米国特許第 5,451,402号（特許文献１）には酵母および芽胞微生物をハロペロキシダーゼ含有組成物で殺滅する方法が記載されており、この組成物はヒトまたは動物での防腐剤による治療処置および植物微生物および黴胞子の消毒殺菌のための生体内投与において有用であると言われている。
【０００５】
Johansenによる米国特許出願公開第
2002/0119136（Al）号明細書（特許文献２）は、カプリナスペルオキシダーゼ、過酸化水素、および増強剤、例えば電子供与体を含有する抗菌組成物に関する。この組成物は、洗濯物、人や動物の皮膚、毛髪、粘膜、口腔、歯、傷口、傷、および固い表面に存在する微生物を阻害または殺滅するのに有用と言われている。またこの組成物は化粧品の保存剤としても、また水処理、食品加工、化学的薬剤的操作、紙パルプ処理で使用する加工装置の上や水の衛生設備の上を洗浄、消毒あるいは微生物の成育阻害をするのにも使用できる。
【０００６】
Johansenの米国特許第6,251,386号（特許文献３）
および米国特許第6,818,212（B2）号（特許文献４）明細書は、ハロペロキシダーゼ、過酸化水素源、ハロゲン化物源、およびアンモニウム源を含有する抗菌組成物、および微生物の成育を殺滅阻害するためにこの組成物を使用する方法に関する。またこの特許には、ハロゲン化物とアンモニウム源の間には未知の相乗効果があると記載している。
【０００７】
Claessonらの米国特許第6,149,908号（特許文献５）は、ヘリコバクターピロリ（Helicobacter pylori）感染の治療薬剤の製造にあたり、ラクトペロキシダーゼ、過酸化物供給体、およびチオシアン酸塩を使用することに関する。
【０００８】
Galleyらの米国特許第5,607,681号（特許文献６）には、ヨウ化物またはチオシアン酸塩アニオン、グルコースオキシダーゼおよびＤ−グルコース、およびラクトペルオキシダーゼを含有する抗菌組成物が記載されている。この特許では、組成物は濃厚な反応性のない形態、例えば乾燥粉末や非水溶液で提供されてもよいと述べられている。この組成物は、口腔衛生、除臭、および頭髪ふけ防止の各製品で使用すると強力な抗菌活性を呈する保存剤としてあるいは活性剤として有用であると述べられている。
【０００９】
Goodらの米国特許第5,250,299号（特許文献７）は、ｐＨを約１．５と約５の間に調整したヒポチオシアン酸塩生成系とジカルボン酸またはトリカルボン酸との相乗作用による抗菌組成物に関する。ヒポチオシアン酸塩生成系はラクトペルオキシダーゼ、チオシアン酸塩および過酸化水素から構成される。この特許には食品製造に係る表面の消毒方法、および家禽類に付着のサルモネラ菌および食品の表面に汚染している他のグラム陰性微生物の殺滅方法が記載されている。
【００１０】
Montgomeryの米国特許第5,176,899号（特許文献８）には、安定で抗菌性のある水性の歯磨き組成物が記載されており、これにはオキシドレダクターゼ酵素とそれの特異基質である過酸化水素産生基質が含有されている。ペルオキシダーゼは過酸化水素に作用して唾液に含まれているチオシアネートイオンを酸化し、抗菌濃度のヒポチオシアナイトイオンを産生する。
【００１１】
Guthrie(Knoll Aktiengesellschaft)らによる国際公開第98/49272号明細書（特許文献９）は、安定化された水性の抗菌性酵素組成物に関し、これにはラクトペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、ハロゲン化アルカリ金属塩、およびこの組成物に特定のｐＨを与えるキレート能を有する緩衝剤が含有されている。この組成物は乳製品、食品素材、医薬品に使用する抗菌剤として有用であると記載されている。
【００１２】
Bycroftらの米国特許第5,043,176号（特許文献１０）は、抗菌性のポリペプチドとヒポシアン酸成分との相乗作用による抗菌性組成物に関する。組成物を約３０〜４０℃の間、ｐＨ約３〜約５の間で投与する場合に相乗活性が見られる。この組成物はグラム陰性菌、例えばサルモネラ菌に対して有用であると言われている。好ましい組成物はナイシン、ラクトペルオキシダーゼ、チオシアン酸塩、および過酸化水素である。この組成物はサルモネラ生細胞の数を１０〜２０分間で６を超える対数で減少することができると述べられている。
【００１３】
Kesslerらの米国特許第4,937,072号（特許文献１１）には、ペルオキシダーゼ、過酸化物または過酸化物発生材料、およびヨウ化塩を含有するイン サイツー（in situ）で胞子を殺滅する消毒剤が記載されている。この三つの成分は反応しない状態で保存されているので、抗胞子性は不活性状態に維持される。三つの成分を水性の媒体中で混合すると、ペルオキシダーゼによって反応が触媒され抗菌性のないラジカルおよび／または副生物が生じてしまう。
【特許文献１】米国特許第 5,451,402号明細書
【特許文献２】米国特許出願公開第 2002/0119136（Al）号明細書
【特許文献３】米国特許第6,251,386号明細書
【特許文献４】米国特許第6,818,212号明細書
【特許文献５】米国特許第6,149,908号明細書
【特許文献６】米国特許第5,607,681号明細書
【特許文献７】米国特許第5,250,299号明細書
【特許文献８】米国特許第5,176,899号明細書
【特許文献９】国際公開第98/49272号明細書
【特許文献１０】米国特許第5,043,176号明細書
【特許文献１１】米国特許第4,937,072号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
工業的な工程、例えば製紙およびパルプ処理の工程では大量の水を使用するので、そのような処理の間およびそのような工程のための水の導入および貯蔵の設備では微生物の成育を阻害することが望ましい。
【００１５】
したがって、微生物の成育を防止、殺滅および／または阻害する方法であって、安価であり、低濃度で有効な組成物を使用し、しかも容易に入手可能な成分を利用する方法が望まれる。
【００１６】
また、微生物の成育を防止、殺滅および／または阻害する方法であって、塩化物または他の環境上望ましくない成分を使用しない方法が望まれる。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
微生物の成育を支える恐れのある水性系および物体上において微生物の成育を抑制する強力な抗菌性溶液を得るためには、ラクトペルオキシダーゼ(本明細書で「ＬＰ」と呼ぶ)、過酸化水素または過酸化物源、例えば過炭酸塩または酵素反応により過酸化物を発生する系、例えばグルコースオキシダーゼ／グルコース系（ＧＯ／glu）、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意にアンモニウム源を供給するのがよく、その供給の条件としてラクトペルオキシダーゼ、過酸化水素または過酸化物源由来の過酸化物、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、およびアンモニウム源が存在するならそれ由来のアンモニウムが相互に反応して水性系または物体に抗菌剤が供給されるのがよいことが判った。（ラクトペルオキシダーゼを含有する本明細書に記載の抗菌系または抗菌溶液は、本明細書では[ＬＰ系]または「ＬＰ抗菌系」と互換的に呼称してもよい）。各成分は水中に予め混合して溶液としておいてもよく、その場合にはそれら成分は相互に反応して抗菌剤を形成するので、得られる溶液の有効量を処理すべき水性系等の系または物体に投与すればよい。あるいは、処理すべき水性系等の系または物体上に各成分を個別に（または組み合わせて）加え、各成分の濃度を選択することによって活性な抗菌性組成物をイン サイツー（in situ）に形成し、処理すべき水性系等の系または物体上に所望期間維持させることもできる。
【００１８】
更に、本発明は、ラクトペルオキシダーゼ(ＬＰ)、過酸化水素または過酸化物源、例えばカルバマイド過酸化物、過炭酸塩、過ホウ酸塩、または過硫酸塩、または酵素反応により過酸化物を発生する系、例えばグルコースオキシダーゼ／グルコース系（ＧＯ／glu）、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意にアンモニウム源を含有する組成物を提供する。
【００１９】
更に、本発明は、少なくとも、ラクトペルオキシダーゼ、臭化アンモニウム、および酵素により過酸化物を発生する系の酵素基質、例えばグルコースの固体状混合物を１つの水溶解性容器に、また過酸化物を生成する固体状酵素、例えばグルコースオキシダーゼを別の水溶解性容器に含有する全て固体状の組成物を提供する。あるいは、この第一の水溶解性容器中の全て固体状の組成物は、ラクトペルオキシダーゼ、ヨウ化カリウム、および酵素基質の固体状混合物でも、ラクトペルオキシダーゼ、臭化ナトリウム、硫酸アンモニウム、および酵素基質の固体状混合物でもよい。本発明の別の方法では、強力な抗菌性溶液を形成するために、上記二つの容器の全固体を所望量の水に溶解してもよい。次に得られる溶液の有効量を処理すべき系または物体に投与すればよい。あるいは、上記二つの容器の内容物を別々に水に溶解して二つの別個の濃厚液を形成し、一の溶液には少なくともＬＰ、臭化アンモニウム、およびグルコースを含有させ、他の溶液には少なくともグルコースオキシダーゼを含有させればよい。次に得られる溶液の有効量を処理すべき系または物体に別々に加えてもよく、この場合には二つの溶液が水性系において反応し抗菌性組成物を形成する。
【００２０】
本明細書に記載のＬＰ系により強力な抗菌性組成物が生成されるが、これは過酸化水素が単独で作用するよりも遥かに強力であるのが好ましい。本発明は各種の工業用流体の系（例えば水性系）と工程において利用することができ、例えば限定されないが、製紙用の水系、パルプスラリー、製紙工程での白色水、冷却水系（冷却水、取り込み冷却水、および排出冷却水）、排水系、リサイクル用の水系、温泉浴、水泳プール、リクレーション用の水系、食品加工系、飲料水系、皮革なめし用の水系、金属加工用液体、および他の工業用水系が挙げられる。また、本発明方法は各種物体上での微生物の成育を抑制するのにも利用してよく、例えば限定されないが、表面被覆、金属、高分子材料、天然物体(例えば、石)、加工石、コンクリート、木材、ペイント、種子、植物、動物の皮、プラスチック、化粧料、パーソナルケア製品、医薬品、および他の工業材料が挙げられる。
【００２１】
本発明の更なる特徴と利点は、一部は以下の説明に記述されるが、一部は説明から自明であり、あるいは本発明の実施要領により知得してもよい。本発明の対象と他の利点は説明および添付の特許請求の範囲において具体的に指摘する要素および組合せによって実現達成される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
以下の概略説明および以下の詳細説明は単なる例示にすぎず、これらによって特許請求に係る本発明が限定されることはないと了解する必要がある。上に記載したおよび本出願書を通じて記載された特許、特許出願書類、および刊行物はそれらの全体が参照により本明細書に援用される。
【００２３】
付随の図面は、本願に編入されかつそれの一部を構成して、本発明の幾つかの実施態様を描出するものであり、説明と一体となって本発明の要旨説明に役立つ。
【００２４】
本発明は、水性系または物体上で微生物の成育を抑制する方法および組成物を提供し、ａ）ラクトペルオキシダーゼ（ＬＰ）、ｂ）過酸化水素または過酸化水素源、およびｃ）ハロゲン化物と任意にアンモニウム塩のようなアンモニウム源を使用する。ハロゲン化物とアンモニウム源の供給は臭化アンモニウムの形態でもよい。例えば、ＬＰ、過酸化水素、およびハロゲン化物の組合せ、またはＬＰ、過酸化水素、ハロゲン化物、およびアンモニウム塩の組合せによって、強力な抗菌性組成物が形成されるが、この組成物は過酸化水素が単独で機能するよりも遥かに活性であるのが好ましい。本発明は、微生物に侵襲されやすい製品、材料、または媒体の中または上で少なくとも１つの微生物の成育を抑制する方法を提供する。この方法には、製品、材料、または媒体に微生物の成育を抑制するのに有効な量の本発明組成物を加える段階がある。この有効量は、処理すべき製品、材料、または媒体に応じて変化し、具体的な投与ケースに応じて当業者が本明細書に記載の開示事項を参照しながら日常的に決定することができる。本発明組成物は、微生物に侵襲されやすい各種の工業用の製品、媒体、または材料において保存または少なくとも１つの微生物の成育抑制に有用である。そのような媒体または材料には、例えば限定されないが、染料、ペースト、木材、皮革、敷物、パルプ、木片、なめし用液、紙粉砕液、高分子乳化液、ペイント、紙等をコーティングおよび糊付けする薬剤、金属加工液、地面堀削用潤滑剤、石油化学品、冷却水系、リクレーション用の水、プラント用の流水、排水、滅菌水、レトルト式の加熱調理器具、医薬品製剤、化粧品製剤、および洗面用製剤が挙げられる。この組成物は種子や穀物を微生物による損傷から防護する目的で農業用製剤にも利用可能である。
【００２５】
この組成物は、広範な微生物に対し低濃度で優れた抗菌活性を呈するので好ましい。
【００２６】
本発明組成物は、微生物に侵襲されやすい製品、材料、または媒体の中または上で少なくとも１つの微生物の成育を抑制する方法において使用することができる。この方法には、製品、材料、または媒体に本発明組成物を加える段階があり、この場合にこの組成物の成分は微生物の成育を抑制するのに有効な量存在する。
【００２７】
前述のように、本発明組成物は、少なくとも１つの微生物に侵襲されやすい工業用の各種製品、材料、または媒体を保存するのに有用である。また本発明組成物は、種子や穀物を微生物による損傷から防護する目的で農業用製剤にも有用である。これらの保存および防護の方法を完璧にするために、製品、材料、または媒体に本発明組成物を加えるが、その量は製品、材料、または媒体を少なくとも１つの微生物による侵襲から防護し、あるいは種子や穀物を微生物による損傷から効果的に防護するのに有効な量である。
【００２８】
本発明方法により少なくとも１つの微生物の成育を抑制または阻害するとは、その成育を減少および／または防止することが含まれる。
【００２９】
少なくとも１つの微生物の成育を「抑制」（例えば、防止）すればその微生物の成育は阻害されたと理解する必要がある。換言すれば、その微生物の成育が存在しない、あるいは実質的に存在しない。少なくとも１つの微生物の成育を「抑制」すれば、その微生物集団は所望のレベルに維持され、集団は所望のレベル(検出不能限界、例えばゼロ集団まで)に減少され、および／または成育を阻害される。したがって、本発明の一実施態様では、少なくとも１つの微生物に侵襲されやすい製品、材料、または媒体が、その侵襲とその結果としての損傷およびこの微生物が原因の他の被害効果から保護されている。また、少なくとも１つの微生物の成育を「抑制」するとは、少なくとも１つの微生物を生物的に静かに減少し、および／またはその微生物のレベルを低く維持し、その結果としてその微生物の侵襲およびそれによる何かの損傷または他の被害効果が緩和されること、すなわちその微生物の成育速度または侵襲速度がスローダウンする、および／または皆無になることを含意すると理解する必要がある。
【００３０】
これら微生物の例には、黴類、菌類、藻類およびこれらの混合物が挙げられ、例えば限定されないが、トリコデルマビリデ（Trichodermaviride）、アスペルギルスニゲル（Aspergillusniger）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、肺炎杆菌クレブシエラニューモニア（Klebsiella pneumoniae）、およびクロレラエスピー（Chlorellasp）がある。本発明の組成物の毒性は低い。
【００３１】
ラクトペルオキシダーゼは糖タンパク質であり、非共有結合による１個のヘム基を有する。ミルク中の非免疫防御系の構成部分であり、ミルク中に約３０ｍｇ／Ｌの濃度で存在する。これはまた各種体液、例えば唾液、涙液、および鼻および腸の分泌液にも存在する。
【００３２】
ＬＰがハロペルオキシダーゼと相違する点は、ＬＰが酪農のナチュラル製品として牛乳から得られる酵素であるのに対し、ハロペルオキシダーゼは黴または細菌から発酵またはＤＮＡ組換え技術により得る酵素である。ＬＰとハロペルオキシダーゼの間の別の相違点は、ハロペルオキシダーゼがＣｌ−の酸化を触媒できるが、ＬＰはできない。現在、ＬＰは工業規模でかつ非常に精製された形態で入手できるが、ハロペルオキシダーゼは量的には実験規模でしか入手できない。したがって、ＬＰはハロペルオキシダーゼより安価であり、したがってＬＰがハロペルオキシダーゼに優る利点は、大量入手が可能であり、かつ価格が比較的に低いことである。
【００３３】
ラクトペルオキシダーゼ自体には抗菌活性がないが、Ｈ２Ｏ２が存在するとＢｒ−、Ｉ−、またはＳＣＮ−の酸化を触媒して抗菌性産物を生ずるが、Ｃｌ−の酸化は触媒しない。ＬＰ、Ｈ２Ｏ２および酸化可能な基質、例えばＢｒ−、Ｉ−、またはＳＣＮ−は、一体となれば強力な抗菌系を形成する。ラクトペルオキシダーゼ抗菌系（「ＬＰ抗菌系」）の抗菌効果が達成されるには、Ｂｒ−、Ｉ−、またはＳＣＮ−の酸化産物、主にヒポハロゲン化物およびヒポチオシアン酸塩が生成することである。ＬＰ抗菌系が抗菌性産物を産生するには極めて低レベルのＨ２Ｏ２および電子供給体が必要である。本明細書に記載のごとく、アンモニウムイオンが追加されて、これがＬＰ抗菌系の中に包含されれば、抗菌活性は更に増強される。特に、ラクトペルオキシダーゼ、過酸化物または過酸化物源、および臭化アンモニウムが組み合わされれば、格別に有用でかつ経済的な抗菌系が提供される。
【００３４】
本発明のラクトペルオキシダーゼは哺乳動物源、例えば哺乳動物の乳、特に牛乳から取得してよい。更にラクトペルオキシダーゼは市販品から容易に入手可能であり、乾燥粉末の形態でもよく、水溶液中であってもよい。商品の具体的な形態ではＬＰは緑褐色粉末であり、タンパク質含量は９０％を超える。この酵素は安定ｐＨのプロフィルが広く（ｐＨ３〜１０）、至適ｐＨは５．０〜６．５であることが示されている。この酵素は室温で保存してよく、最初の封入包装、例えば市販品の入手形態のままであれば、ＬＰの保存期間は２０℃で少なくとも１年、８℃では２年である。この酵素を上昇した温度（＞６５℃）に短時間（１０分）曝せばタンパク質変性して活性を失う。
【００３５】
本発明のＬＰ抗菌系で使用する過酸化水素（これは過酸化物源と考えてもよい）は多様な態様で入手してよく、過酸化水素の濃厚溶液でも希薄溶液でもよく、あるいは過酸化水素の前駆体、例えば過炭酸塩、過ホウ酸塩、カルバマイド過酸化物（尿素過酸化水素とも言われる）、または過硫酸塩から得てもよい。酵素反応により過酸化水素を生成する系、例えばグルコースオキシダーゼとグルコース、あるいはアミラーゼ／デンプン（これからグルコースが生成される）とグルコースオキシダーゼから得てもよい。過酸化水素を生成する他の酵素／基質の組合せを利用してもよい。酵素反応により生成した過酸化水素を利用するのが有利である。関係する材料が全て環境的にグリーン(green)だからである。これらの材料は過酸化水素自体よりも運搬と処理が遥かに容易である。
【００３６】
本発明のＬＰ抗菌系で使用するハロゲン化物はどのようなハロゲン化物源またはハロゲン化物生成源から得てもよく、異なる取得源は多数可能である。臭化アンモニウム、臭化ナトリウム、臭化カリウム、臭化カルシウム、臭化マグネシウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウム、ヨウ化アンモニウム、ヨウ化カルシウム、および／またはヨウ化マグネシウムが可能である。アルカリ金属またはアルカリ土類金属のどのようなハロゲン化塩であってもよい。本発明のＬＰ抗菌系では、好ましくは塩化物化合物はハロゲン化物源としては除外される。ラクトペルオキシダーゼがＣＬ−の酸化を触媒しないからである。ＬＰ抗菌系におけるハロゲン化物に代わる電子供与体として、チオシアン酸塩、例えばチオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸アンモニウム、チオシアン酸カリウムを使用することもできる。
【００３７】
アンモニウムは、ＬＰ抗菌系で使用してもよくそれによって本発明の相乗的な抗菌効果は更に増大し、どのようなアンモニウム源から取得してもよい。アンモニウム源はアンモニウム塩が可能である。非限定的な実施例として、ハロゲン化物とアンモニウムの両方を供給するにあたり、ハロゲン化アンモニウム、例えば臭化アンモニウム（ＮＨ４Ｂｒ）によってもよい。別の非限定的な実施例として、ハロゲン化物とアンモニウムを供給するにあたり、それぞれ臭化ナトリウムと硫酸アンモニウムによってもよい。別の非限定的な実施例として、ハロゲン化物がヨウ化カリウムでよく、アンモニウム源は省略されてよい。
【００３８】
微生物の成育を支える恐れのある水性系または物体上において微生物を殺滅、防止、成育阻害する方法として、ラクトペルオキシダーゼ、過酸化水素または過酸化物源、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意にアンモニウム源を微生物の成育を支える恐れのあるこの水性系または物体に供給し、その供給の条件としてラクトペルオキシダーゼ、過酸化水素または過酸化物源由来の過酸化物、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、およびアンモニウム源（存在する場合に）由来のアンモニウムが相互に反応することによってこの水性系または物体上において微生物を殺滅、防止、成育阻害する抗菌剤が供給されるのがよい。
【００３９】
当業者が、侵襲された物体または系を処理する前に特定投与に有用な本発明の各種組成物の有効量を容易に決定するには、各種濃度を簡単にテストすれば可能である。例えば、水性系を処理する場合には、ラクトペルオキシダーゼの有効量濃度は、例えば約０．０１〜約１０００ｐｐｍの範囲、好ましくは約０．１〜約５０ｐｐｍの範囲にあるのがよい。
【００４０】
水性系に存在する過酸化物源の有効量は、例えば過酸化水素の水性系での濃度が約０．０１〜約１０００ｐｐｍの範囲、好ましくは約０．１〜約２００ｐｐｍの範囲になるのに十分な量がよい。
【００４１】
水性系に存在するハロゲン化物またはチオシアン酸塩の有効量は、例えば水性系での濃度が約０．１〜約１００００ｐｐｍの範囲、好ましくは約１〜約５００ｐｐｍの範囲となるのがよい。
【００４２】
水性系に存在するアンモニウム源の有効量は、例えば水性系でのアンモニウムイオン濃度が約０．０〜約１００００ｐｐｍの範囲または約０．１〜約１００００ｐｐｍの範囲、好ましくは約０〜約５００ｐｐｍの範囲または約１〜約５００ｐｐｍの範囲になるのに十分な濃度がよい。
【００４３】
ＬＰ抗菌系の成分、例えば本出願明細書の各所に記載のラクトペルオキシダーゼ、過酸化水素、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、およびアンモニウムの濃度は、これらを組合せまたは水性系に加えた時点での初期濃度であってもよいし、および／またはこれらが相互に反応した後の時点の濃度であってもよい。
【００４４】
本発明は、組成物の成分を製品、材料、または媒体に別々に加えることも包含している。この実施態様によれば、成分を製品、材料、または媒体に個別に加えるが、使用時に存在する各成分の最終量は少なくとも１つの微生物の成育を抑制するのに効果的な量である。本発明の態様によって、ラクトペルオキシダーゼ、過酸化水素または過酸化物源、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意のアンモニウム源を処理対象の水性系に個別に加えてよい。例えば、ハロゲン化物および任意のアンモニウム源を最初に処理対象の水性系に加え、次にラクトペルオキシダーゼを加え、最後に過酸化水素を加えてもよい。成分を加える順序は厳密ではなく、どのような順序も利用可能である。好ましくは、加える順序は、１）ハロゲン化物／アンモニウム、２）ＬＰ、３）過酸化水素または他の過酸化物源である。
【００４５】
本発明の他の態様によれば、本明細書に記載のＬＰ抗菌系の成分を水中(水性系と呼ぶこともある）で予め混合して濃厚水溶液を形成しておくことができる。次にこの濃厚水溶液を処理対象の水性系または物体に投与すればよい。ラクトペルオキシダーゼ、過酸化水素または過酸化物源、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意のアンモニウム源の濃度を選択してＬＰ抗菌系の抗菌活性を最適化すればよい。
【００４６】
予め混合した水溶液中(水性系と呼ぶこともある）のＬＰの濃度は約０．０１重量％〜約５重量％の範囲、好ましくは約０．０５重量％〜０．５重量％の範囲にあるのがよい。重量％は全て予め混合した溶液中の重量による。予め混合した溶液中に存在する過酸化物源の量は、予め混合した溶液中の過酸化水素の濃度が約０．０３重量％〜約１５重量％の範囲、好ましくは約０．１５重量％〜１．５重量％の範囲になるのに十分な量がよい。予め混合した溶液中に存在するハロゲン化物またはチオシアン酸塩の量は、予め混合した溶液中のハロゲン化物またはチオシアン酸塩の濃度が約０．１重量％〜約５０重量％の範囲、好ましくは約０．５重量％〜５重量％の範囲になるのに十分な量がよい。予め混合した溶液中に存在するアンモニウム源の量は、予め混合した溶液中のアンモニウムの濃度が約０．０重量％〜約５０重量％、または約０．１重量％〜約５０重量％の範囲、好ましくは約０．０重量％〜５重量、または約０．５重量％〜約５重量％の範囲になるのに十分な量がよい。
【００４７】
例えば、ラクトペルオキシダーゼ、臭化アンモニウム、過酸化水素、および水(水性系と呼ぶこともある）を組み合わせて〈例えば混合して）活性な濃厚抗菌性溶液を形成するのがよい。重量％は全て抗菌性溶液中の重量による。濃厚抗菌性溶液において、ラクトペルオキシダーゼは約０．０１重量％〜約５重量％の範囲、好ましくは約０．０５重量％〜０．５重量％の範囲がよく、過酸化水素は約０．０３重量％〜約１５重量％の範囲、好ましくは約０．１５重量％〜１．５重量％の範囲がよく、臭化アンモニウムは約０．１重量％〜約５０重量％の範囲、好ましくは約０．５重量％〜５重量％の範囲がよい。ＬＰ：Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒの重量比は、約１：１：５〜約１：１０：１００の範囲がよく、好ましい重量比は約１：３：１０である。濃厚溶液は処理対象の水性系または物体に投与すればよい。
【００４８】
予め混合した濃厚溶液としてのＬＰ抗菌系の成分を混合するには、公知の方法によればよい。例えば、臭化塩とラクトペルオキシダーゼを固体で水(水性系と呼ぶこともある）に加えて水溶液を形成し、次に過酸化水素溶液を加えて最終組成物を形成すればよい。あるいは、臭化塩水溶液をまず調製し、後に固体のＬＰを加え、次に過酸化水素溶液を加えればよい。あるいは、過酸化水素源が固体状の前駆体、例えば過炭酸塩または過ホウ酸塩または酵素反応によりＨ２Ｏ２を生成する系である場合には、ＬＰ抗菌系の成分は固体形で水に加えればよい。
【００４９】
更に他の代替案では、ＬＰ抗菌系の成分を各溶液(水性系と呼ぶこともある）で組み合わせてもよい。例えば、臭化アンモニウム水溶液とＬＰ水溶液を組み合わせてＬＰ／ＮＨ４Ｂｒの混合水溶液を形成し、次にＨ２Ｏ２水溶液を加えればよい。Ｈ２Ｏ２水溶液を得るには、濃厚Ｈ２Ｏ２水溶液を希釈するか、または固体状のＨ２Ｏ２前駆体、例えば過炭酸塩または過ホウ酸塩または酵素反応によりＨ２Ｏ２を生成する系を水に溶解することにより可能である。この代替案によれば水性系または物体を処理する方法が容易になる。臭化アンモニウム水溶液とＬＰ水溶液を別々のタンクに調製し、次に所望量を混合タンクに組み合わせてもよく、これにより貯蔵可能なＬＰ／ＮＨ４Ｂｒの不活性溶液が形成される。抗菌剤が必要になった時に、このＬＰ／ＮＨ４Ｂｒ溶液をＨ２Ｏ２水溶液と組み合わせれば使用すべき活性な抗菌性溶液が形成可能になる。ＬＰ／ＮＨ４Ｂｒの混合溶液を１個のタンクに調整し、次にＨ２Ｏ２水溶液を加えてＬＰ抗菌系を活性化するのが好ましい。
【００５０】
更に本発明では全て固体の組成物が提供され、この組成物ではＬＰ抗菌系の成分が不反応の状態で貯蔵維持されるので、次に必要時に水と組み合わせれば抗菌剤が形成可能となる。例えば、ラクトペルオキシダーゼ、ハロゲン化物源、任意のアンモニウム源を含有する抗菌系、および酵素反応により過酸化水素を生成する系、例えばグルコースオキシダーゼとグルコース、またはアミラーゼ／デンプンとグルコースオキシダーゼを提供するために、ラクトペルオキシダーゼ、ハロゲン化物源、任意のアンモニウム源、および酵素反応により過酸化水素を生成する基質からなる固体状の混合物を１個の容器に貯蔵することができ、他方、酵素反応により過酸化水素を生成する酵素を別の容器に別に貯蔵することができる。使用する容器が水溶解性であれば、抗菌剤を産生するには、容器類を水と組み合わせて容器中の成分を溶解し濃厚溶液を形成するか、または容器類を水性系に直接加えれば可能である。あるいは、容器類を別々に処理対象の水性系に加えることも可能である。
【００５１】
特別な例として、ラクトペルオキシダーゼ、臭化アンモニウム、およびグルコースの固体状の混合物を水溶解性の袋または容器に供給し、固体のグルコースオキシダーゼを別の水溶解性の袋または容器に供給してもよい。上の二つの水溶解性の袋の中で全ての固体を所望量の水に溶解すれば強力な抗菌性溶液が形成される。次に得られる溶液の有効量を処理対象の水性系または物体に投与すればよい。あるいは、両方の袋を処理対象の水性系に直接加えることができるし、あるいは二つの袋を別々に水性系に加えることもできる。別の特別な例として、二つの別々の袋に固体成分を貯蔵する代わりに、別々に分離された部屋がある１個の容器を使用することができる。ただしＬＰ抗菌系の成分が十分に分離され、水に曝されるまで固体状の不活性な形態のまま保持されなければならない。例えば、一つの部屋にはラクトペルオキシダーゼ、臭化アンモニウム、およびグルコースの固体状の混合物が含有され、他の部屋には固体のグルコースオキシダーゼが含有される。ＬＰ抗菌系の全ての成分が、水と混合される以前は不反応の形態に保持されるのが好ましい。グルコースオキシダーゼを固体形で分離保持している貯蔵系では、好ましくはグルコースオキシダーゼは空気から遮断された条件で保持可能なので、酸素はグルコースオキシダーゼから物理的に分離され、したがってグルコースオキシダーゼは実質的に不反応の形態に維持される。
【００５２】
グルコースオキシダーゼ、ラクトペルオキシダーゼ、臭化アンモニウム、およびグルコースからなるＬＰ抗菌系の全固体状の組成物〈グルコースオキシダーゼは他の成分から分離して貯蔵される）では、四つの成分の重量比、グルコースオキシダーゼ：ＬＰ：ＮＨ４Ｂｒ：グルコースは、約１：１：１０：１００〜約１：５：１００：５０００の範囲にあってよく、好ましい重量比は約１：４：１００：２０００である。
【００５３】
特定の投与に応じて、組成物を液体形に調製するには組成物を水中にまたは有機溶媒中に溶解して可能であり、また組成物を乾燥形に調製するには適当な担体上に吸着し、または錠剤形に製剤化して可能である。本発明組成物を含有する保存剤を乳化形に調製するにはそれを水中に乳化する、または必要であれば乳化剤を加えればよい。追加の化学物質、例えば殺虫剤を前記の調製物に加えるにはその調製物が意図している用途に応ずる。
【００５４】
本発明組成物を投与する方式および比率は意図している用途に応じて変化可能である。組成物を投与する場合に材料や製品にスプレーイングやブラッシングをすることができる。また、疑念のある材料や製品を処理する場合には適当に調製した組成物中に浸漬することができる。液体または液体様の媒体の場合に、その媒体中に組成物を加えるには、組成物を注ぎまたは適当な装置で計量して溶液状または懸濁状の組成物を生産することができる。
【００５５】
例えば、抗菌性の濃厚溶液を上記の全固体の溶液から得るには、グルコースオキシダーゼ、ラクトペルオキシダーゼ、臭化アンモニウムおよびグルコースを水に溶解する。次に得られた溶液を処理対象の水性系または物体に投与すればよい。水性系の場合には、ＬＰ抗菌系の成分は別々にまたは予め混合した溶液で加えてよく、系の有効量は次のようになる。
（ａ）ＬＰ：約０．０１〜約１０００ｐｐｍ、好ましくは約０．１〜約５０ｐｐｍの範囲。
（ｂ）ＮＨ４Ｂｒ：約０．１〜約１００００ｐｐｍ、好ましくは約１〜約５００ｐｐｍの範囲。
（ｃ）グルコースオキシダーゼ：約０．０１〜約５００ｐｐｍ、好ましくは約０．０５〜約５０ｐｐｍの範囲。
（ｄ）グルコース：約１〜約１００００ｐｐｍ、好ましくは約１０〜約５０００ｐｐｍの範囲。
【００５６】
別の非限定的な例として、ＬＰ抗菌系は、ＬＰ、過酸化物源、ヨウ化カリウム、および任意のアンモニウム源を含んでよい。更に別の非限定的な例として、ＬＰ抗菌系は、ＬＰ、Ｈ２Ｏ２、およびＫＩを含んでよい。これら各成分の量は、ＬＰ抗菌系のＬＰ、過酸化物源、ハロゲン化物源、および任意のアンモニウム源の量として一般的に上記した量と同様でよい。特に、ＫＩ含有ＬＰ抗菌系で使用されるＫＩの量は、上記したＮＨ４Ｂｒ含有ＬＰ抗菌系におけるＮＨ４Ｂｒの量と同じでよい。このようなＫＩ含有ＬＰ抗菌系は、ＬＰ抗菌系用として上記した物理的形態のいずれであってもよい。
【００５７】
更に別の非限定的な例として、ＬＰ抗菌系は、ＬＰ、過酸化物源、臭化ナトリウム、および硫酸アンモニウムを含んでよい。これら各成分の量は、ＬＰ抗菌系のＬＰ、過酸化物源、ハロゲン化物源、および任意のアンモニウム源の量として一般的に上記した量と同様でよい。特に、ＮａＢｒおよび（ＮＨ４）２ＳＯ４含有ＬＰ抗菌系で使用されるＮａＢｒおよび（ＮＨ４）２ＳＯ４の量は、ＮＨ４およびＢｒの量が上記したＮＨ４Ｂｒ含有ＬＰ抗菌系で供給されたと同じ量になるように選択すればよい。ＮａＢｒおよび（ＮＨ４）２ＳＯ４を含有するそのようなＬＰ抗菌系は、ＬＰ抗菌系用として上記した物理的形態のいずれであってもよい。
【００５８】
本発明方法は、任意のｐＨ、例えば約２〜約１１のｐＨ範囲、好ましくは約５〜約９のｐＨ範囲で実施してよい。ＬＰ抗菌系の予め混合した溶液のｐＨを調整するには、公知の酸または塩基を加えればよい。加える酸または塩基は系中のどの成分とも反応しないのを選択するのが望ましい。しかし、ＬＰ系の成分を水中で混合してｐＨを調整しないのが好ましい。ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒの予め混合した溶液のｐＨは、ｐＨ調整をしなければ、約６．９である。中性（７．０）域のｐＨでは、ＬＰ抗菌系の活性は最大になる。
【００５９】
本発明方法は、微生物抑制が必要な産業用またはレクレーション用のどのような水性系で使用してもよい。そのような水性系は、例えば限定されないが、金属加工液、冷却水系〈冷却塔、取水冷却水、および放流冷却水）、排水系、例えば水中の廃棄物処理、例えば下水処理を受ける廃水または下水、循環水系、水泳プール、浴槽、食品加工系、飲料水系、皮革加工用水系、白濁水系、パルプスラリーおよび他の製紙用または紙加工用水系が挙げられる。一般に、産業用またはレクレーション用のどのような水性系も本発明から利益を受けることができる。また、本発明方法は、各種の産業工程またはリクレーション設備での取水処理において使用してよい。取水を最初に本発明方法で処理すれば、取水は微生物の成育を阻害されてから産業工程またはレクレーション設備に入れることが出来る。
【００６０】
また、本発明方法を適用することによって、微生物の成育を支える恐れのある何かの物体上で微生物の成育を防止または阻害できる。物体の例は、例えば限定されないが、表面被膜、木材、金属、高分子、天然物（例えば、石）、石造物、セメント、板材、種子、植物、皮革、プラスチック、化粧品、パーソナルケア製品、医薬品、および他の産業材料が挙げられる。更に物体には、水性系における硬い表面、食品加工プラントおよび病院および製紙設備および農業設備が挙げられる。
【００６１】
本発明を以下の実施例によって更に明瞭にするが、実施例は本発明を例示する意図のものと理解される。
【実施例１】
【００６２】
リン酸緩衝液（ｐＨ6.0）中での緑膿菌（P. aeruginosa）に対する各種ラクトペルオキシダーゼ系の抗菌効果
【００６３】
ＬＰ、Ｈ２Ｏ２、および電子供給体としてのＫＩ、ＮＨ４Ｂｒ、ＮａＳＣＮ、またはＮａＢｒのいずれかを所望の濃度で別々に試験管中のリン酸緩衝液に加え、各種のＬＰ抗菌系を形成した。次にこの緩衝液を3x 106細胞／mlの緑膿菌と共に接種した。接種後の接触（または処理)時間４時間後に液1.0mlを試験管から取り出し、栄養寒天上に植え殺菌不活化溶液を希釈ブランクにして１０−２、１０−３、および１０−４倍希釈した。寒天プレートを３７℃で２〜３時間インキュベートし、コロニー数をカウントした。コントロール培地のｃｆｕ/mlに基づいて殺菌率および対数減少値（logreduction）を計算した。コントロール培地にはリン酸緩衝液５ml中の細菌のみが含有された。
【００６４】
図１には、上記したリン酸緩衝液中４時間の処理による、各種電子供与体を含むＬＰ系の緑膿菌に対する抗菌活性をまとめてある。全ての系についてＬＰ濃度は２００ｐｐｍとし、各電子供与体の濃度は０．０２Ｍとした。Ｈ２Ｏ２濃度を図１に示すごとく変化させた。ＬＰをＨ２Ｏ２および電子供与体、すなわちＫＩ、ＮＨ４Ｂｒ、またはＮａＳＣＮと組み合わせると強力な抗菌性のＬＰ系が形成された。抗菌活性は、この系で各種電子供与体を使用するに応じて変化した。結果から、テストしたＬＰ系の中でＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＫＩ系が活性に関して最強であったのが判る。その次に強力な抗菌系はＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒであり、Ｈ２Ｏ２の濃度が５ｐｐｍ以上の場合には対数減少値が４．５を超えた。Ｈ２Ｏ２の濃度が５ｐｐｍを超える場合にはＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の結果はＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＫＩ系に匹敵するとの判明は重要である。理由は、ＮＨ４ＢｒはＫＩよりも遥かに安価で広く入手可能だからである。したがって、各種産業用の酵素ベース抗菌系を開発する上でＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系には大きな潜在能がある。他の二つの系、すなわちＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮａＢｒおよびＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮａＳＣＮでは、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系程の好結果が効果に関して生じなかった。それらの活性はＨ２Ｏ２単独とほぼ同じまたは以下であった〈図２参照）。特に、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の結果をＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮａＢｒ系の結果と比較するデータから判明するごとく、ＮａＢｒの代わりにＮＨ４Ｂｒを使用する場合に改良は劇的である。
【００６５】
比較実験として、緩衝液中にＨ２Ｏ２単独を使用し電子供与体および酵素を加えないテスト、およびＨ２Ｏ２とＮＨ４Ｂｒとを使用し酵素を加えないテストを緑膿菌に対してリン酸緩衝液（ｐＨ６）中４時間の処理で実施した。上記のごとく、ＬＰ濃度はＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系について２００ｐｐｍとした。ＮＨ４Ｂｒ濃度はＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４ＢｒおよびＨ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒの両方の系について０．０２Ｍとした。Ｈ２Ｏ２濃度は図２に示すように変化させた。図２から、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系がＨ２Ｏ２−ＮＨ４ＢｒおよびＨ２Ｏ２単独に優る有利が明瞭である。特にＨ２Ｏ２−ＮＨ４ＢｒにＬＰが加わると、この酵素のないＨ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒの活性に比べて活性が２対数を超えて増加している。この酵素の働きにより、Ｈ２Ｏ２＋ＮＨ４Ｂｒ→Ｂｒ＋（ＨＯＢｒ）＋ＮＨ２Ｂｒ＋Ｈ２Ｏの反応が右手側に押しやられ、更に多くの強力な抗菌性産生物が生ずることが考えられる。
【実施例２】
【００６６】
パルプスラリー中での緑膿菌に対する各種ラクトペルオキシダーゼの抗菌効果
【００６７】
ＬＰ系の成分を別々にパルプスラリーに加えて各種ＬＰ抗菌系を形成した。この評価実験には実施例１に記載と同様なテスト手順を使用した。唯一の変更点としてリン酸緩衝に代えてパルプスラリーを使用した。パルプスラリーは、白色に漂白された乾燥パルプを５ｇ／Ｌ、陽イオンでんぷんを０．０２５ｇ／Ｌ、ＣａＣＯ３を０．７５ｇ／Ｌ、ＡＳＡサイズを０．０１ｇ／Ｌ、保持助剤を０．００２５ｇ／Ｌ、脱泡剤を０．００１２ｇ／Ｌを含有していた。パルプスラリーの稠度は固体の約０．５〜０．７％であった。滅菌後のパルプスラリーの最終ｐＨは約７．５〜８．０であった。
【００６８】
パルプスラリー中１８時間の処理による、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の緑膿菌に対する抗菌活性を、Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４ＢｒおよびＨ２Ｏ２単独の活性との比較で図３に示す。ＬＰ濃度は２００ｐｐｍとした。ＮＨ４Ｂｒ濃度はＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４ＢｒおよびＨ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒの両系について１０００ｐｐｍとした。Ｈ２Ｏ２濃度は図のように変化させた。図３から、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系ではＨ２Ｏ２濃度が５ｐｐｍ以上の場合に１８時間以内に対数減少値が５．８を超えたことが判る。ＬＰが加わると系の活性は、この酵素のないＨ２Ｏ２−ＮＨ４ＢｒまたはＨ２Ｏ２単独の活性に比べて劇的に増大した。パルプスラリー中でのＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の結果はリン酸緩衝液中での（実施例１での）結果と一致した。
【００６９】
同じテスト手順を実施して、パルプスラリー中３０分の処理による、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＫＩ系の緑膿菌に対する抗菌活性を、Ｈ２Ｏ２−ＫＩおよびＨ２Ｏ２単独の活性との比較で対比した。ＬＰ濃度は２００ｐｐｍとした。ＫＩ濃度はＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＫＩおよびＨ２Ｏ２−ＫＩの両系について１０００ｐｐｍとした。図４から、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＫＩ系はＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系よりも強力な活性をより短時間にかつより低い過酸化物濃度（１〜２ｐｐｍ）にて生じたことが判る。
【実施例３】
【００７０】
ＬＰ抗菌系における酸化剤としての過ホウ酸塩、過炭酸塩、およびカルバマイド過酸化物の効果
【００７１】
過ホウ酸ナトリウム、過炭酸ナトリウム、およびカルバマイド過酸化物がＬＰ系において抗菌活性を生ずる効果をテストするために、ＮＨ４Ｂｒを電子供与体として使用した。
【００７２】
酸化剤、ＬＰ、およびｖを別々にパルプスラリーに加えた。テスト手順は実施例２に記載と同じにした。図５、６および７に、酸化剤として過ホウ酸塩（ＮａＢＯ３）、過炭酸塩（ＮａＰｅｒＣ）、およびカルバマイド過酸化物（ＣＰ）を使用した場合のＬＰ系の抗菌活性を示す。図５に、パルプスラリー中１８時間処理によるＬＰ−ＮａＢＯ３−ＮＨ４Ｂｒ系の緑膿菌に対する抗菌活性を、ＮａＢＯ３−ＮＨ４Ｂｒ単独の活性との対比で示す。ＬＰ濃度は２００ｐｐｍとし、ＮＨ４Ｂｒ濃度は１０００ｐｐｍとした。ＮａＢＯ３濃度は図に示すように変化させた。図６に、パルプスラリー中１８時間処理によるＬＰ−ＮａＰｅｒＣ−ＮＨ４Ｂｒ系の緑膿菌に対する抗菌活性を、ＮａＰｅｒＣ−ＮＨ４Ｂｒ単独の活性との対比で示す。ＬＰ濃度は２００ｐｐｍとし、ＮＨ４Ｂｒ濃度は１０００ｐｐｍとした。ＮａＰｅｒＣ濃度は図に示すように変化させた。図７に、パルプスラリー中２４時間処理によるＬＰ−ＣＰ−ＮＨ４Ｂｒ系の緑膿菌に対する抗菌活性を、ＣＰ単独の活性との対比で示す。ＬＰ濃度は２ｐｐｍとし、ＮＨ４Ｂｒ濃度は６０ｐｐｍとした。ＣＰ濃度は図に示すように変化させた。過ホウ酸塩および過炭酸塩の系では、同レベルの活性が生じ、それらは過酸化水素の系に匹敵したが、酸化剤の濃度は高くなった。ＬＰ−ＮａＢＯ３−ＮＨ４ＢｒおよびＬＰ−ＮａＰｅｒＣ−ＮＨ４Ｂｒの系では活性は１０ｐｐｍの過ホウ酸塩または過炭酸塩から出現開始した（図５および６）が、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒの系では活性は５ｐｐｍのＨ２Ｏ２から始まった（図３）。このことは、過炭酸ナトリウムの過酸化水素含量が重量で約２５％に過ぎない事実によって説明可能である。ＬＰ−ＣＰ−ＮＨ４Ｂｒ系では、１〜２ｐｐｍのカルバマイド過酸化物から強力な活性が生じた〈図７〉。ＬＰ−ＣＰ−ＮＨ４Ｂｒ系は、使用する酸化剤濃度が他の三つの系、すなわちＬＰ−ＮａＢＯ３−ＮＨ４Ｂｒ（図５）、ＬＰ−ＮａＰｅｒＣ−ＮＨ４Ｂｒ(図６)、およびＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ（図３）よりもかなり低いが、生ずる活性は強い。これの理由は、ＬＰ−ＣＰ−ＮＨ４Ｂｒ系で使用したＬＰ濃度（２ｐｐｍ）およびＮＨ４Ｂｒ濃度（６０ｐｐｍ）が他の三つの系で使用した２００ｐｐｍのＬＰおよび１０００ｐｐｍのＮＨ４Ｂｒよりも遥かに低かったからである。他の三つの系でのＬＰおよびＮＨ４Ｂｒの濃度は最適ではなかったので、過剰量のＬＰおよびＮＨ４Ｂｒが系中のＨ２Ｏ２の一部を消費することができた。次の実施例４ではＬＰ系の最適化を検討する。
【実施例４】
【００７３】
ＬＰ系の成分を最適濃度で個別に添加
【００７４】
ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の各成分の最適濃度を決定するために、１つの成分の濃度を変化させ、他の二つの成分の濃度を過剰に保持した。例えば、ラクトペルオキシダーゼの最適濃度を決定するために、Ｈ２Ｏ２濃度を５ｐｐｍに保持し、ＮＨ４Ｂｒ濃度を１０００ｐｐｍに保持し、ＬＰ濃度を０．１から２００ｐｐｍまで変化させた。ＮＨ４Ｂｒの最適濃度を決定するために、Ｈ２Ｏ２濃度を５ｐｐｍに保持し、ＬＰ濃度を２００ｐｐｍに保持し、ＮＨ４Ｂｒ濃度を１から２００ｐｐｍまで変化させた。Ｈ２Ｏ２の最適濃度を決定するために、ＮＨ４Ｂｒ濃度を１００ｐｐｍに保持し、ＬＰ濃度を１ｐｐｍに保持し、Ｈ２Ｏ２濃度を０．１から５ｐｐｍまで変化させた。ＬＰ系の抗菌効果を評価するテスト手順は実施例１および２に記載されている。
【００７５】
実施例２のデータから、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒの抗菌系は、２００ｐｐｍのＬＰ、５ｐｐｍのＨ２Ｏ２、および１０００ｐｐｍのＮＨ４Ｂｒを組み合わせた場合に緑膿菌の対数減少値は５．５を超えたことが判る。前の評価実験の間中、系のこれら三つの成分は全て〈特に、ＬＰおよびＮＨ４Ｂｒ）量的に過剰であったと考えられた。各成分の最小有効濃度（対数減少値を＞５とするための）を求めるために、上記のように組合せの一つの成分濃度を変化させ、他の二つの成分を過剰に保持した。図８はＬＰ濃度に対するＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の抗菌活性を示す。テストでは、Ｈ２Ｏ２濃度（５ｐｐｍ）およびＮＨ４Ｂｒ濃度（１０００ｐｐｍ）を過剰に保持し、ＬＰ濃度を０．１ｐｐｍから２００ｐｐｍまで変化させた。図８のデータから、ＬＰ濃度が０．２ｐｐｍ以上である限りＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系によって対数減少値が５を超えたことが示されている。ＬＰが０．１ｐｐｍで系は対数減少値が４．４に達した。したがって、対数減少値が＞５に達するためのＬＰの最小有効濃度は０．２ｐｐｍであると結論された。同様に、ＮＨ４Ｂｒの最小有効濃度は５０ｐｐｍであると判った〈図９）。ＮＨ４Ｂｒ濃度が更に増大して５０ｐｐｍを超えても、系の効果は有意に上昇しなかった。また、対数減少値が＞５を達成するためのＨ２Ｏ２の最小有効濃度は図１０に示されるように０．５ｐｐｍであることが判った。Ｈ２Ｏ２濃度が更に増大して０．５ｐｐｍを超えても系の活性は上昇しなかった。各成分の最小有効濃度は、これらを組み合わせた系が最大活性を達成するための各最低濃度と考えられる。濃度を更に増大して最小有効濃度を超えても、系の抗菌活性の上昇に有意に寄与せず、したがって過剰と考えられる。
【００７６】
図８、９、および１０から、対数減少値が＞５を達成するための各成分、すなわちＬＰ、Ｈ２Ｏ２、およびＮＨ４Ｂｒの最小有効濃度はそれぞれ０．２、０．５、および５０ｐｐｍであることが証明される。各成分の最小有効濃度を得るためには、組合せの他の二つの成分をテストの間は過剰に保持する。表１から、系の最適組合せは、ＬＰ＝１ｐｐｍ／Ｈ２Ｏ２＝１ｐｐｍ／ＮＨ４Ｂｒ＝４０ｐｐｍであることが判った。ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系が組合せの最適濃度である場合に対数減少値が＞５．５となった。この系の三成分の比は、重量でＬＰ：Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ＝１：１：４０であった。表１の他のいくつかの組合せも最適組合せと考えることができた。それらは、（１）ＬＰ：Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ＝０．５：０．５：６０、（２）ＬＰ：Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ＝０．５：１：６０である。
パルプスラリー中（１８時間処理）緑膿菌に対するＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の各種濃度の組合せでの抗菌活性
【表１】
【実施例５】
【００７７】
予めの混合によるＬＰ抗菌系
【００７８】
ＬＰ抗菌系をイン サイツー（in situ）に作成可能にするために各成分を別々に投与部位に加える。あるいは、ＬＰ系を作成可能にするためにすべての成分を予め混合して濃厚液にする。次にこの混合液を処理対象部位に投与してもよい。以下の実施例はＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ抗菌系を予めの混合により作成するのを示す。
【００７９】
ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒの典型的な予めの混合による溶液を次のように調製した。０．０５ｇのＬＰと０．５ｇのＮＨ４Ｂｒを１オンスのガラス瓶に加えた。１０ｍｌのＤＩ水を瓶に加えて全ての内容物を溶解した。次に、０．５ｇの３０％Ｈ２Ｏ２を瓶に加え溶液中に三成分を一体に混合させた。この混合液には０．５％（Ｗ／Ｖ）ＬＰ、１．５％Ｈ２Ｏ２、および５％ＮＨ４Ｂｒが含有された。この溶液の重量比はＬＰ：Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒとして１：３：１０であった。他の比率と濃度の混合液も調製した。溶液を調製後直ちに（０時間とする)、混合液１０μｌを１０ｍLのパルプスラリーに加え、パルプスラリー中の最終濃度をＬＰは５ｐｐｍ、Ｈ２Ｏ２は１５ｐｐｍ、およびＮＨ４Ｂｒは５０ｐｐｍにした。微生物テストを実施するために実施例２に記載の手順を利用し、混合溶液についての抗菌テストを混合後１、２、４、６および８時間目に繰り返した。
【００８０】
ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ混合物の効果が水溶液中で保たれる期間をテストするために、三成分をＤＩ水中に一体に混合し、パルプスラリー中での混合液の抗菌活性を混合後の各時間にテストした。混合物は三つの異なる重量比、ＬＰ：Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ＝（１）１：１：４０、（２）１：１：１０、（３）１：３：１０、についてテストした。それぞれの比について高濃度での混合および低濃度での混合を行った（表２）。混合液の抗菌活性の結果を表２に示す。
混合後の時間に対するＬＰ／Ｈ２Ｏ２／ＮＨ４Ｂｒ混合液の抗菌活性（パルプスラリー中での緑膿菌に対するテスト）
【表２】
＃ パルプスラリー中の各成分の最終濃度は以下の通りである：
（１）１：１：４０比−ＬＰ＝１０ｐｐｍ；Ｈ２Ｏ２＝１０ｐｐｍ；ＮＨ４Ｂｒ＝４００ｐｐｍ。
（２）１：１：１０比−ＬＰ＝１０ｐｐｍ；Ｈ２Ｏ２＝１０ｐｐｍ；ＮＨ４Ｂｒ＝１００ｐｐｍ。
（３）１：３：１０比−ＬＰ＝５ｐｐｍ；Ｈ２Ｏ２＝１５ｐｐｍ；ＮＨ４Ｂｒ＝５０ｐｐｍ。
＊（Ｈ）−高濃度混合，（Ｌ）−低濃度混合
【００８１】
三成分を混合した後、混合液の抗菌活性を安定に維持するには成分の比率が重要であることが判った。混合物中の成分の濃度は重要でないことが判った。１：３：１０の比率では高濃度でも低濃度でも混合後少なくとも８時間は強力な抗菌活性が維持された。実施例４の上記データから、各成分を別々にパルプスラリーに加えた場合に１：１：４０が最良の比率であることが示された。しかし、１：１：４０の比率は三成分を予め一体に混合し次に混合物としてテスト系に投与する場合には有効でないことが判った。予め混合する溶液ではＨ２Ｏ２を１：３：１０の比率に増加するのが好ましく、好ましい活性が安定に保持された。
【実施例６】
【００８２】
パルプ物体中に別々に加えたＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−グルコースオキシダーゼ（ＧＯ）／グルコースの緑膿菌に対する抗菌活性
【００８３】
ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−グルコースオキシダーゼ（ＧＯ）／グルコース系の抗菌効果を求めるために以下の手順を行った。０．０４ｇのグルコースを１／２オンスのガラス瓶中の１０ｍｌの無菌パルプ物体に加えて０．４％（Ｗ／Ｖ)グルコースをテスト系に供給した。１００ｐｐｍのＮＨ４Ｂｒと５ｐｐｍのＬＰを１０ｍｌのパルプ物体に加え、最後にＧＯをパルプスラリーに２．５単位／Ｌから５、１０、２０、４０、５０、１００、および２００単位／Ｌまでの各濃度で加えた。同じ手順をＧＯ−グルコース系をテストするのに行った。ただしこの系ではＮＨ４ＢｒとＬＰがパルプスラリーに加えられていない。全て加えた後に内容物を十分に混合し、接種材料緑膿菌を瓶中に入れて約３×１０７細胞／ｍｌの濃度にした。接種後２４時間目に１．０ｍｌの内容物を各瓶から取り出し、栄養寒天培地上に植え、希釈ブランクとしての抗菌不活性化溶液を使用して１０−２、１０−３、および１０−４倍に希釈した。全プレートを３７℃で２〜３日間インキュベートし、プレートのコロニー数をカウントした。コントロールおよび処理培地のｃｆｕ/mlを基に殺滅率と対数減少値を計算した。コントロール培地には１０ｍｌパルプスラリー中の細菌細胞のみを含有させた。
【００８４】
ＬＰ、ＮＨ４Ｂｒ、およびグルコースの濃度を固定し、ＧＯ濃度を２．５〜２００ｐｐｍの範囲で変化させたＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系をパルプスラリー中で２４時間テストした。結果を表３に示す。
パルプスラリー中（２４時間処理）各ＧＯ濃度でのＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系の緑膿菌に対する効果
【表３】
【００８５】
ＧＯ濃度が５および１０Ｕ／Ｌに上昇するのに応じて、系は抗菌活性を生じた（２．６〜３．６対数減少値）。ＧＯ濃度が更に上昇して２０Ｕ／Ｌ以上になるに応じて、系は強力な抗菌活性を生じ、対数減少値が＞５．６となった〈表３）。したがって、＞５の対数減少値を達成するにはＧＯ濃度が約２０Ｕ／Ｌ(０．５ｐｐｍ相当)以上であるのが好ましい。
【００８６】
ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系とＧＯ／Ｇｌｕ単独との抗菌効果の比較を図１１に示す。二つの系を同一のＧＯ濃度範囲で比較した。ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系は５Ｕ／ＬのＧＯで生ずるのに対し、ＧＯ／Ｇｌｕ単独では効果発生を開始するにはかなり高いＧＯ濃度（８０Ｕ／Ｌ）が必要であるのが判った。ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系では僅か２０Ｕ／ＬのＧＯによって＞５の対数減少値が達成されるのに対し、ＧＯ／Ｇｌｕのみを使用する場合には２００Ｕ／ＬのＧＯによって＞５の対数減少値が達成される〈図１１〉。ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系は、ＧＯ／Ｇｌｕが単独で作用するよりも遥かに強力な抗菌活性を示した。ＧＯ／Ｇｌｕ系は抗菌剤としてＨ２Ｏ２のみを生ずるので、これらの結果から、ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系は、Ｈ２Ｏ２よりも強力な臭素が関連する抗菌性化合物を生ずるのが示唆される。
【００８７】
ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／グルコース系およびＧＯ−グルコース系について時間−殺菌の検討を実施するために以下の手順を行った。０．０４ｇのグルコース、５０ｐｐｍのＮＨ４Ｂｒ、および２ｐｐｍのＬＰを１／２オンスのガラス瓶中の無菌パルプ物体１０ｍｌに加え、最後にこのパルプスラリーに２０単位／ＬのＧＯを加えた。ＧＯ／Ｇｌｕのみの系については、０．０４ｇのグルコースと２００単位／ＬのＧＯのみを１０ｍｌのパルプスラリーに加えた。全てを加えた後、内容物を十分に混合し、接種のために約３×１０７細胞／ｍｌの緑膿菌を瓶中に入れた。接種後の所定の接触時間（１分から５、１０、２０、３０分、および１時間、２、４、６、８、および２４時間）に１．０ｍｌの内容物を処理培地から取り出し、栄養寒天培地上に植え、希釈ブランクとしての抗菌不活性化溶液を使用して１０−２、１０−３、および１０−４倍に希釈した。プレートを３７℃で２〜３日間インキュベートした。プレートのコロニー数をカウントし、コントロールおよび処理培地のｃｆｕ/mlを基に殺滅率と対数減少値を計算した。
【００８８】
パルプ物体中ＧＯの最適濃度（２０Ｕ／Ｌ）にてＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系を接触時間〈処理時間）に対応してテストし、殺滅速度を求めた。対数減少値を接種後の各接触時間にて測定した。ＧＯ＝２００Ｕ／ＬでのＧＯ／Ｇｌｕ系を比較のために加えた。テスト結果を図１２に示す。図に示すごとく、ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系は迅速な殺滅作用を示し、接触時間１０分で対数減少値が４に達した。この系は２時間の処理後に対数減少値が＞５．５になった。ＧＯ／Ｇｌｕ系は、抗菌剤としてはＨ２Ｏ２を生じているので、殺滅速度はかなり緩慢であった。ＧＯ／Ｇｌｕ系では、ＧＯ濃度が１０倍大きくても〈２００対２０Ｕ／Ｌ）２時間接触後の対数減少値は僅か１．０であった。それが＞５．５の対数減少値に到達したのは２４時間処理後であったので、ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系よりも２２時間遅い。この結果から、ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系から生ずる臭素化合物、例えばブロマミンおよびＨＯＢｒが呈する殺滅速度はＧＯ／Ｇｌｕ系から生ずる過酸化水素よりもかなり急速であると示唆される。ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系には、その迅速な殺滅挙動により衛生剤／消毒剤としての潜在的な用途がある。
【実施例７】
【００８９】
ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−Ｈ２Ｏ２系の抗菌活性へのｐＨ効果
【００９０】
ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−Ｈ２Ｏ２の抗菌活性へのｐＨの効果を次のように求めた。ＬＰをＮＨ４Ｂｒと共に水道水中に予め混合して溶液とした。次にこの溶液を水酸化ナトリウムまたは塩酸でいろいろなｐＨ値に調整した。次にこのｐＨ調整したＬＰ／ＮＨ４Ｂｒ溶液を希薄Ｈ２Ｏ２溶液と混合し、三成分を含有し抗菌活性を有する最終の混合液とした。この最終混合液をパルプスラリーに加え、ＬＰ系の抗菌活性を評価するのに望ましい濃度の成分とした。
【００９１】
予め混合しｐＨ調節したＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−Ｈ２Ｏ２溶液を具体的に調製するのを以下に記載してもよい。０．５ｇのＮＨ４Ｂｒおよび０．０５ｇのＬＰを４オンスのガラス瓶中の水道水５０ｍLに加え、よく混合してｐＨ６．９５の溶液を得た。塩酸（１Ｎ）を使用してこのＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ溶液をｐＨ２．９２に調製した。別の４オンス瓶にて０．５ｇのＨ２Ｏ２（３０％）を５０ｍLの水道水に加えて希薄Ｈ２Ｏ２溶液（ｐＨ〜６．５）を作った。希薄Ｈ２Ｏ２溶液をＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ溶液中にゆっくり注ぎ、緩やかに混合して三成分を全て含む混合溶液とした。最終の混合液はｐＨが３．４で、０．０５％ＬＰ、０．１５％Ｈ２Ｏ２、および０．５％ＮＨ４Ｂｒを含有した。全三成分を混合して溶液とした後直ちにＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−Ｈ２Ｏ２の混合液０．２ｍＬを１０ｍＬのパルプスラリーに加えてパルプ物体に１０ｐｐｍのＬＰ、３０ｐｐｍのＨ２Ｏ２、および１００ｐｐｍのＮＨ４Ｂｒとした。抗菌テストを実施例１に記載の手順により実施した。結果を表４に示す。
【００９２】
上記のごとく、予め混合したＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−Ｈ２Ｏ２の溶液のｐＨは系の抗菌効果に影響可能である。最良の条件は三成分を水中にｐＨ調整せずに混合するか、またはｐＨを僅かにアルカリ条件に調節することである。ｐＨ調整せずに予め混合した溶液のｐＨは中性域である。
パルプスラリー中１８時間処理におけるＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−Ｈ２Ｏ２の緑膿菌に対する抗菌効果へのｐＨ効果
【表４】
＊ｐＨ６．９のＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−Ｈ２Ｏ２混合液を調製するために三成分をｐＨ調製せずに混合した。
【実施例８】
【００９３】
ＬＰ系のハロゲン化物源とアンモニウム源としてのＮａＢｒ／（ＮＨ４）２ＳＯ４とＮＨ４Ｂｒの抗菌効果の比較
【００９４】
ハロゲン化物源とアンモニウム源としてのＮａＢｒ／（ＮＨ４）２ＳＯ４を含有するＬＰ系の抗菌活性をパルプスラリー中において評価し、ＮＨ４Ｂｒを含有するＬＰ系と比較した。ＬＰ系の成分を別々にパルプスラリーに加えて各種ＬＰ抗菌系を形成した。実施例２に記載と同様なテスト手順を使用して本評価実験を行った。パルプスラリー中でのＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮａＢｒ／（ＮＨ４）２ＳＯ４系とＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の緑膿菌に対する抗菌活性の比較を表５に示す。ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮａＢｒ／（ＮＨ４）２ＳＯ４系により生ずる活性レベルは、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の活性と同じまたは僅かに上であることが判った。
パルプスラリー中（別々に加えて２４時間処理）による、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮａＢｒ／（ＮＨ４）２ＳＯ４系とＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の緑膿菌に対する抗菌活性の比較
【表５】
【００９５】
同様に、ＮａＢｒ／（ＮＨ４）２ＳＯ４をＬＰ−ＧＯ／グルコース系におけるＮＨ４Ｂｒと比較した。表６は、パルプスラリー中別々に加えることによる、ＬＰ−ＧＯ／ｇｌｕ−ＮａＢｒ／（ＮＨ４）２ＳＯ４系とＬＰ−ＧＯ／ｇｌｕ−ＮＨ４Ｂｒ系の緑膿菌に対する抗菌活性を示す。ＬＰ−ＧＯ／ｇｌｕ−ＮａＢｒ／（ＮＨ４）２ＳＯ４系により生ずる活性レベルは、ＬＰ−ＧＯ／ｇｌｕ−ＮＨ４Ｂｒ系の活性と同じまたは僅かにより良であった〈表６）。
【００９６】
ＬＰ系に抗菌剤を作成するためのハロゲン化物源およびアンモニウム源としての二つの水溶性塩、すなわちＮａＢｒと（ＮＨ４）２ＳＯ４を組み合わせると、その有効性はＮＨ４Ｂｒと同じまたは僅かにより良であると結論される。
パルプスラリー中（別々に加えて２４時間処理）による、ＬＰ−ＧＯ／ｇｌｕ−ＮａＢｒ／（ＮＨ４）２ＳＯ４とＬＰ−ＧＯ／ｇｌｕ−ＮＨ４Ｂｒの緑膿菌に対する抗菌効果の比較
【表６】
【００９７】
本明細書に引用された全ての参照文献の全内容は出願人が特別に編入するものである。更に、量、濃度、あるいは他の値またはパラメータが、範囲、好ましい範囲、あるいは好ましい上方値と好ましい下方値のリストとして提示されている場合には、これは上方の範囲限界または好ましい値と下方の範囲限界または好ましい値との対によって形成される全ての範囲を特定的に開示しており、範囲が分離して開示されているか否かには係わらないと理解すべきである。本明細書において数値の範囲が挙げられている場合は、特に言及しない限り、その範囲には、範囲の末端点が包含され、また範囲内の全ての整数および分数が包含されるものとする。ある範囲を定義する際に挙げた特別の値に本発明の範囲が限定されるものとしてはならない。
【００９８】
本明細書に開示した本発明の説明と実施要領を参酌すれば、本発明の他の実施態様は当業者にとって自明である。本説明と実施例は単なる例示と考えるべきであり、本発明の範囲および要旨は以下の特許請求の範囲およびそれの均等物によって示されるものとする。
【図面の簡単な説明】
【００９９】
【図１】燐酸緩衝液（ｐＨ６．０）中、各種濃度のＨ２Ｏ２での緑膿菌（P. aeruginosa）に対する抗菌効果を各種ラクトペルオキシダーゼ系について比較したグラフである。
【図２】燐酸緩衝液（ｐＨ６．０）中、各種濃度のＨ２Ｏ２での緑膿菌に対する抗菌効果をＨ２Ｏ２単独、Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ、およびＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒについて比較したグラフである。
【図３】パルプスラリー中、各種濃度のＨ２Ｏ２での緑膿菌に対する抗菌効果をＨ２Ｏ２単独、Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ、およびＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒについて１８時間処理してから比較したグラフである。
【図４】パルプスラリー中、各種濃度のＨ２Ｏ２での緑膿菌に対する抗菌効果をＨ２Ｏ２単独、Ｈ２Ｏ２−ＫＩ，およびＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＫＩについて３０分処理してから比較したグラフである。
【図５】パルプスラリー中、各種濃度のＮａＢＯ３での緑膿菌に対する抗菌効果をＬＰ−ＮａＢＯ３−ＮＨ４ＢｒおよびＮａＢＯ３−ＮＨ４Ｂｒについて１８時間処理してから比較したグラフである。
【図６】パルプスラリー中、各種濃度のＮａＰｅｒＣでの緑膿菌に対する抗菌効果をＬＰ−ＮａＰｅｒＣ−ＮＨ４ＢｒおよびＮａＰｅｒＣ−ＮＨ４Ｂｒについて１８時間処理してから比較したグラフである。
【図７】パルプスラリー中、各種濃度のＣＰでの緑膿菌に対する抗菌効果をＬＰ−ＣＰ−ＮＨ４ＢｒおよびＣＰ（カルバマイド過酸化物）単独について２４時間処理してから比較したグラフである。
【図８】パルプスラリー中、一定濃度のＨ２Ｏ２およびＮＨ４Ｂｒでの緑膿菌に対する抗菌効果をＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４ＢｒについてＬＰ濃度の関数として示すグラフである。
【図９】パルプスラリー中、一定濃度のＨ２Ｏ２およびＬＰでの緑膿菌に対する抗菌効果をＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４ＢｒについてＮＨ４Ｂｒ濃度の関数として示すグラフである。
【図１０】パルプスラリー中、一定濃度のＮＨ４ＢｒおよびＬＰでの緑膿菌に対する抗菌効果をＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４ＢｒについてＨ２Ｏ２濃度の関数として示すグラフである。
【図１１】パルプスラリー中、各種濃度のＧＯでの緑膿菌に対する抗菌効果をＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／ＧｌｕおよびＧＯ／Ｇｌｕ単独について２４時間処理してから比較したグラフである。
【図１２】パルプスラリー中、緑膿菌に対する抗菌効果をＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／ＧｌｕおよびＧＯ／Ｇｌｕ単独について比較した時間−殺滅グラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水性系または物体上、例えば物体の１つ以上の表面における微生物の成育を抑制する組成物および方法に関する。また本発明は、ラクトペルオキシダーゼと他の成分との相互反応によって抗菌剤を形成することに関する。
【背景技術】
【０００２】
ペルオキシダーゼは自然界に広く分布する酵素群である。自然界における第一の機能は酸化反応への触媒作用であって、その酸化反応の間に過酸化水素或いは他の酸化剤が消費される。その酸化反応を前進させるためには、一般に電子供与体（還元剤）が必要である。
【０００３】
電子供与体としての、過酸化水素の存在下およびハロゲン化物またはチオシアン酸塩の存在下ではペルオキシダーゼによって、範囲の広い抗菌特性を有する生産物が得られる。ペルオキシダーゼの種類が変わる毎にそれらが反応し得るハロゲン化物またはチオシアン酸塩は特定される。例えば、ミエロペルオキシダーゼは電子供与体としてＣｌ−、Ｂｒ−、Ｉ−、またはＳＣＮ−を利用し、それらを酸化して抗菌性のヒポハロゲン化物またはヒポチオシアン酸塩を形成する。しかしラクトペルオキシダーゼはＢｒ−、Ｉ−、またはＳＣＮ−の酸化を触媒して抗菌性の生産物を生ずるが、Ｃｌ−の酸化は触媒しない。ホースラディッシュペルオキシダーゼは電子供与体としてＩ−のみを利用してＩ２、ＨＩＯ、およびＩＯ−を産生する。ペルオキシダーゼ−ハロゲン化物−Ｈ２Ｏ２の抗菌系を利用している応用領域には食品、乳製品、パーソナルケア、および家畜用製品がある。
【０００４】
Allenの米国特許第 5,451,402号（特許文献１）には酵母および芽胞微生物をハロペロキシダーゼ含有組成物で殺滅する方法が記載されており、この組成物はヒトまたは動物での防腐剤による治療処置および植物微生物および黴胞子の消毒殺菌のための生体内投与において有用であると言われている。
【０００５】
Johansenによる米国特許出願公開第
2002/0119136（Al）号明細書（特許文献２）は、カプリナスペルオキシダーゼ、過酸化水素、および増強剤、例えば電子供与体を含有する抗菌組成物に関する。この組成物は、洗濯物、人や動物の皮膚、毛髪、粘膜、口腔、歯、傷口、傷、および固い表面に存在する微生物を阻害または殺滅するのに有用と言われている。またこの組成物は化粧品の保存剤としても、また水処理、食品加工、化学的薬剤的操作、紙パルプ処理で使用する加工装置の上や水の衛生設備の上を洗浄、消毒あるいは微生物の成育阻害をするのにも使用できる。
【０００６】
Johansenの米国特許第6,251,386号（特許文献３）
および米国特許第6,818,212（B2）号（特許文献４）明細書は、ハロペロキシダーゼ、過酸化水素源、ハロゲン化物源、およびアンモニウム源を含有する抗菌組成物、および微生物の成育を殺滅阻害するためにこの組成物を使用する方法に関する。またこの特許には、ハロゲン化物とアンモニウム源の間には未知の相乗効果があると記載している。
【０００７】
Claessonらの米国特許第6,149,908号（特許文献５）は、ヘリコバクターピロリ（Helicobacter pylori）感染の治療薬剤の製造にあたり、ラクトペロキシダーゼ、過酸化物供給体、およびチオシアン酸塩を使用することに関する。
【０００８】
Galleyらの米国特許第5,607,681号（特許文献６）には、ヨウ化物またはチオシアン酸塩アニオン、グルコースオキシダーゼおよびＤ−グルコース、およびラクトペルオキシダーゼを含有する抗菌組成物が記載されている。この特許では、組成物は濃厚な反応性のない形態、例えば乾燥粉末や非水溶液で提供されてもよいと述べられている。この組成物は、口腔衛生、除臭、および頭髪ふけ防止の各製品で使用すると強力な抗菌活性を呈する保存剤としてあるいは活性剤として有用であると述べられている。
【０００９】
Goodらの米国特許第5,250,299号（特許文献７）は、ｐＨを約１．５と約５の間に調整したヒポチオシアン酸塩生成系とジカルボン酸またはトリカルボン酸との相乗作用による抗菌組成物に関する。ヒポチオシアン酸塩生成系はラクトペルオキシダーゼ、チオシアン酸塩および過酸化水素から構成される。この特許には食品製造に係る表面の消毒方法、および家禽類に付着のサルモネラ菌および食品の表面に汚染している他のグラム陰性微生物の殺滅方法が記載されている。
【００１０】
Montgomeryの米国特許第5,176,899号（特許文献８）には、安定で抗菌性のある水性の歯磨き組成物が記載されており、これにはオキシドレダクターゼ酵素とそれの特異基質である過酸化水素産生基質が含有されている。ペルオキシダーゼは過酸化水素に作用して唾液に含まれているチオシアネートイオンを酸化し、抗菌濃度のヒポチオシアナイトイオンを産生する。
【００１１】
Guthrie(Knoll Aktiengesellschaft)らによる国際公開第98/49272号明細書（特許文献９）は、安定化された水性の抗菌性酵素組成物に関し、これにはラクトペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、ハロゲン化アルカリ金属塩、およびこの組成物に特定のｐＨを与えるキレート能を有する緩衝剤が含有されている。この組成物は乳製品、食品素材、医薬品に使用する抗菌剤として有用であると記載されている。
【００１２】
Bycroftらの米国特許第5,043,176号（特許文献１０）は、抗菌性のポリペプチドとヒポシアン酸成分との相乗作用による抗菌性組成物に関する。組成物を約３０〜４０℃の間、ｐＨ約３〜約５の間で投与する場合に相乗活性が見られる。この組成物はグラム陰性菌、例えばサルモネラ菌に対して有用であると言われている。好ましい組成物はナイシン、ラクトペルオキシダーゼ、チオシアン酸塩、および過酸化水素である。この組成物はサルモネラ生細胞の数を１０〜２０分間で６を超える対数で減少することができると述べられている。
【００１３】
Kesslerらの米国特許第4,937,072号（特許文献１１）には、ペルオキシダーゼ、過酸化物または過酸化物発生材料、およびヨウ化塩を含有するイン サイツー（in situ）で胞子を殺滅する消毒剤が記載されている。この三つの成分は反応しない状態で保存されているので、抗胞子性は不活性状態に維持される。三つの成分を水性の媒体中で混合すると、ペルオキシダーゼによって反応が触媒され抗菌性のないラジカルおよび／または副生物が生じてしまう。
【特許文献１】米国特許第 5,451,402号明細書
【特許文献２】米国特許出願公開第 2002/0119136（Al）号明細書
【特許文献３】米国特許第6,251,386号明細書
【特許文献４】米国特許第6,818,212号明細書
【特許文献５】米国特許第6,149,908号明細書
【特許文献６】米国特許第5,607,681号明細書
【特許文献７】米国特許第5,250,299号明細書
【特許文献８】米国特許第5,176,899号明細書
【特許文献９】国際公開第98/49272号明細書
【特許文献１０】米国特許第5,043,176号明細書
【特許文献１１】米国特許第4,937,072号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
工業的な工程、例えば製紙およびパルプ処理の工程では大量の水を使用するので、そのような処理の間およびそのような工程のための水の導入および貯蔵の設備では微生物の成育を阻害することが望ましい。
【００１５】
したがって、微生物の成育を防止、殺滅および／または阻害する方法であって、安価であり、低濃度で有効な組成物を使用し、しかも容易に入手可能な成分を利用する方法が望まれる。
【００１６】
また、微生物の成育を防止、殺滅および／または阻害する方法であって、塩化物または他の環境上望ましくない成分を使用しない方法が望まれる。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
微生物の成育を支える恐れのある水性系および物体上において微生物の成育を抑制する強力な抗菌性溶液を得るためには、ラクトペルオキシダーゼ(本明細書で「ＬＰ」と呼ぶ)、過酸化水素または過酸化物源、例えば過炭酸塩または酵素反応により過酸化物を発生する系、例えばグルコースオキシダーゼ／グルコース系（ＧＯ／glu）、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意にアンモニウム源を供給するのがよく、その供給の条件としてラクトペルオキシダーゼ、過酸化水素または過酸化物源由来の過酸化物、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、およびアンモニウム源が存在するならそれ由来のアンモニウムが相互に反応して水性系または物体に抗菌剤が供給されるのがよいことが判った。（ラクトペルオキシダーゼを含有する本明細書に記載の抗菌系または抗菌溶液は、本明細書では[ＬＰ系]または「ＬＰ抗菌系」と互換的に呼称してもよい）。各成分は水中に予め混合して溶液としておいてもよく、その場合にはそれら成分は相互に反応して抗菌剤を形成するので、得られる溶液の有効量を処理すべき水性系等の系または物体に投与すればよい。あるいは、処理すべき水性系等の系または物体上に各成分を個別に（または組み合わせて）加え、各成分の濃度を選択することによって活性な抗菌性組成物をイン サイツー（in situ）に形成し、処理すべき水性系等の系または物体上に所望期間維持させることもできる。
【００１８】
更に、本発明は、ラクトペルオキシダーゼ(ＬＰ)、過酸化水素または過酸化物源、例えばカルバマイド過酸化物、過炭酸塩、過ホウ酸塩、または過硫酸塩、または酵素反応により過酸化物を発生する系、例えばグルコースオキシダーゼ／グルコース系（ＧＯ／glu）、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意にアンモニウム源を含有する組成物を提供する。
【００１９】
更に、本発明は、少なくとも、ラクトペルオキシダーゼ、臭化アンモニウム、および酵素により過酸化物を発生する系の酵素基質、例えばグルコースの固体状混合物を１つの水溶解性容器に、また過酸化物を生成する固体状酵素、例えばグルコースオキシダーゼを別の水溶解性容器に含有する全て固体状の組成物を提供する。あるいは、この第一の水溶解性容器中の全て固体状の組成物は、ラクトペルオキシダーゼ、ヨウ化カリウム、および酵素基質の固体状混合物でも、ラクトペルオキシダーゼ、臭化ナトリウム、硫酸アンモニウム、および酵素基質の固体状混合物でもよい。本発明の別の方法では、強力な抗菌性溶液を形成するために、上記二つの容器の全固体を所望量の水に溶解してもよい。次に得られる溶液の有効量を処理すべき系または物体に投与すればよい。あるいは、上記二つの容器の内容物を別々に水に溶解して二つの別個の濃厚液を形成し、一の溶液には少なくともＬＰ、臭化アンモニウム、およびグルコースを含有させ、他の溶液には少なくともグルコースオキシダーゼを含有させればよい。次に得られる溶液の有効量を処理すべき系または物体に別々に加えてもよく、この場合には二つの溶液が水性系において反応し抗菌性組成物を形成する。
【００２０】
本明細書に記載のＬＰ系により強力な抗菌性組成物が生成されるが、これは過酸化水素が単独で作用するよりも遥かに強力であるのが好ましい。本発明は各種の工業用流体の系（例えば水性系）と工程において利用することができ、例えば限定されないが、製紙用の水系、パルプスラリー、製紙工程での白色水、冷却水系（冷却水、取り込み冷却水、および排出冷却水）、排水系、リサイクル用の水系、温泉浴、水泳プール、リクレーション用の水系、食品加工系、飲料水系、皮革なめし用の水系、金属加工用液体、および他の工業用水系が挙げられる。また、本発明方法は各種物体上での微生物の成育を抑制するのにも利用してよく、例えば限定されないが、表面被覆、金属、高分子材料、天然物体(例えば、石)、加工石、コンクリート、木材、ペイント、種子、植物、動物の皮、プラスチック、化粧料、パーソナルケア製品、医薬品、および他の工業材料が挙げられる。
【００２１】
本発明の更なる特徴と利点は、一部は以下の説明に記述されるが、一部は説明から自明であり、あるいは本発明の実施要領により知得してもよい。本発明の対象と他の利点は説明および添付の特許請求の範囲において具体的に指摘する要素および組合せによって実現達成される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
以下の概略説明および以下の詳細説明は単なる例示にすぎず、これらによって特許請求に係る本発明が限定されることはないと了解する必要がある。上に記載したおよび本出願書を通じて記載された特許、特許出願書類、および刊行物はそれらの全体が参照により本明細書に援用される。
【００２３】
付随の図面は、本願に編入されかつそれの一部を構成して、本発明の幾つかの実施態様を描出するものであり、説明と一体となって本発明の要旨説明に役立つ。
【００２４】
本発明は、水性系または物体上で微生物の成育を抑制する方法および組成物を提供し、ａ）ラクトペルオキシダーゼ（ＬＰ）、ｂ）過酸化水素または過酸化水素源、およびｃ）ハロゲン化物と任意にアンモニウム塩のようなアンモニウム源を使用する。ハロゲン化物とアンモニウム源の供給は臭化アンモニウムの形態でもよい。例えば、ＬＰ、過酸化水素、およびハロゲン化物の組合せ、またはＬＰ、過酸化水素、ハロゲン化物、およびアンモニウム塩の組合せによって、強力な抗菌性組成物が形成されるが、この組成物は過酸化水素が単独で機能するよりも遥かに活性であるのが好ましい。本発明は、微生物に侵襲されやすい製品、材料、または媒体の中または上で少なくとも１つの微生物の成育を抑制する方法を提供する。この方法には、製品、材料、または媒体に微生物の成育を抑制するのに有効な量の本発明組成物を加える段階がある。この有効量は、処理すべき製品、材料、または媒体に応じて変化し、具体的な投与ケースに応じて当業者が本明細書に記載の開示事項を参照しながら日常的に決定することができる。本発明組成物は、微生物に侵襲されやすい各種の工業用の製品、媒体、または材料において保存または少なくとも１つの微生物の成育抑制に有用である。そのような媒体または材料には、例えば限定されないが、染料、ペースト、木材、皮革、敷物、パルプ、木片、なめし用液、紙粉砕液、高分子乳化液、ペイント、紙等をコーティングおよび糊付けする薬剤、金属加工液、地面堀削用潤滑剤、石油化学品、冷却水系、リクレーション用の水、プラント用の流水、排水、滅菌水、レトルト式の加熱調理器具、医薬品製剤、化粧品製剤、および洗面用製剤が挙げられる。この組成物は種子や穀物を微生物による損傷から防護する目的で農業用製剤にも利用可能である。
【００２５】
この組成物は、広範な微生物に対し低濃度で優れた抗菌活性を呈するので好ましい。
【００２６】
本発明組成物は、微生物に侵襲されやすい製品、材料、または媒体の中または上で少なくとも１つの微生物の成育を抑制する方法において使用することができる。この方法には、製品、材料、または媒体に本発明組成物を加える段階があり、この場合にこの組成物の成分は微生物の成育を抑制するのに有効な量存在する。
【００２７】
前述のように、本発明組成物は、少なくとも１つの微生物に侵襲されやすい工業用の各種製品、材料、または媒体を保存するのに有用である。また本発明組成物は、種子や穀物を微生物による損傷から防護する目的で農業用製剤にも有用である。これらの保存および防護の方法を完璧にするために、製品、材料、または媒体に本発明組成物を加えるが、その量は製品、材料、または媒体を少なくとも１つの微生物による侵襲から防護し、あるいは種子や穀物を微生物による損傷から効果的に防護するのに有効な量である。
【００２８】
本発明方法により少なくとも１つの微生物の成育を抑制または阻害するとは、その成育を減少および／または防止することが含まれる。
【００２９】
少なくとも１つの微生物の成育を「抑制」（例えば、防止）すればその微生物の成育は阻害されたと理解する必要がある。換言すれば、その微生物の成育が存在しない、あるいは実質的に存在しない。少なくとも１つの微生物の成育を「抑制」すれば、その微生物集団は所望のレベルに維持され、集団は所望のレベル(検出不能限界、例えばゼロ集団まで)に減少され、および／または成育を阻害される。したがって、本発明の一実施態様では、少なくとも１つの微生物に侵襲されやすい製品、材料、または媒体が、その侵襲とその結果としての損傷およびこの微生物が原因の他の被害効果から保護されている。また、少なくとも１つの微生物の成育を「抑制」するとは、少なくとも１つの微生物を生物的に静かに減少し、および／またはその微生物のレベルを低く維持し、その結果としてその微生物の侵襲およびそれによる何かの損傷または他の被害効果が緩和されること、すなわちその微生物の成育速度または侵襲速度がスローダウンする、および／または皆無になることを含意すると理解する必要がある。
【００３０】
これら微生物の例には、黴類、菌類、藻類およびこれらの混合物が挙げられ、例えば限定されないが、トリコデルマビリデ（Trichodermaviride）、アスペルギルスニゲル（Aspergillusniger）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、肺炎杆菌クレブシエラニューモニア（Klebsiella pneumoniae）、およびクロレラエスピー（Chlorellasp）がある。本発明の組成物の毒性は低い。
【００３１】
ラクトペルオキシダーゼは糖タンパク質であり、非共有結合による１個のヘム基を有する。ミルク中の非免疫防御系の構成部分であり、ミルク中に約３０ｍｇ／Ｌの濃度で存在する。これはまた各種体液、例えば唾液、涙液、および鼻および腸の分泌液にも存在する。
【００３２】
ＬＰがハロペルオキシダーゼと相違する点は、ＬＰが酪農のナチュラル製品として牛乳から得られる酵素であるのに対し、ハロペルオキシダーゼは黴または細菌から発酵またはＤＮＡ組換え技術により得る酵素である。ＬＰとハロペルオキシダーゼの間の別の相違点は、ハロペルオキシダーゼがＣｌ−の酸化を触媒できるが、ＬＰはできない。現在、ＬＰは工業規模でかつ非常に精製された形態で入手できるが、ハロペルオキシダーゼは量的には実験規模でしか入手できない。したがって、ＬＰはハロペルオキシダーゼより安価であり、したがってＬＰがハロペルオキシダーゼに優る利点は、大量入手が可能であり、かつ価格が比較的に低いことである。
【００３３】
ラクトペルオキシダーゼ自体には抗菌活性がないが、Ｈ２Ｏ２が存在するとＢｒ−、Ｉ−、またはＳＣＮ−の酸化を触媒して抗菌性産物を生ずるが、Ｃｌ−の酸化は触媒しない。ＬＰ、Ｈ２Ｏ２および酸化可能な基質、例えばＢｒ−、Ｉ−、またはＳＣＮ−は、一体となれば強力な抗菌系を形成する。ラクトペルオキシダーゼ抗菌系（「ＬＰ抗菌系」）の抗菌効果が達成されるには、Ｂｒ−、Ｉ−、またはＳＣＮ−の酸化産物、主にヒポハロゲン化物およびヒポチオシアン酸塩が生成することである。ＬＰ抗菌系が抗菌性産物を産生するには極めて低レベルのＨ２Ｏ２および電子供給体が必要である。本明細書に記載のごとく、アンモニウムイオンが追加されて、これがＬＰ抗菌系の中に包含されれば、抗菌活性は更に増強される。特に、ラクトペルオキシダーゼ、過酸化物または過酸化物源、および臭化アンモニウムが組み合わされれば、格別に有用でかつ経済的な抗菌系が提供される。
【００３４】
本発明のラクトペルオキシダーゼは哺乳動物源、例えば哺乳動物の乳、特に牛乳から取得してよい。更にラクトペルオキシダーゼは市販品から容易に入手可能であり、乾燥粉末の形態でもよく、水溶液中であってもよい。商品の具体的な形態ではＬＰは緑褐色粉末であり、タンパク質含量は９０％を超える。この酵素は安定ｐＨのプロフィルが広く（ｐＨ３〜１０）、至適ｐＨは５．０〜６．５であることが示されている。この酵素は室温で保存してよく、最初の封入包装、例えば市販品の入手形態のままであれば、ＬＰの保存期間は２０℃で少なくとも１年、８℃では２年である。この酵素を上昇した温度（＞６５℃）に短時間（１０分）曝せばタンパク質変性して活性を失う。
【００３５】
本発明のＬＰ抗菌系で使用する過酸化水素（これは過酸化物源と考えてもよい）は多様な態様で入手してよく、過酸化水素の濃厚溶液でも希薄溶液でもよく、あるいは過酸化水素の前駆体、例えば過炭酸塩、過ホウ酸塩、カルバマイド過酸化物（尿素過酸化水素とも言われる）、または過硫酸塩から得てもよい。酵素反応により過酸化水素を生成する系、例えばグルコースオキシダーゼとグルコース、あるいはアミラーゼ／デンプン（これからグルコースが生成される）とグルコースオキシダーゼから得てもよい。過酸化水素を生成する他の酵素／基質の組合せを利用してもよい。酵素反応により生成した過酸化水素を利用するのが有利である。関係する材料が全て環境的にグリーン(green)だからである。これらの材料は過酸化水素自体よりも運搬と処理が遥かに容易である。
【００３６】
本発明のＬＰ抗菌系で使用するハロゲン化物はどのようなハロゲン化物源またはハロゲン化物生成源から得てもよく、異なる取得源は多数可能である。臭化アンモニウム、臭化ナトリウム、臭化カリウム、臭化カルシウム、臭化マグネシウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウム、ヨウ化アンモニウム、ヨウ化カルシウム、および／またはヨウ化マグネシウムが可能である。アルカリ金属またはアルカリ土類金属のどのようなハロゲン化塩であってもよい。本発明のＬＰ抗菌系では、好ましくは塩化物化合物はハロゲン化物源としては除外される。ラクトペルオキシダーゼがＣＬ−の酸化を触媒しないからである。ＬＰ抗菌系におけるハロゲン化物に代わる電子供与体として、チオシアン酸塩、例えばチオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸アンモニウム、チオシアン酸カリウムを使用することもできる。
【００３７】
アンモニウムは、ＬＰ抗菌系で使用してもよくそれによって本発明の相乗的な抗菌効果は更に増大し、どのようなアンモニウム源から取得してもよい。アンモニウム源はアンモニウム塩が可能である。非限定的な実施例として、ハロゲン化物とアンモニウムの両方を供給するにあたり、ハロゲン化アンモニウム、例えば臭化アンモニウム（ＮＨ４Ｂｒ）によってもよい。別の非限定的な実施例として、ハロゲン化物とアンモニウムを供給するにあたり、それぞれ臭化ナトリウムと硫酸アンモニウムによってもよい。別の非限定的な実施例として、ハロゲン化物がヨウ化カリウムでよく、アンモニウム源は省略されてよい。
【００３８】
微生物の成育を支える恐れのある水性系または物体上において微生物を殺滅、防止、成育阻害する方法として、ラクトペルオキシダーゼ、過酸化水素または過酸化物源、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意にアンモニウム源を微生物の成育を支える恐れのあるこの水性系または物体に供給し、その供給の条件としてラクトペルオキシダーゼ、過酸化水素または過酸化物源由来の過酸化物、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、およびアンモニウム源（存在する場合に）由来のアンモニウムが相互に反応することによってこの水性系または物体上において微生物を殺滅、防止、成育阻害する抗菌剤が供給されるのがよい。
【００３９】
当業者が、侵襲された物体または系を処理する前に特定投与に有用な本発明の各種組成物の有効量を容易に決定するには、各種濃度を簡単にテストすれば可能である。例えば、水性系を処理する場合には、ラクトペルオキシダーゼの有効量濃度は、例えば約０．０１〜約１０００ｐｐｍの範囲、好ましくは約０．１〜約５０ｐｐｍの範囲にあるのがよい。
【００４０】
水性系に存在する過酸化物源の有効量は、例えば過酸化水素の水性系での濃度が約０．０１〜約１０００ｐｐｍの範囲、好ましくは約０．１〜約２００ｐｐｍの範囲になるのに十分な量がよい。
【００４１】
水性系に存在するハロゲン化物またはチオシアン酸塩の有効量は、例えば水性系での濃度が約０．１〜約１００００ｐｐｍの範囲、好ましくは約１〜約５００ｐｐｍの範囲となるのがよい。
【００４２】
水性系に存在するアンモニウム源の有効量は、例えば水性系でのアンモニウムイオン濃度が約０．０〜約１００００ｐｐｍの範囲または約０．１〜約１００００ｐｐｍの範囲、好ましくは約０〜約５００ｐｐｍの範囲または約１〜約５００ｐｐｍの範囲になるのに十分な濃度がよい。
【００４３】
ＬＰ抗菌系の成分、例えば本出願明細書の各所に記載のラクトペルオキシダーゼ、過酸化水素、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、およびアンモニウムの濃度は、これらを組合せまたは水性系に加えた時点での初期濃度であってもよいし、および／またはこれらが相互に反応した後の時点の濃度であってもよい。
【００４４】
本発明は、組成物の成分を製品、材料、または媒体に別々に加えることも包含している。この実施態様によれば、成分を製品、材料、または媒体に個別に加えるが、使用時に存在する各成分の最終量は少なくとも１つの微生物の成育を抑制するのに効果的な量である。本発明の態様によって、ラクトペルオキシダーゼ、過酸化水素または過酸化物源、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意のアンモニウム源を処理対象の水性系に個別に加えてよい。例えば、ハロゲン化物および任意のアンモニウム源を最初に処理対象の水性系に加え、次にラクトペルオキシダーゼを加え、最後に過酸化水素を加えてもよい。成分を加える順序は厳密ではなく、どのような順序も利用可能である。好ましくは、加える順序は、１）ハロゲン化物／アンモニウム、２）ＬＰ、３）過酸化水素または他の過酸化物源である。
【００４５】
本発明の他の態様によれば、本明細書に記載のＬＰ抗菌系の成分を水中(水性系と呼ぶこともある）で予め混合して濃厚水溶液を形成しておくことができる。次にこの濃厚水溶液を処理対象の水性系または物体に投与すればよい。ラクトペルオキシダーゼ、過酸化水素または過酸化物源、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意のアンモニウム源の濃度を選択してＬＰ抗菌系の抗菌活性を最適化すればよい。
【００４６】
予め混合した水溶液中(水性系と呼ぶこともある）のＬＰの濃度は約０．０１重量％〜約５重量％の範囲、好ましくは約０．０５重量％〜０．５重量％の範囲にあるのがよい。重量％は全て予め混合した溶液中の重量による。予め混合した溶液中に存在する過酸化物源の量は、予め混合した溶液中の過酸化水素の濃度が約０．０３重量％〜約１５重量％の範囲、好ましくは約０．１５重量％〜１．５重量％の範囲になるのに十分な量がよい。予め混合した溶液中に存在するハロゲン化物またはチオシアン酸塩の量は、予め混合した溶液中のハロゲン化物またはチオシアン酸塩の濃度が約０．１重量％〜約５０重量％の範囲、好ましくは約０．５重量％〜５重量％の範囲になるのに十分な量がよい。予め混合した溶液中に存在するアンモニウム源の量は、予め混合した溶液中のアンモニウムの濃度が約０．０重量％〜約５０重量％、または約０．１重量％〜約５０重量％の範囲、好ましくは約０．０重量％〜５重量、または約０．５重量％〜約５重量％の範囲になるのに十分な量がよい。
【００４７】
例えば、ラクトペルオキシダーゼ、臭化アンモニウム、過酸化水素、および水(水性系と呼ぶこともある）を組み合わせて〈例えば混合して）活性な濃厚抗菌性溶液を形成するのがよい。重量％は全て抗菌性溶液中の重量による。濃厚抗菌性溶液において、ラクトペルオキシダーゼは約０．０１重量％〜約５重量％の範囲、好ましくは約０．０５重量％〜０．５重量％の範囲がよく、過酸化水素は約０．０３重量％〜約１５重量％の範囲、好ましくは約０．１５重量％〜１．５重量％の範囲がよく、臭化アンモニウムは約０．１重量％〜約５０重量％の範囲、好ましくは約０．５重量％〜５重量％の範囲がよい。ＬＰ：Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒの重量比は、約１：１：５〜約１：１０：１００の範囲がよく、好ましい重量比は約１：３：１０である。濃厚溶液は処理対象の水性系または物体に投与すればよい。
【００４８】
予め混合した濃厚溶液としてのＬＰ抗菌系の成分を混合するには、公知の方法によればよい。例えば、臭化塩とラクトペルオキシダーゼを固体で水(水性系と呼ぶこともある）に加えて水溶液を形成し、次に過酸化水素溶液を加えて最終組成物を形成すればよい。あるいは、臭化塩水溶液をまず調製し、後に固体のＬＰを加え、次に過酸化水素溶液を加えればよい。あるいは、過酸化水素源が固体状の前駆体、例えば過炭酸塩または過ホウ酸塩または酵素反応によりＨ２Ｏ２を生成する系である場合には、ＬＰ抗菌系の成分は固体形で水に加えればよい。
【００４９】
更に他の代替案では、ＬＰ抗菌系の成分を各溶液(水性系と呼ぶこともある）で組み合わせてもよい。例えば、臭化アンモニウム水溶液とＬＰ水溶液を組み合わせてＬＰ／ＮＨ４Ｂｒの混合水溶液を形成し、次にＨ２Ｏ２水溶液を加えればよい。Ｈ２Ｏ２水溶液を得るには、濃厚Ｈ２Ｏ２水溶液を希釈するか、または固体状のＨ２Ｏ２前駆体、例えば過炭酸塩または過ホウ酸塩または酵素反応によりＨ２Ｏ２を生成する系を水に溶解することにより可能である。この代替案によれば水性系または物体を処理する方法が容易になる。臭化アンモニウム水溶液とＬＰ水溶液を別々のタンクに調製し、次に所望量を混合タンクに組み合わせてもよく、これにより貯蔵可能なＬＰ／ＮＨ４Ｂｒの不活性溶液が形成される。抗菌剤が必要になった時に、このＬＰ／ＮＨ４Ｂｒ溶液をＨ２Ｏ２水溶液と組み合わせれば使用すべき活性な抗菌性溶液が形成可能になる。ＬＰ／ＮＨ４Ｂｒの混合溶液を１個のタンクに調整し、次にＨ２Ｏ２水溶液を加えてＬＰ抗菌系を活性化するのが好ましい。
【００５０】
更に本発明では全て固体の組成物が提供され、この組成物ではＬＰ抗菌系の成分が不反応の状態で貯蔵維持されるので、次に必要時に水と組み合わせれば抗菌剤が形成可能となる。例えば、ラクトペルオキシダーゼ、ハロゲン化物源、任意のアンモニウム源を含有する抗菌系、および酵素反応により過酸化水素を生成する系、例えばグルコースオキシダーゼとグルコース、またはアミラーゼ／デンプンとグルコースオキシダーゼを提供するために、ラクトペルオキシダーゼ、ハロゲン化物源、任意のアンモニウム源、および酵素反応により過酸化水素を生成する基質からなる固体状の混合物を１個の容器に貯蔵することができ、他方、酵素反応により過酸化水素を生成する酵素を別の容器に別に貯蔵することができる。使用する容器が水溶解性であれば、抗菌剤を産生するには、容器類を水と組み合わせて容器中の成分を溶解し濃厚溶液を形成するか、または容器類を水性系に直接加えれば可能である。あるいは、容器類を別々に処理対象の水性系に加えることも可能である。
【００５１】
特別な例として、ラクトペルオキシダーゼ、臭化アンモニウム、およびグルコースの固体状の混合物を水溶解性の袋または容器に供給し、固体のグルコースオキシダーゼを別の水溶解性の袋または容器に供給してもよい。上の二つの水溶解性の袋の中で全ての固体を所望量の水に溶解すれば強力な抗菌性溶液が形成される。次に得られる溶液の有効量を処理対象の水性系または物体に投与すればよい。あるいは、両方の袋を処理対象の水性系に直接加えることができるし、あるいは二つの袋を別々に水性系に加えることもできる。別の特別な例として、二つの別々の袋に固体成分を貯蔵する代わりに、別々に分離された部屋がある１個の容器を使用することができる。ただしＬＰ抗菌系の成分が十分に分離され、水に曝されるまで固体状の不活性な形態のまま保持されなければならない。例えば、一つの部屋にはラクトペルオキシダーゼ、臭化アンモニウム、およびグルコースの固体状の混合物が含有され、他の部屋には固体のグルコースオキシダーゼが含有される。ＬＰ抗菌系の全ての成分が、水と混合される以前は不反応の形態に保持されるのが好ましい。グルコースオキシダーゼを固体形で分離保持している貯蔵系では、好ましくはグルコースオキシダーゼは空気から遮断された条件で保持可能なので、酸素はグルコースオキシダーゼから物理的に分離され、したがってグルコースオキシダーゼは実質的に不反応の形態に維持される。
【００５２】
グルコースオキシダーゼ、ラクトペルオキシダーゼ、臭化アンモニウム、およびグルコースからなるＬＰ抗菌系の全固体状の組成物〈グルコースオキシダーゼは他の成分から分離して貯蔵される）では、四つの成分の重量比、グルコースオキシダーゼ：ＬＰ：ＮＨ４Ｂｒ：グルコースは、約１：１：１０：１００〜約１：５：１００：５０００の範囲にあってよく、好ましい重量比は約１：４：１００：２０００である。
【００５３】
特定の投与に応じて、組成物を液体形に調製するには組成物を水中にまたは有機溶媒中に溶解して可能であり、また組成物を乾燥形に調製するには適当な担体上に吸着し、または錠剤形に製剤化して可能である。本発明組成物を含有する保存剤を乳化形に調製するにはそれを水中に乳化する、または必要であれば乳化剤を加えればよい。追加の化学物質、例えば殺虫剤を前記の調製物に加えるにはその調製物が意図している用途に応ずる。
【００５４】
本発明組成物を投与する方式および比率は意図している用途に応じて変化可能である。組成物を投与する場合に材料や製品にスプレーイングやブラッシングをすることができる。また、疑念のある材料や製品を処理する場合には適当に調製した組成物中に浸漬することができる。液体または液体様の媒体の場合に、その媒体中に組成物を加えるには、組成物を注ぎまたは適当な装置で計量して溶液状または懸濁状の組成物を生産することができる。
【００５５】
例えば、抗菌性の濃厚溶液を上記の全固体の溶液から得るには、グルコースオキシダーゼ、ラクトペルオキシダーゼ、臭化アンモニウムおよびグルコースを水に溶解する。次に得られた溶液を処理対象の水性系または物体に投与すればよい。水性系の場合には、ＬＰ抗菌系の成分は別々にまたは予め混合した溶液で加えてよく、系の有効量は次のようになる。
（ａ）ＬＰ：約０．０１〜約１０００ｐｐｍ、好ましくは約０．１〜約５０ｐｐｍの範囲。
（ｂ）ＮＨ４Ｂｒ：約０．１〜約１００００ｐｐｍ、好ましくは約１〜約５００ｐｐｍの範囲。
（ｃ）グルコースオキシダーゼ：約０．０１〜約５００ｐｐｍ、好ましくは約０．０５〜約５０ｐｐｍの範囲。
（ｄ）グルコース：約１〜約１００００ｐｐｍ、好ましくは約１０〜約５０００ｐｐｍの範囲。
【００５６】
別の非限定的な例として、ＬＰ抗菌系は、ＬＰ、過酸化物源、ヨウ化カリウム、および任意のアンモニウム源を含んでよい。更に別の非限定的な例として、ＬＰ抗菌系は、ＬＰ、Ｈ２Ｏ２、およびＫＩを含んでよい。これら各成分の量は、ＬＰ抗菌系のＬＰ、過酸化物源、ハロゲン化物源、および任意のアンモニウム源の量として一般的に上記した量と同様でよい。特に、ＫＩ含有ＬＰ抗菌系で使用されるＫＩの量は、上記したＮＨ４Ｂｒ含有ＬＰ抗菌系におけるＮＨ４Ｂｒの量と同じでよい。このようなＫＩ含有ＬＰ抗菌系は、ＬＰ抗菌系用として上記した物理的形態のいずれであってもよい。
【００５７】
更に別の非限定的な例として、ＬＰ抗菌系は、ＬＰ、過酸化物源、臭化ナトリウム、および硫酸アンモニウムを含んでよい。これら各成分の量は、ＬＰ抗菌系のＬＰ、過酸化物源、ハロゲン化物源、および任意のアンモニウム源の量として一般的に上記した量と同様でよい。特に、ＮａＢｒおよび（ＮＨ４）２ＳＯ４含有ＬＰ抗菌系で使用されるＮａＢｒおよび（ＮＨ４）２ＳＯ４の量は、ＮＨ４およびＢｒの量が上記したＮＨ４Ｂｒ含有ＬＰ抗菌系で供給されたと同じ量になるように選択すればよい。ＮａＢｒおよび（ＮＨ４）２ＳＯ４を含有するそのようなＬＰ抗菌系は、ＬＰ抗菌系用として上記した物理的形態のいずれであってもよい。
【００５８】
本発明方法は、任意のｐＨ、例えば約２〜約１１のｐＨ範囲、好ましくは約５〜約９のｐＨ範囲で実施してよい。ＬＰ抗菌系の予め混合した溶液のｐＨを調整するには、公知の酸または塩基を加えればよい。加える酸または塩基は系中のどの成分とも反応しないのを選択するのが望ましい。しかし、ＬＰ系の成分を水中で混合してｐＨを調整しないのが好ましい。ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒの予め混合した溶液のｐＨは、ｐＨ調整をしなければ、約６．９である。中性（７．０）域のｐＨでは、ＬＰ抗菌系の活性は最大になる。
【００５９】
本発明方法は、微生物抑制が必要な産業用またはレクレーション用のどのような水性系で使用してもよい。そのような水性系は、例えば限定されないが、金属加工液、冷却水系〈冷却塔、取水冷却水、および放流冷却水）、排水系、例えば水中の廃棄物処理、例えば下水処理を受ける廃水または下水、循環水系、水泳プール、浴槽、食品加工系、飲料水系、皮革加工用水系、白濁水系、パルプスラリーおよび他の製紙用または紙加工用水系が挙げられる。一般に、産業用またはレクレーション用のどのような水性系も本発明から利益を受けることができる。また、本発明方法は、各種の産業工程またはリクレーション設備での取水処理において使用してよい。取水を最初に本発明方法で処理すれば、取水は微生物の成育を阻害されてから産業工程またはレクレーション設備に入れることが出来る。
【００６０】
また、本発明方法を適用することによって、微生物の成育を支える恐れのある何かの物体上で微生物の成育を防止または阻害できる。物体の例は、例えば限定されないが、表面被膜、木材、金属、高分子、天然物（例えば、石）、石造物、セメント、板材、種子、植物、皮革、プラスチック、化粧品、パーソナルケア製品、医薬品、および他の産業材料が挙げられる。更に物体には、水性系における硬い表面、食品加工プラントおよび病院および製紙設備および農業設備が挙げられる。
【００６１】
本発明を以下の実施例によって更に明瞭にするが、実施例は本発明を例示する意図のものと理解される。
【実施例１】
【００６２】
リン酸緩衝液（ｐＨ6.0）中での緑膿菌（P. aeruginosa）に対する各種ラクトペルオキシダーゼ系の抗菌効果
【００６３】
ＬＰ、Ｈ２Ｏ２、および電子供給体としてのＫＩ、ＮＨ４Ｂｒ、ＮａＳＣＮ、またはＮａＢｒのいずれかを所望の濃度で別々に試験管中のリン酸緩衝液に加え、各種のＬＰ抗菌系を形成した。次にこの緩衝液を3x 106細胞／mlの緑膿菌と共に接種した。接種後の接触（または処理)時間４時間後に液1.0mlを試験管から取り出し、栄養寒天上に植え殺菌不活化溶液を希釈ブランクにして１０−２、１０−３、および１０−４倍希釈した。寒天プレートを３７℃で２〜３時間インキュベートし、コロニー数をカウントした。コントロール培地のｃｆｕ/mlに基づいて殺菌率および対数減少値（logreduction）を計算した。コントロール培地にはリン酸緩衝液５ml中の細菌のみが含有された。
【００６４】
図１には、上記したリン酸緩衝液中４時間の処理による、各種電子供与体を含むＬＰ系の緑膿菌に対する抗菌活性をまとめてある。全ての系についてＬＰ濃度は２００ｐｐｍとし、各電子供与体の濃度は０．０２Ｍとした。Ｈ２Ｏ２濃度を図１に示すごとく変化させた。ＬＰをＨ２Ｏ２および電子供与体、すなわちＫＩ、ＮＨ４Ｂｒ、またはＮａＳＣＮと組み合わせると強力な抗菌性のＬＰ系が形成された。抗菌活性は、この系で各種電子供与体を使用するに応じて変化した。結果から、テストしたＬＰ系の中でＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＫＩ系が活性に関して最強であったのが判る。その次に強力な抗菌系はＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒであり、Ｈ２Ｏ２の濃度が５ｐｐｍ以上の場合には対数減少値が４．５を超えた。Ｈ２Ｏ２の濃度が５ｐｐｍを超える場合にはＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の結果はＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＫＩ系に匹敵するとの判明は重要である。理由は、ＮＨ４ＢｒはＫＩよりも遥かに安価で広く入手可能だからである。したがって、各種産業用の酵素ベース抗菌系を開発する上でＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系には大きな潜在能がある。他の二つの系、すなわちＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮａＢｒおよびＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮａＳＣＮでは、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系程の好結果が効果に関して生じなかった。それらの活性はＨ２Ｏ２単独とほぼ同じまたは以下であった〈図２参照）。特に、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の結果をＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮａＢｒ系の結果と比較するデータから判明するごとく、ＮａＢｒの代わりにＮＨ４Ｂｒを使用する場合に改良は劇的である。
【００６５】
比較実験として、緩衝液中にＨ２Ｏ２単独を使用し電子供与体および酵素を加えないテスト、およびＨ２Ｏ２とＮＨ４Ｂｒとを使用し酵素を加えないテストを緑膿菌に対してリン酸緩衝液（ｐＨ６）中４時間の処理で実施した。上記のごとく、ＬＰ濃度はＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系について２００ｐｐｍとした。ＮＨ４Ｂｒ濃度はＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４ＢｒおよびＨ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒの両方の系について０．０２Ｍとした。Ｈ２Ｏ２濃度は図２に示すように変化させた。図２から、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系がＨ２Ｏ２−ＮＨ４ＢｒおよびＨ２Ｏ２単独に優る有利が明瞭である。特にＨ２Ｏ２−ＮＨ４ＢｒにＬＰが加わると、この酵素のないＨ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒの活性に比べて活性が２対数を超えて増加している。この酵素の働きにより、Ｈ２Ｏ２＋ＮＨ４Ｂｒ→Ｂｒ＋（ＨＯＢｒ）＋ＮＨ２Ｂｒ＋Ｈ２Ｏの反応が右手側に押しやられ、更に多くの強力な抗菌性産生物が生ずることが考えられる。
【実施例２】
【００６６】
パルプスラリー中での緑膿菌に対する各種ラクトペルオキシダーゼの抗菌効果
【００６７】
ＬＰ系の成分を別々にパルプスラリーに加えて各種ＬＰ抗菌系を形成した。この評価実験には実施例１に記載と同様なテスト手順を使用した。唯一の変更点としてリン酸緩衝に代えてパルプスラリーを使用した。パルプスラリーは、白色に漂白された乾燥パルプを５ｇ／Ｌ、陽イオンでんぷんを０．０２５ｇ／Ｌ、ＣａＣＯ３を０．７５ｇ／Ｌ、ＡＳＡサイズを０．０１ｇ／Ｌ、保持助剤を０．００２５ｇ／Ｌ、脱泡剤を０．００１２ｇ／Ｌを含有していた。パルプスラリーの稠度は固体の約０．５〜０．７％であった。滅菌後のパルプスラリーの最終ｐＨは約７．５〜８．０であった。
【００６８】
パルプスラリー中１８時間の処理による、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の緑膿菌に対する抗菌活性を、Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４ＢｒおよびＨ２Ｏ２単独の活性との比較で図３に示す。ＬＰ濃度は２００ｐｐｍとした。ＮＨ４Ｂｒ濃度はＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４ＢｒおよびＨ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒの両系について１０００ｐｐｍとした。Ｈ２Ｏ２濃度は図のように変化させた。図３から、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系ではＨ２Ｏ２濃度が５ｐｐｍ以上の場合に１８時間以内に対数減少値が５．８を超えたことが判る。ＬＰが加わると系の活性は、この酵素のないＨ２Ｏ２−ＮＨ４ＢｒまたはＨ２Ｏ２単独の活性に比べて劇的に増大した。パルプスラリー中でのＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の結果はリン酸緩衝液中での（実施例１での）結果と一致した。
【００６９】
同じテスト手順を実施して、パルプスラリー中３０分の処理による、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＫＩ系の緑膿菌に対する抗菌活性を、Ｈ２Ｏ２−ＫＩおよびＨ２Ｏ２単独の活性との比較で対比した。ＬＰ濃度は２００ｐｐｍとした。ＫＩ濃度はＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＫＩおよびＨ２Ｏ２−ＫＩの両系について１０００ｐｐｍとした。図４から、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＫＩ系はＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系よりも強力な活性をより短時間にかつより低い過酸化物濃度（１〜２ｐｐｍ）にて生じたことが判る。
【実施例３】
【００７０】
ＬＰ抗菌系における酸化剤としての過ホウ酸塩、過炭酸塩、およびカルバマイド過酸化物の効果
【００７１】
過ホウ酸ナトリウム、過炭酸ナトリウム、およびカルバマイド過酸化物がＬＰ系において抗菌活性を生ずる効果をテストするために、ＮＨ４Ｂｒを電子供与体として使用した。
【００７２】
酸化剤、ＬＰ、およびｖを別々にパルプスラリーに加えた。テスト手順は実施例２に記載と同じにした。図５、６および７に、酸化剤として過ホウ酸塩（ＮａＢＯ３）、過炭酸塩（ＮａＰｅｒＣ）、およびカルバマイド過酸化物（ＣＰ）を使用した場合のＬＰ系の抗菌活性を示す。図５に、パルプスラリー中１８時間処理によるＬＰ−ＮａＢＯ３−ＮＨ４Ｂｒ系の緑膿菌に対する抗菌活性を、ＮａＢＯ３−ＮＨ４Ｂｒ単独の活性との対比で示す。ＬＰ濃度は２００ｐｐｍとし、ＮＨ４Ｂｒ濃度は１０００ｐｐｍとした。ＮａＢＯ３濃度は図に示すように変化させた。図６に、パルプスラリー中１８時間処理によるＬＰ−ＮａＰｅｒＣ−ＮＨ４Ｂｒ系の緑膿菌に対する抗菌活性を、ＮａＰｅｒＣ−ＮＨ４Ｂｒ単独の活性との対比で示す。ＬＰ濃度は２００ｐｐｍとし、ＮＨ４Ｂｒ濃度は１０００ｐｐｍとした。ＮａＰｅｒＣ濃度は図に示すように変化させた。図７に、パルプスラリー中２４時間処理によるＬＰ−ＣＰ−ＮＨ４Ｂｒ系の緑膿菌に対する抗菌活性を、ＣＰ単独の活性との対比で示す。ＬＰ濃度は２ｐｐｍとし、ＮＨ４Ｂｒ濃度は６０ｐｐｍとした。ＣＰ濃度は図に示すように変化させた。過ホウ酸塩および過炭酸塩の系では、同レベルの活性が生じ、それらは過酸化水素の系に匹敵したが、酸化剤の濃度は高くなった。ＬＰ−ＮａＢＯ３−ＮＨ４ＢｒおよびＬＰ−ＮａＰｅｒＣ−ＮＨ４Ｂｒの系では活性は１０ｐｐｍの過ホウ酸塩または過炭酸塩から出現開始した（図５および６）が、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒの系では活性は５ｐｐｍのＨ２Ｏ２から始まった（図３）。このことは、過炭酸ナトリウムの過酸化水素含量が重量で約２５％に過ぎない事実によって説明可能である。ＬＰ−ＣＰ−ＮＨ４Ｂｒ系では、１〜２ｐｐｍのカルバマイド過酸化物から強力な活性が生じた〈図７〉。ＬＰ−ＣＰ−ＮＨ４Ｂｒ系は、使用する酸化剤濃度が他の三つの系、すなわちＬＰ−ＮａＢＯ３−ＮＨ４Ｂｒ（図５）、ＬＰ−ＮａＰｅｒＣ−ＮＨ４Ｂｒ(図６)、およびＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ（図３）よりもかなり低いが、生ずる活性は強い。これの理由は、ＬＰ−ＣＰ−ＮＨ４Ｂｒ系で使用したＬＰ濃度（２ｐｐｍ）およびＮＨ４Ｂｒ濃度（６０ｐｐｍ）が他の三つの系で使用した２００ｐｐｍのＬＰおよび１０００ｐｐｍのＮＨ４Ｂｒよりも遥かに低かったからである。他の三つの系でのＬＰおよびＮＨ４Ｂｒの濃度は最適ではなかったので、過剰量のＬＰおよびＮＨ４Ｂｒが系中のＨ２Ｏ２の一部を消費することができた。次の実施例４ではＬＰ系の最適化を検討する。
【実施例４】
【００７３】
ＬＰ系の成分を最適濃度で個別に添加
【００７４】
ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の各成分の最適濃度を決定するために、１つの成分の濃度を変化させ、他の二つの成分の濃度を過剰に保持した。例えば、ラクトペルオキシダーゼの最適濃度を決定するために、Ｈ２Ｏ２濃度を５ｐｐｍに保持し、ＮＨ４Ｂｒ濃度を１０００ｐｐｍに保持し、ＬＰ濃度を０．１から２００ｐｐｍまで変化させた。ＮＨ４Ｂｒの最適濃度を決定するために、Ｈ２Ｏ２濃度を５ｐｐｍに保持し、ＬＰ濃度を２００ｐｐｍに保持し、ＮＨ４Ｂｒ濃度を１から２００ｐｐｍまで変化させた。Ｈ２Ｏ２の最適濃度を決定するために、ＮＨ４Ｂｒ濃度を１００ｐｐｍに保持し、ＬＰ濃度を１ｐｐｍに保持し、Ｈ２Ｏ２濃度を０．１から５ｐｐｍまで変化させた。ＬＰ系の抗菌効果を評価するテスト手順は実施例１および２に記載されている。
【００７５】
実施例２のデータから、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒの抗菌系は、２００ｐｐｍのＬＰ、５ｐｐｍのＨ２Ｏ２、および１０００ｐｐｍのＮＨ４Ｂｒを組み合わせた場合に緑膿菌の対数減少値は５．５を超えたことが判る。前の評価実験の間中、系のこれら三つの成分は全て〈特に、ＬＰおよびＮＨ４Ｂｒ）量的に過剰であったと考えられた。各成分の最小有効濃度（対数減少値を＞５とするための）を求めるために、上記のように組合せの一つの成分濃度を変化させ、他の二つの成分を過剰に保持した。図８はＬＰ濃度に対するＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の抗菌活性を示す。テストでは、Ｈ２Ｏ２濃度（５ｐｐｍ）およびＮＨ４Ｂｒ濃度（１０００ｐｐｍ）を過剰に保持し、ＬＰ濃度を０．１ｐｐｍから２００ｐｐｍまで変化させた。図８のデータから、ＬＰ濃度が０．２ｐｐｍ以上である限りＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系によって対数減少値が５を超えたことが示されている。ＬＰが０．１ｐｐｍで系は対数減少値が４．４に達した。したがって、対数減少値が＞５に達するためのＬＰの最小有効濃度は０．２ｐｐｍであると結論された。同様に、ＮＨ４Ｂｒの最小有効濃度は５０ｐｐｍであると判った〈図９）。ＮＨ４Ｂｒ濃度が更に増大して５０ｐｐｍを超えても、系の効果は有意に上昇しなかった。また、対数減少値が＞５を達成するためのＨ２Ｏ２の最小有効濃度は図１０に示されるように０．５ｐｐｍであることが判った。Ｈ２Ｏ２濃度が更に増大して０．５ｐｐｍを超えても系の活性は上昇しなかった。各成分の最小有効濃度は、これらを組み合わせた系が最大活性を達成するための各最低濃度と考えられる。濃度を更に増大して最小有効濃度を超えても、系の抗菌活性の上昇に有意に寄与せず、したがって過剰と考えられる。
【００７６】
図８、９、および１０から、対数減少値が＞５を達成するための各成分、すなわちＬＰ、Ｈ２Ｏ２、およびＮＨ４Ｂｒの最小有効濃度はそれぞれ０．２、０．５、および５０ｐｐｍであることが証明される。各成分の最小有効濃度を得るためには、組合せの他の二つの成分をテストの間は過剰に保持する。表１から、系の最適組合せは、ＬＰ＝１ｐｐｍ／Ｈ２Ｏ２＝１ｐｐｍ／ＮＨ４Ｂｒ＝４０ｐｐｍであることが判った。ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系が組合せの最適濃度である場合に対数減少値が＞５．５となった。この系の三成分の比は、重量でＬＰ：Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ＝１：１：４０であった。表１の他のいくつかの組合せも最適組合せと考えることができた。それらは、（１）ＬＰ：Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ＝０．５：０．５：６０、（２）ＬＰ：Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ＝０．５：１：６０である。
パルプスラリー中（１８時間処理）緑膿菌に対するＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の各種濃度の組合せでの抗菌活性
【表１】
【実施例５】
【００７７】
予めの混合によるＬＰ抗菌系
【００７８】
ＬＰ抗菌系をイン サイツー（in situ）に作成可能にするために各成分を別々に投与部位に加える。あるいは、ＬＰ系を作成可能にするためにすべての成分を予め混合して濃厚液にする。次にこの混合液を処理対象部位に投与してもよい。以下の実施例はＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ抗菌系を予めの混合により作成するのを示す。
【００７９】
ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒの典型的な予めの混合による溶液を次のように調製した。０．０５ｇのＬＰと０．５ｇのＮＨ４Ｂｒを１オンスのガラス瓶に加えた。１０ｍｌのＤＩ水を瓶に加えて全ての内容物を溶解した。次に、０．５ｇの３０％Ｈ２Ｏ２を瓶に加え溶液中に三成分を一体に混合させた。この混合液には０．５％（Ｗ／Ｖ）ＬＰ、１．５％Ｈ２Ｏ２、および５％ＮＨ４Ｂｒが含有された。この溶液の重量比はＬＰ：Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒとして１：３：１０であった。他の比率と濃度の混合液も調製した。溶液を調製後直ちに（０時間とする)、混合液１０μｌを１０ｍLのパルプスラリーに加え、パルプスラリー中の最終濃度をＬＰは５ｐｐｍ、Ｈ２Ｏ２は１５ｐｐｍ、およびＮＨ４Ｂｒは５０ｐｐｍにした。微生物テストを実施するために実施例２に記載の手順を利用し、混合溶液についての抗菌テストを混合後１、２、４、６および８時間目に繰り返した。
【００８０】
ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ混合物の効果が水溶液中で保たれる期間をテストするために、三成分をＤＩ水中に一体に混合し、パルプスラリー中での混合液の抗菌活性を混合後の各時間にテストした。混合物は三つの異なる重量比、ＬＰ：Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ＝（１）１：１：４０、（２）１：１：１０、（３）１：３：１０、についてテストした。それぞれの比について高濃度での混合および低濃度での混合を行った（表２）。混合液の抗菌活性の結果を表２に示す。
混合後の時間に対するＬＰ／Ｈ２Ｏ２／ＮＨ４Ｂｒ混合液の抗菌活性（パルプスラリー中での緑膿菌に対するテスト）
【表２】
＃ パルプスラリー中の各成分の最終濃度は以下の通りである：
（１）１：１：４０比−ＬＰ＝１０ｐｐｍ；Ｈ２Ｏ２＝１０ｐｐｍ；ＮＨ４Ｂｒ＝４００ｐｐｍ。
（２）１：１：１０比−ＬＰ＝１０ｐｐｍ；Ｈ２Ｏ２＝１０ｐｐｍ；ＮＨ４Ｂｒ＝１００ｐｐｍ。
（３）１：３：１０比−ＬＰ＝５ｐｐｍ；Ｈ２Ｏ２＝１５ｐｐｍ；ＮＨ４Ｂｒ＝５０ｐｐｍ。
＊（Ｈ）−高濃度混合，（Ｌ）−低濃度混合
【００８１】
三成分を混合した後、混合液の抗菌活性を安定に維持するには成分の比率が重要であることが判った。混合物中の成分の濃度は重要でないことが判った。１：３：１０の比率では高濃度でも低濃度でも混合後少なくとも８時間は強力な抗菌活性が維持された。実施例４の上記データから、各成分を別々にパルプスラリーに加えた場合に１：１：４０が最良の比率であることが示された。しかし、１：１：４０の比率は三成分を予め一体に混合し次に混合物としてテスト系に投与する場合には有効でないことが判った。予め混合する溶液ではＨ２Ｏ２を１：３：１０の比率に増加するのが好ましく、好ましい活性が安定に保持された。
【実施例６】
【００８２】
パルプ物体中に別々に加えたＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−グルコースオキシダーゼ（ＧＯ）／グルコースの緑膿菌に対する抗菌活性
【００８３】
ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−グルコースオキシダーゼ（ＧＯ）／グルコース系の抗菌効果を求めるために以下の手順を行った。０．０４ｇのグルコースを１／２オンスのガラス瓶中の１０ｍｌの無菌パルプ物体に加えて０．４％（Ｗ／Ｖ)グルコースをテスト系に供給した。１００ｐｐｍのＮＨ４Ｂｒと５ｐｐｍのＬＰを１０ｍｌのパルプ物体に加え、最後にＧＯをパルプスラリーに２．５単位／Ｌから５、１０、２０、４０、５０、１００、および２００単位／Ｌまでの各濃度で加えた。同じ手順をＧＯ−グルコース系をテストするのに行った。ただしこの系ではＮＨ４ＢｒとＬＰがパルプスラリーに加えられていない。全て加えた後に内容物を十分に混合し、接種材料緑膿菌を瓶中に入れて約３×１０７細胞／ｍｌの濃度にした。接種後２４時間目に１．０ｍｌの内容物を各瓶から取り出し、栄養寒天培地上に植え、希釈ブランクとしての抗菌不活性化溶液を使用して１０−２、１０−３、および１０−４倍に希釈した。全プレートを３７℃で２〜３日間インキュベートし、プレートのコロニー数をカウントした。コントロールおよび処理培地のｃｆｕ/mlを基に殺滅率と対数減少値を計算した。コントロール培地には１０ｍｌパルプスラリー中の細菌細胞のみを含有させた。
【００８４】
ＬＰ、ＮＨ４Ｂｒ、およびグルコースの濃度を固定し、ＧＯ濃度を２．５〜２００ｐｐｍの範囲で変化させたＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系をパルプスラリー中で２４時間テストした。結果を表３に示す。
パルプスラリー中（２４時間処理）各ＧＯ濃度でのＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系の緑膿菌に対する効果
【表３】
【００８５】
ＧＯ濃度が５および１０Ｕ／Ｌに上昇するのに応じて、系は抗菌活性を生じた（２．６〜３．６対数減少値）。ＧＯ濃度が更に上昇して２０Ｕ／Ｌ以上になるに応じて、系は強力な抗菌活性を生じ、対数減少値が＞５．６となった〈表３）。したがって、＞５の対数減少値を達成するにはＧＯ濃度が約２０Ｕ／Ｌ(０．５ｐｐｍ相当)以上であるのが好ましい。
【００８６】
ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系とＧＯ／Ｇｌｕ単独との抗菌効果の比較を図１１に示す。二つの系を同一のＧＯ濃度範囲で比較した。ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系は５Ｕ／ＬのＧＯで生ずるのに対し、ＧＯ／Ｇｌｕ単独では効果発生を開始するにはかなり高いＧＯ濃度（８０Ｕ／Ｌ）が必要であるのが判った。ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系では僅か２０Ｕ／ＬのＧＯによって＞５の対数減少値が達成されるのに対し、ＧＯ／Ｇｌｕのみを使用する場合には２００Ｕ／ＬのＧＯによって＞５の対数減少値が達成される〈図１１〉。ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系は、ＧＯ／Ｇｌｕが単独で作用するよりも遥かに強力な抗菌活性を示した。ＧＯ／Ｇｌｕ系は抗菌剤としてＨ２Ｏ２のみを生ずるので、これらの結果から、ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系は、Ｈ２Ｏ２よりも強力な臭素が関連する抗菌性化合物を生ずるのが示唆される。
【００８７】
ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／グルコース系およびＧＯ−グルコース系について時間−殺菌の検討を実施するために以下の手順を行った。０．０４ｇのグルコース、５０ｐｐｍのＮＨ４Ｂｒ、および２ｐｐｍのＬＰを１／２オンスのガラス瓶中の無菌パルプ物体１０ｍｌに加え、最後にこのパルプスラリーに２０単位／ＬのＧＯを加えた。ＧＯ／Ｇｌｕのみの系については、０．０４ｇのグルコースと２００単位／ＬのＧＯのみを１０ｍｌのパルプスラリーに加えた。全てを加えた後、内容物を十分に混合し、接種のために約３×１０７細胞／ｍｌの緑膿菌を瓶中に入れた。接種後の所定の接触時間（１分から５、１０、２０、３０分、および１時間、２、４、６、８、および２４時間）に１．０ｍｌの内容物を処理培地から取り出し、栄養寒天培地上に植え、希釈ブランクとしての抗菌不活性化溶液を使用して１０−２、１０−３、および１０−４倍に希釈した。プレートを３７℃で２〜３日間インキュベートした。プレートのコロニー数をカウントし、コントロールおよび処理培地のｃｆｕ/mlを基に殺滅率と対数減少値を計算した。
【００８８】
パルプ物体中ＧＯの最適濃度（２０Ｕ／Ｌ）にてＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系を接触時間〈処理時間）に対応してテストし、殺滅速度を求めた。対数減少値を接種後の各接触時間にて測定した。ＧＯ＝２００Ｕ／ＬでのＧＯ／Ｇｌｕ系を比較のために加えた。テスト結果を図１２に示す。図に示すごとく、ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系は迅速な殺滅作用を示し、接触時間１０分で対数減少値が４に達した。この系は２時間の処理後に対数減少値が＞５．５になった。ＧＯ／Ｇｌｕ系は、抗菌剤としてはＨ２Ｏ２を生じているので、殺滅速度はかなり緩慢であった。ＧＯ／Ｇｌｕ系では、ＧＯ濃度が１０倍大きくても〈２００対２０Ｕ／Ｌ）２時間接触後の対数減少値は僅か１．０であった。それが＞５．５の対数減少値に到達したのは２４時間処理後であったので、ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系よりも２２時間遅い。この結果から、ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系から生ずる臭素化合物、例えばブロマミンおよびＨＯＢｒが呈する殺滅速度はＧＯ／Ｇｌｕ系から生ずる過酸化水素よりもかなり急速であると示唆される。ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／Ｇｌｕ系には、その迅速な殺滅挙動により衛生剤／消毒剤としての潜在的な用途がある。
【実施例７】
【００８９】
ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−Ｈ２Ｏ２系の抗菌活性へのｐＨ効果
【００９０】
ＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−Ｈ２Ｏ２の抗菌活性へのｐＨの効果を次のように求めた。ＬＰをＮＨ４Ｂｒと共に水道水中に予め混合して溶液とした。次にこの溶液を水酸化ナトリウムまたは塩酸でいろいろなｐＨ値に調整した。次にこのｐＨ調整したＬＰ／ＮＨ４Ｂｒ溶液を希薄Ｈ２Ｏ２溶液と混合し、三成分を含有し抗菌活性を有する最終の混合液とした。この最終混合液をパルプスラリーに加え、ＬＰ系の抗菌活性を評価するのに望ましい濃度の成分とした。
【００９１】
予め混合しｐＨ調節したＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−Ｈ２Ｏ２溶液を具体的に調製するのを以下に記載してもよい。０．５ｇのＮＨ４Ｂｒおよび０．０５ｇのＬＰを４オンスのガラス瓶中の水道水５０ｍLに加え、よく混合してｐＨ６．９５の溶液を得た。塩酸（１Ｎ）を使用してこのＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ溶液をｐＨ２．９２に調製した。別の４オンス瓶にて０．５ｇのＨ２Ｏ２（３０％）を５０ｍLの水道水に加えて希薄Ｈ２Ｏ２溶液（ｐＨ〜６．５）を作った。希薄Ｈ２Ｏ２溶液をＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ溶液中にゆっくり注ぎ、緩やかに混合して三成分を全て含む混合溶液とした。最終の混合液はｐＨが３．４で、０．０５％ＬＰ、０．１５％Ｈ２Ｏ２、および０．５％ＮＨ４Ｂｒを含有した。全三成分を混合して溶液とした後直ちにＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−Ｈ２Ｏ２の混合液０．２ｍＬを１０ｍＬのパルプスラリーに加えてパルプ物体に１０ｐｐｍのＬＰ、３０ｐｐｍのＨ２Ｏ２、および１００ｐｐｍのＮＨ４Ｂｒとした。抗菌テストを実施例１に記載の手順により実施した。結果を表４に示す。
【００９２】
上記のごとく、予め混合したＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−Ｈ２Ｏ２の溶液のｐＨは系の抗菌効果に影響可能である。最良の条件は三成分を水中にｐＨ調整せずに混合するか、またはｐＨを僅かにアルカリ条件に調節することである。ｐＨ調整せずに予め混合した溶液のｐＨは中性域である。
パルプスラリー中１８時間処理におけるＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−Ｈ２Ｏ２の緑膿菌に対する抗菌効果へのｐＨ効果
【表４】
＊ｐＨ６．９のＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−Ｈ２Ｏ２混合液を調製するために三成分をｐＨ調製せずに混合した。
【実施例８】
【００９３】
ＬＰ系のハロゲン化物源とアンモニウム源としてのＮａＢｒ／（ＮＨ４）２ＳＯ４とＮＨ４Ｂｒの抗菌効果の比較
【００９４】
ハロゲン化物源とアンモニウム源としてのＮａＢｒ／（ＮＨ４）２ＳＯ４を含有するＬＰ系の抗菌活性をパルプスラリー中において評価し、ＮＨ４Ｂｒを含有するＬＰ系と比較した。ＬＰ系の成分を別々にパルプスラリーに加えて各種ＬＰ抗菌系を形成した。実施例２に記載と同様なテスト手順を使用して本評価実験を行った。パルプスラリー中でのＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮａＢｒ／（ＮＨ４）２ＳＯ４系とＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の緑膿菌に対する抗菌活性の比較を表５に示す。ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮａＢｒ／（ＮＨ４）２ＳＯ４系により生ずる活性レベルは、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の活性と同じまたは僅かに上であることが判った。
パルプスラリー中（別々に加えて２４時間処理）による、ＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮａＢｒ／（ＮＨ４）２ＳＯ４系とＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ系の緑膿菌に対する抗菌活性の比較
【表５】
【００９５】
同様に、ＮａＢｒ／（ＮＨ４）２ＳＯ４をＬＰ−ＧＯ／グルコース系におけるＮＨ４Ｂｒと比較した。表６は、パルプスラリー中別々に加えることによる、ＬＰ−ＧＯ／ｇｌｕ−ＮａＢｒ／（ＮＨ４）２ＳＯ４系とＬＰ−ＧＯ／ｇｌｕ−ＮＨ４Ｂｒ系の緑膿菌に対する抗菌活性を示す。ＬＰ−ＧＯ／ｇｌｕ−ＮａＢｒ／（ＮＨ４）２ＳＯ４系により生ずる活性レベルは、ＬＰ−ＧＯ／ｇｌｕ−ＮＨ４Ｂｒ系の活性と同じまたは僅かにより良であった〈表６）。
【００９６】
ＬＰ系に抗菌剤を作成するためのハロゲン化物源およびアンモニウム源としての二つの水溶性塩、すなわちＮａＢｒと（ＮＨ４）２ＳＯ４を組み合わせると、その有効性はＮＨ４Ｂｒと同じまたは僅かにより良であると結論される。
パルプスラリー中（別々に加えて２４時間処理）による、ＬＰ−ＧＯ／ｇｌｕ−ＮａＢｒ／（ＮＨ４）２ＳＯ４とＬＰ−ＧＯ／ｇｌｕ−ＮＨ４Ｂｒの緑膿菌に対する抗菌効果の比較
【表６】
【００９７】
本明細書に引用された全ての参照文献の全内容は出願人が特別に編入するものである。更に、量、濃度、あるいは他の値またはパラメータが、範囲、好ましい範囲、あるいは好ましい上方値と好ましい下方値のリストとして提示されている場合には、これは上方の範囲限界または好ましい値と下方の範囲限界または好ましい値との対によって形成される全ての範囲を特定的に開示しており、範囲が分離して開示されているか否かには係わらないと理解すべきである。本明細書において数値の範囲が挙げられている場合は、特に言及しない限り、その範囲には、範囲の末端点が包含され、また範囲内の全ての整数および分数が包含されるものとする。ある範囲を定義する際に挙げた特別の値に本発明の範囲が限定されるものとしてはならない。
【００９８】
本明細書に開示した本発明の説明と実施要領を参酌すれば、本発明の他の実施態様は当業者にとって自明である。本説明と実施例は単なる例示と考えるべきであり、本発明の範囲および要旨は以下の特許請求の範囲およびそれの均等物によって示されるものとする。
【図面の簡単な説明】
【００９９】
【図１】燐酸緩衝液（ｐＨ６．０）中、各種濃度のＨ２Ｏ２での緑膿菌（P. aeruginosa）に対する抗菌効果を各種ラクトペルオキシダーゼ系について比較したグラフである。
【図２】燐酸緩衝液（ｐＨ６．０）中、各種濃度のＨ２Ｏ２での緑膿菌に対する抗菌効果をＨ２Ｏ２単独、Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ、およびＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒについて比較したグラフである。
【図３】パルプスラリー中、各種濃度のＨ２Ｏ２での緑膿菌に対する抗菌効果をＨ２Ｏ２単独、Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒ、およびＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４Ｂｒについて１８時間処理してから比較したグラフである。
【図４】パルプスラリー中、各種濃度のＨ２Ｏ２での緑膿菌に対する抗菌効果をＨ２Ｏ２単独、Ｈ２Ｏ２−ＫＩ，およびＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＫＩについて３０分処理してから比較したグラフである。
【図５】パルプスラリー中、各種濃度のＮａＢＯ３での緑膿菌に対する抗菌効果をＬＰ−ＮａＢＯ３−ＮＨ４ＢｒおよびＮａＢＯ３−ＮＨ４Ｂｒについて１８時間処理してから比較したグラフである。
【図６】パルプスラリー中、各種濃度のＮａＰｅｒＣでの緑膿菌に対する抗菌効果をＬＰ−ＮａＰｅｒＣ−ＮＨ４ＢｒおよびＮａＰｅｒＣ−ＮＨ４Ｂｒについて１８時間処理してから比較したグラフである。
【図７】パルプスラリー中、各種濃度のＣＰでの緑膿菌に対する抗菌効果をＬＰ−ＣＰ−ＮＨ４ＢｒおよびＣＰ（カルバマイド過酸化物）単独について２４時間処理してから比較したグラフである。
【図８】パルプスラリー中、一定濃度のＨ２Ｏ２およびＮＨ４Ｂｒでの緑膿菌に対する抗菌効果をＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４ＢｒについてＬＰ濃度の関数として示すグラフである。
【図９】パルプスラリー中、一定濃度のＨ２Ｏ２およびＬＰでの緑膿菌に対する抗菌効果をＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４ＢｒについてＮＨ４Ｂｒ濃度の関数として示すグラフである。
【図１０】パルプスラリー中、一定濃度のＮＨ４ＢｒおよびＬＰでの緑膿菌に対する抗菌効果をＬＰ−Ｈ２Ｏ２−ＮＨ４ＢｒについてＨ２Ｏ２濃度の関数として示すグラフである。
【図１１】パルプスラリー中、各種濃度のＧＯでの緑膿菌に対する抗菌効果をＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／ＧｌｕおよびＧＯ／Ｇｌｕ単独について２４時間処理してから比較したグラフである。
【図１２】パルプスラリー中、緑膿菌に対する抗菌効果をＬＰ−ＮＨ４Ｂｒ−ＧＯ／ＧｌｕおよびＧＯ／Ｇｌｕ単独について比較した時間−殺滅グラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの微生物の成育を、該微生物の成育を支える恐れのある水性系または物体上において抑制する方法であって、
（ａ）ラクトペルオキシダーゼ、（ｂ）過酸化物源、（ｃ）ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、ただしハロゲン化物から塩化物を除く、および任意に（ｄ）アンモニウム源、を供給し、その供給の条件として、ラクトペルオキシダーゼ、過酸化物源由来の過酸化物、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意に供給されるアンモニウム源由来のアンモニウムが相互に反応して該水性系または物体上に抗菌剤が供給され、かつ該抗菌剤によって少なくとも１つの微生物の成育がその水性系または物体上において抑制されることを特徴とする方法。
【請求項２】
ラクトペルオキシダーゼを哺乳類の乳汁から得る請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ラクトペルオキシダーゼをウシの乳汁から得る請求項１に記載の方法。
【請求項４】
過酸化物が過酸化水素である請求項１に記載の方法。
【請求項５】
過酸化物源がカルバマイド過酸化物、過炭酸塩、過ホウ酸塩、または過硫酸塩、またはこれらの組合せ物である請求項１に記載の方法。
【請求項６】
過酸化物源が過酸化水素を酵素反応により生成する系であって、その系に過酸化水素を生成する酵素およびその酵素により活性化されて過酸化水素を産生する酵素基質が含まれる請求項１に記載の方法。
【請求項７】
過酸化水素を生成する酵素がグルコースオキシダーゼであり、酵素基質がグルコースである請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ハロゲン化物の形態がアルカリ類金属またはアルカリ土類金属のハロゲン化塩である請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ハロゲン化物が臭化アンモニウム、臭化ナトリウム、臭化カリウム、臭化カルシウム、臭化マグネシウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウム、ヨウ化アンモニウム、ヨウ化カルシウム、またはヨウ化マグネシウム、またはこれらの組合せ物である請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ハロゲン化物がヨウ化カリウムである請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
チオシアン酸塩がチオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸アンモニウム、またはチオシアン酸カリウム、またはこれらの組合せ物である請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
アンモニウム源がアンモニウム塩である請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ハロゲン化物およびアンモニウム源が共にハロゲン化アンモニウムによって提供される請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
ハロゲン化物およびアンモニウム源が共に臭化アンモニウムによって供給される請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
ハロゲン化物が臭化ナトリウムであり、アンモニウム源が硫酸アンモニウムである請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
抗菌剤を水性系に供給するにあたり、ラクトペルオキシダーゼ、過酸化物源、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、およびアンモニウム源を水性系に加え、ラクトペルオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０１〜約１０００ｐｐｍの範囲、過酸化物源により得られる過酸化水素の水性系における濃度を約０．０１〜約１０００ｐｐｍの範囲、ハロゲン化物の水性系における濃度を約０．１〜約１０，０００ｐｐｍの範囲、アンモニウム源により得られるアンモニウムイオンの水性系における濃度を約０．０〜約１０，０００ｐｐｍの範囲とすることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
ラクトペルオキシダーゼの水性系における濃度を約０．１〜約５０ｐｐｍの範囲、過酸化物源により得られる過酸化水素の水性系における濃度を約０．１〜約２００ｐｐｍの範囲、ハロゲン化物の水性系における濃度を約１〜約５００ｐｐｍの範囲、アンモニウム源により得られるアンモニウムイオンの水性系における濃度を約０〜約５００ｐｐｍの範囲とすることを特徴とする請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
過酸化物源が過酸化水素を酵素反応により生成する系であって、その系にグルコースオキシダーゼおよびグルコースが含まれ、ハロゲン化物およびアンモニウム源が共にＮＨ４Ｂｒによって供給され、かつ抗菌剤を水性系に供給するにあたり、ラクトペルオキシダーゼ、ＮＨ４Ｂｒ、グルコースオキシダーゼおよびグルコースを水性系に加え、ラクトペルオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０１〜約１０００ｐｐｍの範囲、ＮＨ４Ｂｒの水性系における濃度を約０．１〜約１００００ｐｐｍの範囲、グルコースオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０１〜約５００ｐｐｍの範囲、グルコースの水性系における濃度を約１〜約１０，０００ｐｐｍの範囲とすることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
ラクトペルオキシダーゼの水性系における濃度を約０．１〜約５０ｐｐｍの範囲、ＮＨ４Ｂｒの水性系における濃度を約１〜約５００ｐｐｍの範囲、グルコースオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０５〜約５０ｐｐｍの範囲、グルコースの水性系における濃度を約１０〜約５０００ｐｐｍの範囲とすることを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
過酸化物源が過酸化水素を酵素反応により生成する系であって、その系にグルコースオキシダーゼおよびグルコースが含まれ、ハロゲン化物がＮａＢｒであり、アンモニウム源が（ＮＨ４）２ＳＯ４であり、かつ抗菌剤を水性系に供給するにあたり、ラクトペルオキシダーゼ、ＮａＢｒ、（ＮＨ４）２ＳＯ４、グルコースオキシダーゼおよびグルコースを水性系に加え、ラクトペルオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０１〜約１０００ｐｐｍの範囲、ＮａＢｒの水性系における濃度を約０．１〜約１００００ｐｐｍの範囲、（ＮＨ４）２ＳＯ４の水性系における濃度を約０．１〜約１００００ｐｐｍの範囲、グルコースオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０１〜約５００ｐｐｍの範囲、グルコースの水性系における濃度を約１〜約１０，０００ｐｐｍの範囲とすることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
ラクトペルオキシダーゼの水性系における濃度を約０．１〜約５０ｐｐｍの範囲、ＮａＢｒの水性系における濃度を約１〜約５００ｐｐｍの範囲、（ＮＨ４）２ＳＯ４の水性系における濃度を約１〜約５００ｐｐｍの範囲、グルコースオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０５〜約５０ｐｐｍの範囲、グルコースの水性系における濃度を約１０〜約５０００ｐｐｍの範囲とすることを特徴とする請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
過酸化物源が過酸化水素を酵素反応により生成する系であって、その系にグルコースオキシダーゼおよびグルコースが含まれ、ハロゲン化物がＫＩであり、かつ抗菌剤を水性系に供給するにあたり、ラクトペルオキシダーゼ、ＫＩ、グルコースオキシダーゼおよびグルコースを水性系に加え、ラクトペルオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０１〜約１０００ｐｐｍの範囲、ＫＩの水性系における濃度を約０．１〜約１００００ｐｐｍの範囲、グルコースオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０１〜約５００ｐｐｍの範囲、グルコースの水性系における濃度を約１〜約１０，０００ｐｐｍの範囲とすることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
ラクトペルオキシダーゼの水性系における濃度を約０．１〜約５０ｐｐｍの範囲、ＫＩの水性系における濃度を約１〜約５００ｐｐｍの範囲、グルコースオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０５〜約５０ｐｐｍの範囲、グルコースの水性系における濃度を約１０〜約５０００ｐｐｍの範囲とすることを特徴とする請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
抗菌剤を水性系または物体に供給するにあたり、ラクトペルオキシダーゼ、過酸化物源、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意のアンモニウム源を水と共に組み合わせて濃厚液を作成し、その濃厚液中でラクトペルオキシダーゼ、過酸化物源由来の過酸化物、ハロゲン化物、および任意のアンモニウム源由来のアンモニウムを相互に反応させてその濃厚液中に抗菌剤を提供し、次にこの濃厚液を水性系または物体に加えることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
濃厚液中に、濃厚液の重量に対しラクトペルオキシダーゼが約０．０１重量％〜約５重量％の濃度範囲で、ＮＨ４Ｂｒが約０．１重量％〜約５０重量％の濃度範囲で、およびＨ２Ｏ２が約０．０３重量％〜約１５重量％の濃度範囲で含まれることを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
濃厚液中に、濃厚液の重量に対しラクトペルオキシダーゼが約０．０５重量％〜約０．５重量％の濃度範囲で、ＮＨ４Ｂｒが約０．５重量％〜約５重量％の濃度範囲で、およびＨ２Ｏ２が約０．１５重量％〜約１．５重量％の濃度範囲で含まれることを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２およびＮＨ４Ｂｒが濃厚液中に重量比で約１：１：５〜１：１０：１００の範囲で存在することを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２およびＮＨ４Ｂｒが濃厚液中に重量比で約１：３：１０の範囲で存在することを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項２９】
濃厚液中に、濃厚液の重量に対しラクトペルオキシダーゼが約０．０１重量％〜約５重量％の濃度範囲で、ＮａＢｒが約０．１重量％〜約５０重量％の濃度範囲で、（ＮＨ４）２ＳＯ４が約０．１重量％〜約５０重量％の濃度範囲で、およびＨ２Ｏ２が約０．０３重量％〜約１５重量％の濃度範囲で含まれることを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項３０】
濃厚液中に、濃厚液の重量に対しラクトペルオキシダーゼが約０．０５重量％〜約０．５重量％の濃度範囲で、ＮａＢｒが約０．５重量％〜約５重量％の濃度範囲で、（ＮＨ４）２ＳＯ４が約０．５重量％〜約５重量％の濃度範囲で、およびＨ２Ｏ２が約０．１５重量％〜約１．５重量％の濃度範囲で含まれることを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項３１】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２、ＮａＢｒ，および（ＮＨ４）２ＳＯ４が濃厚液中に重量比で約１：１：５：５〜１：１０：１００：１００の範囲で存在することを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項３２】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２、ＮａＢｒ，および（ＮＨ４）２ＳＯ４が濃厚液中に重量比で約１：３：１０：１０の範囲で存在することを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項３３】
濃厚液中に、濃厚液の重量に対しラクトペルオキシダーゼが約０．０１重量％〜約５重量％の濃度範囲で、ＫＩが約０．１重量％〜約５０重量％の濃度範囲で、およびＨ２Ｏ２が約０．０３重量％〜約１５重量％の濃度範囲で含まれることを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項３４】
濃厚液中に、濃厚液の重量に対しラクトペルオキシダーゼが約０．０５重量％〜約０．５重量％の濃度範囲で、ＫＩが約０．５重量％〜約５重量％の濃度範囲で、およびＨ２Ｏ２が約０．１５重量％〜約１．５重量％の濃度範囲で含まれることを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項３５】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２、およびＫＩが濃厚液中に重量比で約１：１：５〜１：１０：１００の範囲で存在することを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項３６】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２、およびＫＩが濃厚液中に重量比で約１：３：１０の範囲で存在することを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項３７】
抗菌剤を水性系または物体に供給するにあたり、ラクトペルオキシダーゼ、過酸化物源、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意にアンモニウム源を水性系または物体に別々に加え、その加える条件として抗菌剤が水性系または物体においてインサイツー（in situ）に形成されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３８】
水性系が、金属加工系、冷却水系、排水系、食品加工系、飲料水系、皮革加工水系、洗浄水系、製紙系または紙加工系である請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
水性系における微生物の成育の抑制が、上記抗菌剤を、金属加工系、冷却水系、排水系、食品加工系、飲料水系、皮革加工水系、製紙用白濁水系、製紙系または紙加工系の水取り入れ口（intake water)に供給することによって行われる請求項１に記載の方法。
【請求項４０】
微生物の成育を支える恐れのある水性系または物体上において微生物を殺害または成育阻害する方法であって、以下：
ラクトペルオキシダーゼ、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、ただしハロゲン化物から塩化物を除く、任意に供給するアンモニウム源、および酵素基質に作用して過酸化水素を産生する特性を有する酵素の酵素基質を固体形で含有する第一の水溶解性容器を用意する、
酵素基質に作用して過酸化水素を産生する特性を有する酵素を固体形で含有する第二の水溶解性容器を用意する、
第一の水溶解性容器および第二の水溶解性容器を水に投入し、その条件として、酵素基質に作用して過酸化水素を産生する特性を有する酵素が酵素基質に作用して過酸化水素が産生され、かつラクトペルオキシダーゼ、過酸化水素、ハロゲン化物、任意に供給するアンモニウム源由来のアンモニウムが相互に反応して抗菌剤を形成し、
水性系または物体に抗菌剤が供給され、この抗菌剤によって水性系または物体上における微生物の成育が阻害されること、
を特徴とする方法。
【請求項４１】
第一の水溶解性容器および第二の水溶解性容器を水に投入し、その条件として、酵素基質に作用して過酸化水素を産生する特性を有する酵素が酵素基質に作用して過酸化水素が産生され、かつラクトペルオキシダーゼ、過酸化水素、ハロゲン化物、任意に供給するアンモニウム源由来のアンモニウムが相互に反応して抗菌剤を形成する工程を実施するにあたり、以下の諸工程：
第一の水溶解性容器を水に溶解して、ラクトペルオキシダーゼ、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、任意に供給するアンモニウム源、および酵素反応により過酸化水素を生成する系の酵素基質を含有する第一の濃厚液を形成する、
第二の水溶解性容器を水に溶解して、酵素基質に作用して過酸化水素を産生する特性を有する酵素を含有する第二の濃厚液を形成する、ただし第二の濃厚液を第一の濃厚液と接触させない、
次に、第一の濃厚液および第二の濃厚液を別々に水性系または物体に加え、処理し、その処理の条件として抗菌剤をその水性系または物体上にインサイツー（in situ）で形成する、
によって行うことを特徴とする請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
酵素基質に作用して過酸化水素を産生する特性を有する酵素がグルコースオキシダーゼであり、酵素基質がグルコースである請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
ラクトペルオキシダーゼ、過酸化物源、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、ただしハロゲン化物から塩化物を除く、および任意に供給するアンモニウム源を含む組成物。
【請求項４４】
過酸化物源が過酸化水素である請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
過酸化物源がカルバマイド過酸化物、過炭酸塩、過ホウ酸塩、または過硫酸塩、またはこれらの組合せ物である請求項４３に記載の組成物。
【請求項４６】
過酸化物源が過酸化水素を酵素反応により生成する系であって、その系に過酸化水素を生成する酵素およびその酵素により活性化されて過酸化水素を産生する酵素基質が含まれる請求項４３に記載の組成物。
【請求項４７】
過酸化水素を生成する酵素がグルコースオキシダーゼであり、酵素基質がグルコースである請求項４３に記載の組成物。
【請求項４８】
ハロゲン化物の形態がアルカリ金属またはアルカリ土類金属のハロゲン化塩である請求項４３に記載の組成物。
【請求項４９】
ハロゲン化物が臭化アンモニウム、臭化ナトリウム、臭化カリウム、臭化カルシウム、臭化マグネシウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウム、ヨウ化アンモニウム、ヨウ化カルシウム、またはヨウ化マグネシウム、またはこれらの組合せ物である請求項４３に記載の組成物。
【請求項５０】
ハロゲン化物がヨウ化カリウムである請求項４３に記載の組成物。
【請求項５１】
チオシアン酸塩がチオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸アンモニウム、またはチオシアン酸カリウム、またはこれらの組合せ物である請求項４３に記載の組成物。
【請求項５２】
アンモニウム源がアンモニウム塩である請求項４３に記載の組成物。
【請求項５３】
ハロゲン化物およびアンモニウム源が共にハロゲン化アンモニウムによって供給される請求項４３に記載の組成物。
【請求項５４】
ハロゲン化物およびアンモニウム源が共に臭化アンモニウムによって供給される請求項４３に記載の組成物。
【請求項５５】
ハロゲン化物が臭化ナトリウムであり、アンモニウム源が硫酸アンモニウムである請求項４３に記載の組成物。
【請求項５６】
ラクトペルオキシダーゼの水性系（aqueous system)における濃度（使用時）が約０．０１〜約１０００ｐｐｍの範囲、過酸化物源により得られる過酸化水素の水性系における濃度が約０．０１〜約１０００ｐｐｍの範囲、ハロゲン化物の水性系における濃度が約０．１〜約１０，０００ｐｐｍの範囲、任意のアンモニウム源により得られるアンモニウムイオンの水性系における濃度が約０．０〜約１０，０００ｐｐｍの範囲である請求項４３に記載の組成物。
【請求項５７】
ラクトペルオキシダーゼおよび臭化アンモニウムを含む組成物。
【請求項５８】
ラクトペルオキシダーゼ、臭化ナトリウム、および硫酸アンモニウムを含む組成物。
【請求項５９】
該組成物の重量に対しラクトペルオキシダーゼを約０．０１重量％〜約５重量％の濃度で、ＮＨ４Ｂｒを約０．１重量％〜約５０重量％の濃度で、およびＨ２Ｏ２を約０．０３重量％〜約１５重量％の濃度で含有する水性系(aqueous system)を含む請求項５４に記載の組成物。
【請求項６０】
該組成物の重量に対しラクトペルオキシダーゼを約０．０５重量％〜約０．５重量％の濃度で、ＮＨ４Ｂｒを約０．５重量％〜約５重量％の濃度で、およびＨ２Ｏ２を約０．１５重量％〜約１．５重量％の濃度で含有する水性系(aqueous system)を含む請求項５４に記載の組成物。
【請求項６１】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２およびＮＨ４Ｂｒが約１：１：５〜１：１０：１００の重量比で存在する請求項５４に記載の組成物。
【請求項６２】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２およびＮＨ４Ｂｒが約１：３：１０の重量比で存在する請求項５４に記載の組成物。
【請求項６３】
該組成物の重量に対しラクトペルオキシダーゼを約０．０１重量％〜約５重量％の濃度で、ＮａＢｒを約０．１重量％〜約５０重量％の濃度で、（ＮＨ４）２ＳＯ４を約０．１重量％〜約５０重量％の濃度で、およびＨ２Ｏ２を約０．０３重量％〜約１５重量％の濃度で含有する水性系(aqueous system)を含む請求項５５に記載の組成物。
【請求項６４】
該組成物の重量に対しラクトペルオキシダーゼを約０．０５重量％〜約０．５重量％の濃度で、ＮａＢｒを約０．５重量％〜約５重量％の濃度で、（ＮＨ４）２ＳＯ４を約０．５重量％〜約５重量％の濃度で、およびＨ２Ｏ２を約０．１５重量％〜約１．５重量％の濃度で含有する水性系(aqueous system)を含む請求項５５に記載の組成物。
【請求項６５】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２、ＮａＢｒ、および（ＮＨ４）２ＳＯ４が約１：１：５：５〜１：１０：１００：１００の重量比で存在する請求項５５に記載の組成物。
【請求項６６】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２、ＮａＢｒ，および（ＮＨ４）２ＳＯ４が重量比で約１：３：１０：１０で存在する請求項５５に記載の組成物。
【請求項６７】
該組成物の重量に対しラクトペルオキシダーゼを約０．０１重量％〜約５重量％の濃度で、ＫＩを約０．１重量％〜約５０重量％の濃度で、およびＨ２Ｏ２を約０．０３重量％〜約１５重量％の濃度で含有する水性系(aqueous system)を含む請求項４９に記載の組成物。
【請求項６８】
該組成物の重量に対しラクトペルオキシダーゼを約０．０５重量％〜約０．５重量％の濃度で、ＫＩを約０．５重量％〜約５重量％の濃度で、およびＨ２Ｏ２を約０．１５重量％〜約１．５重量％の濃度で含有する水性系(aqueous system)を含む請求項５０に記載の組成物。
【請求項６９】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２、およびＫＩが約１：１：５〜１：１０：１００の重量比で存在する請求項５０に記載の組成物。
【請求項７０】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２、およびＫＩが約１：３：１０の重量比で存在する請求項５０に記載の組成物。
【請求項７１】
ラクトペルオキシダーゼを約０．０１〜約１０００ｐｐｍの濃度範囲、ＮＨ４Ｂｒを約０．１〜約１０，０００ｐｐｍの濃度範囲、グルコースオキシダーゼを約０．０１〜約５００ｐｐｍの濃度範囲、グルコースを約１〜約１０，０００ｐｐｍの濃度範囲で含有する水性系(aqueous system)を含む請求項４３に記載の組成物。
【請求項７２】
ラクトペルオキシダーゼを約０．０１〜約１０００ｐｐｍの濃度範囲、ＮａＢｒを約０．１〜約１０，０００ｐｐｍの濃度範囲、（ＮＨ４）２ＳＯ４を約０．１〜約１０，０００ｐｐｍの濃度範囲、グルコースオキシダーゼを約０．０１〜約５００ｐｐｍの濃度範囲、グルコースを約１〜約１０，０００ｐｐｍの濃度範囲で含有する水性系(aqueous system)を含む請求項４３に記載の組成物。
【請求項７３】
ラクトペルオキシダーゼを約０．０１〜約１０００ｐｐｍの濃度範囲、ＫＩを約０．１〜約１０，０００ｐｐｍの濃度範囲、グルコースオキシダーゼを約０．０１〜約５００ｐｐｍの濃度範囲、グルコースを約１〜約１０，０００ｐｐｍの濃度範囲で含有する水性系(aqueous system)を含む???請求項４３に記載の組成物。
【請求項７４】
請求項４７に記載の組成物であって、この組成物を実質的に反応の起こらない形態に所定期間維持するために、グルコースオキシダーゼをラクトペルオキシダーゼ、グルコース、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意のアンモニウム源から物理的に分離してある組成物。
【請求項７５】
グルコースオキシダーゼが空気から遮断される条件下に保持される請求項７４に記載の組成物。
【請求項７６】
ラクトペルオキシダーゼ、グルコース、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意のアンモニウム源は第一の水溶解性容器に保持しグルコースオキシダーゼは第二の水溶解性容器に保持する、あるいはラクトペルオキシダーゼ、グルコース、グルコースオキシダーゼ、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意のアンモニウム源を少なくとも１つの仕切り区画を有する容器に収納し、グルコースオキシダーゼがラクトペルオキシダーゼ、グルコース、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意のアンモニウム源から物理的に分離されている請求項７４に記載の組成物。
【請求項７７】
グルコースオキシダーゼ、ラクトペルオキシダーゼ、臭化アンモニウム、およびグルコースを約１：１：１０：１００〜約１：５：１００：５０００の範囲の重量比で含有する請求項４３に記載の組成物。
【請求項７８】
グルコースオキシダーゼ、ラクトペルオキシダーゼ、臭化ナトリウム、硫酸アンモニウム、およびグルコースを約１：１：１０：１０：１００〜約１：５：１００：１００：５０００の範囲の重量比で含有する請求項４３に記載の組成物。
【請求項７９】
グルコースオキシダーゼ、ラクトペルオキシダーゼ、ヨウ化カリウム、およびグルコースを約１：１：１０：１００〜約１：５：１００：５０００の範囲の重量比で含有する請求項４３に記載の組成物。
【請求項８０】
微生物による侵襲を受けやすい製品、材料、または媒体の中または上において少なくとも１つの微生物の成育を抑制する方法であって、その製品、材料、または媒体に請求項４３に記載の組成物を加えることを特徴とする方法。
【請求項８１】
材料または媒体が固体、分散体、乳化体、または溶液体の形態である請求項８０に記載の方法。
【請求項１】
少なくとも１つの微生物の成育を、該微生物の成育を支える恐れのある水性系または物体上において抑制する方法であって、
（ａ）ラクトペルオキシダーゼ、（ｂ）過酸化物源、（ｃ）ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、ただしハロゲン化物から塩化物を除く、および任意に（ｄ）アンモニウム源、を供給し、その供給の条件として、ラクトペルオキシダーゼ、過酸化物源由来の過酸化物、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意に供給されるアンモニウム源由来のアンモニウムが相互に反応して該水性系または物体上に抗菌剤が供給され、かつ該抗菌剤によって少なくとも１つの微生物の成育がその水性系または物体上において抑制されることを特徴とする方法。
【請求項２】
ラクトペルオキシダーゼを哺乳類の乳汁から得る請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ラクトペルオキシダーゼをウシの乳汁から得る請求項１に記載の方法。
【請求項４】
過酸化物が過酸化水素である請求項１に記載の方法。
【請求項５】
過酸化物源がカルバマイド過酸化物、過炭酸塩、過ホウ酸塩、または過硫酸塩、またはこれらの組合せ物である請求項１に記載の方法。
【請求項６】
過酸化物源が過酸化水素を酵素反応により生成する系であって、その系に過酸化水素を生成する酵素およびその酵素により活性化されて過酸化水素を産生する酵素基質が含まれる請求項１に記載の方法。
【請求項７】
過酸化水素を生成する酵素がグルコースオキシダーゼであり、酵素基質がグルコースである請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ハロゲン化物の形態がアルカリ類金属またはアルカリ土類金属のハロゲン化塩である請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ハロゲン化物が臭化アンモニウム、臭化ナトリウム、臭化カリウム、臭化カルシウム、臭化マグネシウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウム、ヨウ化アンモニウム、ヨウ化カルシウム、またはヨウ化マグネシウム、またはこれらの組合せ物である請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ハロゲン化物がヨウ化カリウムである請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
チオシアン酸塩がチオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸アンモニウム、またはチオシアン酸カリウム、またはこれらの組合せ物である請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
アンモニウム源がアンモニウム塩である請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ハロゲン化物およびアンモニウム源が共にハロゲン化アンモニウムによって提供される請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
ハロゲン化物およびアンモニウム源が共に臭化アンモニウムによって供給される請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
ハロゲン化物が臭化ナトリウムであり、アンモニウム源が硫酸アンモニウムである請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
抗菌剤を水性系に供給するにあたり、ラクトペルオキシダーゼ、過酸化物源、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、およびアンモニウム源を水性系に加え、ラクトペルオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０１〜約１０００ｐｐｍの範囲、過酸化物源により得られる過酸化水素の水性系における濃度を約０．０１〜約１０００ｐｐｍの範囲、ハロゲン化物の水性系における濃度を約０．１〜約１０，０００ｐｐｍの範囲、アンモニウム源により得られるアンモニウムイオンの水性系における濃度を約０．０〜約１０，０００ｐｐｍの範囲とすることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
ラクトペルオキシダーゼの水性系における濃度を約０．１〜約５０ｐｐｍの範囲、過酸化物源により得られる過酸化水素の水性系における濃度を約０．１〜約２００ｐｐｍの範囲、ハロゲン化物の水性系における濃度を約１〜約５００ｐｐｍの範囲、アンモニウム源により得られるアンモニウムイオンの水性系における濃度を約０〜約５００ｐｐｍの範囲とすることを特徴とする請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
過酸化物源が過酸化水素を酵素反応により生成する系であって、その系にグルコースオキシダーゼおよびグルコースが含まれ、ハロゲン化物およびアンモニウム源が共にＮＨ４Ｂｒによって供給され、かつ抗菌剤を水性系に供給するにあたり、ラクトペルオキシダーゼ、ＮＨ４Ｂｒ、グルコースオキシダーゼおよびグルコースを水性系に加え、ラクトペルオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０１〜約１０００ｐｐｍの範囲、ＮＨ４Ｂｒの水性系における濃度を約０．１〜約１００００ｐｐｍの範囲、グルコースオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０１〜約５００ｐｐｍの範囲、グルコースの水性系における濃度を約１〜約１０，０００ｐｐｍの範囲とすることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
ラクトペルオキシダーゼの水性系における濃度を約０．１〜約５０ｐｐｍの範囲、ＮＨ４Ｂｒの水性系における濃度を約１〜約５００ｐｐｍの範囲、グルコースオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０５〜約５０ｐｐｍの範囲、グルコースの水性系における濃度を約１０〜約５０００ｐｐｍの範囲とすることを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
過酸化物源が過酸化水素を酵素反応により生成する系であって、その系にグルコースオキシダーゼおよびグルコースが含まれ、ハロゲン化物がＮａＢｒであり、アンモニウム源が（ＮＨ４）２ＳＯ４であり、かつ抗菌剤を水性系に供給するにあたり、ラクトペルオキシダーゼ、ＮａＢｒ、（ＮＨ４）２ＳＯ４、グルコースオキシダーゼおよびグルコースを水性系に加え、ラクトペルオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０１〜約１０００ｐｐｍの範囲、ＮａＢｒの水性系における濃度を約０．１〜約１００００ｐｐｍの範囲、（ＮＨ４）２ＳＯ４の水性系における濃度を約０．１〜約１００００ｐｐｍの範囲、グルコースオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０１〜約５００ｐｐｍの範囲、グルコースの水性系における濃度を約１〜約１０，０００ｐｐｍの範囲とすることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
ラクトペルオキシダーゼの水性系における濃度を約０．１〜約５０ｐｐｍの範囲、ＮａＢｒの水性系における濃度を約１〜約５００ｐｐｍの範囲、（ＮＨ４）２ＳＯ４の水性系における濃度を約１〜約５００ｐｐｍの範囲、グルコースオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０５〜約５０ｐｐｍの範囲、グルコースの水性系における濃度を約１０〜約５０００ｐｐｍの範囲とすることを特徴とする請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
過酸化物源が過酸化水素を酵素反応により生成する系であって、その系にグルコースオキシダーゼおよびグルコースが含まれ、ハロゲン化物がＫＩであり、かつ抗菌剤を水性系に供給するにあたり、ラクトペルオキシダーゼ、ＫＩ、グルコースオキシダーゼおよびグルコースを水性系に加え、ラクトペルオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０１〜約１０００ｐｐｍの範囲、ＫＩの水性系における濃度を約０．１〜約１００００ｐｐｍの範囲、グルコースオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０１〜約５００ｐｐｍの範囲、グルコースの水性系における濃度を約１〜約１０，０００ｐｐｍの範囲とすることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
ラクトペルオキシダーゼの水性系における濃度を約０．１〜約５０ｐｐｍの範囲、ＫＩの水性系における濃度を約１〜約５００ｐｐｍの範囲、グルコースオキシダーゼの水性系における濃度を約０．０５〜約５０ｐｐｍの範囲、グルコースの水性系における濃度を約１０〜約５０００ｐｐｍの範囲とすることを特徴とする請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
抗菌剤を水性系または物体に供給するにあたり、ラクトペルオキシダーゼ、過酸化物源、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意のアンモニウム源を水と共に組み合わせて濃厚液を作成し、その濃厚液中でラクトペルオキシダーゼ、過酸化物源由来の過酸化物、ハロゲン化物、および任意のアンモニウム源由来のアンモニウムを相互に反応させてその濃厚液中に抗菌剤を提供し、次にこの濃厚液を水性系または物体に加えることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
濃厚液中に、濃厚液の重量に対しラクトペルオキシダーゼが約０．０１重量％〜約５重量％の濃度範囲で、ＮＨ４Ｂｒが約０．１重量％〜約５０重量％の濃度範囲で、およびＨ２Ｏ２が約０．０３重量％〜約１５重量％の濃度範囲で含まれることを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
濃厚液中に、濃厚液の重量に対しラクトペルオキシダーゼが約０．０５重量％〜約０．５重量％の濃度範囲で、ＮＨ４Ｂｒが約０．５重量％〜約５重量％の濃度範囲で、およびＨ２Ｏ２が約０．１５重量％〜約１．５重量％の濃度範囲で含まれることを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２およびＮＨ４Ｂｒが濃厚液中に重量比で約１：１：５〜１：１０：１００の範囲で存在することを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２およびＮＨ４Ｂｒが濃厚液中に重量比で約１：３：１０の範囲で存在することを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項２９】
濃厚液中に、濃厚液の重量に対しラクトペルオキシダーゼが約０．０１重量％〜約５重量％の濃度範囲で、ＮａＢｒが約０．１重量％〜約５０重量％の濃度範囲で、（ＮＨ４）２ＳＯ４が約０．１重量％〜約５０重量％の濃度範囲で、およびＨ２Ｏ２が約０．０３重量％〜約１５重量％の濃度範囲で含まれることを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項３０】
濃厚液中に、濃厚液の重量に対しラクトペルオキシダーゼが約０．０５重量％〜約０．５重量％の濃度範囲で、ＮａＢｒが約０．５重量％〜約５重量％の濃度範囲で、（ＮＨ４）２ＳＯ４が約０．５重量％〜約５重量％の濃度範囲で、およびＨ２Ｏ２が約０．１５重量％〜約１．５重量％の濃度範囲で含まれることを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項３１】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２、ＮａＢｒ，および（ＮＨ４）２ＳＯ４が濃厚液中に重量比で約１：１：５：５〜１：１０：１００：１００の範囲で存在することを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項３２】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２、ＮａＢｒ，および（ＮＨ４）２ＳＯ４が濃厚液中に重量比で約１：３：１０：１０の範囲で存在することを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項３３】
濃厚液中に、濃厚液の重量に対しラクトペルオキシダーゼが約０．０１重量％〜約５重量％の濃度範囲で、ＫＩが約０．１重量％〜約５０重量％の濃度範囲で、およびＨ２Ｏ２が約０．０３重量％〜約１５重量％の濃度範囲で含まれることを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項３４】
濃厚液中に、濃厚液の重量に対しラクトペルオキシダーゼが約０．０５重量％〜約０．５重量％の濃度範囲で、ＫＩが約０．５重量％〜約５重量％の濃度範囲で、およびＨ２Ｏ２が約０．１５重量％〜約１．５重量％の濃度範囲で含まれることを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項３５】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２、およびＫＩが濃厚液中に重量比で約１：１：５〜１：１０：１００の範囲で存在することを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項３６】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２、およびＫＩが濃厚液中に重量比で約１：３：１０の範囲で存在することを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項３７】
抗菌剤を水性系または物体に供給するにあたり、ラクトペルオキシダーゼ、過酸化物源、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意にアンモニウム源を水性系または物体に別々に加え、その加える条件として抗菌剤が水性系または物体においてインサイツー（in situ）に形成されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３８】
水性系が、金属加工系、冷却水系、排水系、食品加工系、飲料水系、皮革加工水系、洗浄水系、製紙系または紙加工系である請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
水性系における微生物の成育の抑制が、上記抗菌剤を、金属加工系、冷却水系、排水系、食品加工系、飲料水系、皮革加工水系、製紙用白濁水系、製紙系または紙加工系の水取り入れ口（intake water)に供給することによって行われる請求項１に記載の方法。
【請求項４０】
微生物の成育を支える恐れのある水性系または物体上において微生物を殺害または成育阻害する方法であって、以下：
ラクトペルオキシダーゼ、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、ただしハロゲン化物から塩化物を除く、任意に供給するアンモニウム源、および酵素基質に作用して過酸化水素を産生する特性を有する酵素の酵素基質を固体形で含有する第一の水溶解性容器を用意する、
酵素基質に作用して過酸化水素を産生する特性を有する酵素を固体形で含有する第二の水溶解性容器を用意する、
第一の水溶解性容器および第二の水溶解性容器を水に投入し、その条件として、酵素基質に作用して過酸化水素を産生する特性を有する酵素が酵素基質に作用して過酸化水素が産生され、かつラクトペルオキシダーゼ、過酸化水素、ハロゲン化物、任意に供給するアンモニウム源由来のアンモニウムが相互に反応して抗菌剤を形成し、
水性系または物体に抗菌剤が供給され、この抗菌剤によって水性系または物体上における微生物の成育が阻害されること、
を特徴とする方法。
【請求項４１】
第一の水溶解性容器および第二の水溶解性容器を水に投入し、その条件として、酵素基質に作用して過酸化水素を産生する特性を有する酵素が酵素基質に作用して過酸化水素が産生され、かつラクトペルオキシダーゼ、過酸化水素、ハロゲン化物、任意に供給するアンモニウム源由来のアンモニウムが相互に反応して抗菌剤を形成する工程を実施するにあたり、以下の諸工程：
第一の水溶解性容器を水に溶解して、ラクトペルオキシダーゼ、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、任意に供給するアンモニウム源、および酵素反応により過酸化水素を生成する系の酵素基質を含有する第一の濃厚液を形成する、
第二の水溶解性容器を水に溶解して、酵素基質に作用して過酸化水素を産生する特性を有する酵素を含有する第二の濃厚液を形成する、ただし第二の濃厚液を第一の濃厚液と接触させない、
次に、第一の濃厚液および第二の濃厚液を別々に水性系または物体に加え、処理し、その処理の条件として抗菌剤をその水性系または物体上にインサイツー（in situ）で形成する、
によって行うことを特徴とする請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
酵素基質に作用して過酸化水素を産生する特性を有する酵素がグルコースオキシダーゼであり、酵素基質がグルコースである請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
ラクトペルオキシダーゼ、過酸化物源、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、ただしハロゲン化物から塩化物を除く、および任意に供給するアンモニウム源を含む組成物。
【請求項４４】
過酸化物源が過酸化水素である請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
過酸化物源がカルバマイド過酸化物、過炭酸塩、過ホウ酸塩、または過硫酸塩、またはこれらの組合せ物である請求項４３に記載の組成物。
【請求項４６】
過酸化物源が過酸化水素を酵素反応により生成する系であって、その系に過酸化水素を生成する酵素およびその酵素により活性化されて過酸化水素を産生する酵素基質が含まれる請求項４３に記載の組成物。
【請求項４７】
過酸化水素を生成する酵素がグルコースオキシダーゼであり、酵素基質がグルコースである請求項４３に記載の組成物。
【請求項４８】
ハロゲン化物の形態がアルカリ金属またはアルカリ土類金属のハロゲン化塩である請求項４３に記載の組成物。
【請求項４９】
ハロゲン化物が臭化アンモニウム、臭化ナトリウム、臭化カリウム、臭化カルシウム、臭化マグネシウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウム、ヨウ化アンモニウム、ヨウ化カルシウム、またはヨウ化マグネシウム、またはこれらの組合せ物である請求項４３に記載の組成物。
【請求項５０】
ハロゲン化物がヨウ化カリウムである請求項４３に記載の組成物。
【請求項５１】
チオシアン酸塩がチオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸アンモニウム、またはチオシアン酸カリウム、またはこれらの組合せ物である請求項４３に記載の組成物。
【請求項５２】
アンモニウム源がアンモニウム塩である請求項４３に記載の組成物。
【請求項５３】
ハロゲン化物およびアンモニウム源が共にハロゲン化アンモニウムによって供給される請求項４３に記載の組成物。
【請求項５４】
ハロゲン化物およびアンモニウム源が共に臭化アンモニウムによって供給される請求項４３に記載の組成物。
【請求項５５】
ハロゲン化物が臭化ナトリウムであり、アンモニウム源が硫酸アンモニウムである請求項４３に記載の組成物。
【請求項５６】
ラクトペルオキシダーゼの水性系（aqueous system)における濃度（使用時）が約０．０１〜約１０００ｐｐｍの範囲、過酸化物源により得られる過酸化水素の水性系における濃度が約０．０１〜約１０００ｐｐｍの範囲、ハロゲン化物の水性系における濃度が約０．１〜約１０，０００ｐｐｍの範囲、任意のアンモニウム源により得られるアンモニウムイオンの水性系における濃度が約０．０〜約１０，０００ｐｐｍの範囲である請求項４３に記載の組成物。
【請求項５７】
ラクトペルオキシダーゼおよび臭化アンモニウムを含む組成物。
【請求項５８】
ラクトペルオキシダーゼ、臭化ナトリウム、および硫酸アンモニウムを含む組成物。
【請求項５９】
該組成物の重量に対しラクトペルオキシダーゼを約０．０１重量％〜約５重量％の濃度で、ＮＨ４Ｂｒを約０．１重量％〜約５０重量％の濃度で、およびＨ２Ｏ２を約０．０３重量％〜約１５重量％の濃度で含有する水性系(aqueous system)を含む請求項５４に記載の組成物。
【請求項６０】
該組成物の重量に対しラクトペルオキシダーゼを約０．０５重量％〜約０．５重量％の濃度で、ＮＨ４Ｂｒを約０．５重量％〜約５重量％の濃度で、およびＨ２Ｏ２を約０．１５重量％〜約１．５重量％の濃度で含有する水性系(aqueous system)を含む請求項５４に記載の組成物。
【請求項６１】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２およびＮＨ４Ｂｒが約１：１：５〜１：１０：１００の重量比で存在する請求項５４に記載の組成物。
【請求項６２】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２およびＮＨ４Ｂｒが約１：３：１０の重量比で存在する請求項５４に記載の組成物。
【請求項６３】
該組成物の重量に対しラクトペルオキシダーゼを約０．０１重量％〜約５重量％の濃度で、ＮａＢｒを約０．１重量％〜約５０重量％の濃度で、（ＮＨ４）２ＳＯ４を約０．１重量％〜約５０重量％の濃度で、およびＨ２Ｏ２を約０．０３重量％〜約１５重量％の濃度で含有する水性系(aqueous system)を含む請求項５５に記載の組成物。
【請求項６４】
該組成物の重量に対しラクトペルオキシダーゼを約０．０５重量％〜約０．５重量％の濃度で、ＮａＢｒを約０．５重量％〜約５重量％の濃度で、（ＮＨ４）２ＳＯ４を約０．５重量％〜約５重量％の濃度で、およびＨ２Ｏ２を約０．１５重量％〜約１．５重量％の濃度で含有する水性系(aqueous system)を含む請求項５５に記載の組成物。
【請求項６５】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２、ＮａＢｒ、および（ＮＨ４）２ＳＯ４が約１：１：５：５〜１：１０：１００：１００の重量比で存在する請求項５５に記載の組成物。
【請求項６６】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２、ＮａＢｒ，および（ＮＨ４）２ＳＯ４が重量比で約１：３：１０：１０で存在する請求項５５に記載の組成物。
【請求項６７】
該組成物の重量に対しラクトペルオキシダーゼを約０．０１重量％〜約５重量％の濃度で、ＫＩを約０．１重量％〜約５０重量％の濃度で、およびＨ２Ｏ２を約０．０３重量％〜約１５重量％の濃度で含有する水性系(aqueous system)を含む請求項４９に記載の組成物。
【請求項６８】
該組成物の重量に対しラクトペルオキシダーゼを約０．０５重量％〜約０．５重量％の濃度で、ＫＩを約０．５重量％〜約５重量％の濃度で、およびＨ２Ｏ２を約０．１５重量％〜約１．５重量％の濃度で含有する水性系(aqueous system)を含む請求項５０に記載の組成物。
【請求項６９】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２、およびＫＩが約１：１：５〜１：１０：１００の重量比で存在する請求項５０に記載の組成物。
【請求項７０】
ラクトペルオキシダーゼ、Ｈ２Ｏ２、およびＫＩが約１：３：１０の重量比で存在する請求項５０に記載の組成物。
【請求項７１】
ラクトペルオキシダーゼを約０．０１〜約１０００ｐｐｍの濃度範囲、ＮＨ４Ｂｒを約０．１〜約１０，０００ｐｐｍの濃度範囲、グルコースオキシダーゼを約０．０１〜約５００ｐｐｍの濃度範囲、グルコースを約１〜約１０，０００ｐｐｍの濃度範囲で含有する水性系(aqueous system)を含む請求項４３に記載の組成物。
【請求項７２】
ラクトペルオキシダーゼを約０．０１〜約１０００ｐｐｍの濃度範囲、ＮａＢｒを約０．１〜約１０，０００ｐｐｍの濃度範囲、（ＮＨ４）２ＳＯ４を約０．１〜約１０，０００ｐｐｍの濃度範囲、グルコースオキシダーゼを約０．０１〜約５００ｐｐｍの濃度範囲、グルコースを約１〜約１０，０００ｐｐｍの濃度範囲で含有する水性系(aqueous system)を含む請求項４３に記載の組成物。
【請求項７３】
ラクトペルオキシダーゼを約０．０１〜約１０００ｐｐｍの濃度範囲、ＫＩを約０．１〜約１０，０００ｐｐｍの濃度範囲、グルコースオキシダーゼを約０．０１〜約５００ｐｐｍの濃度範囲、グルコースを約１〜約１０，０００ｐｐｍの濃度範囲で含有する水性系(aqueous system)を含む???請求項４３に記載の組成物。
【請求項７４】
請求項４７に記載の組成物であって、この組成物を実質的に反応の起こらない形態に所定期間維持するために、グルコースオキシダーゼをラクトペルオキシダーゼ、グルコース、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意のアンモニウム源から物理的に分離してある組成物。
【請求項７５】
グルコースオキシダーゼが空気から遮断される条件下に保持される請求項７４に記載の組成物。
【請求項７６】
ラクトペルオキシダーゼ、グルコース、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意のアンモニウム源は第一の水溶解性容器に保持しグルコースオキシダーゼは第二の水溶解性容器に保持する、あるいはラクトペルオキシダーゼ、グルコース、グルコースオキシダーゼ、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意のアンモニウム源を少なくとも１つの仕切り区画を有する容器に収納し、グルコースオキシダーゼがラクトペルオキシダーゼ、グルコース、ハロゲン化物またはチオシアン酸塩、および任意のアンモニウム源から物理的に分離されている請求項７４に記載の組成物。
【請求項７７】
グルコースオキシダーゼ、ラクトペルオキシダーゼ、臭化アンモニウム、およびグルコースを約１：１：１０：１００〜約１：５：１００：５０００の範囲の重量比で含有する請求項４３に記載の組成物。
【請求項７８】
グルコースオキシダーゼ、ラクトペルオキシダーゼ、臭化ナトリウム、硫酸アンモニウム、およびグルコースを約１：１：１０：１０：１００〜約１：５：１００：１００：５０００の範囲の重量比で含有する請求項４３に記載の組成物。
【請求項７９】
グルコースオキシダーゼ、ラクトペルオキシダーゼ、ヨウ化カリウム、およびグルコースを約１：１：１０：１００〜約１：５：１００：５０００の範囲の重量比で含有する請求項４３に記載の組成物。
【請求項８０】
微生物による侵襲を受けやすい製品、材料、または媒体の中または上において少なくとも１つの微生物の成育を抑制する方法であって、その製品、材料、または媒体に請求項４３に記載の組成物を加えることを特徴とする方法。
【請求項８１】
材料または媒体が固体、分散体、乳化体、または溶液体の形態である請求項８０に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【公表番号】特表２００８−５４３８５０（Ｐ２００８−５４３８５０Ａ）
【公表日】平成２０年１２月４日（２００８．１２．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５１７００３（Ｐ２００８−５１７００３）
【出願日】平成１８年６月１３日（２００６．６．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０２２９２８
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１３８２７１
【国際公開日】平成１８年１２月２８日（２００６．１２．２８）
【出願人】（５９０００３２３８）バックマン・ラボラトリーズ・インターナショナル・インコーポレーテッド (18)
【氏名又は名称原語表記】ＢＵＣＫＭＡＮ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ ＩＮＣＯＲＰＯＲＡＴＥＤ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年１２月４日（２００８．１２．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年６月１３日（２００６．６．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０２２９２８
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１３８２７１
【国際公開日】平成１８年１２月２８日（２００６．１２．２８）
【出願人】（５９０００３２３８）バックマン・ラボラトリーズ・インターナショナル・インコーポレーテッド (18)
【氏名又は名称原語表記】ＢＵＣＫＭＡＮ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ ＩＮＣＯＲＰＯＲＡＴＥＤ
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]