治療薬として有用な一価抗体断片
【課題】分子生物学及び抗体医療分野の、治療薬としての使用のために特徴的性質を有する新規の安定化一価抗体断片を含有してなる組成物及び方法を提供する。
【解決手段】単一抗原結合アーム及びＦｃ領域を含有してなる抗体断片であり、該抗原結合アームを含んでなるＦａｂ分子と比較して該抗体断片の安定性が増大しており、該Ｆｃ領域が第一及び第二Ｆｃポリペプチドの複合体を含んでなり、Ｆｃポリペプチドの一方だけでなく両方がＮ末端切断型重鎖である、抗体断片。
【解決手段】単一抗原結合アーム及びＦｃ領域を含有してなる抗体断片であり、該抗原結合アームを含んでなるＦａｂ分子と比較して該抗体断片の安定性が増大しており、該Ｆｃ領域が第一及び第二Ｆｃポリペプチドの複合体を含んでなり、Ｆｃポリペプチドの一方だけでなく両方がＮ末端切断型重鎖である、抗体断片。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
単一抗原結合アーム及びＦｃ領域を含有してなる抗体断片であり、該抗原結合アームを含んでなるＦａｂ分子と比較して該抗体断片の安定性が増大しており、該Ｆｃ領域が第一及び第二Ｆｃポリペプチドの複合体を含んでなり、Ｆｃポリペプチドの一方だけでなく両方がＮ末端切断型重鎖である、抗体断片。
【請求項２】
前記抗体断片がアグリコシル化されている、請求項１に記載の抗体断片。
【請求項３】
前記抗体断片が免疫抑制性質をほとんど持たない、請求項１又は２に記載の抗体断片。
【請求項４】
前記免疫抑制性質がＴ細胞枯渇に影響する能力を含む、請求項３に記載の抗体断片。
【請求項５】
ＦｃＲｎ結合以外の実質的なエフェクター機能を保持しない、請求項１ないし４の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項６】
前記エフェクター機能が補体溶解である、請求項５に記載の抗体断片。
【請求項７】
前記抗体断片がＦｃＲｎに結合する、請求項１ないし６の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項８】
Ｔ細胞表面抗原に特異的に結合しない、請求項１ないし７の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項９】
前記Ｔ細胞表面抗原がＣＤ３又はＣＤ４である、請求項８に記載の抗体断片。
【請求項１０】
前記Ｔ細胞表面抗原がＣＤ３である、請求項９に記載の抗体断片。
【請求項１１】
腫瘍抗原に特異的に結合する、請求項１ないし１０の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項１２】
レセプター二量体化により活性化される細胞表面レセプターに特異的に結合する、請求項１ないし１１の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項１３】
前記抗体断片が軽鎖可変ドメインを含有してなる第一ポリペプチド、重鎖可変ドメイン及び該第一Ｆｃポリペプチドを含有してなる第二ポリペプチド、並びに、該第二Ｆｃポリペプチドを含有してなる第三ポリペプチドを含んでなる、請求項１ないし１２の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項１４】
前記第一ポリペプチドがヒト軽鎖定常ドメインに融合した非ヒト軽鎖可変ドメインを含んでなる、請求項１３に記載の抗体断片。
【請求項１５】
前記第一ポリペプチドがヒト化又はヒトフレームワーク配列に融合した非ヒト種由来のＣＤＲを含んでなる、請求項１３に記載の抗体断片。
【請求項１６】
前記第二ポリペプチドがヒト重鎖定常ドメインに融合した非ヒト重鎖可変ドメインを含んでなる、請求項１３に記載の抗体断片。
【請求項１７】
前記第二ポリペプチドがヒト化又はヒトフレームワーク配列に融合した非ヒト種由来のＣＤＲを含んでなる、請求項１３に記載の抗体断片。
【請求項１８】
前記第三ポリペプチドがＮ末端に少なくとも一のヒンジ配列を含有するＮ末端切断型重鎖を含んでなる、請求項１３に記載の抗体断片。
【請求項１９】
前記２つのＦｃポリペプチドが共有結合している、請求項１ないし１８の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２０】
前記２つのＦｃポリペプチドがヒンジ領域で分子内ジスルフィド結合を介して連結している、請求項１ないし１９の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２１】
標的分子に結合する場合に、前記抗体断片が標的分子の多量体化を阻害する、請求項１ないし２０の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２２】
標的分子に結合する場合に、前記抗体断片が同系結合パートナーの標的分子への結合を阻害する、請求項１ないし２１の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２３】
前記第一Ｆｃポリペプチドと前記第二Ｆｃポリペプチドが作用領域で会合し、該第二Ｆｃポリペプチドの作用領域が第一Ｆｃポリペプチドの作用領域内のキャビティ内に位置しうる隆起を含んでなる、請求項１ないし２２の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２４】
前記第二Ｆｃポリペプチドが鋳型／起源ポリペプチドから変更されて前記隆起をコードしているかあるいは、前記第一Ｆｃポリペプチドが鋳型／起源ポリペプチドから変更されて前記キャビティをコードしているか、その両方である、請求項１ないし２３の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２５】
前記第二Ｆｃポリペプチドが鋳型／起源ポリペプチドから変更されて前記隆起をコードしており、第一Ｆｃポリペプチドが鋳型／起源ポリペプチドから変更されて前記キャビティをコードしているか、その両方である、請求項１ないし２４の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２６】
前記第一Ｆｃポリペプチドと前記第二Ｆｃポリペプチドが作用領域で会合し、該第二Ｆｃポリペプチドの作用領域が第一Ｆｃポリペプチドの作用領域内のキャビティ内に位置しうる隆起を含んでなり、該キャビティ又は該隆起あるいはその両方が該第一Ｆｃポリペプチド及び該第二Ｆｃポリペプチドのそれぞれの作用領域内に取り込まれている、請求項１ないし２５の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２７】
前記隆起及び前記キャビティが前記それぞれのＦｃポリペプチドの作用領域内に取り込まれている、請求項２４ないし２６の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２８】
前記隆起及び前記キャビティのそれぞれが天然に生じるアミノ酸残基を含んでなる、請求項２４ないし２７の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２９】
前記隆起を含有してなる前記Ｆｃポリペプチドが、鋳型／起源のポリペプチドの作用領域の元の残基を元の残基より大きい側鎖容量を有する移入残基で置換することによって生成される、請求項２４ないし２８の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項３０】
前記隆起を含有してなる前記Ｆｃポリペプチドが、前記ポリペプチドの作用領域の元の残基をコードする核酸を元の残基より大きい側鎖容量を有する移入残基をコードする核酸で置換する工程を含んでなる方法により生成される、請求項２４ないし２９の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項３１】
前記元の残基がスレオニンである、請求項２９又は３０の抗体断片。
【請求項３２】
前記移入残基がアルギニン(Ｒ)である、請求項２９ないし３１の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項３３】
前記移入残基がフェニルアラニン(Ｆ)である、請求項２９ないし３１の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項３４】
前記移入残基がチロシン(Ｙ)である、請求項２９ないし３１の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項３５】
前記移入残基がトリプトファン(Ｗ)である、請求項２９ないし３１の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項３６】
キャビティを具備する前記Ｆｃポリペプチドは、鋳型／元のポリペプチドの作用領域内の元の残基を元の残基より小さな側鎖容量を有する移入残基に置換することによって生成される、請求項２３ないし２８の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項３７】
キャビティを具備する前記Ｆｃポリペプチドは、該ポリペプチドの作用領域の元の残基をコードする核酸を元の残基より小さな側鎖容量を有する移入残基をコードする核酸に置換する工程を含む方法によって生成される、請求項２３ないし２８及び３６の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項３８】
元の残基がスレオニンである、請求項３６又は３７に記載の抗体断片。
【請求項３９】
元の残基がロイシンである、請求項３６又は３７に記載の抗体断片。
【請求項４０】
元の残基がチロシンである、請求項３６又は３７に記載の抗体断片。
【請求項４１】
移入残基がシステイン(Ｃ)でない、請求項３６ないし４０の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項４２】
移入残基がアラニン(Ａ)である、請求項３６ないし４０の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項４３】
移入残基がセリン(Ｓ)である、請求項３６ないし４０の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項４４】
移入残基がスレオニン(Ｔ)である、請求項３６ないし４０の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項４５】
移入残基がバリン(Ｖ)である、請求項３６ないし４０の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項４６】
キャビティを具備する前記Ｆｃポリペプチドが、スレオニン、ロイシン及びチロシンからなる群から選択される２以上の元のアミノ酸の置換を具備する、請求項３６ないし４５の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項４７】
キャビティを具備する前記Ｆｃポリペプチドが、アラニン、セリン、スレオニン及びバリンからなる群から選択される２以上の移入残基を具備する、請求項３６ないし４６の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項４８】
キャビティを具備する前記Ｆｃポリペプチドがスレオニン、ロイシン及びチロシンからなる群から選択される２以上の元のアミノ酸の置換を具備し、該元のアミノ酸がアラニン、セリン、スレオニン及びバリンからなる群から選択される移入残基で置換される、請求項３６ないし４７の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項４９】
キャビティを具備する前記Ｆｃポリペプチドが、カバットのＥＵ番号付けスキームに従ったアミノ酸番号３６６位のスレオニンからセリンへの置換を具備する、請求項２３ないし４８の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項５０】
キャビティを具備する前記Ｆｃポリペプチドが、カバットのＥＵ番号付けスキームに従ったアミノ酸番号３６８位のロイシンからアラニンへの置換を具備する、請求項２３ないし４８の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項５１】
キャビティを具備する前記Ｆｃポリペプチドが、チロシンのバリンへの置換を具備する、請求項２３ないし５０の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項５２】
キャビティを具備する前記Ｆｃポリペプチドが、T366S, L368A及びY407Vからなる群から選択される２以上のアミノ酸置換を具備する、請求項２３ないし５１の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項５３】
隆起を具備する前記Ｆｃポリペプチドが、カバットのＥＵ番号付けスキームに従ったアミノ酸番号３６６位のスレオニンからトリプトファンへの置換を具備する、請求項２３ないし５２の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項５４】
第一Ｆｃポリペプチド及び第二Ｆｃポリペプチドのそれぞれが抗体定常ドメインを具備する、請求項１ないし５３の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項５５】
前記抗体定常ドメインがＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインである、請求項５４に記載の抗体断片。
【請求項５６】
前記抗体定常ドメインがＩｇＧ由来である、請求項５４又は５５に記載の抗体断片。
【請求項５７】
前記ＩｇＧがヒトＩｇＧ１である、請求項５６に記載の抗体断片。
【請求項５８】
単一特異性である、請求項１ないし５７の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項５９】
単一特異性イムノアドへシンである、請求項１ないし５８の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項６０】
抗体-イムノアドへシンキメラである、請求項１ないし５９の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項６１】
イムノグロブリンの少なくとも７５％が請求項１ないし６０の何れか一に記載の抗体断片であるイムノグロブリンの集合を含んでなる組成物。
【請求項６２】
(ａ)抗体断片をコードする核酸を含有してなる宿主細胞を培養し；
(ｂ)宿主細胞培養物から抗体断片を回収する
ことを含んでなる、請求項１ないし６０の何れか一に記載の抗体断片の調整方法。
【請求項６３】
抗体断片を含有してなるポリペプチドが、イムノグロブリンの少なくとも５０％が請求項１ないし６０の何れか一に記載の抗体断片であるイムノグロブリンの集合となる割合で発現される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
該ポリペプチドがほぼ等モル量で発現される、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記ポリペプチドをコードする核酸がほぼ等しい強さの翻訳開始領域（ＴＩＲｓ）に作用可能に結合される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記宿主細胞が原核生物である、請求項６２ないし６５の何れか一に記載の方法。
【請求項６７】
宿主細胞が大腸菌である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
大腸菌が内在性プロテアーゼ活性欠陥株のものである、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記宿主細胞が真核生物のものである、請求項６２ないし６５の何れか一に記載の方法。
【請求項７０】
前記宿主細胞がＣＨＯである、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記抗体断片が培養液から回収される、請求項６２ないし７０の何れか一に記載の方法。
【請求項７２】
前記抗体断片が細胞溶解物から回収される、請求項６２ないし７０の何れか一に記載の方法。
【請求項７３】
(ａ)第二Ｆｃポリペプチドの作用領域をコードする核酸が隆起をコードするように第二Ｆｃポリペプチドの元の作用領域をコードする核酸から変更されているか、あるいは第一Ｆｃポリペプチドの作用領域をコードする核酸がキャビティをコードするように第一Ｆｃポリペプチドの元の作用領域をコードする核酸から変更されているか、あるいはその両方である抗体断片をコードする核酸を含有してなる宿主細胞宿主細胞を培養し、
(ｂ)前記宿主細胞培養物から抗体断片を回収する
工程を含んでなる、請求項２３ないし６０の何れか一に記載の抗体断片の調整方法。
【請求項７４】
第二Ｆｃポリペプチドをコードする核酸が隆起をコードするように元の核酸から変更されており、第一ポリペプチドをコードする核酸がキャビティをコードするように元の核酸から変更されている、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
第二Ｆｃポリペプチドの作用領域の元のアミノ酸残基をコードする核酸が、元のアミノ酸残基より大きな側鎖容量を有する移入アミノ酸残基をコードする核酸で置換される工程が工程(ａ)に先行するものであり、大きな側鎖容量を有する移入残基が隆起を含有してなる、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
第一Ｆｃポリペプチドの作用領域の元のアミノ酸残基をコードする核酸が、キャビティを形成するように元のアミノ酸残基より小さい側鎖容量を有する移入アミノ酸残基をコードする核酸で置換される工程が工程(ａ)に先行するものである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７７】
第一Ｆｃポリペプチド及び第二Ｆｃポリペプチドをコードする核酸が宿主細胞に導入される工程が工程(ａ)に先行するものである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７８】
(ａ)抗体断片を形成するポリペプチドを調製し；
(ｂ)ヘテロ多量体化を起こす；
工程を含んでなり、これによって抗体断片が形成される、請求項１ないし６０の何れか一に記載の抗体断片の調整方法。
【請求項７９】
形成されたイムノグロブリンポリペプチド複合体の少なくとも５０％が請求項１ないし６０の何れか一に記載の抗体断片である、請求項６２ないし７８の何れか一に記載の方法。
【請求項８０】
形成されたイムノグロブリンポリペプチド複合体の少なくとも５０％がヘテロ三量体である、請求項６２ないし７８の何れか一に記載の方法。
【請求項８１】
工程(ｂ)が第一Ｆｃポリペプチドと第二Ｆｃポリペプチドのインビトロでの結合を含んでなる、請求項６２ないし７８の何れか一に記載の方法。
【請求項８２】
元の作用領域のアミノ酸配列が遺伝子操作した作用領域内に隆起及びキャビティを生成するように変更されている、請求項６２ないし７８の何れか一に記載の方法。
【請求項８３】
請求項１ないし６０の何れか一に記載の抗体断片をコードする単離した核酸。
【請求項８４】
請求項１ないし６０の何れか一に記載の抗体断片を集合的にコードする二以上の組み換え核酸を含有してなる組成物。
【請求項８５】
請求項８３又は８４に記載の核酸を含有してなる宿主細胞。
【請求項８６】
抗原結合アームをコードする核酸が単一ベクター内に存在する、請求項８５に記載の宿主細胞。
【請求項８７】
抗原結合アームをコードする核酸が別々のベクター内に存在する、請求項８５に記載の宿主細胞。
【請求項８８】
抗原結合アーム及びＮ末端切断型重鎖をコードする核酸が単一ベクター内に存在する、請求項８５に記載の宿主細胞。
【請求項８９】
ポリペプチドが発現するように請求項８３又は請求項８４に記載の核酸を含有する宿主細胞を培養して、該細胞培養物から抗体断片を回収することを含んでなる、請求項１ないし６０の何れか一に記載の抗体断片の作製方法。
【請求項９０】
前記抗体断片が細胞溶解物から回収される、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記抗体断片が細胞培養液から回収される、請求項８９に記載の方法。
【請求項９２】
前記宿主細胞が原核生物細胞である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９３】
前記宿主細胞が大腸菌である、請求項９０に記載の方法。
【請求項９４】
前記宿主細胞が哺乳類のものである、請求項８９に記載の方法。
【請求項９５】
請求項１ないし６０の何れか一に記載の抗体断片と担体を含有してなる組成物。
【請求項９６】
単一抗原結合アームを含有してなるＦａｂ分子と比較して抗体断片の安定性を向上させる単一抗原結合アーム及びＦｃ領域を含有してなる抗体断片の生成方法であり、抗原結合アームの形成と該Ｆｃ領域が形成されるための第一Ｆｃポリペプチドと第二Ｆｃポリペプチドの二量体化とが起こる条件下にて抗原結合アームと第一及び第二のＦｃポリペプチドをコードする好適な宿主細胞核内で発現させることを含んでなり、該Ｆｃポリペプチドの両方ではなく他方がＮ末端切断型重鎖である方法。
【請求項９７】
前記方法がイムノグロブリンの異種性集団を生成し、イムノグロブリンの少なくとも５０％が単一抗原結合アームを含有してなるＦａｂ分子と比較して抗体断片の安定性を向上させるＦｃ領域及び単一抗原結合アームを含有してなる、請求項９６に記載の方法。
【請求項１】
単一抗原結合アーム及びＦｃ領域を含有してなる抗体断片であり、該抗原結合アームを含んでなるＦａｂ分子と比較して該抗体断片の安定性が増大しており、該Ｆｃ領域が第一及び第二Ｆｃポリペプチドの複合体を含んでなり、Ｆｃポリペプチドの一方だけでなく両方がＮ末端切断型重鎖である、抗体断片。
【請求項２】
前記抗体断片がアグリコシル化されている、請求項１に記載の抗体断片。
【請求項３】
前記抗体断片が免疫抑制性質をほとんど持たない、請求項１又は２に記載の抗体断片。
【請求項４】
前記免疫抑制性質がＴ細胞枯渇に影響する能力を含む、請求項３に記載の抗体断片。
【請求項５】
ＦｃＲｎ結合以外の実質的なエフェクター機能を保持しない、請求項１ないし４の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項６】
前記エフェクター機能が補体溶解である、請求項５に記載の抗体断片。
【請求項７】
前記抗体断片がＦｃＲｎに結合する、請求項１ないし６の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項８】
Ｔ細胞表面抗原に特異的に結合しない、請求項１ないし７の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項９】
前記Ｔ細胞表面抗原がＣＤ３又はＣＤ４である、請求項８に記載の抗体断片。
【請求項１０】
前記Ｔ細胞表面抗原がＣＤ３である、請求項９に記載の抗体断片。
【請求項１１】
腫瘍抗原に特異的に結合する、請求項１ないし１０の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項１２】
レセプター二量体化により活性化される細胞表面レセプターに特異的に結合する、請求項１ないし１１の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項１３】
前記抗体断片が軽鎖可変ドメインを含有してなる第一ポリペプチド、重鎖可変ドメイン及び該第一Ｆｃポリペプチドを含有してなる第二ポリペプチド、並びに、該第二Ｆｃポリペプチドを含有してなる第三ポリペプチドを含んでなる、請求項１ないし１２の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項１４】
前記第一ポリペプチドがヒト軽鎖定常ドメインに融合した非ヒト軽鎖可変ドメインを含んでなる、請求項１３に記載の抗体断片。
【請求項１５】
前記第一ポリペプチドがヒト化又はヒトフレームワーク配列に融合した非ヒト種由来のＣＤＲを含んでなる、請求項１３に記載の抗体断片。
【請求項１６】
前記第二ポリペプチドがヒト重鎖定常ドメインに融合した非ヒト重鎖可変ドメインを含んでなる、請求項１３に記載の抗体断片。
【請求項１７】
前記第二ポリペプチドがヒト化又はヒトフレームワーク配列に融合した非ヒト種由来のＣＤＲを含んでなる、請求項１３に記載の抗体断片。
【請求項１８】
前記第三ポリペプチドがＮ末端に少なくとも一のヒンジ配列を含有するＮ末端切断型重鎖を含んでなる、請求項１３に記載の抗体断片。
【請求項１９】
前記２つのＦｃポリペプチドが共有結合している、請求項１ないし１８の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２０】
前記２つのＦｃポリペプチドがヒンジ領域で分子内ジスルフィド結合を介して連結している、請求項１ないし１９の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２１】
標的分子に結合する場合に、前記抗体断片が標的分子の多量体化を阻害する、請求項１ないし２０の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２２】
標的分子に結合する場合に、前記抗体断片が同系結合パートナーの標的分子への結合を阻害する、請求項１ないし２１の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２３】
前記第一Ｆｃポリペプチドと前記第二Ｆｃポリペプチドが作用領域で会合し、該第二Ｆｃポリペプチドの作用領域が第一Ｆｃポリペプチドの作用領域内のキャビティ内に位置しうる隆起を含んでなる、請求項１ないし２２の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２４】
前記第二Ｆｃポリペプチドが鋳型／起源ポリペプチドから変更されて前記隆起をコードしているかあるいは、前記第一Ｆｃポリペプチドが鋳型／起源ポリペプチドから変更されて前記キャビティをコードしているか、その両方である、請求項１ないし２３の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２５】
前記第二Ｆｃポリペプチドが鋳型／起源ポリペプチドから変更されて前記隆起をコードしており、第一Ｆｃポリペプチドが鋳型／起源ポリペプチドから変更されて前記キャビティをコードしているか、その両方である、請求項１ないし２４の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２６】
前記第一Ｆｃポリペプチドと前記第二Ｆｃポリペプチドが作用領域で会合し、該第二Ｆｃポリペプチドの作用領域が第一Ｆｃポリペプチドの作用領域内のキャビティ内に位置しうる隆起を含んでなり、該キャビティ又は該隆起あるいはその両方が該第一Ｆｃポリペプチド及び該第二Ｆｃポリペプチドのそれぞれの作用領域内に取り込まれている、請求項１ないし２５の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２７】
前記隆起及び前記キャビティが前記それぞれのＦｃポリペプチドの作用領域内に取り込まれている、請求項２４ないし２６の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２８】
前記隆起及び前記キャビティのそれぞれが天然に生じるアミノ酸残基を含んでなる、請求項２４ないし２７の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項２９】
前記隆起を含有してなる前記Ｆｃポリペプチドが、鋳型／起源のポリペプチドの作用領域の元の残基を元の残基より大きい側鎖容量を有する移入残基で置換することによって生成される、請求項２４ないし２８の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項３０】
前記隆起を含有してなる前記Ｆｃポリペプチドが、前記ポリペプチドの作用領域の元の残基をコードする核酸を元の残基より大きい側鎖容量を有する移入残基をコードする核酸で置換する工程を含んでなる方法により生成される、請求項２４ないし２９の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項３１】
前記元の残基がスレオニンである、請求項２９又は３０の抗体断片。
【請求項３２】
前記移入残基がアルギニン(Ｒ)である、請求項２９ないし３１の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項３３】
前記移入残基がフェニルアラニン(Ｆ)である、請求項２９ないし３１の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項３４】
前記移入残基がチロシン(Ｙ)である、請求項２９ないし３１の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項３５】
前記移入残基がトリプトファン(Ｗ)である、請求項２９ないし３１の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項３６】
キャビティを具備する前記Ｆｃポリペプチドは、鋳型／元のポリペプチドの作用領域内の元の残基を元の残基より小さな側鎖容量を有する移入残基に置換することによって生成される、請求項２３ないし２８の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項３７】
キャビティを具備する前記Ｆｃポリペプチドは、該ポリペプチドの作用領域の元の残基をコードする核酸を元の残基より小さな側鎖容量を有する移入残基をコードする核酸に置換する工程を含む方法によって生成される、請求項２３ないし２８及び３６の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項３８】
元の残基がスレオニンである、請求項３６又は３７に記載の抗体断片。
【請求項３９】
元の残基がロイシンである、請求項３６又は３７に記載の抗体断片。
【請求項４０】
元の残基がチロシンである、請求項３６又は３７に記載の抗体断片。
【請求項４１】
移入残基がシステイン(Ｃ)でない、請求項３６ないし４０の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項４２】
移入残基がアラニン(Ａ)である、請求項３６ないし４０の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項４３】
移入残基がセリン(Ｓ)である、請求項３６ないし４０の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項４４】
移入残基がスレオニン(Ｔ)である、請求項３６ないし４０の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項４５】
移入残基がバリン(Ｖ)である、請求項３６ないし４０の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項４６】
キャビティを具備する前記Ｆｃポリペプチドが、スレオニン、ロイシン及びチロシンからなる群から選択される２以上の元のアミノ酸の置換を具備する、請求項３６ないし４５の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項４７】
キャビティを具備する前記Ｆｃポリペプチドが、アラニン、セリン、スレオニン及びバリンからなる群から選択される２以上の移入残基を具備する、請求項３６ないし４６の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項４８】
キャビティを具備する前記Ｆｃポリペプチドがスレオニン、ロイシン及びチロシンからなる群から選択される２以上の元のアミノ酸の置換を具備し、該元のアミノ酸がアラニン、セリン、スレオニン及びバリンからなる群から選択される移入残基で置換される、請求項３６ないし４７の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項４９】
キャビティを具備する前記Ｆｃポリペプチドが、カバットのＥＵ番号付けスキームに従ったアミノ酸番号３６６位のスレオニンからセリンへの置換を具備する、請求項２３ないし４８の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項５０】
キャビティを具備する前記Ｆｃポリペプチドが、カバットのＥＵ番号付けスキームに従ったアミノ酸番号３６８位のロイシンからアラニンへの置換を具備する、請求項２３ないし４８の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項５１】
キャビティを具備する前記Ｆｃポリペプチドが、チロシンのバリンへの置換を具備する、請求項２３ないし５０の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項５２】
キャビティを具備する前記Ｆｃポリペプチドが、T366S, L368A及びY407Vからなる群から選択される２以上のアミノ酸置換を具備する、請求項２３ないし５１の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項５３】
隆起を具備する前記Ｆｃポリペプチドが、カバットのＥＵ番号付けスキームに従ったアミノ酸番号３６６位のスレオニンからトリプトファンへの置換を具備する、請求項２３ないし５２の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項５４】
第一Ｆｃポリペプチド及び第二Ｆｃポリペプチドのそれぞれが抗体定常ドメインを具備する、請求項１ないし５３の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項５５】
前記抗体定常ドメインがＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインである、請求項５４に記載の抗体断片。
【請求項５６】
前記抗体定常ドメインがＩｇＧ由来である、請求項５４又は５５に記載の抗体断片。
【請求項５７】
前記ＩｇＧがヒトＩｇＧ１である、請求項５６に記載の抗体断片。
【請求項５８】
単一特異性である、請求項１ないし５７の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項５９】
単一特異性イムノアドへシンである、請求項１ないし５８の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項６０】
抗体-イムノアドへシンキメラである、請求項１ないし５９の何れか一に記載の抗体断片。
【請求項６１】
イムノグロブリンの少なくとも７５％が請求項１ないし６０の何れか一に記載の抗体断片であるイムノグロブリンの集合を含んでなる組成物。
【請求項６２】
(ａ)抗体断片をコードする核酸を含有してなる宿主細胞を培養し；
(ｂ)宿主細胞培養物から抗体断片を回収する
ことを含んでなる、請求項１ないし６０の何れか一に記載の抗体断片の調整方法。
【請求項６３】
抗体断片を含有してなるポリペプチドが、イムノグロブリンの少なくとも５０％が請求項１ないし６０の何れか一に記載の抗体断片であるイムノグロブリンの集合となる割合で発現される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
該ポリペプチドがほぼ等モル量で発現される、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記ポリペプチドをコードする核酸がほぼ等しい強さの翻訳開始領域（ＴＩＲｓ）に作用可能に結合される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記宿主細胞が原核生物である、請求項６２ないし６５の何れか一に記載の方法。
【請求項６７】
宿主細胞が大腸菌である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
大腸菌が内在性プロテアーゼ活性欠陥株のものである、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記宿主細胞が真核生物のものである、請求項６２ないし６５の何れか一に記載の方法。
【請求項７０】
前記宿主細胞がＣＨＯである、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記抗体断片が培養液から回収される、請求項６２ないし７０の何れか一に記載の方法。
【請求項７２】
前記抗体断片が細胞溶解物から回収される、請求項６２ないし７０の何れか一に記載の方法。
【請求項７３】
(ａ)第二Ｆｃポリペプチドの作用領域をコードする核酸が隆起をコードするように第二Ｆｃポリペプチドの元の作用領域をコードする核酸から変更されているか、あるいは第一Ｆｃポリペプチドの作用領域をコードする核酸がキャビティをコードするように第一Ｆｃポリペプチドの元の作用領域をコードする核酸から変更されているか、あるいはその両方である抗体断片をコードする核酸を含有してなる宿主細胞宿主細胞を培養し、
(ｂ)前記宿主細胞培養物から抗体断片を回収する
工程を含んでなる、請求項２３ないし６０の何れか一に記載の抗体断片の調整方法。
【請求項７４】
第二Ｆｃポリペプチドをコードする核酸が隆起をコードするように元の核酸から変更されており、第一ポリペプチドをコードする核酸がキャビティをコードするように元の核酸から変更されている、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
第二Ｆｃポリペプチドの作用領域の元のアミノ酸残基をコードする核酸が、元のアミノ酸残基より大きな側鎖容量を有する移入アミノ酸残基をコードする核酸で置換される工程が工程(ａ)に先行するものであり、大きな側鎖容量を有する移入残基が隆起を含有してなる、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
第一Ｆｃポリペプチドの作用領域の元のアミノ酸残基をコードする核酸が、キャビティを形成するように元のアミノ酸残基より小さい側鎖容量を有する移入アミノ酸残基をコードする核酸で置換される工程が工程(ａ)に先行するものである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７７】
第一Ｆｃポリペプチド及び第二Ｆｃポリペプチドをコードする核酸が宿主細胞に導入される工程が工程(ａ)に先行するものである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７８】
(ａ)抗体断片を形成するポリペプチドを調製し；
(ｂ)ヘテロ多量体化を起こす；
工程を含んでなり、これによって抗体断片が形成される、請求項１ないし６０の何れか一に記載の抗体断片の調整方法。
【請求項７９】
形成されたイムノグロブリンポリペプチド複合体の少なくとも５０％が請求項１ないし６０の何れか一に記載の抗体断片である、請求項６２ないし７８の何れか一に記載の方法。
【請求項８０】
形成されたイムノグロブリンポリペプチド複合体の少なくとも５０％がヘテロ三量体である、請求項６２ないし７８の何れか一に記載の方法。
【請求項８１】
工程(ｂ)が第一Ｆｃポリペプチドと第二Ｆｃポリペプチドのインビトロでの結合を含んでなる、請求項６２ないし７８の何れか一に記載の方法。
【請求項８２】
元の作用領域のアミノ酸配列が遺伝子操作した作用領域内に隆起及びキャビティを生成するように変更されている、請求項６２ないし７８の何れか一に記載の方法。
【請求項８３】
請求項１ないし６０の何れか一に記載の抗体断片をコードする単離した核酸。
【請求項８４】
請求項１ないし６０の何れか一に記載の抗体断片を集合的にコードする二以上の組み換え核酸を含有してなる組成物。
【請求項８５】
請求項８３又は８４に記載の核酸を含有してなる宿主細胞。
【請求項８６】
抗原結合アームをコードする核酸が単一ベクター内に存在する、請求項８５に記載の宿主細胞。
【請求項８７】
抗原結合アームをコードする核酸が別々のベクター内に存在する、請求項８５に記載の宿主細胞。
【請求項８８】
抗原結合アーム及びＮ末端切断型重鎖をコードする核酸が単一ベクター内に存在する、請求項８５に記載の宿主細胞。
【請求項８９】
ポリペプチドが発現するように請求項８３又は請求項８４に記載の核酸を含有する宿主細胞を培養して、該細胞培養物から抗体断片を回収することを含んでなる、請求項１ないし６０の何れか一に記載の抗体断片の作製方法。
【請求項９０】
前記抗体断片が細胞溶解物から回収される、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記抗体断片が細胞培養液から回収される、請求項８９に記載の方法。
【請求項９２】
前記宿主細胞が原核生物細胞である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９３】
前記宿主細胞が大腸菌である、請求項９０に記載の方法。
【請求項９４】
前記宿主細胞が哺乳類のものである、請求項８９に記載の方法。
【請求項９５】
請求項１ないし６０の何れか一に記載の抗体断片と担体を含有してなる組成物。
【請求項９６】
単一抗原結合アームを含有してなるＦａｂ分子と比較して抗体断片の安定性を向上させる単一抗原結合アーム及びＦｃ領域を含有してなる抗体断片の生成方法であり、抗原結合アームの形成と該Ｆｃ領域が形成されるための第一Ｆｃポリペプチドと第二Ｆｃポリペプチドの二量体化とが起こる条件下にて抗原結合アームと第一及び第二のＦｃポリペプチドをコードする好適な宿主細胞核内で発現させることを含んでなり、該Ｆｃポリペプチドの両方ではなく他方がＮ末端切断型重鎖である方法。
【請求項９７】
前記方法がイムノグロブリンの異種性集団を生成し、イムノグロブリンの少なくとも５０％が単一抗原結合アームを含有してなるＦａｂ分子と比較して抗体断片の安定性を向上させるＦｃ領域及び単一抗原結合アームを含有してなる、請求項９６に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【公開番号】特開２０１１−１７２５８５（Ｐ２０１１−１７２５８５Ａ）
【公開日】平成２３年９月８日（２０１１．９．８）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１１−９３３６５（Ｐ２０１１−９３３６５）
【出願日】平成２３年４月１９日（２０１１．４．１９）
【分割の表示】特願２００６−５４５５１５（Ｐ２００６−５４５５１５）の分割
【原出願日】平成１６年１２月１７日（２００４．１２．１７）
【出願人】（５０９０１２６２５）ジェネンテック， インコーポレイテッド (357)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年９月８日（２０１１．９．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−９３３６５（Ｐ２０１１−９３３６５）
【出願日】平成２３年４月１９日（２０１１．４．１９）
【分割の表示】特願２００６−５４５５１５（Ｐ２００６−５４５５１５）の分割
【原出願日】平成１６年１２月１７日（２００４．１２．１７）
【出願人】（５０９０１２６２５）ジェネンテック， インコーポレイテッド (357)
【Ｆターム（参考）】
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