液体クロマトグラフの制御装置、液体クロマトグラフィの実行方法及び液体クロマトグラフの制御プログラム
【課題】 煩雑な作業を行うことなく適切な移動度Ｒf0となる溶離液条件でクロマトグラフィを実行することを可能とする。
【解決手段】 液体クロマトグラフの制御装置１は、薄層クロマトグラフィの分離において複数の成分を特定混合比で含む溶離液４を用いて分離を行ったときの試料３の移動度Ｒfの実測値を特定混合比に関連づけて記憶するための実測値記憶部２５ａと、溶離液１０における各成分の混合比の変化に対する試料３の移動度Ｒfの変化率を記憶するための移動度変化率記憶部２５ｂと、実測値記憶部２５ａに記憶された特定混合比に対する移動度Ｒfの実測値と、移動度変化率記憶部２５ｂに記憶された移動度Ｒfの変化率とに基づいて、特定移動度Ｒf0が得られる溶離液１０の混合比を求めるための混合比演算部２２ａと、混合比演算部２２ａでの演算結果に基づいて、試料３の移動度Ｒfが特定移動度Ｒf0となるようにカラム１８に送液される溶離液４の混合比を制御する制御信号を出力するための混合比制御部２２ｂとを備えている。
【解決手段】 液体クロマトグラフの制御装置１は、薄層クロマトグラフィの分離において複数の成分を特定混合比で含む溶離液４を用いて分離を行ったときの試料３の移動度Ｒfの実測値を特定混合比に関連づけて記憶するための実測値記憶部２５ａと、溶離液１０における各成分の混合比の変化に対する試料３の移動度Ｒfの変化率を記憶するための移動度変化率記憶部２５ｂと、実測値記憶部２５ａに記憶された特定混合比に対する移動度Ｒfの実測値と、移動度変化率記憶部２５ｂに記憶された移動度Ｒfの変化率とに基づいて、特定移動度Ｒf0が得られる溶離液１０の混合比を求めるための混合比演算部２２ａと、混合比演算部２２ａでの演算結果に基づいて、試料３の移動度Ｒfが特定移動度Ｒf0となるようにカラム１８に送液される溶離液４の混合比を制御する制御信号を出力するための混合比制御部２２ｂとを備えている。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、移動相として液体溶媒（溶離液）を用いる液体クロマトグラフィに関し、より詳細には、液体クロマトグラフィを行う際の条件検討に関する。
【０００２】
【従来の技術】液体クロマトグラフィにおいては、カラム内に充填された固定相内に、複数の溶媒が混合された溶離液である移動相に溶解された試料が通過される。このとき、カラム内に導入された試料内の各成分は固定相との相互作用や移動相との親和性等により、それぞれカラムを通過する時間が異なるため、カラムから排出される時点では各成分が分離される。固定相との相互作用が強い、又は移動相との親和性の弱い物質がカラム中に長く留まり、カラムから遅く排出されることとなる。
【０００３】上記示した液体クロマトグラフィと同じ原理により行われる薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）がある。薄層クロマトグラフィでは、薄層とされたカラム内の固定相に用いられる物質に試料が１滴垂らされ、この薄層が移動層となる溶離液中に浸漬される。そして、毛管現象により溶離液が薄層に吸い上げられると共に試料が吸い上げられる作用により、試料の溶離液に対する移動度Ｒfを求めることができる。このようにして任意の溶媒比の溶離液で行われるＴＬＣにて求められる移動度Ｒfが、液体クロマトグラフィの分離度Ｒsに相関性があることが知られている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記の移動度Ｒfと分離度Ｒsとの相関性の具体的指標は明らかにされておらず、ＴＬＣにおける結果を液体クロマトグラフィに利用することは行われていない。そのため、現状では、液体クロマトグラフィにおいて分離度Ｒsを設定するために、まず、ある値の移動度Ｒfにて液体クロマトグラフィを行い、その結果に基づき、溶離液に含まれる極性分子溶媒と非極性分子溶媒との割合を変更する等行って、分離度Ｒsを探し設定することが行われている。例えば、設定した移動度よりも高い移動度となれば、溶離液における極性分子の割合を減少させて、再び液体クロマトグラフィを行う必要がある。そのため、移動度の値が設定されるまで液体クロマトグラフィを繰り返し行う必要があり、作業が煩雑で時間がかかり、溶離液が多量に必要とされるという問題がある。
【０００５】本発明は上記問題に鑑みなされたものであり、煩雑な作業を行うことなく適切な移動度Ｒfとなる溶離液条件でクロマトグラフィを実行することができる液体クロマトグラフィの制御装置、液体クロマトグラフィの実行方法及び液体クロマトグラフィの制御プログラムを提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記問題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、溶離液の各成分の混合比と試料の移動度Ｒfとの関係が比例関係であること、そして、溶離液の各成分の混合比に対する試料の移動度Ｒfの変化率は、試料の種類が変わっても同じであるという知見を得た。
【０００７】本発明はこの知見に基づいてなされたものであって、請求項１に記載の液体クロマトグラフィの制御装置は、薄層クロマトグラフの分離において複数の成分を特定混合比で含む溶離液を用いて分離を行ったときの試料の移動度Ｒfの実測値を前記特定混合比に関連づけて記憶するための実測値記憶手段と、前記溶離液における各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率を記憶するための移動度変化率記憶手段と、前記実測値記憶手段に記憶された前記特定混合比に対する移動度Ｒfの実測値と、前記移動度変化率記憶手段に記憶された移動度Ｒfの変化率とに基づいて、特定移動度Ｒf0が得られる前記溶離液の混合比を求めるための混合比演算手段と、前記混合比演算手段での演算結果に基づいて、試料の移動度Ｒfが前記特定移動度Ｒf0となるようにカラムに送液される前記溶離液の混合比を制御する制御信号を出力するための混合比制御手段とを備えていることを特徴としている。
【０００８】請求項３に記載の液体クロマトグラフィの実行方法は、複数の成分を特定混合比で含む溶離液を用いたときの試料の移動度Ｒfの実測値をＴＬＣを行って求める第１の工程と、前記第１の工程で求められた移動度Ｒfの実測値及びこの実測値が求められた前記溶離液の前記特定混合比に基づいて、前記溶離液における各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率を利用することにより、特定移動度Ｒf0が得られる前記溶離液の混合比を求める第２の工程と、前記第２の工程で求められた前記特定移動度Ｒf0が得られる混合比を有する前記溶離液をカラムに送液する第３の工程とを備えていることを特徴としている。
【０００９】上記の構成によると、任意の特定混合比における試料の移動度Ｒfを薄層クロマトグラフィで求めておけば、所望の特定移動度Ｒf0での溶離液の混合比を知ることができる。そのため、煩雑な作業を行うことなく適切な移動度Ｒf0となる溶離液条件でクロマトグラフィを実行することができる。
【００１０】請求項２に記載の液体クロマトグラフの制御装置は、前記移動度変化率記憶手段が、含有成分の組合せの異なる別種類の溶離液ごとに、各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率を記憶することが可能であることを特徴としている。
【００１１】上記の構成によれば、液体クロマトグラフの制御装置を、含有成分の組合せの異なる多様な種類の溶離液に対して使用することができる。
【００１２】また、請求項４に記載の液体クロマトグラフの制御プログラムは、コンピュータを請求項１のような液体クロマトグラフの制御装置として機能させることが可能なプログラムであり、請求項１と同様の作用効果を奏する。なお、請求項４に記載されているプログラムは、ＣＤ−ＲＯＭ、ＦＤ、ＭＯなどのリムーバブル型記録媒体やハードディスクなどの固定型記録媒体に記録して配布可能である他、有線又は無線の電気通信手段によってインターネットなどの通信ネットワークを介して配布可能である。
【００１３】
【発明の実施の形態】本発明の好適な実施の形態を、図１R>１〜図７に基づいて以下に説明する。
【００１４】図１において、薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）に用いられるＴＬＣ装置１を示す。ＴＬＣ装置１は、試料３が表面に１滴垂らされたシリカゲル薄層板２と、容器５に貯留された溶離液４とを備えている。尚、試料３、シリカゲル薄層板２を形成するシリカゲル、及び溶離液４は、後述する液体クロマトグラフィに用いられるのと同等のものである。
【００１５】図３において、液体クロマトグラフ装置１１を示す。液体クロマトグラフ装置１１は、溶媒Ａが貯留された容器１２と、溶媒Ｂが貯留された容器１３と、溶媒Ａと溶媒Ｂとが連結された位置に設けられた電磁弁１４と、溶離液４が貯留される混合器１５と、ポンプ１６と、インジェクター１７と、カラム１８と、検出器１９と、フラクションコレクター２０とが、この順に配置され経路が形成されている。そして、電磁弁１４に液体クロマトグラフ制御装置２１が接続されている。
【００１６】容器１２には溶媒Ａが、容器１３には溶媒Ｂが貯留されている。尚、用いられる溶媒は２種類に限定されず、使用状態・目的に応じて数を増やしてもよい。一般に、溶媒Ａ・溶媒Ｂには、非極性分子と極性分子との組合せで用いられる。
【００１７】ポンプ１６は、液体クロマトグラフ装置１１の回路において、容器１５・電磁弁１４を介して溶媒Ａ・溶媒Ｂを汲み上げる。電磁弁１４は、液体クロマトグラフ制御装置２１からの制御信号により、汲み上げられる溶媒を溶媒Ａ又は溶媒Ｂから選択する。電磁弁１４での各溶媒の選択時間に応じて混合器１５内での溶媒Ａ、Ｂの混合比が決定される。混合器１５は、汲み上げられた溶媒Ａ及び溶媒Ｂが一旦貯留され、溶離液１０とされる。この溶離液１０は、後述するように、算出された混合比を有するものである。
【００１８】インジェクター１７は、試料３を有しており、溶離液１０が通過することで試料３が送出されるようになっている。この試料３は、図１における試料３と同じものである。尚、インジェクター１７は１本に限定されず、選択的に経路を選ぶことができる並設された複数のインジェクターとし、複数の試料について連続的に作業を行うことも可能である。
【００１９】カラム１８には固定相が充填されており、混合溶媒１０が通過することで液体クロマトグラフが行われる。この固定相としては、図１におけるシリカゲル薄層板２を形成するシリカゲルが用いられている。尚、カラムは１本に限定されず、選択的に経路を選ぶことができる並設された複数のカラムとし、複数種類の液体クロマトグラフィを行うことも可能である。
【００２０】検知器１９は、カラム１８にて行われる液体クロマトグラフの結果の検出を行う。そして、フラクションコレクター２０は、複数の試験管を有しており、検知器１９の分析結果により、試料３に含まれる成分毎に各試験管に分取されるようになっている。
【００２１】また、液体クロマトグラフ制御装置２１は、例えば汎用のパーソナルコンピュータなどの情報処理装置によって構成されており、図４に示すように、混合比演算部２２ａ及び混合比制御部２２ｂを有するＣＰＵ２２と、実測値記憶部２５ａ及び移動度変化率記憶部２５ｂを有するメモリ２５と、ハードディスク２６と、入出力部２８とを備えている。入出力部２８には、例えばキーボードやマウスなどから構成された入力部２９と、液体クロマトグラフィの実行過程における様々な情報をオペレータに知らせるためのディスプレイ３０と、ＣＰＵの混合比制御部２２ｂからの指示に基づいて電磁弁１４の開閉信号を送出する電磁弁操作部３１とが接続されている。
【００２２】ハードディスク２６には、一実施の形態による液体クロマトグラフの制御プログラムを含む各種のソフトウェアが記憶されている。そして、これらのハードウェア及びソフトウェアが組み合わされることによって、上述の各部２２ａ、２２ｂ、２５ａ、２５ｂが構築されている。なお、このプログラムは、ＣＤ−ＲＯＭ、ＦＤ、ＭＯなどのリムーバブル型記録媒体に記録しておくことにより、任意のコンピュータにインストールすることが可能である。
【００２３】実測値記憶部２５ａは、薄層クロマトグラフィの分離において複数の成分を特定混合比で含む溶離液を用いて分離を行ったときの試料の移動度Ｒfの実測値を当該特定混合比に関連づけて記憶する。実測値記憶部２５ａに記憶すべきデータは、液体クロマトグラフ装置１１を用いて液体クロマトグラフィを行う前に予め薄層クロマトグラフィを行って得られたものであって、オペレータによって入力部２９から入力されてよい。
【００２４】移動度変化率記憶部２５ｂは、溶離液における各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率を記憶している。移動度変化率記憶部２５ｂに記憶されたデータは、含有成分の組合せの異なる別種類の溶離液ごとに予め薄層クロマトグラフィを行って得られたものである。ハードディスク２６には、含有成分の組合せの異なる別種類の溶離液について、それぞれ移動度Ｒfの変化率が格納されている。そして、本実施の形態による制御プログラムが実行されるときに、実測値記憶部２５ａに記憶された特定混合比にかかる種類の溶離液に対する移動度Ｒfの変化率だけがメモリ２５にロードされる。
【００２５】混合比演算部２２ａは、実測値記憶部２５ａに記憶された特定混合比に対する移動度Ｒfの実測値と、移動度変化率記憶部２５ｂに記憶された移動度Ｒfの変化率とに基づいて、特定移動度Ｒf0が得られる溶離液の混合比を求める。混合比演算部２２ａでの詳細な動作については後述する。
【００２６】混合比制御部２２ｂは、混合比演算部２２ａでの演算結果に基づいて、試料の移動度Ｒfが特定移動度Ｒf0となるようにカラムに送液される溶離液の混合比を制御する制御信号を出力する。この制御信号は入出力部２８から電磁弁操作部３１に供給される。
【００２７】ディスプレイ３０には、図５に示すように、グラフ５１と、グラフ５２と、グラジエント条件表５３とが表示される。
【００２８】グラフ５１は、混合器１５からカラム１８に供給される溶離液１０の混合比（Ｂ／Ａ＋Ｂ）の時間変化を表したものであり、横軸が経過時間、縦軸が溶離液に含まれる溶媒Ｂの割合である。横軸には、時間巾５４がＷ（ｗａｉｔ）、Ｇ（ｇｒａｄｉｅｎｔ）、Ｔ（ｔｏｐ）、ＦＷ（ｆｏｒｗａｒｄ ｗａｓｈ）、ＥＱ（ｅｑｕｉｌｉｂｒａｔｉｏｎ）の順に設定されている。グラフ５２は、横軸が経過時間、縦軸が吸光度である。グラフ５２は試料３の流出曲線であり、試料３に含まれる成分がカラム１８から排出されたときに突出した値を示す。グラジエント条件表５３は、時間巾毎の、溶離液１０に含まれる溶媒Ａと溶媒Ｂとの混合比が表示されている。尚、時間巾Ｇにおいては、Ｗでの混合比を徐々にＴでの混合比にまで直線的に増加させる。
【００２９】次に、本発明の液体クロマトグラフの実行方法の一実施の形態について説明する。
【００３０】（第１の工程）まず、溶媒Ａ・溶媒Ｂを特定混合比で含む溶離液４を用いたときの、試料３の移動度Ｒfの実測値を、オペレータが薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）を行って求める。
【００３１】ＴＬＣでは、まず、図２（ａ）に示すように、試料３が１滴垂らされた状態のシリカゲル薄層２が、図１に示すように溶離液４中に浸漬される。すると、毛管現象により混合溶液４がシリカゲル薄層２に吸い上げられてゆく。これに伴い、試料３も上方に移動する。溶離液４及び試料３の移動が終了すると、図２（ｂ）に示すように、試料３は試料３´の位置に移動する。このとき、試料３の混合溶液４中に浸漬される前の位置から、溶離液４の上端までの距離を１．０として、その１．０に対する試料３´までの距離が移動度Ｒfとして求められる。
【００３２】（第２の工程）以下の工程は液体クロマトグラフ制御装置２１において行われる。液体クロマトグラフ制御装置２１のＣＰＵ２２は、図６のステップＳ１において、第１の工程のＴＬＣで得られた移動度Ｒfの実測値が入力部２９から入力されたかどうかを繰り返して判断する。そして、移動度Ｒfの実測値が入力された場合には（Ｓ１：ＹＥＳ）、ステップＳ２において、移動度Ｒfの実測値と共に、これが求められたときにおける混合溶液４の溶媒Ａと溶媒Ｂとの混合比（特定混合比）をメモリ２５の実測値記憶部２５ａに記憶する。
【００３３】次に、ステップＳ３において、実測値記憶部２５ａに記憶された特定混合比にかかる種類の溶離液について、各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率のデータがハードディスク２６から読み出されて移動度変化率記憶部２５ｂにロードされる。
【００３４】そして、ステップＳ４において、混合比演算部２２ａは、実測値記憶部２５ａに記憶された特定混合比に対する移動度Ｒfの実測値と、移動度変化率記憶部２５ｂに記憶された移動度Ｒfの変化率とに基づいて、溶離液の混合比と移動度Ｒfとの関係を一対一に定める。つまり、移動度変化率記憶部２５ｂに記憶されているのは移動度Ｒfの変化率に過ぎないので、混合比を横軸に移動度Ｒfを縦軸にとったグラフである図７に示すように、移動度変化率記憶部２５ｂの記憶内容からは、溶離液の混合比と移動度Ｒfとの関係を一対一に定めることはできず、両者の関係を表す直線が直線６１、６２、６３、６４（これらはすべて移動度変化率記憶部２５ｂに記憶された移動度Ｒfの変化率に従った傾きを有している）などの無数の直線のいずれかであるということしか分からない。そのため、実測値記憶部２５ａに記憶された特定混合比Ｘ0に対する移動度Ｒfの実測値Ｒf1を用いて、これら無数の直線の中から座標（Ｘ0，Ｒf1）を通過するものを、実際に移動度Ｒfと混合比との関係を表すものとして選択する。例えば、図７に示す例では、混合比演算部２２ａは、両者の関係を表すものとして直線６３を選択する。
【００３５】さらに、ステップＳ５では、混合比演算部２２ａが、液体クロマトグラフ装置１１で試料の分取を行う際に必要とされる特定移動度Ｒf0に対する混合比を、ステップＳ４で定められた一対一の関係に基づいて算出する。例えば、図５のグラフ５１に示すようなグラジエント処理を行う場合、混合比演算部２２ａは、図７に示すように、時間巾「Ｗ」及び「Ｔ」のときの各特定移動度Ｒf0w、Ｒf0tに対する混合比Ｘw、Ｘtを直線６３に基づいて求める。このようにして求められた混合比は、メモリ２５内の所定領域に書き込まれ、図５のグラジエント条件表５３に示すようにディスプレイ３０に表示される。
【００３６】なお、ステップＳ５において、グラフ５１に示す溶離液１０の混合比の時間変化や、グラフ５２に示す試料３の流出曲線がさらに算出されてもよい。
【００３７】（第３の工程）ステップＳ６において、混合比制御部２２ｂは、ステップＳ５で求められた混合比を有する溶離液１０が所定時間だけカラム１８に送液されるような制御信号を電磁弁操作部３１に順次出力する。電磁弁操作部３１はこの制御信号に基づいて電磁弁１４を開閉させる信号を電磁弁１４に供給する。これにより、カラム１８内での試料の移動度Ｒfを、確実に特定移動度Ｒf0又はその近傍とすることができるので、良好な試料の分離を行わせることができる。
【００３８】また、本実施の形態では、含有成分の組合せの異なる別種類の溶離液ごとに、各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率がハードディスク２６に記憶されており、必要な変化率だけを移動度変化率記憶部２５ｂに記憶させることができる。そのため、液体クロマトグラフ制御装置２１を、含有成分の組合せの異なる多様な種類の溶離液に対して使用することができる。
【００３９】以上、本発明の好適な実施の形態について説明したが、本発明は上述の実施の形態に限られるものではなく、特許請求の範囲に記載した限りにおいて様々な設計変更が可能なものである。例えば、液体クロマトグラフ装置１１の具体的な構成は様々な形態に変更することができる。また、移動度変化率記憶部２５ｂは、各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率を１種類の溶離液だけについて記憶可能であってもよい。また、液体クロマトグラフ制御装置２１のハードウェア構成は任意に変更可能である。
【００４０】
【発明の効果】請求項１、３、４の発明によると、任意の特定混合比における試料の移動度Ｒfを薄層クロマトグラフィで求めておけば、所望の特定移動度Ｒf0での溶離液の混合比を知ることができる。そのため、煩雑な作業を行うことなく適切な移動度Ｒf0となる溶離液条件でクロマトグラフィを実行することができる。
【００４１】また、請求項２の発明によると、液体クロマトグラフの制御装置を、含有成分の組合せの異なる多様な種類の溶離液に対して使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＴＬＣを行う装置を示す斜視図である。
【図２】ＴＬＣを行う際のシリカゲル薄層板の模式図であり、（ａ）はＴＬＣ前、（ｂ）はＴＬＣ後をそれぞれ示している。
【図３】本発明が適用される液体クロマトグラフ装置を示す模式図である。
【図４】本発明の一実施の形態による液体クロマトグラフ制御装置のブロック図である。
【図５】図４に示す液体クロマトグラフ制御装置のディスプレイへの表示例を描いた図面である。
【図６】本発明の一実施の形態による液体クロマトグラフの実行方法のフローチャートである。
【図７】混合比を横軸に、移動度Ｒfを縦軸にとったグラフである。
【符号の説明】
１ ＴＬＣ装置
２ シリカゲル薄層板
３ 試料
４ 溶離液
５ 容器
６ 検出器
１１ 液体クロマトグラフ装置
１２、１３ 容器
１４ 電磁弁
１５ 混合器
１６ ポンプ
１７ インジェクター
１８ カラム
２０ フラクションコレクター
２１ 液体クロマトグラフ制御装置
２２ ＣＰＵ
２２ａ 混合比演算部（混合比演算手段）
２２ｂ 混合比制御部（混合比制御手段）
２５ メモリ
２５ａ 実測値記憶部（実測値記憶手段）
２５ｂ 移動度変化率記憶部（移動度変化率記憶手段）
２６ ハードディスク
２８ 入出力部
２９ 入力部
３０ ディスプレイ
３１ 電磁弁操作部
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、移動相として液体溶媒（溶離液）を用いる液体クロマトグラフィに関し、より詳細には、液体クロマトグラフィを行う際の条件検討に関する。
【０００２】
【従来の技術】液体クロマトグラフィにおいては、カラム内に充填された固定相内に、複数の溶媒が混合された溶離液である移動相に溶解された試料が通過される。このとき、カラム内に導入された試料内の各成分は固定相との相互作用や移動相との親和性等により、それぞれカラムを通過する時間が異なるため、カラムから排出される時点では各成分が分離される。固定相との相互作用が強い、又は移動相との親和性の弱い物質がカラム中に長く留まり、カラムから遅く排出されることとなる。
【０００３】上記示した液体クロマトグラフィと同じ原理により行われる薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）がある。薄層クロマトグラフィでは、薄層とされたカラム内の固定相に用いられる物質に試料が１滴垂らされ、この薄層が移動層となる溶離液中に浸漬される。そして、毛管現象により溶離液が薄層に吸い上げられると共に試料が吸い上げられる作用により、試料の溶離液に対する移動度Ｒfを求めることができる。このようにして任意の溶媒比の溶離液で行われるＴＬＣにて求められる移動度Ｒfが、液体クロマトグラフィの分離度Ｒsに相関性があることが知られている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記の移動度Ｒfと分離度Ｒsとの相関性の具体的指標は明らかにされておらず、ＴＬＣにおける結果を液体クロマトグラフィに利用することは行われていない。そのため、現状では、液体クロマトグラフィにおいて分離度Ｒsを設定するために、まず、ある値の移動度Ｒfにて液体クロマトグラフィを行い、その結果に基づき、溶離液に含まれる極性分子溶媒と非極性分子溶媒との割合を変更する等行って、分離度Ｒsを探し設定することが行われている。例えば、設定した移動度よりも高い移動度となれば、溶離液における極性分子の割合を減少させて、再び液体クロマトグラフィを行う必要がある。そのため、移動度の値が設定されるまで液体クロマトグラフィを繰り返し行う必要があり、作業が煩雑で時間がかかり、溶離液が多量に必要とされるという問題がある。
【０００５】本発明は上記問題に鑑みなされたものであり、煩雑な作業を行うことなく適切な移動度Ｒfとなる溶離液条件でクロマトグラフィを実行することができる液体クロマトグラフィの制御装置、液体クロマトグラフィの実行方法及び液体クロマトグラフィの制御プログラムを提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記問題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、溶離液の各成分の混合比と試料の移動度Ｒfとの関係が比例関係であること、そして、溶離液の各成分の混合比に対する試料の移動度Ｒfの変化率は、試料の種類が変わっても同じであるという知見を得た。
【０００７】本発明はこの知見に基づいてなされたものであって、請求項１に記載の液体クロマトグラフィの制御装置は、薄層クロマトグラフの分離において複数の成分を特定混合比で含む溶離液を用いて分離を行ったときの試料の移動度Ｒfの実測値を前記特定混合比に関連づけて記憶するための実測値記憶手段と、前記溶離液における各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率を記憶するための移動度変化率記憶手段と、前記実測値記憶手段に記憶された前記特定混合比に対する移動度Ｒfの実測値と、前記移動度変化率記憶手段に記憶された移動度Ｒfの変化率とに基づいて、特定移動度Ｒf0が得られる前記溶離液の混合比を求めるための混合比演算手段と、前記混合比演算手段での演算結果に基づいて、試料の移動度Ｒfが前記特定移動度Ｒf0となるようにカラムに送液される前記溶離液の混合比を制御する制御信号を出力するための混合比制御手段とを備えていることを特徴としている。
【０００８】請求項３に記載の液体クロマトグラフィの実行方法は、複数の成分を特定混合比で含む溶離液を用いたときの試料の移動度Ｒfの実測値をＴＬＣを行って求める第１の工程と、前記第１の工程で求められた移動度Ｒfの実測値及びこの実測値が求められた前記溶離液の前記特定混合比に基づいて、前記溶離液における各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率を利用することにより、特定移動度Ｒf0が得られる前記溶離液の混合比を求める第２の工程と、前記第２の工程で求められた前記特定移動度Ｒf0が得られる混合比を有する前記溶離液をカラムに送液する第３の工程とを備えていることを特徴としている。
【０００９】上記の構成によると、任意の特定混合比における試料の移動度Ｒfを薄層クロマトグラフィで求めておけば、所望の特定移動度Ｒf0での溶離液の混合比を知ることができる。そのため、煩雑な作業を行うことなく適切な移動度Ｒf0となる溶離液条件でクロマトグラフィを実行することができる。
【００１０】請求項２に記載の液体クロマトグラフの制御装置は、前記移動度変化率記憶手段が、含有成分の組合せの異なる別種類の溶離液ごとに、各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率を記憶することが可能であることを特徴としている。
【００１１】上記の構成によれば、液体クロマトグラフの制御装置を、含有成分の組合せの異なる多様な種類の溶離液に対して使用することができる。
【００１２】また、請求項４に記載の液体クロマトグラフの制御プログラムは、コンピュータを請求項１のような液体クロマトグラフの制御装置として機能させることが可能なプログラムであり、請求項１と同様の作用効果を奏する。なお、請求項４に記載されているプログラムは、ＣＤ−ＲＯＭ、ＦＤ、ＭＯなどのリムーバブル型記録媒体やハードディスクなどの固定型記録媒体に記録して配布可能である他、有線又は無線の電気通信手段によってインターネットなどの通信ネットワークを介して配布可能である。
【００１３】
【発明の実施の形態】本発明の好適な実施の形態を、図１R>１〜図７に基づいて以下に説明する。
【００１４】図１において、薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）に用いられるＴＬＣ装置１を示す。ＴＬＣ装置１は、試料３が表面に１滴垂らされたシリカゲル薄層板２と、容器５に貯留された溶離液４とを備えている。尚、試料３、シリカゲル薄層板２を形成するシリカゲル、及び溶離液４は、後述する液体クロマトグラフィに用いられるのと同等のものである。
【００１５】図３において、液体クロマトグラフ装置１１を示す。液体クロマトグラフ装置１１は、溶媒Ａが貯留された容器１２と、溶媒Ｂが貯留された容器１３と、溶媒Ａと溶媒Ｂとが連結された位置に設けられた電磁弁１４と、溶離液４が貯留される混合器１５と、ポンプ１６と、インジェクター１７と、カラム１８と、検出器１９と、フラクションコレクター２０とが、この順に配置され経路が形成されている。そして、電磁弁１４に液体クロマトグラフ制御装置２１が接続されている。
【００１６】容器１２には溶媒Ａが、容器１３には溶媒Ｂが貯留されている。尚、用いられる溶媒は２種類に限定されず、使用状態・目的に応じて数を増やしてもよい。一般に、溶媒Ａ・溶媒Ｂには、非極性分子と極性分子との組合せで用いられる。
【００１７】ポンプ１６は、液体クロマトグラフ装置１１の回路において、容器１５・電磁弁１４を介して溶媒Ａ・溶媒Ｂを汲み上げる。電磁弁１４は、液体クロマトグラフ制御装置２１からの制御信号により、汲み上げられる溶媒を溶媒Ａ又は溶媒Ｂから選択する。電磁弁１４での各溶媒の選択時間に応じて混合器１５内での溶媒Ａ、Ｂの混合比が決定される。混合器１５は、汲み上げられた溶媒Ａ及び溶媒Ｂが一旦貯留され、溶離液１０とされる。この溶離液１０は、後述するように、算出された混合比を有するものである。
【００１８】インジェクター１７は、試料３を有しており、溶離液１０が通過することで試料３が送出されるようになっている。この試料３は、図１における試料３と同じものである。尚、インジェクター１７は１本に限定されず、選択的に経路を選ぶことができる並設された複数のインジェクターとし、複数の試料について連続的に作業を行うことも可能である。
【００１９】カラム１８には固定相が充填されており、混合溶媒１０が通過することで液体クロマトグラフが行われる。この固定相としては、図１におけるシリカゲル薄層板２を形成するシリカゲルが用いられている。尚、カラムは１本に限定されず、選択的に経路を選ぶことができる並設された複数のカラムとし、複数種類の液体クロマトグラフィを行うことも可能である。
【００２０】検知器１９は、カラム１８にて行われる液体クロマトグラフの結果の検出を行う。そして、フラクションコレクター２０は、複数の試験管を有しており、検知器１９の分析結果により、試料３に含まれる成分毎に各試験管に分取されるようになっている。
【００２１】また、液体クロマトグラフ制御装置２１は、例えば汎用のパーソナルコンピュータなどの情報処理装置によって構成されており、図４に示すように、混合比演算部２２ａ及び混合比制御部２２ｂを有するＣＰＵ２２と、実測値記憶部２５ａ及び移動度変化率記憶部２５ｂを有するメモリ２５と、ハードディスク２６と、入出力部２８とを備えている。入出力部２８には、例えばキーボードやマウスなどから構成された入力部２９と、液体クロマトグラフィの実行過程における様々な情報をオペレータに知らせるためのディスプレイ３０と、ＣＰＵの混合比制御部２２ｂからの指示に基づいて電磁弁１４の開閉信号を送出する電磁弁操作部３１とが接続されている。
【００２２】ハードディスク２６には、一実施の形態による液体クロマトグラフの制御プログラムを含む各種のソフトウェアが記憶されている。そして、これらのハードウェア及びソフトウェアが組み合わされることによって、上述の各部２２ａ、２２ｂ、２５ａ、２５ｂが構築されている。なお、このプログラムは、ＣＤ−ＲＯＭ、ＦＤ、ＭＯなどのリムーバブル型記録媒体に記録しておくことにより、任意のコンピュータにインストールすることが可能である。
【００２３】実測値記憶部２５ａは、薄層クロマトグラフィの分離において複数の成分を特定混合比で含む溶離液を用いて分離を行ったときの試料の移動度Ｒfの実測値を当該特定混合比に関連づけて記憶する。実測値記憶部２５ａに記憶すべきデータは、液体クロマトグラフ装置１１を用いて液体クロマトグラフィを行う前に予め薄層クロマトグラフィを行って得られたものであって、オペレータによって入力部２９から入力されてよい。
【００２４】移動度変化率記憶部２５ｂは、溶離液における各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率を記憶している。移動度変化率記憶部２５ｂに記憶されたデータは、含有成分の組合せの異なる別種類の溶離液ごとに予め薄層クロマトグラフィを行って得られたものである。ハードディスク２６には、含有成分の組合せの異なる別種類の溶離液について、それぞれ移動度Ｒfの変化率が格納されている。そして、本実施の形態による制御プログラムが実行されるときに、実測値記憶部２５ａに記憶された特定混合比にかかる種類の溶離液に対する移動度Ｒfの変化率だけがメモリ２５にロードされる。
【００２５】混合比演算部２２ａは、実測値記憶部２５ａに記憶された特定混合比に対する移動度Ｒfの実測値と、移動度変化率記憶部２５ｂに記憶された移動度Ｒfの変化率とに基づいて、特定移動度Ｒf0が得られる溶離液の混合比を求める。混合比演算部２２ａでの詳細な動作については後述する。
【００２６】混合比制御部２２ｂは、混合比演算部２２ａでの演算結果に基づいて、試料の移動度Ｒfが特定移動度Ｒf0となるようにカラムに送液される溶離液の混合比を制御する制御信号を出力する。この制御信号は入出力部２８から電磁弁操作部３１に供給される。
【００２７】ディスプレイ３０には、図５に示すように、グラフ５１と、グラフ５２と、グラジエント条件表５３とが表示される。
【００２８】グラフ５１は、混合器１５からカラム１８に供給される溶離液１０の混合比（Ｂ／Ａ＋Ｂ）の時間変化を表したものであり、横軸が経過時間、縦軸が溶離液に含まれる溶媒Ｂの割合である。横軸には、時間巾５４がＷ（ｗａｉｔ）、Ｇ（ｇｒａｄｉｅｎｔ）、Ｔ（ｔｏｐ）、ＦＷ（ｆｏｒｗａｒｄ ｗａｓｈ）、ＥＱ（ｅｑｕｉｌｉｂｒａｔｉｏｎ）の順に設定されている。グラフ５２は、横軸が経過時間、縦軸が吸光度である。グラフ５２は試料３の流出曲線であり、試料３に含まれる成分がカラム１８から排出されたときに突出した値を示す。グラジエント条件表５３は、時間巾毎の、溶離液１０に含まれる溶媒Ａと溶媒Ｂとの混合比が表示されている。尚、時間巾Ｇにおいては、Ｗでの混合比を徐々にＴでの混合比にまで直線的に増加させる。
【００２９】次に、本発明の液体クロマトグラフの実行方法の一実施の形態について説明する。
【００３０】（第１の工程）まず、溶媒Ａ・溶媒Ｂを特定混合比で含む溶離液４を用いたときの、試料３の移動度Ｒfの実測値を、オペレータが薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）を行って求める。
【００３１】ＴＬＣでは、まず、図２（ａ）に示すように、試料３が１滴垂らされた状態のシリカゲル薄層２が、図１に示すように溶離液４中に浸漬される。すると、毛管現象により混合溶液４がシリカゲル薄層２に吸い上げられてゆく。これに伴い、試料３も上方に移動する。溶離液４及び試料３の移動が終了すると、図２（ｂ）に示すように、試料３は試料３´の位置に移動する。このとき、試料３の混合溶液４中に浸漬される前の位置から、溶離液４の上端までの距離を１．０として、その１．０に対する試料３´までの距離が移動度Ｒfとして求められる。
【００３２】（第２の工程）以下の工程は液体クロマトグラフ制御装置２１において行われる。液体クロマトグラフ制御装置２１のＣＰＵ２２は、図６のステップＳ１において、第１の工程のＴＬＣで得られた移動度Ｒfの実測値が入力部２９から入力されたかどうかを繰り返して判断する。そして、移動度Ｒfの実測値が入力された場合には（Ｓ１：ＹＥＳ）、ステップＳ２において、移動度Ｒfの実測値と共に、これが求められたときにおける混合溶液４の溶媒Ａと溶媒Ｂとの混合比（特定混合比）をメモリ２５の実測値記憶部２５ａに記憶する。
【００３３】次に、ステップＳ３において、実測値記憶部２５ａに記憶された特定混合比にかかる種類の溶離液について、各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率のデータがハードディスク２６から読み出されて移動度変化率記憶部２５ｂにロードされる。
【００３４】そして、ステップＳ４において、混合比演算部２２ａは、実測値記憶部２５ａに記憶された特定混合比に対する移動度Ｒfの実測値と、移動度変化率記憶部２５ｂに記憶された移動度Ｒfの変化率とに基づいて、溶離液の混合比と移動度Ｒfとの関係を一対一に定める。つまり、移動度変化率記憶部２５ｂに記憶されているのは移動度Ｒfの変化率に過ぎないので、混合比を横軸に移動度Ｒfを縦軸にとったグラフである図７に示すように、移動度変化率記憶部２５ｂの記憶内容からは、溶離液の混合比と移動度Ｒfとの関係を一対一に定めることはできず、両者の関係を表す直線が直線６１、６２、６３、６４（これらはすべて移動度変化率記憶部２５ｂに記憶された移動度Ｒfの変化率に従った傾きを有している）などの無数の直線のいずれかであるということしか分からない。そのため、実測値記憶部２５ａに記憶された特定混合比Ｘ0に対する移動度Ｒfの実測値Ｒf1を用いて、これら無数の直線の中から座標（Ｘ0，Ｒf1）を通過するものを、実際に移動度Ｒfと混合比との関係を表すものとして選択する。例えば、図７に示す例では、混合比演算部２２ａは、両者の関係を表すものとして直線６３を選択する。
【００３５】さらに、ステップＳ５では、混合比演算部２２ａが、液体クロマトグラフ装置１１で試料の分取を行う際に必要とされる特定移動度Ｒf0に対する混合比を、ステップＳ４で定められた一対一の関係に基づいて算出する。例えば、図５のグラフ５１に示すようなグラジエント処理を行う場合、混合比演算部２２ａは、図７に示すように、時間巾「Ｗ」及び「Ｔ」のときの各特定移動度Ｒf0w、Ｒf0tに対する混合比Ｘw、Ｘtを直線６３に基づいて求める。このようにして求められた混合比は、メモリ２５内の所定領域に書き込まれ、図５のグラジエント条件表５３に示すようにディスプレイ３０に表示される。
【００３６】なお、ステップＳ５において、グラフ５１に示す溶離液１０の混合比の時間変化や、グラフ５２に示す試料３の流出曲線がさらに算出されてもよい。
【００３７】（第３の工程）ステップＳ６において、混合比制御部２２ｂは、ステップＳ５で求められた混合比を有する溶離液１０が所定時間だけカラム１８に送液されるような制御信号を電磁弁操作部３１に順次出力する。電磁弁操作部３１はこの制御信号に基づいて電磁弁１４を開閉させる信号を電磁弁１４に供給する。これにより、カラム１８内での試料の移動度Ｒfを、確実に特定移動度Ｒf0又はその近傍とすることができるので、良好な試料の分離を行わせることができる。
【００３８】また、本実施の形態では、含有成分の組合せの異なる別種類の溶離液ごとに、各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率がハードディスク２６に記憶されており、必要な変化率だけを移動度変化率記憶部２５ｂに記憶させることができる。そのため、液体クロマトグラフ制御装置２１を、含有成分の組合せの異なる多様な種類の溶離液に対して使用することができる。
【００３９】以上、本発明の好適な実施の形態について説明したが、本発明は上述の実施の形態に限られるものではなく、特許請求の範囲に記載した限りにおいて様々な設計変更が可能なものである。例えば、液体クロマトグラフ装置１１の具体的な構成は様々な形態に変更することができる。また、移動度変化率記憶部２５ｂは、各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率を１種類の溶離液だけについて記憶可能であってもよい。また、液体クロマトグラフ制御装置２１のハードウェア構成は任意に変更可能である。
【００４０】
【発明の効果】請求項１、３、４の発明によると、任意の特定混合比における試料の移動度Ｒfを薄層クロマトグラフィで求めておけば、所望の特定移動度Ｒf0での溶離液の混合比を知ることができる。そのため、煩雑な作業を行うことなく適切な移動度Ｒf0となる溶離液条件でクロマトグラフィを実行することができる。
【００４１】また、請求項２の発明によると、液体クロマトグラフの制御装置を、含有成分の組合せの異なる多様な種類の溶離液に対して使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＴＬＣを行う装置を示す斜視図である。
【図２】ＴＬＣを行う際のシリカゲル薄層板の模式図であり、（ａ）はＴＬＣ前、（ｂ）はＴＬＣ後をそれぞれ示している。
【図３】本発明が適用される液体クロマトグラフ装置を示す模式図である。
【図４】本発明の一実施の形態による液体クロマトグラフ制御装置のブロック図である。
【図５】図４に示す液体クロマトグラフ制御装置のディスプレイへの表示例を描いた図面である。
【図６】本発明の一実施の形態による液体クロマトグラフの実行方法のフローチャートである。
【図７】混合比を横軸に、移動度Ｒfを縦軸にとったグラフである。
【符号の説明】
１ ＴＬＣ装置
２ シリカゲル薄層板
３ 試料
４ 溶離液
５ 容器
６ 検出器
１１ 液体クロマトグラフ装置
１２、１３ 容器
１４ 電磁弁
１５ 混合器
１６ ポンプ
１７ インジェクター
１８ カラム
２０ フラクションコレクター
２１ 液体クロマトグラフ制御装置
２２ ＣＰＵ
２２ａ 混合比演算部（混合比演算手段）
２２ｂ 混合比制御部（混合比制御手段）
２５ メモリ
２５ａ 実測値記憶部（実測値記憶手段）
２５ｂ 移動度変化率記憶部（移動度変化率記憶手段）
２６ ハードディスク
２８ 入出力部
２９ 入力部
３０ ディスプレイ
３１ 電磁弁操作部
【特許請求の範囲】
【請求項１】 薄層クロマトグラフィの分離において複数の成分を特定混合比で含む溶離液を用いて分離を行ったときの試料の移動度Ｒfの実測値を前記特定混合比に関連づけて記憶するための実測値記憶手段と、前記溶離液における各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率を記憶するための移動度変化率記憶手段と、前記実測値記憶手段に記憶された前記特定混合比に対する移動度Ｒfの実測値と、前記移動度変化率記憶手段に記憶された移動度Ｒfの変化率とに基づいて、特定移動度Ｒf0が得られる前記溶離液の混合比を求めるための混合比演算手段と、前記混合比演算手段での演算結果に基づいて、試料の移動度Ｒfが前記特定移動度Ｒf0となるようにカラムに送液される前記溶離液の混合比を制御する制御信号を出力するための混合比制御手段とを備えていることを特徴とする液体クロマトグラフの制御装置。
【請求項２】 前記移動度変化率記憶手段が、含有成分の組合せの異なる別種類の溶離液ごとに、各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率を記憶することが可能であることを特徴とする請求項１に記載の液体クロマトグラフの制御装置。
【請求項３】 複数の成分を特定混合比で含む溶離液を用いたときの試料の移動度Ｒfの実測値を薄層クロマトグラフを行って求める第１の工程と、前記第１の工程で求められた移動度Ｒfの実測値及びこの実測値が求められた前記溶離液の前記特定混合比に基づいて、前記溶離液における各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率を利用することにより、特定移動度Ｒf0が得られる前記溶離液の混合比を求める第２の工程と、前記第２の工程で求められた前記特定移動度Ｒf0が得られる混合比を有する前記溶離液をカラムに送液する第３の工程とを備えていることを特徴とする液体クロマトグラフィの実行方法。
【請求項４】 薄層クロマトグラフィの分離において複数の成分を特定混合比で含む溶離液を用いて分離を行ったときの試料の移動度Ｒfの実測値を前記特定混合比に関連づけて記憶するための実測値記憶手段、前記溶離液における各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率を記憶するための移動度変化率記憶手段、前記実測値記憶手段に記憶された前記特定混合比に対する移動度Ｒfの実測値と、前記移動度変化率記憶手段に記憶された移動度Ｒfの変化率とに基づいて、特定移動度Ｒf0が得られる前記溶離液の混合比を求めるための混合比演算手段、及び、前記混合比演算手段での演算結果に基づいて、試料の移動度Ｒfが前記特定移動度Ｒf0となるようにカラムに送液される前記溶離液の混合比を制御する制御信号を出力するための混合比制御手段としてコンピュータを機能させるための液体クロマトグラフの制御プログラム。
【請求項１】 薄層クロマトグラフィの分離において複数の成分を特定混合比で含む溶離液を用いて分離を行ったときの試料の移動度Ｒfの実測値を前記特定混合比に関連づけて記憶するための実測値記憶手段と、前記溶離液における各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率を記憶するための移動度変化率記憶手段と、前記実測値記憶手段に記憶された前記特定混合比に対する移動度Ｒfの実測値と、前記移動度変化率記憶手段に記憶された移動度Ｒfの変化率とに基づいて、特定移動度Ｒf0が得られる前記溶離液の混合比を求めるための混合比演算手段と、前記混合比演算手段での演算結果に基づいて、試料の移動度Ｒfが前記特定移動度Ｒf0となるようにカラムに送液される前記溶離液の混合比を制御する制御信号を出力するための混合比制御手段とを備えていることを特徴とする液体クロマトグラフの制御装置。
【請求項２】 前記移動度変化率記憶手段が、含有成分の組合せの異なる別種類の溶離液ごとに、各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率を記憶することが可能であることを特徴とする請求項１に記載の液体クロマトグラフの制御装置。
【請求項３】 複数の成分を特定混合比で含む溶離液を用いたときの試料の移動度Ｒfの実測値を薄層クロマトグラフを行って求める第１の工程と、前記第１の工程で求められた移動度Ｒfの実測値及びこの実測値が求められた前記溶離液の前記特定混合比に基づいて、前記溶離液における各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率を利用することにより、特定移動度Ｒf0が得られる前記溶離液の混合比を求める第２の工程と、前記第２の工程で求められた前記特定移動度Ｒf0が得られる混合比を有する前記溶離液をカラムに送液する第３の工程とを備えていることを特徴とする液体クロマトグラフィの実行方法。
【請求項４】 薄層クロマトグラフィの分離において複数の成分を特定混合比で含む溶離液を用いて分離を行ったときの試料の移動度Ｒfの実測値を前記特定混合比に関連づけて記憶するための実測値記憶手段、前記溶離液における各成分の混合比の変化に対する試料の移動度Ｒfの変化率を記憶するための移動度変化率記憶手段、前記実測値記憶手段に記憶された前記特定混合比に対する移動度Ｒfの実測値と、前記移動度変化率記憶手段に記憶された移動度Ｒfの変化率とに基づいて、特定移動度Ｒf0が得られる前記溶離液の混合比を求めるための混合比演算手段、及び、前記混合比演算手段での演算結果に基づいて、試料の移動度Ｒfが前記特定移動度Ｒf0となるようにカラムに送液される前記溶離液の混合比を制御する制御信号を出力するための混合比制御手段としてコンピュータを機能させるための液体クロマトグラフの制御プログラム。
【図１】
【図２】
【図６】
【図３】
【図４】
【図７】
【図５】
【図２】
【図６】
【図３】
【図４】
【図７】
【図５】
【公開番号】特開２００３−２４０７６５（Ｐ２００３−２４０７６５Ａ）
【公開日】平成１５年８月２７日（２００３．８．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００２−３７７２２（Ｐ２００２−３７７２２）
【出願日】平成１４年２月１５日（２００２．２．１５）
【出願人】（３９１０４８５３３）山善株式会社 (11)
【公開日】平成１５年８月２７日（２００３．８．２７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１４年２月１５日（２００２．２．１５）
【出願人】（３９１０４８５３３）山善株式会社 (11)
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