液体クロマトグラフィ装置
【課題】
本発明の目的は、液体クロマトグラフィ装置において、分離カラムの不具合検出を容易にすることに関する。
【解決手段】
本発明は、分離カラムと、分離カラムに送液できるポンプと、ポンプによる送液の圧力を検出できるセンサーと、分離カラムの上流側に設けられ、廃液容器と連通可能な、上流側切り替えバルブと、分離カラムの下流流側に設けら、廃液容器と連通可能な、下流側切り替えバルブと、を備える液体クロマトグラフィ装置に関する。分離カラムの上流側及び下流側の切り替えバルブを廃液容器と連通するように切り替え、ポンプにより送液し、ポンプによる送液の圧力を検出することにより、分離カラムの不具合を検出できる。本発明により、分離カラムの異常を容易に検出できる。
本発明の目的は、液体クロマトグラフィ装置において、分離カラムの不具合検出を容易にすることに関する。
【解決手段】
本発明は、分離カラムと、分離カラムに送液できるポンプと、ポンプによる送液の圧力を検出できるセンサーと、分離カラムの上流側に設けられ、廃液容器と連通可能な、上流側切り替えバルブと、分離カラムの下流流側に設けら、廃液容器と連通可能な、下流側切り替えバルブと、を備える液体クロマトグラフィ装置に関する。分離カラムの上流側及び下流側の切り替えバルブを廃液容器と連通するように切り替え、ポンプにより送液し、ポンプによる送液の圧力を検出することにより、分離カラムの不具合を検出できる。本発明により、分離カラムの異常を容易に検出できる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、液体クロマトグラフィ技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、タンパク質を網羅的に観察し、プロファイリングを行うプロテオーム研究の分野の重要性が広く認知されてきている。この分野の研究成果は診断と治療に広く応用されることが期待されている。臨床分野へのプロテオーム解析を導入する場合には、タンパク質を混合物の状態のまま酵素消化して、生成したペプチドを高分離能の液体クロマトグラフィで分離して質量分析装置で高分解能，高感度，高機能測定を行うことが必要である。臨床分野への応用の場合、対象となる成分は、血液，血清などの血液由来成分、尿，腹水，唾液，涙液，脳骨髄液，胸水，細胞組織からのタンパク質抽出液となるが、例えば、血清については２万２千種類以上のタンパク質が存在するといわれており、質量分析装置へ導入する前に、できるかぎり液体クロマトグラフィで分離する必要がある。また、分離能を向上させるために分離モードの異なる複数本のカラム連結した多次元液体クロマトグラフィ技術も普及している。多次元液体クロマトグラフィは、イオン交換カラムと逆相カラムをカラムスイッチングバルブで連結させ、電荷の差を利用して分離したペプチド分画を、トラップカラムに一旦濃縮して、さらに疎水性・親水性の差を利用して２次元的に分離することで、複雑な試料も分離可能な装置である。
【０００３】
特公平４−６２０２４には、一次元の液体クロマトグラフィ装置において、カラムにかかる圧力を測定し、カラムの異常を自動的に検出することが開示されている。
【０００４】
【特許文献１】特公平４−６２０２４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、二次元液体クロマトグラフィ装置においては、１次元目の分離カラム、少なくとも２つのトラップカラム、及び２次元目の分離カラムが装置構成に含まれる。流路も、一般的な１次元クロマトグラフ装置に比べ著しく複雑である。試料および溶媒由来の不純物による流路内の配管またはカラムの詰まり等の問題が発生することがあり、そのつど質量分析計の後段流路から配管またカラムを取り外し、再接続や交換調整を行っている。装置を構成している配管、カラムの内径は２０μｍ〜３００μｍであり、再接続することでデッドボリュームの構築や不純物の混入の原因となり分析精度が悪化することもある。
【０００６】
本発明の目的は、液体クロマトグラフィ装置において、分離カラムの不具合検出を容易にすることに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、分離カラムと、分離カラムに送液できるポンプと、ポンプによる送液の圧力を検出できるセンサーと、分離カラムの上流側に設けられ、廃液容器と連通可能な、上流側切り替えバルブと、分離カラムの下流流側に設けら、廃液容器と連通可能な、下流側切り替えバルブと、を備える液体クロマトグラフィ装置に関する。分離カラムの上流側及び下流側の切り替えバルブを廃液容器と連通するように切り替え、ポンプにより送液し、ポンプによる送液の圧力を検出することにより、分離カラムの不具合を検出できる。
【０００８】
好ましくは、上流側切り替えバルブ、下流側切り替えバルブ、ポンプ、及びセンサーを制御する制御機構を備える。
【０００９】
好ましくは、ポンプが洗浄液を送液でき、異常が検出された分離カラムに洗浄液を送液する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、分離カラムの異常を容易に検出できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、上記及びその他の本発明の新規な特徴と効果について説明する。尚、図面はもっぱら説明のためのものであって、権利範囲を減縮するものではない。
【実施例１】
【００１２】
本実施例では、２つの分離カラムの前後に廃液ボトル側に詰まり検知バルブを経由し廃液ボトルに分岐させる流路を構築する。問題が発生した際に自動的にバルブを廃液ボトル側に切替え、ポンプ内の圧力センサーの変動値から問題箇所を把握する。また、洗浄工程を実施し詰まりの解消を試みることでメンテナンスを行う。
【００１３】
図１は、簡易メンテナンス機能付き多次元液体クロマトグラフ質量分析装置の一例として２次元液体クロマトグラフィの概略図を示す。
【００１４】
本装置は、第１の分離カラムと、第１の分離カラムに送液できる第１のポンプと、第１のポンプによる送液の圧力を検出できる第１のセンサーと、第１の分離カラムの上流側に設けられ、廃液容器と連通可能な、第１の上流側切り替えバルブと、第１の分離カラムの下流流側に設けら、廃液容器と連通可能な、第１の下流側切り替えバルブと、第２の分離カラムと、第２の分離カラムに送液できる第１のポンプと、第２のポンプによる送液の圧力を検出できる第１のセンサーと、第２の分離カラムの上流側に設けられ、廃液容器と連通可能な、第２の上流側切り替えバルブと、第２の分離カラムの下流流側に設けら、廃液容器と連通可能な、第２の下流側切り替えバルブと、を含む。
【００１５】
より具体的には、装置構成は、前段分離カラム部Ａ，トラップカラム部Ｂ，後段分離カラム部Ｃから構成される。前段分離カラム部Ａは、溶離液１３と溶離液１４と溶離液１３，１４を送液する圧力センサー機能を有するポンプ１２とポンプ１２の後段に配置し試料を分離カラム１０に導入する試料導入装置１１と試料を分離する分離カラム１０から構成される。分離カラム１０は通常、陽イオン交換カラム (strong cation ion
chromatography column)が用いられる。溶離液１３は、分離カラム１０に用いるカラムの種類によって適宜選択されるが、本実施例では、０.１％ＨＣＯＯＨ（ｐＨ３.０）を用い、流量１０μＬ／min で送液を行った。溶離液１４はＣＨ3ＣＮ 溶液であり、配管の洗浄用に用いられる。試料導入装置１１は、ポンプ１２の後段と分離カラム１０の前段に位置し、シリンジで試料を流路内に導入することすることでポンプ１２からの溶出液ともに分離カラム１０に試料を導入できる。また、分離カラム１０の分離はイオン強度に応じて分離を行うが、イオン強度の異なる溶離液を試料導入装置のポートに設置し、試料を分離カラム１０に吸着させたのちに、順次導入しイオン交換分離を行った。本実施例では、試料に、ヒト血清(ＳＩＧＭＡ社、Ｈ１３８８)をMultiple Affinity Removal Column System (Agilent Technologies社、５１８５−５９８４)を用いて血清中から６種類の主要タンパク質を除去したのちに、還元アルキル化を行い、トリプシン消化を行った５mg／ｍＬ血清試料を用いて、１μＬ供試した。イオン強度の異なる溶離液は０.１％ ＨＣＯＯＨを含む０ｍＭ ＨＣＯＯＮＨ4，５０Ｍ ＨＣＯＯＮＨ4，１００ｍＭ ＨＣＯＯＮＨ4，１０００
ｍＭ ＨＣＯＯＮＨ4を試料導入装置１１のサンプルポートに設置し、２０μＬずつ導入した。イオン強度の異なる溶離液として、他に、ＣＨ3ＣＯＯＮＨ4等の不揮発性塩を含む溶離液を用いることも可能である。
【００１６】
トラップカラム部Ｂは溶離液７と溶離液８と溶離液７，８を送液する圧力センサー機能を有するポンプ９と分離カラム１０で分離した試料を濃縮するトラップカラム４とトラップカラム５と、トラップカラムの流路およびポンプ９からの流路とポンプ１２からの流路を切り替えることを可能にするバルブ３から構成される。分離カラム１０の前後には、詰まりが発生した場合に流路を切り替えることを可能にする詰まり検知バルブ１７と１８が設置されている。バルブ３と詰まり検知バルブ１７と詰まり検知バルブ１８は制御装置
２１で制御されており、バルブ３の切り替えるタイミングは、あらかじめ制御装置２１にプログラムを作成しておき、バルブ３を一定時間間隔で切り替えることにより、流路を分離カラム１０⇒トラップカラム４⇒廃液ボトル６から分離カラム１０⇒トラップカラム５⇒廃液ボトル６へ切替えることができる。このバルブ３の切替えにより、分離カラム１０から溶出した試料成分をトラップカラム４とトラップカラム５に一定時間間隔で濃縮することが可能となる。詰まり検知バルブ１８の切り替えは、装置内の配管またはカラムに詰まりが発生した場合に、制御装置２１からの制御により詰まり検知バルブ１８を切り替え、分離カラム１０⇒詰まり検知バルブ１８⇒バルブ３から分離カラム１０⇒詰まり検知バルブ１８⇒廃液ボトル１５へと流路の変更を行う。詰まりが発生したかどうかは、ポンプ１２の圧力センサーの値により判断し、あらかじめ制御装置２１に詰まりが発生した場合の圧力値を設定しておき、その値以上になると詰まりが発生したと判断する。この値は、測定に用いる分離カラム１０およびトラップカラム４、５の背圧値により適宜決定される。今回用いたＳＣＸカラム（Poly ＬＣ社製）とトラップカラム（京都モノテック社製）の流量１０μＬ／min での背圧値は合わせて９ＭＰａ程度であるため、詰まり発生したかどうかを判断するための圧力値は本実施例では１０ＭＰａ以上とした。ポンプ１２の圧力値が１０ＭＰａ以上を示した場合、装置内の流路またはカラム内に詰まりが発生したと判断し、バルブ１８の切り替えを行い、圧力値の変動幅を観察する。ポンプ１２の圧力値に変動がない場合は詰まり検知バルブ１８より前段が、圧力値が分離カラム２の背圧からトラップカラムの背圧を引いた値に変動した場合には詰まり検知バルブより後段に詰まり発生箇所が存在していることが分かる。圧力値に変動がない場合には、次に、制御装置２１の制御により自動的に詰まり検知バルブ１７が切り替えられ、試料導入装置１１⇒詰まり検知バルブ１７⇒分離カラム１０から試料導入装置１１⇒詰まり検知バルブ１７⇒廃液ボトル１５へと流路の変更を行う。ポンプ１２の圧力値に変動がない場合には、詰まり検知バルブ１７より前段に、圧力値が０〜０.５ Ｍｐａの値に変動した場合には、詰まり検知バルブ１７より後段に詰まり発生箇所が存在していることが分かる。図２に詰り検知バルブ１７と１８の制御機構による詰り箇所把握までのフローチャートを示す。
【００１７】
後段分離カラム部Ｃは、質量分析装置１と試料を分離する分離カラム２と分離カラム２の前後には、詰まりが発生した場合に流路を切り替えることを可能にする詰まり検知バルブ１９と２０から構成される。分離カラム２には、逆相カラムまたはモノリスカラムが用いられ、疎水性相互作用により分離が行われる。溶離液７と溶離液８の組成は、カラムの種類により適宜選択されるが、本実施例では、溶離液７に０.１％ ＨＣＯＯＨを含む２％ＣＨ3ＣＮ水溶液を溶離液８には０.１％ ＨＣＯＯＨを含む９８％ＣＨ3ＣＮ水溶液を用い、制御装置２１にあらかじめ設定したプログラムに従い溶離液７と溶離液８を混合し、流量２００ｎＬ／min で送液を行った。バルブ３と詰まり検知バルブ１９と詰まり検知バルブ２０は制御装置２１で制御されており、バルブ３の切り替えるタイミングは、あらかじめ制御装置２１にプログラムを作成しておき、バルブ３を一定時間間隔で切り替えることにより、流路をポンプ９⇒トラップカラム４⇒分離カラム２からポンプ９⇒トラップカラム５⇒分離カラム２へ切り替えることができる。このバルブ３の切り替えにタイミングを合わせて、溶離液７と溶離液８の混合を開始させ、ポンプ９からの送液により、トラップカラムへ濃縮した試料成分を溶出させ分離カラム２で分離することが可能である。詰まり検知バルブ２０の切り替えは、装置内の配管またはカラムに詰まりが発生した場合に、制御装置２１からの制御により詰まり検知バルブ２０を切り替え、分離カラム２⇒詰まり検知バルブ２０⇒質量分析装置１から分離カラム２⇒詰まり検知バルブ２０⇒廃液ボトル
１６へと流路の変更を行う。詰まりが発生したかどうかは、ポンプ９の圧力センサーの値により判断し、あらかじめ制御装置２１に詰まりが発生した場合の圧力値を設定しておき、その値以上になると詰まりが発生したと判断する。この値は、測定に用いる分離カラム２およびトラップカラム４、５の背圧値により適宜決定される。今回用いたモノリスカラム（ＧＬサイエンス社製）とトラップカラム（京都モノテック社製）流量２００ｎＬ／
min での背圧値は合わせて３ＭＰａ程度であるため、詰まりが発生したかどうかを判断するための圧力値は本実施例では５Ｍｐａ以上とした。ポンプ９の圧力値が５Ｍｐａ以上を示した場合、装置内の流路またはカラム内に詰まりが発生したと判断し、バルブ２０の切り替えを行い、圧力値の変動幅を観察する。ポンプ９の圧力値に変動がない場合は詰まり検知バルブ２０より前段が、５Ｍｐａ以下に変動した場合には詰まり検知バルブ２０より後段に詰まり発生箇所が存在していることが分かる。圧力値に変動がない場合には、次に、制御装置２１の制御により自動的に詰まり検知バルブ１９が切り替えられ、バルブ３⇒詰まり検知バルブ１９⇒分離カラム２からバルブ３⇒詰まり検知バルブ１９⇒廃液ボトル１６へと流路の変更を行う。ポンプ１２の圧力値に変動がない場合には、詰まり検知バルブ１９より前段に、圧力値がトラップカラムの背圧値に変動した場合には詰まり検知バルブ１９より後段に詰まり発生箇所が存在していることが分かる。図３に詰り検知バルブ
１９と２０の制御機構による詰り箇所把握までのフローチャートを示す。
【００１８】
このように詰まり発生箇所が把握された後、制御装置２１の制御により、詰まりを取り除くために洗浄が行われる。詰まり検知バルブ１７，１８の切り替えにより（１）詰まり検知バルブ１７から前段、（２）詰まり検知バルブ１７から詰まり検知バルブ１８の間、（３）詰まり検知バルブ１８より後段のいずれかにに詰まり発生箇所が存在することが確認される。詰まり発生箇所が把握された後に、制御装置２１の制御により、自動的にバルブ３と詰まり検知バルブ１７、１８、１９が切り替えられ、ポンプ１２またはポンプ９から詰まり発生箇所に適した洗浄液が送液され洗浄が行われる。（１）の場合は、詰まり検知バルブ１７が試料導入装置１１⇒詰まり検知バルブ１７⇒廃液ボトル１５の流路に切り替えられ、溶離液１４がポンプ１２により１００％の組成で送液し、一定時間洗浄が行われる。（２）の場合は、詰まり検知バルブ１８が分離カラム１０⇒詰まり検知バルブ１８⇒廃液ボトル１５の流路に切り替えられ、試料導入装置１１のサンプルポートに設置した１０００ｍＭ ＨＣＯＯＮＨ4がポンプ１２により溶離液１３が送液される流路に導入され、分離カラム１０の洗浄が一定時間行われる。（３）の場合は、詰まり検知バルブ１９をバルブ３⇒詰まり検知バルブ１９⇒廃液ボトル１６の流路に切り替え、バルブ３も切り替えることによりポンプ１２⇒トラップカラム４⇒廃液ボトル６からポンプ９⇒トラップカラム４⇒廃液ボトル１６またはポンプ１２⇒トラップカラム５⇒廃液ボトル６からポンプ９⇒トラップカラム５⇒廃液ボトル１６へと流路を切り替え、溶離液８を１００％の組成でポンプ９により送液され、洗浄が一定時間行われる。ある一定時間洗浄を行い、ポンプ１２の圧力値が１０Ｍｐａ以下に戻った場合にメンテナンスが完了する。洗浄により効果が見られない場合は、配管およびカラムの交換を実施し、メンテナンスを行う。
【００１９】
同様に、詰まり検知バルブ１９，２０の切り替えにより（４）詰まり検知バルブ１９から前段、（５）詰まり検知バルブ１９から詰まり検知バルブ２０の間、（６）詰まり検知バルブ２０より後段のいずれかにに詰まり発生箇所が存在することが確認される。詰まり発生箇所が把握された後に、制御装置２１の制御により、自動的にバルブ３と詰まり検知バルブ１９，２０が切り替えられ、ポンプ９から詰まり発生箇所に適した洗浄液が送液され洗浄が行われる。（４）の場合は、詰まり検知バルブ１９がバルブ３⇒詰まり検知バルブ１９⇒廃液ボトル１６の流路に切り替えられ、溶離液８がポンプ９により１００％の組成で送液し、トラップカラム４またはトラップカラム５の洗浄が行われる。（５）の場合は、詰まり検知バルブ２０が分離カラム２⇒詰まり検知バルブ２０⇒廃液ボトル１６の流路に切り替えられ、溶離液８がポンプ９により１００％の組成で送液し、分離カラム２の洗浄が行われる。（６）の場合は、洗浄を行うと質量分析装置に不純物が導入されることになり、測定精度の劣化をまねく恐れがあるため洗浄は行わず、詰まり検知バルブ２０と質量分析装置１の間の配管を交換する。ある一定時間洗浄を行い、ポンプ９の５Ｍｐａ以下に戻った場合にメンテナンスが完了する。洗浄により効果が見られない場合は、手動で配管およびカラムの交換を実施し、メンテナンスを行う。
【００２０】
配管や詰まりが発生した場合、通常は装置の最前段、図１では質量分析装置に近い側から順次配管やカラム等の脱着や交換を行い、ポンプ圧力値の変動幅から詰まり箇所を特定し、装置の復旧を行っていた。この方法であるとメンテナンスに手間がかかるのと同時に、配管やカラムの脱着の際に、デッドボリュームの形成や不純物の混入が生じる恐れがあった。そのため、測定の精度やスループットまたは再現性に多大な影響を及ぼしていた。しかし、本実施例を用いることで、的確に詰まり箇所を容易に発見することが可能であり、洗浄工程を実施し詰まりの解消を試みることで、カラムや配管の脱着と交換が最小限にとどめることができるため、デッドボリュームの形成や不純物の混入を最小限におさえることが可能となる。そのため、短時間で装置のメンテナンスが完了し、測定の精度や再現性を確保しつつ、安定したデータの取得が可能となる。
【００２１】
本実施例により、自動的に詰まり箇所を把握し、洗浄工程で詰りを取り除くことが可能である。洗浄工程において詰りを取り除けなかった場合でも、詰まり箇所を把握できているので測定者による配管およびカラム交換や再接続の煩雑な作業をできるだけ減らし、簡易な装置メンテナンスを可能にする。また、デッドボリュームの構築や不純物の混入の原因となり分析精度が悪化する恐れを防ぎ、信頼性の高いデータが得られることを可能にする。
【実施例２】
【００２２】
実施例２は、実施例１のように複数のカラムを用いることなく、１本のカラムにより試料の分離を行う液体クロマトグラフィ質量分析計に関するものである。本実施例の主な用途は、疾患プロテオーム分野において疾患に関連したマーカーや代謝関連マーカー等のバイオマーカー探索研究に用いられており、試料として血液，血清などの血液由来成分、尿，腹水，唾液，涙液，脳骨髄液，胸水，細胞組織からのタンパク質抽出液を用いる。
【００２３】
以下、本実施例について、図４を用いて説明する。本装置は、溶離液４０５と溶離液
４０６、溶離液４０５と溶離液４０６を送液する圧力センサー機能を有するポンプ４０４と試料をポンプ４０４の送液により導入する試料導入装置４０３と分離カラム４０２および質量分析装置４０１から構成される。また、分離カラム４０２の前後には、制御装置
４１０の制御により流路の変更を行うことが可能である詰まり検知バルブ４０７と詰まり検知バルブ４０８が配置され、廃液ボトル４０９へ流路を変更することができる。本実施例では、疎水性相互作用により分離を行い、１０ＭＰａ以上の高い背圧のもとでも使用可能なカラムを用いている。溶離液４０５には０.１％ ＨＣＯＯＨを含む２％ＣＨ3ＣＮ 水溶液を溶離液６には０.１％ ＨＣＯＯＨを含む９８％ＣＨ3ＣＮ 水溶液を用い、制御装置
４１０にあらかじめ設定したプログラムに従い溶離液４０５と溶離液４０６を混合し、流量５μＬ／min で送液を行った。詰まりが発生したかどうかは、ポンプ４０４の圧力センサーの値により判断し、あらかじめ制御装置４１０に詰まりが発生した場合の圧力値を設定しておき、その値以上になると詰まりが発生したと判断する。この値は分離カラム402の背圧値により適宜決定されるが、今回分離カラム４０２には逆相カラム（資生堂製）を用い、流量５μＬ／ｍｉｎでの背圧値は合わせて３ＭＰａ程度であるため、詰まりが発生したかどうかを判断するための圧力値は本実施例では５Ｍｐａ以上とした。ポンプ４０４の圧力値が５Ｍｐａ以上を示した場合、装置内の流路またはカラム内に詰まりが発生したと判断し、バルブ４０８の切り替えを行い、分離カラム４０２⇒詰まり検知バルブ４０８⇒質量分析計４０１から分離カラム４０２⇒詰まり検知バルブ４０８⇒廃液ボトル４０９へ流路の切替えを行い、圧力値の変動幅を観察する。ポンプ４０４の圧力値に変動がない場合は詰まり検知バルブ４０８より前段が、５Ｍｐａ以下に変動した場合には詰まり検知バルブ４０８より後段に詰まり発生箇所が存在していることが分かる。圧力値に変動がない場合には、次に、制御装置４１０の制御により自動的に詰まり検知バルブ４０７が切り替えられ、試料導入装置４０３⇒詰まり検知バルブ４０７⇒分離カラム４０２から、試料導入装置４０３⇒詰まり検知バルブ４０７⇒廃液ボトル４０９へと流路の変更を行う。ポンプ４０４の圧力値に変動がない場合には、詰まり検知バルブ４０７より前段に、０〜
０.５ＭＰａ の背圧値に変動した場合には詰まり検知バルブ４０７より後段に詰まり発生箇所が存在していることが分かる。
【００２４】
このように詰まり発生箇所が把握された後、制御装置４１０の制御により、詰まりを取り除くために洗浄が行われる。詰まり検知バルブ４０７，４０８の切り替えにより（１）詰まり検知バルブ４０７から前段、(２)詰まり検知バルブ７から詰まり検知バルブ４０８の間、（３）詰まり検知バルブ４０８より後段のいずれかにに詰まり発生箇所が存在することが確認される。詰まり発生箇所が把握された後に、制御装置４１０の制御により、自動的に詰まり検知バルブ４０７，４０８が切り替えられ、ポンプ４０４から詰まり発生箇所に適した洗浄液が送液され洗浄が行われる。（１）の場合は、詰まり検知バルブ７が試料導入装置４０３⇒詰まり検知バルブ４０７⇒廃液ボトル４０９の流路に切り替えられ、溶離液４０６がポンプ４０４により１００％の組成で送液し、一定時間洗浄が行われる。（２）の場合は、詰まり検知バルブ８が分離カラム２⇒詰まり検知バルブ４０８⇒廃液ボトル４０９の流路に切り替えられ、溶離液４０６がポンプ４０４により１００％の組成で送液し、一定時間洗浄が行われる。(３)の場合は、詰まり検知バルブ４０７を試料導入装置４０３⇒詰まり検知バルブ４０７⇒廃液ボトル４０９と流路を切り替え、溶離液４０６を１００％の組成でポンプ４０４により送液され、洗浄が一定時間行われる。ある一定時間洗浄を行い、ポンプ４０４の圧力値が５Ｍｐａ以下に戻った場合にメンテナンスが完了する。洗浄により効果が見られない場合は、手動で配管およびカラムの交換を実施し、メンテナンスを行う。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】実施例１に係る多次元液体クロマトグラフ装置の概略図。
【図２】検知バルブ１７と１８の制御機構による詰り箇所把握までのフローチャト。
【図３】検知バルブ１９と２０の制御機構による詰り箇所把握までのフローチャト。
【図４】実施例２に係る液体液体クロマトグラフ装置の概略図。
【符号の説明】
【００２６】
１，４０１ 質量分析装置
２，１０,４０２ 分離カラム
３ バルブ
４，５ トラップカラム
６，１５，１６，４０９ 廃液ボトル
７，８，１３，１４，４０５，４０６ 溶離液
９，１２，４０４ ポンプ
１１，４０３ 試料導入装置
１７，１８，１９，２０，４０７，４０８ 詰り検知バルブ
２１，４１０ 制御装置
【技術分野】
【０００１】
本発明は、液体クロマトグラフィ技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、タンパク質を網羅的に観察し、プロファイリングを行うプロテオーム研究の分野の重要性が広く認知されてきている。この分野の研究成果は診断と治療に広く応用されることが期待されている。臨床分野へのプロテオーム解析を導入する場合には、タンパク質を混合物の状態のまま酵素消化して、生成したペプチドを高分離能の液体クロマトグラフィで分離して質量分析装置で高分解能，高感度，高機能測定を行うことが必要である。臨床分野への応用の場合、対象となる成分は、血液，血清などの血液由来成分、尿，腹水，唾液，涙液，脳骨髄液，胸水，細胞組織からのタンパク質抽出液となるが、例えば、血清については２万２千種類以上のタンパク質が存在するといわれており、質量分析装置へ導入する前に、できるかぎり液体クロマトグラフィで分離する必要がある。また、分離能を向上させるために分離モードの異なる複数本のカラム連結した多次元液体クロマトグラフィ技術も普及している。多次元液体クロマトグラフィは、イオン交換カラムと逆相カラムをカラムスイッチングバルブで連結させ、電荷の差を利用して分離したペプチド分画を、トラップカラムに一旦濃縮して、さらに疎水性・親水性の差を利用して２次元的に分離することで、複雑な試料も分離可能な装置である。
【０００３】
特公平４−６２０２４には、一次元の液体クロマトグラフィ装置において、カラムにかかる圧力を測定し、カラムの異常を自動的に検出することが開示されている。
【０００４】
【特許文献１】特公平４−６２０２４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、二次元液体クロマトグラフィ装置においては、１次元目の分離カラム、少なくとも２つのトラップカラム、及び２次元目の分離カラムが装置構成に含まれる。流路も、一般的な１次元クロマトグラフ装置に比べ著しく複雑である。試料および溶媒由来の不純物による流路内の配管またはカラムの詰まり等の問題が発生することがあり、そのつど質量分析計の後段流路から配管またカラムを取り外し、再接続や交換調整を行っている。装置を構成している配管、カラムの内径は２０μｍ〜３００μｍであり、再接続することでデッドボリュームの構築や不純物の混入の原因となり分析精度が悪化することもある。
【０００６】
本発明の目的は、液体クロマトグラフィ装置において、分離カラムの不具合検出を容易にすることに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、分離カラムと、分離カラムに送液できるポンプと、ポンプによる送液の圧力を検出できるセンサーと、分離カラムの上流側に設けられ、廃液容器と連通可能な、上流側切り替えバルブと、分離カラムの下流流側に設けら、廃液容器と連通可能な、下流側切り替えバルブと、を備える液体クロマトグラフィ装置に関する。分離カラムの上流側及び下流側の切り替えバルブを廃液容器と連通するように切り替え、ポンプにより送液し、ポンプによる送液の圧力を検出することにより、分離カラムの不具合を検出できる。
【０００８】
好ましくは、上流側切り替えバルブ、下流側切り替えバルブ、ポンプ、及びセンサーを制御する制御機構を備える。
【０００９】
好ましくは、ポンプが洗浄液を送液でき、異常が検出された分離カラムに洗浄液を送液する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、分離カラムの異常を容易に検出できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、上記及びその他の本発明の新規な特徴と効果について説明する。尚、図面はもっぱら説明のためのものであって、権利範囲を減縮するものではない。
【実施例１】
【００１２】
本実施例では、２つの分離カラムの前後に廃液ボトル側に詰まり検知バルブを経由し廃液ボトルに分岐させる流路を構築する。問題が発生した際に自動的にバルブを廃液ボトル側に切替え、ポンプ内の圧力センサーの変動値から問題箇所を把握する。また、洗浄工程を実施し詰まりの解消を試みることでメンテナンスを行う。
【００１３】
図１は、簡易メンテナンス機能付き多次元液体クロマトグラフ質量分析装置の一例として２次元液体クロマトグラフィの概略図を示す。
【００１４】
本装置は、第１の分離カラムと、第１の分離カラムに送液できる第１のポンプと、第１のポンプによる送液の圧力を検出できる第１のセンサーと、第１の分離カラムの上流側に設けられ、廃液容器と連通可能な、第１の上流側切り替えバルブと、第１の分離カラムの下流流側に設けら、廃液容器と連通可能な、第１の下流側切り替えバルブと、第２の分離カラムと、第２の分離カラムに送液できる第１のポンプと、第２のポンプによる送液の圧力を検出できる第１のセンサーと、第２の分離カラムの上流側に設けられ、廃液容器と連通可能な、第２の上流側切り替えバルブと、第２の分離カラムの下流流側に設けら、廃液容器と連通可能な、第２の下流側切り替えバルブと、を含む。
【００１５】
より具体的には、装置構成は、前段分離カラム部Ａ，トラップカラム部Ｂ，後段分離カラム部Ｃから構成される。前段分離カラム部Ａは、溶離液１３と溶離液１４と溶離液１３，１４を送液する圧力センサー機能を有するポンプ１２とポンプ１２の後段に配置し試料を分離カラム１０に導入する試料導入装置１１と試料を分離する分離カラム１０から構成される。分離カラム１０は通常、陽イオン交換カラム (strong cation ion
chromatography column)が用いられる。溶離液１３は、分離カラム１０に用いるカラムの種類によって適宜選択されるが、本実施例では、０.１％ＨＣＯＯＨ（ｐＨ３.０）を用い、流量１０μＬ／min で送液を行った。溶離液１４はＣＨ3ＣＮ 溶液であり、配管の洗浄用に用いられる。試料導入装置１１は、ポンプ１２の後段と分離カラム１０の前段に位置し、シリンジで試料を流路内に導入することすることでポンプ１２からの溶出液ともに分離カラム１０に試料を導入できる。また、分離カラム１０の分離はイオン強度に応じて分離を行うが、イオン強度の異なる溶離液を試料導入装置のポートに設置し、試料を分離カラム１０に吸着させたのちに、順次導入しイオン交換分離を行った。本実施例では、試料に、ヒト血清(ＳＩＧＭＡ社、Ｈ１３８８)をMultiple Affinity Removal Column System (Agilent Technologies社、５１８５−５９８４)を用いて血清中から６種類の主要タンパク質を除去したのちに、還元アルキル化を行い、トリプシン消化を行った５mg／ｍＬ血清試料を用いて、１μＬ供試した。イオン強度の異なる溶離液は０.１％ ＨＣＯＯＨを含む０ｍＭ ＨＣＯＯＮＨ4，５０Ｍ ＨＣＯＯＮＨ4，１００ｍＭ ＨＣＯＯＮＨ4，１０００
ｍＭ ＨＣＯＯＮＨ4を試料導入装置１１のサンプルポートに設置し、２０μＬずつ導入した。イオン強度の異なる溶離液として、他に、ＣＨ3ＣＯＯＮＨ4等の不揮発性塩を含む溶離液を用いることも可能である。
【００１６】
トラップカラム部Ｂは溶離液７と溶離液８と溶離液７，８を送液する圧力センサー機能を有するポンプ９と分離カラム１０で分離した試料を濃縮するトラップカラム４とトラップカラム５と、トラップカラムの流路およびポンプ９からの流路とポンプ１２からの流路を切り替えることを可能にするバルブ３から構成される。分離カラム１０の前後には、詰まりが発生した場合に流路を切り替えることを可能にする詰まり検知バルブ１７と１８が設置されている。バルブ３と詰まり検知バルブ１７と詰まり検知バルブ１８は制御装置
２１で制御されており、バルブ３の切り替えるタイミングは、あらかじめ制御装置２１にプログラムを作成しておき、バルブ３を一定時間間隔で切り替えることにより、流路を分離カラム１０⇒トラップカラム４⇒廃液ボトル６から分離カラム１０⇒トラップカラム５⇒廃液ボトル６へ切替えることができる。このバルブ３の切替えにより、分離カラム１０から溶出した試料成分をトラップカラム４とトラップカラム５に一定時間間隔で濃縮することが可能となる。詰まり検知バルブ１８の切り替えは、装置内の配管またはカラムに詰まりが発生した場合に、制御装置２１からの制御により詰まり検知バルブ１８を切り替え、分離カラム１０⇒詰まり検知バルブ１８⇒バルブ３から分離カラム１０⇒詰まり検知バルブ１８⇒廃液ボトル１５へと流路の変更を行う。詰まりが発生したかどうかは、ポンプ１２の圧力センサーの値により判断し、あらかじめ制御装置２１に詰まりが発生した場合の圧力値を設定しておき、その値以上になると詰まりが発生したと判断する。この値は、測定に用いる分離カラム１０およびトラップカラム４、５の背圧値により適宜決定される。今回用いたＳＣＸカラム（Poly ＬＣ社製）とトラップカラム（京都モノテック社製）の流量１０μＬ／min での背圧値は合わせて９ＭＰａ程度であるため、詰まり発生したかどうかを判断するための圧力値は本実施例では１０ＭＰａ以上とした。ポンプ１２の圧力値が１０ＭＰａ以上を示した場合、装置内の流路またはカラム内に詰まりが発生したと判断し、バルブ１８の切り替えを行い、圧力値の変動幅を観察する。ポンプ１２の圧力値に変動がない場合は詰まり検知バルブ１８より前段が、圧力値が分離カラム２の背圧からトラップカラムの背圧を引いた値に変動した場合には詰まり検知バルブより後段に詰まり発生箇所が存在していることが分かる。圧力値に変動がない場合には、次に、制御装置２１の制御により自動的に詰まり検知バルブ１７が切り替えられ、試料導入装置１１⇒詰まり検知バルブ１７⇒分離カラム１０から試料導入装置１１⇒詰まり検知バルブ１７⇒廃液ボトル１５へと流路の変更を行う。ポンプ１２の圧力値に変動がない場合には、詰まり検知バルブ１７より前段に、圧力値が０〜０.５ Ｍｐａの値に変動した場合には、詰まり検知バルブ１７より後段に詰まり発生箇所が存在していることが分かる。図２に詰り検知バルブ１７と１８の制御機構による詰り箇所把握までのフローチャートを示す。
【００１７】
後段分離カラム部Ｃは、質量分析装置１と試料を分離する分離カラム２と分離カラム２の前後には、詰まりが発生した場合に流路を切り替えることを可能にする詰まり検知バルブ１９と２０から構成される。分離カラム２には、逆相カラムまたはモノリスカラムが用いられ、疎水性相互作用により分離が行われる。溶離液７と溶離液８の組成は、カラムの種類により適宜選択されるが、本実施例では、溶離液７に０.１％ ＨＣＯＯＨを含む２％ＣＨ3ＣＮ水溶液を溶離液８には０.１％ ＨＣＯＯＨを含む９８％ＣＨ3ＣＮ水溶液を用い、制御装置２１にあらかじめ設定したプログラムに従い溶離液７と溶離液８を混合し、流量２００ｎＬ／min で送液を行った。バルブ３と詰まり検知バルブ１９と詰まり検知バルブ２０は制御装置２１で制御されており、バルブ３の切り替えるタイミングは、あらかじめ制御装置２１にプログラムを作成しておき、バルブ３を一定時間間隔で切り替えることにより、流路をポンプ９⇒トラップカラム４⇒分離カラム２からポンプ９⇒トラップカラム５⇒分離カラム２へ切り替えることができる。このバルブ３の切り替えにタイミングを合わせて、溶離液７と溶離液８の混合を開始させ、ポンプ９からの送液により、トラップカラムへ濃縮した試料成分を溶出させ分離カラム２で分離することが可能である。詰まり検知バルブ２０の切り替えは、装置内の配管またはカラムに詰まりが発生した場合に、制御装置２１からの制御により詰まり検知バルブ２０を切り替え、分離カラム２⇒詰まり検知バルブ２０⇒質量分析装置１から分離カラム２⇒詰まり検知バルブ２０⇒廃液ボトル
１６へと流路の変更を行う。詰まりが発生したかどうかは、ポンプ９の圧力センサーの値により判断し、あらかじめ制御装置２１に詰まりが発生した場合の圧力値を設定しておき、その値以上になると詰まりが発生したと判断する。この値は、測定に用いる分離カラム２およびトラップカラム４、５の背圧値により適宜決定される。今回用いたモノリスカラム（ＧＬサイエンス社製）とトラップカラム（京都モノテック社製）流量２００ｎＬ／
min での背圧値は合わせて３ＭＰａ程度であるため、詰まりが発生したかどうかを判断するための圧力値は本実施例では５Ｍｐａ以上とした。ポンプ９の圧力値が５Ｍｐａ以上を示した場合、装置内の流路またはカラム内に詰まりが発生したと判断し、バルブ２０の切り替えを行い、圧力値の変動幅を観察する。ポンプ９の圧力値に変動がない場合は詰まり検知バルブ２０より前段が、５Ｍｐａ以下に変動した場合には詰まり検知バルブ２０より後段に詰まり発生箇所が存在していることが分かる。圧力値に変動がない場合には、次に、制御装置２１の制御により自動的に詰まり検知バルブ１９が切り替えられ、バルブ３⇒詰まり検知バルブ１９⇒分離カラム２からバルブ３⇒詰まり検知バルブ１９⇒廃液ボトル１６へと流路の変更を行う。ポンプ１２の圧力値に変動がない場合には、詰まり検知バルブ１９より前段に、圧力値がトラップカラムの背圧値に変動した場合には詰まり検知バルブ１９より後段に詰まり発生箇所が存在していることが分かる。図３に詰り検知バルブ
１９と２０の制御機構による詰り箇所把握までのフローチャートを示す。
【００１８】
このように詰まり発生箇所が把握された後、制御装置２１の制御により、詰まりを取り除くために洗浄が行われる。詰まり検知バルブ１７，１８の切り替えにより（１）詰まり検知バルブ１７から前段、（２）詰まり検知バルブ１７から詰まり検知バルブ１８の間、（３）詰まり検知バルブ１８より後段のいずれかにに詰まり発生箇所が存在することが確認される。詰まり発生箇所が把握された後に、制御装置２１の制御により、自動的にバルブ３と詰まり検知バルブ１７、１８、１９が切り替えられ、ポンプ１２またはポンプ９から詰まり発生箇所に適した洗浄液が送液され洗浄が行われる。（１）の場合は、詰まり検知バルブ１７が試料導入装置１１⇒詰まり検知バルブ１７⇒廃液ボトル１５の流路に切り替えられ、溶離液１４がポンプ１２により１００％の組成で送液し、一定時間洗浄が行われる。（２）の場合は、詰まり検知バルブ１８が分離カラム１０⇒詰まり検知バルブ１８⇒廃液ボトル１５の流路に切り替えられ、試料導入装置１１のサンプルポートに設置した１０００ｍＭ ＨＣＯＯＮＨ4がポンプ１２により溶離液１３が送液される流路に導入され、分離カラム１０の洗浄が一定時間行われる。（３）の場合は、詰まり検知バルブ１９をバルブ３⇒詰まり検知バルブ１９⇒廃液ボトル１６の流路に切り替え、バルブ３も切り替えることによりポンプ１２⇒トラップカラム４⇒廃液ボトル６からポンプ９⇒トラップカラム４⇒廃液ボトル１６またはポンプ１２⇒トラップカラム５⇒廃液ボトル６からポンプ９⇒トラップカラム５⇒廃液ボトル１６へと流路を切り替え、溶離液８を１００％の組成でポンプ９により送液され、洗浄が一定時間行われる。ある一定時間洗浄を行い、ポンプ１２の圧力値が１０Ｍｐａ以下に戻った場合にメンテナンスが完了する。洗浄により効果が見られない場合は、配管およびカラムの交換を実施し、メンテナンスを行う。
【００１９】
同様に、詰まり検知バルブ１９，２０の切り替えにより（４）詰まり検知バルブ１９から前段、（５）詰まり検知バルブ１９から詰まり検知バルブ２０の間、（６）詰まり検知バルブ２０より後段のいずれかにに詰まり発生箇所が存在することが確認される。詰まり発生箇所が把握された後に、制御装置２１の制御により、自動的にバルブ３と詰まり検知バルブ１９，２０が切り替えられ、ポンプ９から詰まり発生箇所に適した洗浄液が送液され洗浄が行われる。（４）の場合は、詰まり検知バルブ１９がバルブ３⇒詰まり検知バルブ１９⇒廃液ボトル１６の流路に切り替えられ、溶離液８がポンプ９により１００％の組成で送液し、トラップカラム４またはトラップカラム５の洗浄が行われる。（５）の場合は、詰まり検知バルブ２０が分離カラム２⇒詰まり検知バルブ２０⇒廃液ボトル１６の流路に切り替えられ、溶離液８がポンプ９により１００％の組成で送液し、分離カラム２の洗浄が行われる。（６）の場合は、洗浄を行うと質量分析装置に不純物が導入されることになり、測定精度の劣化をまねく恐れがあるため洗浄は行わず、詰まり検知バルブ２０と質量分析装置１の間の配管を交換する。ある一定時間洗浄を行い、ポンプ９の５Ｍｐａ以下に戻った場合にメンテナンスが完了する。洗浄により効果が見られない場合は、手動で配管およびカラムの交換を実施し、メンテナンスを行う。
【００２０】
配管や詰まりが発生した場合、通常は装置の最前段、図１では質量分析装置に近い側から順次配管やカラム等の脱着や交換を行い、ポンプ圧力値の変動幅から詰まり箇所を特定し、装置の復旧を行っていた。この方法であるとメンテナンスに手間がかかるのと同時に、配管やカラムの脱着の際に、デッドボリュームの形成や不純物の混入が生じる恐れがあった。そのため、測定の精度やスループットまたは再現性に多大な影響を及ぼしていた。しかし、本実施例を用いることで、的確に詰まり箇所を容易に発見することが可能であり、洗浄工程を実施し詰まりの解消を試みることで、カラムや配管の脱着と交換が最小限にとどめることができるため、デッドボリュームの形成や不純物の混入を最小限におさえることが可能となる。そのため、短時間で装置のメンテナンスが完了し、測定の精度や再現性を確保しつつ、安定したデータの取得が可能となる。
【００２１】
本実施例により、自動的に詰まり箇所を把握し、洗浄工程で詰りを取り除くことが可能である。洗浄工程において詰りを取り除けなかった場合でも、詰まり箇所を把握できているので測定者による配管およびカラム交換や再接続の煩雑な作業をできるだけ減らし、簡易な装置メンテナンスを可能にする。また、デッドボリュームの構築や不純物の混入の原因となり分析精度が悪化する恐れを防ぎ、信頼性の高いデータが得られることを可能にする。
【実施例２】
【００２２】
実施例２は、実施例１のように複数のカラムを用いることなく、１本のカラムにより試料の分離を行う液体クロマトグラフィ質量分析計に関するものである。本実施例の主な用途は、疾患プロテオーム分野において疾患に関連したマーカーや代謝関連マーカー等のバイオマーカー探索研究に用いられており、試料として血液，血清などの血液由来成分、尿，腹水，唾液，涙液，脳骨髄液，胸水，細胞組織からのタンパク質抽出液を用いる。
【００２３】
以下、本実施例について、図４を用いて説明する。本装置は、溶離液４０５と溶離液
４０６、溶離液４０５と溶離液４０６を送液する圧力センサー機能を有するポンプ４０４と試料をポンプ４０４の送液により導入する試料導入装置４０３と分離カラム４０２および質量分析装置４０１から構成される。また、分離カラム４０２の前後には、制御装置
４１０の制御により流路の変更を行うことが可能である詰まり検知バルブ４０７と詰まり検知バルブ４０８が配置され、廃液ボトル４０９へ流路を変更することができる。本実施例では、疎水性相互作用により分離を行い、１０ＭＰａ以上の高い背圧のもとでも使用可能なカラムを用いている。溶離液４０５には０.１％ ＨＣＯＯＨを含む２％ＣＨ3ＣＮ 水溶液を溶離液６には０.１％ ＨＣＯＯＨを含む９８％ＣＨ3ＣＮ 水溶液を用い、制御装置
４１０にあらかじめ設定したプログラムに従い溶離液４０５と溶離液４０６を混合し、流量５μＬ／min で送液を行った。詰まりが発生したかどうかは、ポンプ４０４の圧力センサーの値により判断し、あらかじめ制御装置４１０に詰まりが発生した場合の圧力値を設定しておき、その値以上になると詰まりが発生したと判断する。この値は分離カラム402の背圧値により適宜決定されるが、今回分離カラム４０２には逆相カラム（資生堂製）を用い、流量５μＬ／ｍｉｎでの背圧値は合わせて３ＭＰａ程度であるため、詰まりが発生したかどうかを判断するための圧力値は本実施例では５Ｍｐａ以上とした。ポンプ４０４の圧力値が５Ｍｐａ以上を示した場合、装置内の流路またはカラム内に詰まりが発生したと判断し、バルブ４０８の切り替えを行い、分離カラム４０２⇒詰まり検知バルブ４０８⇒質量分析計４０１から分離カラム４０２⇒詰まり検知バルブ４０８⇒廃液ボトル４０９へ流路の切替えを行い、圧力値の変動幅を観察する。ポンプ４０４の圧力値に変動がない場合は詰まり検知バルブ４０８より前段が、５Ｍｐａ以下に変動した場合には詰まり検知バルブ４０８より後段に詰まり発生箇所が存在していることが分かる。圧力値に変動がない場合には、次に、制御装置４１０の制御により自動的に詰まり検知バルブ４０７が切り替えられ、試料導入装置４０３⇒詰まり検知バルブ４０７⇒分離カラム４０２から、試料導入装置４０３⇒詰まり検知バルブ４０７⇒廃液ボトル４０９へと流路の変更を行う。ポンプ４０４の圧力値に変動がない場合には、詰まり検知バルブ４０７より前段に、０〜
０.５ＭＰａ の背圧値に変動した場合には詰まり検知バルブ４０７より後段に詰まり発生箇所が存在していることが分かる。
【００２４】
このように詰まり発生箇所が把握された後、制御装置４１０の制御により、詰まりを取り除くために洗浄が行われる。詰まり検知バルブ４０７，４０８の切り替えにより（１）詰まり検知バルブ４０７から前段、(２)詰まり検知バルブ７から詰まり検知バルブ４０８の間、（３）詰まり検知バルブ４０８より後段のいずれかにに詰まり発生箇所が存在することが確認される。詰まり発生箇所が把握された後に、制御装置４１０の制御により、自動的に詰まり検知バルブ４０７，４０８が切り替えられ、ポンプ４０４から詰まり発生箇所に適した洗浄液が送液され洗浄が行われる。（１）の場合は、詰まり検知バルブ７が試料導入装置４０３⇒詰まり検知バルブ４０７⇒廃液ボトル４０９の流路に切り替えられ、溶離液４０６がポンプ４０４により１００％の組成で送液し、一定時間洗浄が行われる。（２）の場合は、詰まり検知バルブ８が分離カラム２⇒詰まり検知バルブ４０８⇒廃液ボトル４０９の流路に切り替えられ、溶離液４０６がポンプ４０４により１００％の組成で送液し、一定時間洗浄が行われる。(３)の場合は、詰まり検知バルブ４０７を試料導入装置４０３⇒詰まり検知バルブ４０７⇒廃液ボトル４０９と流路を切り替え、溶離液４０６を１００％の組成でポンプ４０４により送液され、洗浄が一定時間行われる。ある一定時間洗浄を行い、ポンプ４０４の圧力値が５Ｍｐａ以下に戻った場合にメンテナンスが完了する。洗浄により効果が見られない場合は、手動で配管およびカラムの交換を実施し、メンテナンスを行う。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】実施例１に係る多次元液体クロマトグラフ装置の概略図。
【図２】検知バルブ１７と１８の制御機構による詰り箇所把握までのフローチャト。
【図３】検知バルブ１９と２０の制御機構による詰り箇所把握までのフローチャト。
【図４】実施例２に係る液体液体クロマトグラフ装置の概略図。
【符号の説明】
【００２６】
１，４０１ 質量分析装置
２，１０,４０２ 分離カラム
３ バルブ
４，５ トラップカラム
６，１５，１６，４０９ 廃液ボトル
７，８，１３，１４，４０５，４０６ 溶離液
９，１２，４０４ ポンプ
１１，４０３ 試料導入装置
１７，１８，１９，２０，４０７，４０８ 詰り検知バルブ
２１，４１０ 制御装置
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の分離カラムと、
第１の分離カラムに送液できる第１のポンプと、
第１のポンプによる送液の圧力を検出できる第１のセンサーと、
第１の分離カラムの上流側に設けられ、廃液容器と連通可能な、第１の上流側切り替えバルブと、
第１の分離カラムの下流流側に設けら、廃液容器と連通可能な、第１の下流側切り替えバルブと、
第２の分離カラムと、
第２の分離カラムに送液できる第１のポンプと、
第２のポンプによる送液の圧力を検出できる第１のセンサーと、
第２の分離カラムの上流側に設けられ、廃液容器と連通可能な、第２の上流側切り替えバルブと、
第２の分離カラムの下流流側に設けら、廃液容器と連通可能な、第２の下流側切り替えバルブと、を備える多次元液体クロマトグラフィ装置。
【請求項２】
請求項１記載の液体クロマトグラフィ装置であって、
第１の上流側切り替えバルブ、第１の下流側切り替えバルブ、第１のポンプ、第１のセンサー、第２の上流側切り替えバルブ、第２の下流側切り替えバルブ、第２のポンプ、及び第２のセンサーを制御する制御機構を備え、
第１の分離カラム、及び第２の分離カラムの異常を自動検出することを特徴とする液体クロマトグラフィ装置。
【請求項３】
請求項２記載の液体クロマトグラフィ装置であって、
第１のポンプ、及び第２のポンプが洗浄液を送液でき、
異常が検出された分離カラムに洗浄液を送液することを特徴とする液体クロマトグラフィ装置。
【請求項４】
請求項１記載の液体クロマトグラフィ装置であって、
第２の下流側切り替えバルブの下流側が、質量分析装置と連通していることを特徴とする液体クロマトグラフィ装置。
【請求項５】
分離カラムと、
分離カラムに送液できるポンプと、
ポンプによる送液の圧力を検出できるセンサーと、
分離カラムの上流側に設けられ、廃液容器と連通可能な、上流側切り替えバルブと、
分離カラムの下流流側に設けら、廃液容器と連通可能な、下流側切り替えバルブと、を備える液体クロマトグラフィ装置。
【請求項１】
第１の分離カラムと、
第１の分離カラムに送液できる第１のポンプと、
第１のポンプによる送液の圧力を検出できる第１のセンサーと、
第１の分離カラムの上流側に設けられ、廃液容器と連通可能な、第１の上流側切り替えバルブと、
第１の分離カラムの下流流側に設けら、廃液容器と連通可能な、第１の下流側切り替えバルブと、
第２の分離カラムと、
第２の分離カラムに送液できる第１のポンプと、
第２のポンプによる送液の圧力を検出できる第１のセンサーと、
第２の分離カラムの上流側に設けられ、廃液容器と連通可能な、第２の上流側切り替えバルブと、
第２の分離カラムの下流流側に設けら、廃液容器と連通可能な、第２の下流側切り替えバルブと、を備える多次元液体クロマトグラフィ装置。
【請求項２】
請求項１記載の液体クロマトグラフィ装置であって、
第１の上流側切り替えバルブ、第１の下流側切り替えバルブ、第１のポンプ、第１のセンサー、第２の上流側切り替えバルブ、第２の下流側切り替えバルブ、第２のポンプ、及び第２のセンサーを制御する制御機構を備え、
第１の分離カラム、及び第２の分離カラムの異常を自動検出することを特徴とする液体クロマトグラフィ装置。
【請求項３】
請求項２記載の液体クロマトグラフィ装置であって、
第１のポンプ、及び第２のポンプが洗浄液を送液でき、
異常が検出された分離カラムに洗浄液を送液することを特徴とする液体クロマトグラフィ装置。
【請求項４】
請求項１記載の液体クロマトグラフィ装置であって、
第２の下流側切り替えバルブの下流側が、質量分析装置と連通していることを特徴とする液体クロマトグラフィ装置。
【請求項５】
分離カラムと、
分離カラムに送液できるポンプと、
ポンプによる送液の圧力を検出できるセンサーと、
分離カラムの上流側に設けられ、廃液容器と連通可能な、上流側切り替えバルブと、
分離カラムの下流流側に設けら、廃液容器と連通可能な、下流側切り替えバルブと、を備える液体クロマトグラフィ装置。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２００８−２０９３３４（Ｐ２００８−２０９３３４Ａ）
【公開日】平成２０年９月１１日（２００８．９．１１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−４８３７０（Ｐ２００７−４８３７０）
【出願日】平成１９年２月２８日（２００７．２．２８）
【出願人】（５０１３８７８３９）株式会社日立ハイテクノロジーズ (4,325)
【公開日】平成２０年９月１１日（２００８．９．１１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年２月２８日（２００７．２．２８）
【出願人】（５０１３８７８３９）株式会社日立ハイテクノロジーズ (4,325)
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