減少した試料マトリックス効果を有するアッセイ方法及び装置
本発明は、試料マトリックス効果を減少させることにより環境試料において実施される免疫アッセイの感度を増大させるための方法、キット及び装置を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、参照により全体が組み込まれる、２００４年１２月２０日に出願された米国仮特許出願第６０／６３６，８６７号の優先権を主張するものである。
【０００２】
本発明は、試料中の抗原又はハプテンなどの分析対象物の検出のためのアッセイを含むアッセイ方法、装置及びキットに関する。分析対象物は、例えば、生物学的又は空気試料中のものを供給することができる。
【背景技術】
【０００３】
医療、環境、生体防御及び食品安全性分野において、免疫診断検査により、社会に対して有害である疾患及び汚染物質の簡単な評価と迅速な特定を行うことができる。遅延性疾患及び／又は地方病の発生を防止するためには、臨床検体、土壌若しくは水試料又は食品中の抗原などの分析対象物の定性的、半定量的及び定量的検出を可能にする簡単な確認アッセイが必要である。さらに、近年、国家テロの脅威が認識されているため、多くの診断検査が、確立された研究施設以外の衛星施設で実施することができるように設計されている。
【０００４】
従来の免疫アッセイを用いた検出システムは、検出可能な事象を発生させるために複数のアッセイ試薬を逐次的に加えることが必要である抗体−抗原相互作用に依拠している。一般的に明確な同定に対する信頼度は高いが、これらのアッセイ及び試薬調製手順は、試料マトリックスによる影響を受けることがある。例えば、試料中の成分が、アッセイ試薬が適切に機能する能力を妨害する可能性がある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
したがって、非技術要員又は非専門要員が実施することができる、減少した試料マトリックス効果を有する、信頼度が高く、使用しやすい診断アッセイのための新規の方法及び装置を開発する必要性が依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
いくつかの実施形態において、本発明は、分析対象物を含むと推定される試料を分析する方法であって、
（ａ）試料をフィルターによりろ過するステップと、
（ｂ）前記分析対象物に対して特異的な標識結合パートナーを加えるステップと、
（ｃ）（ｉ）８以上のｐＨ若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び
（ｉｉ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液
から選択される抽出緩衝液を加えるステップと、
（ｄ）得られる混合物中の標識結合パートナーを測定するステップと
を含み、ステップ（ａ）からステップ（ｃ）までをどのような順序で実施してもよく、ステップ（ｄ）は最後に実施する、上記方法を提供する。
【０００７】
特定の実施形態において、本発明は、分析対象物を含むと推定される試料を分析する方法であって、
（ａ）試料をフィルターによりろ過するステップと、
（ｂ）前記分析対象物に対して特異的な第１の標識結合パートナーを加えるステップと、
（ｃ）前記分析対象物に対して特異的な第２の結合パートナーを加えるステップと、
（ｄ）（ｉ）８以上のｐＨ若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び
（ｉｉ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液
から選択される抽出緩衝液を加えるステップと、
（ｅ）第１の結合パートナー、分析対象物、及び第２の結合パートナーの間で形成される複合体中の標識された第１の結合パートナーの量を測定するステップと
を含み、ステップ（ａ）からステップ（ｄ）までをどのような順序で実施してもよく、ステップ（ｅ）は最後に実施する、上記方法を提供する。
【０００８】
種々の実施形態において、本発明は、分析対象物を含むと推定される試料を分析する方法であって、
（ａ）試料をフィルターによりろ過するステップと、
（ｂ）分析対象物の標識類似体を加えるステップと、
（ｃ）前記分析対象物に対して特異的な結合パートナーを加えるステップと、
（ｄ）（ｉ）８以上のｐＨ若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び
（ｉｉ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液
から選択される抽出緩衝液を加えるステップと、
（ｅ）結合パートナーに結合した分析対象物の標識類似体の量を測定するステップと
を含み、ステップ（ａ）からステップ（ｄ）までをどのような順序で実施してもよく、ステップ（ｅ）は最後に実施する、上記方法を提供する。
【０００９】
特定の実施形態において、本発明は、フィルター、並びに（ａ）８以上若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び（ｂ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液から選択される少なくとも１つの試薬を含む、上記の方法を実施するためのキットを提供する。
【００１０】
いくつかの実施形態において、本発明は、１つ又は複数の分析対象物を含むと推定される試料の分析用の装置であって、
（ａ）サンプリング器具からフィルターに向かって流れるように方向が定められた第１の一方向弁を介してサンプリング器具に流体的に接続されているフィルター、
（ｂ）第１の一方向弁とフィルターとの間の箇所に流体的に接続され、フィルターから廃棄物管路に向かって流れるように方向が定められた第２の一方向弁に流体的に接続されている廃棄物管路、
（ｃ）液体の流れをフィルター中に不可逆的に駆動させることができるように配置されているポンプ、
（ｄ）前記１つ又は複数の分析対象物に対して特異的な標識結合パートナーを収容する結合試薬容器、
（ｅ）前記フィルターからのろ液を前記結合試薬容器に導入する手段、及び
（ｆ）標識結合パートナーを測定する手段
を含む、上記装置を提供する。
【００１１】
種々の実施形態において、本発明は、１つ又は複数の分析対象物を含むと推定される試料の分析用の装置であって、
（ａ）サンプリング器具に流体的に接続されているフィルター、
（ｂ）液体の流れをフィルター中に駆動させることができるように配置されているポンプ、
（ｃ）前記１つ又は複数の分析対象物に対して特異的な標識結合パートナーを収容する結合試薬容器、
（ｄ）前記フィルターからのろ液を前記結合試薬容器に導入する手段、及び
（ｅ）標識結合パートナーを測定する手段
を含む、上記装置を提供する。
【００１２】
特定の実施形態において、本発明は、
（ａ）フィルターにより下部容器から流体的に封じられている上部容器、及び
（ｂ）上部容器を経ることなく、下部容器に出入りすることができる開口部
を含む、試料ろ過器具を提供する。
【００１３】
前述の一般的説明及び以下の詳細な説明は、例示的かつ説明的なものであるにすぎず、請求の範囲に記載されている発明を制限するものではないことを理解すべきである。項の見出しは、読者に対する案内として設けられており、いずれにしても本発明を限定するものでないことは理解されよう。
【００１４】
添付図面は、本発明の実施形態を説明するものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本明細書には、試料マトリックス効果を減少させることにより、分析対象物を検出及び／又は定量する際に用いる方法、キット及び装置を開示する。
【００１６】
Ｉ．定義
「乾燥組成物」という用語は、組成物がその総重量に対して５重量％以下の含水率を有することを意味する。
【００１７】
「結合パートナー」という用語は、分析対象物に特異的に結合することができる１つ又は複数の物質を意味する。一般的に、特異的結合は、比較的高い親和力と比較的低ないし中容量を特徴とする。一般的に、親和定数Ｋａが少なくとも１０６Ｍ−１、少なくとも１０７Ｍ−１、少なくとも１０８Ｍ−１又は少なくとも１０９Ｍ−１であるとき、結合は特異的とみなされる。より高い親和定数は、より大きい親和力、したがって、一般的により大きい特異性を示す。例えば、抗体は一般的に、１０６Ｍ−１〜１０９Ｍ−１の範囲又はより高い親和定数で抗原に結合する。非特異的結合は通常、低親和力と中ないし高容量を有する。非特異的結合は通常、親和定数が１０６Ｍ−１を下回るときに発生する。
【００１８】
「抗体」という用語は、抗原結合性を保持する１つ又は複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むタンパク質を意味する。いくつかの実施形態において、抗体は、免疫グロブリン又はその一部であり、起源、生産の方法又は他の特性にかかわりなく抗原結合部位を含むあらゆるポリペプチド（糖部分（単及び多糖）による修飾をさらに伴う又は伴わない）を含む。この用語は、例えば、ポリクローナル、モノクローナル、単一特異的、多特異的、ヒト化、単鎖、キメラ、合成、組換え、ハイブリッド、変異及びＣＤＲグラフト化抗体並びに融合タンパク質を含む。抗体の一部は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｃｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖ、Ｆｄ、ＶＨ及びＶＬを含むが、これらに限定されない、抗原に結合することができるフラグメントを含むことができる。
【００１９】
「標識結合パートナー」という用語は、検出可能なシグナルを発生、修正又は調節することができる原子、部分、官能基又は分子を含む標識を含む結合パートナーを意味する。
【００２０】
「分析対象物」という用語は、試料中に認められるウイルス、原始細菌、植物、動物、真菌及び／又は細菌の細胞若しくは細胞成分を含む、あらゆる分子若しくは分子の凝集体を意味する。試料中に認められるあらゆる分子の断片も「分析対象物」という用語の範囲に含まれる。この定義は、この定義の範囲内に示されている例のいずれかのうちの１つ又は複数のものを含む複合体をさらに含む。
【００２１】
「分析対象物の類似体」という用語は、結合パートナーへの結合に対して問題の分析対象物と競合する物質を指す。分析対象物の類似体は、試料中に存在する問題の分析対象物と特定の結合パートナーへの結合に対して競合させるために加えられる既知量の問題の分析対象物自体であってよい。分析対象物の類似体の例としては、ＨＩＶ逆転写酵素に結合するヌクレオチドの類似体であるアジドチミジン（ＡＺＴ）、アミノアシルｔＲＮＡの末端アミノアシルアデノシン部分の類似体であるピューロマイシン、テトラヒドロ葉酸塩の類似体であるメトトレキセートなどがある。他の類似体は、問題の分析対象物の誘導体であってよい。本明細書で用いられている「分析対象物の標識類似体」という用語は、標識結合パートナーと同様に定義される。
【００２２】
「陽性対照」という用語は、既知量の分析対象物又は分析対象物の類似体を指す。陽性対照は、適切な機器の動作及び／又は試料の測定を評価するために用いることができる。陽性対照は、機器を校正するために用いることができる。陽性対照は、試験試料のシグナルレベルを対照標準のシグナルレベルと比較するための対照標準として用いることができる。陽性対照はまた、シグナルレベルを分析対象物濃度に関連づける数学関数とともに使用することができ、そのうちの１つの使用は、試料のシグナル測定値を分析対象物濃度に変換することである。「陽性対照」という用語は、陽性対照及び陽性キャリブレータの一般的な定義を含む。
【００２３】
「アッセイ陽性対照」という用語は、（ａ）試料の測定の成功を確認するため、又は（ｂ）試料の実測シグナルを供試分析対象物の濃度に変換するために用いる組成物を指す。一般的に、アッセイ陽性対照は、陽性対照と、分析対象物を含む試料の測定を模擬するために結合アッセイに用いる試薬を含む。
【００２４】
「試料」という用語は、分析対象物を含む可能性がある液体を含む。
【００２５】
「液体」という用語は、液体のより伝統的な定義に加えて、粒子が地球の重力に起因する１ｍｍ／ｓ以下の沈降速度を有するコロイド、懸濁液、スラリー及び液体中粒子の分散系を含む。
【００２６】
「抽出緩衝液」という用語は、分析対象物又は分析対象物の類似体と試料マトリックスとの非特異的結合を減少させるために用いる組成物を指す。
【００２７】
「流体的に接続された」という用語は、接続によって流体が構成要素の間を通ることが可能になる、２つの構成要素の間の接続を指す。
【００２８】
「試料マトリックス」という用語は、分析対象物を除く試料中のすべてのものを指す。「環境マトリックス」という用語は、試料が採取される環境由来の試料マトリックスの成分を指す。例えば、試料マトリックスは、試料環境中に通常認められない検出アッセイを実施するために用いる試薬を含むことがあり得る。環境マトリックスという用語はまた、アッセイの開発のため、模擬のため、又は他の目的のために試料中の分析対象物はスパイクされていなかったが、試料を採取することを意図する環境由来の試料マトリックスの成分を指す。
【００２９】
本明細書で用いるように、「支持体」という用語は、当技術分野で知られている結合パートナーを固定化するための手段のいずれかを意味する。支持体の例は、膜、ビーズ、粒子、電極又は容器の壁若しくは表面を含むが、これらに限定されない。
【００３０】
「磁化可能ビーズ」という用語は、磁性、常磁性及び超常磁性ビーズを含む。
【００３１】
ＩＩ．方法
特定の実施形態において、本発明は、試料中の分析対象物の検出又はその量の定量のための結合アッセイに用いられ、測定に対する試料マトリックスの影響が最小限である方法に関する。
【００３２】
Ａ．分析対象物の検出に対する試料マトリックスの影響
試料マトリックスは、試料中に認められる分析対象物の測定に多くの点で影響を及ぼす可能性がある。試料マトリックスがアッセイに影響を及ぼすメカニズムに関する特定の理論により拘束されることを意図することなく、例えば、マトリックスは、試料の粘度を変化させることにより、或いは、さもなければ試料中の有効拡散速度を変化させることにより、分析対象物と結合パートナーとの間の結合の速度を減少させることができる。他のシナリオにおいて、マトリックスは、結合パートナーに非特異的に結合して、結合パートナー上の利用可能な結合部位の数を減少させることもできる。マトリックスは、複数の分析対象物又は複数の結合パートナーと非特異的に結合して、より緩慢に拡散するより大きい集塊を形成することもできる。マトリックスは、結合パートナーが位置する支持体に付着又は支持体上に沈降し、それにより、分析対象物との相互作用に利用可能な結合パートナーの数を減少させることができる。試料中で移動することができる支持体（例えば、ビーズ）の場合、マトリックスは、複数の支持体に付着して、より緩慢に拡散及び／又は試料の底部に沈降する集塊を形成することができる。マトリックスは、平衡状態で結合する分析対象物の量に影響を及ぼすことができる。例えば、高濃度のマトリックスは、平衡状態にある結合パートナーの結合部位のゼロでない一部を占有することができる。酵素を用いて基質を生成物に変換させる場合、マトリックスは生成物の生成速度を減少させる可能性がある。
【００３３】
マトリックスは、標識結合パートナーの測定に影響を及ぼすことがあり得る。測定法が質量の変化である場合、マトリックスは、例えば、結合パートナー又は分析対象物に結合して、質量を効果的に増加させることがあり得る。測定が凝集に敏感である場合、マトリックスは、分析対象物の非存在下で凝集を引き起こす可能性がある。測定がルミネセンスである場合、マトリックスは、光を散乱させ、吸収し、又は別の仕方で光が検出器に到達することを妨げる可能性がある。測定がルミネセンスである場合、マトリックスは、励起状態から別の非発光経路を発生させる可能性がある。測定法が蛍光である場合、ルミネセンスメカニズムに加えて、マトリックスは、励起光が意図する蛍光化合物により吸収されることを妨げるか、又は自家蛍光を発する可能性がある。測定法が化学ルミネセンスである場合、ルミネセンスメカニズムに加えて、マトリックスは、前のパラグラフで述べたメカニズムにより励起状態の生成の速度を減少させる可能性があり、分析対照物と結合パートナーとの相互作用を妨げることができるときには、これが、発光をもたらす、いずれか２つの化合物の相互作用を妨げることがある。測定法が電気化学ルミネセンスである場合、化学ルミネセンスメカニズムに加えて、マトリックスは、例えば、前のパラグラフで述べた変速メカニズムにより、電極から電気化学ルミネセンス化合物又は電気化学ルミネセンス共反応物へのエネルギー輸送の速度を減少させることができる。
【００３４】
Ｂ．試料マトリックス効果の減少
検出工程に対するマトリックスの影響は、２つの方法のいずれかにより減少させることができる。第１に、検出に対する分析対象物の有効性は、分析対象物のマトリックス成分との結合／会合を妨げるように溶液の特性を変化させることによって増加させることができる。第２に、検出工程を妨害するマトリックスの成分は、検出工程から除くことができる。この目的を達成するためにいくつかの方法を用いることができる。
【００３５】
問題の分析対象物は、妨害マトリックスといくつかの物理的性質が異なることがあり得る。これらは、サイズ、密度、溶解度、表面電荷の分布又は表面部分の差異を含むが、これらに限定されない。サイズの差に基づく分離としては、ろ過器具の使用又はサイズ排除カラム通過などがある。密度差に基づく分離は、遠心分離機の使用又は重力沈降を含むが、これらに限定されない。溶解度に基づく分離は、２相分配又は不混和性相中への溶媒抽出を含むが、これらに限定されない。表面電荷の差に基づく分離は、イオン交換クロマトグラフィー又は凝析及び沈澱を含むが、これらに限定されない。これらの分離法の多くは、主として実験室環境において実際的なものである。実験室以外の環境で使用しやすい方法は、ろ過及び抽出溶液を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本発明は、妨害マトリックス粒子及び／又はろ過器具から分析対象物を放出させるための抽出緩衝液を用いて、試料からこれらのマトリックス粒子を除去する。
【００３６】
１．ろ過
ろ過は、検出工程からマトリックスの妨害成分を除去する１つの方法である。このアプローチでは、フィルターのバリアを用いて検出工程を妨害するような微粒子成分を保持する。マトリックスの微粒子成分は、標識結合パートナー、分析対象物の標識類似体又は検出表面上のビーズの捕捉又は析出を必要とするいくつかの検出方法を妨害することがある。さらに、これらの成分を除去することにより、分析対象物に結合することができる表面の量が減少する。いくつかの実施形態において、微粒子成分を捕捉したフィルターを処理して、分析対象物を検出工程に対して放出することができる。
【００３７】
ろ過は、所定のサイズより大きい粒子を排除する物理的バリアを設けることにより溶液から成分を主として分離する。ろ過技術にはこれらの種類バリアを作る多種の方法が存在し、各方法で基本材料の機能が操作される。例えば、粒径が５０μｍを超える極めて大きい粒子を捕捉するために用いることができる織りスクリーンを製造するのに、金属ワイヤーが一般的に用いられている。より小さい浮遊粒子を捕捉するために、より小さい直径の金属ワイヤースクリーンを用いることができるが、それらは、気流に対する抵抗（圧力降下）のため限界を有する。ポリマーを用いた膜は、一般的に溶液からより小さい粒子を除去するために用いられる。例えば、ポリマーナイロンは、１０μｍの孔径定格から０．１μｍの孔径定格までの範囲の膜を作製するための転相注型法に用いられる。他のポリマーを用いた膜（例えば、ポリエーテルスルホン、ニトロセルロース又は酢酸セルロース）は、溶媒蒸発注型法により作製される。ろ過媒体は一般的に、問題の流体がフィルターバリアを制御された挙動で通過することを可能にする保持器具に組み込まれている。いくつかの実施形態において、本発明は、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）ポリマーを用いたろ過媒体を含むフィルターを使用する。特定の実施形態において、ＰＥＳフィルターは、（ａ）注射器に取付けることができる、（ｂ）ロボットオートメーションを容易にするために設計された１回使用使い捨て器具の一部、又は（ｃ）複数回使用使い捨て器具の一部であるプラスチックハウジングに収容されている。
【００３８】
ろ過は主として、サイズにより溶液から成分を分離する。ほとんどのフィルターにおいて、フィルターを通しての経路は、直線的な穴ではなく、ねじれた経路である。これにより、フィルターの孔径の記述は操作上のものとなり、孔径定格という用語が生ずる。フィルターの孔径定格を決定するにあたって、既知の容積（又は量）の既知の粒径（顕微鏡観察、光散乱又はインピーダンス測定により知られる）の粒子でフィルターをチャレンジする。次いで、フィルターの下流の粒子の量を測定し、粒子の複数の粒径にわたってフィルターの上流の粒子の量と比較する。粒子の所定の粒径範囲について下流の粒子と上流の粒子の比が１以下に有意に低下した場合、フィルターは該粒径範囲について除去能力を有すると言われる。これらの比は、一般的に除去の対数単位で記述される。例えば、５μｍと格付けされるフィルターは、一般的に５μｍより大きい下流粒子のレベルを０．９０の比（９０％除去又は１ｌｏｇ除去）から０．９９９の比（９９．９％除去又は３ｌｏｇ除去）低下させる。フィルターの孔径は多くの要因に基づいて選択される。孔径は、分析対象物を通過させるために十分に大きくなければならない。例えば、炭疸菌芽胞はサイズが約１μｍである。孔径は、試料マトリックスからの妨害成分を阻止するために十分に小さくなければならない。孔径はフィルターを通過する流体の流速にも影響を及ぼし、孔径が小さいほど、生ずる流動抵抗が一般的に大きくなる。
【００３９】
いくつかの実施形態において、本発明は、５μｍの孔径定格を有するろ過器具を用いて試料マトリックスの妨害成分を除去することができる。いくつかの実施形態において、本発明は、０．１、０．２、０．５、１、２、３、４、７、１０、１５、２０、５０又は１００μｍの孔径定格を有するろ過器具を用いて試料マトリックスの妨害成分を除去することができる。いくつかの実施形態において、フィルターは、試料マトリックスの妨害成分を除去するために約１００μｍ以下及び約１０μｍ以上の孔径定格を有する。いくつかの実施形態において、フィルターは、試料マトリックスの妨害成分を除去するために約１０μｍ以下及び約１μｍ以上の孔径定格を有する。いくつかの実施形態において、フィルターは、試料マトリックスの妨害成分を除去するために約１μｍ以下及び約０．１μｍ以上の孔径定格を有する。いくつかの実施形態において、フィルターは、試料マトリックスの妨害成分を除去するために約０．１μｍ以下及び約０．０２μｍ以上の孔径定格を有する。
【００４０】
一般的に、フィルターの孔径定格より小さい粒子は、ろ過媒体に吸着されない限り、妨害を受けずにフィルターを通過する。非特異的吸着を防ぐためには、ろ過媒体を、表面修飾し、例えば、フィルター表面をより濡れ性、すなわち、より親水性にすることにより、この種の相互作用を減少させることができる。分析対象物の非特異的結合（回収の損失をもたらす）は疎水性相互作用、主としてファンデルワールス相互作用に起因すると一般的に考えられている。例えば、ろ過媒体ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）をグリセロールのような親水性化合物で被覆することにより、水が表面を濡らす能力が増大し、分析対象物の損失が減少する。
【００４１】
いくつかの表面処理はより永久的なものであり、表面グラフトが考慮される。ろ過媒体の永久的表面修飾は、当業者により知られている多くの方法により達成することができる。これらの方法は、フリーラジカル重合、イオンビーム開始重合、電離放射線誘導重合、プラズマエッチング及び化学カップリングを含むが、これらに限定されない。これらの方法は、水和を促進し、疎水性相互作用を減少させるかなりの数のヒドロキシル基を有する分子を組み込む。表面修飾の特定の方法は、フィルター器具に用いられるろ材の化学的性質に主として依存する。例えば、電離放射線は、ナイロンろ過媒体を親水性にし、タンパク質結合性を低くするためにナイロンろ過媒体上へのヒドロキシ−プロピル−アクリレート部分のグラフティングを誘導するために用いることができる。いくつかの実施形態において、本発明は、表面を濡れやすくし、分析対象物の損失を減少させるためにグリセロールで被覆したポリエーテルスルホンポリマーを含むろ過媒体を使用する。
【００４２】
逆に、フィルターは、妨害成分に特異的に結合する、表面に付着した化学部分を有していてよい。ろ過媒体は、結合反応（例えば、免疫反応）又は検出方法を妨害することが知られているクラスの分子と高親和性相互作用を有する分子に共有結合することができる。例えば、赤血球上の表面基に結合するレクチン、又は検出法を妨害する可能性がある金属イオンに結合するエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）をろ過媒体に結合させることができる。
【００４３】
本発明の様々な実施形態において、ろ過器具は、試料中の分析対象物の数が変化し、各分析対象物が固有の調製要件を有する適用例における試料を調製するために用いることができる。一部の分析対象物は、大きく、小孔径フィルターにより除去されるであろう。例えば、細菌の一部である分析対象物は、滅菌フィルターの孔径定格（０．２μｍ）を有するフィルターにより除去されるが、５μｍの孔径定格を有するフィルターを用いたろ過の後には試料マトリックス中に残るであろう。逆に、トキシンのような小分子の検出は、１μｍ以上の孔径定格を有するフィルターにより大粒子を除去することによって向上させることができる。したがって、本発明の特定の実施形態は、適切なろ過器具の後に特定の分析対象物の試料を採取することができる、次第により小さい粒子を除去するための直列のいくつかのろ過器具を使用する。
【００４４】
本発明によれば、試料を１回又は複数回ろ過することができる。いくつかの適用例において、試料の微粒子負荷が重く、保持粒子の層が非常に厚いので、ろ過器具を１回のみ用いることができる。他の試料において、粒子負荷が低いことがあり、そのため、流速があまりにも遅くなるか、又は圧力降下があまりにも高くなって実際的でなくなる前に複数の試料をろ過器具に通すことができる。これらの場合、ろ過器具は、必要及びサンプリング頻度の要件を満たすある定期的な間隔で交換することができる。例えば、粒子負荷が低く、陽性検出事象の頻度も低い場合、ろ過器具は、月１回、週１回、毎日、又は陽性検出事象の発生後より速やかに交換することができる。フィルター交換間隔は、例えば、ろ過した試料の数により、又はフィルターにわたる圧力降下を測定することにより、若しくはフィルターを通しての流速を測定することにより、設定することができる。
【００４５】
２．流体の移動
本発明によれば、複数のメカニズムを用いて試料流体をフィルターを通して駆動することができる。流体は、重力流により、或いは、正のゲージ圧をフィルターの上流に加え、かつ／又は負のゲージ圧（真空）をフィルターの下流に加える、圧力により、フィルターを通して移動させることができる。
【００４６】
本発明は、粒子保持層を逆流（逆洗）法により減少させることができる場合には、フィルターを試料の調製のために複数回使用することができることを企図する。これらの実施形態において、流体の逆流を用いてろ過器具の表面から微粒子を除去し、分析のためにろ過済み試料を採取した後にそれらの進路を廃棄物収集システムへと変えることができる。
【００４７】
３．緩衝液
妨害マトリックスを含む試料からの分析対象物の回収及び検出は、適切な抽出緩衝液を用いて増大させることができる。いくつかの実施形態において、本発明は、例えば、ホウ酸ナトリウム、塩化ナトリウム及び非イオン性界面活性剤を含む抽出緩衝液を用いて、分析対象物の回収を増大させることができる。代替抽出緩衝液は、酢酸ナトリウム、マレイン酸ナトリウム、シュウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、リン酸ナトリウム並びにホウ酸、塩化物、酢酸、マレイン酸、シュウ酸、クエン酸、硫酸及びリン酸のカリウム及びリチウム塩を含む。
【００４８】
問題の分析対象物の一部は、低親和性非特異的相互作用により試料マトリックスと結合させることができる。これらの種類の相互作用は、例えば、イオン及び疎水結合を含んでいてよい。いくつかの実施形態において、マトリックスのイオン表面電荷を有する可動性溶液イオン対がマトリックス粒子表面からの分析対象物の変位を促進するように、抽出緩衝液の総イオン強度を増加させることによって、分析対象物とマトリックス粒子とのイオン相互作用を低下させることができる。様々な実施形態において、非特異的イオン相互作用の低下時にイオン強度を増大させるために、溶液のｐＨを中性（すなわち、ｐＨ７）から高いｐＨ又は低いｐＨに変化させることができる。ほとんどの環境マトリックス粒子は優勢な負の表面電荷を有するので、本発明の特定の実施形態は、抽出緩衝液中のイオンがマトリックス粒子から分析対象物を変位させることができるように、高いｐＨを用いて表面基をイオン化することができる。いくつかの実施形態において、本発明は、８．５のｐＨを有し、少なくとも０．５モルの塩化ナトリウムを含む抽出緩衝液を使用する。いくつかの実施形態において、本発明は、８以上のｐＨを有する抽出緩衝液を使用する。
【００４９】
イオン相互作用に加えて、疎水性相互作用は、分析対象物の回収率を減少させることができる。これらの種類の相互作用は、ファンデルワールス型の相互作用と記載されており、水及び水素結合の複雑な性質から生ずることがあり得る。イオン性分子は、水分子に、水分子を組織化し、水分子の運動を減少させる傾向がある、荷電基の周りの水素結合ケージ構造（包接化合物）を形成させることができる。極性基を有する分子は、水の水素と極性基との間の水素結合構造を形成することによって水に溶解することができる。イオン電荷も極性基も有さない分子の部分は、疎水性とみなすことができ、これらの部分は、水和事象からの排除により共に追いやられる傾向がある。疎水性部分を有する分子は、ファンデルワールス相互作用に共にたずさわらされる可能性がある。このようにして、水の全体の構造を安定化させることができる。
【００５０】
妨害マトリックス粒子との低親和性非特異的相互作用による分析対象物の回収を増加させるために、本発明の特定の実施形態は、水の組織化力の測定される崩壊を引き起こす物質を用いることができる。例えば、疎水性相互作用は、界面活性剤／洗剤及びカオトロピックイオン並びに電荷を有さないカオトロピック分子を用いて減少させることができる。本明細書で用いるように、界面活性剤と洗剤は同義語である。カオトロピック分子（イオンとして荷電又は非荷電）は、水の組織化力及び構造を崩壊させる傾向がある。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０（モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン））を用いて、洗剤分子の疎水性部分をマトリックス及び分析対象物の疎水性部分に結合させることにより分析対象物の回収を促進させることができる。非荷電カオトロピック分子（例えば、尿素）は、水の水素結合構造を崩壊させる十分に高い濃度の溶液を形成することができる。水の水素結合構造の崩壊を促進するために、様々な実施形態もホウ酸塩、塩酸グアニジン、チオシアン酸グアニジン又は他のカオトロピックイオンを用いることができる。ホウ酸イオンは、小さく、ほとんどのイオン以上に水分子ケージ構造を妨げる。リン酸及び硫酸イオンも本発明において用いることができる。本発明のいくつかの実施形態は、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｌｉ＋、Ｎａ＋又はＫ＋などの１つ又は複数の陽イオンを使用する。当業者は、２価又は３価陽イオンを用いるとき、ある種のマトリックスとのさらなる好ましくない反応が起こる可能性があることを理解するであろう。当業者は、カオトロピックイオンの高い濃度において、タンパク質分子の２次及び３次構造が分解し、免疫アッセイで用いる高親和性相互作用が破壊されることを理解するであろう。いくつかの実施形態において、抽出緩衝液は、０．１Ｍホウ酸ナトリウム（ｐＨ８．５）、０．５Ｍ塩化ナトリウム及び０．３％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を含む。
【００５１】
様々な実施形態において、抽出緩衝液は、表１に示すような様々な容量オスモル濃度範囲を有することができる。これらの範囲は代表的なものにすぎず、当業者は本発明に適用可能なさらなる範囲を認識することができる。
【００５２】
【表１】
【００５３】
表１に示す代表的な抽出緩衝液は、２〜１１、３〜１０、４〜９．５、５〜８、６〜８、７〜１０、８〜１０、８．５〜９．７及び／又は６．５〜７．５の範囲内のいずれかのｐＨを任意に有していてよい。
【００５４】
様々な実施形態において、抽出緩衝液は、表２に示すような様々なｐＨ及び容量オスモル濃度の組合せを有していてよい。これらの組合せは代表的なものにすぎず、当業者は本発明に適用可能なさらなる組合せを認識することができる。
【００５５】
【表２−１】
【表２−２】
【００５６】
表１及び２に示す代表的な抽出緩衝液は、場合によって界面活性剤を含む。選択される特定の界面活性剤は、分析対象物及び試料マトリックスの化学的特性を反映する。タンパク質性結合パートナーについては、界面活性剤は、非イオン型であってよく、或いはいくつかの実施形態において、両性イオン型であってよい。核酸結合パートナーについては、界面活性剤は、非イオン、両性イオン、陰イオン又は陽イオン型であってよい。
【００５７】
適切な非イオン性界面活性剤は、アルキルグリコシド、アルキルチオグリコシド、アルキルマルトシド、グルカミド、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマー、ポリオキシエチレンポリオキシアルキレンエーテル、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル、グリセロール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルアミン、アルキルジメチルホスフィンオキシド、アルキルジメチルアミンオキシド及びアルキロールアミドを含むが、これらに限定されない、いくつかのカテゴリーから選択することができる。適切な両性イオン界面活性剤は、アルキルベタイン、アルキルスルホベタイン、アルキルアミノプロパンスルホン酸塩、（アルキルジメチルアミノ）プロパンスルホン酸塩、アリールアミノプロパンスルホン酸塩、アルキルホスホコリン、アミノプロピルアミンアルキルカルボン酸塩、アルキルジメチルグリシン、アルキルホスホコリン、アルキルイミドジプロピオネートアミンオキシド及びポリアルキルジメチルアミンプロピルアミンカルボン酸塩を含むが、これらに限定されない、いくつかのカテゴリーから選択することができる。適切な陰イオン界面活性剤は、脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、胆汁酸、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキルナフタレンスルホン酸塩、ジアルキルスルホコハク酸塩、アルキルジフェニレンジスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテルホスホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ナフタレン硫酸ホルムアルデヒド縮合物、アルキルアミノプロピオン酸塩及びポリカルボン酸塩を含むが、これらに限定されない、いくつかのカテゴリーから選択することができる。適切な陽イオン界面活性剤は、アルキルアミン塩、アルキルアルキル第四級アンモニウム塩及びアルキルアリール第四級アンモニウム塩を含むが、これらに限定されない、いくつかのカテゴリーから選択することができる。
【００５８】
いくつかの実施形態において、抽出緩衝液は、ブロッキング剤を含んでいてよい。あらゆる従来のブロッキング剤を用いることができる。適切なブロッキング剤は、例えば、米国特許第５，８０７，７５２号、同第５，２０２，２６７号、同第５，３９９，５００号、同第５，１０２，７８８号、同第４，９３１，３８５号、同第５，０１７，５５９号、同第４，８１８，６８６号、同第４，６２２，２９３号、同第４，４６８，４６９号並びにカナダ特許第１，３４０，３２０号、国際公開第９７／０５４８５号、欧州特許公開Ａ１第５６６，２０５号、欧州特許公開Ａ２第４４４，６４９号及び欧州特許公開Ａ１第１６５，６６９号に記載されている。代表的なブロッキング剤としては、動物血清（例えば、ヤギ血清）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ゼラチン、ビオチン及び乳汁タンパク質（「ｂｌｏｔｔｏ」）などの血清及び血清アルブミンなどがある。いくつかの実施形態において、本発明は、１〜２５ｇ／Ｌ ＢＳＡ、１〜１０ｇ／Ｌ ＢＳＡ、１〜５ｇ／Ｌ ＢＳＡ又は無ＢＳＡを含む抽出緩衝液を使用する。いくつかの実施形態において、本発明は、１．６ｇ／Ｌ ＢＳＡ、０．２５Ｍ ＨＢＯ３、０．５Ｍ ＮａＣｌ及び０．３％Ｔｗｅｅｎ−２０を含み９．２のｐＨの抽出緩衝液を使用する。いくつかの実施形態において、本発明は、ＢＳＡを含まず、０．２５Ｍ ＨＢＯ３、０．５Ｍ ＮａＣｌ及び０．３％Ｔｗｅｅｎ−２０を含み９．２のｐＨの抽出緩衝液を使用する。
【００５９】
Ｃ．アッセイの方式
本発明は、あらゆる結合アッセイ技術とともに用いることができる。例えば、Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、第３版、Ｗｉｌｄ編、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ（２００５年）並びにＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、Ｐｒｉｃｅ及びＮｅｗｍａｎ編、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ（１９９７年）を参照のこと。便宜のために、いくつかの結合アッセイ技術の手短な説明を以下に示す。
【００６０】
結合アッセイ技術は、多くの観点で細分することができる。例えば、ある種のアッセイはシグナルの検出のために標識結合パートナーを必要とするが、他のアッセイは分析対象物と結合パートナーとの相互作用に基づいてシグナルを発生する、例えば、質量変化を測定する。ある種のアッセイは、標識結合パートナーを使用しないが、その代わりとして、分析対象物の標識類似体を使用する。
【００６１】
ある種のアッセイは、両結合パートナーが同じ分析対象物に特異的に結合するサンドイッチアッセイを構築するために２つの結合パートナーを使用する。いくつかの実施形態において、２つの結合パートナーは、分析対象物の異なる部分、例えば、異なるエピトープに結合する。
【００６２】
ある種のアッセイは、分析対象物に結合した標識結合パートナーと分析対象物に結合しなかった標識結合パートナーとを区別するために、分離ステップを必要とする。凝集アッセイ、及び標識結合パートナー上の標識が分析対象物の結合により直接的又は間接的に修飾、活性化又は不活性化されるアッセイなどのある種のアッセイは、分離ステップを必要としない。ある種のアッセイは、結合パートナーが付着する支持体を必要とする。支持体、分離、サンドイッチアッセイは、支持体に標識を結合させるために、２つの結合パートナー（第１の結合パートナーは支持体に付着するが、第２の結合パートナーは標識結合パートナーである）を使用し、その後、標識を測定する前に支持体を洗浄して遊離の標識結合パートナーを除去する。
【００６３】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、標識結合パートナーを分析対象物に結合させることにより、分析対象物を検出する。いくつかの実施形態において、本発明は、分析対象物を含むと推定される試料を分析する方法であって、
（ａ）試料をフィルターによりろ過するステップと、
（ｂ）前記分析対象物に対して特異的な標識結合パートナーを加えるステップと、
（ｃ）（ｉ）８以上のｐＨ若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び
（ｉｉ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液
から選択される抽出緩衝液を加えるステップと、
（ｄ）得られる混合物中の標識結合パートナーを測定するステップと
を含み、ステップ（ａ）からステップ（ｃ）までをどのような順序で実施してもよく、ステップ（ｄ）は最後に実施する、上記方法を提供する。
【００６４】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、１つが標識されている２つの結合パートナーの間に分析対象物をサンドイッチすることにより、分析対象物を検出する。特定の実施形態において、本発明は、分析対象物を含むと推定される試料を分析する方法であって、
（ａ）試料をフィルターによりろ過するステップと、
（ｂ）前記分析対象物に対して特異的な第１の標識結合パートナーを加えるステップと、
（ｃ）前記分析対象物に対して特異的な第２の結合パートナーを加えるステップと、
（ｄ）（ｉ）８以上のｐＨ若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び
（ｉｉ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液
から選択される抽出緩衝液を加えるステップと、
（ｅ）第１の結合パートナー、分析対象物、及び第２の結合パートナーの間で形成される複合体中の標識された第１の結合パートナーの量を測定するステップと
を含み、ステップ（ａ）からステップ（ｄ）までをどのような順序で実施してもよく、ステップ（ｅ）は最後に実施する、上記方法を提供する。
【００６５】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、結合パートナーへの結合を競合する標識分析対象物類似体を用いることにより、分析対象物を検出する。様々な実施形態において、分析対象物を含むと推定される試料を分析する方法であって、
（ａ）試料をフィルターによりろ過するステップと、
（ｂ）分析対象物の標識類似体を加えるステップと、
（ｃ）前記分析対象物に対して特異的な結合パートナーを加えるステップと、
（ｄ）（ｉ）８以上のｐＨ若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び
（ｉｉ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液
から選択される抽出緩衝液を加えるステップと、
（ｅ）結合パートナーに結合した分析対象物の標識類似体の量を測定するステップと
を含み、ステップ（ａ）からステップ（ｄ）までをどのような順序で実施してもよく、ステップ（ｅ）は最後に実施する、上記方法を提供する。
【００６６】
本発明の方法は、試料マトリックス効果を低下させるために、様々なステップで修正することができる。例えば、いくつかの実施形態において、検出すべき分析対象物の結合パートナーが試料に接触する前に、試料マトリックス中の成分を除去することができる。いくつかの実施形態において、方法の添加ステップを同時に実施してもよい。いくつかの実施形態において、方法の添加ステップを順次実施してもよい。いくつかの実施形態において、抽出緩衝液を試料に加え、試料をろ過し、複数の結合パートナーを用いる場合にはそのうちの１つが標識されている、結合パートナーを加え、標識結合パートナーを検出する。いくつかの実施形態において、試料をろ過し、抽出緩衝液をろ過済み試料に加え、複数の結合パートナーを用いる場合にはそのうちの１つが標識されている、結合パートナーを加え、標識結合パートナーを検出する。いくつかの実施形態において、抽出緩衝液を試料に加え、試料をろ過し、結合パートナーを加え、分析対象物の標識類似体を加え、標識類似体を検出する。いくつかの実施形態において、試料をろ過し、抽出緩衝液をろ過済み試料に加え、結合パートナーを加え、分析対象物の標識類似体を加え、標識類似体を検出する。いくつかの実施形態において、試料をろ過し、複数の結合パートナーを用いる場合にはそのうちの１つが標識されている、結合パートナーを加え、抽出緩衝液を加え、標識結合パートナーを検出する。いくつかの実施形態において、試料をろ過し、結合パートナーを加え、分析対象物の標識類似体を加え、抽出緩衝液を加え、標識類似体を検出する。他の実施形態は、標識結合パートナーが試料に接触する前に試料マトリックス中の成分を除去する方法を含む。いくつかの実施形態は、試料が、電気化学ルミネセンスを開始することができる電極に接触する前に試料マトリックス中の成分を除去する方法を含む。
【００６７】
いくつかの実施形態は、検出すべき分析対象物の結合パートナーと前記分析対象物との間の平衡化又は反応速度を妨害する試料マトリックスの能力を減弱させる方法を含む。いくつかの実施形態は、標識結合パートナーと検出すべき分析対象物との間の平衡化又は反応速度を妨害する試料マトリックスの能力を減弱させる方法を含む。
【００６８】
いくつかの実施形態は、標識結合パートナー及び／又は分析対象物の標識類似体上の標識の検出に対して影響を及ぼす試料マトリックスの能力を減弱させる方法を含む。
【００６９】
いくつかの実施形態は、電気化学ルミネセンス測定に影響を及ぼす試料マトリックスの能力を減弱させる方法及び装置を含む。いくつかの実施形態は、空気サンプリングシステムを用いて結合アッセイを実施することができる装置に接続するための方法及び装置を含む。
【００７０】
いくつかの実施形態において、複数の分析対象物を同時にアッセイする。他の実施形態において、複数の分析対象物を順次アッセイする。
【００７１】
Ｄ．試料及び分析対象物
試料は、分析すべき源から抜き取ることができる。例えば、試料は、血液、血漿、血清、乳汁、精液、羊水、脳脊髄液、痰、涙液、汗、尿若しくは唾液などの体液又は他の生物学的流体から生じてよい。或いは、試料は、湖又は川などの水源から得た水の試料であってよい。試料は、水、微生物学的増殖培地又は水性緩衝液などの液体に試料を溶解又は懸濁することにより調製してもよい。試料は、土壌、タルク、ベビーパウダー、食品（例えば、果実、野菜及び／又は肉）及び／又はヒト、有蹄類、家禽及び／又は他の動物の糞であってよい。これら及び他の種類の試料は、Ｓｅｗａｒｄ Ｓｔｏｍａｃｈｅｒ（登録商標）装置、音波処理、混合などのマトリックスから分析対象物を除去するための機械的処理、或いは固体を液体マトリックス中に移す他のあらゆる物理的方法を用いて処理することができる。試料源は表面スワブであってよく、例えば、表面をスワブで拭き取り、スワブを液体で洗浄し、それにより、表面から分析対象物を液体中に移すことができる。スワブとしては、スポンジ、ペーパータオル、綿及び他の吸収材を先端に取付けたアプリケータなどがある。試料源は、空気に由来するものであってよく、例えば、空気をろ過し、フィルターを液体により洗浄し、それにより、分析対象物を空気から液体中に移す。空気サンプリング器具は、空気を直接液体中に吹き込んで、分析対象物を移すこともできる。例えば、空気は、郵便物処理機械の近くの郵便室内から採取することができる。
【００７２】
本発明の方法は、試料中のいくつかの種類の分析対象物を検出することができる。結合パートナーが特異的に結合することができる分析対象物の例は、細菌毒素、ウイルス、細菌、タンパク質、ホルモン、ＤＮＡ、ＲＮＡ、薬物、抗生物質、神経毒素及びその代謝物を含むが、これらに限定されない。分析対象物としては、試料中に認められる分子の断片などもある。いくつかの実施形態において、分析対象物は、有機化合物、有機金属化合物又は無機化合物であってよい。分析対象物は、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、ベクター又はオリゴヌクレオチド）、タンパク質（例えば、抗体、抗原、受容体、受容体リガンド又はペプチド）、リポタンパク質、糖タンパク質、リボ若しくはデオキシリボ核タンパク質、ペプチド、多糖、リポ多糖、脂質、脂肪酸、ビタミン、アミノ酸、薬剤化合物（例えば、精神安定薬、バルビツレート、アヘン剤、アルコール、三環系抗うつ薬、ベンゾジアゼピン、抗ウイルス薬、抗真菌薬、抗生物質、ステロイド、強心配糖体又は前出のもののいずれかの代謝物）、ホルモン、成長因子、酵素、補酵素、アポ酵素、ハプテン、レクチン、基質、細胞代謝物、細胞成分又はオルガネラ（例えば、膜、細胞壁、リボソーム、染色体、ミトコンドリア、細胞骨格成分）であってよい。他の実施形態において、分析対象物は、毒素、農薬、除草剤又は環境汚染物質である。
【００７３】
分析対象物のさらなる例は、アエロモナス・ヒドロフィア（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉａ）などのアエロモナス種、炭疸菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）のボツリヌス菌毒素産生種、ウシ流産菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ）、マルタ熱菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ）、ブタ流産菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｓｕｉｓ）、鼻疽菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｍａｌｌｅｉ（以前はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｍａｌｌｅｉ））、キャンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）、オウム病クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｓｉｔｔａｃｉ）、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、ウェルシュ（Ｗｅｌｃｈ）菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、コクシジオイデス・ポサダシイ（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｐｏｓａｄａｓｉｉ）、カウドリア・ルミナンチウム（Ｃｏｗｄｒｉａ ｒｕｍｉｎａｎｔｉｕｍ）（心水病）、コクシエラ・バーネッティイ（Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｂｕｒｎｅｔｉｉ）、大腸菌−腸管毒産生性（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ−ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ）（ＥＴＥＣ）、大腸菌−腸疾患発現性（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ−ｅｎｔｅｒｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ）（ＥＰＥＣ）、大腸菌−Ｏ１５７：Ｈ７腸管出血性（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ−Ｏ１５７：Ｈ７ ｅｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ）（ＥＨＥＣ）などの腸内毒性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）群（ＥＥＣ群）、エーリッヒア・チャフェンシス（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｃｈａｆｆｅｅｎｉｓｉｓ）などのエーリッヒア（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ）種、野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）、レジュネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、リベロバクター・アフリカヌス（Ｌｉｂｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｆｒｉｃａｎｕｓ）、リベロバクター・アジアティカス（Ｌｉｂｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｓｉａｔｉｃｕｓ）、リステリア・モノシトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、シトロバクター（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）、アエロバクター（Ａｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、プロビデンシア（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ）及びセラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）などの種々雑多な腸内細菌、ウシ型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ）、ヒト型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコプラズマ・カプリコラム（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｒｉｃｏｌｕｍ）、牛肺疫菌標準亜種（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｍｙｃｏｉｄｅｓ ｓｓｐ ｍｙｃｏｉｄｅｓ）、ペロノスクレロスポラ・フィリッピンシス（Ｐｅｒｏｎｏｓｃｌｅｒｏｓｐｏｒａ ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｎｓｉｓ）、ファコプソラ・パチリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）、プレシオモナス・シゲロイデス（Ｐｌｅｓｉｏｍｏｎａｓ ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ）、青枯病菌（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）品種３、次亜種２、発疹チフスリケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ）、斑点熱リケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ）、サルモネラ種（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、シュレロフトラ・レイシアエ・バル・ゼアエ（Ｓｃｈｌｅｒｏｐｈｔｈｏｒａ ｒａｙｓｓｉａｅ ｖａｒ ｚｅａｅ）、赤痢菌種（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ジャガイモ癌腫病菌（Ｓｙｎｃｈｙｔｒｉｕｍ ｅｎｄｏｂｉｏｔｉｃｕｍ）、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）ｎｏｎ−Ｏ１、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）Ｏ１、ビブリオ・パラヘモリティカス（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）及び他のビブリオ菌、ビブリオ・バルニフィカス（Ｖｉｂｒｉｏ ｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ）、キサントモナス・オリザエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ）、柑橘類ピアス氏病菌（Ｘｙｌｅｌｌａ ｆａｓｔｉｄｉｏｓａ）（柑橘類斑入病菌株）、エルジニア・エンテロコリティカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）及び偽結核エルジニア菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）及びペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ）などの細菌病原体を含む。
【００７４】
分析対象物のさらなる例は、アフリカウマ病ウイルス、アフリカ豚コレラウイルス、アカバネウイルス、鳥類インフルエンザウイルス（高度に病原性）、ブハンジャ（Ｂｈａｎｊａ）ウイルス、ブルータングウイルス（エキゾチック）、ラクダ痘ウイルス、オナガザルヘルペスヘルペスウイルス１、チクングニヤウイルス、古典的ブタ熱ウイルス、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、クリミア−コンゴ出血熱ウイルス、デング熱ウイルス、デュグベ（Ｄｕｇｂｅ）ウイルス、エボラウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、マリーバレー脳炎及びベネズエラウマ脳炎ウイルスなどの脳炎ウイルス、ウマ麻疹ウイルス、フレキサル（Ｆｌｅｘａｌ）ウイルス、口蹄疫ウイルス、ゲルミストン（Ｇｅｒｍｉｓｔｏｎ）ウイルス、ヤギ痘ウイルス、ハンターン又は他のハンタウイルス、ヘンドラウイルス、イシククルウイルス、コウタンゴ（Ｋｏｕｔａｎｇｏ）ウイルス、ラッサ熱ウイルス、跳躍病ウイルス、ランピースキン病ウイルス、リンパ球脈絡髄膜炎ウイルス、悪性カタル熱ウイルス（エキゾチック）、マルブルクウイルス、マヤロウイルス、メナングルウイルス、サル痘ウイルス、ムカンボ（Ｍｕｃａｍｂｏ）ウイルス、ニューカッスル病ウイルス（ＶＶＮＤ）、ニパーウイルス、ノーウォークウイルス群、オロプーシェウイルス、オルンゴ（Ｏｒｕｎｇｏ）ウイルス、小反芻獣疫（Ｐｅｓｔｅ Ｄｅｓ Ｐｅｔｉｔｓ Ｒｕｍｉｎａｎｔｓ）ウイルス、ピリーウイルス、プラムポックスポティウイルス、ポリオウイルス、ポテトウイルス、ポーワッサンウイルス、リフトバレー熱ウイルス、牛疫ウイルス、ロタウイルス、セムリキ森林ウイルス、ヒツジ痘ウイルス、Ｆｌｅｘａｌ、Ｇｕａｎａｒｉｔｏ、Ｊｕｎｉｎ、Ｍａｃｈｕｐｏ及びＳａｂｉａなどの南アフリカ出血熱ウイルス、スポンドウェニ（Ｓｐｏｎｄｗｅｎｉ）ウイルス、ブタ水疱病ウイルス、中央ヨーロッパダニ媒介脳炎、極東ダニ媒介脳炎、ロシア春及び夏脳炎、キャサヌール森林病並びにオムスク出血熱などのダニ媒介脳炎複合（フラビ）ウイルス、大痘瘡ウイルス（痘瘡ウイルス）、小痘瘡ウイルス（アラストリム）、水疱性口内炎ウイルス（エキゾチック）、ウェセルスブロンウイルス、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、ＳＶ４０、ＪＣ及びＢＫなどのポリオーマウイルス属、並びに乳頭腫ウイルス属（例えば、ＨＰＶ）を含むパポーバウイルス科のウイルス、パルボウイルス（例えば、Ｂ１９及びＲＡ−１）、並びにライノウイルス及びコクサッキーＢを含むピコルナウイリス科のウイルスなどのウイルスを含む。標的核酸配列を含むことができる他のウイルスは、アデノウイルス、アレナウイルス、アルテリウイルス、アストロウイルス、バキュロウイルス、バンドナウイルス、バルナウイルス、ビルナウイルス、ブロモウイルス、ブニヤウイルス、カリチウイルス、カピロウイルス、カーラウイルス、カリモウイルス、サーコウイルス、クロステロウイルス、コモウイルス、コロナウイルス、コルチコウイルス、シストウイルス、デルタウイルス、ジアントウイルス、エナモウイルス、フィロウイルス、フラビウイルス、フロウイルス、フセロウイルス、ジェミニウイルス、ヘパドナウイルス、ヘルペスウイルス、ホルデイウイルス、ハイポウイルス、イダエオウイルス、イノウイルス、イリドウイルス、レビウイルス、リポスリクスウイルス、ルテオウイルス、マクロモウイルス、マラフィウイルス、ミクロウイルス、ミオウイルス、ネクロウイルス、ノダウイルス、オルトミクソウイルス、パラミクソウイルス、パルティティウイルス、パルボウイルス、フィコドナウイルス、プラズマウイルス、ポドウイルス、ポリドナウイルス、ポテクスウイルス、ポティウイルス、ポックスウイルス、レオウイルス、レトロウイルス、ラブドウイルス、リジディオウイルス、セキウイルス、シフォウイルス、ソベモウイルス、テクティウイルス、テヌイウイルス、テトラウイルス、トバモウイルス、トブラウイルス、トガウイルス、トンブスウイルス、トティウイルス、ティモウイルス及びアンブラウイルスから選択される科に属する上で言及しなかった種を含む。
【００７５】
分析対象物のさらなる例は、アブリン、アフラトキシン、ボツリヌス神経毒素、シグアテラ毒素、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）イプシロン毒素、コノトキシン、ジアセトキシスカーペノール、ジフテリア毒素、グラヤノトキシン、アマニティンス、ギロミトリン及びオレラニンなどのマッシュルーム毒素、フィトヘマグルチニン、ピロリジジンアルカロイド、リシン、サキシトキシン、サキシトキシン、アカダ酸、ディノフィシス毒素、ペクトノトキシン、イエッソトキシン、ブレベトキシン及びドモ酸などの貝毒素（麻痺性、下痢、神経毒性又は健忘）、志賀毒素、志賀毒素様リボソーム不活性化タンパク質、ヘビ毒素、ブドウ球菌腸毒素、Ｔ−２毒素及びテトロドトキシンなどの毒素を含む。
【００７６】
分析対象物のさらなる例は、スクラピー、クールー、クロイツフェルト−ヤコブ病（ＣＪＤ）、変異型クロイツフェルト−ヤコブ病（ｖＣＪＤ）、慢性消耗病、致命的家族性不眠症（ＦＦＩ）、ゲルストマン−シュトロイスラー−シャインカー症候群（ＧＳＳ）及び牛海綿状脳症（ＢＳＥ又は狂牛病）を含む伝達性牛海綿状脳症の病原体のようなプリオンタンパク質を含む。
【００７７】
分析対象物のさらなる例は、アカントアメーバ及び他の自由生活アメーバ、アニサキス種並びに他の関連蠕虫回虫（Ａｓｃａｒｉｓ ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ）及びヒト鞭虫（Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｔｒｉｃｈｉｕｔａ）、クリプトスポリジウム・パーバム、サイクロスポーラカエタネンシス（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒａ ｃａｙｅｔａｎｅｎｓｉｓ）、裂頭条虫（Ｄｉｐｈｙｌｌｏｂｏｔｈｒｉｕｍ）種、赤痢アメーバ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、腎虫（Ｅｕｓｔｒｏｎｇｙｌｉｄｅｓ）種、ランブル鞭毛虫（Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ）、住血吸虫（Ｎａｎｏｐｈｙｅｔｕｓ）種、住血吸虫（Ｓｈｉｓｔｏｓｏｍａ）種、トキソプラズマ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）及び旋毛虫属（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ）などの寄生原虫及び蠕虫を含む。
【００７８】
分析対象物のさらなる例は、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、ブラストミセス・デルマチチジス（Ｂａｌｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、コクシジオイデス・ポサダシイイ（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｐｏｓａｄａｓｉｉ）、クリプトコックス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、メイズラスト（Ｍａｉｚｅ ｒｕｓｔ）、イネいもち病、イネ褐斑病、ライブラスト（Ｒｙｅ ｂｌａｓｔ）、スポロトリクス・シェンキイ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ）及びコムギカビなどの真菌を含む。
【００７９】
分析対象物のさらなる例は、
（１）米国保健福祉省（ＨＨＳ）及び米国農務省（ＵＳＤＡ）選択因子（７ＣＦＲ§３３１、９Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１２１及び４２Ｃ．Ｆ．Ｒ．§７３）のいずれかの感染性及び／又は複製コンピテント形をエンコードすることができる核酸（合成又は天然由来、連続的又は断片化、宿主染色体中又は発現ベクター中）、
（２）核酸が以下の場合に、列挙した毒素のいずれかの機能型をエンコードする核酸（合成又は天然由来）
（ｉ）ベクター中又は宿主染色体中に存在し、
（ｉｉ）ｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏで発現することができる、
及び／又は
（３）細胞調節事象に関与する以下の核酸−タンパク質複合体
（ｉ）ウイルス複製の前駆体であるウイルス核酸−タンパク質複合体、
（ｉｉ）ＲＮＡ構造を修飾し、タンパク質転写事象を調節するＲＮＡ−タンパク質複合体、
（ｉｉｉ）ホルモン又は二次細胞シグナリング分子により調節される核酸−タンパク質複合体、
（４）遺伝的に修飾されたウイルス、古細菌、細菌、真菌
などの遺伝子因子、組換え核酸及び組換え生物を含む。
【００８０】
分析対象物のさらなる例は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭなどの上述の分析対象物の例に対する免疫応答分子を含む。
【００８１】
Ｅ．結合パートナー
１．結合パートナーの種類
結合パートナーとそれらの標的分析対象物の例は、相補的核酸配列（例えば、互いにハイブリッド形成する２つのＤＮＡ配列、互いにハイブリッド形成する２つのＲＮＡ配列、互いにハイブリッド形成するＤＮＡ及びＲＮＡ配列）、抗体と抗原、受容体とリガンド（例えば、ＴＮＦとＴＮＦｒ−１、ＣＤ１４２とＶＩＩａ因子、Ｂ７−２とＣＤ２８、ＨＩＶ−１とＣＤ４、ＡＴＲ／ＴＥＭ８若しくはＣＭＧと炭疸毒素の防御抗原部分）、酵素と基質、又は分子と結合タンパク質（例えば、ビタミンＢ１２と内因性因子、葉酸と葉酸結合タンパク質）を含むが、これらに限定されない。結合パートナーのさらなる例は、結合タンパク質、例えば、ビタミンＢ１２結合タンパク質、基本ドメインのスーパークラス、亜鉛配位ＤＮＡ結合ドメイン、ヘリックス−ターン−ヘリックス、副溝接触を有するベータスカホールド因子、他の転写因子などのＤＮＡ結合タンパク質を含むが、これらに限定されない。
【００８２】
いくつかの実施形態において、結合パートナーは、モノクローナル抗体又は１組のポリクローナル抗体であってよい抗体である。Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ ａｎｄ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ １４５０８、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ．、６３１７８（２００２／２００３）、Ｔｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ−Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｂｅｓ ａｎｄ Ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｔｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏ．、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ（２００５）、Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ ｔｏ Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅ Ｙｏｕｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｉｎｖｉｔｏｇｅｎ（商標）Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１６００ Ｆａｒａｄａｙ Ａｖｅｎｕｅ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ９２００８（２００３）、Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｃａｔａｌｏｇ、ＫＰＬ、Ｔｗｏ Ｃｅｓｓｎａ Ｃｏｕｒｔ、Ｇａｉｔｈｅｒｂｕｒｇ、ＭＤ．２０８７９（２００４及び２００５）並びにＰｉｅｒｃｅ Ｃａｔａｌｏｇ、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ １１７、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＩＩ．６１１０５（２００５）などの様々なカタログにおける一覧により例示されているように、問題の様々な分析対象物に結合する多数のモノクローナル抗体が入手可能である。
【００８３】
他の代表的なモノクローナル抗体は、β−アクチン、ＤＮＡ、ジゴキシン、インスリン、プロゲステロン、ヒト白血球マーカー、ヒトインターロイキン−１０、ヒトインターフェロン、ヒトフィブリノーゲン、ｐ５３、Ｂ型肝炎ウイルス若しくはその一部、ＨＩＶウイルス若しくはその一部、腫瘍壊死因子又はＦＫ−５０６に特異的に結合するものを含む。特定の実施形態において、モノクローナル抗体は、Ｔ４、Ｔ３、遊離Ｔ３、遊離Ｔ４、ＴＳＨ（甲状腺刺激ホルモン）、チログロブリン、ＴＳＨ受容体、プロラクチン、ＬＨ（黄体形成ホルモン）、ＦＳＨ（濾胞刺激ホルモン）、テストステロン、プロゲステロン、エストラジオール、ｈＣＧ（ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン）、ｈＣＧ＋β、ＳＨＢＧ（性ホルモン結合グロブリン）、ＤＨＥＡ−Ｓ（硫酸デヒドロエピアンドロステロン）、ｈＧＨ（ヒト成長ホルモン）、ＡＣＴＨ（副腎刺激ホルモン）、コルチソル、インスリン、フェリチン、葉酸塩、ＲＢＣ（赤血球）葉酸塩、ビタミンＢ１２、ビタミンＤ、Ｃ−ペプチド、トロポニンＴ、ＣＫ−ＭＢ（クレアチンキナーゼミオグロビン）、ミオグロビン、プロ−ＢＮＰ（脳利尿ペプチド）、ＨｂｓＡｇ（Ｂ型肝炎表面抗原）、ＨｂｅＡｇ（Ｂ型肝炎ｅ抗原）、ＨＩＶ抗原、複合ＨＩＶ、Ｈ．ピロリ、β−ＣｒｏｓＬａｐｓ、オステオカルシン、ＰＴＨ（副甲状腺ホルモン）、ＩｇＥ、ジゴキシン、ジギトキシン、ＡＦＰ（α−フェトプロテイン）、ＣＥＡ（癌胎児抗原）、ＰＳＡ（前立腺特異抗原）、遊離ＰＳＡ、ＣＡ（癌抗原）１９−９、ＣＡ１２−５、ＣＡ７２−４、ｃｙｆｒａ２１−１、ＮＳＥ（ニューロン特異エノラーゼ）、Ｓ１００、Ｐ１ＮＰ（プロコラーゲンタイプ１Ｎ−プロペプチド）、ＰＡＰＰ−Ａ（妊娠関連血漿プロテインＡ）、Ｌｐ−ＰＬＡ２（リポタンパク質関連ホスホリパーゼＡ２）、ｓＣＤ４０Ｌ（可溶性ＣＤ４０リガンド）、ＩＬ１８、リシン及びＳｕｒｖｉｖｉｎのうちの少なくとも１つに特異的に結合する抗体から選択される。
【００８４】
他の代表的なモノクローナル抗体は、上で代表的な分析対象物として述べた病原体、ウイルス、毒素、原生動物、蠕虫、プリオン、細菌、古細菌及び真菌に特異的に結合するものを含む。
【００８５】
他の代表的なモノクローナル抗体は、抗ＴＰＯ（抗甲状腺ペルオキシダーゼ抗体）、抗ＨＢｃ（Ｂ型肝炎ｃ抗原）、抗ＨＢｃ／ＩｇＭ、抗ＨＡＶ（Ａ型肝炎ウイルス）、抗ＨＡＶ／ＩｇＭ、抗ＨＣＶ（Ｃ型肝炎ウイルス）、抗ＨＩＶ、抗ＨＩＶｐ−２４、抗風疹ＩｇＧ、抗風疹ＩｇＭ、抗トキソプラズマ症ＩｇＧ、抗トキソプラズマ症ＩｇＭ、抗ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）ＩｇＧ、抗ＣＭＶＩｇＭ、抗ＨＧＶ（Ｇ型肝炎ウイルス）、抗炭疸菌及び抗ＨＴＬＶ（ヒトＴリンパ栄養ウイルス）を含む。
【００８６】
２．支持体
いくつかの実施形態において、結合パートナーは、なんらかの従来の手段、例えば、吸着、吸収、非共有結合、架橋剤による共有結合、又は支持体若しくは第１の結合パートナーのいずれか、若しくは両方の化学的活性化に起因する共有結合により、支持体上に固定化させることができる。いくつかの実施形態において、支持体による第１の結合パートナーの固定化は、結合対を用いることによって達成することができる。例えば、結合対の１つのメンバー、例えば、ストレプトアビジン又はアビジンを支持体に結合させることができ、同じ結合対の他のメンバー、例えば、ビオチンを第１の結合パートナーに結合させることができる。第１の結合パートナーを支持体上に固定化する適切な手段は、例えば、Ｐｉｅｒｃｅカタログ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ １１７、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＩＩ．６１１０５、１９９４）に開示されている。
【００８７】
結合パートナーとともに用いることができる支持体の他の例は、膜、ビーズ、粒子、電極、又は容器の壁若しくは表面を含むが、これらに限定されない。支持体は、ニトロセルロース、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、酢酸エチルビニル（ＥＶＡ）、ガラス、炭素、ガラス質炭素、カーボンブラック、カーボンナノチューブ若しくはフィブリル、白金、パラジウム、金、銀、塩化銀、イリジウム又はロジウムなどの、結合パートナーが固定化される材料を含んでいてよい。
【００８８】
いくつかの実施形態において、支持体は、ポリスチレンビーズ又は磁化可能ビーズなどのビーズである。様々な実施形態において、ビーズは、多くの異なるサイズ、例えば、３ｍｍ以上、３ｍｍ以下、１ｍｍ以下、０．１ｍｍ以下、１００μｍ以下、１０μｍ以下、５μｍ以下、２．８μｍ、１μｍ、１μｍ以下、０．５μｍ以下、０．１μｍ又は０．１μｍ以下を有していてよい。ビーズのサイズは、０．０１μｍ〜５ｍｍ、０．１μｍ〜３ｍｍ、１μｍ〜３μｍ又は２．８μｍ〜５μｍの範囲にあってもよい。特定の実施形態において、ビーズは主に球状である。特定の実施形態において、ビーズは球状でなくてよく、非球状ビーズについては、上の寸法はビーズの内部にとどまることができる最大直線部分の長さを指す。
【００８９】
特定の実施形態において、支持体は、結合パートナーの溶解、結合、検出分子の非特異的結合の減少、又は検出工程に不可欠な制御分子の結合を促進するためのさらなるポリマーコーティングを有していてよい。
【００９０】
他の実施形態において、支持体は、微小遠心管又は多ウエルプレートの少なくとも１つのウエルである。
【００９１】
３．結合パートナーの標識
いくつかの実施形態において、結合パートナーを標識することができる。検出可能な標識は、例えば、発蛍光団、発色団、スピン標識、放射性同位元素、酵素、量子ドット、ビーズ、アミノヘキシル、ピレン、抗体により検出可能な抗原決定基、化学ルミネセンス部分、若しくは電気化学ルミネセンス部分（ＥＣＬ部分）、ハプテン、ルミネセンス標識、放射性標識、量子ドット、ビーズ、アミノヘキシル、ピレン、金属粒子、スピン標識及び色素であってよい。代表的な標識は、Ｈｅｍｍｉｌａら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、第２６巻、２８３〜２９０頁（１９９３）、Ｋａｋａｂａｋｏｓら、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、第３８巻、３３８〜３４２頁（１９９２）、Ｘｕら、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、２０３８〜２０４３頁（１９９２）、Ｈｅｍｍｉｌａら、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．、第４８巻、３８９〜４００頁（１９８８）、Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ９ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ １９９６、Ｊ．Ｗ．Ｈａｓｔｉｎｇｓら編、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９６、Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｋｎｏｘ Ｖａｎ Ｄｙｒｅ編、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、１９８５、Ｉ．Ｈｅｍｍｉｌａ、Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ、第１１７巻、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９１、及びＢｌａｃｋｂｕｒｎら、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、第３７巻、１５３４頁（１９９１）に開示されている。
【００９２】
標識結合パートナーは、蛍光測定、時間分解蛍光測定及び／又は蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）測定に有用なものなどの発蛍光団で標識されていてよい。本発明の方法に用いることができる発蛍光団は、ＩＲ色素、Ｄｙｏｍｉｃｓ色素、フィコエリトリン、カスケードブルー、Ｏｒｅｇｏｎグリーン４８８、パシフィックブルー、ローダミングリーンなどのローダミン誘導体、５（６）−カルボキシフルオロセイン、シアニン色素（すなわち、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７）（ジエチルアミノ）クマリン、フルオレセイン（すなわち、ＦＩＴＣ）、テトラメチルローダミン、リスマリン、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、ＡＭＣＡ、ＴＲＩＴＣ、ｂｏｄｉｐｙ色素、Ａｌｅｘａ色素、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ＧＦＰ類似体、ｒｅｅｆ ｃｏｒａｌ蛍光タンパク質（ＲＣＦＰｓ）、ＲＣＦＰ類似体及び米国特許第５，７８３，６７３号、同第５，２７２，２５７号及び同第５，１７１，８４３号に記載されているｔａｎｄｅｍ色素を含むが、これらに限定されない。
【００９３】
本発明に用いることができる酵素標識は、ダイズペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ及び西洋ワサビペルオキシダーゼを含むが、これらに限定されない。
【００９４】
本発明に用いることができる放射性同位元素は、１３１Ｉ、３２Ｐ及び３５Ｓを含むが、これらに限定されない。
【００９５】
本発明に用いることができる化学ルミネセンス部分は、アクリジニウム、ルミノール、イソルミノール、アクリジニウムエステル、アクリジンジオン１，２−ジオキセタン、ピリドピリダジンを含むが、これらに限定されない。
【００９６】
標識結合パートナーのさらなる例は、電気化学ルミネセンス（ＥＣＬ）アッセイにおけるシグナルの発生に有用である部分、官能基又は分子で標識されている結合パートナーを含む。ＥＣＬ部分は、電気化学エネルギー源に直接曝露させることにより、電磁波を繰返し放出するように誘導することができるあらゆる化合物であってよい。そのような部分、官能基又は分子は、米国特許第５，９６２，２１８号、同第５，９４５，３４４号、同第５，９３５，７７９号、同第５，８５８，６７６号、同第５，８４６，４８５号、同第５，８１１，２３６号、同第５，８０４，４００号、同第５，７９８，０８３号、同第５，７７９，９７６号、同第５，７７０，４５９号、同第５，７４６，９７４号、同第５，７４４，３６７号、同第５，７３１，１４７号、同第５，７２０，９２２号、同第５，７１６，７８１号、同第５，７１４，０８９号、同第５，７０５，４０２号、同第５，７００，４２７号、同第５，６８６，２４４号、同第５，６７９，５１９号、同第５，６４３，７１３号、同第５，６４１，６２３号、同第５，６３２，９５６号、同第５，６２４，６３７号、同第５，６１０，０７５号、同第５，５９７，９１０号、同第５，５９１，５８１号、同第５，５４３，１１２号、同第５，４６６，４１６号、同第５，４５３，３５６号、同第５，３１０，６８７号、同第５，２９６，１９１号、同第５，２４７，２４３号、同第５，２３８，８０８号、同第５，２２１，６０５号、同第５，１８９，５４９号、同第５，１４７，８０６号、同第５，０９３，２６８号、同第５，０６８，０８８号、同第５，０６１，４４５号及び同第６，８０８，９３９号、Ｄｏｎｇ Ｌ．ら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、第２３６号、３４４〜３４７頁（１９９６年）、Ｂｌｏｈｍら、Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、第２１巻、４号、６０頁（１９９６年）、Ｊａｍｅｉｓｏｎら、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．、第６８巻、１２９８〜１３０２頁（１９９６年）、Ｋｉｂｂｅｙら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、第１４巻、３号、２５９〜２６０頁（１９９６年）、Ｙｕら、Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、第６２巻、２号、５８７〜５９２頁（１９９６）、Ｗｉｌｌｉａｍｓ、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２６頁（１９９６年１月）、Ｄａｒｓｌｅｙら、Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、第２１巻、１号、１３３頁（１９９６年１月）、Ｋｏｂｒｙｎｓｋｉら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第３巻、１号、４２〜４６頁（１９９６年１月）、Ｗｉｌｌｉａｍｓ、ＩＶＤ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２８〜３１頁（１９９５年１１月）、Ｄｅａｖｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ、第３７７号、７５８〜７６０頁（１９９５年１０月２６日）、Ｙｕら、ＢｉｏＭｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、第２０巻、１０号、２０頁（１９９５年１０月）、Ｋｉｂｂｅｙら、ＢｉｏＭｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、第２０巻、９号、１１６頁（１９９５年９月）、Ｓｃｈｕｔｚｂａｎｋら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、第３３巻、２０３６〜２０４１頁（１９９５年８月）、Ｓｔｅｒｎら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２８巻、４７０〜４７２頁（１９９５年８月）、Ｃａｒｌｏｗｉｃｚ、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｅｗｓ、第２１巻、８号、１〜２頁（１９９５年８月）、Ｇａｔｔｏ−Ｍｅｎｋｉｎｇら、Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ ＆ Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ、第１０巻、５０１〜５０７頁（１９９５年７月）、Ｙｕら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ、第１０巻、２３９〜２４５頁（１９９５年）、Ｖａｎ Ｇｅｍｅｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ、第４９巻、１５７〜１６８頁（１９９４年）、Ｙａｎｇら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、第１２巻、１９３〜１９４頁（１９９４）、Ｋｅｎｔｅｎら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第３８巻、８７３〜８７９頁（１９９２年）、Ｋｅｎｔｅｎ、Ｎｏｎ−ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ Ｌａｂｅｌｉｎｇ ａｎｄ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、Ｋｅｓｓｌｅｒ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、Ｂｅｒｌｉｎ、１７５〜１７９頁（１９９２年）、Ｇｕｄｉｂａｎｄｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、第６巻、４９５〜５０３頁（１９９２年）、Ｋｅｎｔｅｎら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第３７巻、１６２６〜１６３２頁（１９９１年）、Ｂｌａｃｋｂｕｒｎら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第３７巻、１５３４〜１５３９頁（１９９１年）、Ｅｌｅｃｔｒｏｇｅｎｅｒａｔｅｄ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ、Ｂａｒｄ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ（２００４年）、並びにＫｎｉｇｈｔ Ａ．及びＧｒｅｅｎｗａｙ Ｇ．、Ａｎａｌｙｓｔ、第１１９巻、８７９〜８９０頁に開示されている。
【００９７】
特定の実施形態において、電気化学ルミネセンス部分は、ルテニウム、オスミウム、レニウム、イリジウム、ロジウム、白金、パラジウム、モリブデン及びテクネチウムなどの金属を含んでいてよい。特定の実施形態において、電気化学ルミネセンス部分は、セリウム、ジスプロシウム、エルビウム、ユーロピウム、ガドリニウム、ホルミウム、ランタン、ルテチウム、ネオジム、プラセオジウム、プロメチウム、テルビウム、ツリウム及びイッテルビウムなどの希土類金属を含んでいてよい。特定の実施形態において、電気化学ルミネセンス部分は、ルテニウム又はオスミウムなどの金属を含んでいてよい。特定の実施形態において、結合パートナーは、ルテニウム（ＩＩ）トリスビピリジン及びその塩（［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋）などのトリスビピリジルルテニウム基のようなルテニウム部分で標識することができる。他の代表的なＥＣＬ部分は、構造が
【化１】
である［Ｒｕ（スルホ−ｂｐｙ）２ｂｐｙ］２＋であってよい［式中、Ｗは、ＮＨＳエステル、活性化カルボキシル、アミノ基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、ヒドラジド、マレイミド又はホスホルアミドなどの共有結合を形成するように、生物学的物質、結合パートナー、酵素基質又は他のアッセイ試薬と反応することができるＥＣＬ部分に結合した官能基である］。［Ｒｕ（スルホ−ｂｐｙ）２ｂｐｙ］２＋は、示した構造の他の塩も含む。
【００９８】
ＩＩＩ．装置
いくつかの実施形態において、本発明は、上述の方法を実施するための装置を提供する。
【００９９】
いくつかの実施形態において、本発明は、
（ａ）サンプリング器具及びフィルターから流れるように方向が定められた第１の一方向弁を介してサンプリング器具に流体的に接続されているフィルター、
（ｂ）第１の一方向弁とフィルターとの間の箇所に流体的に接続され、フィルターから廃棄物管路に向かって流れるように方向が定められた第２の一方向弁に流体的に接続されている廃棄物管路、
（ｃ）液体の流れをフィルター中に不可逆的に駆動させることができるように配置されているポンプ、
（ｄ）前記１つ又は複数の分析対象物に対して特異的な標識結合パートナーを収容する結合試薬容器、
（ｅ）前記フィルターからのろ液を前記結合試薬容器に導入する手段、及び
（ｆ）標識結合パートナーを測定する手段
を含む、１つ又は複数の分析対象物を含むと推定される試料の分析用の装置を提供する。
【０１００】
様々な実施形態において、本発明は、
（ａ）サンプリング器具に流体的に接続されているフィルター、
（ｂ）液体の流れをフィルター中に駆動させることができるように配置されているポンプ、
（ｃ）前記１つ又は複数の分析対象物に対して特異的な標識結合パートナーを収容する結合試薬容器、
（ｄ）前記フィルターからのろ液を前記結合試薬容器に導入する手段、及び
（ｅ）標識結合パートナーを測定する手段
を含む、１つ又は複数の分析対象物を含むと推定される試料の分析用の装置を提供する。
【０１０１】
特定の実施形態において、本発明は、
（ａ）フィルターにより下部容器から流体的に封じられている上部容器、及び
（ｂ）上部容器を経ることなく、下部容器に出入りすることができる開口部
を含む試料ろ過器具を提供する。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、装置は、１回又は複数回使用することができる電極を含む。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、サンプリング器具は、空気サンプラーである。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、試料ろ過器具は、半径方向対称性を有する。他の実施形態において、試料ろ過器具の外部は、半径方向対称性を有さない。
【０１０５】
標識結合パートナーを測定するためにルミネセンス（例えば、電気化学ルミネセンス、蛍光又は化学ルミネセンス）を使用する実施形態において、装置は、ルミネセンスの放射を測定するための光検出器、例えば、フォトダイオード、ＣＣＤ若しくはＣＭＯＳセンサ、及び／又は光電子倍増管を含んでいてよい。
【０１０６】
１．結合試薬容器
いくつかの実施形態において、結合試薬容器は、乾燥組成物を収容する。乾燥組成物の例は、組成物の総重量に対して３重量％以下の含水率を有する組成物及び組成物の総重量に対して１重量％から３重量％の含水率を有する組成物を含む。いくつかの実施形態において、結合試薬容器は、２５℃で９５％の相対湿度で少なくとも４週間にわたり容器内の乾燥組成物を乾燥した状態に維持するのに十分な水分バリアを含む。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、乾燥組成物は、結合アッセイ及び陽性対照に用いる組成物を含む。
【０１０８】
特定の実施形態において、結合試薬容器は、凍結乾燥緩衝液をさらに含んでいてよい。凍結乾燥緩衝液は、当技術分野でよく知られており、リン酸緩衝剤、及びトレハロース若しくはスクロースなどの１つ又は複数の凍結防止剤を含んでいてよい。
【０１０９】
特定の実施形態において、結合試薬容器は、第２の結合パートナー、分析対象物又は分析対象物の類似体の支持体への非特異的結合を阻害又は減少させるために処理することができるアッセイ支持体を含む。あらゆる従来の阻害剤を用いることができる。適切な阻害剤は、例えば、米国特許第５，８０７，７５２号、同第５，２０２，２６７号、同第５，３９９，５００号、同第５，１０２，７８８号、同第４，９３１，３８５号、同第５，０１７，５５９号、同第４，８１８，６８６号、同第４，６２２，２９３号、同第４，４６８，４６９号、カナダ特許第１，３４０，３２０号、国際公開第９７／０５４８５号、欧州特許公開Ａ１第５６６，２０５号、欧州特許公開Ａ２第４４４，６４９号、欧州特許公開Ａ１第１６５，６６９号に記載されている。代表的な阻害剤は、動物血清（例えば、ヤギ血清）、ウシ血清アルブミンなどの血清及び血清アルブミン、ゼラチン、ビオチン並びに乳汁タンパク質（「ｂｌｏｔｔｏ」）を含む。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、結合試薬容器は、各ウエルが１つ又は複数の乾燥組成物を含むことができる、例えば、２４、９６、３８４、１５３６又は６１４４ウエルを含む多ウエルプレートであってよい。特定の実施形態において、機器に用いられるような多ウエルプレートは、底部の寸法に関するＡＮＳＩ／ＳＢＳ２０００４マイクロプレート規格（ＡＮＳＩ／ＳＢＳ１−２００４）に規定されているほぼ最大寸法より大きくない外側寸法を有していてよい。機器に用いられるような多ウエルプレートの第３の寸法（すなわち、高さ）は、約４４ｍｍより大きくない外側寸法を有していてよい。様々な実施形態において、容器は、直径が約９ｍｍ以下で、高さが約４０ｍｍ以下の管であってよい。いくつかの実施形態において、容器は、約８．６ｍｍの最大外径及び約３３．８ｍｍの高さを有する管であってよい。いくつかの実施形態において、結合試薬容器の２次元アレイは、上の寸法の多ウエルプレート内にあるホルダーに入れることができる。様々な実施形態において、ホルダー中の容器の２次元アレイは、高さが３５ｍｍであってよい。
【０１１１】
いくつかの実施形態において、結合試薬容器は、密封することができる。いくつかの実施形態において、容器は、容器の開口部に押し込むことができるＥＶＡ又はＳａｎｔｏｐｒｅｎｅ（登録商標）などのエラストマー、熱硬化性又は熱可塑性材料で密封することができる。いくつかの実施形態において、結合試薬容器は、フォイルマイクロプレートシールなどの金属層を含む積層材で密封することができる。様々な実施形態において、結合試薬容器は、容器にヒートシールすることができる積層材などの熱により変形できる層を含む積層材で密封することができる。いくつかの実施形態において、結合試薬容器は、容器に積層材を結合させることができる接着性層を含む積層材で密封することができる。
【０１１２】
いくつかの実施形態において、結合試薬容器は、密封バッグ内の１つ又は複数の外被（容器）などの少なくとも１つの外被を含む。いくつかの実施形態において、密封バッグは、例えば、ポリエチレン、ポリエステル、アルミニウム、ニッケル、ポリエステル−フォイル−ポリエチレンの３積層体又はポリエステル−ポリエチレンの２積層体を含むことができる。いくつかの実施形態において、乾燥剤を最も内側の外被と最も外側の外被との間に加えることができる。乾燥剤は、例えば、酸化カルシウム、塩化カルシウム、硫酸カルシウム、シリカ、非晶質ケイ酸塩、アルミノケイ酸塩、クレー、活性アルミナ、ゼオライト又はモレキュラーシーブを含んでいてよい。いくつかの実施形態において、湿度インジケータを最も内側の外被と最も外側の外被との間に加えることができる。湿度インジケータは、例えば、乾燥組成物が依然として十分に乾燥しており、その安定性は損なわれていなかったという表示として用いることができる。いくつかの実施形態において、湿度インジケータは、最も外側の外被を通して見ることができる。特定の実施形態において、湿度インジケータは、米国軍用規格ＭＳ２０００３に適合するように設計されたもののような変色により湿度が示される、カード又はディスクであってよい。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、容器により形成される湿度バリアは、外部条件が１０日間、２０日間、４０日間、６７日間、３カ月間、６カ月間、１２カ月間、１８カ月間、２４カ月間又はより長期間にわたり４５℃及び相対湿度１００％であるとき、乾燥組成物を乾燥した状態に維持するのに十分であり得る。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、容器により形成される湿度バリアは、外部条件が１日間、１週間、１カ月間、３カ月間、６カ月間、１２カ月間、１８カ月間、２４カ月間又はより長期間にわたり２５℃及び相対湿度１００％であるとき、乾燥組成物を乾燥した状態に維持するのに十分であり得る。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、容器により形成される湿度バリアは、外部条件が３カ月間、６カ月間、１２カ月間、１８カ月間、２４カ月間又はより長期間にわたり４℃及び相対湿度１００％であるとき、乾燥組成物を乾燥した状態に維持するのに十分であり得る。
【０１１６】
２．フローセルに基づく生物学的検出システム
図１は、代表的な検出システム、例えば、フローセルに基づく生物学的検出システムの概略図である。示すように、検出システムの全動作は、コンピュータシステムにより制御することができる。試料の分析は、フローセル１１２、例えば、放射能、吸光度、磁性若しくは磁化可能物質、光散乱、光学干渉（すなわち、干渉測定）、屈折率変化、表面プラスモン共鳴及び／又はルミネセンス（例えば、蛍光、化学ルミネセンス及び電気化学ルミネセンス）を測定するように構成されたフローセルで行われる。１つの態様によれば、フローセル１１２は、電気化学ルミネセンス測定を行うように構成することができる。代表的な電気化学ルミネセンスフローセル及びそれらの使用の方法は、米国特許第６，２００，５３１号に開示されている。フローセル１１２の動作は、フローセル１１２からアッセイのデータを受け、データ解析を行うこともできるコンピュータシステムにより制御することができる。フローセル１１２は、試料が適切に吸引されることを保証するために用いることができる、液体と空気との差を検出するように構成することができる。
【０１１７】
代表的なフローセルに基づく生物学的検出システムは、ガス及び液体を含むことができる１つ若しくは複数の試薬及び／又は１つ若しくは複数の試料を導入するための液体処理ステーションを含んでいてよい。図１に流量制御弁１０９及び１１６並びにピペッター１１１を受け入れるためのマニホールドを含むことができる液体処理ステーション１１０を示す。追加の流量制御弁並びに試薬／ガス検出器も存在していてよい。
【０１１８】
ピペッター１１１は、マニホールドの密閉面及びピペッターの密閉面（例えば、カラー、フランジ等）上に配置されたＯリング１２０を用いて液体処理ステーション１１０内に気密シールを形成することができる。示すように、液体処理マニホールド密閉面は、試薬送入管路から離れた位置に設けることができる（例えば、試薬管路の吸引チャンバー入口箇所の上）。さらに、１つ又は複数の試薬入口箇所を吸引チャンバー内のあらかじめ決定した高さに配置することができる。例えば、示すように、液体試薬管路は、ガス管路の汚染を防止するために、ガス試薬管路の下に配置することができる。試薬の吸引は、試薬を選択される試薬ビン１２５から、フィルター１０７から、又は可能な追加のビンから、或いは空気を示されていない流量制御弁を介して吸引するように、ピペッターの適切な位置決め及びポンプ１１３の作動により、１つ又は複数の流量制御弁１０９、１１６の選択的な作動を調整することにより制御できる。
【０１１９】
検出システムは、容器及び／又は液体処理ステーションから液体を吸引／分配するようにピペッターを向けることができるように、ピペッター１１１及び１つ又は複数の結合試薬容器１３５を精密かつ正確に位置決めすることができる。容器は、乾燥又は湿潤結合試薬１０８を有することができる。ピペッター１１１と結合試薬容器１３５の相対的な位置決めは、３次元位置決めシステム１１７によって行われる。３方向の運動は、おそらく製造に関連する垂直性からの摂動のみを有するので、相互に垂直に非常に近いか、或いは矩形の箱のすべての箇所にわたり動く必要がおそらくないため、明確に垂直でないことがあり得る。或いは、位置決めシステムは、代替座標システム（例えば、１次元、２次元、極座標等）に基づくものであってよい。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、試料収集器具１００は、例えば、湿潤濃縮空気試料を収集することができる。代表的な試料収集器具は、Ｓｐｅｃｔｏｒ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ、ＭＯ）によるＳｐｉｎＣｏｎ（登録商標）改良型空気サンプラーである。特定の実施形態において、試料収集器具１００は、試料を例えば手で入れることができる開放カップ又は貯蔵容器であってよい。場合によっては、試料収集器具は、配管１２３を介して試薬ビン１２５中にある抽出緩衝液を用いることができる。或いは、器具中又は容器の外部にある異なる液体を試料収集器具１００により用いることができる。場合によっては、試料収集器具１００からの配管１０１には、器具内の大気への通気穴を設けることができる。ポンプ１１３は、ピペッター１１１、流量制御弁１０９、フィルター１０７、配管１０５、配管１０３、一方向弁１０２及び配管１０１を介して試料収集器具１００からろ液を吸引することができる。試料収集器具１００は、液体を一方向弁１０２を介して配管１０５中に吸引し、配管１０５から液体を配管１０４及び一方向弁１１５を介して廃棄物容器１０６に送る別の方法でポンプ１１３を用いて過剰な試料液体を排出させることができる。フィルター１０７は、抽出緩衝液（例えば）を流量制御弁１１６を介して少なくともピペッター１１１中に吸引し、抽出緩衝液をフィルター１０７を経て、一方向弁１１５を介して廃棄物容器１０６に押し込む別の方法でポンプ１１３を用いて逆洗又は少なくとも部分的に洗浄することができる。
【０１２１】
試料収集器具１００からの試料をフィルター１０７によりろ過し、ピペッター１１１中に吸引することができる。次いで、試料を結合試薬容器１３５中に分配することができる。試薬ビン１２５からの抽出緩衝液又は他の試薬をさらに結合試薬容器１３５中に分配することができる。次いで結合試薬と試料中に見出した分析対象物の間で結合反応は起こり得る。一定期間後に試薬ビン１２５からの追加の抽出緩衝液又は他の試薬は結合試薬容器１３５中に分配することができる。さらなる時間間隔の後に、反応混合物を測定のためにフローセル１１２中に吸引することができる。測定技術によって、測定が行われる前に追加の試薬がフローセルに必要なことがある。例えば、電気化学ルミネセンス測定の場合には、フローセル中の反応混合物について遊離−結合分離の実施中に一般的に共反応物をフローセルに加える。測定後、試料を廃棄物容器に分配することができる。
【０１２２】
３．フローセルを含まない検出システム
図２にフローセルを使用しない検出システムのいくつかの実施形態を示す。これらの実施形態は、液体対空気を検出する能力又は試料が吸引されることを保証する他の手段を保有することができる。これらの実施形態と上述のフローセル実施形態との相違点のみを述べると、これらの実施形態において、結合試薬容器２０２は、結合パートナー並びに測定に必要な他の物質を液体又は乾燥した形態で収容することができる。例えば、電気化学ルミネセンス測定の場合、結合試薬容器２０２は、電気化学ルミネセンスを開始させるための電極を含むことができる。比色測定の場合、結合試薬容器２０２は、試料の光学的特性をｉｎ ｓｕｔｕで測定するための光路を含むことができる。いくつかの実施形態において、結合試薬容器２０２は、複数の分析対象物に対する結合パートナーを収容することができる。これらの結合パートナーは、少なくとも一部は測定技術が標識結合パートナー間でどのように区別するかによって、２０１として図に示すように空間的に分離することができるか、又は同じ場所に配置することができる。ピペッター１１１は、試料を抽出緩衝液及び／又は測定に必要な他の試薬の容器にピペッティングにより移すことができる。ピペッター１１１は、結合試薬容器２０２の洗浄又は内容物を交換するために別の方法で用いることができる。
【０１２３】
４．代替構成
図３に試料を得るための代替構成を用いるいくつかの実施形態を示す。図３ａに示すように、ポンプ３０１をフィルター１０７の前に置くことができる。この位置では、ポンプ３０１は、試料のより迅速なろ過を可能にするためにフィルター１０７にわたる大きい圧力を発生させることができる。ポンプ３０１はまた、過剰な圧力が生じないことを保証するための圧力監視器具を含むことができる。過剰な試料を廃棄物容器に送ったり、フィルター１０７を逆洗するなどの他の特徴を保有させることができる。簡潔のために、斜線３９８は、図１又は図２の装置をこのシステムに接続させることができる場所を示す。図３ｂに、試料収集器具１００が用いる圧力で常に開いている通気穴を有さない代表的な実施形態を示す。ポンプ３０２は、試料収集器具１００及びフィルター１０７を通して液体を押し出すことができる。ポンプ３０２はまた、過剰な圧力が生じないことを保証するための圧力監視器具を含むことができる。簡潔のために、斜線３９９は、図１又は図２の装置をこのシステムに接続させることができる場所を示す。
【０１２４】
図４に示すように、いくつかの実施形態の配管１０５は、フィルターと常時流体接触していない。ここに示すように、試料収集器具１００は、試薬ビン１２５中に存在する抽出緩衝液に場合によってポンプ３０２及び配管１２３を介して接続させることができる。或いは、異なる液体を試料収集器具１００により使用することができる。ポンプ３０２は、容器ホルダー４０２中にある容器４０１に試料を分配することができる。次に、結合パートナーとの結合及び最終的な測定のために、容器ホルダー４０２を動かす運動制御装置４０３及びピペッター１１１を動かす運動制御装置１１７により、試料を容器４０１から吸引して、例えば、結合試薬容器１３５又は結合試薬容器２０２中に入れることができる。いくつかの実施形態において、試料は、手又はロボット組込みの代替部品により容器４０１に入れることができる。図４に容器４０１及び容器ホルダー４０２の円形の配置を示すが、他の形状（例えば、矩形配列又は線状配列）も考えられる。
【０１２５】
図５に容器４０１のいくつかの実施形態を示す。いくつかの実施形態において、空間５０１及び５０３はフィルター５０２により分離することができる。試料が最初に空間５０１に入ることができ、ろ液が空間５０３に入ることができる。ピペッター１１１は、ろ液に接触するためにフィルター５０２を貫通することができる。いくつかの実施形態において、試料が最初に開口部５０５を経て空間５０７に入ることができ、フィルター５０２によりろ過されることができ、ろ液が空間５０６に入ることができる。次に、ピペッター１１１は、フィルター５０２に接触せずに開口部５０６を経てろ液に接触することができる。容器の底部は、ピペッター１１１がほぼすべてのろ液を吸引することができるように構成することができる。いくつかの実施形態において、空間５０７及びフィルター５０２は円環状であってよく、一方、開口部５０６は環状体の中心部にあってよい。これ及び同様な実施形態において、容器４０１の半径方向の対称性は、容器ホルダー４０２の回転と独立に生じ得る。いくつかの実施形態において、試料が最初に空間５０１に入ることができ、ろ液が空間５０３に入り、次いで、コネクタ５０９を経て空間５０８に流入することができる。次に、ピペッター１１１は、フィルター５０２に接触せずにろ液に接触することができる。容器４０１が半径方向に対称でない実施形態において、検出システムが容器４０１の向きを知ることができるように容器ホルダー４０２を調節することができる。ろ過工程を促進するために、容器ホルダー４０２を遠心分離機として動作させて重力を増大させる（一般相対性理論により）か、又は試料を受け入れる容器の上部の一部を密閉して加圧することができる。これらの容器４０１の位相上の同等物も本発明の一部である。
【０１２６】
図６に示すように、本発明のいくつかの実施形態は、フィルター６０１を含むピペットチップ６００を使用する。試料収集器具１００からのろ液は、配管１０５及びピペットチップ６００を通過し、検出システムによって、結合試薬容器１３５又は結合試薬容器２０２に入ることができる。場合によっては、試料収集器具は、配管１２３を介して抽出緩衝液１１５を使用することができる。
【０１２７】
いくつかの実施形態は、図４及び／又は図６における変形形態であってよい。配管１２３にポンプ３０２を設置せずに、ポンプ３０１と同様な方法でポンプを配管１０５に設置することができる。試料収集器具１００を空にする手段として、一方向弁１０２及び１１５の対が場合によって存在していてよい。
【０１２８】
特定の実施形態において、フィルター１０７、５０２及び／又は６０１は、本明細書における他所で記載した特性及び組成を有する。特定の実施形態において、試薬ビン１２５に入っている抽出緩衝液は、本明細書における他所で記載した特性及び組成を有する。
【０１２９】
ポンプ１１３、３０１及び３０２は、いくつかの種類であってよい。例えば、ポンプは、米国特許出願公開ＵＳ−２００４−００９６３６８Ａ１又はＰＣＴ国際公開２００５／１１４１７５Ａ２に記載されているものであってよい。ポンプは、蠕動式、シリンジ式、ギア式、ピストン式（Ｆｌｕｉｄ Ｍｅｔｅｒｉｎｇ，Ｉｎｃ．、Ｓｙｏｓｓｅｔ、ＮＹにより販売されている無弁設計並びに弁を用いるより伝統的な設計を含む）又は他の容積式設計であってよい。ポンプは、真空ポンプ及び渦巻式ポンプなどの圧力源であってよい。特定の実施形態において、本発明におけるポンプは、液体を移動させるのに毛細管作用のみに依拠することはできない。
【０１３０】
ＩＶ．キット
いくつかの実施形態において、本発明は、問題の分析対象物を検出するためのアッセイを実施するための試薬、試料をろ過するためのフィルター及びアッセイに対する試料マトリックスの影響を減少させるための少なくとも１つの抽出緩衝液を含むキットを提供する。
【０１３１】
特定の実施形態において、本発明は、フィルター、並びに（ａ）８以上のｐＨ若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び（ｂ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液から選択される少なくとも１つの試薬を含む、上の方法を実施するためのキットを提供する。いくつかの実施形態において、キットは、前記分析対象物に対して特異的な標識結合パートナーをさらに含む。いくつかの実施形態において、キットは、前記分析対象物に対して特異的な第１の標識結合パートナー及び第２の標識結合パートナーをさらに含む。いくつかの実施形態において、第１及び第２の結合パートナーのうちの少なくとも１つが抗体である。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、キットは、分析対象物の標識類似体及び前記分析対象物に対して特異的な結合パートナーをさらに含む。いくつかの実施形態において、分析対象物の標識類似体は、既知の量の標識された分析対象物自体である。
【０１３３】
特定の実施形態において、アッセイを実施するための試薬が上記のように結合試薬容器中に入れられており、一方、フィルター及びアッセイに対する試料マトリックスの影響を減少させるための少なくとも１つの抽出緩衝液が第２の容器中に入れられていてよい。
【０１３４】
様々な実施形態において、キットはキットの使用方法を記載している添付文書又はパッケージの形の取扱説明書を備えていてよい。
【０１３５】
本発明による特定のキットにおいて、アッセイを実施するための試薬が上述の標識のうちの少なくとも１つを含む。
【０１３６】
本発明のいくつかの実施形態において、アッセイを実施するための試薬が上述の支持体のうちの少なくとも１つを含む。
【０１３７】
キットの構成要素は、問題の分析対象物を検出するためのアッセイを実施するのに有用なあらゆる試薬を含んでいてよい。特定の実施形態において、キットは、アッセイ用又は試薬の完全性を維持するための容器、湿度インジケータ又は湿度バリアのいずれかを含んでいてよい。
【０１３８】
以下の実施例は、本発明の例示であること意味するものであり、本発明の範囲及び適用を限定するものではない。当業者は、本発明の目的を反映するさらなる実施形態を認識することができる。
【実施例】
【０１３９】
これらの実施例では、分析対象物検出免疫アッセイの前又は実施中に試料を処理することの有用な効果を述べる。そのような処理のない場合、試料マトリックス中の成分が、特定の分析対象物を検出するのに必要な結合相互作用を妨害することがあり得る。結果として、結合シグナル及び／又はシグナル対バックグラウンド比（Ｓ：Ｂ）が減少し、分析対象物の検出が困難になる。１つの実施例で述べる試薬及び他の定義は、当該実施例における記述／定義によって明確に取って代わらない限り、他の実施例にも適用される。
【０１４０】
（実施例１）
環境マトリックスはシグナル及びシグナル対バックグラウンド比を著しく減少させる
検出する分析対象物としてマウスＩｇＧ抗体を用いて免疫アッセイを実施した。環境マトリックス（例えば、ＭＲマトリックス）がアッセイに及ぼす影響を検討するために、分析対象物標準は、湿式濃縮装置（ＭＲマトリックス）を通して郵便室内の空気をろ過して調製したマトリックス又はリン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳマトリックス）で保存マウスＩｇＧを１０μｇ／ｍｌに希釈して調製した。ＰＢＳマトリックスは、ｐＨ７．４の０．３％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ（登録商標）（モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン）、１０ｍＭリン酸緩衝液、１２０ｍＭ ＮａＣｌ、２．７ｍＭ ＫＣｌ、０．１％（ｖ／ｖ）ヒドロキシピリジン及び０．１％（ｖ／ｖ）メチルイソチアゾリノン（ＭＩＴ）を含んでいた。ＭＲマトリックス中に存在する物質を図１０に示す。希釈保存溶液をＭＲマトリックス又はＰＢＳでさらに連続希釈して、０．５ｎｇ／ｍｌ〜１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度のマウスＩｇＧを含む試料を得た。
【０１４１】
ヤギ抗マウスＩｇＧ Ｆｃ抗体で被覆したビーズを以下のように準備した。最初に、ヤギ抗体をビオチンで標識した。ＮＨＳ−ＬＣ−ＬＣ−ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ）をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で１ｍｇ／ｍｌの濃度に希釈して、ビオチン溶液を調製した。ＰＢＳ中に０．５ｍｇのヤギ抗体を含む容積を１００μｌのビオチン溶液と混合した。混合物を絶えず振とうしながら室温で１時間インキュベートした。ヤギ抗体−ビオチン複合体を、Ｐｉｅｒｃｅ ｓｌｉｄｅ−ａ−ｌｙｚｅｒｓを用いて、５時間ごとに緩衝液を交換し、３回交換のＰＢＳに対して透析した。ストレプトアビジンを被覆した直径２．８μｍの超常磁化可能ビーズ（Ｄｙｎａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈ）４ｍｇを１０μｇのビオチン標識ヤギ抗体と混合し、微小遠心管中で絶えず振とうしながら室温で１時間インキュベートした。ビーズを１ｍｌのアッセイ緩衝液で３回洗浄し、５ｍｇ／ｍｌの最終濃度に再構成した。
【０１４２】
抗マウスＩｇＧＦ（ａｂ）２フラグメントを製造業者の指示に従って［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋（ＢＶ−ＴＡＧ ＮＨＳ Ｅｓｔｅｒ、ＢｉｏＶｅｒｉｓ、Ｃｏｒｐ Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）で標識した。
【０１４３】
抗体被覆ビーズをアッセイ緩衝液で１：４０に希釈し、２５μｌのこの懸濁液を各アッセイウエルに加えて、免疫アッセイを実施した。５０μｌの各マウスＩｇＧ試料を各ウエルに３系列で加えた。［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋標識Ｆ（ａｂ）２フラグメントをアッセイ緩衝液で６７０ｎｇ／ｍｌに希釈した。２５μｌの標識Ｆ（ａｂ）２フラグメント溶液をすべてのアッセイウエルに加えた。アッセイプレートを振とうしながら室温で１５分間インキュベートした。製造業者の指示に従ってＭ−ｓｅｒｉｅｓＭ１Ｍ分析装置（ＢｉｏＶｅｒｉｓ Ｃｏｒｐ．）を用いて超常磁化可能ビーズに結合した［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋標識Ｆ（ａｂ）２フラグメントの量を測定する前に、３００μｌのＰＢＳ希釈剤をすべてのウエルに加えた。
【０１４４】
結果を表３及び図７に示す。データから、ＭＲマトリックスが該アッセイにおけるシグナル対バックグラウンド比を著しく減少させたことがわかる。
【０１４５】
【表３】
【０１４６】
（実施例２）
シグナル及びＳ：Ｂ比に対する試料の調製の影響
ＭＲマトリックスで希釈したマウスＩｇＧの試料を実施例１で述べたように調製した。抗マウスＩｇＧＦｃフラグメント抗体被覆ビーズをアッセイ緩衝液で１：４０に希釈し、２５μｌのこの懸濁液を各アッセイウエルに加えて、免疫アッセイを実施した。５０μｌの各マウスＩｇＧ試料を各ウエルに３系列で加えた。［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋標識Ｆ（ａｂ）２フラグメントをアッセイ緩衝液で６７０ｎｇ／ｍｌに希釈した。２５μｌの標識Ｆ（ａｂ）２フラグメント溶液をすべてのアッセイウエルに加えた。アッセイプレートを振とうしながら室温で１５分間インキュベートした。製造業者の指示に従ってＭ−Ｓｅｒｉｅｓ Ｍ１Ｍ分析装置（ＢｉｏＶｅｒｉｓ Ｃｏｒｐ．）を用いて超常磁化可能ビーズに結合した［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋標識Ｆ（ａｂ）２フラグメントの量を測定する前に、３００μｌのホウ酸緩衝液（０．１Ｍホウ酸ナトリウム、０．５Ｍ ＮａＣｌ、０．３％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、ｐＨ８．５）をすべてのウエルに加えた。ＰＢＳ希釈剤はＰＢＳマトリックスと異なる保存剤を使用し、ＰＢＳ希釈剤はヒドロキシピリジン及びＭＩＴの代わりに０．１％（ｖ／ｖ）ＫａｔｈｏｎＩＩｃＧ／ＩＣＰ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を含む。
【０１４７】
結果を表４及び図８に示す。表３及び図７と比較することにより、インキュベーションの後、ＥＣＬ測定の前にホウ酸緩衝液を免疫アッセイに加えることにより、シグナル対バックグラウンド比が著しく増加することわかる。
【０１４８】
【表４】
【０１４９】
（実施例３）
マトリックスのろ過の効果
ＭＲマトリックスで希釈した試料について、リシンを検出するための免疫アッセイを実施した。リシン（Ｒｉｃｉｎｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ＩＩ、ＲＣＡ６０）をＭＲマトリックスで１０００ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ及び１ｎｇ／ｍｌに希釈した。アッセイの前に、各試料の一部を５ｍｌ注射器を用いて５μｍＡｃｒｏｄｉｓｃ（登録商標）シリンジフィルター（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐ．、Ｅｌｍｈｕｒｓｔ、ＮＹ）によりろ過した。実施例１で述べたように、リシンに結合する抗体を用いてビーズを被覆した。実施例１で述べたように、リシンに結合する第２抗体を［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋で標識した。
【０１５０】
２５μｌの抗体被覆超常磁化可能ビーズ懸濁液を各アッセイウエルに加えた。５０μｌの各ろ過済みリシン試料をアッセイウエルに２系列で加えた。ＭＲマトリックス希釈の影響をろ過と比較するために、１００μｌの未ろ過リシン試料をアッセイウエルに加えた。２５μｌの［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋標識抗リシン抗体及び２５μｌのビオチン標識抗体被覆ビーズをすべてのアッセイウエルに加えた。アッセイプレートを振とうしながら室温で１５分間インキュベートした。製造業者の指示に従ってＭ−Ｓｅｒｉｅｓ Ｍ１Ｍ分析装置（ＢｉｏＶｅｒｉｓ Ｃｏｒｐ．）を用いて超常磁化可能ビーズに結合した［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋標識Ｆ（ａｂ）２フラグメントの量を測定する前に、３００μｌのホウ酸緩衝液（０．１Ｍホウ酸ナトリウム、０．５Ｍ ＮａＣｌ、０．３％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、ｐＨ８．５）をすべてのウエルに加えた。
【０１５１】
表５及び図９に示すように、分析対象物試料のろ過は、未ろ過試料と比較してシグナル及びシグナル対バックグラウンド比を実質的に改善した。
【０１５２】
【表５】
【０１５３】
図１１に測定セル電極上へのろ過済み及び未ろ過試料からの超常磁化可能ビーズの沈着の間の差を示す。最も内側の円は、これらの画像を得るために除去した光検出器に直接可視である作用電極の一部である。１つ又は複数の垂直のバンドを形成している褐色の小粒は、超常磁化可能ビーズである。（Ａ）は、試料を本発明によるフィルター及び抽出緩衝液で処理した場合のビーズの沈着を示す。（Ｂ）は、ろ過せずに処理した同じＭＲマトリックスを含む試料で開始したビーズの沈着の写真である。画像は、マトリックスは、両方が実測電気化学ルミネセンスに影響を及ぼすと予想される捕捉されるビーズの数並びにそれらの分布に影響を及ぼすことを示している。
【０１５４】
（実施例４）
アッセイの感度
本発明により実施されるリシンアッセイの感度の下限を試験するために、リシンをＭＲマトリックスで０．２、２、２０、２００及び２０００ｐｇ／ｍｌに希釈した。免疫アッセイインキュベーションステップの完了後までホウ酸緩衝液を加えず、米国政府により提供された重要試薬プログラム（Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍ）（ＣＰＲ）試薬を用いたこと以外は、実施例３で述べたように試料をろ過し、アッセイした。測定は、１回測定した０ｐｇ／ｍｌ濃度を除いて、２回繰り返して行った。
【０１５５】
表６に本実験におけるシグナル対バックグラウンド比を示す。図１２に本実験におけるシグナル値を示す。本アッセイは、少なくとも２００ｐｇ／ｍｌのリシン濃度に対して感度が高かった。
【０１５６】
【表６】
【０１５７】
（実施例５）
アッセイシグナルに対するホウ酸緩衝液単独の影響
ホウ酸緩衝液がアッセイの性能を改善するかどうかを検討するために、炭疸菌芽胞（Ｓｔｅｒｎｅ株）をＰＢＳマトリックス、又はＭＲマトリックスとホウ酸緩衝液との５０％／５０％混合物で１０２コロニー形成単位（ｃｆｕ）／ｍｌから１０６ｃｆｕ／ｍｌまでの範囲の濃度に希釈した。各試料の一部における芽胞を製造業者の指示に従って標準ＣＲＰ試薬を用いてろ過せずにアッセイした。簡単に述べると、１００μｌの試料ろ液又はＰＢＳ希釈芽胞を、ＣＲＰアッセイ試薬を含み各管に加えた。次いで、管をＭ１Ｍ分析装置に入れ、インキュベートし、読み取るように設定した。１５分間のインキュベーションの終了時に、３００μｌのＰＢＳ希釈剤をすべての試料に加えた。超常磁化可能ビーズに結合した［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋標識抗炭疸菌抗体の量を製造業者の指示に従ってＭ１Ｍ分析装置（ＢｉｏＶｅｒｉｓ Ｃｏｒｐ．）を用いて測定した。
【０１５８】
表７及び図１３に結果を示す。ろ過しなかった試料中のＭＲマトリックス及びホウ酸緩衝液の存在下で測定したシグナル及びシグナル対バックグラウンド比は、両方とも対照値より低下した。
【０１５９】
【表７】
【０１６０】
インキュベーション期間の後の３００μｌ希釈でＰＢＳ希釈剤の代わりにホウ酸緩衝液を用いた追加実験を行った。結果（示さず）は、表７及び図１３と同様であった。インキュベーション期間の後のホウ酸緩衝液の添加は、ろ過しなかった場合の結果に影響を及ぼさなかった。
【０１６１】
（実施例６）
ろ過の前に加えたホウ酸緩衝液の影響
ろ過ステップの前の環境マトリックス試料へのホウ酸緩衝液の添加が後に測定されるＥＣＬシグナルに影響を及ぼすかどうかを検討するために、以下の実験を実施した。バシラス・グロビギー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｌｏｂｉｇｉｉ）（ＢＧ）を含む２組の試料、すなわち、ホウ酸緩衝液で１：１に希釈したＭＲマトリックス中ＢＧの連続希釈物（「試料１」）とＭＲマトリックス単独中ＢＧの連続希釈物（「試料２」）を調製した。両方の組の試料を上述のように５μｍ Ａｃｒｏｄｉｓｃ（登録商標）シリンジフィルターを用いてろ過した。
【０１６２】
２５μｌの抗ＢＧ抗体被覆超常磁性ビーズ懸濁液を各アッセイウエルに加えた。１００μｌの試料１希釈物を３つのアッセイウエルに加えた。５０μｌの各試料２希釈物を３つのアッセイウエルに加えた。２５μｌの［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋標識抗ＢＧ抗体をすべてのアッセイウエルに加えた。アッセイプレートを振とうしながら室温で１５分間インキュベートした。次いで、３００μｌのホウ酸緩衝液を試料１ウエルのそれぞれ、及び６つの試料２ウエルの各組の３つに加えた。３００μｌのＰＢＳ希釈剤を残りの試料２ウエルに加えた。次いで、超常磁性ビーズに結合した［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋標識抗体結合の量を製造業者の指示に従ってＭ−Ｓｅｒｉｅｓ Ｍ１Ｍ分析装置（ＢｉｏＶｅｒｉｓ Ｃｏｒｐ．）を用いて測定した。
【０１６３】
表８及び図１４に結果を示す。低分析対象物濃度におけるシグナル及びシグナル対バックグラウンド比がホウ酸希釈を行うことによって改善された。
【０１６４】
【表８】
【０１６５】
本明細書は、本明細書で引用した参考文献の教示に照らして最も十分に理解される。本明細書における実施形態は、本発明の実施形態の実例であり、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。当業者は、他の多くの実施例が本発明によって包含されることを容易に認識する。本開示で引用したすべての刊行物及び特許は、それらの全体が参照により組み込まれる。参照により組み込まれる資料が本明細書と矛盾又は相反する限り、本明細書はそのような資料に取って代わるものとする。本明細書における参考文献の引用は、そのような参考文献が本発明の従来技術であることを容認するものではない。
【０１６６】
特に示さない限り、特許請求の範囲を含む本明細書で用いる成分の量、反応条件等を表すすべての数は、すべての場合に「約」という語により修正されると理解すべきである。したがって、反するものとして特に示さない限り、数値パラメーターは、概数であり、本発明によって得ようとする所望の特性に異なることがあり得る。少なくとも、また請求事項の範囲の同等物の原則の適用を制限する試みとしてではなく、各数値パラメーターは、有効数字の数及び通常の丸め法に照らして解釈すべきである。
【０１６７】
特に示さない限り、一連の要素の前の「少なくとも」という語は、該一続きのすべての要素に当てはまると理解すべきである。当業者は、わずかな通常の実験を用いて、本明細書に記載した本発明の特定の実施形態の多くの同等物を認識、又は確認することができるであろう。そのような同等物は、以下の請求事項の範囲によって包含されるものである。
【図面の簡単な説明】
【０１６８】
【図１】再使用可能な検出システムのいくつかの例示的な実施形態の概略図である。
【図２】使い捨て式検出システムのいくつかの例示的な実施形態の概略図である。
【図３】ａは、検出システムのサンプリング部分のいくつかの例示的な実施形態の概略図である。ｂは、検出システムのろ過部分のいくつかの例示的な実施形態の概略図である。
【図４】検出システムのサンプリング及びろ過部分のいくつかの例示的な実施形態の概略図である。
【図５】検出システム用の使い捨て式フィルターの例示的な実施形態の概略図である。
【図６】検出システム用の使い捨て式フィルターの例示的な実施形態の概略図である。
【図７】マウスＩｇＧ免疫検出アッセイにおける試料のシグナル対バックグラウンド比（Ｓ：Ｂ）に対する環境マトリックス（ＭＲマトリックス）の抑制効果を示す図である。記号は平均測定値を表し、直線は平均測定値を結んだものである。
【図８】本発明によるマウスＩｇＧ免疫検出を実施することにより、シグナル対バックグラウンド比（Ｓ：Ｂ）に対する環境マトリックス（ＭＲマトリックス）の影響が減少することを示す図である。記号は平均測定値を表し、直線は平均測定値を結んだものである。
【図９】免疫検出アッセイに使用する前にＭＲマトリックス及びリシンを含む環境マトリックス試料をろ過することにより、シグナルに対する環境マトリックスの影響が減少することを示す図である。記号は平均測定値を表し、直線は平均測定値を結んだものである。
【図１０】環境マトリックス（ＭＲマトリックス）試料の顕微鏡写真である。格子線は４０μｍ間隔である。
【図１１】環境マトリックス（ＭＲマトリックス）を含む試料について実施した免疫検出アッセイにおける超常磁化可能ビーズの沈着を示す図である。最も内側の円は、これらの画像を得るために除去した光検出器に直接可視である作用電極の一部である。１つ又は複数の垂直のバンドを形成している褐色の小粒は、超常磁化可能ビーズである。（Ａ）は、試料を本発明によるフィルター及び抽出緩衝液で処理した場合のビーズの沈着を示す。（Ｂ）は、標準的な従来技術の方法を用いて処理した同じ環境マトリックスを含む試料で開始したビーズの沈着の写真である。
【図１２】本発明による環境マトリックス（ＭＲマトリックス）中のリシンの免疫アッセイの検出限界を示す図である。記号は平均測定値を表し、曲線はモデル式
【数１】
［式中、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄは適合パラメーターであり、ｙはＥＣＬシグナル値であり、ｘはリシンの濃度である］を有する用量反応一部位曲線適合である。
【図１３】炭疽菌芽胞の免疫アッセイからのシグナルに対する環境マトリックス（ＭＲマトリックス）の影響を示す図である。記号は平均測定値を表し、直線は平均測定値を結んだものである。
【図１４】環境マトリックス（ＭＲマトリックス）及びバシラス・グロビギー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｌｏｂｉｇｉｉ）を含むろ過済み試料に対するホウ酸抽出緩衝液の影響を示す図である。記号は平均測定値を表し、直線は平均測定値を結んだものである。
【技術分野】
【０００１】
本出願は、参照により全体が組み込まれる、２００４年１２月２０日に出願された米国仮特許出願第６０／６３６，８６７号の優先権を主張するものである。
【０００２】
本発明は、試料中の抗原又はハプテンなどの分析対象物の検出のためのアッセイを含むアッセイ方法、装置及びキットに関する。分析対象物は、例えば、生物学的又は空気試料中のものを供給することができる。
【背景技術】
【０００３】
医療、環境、生体防御及び食品安全性分野において、免疫診断検査により、社会に対して有害である疾患及び汚染物質の簡単な評価と迅速な特定を行うことができる。遅延性疾患及び／又は地方病の発生を防止するためには、臨床検体、土壌若しくは水試料又は食品中の抗原などの分析対象物の定性的、半定量的及び定量的検出を可能にする簡単な確認アッセイが必要である。さらに、近年、国家テロの脅威が認識されているため、多くの診断検査が、確立された研究施設以外の衛星施設で実施することができるように設計されている。
【０００４】
従来の免疫アッセイを用いた検出システムは、検出可能な事象を発生させるために複数のアッセイ試薬を逐次的に加えることが必要である抗体−抗原相互作用に依拠している。一般的に明確な同定に対する信頼度は高いが、これらのアッセイ及び試薬調製手順は、試料マトリックスによる影響を受けることがある。例えば、試料中の成分が、アッセイ試薬が適切に機能する能力を妨害する可能性がある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
したがって、非技術要員又は非専門要員が実施することができる、減少した試料マトリックス効果を有する、信頼度が高く、使用しやすい診断アッセイのための新規の方法及び装置を開発する必要性が依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
いくつかの実施形態において、本発明は、分析対象物を含むと推定される試料を分析する方法であって、
（ａ）試料をフィルターによりろ過するステップと、
（ｂ）前記分析対象物に対して特異的な標識結合パートナーを加えるステップと、
（ｃ）（ｉ）８以上のｐＨ若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び
（ｉｉ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液
から選択される抽出緩衝液を加えるステップと、
（ｄ）得られる混合物中の標識結合パートナーを測定するステップと
を含み、ステップ（ａ）からステップ（ｃ）までをどのような順序で実施してもよく、ステップ（ｄ）は最後に実施する、上記方法を提供する。
【０００７】
特定の実施形態において、本発明は、分析対象物を含むと推定される試料を分析する方法であって、
（ａ）試料をフィルターによりろ過するステップと、
（ｂ）前記分析対象物に対して特異的な第１の標識結合パートナーを加えるステップと、
（ｃ）前記分析対象物に対して特異的な第２の結合パートナーを加えるステップと、
（ｄ）（ｉ）８以上のｐＨ若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び
（ｉｉ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液
から選択される抽出緩衝液を加えるステップと、
（ｅ）第１の結合パートナー、分析対象物、及び第２の結合パートナーの間で形成される複合体中の標識された第１の結合パートナーの量を測定するステップと
を含み、ステップ（ａ）からステップ（ｄ）までをどのような順序で実施してもよく、ステップ（ｅ）は最後に実施する、上記方法を提供する。
【０００８】
種々の実施形態において、本発明は、分析対象物を含むと推定される試料を分析する方法であって、
（ａ）試料をフィルターによりろ過するステップと、
（ｂ）分析対象物の標識類似体を加えるステップと、
（ｃ）前記分析対象物に対して特異的な結合パートナーを加えるステップと、
（ｄ）（ｉ）８以上のｐＨ若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び
（ｉｉ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液
から選択される抽出緩衝液を加えるステップと、
（ｅ）結合パートナーに結合した分析対象物の標識類似体の量を測定するステップと
を含み、ステップ（ａ）からステップ（ｄ）までをどのような順序で実施してもよく、ステップ（ｅ）は最後に実施する、上記方法を提供する。
【０００９】
特定の実施形態において、本発明は、フィルター、並びに（ａ）８以上若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び（ｂ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液から選択される少なくとも１つの試薬を含む、上記の方法を実施するためのキットを提供する。
【００１０】
いくつかの実施形態において、本発明は、１つ又は複数の分析対象物を含むと推定される試料の分析用の装置であって、
（ａ）サンプリング器具からフィルターに向かって流れるように方向が定められた第１の一方向弁を介してサンプリング器具に流体的に接続されているフィルター、
（ｂ）第１の一方向弁とフィルターとの間の箇所に流体的に接続され、フィルターから廃棄物管路に向かって流れるように方向が定められた第２の一方向弁に流体的に接続されている廃棄物管路、
（ｃ）液体の流れをフィルター中に不可逆的に駆動させることができるように配置されているポンプ、
（ｄ）前記１つ又は複数の分析対象物に対して特異的な標識結合パートナーを収容する結合試薬容器、
（ｅ）前記フィルターからのろ液を前記結合試薬容器に導入する手段、及び
（ｆ）標識結合パートナーを測定する手段
を含む、上記装置を提供する。
【００１１】
種々の実施形態において、本発明は、１つ又は複数の分析対象物を含むと推定される試料の分析用の装置であって、
（ａ）サンプリング器具に流体的に接続されているフィルター、
（ｂ）液体の流れをフィルター中に駆動させることができるように配置されているポンプ、
（ｃ）前記１つ又は複数の分析対象物に対して特異的な標識結合パートナーを収容する結合試薬容器、
（ｄ）前記フィルターからのろ液を前記結合試薬容器に導入する手段、及び
（ｅ）標識結合パートナーを測定する手段
を含む、上記装置を提供する。
【００１２】
特定の実施形態において、本発明は、
（ａ）フィルターにより下部容器から流体的に封じられている上部容器、及び
（ｂ）上部容器を経ることなく、下部容器に出入りすることができる開口部
を含む、試料ろ過器具を提供する。
【００１３】
前述の一般的説明及び以下の詳細な説明は、例示的かつ説明的なものであるにすぎず、請求の範囲に記載されている発明を制限するものではないことを理解すべきである。項の見出しは、読者に対する案内として設けられており、いずれにしても本発明を限定するものでないことは理解されよう。
【００１４】
添付図面は、本発明の実施形態を説明するものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本明細書には、試料マトリックス効果を減少させることにより、分析対象物を検出及び／又は定量する際に用いる方法、キット及び装置を開示する。
【００１６】
Ｉ．定義
「乾燥組成物」という用語は、組成物がその総重量に対して５重量％以下の含水率を有することを意味する。
【００１７】
「結合パートナー」という用語は、分析対象物に特異的に結合することができる１つ又は複数の物質を意味する。一般的に、特異的結合は、比較的高い親和力と比較的低ないし中容量を特徴とする。一般的に、親和定数Ｋａが少なくとも１０６Ｍ−１、少なくとも１０７Ｍ−１、少なくとも１０８Ｍ−１又は少なくとも１０９Ｍ−１であるとき、結合は特異的とみなされる。より高い親和定数は、より大きい親和力、したがって、一般的により大きい特異性を示す。例えば、抗体は一般的に、１０６Ｍ−１〜１０９Ｍ−１の範囲又はより高い親和定数で抗原に結合する。非特異的結合は通常、低親和力と中ないし高容量を有する。非特異的結合は通常、親和定数が１０６Ｍ−１を下回るときに発生する。
【００１８】
「抗体」という用語は、抗原結合性を保持する１つ又は複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むタンパク質を意味する。いくつかの実施形態において、抗体は、免疫グロブリン又はその一部であり、起源、生産の方法又は他の特性にかかわりなく抗原結合部位を含むあらゆるポリペプチド（糖部分（単及び多糖）による修飾をさらに伴う又は伴わない）を含む。この用語は、例えば、ポリクローナル、モノクローナル、単一特異的、多特異的、ヒト化、単鎖、キメラ、合成、組換え、ハイブリッド、変異及びＣＤＲグラフト化抗体並びに融合タンパク質を含む。抗体の一部は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｃｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖ、Ｆｄ、ＶＨ及びＶＬを含むが、これらに限定されない、抗原に結合することができるフラグメントを含むことができる。
【００１９】
「標識結合パートナー」という用語は、検出可能なシグナルを発生、修正又は調節することができる原子、部分、官能基又は分子を含む標識を含む結合パートナーを意味する。
【００２０】
「分析対象物」という用語は、試料中に認められるウイルス、原始細菌、植物、動物、真菌及び／又は細菌の細胞若しくは細胞成分を含む、あらゆる分子若しくは分子の凝集体を意味する。試料中に認められるあらゆる分子の断片も「分析対象物」という用語の範囲に含まれる。この定義は、この定義の範囲内に示されている例のいずれかのうちの１つ又は複数のものを含む複合体をさらに含む。
【００２１】
「分析対象物の類似体」という用語は、結合パートナーへの結合に対して問題の分析対象物と競合する物質を指す。分析対象物の類似体は、試料中に存在する問題の分析対象物と特定の結合パートナーへの結合に対して競合させるために加えられる既知量の問題の分析対象物自体であってよい。分析対象物の類似体の例としては、ＨＩＶ逆転写酵素に結合するヌクレオチドの類似体であるアジドチミジン（ＡＺＴ）、アミノアシルｔＲＮＡの末端アミノアシルアデノシン部分の類似体であるピューロマイシン、テトラヒドロ葉酸塩の類似体であるメトトレキセートなどがある。他の類似体は、問題の分析対象物の誘導体であってよい。本明細書で用いられている「分析対象物の標識類似体」という用語は、標識結合パートナーと同様に定義される。
【００２２】
「陽性対照」という用語は、既知量の分析対象物又は分析対象物の類似体を指す。陽性対照は、適切な機器の動作及び／又は試料の測定を評価するために用いることができる。陽性対照は、機器を校正するために用いることができる。陽性対照は、試験試料のシグナルレベルを対照標準のシグナルレベルと比較するための対照標準として用いることができる。陽性対照はまた、シグナルレベルを分析対象物濃度に関連づける数学関数とともに使用することができ、そのうちの１つの使用は、試料のシグナル測定値を分析対象物濃度に変換することである。「陽性対照」という用語は、陽性対照及び陽性キャリブレータの一般的な定義を含む。
【００２３】
「アッセイ陽性対照」という用語は、（ａ）試料の測定の成功を確認するため、又は（ｂ）試料の実測シグナルを供試分析対象物の濃度に変換するために用いる組成物を指す。一般的に、アッセイ陽性対照は、陽性対照と、分析対象物を含む試料の測定を模擬するために結合アッセイに用いる試薬を含む。
【００２４】
「試料」という用語は、分析対象物を含む可能性がある液体を含む。
【００２５】
「液体」という用語は、液体のより伝統的な定義に加えて、粒子が地球の重力に起因する１ｍｍ／ｓ以下の沈降速度を有するコロイド、懸濁液、スラリー及び液体中粒子の分散系を含む。
【００２６】
「抽出緩衝液」という用語は、分析対象物又は分析対象物の類似体と試料マトリックスとの非特異的結合を減少させるために用いる組成物を指す。
【００２７】
「流体的に接続された」という用語は、接続によって流体が構成要素の間を通ることが可能になる、２つの構成要素の間の接続を指す。
【００２８】
「試料マトリックス」という用語は、分析対象物を除く試料中のすべてのものを指す。「環境マトリックス」という用語は、試料が採取される環境由来の試料マトリックスの成分を指す。例えば、試料マトリックスは、試料環境中に通常認められない検出アッセイを実施するために用いる試薬を含むことがあり得る。環境マトリックスという用語はまた、アッセイの開発のため、模擬のため、又は他の目的のために試料中の分析対象物はスパイクされていなかったが、試料を採取することを意図する環境由来の試料マトリックスの成分を指す。
【００２９】
本明細書で用いるように、「支持体」という用語は、当技術分野で知られている結合パートナーを固定化するための手段のいずれかを意味する。支持体の例は、膜、ビーズ、粒子、電極又は容器の壁若しくは表面を含むが、これらに限定されない。
【００３０】
「磁化可能ビーズ」という用語は、磁性、常磁性及び超常磁性ビーズを含む。
【００３１】
ＩＩ．方法
特定の実施形態において、本発明は、試料中の分析対象物の検出又はその量の定量のための結合アッセイに用いられ、測定に対する試料マトリックスの影響が最小限である方法に関する。
【００３２】
Ａ．分析対象物の検出に対する試料マトリックスの影響
試料マトリックスは、試料中に認められる分析対象物の測定に多くの点で影響を及ぼす可能性がある。試料マトリックスがアッセイに影響を及ぼすメカニズムに関する特定の理論により拘束されることを意図することなく、例えば、マトリックスは、試料の粘度を変化させることにより、或いは、さもなければ試料中の有効拡散速度を変化させることにより、分析対象物と結合パートナーとの間の結合の速度を減少させることができる。他のシナリオにおいて、マトリックスは、結合パートナーに非特異的に結合して、結合パートナー上の利用可能な結合部位の数を減少させることもできる。マトリックスは、複数の分析対象物又は複数の結合パートナーと非特異的に結合して、より緩慢に拡散するより大きい集塊を形成することもできる。マトリックスは、結合パートナーが位置する支持体に付着又は支持体上に沈降し、それにより、分析対象物との相互作用に利用可能な結合パートナーの数を減少させることができる。試料中で移動することができる支持体（例えば、ビーズ）の場合、マトリックスは、複数の支持体に付着して、より緩慢に拡散及び／又は試料の底部に沈降する集塊を形成することができる。マトリックスは、平衡状態で結合する分析対象物の量に影響を及ぼすことができる。例えば、高濃度のマトリックスは、平衡状態にある結合パートナーの結合部位のゼロでない一部を占有することができる。酵素を用いて基質を生成物に変換させる場合、マトリックスは生成物の生成速度を減少させる可能性がある。
【００３３】
マトリックスは、標識結合パートナーの測定に影響を及ぼすことがあり得る。測定法が質量の変化である場合、マトリックスは、例えば、結合パートナー又は分析対象物に結合して、質量を効果的に増加させることがあり得る。測定が凝集に敏感である場合、マトリックスは、分析対象物の非存在下で凝集を引き起こす可能性がある。測定がルミネセンスである場合、マトリックスは、光を散乱させ、吸収し、又は別の仕方で光が検出器に到達することを妨げる可能性がある。測定がルミネセンスである場合、マトリックスは、励起状態から別の非発光経路を発生させる可能性がある。測定法が蛍光である場合、ルミネセンスメカニズムに加えて、マトリックスは、励起光が意図する蛍光化合物により吸収されることを妨げるか、又は自家蛍光を発する可能性がある。測定法が化学ルミネセンスである場合、ルミネセンスメカニズムに加えて、マトリックスは、前のパラグラフで述べたメカニズムにより励起状態の生成の速度を減少させる可能性があり、分析対照物と結合パートナーとの相互作用を妨げることができるときには、これが、発光をもたらす、いずれか２つの化合物の相互作用を妨げることがある。測定法が電気化学ルミネセンスである場合、化学ルミネセンスメカニズムに加えて、マトリックスは、例えば、前のパラグラフで述べた変速メカニズムにより、電極から電気化学ルミネセンス化合物又は電気化学ルミネセンス共反応物へのエネルギー輸送の速度を減少させることができる。
【００３４】
Ｂ．試料マトリックス効果の減少
検出工程に対するマトリックスの影響は、２つの方法のいずれかにより減少させることができる。第１に、検出に対する分析対象物の有効性は、分析対象物のマトリックス成分との結合／会合を妨げるように溶液の特性を変化させることによって増加させることができる。第２に、検出工程を妨害するマトリックスの成分は、検出工程から除くことができる。この目的を達成するためにいくつかの方法を用いることができる。
【００３５】
問題の分析対象物は、妨害マトリックスといくつかの物理的性質が異なることがあり得る。これらは、サイズ、密度、溶解度、表面電荷の分布又は表面部分の差異を含むが、これらに限定されない。サイズの差に基づく分離としては、ろ過器具の使用又はサイズ排除カラム通過などがある。密度差に基づく分離は、遠心分離機の使用又は重力沈降を含むが、これらに限定されない。溶解度に基づく分離は、２相分配又は不混和性相中への溶媒抽出を含むが、これらに限定されない。表面電荷の差に基づく分離は、イオン交換クロマトグラフィー又は凝析及び沈澱を含むが、これらに限定されない。これらの分離法の多くは、主として実験室環境において実際的なものである。実験室以外の環境で使用しやすい方法は、ろ過及び抽出溶液を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本発明は、妨害マトリックス粒子及び／又はろ過器具から分析対象物を放出させるための抽出緩衝液を用いて、試料からこれらのマトリックス粒子を除去する。
【００３６】
１．ろ過
ろ過は、検出工程からマトリックスの妨害成分を除去する１つの方法である。このアプローチでは、フィルターのバリアを用いて検出工程を妨害するような微粒子成分を保持する。マトリックスの微粒子成分は、標識結合パートナー、分析対象物の標識類似体又は検出表面上のビーズの捕捉又は析出を必要とするいくつかの検出方法を妨害することがある。さらに、これらの成分を除去することにより、分析対象物に結合することができる表面の量が減少する。いくつかの実施形態において、微粒子成分を捕捉したフィルターを処理して、分析対象物を検出工程に対して放出することができる。
【００３７】
ろ過は、所定のサイズより大きい粒子を排除する物理的バリアを設けることにより溶液から成分を主として分離する。ろ過技術にはこれらの種類バリアを作る多種の方法が存在し、各方法で基本材料の機能が操作される。例えば、粒径が５０μｍを超える極めて大きい粒子を捕捉するために用いることができる織りスクリーンを製造するのに、金属ワイヤーが一般的に用いられている。より小さい浮遊粒子を捕捉するために、より小さい直径の金属ワイヤースクリーンを用いることができるが、それらは、気流に対する抵抗（圧力降下）のため限界を有する。ポリマーを用いた膜は、一般的に溶液からより小さい粒子を除去するために用いられる。例えば、ポリマーナイロンは、１０μｍの孔径定格から０．１μｍの孔径定格までの範囲の膜を作製するための転相注型法に用いられる。他のポリマーを用いた膜（例えば、ポリエーテルスルホン、ニトロセルロース又は酢酸セルロース）は、溶媒蒸発注型法により作製される。ろ過媒体は一般的に、問題の流体がフィルターバリアを制御された挙動で通過することを可能にする保持器具に組み込まれている。いくつかの実施形態において、本発明は、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）ポリマーを用いたろ過媒体を含むフィルターを使用する。特定の実施形態において、ＰＥＳフィルターは、（ａ）注射器に取付けることができる、（ｂ）ロボットオートメーションを容易にするために設計された１回使用使い捨て器具の一部、又は（ｃ）複数回使用使い捨て器具の一部であるプラスチックハウジングに収容されている。
【００３８】
ろ過は主として、サイズにより溶液から成分を分離する。ほとんどのフィルターにおいて、フィルターを通しての経路は、直線的な穴ではなく、ねじれた経路である。これにより、フィルターの孔径の記述は操作上のものとなり、孔径定格という用語が生ずる。フィルターの孔径定格を決定するにあたって、既知の容積（又は量）の既知の粒径（顕微鏡観察、光散乱又はインピーダンス測定により知られる）の粒子でフィルターをチャレンジする。次いで、フィルターの下流の粒子の量を測定し、粒子の複数の粒径にわたってフィルターの上流の粒子の量と比較する。粒子の所定の粒径範囲について下流の粒子と上流の粒子の比が１以下に有意に低下した場合、フィルターは該粒径範囲について除去能力を有すると言われる。これらの比は、一般的に除去の対数単位で記述される。例えば、５μｍと格付けされるフィルターは、一般的に５μｍより大きい下流粒子のレベルを０．９０の比（９０％除去又は１ｌｏｇ除去）から０．９９９の比（９９．９％除去又は３ｌｏｇ除去）低下させる。フィルターの孔径は多くの要因に基づいて選択される。孔径は、分析対象物を通過させるために十分に大きくなければならない。例えば、炭疸菌芽胞はサイズが約１μｍである。孔径は、試料マトリックスからの妨害成分を阻止するために十分に小さくなければならない。孔径はフィルターを通過する流体の流速にも影響を及ぼし、孔径が小さいほど、生ずる流動抵抗が一般的に大きくなる。
【００３９】
いくつかの実施形態において、本発明は、５μｍの孔径定格を有するろ過器具を用いて試料マトリックスの妨害成分を除去することができる。いくつかの実施形態において、本発明は、０．１、０．２、０．５、１、２、３、４、７、１０、１５、２０、５０又は１００μｍの孔径定格を有するろ過器具を用いて試料マトリックスの妨害成分を除去することができる。いくつかの実施形態において、フィルターは、試料マトリックスの妨害成分を除去するために約１００μｍ以下及び約１０μｍ以上の孔径定格を有する。いくつかの実施形態において、フィルターは、試料マトリックスの妨害成分を除去するために約１０μｍ以下及び約１μｍ以上の孔径定格を有する。いくつかの実施形態において、フィルターは、試料マトリックスの妨害成分を除去するために約１μｍ以下及び約０．１μｍ以上の孔径定格を有する。いくつかの実施形態において、フィルターは、試料マトリックスの妨害成分を除去するために約０．１μｍ以下及び約０．０２μｍ以上の孔径定格を有する。
【００４０】
一般的に、フィルターの孔径定格より小さい粒子は、ろ過媒体に吸着されない限り、妨害を受けずにフィルターを通過する。非特異的吸着を防ぐためには、ろ過媒体を、表面修飾し、例えば、フィルター表面をより濡れ性、すなわち、より親水性にすることにより、この種の相互作用を減少させることができる。分析対象物の非特異的結合（回収の損失をもたらす）は疎水性相互作用、主としてファンデルワールス相互作用に起因すると一般的に考えられている。例えば、ろ過媒体ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）をグリセロールのような親水性化合物で被覆することにより、水が表面を濡らす能力が増大し、分析対象物の損失が減少する。
【００４１】
いくつかの表面処理はより永久的なものであり、表面グラフトが考慮される。ろ過媒体の永久的表面修飾は、当業者により知られている多くの方法により達成することができる。これらの方法は、フリーラジカル重合、イオンビーム開始重合、電離放射線誘導重合、プラズマエッチング及び化学カップリングを含むが、これらに限定されない。これらの方法は、水和を促進し、疎水性相互作用を減少させるかなりの数のヒドロキシル基を有する分子を組み込む。表面修飾の特定の方法は、フィルター器具に用いられるろ材の化学的性質に主として依存する。例えば、電離放射線は、ナイロンろ過媒体を親水性にし、タンパク質結合性を低くするためにナイロンろ過媒体上へのヒドロキシ−プロピル−アクリレート部分のグラフティングを誘導するために用いることができる。いくつかの実施形態において、本発明は、表面を濡れやすくし、分析対象物の損失を減少させるためにグリセロールで被覆したポリエーテルスルホンポリマーを含むろ過媒体を使用する。
【００４２】
逆に、フィルターは、妨害成分に特異的に結合する、表面に付着した化学部分を有していてよい。ろ過媒体は、結合反応（例えば、免疫反応）又は検出方法を妨害することが知られているクラスの分子と高親和性相互作用を有する分子に共有結合することができる。例えば、赤血球上の表面基に結合するレクチン、又は検出法を妨害する可能性がある金属イオンに結合するエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）をろ過媒体に結合させることができる。
【００４３】
本発明の様々な実施形態において、ろ過器具は、試料中の分析対象物の数が変化し、各分析対象物が固有の調製要件を有する適用例における試料を調製するために用いることができる。一部の分析対象物は、大きく、小孔径フィルターにより除去されるであろう。例えば、細菌の一部である分析対象物は、滅菌フィルターの孔径定格（０．２μｍ）を有するフィルターにより除去されるが、５μｍの孔径定格を有するフィルターを用いたろ過の後には試料マトリックス中に残るであろう。逆に、トキシンのような小分子の検出は、１μｍ以上の孔径定格を有するフィルターにより大粒子を除去することによって向上させることができる。したがって、本発明の特定の実施形態は、適切なろ過器具の後に特定の分析対象物の試料を採取することができる、次第により小さい粒子を除去するための直列のいくつかのろ過器具を使用する。
【００４４】
本発明によれば、試料を１回又は複数回ろ過することができる。いくつかの適用例において、試料の微粒子負荷が重く、保持粒子の層が非常に厚いので、ろ過器具を１回のみ用いることができる。他の試料において、粒子負荷が低いことがあり、そのため、流速があまりにも遅くなるか、又は圧力降下があまりにも高くなって実際的でなくなる前に複数の試料をろ過器具に通すことができる。これらの場合、ろ過器具は、必要及びサンプリング頻度の要件を満たすある定期的な間隔で交換することができる。例えば、粒子負荷が低く、陽性検出事象の頻度も低い場合、ろ過器具は、月１回、週１回、毎日、又は陽性検出事象の発生後より速やかに交換することができる。フィルター交換間隔は、例えば、ろ過した試料の数により、又はフィルターにわたる圧力降下を測定することにより、若しくはフィルターを通しての流速を測定することにより、設定することができる。
【００４５】
２．流体の移動
本発明によれば、複数のメカニズムを用いて試料流体をフィルターを通して駆動することができる。流体は、重力流により、或いは、正のゲージ圧をフィルターの上流に加え、かつ／又は負のゲージ圧（真空）をフィルターの下流に加える、圧力により、フィルターを通して移動させることができる。
【００４６】
本発明は、粒子保持層を逆流（逆洗）法により減少させることができる場合には、フィルターを試料の調製のために複数回使用することができることを企図する。これらの実施形態において、流体の逆流を用いてろ過器具の表面から微粒子を除去し、分析のためにろ過済み試料を採取した後にそれらの進路を廃棄物収集システムへと変えることができる。
【００４７】
３．緩衝液
妨害マトリックスを含む試料からの分析対象物の回収及び検出は、適切な抽出緩衝液を用いて増大させることができる。いくつかの実施形態において、本発明は、例えば、ホウ酸ナトリウム、塩化ナトリウム及び非イオン性界面活性剤を含む抽出緩衝液を用いて、分析対象物の回収を増大させることができる。代替抽出緩衝液は、酢酸ナトリウム、マレイン酸ナトリウム、シュウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、リン酸ナトリウム並びにホウ酸、塩化物、酢酸、マレイン酸、シュウ酸、クエン酸、硫酸及びリン酸のカリウム及びリチウム塩を含む。
【００４８】
問題の分析対象物の一部は、低親和性非特異的相互作用により試料マトリックスと結合させることができる。これらの種類の相互作用は、例えば、イオン及び疎水結合を含んでいてよい。いくつかの実施形態において、マトリックスのイオン表面電荷を有する可動性溶液イオン対がマトリックス粒子表面からの分析対象物の変位を促進するように、抽出緩衝液の総イオン強度を増加させることによって、分析対象物とマトリックス粒子とのイオン相互作用を低下させることができる。様々な実施形態において、非特異的イオン相互作用の低下時にイオン強度を増大させるために、溶液のｐＨを中性（すなわち、ｐＨ７）から高いｐＨ又は低いｐＨに変化させることができる。ほとんどの環境マトリックス粒子は優勢な負の表面電荷を有するので、本発明の特定の実施形態は、抽出緩衝液中のイオンがマトリックス粒子から分析対象物を変位させることができるように、高いｐＨを用いて表面基をイオン化することができる。いくつかの実施形態において、本発明は、８．５のｐＨを有し、少なくとも０．５モルの塩化ナトリウムを含む抽出緩衝液を使用する。いくつかの実施形態において、本発明は、８以上のｐＨを有する抽出緩衝液を使用する。
【００４９】
イオン相互作用に加えて、疎水性相互作用は、分析対象物の回収率を減少させることができる。これらの種類の相互作用は、ファンデルワールス型の相互作用と記載されており、水及び水素結合の複雑な性質から生ずることがあり得る。イオン性分子は、水分子に、水分子を組織化し、水分子の運動を減少させる傾向がある、荷電基の周りの水素結合ケージ構造（包接化合物）を形成させることができる。極性基を有する分子は、水の水素と極性基との間の水素結合構造を形成することによって水に溶解することができる。イオン電荷も極性基も有さない分子の部分は、疎水性とみなすことができ、これらの部分は、水和事象からの排除により共に追いやられる傾向がある。疎水性部分を有する分子は、ファンデルワールス相互作用に共にたずさわらされる可能性がある。このようにして、水の全体の構造を安定化させることができる。
【００５０】
妨害マトリックス粒子との低親和性非特異的相互作用による分析対象物の回収を増加させるために、本発明の特定の実施形態は、水の組織化力の測定される崩壊を引き起こす物質を用いることができる。例えば、疎水性相互作用は、界面活性剤／洗剤及びカオトロピックイオン並びに電荷を有さないカオトロピック分子を用いて減少させることができる。本明細書で用いるように、界面活性剤と洗剤は同義語である。カオトロピック分子（イオンとして荷電又は非荷電）は、水の組織化力及び構造を崩壊させる傾向がある。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０（モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン））を用いて、洗剤分子の疎水性部分をマトリックス及び分析対象物の疎水性部分に結合させることにより分析対象物の回収を促進させることができる。非荷電カオトロピック分子（例えば、尿素）は、水の水素結合構造を崩壊させる十分に高い濃度の溶液を形成することができる。水の水素結合構造の崩壊を促進するために、様々な実施形態もホウ酸塩、塩酸グアニジン、チオシアン酸グアニジン又は他のカオトロピックイオンを用いることができる。ホウ酸イオンは、小さく、ほとんどのイオン以上に水分子ケージ構造を妨げる。リン酸及び硫酸イオンも本発明において用いることができる。本発明のいくつかの実施形態は、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｌｉ＋、Ｎａ＋又はＫ＋などの１つ又は複数の陽イオンを使用する。当業者は、２価又は３価陽イオンを用いるとき、ある種のマトリックスとのさらなる好ましくない反応が起こる可能性があることを理解するであろう。当業者は、カオトロピックイオンの高い濃度において、タンパク質分子の２次及び３次構造が分解し、免疫アッセイで用いる高親和性相互作用が破壊されることを理解するであろう。いくつかの実施形態において、抽出緩衝液は、０．１Ｍホウ酸ナトリウム（ｐＨ８．５）、０．５Ｍ塩化ナトリウム及び０．３％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０を含む。
【００５１】
様々な実施形態において、抽出緩衝液は、表１に示すような様々な容量オスモル濃度範囲を有することができる。これらの範囲は代表的なものにすぎず、当業者は本発明に適用可能なさらなる範囲を認識することができる。
【００５２】
【表１】
【００５３】
表１に示す代表的な抽出緩衝液は、２〜１１、３〜１０、４〜９．５、５〜８、６〜８、７〜１０、８〜１０、８．５〜９．７及び／又は６．５〜７．５の範囲内のいずれかのｐＨを任意に有していてよい。
【００５４】
様々な実施形態において、抽出緩衝液は、表２に示すような様々なｐＨ及び容量オスモル濃度の組合せを有していてよい。これらの組合せは代表的なものにすぎず、当業者は本発明に適用可能なさらなる組合せを認識することができる。
【００５５】
【表２−１】
【表２−２】
【００５６】
表１及び２に示す代表的な抽出緩衝液は、場合によって界面活性剤を含む。選択される特定の界面活性剤は、分析対象物及び試料マトリックスの化学的特性を反映する。タンパク質性結合パートナーについては、界面活性剤は、非イオン型であってよく、或いはいくつかの実施形態において、両性イオン型であってよい。核酸結合パートナーについては、界面活性剤は、非イオン、両性イオン、陰イオン又は陽イオン型であってよい。
【００５７】
適切な非イオン性界面活性剤は、アルキルグリコシド、アルキルチオグリコシド、アルキルマルトシド、グルカミド、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマー、ポリオキシエチレンポリオキシアルキレンエーテル、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル、グリセロール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルアミン、アルキルジメチルホスフィンオキシド、アルキルジメチルアミンオキシド及びアルキロールアミドを含むが、これらに限定されない、いくつかのカテゴリーから選択することができる。適切な両性イオン界面活性剤は、アルキルベタイン、アルキルスルホベタイン、アルキルアミノプロパンスルホン酸塩、（アルキルジメチルアミノ）プロパンスルホン酸塩、アリールアミノプロパンスルホン酸塩、アルキルホスホコリン、アミノプロピルアミンアルキルカルボン酸塩、アルキルジメチルグリシン、アルキルホスホコリン、アルキルイミドジプロピオネートアミンオキシド及びポリアルキルジメチルアミンプロピルアミンカルボン酸塩を含むが、これらに限定されない、いくつかのカテゴリーから選択することができる。適切な陰イオン界面活性剤は、脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、胆汁酸、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキルナフタレンスルホン酸塩、ジアルキルスルホコハク酸塩、アルキルジフェニレンジスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテルホスホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ナフタレン硫酸ホルムアルデヒド縮合物、アルキルアミノプロピオン酸塩及びポリカルボン酸塩を含むが、これらに限定されない、いくつかのカテゴリーから選択することができる。適切な陽イオン界面活性剤は、アルキルアミン塩、アルキルアルキル第四級アンモニウム塩及びアルキルアリール第四級アンモニウム塩を含むが、これらに限定されない、いくつかのカテゴリーから選択することができる。
【００５８】
いくつかの実施形態において、抽出緩衝液は、ブロッキング剤を含んでいてよい。あらゆる従来のブロッキング剤を用いることができる。適切なブロッキング剤は、例えば、米国特許第５，８０７，７５２号、同第５，２０２，２６７号、同第５，３９９，５００号、同第５，１０２，７８８号、同第４，９３１，３８５号、同第５，０１７，５５９号、同第４，８１８，６８６号、同第４，６２２，２９３号、同第４，４６８，４６９号並びにカナダ特許第１，３４０，３２０号、国際公開第９７／０５４８５号、欧州特許公開Ａ１第５６６，２０５号、欧州特許公開Ａ２第４４４，６４９号及び欧州特許公開Ａ１第１６５，６６９号に記載されている。代表的なブロッキング剤としては、動物血清（例えば、ヤギ血清）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ゼラチン、ビオチン及び乳汁タンパク質（「ｂｌｏｔｔｏ」）などの血清及び血清アルブミンなどがある。いくつかの実施形態において、本発明は、１〜２５ｇ／Ｌ ＢＳＡ、１〜１０ｇ／Ｌ ＢＳＡ、１〜５ｇ／Ｌ ＢＳＡ又は無ＢＳＡを含む抽出緩衝液を使用する。いくつかの実施形態において、本発明は、１．６ｇ／Ｌ ＢＳＡ、０．２５Ｍ ＨＢＯ３、０．５Ｍ ＮａＣｌ及び０．３％Ｔｗｅｅｎ−２０を含み９．２のｐＨの抽出緩衝液を使用する。いくつかの実施形態において、本発明は、ＢＳＡを含まず、０．２５Ｍ ＨＢＯ３、０．５Ｍ ＮａＣｌ及び０．３％Ｔｗｅｅｎ−２０を含み９．２のｐＨの抽出緩衝液を使用する。
【００５９】
Ｃ．アッセイの方式
本発明は、あらゆる結合アッセイ技術とともに用いることができる。例えば、Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、第３版、Ｗｉｌｄ編、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ（２００５年）並びにＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ、Ｐｒｉｃｅ及びＮｅｗｍａｎ編、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ（１９９７年）を参照のこと。便宜のために、いくつかの結合アッセイ技術の手短な説明を以下に示す。
【００６０】
結合アッセイ技術は、多くの観点で細分することができる。例えば、ある種のアッセイはシグナルの検出のために標識結合パートナーを必要とするが、他のアッセイは分析対象物と結合パートナーとの相互作用に基づいてシグナルを発生する、例えば、質量変化を測定する。ある種のアッセイは、標識結合パートナーを使用しないが、その代わりとして、分析対象物の標識類似体を使用する。
【００６１】
ある種のアッセイは、両結合パートナーが同じ分析対象物に特異的に結合するサンドイッチアッセイを構築するために２つの結合パートナーを使用する。いくつかの実施形態において、２つの結合パートナーは、分析対象物の異なる部分、例えば、異なるエピトープに結合する。
【００６２】
ある種のアッセイは、分析対象物に結合した標識結合パートナーと分析対象物に結合しなかった標識結合パートナーとを区別するために、分離ステップを必要とする。凝集アッセイ、及び標識結合パートナー上の標識が分析対象物の結合により直接的又は間接的に修飾、活性化又は不活性化されるアッセイなどのある種のアッセイは、分離ステップを必要としない。ある種のアッセイは、結合パートナーが付着する支持体を必要とする。支持体、分離、サンドイッチアッセイは、支持体に標識を結合させるために、２つの結合パートナー（第１の結合パートナーは支持体に付着するが、第２の結合パートナーは標識結合パートナーである）を使用し、その後、標識を測定する前に支持体を洗浄して遊離の標識結合パートナーを除去する。
【００６３】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、標識結合パートナーを分析対象物に結合させることにより、分析対象物を検出する。いくつかの実施形態において、本発明は、分析対象物を含むと推定される試料を分析する方法であって、
（ａ）試料をフィルターによりろ過するステップと、
（ｂ）前記分析対象物に対して特異的な標識結合パートナーを加えるステップと、
（ｃ）（ｉ）８以上のｐＨ若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び
（ｉｉ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液
から選択される抽出緩衝液を加えるステップと、
（ｄ）得られる混合物中の標識結合パートナーを測定するステップと
を含み、ステップ（ａ）からステップ（ｃ）までをどのような順序で実施してもよく、ステップ（ｄ）は最後に実施する、上記方法を提供する。
【００６４】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、１つが標識されている２つの結合パートナーの間に分析対象物をサンドイッチすることにより、分析対象物を検出する。特定の実施形態において、本発明は、分析対象物を含むと推定される試料を分析する方法であって、
（ａ）試料をフィルターによりろ過するステップと、
（ｂ）前記分析対象物に対して特異的な第１の標識結合パートナーを加えるステップと、
（ｃ）前記分析対象物に対して特異的な第２の結合パートナーを加えるステップと、
（ｄ）（ｉ）８以上のｐＨ若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び
（ｉｉ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液
から選択される抽出緩衝液を加えるステップと、
（ｅ）第１の結合パートナー、分析対象物、及び第２の結合パートナーの間で形成される複合体中の標識された第１の結合パートナーの量を測定するステップと
を含み、ステップ（ａ）からステップ（ｄ）までをどのような順序で実施してもよく、ステップ（ｅ）は最後に実施する、上記方法を提供する。
【００６５】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、結合パートナーへの結合を競合する標識分析対象物類似体を用いることにより、分析対象物を検出する。様々な実施形態において、分析対象物を含むと推定される試料を分析する方法であって、
（ａ）試料をフィルターによりろ過するステップと、
（ｂ）分析対象物の標識類似体を加えるステップと、
（ｃ）前記分析対象物に対して特異的な結合パートナーを加えるステップと、
（ｄ）（ｉ）８以上のｐＨ若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び
（ｉｉ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液
から選択される抽出緩衝液を加えるステップと、
（ｅ）結合パートナーに結合した分析対象物の標識類似体の量を測定するステップと
を含み、ステップ（ａ）からステップ（ｄ）までをどのような順序で実施してもよく、ステップ（ｅ）は最後に実施する、上記方法を提供する。
【００６６】
本発明の方法は、試料マトリックス効果を低下させるために、様々なステップで修正することができる。例えば、いくつかの実施形態において、検出すべき分析対象物の結合パートナーが試料に接触する前に、試料マトリックス中の成分を除去することができる。いくつかの実施形態において、方法の添加ステップを同時に実施してもよい。いくつかの実施形態において、方法の添加ステップを順次実施してもよい。いくつかの実施形態において、抽出緩衝液を試料に加え、試料をろ過し、複数の結合パートナーを用いる場合にはそのうちの１つが標識されている、結合パートナーを加え、標識結合パートナーを検出する。いくつかの実施形態において、試料をろ過し、抽出緩衝液をろ過済み試料に加え、複数の結合パートナーを用いる場合にはそのうちの１つが標識されている、結合パートナーを加え、標識結合パートナーを検出する。いくつかの実施形態において、抽出緩衝液を試料に加え、試料をろ過し、結合パートナーを加え、分析対象物の標識類似体を加え、標識類似体を検出する。いくつかの実施形態において、試料をろ過し、抽出緩衝液をろ過済み試料に加え、結合パートナーを加え、分析対象物の標識類似体を加え、標識類似体を検出する。いくつかの実施形態において、試料をろ過し、複数の結合パートナーを用いる場合にはそのうちの１つが標識されている、結合パートナーを加え、抽出緩衝液を加え、標識結合パートナーを検出する。いくつかの実施形態において、試料をろ過し、結合パートナーを加え、分析対象物の標識類似体を加え、抽出緩衝液を加え、標識類似体を検出する。他の実施形態は、標識結合パートナーが試料に接触する前に試料マトリックス中の成分を除去する方法を含む。いくつかの実施形態は、試料が、電気化学ルミネセンスを開始することができる電極に接触する前に試料マトリックス中の成分を除去する方法を含む。
【００６７】
いくつかの実施形態は、検出すべき分析対象物の結合パートナーと前記分析対象物との間の平衡化又は反応速度を妨害する試料マトリックスの能力を減弱させる方法を含む。いくつかの実施形態は、標識結合パートナーと検出すべき分析対象物との間の平衡化又は反応速度を妨害する試料マトリックスの能力を減弱させる方法を含む。
【００６８】
いくつかの実施形態は、標識結合パートナー及び／又は分析対象物の標識類似体上の標識の検出に対して影響を及ぼす試料マトリックスの能力を減弱させる方法を含む。
【００６９】
いくつかの実施形態は、電気化学ルミネセンス測定に影響を及ぼす試料マトリックスの能力を減弱させる方法及び装置を含む。いくつかの実施形態は、空気サンプリングシステムを用いて結合アッセイを実施することができる装置に接続するための方法及び装置を含む。
【００７０】
いくつかの実施形態において、複数の分析対象物を同時にアッセイする。他の実施形態において、複数の分析対象物を順次アッセイする。
【００７１】
Ｄ．試料及び分析対象物
試料は、分析すべき源から抜き取ることができる。例えば、試料は、血液、血漿、血清、乳汁、精液、羊水、脳脊髄液、痰、涙液、汗、尿若しくは唾液などの体液又は他の生物学的流体から生じてよい。或いは、試料は、湖又は川などの水源から得た水の試料であってよい。試料は、水、微生物学的増殖培地又は水性緩衝液などの液体に試料を溶解又は懸濁することにより調製してもよい。試料は、土壌、タルク、ベビーパウダー、食品（例えば、果実、野菜及び／又は肉）及び／又はヒト、有蹄類、家禽及び／又は他の動物の糞であってよい。これら及び他の種類の試料は、Ｓｅｗａｒｄ Ｓｔｏｍａｃｈｅｒ（登録商標）装置、音波処理、混合などのマトリックスから分析対象物を除去するための機械的処理、或いは固体を液体マトリックス中に移す他のあらゆる物理的方法を用いて処理することができる。試料源は表面スワブであってよく、例えば、表面をスワブで拭き取り、スワブを液体で洗浄し、それにより、表面から分析対象物を液体中に移すことができる。スワブとしては、スポンジ、ペーパータオル、綿及び他の吸収材を先端に取付けたアプリケータなどがある。試料源は、空気に由来するものであってよく、例えば、空気をろ過し、フィルターを液体により洗浄し、それにより、分析対象物を空気から液体中に移す。空気サンプリング器具は、空気を直接液体中に吹き込んで、分析対象物を移すこともできる。例えば、空気は、郵便物処理機械の近くの郵便室内から採取することができる。
【００７２】
本発明の方法は、試料中のいくつかの種類の分析対象物を検出することができる。結合パートナーが特異的に結合することができる分析対象物の例は、細菌毒素、ウイルス、細菌、タンパク質、ホルモン、ＤＮＡ、ＲＮＡ、薬物、抗生物質、神経毒素及びその代謝物を含むが、これらに限定されない。分析対象物としては、試料中に認められる分子の断片などもある。いくつかの実施形態において、分析対象物は、有機化合物、有機金属化合物又は無機化合物であってよい。分析対象物は、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、ベクター又はオリゴヌクレオチド）、タンパク質（例えば、抗体、抗原、受容体、受容体リガンド又はペプチド）、リポタンパク質、糖タンパク質、リボ若しくはデオキシリボ核タンパク質、ペプチド、多糖、リポ多糖、脂質、脂肪酸、ビタミン、アミノ酸、薬剤化合物（例えば、精神安定薬、バルビツレート、アヘン剤、アルコール、三環系抗うつ薬、ベンゾジアゼピン、抗ウイルス薬、抗真菌薬、抗生物質、ステロイド、強心配糖体又は前出のもののいずれかの代謝物）、ホルモン、成長因子、酵素、補酵素、アポ酵素、ハプテン、レクチン、基質、細胞代謝物、細胞成分又はオルガネラ（例えば、膜、細胞壁、リボソーム、染色体、ミトコンドリア、細胞骨格成分）であってよい。他の実施形態において、分析対象物は、毒素、農薬、除草剤又は環境汚染物質である。
【００７３】
分析対象物のさらなる例は、アエロモナス・ヒドロフィア（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉａ）などのアエロモナス種、炭疸菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）のボツリヌス菌毒素産生種、ウシ流産菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ）、マルタ熱菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ）、ブタ流産菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｓｕｉｓ）、鼻疽菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｍａｌｌｅｉ（以前はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｍａｌｌｅｉ））、キャンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）、オウム病クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｓｉｔｔａｃｉ）、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、ウェルシュ（Ｗｅｌｃｈ）菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、コクシジオイデス・ポサダシイ（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｐｏｓａｄａｓｉｉ）、カウドリア・ルミナンチウム（Ｃｏｗｄｒｉａ ｒｕｍｉｎａｎｔｉｕｍ）（心水病）、コクシエラ・バーネッティイ（Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｂｕｒｎｅｔｉｉ）、大腸菌−腸管毒産生性（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ−ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ）（ＥＴＥＣ）、大腸菌−腸疾患発現性（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ−ｅｎｔｅｒｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ）（ＥＰＥＣ）、大腸菌−Ｏ１５７：Ｈ７腸管出血性（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ−Ｏ１５７：Ｈ７ ｅｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ）（ＥＨＥＣ）などの腸内毒性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）群（ＥＥＣ群）、エーリッヒア・チャフェンシス（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｃｈａｆｆｅｅｎｉｓｉｓ）などのエーリッヒア（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ）種、野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）、レジュネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、リベロバクター・アフリカヌス（Ｌｉｂｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｆｒｉｃａｎｕｓ）、リベロバクター・アジアティカス（Ｌｉｂｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｓｉａｔｉｃｕｓ）、リステリア・モノシトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、シトロバクター（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）、アエロバクター（Ａｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、プロビデンシア（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ）及びセラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）などの種々雑多な腸内細菌、ウシ型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ）、ヒト型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコプラズマ・カプリコラム（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｒｉｃｏｌｕｍ）、牛肺疫菌標準亜種（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｍｙｃｏｉｄｅｓ ｓｓｐ ｍｙｃｏｉｄｅｓ）、ペロノスクレロスポラ・フィリッピンシス（Ｐｅｒｏｎｏｓｃｌｅｒｏｓｐｏｒａ ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｎｓｉｓ）、ファコプソラ・パチリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）、プレシオモナス・シゲロイデス（Ｐｌｅｓｉｏｍｏｎａｓ ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ）、青枯病菌（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）品種３、次亜種２、発疹チフスリケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ）、斑点熱リケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ）、サルモネラ種（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、シュレロフトラ・レイシアエ・バル・ゼアエ（Ｓｃｈｌｅｒｏｐｈｔｈｏｒａ ｒａｙｓｓｉａｅ ｖａｒ ｚｅａｅ）、赤痢菌種（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｐｅｃｉｅｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ジャガイモ癌腫病菌（Ｓｙｎｃｈｙｔｒｉｕｍ ｅｎｄｏｂｉｏｔｉｃｕｍ）、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）ｎｏｎ−Ｏ１、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）Ｏ１、ビブリオ・パラヘモリティカス（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）及び他のビブリオ菌、ビブリオ・バルニフィカス（Ｖｉｂｒｉｏ ｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ）、キサントモナス・オリザエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ）、柑橘類ピアス氏病菌（Ｘｙｌｅｌｌａ ｆａｓｔｉｄｉｏｓａ）（柑橘類斑入病菌株）、エルジニア・エンテロコリティカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）及び偽結核エルジニア菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）及びペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ）などの細菌病原体を含む。
【００７４】
分析対象物のさらなる例は、アフリカウマ病ウイルス、アフリカ豚コレラウイルス、アカバネウイルス、鳥類インフルエンザウイルス（高度に病原性）、ブハンジャ（Ｂｈａｎｊａ）ウイルス、ブルータングウイルス（エキゾチック）、ラクダ痘ウイルス、オナガザルヘルペスヘルペスウイルス１、チクングニヤウイルス、古典的ブタ熱ウイルス、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、クリミア−コンゴ出血熱ウイルス、デング熱ウイルス、デュグベ（Ｄｕｇｂｅ）ウイルス、エボラウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、マリーバレー脳炎及びベネズエラウマ脳炎ウイルスなどの脳炎ウイルス、ウマ麻疹ウイルス、フレキサル（Ｆｌｅｘａｌ）ウイルス、口蹄疫ウイルス、ゲルミストン（Ｇｅｒｍｉｓｔｏｎ）ウイルス、ヤギ痘ウイルス、ハンターン又は他のハンタウイルス、ヘンドラウイルス、イシククルウイルス、コウタンゴ（Ｋｏｕｔａｎｇｏ）ウイルス、ラッサ熱ウイルス、跳躍病ウイルス、ランピースキン病ウイルス、リンパ球脈絡髄膜炎ウイルス、悪性カタル熱ウイルス（エキゾチック）、マルブルクウイルス、マヤロウイルス、メナングルウイルス、サル痘ウイルス、ムカンボ（Ｍｕｃａｍｂｏ）ウイルス、ニューカッスル病ウイルス（ＶＶＮＤ）、ニパーウイルス、ノーウォークウイルス群、オロプーシェウイルス、オルンゴ（Ｏｒｕｎｇｏ）ウイルス、小反芻獣疫（Ｐｅｓｔｅ Ｄｅｓ Ｐｅｔｉｔｓ Ｒｕｍｉｎａｎｔｓ）ウイルス、ピリーウイルス、プラムポックスポティウイルス、ポリオウイルス、ポテトウイルス、ポーワッサンウイルス、リフトバレー熱ウイルス、牛疫ウイルス、ロタウイルス、セムリキ森林ウイルス、ヒツジ痘ウイルス、Ｆｌｅｘａｌ、Ｇｕａｎａｒｉｔｏ、Ｊｕｎｉｎ、Ｍａｃｈｕｐｏ及びＳａｂｉａなどの南アフリカ出血熱ウイルス、スポンドウェニ（Ｓｐｏｎｄｗｅｎｉ）ウイルス、ブタ水疱病ウイルス、中央ヨーロッパダニ媒介脳炎、極東ダニ媒介脳炎、ロシア春及び夏脳炎、キャサヌール森林病並びにオムスク出血熱などのダニ媒介脳炎複合（フラビ）ウイルス、大痘瘡ウイルス（痘瘡ウイルス）、小痘瘡ウイルス（アラストリム）、水疱性口内炎ウイルス（エキゾチック）、ウェセルスブロンウイルス、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、ＳＶ４０、ＪＣ及びＢＫなどのポリオーマウイルス属、並びに乳頭腫ウイルス属（例えば、ＨＰＶ）を含むパポーバウイルス科のウイルス、パルボウイルス（例えば、Ｂ１９及びＲＡ−１）、並びにライノウイルス及びコクサッキーＢを含むピコルナウイリス科のウイルスなどのウイルスを含む。標的核酸配列を含むことができる他のウイルスは、アデノウイルス、アレナウイルス、アルテリウイルス、アストロウイルス、バキュロウイルス、バンドナウイルス、バルナウイルス、ビルナウイルス、ブロモウイルス、ブニヤウイルス、カリチウイルス、カピロウイルス、カーラウイルス、カリモウイルス、サーコウイルス、クロステロウイルス、コモウイルス、コロナウイルス、コルチコウイルス、シストウイルス、デルタウイルス、ジアントウイルス、エナモウイルス、フィロウイルス、フラビウイルス、フロウイルス、フセロウイルス、ジェミニウイルス、ヘパドナウイルス、ヘルペスウイルス、ホルデイウイルス、ハイポウイルス、イダエオウイルス、イノウイルス、イリドウイルス、レビウイルス、リポスリクスウイルス、ルテオウイルス、マクロモウイルス、マラフィウイルス、ミクロウイルス、ミオウイルス、ネクロウイルス、ノダウイルス、オルトミクソウイルス、パラミクソウイルス、パルティティウイルス、パルボウイルス、フィコドナウイルス、プラズマウイルス、ポドウイルス、ポリドナウイルス、ポテクスウイルス、ポティウイルス、ポックスウイルス、レオウイルス、レトロウイルス、ラブドウイルス、リジディオウイルス、セキウイルス、シフォウイルス、ソベモウイルス、テクティウイルス、テヌイウイルス、テトラウイルス、トバモウイルス、トブラウイルス、トガウイルス、トンブスウイルス、トティウイルス、ティモウイルス及びアンブラウイルスから選択される科に属する上で言及しなかった種を含む。
【００７５】
分析対象物のさらなる例は、アブリン、アフラトキシン、ボツリヌス神経毒素、シグアテラ毒素、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）イプシロン毒素、コノトキシン、ジアセトキシスカーペノール、ジフテリア毒素、グラヤノトキシン、アマニティンス、ギロミトリン及びオレラニンなどのマッシュルーム毒素、フィトヘマグルチニン、ピロリジジンアルカロイド、リシン、サキシトキシン、サキシトキシン、アカダ酸、ディノフィシス毒素、ペクトノトキシン、イエッソトキシン、ブレベトキシン及びドモ酸などの貝毒素（麻痺性、下痢、神経毒性又は健忘）、志賀毒素、志賀毒素様リボソーム不活性化タンパク質、ヘビ毒素、ブドウ球菌腸毒素、Ｔ−２毒素及びテトロドトキシンなどの毒素を含む。
【００７６】
分析対象物のさらなる例は、スクラピー、クールー、クロイツフェルト−ヤコブ病（ＣＪＤ）、変異型クロイツフェルト−ヤコブ病（ｖＣＪＤ）、慢性消耗病、致命的家族性不眠症（ＦＦＩ）、ゲルストマン−シュトロイスラー−シャインカー症候群（ＧＳＳ）及び牛海綿状脳症（ＢＳＥ又は狂牛病）を含む伝達性牛海綿状脳症の病原体のようなプリオンタンパク質を含む。
【００７７】
分析対象物のさらなる例は、アカントアメーバ及び他の自由生活アメーバ、アニサキス種並びに他の関連蠕虫回虫（Ａｓｃａｒｉｓ ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ）及びヒト鞭虫（Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｔｒｉｃｈｉｕｔａ）、クリプトスポリジウム・パーバム、サイクロスポーラカエタネンシス（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒａ ｃａｙｅｔａｎｅｎｓｉｓ）、裂頭条虫（Ｄｉｐｈｙｌｌｏｂｏｔｈｒｉｕｍ）種、赤痢アメーバ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、腎虫（Ｅｕｓｔｒｏｎｇｙｌｉｄｅｓ）種、ランブル鞭毛虫（Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ）、住血吸虫（Ｎａｎｏｐｈｙｅｔｕｓ）種、住血吸虫（Ｓｈｉｓｔｏｓｏｍａ）種、トキソプラズマ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）及び旋毛虫属（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ）などの寄生原虫及び蠕虫を含む。
【００７８】
分析対象物のさらなる例は、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、ブラストミセス・デルマチチジス（Ｂａｌｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、コクシジオイデス・ポサダシイイ（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｐｏｓａｄａｓｉｉ）、クリプトコックス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、メイズラスト（Ｍａｉｚｅ ｒｕｓｔ）、イネいもち病、イネ褐斑病、ライブラスト（Ｒｙｅ ｂｌａｓｔ）、スポロトリクス・シェンキイ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ）及びコムギカビなどの真菌を含む。
【００７９】
分析対象物のさらなる例は、
（１）米国保健福祉省（ＨＨＳ）及び米国農務省（ＵＳＤＡ）選択因子（７ＣＦＲ§３３１、９Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１２１及び４２Ｃ．Ｆ．Ｒ．§７３）のいずれかの感染性及び／又は複製コンピテント形をエンコードすることができる核酸（合成又は天然由来、連続的又は断片化、宿主染色体中又は発現ベクター中）、
（２）核酸が以下の場合に、列挙した毒素のいずれかの機能型をエンコードする核酸（合成又は天然由来）
（ｉ）ベクター中又は宿主染色体中に存在し、
（ｉｉ）ｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏで発現することができる、
及び／又は
（３）細胞調節事象に関与する以下の核酸−タンパク質複合体
（ｉ）ウイルス複製の前駆体であるウイルス核酸−タンパク質複合体、
（ｉｉ）ＲＮＡ構造を修飾し、タンパク質転写事象を調節するＲＮＡ−タンパク質複合体、
（ｉｉｉ）ホルモン又は二次細胞シグナリング分子により調節される核酸−タンパク質複合体、
（４）遺伝的に修飾されたウイルス、古細菌、細菌、真菌
などの遺伝子因子、組換え核酸及び組換え生物を含む。
【００８０】
分析対象物のさらなる例は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭなどの上述の分析対象物の例に対する免疫応答分子を含む。
【００８１】
Ｅ．結合パートナー
１．結合パートナーの種類
結合パートナーとそれらの標的分析対象物の例は、相補的核酸配列（例えば、互いにハイブリッド形成する２つのＤＮＡ配列、互いにハイブリッド形成する２つのＲＮＡ配列、互いにハイブリッド形成するＤＮＡ及びＲＮＡ配列）、抗体と抗原、受容体とリガンド（例えば、ＴＮＦとＴＮＦｒ−１、ＣＤ１４２とＶＩＩａ因子、Ｂ７−２とＣＤ２８、ＨＩＶ−１とＣＤ４、ＡＴＲ／ＴＥＭ８若しくはＣＭＧと炭疸毒素の防御抗原部分）、酵素と基質、又は分子と結合タンパク質（例えば、ビタミンＢ１２と内因性因子、葉酸と葉酸結合タンパク質）を含むが、これらに限定されない。結合パートナーのさらなる例は、結合タンパク質、例えば、ビタミンＢ１２結合タンパク質、基本ドメインのスーパークラス、亜鉛配位ＤＮＡ結合ドメイン、ヘリックス−ターン−ヘリックス、副溝接触を有するベータスカホールド因子、他の転写因子などのＤＮＡ結合タンパク質を含むが、これらに限定されない。
【００８２】
いくつかの実施形態において、結合パートナーは、モノクローナル抗体又は１組のポリクローナル抗体であってよい抗体である。Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ ａｎｄ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ １４５０８、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ．、６３１７８（２００２／２００３）、Ｔｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ−Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｂｅｓ ａｎｄ Ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｔｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏ．、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ（２００５）、Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ ｔｏ Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅ Ｙｏｕｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｉｎｖｉｔｏｇｅｎ（商標）Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１６００ Ｆａｒａｄａｙ Ａｖｅｎｕｅ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ９２００８（２００３）、Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｃａｔａｌｏｇ、ＫＰＬ、Ｔｗｏ Ｃｅｓｓｎａ Ｃｏｕｒｔ、Ｇａｉｔｈｅｒｂｕｒｇ、ＭＤ．２０８７９（２００４及び２００５）並びにＰｉｅｒｃｅ Ｃａｔａｌｏｇ、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ １１７、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＩＩ．６１１０５（２００５）などの様々なカタログにおける一覧により例示されているように、問題の様々な分析対象物に結合する多数のモノクローナル抗体が入手可能である。
【００８３】
他の代表的なモノクローナル抗体は、β−アクチン、ＤＮＡ、ジゴキシン、インスリン、プロゲステロン、ヒト白血球マーカー、ヒトインターロイキン−１０、ヒトインターフェロン、ヒトフィブリノーゲン、ｐ５３、Ｂ型肝炎ウイルス若しくはその一部、ＨＩＶウイルス若しくはその一部、腫瘍壊死因子又はＦＫ−５０６に特異的に結合するものを含む。特定の実施形態において、モノクローナル抗体は、Ｔ４、Ｔ３、遊離Ｔ３、遊離Ｔ４、ＴＳＨ（甲状腺刺激ホルモン）、チログロブリン、ＴＳＨ受容体、プロラクチン、ＬＨ（黄体形成ホルモン）、ＦＳＨ（濾胞刺激ホルモン）、テストステロン、プロゲステロン、エストラジオール、ｈＣＧ（ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン）、ｈＣＧ＋β、ＳＨＢＧ（性ホルモン結合グロブリン）、ＤＨＥＡ−Ｓ（硫酸デヒドロエピアンドロステロン）、ｈＧＨ（ヒト成長ホルモン）、ＡＣＴＨ（副腎刺激ホルモン）、コルチソル、インスリン、フェリチン、葉酸塩、ＲＢＣ（赤血球）葉酸塩、ビタミンＢ１２、ビタミンＤ、Ｃ−ペプチド、トロポニンＴ、ＣＫ−ＭＢ（クレアチンキナーゼミオグロビン）、ミオグロビン、プロ−ＢＮＰ（脳利尿ペプチド）、ＨｂｓＡｇ（Ｂ型肝炎表面抗原）、ＨｂｅＡｇ（Ｂ型肝炎ｅ抗原）、ＨＩＶ抗原、複合ＨＩＶ、Ｈ．ピロリ、β−ＣｒｏｓＬａｐｓ、オステオカルシン、ＰＴＨ（副甲状腺ホルモン）、ＩｇＥ、ジゴキシン、ジギトキシン、ＡＦＰ（α−フェトプロテイン）、ＣＥＡ（癌胎児抗原）、ＰＳＡ（前立腺特異抗原）、遊離ＰＳＡ、ＣＡ（癌抗原）１９−９、ＣＡ１２−５、ＣＡ７２−４、ｃｙｆｒａ２１−１、ＮＳＥ（ニューロン特異エノラーゼ）、Ｓ１００、Ｐ１ＮＰ（プロコラーゲンタイプ１Ｎ−プロペプチド）、ＰＡＰＰ−Ａ（妊娠関連血漿プロテインＡ）、Ｌｐ−ＰＬＡ２（リポタンパク質関連ホスホリパーゼＡ２）、ｓＣＤ４０Ｌ（可溶性ＣＤ４０リガンド）、ＩＬ１８、リシン及びＳｕｒｖｉｖｉｎのうちの少なくとも１つに特異的に結合する抗体から選択される。
【００８４】
他の代表的なモノクローナル抗体は、上で代表的な分析対象物として述べた病原体、ウイルス、毒素、原生動物、蠕虫、プリオン、細菌、古細菌及び真菌に特異的に結合するものを含む。
【００８５】
他の代表的なモノクローナル抗体は、抗ＴＰＯ（抗甲状腺ペルオキシダーゼ抗体）、抗ＨＢｃ（Ｂ型肝炎ｃ抗原）、抗ＨＢｃ／ＩｇＭ、抗ＨＡＶ（Ａ型肝炎ウイルス）、抗ＨＡＶ／ＩｇＭ、抗ＨＣＶ（Ｃ型肝炎ウイルス）、抗ＨＩＶ、抗ＨＩＶｐ−２４、抗風疹ＩｇＧ、抗風疹ＩｇＭ、抗トキソプラズマ症ＩｇＧ、抗トキソプラズマ症ＩｇＭ、抗ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）ＩｇＧ、抗ＣＭＶＩｇＭ、抗ＨＧＶ（Ｇ型肝炎ウイルス）、抗炭疸菌及び抗ＨＴＬＶ（ヒトＴリンパ栄養ウイルス）を含む。
【００８６】
２．支持体
いくつかの実施形態において、結合パートナーは、なんらかの従来の手段、例えば、吸着、吸収、非共有結合、架橋剤による共有結合、又は支持体若しくは第１の結合パートナーのいずれか、若しくは両方の化学的活性化に起因する共有結合により、支持体上に固定化させることができる。いくつかの実施形態において、支持体による第１の結合パートナーの固定化は、結合対を用いることによって達成することができる。例えば、結合対の１つのメンバー、例えば、ストレプトアビジン又はアビジンを支持体に結合させることができ、同じ結合対の他のメンバー、例えば、ビオチンを第１の結合パートナーに結合させることができる。第１の結合パートナーを支持体上に固定化する適切な手段は、例えば、Ｐｉｅｒｃｅカタログ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ １１７、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＩＩ．６１１０５、１９９４）に開示されている。
【００８７】
結合パートナーとともに用いることができる支持体の他の例は、膜、ビーズ、粒子、電極、又は容器の壁若しくは表面を含むが、これらに限定されない。支持体は、ニトロセルロース、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、酢酸エチルビニル（ＥＶＡ）、ガラス、炭素、ガラス質炭素、カーボンブラック、カーボンナノチューブ若しくはフィブリル、白金、パラジウム、金、銀、塩化銀、イリジウム又はロジウムなどの、結合パートナーが固定化される材料を含んでいてよい。
【００８８】
いくつかの実施形態において、支持体は、ポリスチレンビーズ又は磁化可能ビーズなどのビーズである。様々な実施形態において、ビーズは、多くの異なるサイズ、例えば、３ｍｍ以上、３ｍｍ以下、１ｍｍ以下、０．１ｍｍ以下、１００μｍ以下、１０μｍ以下、５μｍ以下、２．８μｍ、１μｍ、１μｍ以下、０．５μｍ以下、０．１μｍ又は０．１μｍ以下を有していてよい。ビーズのサイズは、０．０１μｍ〜５ｍｍ、０．１μｍ〜３ｍｍ、１μｍ〜３μｍ又は２．８μｍ〜５μｍの範囲にあってもよい。特定の実施形態において、ビーズは主に球状である。特定の実施形態において、ビーズは球状でなくてよく、非球状ビーズについては、上の寸法はビーズの内部にとどまることができる最大直線部分の長さを指す。
【００８９】
特定の実施形態において、支持体は、結合パートナーの溶解、結合、検出分子の非特異的結合の減少、又は検出工程に不可欠な制御分子の結合を促進するためのさらなるポリマーコーティングを有していてよい。
【００９０】
他の実施形態において、支持体は、微小遠心管又は多ウエルプレートの少なくとも１つのウエルである。
【００９１】
３．結合パートナーの標識
いくつかの実施形態において、結合パートナーを標識することができる。検出可能な標識は、例えば、発蛍光団、発色団、スピン標識、放射性同位元素、酵素、量子ドット、ビーズ、アミノヘキシル、ピレン、抗体により検出可能な抗原決定基、化学ルミネセンス部分、若しくは電気化学ルミネセンス部分（ＥＣＬ部分）、ハプテン、ルミネセンス標識、放射性標識、量子ドット、ビーズ、アミノヘキシル、ピレン、金属粒子、スピン標識及び色素であってよい。代表的な標識は、Ｈｅｍｍｉｌａら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、第２６巻、２８３〜２９０頁（１９９３）、Ｋａｋａｂａｋｏｓら、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、第３８巻、３３８〜３４２頁（１９９２）、Ｘｕら、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、２０３８〜２０４３頁（１９９２）、Ｈｅｍｍｉｌａら、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．、第４８巻、３８９〜４００頁（１９８８）、Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ９ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ １９９６、Ｊ．Ｗ．Ｈａｓｔｉｎｇｓら編、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９６、Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｋｎｏｘ Ｖａｎ Ｄｙｒｅ編、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、１９８５、Ｉ．Ｈｅｍｍｉｌａ、Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ、第１１７巻、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９１、及びＢｌａｃｋｂｕｒｎら、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、第３７巻、１５３４頁（１９９１）に開示されている。
【００９２】
標識結合パートナーは、蛍光測定、時間分解蛍光測定及び／又は蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）測定に有用なものなどの発蛍光団で標識されていてよい。本発明の方法に用いることができる発蛍光団は、ＩＲ色素、Ｄｙｏｍｉｃｓ色素、フィコエリトリン、カスケードブルー、Ｏｒｅｇｏｎグリーン４８８、パシフィックブルー、ローダミングリーンなどのローダミン誘導体、５（６）−カルボキシフルオロセイン、シアニン色素（すなわち、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７）（ジエチルアミノ）クマリン、フルオレセイン（すなわち、ＦＩＴＣ）、テトラメチルローダミン、リスマリン、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、ＡＭＣＡ、ＴＲＩＴＣ、ｂｏｄｉｐｙ色素、Ａｌｅｘａ色素、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ＧＦＰ類似体、ｒｅｅｆ ｃｏｒａｌ蛍光タンパク質（ＲＣＦＰｓ）、ＲＣＦＰ類似体及び米国特許第５，７８３，６７３号、同第５，２７２，２５７号及び同第５，１７１，８４３号に記載されているｔａｎｄｅｍ色素を含むが、これらに限定されない。
【００９３】
本発明に用いることができる酵素標識は、ダイズペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ及び西洋ワサビペルオキシダーゼを含むが、これらに限定されない。
【００９４】
本発明に用いることができる放射性同位元素は、１３１Ｉ、３２Ｐ及び３５Ｓを含むが、これらに限定されない。
【００９５】
本発明に用いることができる化学ルミネセンス部分は、アクリジニウム、ルミノール、イソルミノール、アクリジニウムエステル、アクリジンジオン１，２−ジオキセタン、ピリドピリダジンを含むが、これらに限定されない。
【００９６】
標識結合パートナーのさらなる例は、電気化学ルミネセンス（ＥＣＬ）アッセイにおけるシグナルの発生に有用である部分、官能基又は分子で標識されている結合パートナーを含む。ＥＣＬ部分は、電気化学エネルギー源に直接曝露させることにより、電磁波を繰返し放出するように誘導することができるあらゆる化合物であってよい。そのような部分、官能基又は分子は、米国特許第５，９６２，２１８号、同第５，９４５，３４４号、同第５，９３５，７７９号、同第５，８５８，６７６号、同第５，８４６，４８５号、同第５，８１１，２３６号、同第５，８０４，４００号、同第５，７９８，０８３号、同第５，７７９，９７６号、同第５，７７０，４５９号、同第５，７４６，９７４号、同第５，７４４，３６７号、同第５，７３１，１４７号、同第５，７２０，９２２号、同第５，７１６，７８１号、同第５，７１４，０８９号、同第５，７０５，４０２号、同第５，７００，４２７号、同第５，６８６，２４４号、同第５，６７９，５１９号、同第５，６４３，７１３号、同第５，６４１，６２３号、同第５，６３２，９５６号、同第５，６２４，６３７号、同第５，６１０，０７５号、同第５，５９７，９１０号、同第５，５９１，５８１号、同第５，５４３，１１２号、同第５，４６６，４１６号、同第５，４５３，３５６号、同第５，３１０，６８７号、同第５，２９６，１９１号、同第５，２４７，２４３号、同第５，２３８，８０８号、同第５，２２１，６０５号、同第５，１８９，５４９号、同第５，１４７，８０６号、同第５，０９３，２６８号、同第５，０６８，０８８号、同第５，０６１，４４５号及び同第６，８０８，９３９号、Ｄｏｎｇ Ｌ．ら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、第２３６号、３４４〜３４７頁（１９９６年）、Ｂｌｏｈｍら、Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、第２１巻、４号、６０頁（１９９６年）、Ｊａｍｅｉｓｏｎら、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．、第６８巻、１２９８〜１３０２頁（１９９６年）、Ｋｉｂｂｅｙら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、第１４巻、３号、２５９〜２６０頁（１９９６年）、Ｙｕら、Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、第６２巻、２号、５８７〜５９２頁（１９９６）、Ｗｉｌｌｉａｍｓ、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２６頁（１９９６年１月）、Ｄａｒｓｌｅｙら、Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、第２１巻、１号、１３３頁（１９９６年１月）、Ｋｏｂｒｙｎｓｋｉら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第３巻、１号、４２〜４６頁（１９９６年１月）、Ｗｉｌｌｉａｍｓ、ＩＶＤ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２８〜３１頁（１９９５年１１月）、Ｄｅａｖｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ、第３７７号、７５８〜７６０頁（１９９５年１０月２６日）、Ｙｕら、ＢｉｏＭｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、第２０巻、１０号、２０頁（１９９５年１０月）、Ｋｉｂｂｅｙら、ＢｉｏＭｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、第２０巻、９号、１１６頁（１９９５年９月）、Ｓｃｈｕｔｚｂａｎｋら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、第３３巻、２０３６〜２０４１頁（１９９５年８月）、Ｓｔｅｒｎら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２８巻、４７０〜４７２頁（１９９５年８月）、Ｃａｒｌｏｗｉｃｚ、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｅｗｓ、第２１巻、８号、１〜２頁（１９９５年８月）、Ｇａｔｔｏ−Ｍｅｎｋｉｎｇら、Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ ＆ Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ、第１０巻、５０１〜５０７頁（１９９５年７月）、Ｙｕら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ、第１０巻、２３９〜２４５頁（１９９５年）、Ｖａｎ Ｇｅｍｅｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ、第４９巻、１５７〜１６８頁（１９９４年）、Ｙａｎｇら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、第１２巻、１９３〜１９４頁（１９９４）、Ｋｅｎｔｅｎら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第３８巻、８７３〜８７９頁（１９９２年）、Ｋｅｎｔｅｎ、Ｎｏｎ−ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ Ｌａｂｅｌｉｎｇ ａｎｄ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、Ｋｅｓｓｌｅｒ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、Ｂｅｒｌｉｎ、１７５〜１７９頁（１９９２年）、Ｇｕｄｉｂａｎｄｅら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、第６巻、４９５〜５０３頁（１９９２年）、Ｋｅｎｔｅｎら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第３７巻、１６２６〜１６３２頁（１９９１年）、Ｂｌａｃｋｂｕｒｎら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第３７巻、１５３４〜１５３９頁（１９９１年）、Ｅｌｅｃｔｒｏｇｅｎｅｒａｔｅｄ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ、Ｂａｒｄ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ（２００４年）、並びにＫｎｉｇｈｔ Ａ．及びＧｒｅｅｎｗａｙ Ｇ．、Ａｎａｌｙｓｔ、第１１９巻、８７９〜８９０頁に開示されている。
【００９７】
特定の実施形態において、電気化学ルミネセンス部分は、ルテニウム、オスミウム、レニウム、イリジウム、ロジウム、白金、パラジウム、モリブデン及びテクネチウムなどの金属を含んでいてよい。特定の実施形態において、電気化学ルミネセンス部分は、セリウム、ジスプロシウム、エルビウム、ユーロピウム、ガドリニウム、ホルミウム、ランタン、ルテチウム、ネオジム、プラセオジウム、プロメチウム、テルビウム、ツリウム及びイッテルビウムなどの希土類金属を含んでいてよい。特定の実施形態において、電気化学ルミネセンス部分は、ルテニウム又はオスミウムなどの金属を含んでいてよい。特定の実施形態において、結合パートナーは、ルテニウム（ＩＩ）トリスビピリジン及びその塩（［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋）などのトリスビピリジルルテニウム基のようなルテニウム部分で標識することができる。他の代表的なＥＣＬ部分は、構造が
【化１】
である［Ｒｕ（スルホ−ｂｐｙ）２ｂｐｙ］２＋であってよい［式中、Ｗは、ＮＨＳエステル、活性化カルボキシル、アミノ基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、ヒドラジド、マレイミド又はホスホルアミドなどの共有結合を形成するように、生物学的物質、結合パートナー、酵素基質又は他のアッセイ試薬と反応することができるＥＣＬ部分に結合した官能基である］。［Ｒｕ（スルホ−ｂｐｙ）２ｂｐｙ］２＋は、示した構造の他の塩も含む。
【００９８】
ＩＩＩ．装置
いくつかの実施形態において、本発明は、上述の方法を実施するための装置を提供する。
【００９９】
いくつかの実施形態において、本発明は、
（ａ）サンプリング器具及びフィルターから流れるように方向が定められた第１の一方向弁を介してサンプリング器具に流体的に接続されているフィルター、
（ｂ）第１の一方向弁とフィルターとの間の箇所に流体的に接続され、フィルターから廃棄物管路に向かって流れるように方向が定められた第２の一方向弁に流体的に接続されている廃棄物管路、
（ｃ）液体の流れをフィルター中に不可逆的に駆動させることができるように配置されているポンプ、
（ｄ）前記１つ又は複数の分析対象物に対して特異的な標識結合パートナーを収容する結合試薬容器、
（ｅ）前記フィルターからのろ液を前記結合試薬容器に導入する手段、及び
（ｆ）標識結合パートナーを測定する手段
を含む、１つ又は複数の分析対象物を含むと推定される試料の分析用の装置を提供する。
【０１００】
様々な実施形態において、本発明は、
（ａ）サンプリング器具に流体的に接続されているフィルター、
（ｂ）液体の流れをフィルター中に駆動させることができるように配置されているポンプ、
（ｃ）前記１つ又は複数の分析対象物に対して特異的な標識結合パートナーを収容する結合試薬容器、
（ｄ）前記フィルターからのろ液を前記結合試薬容器に導入する手段、及び
（ｅ）標識結合パートナーを測定する手段
を含む、１つ又は複数の分析対象物を含むと推定される試料の分析用の装置を提供する。
【０１０１】
特定の実施形態において、本発明は、
（ａ）フィルターにより下部容器から流体的に封じられている上部容器、及び
（ｂ）上部容器を経ることなく、下部容器に出入りすることができる開口部
を含む試料ろ過器具を提供する。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、装置は、１回又は複数回使用することができる電極を含む。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、サンプリング器具は、空気サンプラーである。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、試料ろ過器具は、半径方向対称性を有する。他の実施形態において、試料ろ過器具の外部は、半径方向対称性を有さない。
【０１０５】
標識結合パートナーを測定するためにルミネセンス（例えば、電気化学ルミネセンス、蛍光又は化学ルミネセンス）を使用する実施形態において、装置は、ルミネセンスの放射を測定するための光検出器、例えば、フォトダイオード、ＣＣＤ若しくはＣＭＯＳセンサ、及び／又は光電子倍増管を含んでいてよい。
【０１０６】
１．結合試薬容器
いくつかの実施形態において、結合試薬容器は、乾燥組成物を収容する。乾燥組成物の例は、組成物の総重量に対して３重量％以下の含水率を有する組成物及び組成物の総重量に対して１重量％から３重量％の含水率を有する組成物を含む。いくつかの実施形態において、結合試薬容器は、２５℃で９５％の相対湿度で少なくとも４週間にわたり容器内の乾燥組成物を乾燥した状態に維持するのに十分な水分バリアを含む。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、乾燥組成物は、結合アッセイ及び陽性対照に用いる組成物を含む。
【０１０８】
特定の実施形態において、結合試薬容器は、凍結乾燥緩衝液をさらに含んでいてよい。凍結乾燥緩衝液は、当技術分野でよく知られており、リン酸緩衝剤、及びトレハロース若しくはスクロースなどの１つ又は複数の凍結防止剤を含んでいてよい。
【０１０９】
特定の実施形態において、結合試薬容器は、第２の結合パートナー、分析対象物又は分析対象物の類似体の支持体への非特異的結合を阻害又は減少させるために処理することができるアッセイ支持体を含む。あらゆる従来の阻害剤を用いることができる。適切な阻害剤は、例えば、米国特許第５，８０７，７５２号、同第５，２０２，２６７号、同第５，３９９，５００号、同第５，１０２，７８８号、同第４，９３１，３８５号、同第５，０１７，５５９号、同第４，８１８，６８６号、同第４，６２２，２９３号、同第４，４６８，４６９号、カナダ特許第１，３４０，３２０号、国際公開第９７／０５４８５号、欧州特許公開Ａ１第５６６，２０５号、欧州特許公開Ａ２第４４４，６４９号、欧州特許公開Ａ１第１６５，６６９号に記載されている。代表的な阻害剤は、動物血清（例えば、ヤギ血清）、ウシ血清アルブミンなどの血清及び血清アルブミン、ゼラチン、ビオチン並びに乳汁タンパク質（「ｂｌｏｔｔｏ」）を含む。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、結合試薬容器は、各ウエルが１つ又は複数の乾燥組成物を含むことができる、例えば、２４、９６、３８４、１５３６又は６１４４ウエルを含む多ウエルプレートであってよい。特定の実施形態において、機器に用いられるような多ウエルプレートは、底部の寸法に関するＡＮＳＩ／ＳＢＳ２０００４マイクロプレート規格（ＡＮＳＩ／ＳＢＳ１−２００４）に規定されているほぼ最大寸法より大きくない外側寸法を有していてよい。機器に用いられるような多ウエルプレートの第３の寸法（すなわち、高さ）は、約４４ｍｍより大きくない外側寸法を有していてよい。様々な実施形態において、容器は、直径が約９ｍｍ以下で、高さが約４０ｍｍ以下の管であってよい。いくつかの実施形態において、容器は、約８．６ｍｍの最大外径及び約３３．８ｍｍの高さを有する管であってよい。いくつかの実施形態において、結合試薬容器の２次元アレイは、上の寸法の多ウエルプレート内にあるホルダーに入れることができる。様々な実施形態において、ホルダー中の容器の２次元アレイは、高さが３５ｍｍであってよい。
【０１１１】
いくつかの実施形態において、結合試薬容器は、密封することができる。いくつかの実施形態において、容器は、容器の開口部に押し込むことができるＥＶＡ又はＳａｎｔｏｐｒｅｎｅ（登録商標）などのエラストマー、熱硬化性又は熱可塑性材料で密封することができる。いくつかの実施形態において、結合試薬容器は、フォイルマイクロプレートシールなどの金属層を含む積層材で密封することができる。様々な実施形態において、結合試薬容器は、容器にヒートシールすることができる積層材などの熱により変形できる層を含む積層材で密封することができる。いくつかの実施形態において、結合試薬容器は、容器に積層材を結合させることができる接着性層を含む積層材で密封することができる。
【０１１２】
いくつかの実施形態において、結合試薬容器は、密封バッグ内の１つ又は複数の外被（容器）などの少なくとも１つの外被を含む。いくつかの実施形態において、密封バッグは、例えば、ポリエチレン、ポリエステル、アルミニウム、ニッケル、ポリエステル−フォイル−ポリエチレンの３積層体又はポリエステル−ポリエチレンの２積層体を含むことができる。いくつかの実施形態において、乾燥剤を最も内側の外被と最も外側の外被との間に加えることができる。乾燥剤は、例えば、酸化カルシウム、塩化カルシウム、硫酸カルシウム、シリカ、非晶質ケイ酸塩、アルミノケイ酸塩、クレー、活性アルミナ、ゼオライト又はモレキュラーシーブを含んでいてよい。いくつかの実施形態において、湿度インジケータを最も内側の外被と最も外側の外被との間に加えることができる。湿度インジケータは、例えば、乾燥組成物が依然として十分に乾燥しており、その安定性は損なわれていなかったという表示として用いることができる。いくつかの実施形態において、湿度インジケータは、最も外側の外被を通して見ることができる。特定の実施形態において、湿度インジケータは、米国軍用規格ＭＳ２０００３に適合するように設計されたもののような変色により湿度が示される、カード又はディスクであってよい。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、容器により形成される湿度バリアは、外部条件が１０日間、２０日間、４０日間、６７日間、３カ月間、６カ月間、１２カ月間、１８カ月間、２４カ月間又はより長期間にわたり４５℃及び相対湿度１００％であるとき、乾燥組成物を乾燥した状態に維持するのに十分であり得る。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、容器により形成される湿度バリアは、外部条件が１日間、１週間、１カ月間、３カ月間、６カ月間、１２カ月間、１８カ月間、２４カ月間又はより長期間にわたり２５℃及び相対湿度１００％であるとき、乾燥組成物を乾燥した状態に維持するのに十分であり得る。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、容器により形成される湿度バリアは、外部条件が３カ月間、６カ月間、１２カ月間、１８カ月間、２４カ月間又はより長期間にわたり４℃及び相対湿度１００％であるとき、乾燥組成物を乾燥した状態に維持するのに十分であり得る。
【０１１６】
２．フローセルに基づく生物学的検出システム
図１は、代表的な検出システム、例えば、フローセルに基づく生物学的検出システムの概略図である。示すように、検出システムの全動作は、コンピュータシステムにより制御することができる。試料の分析は、フローセル１１２、例えば、放射能、吸光度、磁性若しくは磁化可能物質、光散乱、光学干渉（すなわち、干渉測定）、屈折率変化、表面プラスモン共鳴及び／又はルミネセンス（例えば、蛍光、化学ルミネセンス及び電気化学ルミネセンス）を測定するように構成されたフローセルで行われる。１つの態様によれば、フローセル１１２は、電気化学ルミネセンス測定を行うように構成することができる。代表的な電気化学ルミネセンスフローセル及びそれらの使用の方法は、米国特許第６，２００，５３１号に開示されている。フローセル１１２の動作は、フローセル１１２からアッセイのデータを受け、データ解析を行うこともできるコンピュータシステムにより制御することができる。フローセル１１２は、試料が適切に吸引されることを保証するために用いることができる、液体と空気との差を検出するように構成することができる。
【０１１７】
代表的なフローセルに基づく生物学的検出システムは、ガス及び液体を含むことができる１つ若しくは複数の試薬及び／又は１つ若しくは複数の試料を導入するための液体処理ステーションを含んでいてよい。図１に流量制御弁１０９及び１１６並びにピペッター１１１を受け入れるためのマニホールドを含むことができる液体処理ステーション１１０を示す。追加の流量制御弁並びに試薬／ガス検出器も存在していてよい。
【０１１８】
ピペッター１１１は、マニホールドの密閉面及びピペッターの密閉面（例えば、カラー、フランジ等）上に配置されたＯリング１２０を用いて液体処理ステーション１１０内に気密シールを形成することができる。示すように、液体処理マニホールド密閉面は、試薬送入管路から離れた位置に設けることができる（例えば、試薬管路の吸引チャンバー入口箇所の上）。さらに、１つ又は複数の試薬入口箇所を吸引チャンバー内のあらかじめ決定した高さに配置することができる。例えば、示すように、液体試薬管路は、ガス管路の汚染を防止するために、ガス試薬管路の下に配置することができる。試薬の吸引は、試薬を選択される試薬ビン１２５から、フィルター１０７から、又は可能な追加のビンから、或いは空気を示されていない流量制御弁を介して吸引するように、ピペッターの適切な位置決め及びポンプ１１３の作動により、１つ又は複数の流量制御弁１０９、１１６の選択的な作動を調整することにより制御できる。
【０１１９】
検出システムは、容器及び／又は液体処理ステーションから液体を吸引／分配するようにピペッターを向けることができるように、ピペッター１１１及び１つ又は複数の結合試薬容器１３５を精密かつ正確に位置決めすることができる。容器は、乾燥又は湿潤結合試薬１０８を有することができる。ピペッター１１１と結合試薬容器１３５の相対的な位置決めは、３次元位置決めシステム１１７によって行われる。３方向の運動は、おそらく製造に関連する垂直性からの摂動のみを有するので、相互に垂直に非常に近いか、或いは矩形の箱のすべての箇所にわたり動く必要がおそらくないため、明確に垂直でないことがあり得る。或いは、位置決めシステムは、代替座標システム（例えば、１次元、２次元、極座標等）に基づくものであってよい。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、試料収集器具１００は、例えば、湿潤濃縮空気試料を収集することができる。代表的な試料収集器具は、Ｓｐｅｃｔｏｒ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ、ＭＯ）によるＳｐｉｎＣｏｎ（登録商標）改良型空気サンプラーである。特定の実施形態において、試料収集器具１００は、試料を例えば手で入れることができる開放カップ又は貯蔵容器であってよい。場合によっては、試料収集器具は、配管１２３を介して試薬ビン１２５中にある抽出緩衝液を用いることができる。或いは、器具中又は容器の外部にある異なる液体を試料収集器具１００により用いることができる。場合によっては、試料収集器具１００からの配管１０１には、器具内の大気への通気穴を設けることができる。ポンプ１１３は、ピペッター１１１、流量制御弁１０９、フィルター１０７、配管１０５、配管１０３、一方向弁１０２及び配管１０１を介して試料収集器具１００からろ液を吸引することができる。試料収集器具１００は、液体を一方向弁１０２を介して配管１０５中に吸引し、配管１０５から液体を配管１０４及び一方向弁１１５を介して廃棄物容器１０６に送る別の方法でポンプ１１３を用いて過剰な試料液体を排出させることができる。フィルター１０７は、抽出緩衝液（例えば）を流量制御弁１１６を介して少なくともピペッター１１１中に吸引し、抽出緩衝液をフィルター１０７を経て、一方向弁１１５を介して廃棄物容器１０６に押し込む別の方法でポンプ１１３を用いて逆洗又は少なくとも部分的に洗浄することができる。
【０１２１】
試料収集器具１００からの試料をフィルター１０７によりろ過し、ピペッター１１１中に吸引することができる。次いで、試料を結合試薬容器１３５中に分配することができる。試薬ビン１２５からの抽出緩衝液又は他の試薬をさらに結合試薬容器１３５中に分配することができる。次いで結合試薬と試料中に見出した分析対象物の間で結合反応は起こり得る。一定期間後に試薬ビン１２５からの追加の抽出緩衝液又は他の試薬は結合試薬容器１３５中に分配することができる。さらなる時間間隔の後に、反応混合物を測定のためにフローセル１１２中に吸引することができる。測定技術によって、測定が行われる前に追加の試薬がフローセルに必要なことがある。例えば、電気化学ルミネセンス測定の場合には、フローセル中の反応混合物について遊離−結合分離の実施中に一般的に共反応物をフローセルに加える。測定後、試料を廃棄物容器に分配することができる。
【０１２２】
３．フローセルを含まない検出システム
図２にフローセルを使用しない検出システムのいくつかの実施形態を示す。これらの実施形態は、液体対空気を検出する能力又は試料が吸引されることを保証する他の手段を保有することができる。これらの実施形態と上述のフローセル実施形態との相違点のみを述べると、これらの実施形態において、結合試薬容器２０２は、結合パートナー並びに測定に必要な他の物質を液体又は乾燥した形態で収容することができる。例えば、電気化学ルミネセンス測定の場合、結合試薬容器２０２は、電気化学ルミネセンスを開始させるための電極を含むことができる。比色測定の場合、結合試薬容器２０２は、試料の光学的特性をｉｎ ｓｕｔｕで測定するための光路を含むことができる。いくつかの実施形態において、結合試薬容器２０２は、複数の分析対象物に対する結合パートナーを収容することができる。これらの結合パートナーは、少なくとも一部は測定技術が標識結合パートナー間でどのように区別するかによって、２０１として図に示すように空間的に分離することができるか、又は同じ場所に配置することができる。ピペッター１１１は、試料を抽出緩衝液及び／又は測定に必要な他の試薬の容器にピペッティングにより移すことができる。ピペッター１１１は、結合試薬容器２０２の洗浄又は内容物を交換するために別の方法で用いることができる。
【０１２３】
４．代替構成
図３に試料を得るための代替構成を用いるいくつかの実施形態を示す。図３ａに示すように、ポンプ３０１をフィルター１０７の前に置くことができる。この位置では、ポンプ３０１は、試料のより迅速なろ過を可能にするためにフィルター１０７にわたる大きい圧力を発生させることができる。ポンプ３０１はまた、過剰な圧力が生じないことを保証するための圧力監視器具を含むことができる。過剰な試料を廃棄物容器に送ったり、フィルター１０７を逆洗するなどの他の特徴を保有させることができる。簡潔のために、斜線３９８は、図１又は図２の装置をこのシステムに接続させることができる場所を示す。図３ｂに、試料収集器具１００が用いる圧力で常に開いている通気穴を有さない代表的な実施形態を示す。ポンプ３０２は、試料収集器具１００及びフィルター１０７を通して液体を押し出すことができる。ポンプ３０２はまた、過剰な圧力が生じないことを保証するための圧力監視器具を含むことができる。簡潔のために、斜線３９９は、図１又は図２の装置をこのシステムに接続させることができる場所を示す。
【０１２４】
図４に示すように、いくつかの実施形態の配管１０５は、フィルターと常時流体接触していない。ここに示すように、試料収集器具１００は、試薬ビン１２５中に存在する抽出緩衝液に場合によってポンプ３０２及び配管１２３を介して接続させることができる。或いは、異なる液体を試料収集器具１００により使用することができる。ポンプ３０２は、容器ホルダー４０２中にある容器４０１に試料を分配することができる。次に、結合パートナーとの結合及び最終的な測定のために、容器ホルダー４０２を動かす運動制御装置４０３及びピペッター１１１を動かす運動制御装置１１７により、試料を容器４０１から吸引して、例えば、結合試薬容器１３５又は結合試薬容器２０２中に入れることができる。いくつかの実施形態において、試料は、手又はロボット組込みの代替部品により容器４０１に入れることができる。図４に容器４０１及び容器ホルダー４０２の円形の配置を示すが、他の形状（例えば、矩形配列又は線状配列）も考えられる。
【０１２５】
図５に容器４０１のいくつかの実施形態を示す。いくつかの実施形態において、空間５０１及び５０３はフィルター５０２により分離することができる。試料が最初に空間５０１に入ることができ、ろ液が空間５０３に入ることができる。ピペッター１１１は、ろ液に接触するためにフィルター５０２を貫通することができる。いくつかの実施形態において、試料が最初に開口部５０５を経て空間５０７に入ることができ、フィルター５０２によりろ過されることができ、ろ液が空間５０６に入ることができる。次に、ピペッター１１１は、フィルター５０２に接触せずに開口部５０６を経てろ液に接触することができる。容器の底部は、ピペッター１１１がほぼすべてのろ液を吸引することができるように構成することができる。いくつかの実施形態において、空間５０７及びフィルター５０２は円環状であってよく、一方、開口部５０６は環状体の中心部にあってよい。これ及び同様な実施形態において、容器４０１の半径方向の対称性は、容器ホルダー４０２の回転と独立に生じ得る。いくつかの実施形態において、試料が最初に空間５０１に入ることができ、ろ液が空間５０３に入り、次いで、コネクタ５０９を経て空間５０８に流入することができる。次に、ピペッター１１１は、フィルター５０２に接触せずにろ液に接触することができる。容器４０１が半径方向に対称でない実施形態において、検出システムが容器４０１の向きを知ることができるように容器ホルダー４０２を調節することができる。ろ過工程を促進するために、容器ホルダー４０２を遠心分離機として動作させて重力を増大させる（一般相対性理論により）か、又は試料を受け入れる容器の上部の一部を密閉して加圧することができる。これらの容器４０１の位相上の同等物も本発明の一部である。
【０１２６】
図６に示すように、本発明のいくつかの実施形態は、フィルター６０１を含むピペットチップ６００を使用する。試料収集器具１００からのろ液は、配管１０５及びピペットチップ６００を通過し、検出システムによって、結合試薬容器１３５又は結合試薬容器２０２に入ることができる。場合によっては、試料収集器具は、配管１２３を介して抽出緩衝液１１５を使用することができる。
【０１２７】
いくつかの実施形態は、図４及び／又は図６における変形形態であってよい。配管１２３にポンプ３０２を設置せずに、ポンプ３０１と同様な方法でポンプを配管１０５に設置することができる。試料収集器具１００を空にする手段として、一方向弁１０２及び１１５の対が場合によって存在していてよい。
【０１２８】
特定の実施形態において、フィルター１０７、５０２及び／又は６０１は、本明細書における他所で記載した特性及び組成を有する。特定の実施形態において、試薬ビン１２５に入っている抽出緩衝液は、本明細書における他所で記載した特性及び組成を有する。
【０１２９】
ポンプ１１３、３０１及び３０２は、いくつかの種類であってよい。例えば、ポンプは、米国特許出願公開ＵＳ−２００４−００９６３６８Ａ１又はＰＣＴ国際公開２００５／１１４１７５Ａ２に記載されているものであってよい。ポンプは、蠕動式、シリンジ式、ギア式、ピストン式（Ｆｌｕｉｄ Ｍｅｔｅｒｉｎｇ，Ｉｎｃ．、Ｓｙｏｓｓｅｔ、ＮＹにより販売されている無弁設計並びに弁を用いるより伝統的な設計を含む）又は他の容積式設計であってよい。ポンプは、真空ポンプ及び渦巻式ポンプなどの圧力源であってよい。特定の実施形態において、本発明におけるポンプは、液体を移動させるのに毛細管作用のみに依拠することはできない。
【０１３０】
ＩＶ．キット
いくつかの実施形態において、本発明は、問題の分析対象物を検出するためのアッセイを実施するための試薬、試料をろ過するためのフィルター及びアッセイに対する試料マトリックスの影響を減少させるための少なくとも１つの抽出緩衝液を含むキットを提供する。
【０１３１】
特定の実施形態において、本発明は、フィルター、並びに（ａ）８以上のｐＨ若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び（ｂ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液から選択される少なくとも１つの試薬を含む、上の方法を実施するためのキットを提供する。いくつかの実施形態において、キットは、前記分析対象物に対して特異的な標識結合パートナーをさらに含む。いくつかの実施形態において、キットは、前記分析対象物に対して特異的な第１の標識結合パートナー及び第２の標識結合パートナーをさらに含む。いくつかの実施形態において、第１及び第２の結合パートナーのうちの少なくとも１つが抗体である。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、キットは、分析対象物の標識類似体及び前記分析対象物に対して特異的な結合パートナーをさらに含む。いくつかの実施形態において、分析対象物の標識類似体は、既知の量の標識された分析対象物自体である。
【０１３３】
特定の実施形態において、アッセイを実施するための試薬が上記のように結合試薬容器中に入れられており、一方、フィルター及びアッセイに対する試料マトリックスの影響を減少させるための少なくとも１つの抽出緩衝液が第２の容器中に入れられていてよい。
【０１３４】
様々な実施形態において、キットはキットの使用方法を記載している添付文書又はパッケージの形の取扱説明書を備えていてよい。
【０１３５】
本発明による特定のキットにおいて、アッセイを実施するための試薬が上述の標識のうちの少なくとも１つを含む。
【０１３６】
本発明のいくつかの実施形態において、アッセイを実施するための試薬が上述の支持体のうちの少なくとも１つを含む。
【０１３７】
キットの構成要素は、問題の分析対象物を検出するためのアッセイを実施するのに有用なあらゆる試薬を含んでいてよい。特定の実施形態において、キットは、アッセイ用又は試薬の完全性を維持するための容器、湿度インジケータ又は湿度バリアのいずれかを含んでいてよい。
【０１３８】
以下の実施例は、本発明の例示であること意味するものであり、本発明の範囲及び適用を限定するものではない。当業者は、本発明の目的を反映するさらなる実施形態を認識することができる。
【実施例】
【０１３９】
これらの実施例では、分析対象物検出免疫アッセイの前又は実施中に試料を処理することの有用な効果を述べる。そのような処理のない場合、試料マトリックス中の成分が、特定の分析対象物を検出するのに必要な結合相互作用を妨害することがあり得る。結果として、結合シグナル及び／又はシグナル対バックグラウンド比（Ｓ：Ｂ）が減少し、分析対象物の検出が困難になる。１つの実施例で述べる試薬及び他の定義は、当該実施例における記述／定義によって明確に取って代わらない限り、他の実施例にも適用される。
【０１４０】
（実施例１）
環境マトリックスはシグナル及びシグナル対バックグラウンド比を著しく減少させる
検出する分析対象物としてマウスＩｇＧ抗体を用いて免疫アッセイを実施した。環境マトリックス（例えば、ＭＲマトリックス）がアッセイに及ぼす影響を検討するために、分析対象物標準は、湿式濃縮装置（ＭＲマトリックス）を通して郵便室内の空気をろ過して調製したマトリックス又はリン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳマトリックス）で保存マウスＩｇＧを１０μｇ／ｍｌに希釈して調製した。ＰＢＳマトリックスは、ｐＨ７．４の０．３％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ（登録商標）（モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン）、１０ｍＭリン酸緩衝液、１２０ｍＭ ＮａＣｌ、２．７ｍＭ ＫＣｌ、０．１％（ｖ／ｖ）ヒドロキシピリジン及び０．１％（ｖ／ｖ）メチルイソチアゾリノン（ＭＩＴ）を含んでいた。ＭＲマトリックス中に存在する物質を図１０に示す。希釈保存溶液をＭＲマトリックス又はＰＢＳでさらに連続希釈して、０．５ｎｇ／ｍｌ〜１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度のマウスＩｇＧを含む試料を得た。
【０１４１】
ヤギ抗マウスＩｇＧ Ｆｃ抗体で被覆したビーズを以下のように準備した。最初に、ヤギ抗体をビオチンで標識した。ＮＨＳ−ＬＣ−ＬＣ−ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ）をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で１ｍｇ／ｍｌの濃度に希釈して、ビオチン溶液を調製した。ＰＢＳ中に０．５ｍｇのヤギ抗体を含む容積を１００μｌのビオチン溶液と混合した。混合物を絶えず振とうしながら室温で１時間インキュベートした。ヤギ抗体−ビオチン複合体を、Ｐｉｅｒｃｅ ｓｌｉｄｅ−ａ−ｌｙｚｅｒｓを用いて、５時間ごとに緩衝液を交換し、３回交換のＰＢＳに対して透析した。ストレプトアビジンを被覆した直径２．８μｍの超常磁化可能ビーズ（Ｄｙｎａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈ）４ｍｇを１０μｇのビオチン標識ヤギ抗体と混合し、微小遠心管中で絶えず振とうしながら室温で１時間インキュベートした。ビーズを１ｍｌのアッセイ緩衝液で３回洗浄し、５ｍｇ／ｍｌの最終濃度に再構成した。
【０１４２】
抗マウスＩｇＧＦ（ａｂ）２フラグメントを製造業者の指示に従って［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋（ＢＶ−ＴＡＧ ＮＨＳ Ｅｓｔｅｒ、ＢｉｏＶｅｒｉｓ、Ｃｏｒｐ Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）で標識した。
【０１４３】
抗体被覆ビーズをアッセイ緩衝液で１：４０に希釈し、２５μｌのこの懸濁液を各アッセイウエルに加えて、免疫アッセイを実施した。５０μｌの各マウスＩｇＧ試料を各ウエルに３系列で加えた。［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋標識Ｆ（ａｂ）２フラグメントをアッセイ緩衝液で６７０ｎｇ／ｍｌに希釈した。２５μｌの標識Ｆ（ａｂ）２フラグメント溶液をすべてのアッセイウエルに加えた。アッセイプレートを振とうしながら室温で１５分間インキュベートした。製造業者の指示に従ってＭ−ｓｅｒｉｅｓＭ１Ｍ分析装置（ＢｉｏＶｅｒｉｓ Ｃｏｒｐ．）を用いて超常磁化可能ビーズに結合した［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋標識Ｆ（ａｂ）２フラグメントの量を測定する前に、３００μｌのＰＢＳ希釈剤をすべてのウエルに加えた。
【０１４４】
結果を表３及び図７に示す。データから、ＭＲマトリックスが該アッセイにおけるシグナル対バックグラウンド比を著しく減少させたことがわかる。
【０１４５】
【表３】
【０１４６】
（実施例２）
シグナル及びＳ：Ｂ比に対する試料の調製の影響
ＭＲマトリックスで希釈したマウスＩｇＧの試料を実施例１で述べたように調製した。抗マウスＩｇＧＦｃフラグメント抗体被覆ビーズをアッセイ緩衝液で１：４０に希釈し、２５μｌのこの懸濁液を各アッセイウエルに加えて、免疫アッセイを実施した。５０μｌの各マウスＩｇＧ試料を各ウエルに３系列で加えた。［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋標識Ｆ（ａｂ）２フラグメントをアッセイ緩衝液で６７０ｎｇ／ｍｌに希釈した。２５μｌの標識Ｆ（ａｂ）２フラグメント溶液をすべてのアッセイウエルに加えた。アッセイプレートを振とうしながら室温で１５分間インキュベートした。製造業者の指示に従ってＭ−Ｓｅｒｉｅｓ Ｍ１Ｍ分析装置（ＢｉｏＶｅｒｉｓ Ｃｏｒｐ．）を用いて超常磁化可能ビーズに結合した［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋標識Ｆ（ａｂ）２フラグメントの量を測定する前に、３００μｌのホウ酸緩衝液（０．１Ｍホウ酸ナトリウム、０．５Ｍ ＮａＣｌ、０．３％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、ｐＨ８．５）をすべてのウエルに加えた。ＰＢＳ希釈剤はＰＢＳマトリックスと異なる保存剤を使用し、ＰＢＳ希釈剤はヒドロキシピリジン及びＭＩＴの代わりに０．１％（ｖ／ｖ）ＫａｔｈｏｎＩＩｃＧ／ＩＣＰ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を含む。
【０１４７】
結果を表４及び図８に示す。表３及び図７と比較することにより、インキュベーションの後、ＥＣＬ測定の前にホウ酸緩衝液を免疫アッセイに加えることにより、シグナル対バックグラウンド比が著しく増加することわかる。
【０１４８】
【表４】
【０１４９】
（実施例３）
マトリックスのろ過の効果
ＭＲマトリックスで希釈した試料について、リシンを検出するための免疫アッセイを実施した。リシン（Ｒｉｃｉｎｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ＩＩ、ＲＣＡ６０）をＭＲマトリックスで１０００ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ及び１ｎｇ／ｍｌに希釈した。アッセイの前に、各試料の一部を５ｍｌ注射器を用いて５μｍＡｃｒｏｄｉｓｃ（登録商標）シリンジフィルター（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐ．、Ｅｌｍｈｕｒｓｔ、ＮＹ）によりろ過した。実施例１で述べたように、リシンに結合する抗体を用いてビーズを被覆した。実施例１で述べたように、リシンに結合する第２抗体を［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋で標識した。
【０１５０】
２５μｌの抗体被覆超常磁化可能ビーズ懸濁液を各アッセイウエルに加えた。５０μｌの各ろ過済みリシン試料をアッセイウエルに２系列で加えた。ＭＲマトリックス希釈の影響をろ過と比較するために、１００μｌの未ろ過リシン試料をアッセイウエルに加えた。２５μｌの［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋標識抗リシン抗体及び２５μｌのビオチン標識抗体被覆ビーズをすべてのアッセイウエルに加えた。アッセイプレートを振とうしながら室温で１５分間インキュベートした。製造業者の指示に従ってＭ−Ｓｅｒｉｅｓ Ｍ１Ｍ分析装置（ＢｉｏＶｅｒｉｓ Ｃｏｒｐ．）を用いて超常磁化可能ビーズに結合した［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋標識Ｆ（ａｂ）２フラグメントの量を測定する前に、３００μｌのホウ酸緩衝液（０．１Ｍホウ酸ナトリウム、０．５Ｍ ＮａＣｌ、０．３％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、ｐＨ８．５）をすべてのウエルに加えた。
【０１５１】
表５及び図９に示すように、分析対象物試料のろ過は、未ろ過試料と比較してシグナル及びシグナル対バックグラウンド比を実質的に改善した。
【０１５２】
【表５】
【０１５３】
図１１に測定セル電極上へのろ過済み及び未ろ過試料からの超常磁化可能ビーズの沈着の間の差を示す。最も内側の円は、これらの画像を得るために除去した光検出器に直接可視である作用電極の一部である。１つ又は複数の垂直のバンドを形成している褐色の小粒は、超常磁化可能ビーズである。（Ａ）は、試料を本発明によるフィルター及び抽出緩衝液で処理した場合のビーズの沈着を示す。（Ｂ）は、ろ過せずに処理した同じＭＲマトリックスを含む試料で開始したビーズの沈着の写真である。画像は、マトリックスは、両方が実測電気化学ルミネセンスに影響を及ぼすと予想される捕捉されるビーズの数並びにそれらの分布に影響を及ぼすことを示している。
【０１５４】
（実施例４）
アッセイの感度
本発明により実施されるリシンアッセイの感度の下限を試験するために、リシンをＭＲマトリックスで０．２、２、２０、２００及び２０００ｐｇ／ｍｌに希釈した。免疫アッセイインキュベーションステップの完了後までホウ酸緩衝液を加えず、米国政府により提供された重要試薬プログラム（Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍ）（ＣＰＲ）試薬を用いたこと以外は、実施例３で述べたように試料をろ過し、アッセイした。測定は、１回測定した０ｐｇ／ｍｌ濃度を除いて、２回繰り返して行った。
【０１５５】
表６に本実験におけるシグナル対バックグラウンド比を示す。図１２に本実験におけるシグナル値を示す。本アッセイは、少なくとも２００ｐｇ／ｍｌのリシン濃度に対して感度が高かった。
【０１５６】
【表６】
【０１５７】
（実施例５）
アッセイシグナルに対するホウ酸緩衝液単独の影響
ホウ酸緩衝液がアッセイの性能を改善するかどうかを検討するために、炭疸菌芽胞（Ｓｔｅｒｎｅ株）をＰＢＳマトリックス、又はＭＲマトリックスとホウ酸緩衝液との５０％／５０％混合物で１０２コロニー形成単位（ｃｆｕ）／ｍｌから１０６ｃｆｕ／ｍｌまでの範囲の濃度に希釈した。各試料の一部における芽胞を製造業者の指示に従って標準ＣＲＰ試薬を用いてろ過せずにアッセイした。簡単に述べると、１００μｌの試料ろ液又はＰＢＳ希釈芽胞を、ＣＲＰアッセイ試薬を含み各管に加えた。次いで、管をＭ１Ｍ分析装置に入れ、インキュベートし、読み取るように設定した。１５分間のインキュベーションの終了時に、３００μｌのＰＢＳ希釈剤をすべての試料に加えた。超常磁化可能ビーズに結合した［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋標識抗炭疸菌抗体の量を製造業者の指示に従ってＭ１Ｍ分析装置（ＢｉｏＶｅｒｉｓ Ｃｏｒｐ．）を用いて測定した。
【０１５８】
表７及び図１３に結果を示す。ろ過しなかった試料中のＭＲマトリックス及びホウ酸緩衝液の存在下で測定したシグナル及びシグナル対バックグラウンド比は、両方とも対照値より低下した。
【０１５９】
【表７】
【０１６０】
インキュベーション期間の後の３００μｌ希釈でＰＢＳ希釈剤の代わりにホウ酸緩衝液を用いた追加実験を行った。結果（示さず）は、表７及び図１３と同様であった。インキュベーション期間の後のホウ酸緩衝液の添加は、ろ過しなかった場合の結果に影響を及ぼさなかった。
【０１６１】
（実施例６）
ろ過の前に加えたホウ酸緩衝液の影響
ろ過ステップの前の環境マトリックス試料へのホウ酸緩衝液の添加が後に測定されるＥＣＬシグナルに影響を及ぼすかどうかを検討するために、以下の実験を実施した。バシラス・グロビギー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｌｏｂｉｇｉｉ）（ＢＧ）を含む２組の試料、すなわち、ホウ酸緩衝液で１：１に希釈したＭＲマトリックス中ＢＧの連続希釈物（「試料１」）とＭＲマトリックス単独中ＢＧの連続希釈物（「試料２」）を調製した。両方の組の試料を上述のように５μｍ Ａｃｒｏｄｉｓｃ（登録商標）シリンジフィルターを用いてろ過した。
【０１６２】
２５μｌの抗ＢＧ抗体被覆超常磁性ビーズ懸濁液を各アッセイウエルに加えた。１００μｌの試料１希釈物を３つのアッセイウエルに加えた。５０μｌの各試料２希釈物を３つのアッセイウエルに加えた。２５μｌの［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋標識抗ＢＧ抗体をすべてのアッセイウエルに加えた。アッセイプレートを振とうしながら室温で１５分間インキュベートした。次いで、３００μｌのホウ酸緩衝液を試料１ウエルのそれぞれ、及び６つの試料２ウエルの各組の３つに加えた。３００μｌのＰＢＳ希釈剤を残りの試料２ウエルに加えた。次いで、超常磁性ビーズに結合した［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋標識抗体結合の量を製造業者の指示に従ってＭ−Ｓｅｒｉｅｓ Ｍ１Ｍ分析装置（ＢｉｏＶｅｒｉｓ Ｃｏｒｐ．）を用いて測定した。
【０１６３】
表８及び図１４に結果を示す。低分析対象物濃度におけるシグナル及びシグナル対バックグラウンド比がホウ酸希釈を行うことによって改善された。
【０１６４】
【表８】
【０１６５】
本明細書は、本明細書で引用した参考文献の教示に照らして最も十分に理解される。本明細書における実施形態は、本発明の実施形態の実例であり、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。当業者は、他の多くの実施例が本発明によって包含されることを容易に認識する。本開示で引用したすべての刊行物及び特許は、それらの全体が参照により組み込まれる。参照により組み込まれる資料が本明細書と矛盾又は相反する限り、本明細書はそのような資料に取って代わるものとする。本明細書における参考文献の引用は、そのような参考文献が本発明の従来技術であることを容認するものではない。
【０１６６】
特に示さない限り、特許請求の範囲を含む本明細書で用いる成分の量、反応条件等を表すすべての数は、すべての場合に「約」という語により修正されると理解すべきである。したがって、反するものとして特に示さない限り、数値パラメーターは、概数であり、本発明によって得ようとする所望の特性に異なることがあり得る。少なくとも、また請求事項の範囲の同等物の原則の適用を制限する試みとしてではなく、各数値パラメーターは、有効数字の数及び通常の丸め法に照らして解釈すべきである。
【０１６７】
特に示さない限り、一連の要素の前の「少なくとも」という語は、該一続きのすべての要素に当てはまると理解すべきである。当業者は、わずかな通常の実験を用いて、本明細書に記載した本発明の特定の実施形態の多くの同等物を認識、又は確認することができるであろう。そのような同等物は、以下の請求事項の範囲によって包含されるものである。
【図面の簡単な説明】
【０１６８】
【図１】再使用可能な検出システムのいくつかの例示的な実施形態の概略図である。
【図２】使い捨て式検出システムのいくつかの例示的な実施形態の概略図である。
【図３】ａは、検出システムのサンプリング部分のいくつかの例示的な実施形態の概略図である。ｂは、検出システムのろ過部分のいくつかの例示的な実施形態の概略図である。
【図４】検出システムのサンプリング及びろ過部分のいくつかの例示的な実施形態の概略図である。
【図５】検出システム用の使い捨て式フィルターの例示的な実施形態の概略図である。
【図６】検出システム用の使い捨て式フィルターの例示的な実施形態の概略図である。
【図７】マウスＩｇＧ免疫検出アッセイにおける試料のシグナル対バックグラウンド比（Ｓ：Ｂ）に対する環境マトリックス（ＭＲマトリックス）の抑制効果を示す図である。記号は平均測定値を表し、直線は平均測定値を結んだものである。
【図８】本発明によるマウスＩｇＧ免疫検出を実施することにより、シグナル対バックグラウンド比（Ｓ：Ｂ）に対する環境マトリックス（ＭＲマトリックス）の影響が減少することを示す図である。記号は平均測定値を表し、直線は平均測定値を結んだものである。
【図９】免疫検出アッセイに使用する前にＭＲマトリックス及びリシンを含む環境マトリックス試料をろ過することにより、シグナルに対する環境マトリックスの影響が減少することを示す図である。記号は平均測定値を表し、直線は平均測定値を結んだものである。
【図１０】環境マトリックス（ＭＲマトリックス）試料の顕微鏡写真である。格子線は４０μｍ間隔である。
【図１１】環境マトリックス（ＭＲマトリックス）を含む試料について実施した免疫検出アッセイにおける超常磁化可能ビーズの沈着を示す図である。最も内側の円は、これらの画像を得るために除去した光検出器に直接可視である作用電極の一部である。１つ又は複数の垂直のバンドを形成している褐色の小粒は、超常磁化可能ビーズである。（Ａ）は、試料を本発明によるフィルター及び抽出緩衝液で処理した場合のビーズの沈着を示す。（Ｂ）は、標準的な従来技術の方法を用いて処理した同じ環境マトリックスを含む試料で開始したビーズの沈着の写真である。
【図１２】本発明による環境マトリックス（ＭＲマトリックス）中のリシンの免疫アッセイの検出限界を示す図である。記号は平均測定値を表し、曲線はモデル式
【数１】
［式中、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄは適合パラメーターであり、ｙはＥＣＬシグナル値であり、ｘはリシンの濃度である］を有する用量反応一部位曲線適合である。
【図１３】炭疽菌芽胞の免疫アッセイからのシグナルに対する環境マトリックス（ＭＲマトリックス）の影響を示す図である。記号は平均測定値を表し、直線は平均測定値を結んだものである。
【図１４】環境マトリックス（ＭＲマトリックス）及びバシラス・グロビギー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｇｌｏｂｉｇｉｉ）を含むろ過済み試料に対するホウ酸抽出緩衝液の影響を示す図である。記号は平均測定値を表し、直線は平均測定値を結んだものである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
分析対象物を含むと推定される試料を分析する方法であって、
（ａ）試料をフィルターによりろ過するステップと、
（ｂ）前記分析対象物に対して特異的な第１の標識結合パートナーを加えるステップと、
（ｃ）場合によって、前記分析対象物に対して特異的な第２の結合パートナーを加えるステップと、
（ｄ）（ｉ）８以上のｐＨ若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、又は
（ｉｉ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液
から選択される抽出緩衝液を加えるステップと、
（ｅ）第１の結合パートナー、分析対象物、及び存在する場合、第２の結合パートナーの間で形成される複合体中の標識された第１の結合パートナーの量を測定するステップと
を含み、ステップ（ａ）からステップ（ｄ）までをどのような順序で実施してもよく、ステップ（ｅ）は最後に実施する、上記方法。
【請求項２】
前記フィルターが約１００μｍ以下でかつ約１０μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記フィルターが約１０μｍ以下でかつ約１μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記フィルターが約１μｍ以下でかつ約０．１μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記フィルターが約０．１μｍ以下でかつ約０．０２μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記抽出緩衝液が８以上のｐＨ及び０．８オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記抽出緩衝液が８以上のｐＨ及び１．０オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記抽出緩衝液が界面活性剤を含む、請求項１から７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
結合パートナーが電気化学ルミネセンス（ＥＣＬ）部分で標識されている、請求項１から８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＥＣＬ部分がＲｕ又はＯｓを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＥＣＬ部分が［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋又は［Ｒｕ（スルホ−ｂｐｙ）２ｂｐｙ］２＋を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１の標識結合パートナーが抗体を含む、請求項１から１１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記第２の結合パートナーが抗体を含む、請求項１から１２までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記第２の結合パートナーがビーズに結合している、請求項１から１３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記第２の結合パートナーがビーズに共有結合している、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記第２の結合パートナーが結合パートナーの対の相互作用によりビーズに結合している、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
結合パートナーの対がアビジン：ビオチン、ストレプトアビジン：ビオチン及びジゴキシゲニン：アンチジゴキシゲニンから選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ビーズが磁化可能である、請求項１４から１７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
複数の分析対象物について試料を分析する方法である、請求項１から１８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記抽出緩衝液を前記試料に加えてその後前記試料をろ過する、請求項１から１９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
（ｉ）（ａ）、（ｂ）及び（ｄ）を同時に実施することにより、
（ｉｉ）（ａ）、（ｂ）及び（ｄ）を、（ｄ）、（ａ）、（ｂ）の順序で実施することにより、或いは
（ｉｉｉ）（ａ）、（ｂ）及び（ｄ）を、（ａ）、（ｄ）、（ｂ）の順序で実施することにより実施する、請求項１から１９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
（ｃ）を（ｂ）の後に実施する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
（ｃ）を（ａ）と（ｂ）との間に実施する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
（ｃ）を（ｄ）と（ｂ）との間に実施する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記試料をろ過した後に前記抽出緩衝液を前記試料に加える、請求項１から１９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
分析対象物を含むと推定される試料を分析する方法であって、
（ａ）試料をフィルターによりろ過するステップと、
（ｂ）分析対象物の標識類似体を加えるステップと、
（ｃ）前記分析対象物に対して特異的な結合パートナーを加えるステップと、
（ｄ）（ｉ）８以上のｐＨ若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び
（ｉｉ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液
から選択される抽出緩衝液を加えるステップと、
（ｅ）結合パートナーに結合した分析対象物の標識類似体の量を測定するステップと
を含み、ステップ（ａ）からステップ（ｄ）までをどのような順序で実施してもよく、ステップ（ｅ）は最後に実施する、上記方法。
【請求項２７】
前記フィルターが約１００μｍ以下でかつ約１０μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記フィルターが約１０μｍ以下でかつ約１μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記フィルターが約１μｍ以下でかつ約０．１μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記フィルターが約０．１μｍ以下でかつ約０．０２μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
前記抽出緩衝液が８以上のｐＨ及び０．８オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
前記抽出緩衝液が８以上のｐＨ及び１．０オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３３】
前記抽出緩衝液が界面活性剤を含む、請求項２６から３２までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記結合パートナーが電気化学ルミネセンス（ＥＣＬ）部分で標識されている、請求項２６から３３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＥＣＬ部分がＲｕ又はＯｓを含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＥＣＬ部分が［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋又は［Ｒｕ（スルホ−ｂｐｙ）２ｂｐｙ］２＋を含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記結合パートナーが抗体を含む、請求項２６から３６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記結合パートナーがビーズに結合している、請求項２６から３７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
第２の結合パートナーが前記ビーズに共有結合している、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記結合パートナーが結合パートナーの対の相互作用により前記ビーズに結合している、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
結合パートナーの対がアビジン：ビオチン、ストレプトアビジン：ビオチン及びジゴキシゲニン：アンチジゴキシゲニンから選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記ビーズが磁化可能である、請求項３８から４１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
複数の分析対象物について試料を分析する方法である、請求項２６から４２までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記抽出緩衝液を前記試料に加えてその後前記試料をろ過する、請求項２６から４３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
（ｉ）（ａ）、（ｂ）及び（ｄ）を同時に実施することにより、
（ｉｉ）（ａ）、（ｂ）及び（ｄ）を、（ｄ）、（ａ）、（ｂ）の順序で実施することにより、或いは
（ｉｉｉ）（ａ）、（ｂ）及び（ｄ）を、（ａ）、（ｄ）、（ｂ）の順序で実施することにより実施する、請求項２６から４３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
（ｃ）を（ｂ）の後に実施する、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
（ｃ）を（ａ）と（ｂ）との間に実施する、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
（ｃ）を（ｄ）と（ｂ）との間に実施する、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
前記試料をろ過した後に前記抽出緩衝液を前記試料に加える、請求項２６から４３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
フィルター、並びに（ａ）８以上若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び（ｂ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液から選択される少なくとも１つの試薬を含む、請求項１に記載の方法を実施するためのキット。
【請求項５１】
前記抽出緩衝液が８を超えるｐＨ及び０．８オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する、請求項５０に記載のキット。
【請求項５２】
前記抽出緩衝液が８を超えるｐＨ及び１．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する、請求項５０に記載のキット。
【請求項５３】
第１の標識結合パートナー及び前記分析対象物に対して特異的な第２の結合パートナーをさらに含む、請求項５０から５２までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項５４】
前記第１及び第２の結合パートナーの少なくとも１つが抗体を含む、請求項５３に記載のキット。
【請求項５５】
磁化可能ビーズをさらに含む、請求項５０から５４までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項５６】
取扱説明書をさらに含む、請求項５０から５５までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項５７】
フィルター、並びに（ａ）８以上若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び（ｂ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液から選択される少なくとも１つの試薬を含む、請求項２６に記載の方法を実施するためのキット。
【請求項５８】
前記抽出緩衝液が８を超えるｐＨ及び０．８オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する、請求項５７に記載のキット。
【請求項５９】
前記抽出緩衝液が８を超えるｐＨ及び１．０オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する、請求項５７に記載のキット。
【請求項６０】
分析対象物の標識類似体及び前記分析対象物に対して特異的な結合パートナーをさらに含む、請求項５７から５９までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項６１】
結合パートナーが抗体を含む、請求項６０に記載のキット。
【請求項６２】
磁化可能ビーズをさらに含む、請求項５７から６１までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項６３】
取扱説明書をさらに含む、請求項５７から６２までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項６４】
１つ又は複数の分析対象物を含むと推定される試料の分析用の装置であって、
（ａ）サンプリング器具からフィルターに向かって流れるように方向が定められた第１の一方向弁を介してサンプリング器具に流体的に接続されているフィルター、
（ｂ）第１の一方向弁とフィルターとの間の箇所に流体的に接続され、フィルターから廃棄物管路に向かって流れるように方向が定められた第２の一方向弁に流体的に接続されている廃棄物管路、
（ｃ）液体の流れをフィルター中に不可逆的に駆動させることができるように配置されているポンプ、
（ｄ）前記１つ又は複数の分析対象物のそれぞれに対して特異的な標識結合パートナーを収容する結合試薬容器、
（ｅ）前記フィルターからのろ液を前記結合試薬容器に導入する手段、及び
（ｆ）標識結合パートナーを測定する手段
を含む装置。
【請求項６５】
１つ又は複数の分析対象物を含むと推定される試料の分析用の装置であって、
（ａ）サンプリング器具に流体的に接続されているフィルター、
（ｂ）液体の流れをフィルター中に駆動させることができるように配置されているポンプ、
（ｃ）前記１つ又は複数の分析対象物のそれぞれに対して特異的な標識結合パートナーを収容する結合試薬容器、
（ｄ）前記フィルターからのろ液を前記結合試薬容器に導入する手段、及び
（ｅ）標識結合パートナーを測定する手段
を含み、次の要素、すなわち、（ｉ）装置が少なくとも１つの電極をさらに含むこと、（ｉｉ）ポンプが液体を移動させるために毛細管作用のみに依拠しないこと、（ｉｉｉ）ポンプが容積式ポンプであること、（ｉｖ）装置が、抽出緩衝液を試料に加えるための手段をさらに含むこと、（ｖ）装置が、試料がフィルターに接触する前に、抽出緩衝液を試料に加える手段をさらに含むこと、（ｖｉ）サンプリング器具が空気サンプラーであること、のうちの少なくとも１つが当てはまる装置。
【請求項６６】
（ａ）電気化学ルミネセンスを開始させるための少なくとも１つの作用電極、及び
（ｂ）光検出器
をさらに含む、請求項６４又は６５に記載の装置。
【請求項６７】
前記ポンプが液体を移動させるために毛細管作用にのみ依拠しない、請求項６４から６６までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項６８】
前記試料に抽出緩衝液を加える手段をさらに含む、請求項６４から６７までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項６９】
前記試料が前記フィルターに接触する前に、抽出緩衝液を前記試料に加える手段をさらに含む、請求項６４から６７までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項７０】
前記標識結合パートナーを測定する手段が電気化学ルミネセンスである、請求項６４から６９までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項７１】
前記サンプリング器具が空気サンプラーである、請求項６４から７０までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項７２】
前記サンプリング器具が開放カップ又は貯蔵容器である、請求項６４から７０までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項７３】
前記ポンプが容積式ポンプである、請求項６４から７２までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項７４】
前記結合試薬容器が乾燥試薬を収容している、請求項６４から７３までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項７５】
前記結合試薬容器が、２５℃、相対湿度９５％で、容器内の乾燥組成物を少なくとも４週間にわたり乾燥した状態に維持するのに十分な水分バリアを含む、請求項７４に記載の装置。
【請求項７６】
（ａ）フィルターにより下部容器から流体的に封じられている上部容器、及び
（ｂ）上部容器を経ることなく、下部容器に出入りすることができる開口部
を含む試料ろ過器具。
【請求項７７】
前記器具が半径方向対称性を有する、請求項７６に記載の試料ろ過器具。
【請求項７８】
前記器具の外部が半径方向対称性を有さない、請求項７６に記載の試料ろ過器具。
【請求項７９】
前記フィルターが約１００μｍ以下でかつ約１０μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項６４から７８までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項８０】
前記フィルターが約１０μｍ以下でかつ約１μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項６４から７８までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項８１】
前記フィルターが約１μｍ以下でかつ約０．１μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項６４から７８までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項８２】
前記フィルターが約０．１μｍ以下でかつ約０．０２μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項６４から７８までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項１】
分析対象物を含むと推定される試料を分析する方法であって、
（ａ）試料をフィルターによりろ過するステップと、
（ｂ）前記分析対象物に対して特異的な第１の標識結合パートナーを加えるステップと、
（ｃ）場合によって、前記分析対象物に対して特異的な第２の結合パートナーを加えるステップと、
（ｄ）（ｉ）８以上のｐＨ若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、又は
（ｉｉ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液
から選択される抽出緩衝液を加えるステップと、
（ｅ）第１の結合パートナー、分析対象物、及び存在する場合、第２の結合パートナーの間で形成される複合体中の標識された第１の結合パートナーの量を測定するステップと
を含み、ステップ（ａ）からステップ（ｄ）までをどのような順序で実施してもよく、ステップ（ｅ）は最後に実施する、上記方法。
【請求項２】
前記フィルターが約１００μｍ以下でかつ約１０μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記フィルターが約１０μｍ以下でかつ約１μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記フィルターが約１μｍ以下でかつ約０．１μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記フィルターが約０．１μｍ以下でかつ約０．０２μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記抽出緩衝液が８以上のｐＨ及び０．８オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記抽出緩衝液が８以上のｐＨ及び１．０オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記抽出緩衝液が界面活性剤を含む、請求項１から７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
結合パートナーが電気化学ルミネセンス（ＥＣＬ）部分で標識されている、請求項１から８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＥＣＬ部分がＲｕ又はＯｓを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＥＣＬ部分が［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋又は［Ｒｕ（スルホ−ｂｐｙ）２ｂｐｙ］２＋を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１の標識結合パートナーが抗体を含む、請求項１から１１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記第２の結合パートナーが抗体を含む、請求項１から１２までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記第２の結合パートナーがビーズに結合している、請求項１から１３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記第２の結合パートナーがビーズに共有結合している、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記第２の結合パートナーが結合パートナーの対の相互作用によりビーズに結合している、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
結合パートナーの対がアビジン：ビオチン、ストレプトアビジン：ビオチン及びジゴキシゲニン：アンチジゴキシゲニンから選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ビーズが磁化可能である、請求項１４から１７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
複数の分析対象物について試料を分析する方法である、請求項１から１８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記抽出緩衝液を前記試料に加えてその後前記試料をろ過する、請求項１から１９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
（ｉ）（ａ）、（ｂ）及び（ｄ）を同時に実施することにより、
（ｉｉ）（ａ）、（ｂ）及び（ｄ）を、（ｄ）、（ａ）、（ｂ）の順序で実施することにより、或いは
（ｉｉｉ）（ａ）、（ｂ）及び（ｄ）を、（ａ）、（ｄ）、（ｂ）の順序で実施することにより実施する、請求項１から１９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
（ｃ）を（ｂ）の後に実施する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
（ｃ）を（ａ）と（ｂ）との間に実施する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
（ｃ）を（ｄ）と（ｂ）との間に実施する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記試料をろ過した後に前記抽出緩衝液を前記試料に加える、請求項１から１９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
分析対象物を含むと推定される試料を分析する方法であって、
（ａ）試料をフィルターによりろ過するステップと、
（ｂ）分析対象物の標識類似体を加えるステップと、
（ｃ）前記分析対象物に対して特異的な結合パートナーを加えるステップと、
（ｄ）（ｉ）８以上のｐＨ若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び
（ｉｉ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液
から選択される抽出緩衝液を加えるステップと、
（ｅ）結合パートナーに結合した分析対象物の標識類似体の量を測定するステップと
を含み、ステップ（ａ）からステップ（ｄ）までをどのような順序で実施してもよく、ステップ（ｅ）は最後に実施する、上記方法。
【請求項２７】
前記フィルターが約１００μｍ以下でかつ約１０μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記フィルターが約１０μｍ以下でかつ約１μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記フィルターが約１μｍ以下でかつ約０．１μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記フィルターが約０．１μｍ以下でかつ約０．０２μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
前記抽出緩衝液が８以上のｐＨ及び０．８オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
前記抽出緩衝液が８以上のｐＨ及び１．０オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３３】
前記抽出緩衝液が界面活性剤を含む、請求項２６から３２までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記結合パートナーが電気化学ルミネセンス（ＥＣＬ）部分で標識されている、請求項２６から３３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＥＣＬ部分がＲｕ又はＯｓを含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＥＣＬ部分が［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］２＋又は［Ｒｕ（スルホ−ｂｐｙ）２ｂｐｙ］２＋を含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記結合パートナーが抗体を含む、請求項２６から３６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記結合パートナーがビーズに結合している、請求項２６から３７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
第２の結合パートナーが前記ビーズに共有結合している、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記結合パートナーが結合パートナーの対の相互作用により前記ビーズに結合している、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
結合パートナーの対がアビジン：ビオチン、ストレプトアビジン：ビオチン及びジゴキシゲニン：アンチジゴキシゲニンから選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記ビーズが磁化可能である、請求項３８から４１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
複数の分析対象物について試料を分析する方法である、請求項２６から４２までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記抽出緩衝液を前記試料に加えてその後前記試料をろ過する、請求項２６から４３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
（ｉ）（ａ）、（ｂ）及び（ｄ）を同時に実施することにより、
（ｉｉ）（ａ）、（ｂ）及び（ｄ）を、（ｄ）、（ａ）、（ｂ）の順序で実施することにより、或いは
（ｉｉｉ）（ａ）、（ｂ）及び（ｄ）を、（ａ）、（ｄ）、（ｂ）の順序で実施することにより実施する、請求項２６から４３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
（ｃ）を（ｂ）の後に実施する、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
（ｃ）を（ａ）と（ｂ）との間に実施する、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
（ｃ）を（ｄ）と（ｂ）との間に実施する、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
前記試料をろ過した後に前記抽出緩衝液を前記試料に加える、請求項２６から４３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
フィルター、並びに（ａ）８以上若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び（ｂ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液から選択される少なくとも１つの試薬を含む、請求項１に記載の方法を実施するためのキット。
【請求項５１】
前記抽出緩衝液が８を超えるｐＨ及び０．８オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する、請求項５０に記載のキット。
【請求項５２】
前記抽出緩衝液が８を超えるｐＨ及び１．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する、請求項５０に記載のキット。
【請求項５３】
第１の標識結合パートナー及び前記分析対象物に対して特異的な第２の結合パートナーをさらに含む、請求項５０から５２までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項５４】
前記第１及び第２の結合パートナーの少なくとも１つが抗体を含む、請求項５３に記載のキット。
【請求項５５】
磁化可能ビーズをさらに含む、請求項５０から５４までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項５６】
取扱説明書をさらに含む、請求項５０から５５までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項５７】
フィルター、並びに（ａ）８以上若しくは６以下のｐＨ及び０．１オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液、及び（ｂ）１．１オスモル／Ｌを超える容量オスモル濃度を有する抽出緩衝液から選択される少なくとも１つの試薬を含む、請求項２６に記載の方法を実施するためのキット。
【請求項５８】
前記抽出緩衝液が８を超えるｐＨ及び０．８オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する、請求項５７に記載のキット。
【請求項５９】
前記抽出緩衝液が８を超えるｐＨ及び１．０オスモル／Ｌ以上の容量オスモル濃度を有する、請求項５７に記載のキット。
【請求項６０】
分析対象物の標識類似体及び前記分析対象物に対して特異的な結合パートナーをさらに含む、請求項５７から５９までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項６１】
結合パートナーが抗体を含む、請求項６０に記載のキット。
【請求項６２】
磁化可能ビーズをさらに含む、請求項５７から６１までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項６３】
取扱説明書をさらに含む、請求項５７から６２までのいずれか一項に記載のキット。
【請求項６４】
１つ又は複数の分析対象物を含むと推定される試料の分析用の装置であって、
（ａ）サンプリング器具からフィルターに向かって流れるように方向が定められた第１の一方向弁を介してサンプリング器具に流体的に接続されているフィルター、
（ｂ）第１の一方向弁とフィルターとの間の箇所に流体的に接続され、フィルターから廃棄物管路に向かって流れるように方向が定められた第２の一方向弁に流体的に接続されている廃棄物管路、
（ｃ）液体の流れをフィルター中に不可逆的に駆動させることができるように配置されているポンプ、
（ｄ）前記１つ又は複数の分析対象物のそれぞれに対して特異的な標識結合パートナーを収容する結合試薬容器、
（ｅ）前記フィルターからのろ液を前記結合試薬容器に導入する手段、及び
（ｆ）標識結合パートナーを測定する手段
を含む装置。
【請求項６５】
１つ又は複数の分析対象物を含むと推定される試料の分析用の装置であって、
（ａ）サンプリング器具に流体的に接続されているフィルター、
（ｂ）液体の流れをフィルター中に駆動させることができるように配置されているポンプ、
（ｃ）前記１つ又は複数の分析対象物のそれぞれに対して特異的な標識結合パートナーを収容する結合試薬容器、
（ｄ）前記フィルターからのろ液を前記結合試薬容器に導入する手段、及び
（ｅ）標識結合パートナーを測定する手段
を含み、次の要素、すなわち、（ｉ）装置が少なくとも１つの電極をさらに含むこと、（ｉｉ）ポンプが液体を移動させるために毛細管作用のみに依拠しないこと、（ｉｉｉ）ポンプが容積式ポンプであること、（ｉｖ）装置が、抽出緩衝液を試料に加えるための手段をさらに含むこと、（ｖ）装置が、試料がフィルターに接触する前に、抽出緩衝液を試料に加える手段をさらに含むこと、（ｖｉ）サンプリング器具が空気サンプラーであること、のうちの少なくとも１つが当てはまる装置。
【請求項６６】
（ａ）電気化学ルミネセンスを開始させるための少なくとも１つの作用電極、及び
（ｂ）光検出器
をさらに含む、請求項６４又は６５に記載の装置。
【請求項６７】
前記ポンプが液体を移動させるために毛細管作用にのみ依拠しない、請求項６４から６６までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項６８】
前記試料に抽出緩衝液を加える手段をさらに含む、請求項６４から６７までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項６９】
前記試料が前記フィルターに接触する前に、抽出緩衝液を前記試料に加える手段をさらに含む、請求項６４から６７までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項７０】
前記標識結合パートナーを測定する手段が電気化学ルミネセンスである、請求項６４から６９までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項７１】
前記サンプリング器具が空気サンプラーである、請求項６４から７０までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項７２】
前記サンプリング器具が開放カップ又は貯蔵容器である、請求項６４から７０までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項７３】
前記ポンプが容積式ポンプである、請求項６４から７２までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項７４】
前記結合試薬容器が乾燥試薬を収容している、請求項６４から７３までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項７５】
前記結合試薬容器が、２５℃、相対湿度９５％で、容器内の乾燥組成物を少なくとも４週間にわたり乾燥した状態に維持するのに十分な水分バリアを含む、請求項７４に記載の装置。
【請求項７６】
（ａ）フィルターにより下部容器から流体的に封じられている上部容器、及び
（ｂ）上部容器を経ることなく、下部容器に出入りすることができる開口部
を含む試料ろ過器具。
【請求項７７】
前記器具が半径方向対称性を有する、請求項７６に記載の試料ろ過器具。
【請求項７８】
前記器具の外部が半径方向対称性を有さない、請求項７６に記載の試料ろ過器具。
【請求項７９】
前記フィルターが約１００μｍ以下でかつ約１０μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項６４から７８までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項８０】
前記フィルターが約１０μｍ以下でかつ約１μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項６４から７８までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項８１】
前記フィルターが約１μｍ以下でかつ約０．１μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項６４から７８までのいずれか一項に記載の装置。
【請求項８２】
前記フィルターが約０．１μｍ以下でかつ約０．０２μｍ以上と評価される孔径を有する、請求項６４から７８までのいずれか一項に記載の装置。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【公表番号】特表２００８−５２４６０４（Ｐ２００８−５２４６０４Ａ）
【公表日】平成２０年７月１０日（２００８．７．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５４７０１４（Ｐ２００７−５４７０１４）
【出願日】平成１７年１２月２０日（２００５．１２．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０４６０２１
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０６９０２３
【国際公開日】平成１８年６月２９日（２００６．６．２９）
【出願人】（５０５０００１０３）バイオヴェリス コーポレイション (7)
【公表日】平成２０年７月１０日（２００８．７．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１２月２０日（２００５．１２．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０４６０２１
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０６９０２３
【国際公開日】平成１８年６月２９日（２００６．６．２９）
【出願人】（５０５０００１０３）バイオヴェリス コーポレイション (7)
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