睡眠改善剤
【課題】 アキノワスレグサの有効利用を図るため、アキノワスレグサの植物自体の摂取より、よりよい睡眠改善作用や、ＡＣＥ阻害活性作用を奏し得るその発酵処理物、及びその発酵植物を含有する食品素材・食品を提供することにある。
【解決手段】 アキノワスレグサを発酵処理することにより、該植物そのものより睡眠改善効果を奏することができ、且つ、食味を改善し、その乳酸発酵処理物では、ＡＣＥ阻害活性効果を奏する発酵処理物を得ることができる。さらに、前記の作用を強化させた利用価値が大きい食品素材・食品を得ることができる。
【解決手段】 アキノワスレグサを発酵処理することにより、該植物そのものより睡眠改善効果を奏することができ、且つ、食味を改善し、その乳酸発酵処理物では、ＡＣＥ阻害活性効果を奏する発酵処理物を得ることができる。さらに、前記の作用を強化させた利用価値が大きい食品素材・食品を得ることができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、沖縄、南九州、奄美地域に自生しているアキノワスレグサ（Hemerocallis fulva var sempervirens）を、乳酸菌、酵母、麹等により発酵させて得られる発酵処理物を有効成分とする睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤や、前記発酵処理物を含有することを特徴とする睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
植物を原料とし、植物自体をそのまま、或いはそれから抽出し、又は乾燥し煎じて飲用するなど種々の形態で、病気の治療、予防に用いられ、生薬と称して、古くから知られている。植物の一つであるアキノワスレグサは、ノカンゾウの仲間で、ユリ科キスゲ属に属し、方言名をクヮンソウといい、沖縄では、民間薬として従来知られている植物である。最近ではアキノワスレグサの花の乾燥粉末が動物実験により、睡眠時間が１．５倍ほど延びたということが報告されている。
【０００３】
また、アキノワスレグサ から水及び／または水溶性の極性有機溶媒を用いて肝臓障害抑制剤の有効成分を抽出し、肝臓障害抑制剤とすることが知られている（例えば、特許文献１参照）。
【０００４】
さらに、アキノワスレグサ 、イタドリ、オオイタビ、オオゴチョウ、カタバミ、クマツヅラ、サツマイモ、ジュズダマ、ツルグミ、ツルソバ、トウアズキ、トウガン、ニガニガグサ、ノカラムシ、ノビル、パパイア、ビョウヤナギ、モクセンナおよびヤマモモからなる群から選ばれた１種類以上の生物素材の乾燥粉末又は抽出物中の成分が作用するように乾燥および抽出条件を定めたことを特徴とする血糖上昇抑制（抗糖尿病・抗肥満）剤、血圧上昇抑制（抗高血圧症）剤、α−アミラーゼ阻害剤、α−グルコシダーゼ阻害剤、アンジオテンシン（１）変換酵素阻害剤、食品および食品添加物が知られている（例えば、特許文献２参照）。
【０００５】
このように従来のものは、アキノワスレグサの植物体そのもの又はその抽出物に関するものであって、発酵させて得られる処理物に関するものでなく、アキノワスレグサを発酵処理させて得られる発酵処理物が未発酵の植物体そのもの又はその抽出物に比して、優れた睡眠改善作用やＡＣＥ阻害作用を有することは知られていなかった。
【０００６】
【特許文献１】特開２００１−１０９６８号公報
【特許文献２】特開２００４−７５６３８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、睡眠改善作用や高血圧の予防・治療のためのＡＣＥ阻害作用に優れ、かつ安全な天然資源や、かかる天然資源を含有する睡眠改善作用やＡＣＥ阻害作用を備えた機能性食品を提供することにある。アキノワスレグサをより有効利用を図るため、該植物を発酵処理することにより、アキノワスレグサの植物自体の摂取より、よりよい睡眠改善作用や、ＡＣＥ阻害活性作用を奏し得る発酵処理物、及び発酵植物を含有する食品素材・食品
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、現代社会においてストレス、食物の偏食、環境等種々の要因により、多くの人が罹患している不眠症、高血圧症等に対し、その予防や治療に有効な天然資源について研究を続けており、アキノワスレグサのより有効な利用を図るため、睡眠改善作用等を有するアキノワスレグサを乳酸菌等により発酵処理すると、睡眠改善作用やＡＣＥ阻害作用が増強され、かつ風味が向上されて摂取しやすいものとなることを見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち本発明は、アキノワスレグサ（Hemerocallis fulva var.sempervirens）の発酵処理物を有効成分とすることを特徴とする睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項１）や、アキノワスレグサの全草の発酵処理物であることを特徴とする請求項１記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項２）や、乳酸菌、枯草菌、酵母、麹菌又はこれらの混合物により発酵させて得られることを特徴とする請求項１又は２記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項３）や、乳酸菌が、ストレプトコッカス属（Storeptococcus）、ラクトバチルス属（Lactobacillus）、ロイコノストック属（Leuconostoc）、ペディオコッカス属（Pediococcus）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）又はテトラジェノコッカス属（Tetragenococcus）のいずれかに属する微生物であることを特徴とする請求項３記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項４）や、ストレプトコッカス属に属する微生物が、ストレプトコッカス・サーモフィルス（S. thermophilus）であることを特徴とする請求項４記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項５）や、ラクトバチルス属に属する微生物が、ラクトバチルス・プランタリム（L. plantarum）、ラクトバチルス・デルブリッキ（L. delbruckii）、ラクトバチルス・ペントサス（L. pentosus）又はラクトバチルス・カセイ（L. casei）であることを特徴とする請求項４記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項６）や、テトラジェノコッカス属に属する微生物が、テトラジェノ・ハロフィルス（T. halophilus）であることを特徴とする請求項４記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項７）や、酵母が、カンジダ属（Candida）又はサッカロマイセス属（Saccharomyces）に属する微生物であることを特徴とする請求項３記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項８）や、カンジダ属に属する微生物が、カンジダ・ビルサチルス（C. versatilis）であることを特徴とする請求項８記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項９）や、サッカロマイセス属に属する微生物が、サッカロマイセス・セレビシアエ（S. cerevisiae）であることを特徴とする請求項８記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項１０）や、麹菌が、アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus awamori）又はアスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）であることを特徴とする請求項３記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項１１）に関する。
【００１０】
また本発明は、アキノワスレグサ（Hemerocallis fulva var.sempervirens）の発酵処理物を含有することを特徴とする睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項１２）や、アキノワスレグサの全草の発酵処理物であることを特徴とする請求項１２記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項１３）や、乳酸菌、枯草菌、酵母、麹菌又はこれらの混合物により発酵させて得られることを特徴とする請求項１２又は１３記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項１４）や、乳酸菌が、ストレプトコッカス属（Storeptococcus）、ラクトバチルス属（Lactobacillus）、ロイコノストック属（Leuconostoc）、ペディオコッカス属（Pediococcus）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）又はテトラジェノコッカス属（Tetragenococcus）のいずれかに属する微生物であることを特徴とする請求項１４記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項１５）や、ストレプトコッカス属に属する微生物が、ストレプトコッカス・サーモフィルス（S. thermophilus）であることを特徴とする請求項１５記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項１６）や、ラクトバチルス属に属する微生物が、ラクトバチルス・プランタリム（L. plantarum）、ラクトバチルス・デルブリッキ（L. delbruckii）、ラクトバチルス・ペントサス（L. pentosus）又はラクトバチルス・カセイ（L. casei）であることを特徴とする請求項１５記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項１７）や、テトラジェノコッカス属に属する微生物が、テトラジェノ・ハロフィルス（T. halophilus）であることを特徴とする請求項１５記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項１８）や、酵母が、カンジダ属（Candida）又はサッカロマイセス属（Saccharomyces）に属する微生物であることを特徴とする請求項１４記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項１９）や、カンジダ属に属する微生物が、カンジダ・ビルサチルス（C. versatilis）であることを特徴とする請求項１９記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項２０）や、サッカロマイセス属に属する微生物が、サッカロマイセス・セレビシアエ（S. cerevisiae）であることを特徴とする請求項１９記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項２１）や、麹菌が、アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus awamori）又はアスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）であることを特徴とする請求項１４記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項２２）に関する。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によると、アキノワスレグサを発酵処理することにより、未発酵の植物そのものより、睡眠改善作用やＡＣＥ阻害作用が増強され、かつ、風味が向上した、睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤や、睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品を得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤としては、アキノワスレグサの発酵処理物を有効成分とするものであれば特に制限されず、また、本発明の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品としては、アキノワスレグサの発酵処理物を含有するものであれば特に制限されず、上記アキノワスレグサの発酵処理物の製造方法としては、沖縄、台湾などに自生するアキノワスレグサを、乳酸菌、酵母、麹菌又はこれらの混合物を用いて発酵させる方法を挙げることができ、発酵の対象となる部分は、全草であっても、また、葉、茎、根、花等、特定の部分であってもよく、これらは生体であっても、乾燥体であってもよい。
【００１３】
また、発酵処理物の製造方法において使用される微生物としては、乳酸菌、枯草菌、酵母、麹を挙げることができ、これらを単独又は２種以上を適宜組み合わせて使用することができる。
【００１４】
上記乳酸菌としては、ストレプトコッカス属（Storeptococcus）、ラクトバチルス属（Lactobacillus）、ロイコノストック属（Leuconostoc）、ペディオコッカス属（Pediococcus）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）又はテトラジェノコッカス属（Tetragenococcus）のいずれかに属する微生物が好ましい。上記ストレプトコッカス属に属する微生物としては、ストレプトコッカス・サーモフィルス（S. thermophilus）を好適に例示することができ、ストレプトコッカス・サーモフィルスＩＦＯ１３９５７菌株を具体的に例示することができる。また、ラクトバチルス属に属する微生物としては、ラクトバチルス・プランタリム（L. plantrum）、ラクトバチルス・デルブリッキ（L. delbruckii）、ラクトバチルス・ペントサス（L. pentosus）又はラクトバチルス・カセイ（L. casei）のいずれかに属する微生物であることが好ましく、これらの菌のうち、特にラクトバチルス・プランタリムが好ましい。かかるラクトバチルス・プランタリムとしてＩＦＯ１４７１２菌株やＩＦＯ１４７１３菌株を、ラクトバチルス・デルブリッキとしてＩＦＯ１３９５３菌株を、ラクトバチルス・ペントサスとしてＩＦＯ１２０１１菌株を、ラクトバチルス・カセイとしてＩＦＯ１５８８３菌株を、それぞれ具体的に例示することができる。また、テトラジェノコッカス属に属する微生物としては、テトラジェノ・ハロフィルス（T. halophilus）であることが好ましく、テトラジェノ・ハロフィルスＩＦＯ１２１７２菌株を具体的に例示することができる。また、枯草菌としては、バチルス・ズブチルス（Bacillus subtilis）ＩＦＯ３０１３菌株を具体的に例示することができる。これら乳酸菌や枯草菌は、アキノワスレグサの乾物１ｇ当たり、通常、１０２〜１０７個、特に１０５〜１０７個用いることが好ましい。
【００１５】
また、本発明の発酵処理物の製造方法において用いられる酵母としては、カンジダ属（Candida）又はサッカロマイセス属（Saccharomyces）に属する微生物が好ましい。かかるカンジダ属に属する微生物として、カンジダ・ビルサチルス（Candida versatilis）であることが好ましく、カンジダ・ビルサチルスとしてＩＦＯ１００３８菌株を具体的に例示することができる。サッカロマイセス属に属する微生物として、サッカロマイセス・セレビシアエ（S. cerevisiae）であることが好ましく、サッカロマイセス・セレビシアエとしてＩＦＯ０５５５菌株を具体的に例示することができる。これら酵母菌は、アキノワスレグサの乾物１ｇあたり、通常１０３〜１０７個、特に１０６〜１０７個用いることが好ましい。
【００１６】
また、本発明の発酵処理植物の製造方法において用いられる麹菌は、アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus awamori）又はアスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）が好ましい。これら麹菌として、アスペルギルス・アワモリＩＦＯ４０３３菌株やアスペルギルス・ニガーＩＦＯ３１１２５菌株を具体的に例示することができる。これら麹菌は、アキノワスレグサの乾物１ｇあたり、湿菌体として通常１〜５重量％用いることが好ましい。
【００１７】
アキノワスレグサの発酵処理物には、発酵処理後の乾燥物や乾燥粉末やこれらの熱水抽出物も含まれ、これらアキノワスレグサの発酵処理物は、優れた睡眠改善作用を有し、服用前と比較して、３０％以上のより長い睡眠時間をとることができるので、睡眠不足を改善するのに役に立つ。また、アキノワスレグサの発酵処理物は、未発酵植物と比べて、風味が向上されて摂取しやすい上に、６％以上のより長い睡眠時間をとることが可能となる。
【００１８】
また、アキノワスレグサの発酵処理物のうち、乳酸発酵処理物は、血圧上昇抑制効果があり、未発酵処理物に比してもより効果が向上される。これは、本発明により得られる発酵処理物について、ＡＣＥ（Angiotensin I Converting enzyme）阻害活性が未発酵植物より増加することに起因する。ＡＣＥは、アンギオテンシンＩをアンギオテンシンIIへ変換するのに係わるアンギオテンシンＩ変換酵素であり、アンギオテンシンIIは血圧を上昇させるホルモンであるところから、ＡＣＥの活性を阻害することにより、血圧上昇を予防することが可能となる。
【００１９】
未発酵植物を服用したものと比べると、ＡＣＥ活性を５０％以下にまで阻害することができる。アキノワスレグサは、発酵前にもＡＣＥ阻害活性を有するが、発酵処理によってＡＣＥ阻害活性が更に高められ、顕著なＡＣＥ阻害活性を示すものである。
【００２０】
本発明の発酵処理物の製造方法においては、アキノワスレグサの葉、茎、根、花あるいは全草等の生体又は乾燥体を、３ｍｍ以下、好ましくは０．５〜１．０ｍｍの粒径まで粉砕する。３ｍｍ以下の粒径とすることにより、発酵菌との接触面積を十分に確保することができ、発酵を効果的に進行させることができる。このような植物の粉砕物に、発酵の進行を促進するため、乾物１重量部に対し、２〜１０重量部、特に５重量部程度の水分を添加することが好ましい。かかる粉砕植物に、上述の乳酸菌等の微生物を添加する。菌を培養後、培地へ添加する前に予め混合し、乾燥体である場合の植物の重量に対して、１〜１０重量％添加することが好ましい。発酵は、温度２０〜５０℃、好ましくは４０℃で行なわれることが好ましく、発酵時間は、ｐHや、菌数等の条件による発酵の進行状況や、嗜好により適宜選択することができ、例えば、ｐＨ４〜５、菌数１０６以上であれば、全草では約７２時間とするのが好ましい。発酵処理時、必要に応じてエアレーションや脱酸素処理を行なうことができるが、脱酸素処理後に静置培養において発酵させることもでき、この場合の発酵形式は、液体培養でなく固体培養が好ましい。
【００２１】
かかる発酵処理において、発酵菌の資化剤として炭水化物や蛋白質を添加することができる。資化剤としての炭水化物は市販のブドウ糖、蔗糖、廃糖蜜等の糖が好ましく、これらの添加量としては培地当たり１〜１０重量％が好ましく、特に３重量％前後が適当である。資化剤としての蛋白質は米糠、ふすま等が好ましく、これらの添加量としては培地当たり１〜５重量％が好ましい。これらの資化剤は１種を単独で、又は２種以上を混合して用いてもよい。
【００２２】
発酵終了後、乾燥機により水分値が１０重量％以下となるように乾燥させることが好ましく、乾燥方法としては、加熱乾燥や凍結乾燥によることができ、熱風乾燥等の加熱乾燥の場合は、品温が１００℃以下で行われることが、生理活性成分の失活を防止することができるため好ましい。乾燥後、必要に応じて加熱等公知の方法により滅菌処理を行ない、食品やエキスの原料として使用することができる発酵処理物が得られる。
【００２３】
上記発酵処理物は、乾燥微粉末あるいは熱水抽出液として、睡眠改善剤やＡＣＥ阻害剤とすることができる。これらを医薬品として用いる場合は、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、可溶化剤、溶解補助剤、等張剤などの各種調剤用配合成分を添加することができる。またこれら予防若しくは治療剤は、経口的又は非経口的に投与することができるが、例えば粉末、顆粒、カプセル剤、シロップ剤、懸濁液等の剤型で経口的に投与することが好ましい。
【００２４】
また、発酵処理物は、乾燥微粉末あるいは熱水抽出液として、食品や食品素材として用い、睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品とすることができる。食品の種類としては、タブレット、顆粒、カプセル等の他、お茶、コーヒー、ミネラルウォーター、スポーツドリンク、栄養ドリンク、ジュース等の飲料や、パン、ケーキ、煎餅などの焼き菓子、羊羹などの和菓子、冷菓、チューインガム、ゼリー等のパン・菓子類や、うどん、そば等の麺類や、かまぼこ、ハム、魚肉ソーセージ等の魚肉練り製品や、みそ、しょう油、ドレッシング、マヨネーズ、甘味料等の調味類や、チーズ、バター、ヨーグルト、アイスクリーム、プディング等の乳製品や、豆腐、こんにゃく、その他佃煮等の各種総菜に配合した機能性食品の形態とすることができる。
【００２５】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例１】
【００２６】
［乳酸菌を用いた発酵処理物の製造］
アキノワスレグサの全草の乾燥物を０．１〜３ｍｍの粒径に粉砕した。このアキノワスレグサの乾燥粉砕物３０ｇを入れた容器に水１５０ｇ、糖蜜０．９ｇ、米ぬか０．９ｇを添加した。かかる粉砕アキノワスレグサを収納した容器に、ラクトバチルス・プランタリムＩＦＯ１４７１２、ストレプトコッカス・サーモフィルスＩＦＯ１３９５７、バチルス・ズブチルスＩＦＯ３０１３の各々の菌を培養後、菌数の割合が１：１：１となるように混合した培養液アキノワスレグサ重量に対し１０重量％を添加・混合し、容器を密閉し、静置培養により発酵を行った。発酵温度は４０℃、発酵時間は７２時間とした。その後、乾燥機により水分値が１０重量％以下になるまで６０℃で乾燥した後、滅菌処理（１３０℃蒸気、５〜１５秒）を行い、アキノワスレグサ醗酵処理物３０ｇを得た。
【実施例２】
【００２７】
［酵母菌を用いた発酵処理物の製造］
アキノワスレグサの全草の乾燥物を０．１〜３ｍｍの粒径に粉砕した。このアキノワスレグサの乾燥粉砕物３０ｇを入れた容器に水１５０ｇ、糖蜜０．９ｇ、米ぬか０．９ｇを添加した。かかる粉砕アキノワスレグサを収納した容器に、サッカロマイセス・セレビシアエＩＦＯ０５５５の培養液をアキノワスレグサ重量に対し１０重量％を添加・混合し、容器を密閉し、静置培養により発酵を行った。発酵温度は３０℃、発酵時間は７２時間とした。その後、乾燥機により水分値が１０重量％以下になるまで６０℃で乾燥した後、滅菌処理（１３０℃蒸気、５〜１５秒）を行い、アキノワスレグサ醗酵処理物３０ｇを得た。
【実施例３】
【００２８】
［麹菌を用いた発酵処理物の製造］
アキノワスレグサの全草の乾燥物を０．１〜３ｍｍの粒径に粉砕した。このアキノワスレグサの乾燥粉砕物３０ｇを入れた容器に水１５０ｇ、糖蜜０．９ｇ、米ぬか０．９ｇを添加した。かかる粉砕アキノワスレグサを収納した容器に、アスペルギルス・アワモリＩＦＯ４０３３の培養後の菌体３ｇ（湿重量）を添加・混合し、容器を密閉し、静置培養により発酵を行った。発酵温度は３０℃、発酵時間は７２時間とした。その後、乾燥機により水分値が１０重量％以下になるまで６０℃で乾燥した後、滅菌処理（１３０℃蒸気、５〜１５秒）を行い、アキノワスレグサ醗酵処理物３０ｇを得た。
【実施例４】
【００２９】
［アキノワスレグサ発酵処理物の睡眠改善効果］
実施例１〜３より得られた乾燥アキノワスレグサ醗酵処理物、及び乾燥アキノワスレグサ未発酵物を、沸騰させた熱水１リットル（Ｌ）に対し各５ｇずつの割合で加え、５分間抽出し、濾過した濾液を供試液とした。これら４種類の供試液の各々につき、寝つきが悪いか又は不眠症の５名の被験者（計２０名）に各２００ｃｃを就寝前に４週間にわたり服用してもらい、服用前４週間及び服用後４週間の総睡眠時間及び寝つきの状況について調べた。各被験者には、調査期間中、日時、就寝時刻、入眠時刻、起床時刻、総睡眠時間、備考欄を設けたデータ用紙に記入してもらいデータとした。結果を表１に示す。５名の平均睡眠時間が、乾燥アキノワスレグサ未発酵物投与群では３．９２時間から５．１４時間と１．２２時間延長されたが、実施例１の乳酸菌による発酵処理物投与群では３．９８時間から５．４６時間と１．４８時間延長され、実施例２の酵母菌による発酵処理物投与群では３．９８時間から５．４５時間と１．４７時間延長され、実施例３の麹菌による発酵処理物投与群では３．８２時間から５．４９時間と１．６７時間延長され、これらはいずれも未発酵物投与群の睡眠延長時間を上回っていた。
【００３０】
【表１】
【実施例５】
【００３１】
［発酵処理物の成分分析］
実施例１で得られたアキノワスレグサ醗酵処理物と、発酵処理前のアキノワスレグサ乾燥粉砕物の各１ｇをそれぞれ８０℃熱水２５mlで２０分間抽出し、これを２回繰り返し５０mlに定溶した、抽出液を供試サンプルとして、以下の条件で、ＨＰＬＣ分析を行なった。
カラム：Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ ＯＤＳ−ＨＧ−５ φ４．６×２５０ｍｍ
波長：２６０ｎｍ
移動相：０．１％ＴＦＡ−メタノールの０〜１００％までのグラジエント分析
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：１０μＬ
アキノワスレグサ乾燥粉末の発酵前と醗酵後のそれぞれの熱水抽出液におけるＨＰＬＣ分析の結果を図１及び２に示す。図１及び２から、明らかなようにアキノワスレグサ醗酵処理物では、発酵前のアキノワスレグサに比べ、１０分付近にピークを示す物質（未同定）が有意に増加していることがわかった。
【実施例６】
【００３２】
［ＡＣＥ阻害活性の測定］
実施例１の乳酸菌によるアキノワスレグサ発酵処理物についてＡＣＥ阻害活性を測定し、発酵前の未発酵アキノワスレグサのＡＣＥ阻害活性と比較した。ＡＣＥ（ウサギ肺アセトンパウダー由来、６７mＵ／ｍｌ）５０μｌに、実施例１で得られたアキノワスレグサ醗酵処理物と、発酵処理前のアキノワスレグサ乾燥粉砕物の各１ｇをそれぞれ８０℃熱水25mlで２０分間抽出し、これを２回繰り返し５０mlに定溶した抽出液それぞれ１５μＬを添加し３７℃、５分間加温した。その後６０８ｍＭ塩化ナトリウムを含むホウ酸緩衝液（ｐＨ８．３）に７．６ｍＭとなるように溶解したHippuryl L-histidyl L-leucineを１２５μＬ添加し、正確に３７℃、３０分間反応させた。反応停止には１０％トリフルオロ酢酸（ＴＥＡ）２０μＬを加え酵素を失活させた。ＡＣＥ阻害活性は高速液体クロマトグラフィーを用いて遊離した馬尿酸を測定した。コントロールとして水を用いた場合をＡＣＥ活性１００％とした結果を図３に示す。この結果、アキノワスレグサを発酵処理することにより、ＡＣＥ活性を約５０％程度にまで阻害できることがわかった。
【実施例７】
【００３３】
［風味の官能検査］
アキノワスレグサの発酵処理物について、嗜好性の試験を行った。実施例１〜３より得られた乾燥アキノワスレグサ醗酵処理物、及び乾燥アキノワスレグサ未発酵物を、沸騰させた熱水１リットル（Ｌ）に対し各５ｇずつの割合で加え、５分間抽出し、濾過した濾液を供試液とし、これら４種類の供試液の各々につき、１０人のパネラーが試飲した。評価基準は、特に飲みやすい（５点）、飲みやすい（４点）、ふつう（３点）、飲みにくい（２点）、特に飲みにくい（１点）の５段階とし、乾燥アキノワスレグサ未発酵物の抽出液をふつう（３点）とし、１０人のパネラーの平均値として評価したところ、実施例１の乳酸菌による発酵処理物の抽出液は４．２点、酵母菌による発酵処理物の抽出液は３．９点、麹菌による発酵処理物の抽出液は３．４点であった。以上の官能検査の結果から、アキノワスレグサを発酵処理することにより、食味が向上され、嗜好性の改善が図れたことが明らかとなった。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】発酵前（比較例：熱水抽出)のＨＰＬＣの測定を示す図である。
【図２】本発明の発酵処理物（熱水抽出）のＨＰＬＣの測定を示す図である。
【図３】本発明の発酵処理物のＡＣＥ阻害活性の測定結果を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、沖縄、南九州、奄美地域に自生しているアキノワスレグサ（Hemerocallis fulva var sempervirens）を、乳酸菌、酵母、麹等により発酵させて得られる発酵処理物を有効成分とする睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤や、前記発酵処理物を含有することを特徴とする睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
植物を原料とし、植物自体をそのまま、或いはそれから抽出し、又は乾燥し煎じて飲用するなど種々の形態で、病気の治療、予防に用いられ、生薬と称して、古くから知られている。植物の一つであるアキノワスレグサは、ノカンゾウの仲間で、ユリ科キスゲ属に属し、方言名をクヮンソウといい、沖縄では、民間薬として従来知られている植物である。最近ではアキノワスレグサの花の乾燥粉末が動物実験により、睡眠時間が１．５倍ほど延びたということが報告されている。
【０００３】
また、アキノワスレグサ から水及び／または水溶性の極性有機溶媒を用いて肝臓障害抑制剤の有効成分を抽出し、肝臓障害抑制剤とすることが知られている（例えば、特許文献１参照）。
【０００４】
さらに、アキノワスレグサ 、イタドリ、オオイタビ、オオゴチョウ、カタバミ、クマツヅラ、サツマイモ、ジュズダマ、ツルグミ、ツルソバ、トウアズキ、トウガン、ニガニガグサ、ノカラムシ、ノビル、パパイア、ビョウヤナギ、モクセンナおよびヤマモモからなる群から選ばれた１種類以上の生物素材の乾燥粉末又は抽出物中の成分が作用するように乾燥および抽出条件を定めたことを特徴とする血糖上昇抑制（抗糖尿病・抗肥満）剤、血圧上昇抑制（抗高血圧症）剤、α−アミラーゼ阻害剤、α−グルコシダーゼ阻害剤、アンジオテンシン（１）変換酵素阻害剤、食品および食品添加物が知られている（例えば、特許文献２参照）。
【０００５】
このように従来のものは、アキノワスレグサの植物体そのもの又はその抽出物に関するものであって、発酵させて得られる処理物に関するものでなく、アキノワスレグサを発酵処理させて得られる発酵処理物が未発酵の植物体そのもの又はその抽出物に比して、優れた睡眠改善作用やＡＣＥ阻害作用を有することは知られていなかった。
【０００６】
【特許文献１】特開２００１−１０９６８号公報
【特許文献２】特開２００４−７５６３８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、睡眠改善作用や高血圧の予防・治療のためのＡＣＥ阻害作用に優れ、かつ安全な天然資源や、かかる天然資源を含有する睡眠改善作用やＡＣＥ阻害作用を備えた機能性食品を提供することにある。アキノワスレグサをより有効利用を図るため、該植物を発酵処理することにより、アキノワスレグサの植物自体の摂取より、よりよい睡眠改善作用や、ＡＣＥ阻害活性作用を奏し得る発酵処理物、及び発酵植物を含有する食品素材・食品
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、現代社会においてストレス、食物の偏食、環境等種々の要因により、多くの人が罹患している不眠症、高血圧症等に対し、その予防や治療に有効な天然資源について研究を続けており、アキノワスレグサのより有効な利用を図るため、睡眠改善作用等を有するアキノワスレグサを乳酸菌等により発酵処理すると、睡眠改善作用やＡＣＥ阻害作用が増強され、かつ風味が向上されて摂取しやすいものとなることを見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち本発明は、アキノワスレグサ（Hemerocallis fulva var.sempervirens）の発酵処理物を有効成分とすることを特徴とする睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項１）や、アキノワスレグサの全草の発酵処理物であることを特徴とする請求項１記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項２）や、乳酸菌、枯草菌、酵母、麹菌又はこれらの混合物により発酵させて得られることを特徴とする請求項１又は２記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項３）や、乳酸菌が、ストレプトコッカス属（Storeptococcus）、ラクトバチルス属（Lactobacillus）、ロイコノストック属（Leuconostoc）、ペディオコッカス属（Pediococcus）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）又はテトラジェノコッカス属（Tetragenococcus）のいずれかに属する微生物であることを特徴とする請求項３記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項４）や、ストレプトコッカス属に属する微生物が、ストレプトコッカス・サーモフィルス（S. thermophilus）であることを特徴とする請求項４記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項５）や、ラクトバチルス属に属する微生物が、ラクトバチルス・プランタリム（L. plantarum）、ラクトバチルス・デルブリッキ（L. delbruckii）、ラクトバチルス・ペントサス（L. pentosus）又はラクトバチルス・カセイ（L. casei）であることを特徴とする請求項４記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項６）や、テトラジェノコッカス属に属する微生物が、テトラジェノ・ハロフィルス（T. halophilus）であることを特徴とする請求項４記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項７）や、酵母が、カンジダ属（Candida）又はサッカロマイセス属（Saccharomyces）に属する微生物であることを特徴とする請求項３記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項８）や、カンジダ属に属する微生物が、カンジダ・ビルサチルス（C. versatilis）であることを特徴とする請求項８記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項９）や、サッカロマイセス属に属する微生物が、サッカロマイセス・セレビシアエ（S. cerevisiae）であることを特徴とする請求項８記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項１０）や、麹菌が、アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus awamori）又はアスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）であることを特徴とする請求項３記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤（請求項１１）に関する。
【００１０】
また本発明は、アキノワスレグサ（Hemerocallis fulva var.sempervirens）の発酵処理物を含有することを特徴とする睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項１２）や、アキノワスレグサの全草の発酵処理物であることを特徴とする請求項１２記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項１３）や、乳酸菌、枯草菌、酵母、麹菌又はこれらの混合物により発酵させて得られることを特徴とする請求項１２又は１３記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項１４）や、乳酸菌が、ストレプトコッカス属（Storeptococcus）、ラクトバチルス属（Lactobacillus）、ロイコノストック属（Leuconostoc）、ペディオコッカス属（Pediococcus）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）又はテトラジェノコッカス属（Tetragenococcus）のいずれかに属する微生物であることを特徴とする請求項１４記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項１５）や、ストレプトコッカス属に属する微生物が、ストレプトコッカス・サーモフィルス（S. thermophilus）であることを特徴とする請求項１５記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項１６）や、ラクトバチルス属に属する微生物が、ラクトバチルス・プランタリム（L. plantarum）、ラクトバチルス・デルブリッキ（L. delbruckii）、ラクトバチルス・ペントサス（L. pentosus）又はラクトバチルス・カセイ（L. casei）であることを特徴とする請求項１５記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項１７）や、テトラジェノコッカス属に属する微生物が、テトラジェノ・ハロフィルス（T. halophilus）であることを特徴とする請求項１５記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項１８）や、酵母が、カンジダ属（Candida）又はサッカロマイセス属（Saccharomyces）に属する微生物であることを特徴とする請求項１４記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項１９）や、カンジダ属に属する微生物が、カンジダ・ビルサチルス（C. versatilis）であることを特徴とする請求項１９記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項２０）や、サッカロマイセス属に属する微生物が、サッカロマイセス・セレビシアエ（S. cerevisiae）であることを特徴とする請求項１９記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項２１）や、麹菌が、アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus awamori）又はアスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）であることを特徴とする請求項１４記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品（請求項２２）に関する。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によると、アキノワスレグサを発酵処理することにより、未発酵の植物そのものより、睡眠改善作用やＡＣＥ阻害作用が増強され、かつ、風味が向上した、睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤や、睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品を得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤としては、アキノワスレグサの発酵処理物を有効成分とするものであれば特に制限されず、また、本発明の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品としては、アキノワスレグサの発酵処理物を含有するものであれば特に制限されず、上記アキノワスレグサの発酵処理物の製造方法としては、沖縄、台湾などに自生するアキノワスレグサを、乳酸菌、酵母、麹菌又はこれらの混合物を用いて発酵させる方法を挙げることができ、発酵の対象となる部分は、全草であっても、また、葉、茎、根、花等、特定の部分であってもよく、これらは生体であっても、乾燥体であってもよい。
【００１３】
また、発酵処理物の製造方法において使用される微生物としては、乳酸菌、枯草菌、酵母、麹を挙げることができ、これらを単独又は２種以上を適宜組み合わせて使用することができる。
【００１４】
上記乳酸菌としては、ストレプトコッカス属（Storeptococcus）、ラクトバチルス属（Lactobacillus）、ロイコノストック属（Leuconostoc）、ペディオコッカス属（Pediococcus）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）又はテトラジェノコッカス属（Tetragenococcus）のいずれかに属する微生物が好ましい。上記ストレプトコッカス属に属する微生物としては、ストレプトコッカス・サーモフィルス（S. thermophilus）を好適に例示することができ、ストレプトコッカス・サーモフィルスＩＦＯ１３９５７菌株を具体的に例示することができる。また、ラクトバチルス属に属する微生物としては、ラクトバチルス・プランタリム（L. plantrum）、ラクトバチルス・デルブリッキ（L. delbruckii）、ラクトバチルス・ペントサス（L. pentosus）又はラクトバチルス・カセイ（L. casei）のいずれかに属する微生物であることが好ましく、これらの菌のうち、特にラクトバチルス・プランタリムが好ましい。かかるラクトバチルス・プランタリムとしてＩＦＯ１４７１２菌株やＩＦＯ１４７１３菌株を、ラクトバチルス・デルブリッキとしてＩＦＯ１３９５３菌株を、ラクトバチルス・ペントサスとしてＩＦＯ１２０１１菌株を、ラクトバチルス・カセイとしてＩＦＯ１５８８３菌株を、それぞれ具体的に例示することができる。また、テトラジェノコッカス属に属する微生物としては、テトラジェノ・ハロフィルス（T. halophilus）であることが好ましく、テトラジェノ・ハロフィルスＩＦＯ１２１７２菌株を具体的に例示することができる。また、枯草菌としては、バチルス・ズブチルス（Bacillus subtilis）ＩＦＯ３０１３菌株を具体的に例示することができる。これら乳酸菌や枯草菌は、アキノワスレグサの乾物１ｇ当たり、通常、１０２〜１０７個、特に１０５〜１０７個用いることが好ましい。
【００１５】
また、本発明の発酵処理物の製造方法において用いられる酵母としては、カンジダ属（Candida）又はサッカロマイセス属（Saccharomyces）に属する微生物が好ましい。かかるカンジダ属に属する微生物として、カンジダ・ビルサチルス（Candida versatilis）であることが好ましく、カンジダ・ビルサチルスとしてＩＦＯ１００３８菌株を具体的に例示することができる。サッカロマイセス属に属する微生物として、サッカロマイセス・セレビシアエ（S. cerevisiae）であることが好ましく、サッカロマイセス・セレビシアエとしてＩＦＯ０５５５菌株を具体的に例示することができる。これら酵母菌は、アキノワスレグサの乾物１ｇあたり、通常１０３〜１０７個、特に１０６〜１０７個用いることが好ましい。
【００１６】
また、本発明の発酵処理植物の製造方法において用いられる麹菌は、アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus awamori）又はアスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）が好ましい。これら麹菌として、アスペルギルス・アワモリＩＦＯ４０３３菌株やアスペルギルス・ニガーＩＦＯ３１１２５菌株を具体的に例示することができる。これら麹菌は、アキノワスレグサの乾物１ｇあたり、湿菌体として通常１〜５重量％用いることが好ましい。
【００１７】
アキノワスレグサの発酵処理物には、発酵処理後の乾燥物や乾燥粉末やこれらの熱水抽出物も含まれ、これらアキノワスレグサの発酵処理物は、優れた睡眠改善作用を有し、服用前と比較して、３０％以上のより長い睡眠時間をとることができるので、睡眠不足を改善するのに役に立つ。また、アキノワスレグサの発酵処理物は、未発酵植物と比べて、風味が向上されて摂取しやすい上に、６％以上のより長い睡眠時間をとることが可能となる。
【００１８】
また、アキノワスレグサの発酵処理物のうち、乳酸発酵処理物は、血圧上昇抑制効果があり、未発酵処理物に比してもより効果が向上される。これは、本発明により得られる発酵処理物について、ＡＣＥ（Angiotensin I Converting enzyme）阻害活性が未発酵植物より増加することに起因する。ＡＣＥは、アンギオテンシンＩをアンギオテンシンIIへ変換するのに係わるアンギオテンシンＩ変換酵素であり、アンギオテンシンIIは血圧を上昇させるホルモンであるところから、ＡＣＥの活性を阻害することにより、血圧上昇を予防することが可能となる。
【００１９】
未発酵植物を服用したものと比べると、ＡＣＥ活性を５０％以下にまで阻害することができる。アキノワスレグサは、発酵前にもＡＣＥ阻害活性を有するが、発酵処理によってＡＣＥ阻害活性が更に高められ、顕著なＡＣＥ阻害活性を示すものである。
【００２０】
本発明の発酵処理物の製造方法においては、アキノワスレグサの葉、茎、根、花あるいは全草等の生体又は乾燥体を、３ｍｍ以下、好ましくは０．５〜１．０ｍｍの粒径まで粉砕する。３ｍｍ以下の粒径とすることにより、発酵菌との接触面積を十分に確保することができ、発酵を効果的に進行させることができる。このような植物の粉砕物に、発酵の進行を促進するため、乾物１重量部に対し、２〜１０重量部、特に５重量部程度の水分を添加することが好ましい。かかる粉砕植物に、上述の乳酸菌等の微生物を添加する。菌を培養後、培地へ添加する前に予め混合し、乾燥体である場合の植物の重量に対して、１〜１０重量％添加することが好ましい。発酵は、温度２０〜５０℃、好ましくは４０℃で行なわれることが好ましく、発酵時間は、ｐHや、菌数等の条件による発酵の進行状況や、嗜好により適宜選択することができ、例えば、ｐＨ４〜５、菌数１０６以上であれば、全草では約７２時間とするのが好ましい。発酵処理時、必要に応じてエアレーションや脱酸素処理を行なうことができるが、脱酸素処理後に静置培養において発酵させることもでき、この場合の発酵形式は、液体培養でなく固体培養が好ましい。
【００２１】
かかる発酵処理において、発酵菌の資化剤として炭水化物や蛋白質を添加することができる。資化剤としての炭水化物は市販のブドウ糖、蔗糖、廃糖蜜等の糖が好ましく、これらの添加量としては培地当たり１〜１０重量％が好ましく、特に３重量％前後が適当である。資化剤としての蛋白質は米糠、ふすま等が好ましく、これらの添加量としては培地当たり１〜５重量％が好ましい。これらの資化剤は１種を単独で、又は２種以上を混合して用いてもよい。
【００２２】
発酵終了後、乾燥機により水分値が１０重量％以下となるように乾燥させることが好ましく、乾燥方法としては、加熱乾燥や凍結乾燥によることができ、熱風乾燥等の加熱乾燥の場合は、品温が１００℃以下で行われることが、生理活性成分の失活を防止することができるため好ましい。乾燥後、必要に応じて加熱等公知の方法により滅菌処理を行ない、食品やエキスの原料として使用することができる発酵処理物が得られる。
【００２３】
上記発酵処理物は、乾燥微粉末あるいは熱水抽出液として、睡眠改善剤やＡＣＥ阻害剤とすることができる。これらを医薬品として用いる場合は、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、可溶化剤、溶解補助剤、等張剤などの各種調剤用配合成分を添加することができる。またこれら予防若しくは治療剤は、経口的又は非経口的に投与することができるが、例えば粉末、顆粒、カプセル剤、シロップ剤、懸濁液等の剤型で経口的に投与することが好ましい。
【００２４】
また、発酵処理物は、乾燥微粉末あるいは熱水抽出液として、食品や食品素材として用い、睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品とすることができる。食品の種類としては、タブレット、顆粒、カプセル等の他、お茶、コーヒー、ミネラルウォーター、スポーツドリンク、栄養ドリンク、ジュース等の飲料や、パン、ケーキ、煎餅などの焼き菓子、羊羹などの和菓子、冷菓、チューインガム、ゼリー等のパン・菓子類や、うどん、そば等の麺類や、かまぼこ、ハム、魚肉ソーセージ等の魚肉練り製品や、みそ、しょう油、ドレッシング、マヨネーズ、甘味料等の調味類や、チーズ、バター、ヨーグルト、アイスクリーム、プディング等の乳製品や、豆腐、こんにゃく、その他佃煮等の各種総菜に配合した機能性食品の形態とすることができる。
【００２５】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例１】
【００２６】
［乳酸菌を用いた発酵処理物の製造］
アキノワスレグサの全草の乾燥物を０．１〜３ｍｍの粒径に粉砕した。このアキノワスレグサの乾燥粉砕物３０ｇを入れた容器に水１５０ｇ、糖蜜０．９ｇ、米ぬか０．９ｇを添加した。かかる粉砕アキノワスレグサを収納した容器に、ラクトバチルス・プランタリムＩＦＯ１４７１２、ストレプトコッカス・サーモフィルスＩＦＯ１３９５７、バチルス・ズブチルスＩＦＯ３０１３の各々の菌を培養後、菌数の割合が１：１：１となるように混合した培養液アキノワスレグサ重量に対し１０重量％を添加・混合し、容器を密閉し、静置培養により発酵を行った。発酵温度は４０℃、発酵時間は７２時間とした。その後、乾燥機により水分値が１０重量％以下になるまで６０℃で乾燥した後、滅菌処理（１３０℃蒸気、５〜１５秒）を行い、アキノワスレグサ醗酵処理物３０ｇを得た。
【実施例２】
【００２７】
［酵母菌を用いた発酵処理物の製造］
アキノワスレグサの全草の乾燥物を０．１〜３ｍｍの粒径に粉砕した。このアキノワスレグサの乾燥粉砕物３０ｇを入れた容器に水１５０ｇ、糖蜜０．９ｇ、米ぬか０．９ｇを添加した。かかる粉砕アキノワスレグサを収納した容器に、サッカロマイセス・セレビシアエＩＦＯ０５５５の培養液をアキノワスレグサ重量に対し１０重量％を添加・混合し、容器を密閉し、静置培養により発酵を行った。発酵温度は３０℃、発酵時間は７２時間とした。その後、乾燥機により水分値が１０重量％以下になるまで６０℃で乾燥した後、滅菌処理（１３０℃蒸気、５〜１５秒）を行い、アキノワスレグサ醗酵処理物３０ｇを得た。
【実施例３】
【００２８】
［麹菌を用いた発酵処理物の製造］
アキノワスレグサの全草の乾燥物を０．１〜３ｍｍの粒径に粉砕した。このアキノワスレグサの乾燥粉砕物３０ｇを入れた容器に水１５０ｇ、糖蜜０．９ｇ、米ぬか０．９ｇを添加した。かかる粉砕アキノワスレグサを収納した容器に、アスペルギルス・アワモリＩＦＯ４０３３の培養後の菌体３ｇ（湿重量）を添加・混合し、容器を密閉し、静置培養により発酵を行った。発酵温度は３０℃、発酵時間は７２時間とした。その後、乾燥機により水分値が１０重量％以下になるまで６０℃で乾燥した後、滅菌処理（１３０℃蒸気、５〜１５秒）を行い、アキノワスレグサ醗酵処理物３０ｇを得た。
【実施例４】
【００２９】
［アキノワスレグサ発酵処理物の睡眠改善効果］
実施例１〜３より得られた乾燥アキノワスレグサ醗酵処理物、及び乾燥アキノワスレグサ未発酵物を、沸騰させた熱水１リットル（Ｌ）に対し各５ｇずつの割合で加え、５分間抽出し、濾過した濾液を供試液とした。これら４種類の供試液の各々につき、寝つきが悪いか又は不眠症の５名の被験者（計２０名）に各２００ｃｃを就寝前に４週間にわたり服用してもらい、服用前４週間及び服用後４週間の総睡眠時間及び寝つきの状況について調べた。各被験者には、調査期間中、日時、就寝時刻、入眠時刻、起床時刻、総睡眠時間、備考欄を設けたデータ用紙に記入してもらいデータとした。結果を表１に示す。５名の平均睡眠時間が、乾燥アキノワスレグサ未発酵物投与群では３．９２時間から５．１４時間と１．２２時間延長されたが、実施例１の乳酸菌による発酵処理物投与群では３．９８時間から５．４６時間と１．４８時間延長され、実施例２の酵母菌による発酵処理物投与群では３．９８時間から５．４５時間と１．４７時間延長され、実施例３の麹菌による発酵処理物投与群では３．８２時間から５．４９時間と１．６７時間延長され、これらはいずれも未発酵物投与群の睡眠延長時間を上回っていた。
【００３０】
【表１】
【実施例５】
【００３１】
［発酵処理物の成分分析］
実施例１で得られたアキノワスレグサ醗酵処理物と、発酵処理前のアキノワスレグサ乾燥粉砕物の各１ｇをそれぞれ８０℃熱水２５mlで２０分間抽出し、これを２回繰り返し５０mlに定溶した、抽出液を供試サンプルとして、以下の条件で、ＨＰＬＣ分析を行なった。
カラム：Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ ＯＤＳ−ＨＧ−５ φ４．６×２５０ｍｍ
波長：２６０ｎｍ
移動相：０．１％ＴＦＡ−メタノールの０〜１００％までのグラジエント分析
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：１０μＬ
アキノワスレグサ乾燥粉末の発酵前と醗酵後のそれぞれの熱水抽出液におけるＨＰＬＣ分析の結果を図１及び２に示す。図１及び２から、明らかなようにアキノワスレグサ醗酵処理物では、発酵前のアキノワスレグサに比べ、１０分付近にピークを示す物質（未同定）が有意に増加していることがわかった。
【実施例６】
【００３２】
［ＡＣＥ阻害活性の測定］
実施例１の乳酸菌によるアキノワスレグサ発酵処理物についてＡＣＥ阻害活性を測定し、発酵前の未発酵アキノワスレグサのＡＣＥ阻害活性と比較した。ＡＣＥ（ウサギ肺アセトンパウダー由来、６７mＵ／ｍｌ）５０μｌに、実施例１で得られたアキノワスレグサ醗酵処理物と、発酵処理前のアキノワスレグサ乾燥粉砕物の各１ｇをそれぞれ８０℃熱水25mlで２０分間抽出し、これを２回繰り返し５０mlに定溶した抽出液それぞれ１５μＬを添加し３７℃、５分間加温した。その後６０８ｍＭ塩化ナトリウムを含むホウ酸緩衝液（ｐＨ８．３）に７．６ｍＭとなるように溶解したHippuryl L-histidyl L-leucineを１２５μＬ添加し、正確に３７℃、３０分間反応させた。反応停止には１０％トリフルオロ酢酸（ＴＥＡ）２０μＬを加え酵素を失活させた。ＡＣＥ阻害活性は高速液体クロマトグラフィーを用いて遊離した馬尿酸を測定した。コントロールとして水を用いた場合をＡＣＥ活性１００％とした結果を図３に示す。この結果、アキノワスレグサを発酵処理することにより、ＡＣＥ活性を約５０％程度にまで阻害できることがわかった。
【実施例７】
【００３３】
［風味の官能検査］
アキノワスレグサの発酵処理物について、嗜好性の試験を行った。実施例１〜３より得られた乾燥アキノワスレグサ醗酵処理物、及び乾燥アキノワスレグサ未発酵物を、沸騰させた熱水１リットル（Ｌ）に対し各５ｇずつの割合で加え、５分間抽出し、濾過した濾液を供試液とし、これら４種類の供試液の各々につき、１０人のパネラーが試飲した。評価基準は、特に飲みやすい（５点）、飲みやすい（４点）、ふつう（３点）、飲みにくい（２点）、特に飲みにくい（１点）の５段階とし、乾燥アキノワスレグサ未発酵物の抽出液をふつう（３点）とし、１０人のパネラーの平均値として評価したところ、実施例１の乳酸菌による発酵処理物の抽出液は４．２点、酵母菌による発酵処理物の抽出液は３．９点、麹菌による発酵処理物の抽出液は３．４点であった。以上の官能検査の結果から、アキノワスレグサを発酵処理することにより、食味が向上され、嗜好性の改善が図れたことが明らかとなった。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】発酵前（比較例：熱水抽出)のＨＰＬＣの測定を示す図である。
【図２】本発明の発酵処理物（熱水抽出）のＨＰＬＣの測定を示す図である。
【図３】本発明の発酵処理物のＡＣＥ阻害活性の測定結果を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アキノワスレグサ（Hemerocallis fulva var.sempervirens）の発酵処理物を有効成分とすることを特徴とする睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項２】
アキノワスレグサの全草の発酵処理物であることを特徴とする請求項１記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項３】
乳酸菌、枯草菌、酵母、麹菌又はこれらの混合物により発酵させて得られることを特徴とする請求項１又は２記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項４】
乳酸菌が、ストレプトコッカス属（Storeptococcus）、ラクトバチルス属（Lactobacillus）、ロイコノストック属（Leuconostoc）、ペディオコッカス属（Pediococcus）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）又はテトラジェノコッカス属（Tetragenococcus）のいずれかに属する微生物であることを特徴とする請求項３記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項５】
ストレプトコッカス属に属する微生物が、ストレプトコッカス・サーモフィルス（S. thermophilus）であることを特徴とする請求項４記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項６】
ラクトバチルス属に属する微生物が、ラクトバチルス・プランタリム（L. plantarum）、ラクトバチルス・デルブリッキ（L. delbruckii）、ラクトバチルス・ペントサス（L. pentosus）又はラクトバチルス・カセイ（L. casei）であることを特徴とする請求項４記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項７】
テトラジェノコッカス属に属する微生物が、テトラジェノ・ハロフィルス（T. halophilus）であることを特徴とする請求項４記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項８】
酵母が、カンジダ属（Candida）又はサッカロマイセス属（Saccharomyces）に属する微生物であることを特徴とする請求項３記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項９】
カンジダ属に属する微生物が、カンジダ・ビルサチルス（C. versatilis）であることを特徴とする請求項８記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項１０】
サッカロマイセス属に属する微生物が、サッカロマイセス・セレビシアエ（S. cerevisiae）であることを特徴とする請求項８記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項１１】
麹菌が、アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus awamori）又はアスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）であることを特徴とする請求項３記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項１２】
アキノワスレグサ（Hemerocallis fulva var.sempervirens）の発酵処理物を含有することを特徴とする睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項１３】
アキノワスレグサの全草の発酵処理物であることを特徴とする請求項１２記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項１４】
乳酸菌、枯草菌、酵母、麹菌又はこれらの混合物により発酵させて得られることを特徴とする請求項１２又は１３記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項１５】
乳酸菌が、ストレプトコッカス属（Storeptococcus）、ラクトバチルス属（Lactobacillus）、ロイコノストック属（Leuconostoc）、ペディオコッカス属（Pediococcus）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）又はテトラジェノコッカス属（Tetragenococcus）のいずれかに属する微生物であることを特徴とする請求項１４記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項１６】
ストレプトコッカス属に属する微生物が、ストレプトコッカス・サーモフィルス（S. thermophilus）であることを特徴とする請求項１５記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項１７】
ラクトバチルス属に属する微生物が、ラクトバチルス・プランタリム（L. plantarum）、ラクトバチルス・デルブリッキ（L. delbruckii）、ラクトバチルス・ペントサス（L. pentosus）又はラクトバチルス・カセイ（L. casei）であることを特徴とする請求項１５記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項１８】
テトラジェノコッカス属に属する微生物が、テトラジェノ・ハロフィルス（T. halophilus）であることを特徴とする請求項１５記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項１９】
酵母が、カンジダ属（Candida）又はサッカロマイセス属（Saccharomyces）に属する微生物であることを特徴とする請求項１４記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項２０】
カンジダ属に属する微生物が、カンジダ・ビルサチルス（C. versatilis）であることを特徴とする請求項１９記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項２１】
サッカロマイセス属に属する微生物が、サッカロマイセス・セレビシアエ（S. cerevisiae）であることを特徴とする請求項１９記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項２２】
麹菌が、アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus awamori）又はアスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）であることを特徴とする請求項１４記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項１】
アキノワスレグサ（Hemerocallis fulva var.sempervirens）の発酵処理物を有効成分とすることを特徴とする睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項２】
アキノワスレグサの全草の発酵処理物であることを特徴とする請求項１記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項３】
乳酸菌、枯草菌、酵母、麹菌又はこれらの混合物により発酵させて得られることを特徴とする請求項１又は２記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項４】
乳酸菌が、ストレプトコッカス属（Storeptococcus）、ラクトバチルス属（Lactobacillus）、ロイコノストック属（Leuconostoc）、ペディオコッカス属（Pediococcus）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）又はテトラジェノコッカス属（Tetragenococcus）のいずれかに属する微生物であることを特徴とする請求項３記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項５】
ストレプトコッカス属に属する微生物が、ストレプトコッカス・サーモフィルス（S. thermophilus）であることを特徴とする請求項４記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項６】
ラクトバチルス属に属する微生物が、ラクトバチルス・プランタリム（L. plantarum）、ラクトバチルス・デルブリッキ（L. delbruckii）、ラクトバチルス・ペントサス（L. pentosus）又はラクトバチルス・カセイ（L. casei）であることを特徴とする請求項４記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項７】
テトラジェノコッカス属に属する微生物が、テトラジェノ・ハロフィルス（T. halophilus）であることを特徴とする請求項４記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項８】
酵母が、カンジダ属（Candida）又はサッカロマイセス属（Saccharomyces）に属する微生物であることを特徴とする請求項３記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項９】
カンジダ属に属する微生物が、カンジダ・ビルサチルス（C. versatilis）であることを特徴とする請求項８記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項１０】
サッカロマイセス属に属する微生物が、サッカロマイセス・セレビシアエ（S. cerevisiae）であることを特徴とする請求項８記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項１１】
麹菌が、アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus awamori）又はアスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）であることを特徴とする請求項３記載の睡眠改善剤及び／又はＡＣＥ阻害剤。
【請求項１２】
アキノワスレグサ（Hemerocallis fulva var.sempervirens）の発酵処理物を含有することを特徴とする睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項１３】
アキノワスレグサの全草の発酵処理物であることを特徴とする請求項１２記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項１４】
乳酸菌、枯草菌、酵母、麹菌又はこれらの混合物により発酵させて得られることを特徴とする請求項１２又は１３記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項１５】
乳酸菌が、ストレプトコッカス属（Storeptococcus）、ラクトバチルス属（Lactobacillus）、ロイコノストック属（Leuconostoc）、ペディオコッカス属（Pediococcus）、ビフィドバクテリウム属（Bifidobacterium）又はテトラジェノコッカス属（Tetragenococcus）のいずれかに属する微生物であることを特徴とする請求項１４記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項１６】
ストレプトコッカス属に属する微生物が、ストレプトコッカス・サーモフィルス（S. thermophilus）であることを特徴とする請求項１５記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項１７】
ラクトバチルス属に属する微生物が、ラクトバチルス・プランタリム（L. plantarum）、ラクトバチルス・デルブリッキ（L. delbruckii）、ラクトバチルス・ペントサス（L. pentosus）又はラクトバチルス・カセイ（L. casei）であることを特徴とする請求項１５記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項１８】
テトラジェノコッカス属に属する微生物が、テトラジェノ・ハロフィルス（T. halophilus）であることを特徴とする請求項１５記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項１９】
酵母が、カンジダ属（Candida）又はサッカロマイセス属（Saccharomyces）に属する微生物であることを特徴とする請求項１４記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項２０】
カンジダ属に属する微生物が、カンジダ・ビルサチルス（C. versatilis）であることを特徴とする請求項１９記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項２１】
サッカロマイセス属に属する微生物が、サッカロマイセス・セレビシアエ（S. cerevisiae）であることを特徴とする請求項１９記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【請求項２２】
麹菌が、アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus awamori）又はアスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）であることを特徴とする請求項１４記載の睡眠改善作用及び／又はＡＣＥ阻害作用を有する機能性食品。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２００６−６２９９８（Ｐ２００６−６２９９８Ａ）
【公開日】平成１８年３月９日（２００６．３．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−２４５１４１（Ｐ２００４−２４５１４１）
【出願日】平成１６年８月２５日（２００４．８．２５）
【出願人】（３９７０３１７８４）株式会社琉球バイオリソース開発 (21)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年３月９日（２００６．３．９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年８月２５日（２００４．８．２５）
【出願人】（３９７０３１７８４）株式会社琉球バイオリソース開発 (21)
【Ｆターム（参考）】
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