【課題】使用済み腹膜透析液のような患者の腹水中の巨核球増強因子に関するアミノ酸配列を有するペプチドを検出し、かつ、定量するための方法及びキットを提供する。前記方法及びキットは、患者の腹腔を裏打ちする中皮の生物学的状態を監視するためと、他の無症候患者で中皮の病状の発生を予測するためと、治療法の危険性及び適合性を評価するためとに用いられる。
【解決手段】体液又は腹水中のＭＰＦレベルを測定するために少なくとも１種類のＭＰＦ特異的な結合物質に患者の腹水を曝露するステップを含むことを特徴とする、腹膜透析を受けている患者の腹膜の健康状態を評価する方法。

【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書で開示される一部の実施態様は、腹水中のメソテリン断片を検出するための方法、キット、試薬及び装置に関する。特に、一部の実施態様は、メソテリン、巨核球増強因子（ＭＰＦ）又はこれら両方の減少を例えば標準試料と比較する検出によって、腹腔及び腹水の状態と、腹膜の細胞のインテグリティー（ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ）との監視に関する。
【背景技術】
【０００２】
腹膜透析（ＰＤ）は腎不全治療の一般的な治療法である。腎臓が十分に血液を濾過できない患者は、過剰な塩、尿酸その他の老廃物を除去するために透析液を腹腔に注射する。前記腹膜を介する浸透によって、溶質は前記血液と前記透析液との間で交換される。適切な時間経過後に、前記透析液は前記腹膜から除去され、廃棄される。このようにして前記血液は平衡化され、尿酸のような最終的な代謝産物が前記血液中に無限に蓄積することを防止する。
【０００３】
ＰＤの代替的な治療は血液透析（ＨＤ）である。ＰＤは、患者の残存する腎機能を維持する点でＨＤよりも優れており、ＨＤよりは軽い貧血症を伴うことが知られる。結果として、ＰＤは（主に心血管イベントの危険性が低いために）治療直後の２年間生存率が高い。しかし長期的には、ＰＤは、腹膜の過剰透過（ｈｙｐｅｒｔｒａｎｓｐｏｒｔ）、腹膜肥大症、非細菌性腹膜炎及び被嚢性腹膜硬化症（ＥＰＳ）をもたらす可能性がある。腹膜肥大症とは、著しい脈管化と、その結果としての血液と透析液との間で非常に効率的な溶質交換−すなわち過剰透過とを伴う、炎症様の腹膜中皮の肥厚をいう。残念ながら、腹膜肥大症は、慢性痛及び排泄困難から死に及ぶまでの範囲の大腸の閉塞性症状にしばしば進行する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
概要
本明細書で議論される一部の局面では、開示される装置、試薬、方法及びキットは、例えば、腎不全の治療を受けている患者の腹腔の状態を評価するための巨核球増強因子（ＭＰＦ）、メソテリン（ＭＳＬＮ）又はこれら両方の減少を有効に検出する。前記ＭＰＦ及びＭＳＬＮレベルは、本明細書で説明される実施例の装置、試薬、方法及びキットその他、本明細書の利益によって当業者によって選択されるであろう、適切な装置、試薬、方法及びキットを用いて血清及び腹水を含むが、これらに限られない体液中で測定される場合がある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
ある局面では、腹腔の状態及び／又は腎不全の治療を受けている患者の腹膜を評価する方法が説明される。一部の実施例では、前記方法は、腹水中のＭＰＦレベルを測定するために少なくとも１種類の前記ＭＰＦ特異的な結合物質に前記患者の腹水を曝露するステップを含む。
【０００６】
１つの実施態様では、前記方法は、腹水中のＭＰＦの測定レベルを標準試料、例えば、透析治療の開始より前又は同時に血液中で検出されるか、あるいは腎不全の透析治療の開始時又は開始から１、２、３ヶ月以内に前記腹水中で検出される、患者の前記ＭＰＦレベルと比較するステップをさらに含む場合がある。もう１つの実施態様では、前記方法は、腹水中の前記ＭＰＦレベルにもとづいて前記患者の治療を選択するステップをさらに含む場合がある。一部の実施例では、選択される前記治療は腹膜透析となってもかまわない。一部の実施態様では、前記ＭＰＦレベルが閾値レベルよりもより大きい場合、例えば、前記ＭＰＦレベルが、例えば、前記標準試料の一定の／規定された割合と統計的に同一か、あるいはより大きくなる場合、選択される前記治療は腹膜透析となる。一部の実施態様では、前記ＭＰＦレベルが、統計的に前記標準試料と同一の割合未満になるか、あるいは前記標準試料と同一の割合以下に減少する場合、選択される前記治療は血液透析となる。
【０００７】
一部の実施態様では、前記結合物質は、低分子及びタンパク質（例えば、リガンド、抗体又はその抗原結合断片）から選択される。一部の実施態様では、結合タンパク質は、ＭＰＦに結合する、例えば、配列番号１に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアント（ｖａｒｉａｎｔ）に結合する、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図４に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、抗体２０−１０又は抗体４１−２８の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域をさらに含む。ある実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又は定常領域の一部分を含む。
【０００８】
一部の実施態様では、前記結合物質は、例えば、検出可能な標識で直接的又は間接的に標識される場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素であってもかまわない。一部の実施態様では、前記検出可能な標識は前記結合物質に直接的に結合される。他の実施態様では、前記標識は前記結合物質に結合する物質に結合する場合がある。例えば、ある実施態様では、前記結合物質は、抗体又はその抗原結合断片となる場合があり、該抗体又は抗原結合断片は、該抗体又はその抗原結合断片に結合する標識物質に接触される場合がある。前記物質の限定的でない実施例は、抗イディオタイプ抗体である。
【０００９】
他の実施態様では、ＭＰＦレベルは、該ＭＰＦを検出可能な標識を含むＭＰＦの第２の結合物質に接触することによって測定される場合があり、例えば、ＭＰＦの領域に結合する第２の結合物質は第１の結合物質と異なる。追加の実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素であってもかまわない。一部の実施態様では、前記検出可能な標識は前記結合物質に直接的に結合される。他の実施態様では、前記標識は前記結合物質に結合する物質に結合する場合がある。例えば、ある実施態様では、前記結合物質は、抗体又はその抗原結合断片となる場合があり、該抗体又は抗原結合断片は、該抗体又はその抗原結合断片に結合する標識物質に結合される場合がある。前記物質の限定的でない実施例は、抗イディオタイプ抗体である。
【００１０】
一部の実施態様では、ＭＰＦレベルは、腎不全治療が開始された後、１、２、３、４、５、６ヶ月、１年、２年又は１０年までか、あるいはそれ以上の期間測定される。
【００１１】
一部の実施態様では、方法は、腎不全治療、例えば、腹膜透析中に１回以上体液中のＭＰＦレベルを測定するステップをさらに含む。一部の実施例では、前記ＭＰＦレベルは、毎週、毎月、３ヶ月毎、６ヶ月毎又は１年毎に測定される場合がある。
【００１２】
追加の局面では、腎不全治療を受けている患者の腹腔及び／又は腹膜の状態を評価する方法が開示される。一部の実施例では、前記方法は、該腹水中のＭＳＬＮレベルを測定するために少なくとも１種類の前記ＭＳＬＮ特異的な結合物質に前記患者の腹水を曝露するステップを含む。
【００１３】
一部の実施態様では、前記方法は、腹水中のＭＳＬＮの測定レベルを標準試料、例えば、透析治療の開始より前又は同時に血液中で検出されるか、あるいは腎不全の透析治療の開始時又は開始から１、２、３ヶ月以内に前記腹水中で検出される、患者の前記ＭＳＬＮレベルと比較するステップをさらに含む場合がある。他の実施態様では、前記方法は、腹水中の前記ＭＳＬＮレベルにもとづいて前記患者の治療を選択するステップをさらに含む場合がある。一部の実施例では、選択される前記治療は腹膜透析となってもかまわない。一部の実施態様では、前記ＭＳＬＮレベルが閾値レベルよりもより大きい場合、例えば、前記ＭＳＬＮレベルが、例えば、前記標準試料の一定の割合と統計的に同一か、あるいはより大きくなる場合、選択される前記治療は腹膜透析となる。他の実施態様では、前記ＭＳＬＮレベルの減少が、統計的に前記標準試料と同一の割合未満になるか、あるいは前記標準試料の一定の割合以下に減少する場合、選択される前記治療は血液透析となる。
【００１４】
一部の実施態様では、前記結合物質は、低分子及びタンパク質（例えば、リガンド、抗体又はその抗原結合断片）から選択される。一部の実施態様では、結合タンパク質は、ＭＳＬＮに結合する、例えば、配列番号２に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアントに結合する、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図６に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図６に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、抗体ＩＣ１４−３０又は抗体１１−２５の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域をさらに含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又はこの一部分を含む。
【００１５】
一部の実施態様では、前記結合物質は、例えば、検出可能な標識で直接的又は間接的に標識される場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素であってもかまわない。一部の実施態様では、前記検出可能な標識は前記結合物質に直接的に結合される。他の実施態様では、前記標識は前記結合物質に結合する物質に結合する場合がある。例えば、ある実施態様では、前記結合物質は、抗体又はその抗原結合断片となる場合があり、該抗体又は抗原結合断片は、該抗体又はその抗原結合断片に結合する標識物質に接触される場合がある。前記物質の限定的でない実施例は、抗イディオタイプ抗体である。
【００１６】
一部の実施態様では、前記ＭＳＬＮレベルは、該ＭＳＬＮを検出可能な標識を含むＭＳＬＮの第２の結合物質に接触することによって測定される場合があり、例えば、ＭＳＬＮ領域に結合する第２の結合物質は第１の結合物質と異なる。追加の実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素であってもかまわない。一部の実施態様では、前記検出可能な標識は前記結合物質に直接的に結合される。他の実施態様では、前記標識は前記結合物質に結合する物質に結合する場合がある。例えば、ある実施態様では、前記結合物質は、抗体又はその抗原結合断片となる場合があり、該抗体又は抗原結合断片は、該抗体又はその抗原結合断片に結合する標識物質に結合される場合がある。前記物質の限定的でない実施例は、抗イディオタイプ抗体である。
【００１７】
一部の実施態様では、前記方法は、腎不全治療、例えば、腹膜透析中に１回以上体液中のＭＳＬＮレベルを測定するステップをさらに含む。一部の実施例では、前記ＭＳＬＮレベルは、毎週、毎月、３ヶ月毎、６ヶ月毎又は１年毎に測定される場合がある。
【００１８】
他の実施態様では、方法は、腹水中のＭＳＬＮレベルにもとづいて患者の治療を選択するステップをさらに含む場合がある。一部の実施例では、選択される前記治療は腹膜透析となってもかまわない。一部の実施態様では、前記ＭＳＬＮレベルが閾値レベルよりもより大きい場合、例えば、前記ＭＳＬＮレベルが、例えば、前記標準試料の一定の割合と統計的に同一か、あるいはより大きくなる場合、選択される前記治療は腹膜透析となる。他の実施態様では、前記ＭＳＬＮレベルの減少が、統計的に前記標準試料の一定の割合未満になるか、あるいは前記標準試料以下に減少する場合には、選択される前記治療は血液透析となる。
【００１９】
もう１つの局面では、患者の体液中のＭＰＦの検出方法が説明される。一部の実施例では、前記方法は、ＭＰＦの第１のエピトープに結合する、少なくとも１種類の抗体又はその抗原結合断片に前記患者の体液を接触させるステップと、前記第１のエピトープと異なるＭＰＦの第２のエピトープに結合する検出可能な標識を含む、第２の抗体又はその抗原結合断片に前記体液を接触させるステップと、前記第１及び第２の抗体又は抗体断片を用いて前記体液中の前記ＭＰＦレベルを検出するステップとを含む。前記検出可能な標識は、例えば、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素であってもかまわない。
【００２０】
一部の実施態様では、方法は、体液中の（とりわけ、腹水中の）ＭＰＦの測定レベルを標準試料、例えば、透析治療の開始より前又は同時に血液中で検出されるか、あるいは腎不全の透析治療の開始時又は開始から１、２、３ヶ月以内に腹水中で検出される、患者の前記ＭＰＦレベルと比較するステップを含む。
【００２１】
もう１つの実施態様では、方法は、腹水中のＭＰＦレベルにもとづいて患者の治療を選択するステップをさらに含む場合がある。一部の実施例では、選択される前記治療は腹膜透析となってもかまわない。一部の実施態様では、前記ＭＰＦレベルが閾値レベルよりもより大きい場合、例えば、前記ＭＰＦレベルが、例えば、前記標準試料の一定の割合と統計的に同一か、あるいはより大きくなる場合、選択される前記治療は腹膜透析となる。一部の実施態様では、前記ＭＰＦレベルが、統計的に前記標準試料と同一の割合未満になるか、あるいは前記標準試料と同一以下に減少する場合には、選択される前記治療は血液透析となる。
【００２２】
一部の実施態様では、抗体又はその抗原結合断片は、ＭＰＦに結合し、例えば、配列番号１に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアントに結合する。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図４に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図４に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、抗体２０−１０又は抗体４１−２８の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域をさらに含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又は定常領域の一部分を含む。
【００２３】
一部の実施態様では、方法は、前記検体から前記ＭＰＦを除去する第１の抗体及び検出可能な標識を含む第２の結合抗体に腹水の検体中のＭＰＦを接触させるステップを含む。一部の実施例では、前記方法は、検出可能な標識で標識されるＭＰＦに前記腹水を曝露するステップをさらに含む場合がある。一部の実施態様では、前記方法は、腎不全治療、例えば、腹膜透析中に１回以上体液中のＭＰＦレベルを測定するステップをさらに含む場合がある。一定の実施態様では、前記ＭＰＦレベルは、毎週、毎月、３ヶ月毎、６ヶ月毎又は１年毎に測定される場合がある。
【００２４】
もう１つの局面では、患者の体液中のＭＳＬＮを検出する方法が説明される。一部の実施例では、前記方法は、ＭＳＬＮの第１のエピトープに結合する少なくとも１つの抗体又はその抗原結合断片に前記患者の体液を接触させるステップと、前記第１のエピトープと異なるＭＳＬＮの第２のエピトープに結合する検出可能な標識を含む、第２の抗体又はその抗原結合断片に前記体液を接触させるステップと、前記第１及び第２の抗体又は抗体断片を用いて前記体液中の前記ＭＳＬＮレベルを検出するステップとを含む。
【００２５】
一部の実施態様では、方法は、体液中のＭＳＬＮの測定レベルを標準試料、例えば、透析治療の開始より前又は同時に血液中で検出されるか、あるいは腎不全の透析治療の開始時又は開始から１、２、３ヶ月以内に前記腹水中で検出される、患者の前記ＭＳＬＮレベルと比較するステップをさらに含む場合がある。他の実施態様では、前記方法は、前記腹水中の前記ＭＳＬＮレベルにもとづいて前記患者の治療を選択するステップをさらに含む場合がある。一部の実施例では、選択される前記治療は腹膜透析となってもかまわない。一部の実施態様では、前記ＭＳＬＮレベルが閾値レベルよりもより大きい場合、例えば、前記ＭＳＬＮレベルが、例えば、前記標準試料の一定の割合と統計的に同一か、あるいはより大きくなる場合、選択される前記治療は腹膜透析となる。他の実施態様では、前記ＭＳＬＮレベルの減少が、統計的に前記標準試料と同一の割合未満になるか、あるいは前記標準試料と同一の割合以下に減少する場合、選択される前記治療は血液透析となる。
【００２６】
一部の実施態様では、抗体又はその抗原結合断片は、ＭＳＬＮに結合し、例えば、配列番号２に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアントに結合する。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、（図６に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、（図６に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、抗体１４−３０又は抗体１１−２５の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域を含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又はこの一部分を含む。
【００２７】
一部の実施態様では、方法は、腎不全治療、例えば、腹膜透析中に１回以上体液中のＭＳＬＮレベルを測定するステップをさらに含む場合がある。一部の実施態様では、前記ＭＳＬＮレベルは、毎週、毎月、３ヶ月毎、６ヶ月毎又は１年毎に測定される場合がある。
【００２８】
もう１つの局面では、体液中の（とりわけ、腹水中の）ＭＰＦレベルの検出に使用するためのキットが提供され、該キットはＭＰＦのエピトープに結合する第１の結合物質を含む。
【００２９】
一部の実施態様では、前記結合物質は、低分子及びタンパク質（例えば、リガンド、抗体又はその抗原結合断片）から選択される。一部の実施態様では、結合タンパク質は、ＭＰＦに結合する、例えば、配列番号１に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアントに結合する、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図４に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図４に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、抗体２０−１０又は抗体４１−２８の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域をさらに含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又は定常領域の一部分を含む。
【００３０】
一部の実施態様では、前記結合物質は、例えば、検出可能な標識で直接的又は間接的に標識される場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素であってもかまわない。一部の実施態様では、前記検出可能な標識は前記結合物質に直接的に結合する。他の実施態様では、前記キットは前記結合物質に結合する物質を含み、前記結合物質に結合する前記物質は標識される。例えば、ある実施態様では、前記結合物質は、抗体又はその抗原結合断片となる場合があり、該抗体又は抗原結合断片は、前記抗体又はその抗原結合断片に結合する標識物質に接触される場合がある。前記物質の限定的でない実施例は、抗イディオタイプ抗体である。一部の実施態様では、前記キットは、説明書、例えば、腹腔及び／又は腹膜の状態を測定するための取扱説明書を含む場合がある。
【００３１】
ある実施態様では、キットは、ＭＰＦの第２の結合物質、例えば、第１の結合物質よりも異なるエピトープに効率的に結合する抗体又はその抗原結合断片をさらに含む場合がある。一部の実施例では、前記第２の結合物質は、抗体又はその抗原結合断片となってもかまわない。一部の実施例では、前記第２の結合物質は、検出可能な標識を含む。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。一部の実施態様では、前記キットは、前記第１の結合物質又は前記第２の結合物質か、あるいはこれら両方に結合できる検出可能な標識をさらに含む場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。他の実施例では、前記キットは、標準曲線を作成するのに用いる１組の標準ＭＰＦを含む場合がある。一部の実施例では、前記標準ＭＰＦは組換えＭＰＦである。一部の実施例では、前記キットは検出可能な標識を含むＭＰＦを含む場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。
【００３２】
もう１つの局面では、体液中の（とりわけ、腹水中の）ＭＳＬＮレベルの検出に用いるためのキットが提供され、該キットはＭＳＬＮのエピトープに結合する第１の結合物質を含む。
【００３３】
一部の実施例では、前記結合物質は、低分子及びタンパク質（例えば、リガンド、抗体又はその抗原結合断片）から選択される。一部の実施態様では、結合タンパク質は、ＭＳＬＮに結合する、例えば、配列番号２に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアントに結合する、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図６に示す）ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図６に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、抗体ＩＣ１４−３０又は抗体１１−２５の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域をさらに含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又はこの一部分を含む。
【００３４】
一部の実施態様では、前記結合物質は、例えば、検出可能な標識で直接的又は間接的に標識される場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素であってもかまわない。一部の実施態様では、前記検出可能な標識は前記結合物質に直接的に結合する。他の実施態様では、前記キットは、前記結合物質に結合する物質をさらに含み、例えば、前記結合物質に結合する前記物質は標識される。例えば、ある実施態様では、前記結合物質は、抗体又はその抗原結合断片となる場合があり、該抗体又は抗原結合断片は、前記抗体又はその抗原結合断片に結合する標識物質に接触される場合がある。前記物質の限定的でない実施例は、抗イディオタイプ抗体である。一部の実施態様では、前記キットは、説明書、例えば、腹腔及び／又は腹膜の状態を測定するための取扱説明書を含む場合がある。
【００３５】
ある実施態様では、キットは、ＭＳＬＮの第２の結合物質、例えば、第１の結合物質よりも異なるエピトープ又は部位に効率的に結合する、抗体又はその抗原結合断片をさらに含む場合がある。一部の実施態様では、前記第２の結合物質は検出可能な標識を含む。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。一部の実施態様では、前記キットは、前記第１の結合物質又は前記第２の結合物質か、あるいはこれら両方に結合できる検出可能な標識をさらに含む場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。他の実施例では、前記キットは、標準曲線を作成するのに用いる１組の標準ＭＳＬＮを含む場合がある。一部の実施例では、前記標準ＭＳＬＮは組換えＭＳＬＮである。一部の実施例では、前記キットは検出可能な標識を含むＭＳＬＮを含む場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。
【００３６】
追加の局面では、体液中の（とりわけ、腹水中の）ＭＰＦ又はＭＳＬＮレベルの検出に用いるためのキットが提供される。一部の実施例では、前記キットは、ＭＰＦに効率的に結合する第１の抗体又はその抗原結合断片と、例えば、前記第１の抗体又はその抗原結合断片と異なるエピトープでＭＳＬＮに効率的に結合する第２の抗体又はその抗原結合断片とを含む。
【００３７】
一部の実施態様では、前記第１の抗体又はその抗原結合断片は、ＭＰＦに結合する、例えば、配列番号１に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアントに結合する。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記第１の抗体又はその抗原結合断片は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図４に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図４に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む。一部の実施態様では、前記第１の抗体は、抗体２０−１０又は抗体４１−２８の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域を含む。一部の実施態様では、前記第１の抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又は定常領域の一部分を含む。
【００３８】
一部の実施例では、前記第２の抗体又はその抗原結合断片は、ＭＳＬＮに結合する、例えば、配列番号２に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアントに結合する、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記第２の抗体又はその抗原結合断片は、（図６に示す）ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、前記第２の抗体又はその抗原結合断片は、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、前記第２の抗体又はその抗原結合断片は、（図６に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む。一部の実施態様では、前記第２の抗体又はその抗原結合断片は、抗体ＩＣ１４−３０又は抗体１１−２５の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域を含む。一部の実施態様では、前記第２の抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又はこの一部分を含む。
【００３９】
一部の実施態様では、キットは、前記第１及び第２の抗体の取扱説明書を含む場合がある。一部の実施例では、前記第１及び第２の抗体の１つは検出可能な標識を含む。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。他の実施例では、前記キットは、前記第１の抗体又は前記第２の抗体か、あるいはこれら両方に結合できる検出可能な標識を含む場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。ある実施態様では、前記キットは、標準曲線を作成するのに用いる１組の標準ＭＰＦを含む場合がある。一部の実施例では、前記標準ＭＰＦは組換えＭＰＦである。他の実施例では、前記キットは１組の標準ＭＳＬＮを含む。一部の実施例では、前記標準ＭＳＬＮは組換えＭＳＬＮである。追加の実施例では、前記キットは、検出可能な標識を含むＭＰＦか、検出可能な標識を含むＭＳＬＮか、あるいはこれら両方を含む場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。
【００４０】
もう１つの局面では、透析が必要な患者の腹膜透析の継続を評価する方法が説明され、前記方法は、前記患者由来の腹膜透析液、例えば使用済みの腹水を少なくとも１種類の結合物質、例えば、ＭＰＦ又はＭＳＬＮに特異的な抗体又はその抗原結合断片に接触させるステップと、ＭＰＦ又はＭＳＬＮレベルを腹膜透析液中で測定するステップと、前記ＭＰＦ又はＭＳＬＮの測定レベルにもとづいてか、あるいは標準試料、例えば、初期に測定されるＭＰＦ及び／又はＭＳＬＮレベル、例えば、腹膜透析治療の開始時か、あるいは腹膜透析治療の開始後１、２又は３ヶ月での個人のＭＰＦ又はＭＳＬＮの初期レベルと比較して前記ＭＰＦ又はＭＳＬＮの測定レベルの減少にもとづいて、腹膜透析又は血液透析を提供するかどうかを評価するステップとを含む。
【００４１】
一部の実施態様では、ＭＰＦ特異的な抗体又はその抗原結合断片は、ＭＰＦに結合する、例えば、配列番号１に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアントに結合する。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、ＭＰＦ特異的な前記抗体又はその抗原結合断片は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図４に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、ＭＰＦ特異的な抗体又はその抗原結合断片は、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、ＭＰＦ特異的な前記抗体又はその抗原結合断片は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図４に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む。一部の実施態様では、ＭＰＦ特異的な前記抗体又はその抗原結合断片は、抗体２０−１０又は抗体４１−２８の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域を含む。一部の実施態様では、ＭＰＦ特異的な前記抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又は定常領域の一部分を含む。
【００４２】
一部の実施例では、ＭＳＬＮ特異的な前記第２の抗体又はその抗原結合断片は、例えば、配列番号２に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアントに結合する。一部の実施態様では、ＭＳＬＮ特異的な前記抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、ＭＳＬＮ特異的な前記抗体又はその抗原結合断片は、（図６に示す）ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、ＭＳＬＮ特異的な前記抗体又はその抗原結合断片は、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、ＭＳＬＮ特異的な前記抗体又はその抗原結合断片は、（図６に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む。一部の実施態様では、ＭＳＬＮ特異的な前記抗体又はその抗原結合断片は、抗体ＩＣ１４−３０又は抗体１１−２５の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域を含む。一部の実施態様では、ＭＳＬＮ特異的な前記抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又はその一部分を含む。
【００４３】
一部の実施態様では、方法は、ＭＰＦ又はＭＳＬＮの測定レベルが、標準試料と比較して、約２０％、３０％、４０％、５０％となるか、あるいはより低くなる場合に、腹膜透析治療を中止するステップをさらに含む。一部の実施例では、血液透析は前記腹膜透析治療の中止後に実施される。一部の実施態様では、前記方法は、検出可能な標識を含むもう１種類の抗体を用いて前記ＭＰＦ又はＭＳＬＮレベルを検出するステップを含む。
【００４４】
追加の局面では、ＨＣ及びＬＣの免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＭＰＦに結合する抗原結合部位を提供する、前記重鎖（ＨＣ）の免疫グロブリン可変ドメイン配列及び前記軽鎖（ＬＣ）の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む、抗体又はその抗原結合断片が提供される。ある実施態様では、前記ＨＣは抗体２０−１０に由来する３個のＣＤＲｓを含む。ある実施態様では、前記ＬＣは抗体２０−１０に由来する３個のＣＤＲｓを含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、抗体２０−１０の前記ＨＣ及び／又はＬＣに由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域を含む。
【００４５】
追加の局面では、ＨＣ及びＬＣの免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＭＰＦに結合する抗原結合部位を提供する、前記重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列及び軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む、抗体又はその抗原結合断片が提供される。ある実施態様では、前記ＨＣは抗体４１−２８に由来する３個のＣＤＲｓを含む。ある実施態様では、前記ＬＣは抗体４１−２８に由来する３個のＣＤＲｓを含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、抗体４１−２８の前記ＨＣ及び／又はＬＣに由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域を含む。
【００４６】
追加の局面では、ＨＣ及びＬＣの免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＭＳＬＮに結合する抗原結合部位を提供する、前記重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列及び軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む、抗体又はその抗原結合断片が提供される。ある実施態様では、前記ＨＣは抗体ＩＣ１４−３０に由来する３個のＣＤＲｓを含む。ある実施態様では、前記ＬＣは抗体ＩＣ１４−３０に由来する３個のＣＤＲｓを含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、抗体ＩＣ１４−３０の前記ＨＣ及び／又はＬＣに由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域を含む。
【００４７】
もう１つの局面では、ＨＣ及びＬＣの免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＭＳＬＮに結合する抗原結合部位を提供する、前記重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列及び軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む、抗体又はその抗原結合断片が提供される。ある実施態様では、前記ＨＣは抗体１１−２５に由来する３個のＣＤＲｓを含む。ある実施態様では、前記ＬＣは抗体１１−２５に由来する３個のＣＤＲｓを含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、抗体１１−２５の前記ＨＣ及び／又はＬＣに由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域を含む。
【００４８】
もう１つの局面では、透析治療を選択する方法が提供される。一部の実施例では、前記方法は、腹水中のＭＰＦレベルが、例えば標準試料の一定の割合より高くなる場合に腹膜透析を選択するステップと、前記腹水中の前記ＭＰＦレベルが標準試料の一定の割合より低くなる場合に血液透析を選択するステップとを含む。一部の実施例では、前記標準試料値は、腹膜透析治療の開始時か、あるいは該開始から１、２又は３ヶ月以内に測定される初期ＭＰＦ値からの変動の少なくとも一部分にもとづく場合がある。例えば前記ＭＰＦレベルが、前記標準試料値の約５０％、４０％、３０％、２０％となるか、あるいは未満となる場合に、腹膜透析は中止され、血液透析が開始される場合がある。
【００４９】
追加の局面では、透析治療を選択する方法が提供される。一部の実施例では、前記方法は、腹水中のＭＳＬＮレベルが標準試料の一定の割合より高くなる場合に腹膜透析を選択するステップと、前記腹水中の前記ＭＳＬＮレベルが標準試料の一定の割合より低くなる場合に血液透析を選択するステップとを含む。一部の実施例では、前記標準試料は、腹膜透析治療の開始時か、あるいは該開始から１、２、３ヶ月以内に測定される初期ＭＳＬＮ値からの変動の少なくとも一部分にもとづく場合がある。例えば前記ＭＳＬＮレベルが、前記標準試料値の約５０％、４０％、３０％、２０％となるか、あるいは未満となる場合に、腹膜透析は中止され、血液透析が開始される場合がある。
【００５０】
もう１つの局面では、継続性腹膜透析治療の適合性を評価する方法が説明される。一部の実施例では、前記方法は、腹水中のＭＰＦレベルが標準試料の一定の割合より高くなる場合に腹膜透析を継続するステップと、前記腹水中の前記ＭＰＦレベルが標準試料の一定の割合より低くなる場合に腹膜透析を中止するステップとを含む。一部の実施例では、前記標準試料は、腹膜透析治療の開始時か、あるいは該腹膜透析治療の開始から１、２、３ヶ月以内に測定される初期ＭＰＦ値からの変動の少なくとも一部分にもとづく場合がある。例えば前記ＭＰＦレベルが、前記標準試料値の約５０％、４０％、３０％、２０％となるか、あるいは未満となる場合に腹膜透析は中止される場合がある。一部の実施例では、血液透析は、腹膜透析が中止される場合に開始される場合がある。
【００５１】
追加の局面では、継続性腹膜透析治療の適合性を評価する方法が説明される。一部の実施例では、前記方法は、腹水中のＭＳＬＮレベルが標準試料の一定の割合より高くなる場合に腹膜透析を継続するステップと、前記腹水中の前記ＭＰＦレベルが標準試料の一定の割合より低くなる場合に腹膜透析を中止するステップとを含む。一部の実施例では、前記標準試料は、透析治療の開始時か、あるいは透析治療の開始から１、２、３ヶ月以内に測定される初期ＭＳＬＮ値からの変動の少なくとも一部分にもとづく場合がある。例えば前記ＭＳＬＮレベルが、前記標準試料値の約５０％、４０％、３０％、２０％となるか、あるいは未満となる場合に、腹膜透析は中止される場合がある。一部の実施例では、血液透析は、腹膜透析が中止される場合に開始される場合がある。
【００５２】
これらと、その他の局面、特徴、実施例及び実施態様とは、以下により詳細に説明される。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
一部の実施態様は、添付図に関して以下に説明される。
【図１】ＭＰＦ（既知のバリアントについて、スイス−プロット Ｑ１３４２１、３２番目ないし２９５番目の残基を参照せよ。）のアミノ酸配列（配列番号１）と、メソテリン（既知のバリアントについて、スイス−プロット Ｑ１３４２１、２９６番目ないし６０６番目の残基を参照せよ。）のアミノ酸配列（配列番号２）。
【図２】抗ＭＰＦクローン２０−１０の重鎖のアミノ酸配列（配列番号５）。
【図３】抗ＭＰＦクローン２０−１０の軽鎖のアミノ酸配列（配列番号６）。
【図４】抗ＭＰＦクローン４１−２８の重鎖のアミノ酸配列（配列番号７）。
【図５】抗ＭＰＦクローン４１−２８の軽鎖のアミノ酸配列（配列番号８）。
【図６】抗ＭＳＬＮクローンＩＣ１４−３０の重鎖のアミノ酸配列（配列番号９）。
【図７】抗ＭＳＬＮクローンＩＣ１４−３０の軽鎖のアミノ酸配列（配列番号１０）。
【図８】抗ＭＳＬＮクローン１１−２５の重鎖のアミノ酸配列（配列番号１１）。
【図９】抗ＭＳＬＮクローン１１−２５の軽鎖のアミノ酸配列（配列番号１２）。
【図１０Ａ】ＭＰＦを検出するために用いられるアッセイの機能的感受性試験の結果。
【図１０Ｂ】メソテリン（ＭＳＬＮ）を検出するために用いられるアッセイの機能的感受性試験の結果。
【図１１】３８人の健康な日本人の血清中で検出される前記メソテリン及びＭＰＦの濃度分布。
【図１２】慢性腎不全の治療として腹膜透析を受けている患者個人の使用済み腹膜透析液中に蓄積される、ＭＰＦ（図１２Ａ）及びメソテリン（１２Ｂ）の９１日間にわたる変動。
【図１３】急性細菌性腹膜炎の発症前後に患者の前記腹膜透析液中に蓄積される、ＭＰＦ、メソテリンその他のマーカーのレベルを示すグラフ。
【図１４】ＭＰＦ及びメソテリンが腹膜透析を長期間実施された患者の透析液中に蓄積しない場合の平均を示す棒グラフ。
【図１５】使用済み透析液中のメソテリン及びＭＰＦの両方の蓄積は、腹膜透析治療の治療結果（継続又は放棄）に関する予測因子となることを示す棒グラフ。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
詳細な説明
以下に説明される、一部の実施例、実施態様、特徴及び局面は、標準試料、例えば、患者の健康状態を評価するために腹膜透析の開始時か、あるいは前記腹膜透析の開始から１、２又は３ヶ月以内に腹水中に存在するＭＰＦ又はＭＳＬＮレベル、例えば、腹腔及び／又は腹膜の状態から、巨核球増強因子（ＭＰＦ）、メソテリン（ＭＳＬＮ）又はこれら両方のレベルの減少を検出する。現行のアッセイは、癌その他の疾患状態の指標としてのＭＰＦの増加を検出するために設計される−例えば、Ｉｗａｈｏｒｉ， Ｋ．ら（Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ ２００８，印刷中）を参照せよ。増加を測定する現行の方法と異なり、ＭＰＦ、ＭＳＬＮ又はこれら両方の前記レベルの減少は、腎不全のような疾患に対する特定の治療の適合性を測定するために用いられる場合があることが突如発見された。前記治療は、腹膜透析又は血液透析の場合がある。ある実施例では、ＭＰＦ又はＭＳＬＮの減少は、細胞学的インテグリティー又は前記腹腔の全体の状態を監視するために用いられる場合がある。追加の使用と、ＭＰＦ、ＭＳＬＮ又はこれら両方の減少の徴候とは、以下により詳細に議論される。
【００５５】
中皮膜は、前記腹腔、胸腔及び心腔のようなさまざまな体腔を裏打ちする。腹膜肥大は、腹水の異常な量と、前記中皮、前記腹膜を保護的に覆う細胞の単層の消失の結果とによって生じる力学的ストレスに対する炎症性応答として考えられる場合がある。ＰＤが中止された後でさえも腹膜肥大が進行するとき、必要とされる初期診断マーカーは、腹膜肥大の発症前及び過剰透過が顕在化する前に中皮細胞の前記消失を示す場合がある。
【００５６】
中皮細胞の裏打ちの健康状態を示すために使用済み透析液中で測定可能である既知の診断マーカーの１つは、ＣＡ１２５である。ＣＡ１２５は腹膜透析中に前記腹膜から剥離する腹膜中皮細胞の全てではないが、多くの表面上に存在することが観察された（Ｋａｍｉｄａら、ポスター Ｐ−２６８，５０^ｔｈ ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｆ ｔｈｅ Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｋｉｄｎｅｙ Ｓｏｃｉｅｔｙ）。たとえ、溶質輸送マーカーとの組み合わせでのその使用が科学文献で物議をかもす議論がされたとしても、使用済み透析液中のＣＡ１２５濃度は大きく変動し、診療において有用であることは未だに証明されていない（例えば、Ｋｒｅｄｉｅｔ， Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ５５： ３４１−３５６； Ｏｔｓｕｋａら， Ｃｌｉｎ． Ｅｘｐ． Ｎｅｐｈｒｏｌ ９：３１５−３１９； Ｂｒｅｂｏｒｏｗｉｃｚら、Ｎｅｐｈｒｏｎ Ｃｌｉｎ． Ｐｒａｃｔ． １００：ｃ４６−ｃ５１を参照せよ。）。
【００５７】
初期段階でＰＤの有効な利益（すなわち、残存する腎機能の保護、軽い貧血症及び心血管イベントの低い危険性）をもたらし、長期間の危険性（すなわち、腹膜肥大及びＥＰＳによる大腸閉塞）を回避するためのＨＤ治療へ変更するためにＰＤ患者に対する適切な時点を提供する、診療での診断マーカーは、今日、全く存在しない。
【００５８】
中皮細胞は、メソテリン前駆体タンパク質を合成することが知られる。前記前駆体タンパク質は、細胞外間隙に分泌される、短いＮ−末端断片（３１ｋＤａ）、ＭＰＦと、グリコホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）−アンカーを介して細胞膜に結合されたままとなる、長いＣ−末端断片、メソテリンとを産生する、フリンプロテアーゼによって効率的に開裂されると考えられる。
【００５９】
メソテリンは、中皮細胞と、中皮腫と、ある扁平上皮癌と、卵巣癌と、膵臓癌と、肺癌との細胞表面上で観察され（Ｃｈａｎｇら、１９９６， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９３： １３６−１４０；米国特許第６，０８３，５０２号公報明細書）、前記癌に対する治療用抗体のための標的として調査中である（例えば、Ｍｏｒｐｈｏｔｅｋ社による米国臨床試験第ＮＣＴ００３２５４９４号）。それどころか、ＭＰＦは前記細胞表面上で決して観察されない。むしろ、ＭＰＦは、膵癌の細胞株、ＨＰＣ−Ｙ５の培養上清で最初に同定された（Ｋｏｊｉｍａら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７０： ２１９８４−２１９９０；さらに、日本国特許第３４９０１２５号公報明細書）。この報告は、ＭＰＦだけでなく、完全長メソテリン前駆体タンパク質が、完全長メソテリン前駆体ｃＤＮＡをトランスフェクションしたＣＯＳ細胞の前記培養上清で検出されたことを示し、メソテリン前駆体が前記細胞から分泌されず、前記細胞表面上に到達する前にＭＰＦ及びメソテリンに完全に開裂されることを示す。
【００６０】
Ｓｃｈｏｌｌｅｒら（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９６： １１５３１−１１５３６、さらに、米国特許第６７７０４４５号公報明細書）は、メソテリン前駆体ｍＲＮＡを発現している癌細胞の前記細胞表面と、組換えメソテリン融合タンパク質とに結合できる多くのマウスモノクローナル抗体の産生を報告した。この組換えタンパク質は、メソテリン前駆体タンパク質の前記ＭＰＦ（Ｎ−末端）部分を含まず、前記抗体がタンパク質分解性開裂後の成熟メソテリン（Ｃ−末端）部分にのみ結合することを示す。ＳｃｈｏｌｌｅｒらはサンドウィッチＥＬＩＳＡを構築し、メソテリン又は関連ペプチドの存在を証明するために前記抗体のうち２種類、クローンＯＶ６５９及び４Ｈ３を用い、前記関連ペプチドは、（可溶性メソテリン−関連ペプチドにちなんで）ＳＭＲと名付けられた。ＳＭＲは、（例えば、ホスホリパーゼＣによって触媒される）前記ＧＰＩアンカーの酵素性開裂による前記細胞表面からの放出を含む、多くの供給源から生じると考えられる。
【００６１】
対照的に、前記メソテリン前駆体ペプチドからＭＰＦを開裂させる原因であるフリンプロテアーゼはヒト細胞で偏在的に発現し、トランスゴルジ網で主に配置されるために、ＭＰＦは前記タンパク質が前記細胞表面に到達する前に前記前駆体タンパク質から開裂されると思われる（例えば、Ｎａｋａｙａｍａ、Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｊ． ３２７： ６２５−６３５）。したがって、メソテリン前駆体タンパク質は通常は血流中に入らず、むしろＭＰＦ及びメソテリンの前記開裂産物は、別個独立のメカニズムによって細胞から放出された後に、別々に前記血流に入ることが明らかである。さらに、メソテリンがミュラー上皮細胞の細胞表面上で見出され、かつ、前記血流中に部分的に開裂される巨大糖タンパク質のＣＡ１２５に結合することが示されたように、ＭＰＦ及びメソテリンは一端前記血液に入った後には異なる薬物動態を示すことが明らかである。実際に、Ｉｗａｈｏｒｉら（Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ ２００８，印刷中）は、ＮＣＩ−Ｈ２２６、メソテリン前駆体ｍＲＮＡを発現することが知られるヒト肺癌細胞株の培養上清中の７０ｎｇ／ｍＬのＭＰＦと、メソテリン前駆体のｃＤＮＡ発現ベクターを用いてトランスフェクションされたＨＥＫ ２９３Ｔ細胞の上清中の２０ｎｇ／ｍＬとを測定した。同一の培養上清は、４ｎｇ／ｍＬ及び２．８ｎｇ／ｍＬのメソテリンのそれぞれのみを含み、約８０−９５％のメソテリンが、用いられた培養条件下で前記細胞に結合したままであることを示唆する。対照的に、Ｉｗａｈｏｒｉらは、健康な日本人が該日本人の血清中には、９．０ ＋／− ２．９ｎｇ／ｍＬのＭＰＦ及び６１．４ ＋／− ２１．４ｎｇ／ｍＬのメソテリンが存在することを発見し、該発見は、メソテリンがＭＰＦよりも前記血流中でより安定（約５０−１００倍）となる場合があることを示唆する。まとめると、長年の十分かつ矛盾のない証拠が存在し、メソテリン及びＭＰＦは、分泌、隔離及び分解の異なるメカニズムに関する明確なバイオマーカーであることを示す。
【００６２】
特許出願第ＷＯ２００５０７２３４１号公報明細書は、腹水中のメソテリンの存在を証明するために、ＳｃｈｏｌｌｅｒらのクローンＯＶ６５９及び４Ｈ３と同一の抗体を用いる。前記特許は、中皮腫は腹水の蓄積及び腹水中でのメソテリンの蓄積をもたらすという概念的な理解を議論する。したがって、腹水中のメソテリンの高濃度測定値は、腹水の前記蓄積原因が非悪性原因というよりはむしろ癌であるということを示す場合がある。メソテリンは腹水中で検出できるということを証明するために、出願人は天然の病的原因のために腹水の蓄積がある患者を見出すことが困難なために、その代わりに約５−６５ｎｇ／ｍＬのメソテリンが使用済み腹膜透析液中で検出される場合があることを示した。
【００６３】
透析液は腎不全の腹膜透析治療で一般的に用いられる。人工緩衝液は所定期間ヒト腹膜中に注射され、そのうえ再度排出される。特許出願第ＷＯ２００５０７２３４１号公報明細書は、前記腹膜の中皮細胞が腹水中にメソテリンを放出可能であることを示唆する。したがって、メソテリン濃度は前記中皮細胞の状態の指標であり、増加は前記中皮細胞の悪性増殖を示唆する。概念的に、悪性腫瘍は、ネクローシス及びタンパク質分解の発生のために細胞が死ぬ低いｐＨの低酸素領域をしばしば生じるために、悪性状態は細胞表面から前記腹水中へのメソテリンの分泌を特にもたらす場合がある。
【００６４】
これらの論文、特許文献及び特許は、低下されるＭＰＦ又はＭＳＬＮ濃度の診断的有用性か、いずれかの非腫瘍性疾患の診断のためのＭＰＦ又はＭＳＬＮの使用か、血液以外の体液中でのＭＰＦの測定かを考慮していない。メソテリン及びＭＰＦは癌の診断マーカーとして注目を浴びていたが、これらのマーカーは、ＰＤ治療の監視、特に、将来の合併症の危険性の評価か、ＰＤ治療を中止してＨＤ治療を選択するための腎不全患者に対する最適な時点の決定かについて考慮されていなかった。ＭＰＦは、使用済み腹膜透析液のような腹水又は胸水中に検出可能な量で存在することが証明されていなかった。さらに、初期レベルからのＭＰＦ及びＭＳＬＮの減少は、特定の状態の指標として前記出願のいずれにも用いられていない。
【００６５】
本明細書で開示される、方法、キット、試薬及び装置の一部の実施態様は、ＭＰＦ、ＭＳＬＮ又はこれら両方を有利に検出し、特に、治療の開始時に典型的に測定されるか、あるいは決定されるレベルである、参照レベルからのＭＰＦ、ＭＳＬＮ又はこれら両方の減少を検出する。一部の実施態様では、ＭＰＦ、ＭＳＬＮ又はこれら両方の前記レベルは、例えば、腹膜透析を受けている患者の腹腔の健康状態を含む、健康状態を評価するために用いられる場合がある。前記方法を実施するために形成されるキットが説明される。
【００６６】
本明細書で開示される一部の実施態様は、体液又は腹水の検体を用いて実施される場合がある、診断アッセイに関する。一部の実施例では、液体検体は、前記腹腔の中皮の裏打ちの細胞学的インテグリティーを監視するために前記腹腔から得られる場合がある。限定的でない実施例として、前記アッセイは、腹膜透析治療に由来する腹膜の合併症の危険性を評価するために使用済み腹膜透析液を用いて実施される場合がある。
【００６７】
一部の実施態様では、ヒト患者で前記中皮の前記細胞学的インテグリティーの監視の非侵襲的方法は、本明細書で説明される前記方法及び物質を用いて実施される場合がある。ある実施例では、前記方法は、前記患者から得られた使用済み透析液中のＭＳＬＮ又はＭＰＦか、これらのタンパク質分解性断片かの発生を評価するステップを含む。例えば、前記使用済み透析液中で測定される、ＭＳＬＮ又はＭＰＦか、あるいはこれらの断片の量と、ＰＤ治療期間にわたって前記使用済み透析液中の前記ペプチドの蓄積の減少とは、前記患者が腹膜肥大症及び関連合併症を発症する場合がある危険性の指標として用いられる場合がある。
【００６８】
一部の実施態様では、ＭＳＬＮ又はＭＰＦか、あるいはこれらの断片は、例えば、前記ＭＳＬＮ又はＭＰＦのペプチドに特異的に結合する第１の抗体のような結合物質に前記使用済み透析液（又は遠心分離か、あるいは濾過済み透析液）を曝露することによって前記患者の使用済み透析液中で評価される場合がある。第１の抗体に結合する前記ＭＳＬＮ又はＭＰＦのペプチドかどうかを決定することによって、前記患者の中皮液中のＭＳＬＮ又はＭＰＦのペプチドの存在又はレベルが評価される場合がある。例えば、第１の抗体は、ロボット装置での自動分析のために適用される類型のプラスチックのマルチ−ウェルプレートのような基質に結合される場合がある。前記ＭＳＬＮ又はＭＰＦと、第１の抗体との結合は、例えば、前記ＭＳＬＮ又はＭＰＦのペプチドに特異的に結合する第２の抗体に第１の抗体を接触するステップと、前記第１及び第２の抗体の共局在を評価するステップとによって評価される場合がある。一部の実施例では、さらに以下で議論されるように、前記第２の抗体は、酵素、放射性核種、フルオロフォア及び発色団その他の検出可能な標識からなるグループから選択される化合物で検出可能に標識される場合がある。ＭＰＦ、ＭＳＬＮ又はこれらの断片のレベルは、治療期間中監視される場合があり、前記ＭＰＦ又はＭＳＬＮレベルが閾値レベル以下に低下するとき、治療は中止又は変更されてもかまわないが、前記閾値は、絶対的なレベルか、あるいは同一患者の過去のＭＰＦ又はＭＳＬＮレベルに関する減少のいずれか、好ましくは、腹膜透析治療の開始から３ヶ月以内に測定される前記ＭＰＦ又はＭＳＬＮレベルとして定義される場合がある。
【００６９】
ある実施態様では、患者から得た使用済み透析液にこれらと結合する抗ＭＳＬＮ又は抗ＭＰＦのペプチド「捕捉」抗体を含むプレートを接触するステップを含む方法が実施される場合がある。前記使用済み透析液は、任意に、例えば、１０分間、２０分間、３０分間又は１時間その他の選択される時間のような期間、プレートでインキュベートされる場合がある。前記プレートは、前記捕捉抗体によって結合されるエピトープとは別のＭＳＬＮ又はＭＰＦのペプチドのそれぞれの前記エピトープに結合するビオチン化された第２の抗体と接触される場合がある。ストレプトアビジン連結酵素は、発色性基質（例えば、西洋ワサビのペルオキシダーゼの発色性基質である、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ））の存在下でその検出を可能にするために前記ビオチン化された抗体に結合される場合がある。もちろん、前記第２の抗体は、その代わりに、蛍光的に標識されるか、放射性標識されるか、あるいはその逆で、以下により詳細に議論されるように検出可能に標識される場合がある。
【００７０】
もう１つの実施態様では、中皮の細胞学的インテグリティーを監視する方法が提供される。ある実施例では前記方法は、第１の抗体をこれらの標識化リガンドに曝露するステップと、前記第１の抗体を前記中皮液に接触させるステップとを含む。前記中皮液に接触させられた前記第１の抗体に結合する標識化リガンドの量と、前記中皮液に接触させられていない前記第１抗体と同等量に結合する標識化リガンドの量とを比較することによって、前記第１抗体に結合された前記中皮液に由来するＭＳＬＮ又はＭＰＦがどれくらいの量なのかを評価される場合がある。
【００７１】
本明細書で開示されるアッセイ及びキットの一部の実施態様では、前記ＭＰＦ又はＭＳＬＮのペプチドのアミノ酸配列は、配列番号１又は配列番号２の少なくとも１０個、２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個、８０個、９０個、１００個、１２０個、１４０個、１６０個、１８０個又は２００個の連続する残基か、スイス−プロットのアクセッション番号Ｑ１３４２１に列挙される既知のバリアントかを含むことが、必ずしも必要ではないが、所望される。代替的に、前記ＭＰＦ又はＭＳＬＮのペプチドは、少なくとも２０個の連続するアミノ酸残基の一部分を含む場合があり、該アミノ酸の一部分は、（ＭＰＦの）配列番号１又は（ＭＳＬＮの）配列番号２か、スイス−プロットのアクセッション番号Ｑ１３４２１に列挙される既知のバリアントかに少なくと９０％（又は９５％）一致する。
【００７２】
一部の実施例では、本明細書に開示されるキット、装置及び方法は、例えば、炎症及び増殖過程の指標と、血液及び透析液間の溶質輸送の指標と、患者の適切な血液透析の指標と、腹膜の細胞学的インテグリティー又は損傷の追加の指標とを用いる、腹腔の状態を（例えば、使用済み透析液か、血清か、あるいは超音波のような画像技術を用いて）評価するための既知か、今後開発されるキット及び方法かを組み合わせて用いるられる場合がある。患者の腹水中のＭＳＬＮ又はＭＰＦか、これらの断片かの発生の評価は、患者の血清中のＭＳＬＮ又はＭＰＦか、これらの断片かの評価を組み合わせて同様に実施される場合がある。
【００７３】
実質的に同一のキット及び方法は、細菌性又は非細菌性腹膜炎か、被嚢性腹膜硬化症（ＥＰＳ）かの徴候がある患者のような徴候を示す患者の腹膜の病状を特徴付けるために用いられる場合がある。実質的に同一の前記キット及び方法は、例えば、新規の透析液の生体適合性を評価するために、ｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏで腹膜中皮の前記細胞学的インテグリティーを有する投与透析液のいずれかの効果を監視するために用いられる場合がある。透析液中のＭＳＬＮ又はＭＰＦか、これらの断片かの蓄積の急速な変動、特に減少は、前記透析液は患者が十分に耐えられないという効能を証明する場合がある一方で、透析液中のＭＳＬＮ又はＭＰＦか、これらの断片かの蓄積の緩慢な変動は、腹膜の合併症の危険性がない緩衝液の効能を提供する場合がある。したがって、前記キット、装置及び方法は、腹膜透析液に添加される新規薬剤の治療効果及び安全性を評価するために用いられる場合がある。
【００７４】
これらと、その他の実施態様、特徴、局面及び実施例とは、下記の定義に関して以下により詳細に説明される。
【００７５】
巨核球増強因子（「ＭＰＦ」）は、約３１ｋＤａの分子量を有し、かつ、（ｉ）配列番号１の少なくとも１０個の連続する残基か、（ｉｉ）少なくとも２０個の連続するアミノ酸残基の一部分かのいずれかを含むアミノ酸配列を含む、ポリペプチドをいい、該アミノ酸残基の一部分は、図１に示す配列番号１の２０個の連続する残基か、スイス−プロットのアクセッション番号Ｑ１３４２１に列挙される既知のこれらのバリアントかに少なくとも９０％（好ましくは、少なくとも９５％又は１００％）一致する。ＭＰＦはＮ−グリコシル化される場合があり、いくつかの既知の小さな配列変化が知られる（スイス−プロットのアクセッション番号Ｑ１３４２１を参照せよ。）。
【００７６】
メソテリン（「ＭＳＬＮ」）は、約４０ｋＤａの分子量を有し、かつ、（ｉ）配列番号２の少なくとも１０個の連続するアミノ酸又はスイス−プロットのアクセッション番号Ｑ１３４２１に列挙される既知の前記バリアントか、（ｉｉ）少なくとも２０個の連続するアミノ酸残基の一部分かのいずれかを含むアミノ酸配列を有する、ポリペプチドをいい、該アミノ酸残基の一部分は、図１に示す配列番号２の２０個の連続する残基か、スイス−プロットのアクセッション番号Ｑ１３４２１に列挙される既知の前記バリアントかに少なくとも９０％（好ましくは、少なくとも９５％又は１００％）一致する。メソテリンのバリアントは、検出される８個のアミノ酸、ＰＱＡＰＲＲＰＬ（配列番号２１）のバリアントと、Ｃ末端側のＶＱＧＧＲＧＧＱＡＲＡＧＧＲＡＧＧＶＥＶＧＡＬＳＨＰＳＬＣＲＧＰＬＧＤＡＬＰＰＲＴＷＴＣＳＨＲＰＧＴＡＰＳＬＨＰＧＬＲＡＰＬＰＣ（配列番号２３）が、ＭＱＥＡＬＳ（配列番号２２）及び疎水性ＧＰＩリンカーモチーフ（ＧＴＰＣＬＬＧＰＧＰＶＬＴＶＬＡＬＬＬＡＳＴＬＡ）（配列番号２４）に置換されているバリアントとを含むが、これらに限られないことが知られる。前記メソテリンは、翻訳後修飾としてのグリコホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー及び多くのＮ−結合型糖鎖を含む場合がある。前記ＧＰＩアンカーはメソテリンを細胞膜に結合させるが、可溶型のメソテリンを提供するためのホスホリパーゼによって開裂される場合がある。
【００７７】
ＭＰＦ／メソテリン前駆体は、フリンプロテアーゼによる開裂後にＭＰＦ及びＭＳＬＮを提供する約７０ｋＤａのタンパク質である。
【００７８】
本明細書で用いられるところの「体液」という用語は、抽出、単離又はサンプリングされる場合があり、身体中の天然の液体（例えば、血液、リンパ液、尿など）を含む体液を含むことを意図する。体液は、前記血液と平衡化され（あるいはその逆に天然の体液と混合され）、このように前記身体に由来する多量の液体及び溶質が溶解された流動性人工溶液を含むことを意図する。例えば、一部の実施態様では、腹水は体液とみなされる場合がある。例えば、腹水は、腹腔中に腹膜透析液の注入がしばしば原因で個人の前記腹腔中で見出される液体である。
【００７９】
「腎不全」という用語は、腎障害か、腎疾患か、腎不全か、腎癌か、事故による少なくとも１個の腎臓の欠失か、外科的除去又は遺伝性疾患か、１つ又は両方の腎臓が適切に作用していないその他の状態かを含むことを意図する。
【００８０】
「抗体」という用語は、少なくとも１個の免疫グロブリン可変ドメイン又は免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質をいう。例えば、抗体は、（ＶＨとして本明細書で省略される）重鎖（Ｈ）可変領域と、（ＶＬとして本明細書で省略される）軽鎖（Ｌ）可変領域とを含む場合がある。もう１つの例は、抗体は、２個の重鎖（Ｈ）可変領域と、２個の軽鎖（Ｌ）可変領域とを含む。「抗体」という用語は、抗体の抗原結合断片（例えば、単鎖抗体と、Ｆａｂ及びｓＦａｂ断片と、Ｆ（ａｂ’）_２と、Ｆｄ断片と、Ｆｖ断片と、ｓｃＦｖと、ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（ｄｅ Ｗｉｌｄｔら、Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １９９６； ２６（３）：６２９−３９．）と）及び完全抗体を含む。抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ（及びこれらのサブタイプ）の構造的特徴を有する場合がある。抗体は、いずれの供給源に由来してもかまわないが、霊長類（ヒト及びヒトでない霊長類）の抗体と、霊長類化される抗体とが好ましい。ポリクローナル及びモノクローナル抗体のいずれか又は両方は、本明細書で説明されるアッセイ及びキットで用いられる場合がある。
【００８１】
前記ＶＨ及びＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（「ＦＲ」）と呼ばれるより保存される領域に散在される「相補性決定領域」（「ＣＤＲｓ」）と呼ばれる超可変領域にさらに細分化される場合がある。フレームワーク領域及びＣＤＲｓの範囲は正確に定義された（Ｋａｂａｔ， Ｅ．Ａ．ら、（１９９１） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ出版 Ｎｏ． ９１−３２４２と、Ｃｈｏｔｈｉａ， Ｃ．ら、 （１９８７） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１−９１７を参照せよ。また、ｗｗｗ．ｈｇｍｐ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋを参照せよ。）。Ｋａｂａｔの定義は本明細書で用いられる。ＶＨ及びＶＬのそれぞれは、次の順序、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシル末端まで配置される、３個のＣＤＲｓ及び４個のＦＲｓから典型的に構成される。
【００８２】
本明細書で用いられるところの「免疫グロブリン可変ドメイン配列」は、１個又は２個以上のＣＤＲ領域が抗原結合部位に適する構造中に位置されるように免疫グロブリン可変ドメインの構造を形成する場合があるアミノ酸配列をいう。例えば、前記配列は、天然の可変ドメインのアミノ酸配列の全て又は一部分を含む場合がある。例えば、前記配列は、１種類、２種類又は３種類以上のＮ−又はＣ−末端のアミノ酸、内部のアミノ酸を省略する場合か、１種類又は２種類以上の挿入又は追加の末端のアミノ酸を含む場合か、他の変更を含む場合かがある。ある実施態様では、免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むポリペプチドは、抗原結合部位を形成するためのもう１個の免疫グロブリン可変ドメイン配列、例えば、ＭＰＦ又はＭＳＬＮタンパク質、例えば、腹水中のＭＰＦ又はＭＳＬＮと優先的に相互作用する構造に関連する場合がある。
【００８３】
前記抗体のＶＨ又はＶＬ鎖は、免疫グロブリン重鎖又は軽鎖のそれぞれを形成するための重鎖又は軽鎖の定常領域の全て又は一部分をさらに含む場合がある。ある実施態様では、前記抗体は、２種類の免疫グロブリン重鎖及び２種類の免疫グロブリン軽鎖の４量体であって、該免疫グロブリン重鎖及び軽鎖は、例えば、ジスルフィド結合によって相互に連結させられる。ＩｇＧｓで、前記重鎖の定常領域は、３個の免疫グロブリンドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。前記軽鎖の定常領域は、ＣＬ領域を含む。前記重鎖及び軽鎖の前記可変領域は、抗原と相互作用する結合領域を含む。前記抗体の前記定常領域は、免疫系のさまざまな細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）を含む、宿主の組織又は因子への該抗体の結合を典型的に仲介する。前記免疫グロブリンの前記軽鎖は、カッパー又はラムダ型となる場合がある。ある実施態様では、前記抗体はグリコシル化される。抗体は、抗体−依存性細胞障害及び／又は補体−仲介性細胞障害に対して機能的となる場合がある。
【００８４】
抗体の１箇所又は２箇所以上の領域は、ヒト又は事実上ヒトの領域である。例えば、１箇所又は２箇所以上の前記可変領域は、ヒト又は事実上ヒトの可変領域である。例えば、１箇所又は２箇所以上の前記ＣＤＲｓは、例えば、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２及びＬＣ ＣＤＲ３に由来するヒトのＣＤＲｓである。前記軽鎖のＣＤＲｓのそれぞれはヒトのＣＤＲｓである。ＨＣ ＣＤＲ３はヒトのＨＣ ＣＤＲ３である。１箇所又は２箇所以上の前記フレームワーク領域は、例えば、前記ＨＣ又はＬＣのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４に由来するヒトのフレームワーク領域である。例えば、前記Ｆｃ領域はヒトのＦｃ領域である。ある実施態様では、全ての前記フレームワーク領域は、例えば、ヒトの体細胞（例えば、免疫グロブリンを産生する造血細胞又は非造血細胞）に由来するヒトのフレームワーク領域である。ある実施態様では、前記ヒトの配列は、例えば、生殖系列の核酸によってエンコードされる生殖系列の配列である。ある実施態様では、選択される抗体の前記フレームワーク（ＦＲ）残基は、最も類似の霊長類の生殖系列遺伝子、特に前記ヒト生殖系列遺伝子中の対応する残基のアミノ酸型に変わってもかまわない。１箇所又は２箇所以上の前記定常領域は、ヒト又は事実上ヒトの領域である。例えば、免疫グロブリン可変領域、前記定常領域、前記定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＬ１）又は完全抗体の少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％は、ヒト又は事実上ヒトの領域である。
【００８５】
抗体の全て又は一部分は、免疫グロブリン遺伝子又はそのセグメントによってエンコードされる場合がある。模範的なヒト免疫グロブリン遺伝子は、カッパー、ラムダ、アルファ（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）、ガンマ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、デルタ、イプシロン及びミューの定常領域遺伝子と、多くの免疫グロブリン可変領域遺伝子とを含む。完全長免疫グロブリン「軽鎖」（約２５ＫＤａ又は約２１４個のアミノ酸）は、ＮＨ_２−末端（約１１０個のアミノ酸）の可変領域遺伝子と、ＣＯＯＨ−末端のカッパー又はラムダの定常領域遺伝子とによってエンコードされる。完全長免疫グロブリン「重鎖」（約５０ＫＤａ又は約４４６個のアミノ酸）は、（約１１６個のアミノ酸）の可変領域遺伝子と、他の前記定常領域遺伝子の１種類、例えば、（約３３０個のアミノ酸をエンコードしている）ガンマとによって同様にエンコードされる。ヒトＨＣの長さは、ＨＣ ＣＤＲ３は、約３個のアミノ酸残基から３５個を超えるアミノ酸残基まで変化するためにかなり変化する。
【００８６】
完全長抗体の「抗原−結合断片」という用語は、興味のある標的に特異的に結合する能力がある、完全長抗体の１種類又は２種類以上の断片をいう。完全長抗体の「抗原−結合断片」という用語に含まれる結合断片の例は、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる１価の断片と、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）_２断片、蝶番領域でジスルフィド結合によって連結される２個のＦａｂ断片を含む２価の断片と、（ｉｉｉ）前記ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片と、（ｉｖ）抗体の単腕の前記ＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片と、（ｖ）ＶＨドメインからなる、ｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、（１９８９） Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６）と、（ｖｉ）機能性を保持する単離化相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含むが、これらに限られない。さらに、Ｆｖ断片、ＶＬ及びＶＨの２種類のドメインは、別々の遺伝子によってコードされるけれども、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる１価の分子を形成するための前記ＶＬ及びＶＨ領域対で単一のタンパク質鎖としてこれらを製造することができる、合成リンカーによる組換え方法を用いてこれらは結合される場合がある。例えば、米国特許第５，２６０，２０３号公報明細書、第４，９４６，７７８号公報明細書及び第４，８８１，１７５公報明細書と、Ｂｉｒｄら、（１９８８） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６及びＨｕｓｔｏｎら、（１９８８） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３とを参照せよ。
【００８７】
抗体断片は、当業者に知られる従来技術を含む適切な技術のいずれかを用いて獲得される場合がある。「単一特異的抗体」という用語は、特定の標的、例えば、エピトープに対する単一の結合特異性及び親和性を示す抗体をいう。本明細書で用いられるところの「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」を含むこの用語は、生産される前記抗体がどのようなものかにかかわりなく、単一の分子組成物の抗体又はこれらの断片の準備をいう。
【００８８】
「事実上ヒト」免疫グロブリン可変領域は、該免疫グロブリン可変領域が正常なヒトで免疫原性応答を誘発しないような十分に多くのヒトのフレームワークアミノ酸位置を含む免疫グロブリン可変領域である。「事実上ヒト」抗体は、該抗体が正常なヒトで免疫原性応答を誘発しないような十分に多くのヒトのアミノ酸位置を含む抗体である。
【００８９】
「ヒト化」免疫グロブリン可変領域は、該免疫グロブリン可変領域が正常なヒトで免疫原性応答を誘発しないような十分に多くのヒトのフレームワークアミノ酸位置を含むように改変される免疫グロブリン可変領域である。「ヒト化」免疫グロブリンの説明は、例えば、米国特許第６，４０７，２１３号公報明細書及び米国特許第５，６９３，７６２号公報明細書を含む。
【００９０】
本明細書で用いられる「結合親和性」は、見かけの結合定数又はＫａをいう。前記Ｋａは、解離定数（Ｋ_ｄ）の逆数である。結合タンパク質は、例えば、特定の標的分子、例えば、ＭＰＦ、メソテリン又はこれらの断片に対して、少なくとも１０^５、１０^６、１０^７、１０^８、１０^９、１０^１０及び１０^１１Ｍ^−１の結合親和性を有する場合がある。第２の標的と比較して第１の標的への結合タンパク質の高結合親和性は、前記第２の標的に結合するための前記Ｋａ（又はＫ_ｄの数値）と比較して、前記第１の標的に結合するためのより高いＫａ（又はＫ_ｄのより小さな数値）として示される場合がある。前記の場合には、前記結合タンパク質は、前記第２の標的（例えば、第２の構造又はその模倣の同一のタンパク質か、あるいは第２のタンパク質）と比較して、前記第１の標的（例えば、第１の構造又はその模倣のタンパク質）に対して特異性を有する。結合親和性（例えば、特異性その他の比較に関して）の違いは、少なくとも１．５、２、３、４、５、１０、１５、２０、３７．５、５０、７０、８０、９１、１００、５００、１０００又は１０^５倍である。
【００９１】
結合親和性は、平衡透析、平衡結合、ゲル濾過、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴又は（例えば、蛍光アッセイ、電子スピン共鳴又は核磁気共鳴を用いる）分光法を含む、さまざまな方法によって測定される場合がある。評価する結合親和性の模範的な状態は、ＴＲＩＳ−緩衝液（ｐＨ ７．５で、５０ｍＭ トリス、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＣａＣｌ_２）である。これらの技術は、結合タンパク質（又は標的）として作用する濃度のような、結合した及び遊離の結合タンパク質の濃度を測定するために用いられる場合がある。結合した結合タンパク質の濃度（「結合した」）は、遊離の結合タンパク質（「遊離」）の濃度と、前記標的上の前記結合タンパク質に対する結合部位の濃度とに関連させられ、以下の方程式では（Ｎ）は、標的分子ごとの結合部位の数である。

「結合した」 ＝ Ｎ・「遊離」／（（１／Ｋａ） ＋ 「遊離」）

例えば、ＥＬＩＳＡ又はＦＡＣＳ解析のような方法を用いて測定される親和性の定量的測定値を得るか、例えば、機能的アッセイ（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏアッセイ）での活性によって、親和性の定性的測定値を得るか、あるいは、親和性の推定値を得るために十分であり、前記定量的測定値は、Ｋａに比例し、そのために高親和性が、例えば２倍高いかどうかを測定するような比較のために用いられる場合がしばしばあるために、Ｋａの正確な測定は常に必要ではない。
【００９２】
「単離される組成物」は、該単離される組成物を得ることが可能な天然試料の少なくとも１種類の成分を少なくとも９０％の状態で取り出される、組成物をいう。人工的に又は天然に生産される組成物は、興味のある種類の、種類又は集団が、重量−重量基準で、少なくとも５、１０、２５、５０、７５、８０、９０、９２、９５、９８又は９９％の純度である場合に、「少なくともある純度の組成物」となる。
【００９３】
「エピトープ」は、結合タンパク質（例えば、Ｆａｂ又は完全長抗体のような抗体）によって結合される標的化合物上の部位をいう。前記標的化合物がタンパク質である場合には、前記部位は、アミノ酸成分から全体的に構成されるか、タンパク質のアミノ酸の化学修飾（例えば、グリコシル原子団）から全体的に構成されるか、あるいはこれらの組み合わせから構成される。重複しているエピトープは、少なくとも１種類の共通のアミノ酸残基、グリコシル基、リン酸基、硫酸基その他の分子特徴を含む。
【００９４】
（本明細書で互換的に用いられるところの用語である）２種類の配列間の「相同性」又は「配列の同一性」の計算は、下記のように実施される場合がある。前記配列は、最適に比較する目的でアライメントされる（例えば、隙間は、最適にアライメントするために第１及び第２のアミノ酸又は核酸配列の１種類か、あるいはこれら両方で埋められ、非相同配列は比較する目的で無視される。）。前記最適なアライメンは、例えば、ブロッサム６２スコアリングマトリクスのＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラムで、１２個のギャップペナルティー、拡大された４個のギャップペナルティー及び５個のフレームシフトギャップペナルティーを用いて、最良のスコアとして測定される。その際に、対応するアミノ酸位置又はヌクレオチド位置で前記アミノ酸残基又はヌクレオチドは比較される。第１の配列中の位置が、第２の配列中の対応する位置として同一のアミノ酸残基又はヌクレオチドによって占められるとき、その時、分子はその位置で同一である（本明細書で用いられるアミノ酸又は核酸の「同一性」は、アミノ酸又は核酸の「相同性」と同等である。）。前記２種類の配列間の同一性の百分率は、前記配列によって共有される同一の位置の数の相関的要素である。
【００９５】
好ましい実施態様では、比較する目的のためにアライメンされる参照配列の長さは、該参照配列の長さの、少なくとも３０％と、好ましくは少なくとも４０％と、より好ましくは少なくとも５０％と、さらにより好ましくは少なくとも６０％と、さらにより好ましくは少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％とである。例えば、前記参照配列は、免疫グロブリン可変ドメイン配列の長さとなる場合がある。
【００９６】
本明細書で用いられるところの「実質的に同一」（又は「実質的に相同」）という用語は、第１のアミノ酸又は核酸配列という意味として本明細書で用いられ、前記第１のアミノ酸又は核酸配列は、前記第１及び第２のアミノ酸又は核酸配列が、類似の活性、例えば、結合活性、結合選択又は生物活性を有する（又はタンパク質をエンコードする）ような第２のアミノ酸又は核酸配列に対して、十分に多くの同一又は同等の（例えば類似の側鎖を持つ、例えばアミノ酸置換が保存される）アミノ酸残基又はヌクレオチドを含む。抗体の場合には、第２の抗体は同一の特異性を有し、同一の抗原に関して、少なくとも５０％、少なくとも２５％又は少なくとも１０％の親和性を有する。
【００９７】
本明細書で開示される配列に対して、類似又は相同の配列（例えば、少なくとも約８５％の配列同一性）は、本出願の一部分である。ある実施態様では、前記配列の同一性は、約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％となるか、あるいはより高くなる。さらに、核酸セグメントが、相補鎖に対して選択的なハイブリダイゼーション条件（例えば高いストリンジェントなハイブリダイゼーション条件）下でハイブリダイゼーションするときに、実質的な同一性が存在する。前記核酸は、細胞全体中か、細胞可溶化物中か、部分的に精製される又は実質的に純粋な形状中かに存在する場合がある。
【００９８】
クローン４１−２８は、Ｉｗａｈｏｒｉら、Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ ２００８によって報告されるようなＭＰＦに特異的ＩｇＧ１カッパーのアイソタイプのマウスモノクローナル抗体クローン４１−２８をいい、クローン４１−２８のＣＤＲは、図４及び５に示される。この抗体は、抗体４１−２８として本明細書のある実施例で言及される。
【００９９】
クローン２０−１０は、Ｉｗａｈｏｒｉら、Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ ２００８によって報告されるようなＭＰＦ特異的なＩｇＧ１カッパーのアイソタイプのマウスモノクローナル抗体２０−１０をいい、クローン２０−１０のＣＤＲは、図２及び３に示される。この抗体は、抗体２０−１０として本明細書のある実施例で言及される。
【０１００】
クローン１１−２５は、Ｉｗａｈｏｒｉら、Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ ２００８によって報告されるようなメソテリン特異的なＩｇＧ２ｂカッパーのアイソタイプのマウスモノクローナル抗体クローン１１−２５をいい、クローン１１−２５のＣＤＲは、図８及び９に示される。この抗体は、抗体１１−２５として本明細書のある実施例で言及される。
【０１０１】
クローンＩＣ１４−３０は、メソテリン特異的なＩｇＧ１カッパーのアイソタイプのマウスモノクローナル抗体クローンＩＣ１４−３０をいい、クローンＩＣ１４−３０のＣＤＲは、図６及び７に示される。この抗体は、抗体ＩＣ１４−３０として本明細書の一部の実施例で言及される。
【０１０２】
抗体又はペプチドに関して、「標識化」という用語は、抗体又はペプチドに対する検出可能な基質のカップリングすること（例えば、物理的に結合すること）による前記ペプチド又は抗体の直接標識と、直接的に標識されるもう１種類の試薬でそれをカップリングすることによる前記ペプチド又は抗体の間接標識とを含む。間接標識の例は、蛍光標識された第２の抗体と、蛍光的に標識されるストレプトアビジンで検出可能なビオチンで末端−標識されるペプチドとを用いる、第１の抗体の検出を含む。
【０１０３】
「取扱説明書」は、本明細書で説明されるキットの使用方法か、細胞学的状態、病理学的状態又はこれら両方か、腹腔か、継続性腹膜透析治療に由来する合併症の危険性かに関係がある使用済み腹膜透析液中のＭＰＦ又はメソテリンの発生を解釈するための情報か、治療変更勧告かを伝達するために用いられる場合がある文献、記録、図表その他の表現媒体のいずれかである。本発明のキットの前記取扱説明書は、例えば、本発明のキットを含む容器に添付されるか、あるいは前記キットを含む容器とともに輸送される。代替的に前記取扱説明書は、該取扱説明書及び前記キットが受取人によって協同的に用いられる本発明の前記容器から別々に輸送されるか、利用される場合がある。
【０１０４】
「透析液（ｄｉａｌｙｓｉｓ ｆｌｕｉｄ）」又は「透析液（ｄｉａｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）」又は「透析液（ｄｉａｌｙｓｉｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）」という用語は、慢性腎不全後の血液を平衡化し、かつ、解毒するために、しばしば外科的に挿入されるアクセスチュービング（ａｃｃｅｓｓ ｔｕｂｉｎｇ）を通して患者の腹腔内に一般に注入される水溶液を同義的にいう。「使用済み」透析液は、透析液を挿入後の時間（しばしば数時間）に適切な量を患者の腹腔から患者が排出した前記透析液をいう。したがって使用済み透析液は、前記患者の機能不全の腎臓が除去できなかった尿毒症毒素を含む、前記患者の血流及び腹腔に由来する多くの溶質を含み、それらの溶質の濃度は前記患者の治療状態に関する診断的判断のために測定される場合がある。
【０１０５】
ＭＰＦ又はＭＳＬＮ結合タンパク質は、本明細書で説明される結合タンパク質に関してタンパク質機能に実質的な影響を及ぼさない（例えば、少なくとも１個、２個又は４個、及び／又は、１５個、１０個、５個又は３個未満の）変異（例えば、保存性又は非必須アミノ酸置換）を有する場合がある。特定の置換が許容されるかどうかは、例えば、（例えば、前記変異が保存性であるかを評価するか、あるいはＢｏｗｉｅら、（１９９０） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１３０６−１３１０の方法によって）結合活性が予測され得るような生物学的特徴が逆に影響しないかどうかである。
【０１０６】
「保存性アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されるものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、従来技術で定義された。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）と、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）と、非電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）と、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）と、ベータ−分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）と、芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）とを有するアミノ酸を含む。多くのフレームワーク及びＣＤＲのアミノ酸残基は、１種類又は２種類以上の保存性置換を含む場合がある。
【０１０７】
タンパク質のモチーフ配列は、アミノ酸が変更される位置を含む場合がある。例えば、かかる文脈中の記号「Ｘ」は、アミノ酸のいずれか（例えば、２０個の天然アミノ酸のいずれか又は１９個の非システインアミノ酸のいずれか）を一般的にいう。他の許容されるアミノ酸は、括弧及び斜線を用いる例として示される。例えば、「（Ａ／Ｗ／Ｆ／Ｎ／Ｑ）」は、アラニン、トリプトファン、フェニルアラニン、アスパラギン及びグルタミンが、その特定の位置で許容されることを意味する。
【０１０８】
「非必須」アミノ酸残基は、生物活性を消滅しない又はより好ましくは、実質的に変更せずに結合物質、例えば、抗体の野生型配列から変更されてもかまわない残基であるが、「必須」アミノ酸残基の変更は活性の実質的な消失をもたらす。
【０１０９】
統計学的な重要性は、基準点で偏差及び分散を評価するために一般的に用いられる多くの異なる方法によって決定される。実施例の統計検定は、ステューデントＴ−検定、マンホイットニーの非パラメトリックＵ検定及びウィルコクソン非パラメトリック統計検定を含むが、これらに限られない。ある統計学的な有意関係は、０．０５又は０．０２未満のＰ値を有する。特定の結合タンパク質は、例えば、特異性又は結合で統計学的に重要である（例えば、０．０５又は０．０２未満のＰ値）違いを示す場合がある。「誘導」、「抑制」、「増強」、「上昇」、「増加」、「減少」又はそのようなものの用語は、例えば、２種類の状態間の区別可能な定性的又は定量的な違いを示し、違い、例えば２種類の状態間の統計学的に有意な違い、例えば初期レベルから現在レベルまでのＭＰＦ又はＭＳＬＮの減少をいう場合がある。
【０１１０】
本明細書で説明される技術の一部の実施態様は、健康状態及び／又は健康リスクを評価するためにＭＳＬＮ及び／又はＭＰＦレベルを監視することに関する。例えば、ＭＳＬＮ及びＭＰＦは、腹膜透析患者の腹膜透析液のそれらの蓄積能力で段階的な低下を示す。これらのバイオマーカーの蓄積の低下は、腹膜透析治療の中止を示す合併症の治療をもらす場合があり、腹膜硬化症、大腸閉塞、慢性痛及び死亡のような重篤な合併症をもたらす場合がある腹膜の生理的な変動に関連する。本明細書で議論されるように、腹膜透析液中のこれらのマーカーのそれぞれの低蓄積は、腹膜透析の中止に必要な統計学的に有意な予測因子である。
【０１１１】
ＭＰＦ又はＭＳＬＮの濃度又は発生の減少は、細菌性腹膜炎のような慢性及び急性障害の両方で腹腔を裏打ちしている中皮膜の細胞学的インテグリティーの悪化指標を提供する場合がある。ＭＰＦ及びＭＳＬＮの量は、前記病状の効果的な治療後に反跳する。したがって、腹膜透析液中のＭＰＦ又はメソテリンの蓄積は、急性障害又は慢性腹膜透析後の腹膜の回復を監視し、かつ、新規の透析液の生体適合性を評価するか、前記腹膜の健康状態及びインテグリティーを保護するか、あるいは改善するために、又は、腹膜透析治療に由来する合併症の発症を遅らせるために、患者の透析液に添加されるか、あるいはその逆で患者に投与される治療剤の治療効果を評価するかのために用いられる場合がある。
【０１１２】
ＭＰＦは、マウス骨髄細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ培養系で巨核球のコロニー形成が増大されるヒト膵腫瘍細胞株、ＨＰＣ−Ｙ５の培養上清で最初に同定された（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ Ｎら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６９（２）：８０５−８ （１９９４））。ｃＤＮＡのクローニングは、フリンプロテアーゼ開裂部位によって分離される、メソテリン及びＭＰＦの配列を含む、メソテリン前駆体ペプチドの完全コーディング配列の発見をもたらした（Ｋｏｊｉｍａ Ｔら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７０（３７）：２１９８４−９０ （１９９５））。メソテリンは、その後に、ＣＡＫ１抗体、卵巣癌細胞に結合することが知られる抗体に対する同種抗原となることが同定され、腹腔、胸腔及び心腔（ｃａｒｄｉａｃ ｂｏｄｙ ｃａｖｉｔｉｅｓ）を裏打ちしている中皮細胞でのその発現から名付けられた（Ｃｈａｎｇ Ｋら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ． ９３（１）：１３６−４０ （１９９６））。さまざまな研究は、メソテリン及びＭＰＦが、ヒトの血清中で検出され、卵巣癌及びある種の肺癌のような中皮に関連する由来のさまざまな癌で上昇されることをその後に証明した。Ｆｕｊｉｒｅｂｉｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓは、メソテリンを測定することによって中皮腫の診断に用いられる、血液試験、Ｍｅｓｏｍａｒｋ（登録商標）を商業化した。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｄｉ．ｃｏｍ／ｍｅｓｏｍａｒｋ／ｗｏｒｌｄ／ｈｏｍｅ．ｈｔｍｌ
【０１１３】
患者のメソテリン又はＭＰＦの増加は癌診断のための診断学的価値となることが周知であるが、本明細書で説明される実施態様は、初期レベルと比較して、ＭＳＬＮ又はＭＰＦレベルの減少を効果的に監視し、腹膜透析期間中の腹膜の健康悪化の減少に関連する。
【０１１４】
大腸その他の器官の閉塞をもたらす腹膜の炎症性の肥厚のような重篤な合併症の危険性は、腹膜透析継続期間を増大する。患者は、十年をおおいに途過する腹膜透析治療をめったに実施できない。それにもかかわらず、最初の２年間、腹膜透析は、血液透析と比較して、心血管イベント及び死亡の危険性が低い。本明細書で証明されるように、腹膜透析液中のＭＳＬＮ及びＭＰＦの蓄積は、数年にわたる治療で重大な減少を示し（図１４）、観察される患者の多くで３ヶ月間を超える明らかな減少を示した（図１３）。重要なことに、５年間又はより長い期間の透析治療中の患者で、使用済み透析液中のメソテリン及びＭＰＦの両方の濃度の減少は、腹膜透析を中止しなければないない患者が該患者の使用済み透析液中のメソテリン及びＭＰＦの両方で統計学的に低い濃度となるような治療に関する予測となる（図１５）。さらに、メソテリン及びＭＰＦレベルの重度な減少は、急性腹膜炎（前記腹膜の細菌性感染の罹患）で検出され、しばしば前記感染の急性期で検出不能なレベルとなる（図１３）。これらの結果は、透析液の物理化学的な消耗に感受性となることが知られる、腹膜の健康状態の生物学的指標となる、メソテリン及びＭＰＦと一致する。中皮細胞は、腹膜透析治療によって、解離され、洗い流されることが知られ（例えば、Ｋａｍｉｄａら、ｐｏｓｔｅｒ Ｐ−２６８， ５^ｔｈ ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｆ ｔｈｅ Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｋｉｄｎｅｙ Ｓｏｃｉｅｔｙを参照せよ。）、経時的に線維芽細胞によって腹膜透析期間中に徐々に置換される。透析液中のメソテリン及びＭＰＦの蓄積の減少は、危険な炎症性の合併症をもたらす線維化過程の簡便な指標である。
【０１１５】
さらに、メソテリン及びＭＰＦは、中皮細胞以外の非腫瘍性細胞のいずれかで発現することは知られていない。前記腹膜が、重要ではない追加の供給源となる胸膜及び心膜を有する身体で最も大きな中皮であるとき、ＭＳＬＮ又はＭＰＦのヒトの血清濃度、特に、前記濃度の減少は、透析期間中の腹膜の健康悪化の生物学的指標となることは明らかである。これは、使用済み透析液が腹膜透析治療の開始前に利用できないために特に顕著である。したがって、前記患者の個々の減少が測定される場合があるために、血清のＭＳＬＮ又はＭＰＦは、使用済み透析液又は血清のメソテリン又はＭＰＦかの先の測定が比較される、患者の個々の基線の測定で有用である。さらに、血清のメソテリン又はＭＰＦは、如何に良く患者が腹膜透析治療に耐えるようにするかを治療前に決定するための有用な指標となる場合があり、したがって、治療の選択で有益な指針となる。
【０１１６】
ＭＰＦ及びＭＳＬＮレベルの測定及び使用
一部の実施態様に従って、体液中のＭＳＬＮ又はＭＰＦレベルを評価するための方法が提供される。一部の実施例では、前記方法は、患者の腹腔の細胞学的状態及び生物学的インテグリティーを診断するのに用いられる場合がある。他の実施態様では、前記方法は、初期レベルと比較して、例えば、血清、使用済み透析液又はそのようなものの体液中の前記ＭＰＦ又はＭＳＬＮレベルの減少を測定するのに用いられる場合がある。
【０１１７】
一部の実施態様では、前記方法は、哺乳類の被験体、例えば、腎不全患者から得られる使用済み腹膜透析液中のＭＰＦ又はメソテリンの発生を評価するステップを含む場合がある。ＭＰＦ又はメソテリンレベルの減少は、腹膜の裏打ちの前記細胞学的状態及び生物学的インテグリティーの悪化、つまり治療合併症の危険性の増加指標として用いられる場合がある。特定百分率までの前記レベルの減少後に、腹膜透析治療は中止される場合があり、血液透析が開始される場合がある。周期的に、腹水中の前記ＭＰＦ又はメソテリンレベルは、腹膜透析の再開するのに安全かどうかを決定するために評価される場合がある。
【０１１８】
一部の実施例では、腹水中のＭＰＦ又はＭＳＬＮの初期レベルを測定するために好ましい場合がある。前記初期レベルは、誕生直後、１日、１週間、１ヶ月、１年、１０年、２５年、５０年、７５年、１００年又はいずれかの期間中を含む、妊娠後の時点のいずれかで得られる場合がある。一部の実施例では、腹膜透析が開始された後に、できるだけ早期に腹水中のＭＰＦ又はＭＳＬＮの初期レベルを測定するのに好ましい。前記初期レベルは用いられ、ＭＰＦ又はＭＳＬＮが、腹膜透析を中止することが賢明である前記時点まで減少したかどうかを評価するために後のレベルと比較される場合がある。
【０１１９】
正確な初期レベルは患者間で変動する場合があり、一部の実施態様では、絶対量の存在よりもむしろ前記ＭＰＦ又はＭＳＬＮの変動が、健康状態の評価に用いられる。一部の実施例では、初期レベルと比較して、前記ＭＰＦレベルが、少なくとも４０％まで減少する、約８０％までよりいっそう減少するとき、腹膜透析は中止される場合がある。ある実施例では、閾値レベルの変動は、腹膜透析が継続されるべきかどうかを評価するために用いられる場合がある。ある実施例では、前記閾値レベルの変動は、初期レベルの、２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、１０分の１又は２０分の１であるとき、その際に腹膜透析は中止される場合がある。急性レベルが、（前記レベルは前記閾値以上のままで、初期値と比較しての減少は相対的に小さい）サブ閾値レベルの変動を示す場合、その際に腹膜透析は継続される場合がある。前記急性レベルは、（前記レベルが閾値以下に低下し、初期値と比較しての減少は相対的に大きくなる）閾値レベルの変動以上を示す場合、その際に腹膜透析は中止され、血液透析が開始される場合がある。
【０１２０】
抗体、例えば、抗メソテリン又は抗ＭＰＦペプチド抗体が患者から得られる使用済み腹膜透析液に接触される実施態様では、該使用済み腹膜透析液は、それを天然に発現される状態で用いられる場合があり、使用前に部分的に精製されるか、浄化されるか、濾過されるか、あるいは濃縮される場合がある。例えば、使用済み腹膜透析液は、中皮液を抗体に接触させる前に、そこから沈殿物のいずれかを実質的に除去するための標準的な方法を用いて遠心分離される場合がある。代替的に、前記使用済み腹膜透析液は、その量を低下させるか、あるいは大きな混入物を除去するために濾過されるか、あるいは限外濾過される場合がある。前記使用済み腹膜透析液中に発生するメソテリン及びＭＰＦペプチドは、１０，０００−５０，０００ダルトンの範囲の分子量を有するグリコシル化ペプチドとなることが期待される場合があるために、適切な濾過／限外濾過の選択は、その検出前に前記メソテリン又はＭＰＦペプチドが存在しないことが好ましい。実施例を通して、相対的に大きな径の濾過、例えば、２５０，０００ないし１，０００，０００ダルトンの分子量を有する球状粒子の通過を許容するものは、使用済み腹膜透析液から粒子状物質を除去するために用いられる場合があり、約５，０００ダルトン以上の大きさの分子量を有するタンパク質の通過を排除する膜を備える限外濾過装置は、濾液を濃縮するために用いられる場合がある。この実施例では、メソテリン又はＭＰＦの発生は、限外濾過装置中の未透過物で評価される場合がある。
【０１２１】
本明細書で開示される多くの方法（例えば、免疫学的方法）は相対的に感受性であるために、使用済み透析液の濃縮は、患者の使用済み腹膜透析液中のＭＰＦ又はメソテリンペプチドの発生を検出するためにしばしば不必要である。その代わりに、使用済み腹膜透析液は、興味のある濃度範囲で最適な定量的読出しを得るために適切な希釈液で希釈される場合がある。使用済み腹膜透析液の浄化が所望される状況で前記使用済み腹膜透析液中に存在する、メソテリン又はＭＰＦペプチドを、結合させるか、あるいは捕らえる濾材となる可能性は存在しないために遠心分離は好ましい場合がある。
【０１２２】
一部の実施態様では、多くの異なる方法は、患者の使用済み透析液中のＭＦＰ又はメソテリンレベルを評価するために用いられる場合がある。特に、それぞれのペプチドの１つが存在するか、あるいは存在しないかを評価するために用いられる場合があるいずれかの方法は適している。ある実施態様では、前記患者の腹水中のＭＰＦ又はメソテリンペプチドのレベルは、該腹水を該ＭＰＦ又はメソテリンペプチドに特異的に結合する抗体に曝露することによって評価される場合がある。前記曝露は、前記腹水に対する抗体の選択量を添加によって達成される場合がある。ある実施例では、結合する第２の抗体は、前記ＭＰＦ又はメソテリンペプチドが第１の抗体に結合したかどうかを評価するために前記腹水に添加される場合がある。前記２つの抗体は、非競合的なやり方で同一抗原に結合するよりもむしろ、同一のエピトープに結合するために競合しないことが好ましい。
【０１２３】
使用済み腹膜透析液その他の患者の体液中のＭＳＬＮ又はＭＰＦの発生を評価する好ましい方法の１つは、「サンドウィッチＥＬＩＳＡ」アッセイとして一般的に知られる手続である。（ＥＬＩＳＡは、酵素結合免疫吸着アッセイの略称である。）この技術では、抗体は、ガラスビーズ又はプラスチックのマルチ−ウェルアッセイプレートの底面のような基質に結合される。この抗体は、「捕捉」抗体と命名される。未精製の、浄化される、又は、精製される、患者からの使用済み腹膜透析液又はそれぞれの体液検体は、条件（例えば、塩及び界面活性剤の低濃度、かつ、非タンパク質変性条件）下で基質に接触される場合があり、そのために前記使用済み腹膜透析液又は体液検体中に存在する、メソテリン又はＭＰＦのいずれかは前記捕捉抗体に特異的に結合する場合がある。前記基質は、残留する使用済み腹膜透析液又は体液を除去するために、前記補足抗体か、あるいはメソテリン又はＭＰＦペプチドを含まない液体で任意にすすがれる。前記基質は、その際に前記捕捉抗体が結合するエピトープとは独立のエピトープでメソテリン又はＭＰＦペプチドに特異的に結合する第２抗体に接触させられる場合がある。前記第２の抗体は、リガンド又は該リガンドのレセプターに検出可能に標識されるか、あるいは連結される。どちらでも、前記第２の抗体の結合は、該第２の抗体を含まない液体で前記基質をすすぐステップの後に検出される（かつ、任意に定量される）。前記第２の抗体の検出は、前記使用済み腹膜透析液又は体液中のＭＰＦ又はＭＳＬＮそれぞれのペプチドの存在を示す。前記第２の抗体量が定量される場合には、その際に前記使用済み腹膜透析液又は体液中の前記ＭＰＦ又はメソテリンペプチド量は、例えば、ＭＰＦ又はＭＳＬＮの既知量を含む、対照検体又は標準を用いて実施される測定で検出される第２の抗体量の比較によって定量される場合がある。
【０１２４】
他の実施態様では、競合アッセイは、前記使用済み腹膜透析液又は体液中のＭＳＬＮ又はＭＰＦの存在及び／又はレベルを評価するために用いられる場合がある。このアッセイのある実施態様では、前記メソテリン又はＭＰＦペプチドに特異的に結合する抗体は基質に固定される場合がある。未精製の、浄化される、精製される、又は、希釈される、使用済み腹膜透析液又は体液は、（好ましくは数分間又は数時間）前記基質に接触され、そのために前記使用済み腹膜透析液又は体液中に存在するメソテリン又はＭＰＦペプチドのいずれかは、前記抗体に結合する。前記抗体に特異的に結合する標識化リガンド（例えば、ＭＰＦ又はメソテリンペプチドの標識される形）は、その際に（好ましくは数分間又は数時間）前記基質に接触される。前記基質に結合される標識化リガンド量は、前記標識又は標識化リガンドを含まない液体で該基質をすすぐステップの後に評価される。前記基質に結合させる標識量は、患者の使用済み腹膜透析液又は体液に接触されない、別の方法で同様に処理される基質に結合させる標識量と比較される。２つの結合される標識量の違いは、前記基質に結合されるＭＰＦ又はメソテリンペプチド量を示し、前記基質に適用される前記使用済み腹膜透析液又は体液検体中に存在するＭＰＦ又はメソテリンペプチド量を示す。
【０１２５】
免疫学的競合アッセイが用いられるとき、前記基質に結合される抗体の標識化リガンドは、患者の体液及び使用済み腹膜透析液中の既知の又は存在することが期待される前記ＭＦＰ又はメソテリンペプチドとほとんど同一であることができるだけ好ましい。例えば、前記リガンドと、前記ＭＰＦ又はメソテリンペプチドとは、前記抗体によって結合される領域中の同一のアミノ酸配列を持つか、あるいは含むべきである。同様に、前記患者の使用済み腹膜透析液又は体液中に発生する場合がある前記ＭＰＦ又はメソテリンペプチドは、グリコシル化されることが期待され、その際に前記リガンドは、同一の方法、同一の位置及び／又は同一の程度でグリコシル化される場合がある。この方法で、前記リガンドと、前記ＭＰＦ又はメソテリン分析物とに対する親和性の違いは最小限化される場合があり、前記競合アッセイの精度は改善される場合がある。
【０１２６】
一部の実施例では、ホモジニアスアッセイは、体液中のＭＳＬＮ又はＭＰＦの存在及びレベルを評価するために用いられる場合がある。ホモジニアスアッセイでは、該アッセイの全ての成分が添加された後には、追加の液体処置は必要とされない。例えば、蛍光共鳴エネルギー移転（ＦＲＥＴ）は、ホモジニアスアッセイとして用いられる場合がある（例えば、Ｌａｋｏｗｉｃｚら、米国特許第５，６３１，１６９号公報明細書；Ｓｔａｖｒｉａｎｏｐｏｕｌｏｓら、米国特許第４，８６８，１０３号公報明細書を参照せよ。）。第２の分子が第１の分子に近接する場合に、その放出される蛍光エネルギーが前記第２の分子上の蛍光標識（受容体）によって吸収される場合があるように前記第１の分子上のフルオロフォア標識（供与体）は選択される。前記蛍光標識が移転されるエネルギーを吸収するとき、前記第２の分子上の蛍光標識は蛍光を発する。前記標識間のエネルギー移転の効率は、前記分子を分離している距離に関係するために該分子間の空間的関係が評価される場合がある。前記受容体標識が競合するリガンド上に存在する場合に、その際に全体の蛍光強度は、ＭＰＦ又はＭＳＬＮの存在下で低下される場合がある。ＭＰＦ又はＭＳＬＮが全く存在しない場合に、前記アッセイでの前記受容体分子標識の蛍光放出は最大となるべきである。ＦＲＥＴによる監視のために形成される結合イベントは、例えば蛍光光度計を用いる標準蛍光定量検出の平均を通じて便利に測定される場合がある。第１又は第２の結合分子の量の滴定によって、結合曲線は、平衡結合定数を推定するために及び／又は体液中のＭＰＦ又はＭＳＬＮレベルを測定するために作成される場合がある。経時的な患者のバイオマーカーレベルの変動の監視に役立つ正確な定量結果を提供することが知られるある特定のＦＲＥＴ技術は、クリプテート（ｃｒｙｐｔａｔｅｓ）と称される有機複合体中に入れられるユーロピウム及びテルビウムのようなランタノイドを含む長期放出半減期のフルオロファアを用いる、均一時間分解蛍光（ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ ｔｉｍｅ ｒｅｓｏｌｖｅｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）（ＨＴＲＦ）及びＴＲ−ＦＲＥＴ、ＦＲＥＴ技術を含むが、これらに限られない。さまざまなバイオバーカーの診断ＨＴＲＦアッセイが、Ｃｉｓｂｉｏ、バニョル／セズ、フランスから許可を受けているベルリンーヘニングスドルフ、ドイツのＢＲＡＨＭＳ ＡＧによって販売され、本質的に類似のアッセイは、使用済み腹膜透析液又は体液検体中のＭＳＬＮ又はＭＰＦの定量を実行可能にする。
【０１２７】
ホモジニアスアッセイのもう１つの例は、ＡＬＰＨＡＳＣＲＥＥＮ（商標）（Ｐａｃｋａｒｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、コネチカット州メリデン）である。ＡＬＰＨＡＳＣＲＥＥＮ（商標）は２つの標識化ビーズを使用する。レーザーによって励起されるとき、あるビーズは一重項酸素を発生する。一重項酸素が第１のビーズから拡散し、それと衝突するとき、他のビーズは光信号を発生する。２つのビーズが近接するとき、前記信号が単に発生する。あるビーズは、ディスプレイライブラリーメンバー（ｄｉｓｐｌａｙ ｌｉｂｒａｒｙ ｍｅｍｂｅｒ）、他のものないし標的に付着される場合がある。信号は、結合の程度を決定するために測定される。一部の実施例では、ビーズに付着される競合性リガンドは、使用済み腹膜透析液又は体液中のＭＰＦ又はＭＳＬＮレベルを評価するために用いられる場合があり、ＭＰＦ又はＭＳＬＮの存在を示す全体の信号が減少する。定量が所望される場合には、標準は、所望される濃度範囲を超えて実施される場合があり、使用済み腹膜透析液又は体液検体中のＭＰＦ又はＭＳＬＮがどのくらいかを測定するために用いられる。
【０１２８】
一部の実施例では、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）は、体液中のＭＰＦ又はＭＳＬＮレベルを測定するために用いられる場合がある。ＳＰＲ又は生体分子相互作用解析（ＢＩＡ）は、相互作用物を全く標識することなく、実時間に生体分子特異的相互作用を検出する。ＢＩＡチップの（結合イベントを示す）結合表面での全体としての変化は、前記表面に近接する光の屈折率の変化（表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）の光学的現象）をもたらす。屈折の変化は、生体分子間で実時間反応の指標として測定される検出可能な信号を発生する。ＳＰＲを用いる方法は、例えば、米国特許第５，６４１，６４０と；Ｒａｅｔｈｅｒ、１９８８， Ｓｕｒｆａｃｅ Ｐｌａｓｍｏｎｓ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇと； Ｓｊｏｌａｎｄｅｒ及びＵｒｂａｎｉｃｚｋｙ、１９９１， Ａｎａｌ． Ｃｈｅｍ． ６３：２３３８−２３４５と； Ｓｚａｂｏら、１９９５， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ． ５：６９９−７０５と、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＡＢ（ウプサラ、スウェーデン）によって提供されるオンライン供給源とに説明される。ＢＩＡｃｏｒｅ Ｆｌｅｘｃｈｉｐは標識を用いることなく、実時間、動態、親和性又は特異性における相互作用を比較又は位置付けのために用いられる場合がある。ＳＰＲからの情報は、使用済み腹膜透析液又は体液中の動態パラメーターと、ＭＰＦ又はＭＳＬＮレベルとの正確かつ定量的な測定を提供するために用いられる場合がある。
【０１２９】
一部の実施例では、細胞アッセイは、ＭＰＦ及び／又はＭＳＬＮの存在及び／又はレベルを測定するために実施される場合がある。例えば、結合タンパク質は、前記細胞表面上に興味のある標的を一過的又は安定的に発現し、かつ、提示する、細胞に結合するための能力が選別される場合がある。例えば、ＭＰＦ又はＭＳＬＮ結合タンパク質は蛍光的に標識される場合があり、拮抗性抗体の存在又は不存在下でのＭＰＦ又はＭＳＬＮへの結合は、フローサイトメトリー、例えば、蛍光標示式細胞分取器を用いる蛍光強度の変化によって検出される場合がある。一部の実施例では、ＭＳＬＮ又はＭＰＦに結合することが知られる細胞、ビーズその他の検出可能なプローブの細胞表面上に分子を提示する該細胞、ビーズその他の検出可能なプローブは、使用済み腹膜透析液又は体液検体に接触される場合がある。ＭＳＬＮ又はＭＰＦに結合することが知られる前記分子は、本明細書で開示される抗体か、ＭＳＬＮ又はＭＰＦに特異的な他の抗体か、前記抗体又はリガンドの天然リガンド分子又は断片、例えば、メソテリンに特異的に結合することが知られているＣＡ１２５の少なくとも１種類の粘液性の繰返しドメインを含む、ＣＡ１２５又はＣＡ１２５の断片かを含む（Ｒｕｍｐら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． ５；２７９（１０）：９１９０−８ （２００４））。前記検体に前記細胞又はプローブを適切に接触するステップ後に、前記検体中に存在するＭＳＬＮ又はＭＰＦの量は、ＭＰＦ又はＭＳＬＮを第１の結合分子に非競合的に結合する標識化分子に前記プローブを接触するステップか、あるいは代替的に、前記結合分子に結合するＭＳＬＮ又はＭＰＦと競合する場合がある標識化ペプチドに前記プローブを接触するステップかによって標準検体と比較して定量される場合がある。
【０１３０】
一部の実施態様では、シンチレーション近接アッセイは、前記使用済み腹膜透析液又は体液検体中のＭＰＦ又はＭＳＬＮの存在及び／又はレベルを評価するために用いられる場合がある。シンチレーション近接アッセイでは、光の放出を促進させる発光剤（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）を含むビーズが用いられる。興味のある放射性標識分子が前記ビーズの表面に結合したとき、この促進イベントが単に生じる。前記分子が結合するとき、その際に光は放出され、標準シンチレーションカウンターその他の適切な光学装置を用いて検出される場合がある。一部の実施例では、放射性標識されるＭＰＦ又はＭＳＬＮは、ＭＰＦ又はＭＳＬＮに対する結合タンパク質を含むビーズに添加される場合がある。非標識化ＭＰＦ又はＭＳＬＮを含む体液は添加される場合があり、蛍光の減少は、検体中のＭＰＦ又はＭＳＬＮレベルを測定するために用いられる場合がある。標準曲線は、体液検体中のＭＰＦ又はＭＳＬＮの測定を促進するためにさまざまな標準濃度を用いて作成される場合がある。
【０１３１】
一部の実施態様では、上記されるアッセイ以外のアッセイは、用いられるか、あるいは上記される前記アッセイに付加して用いられる場合がある。例えば、凝集／比濁アッセイか、層流／層速試験か、抗体チップその他の複合アッセイか、例えば、カーボンナノチューブアッセイのようなナノ物質を含むアッセイかが実施される場合がある。
【０１３２】
一部の実施例では、腎不全治療を受けている患者の腹腔及び／又は腹膜の状態をアッセイする方法が説明される。一部の実施例では、前記方法は、前記腹水中のＭＰＦレベルを測定するために患者の腹水を少なくとも１種類のＭＰＦ特異的な結合物質に曝露するステップを含む。
【０１３３】
ある実施態様では、前記方法は、例えば、腹水中のＭＰＦの測定レベルを標準試料、例えば、透析治療の開始より前又は同時に血液中で検出されるか、あるいは腎不全の透析治療の開始時又は開始から１、２、３ヶ月以内に前記腹水中で検出される、患者の前記ＭＰＦレベルと比較するステップをさらに含む場合がある。もう１つの実施態様では、前記方法は、前記腹水のＭＰＦレベルにもとづいて前記患者のための治療を選択するステップをさらに含む場合がある。一部の実施例では、選択される前記治療は腹膜透析となってもかまわない。一部の実施態様では、前記ＭＰＦレベルが閾値レベルよりもより大きい場合、例えば、前記ＭＰＦレベルが、例えば、前記標準試料の一定の／規定された割合と統計的に同一か、あるいはより大きくなる場合、選択される前記治療は腹膜透析となる。一部の実施態様では、前記ＭＰＦレベルが、統計的に前記標準試料と同一の割合未満になるか、あるいは前記標準試料と同一の割合以下に減少する場合、選択される前記治療は血液透析となる。
【０１３４】
一部の実施態様では、結合物質は、低分子及びタンパク質（例えば、リガンド、抗体又はその抗体結合断片）から選択される。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、ＭＰＦに結合する、例えば、配列番号１に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアントに結合する、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図４に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、抗体２０−１０又は抗体４１−２８の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域をさらに含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又は定常領域の一部分を含む。
【０１３５】
一部の実施態様では、前記結合物質は、例えば、検出可能な標識で直接的又は間接的に標識される場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素であってもかまわない。一部の実施態様では、前記検出可能な標識は前記結合物質に直接的に結合する。他の実施態様では、前記標識は前記結合物質に結合する物質に結合する場合がある。例えば、ある実施態様では、前記結合物質は、抗体又はその抗原結合断片となる場合があり、該抗体又は抗原結合断片は、該抗体又はその抗原結合断片に結合する標識物質に接触される場合がある。前記物質の限定的でない実施例は、抗イディオタイプ抗体である。
【０１３６】
他の実施態様では、ＭＰＦレベルは、検出可能な標識を含むＭＰＦの第２の結合物質、例えば、第１の結合物質と異なるＭＦＰの領域に結合する第２の結合物質に該ＭＰＦを接触することによって測定される場合がある。追加の実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。一部の実施態様では、前記検出可能な標識は、前記結合物質に直接的に結合する。他の実施態様では、前記標識は前記結合物質に結合する物質に結合する場合がある。例えば、ある実施態様では、前記結合物質は、抗体又はその抗原結合断片となる場合があり、該抗体又は抗原結合断片は、該抗体又はその抗原結合断片に結合する標識物質に接触される場合がある。前記物質の限定的でない実施例は、抗イディオタイプ抗体である。
【０１３７】
一部の実施態様では、ＭＰＦレベルは、腎不全治療が開始された後、１、２、３、４、５、６ヶ月、１年、２年又は１０年までか、あるいはそれ以上の期間測定される。
【０１３８】
一部の実施態様では、方法は、腎不全治療、例えば、腹膜透析中に１回以上体液中のＭＰＦレベルを測定するステップをさらに含む場合がある。一部の実施例では、前記ＭＰＦレベルは、毎週、毎月、３ヶ月毎、６ヶ月毎又は１年毎に測定される場合がある。
【０１３９】
他の実施例では、腎不全治療を受けている患者の腹腔及び／又は腹膜の状態を評価する方法は開示される。一部の実施例では、前記方法は、前記患者の腹水を該腹水中のＭＳＬＮレベルを測定するために少なくとも１種類のＭＳＬＮ特異的な結合物質に曝露するステップを含む。
【０１４０】
一部の実施態様では、方法は、腹水中のＭＳＬＮの測定レベルを標準試料、例えば、透析治療の開始より前又は同時に血液中で検出されるか、あるいは腎不全の透析治療の開始時又は開始から１、２、３ヶ月以内に前記腹水中で検出される、患者の前記ＭＳＬＮレベルと比較するステップをさらに含む場合がある。他の実施態様では、前記方法は、前記腹水中の前記ＭＳＬＮレベルにもとづいて前記患者のための治療を選択するステップをさらに含む場合がある。一部の実施態様では、選択される前記治療は腹膜透析となってもかまわない。一部の実施態様では、前記ＭＳＬＮレベルが閾値レベルよりもより大きい場合、例えば、前記ＭＳＬＮレベルが、例えば、前記標準試料の一定の割合と統計的に同一か、あるいはより大きくなる場合、選択される前記治療は腹膜透析となる。他の実施態様では、ＭＳＬＮレベルの減少が、統計的に前記標準試料と同一の割合未満になるか、あるいは前記標準試料の一定の割合以下に減少する場合、選択される前記治療は血液透析となる。
【０１４１】
一部の実施例では、結合物質は、低分子及びタンパク質（例えば、リガンド、抗体又はその抗原結合断片）から選択される。一部の実施態様では、結合タンパク質は、ＭＳＬＮに結合する、例えば、配列番号２に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアントに結合する、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図６に示す）ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図６に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、抗体ＩＣ１４−３０又は抗体１１−２５の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域をさらに含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又はこの一部分を含む。
【０１４２】
一部の実施態様では、前記結合物質は、例えば、検出可能な標識で直接的又は間接的に標識される場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素であってもかまわない。一部の実施態様では、前記検出可能な標識は前記結合物質に直接的に結合する。他の実施態様では、前記標識は前記結合物質に結合する物質に結合する場合がある。例えば、ある実施態様では、前記結合物質は、抗体又はその抗原結合断片となる場合があり、該抗体又は抗原結合断片は、該抗体又はその抗原結合断片に結合する標識物質に接触される場合がある。前記物質の限定的でない実施例は、抗イディオタイプ抗体である。
【０１４３】
他の実施態様では、ＭＳＬＮレベルは、検出可能な標識を含むＭＳＬＮの第２の結合物質、例えば、第１の結合物質と異なるＭＳＬＮの領域に結合する第２の結合物質に前記ＭＳＬＮを接触することによって測定される場合がある。追加の実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。一部の実施態様では、前記検出可能な標識は、前記結合物質に直接的に結合する。他の実施態様では、前記標識は前記結合物質に結合する物質に結合する場合がある。例えば、ある実施態様では、前記結合物質は、抗体又はその抗原結合断片となる場合があり、該抗体又は抗原結合断片は、該抗体又はその抗原結合断片に結合する標識物質に接触される場合がある。前記物質の限定的でない実施例は、抗イディオタイプ抗体である。
【０１４４】
一部の実施態様では、方法は、腎不全治療、例えば、腹膜透析中に１回以上体液中のＭＳＬＮレベルを測定するステップをさらに含む場合がある。一部の実施例では、前記ＭＳＬＮレベルは、毎週、毎月、３ヶ月毎、６ヶ月毎又は１年毎に測定される場合がある。
【０１４５】
他の実施態様では、方法は、前記腹水中の前記ＭＳＬＮレベルにもとづいて前記患者のための治療を選択するステップをさらに含む場合がある。一部の実施態様では、選択される前記治療は腹膜透析となってもかまわない。一部の実施態様では、前記ＭＳＬＮレベルが閾値レベルよりもより大きい場合、例えば、前記ＭＳＬＮレベルが、例えば、前記標準試料の一定の割合と統計的に同一か、あるいはより大きくなる場合、選択される前記治療は腹膜透析となる。他の実施態様では、ＭＳＬＮレベルの減少が、統計的に前記標準試料と同一の割合未満になるか、あるいは前記標準試料以下に減少する場合、選択される前記治療は血液透析となる。
【０１４６】
もう１つの実施例では、患者の体液中のＭＰＦを検出する方法が説明される。一部の実施例では、前記方法は、ＭＰＦの第１のエピトープに結合する、少なくとも１種類の抗体又はその抗原結合断片に前記患者の体液を接触させるステップと、前記第１のエピトープと異なるＭＰＦの第２のエピトープに結合する検出可能な標識を含む、第２の抗体又はその抗原結合断片に前記体液を接触させるステップと、前記第１及び第２の抗体又は抗体断片を用いて前記体液中の前記ＭＰＦレベルを検出するステップとを含む。前記検出可能な標識は、例えば、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素であってもかまわない。
【０１４７】
一部の実施態様では、方法は、体液中の（とりわけ、腹水中の）ＭＰＦの測定レベルを標準試料、例えば、透析治療の開始より前又は同時に血液中で検出されるか、あるいは腎不全の透析治療の開始時又は開始から１、２、３ヶ月以内に前記腹水中で検出される、患者の前記ＭＰＦレベルと比較するステップを含む場合がある。
【０１４８】
もう１つの実施態様では、方法は、前記腹水中の前記ＭＰＦレベルにもとづいて前記患者のための治療を選択するステップをさらに含む場合がある。一部の実施例では、選択される前記治療は腹膜透析となってもかまわない。一部の実施態様では、前記ＭＰＦレベルが閾値レベルよりもより大きい場合、例えば、前記ＭＰＦレベルが、例えば、標準試料の一定の割合と統計的に同一か、あるいはより大きくなる場合、選択される前記治療は腹膜透析となる。一部の実施態様では、前記ＭＰＦレベルは、統計的に前記標準試料と同一の割合未満になるか、あるいは前記標準試料と同一の割合以下に減少する場合、選択される前記治療は血液透析となる。
【０１４９】
一部の実施態様では、抗体又はその抗原結合断片はＭＰＦに結合し、例えば、配列番号１に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアントに結合する。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図４に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図４に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、抗体２０−１０又は抗体４１−２８の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域をさらに含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又は定常領域の一部分を含む。
【０１５０】
一部の実施態様では、方法は、腹水の検体中のＭＰＦを該検体に由来する該ＭＰＦを除去する第１の抗体と、検出可能な標識を含む第２の結合抗体とに接触するステップを含む。一部の実施例では、前記方法は、前記腹水を検出可能な標識で標識されるＭＰＦに曝露するステップをさらに含む場合がある。一部の実施態様では、前記方法は、腎不全治療、例えば、腹膜透析中に１回以上体液中の前記ＭＰＦレベルを測定するステップをさらに含む場合がある。一部の実施例では、前記ＭＰＦレベルは、毎週、毎月、３ヶ月毎、６ヶ月毎又は１年毎に測定される場合がある。
【０１５１】
追加の実施例では、患者の体液中のＭＳＬＮを検出する方法が説明される。一部の実施例では、前記方法は、ＭＳＬＮの第１のエピトープに結合する、少なくとも１種類の抗体又はその抗原結合断片に前記患者の体液を接触させるステップと、前記第１のエピトープと異なるＭＳＬＮの第２のエピトープに結合する検出可能な標識を含む、第２の抗体又はその抗原結合断片に前記体液を接触させるステップと、前記第１及び第２の抗体又は抗体断片を用いて前記体液中の前記ＭＳＬＮレベルを検出するステップとを含む。
【０１５２】
ある実施態様では、方法は、例えば、腹水中のＭＳＬＮの測定レベルを標準試料、例えば、透析治療の開始より前又は同時に血液中で検出されるか、あるいは腎不全の透析治療の開始時又は開始から１、２、３ヶ月以内に前記腹水中で検出される、患者の前記ＭＳＬＮレベルと比較するステップをさらに含む場合がある。他の実施態様では、前記方法は、前記腹水のＭＳＬＮレベルにもとづいて前記患者のための治療を選択するステップをさらに含む場合がある。一部の実施例では、選択される前記治療は腹膜透析となってもかまわない。一部の実施態様では、前記ＭＳＬＮレベルが閾値レベルよりもより大きい場合、例えば、前記ＭＰＦレベルが、例えば、前記標準試料の一定の割合と統計的に同一か、あるいはより大きくなる場合、選択される前記治療は腹膜透析となる。他の実施態様では、ＭＳＬＮレベルの減少が、統計的に前記標準試料と同一の割合未満になるか、あるいは前記標準試料と同一の割合以下に減少する場合、選択される前記治療は血液透析となる。
【０１５３】
一部の実施例では、抗体又はその抗原結合断片はＭＳＬＮに結合し、例えば、配列番号２に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアントに結合する。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、（図６に示す）ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、（図６に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、抗体ＩＣ１４−３０又は抗体１１−２５の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域を含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又はこの一部分を含む。
【０１５４】
一部の実施態様では、方法は、腎不全治療、例えば、腹膜透析中に１回以上体液中のＭＳＬＮレベルを測定するステップをさらに含む場合がある。一部の実施例では、前記ＭＳＬＮレベルは、毎週、毎月、３ヶ月毎、６ヶ月毎又は１年毎に測定される場合がある。
【０１５５】
一部の実施態様では、透析を必要とする患者の腹膜透析の継続を評価するアッセイが説明され、該アッセイは、前記患者に由来する腹膜透析液、例えば、使用済み腹水を少なくとも１種類の結合物質、例えば、ＭＰＦ又はＭＳＬＮに特異的な抗体又はその抗原結合断片に接触するステップと、前記腹水中のＭＰＦ又はＭＳＬＮレベルを決定するステップと、ＭＰＦ又はＭＳＬＮの測定レベルにもとづいてか、あるいは標準試料、例えば、より早期で測定されるＭＰＦ及び／又はＭＳＬＮレベル、例えば、腹膜透析治療の開始時又は腹膜透析が開始された後、１、２、３ヶ月の個人の初期ＭＰＦ又はＭＳＬＮレベルと比較してのＭＰＦ又はＭＳＬＮの測定レベルの減少にもとづいて腹膜透析又は血液透析を提供するかどうかを評価するステップとを含む。
【０１５６】
一部の実施態様では、ＭＰＦ特異的な抗体又はその抗原結合断片は、ＭＰＦに結合し、例えば、配列番号１に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアントに結合する。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、ＭＰＦ特異的な前記抗体又はその抗原結合断片は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図４に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、ＭＰＦ特異的な前記抗体又はその抗原結合断片は、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、ＭＰＦ特異的な前記抗体又はその抗原結合断片は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図４に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む。一部の実施態様では、ＭＰＦ特異的な前記抗体又はその抗原結合断片は、抗体２０−１０又は抗体４１−２８の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域を含む。一部の実施態様では、ＭＰＦ特異的な前記抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又は定常領域の一部分を含む。
【０１５７】
一部の実施例では、ＭＳＬＮ特異的な抗体又はその抗原結合断片は、例えば、配列番号２に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアントに結合する。一部の実施態様では、ＭＳＬＮ特異的な抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、ＭＳＬＮ特異的な抗体又はその抗原結合断片は、（図６に示す）ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、ＭＳＬＮ特異的な抗体又はその抗原結合断片は、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、ＭＳＬＮ特異的な抗体又はその抗原結合断片は、（図６に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む。一部の実施態様では、ＭＳＬＮ特異的な抗体又はその抗原結合断片は、抗体ＩＣ１４−３０又は抗体１１−２５の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域を含む。一部の実施態様では、ＭＳＬＮ特異的な抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又はこの一部分を含む。
【０１５８】
一部の実施態様では、方法は、ＭＰＦ又はＭＳＬＮの測定レベルが、標準試料と比較して、約２０％、３０％、４０％、５０％となるか、あるいはより低くなる場合に、腹膜透析治療を中止するステップをさらに含む。一部の実施例では、血液透析は前記腹膜透析治療の中止後に実施される。一部の実施例では、前記方法は、検出可能な標識を含むもう１種類の抗体を用いて前記ＭＰＦ又はＭＳＬＮレベルを検出するステップを含む。
【０１５９】
もう１つの実施態様では、透析治療の選択方法が提供される。一部の実施例では、前記方法は、腹水中のＭＰＦレベルが、例えば、標準試料の一定の割合以上になる場合に、腹膜透析を選択するステップと、前記腹水中の前記ＭＰＦレベルが標準試料の一定の割合以下に場合に、血液透析を選択するステップとを含む。一部の実施例では、前記標準試料値は、腹膜透析治療の開始時か、あるいは該開始から１、２又は３ヶ月以内に測定される初期ＭＰＦ値からの変動の少なくとも一部分にもとづく場合がある。例えば、前記ＭＰＦレベルが、前記標準試料値の５０％、４０％、３０％、２０％となるか、あるいは未満となる場合に、腹膜透析は中止され、血液透析が開始される場合がある。
【０１６０】
追加の局面では、透析治療を選択する方法が提供される。一部の実施例では、前記方法は、腹水中のＭＳＬＮレベルが標準試料の一定の割合より高くなる場合に、腹膜透析を選択するステップと、前記腹水中の前記ＭＳＬＮレベルが標準試料の一定の割合より低くなる場合に、血液透析を選択するステップとを含む。一部の実施例では、前記標準試料は、透析治療の開始時か、あるいは該開始から１、２、３ヶ月以内に測定される初期ＭＳＬＮ値からの変動の少なくとも一部分にもとづく場合がある。例えば、前記ＭＳＬＮレベルが、前記標準試料の５０％、４０％、３０％、２０％となるか、あるいは未満となる場合に、腹膜透析は中止され、血液透析が開始される場合がある。
【０１６１】
もう１つの局面では、継続性腹膜透析治療の適合性を評価する方法が説明される。一部の実施例では、前記方法は、腹水中のＭＰＦレベルが標準試料の一定の割合より高くなる場合に、腹膜透析を継続するステップと、前記腹水中の前記ＭＰＦレベルが標準試料の一定の割合より低くなる場合に、腹膜透析を中止するステップとを含む。一定の実施例では、前記標準試料は、透析治療の開始時か、あるいは該透析治療の開始から１、２、３ヶ月以内に測定される初期ＭＰＦ値からの変動の少なくとも一部分にもとづく場合がある。例えば、前記ＭＰＦレベルが、前記標準試料値の５０％、４０％、３０％、２０％となるか、あるいは未満となる場合に、腹膜透析は中止される場合がある。一定の実施例では、血液透析は、腹膜透析が中止される場合に、開始される場合がある。
【０１６２】
追加の実施態様では、継続性腹膜透析治療の適合性を評価する方法が説明される。一定の実施例では、前記方法は、腹水中のＭＳＬＮレベルが標準試料の一定の割合より高くなる場合に腹膜透析を継続するステップと、前記腹水中の前記ＭＳＬＮレベルが標準試料の一定の割合より低くなる場合に腹膜透析を中止するステップとを含む。一定の実施例では、前記標準試料は、透析治療の開始時か、あるいは該透析治療の開始から１、２、３ヶ月以内に測定される初期ＭＳＬＮ値からの変動の少なくとも一部分にもとづく場合がある。例えば、前記ＭＳＬＮレベルが、前記標準試料値の５０％、４０％、３０％、２０％となるか、あるいは未満となる場合に、腹膜透析は中止される場合がある。ある実施例では、血液透析は、腹膜透析が中止される場合に、開始される場合がある。
【０１６３】
キット
一定の実施態様では、体液中検体中のＭＰＦ又はＭＳＬＮの存在及び／又はレベルを検出するために形成されるキットが提供される。前記キットは、単一又は複数の抗体と、標準と、緩衝液と、試薬と、そのようなものとを含む多くの異なる方法で形成される場合がある。実施例の機器構成は以下に説明される。
【０１６４】
一定の実施例では、患者から得られる腹水中のＭＳＬＮ、ＭＰＦ又はこれらの断片の存在及び／又はレベルを評価するためのキットが提供される。一定の実施例では、前記キットは、メソテリン又はＭＰＦペプチドか、これらの断片かに結合する第１の結合タンパク質（例えば、抗体）と、腹水を第１の物質に接触するステップを説明する取扱説明書とを含む。前記キットのフォーマットは重要ではなく、すなわち多くの標準フォーマットは、ＥＬＩＳＡ、ラテックスビーズ凝集及び表面プラズモン共鳴のフォーマットとして用いられる場合がある。前記キットは、陽性対照としての使用するメソテリン又はＭＰＦペプチドを含む場合がある。当然に、前記キットは、腹腔内の中皮膜又は組織又は器官の病状の他の既知マーカーを評価するための試薬と、透析液の交換の性能を評価するための試薬とを含む場合がある。
【０１６５】
他の実施例では、哺乳類（例えば、ヒト患者）から得られる使用済み腹膜透析液検体中のメソテリン又はＭＰＦペプチドの存在及び／又はレベルの検出キットが提供される。前記キットは、前記メソテリン又はＭＰＦペプチドに結合する第１の物質（例えば、結合タンパク質）と、該物質へのペプチドそれぞれの結合を評価する第２の物質と、前記第１の物質及び第２の物質を使用するための取扱説明書とを含む。実施態様の前記キットは、例えば、患者が前記腹膜の病状を生じさせる危険性を増加させるかを決定するために用いられる場合がある。例えば、前記キットは、使用済み腹膜透析液検体中のメソテリン又はＭＰＦペプチド量を決定可能な標識化合物又は物質を含む場合がある。キットは、以前に、例えば、腹膜透析治療の開始より前又は直後に、例えば、同一の患者の血液又は使用済み腹膜透析液中の分析物それぞれの測定によって確立される初期レベルと比較して、メソテリン又はＭＰＦペプチド量が正常レベル以下であるか、あるいはある因子によって減少された場合に、試験される患者が患っているか、あるいは病状を生じさせる危険性があるのかどうかを評価するための説明書をを含む場合がある。
【０１６６】
キットが抗体を含む実施態様では、該キットは、例えば、（１）メソテリン又はＭＰＦペプチドに特異的に結合する（例えば、固体支持体に結合される）第１の抗体と、任意に、（２）（例えば、前記第１の抗体が結合するエピトープと異なるエピトープで）同一ペプチドか、あるいは前記第１の抗体のいずれかに特異的に結合し、検出可能な物質でコンジュゲート化される第２の異なる抗体とを含む場合がある。代替的に、前記キットは、前記第１の抗体及び該第１の抗体の標識化リガンドを含む場合がある。前記第１の抗体を患者の使用済み腹膜透析液検体への接触後に、前記標識化リガンドと前記第１の抗体との結合は、本明細書で説明される競合型アッセイで評価される場合がある。
【０１６７】
一部の実施例では、キットは、使用済み腹膜透析液又は血清中の発生を評価するための試薬及び／又は説明書と、患者のもう１つの体液中の前記患者の病状の発生を示すもう１種類のマーカーとをさらに含む場合があり、該マーカーは、尿毒症毒素又は尿毒症毒素の指標と、炎症応答を示すマーカーと、腹膜を介する溶質交換と、細菌性及び真菌性感染のマーカーと、カリウム、カルシウム、クレアチニン、ＣＰＲのような腎不全のために平衡化が妨げられる場合があるイオン及び有機低分子と、ブドウ糖のような腹膜透析液の特定成分によってか、あるいは糖尿病のような慢性腎不全関連疾患によって与えられる、ブドウ糖分解産物、最終糖化産物その他の損傷マーカーとを含むが、これらに限られない。
【０１６８】
一部の実施態様では、（本明細書で説明される方法及び）キットは、ヒト患者又は実験動物の使用済み腹膜透析液中のメソテリン又はＭＰＦペプチドの発生を評価するために単独で用いられる場合があり、前記発生が、腹膜中皮の健康状態及び細胞学的インテグリティーを示す。所望する場合には、病理学的又は生化学的状態の多くは、患者の使用済み腹膜透析液中で１種類以上のマーカーを使用することによって腹腔の状態についてより大きな信頼性を与えるするために検出される場合がある。追加のマーカーのいずれかは、使用済み腹膜透析液中か、血液中か、あるいは他の体液中又はこのような液体の多くで正常に見い出される、メソテリン、ＭＰＦ、ＣＡ１２５その他のマーカーを含むが、これらに限られない場合がある。本明細書で説明される前記キット及び方法は、腹膜の内視鏡検査、生検又は超音波画像診断のような腹膜の健康を評価するための病理学的又は物理学的方法に関する説明書を含む場合がある。使用済み腹膜透析液中のメソテリン又はＭＰＦペプチドの発生を評価するために本明細書で説明される前記キット及び方法は、血清中の同一又は他のメソテリン又はＭＰＦを検出するためのキット及び方法を組み合わせて用いられる場合がある。
【０１６９】
患者から得られる使用済み腹膜透析液中のＭＳＬＮ又はＭＰＦの発生を評価するための本明細書で説明される前記キット及び方法は、前記患者が、腹腔の構成に病状を生じる可能性を評価するために用いられる場合がある。患者の使用済み腹膜透析液中のメソテリン又はＭＰＦペプチドの蓄積の明白な減少の検出は、前記患者が使用済み腹膜透析液中のＭＳＬＮ又はＭＰＦの蓄積がほとんど減少しない別の同一患者よりも初期腹膜透析治療に由来する合併症を発生させる可能性が高いことを示す。最初期の病状に罹患していることと、病状に罹患する可能性が高まっていることとの違いは、実質的に区別できない場合があると認識される。それでもなお、これらの過程のそれぞれの結果は、患者の健康状態の悪化につながる病状の進行である。この理由のために、本明細書で開示される前記キット及び方法を用いてこれらの状態のいずれかを評価することは有用である。
【０１７０】
一部の実施例では、キットは、例えば、所定の治療計画の効率を測定するための臨床試験の手続の一部として腎不全患者の血清又は使用済み腹膜透析液中のメソテリン又はＭＰＦレベルを診断的に又は予後的に監視するために用いられる場合がある、メソテリン又はＭＰＦに特異的な抗体を含む場合がある。
【０１７１】
他の実施態様では、本明細書で説明されるキット及び方法は、物質（例えば、作動薬、拮抗薬、ペプチド模倣薬、タンパク質、ペプチド、核酸、低分子その他の治療上の候補）が、腹膜透析治療に由来する腹膜合併症を緩和、抑制、回復又は阻害するために患者に投与するかどうかを決定するために用いられる場合がある。例えば、前記方法は、特定の腹膜透析液か、腹膜透析の実施前に腹膜透析液に添加される物質又は同様の物質か、体系的に（経口、静注、腹腔その他の方法で）患者に投与される物質又は同様の物質かが、腹膜透析治療の期間中に腹膜中皮の悪化を妨げるか、腹膜透析治療の期間中又は腹膜透析が中止された後に前記悪化を回復させるかどうかを決定するために用いられる場合がある。前記キットは、例えば、長期間の腹膜透析治療後に頻出する苦痛かつ危険な腹膜性合併症の回避を助長する場合がある。
【０１７２】
前記キットで用いられる抗体の検出は、検出可能な物質に前記抗体をカップリングすることによって促進される場合がある。検出可能な物質の例は、さまざまな酵素、補欠分子団、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、常磁性物質及び放射性物質を含む。適切な酵素の例は、西洋ワサビのペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ又はアセチルコリンエステラーゼを含む。適切な補欠分子団複合体の例は、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンを含む。適切な蛍光物質の例は、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドオルフィコエリスリンを含む。発光物質の例はルミノールを含む。生物発光物資の例は、ルシフェラーゼ、ルシフェリン及びエクオリンを含む。適切な放射性物資は、Ｉ、Ｓ又はＨを含む。実施例の常磁性標識は、スピン標識、常磁性金属、不対電子を有するその他の種類を含むが、これらに限られない。前記構成は、前記キットを提供する場合か、あるいは別々に得られる場合がある。一部の実施例では、１種類又は２種類以上の抗体は、最終消費者が前記キットの構成を即座に使用できるように前標識される場合がある。
【０１７３】
標準アッセイ装置の使用は、本明細書で説明される方法を自動化できる。例えば、多くの異なる標準アッセイ容器は、２４−、４８−、９６−及び３８６−ウェルプラスチックプレートが知られる。これらの容器が、相対的に短時間で多くの検体のハイスループットスクリーニングを可能にする、ロボット装置に装着するために改変される場合には、検体の自動解析は達成される場合がある。コンピューター制御のアッセイでそれらの使用のために改変される自動アッセイ装置及び容器は従来技術であり、本明細書で説明される前記キット及び方法に関する本開示の利益が与えられる当業者によって容易に改変されるであろう。
【０１７４】
一部の実施例では、キットの構成は、最終消費者による使用を促進するためのカートリッジ、他の形状のバイアル中に前包装される場合がある。例えば、１種類又は２種類以上の抗体は、前記カートリッジは、抗体をウェルプレートに噴出するためのマルチプルステムピペットに結合される場合があるためにカートリッジの形状中に包装される場合がある。一部の実施例では、前記カートリッジは、抗体が８ウェルのウェルプレート中に１回のステップで入れられる場合があるために、実質的に同一の量の抗体をそれぞれに含む８本のチューブを有する場合がある。当然に、２本、４本、８本、１２本、１６本又はより多くの本数を含むが、これらに限られないチューブの他の本数が、カートリッジ中に含まれる場合もある。一部の実施例では、各チューブの内容物の堆積がマイクロタイタープレートの異なるウェル中で標準の異なる濃度を提供するようなやり方で、前包装される標準を含むカートリッジは含まれる場合がある。この前包装は、ピペッティングの誤作動及び標準の全体汚染を減少させる場合がある。
【０１７５】
もう１つの実施態様では、ＭＰＦのエピトープに結合する第１の結合物質を含む、体液中の（とりわけ、腹水中の）ＭＰＦレベルの検出で用いられるキットが提供される。
【０１７６】
一部の実施態様では、前記結合物質は、低分子及びタンパク質（例えば、リガンド、抗体又はその抗原結合断片）から選択される。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、ＭＰＦに結合する、例えば、配列番号１に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアントに結合する、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図４に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図４に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、抗体２０−１０又は抗体４１−２８の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域をさらに含む。ある実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又は定常領域の一部分を含む。
【０１７７】
一部の実施態様では、前記結合物質は、例えば、検出可能な標識で直接的又は間接的に標識される場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素であってもかまわない。一部の実施態様では、前記検出可能な標識は前記結合物質に直接的に結合される。他の実施態様では、前記キットは前記結合物質に結合する物質を含み、該結合物質に結合する該物質が標識される。例えば、ある実施態様では、前記結合物質は、抗体又はその抗原結合断片となる場合があり、該抗体又は抗原結合断片は、該抗体又はその抗原結合断片に結合する標識物質に接触される場合がある。前記物質の限定的でない実施例は、抗イディオタイプ抗体である。一部の実施態様では、前記キットは、説明書、例えば、腹腔及び／又は腹膜の状態を測定するための取扱説明書を含む場合がある。
【０１７８】
ある実施態様では、キットは、ＭＰＦの第２の結合物質、例えば、第１の結合物質よりも異なるエピトープに効率的に結合する抗体又はその抗原結合断片をさらに含む場合がある。一部の実施例では、前記第２の結合物質は、抗体又はその抗原結合断片となってもかまわない。一部の実施例では、前記第２の結合物質は、検出可能な標識を含む。一部の実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。一部の実施態様では、前記キットは、前記第１の結合物質又は前記第２の結合物質か、あるいはこれら両方に結合できる検出可能な標識をさらに含む場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。他の実施例では、前記キットは、標準曲線を作成するのに用いる１組の標準ＭＰＦを含む場合がある。一部の実施例では、前記標準ＭＰＦは組換えＭＰＦである。一部の実施例では、前記キットは検出可能な標識を含むＭＰＦを含む場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。
【０１７９】
追加の実施態様では、ＭＳＬＮのエピトープに結合する第１の結合物質を含む、体液中の（とりわけ、腹水中の）ＭＳＬＮレベルの検出で用いられるキットが提供される。
【０１８０】
一部の実施例では、前記結合物質は、低分子及びタンパク質（例えば、リガンド、抗体又はその抗原結合断片）から選択される。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、ＭＳＬＮに結合する、例えば、配列番号２に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアントに結合する、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図６に示す）ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、（図６に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む、抗体又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記結合タンパク質は、抗体ＩＣ１４−３０又は抗体１１−２５の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域をさらに含む。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又はこの一部分を含む。
【０１８１】
一部の実施態様では、前記結合物質は、例えば、検出可能な標識で直接的又は間接的に標識される場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素であってもかまわない。一部の実施態様では、前記検出可能な標識は前記結合物質に直接的に結合される。他の実施態様では、前記キットは前記結合物質に結合する物質をさらに含み、例えば、該結合物質に結合する該物質は標識される。例えば、ある実施態様では、前記結合物質は、抗体又はその抗原結合断片となる場合があり、該抗体又は抗原結合断片は、該抗体又はその抗原結合断片に結合する標識物質に接触される場合がある。前記物質の限定的でない実施例は、抗イディオタイプ抗体である。一部の実施態様では、前記キットは、説明書、例えば、腹腔及び／又は腹膜の状態を測定するための取扱説明書を含む場合がある。
【０１８２】
ある実施態様では、キットは、ＭＳＬＮの第２の結合物質、例えば、第１の結合物質よりも異なるエピトープ又は部位に効率的に結合する抗体又はその抗原結合断片をさらに含む場合がある。一部の実施例では、前記第２の結合物質は検出可能な標識を含む。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。一部の実施態様では、前記キットは、前記第１の結合物質又は前記第２の結合物質か、あるいはこれら両方に結合できる検出可能な標識をさらに含む場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。他の実施例では、前記キットは、標準曲線を作成するのに用いる１組の標準ＭＳＬＮを含む場合がある。一部の実施例では、前記標準ＭＳＬＮは組換えＭＳＬＮである。一部の実施例では、前記キットは検出可能な標識を含むＭＳＬＮを含む場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。
【０１８３】
もう１つの局面では、体液の（とりわけ、腹水中の）前記ＭＰＦ又はＭＳＬＮレベルを検出するためのキットが提供される。ある実施例では、前記キットは、ＭＰＦに効率的に結合する第１の抗体又はその抗原結合断片と、例えば、前記第１の抗体又はその抗原結合断片と異なるエピトープでＭＳＬＮに効率的に結合する第２の抗体又はその抗原結合断片とを含む。
【０１８４】
一部の実施態様は、前記第１の抗体又はその抗原結合断片は、ＭＰＦに結合し、例えば、配列番号１に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアントに結合する。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記第１の抗体又はその抗原結合断片は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図４に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、前記第１の抗体又はその抗原結合断片は、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、前記第１の抗体又はその抗原結合断片は、（図２に示す）抗体２０−１０又は（図４に示す）抗体４１−２８の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図３に示す）抗体２０−１０又は（図５に示す）抗体４１−２８の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む。一部の実施態様では、前記第１の抗体は、抗体２０−１０又は抗体４１−２８の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域を含む。一部の実施態様では、前記第１の抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又は定常領域の一部分を含む。
【０１８５】
一部の実施例では、前記第２の抗体又はその抗原結合断片は、ＭＳＬＮに結合し、例えば、配列番号２に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸か、あるいはそのバリアントに結合する。一部の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、本明細書で説明される抗体又は抗原結合断片である。一部の実施態様では、前記第２の抗体又はその抗原結合断片は、（図６に示す）ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、前記第２の抗体又はその抗原結合断片は、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。一部の実施態様では、前記第２の抗体又はその抗原結合断片は、（図６に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図８に示す）抗体１１−２５の３個の重鎖（ＨＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と、（図７に示す）抗体ＩＣ１４−３０又は（図９に示す）抗体１１−２５の３個の軽鎖（ＬＣ）の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）とを含む。一部の実施態様では、前記第２の抗体又はその抗原結合断片は、抗体ＩＣ１４−３０又は抗体１１−２５の前記重鎖及び／又は軽鎖に由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域を含む。一部の実施態様では、前記第２の抗体又はその抗原結合断片は、定常領域又は定常領域の一部分、例えば、本明細書で説明される定常領域又はこの一部分を含む。
【０１８６】
一部の実施態様では、キットは、前記第１及び第２の抗体の取扱説明書を含む場合がある。一部の実施例では、前記第１及び第２の抗体の１つは検出可能な標識を含む。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。他の実施例では、前記キットは、前記第１の抗体又は前記第２の抗体か、あるいはこれら両方に結合できる検出可能な標識を含む場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。ある実施態様では、前記キットは、標準曲線を作成するのに用いる１組の標準ＭＰＦを含む場合がある。一部の実施例では、前記標準ＭＰＦは組換えＭＰＦである。他の実施例では、前記キットは１組の標準ＭＳＬＮを含む場合がある。一部の実施例では、前記標準ＭＳＬＮは組換えＭＳＬＮである。追加の実施例では、前記キットは、検出可能な標識を含むＭＰＦか、検出可能な標識を含むＭＳＬＮか、これら両方かを含む場合がある。一部の実施例では、前記検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、発光標識、常磁性標識又は酵素である。
【０１８７】
抗体及び抗原の生産
本明細書で開示される一部の実施態様は、ＭＰＦ又はＭＳＬＮに結合し、少なくとも１個の免疫グロブリン可変領域を含むタンパク質に関する。例えば、前記ＭＰＦ又はＭＳＬＮの結合タンパク質は、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列と、軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列とを含む場合がある。実施例のＭＰＦ又はＭＳＬＮの結合タンパク質の多くは、本明細書で説明され、かつ、図示される。
【０１８８】
一部の実施例では、前記ＭＰＦ又はＭＳＬＮの結合タンパク質は、単離されるタンパク質となる場合がある（例えば、他のタンパク質は、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％存在しない。）。
【０１８９】
一部の実施例では、前記ＭＰＦ又はＭＳＬＮの結合タンパク質は、抗体となる場合がある。例えば、ＭＰＦ又はＭＳＬＮ抗体は、単一のポリペプチド（例えば、ｓｃＦｖ）又は異なるポリペプチド（例えば、ＩｇＧ又はＦａｂ）に含まれる、これらのＨＣ及びＬＣ可変ドメイン配列を有する場合がある。
【０１９０】
さまざまなＭＰＦ及びメソテリン抗体は当業者に知られる。例えば、クローン２０−１０と、クローン４１−２８との組み合わせは高感度にＭＰＦを検出することが知られ、クローンＭＮと、クローン１１−２５との組み合わせは高感度にメソテリンを検出することが知られる（Ｉｗａｈｏｒｉ Ｋら、Ｔ． Ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ａｓ ａ ｔｕｍｏｒ ｍａｒｋｅｒ ｏｆ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｌｅｕｒａｌ ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｏｍａ： Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｉｎ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ． Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ， ２００８，印刷中）。
【０１９１】
本明細書で説明される一部の実施態様では、クローンＩＣ１４−３０とクローン１１−２５との組み合わせは高感度にメソテリンを検出する場合がある。したがって、例えば、クローンＩＣ１４−３０は基質に結合され、適切な抗体結合条件下で患者の使用済み透析液中に存在するメソテリンペプチドに結合するための「捕捉」抗体として用いられる場合があり、クローン１１−２５は直接的に標識され、前記「捕捉」抗体を前記患者の使用済み透析液に接触後に、前記「捕捉」抗体に接触される場合がある。
【０１９２】
同様に、クローン２０−１０は、基質に結合され、適切な抗体結合条件下で患者の使用済み透析液中に存在するＭＰＦペプチドに結合するための「捕捉」抗体として用いられる場合があり、クローン４１−２８は直接的に標識され、前記「捕捉」抗体を前記患者の使用済み透析液に接触後に、前記「捕捉」抗体に接触される場合がある。
【０１９３】
直接的に標識される抗体の前記「捕捉」抗体との結合は、前記メソテリン又はＭＰＦペプチドが前記患者の使用済み透析液中に存在することを示す。前記「捕捉」抗体と共局在される検出可能な標識量の解析は、存在する前記ペプチドレベルを提供する。
【０１９４】
ＭＰＦ及びメソテリンのいくつかのバリアント、特に、スプライスバリアント及びスイス−プロットの登録番号Ｑ１３４２１（２００８年５月１８日に最後に改変された、登録第６４版）で要約される多型が存在することが知られる。これらの配列から、図１及び２に示される配列（配列番号１及び２のそれぞれ）は、メソテリン及びＭＰＦペプチドの有用な一部分を示すことが明らかである。これらの配列のいずれかの全部又は一部分（例えば、１０個、２０個、５０個又は２００個の連続する残基）に対して産生される抗体は、患者の使用済み腹膜透析液中に生じるものを含む、広範囲のメソテリン又はＭＰＦペプチドに特異的に結合することが期待される場合がある。
【０１９５】
抗体の生産方法は周知であり、ただ手短に本明細書で要約される。免疫原は、ウサギ、ヒツジ、マウスその他の哺乳類又は脊椎動物のような適切な（例えば、免疫適格性）被験体に免疫することによって抗体を調製するために典型的に用いられる。適切な免疫原調製は、例えば、組換え発現又は化学合成ポリペプチドを含む場合がある。前記調製は、フロイントの完全又は不完全アジュバンドか、類似の免疫賦活性物質かのようなアジュバンドをさらに含む場合がある。メソテリン又はＭＰＦか、これらの断片かは、ポリクローナル及びモノクローナル抗体の調製のために標準技術を用いて抗体を産生するための免疫原として用いられる場合がある。メソテリン又はＭＰＦの断片が免疫原として用いられるとき、配列番号１−２のいずれかのアミノ酸配列か、メソテリン又はＭＰＦのもう１つのバリアントのアミノ酸配列かの少なくとも１０個（好ましくは、１２個、１５個、２０個、５０個、１００個か、２０個又はそれ以上か）のアミノ酸残基を含むことが好ましい。
【０１９６】
本明細書で説明される前記キット及び方法で有用な抗体を産生するための適切なメソテリン又はＭＰＦペプチドは、配列番号１−２か、あるいはスイスプロット登録番号Ｑ１３４２１で説明される既知のバリアントからなるグループから選択される配列の２０個の連続する残基と少なくとも９０％（好ましくは、少なくとも９５％又は１００％）同一である少なくとも２０個の連続するアミノ酸残基の一部分を含む。
【０１９７】
前記ＭＰＦ又はＭＳＬＮは、前記抗体産生で使用するＭＰＦ又はＭＳＬＮの適当量を提供するために組換え発現される場合がある。例えば、組換えＭＰＦタンパク質は、例えば、Ｉｗａｈｏｒｉらの論文（Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ ２００８）中で説明される、Ｔａｑ ＤＮＡポリメラーゼ（その他の適切なポリメラーゼ）と、適切なプライマー（例えば、５’−ＣＧＧＡＡＴＴＣＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧＣＣＴＴＧＣＣＡＡＣＧＧＣＴＣＧＡＣＣＣＣＴＧＴＴＧ−３’（配列番号２５）及び５’−ＧＣＴＣＴＡＧＡＧＡＴＧＧＴＴＣＣＧＴＴＣＡＧＧＣＴＧＣＣＧＣＣＡＧＧＡＴＧＧ−３’（配列番号２６））とを用いてヒトメソテリン（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００５８２３）の転写バリアント１をエンコードしているｃＤＮＡに由来するアミノ酸１−２８８番目のコーディング部分を増幅することによって生産される場合がある。単位複製配列は、哺乳類発現プラスミドｐｃＤＮＡ３．１／ｍｙｃ−Ｈｉｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）のＥｃｏＲＩ／ＸｂａＩ部位に挿入され、リポフェクション（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００； Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によってＨＥＫ ２９３Ｔ細胞にトランスフェクションされる場合がある。培養上清は、製造業者の説明書に従ってＴＡＬＯＮ樹脂に適用される場合がある（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カリフォルニア州マウンテンビュー）。精製ＭＰＦタンパク質は、４リットルのＰＢＳを用いる透析によって得られ、本明細書で説明される方法、キット及び装置の免疫原又は標準として用いられるまで−８０°Ｃで保存される場合がある。
【０１９８】
同様に、ＭＳＬＮは、プライマー（例えば、５’−ＡＡＡＴＴＴＣＣＣＡＡＧＣＴＴＧＴＧＧＡＧＡＡＧＡＣＡＧＣＣＴＧＴＣＣＴＴＣＡＧＧＣＡＡＧ−３’（配列番号２７）及び５’−ＡＡＧＧＡＡＡＡＡＡＧＣＧＧＣＣＧＣＧＣＣＣＴＧＴＡＧＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＡＧ−３’（配列番号２８））を用いて、ＭＰＦに関して議論される同一のｃＤＮＡに由来するアミノ酸２９７−５８０番目のコーディング部分を増幅することによって生産される場合がある。増幅ＤＮＡは、発現ベクター ｐＳｅｃＴａｇ２Ｂ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のＨｉｎｄＩＩＩ／ＮｏｔＩ部位に挿入される場合がある。プラスミドＤＮＡはＨＥＫ２９３Ｔ細胞にトランスフェクションされる場合があり、組換えＭＳＬＮは培養上清中で生産され、組換えＭＰＦに関して説明されるように精製される場合がある。組換えＭＳＬＮは、本明細書で説明される方法、キット、装置で免疫原又は標準として用いられる場合がある。
【０１９９】
ポリクローナル抗体は、免疫原として本発明のポリペプチドで適切な被験体に免疫することによって上記のように調製されてもかまわない。免疫される被験体の前記抗体の力価は、不動化ポリペプチドを用いる酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）のような標準技術によって経時的に監視される場合がある。所望の場合には、前記抗体分子は、前記被験体から（具体的には、該被験体の血液又は血清から）獲得されるか、あるいは単離され、かつ、ＩｇＧ分画を得るためのタンパク質Ａクロマトグラフィーのような周知の技術によってさらに精製される場合がある。
【０２００】
免疫後の適切な時間、例えば、特異的抗体の力価が最大のとき、抗体産生細胞は前記被験体から得られ、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６： ４９５−４９７によって最初に説明されるハイブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら（１９８３）Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｔｏｄａｙ ４： ７２）、ＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら（１９８５）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ， Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ出版社、７７−９６頁）又はトリオーマ技術のような標準技術によってモノクローナル抗体を調製するために用いられる場合がある。ハイブリドーマを生産するための前記技術は周知である（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （１９９４） Ｃｏｌｉｇａｎら（編） Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ａｍｐ； Ｓｏｎｓ出版社、ニューヨーク州ニューヨークを一般的に参照せよ。）。本発明のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞は、興味のあるポリペプチドに結合する抗体の前記ハイブリドーマ培養上清をスクリーニングすること、例えば、標準的ＥＬＩＳＡアッセイを用いることによって検出される。
【０２０１】
ある実施態様では、モノクローナル抗体は、特定の時間、例えば、０日目、７日目、１４日目及び１６日目に適切な免疫原（例えば、ＭＰＦ又はＭＳＬＮのいずれか）で４−６週齢ＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫することによってＭＰＦ及びＭＳＬＮに対して調製される場合がある。最後の注射後から１８日目に、脾臓のリンパ球は収集され、５０％ポリエチレングリコール４０００溶液（Ｗａｋｏ、日本国大阪）中でＰ３Ｕ１メラノーマ細胞と融合される場合がある。融合細胞は、１５％ウシ胎児血清、抗生物質及びＨＡＴ溶液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含むＲＰＭＩ−１６４０培養液を用いて９６ウェルプレート上に播種される。３７°Ｃ、５％ ＣＯ_２、飽和水蒸気下で１０日間の培養後に、培養上清は収集され、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイを用いて免疫抗原に結合するためのそれらの能力をスクリーニングされる場合がある。陽性ハイブリドーマコロニーは増殖され、限界希釈によってサブクローン化される場合がある。
【０２０２】
モノクローナル抗体分泌ハイブリドーマを調製するための代替的手段として、ポリペプチドに対するモノクローナル抗体は、興味のある前記ポリペプチドを用いて組換えコンビナトリアル免疫グロブリンライブラリー（例えば、抗体ファージディスプレイライブラリー、酵母ディスプレイライブラリー、哺乳類細胞ディスプレイライブラリー、細菌細胞ディスプレイライブラリー又は類似のもの）によって同定され、単離される場合がある。ファージディスプレイライブラリーを生産及びスクリーニングするためのキットは商業的に入手できる（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ社 Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｈａｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｙｓｔｅｍ、カタログ番号２７−９４００−０１及びＳｔｒａｔａｇｅｎｅ社 ＳＵＲＦＺＡＰ Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ Ｋｉｔ、カタログ番号２４０６１２）。追加的に、抗体ディスプレイライブラリーの生産及びスクリーニングで使用の余地のある方法及び試薬の例は、例えば、米国特許第５，２２３， ４０９号公報明細書、ＰＣＴ出願第ＷＯ ９２／１８６１９号公報明細書、ＰＣＴ出願第ＷＯ ９１／１７２７１号公報明細書、ＰＣＴ出願第ＷＯ ９２／２０７９１号公報明細書、ＰＣＴ出願第ＷＯ ９２／１５６７９号公報明細書、ＰＣＴ出願第ＷＯ ９３／０１２８８号公報明細書、ＰＣＴ出願第ＷＯ ９２／０１０４７号公報明細書、ＰＣＴ出願第ＷＯ ９２／０９６９０号公報明細書、ＰＣＴ出願第ＷＯ ９０／０２８０９号公報明細書、Ｆｕｃｈｓら（１９９１） Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９： １３７０−１３７２、Ｈａｙら（１９９２） Ｈｕｍ． Ａｎｔｉｂｏｄ． Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ３： ８１−８５、Ｈｕｓｅら（１９８９） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６： １２７５−１２８１、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら （１９９３） ＥＭＢＯ Ｊ． １２： ７２５−７３４で見出される場合がある。
【０２０３】
標準的な組換えＤＮＡ技術を用いて作られる場合がある、ヒト及び非ヒトの両方の一部分を含む、キメラ及びヒト化モノクローナル抗体のような組換え抗体が生産され、用いられる場合がある。前記キメラ及びヒト化モノクローナル抗体は、当業者に知られる組換えＤＮＡ技術、例えば、ＰＣＴ出願第ＷＯ ８７／０２６７１号公報明細書と、欧州特許出願第１８４，１８７号公報明細書と、欧州特許出願第１７１，４９６号公報明細書と、欧州特許出願第１７３，４９４号公報明細書と、ＰＣＴ出願第ＷＯ ８６／０１５３３号公報明細書と、米国特許第４，８１６，５６７号公報明細書と、欧州特許出願第１２５，０２３号公報明細書と、Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０： １０４１−１０４３と、Ｌｉｕら（１９８７） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８４ ： ３４３９−３４４３と、Ｌｉｕら（１９８７） Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １３９： ３５２１−３５２６と、Ｓｕｎら（１９８７） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８４ ： ２１４− ２１８と、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら（１９８７） Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ４７： ９９９−１００５と、Ｗｏｏｄら（１９８５） Ｎａｔｕｒｅ ３１４： ４４６− ４４９と、Ｓｈａｗら（１９８８） Ｊ． Ｎａｔｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ． ８０ ： １５５３−１５５９）と、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９： １２０２−１２０７と、Ｏｉら（１９８６） Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４： ２１４と、Ｕ． Ｓ． Ｐａｔｅｎｔ ５，２２５，５３９と、Ｊｏｎｅｓら（１９８６） Ｎａｔｕｒｅ ３２１： ５５２−５２５と、Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら（１９８８） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９： １５３４と、Ｂｅｉｄｌｅｒら（１９８８） Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４１： ４０５３−４０６０とで説明される方法を用いることによって生産される場合がある。
【０２０４】
追加の実施態様では、ＨＣ及びＬＣの免疫グロブリン可変ドメイン配列がＭＰＦに結合する抗原結合部位を提供する、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列及び軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む、抗体又はその抗原結合断片が提供される。ある実施態様では、前記ＨＣは、抗体２０−１０に由来する３個のＣＤＲｓを含む。ある実施態様では、前記ＬＣは、抗体２０−１０に由来する３個のＣＤＲｓを含む。ある実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、抗体２０−１０の前記ＨＣ及び／又はＬＣに由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域を含む。
【０２０５】
もう１つの実施態様では、ＨＣ及びＬＣの免疫グロブリン可変ドメイン配列がＭＰＦに結合する抗原結合部位を提供する、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列及び軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む、抗体又はその抗原結合断片が提供される。ある実施態様では、前記ＨＣは、抗体４１−２８に由来する３個のＣＤＲｓを含む。ある実施態様では、前記ＬＣは、抗体４１−２８に由来する３個のＣＤＲｓを含む。ある実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、抗体４１−２８の前記ＨＣ及び／又はＬＣに由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域を含む。
【０２０６】
追加の実施態様では、ＨＣ及びＬＣの免疫グロブリン可変ドメイン配列がＭＳＬＮに結合する抗原結合部位を提供する、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列及び軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む、抗体又はその抗原結合断片が提供される。ある実施態様では、前記ＨＣは、抗体ＩＣ１４−３０に由来する３個のＣＤＲｓを含む。ある実施態様では、前記ＬＣは、抗体ＩＣ１４−３０に由来する３個のＣＤＲｓを含む。ある実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、抗体ＩＣ１４−３０の前記ＨＣ及び／又はＬＣに由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域を含む。
【０２０７】
もう１つの実施態様では、ＨＣ及びＬＣの免疫グロブリン可変ドメイン配列がＭＳＬＮに結合する抗原結合部位を提供する、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列及び軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む、抗体又はその抗原結合断片が提供される。ある実施態様では、前記ＨＣは、抗体１１−２５に由来する３個のＣＤＲｓを含む。ある実施態様では、前記ＬＣは、抗体１１−２５に由来する３個のＣＤＲｓを含む。ある実施態様では、前記抗体又はその抗原結合断片は、抗体１１−２５の前記ＨＣ及び／又はＬＣに由来する１個又は２個以上のフレームワーク領域を含む。
【０２０８】
ある特定の実施例は、本明細書で説明される技術の新規性、特徴、局面及び実施態様のいくつかをさらに図示するために以下により詳細に説明される。
【実施例１】
【０２０９】
実施例１ 組換えＭＰＦタンパク質の生産
組換えＭＰＦタンパク質は、５’−ＣＧＧＡＡＴＴＣＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧＣＣＴＴＧＣＣＡＡＣＧＧＣＴＣＧＡＣＣＣＣＴＧＴＴＧ−３’（配列番号２５）と、５’−ＧＣＴＣＴＡＧＡＧＡＴＧＧＴＣＣＧＴＴＣＡＧＧＣＴＧＣＣＧＣＣＡＧＧＡＴＧＧ−３’（配列番号２６）というプライマーを用いるポリメラーゼ連鎖反応によってヒトメソテリン前駆体タンパク質（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００５８２３）の転写バリアント１をエンコードするｃＤＮＡに由来するアミノ酸１−２８８番目のコーディング部分を増幅することによって作成された。増幅ＤＮＡは、哺乳類発現プラスミドｐｃＤＮＡ３．１／ｍｙｃ−Ｈｉｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のＥｃｏＲＩ／ＸｂａＩ部位に挿入され、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞にトランスフェクションされた。ＭＰＦタンパク質は、トランスフェクションされた細胞の培養上清からＴＡＬＯＮ樹脂を用いて精製された。このようにして得られる精製ＭＰＦタンパク質はＰＢＳで２回透析され、使用時まで−８０°Ｃで保存された。
【実施例２】
【０２１０】
実施例２ 組換えメソテリンタンパク質の生産
組換えメソテリンタンパク質は、５’−ＡＡＡＴＴＴＣＣＣＡＡＧＣＴＴＧＴＧＧＡＧＡＡＧＡＣＡＧＣＣＴＧＴＣＣＴＴＣＡＧＧＣＡＡＧ−３’（配列番号２７）と、５’−ＡＡＧＧＡＡＡＡＡＡＧＣＧＧＣＣＧＣＧＣＣＣＴＧＴＡＧＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＡＧ−３’（配列番号２８）というプライマーを用いるポリメラーゼ連鎖反応によってヒトメソテリン前駆体タンパク質（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００５８２３）の転写バリアント１をエンコードするｃＤＮＡに由来するアミノ酸２９７−５８０番目のコーディング部分を増幅することによって作成された。増幅ＤＮＡは、発現ベクターｐＳｅｃＴａｇ２Ｂ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のＨｉｎｄＩＩＩ／ＮｏｔＩ部位に挿入された。クローンＮＭ００５８２３によってエンコードされるタンパク質のアミノ酸２９７−５８０番目は、Ｓｃｈｏｌｌｅｒら（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ． １９９９；９６（２０）：１１５３１−６）によって説明されるヒトメソテリンのアイソフォーム１及び３に共通の配列である点に留意すべきである。前記メソテリン発現プラスミドは、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞にトランスフェクションされた。メソテリンタンパク質は、トランスフェクションされた細胞の培養上清からＴＡＬＯＮ樹脂を用いて精製された。このようにして得られる精製メソテリンタンパク質はＰＢＳで２回透析され、使用時まで−８０°Ｃで保存された。
【実施例３】
【０２１１】
実施例３ ＭＰＦ抗体の生産
ＭＰＦに対するモノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）を生産するために、４ないし６週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスは、精製組換えＭＰＦタンパク質を０日目、７日目、１４日目及び１６日目に腹腔内注射（１０マイクログラム／注射）して免疫された。４回目の免疫後１８日目に脾臓のリンパ球は採取され、５０％ポリエチレングリコール４０００溶液を用いてＰ３Ｕ１メラノーマ細胞と融合された。前記融合細胞は、１５％ ウシ胎児血清、ペニシリン／ストレプトマイシン及びＨＡＴ溶液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含む、ＲＰＭＩ−１６４０培地を用いて９６ウェルプレート上に播種された。３７°Ｃ、５％ ＣＯ_２、飽和水蒸気下で１０日間の培養後に培養上清は収集され、組換えＭＰＦタンパク質を用いる間接ＥＬＩＳＡによって免疫原に結合する能力がスクリーニングされた。選択された陽性ハイブリドーマコロニーは増殖され、限界希釈によってサブクローン化された。サブクローン化ハイブリドーマは培養され、サブクローン化抗体のアイソタイプはＲｏｃｈｅのアイソストリップキットを用いて決定された。抗体精製はタンパク質Ａ親和性クロマトグラフィーによって実施された。得られたクローン間の免疫原競合アッセイ後に、クローン２０−１０及びクローン４１−２８（両方ともＩｇＧ１カッパー）は、ＭＰＦのＥＬＩＳＡ検出のためのＥＬＩＳＡを構築するために選択された。クローン４１−２８は、ＧＥ ＨｅａｌｔｈｃａｒｅのＥＣＬタンパク質ビオチネーションモジュールを用いてビオチン化された。
【実施例４】
【０２１２】
実施例４ メソテリン抗体の生産
メソテリンに対するモノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）を生産するために、４ないし６週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスは、精製組換えメソテリンタンパク質を０日目、７日目、１４日目及び１６日目に腹腔内注射（１０マイクログラム／注射）して免疫された。４回目の免疫後１８日目に脾臓のリンパ球は採取され、５０％ポリエチレングリコール４０００溶液を用いてＰ３Ｕ１メラノーマ細胞と融合された。前記融合細胞は、１５％ ウシ胎児血清、ペニシリン／ストレプトマイシン及びＨＡＴ溶液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含む、ＲＰＭＩ−１６４０培地を用いて９６ウェルプレート上に播種された。３７°Ｃ、５％ ＣＯ_２、飽和水蒸気下で１０日間の培養後に培養上清は採取され、組換えメソテリンタンパク質を用いる間接ＥＬＩＳＡによって免疫原に結合する能力がスクリーニングされた。選択された陽性ハイブリドーマコロニーは増殖され、限界希釈によってサブクローン化された。サブクローン化ハイブリドーマは培養され、サブクローン化抗体のアイソタイプはＲｏｃｈｅのアイソストリップキットを用いて決定された。抗体精製はタンパク質Ａ親和性クロマトグラフィーによって実施された。得られたクローン間の免疫原競合アッセイ後に、クローン１１−２５（ＩｇＧ２ｂカッパー）及びクローンＩＣ１４−３０（ＩｇＧ１カッパー）は、ＭＰＦのＥＬＩＳＡ検出のためのＥＬＩＳＡを構築するために選択された。クローン１１−２５は、ＧＥ ＨｅａｌｔｈｃａｒｅのＥＣＬタンパク質ビオチネーションモジュールを用いてビオチン化された。
【実施例５】
【０２１３】
実施例５ ＭＰＦ抗体の特徴付け
抗ＭＰＦモノクローナル抗体、２０−１０及び４１−２８のＣＤＲ領域の核酸配列を決定するために、全量ＲＮＡは、実施例３に従って生産される２０−１０及び４１−２８のそれぞれを産生するハイブリドーマから採取された。採取される前記全量ＲＮＡ中のメッセンジャーＲＮＡは、（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入される）オリゴ（ｄＴ）_{１２−１８}プライマーを用いて相補性ＤＮＡに逆転写された。このＤＮＡから、免疫グロブリン可変領域のヌクレオチド配列は、２０−１０の重鎖のための５’−ＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＧＣＧＧＧＧＴＣＴＴＴＣＴＣＴＴ−３’（配列番号３１）及び５’−ＣＡＧＴＧＧＡＴＡＧＡＣＡＧＡＴＧＧＧＧＧ−３’（配列番号３２）プライマーと、２０−１０の軽鎖のための５’−ＡＴＧＡＧＴＧＴＧＣＴＣＡＣＴＣＡＧＧＴＣＣＴＧＧＣＧＴＴＧ−３’（配列番号３３）及び５’−ＡＣＴＧＧＡＴＧＧＴＧＧＧＡＡＧＡＴＧＧ−３’（配列番号３４）プライマーと、４１−２８の重鎖のための５’−ＡＴＧＧＣＴＴＧＧＧＴＧＴＧＧＡＣＣＴＴＧＣＴＡＴＴＣＣＴＧ−３’（配列番号３５）及び５’−ＣＡＧＴＧＧＡＴＡＧＡＣＡＧＡＴＧＧＧＧＧ−３’（配列番号３６）プライマーと、４１−２８の軽鎖のための５’−ＡＴＧＡＡＧＴＴＧＣＣＴＧＴＴＡＧＧＣＴＧＴＴＧＧＴＧＣＴＧ−３’（配列番号３７）及び５’−ＡＣＴＧＧＡＴＧＧＴＧＧＧＡＡＧＡＴＧＧ−３’（配列番号３８）プライマーとを用いるＰＣＲ技術によって増幅された。増幅ｃＤＮＡは、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＩＩ ＫＳ（＋）プラスミド（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）のＥｃｏＲＶ部位に挿入された。次に、ＶＨ及びＶＬ領域の配列は遺伝子配列決定装置（３１３０／３１００−Ａｖａｎｔ（登録商標）Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ Ｃａｐｉｌｌａｒｙ Ａｒｒａｙｓ、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によって解析された。ＦＲ１、２、３及び４と、ＣＤＲ１、２及び３との領域の決定は、ＩｇＧ ｂｌａｓｔ（ＮＣＢＩ データベース）及びＳＥＱＵＥＮＣＥＳ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ ＩＮＴＥＲＥＳＴ、１巻、第５版、１９９１；ＮＩＨ出版第９１−３２４２頁（Ｅｌｖｉｎ Ａ． Ｋａｂａｔら）を用いて実施された。
【実施例６】
【０２１４】
実施例６ ＭＳＬＮ抗体の特徴付け
抗ＭＳＬＮモノクローナル抗体、ＩＣ１４−３０及び１１−２５のＣＤＲ領域の核酸配列を決定するために、全量ＲＮＡは、実施例４に従って生産されるＩＣ１４−３０及び１１−２５のそれぞれを産生するハイブリドーマから採取された。採取される前記全量ＲＮＡ中のメッセンジャーＲＮＡは、（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入される）オリゴ（ｄＴ）_{１２−１８}プライマーを用いて相補性ＤＮＡに逆転写された。このＤＮＡから、免疫グロブリン可変領域配列のヌクレオチド配列は、ＩＣ１４−３０の重鎖のための５’−ＡＴＧＡＡＡＴＧＣＡＧＣＴＧＧＧＧＣＡＴＣＴＴＣＴＴＣ−３’（配列番号４１）及び５’−ＣＡＧＴＧＧＡＴＡＧＡＣＡＧＡＴＧＧＧＧＧ−３’（配列番号４２）プライマーと、ＩＣ１４−３０の軽鎖のための５’−ＡＴＧＧＧＣＴＴＣＡＡＧＡＴＧＧＡＧＴＣＡＣＡＧＡＴＣＣＡＧＧ−３’（配列番号４３）及び５’−ＡＣＴＧＧＡＴＧＧＴＧＧＧＡＡＧＡＴＧＧ−３’（配列番号４４）プライマーと、１１−２５の重鎖のための５’−ＡＴＧＧＣＴＧＴＣＴＴＧＧＧＧＣＴＧＣＴＣＴＴＣＴＧＣ−３’（配列番号４５）及び５’−ＣＡＧＴＧＧＡＴＡＧＡＣＴＧＡＴＧＧＧＧＧ−３’（配列番号４６）プライマーと、１１−２５の軽鎖のための５’−ＡＴＧＡＡＧＴＴＧＣＣＴＧＴＴＡＧＧＣＴＧＴＴＧＧＴＧＣＴＧ−３’（配列番号４７）及び５’−ＡＣＴＧＧＡＴＧＧＴＧＧＧＡＡＧＡＴＧＧ−３’（配列番号４８）プライマーとを用いるＰＣＲ技術によって増幅された。増幅ｃＤＮＡは、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＩＩ ＫＳ（＋）プラスミド（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）のＥｃｏＲＶ部位に挿入された。次に、ＶＨ及びＶＬ領域の配列は遺伝子配列決定装置（３１３０／３１００−Ａｖａｎｔ（登録商標）Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ Ｃａｐｉｌｌａｒｙ Ａｒｒａｙｓ、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によって解析された。ＦＲ１、２、３及び４と、ＣＤＲ１、２及び３との領域の決定は、ＩｇＧ ｂｌａｓｔ（ＮＣＢＩ データベース）及びＳＥＱＵＥＮＣＥＳ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ ＩＮＴＥＲＥＳＴ、１巻、第５版、１９９１；ＮＩＨ出版第９１−３２４２頁（Ｅｌｖｉｎ Ａ． Ｋａｂａｔら）を用いて実施された。
【実施例７】
【０２１５】
実施例７ 検体中のＭＰＦを評価するためのサンドウィッチＥＬＩＳＡアッセイ
使用済み腹膜透析液検体中のＭＰＦペプチドを検出するために用いられる典型的なアッセイが、ここで説明される。アッセイは、４°Ｃで一晩、前もって炭酸塩−炭酸水素塩緩衝液中で１ミリリットルあたり５マイクログラムの濃度の捕捉抗体（印刷中のＩｗａｈｏｒｉら、Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ、２００８で説明されるモノクローナル抗体クローン２０−１０）１００マイクロリットルで被覆された９６ウェル透明、平底マイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ）で実施された。各ウェルは、その際に、室温で２時間１．０％ ＢＳＡを含む２００マイクロリットルのリン酸緩衝生理食塩水を充填することによってブロッキングされ、その後に前記ＢＳＡ懸濁液は前記ウェルから除去された。
【０２１６】
標準液は、組換えＭＰＦタンパク質を１ミリリットルあたり２、１、０．５、０．２５、０．１２５、０．０６２４及び０．０３１３ナノグラムに希釈することによって調製された。標準希釈及び検出抗体のために用いられる検体希釈液は、リン酸緩衝生理食塩水の１％（Ｗ／Ｖ）ＢＳＡ懸濁液であった。
【０２１７】
前記アッセイを実施するために、標準希釈液、対照、使用済み腹膜透析液検体又は希釈済みの使用済み腹膜透析液検体のそれぞれ５０マイクロリッターは、各ウェルに添加された。典型的に、使用済み腹膜透析液検体は、検体希釈液で４０倍に希釈された。プレートは室温で１時間インキュベーションされ、その後にウェルは、０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０界面活性剤を含むトリス緩衝生理食塩水で洗浄された。西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲート化モノクローナル抗体４１−２８の１ミリリットルあたり０．２５マイクログラムの懸濁液１００マイクロリットルが各ウェルに添加された。前記プレートは室温で１時間インキュベーションされ、その後にウェルは、０．０１３％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０界面活性剤を含むトリス緩衝生理食塩水で洗浄された。３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ；西洋ワサビペルオキシダーゼのための非発色性基質）１００マイクロリットルは、信号を発生させるために各ウェルに添加された。前記プレートは、前記ペルオキシダーゼ反応を停止するためのＴＭＢ停止液（０．３６規定の硫酸）１００マイクロリットルを添加する前に、室温で３０分間インキュベーションされた。ＴＭＢに対する前記ペルオキシダーゼの作用によって発生された青色は、４５０ナノメーターの吸光度を測定するためのプレート読み取り装置を用いて評価された。ＭＰＦ ＥＬＩＳＡの感度は、標準濃度の３倍希釈系列を測定するステップと、別個の８ウェル中の各濃度を測定するステップとよって決定された。各濃度のＯＤ平均値及び標準偏差値は決定された。定量測定値の下限は、前記標準偏差値が平均値の１０％となることが期待される濃度以下として決定され、（図１０Ａで示す）４０倍希釈の検体で１ミリリットルあたり２．２８ナノグラムと同等である、１ミリリットルあたり５７ピコグラムとなることが発見された。
【実施例８】
【０２１８】
実施例８ 検体中のメソテリンを評価するためのサンドウィッチＥＬＩＳＡアッセイ
使用済み腹膜透析液検体中のメソテリンペプチドを検出するために用いられる典型的なアッセイが、ここで説明される。アッセイは、４°Ｃで一晩、前もって炭酸塩−炭酸水素塩緩衝液中で１ミリリットルあたり５マイクログラムの濃度の捕捉抗体（モノクローナル抗体クローンＩＣ１４−３０）１００マイクロリットルで被覆された９６ウェル透明、平底マイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ）で実施された。各ウェルは、その際に、室温で２時間１．０％ ＢＳＡを含む２００マイクロリットルのリン酸緩衝生理食塩水を充填することによってブロッキングされ、その後に前記ＢＳＡ懸濁液は前記ウェルから除去された。
【０２１９】
標準液は、組換えメソテリンタンパク質を１ミリリットルあたり２５、１２．５、６．２５、３．１２５、１．５６２５、０．７８１２５及び０．３９０６２６ナノグラムに希釈することによって調製された。標準希釈及び検出抗体のために用いられる検体希釈液は、ＰＢＳの１％（Ｗ／Ｖ）ＢＳＡ懸濁液であった。
【０２２０】
前記アッセイを実施するために、標準希釈液、対照、使用済み腹膜透析液検体又は希釈済みの使用済み腹膜透析液検体のそれぞれ１００マイクロリッターは、各ウェルに添加された。典型的に、使用済み腹膜透析液検体は、検体希釈液で５倍に希釈された。プレートは室温で１時間インキュベーションされ、その後にウェルは、０．０１３％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０界面活性剤を含むトリス緩衝生理食塩水で洗浄された。ビオチン化モノクローナル抗体１１−２５の１ミリリットルあたり０．３マイクログラムの懸濁液１００マイクロリットルは、各ウェルに添加された。室温で１時間前記プレートのインキュベーションするステップと、その後のＴｗｅｅｎ２０界面活性剤を含むトリス緩衝生理食塩水で各ウェルの洗浄するステップとの後に、１：２００００希釈の（ＤＡＫＯから得られる）ストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼ１００マイクロリットルが各ウェルに添加され、前記プレートは室温で１時間インキュベーションされた。３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ；西洋ワサビペルオキシダーゼのための非発色性基質）１００マイクロリットルは、信号を発生させるために各ウェルに添加された。前記プレートは、前記ペルオキシダーゼ反応を停止するためのＴＭＢ停止液（０．３６規定の硫酸）１００マイクロリットルを添加する前に、室温で３０分間インキュベーションされた。ＴＭＢに対する前記ペルオキシダーゼの作用によって発生された青色は、４５０ナノメーターの吸光度を測定するためのプレート読み取り装置を用いて評価された。ＭＳＬＮのＥＬＩＳＡの感度は、標準濃度の２倍希釈系列を測定するステップと、別個の８ウェル中の各濃度を測定するステップとよって決定された。各濃度のＯＤ平均値及び標準偏差値は決定された。定量測定値の下限は、前記標準偏差値が平均値の１０％となることが期待される濃度以下として決定され、（図１０Ｂで示す）５倍希釈の検体で１ミリリットルあたり１３．３ナノグラムと同等である、１ミリリットルあたり２．２６ナノグラムとなることが発見された。検出限界は、平均値＋２の標準偏差値が次に高濃度の平均値−２の標準偏差値よりも低い、最低濃度として決定される。前記検出限界は、１ミリリットルあたり０．７８ナノグラムとなることが発見された。
【実施例９】
【０２２１】
実施例９ 健康な人の血清中のＭＰＦペプチド及びメソテリンペプチドの検出
ＭＰＦ及びメソテリンの両方が、３８人の健康な日本人から採取される血清中で定量された。インフォームドコンセントが得られ、血液は健康な志願者から取り出され、凝固可能であり、固体は遠心分離によって除去される。血清中のＭＰＦを定量するために用いられるＥＬＩＳＡは実施例７で説明され、血清中のＭＳＬＮを定量するために用いられるＥＬＩＳＡは、実施例７で説明されるような同一の検出抗体以外の異なる捕捉抗体を用いるＩｗａｈｏｒｉら（Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ，２００８）によって説明されるものである。結果は図１１に示される。
【０２２２】
たいていの健康な人では、血清中の両方のタンパク質は検出可能な量である。相関関係は、Ｒ^２ ＝ ０．３１（ピアソン相関係数）となることが決定された。このデータは、２つのバイオマーカーが健康な人の血流中で検出可能であり、双方のバイオマーカーが明らかに区別でき、かつ、診断上等価ではないことを示す。
【実施例１０】
【０２２３】
実施例１０ 患者個人の腹膜透析液中のＭＰＦペプチド及びメソテリンペプチドの蓄積の経時的減少
腹膜透析は、末期の腎不全のための治療の１手段であり、失われた腎機能の置換術として役立つ。
【０２２４】
３１０個の透析検体は、（患者あたり１ないし３２回の採取の範囲の）インフォームドコンセントが得られた８４人の患者から異なる日に得られた。診療所を訪れる前夜、患者は腹腔に２０００ｍＬの腹膜透析液が注射された。注射後９−１０時間に診療所で前記腹膜透析液は除去され、検体は解析するために利用され、残余は廃棄された。検体は、使用されるまで−４０°Ｃ以下で保存された。
【０２２５】
検体は、実施例７及び８で説明されるように希釈された（ＭＰＦを測定するために１％ ＢＳＡを含むＰＢＳで１：４０となるように希釈され、ＭＳＬＮを測定するために１％ ＢＳＡを含むＰＢＳで１：５となるように希釈された。）。透析液は陰性対照として用いられた。検体の希釈液のそれぞれ１００マイクロリットルは、実施例１で説明されるアッセイで試験された。図１４に示す結果は、ＭＰＦが腹膜透析液中のマーカーとして有用であることを示す。
【０２２６】
監視される８４人の患者中４３人は観察期間前又は期間中に腹膜炎の徴候を全く知らず、それらの患者中２２人の使用済み腹膜透析液検体は、３ヶ月間隔（９１−９８日間）にわたって得られた。これらの患者は、この試験の開始から１５４−３８８４日間腹膜透析が既に実施された。図１２は、患者個人の使用済み腹膜透析液中のメソテリン及びＭＰＦの両方の濃度の低下を示す。ＭＳＬＮ及びＭＰＦの両方の低下は、非常に有意であった（独立ステューデントＴ検定で測定されるとき、ｐ＜０．００１である。）。さらに、腹膜透析の短期履歴のこれらの２２人の患者は、両方のマーカーが全体として高いレベルとなりがちであることが明らかである（図１４に類似するが、データは示されない）。
【実施例１１】
【０２２７】
実施例１１ 急性炎症性障害での腹膜透析液中のＭＰＦペプチド及びメソテリンペプチドの蓄積
実施例１０で説明される方法で、使用済み透析液中のＭＰＦ及びメソテリンは、多くの患者で細菌性又は真菌性感染が原因の腹膜炎の進行後に結果として生じ、前記腹膜透析液中の白血球細胞数及びマトリックスメタロプロテイナーゼ２（ＭＭＰ−２）濃度を含む、炎症性マーカーと比較された。
【０２２８】
図１３で示すように、典型的な患者の使用済み腹膜透析液中のＭＰＦ及びメソテリン濃度は炎症時に急速に低下するが、ある場合には、炎症性感染が沈静化した後に感染前レベルに回復する。
【実施例１２】
【０２２９】
実施例１２ 長期腹膜透析患者での腹膜透析液中のＭＰＦペプチド及びメソテリンペプチドの蓄積の低下
この試験中の検体は、長期間の腹膜透析治療の期間に応じて４つのグループにグループ化された。
グループ１：１年未満のグループ
ＣＡＰＤ治療期間２４０＋／−８１日間（平均値＋／−標準偏差値）、５９＋／−１２歳の高齢の２０人の患者
グループ２：１−３年のグループ
ＣＡＰＤ治療期間５８４＋／−１６８日間、６３＋／−１３歳の高齢の３４人の患者
グループ３：３−５年のグループ
ＣＡＰＤ治療期間１３８５＋／−２２５日間、６７＋／−１２歳の高齢の１２人の患者
グループ４：５年より長いグループ
ＣＡＰＤ治療期間２５５７＋／−６３３日間、６４＋／−９歳の高齢の１８人の患者
【０２３０】
ＭＰＦ及びメソテリンレベルは、実施例１０で説明されるように測定される。図１４で示すように、腹膜透析液中のメソテリン及びＭＰＦの平均蓄積量は、治療継続期間にともなって着実に低下する。前記低下は、グループ１と、ＭＳＬＮ及びＭＰＦの両方のいずれかのグループとの間、及び、グループ２と、ＭＳＬＮのグループ４との間で統計学的に有意であった（Ｐ＜０．０１、マンホイットニーのＵ検定）。
【実施例１３】
【０２３１】
実施例１３ 使用済み透析液中のメソテリン及びＭＰＦによる治療法の生存期間の予測
治療成果の遡及解析では、５年よりも長い腹膜透析を受けた１８人の患者（実施例１０のグループ４）は、観察末期で未だに腹膜透析治療中の患者（患者数１２、検体数３３）と、腹膜透析治療を中止しなければならない患者（患者数６、検体数４７）とに分類される。
【０２３２】
ＭＰＦ及びメソテリンレベルは、実施例１０で説明されるように決定される。図１５で示すようにメソテリン及びＭＰＦの両方は、継続性腹膜透析治療グループと比較して、腹膜透析治療を中止しなければならなかった患者からの検体での低下が有意であった（Ｐ＜０．００５）。これらのデータは、使用済み透析液中のメソテリン及びＭＰＦの両方の蓄積が治療成果の予測指標となることを示す。結果として、これらのマーカーは、慢性痛及び器官障害を含む腹膜の重篤かつ不可逆的損傷を回避するために患者にとってちょうどよい時期に腹膜透析を中止するための有用な手引きを提供する。全ての特許、特許出願の公報及び本明細書で引用される文献は、全体として引用により本明細書に取り込まれる。追加的に、明細書で議論される一部の文献の引用は以下に列挙され、引用により本明細書に取り込まれる。
【０２３３】
本明細書で説明される実施例の構成を導入するとき、「１つ」、「その」及び「前記」という記載は、１種類又は２種類以上の構成が存在することを意味する。「含む」、「含む」及び「有する」という用語は制限がなく、列挙される構成よりも他の追加の構成が存在する場合があることを意味する。実施例のさまざまな構成要素は、他の実施例のさまざまな構成要素に交換されるか、あるいは置換される場合があると本明細書の利益が与えられる当業者によって認識されるであろう。引用により本明細書に取り込まれる特許又は文献という用語の意味が本明細書で用いられる用語の意味と矛盾する場合には、本明細書での用語の意味が基準となることを意図される。
【０２３４】
一部の局面、実施例及び実施態様は上記に説明されるが、開示される実施例の局面、実施例及び実施態様の追加、置換、改変及び変更は可能であると本明細書の利益が与えられる当業者によって認識されるであろう。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
体液又は腹水中のＭＰＦレベルを測定するために少なくとも１種類のＭＰＦ特異的な結合物質に患者の腹水を曝露するステップを含むことを特徴とする、腹膜透析を受けている患者の腹膜の健康状態を評価する方法。
【請求項２】
前記結合物質は、図２−５に示す少なくとも１個のＨＣ及び少なくとも１個のＬＣの相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む、抗体又はその抗原結合断片であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記患者の腹水を、該腹水中のＭＳＬＮレベルを測定するために少なくとも１種類のＭＳＬＮ特異的な結合物質に曝露するステップを含むことを特徴とする、腹膜透析を受けている患者の腹膜の健康状態を評価する方法。
【請求項４】
前記結合物質は、図６−９に示す少なくとも１個のＨＣ及び少なくとも１個のＬＣの相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む、抗体又はその抗原結合断片であることを特徴とする、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
図２−５に示す少なくとも１個のＨＣ及び少なくとも１個のＬＣの相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む第１の抗体と、体液又は腹水中のＭＰＦレベルを検出するための前記抗体の取扱説明書とを含むことを特徴とする、体液又は腹水中のＭＰＦレベルの検出で使用するためのキット。
【請求項６】
図６−９に示す少なくとも１個のＨＣ及び少なくとも１個のＬＣの相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む第１の抗体と、体液又は腹膜中のＭＳＬＮレベルを検出するための前記抗体の取扱説明書とを含むことを特徴とする、体液中のＭＰＦレベルの検出で使用するためのキット。
【請求項７】
少なくとも１種類のＭＰＦ又はＭＳＬＮに特異的な抗体に患者に由来する使用済み腹膜透析液を曝露するステップと、前記使用済み腹膜透析液中の前記ＭＰＦ又はＭＳＬＮレベルを測定するステップと、腹膜透析治療の開始時のＭＰＦ又はＭＳＬＮの初期レベルと比較して前記ＭＰＦ又はＭＳＬＮの測定レベルの減少にもとづいて腹膜透析又は血液透析を提供するかどうかを評価するステップとを含むことを特徴とする、腎不全患者のための腹膜透析の継続を評価するアッセイ。
【請求項８】
前記ＭＰＦに特異的な抗体は、図２−５に示す少なくとも１個のＨＣ及び少なくとも１個のＬＣの相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含むことを特徴とする、請求項７に記載のアッセイ。
【請求項９】
前記ＭＳＬＮに特異的な抗体は、図６−９に示す少なくとも１個のＨＣ及び少なくとも１個のＬＣの相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含むことを特徴とする、請求項７に記載のアッセイ。
【請求項１０】
前記ＭＰＦに特異的な抗体は、配列番号１に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸に効率的に結合することを特徴とする、請求項７に記載のアッセイ。
【請求項１１】
前記ＭＳＬＮに特異的な抗体は、配列番号２に示す少なくとも２０個の連続するアミノ酸に効率的に結合することを特徴とする、請求項７に記載のアッセイ。
【請求項１２】
前記方法は、前記ＭＰＦ又はＭＳＬＮの測定レベルが前記初期レベルと比較して４０％未満となる場合に、腹膜透析治療を中止するステップをさらに含むことを特徴とする、請求項７に記載のアッセイ。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０Ａ】

【図１０Ｂ】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【公開番号】特開２０１０−１４６９１（Ｐ２０１０−１４６９１Ａ）
【公開日】平成２２年１月２１日（２０１０．１．２１）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２００８−２９５６７２（Ｐ２００８−２９５６７２）
【出願日】平成２０年１１月１９日（２００８．１１．１９）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り　〔刊行物名〕　日本透析医学会雑誌　４１巻　〔発行人〕　社団法人日本透析医学会　西沢良記　〔発行日〕　２００８年５月２０日
【出願人】（３９０００４０９７）株式会社医学生物学研究所 (41)
【Ｆターム（参考）】