血液を解毒するための血液濾過材
本発明は、細菌毒素（リポ多糖類）の血液からの除去のために血液濾過材を使用することに関し、前記血液濾過材は、シクロデキストリンが共有結合的に結合された固体担体を具備している。この固体担体は、織物又は不織布、又は、適切な架橋剤、例えばエピクロルヒドリン、でのシクロデキストリンの架橋によって得られるポリマー樹脂であり得る。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
本発明は、血液を解毒するための担持されたシクロデキストリンの使用に関する。
【０００２】
敗血症症候群は、グラム陰性菌による感染の重大な合併症である。
【０００３】
度々、この症候群は、全ての臓器及び器官に影響を与え、人工的補助器具（自動呼吸器、人工腎、心臓刺激装置）の適用を必要とする多臓器不全を引き起こす。敗血症の特に懸念され広く広まっている合併症の１つは、敗血症ショックであり、これは死をもたらし得る。
【０００４】
敗血症は、細菌のきょう膜（outer capsule）からの外毒素及び内毒素の遊離により引き起こされる。これらの物質はリポ多糖類であり、血液循環に入ると、それの体液成分及び細胞成分における免疫系に影響を与える一連の反応を引き起こす。この疾病に関して最も危険な状況としては、重い外傷、腸の穿孔、上腹部の外科手術、特には糖尿病患者又は免疫が低下した高齢の患者の手術が挙げられる。
【０００５】
内毒素に対する臓器の反応は、度々、臓器の微小循環に影響を与える一連の応答を引き起こす（敗血症カスケード）。
【０００６】
このような反応は、細菌侵入時の臓器の防衛と考えられるが、しばしば異常であり、応答の自己増幅プロセスの原因となる多くの炎症メディエータ（サイトカイン及び他のミクロプロテイン）の生成を誘発させ、臓器及び器官に対する重大な障害をもたらす。
【０００７】
抗生物質治療及び障害を受けた臓器の人工的補助器具による置換によって、常に敗血症カスケードを食い止められるというわけではない。
【０００８】
それゆえに、敗血症の最も効果的な治療は、菌体毒素の臓器への侵入を、これらが敗血症カスケードを誘発させる前に防止することである。
【０００９】
リポ多糖類（ＬＰＳ）は、グラム陰性菌の細胞膜の特徴的な成分であり、それらはグラム陽性菌には存在しない。
【００１０】
これらは、毒性の原因となる疎水性の脂質鎖と、中心にある親水性の多糖鎖と、各菌体株に特異的な親水性のＯ−多糖側鎖（O-polysaccharide side chain）とで構成さている。
【００１１】
リポ多糖類は、様々な寸法の凝集塊、特には約１，０００ＫＤａの重さのミセルを水性溶媒中に形成する傾向にある。その結果、これらは、膜の細孔を通り抜けないので、限外濾過によっては血液から分離可能ではない。
【００１２】
長年に亘って、多くの血液解毒技術が開発されてきたが、これらは、あまり有効ではなく、特には、用いられる材料のせいで非常に高額の費用を必要とするという欠点を有している。例えば、血液の解毒が可能な抗生物質を含んだ血液濾過材は、入手可能である。しかしながら、このような濾過材は、巨額の費用がかかる。
【００１３】
上述の問題は、添付の特許請求の範囲に要旨が記載された血液濾過材の使用により解決される。
【００１４】
本発明を、以下の図面を参照しながら、以下に詳細に説明する。
【００１５】
第１の側面では、本発明は、固体担体を具備した血液濾過材であって、この固体担体にシクロデキストリン又はシクロデキストリン誘導体が共有結合的に結合された血液濾過材の使用に関する。
【００１６】
本発明において用いられる固体担体は、シクロデキストリンと、適切な架橋剤、例えば、エピクロルヒドリン、イソシアネート、ポリアミン、アクリレート、カーボネートとの架橋反応によって得られるポリマー樹脂であり得るか、又は、シクロデキストリンが化学的又は物理的処理、例えば電子ビームによって結合された、例えばセルロースの繊維若しくは織物の担体、又は、例えばポリプロピレンの不織繊維であり得る。これらの中で、天然セルロース担体が好ましい。好ましく用いられる他の担体は、シクロデキストリンで誘導体化された（derivatised）ポリエチレンイミンにより被覆されたシリカである。
【００１７】
シクロデキストリン（ＣＤ）は、シクロアミロース、シクログルカン、シクロマルトサイドとも呼ばれ、環状のオリゴ糖であり、α（１，４）結合した６個乃至１２個のグルコース単位からなる結合により構成されている。用語ＣＤの前付されるギリシャ文字は、環の中に存在するグルコース単位の数を示している（αは６個の単位に対応し、βは7個の単位に対応する、など）。
【００１８】
シクロデキストリンは、様々な細菌（例えば、Bacillus Macerans、 Klebsiella Pneumonite、Bacillua Stearothermophilus、Bacillus Megateriumなど）によって生成される糖転移酵素（ＣＧＴａｓｅ）による、アミドの酵素分解の生成物である。
【００１９】
ＣＧｔａｓｅ酵素は、アミドの螺旋構造を破壊し、グルコース分子間にα（１，４）結合を同時形成させ、環状のオリゴ糖類の獲得をもたらす。
【００２０】
シクロデキストリンは、図１及び２に示すように、構造の外側に向いた水酸基、並びに、構造の内側に向いた炭素原子、水素原子及びヘテロ酸化物結合（hetero-oxide bond）を持つ切頭円錐構造を有している。更に、一級水酸基が切頭円錐のより小さな径の領域に位置しており、二級水酸基が切頭円錐のより大きな径の領域に位置している。
【００２１】
この構造は、特別な性質をＣＤに与える。グリコシド結合の酸素によってもたらされる高い電子密度は、疎水性分子の空洞を無極性にし、親水特性をその外側に与える。
【００２２】
それゆえ、本発明の基礎をなす原理は、水溶性のシクロデキストリンを固体担体に結合させることである。血液、特には血漿が前記担体上に通される。シクロデキストリンの疎水性の内部空洞は、菌体内毒素を捕捉して血液の解毒を可能にし、この血液は、その後、清浄に循環中へと再挿入される。
【００２３】
この解毒が可能なのは、内毒素又はリポ多糖類が疎水性分子であり、そのために、これらが、包接錯体と呼ばれる、シクロデキストリンの疎水性内部空洞を有する安定で可逆な錯体を形成するからである。
【００２４】
殆どの場合、ＣＤとホスト分子との比は１：１であり且つ共有結合が無い一方で、主に包接される分子とＣＤの水酸基との間のファンデルワールス相互作用及び水素結合のおかげで、会合−解離型の平衡が成り立っている。
【００２５】
本発明の目的のために、好ましく使用されるシクロデキストリンは、アルファ、ベータ、ガンマデキストリン、並びに、ヒドロキシプロピル、サルフェート及びエチルスルホナートなどのそれらの誘導体である。最も好ましいシクロデキストリンは、アルファシクロデキストリンである。
【００２６】
固体ポリマー担体の合成は、シクロデキストリンを適切な架橋剤と反応させることによって行われる。前記架橋剤は、有利には、シクロデキストリンの一級及び二級水酸基と反応可能な官能基を２つの端に有する二官能性分子である（例えば、エポキシド及びハライド）。
【００２７】
架橋剤の例は、エピクロルヒドリン、イソシアネート、ポリアミン、アクリレート及びカーボネートであり、好ましくはエピクロルヒドリンが使用される。合成法は、文献、例えば、以下の論文により知られている；E. Renard、G. Barnathan、A. Deratani及びB. Sebille、“Characterization and structure of cyclodextrin-epichlorohydrin polymers-effects of synthesis parameters" (1996)、Proceeding of the Eighth International Symposium on Cyclodextrins。
【００２８】
合成されたポリマーは、粒状であり、水及び殆どの有機溶媒（アルコール、クロロホルム、アセトン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ等）に不溶である。
【００２９】
本発明の目的のために好ましく使用されるポリマーは、エピクロロヒドリンを用いたシクロデキストリンの架橋によって得られるポリマーであり、２００−９００μｍｏｌ／ｇ、好ましくは６００−８００μｍｏｌ／ｇの範囲内にあるシクロデキストリン含量を有する。
【００３０】
シクロデキストリンの、例えばセルロースのヤーン若しくは織物上への、又は、例えばセルロースアセテート、ポリプロピレン、ポリエチレン、若しくはポリエステルなどのポリマー材料の不織布上へのグラフトは、リンカーモノマーを支持体とシクロデキストリンとの間に介在させることにより行われる。
【００３１】
様々なモノマー、例えば、グリシジルメタクリレート（ＧＭＡ）、アクリル酸、Ｎ−ビニルピロリドン、アクリルアミド及びビニルアセテートが、グラフト重合反応において用いられ得る。好ましくは、使用されるモノマーは、グリシジルメタクリレートである。
【００３２】
ＧＭＡモノマーは、エポキシドなどの極めて反応性の高い基が存在するおかげで、特に興味の対象となっている。
【００３３】
モノマーを支持体上へとグラフトするために用いられる方法は、文献、例えば、以下の論文により知られている；P. Le Thuaut、G. Crini、M. Morcellet、A. Naggi、U. Maschke、C. Vecchi、X. Coqueret、G. Torri及びB. Martel、J. Appl. Polym. Sci. (１９９７年)；P. Le Thuaut、Macromolecular and Organic Chemistry Doctoral thesis、University of Science and Technology of Lille、Macromolecular and Chemistry Laboratory、“Fonctionnalisation de supports textiles pour l’elaboration de filtres adsorbeurs de polluants organiques” (２０００年)。この合成は、典型的には、以下の工程を含む：
・化学的又は物理的処理による、例えば電子ビームなどを用いた固体支持体の活性化。好ましい技術は、電子ビームの照射である；
・支持体の誘導体化とモノマーの重合とを両方もたらし、様々な長さのスペーサを生成させるモノマーのラジカルグラフト反応。
【００３４】
スペーサが支持体上にグラフトされると、後者はシクロデキストリンで機能付与される。本発明において用いられる織物へのＣＤでの機能付与方法は、文献、例えば以下の論文において説明されている：K. Poulakis、H.J. Buschmann及びE. Schollmeyer、独国特許第４０ ３５３７８号（１９９２年）；H. Reuscher及びR. Hirsenkorn、欧州特許第６９７ ４１５号（１９９５年）；H. Reuscher及びR. Hirsenkorn、独国特許第１９ ５２０ ９６７号（１９９５）；P. Le Thuaut、G. Crini、M. Morcellet、A. Naggi、U. Maschke、C. Vecchi、X. Coqueret、G. Torri及びB. Martel、J. Appl. Polym. Sci. （１９９７年）。
【００３５】
第２の側面では、本発明は、血液の解毒方法であって、以下の工程：
ａ）血液を敗血病のおそれのある患者から取り出す工程と、
ｂ）体外循環の動脈系統上に、ポリスルフォン又はそれの誘導体、例えばポリエーテルスルフォンからなる血漿濾過材を挿入して、血漿を前記血液の残りの部分から分離する工程と、
ｃ）前記血漿を、本発明に従う血液濾過材上で濾過する工程と、
ｄ）濾過された前記血漿を、先に分離した血液の前記部分と再び合わせる工程と
を含んだ方法に関する。
【００３６】
工程ｄ）が終了したら、このようにして解毒された血液が、直ちに、患者に戻され得る。
【００３７】
第３の側面では、本発明は、数種類の薬剤、例えばバルビツール剤、又は他の毒性物質の不適切な摂取により引き起こされる血液中毒の場合における、上で説明した血液濾過材の使用及び血液の解毒方法に関する。これら物質は、リポ多糖類と同様に、担持されたシクロデキストリンと共に錯体を形成し、それにより血液から除去される。
【００３８】
実験データ
ポリマー担体材料の合成
シクロデキストリンは、水酸基の１つを２官能性分子であるエピクロルヒドリンと反応させることによって重合され得る。塩基性環境において、エピクロルヒドリンは、反応ダイアグラム１に示すように、ＣＤと（架橋反応）及び／又はそれ自身と（ホモ重合）反応し得、ダイアグラム２に示されたポリマーの合成をもたらす。
【化１】
【化２】
【００３９】
恒温リアクタ中で、機械攪拌子が、水溶液中で互いに異なる割合にあるシクロデキストリン（Wacker）とＮａＯＨ（Carlo Erba）とを混ぜ合わせる。１時間の攪拌後、所望量のエピクロルヒドリン（Fluka）がゆっくりと滴下されて、高粘度の白みがかったペーストの形成が即座に観察され、これが、表１に記載された様々な時間に亘り激しく攪拌される。次に、アセトン（Acros）が添加され、生成物がグーチ濾過材のために回収される。過剰の未反応エピクロルヒドリン及びシクロデキストリンは、ソックスレーにおけるポリマーの熱水及びエタノール（Girelli）での洗浄により取り除かれる。最後に、回収された生成物が凍結乾燥によって乾燥される。
【００４０】
合成生成物に存在するＣＤの測定のために、ポリマー全体の加水分解によって得られるグルコースが、比色測定（フェノールを用いる）により定量される。
【００４１】
この目的のために、２０ｍｇのポリマーが５ｍｌの１Ｍトリフルオロ酢酸（Fluka）中に懸濁されて、この懸濁液が、激しい攪拌下で、１２０℃で８時間に亘り加熱される。その後、トリフルオロ酢酸を取り除くために、溶液が蒸発される。生成物は、１０ｍｌの蒸留水中に回収される。グルコース含量は、フェノールと硫酸とを用いる比色測定により測定される。この方法は、検量線を必要とする；そのために、１重量％のグルコースの母液を用いて、表に示される様々なグルコース（Fluka）濃度の溶液が調製される。
【表１】
【００４２】
同じ手順が、加水分解されたポリマーの溶液について繰り返される。もっとはっきり言えば、様々な量が１０ｍｌの中性溶液から取り出され、表で報告されるように、様々な量の水で希釈される。
【表２】
【００４３】
試験管中に入れられたこれら溶液に、０．５ｍｌの５重量％フェノール水溶液（Carlo Erba）が添加される。１０分後、２．５ｍｌの９８％Ｈ2ＳＯ4（Carlo Erba）が添加され、激しく攪拌される。この添加の後の更に１０分後、４８０ｎｍの波長での吸光度が読み取られる。ランバート−ベールの法則を使用して、検量線をつくること及びそれにより加水分解されたポリマー中のグルコース含量を測定することができる。この方法によって、１ｇの材料当たりのμｍｏｌ又はμｇで表されたシクロデキストリン含量が得られる。
【００４４】
合成されたポリマー中のシクロデキストリン含量の計算は、材料を２つの群：低い（〜３００μｍｏｌ／ｇ）ＣＤ含量を有するものと高い（〜６００／８００μｍｏｌ／ｇ）ＣＤ含量を有するものとに分けることを可能にした。
【００４５】
様々な実験条件と得られたＣＤ値とが、表１に報告されている。
【表３】
【００４６】
この表でベータ−２０と示された材料は、文献（E. Renard、G. Barnathan、A. Deratani及びB. Sebille，“Characterization and structure of cyclodextrin-epichlorohydrin polymers-effects of synthesis parameters”、（１９９６年）、Proceeding of the Eighth International Symposium on Cyclodextrins）で知られた方法を用いて合成された。
【００４７】
錯体生成能の性質決定及び計算の検討の両方の間中、この材料が参照された。
【００４８】
合成のために用いられた実験条件の分析から、高シクロデキストリン含量の材料を得るための基本的なパラメータは反応混合物中に存在する溶媒の量であることが結論付けられた。
【００４９】
織物及び不織布の固体担体の合成
織物は、“Grafting of cyclodextrins onto polypropylene nonwoven fabrics for the manufacture of reactive filters. II Characterization”、B. Martel、P.Le Thuaut、G. Crini、M. Morcellet、A. Naggi、U. Maschke、S. Bertini、C. Vecchi、X. Coqueret及びG. Torri、J. Appl. Polym. Sci.、78: 2166-2173、（２０００年）に記載された方法に従い、図３に記載されたダイアグラムに従って準備される。
不織布は、５０ＫＧｙ（５Ｍｒａｄ）の電子線によって基本活性線量を提供する装置を用い、５〜３０Ｍｒａｄを使用して物理的に活性化され、より大きな線量を得るために、照射が繰り返される。グリシジルメタクリレートのグラフト反応は、活性化された織物を、モノマーを１−７０％の濃度で含んだ水溶液浴中に浸漬させ、不活性雰囲気において７０℃で２０−２００分の様々な時間に亘って加熱することによって行われる。結合されたＧＭＡの量は、長時間の洗浄及び乾燥後の織物の重量の増加から算出される。シクロデキストリンでの誘導体化は、機能付与された織物をシクロデキストリンのＤＭＦ／Ｈ2Ｏ溶液に浸漬させ、８０℃で８〜２４時間に亘って加熱することによって行われる。導入されたシクロデキストリンの量は、長時間の洗浄及び乾燥後の織物の重量の増加から算出される。
【化３】
【００５０】
本発明の担持されたシクロデキストリンの生物活性の例
例１．水溶液からのバッチ吸収
以下のタイプの材料が試験された：エピクロルヒドリンで架橋されたシクロデキストリン（Ｐ１７７６：ＧｅｌベータＣＤ；Ｐ１７８０：ＧｅｌガンマＣＤ；Ｐ１７９３：ＧｅｌアルファＣＤ）、ＣＤで誘導体化されたポリエチレンイミンで被覆されたシリカ（ＳｉＰＥＩＣＤ）、ベータシクロデキストリンで誘導体化されたポリプロピレン担体（Ｐ１７０８）。
【００５１】
再水和され洗浄されたＣＤを含んだ１００ｍｇの各々の材料が、５ｍｌの（１０ｍｇ／Ｌの）ＬＰＳの蒸留水溶液と共に２時間に亘って攪拌される。２２２ｍｇのＰ１７０８は、２時間に亘って、３ｍｌの溶液と共に攪拌される。
【００５２】
溶液は、５０００ｒｐｍでの５分間に亘る遠心分離によって回収される。上澄みから、１．６μｃのガラス繊維フィルタ上で濾過されて、別々の部分標本が取り出される。第１（０．５ｍｌ）はフェノール／硫酸法で分析され、第２（５ｍｌ）は、凍結乾燥され、１．６ｍｌ中に取り入れられた後に、カルボシアニン色素アッセイ法（Carbocyanine Dye Assay method）に従う測定に供される。
【００５３】
フェノール／硫酸法
サンプル部分標本（５００μｌ）に、５００μｌの５％フェノール水溶液が添加され、２ｍｌの濃硫酸が添加され、２０分放置後、ゆっくりと攪拌しながら、４８０ｎｍの波長での吸収が読み取られる。
【００５４】
カルボシアニン色素アッセイ法
試薬：
１）カルボシアニン色素
２）ｐＨ４の０．０３Ｍ Ｎａ−アセテート緩衝液
３）１，４−ジオキサン：ｐＨ４の０．０３Ｍ Ｎａ−アセテート緩衝液（１：１体積／体積）
４）０．０１Ｍアスコルビン酸。
【００５５】
色素溶液を調製するために、試薬１を試薬３に１：２の比（重量／体積）で添加され、完全に可溶化したとき、試薬２が１：４の比（体積／体積）で添加され、最後に、試薬４が１：０．０１（体積／体積）の比で添加される。
【００５６】
アッセイのために、凍結乾燥された部分標本が０．４ｍｌの試薬２中に取り入れられ、体積が１ｍｌになるまで水が添加される。
【００５７】
攪拌後、０．６ｍｌの色素溶液が添加され、それは室温で５分間に亘ってインキュベートされる。４６０ｎｍの波長での吸収の読み取りが行われる（BeMiller J.N. Whistler R.L. Shaw D.H.によって編集された“Methods in carbohydrate chemistry”の中の、Johnson K.G. “Isolation and purification of lipopolysaccharides”）。
【００５８】
比較として、シクロデキストリンでの誘導体化がない以外は、類似の条件で得られた材料のサンプルを同じ条件で試験する（Ｐ１４５８；ＳｉＰＥＩ；）。表２に、残留ＬＰＳデータが報告されている。
【表４】
【００５９】
例２． ０．１５Ｍ ＮａＣｌ溶液によるバッチ吸収
得られた結果に基づいて、樹脂Ｐ１７７６、Ｐ１７８０、Ｐ１７９３及びＰ１７０８が、ＬＰＳ水溶液中及び０．１５Ｍ ＮａＣｌ溶液中で再試験された。この場合、２００ｍｇのＰ１７９３が処理され、５ｍｌの（１０ｍｇ／Ｌの）ＬＰＳ蒸留水溶液と共に２時間に亘って攪拌された１００ｍｇのＰ１７７６及びＰ１７８０と比較された。
【００６０】
Ｐ１７０８に関しては、２２８ｍｇが秤量され、０．１５Ｍ ＮａＣｌ中で３ｍｌの５０μｇ／ｍｌ ＬＰＳと共に２時間に亘って攪拌された。
【００６１】
この場合においても、溶液は、５０００ｒｐｍでの５分間に亘る遠心分離によって回収された。２つの部分標本（５００μｍ）は、各々、例１において説明されたフェノール／硫酸法を用いた測定に供された。
【表５】
【００６２】
エピクロルヒドリンで架橋されたシクロデキストリンに基づいた材料は良好な吸収値を示し、架橋された白色のＣＭＣ（Ｐ１４５８）によって示された吸収度の欠如を考察すると、架橋剤の架橋による寄与はないと考えても良いかもしれない。以下の吸収度スケールが観察された：ベータ＜ガンマ＜アルファ。ここで、材料中のＣＤ量は等しい。類似の結果がイオン力の存在下で観察された。
【００６３】
例４． 低圧カラムでの吸収
２００ｍｇの樹脂Ｐ１７９３が、終夜に亘って放置されて再水和され、次に、カラムにおいて、３００ｍｌのＨ2Ｏで洗浄された。２０ｍｌの１０μｇ／ｍｌ ＬＰＳ溶液が樹脂に通され、３ｍｌ（実験Ｉ）及び１ｍｌ（実験ＩＩ）部分が集められた。各々の部分が凍結乾燥され、例１において説明されたように、カルボシアニンの存在下の測定に供された。表４及び５に、各々の部分中のＬＰＳのμｇ／ｍｌでの濃度が、それぞれ、第１及び第２実験について報告されている。カラムの初期効果及び段階的飽和が記録されている。
【表６】
【表７】
【００６４】
例５．高圧での吸収
７９０ｍｇのＰ１７８０樹脂がＨＰＬＣカラムに詰められ、５時間に亘って、蒸留されたＨ2Ｏで洗浄され且つ水和された。５ｍｌの２０μｇ／ｍｌ ＬＰＳ溶液が、３０分間に亘る連続的な循環の中で樹脂に通され、次に、部分標本（５００μｇ／ｍｌ；溶液２）が、実験法１で説明されたフェノール／硫酸法を用いて、２倍量での測定に供された。比較のために、再循環前のＬＰＳ溶液（溶液１）の部分標本も測定に供された。表６に、測定されたＬＰＳ濃度が、μｇ／ｍｌで報告されている。ＬＰＳの６０％の吸収が見受けられた。
【表８】
【００６５】
同じ溶液が、ＬＡＬ試験法（CAMBREX）を用いて試験された。０．１２５ＥＵ／ｍｌと予想されるこの方法の感度閾値を利用するために、「最適な」希釈溶液が調製された。結果は表７に報告されている。
【表９】
【００６６】
所見：２つの調製間の比較は、２つの対応する希釈溶液に対する試験について異なる陽性結果を示しており、それゆえに、ガンマＣＤで処理された試料では、約６０％に等しいＬＰＳが除去されたという仮説が立てられるかもしれない。
【００６７】
利点
血液からのリポ多糖類の選択的除去のための血液濾過材を製造するための担持されたシクロデキストリンの使用は、敗血病に冒された人の健康に非常に有利に、１つの血液濾過材の費用を相当削減することを可能にする：シクロデキストリンは、容易に且つそれにより経済的に供給され得る化合物である。
【００６８】
更に、血液の解毒の効果は、他の現在入手可能な濾過材の効果よりも非常に高い。
【００６９】
担持されたシクロデキストリンの使用は、血漿のただ１回の濾過を行うことで内毒素の完全な除去を達成することを可能にし、これは、同じ結果に達するために繰り返しの適用を必要とする従来の解毒システムとは異なる。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】シクロデキストリンの切頭円錐構造を示す図。
【図２】β−シクロデキストリンの構造の１つの例を示す図。
【発明の開示】
【０００１】
本発明は、血液を解毒するための担持されたシクロデキストリンの使用に関する。
【０００２】
敗血症症候群は、グラム陰性菌による感染の重大な合併症である。
【０００３】
度々、この症候群は、全ての臓器及び器官に影響を与え、人工的補助器具（自動呼吸器、人工腎、心臓刺激装置）の適用を必要とする多臓器不全を引き起こす。敗血症の特に懸念され広く広まっている合併症の１つは、敗血症ショックであり、これは死をもたらし得る。
【０００４】
敗血症は、細菌のきょう膜（outer capsule）からの外毒素及び内毒素の遊離により引き起こされる。これらの物質はリポ多糖類であり、血液循環に入ると、それの体液成分及び細胞成分における免疫系に影響を与える一連の反応を引き起こす。この疾病に関して最も危険な状況としては、重い外傷、腸の穿孔、上腹部の外科手術、特には糖尿病患者又は免疫が低下した高齢の患者の手術が挙げられる。
【０００５】
内毒素に対する臓器の反応は、度々、臓器の微小循環に影響を与える一連の応答を引き起こす（敗血症カスケード）。
【０００６】
このような反応は、細菌侵入時の臓器の防衛と考えられるが、しばしば異常であり、応答の自己増幅プロセスの原因となる多くの炎症メディエータ（サイトカイン及び他のミクロプロテイン）の生成を誘発させ、臓器及び器官に対する重大な障害をもたらす。
【０００７】
抗生物質治療及び障害を受けた臓器の人工的補助器具による置換によって、常に敗血症カスケードを食い止められるというわけではない。
【０００８】
それゆえに、敗血症の最も効果的な治療は、菌体毒素の臓器への侵入を、これらが敗血症カスケードを誘発させる前に防止することである。
【０００９】
リポ多糖類（ＬＰＳ）は、グラム陰性菌の細胞膜の特徴的な成分であり、それらはグラム陽性菌には存在しない。
【００１０】
これらは、毒性の原因となる疎水性の脂質鎖と、中心にある親水性の多糖鎖と、各菌体株に特異的な親水性のＯ−多糖側鎖（O-polysaccharide side chain）とで構成さている。
【００１１】
リポ多糖類は、様々な寸法の凝集塊、特には約１，０００ＫＤａの重さのミセルを水性溶媒中に形成する傾向にある。その結果、これらは、膜の細孔を通り抜けないので、限外濾過によっては血液から分離可能ではない。
【００１２】
長年に亘って、多くの血液解毒技術が開発されてきたが、これらは、あまり有効ではなく、特には、用いられる材料のせいで非常に高額の費用を必要とするという欠点を有している。例えば、血液の解毒が可能な抗生物質を含んだ血液濾過材は、入手可能である。しかしながら、このような濾過材は、巨額の費用がかかる。
【００１３】
上述の問題は、添付の特許請求の範囲に要旨が記載された血液濾過材の使用により解決される。
【００１４】
本発明を、以下の図面を参照しながら、以下に詳細に説明する。
【００１５】
第１の側面では、本発明は、固体担体を具備した血液濾過材であって、この固体担体にシクロデキストリン又はシクロデキストリン誘導体が共有結合的に結合された血液濾過材の使用に関する。
【００１６】
本発明において用いられる固体担体は、シクロデキストリンと、適切な架橋剤、例えば、エピクロルヒドリン、イソシアネート、ポリアミン、アクリレート、カーボネートとの架橋反応によって得られるポリマー樹脂であり得るか、又は、シクロデキストリンが化学的又は物理的処理、例えば電子ビームによって結合された、例えばセルロースの繊維若しくは織物の担体、又は、例えばポリプロピレンの不織繊維であり得る。これらの中で、天然セルロース担体が好ましい。好ましく用いられる他の担体は、シクロデキストリンで誘導体化された（derivatised）ポリエチレンイミンにより被覆されたシリカである。
【００１７】
シクロデキストリン（ＣＤ）は、シクロアミロース、シクログルカン、シクロマルトサイドとも呼ばれ、環状のオリゴ糖であり、α（１，４）結合した６個乃至１２個のグルコース単位からなる結合により構成されている。用語ＣＤの前付されるギリシャ文字は、環の中に存在するグルコース単位の数を示している（αは６個の単位に対応し、βは7個の単位に対応する、など）。
【００１８】
シクロデキストリンは、様々な細菌（例えば、Bacillus Macerans、 Klebsiella Pneumonite、Bacillua Stearothermophilus、Bacillus Megateriumなど）によって生成される糖転移酵素（ＣＧＴａｓｅ）による、アミドの酵素分解の生成物である。
【００１９】
ＣＧｔａｓｅ酵素は、アミドの螺旋構造を破壊し、グルコース分子間にα（１，４）結合を同時形成させ、環状のオリゴ糖類の獲得をもたらす。
【００２０】
シクロデキストリンは、図１及び２に示すように、構造の外側に向いた水酸基、並びに、構造の内側に向いた炭素原子、水素原子及びヘテロ酸化物結合（hetero-oxide bond）を持つ切頭円錐構造を有している。更に、一級水酸基が切頭円錐のより小さな径の領域に位置しており、二級水酸基が切頭円錐のより大きな径の領域に位置している。
【００２１】
この構造は、特別な性質をＣＤに与える。グリコシド結合の酸素によってもたらされる高い電子密度は、疎水性分子の空洞を無極性にし、親水特性をその外側に与える。
【００２２】
それゆえ、本発明の基礎をなす原理は、水溶性のシクロデキストリンを固体担体に結合させることである。血液、特には血漿が前記担体上に通される。シクロデキストリンの疎水性の内部空洞は、菌体内毒素を捕捉して血液の解毒を可能にし、この血液は、その後、清浄に循環中へと再挿入される。
【００２３】
この解毒が可能なのは、内毒素又はリポ多糖類が疎水性分子であり、そのために、これらが、包接錯体と呼ばれる、シクロデキストリンの疎水性内部空洞を有する安定で可逆な錯体を形成するからである。
【００２４】
殆どの場合、ＣＤとホスト分子との比は１：１であり且つ共有結合が無い一方で、主に包接される分子とＣＤの水酸基との間のファンデルワールス相互作用及び水素結合のおかげで、会合−解離型の平衡が成り立っている。
【００２５】
本発明の目的のために、好ましく使用されるシクロデキストリンは、アルファ、ベータ、ガンマデキストリン、並びに、ヒドロキシプロピル、サルフェート及びエチルスルホナートなどのそれらの誘導体である。最も好ましいシクロデキストリンは、アルファシクロデキストリンである。
【００２６】
固体ポリマー担体の合成は、シクロデキストリンを適切な架橋剤と反応させることによって行われる。前記架橋剤は、有利には、シクロデキストリンの一級及び二級水酸基と反応可能な官能基を２つの端に有する二官能性分子である（例えば、エポキシド及びハライド）。
【００２７】
架橋剤の例は、エピクロルヒドリン、イソシアネート、ポリアミン、アクリレート及びカーボネートであり、好ましくはエピクロルヒドリンが使用される。合成法は、文献、例えば、以下の論文により知られている；E. Renard、G. Barnathan、A. Deratani及びB. Sebille、“Characterization and structure of cyclodextrin-epichlorohydrin polymers-effects of synthesis parameters" (1996)、Proceeding of the Eighth International Symposium on Cyclodextrins。
【００２８】
合成されたポリマーは、粒状であり、水及び殆どの有機溶媒（アルコール、クロロホルム、アセトン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ等）に不溶である。
【００２９】
本発明の目的のために好ましく使用されるポリマーは、エピクロロヒドリンを用いたシクロデキストリンの架橋によって得られるポリマーであり、２００−９００μｍｏｌ／ｇ、好ましくは６００−８００μｍｏｌ／ｇの範囲内にあるシクロデキストリン含量を有する。
【００３０】
シクロデキストリンの、例えばセルロースのヤーン若しくは織物上への、又は、例えばセルロースアセテート、ポリプロピレン、ポリエチレン、若しくはポリエステルなどのポリマー材料の不織布上へのグラフトは、リンカーモノマーを支持体とシクロデキストリンとの間に介在させることにより行われる。
【００３１】
様々なモノマー、例えば、グリシジルメタクリレート（ＧＭＡ）、アクリル酸、Ｎ−ビニルピロリドン、アクリルアミド及びビニルアセテートが、グラフト重合反応において用いられ得る。好ましくは、使用されるモノマーは、グリシジルメタクリレートである。
【００３２】
ＧＭＡモノマーは、エポキシドなどの極めて反応性の高い基が存在するおかげで、特に興味の対象となっている。
【００３３】
モノマーを支持体上へとグラフトするために用いられる方法は、文献、例えば、以下の論文により知られている；P. Le Thuaut、G. Crini、M. Morcellet、A. Naggi、U. Maschke、C. Vecchi、X. Coqueret、G. Torri及びB. Martel、J. Appl. Polym. Sci. (１９９７年)；P. Le Thuaut、Macromolecular and Organic Chemistry Doctoral thesis、University of Science and Technology of Lille、Macromolecular and Chemistry Laboratory、“Fonctionnalisation de supports textiles pour l’elaboration de filtres adsorbeurs de polluants organiques” (２０００年)。この合成は、典型的には、以下の工程を含む：
・化学的又は物理的処理による、例えば電子ビームなどを用いた固体支持体の活性化。好ましい技術は、電子ビームの照射である；
・支持体の誘導体化とモノマーの重合とを両方もたらし、様々な長さのスペーサを生成させるモノマーのラジカルグラフト反応。
【００３４】
スペーサが支持体上にグラフトされると、後者はシクロデキストリンで機能付与される。本発明において用いられる織物へのＣＤでの機能付与方法は、文献、例えば以下の論文において説明されている：K. Poulakis、H.J. Buschmann及びE. Schollmeyer、独国特許第４０ ３５３７８号（１９９２年）；H. Reuscher及びR. Hirsenkorn、欧州特許第６９７ ４１５号（１９９５年）；H. Reuscher及びR. Hirsenkorn、独国特許第１９ ５２０ ９６７号（１９９５）；P. Le Thuaut、G. Crini、M. Morcellet、A. Naggi、U. Maschke、C. Vecchi、X. Coqueret、G. Torri及びB. Martel、J. Appl. Polym. Sci. （１９９７年）。
【００３５】
第２の側面では、本発明は、血液の解毒方法であって、以下の工程：
ａ）血液を敗血病のおそれのある患者から取り出す工程と、
ｂ）体外循環の動脈系統上に、ポリスルフォン又はそれの誘導体、例えばポリエーテルスルフォンからなる血漿濾過材を挿入して、血漿を前記血液の残りの部分から分離する工程と、
ｃ）前記血漿を、本発明に従う血液濾過材上で濾過する工程と、
ｄ）濾過された前記血漿を、先に分離した血液の前記部分と再び合わせる工程と
を含んだ方法に関する。
【００３６】
工程ｄ）が終了したら、このようにして解毒された血液が、直ちに、患者に戻され得る。
【００３７】
第３の側面では、本発明は、数種類の薬剤、例えばバルビツール剤、又は他の毒性物質の不適切な摂取により引き起こされる血液中毒の場合における、上で説明した血液濾過材の使用及び血液の解毒方法に関する。これら物質は、リポ多糖類と同様に、担持されたシクロデキストリンと共に錯体を形成し、それにより血液から除去される。
【００３８】
実験データ
ポリマー担体材料の合成
シクロデキストリンは、水酸基の１つを２官能性分子であるエピクロルヒドリンと反応させることによって重合され得る。塩基性環境において、エピクロルヒドリンは、反応ダイアグラム１に示すように、ＣＤと（架橋反応）及び／又はそれ自身と（ホモ重合）反応し得、ダイアグラム２に示されたポリマーの合成をもたらす。
【化１】
【化２】
【００３９】
恒温リアクタ中で、機械攪拌子が、水溶液中で互いに異なる割合にあるシクロデキストリン（Wacker）とＮａＯＨ（Carlo Erba）とを混ぜ合わせる。１時間の攪拌後、所望量のエピクロルヒドリン（Fluka）がゆっくりと滴下されて、高粘度の白みがかったペーストの形成が即座に観察され、これが、表１に記載された様々な時間に亘り激しく攪拌される。次に、アセトン（Acros）が添加され、生成物がグーチ濾過材のために回収される。過剰の未反応エピクロルヒドリン及びシクロデキストリンは、ソックスレーにおけるポリマーの熱水及びエタノール（Girelli）での洗浄により取り除かれる。最後に、回収された生成物が凍結乾燥によって乾燥される。
【００４０】
合成生成物に存在するＣＤの測定のために、ポリマー全体の加水分解によって得られるグルコースが、比色測定（フェノールを用いる）により定量される。
【００４１】
この目的のために、２０ｍｇのポリマーが５ｍｌの１Ｍトリフルオロ酢酸（Fluka）中に懸濁されて、この懸濁液が、激しい攪拌下で、１２０℃で８時間に亘り加熱される。その後、トリフルオロ酢酸を取り除くために、溶液が蒸発される。生成物は、１０ｍｌの蒸留水中に回収される。グルコース含量は、フェノールと硫酸とを用いる比色測定により測定される。この方法は、検量線を必要とする；そのために、１重量％のグルコースの母液を用いて、表に示される様々なグルコース（Fluka）濃度の溶液が調製される。
【表１】
【００４２】
同じ手順が、加水分解されたポリマーの溶液について繰り返される。もっとはっきり言えば、様々な量が１０ｍｌの中性溶液から取り出され、表で報告されるように、様々な量の水で希釈される。
【表２】
【００４３】
試験管中に入れられたこれら溶液に、０．５ｍｌの５重量％フェノール水溶液（Carlo Erba）が添加される。１０分後、２．５ｍｌの９８％Ｈ2ＳＯ4（Carlo Erba）が添加され、激しく攪拌される。この添加の後の更に１０分後、４８０ｎｍの波長での吸光度が読み取られる。ランバート−ベールの法則を使用して、検量線をつくること及びそれにより加水分解されたポリマー中のグルコース含量を測定することができる。この方法によって、１ｇの材料当たりのμｍｏｌ又はμｇで表されたシクロデキストリン含量が得られる。
【００４４】
合成されたポリマー中のシクロデキストリン含量の計算は、材料を２つの群：低い（〜３００μｍｏｌ／ｇ）ＣＤ含量を有するものと高い（〜６００／８００μｍｏｌ／ｇ）ＣＤ含量を有するものとに分けることを可能にした。
【００４５】
様々な実験条件と得られたＣＤ値とが、表１に報告されている。
【表３】
【００４６】
この表でベータ−２０と示された材料は、文献（E. Renard、G. Barnathan、A. Deratani及びB. Sebille，“Characterization and structure of cyclodextrin-epichlorohydrin polymers-effects of synthesis parameters”、（１９９６年）、Proceeding of the Eighth International Symposium on Cyclodextrins）で知られた方法を用いて合成された。
【００４７】
錯体生成能の性質決定及び計算の検討の両方の間中、この材料が参照された。
【００４８】
合成のために用いられた実験条件の分析から、高シクロデキストリン含量の材料を得るための基本的なパラメータは反応混合物中に存在する溶媒の量であることが結論付けられた。
【００４９】
織物及び不織布の固体担体の合成
織物は、“Grafting of cyclodextrins onto polypropylene nonwoven fabrics for the manufacture of reactive filters. II Characterization”、B. Martel、P.Le Thuaut、G. Crini、M. Morcellet、A. Naggi、U. Maschke、S. Bertini、C. Vecchi、X. Coqueret及びG. Torri、J. Appl. Polym. Sci.、78: 2166-2173、（２０００年）に記載された方法に従い、図３に記載されたダイアグラムに従って準備される。
不織布は、５０ＫＧｙ（５Ｍｒａｄ）の電子線によって基本活性線量を提供する装置を用い、５〜３０Ｍｒａｄを使用して物理的に活性化され、より大きな線量を得るために、照射が繰り返される。グリシジルメタクリレートのグラフト反応は、活性化された織物を、モノマーを１−７０％の濃度で含んだ水溶液浴中に浸漬させ、不活性雰囲気において７０℃で２０−２００分の様々な時間に亘って加熱することによって行われる。結合されたＧＭＡの量は、長時間の洗浄及び乾燥後の織物の重量の増加から算出される。シクロデキストリンでの誘導体化は、機能付与された織物をシクロデキストリンのＤＭＦ／Ｈ2Ｏ溶液に浸漬させ、８０℃で８〜２４時間に亘って加熱することによって行われる。導入されたシクロデキストリンの量は、長時間の洗浄及び乾燥後の織物の重量の増加から算出される。
【化３】
【００５０】
本発明の担持されたシクロデキストリンの生物活性の例
例１．水溶液からのバッチ吸収
以下のタイプの材料が試験された：エピクロルヒドリンで架橋されたシクロデキストリン（Ｐ１７７６：ＧｅｌベータＣＤ；Ｐ１７８０：ＧｅｌガンマＣＤ；Ｐ１７９３：ＧｅｌアルファＣＤ）、ＣＤで誘導体化されたポリエチレンイミンで被覆されたシリカ（ＳｉＰＥＩＣＤ）、ベータシクロデキストリンで誘導体化されたポリプロピレン担体（Ｐ１７０８）。
【００５１】
再水和され洗浄されたＣＤを含んだ１００ｍｇの各々の材料が、５ｍｌの（１０ｍｇ／Ｌの）ＬＰＳの蒸留水溶液と共に２時間に亘って攪拌される。２２２ｍｇのＰ１７０８は、２時間に亘って、３ｍｌの溶液と共に攪拌される。
【００５２】
溶液は、５０００ｒｐｍでの５分間に亘る遠心分離によって回収される。上澄みから、１．６μｃのガラス繊維フィルタ上で濾過されて、別々の部分標本が取り出される。第１（０．５ｍｌ）はフェノール／硫酸法で分析され、第２（５ｍｌ）は、凍結乾燥され、１．６ｍｌ中に取り入れられた後に、カルボシアニン色素アッセイ法（Carbocyanine Dye Assay method）に従う測定に供される。
【００５３】
フェノール／硫酸法
サンプル部分標本（５００μｌ）に、５００μｌの５％フェノール水溶液が添加され、２ｍｌの濃硫酸が添加され、２０分放置後、ゆっくりと攪拌しながら、４８０ｎｍの波長での吸収が読み取られる。
【００５４】
カルボシアニン色素アッセイ法
試薬：
１）カルボシアニン色素
２）ｐＨ４の０．０３Ｍ Ｎａ−アセテート緩衝液
３）１，４−ジオキサン：ｐＨ４の０．０３Ｍ Ｎａ−アセテート緩衝液（１：１体積／体積）
４）０．０１Ｍアスコルビン酸。
【００５５】
色素溶液を調製するために、試薬１を試薬３に１：２の比（重量／体積）で添加され、完全に可溶化したとき、試薬２が１：４の比（体積／体積）で添加され、最後に、試薬４が１：０．０１（体積／体積）の比で添加される。
【００５６】
アッセイのために、凍結乾燥された部分標本が０．４ｍｌの試薬２中に取り入れられ、体積が１ｍｌになるまで水が添加される。
【００５７】
攪拌後、０．６ｍｌの色素溶液が添加され、それは室温で５分間に亘ってインキュベートされる。４６０ｎｍの波長での吸収の読み取りが行われる（BeMiller J.N. Whistler R.L. Shaw D.H.によって編集された“Methods in carbohydrate chemistry”の中の、Johnson K.G. “Isolation and purification of lipopolysaccharides”）。
【００５８】
比較として、シクロデキストリンでの誘導体化がない以外は、類似の条件で得られた材料のサンプルを同じ条件で試験する（Ｐ１４５８；ＳｉＰＥＩ；）。表２に、残留ＬＰＳデータが報告されている。
【表４】
【００５９】
例２． ０．１５Ｍ ＮａＣｌ溶液によるバッチ吸収
得られた結果に基づいて、樹脂Ｐ１７７６、Ｐ１７８０、Ｐ１７９３及びＰ１７０８が、ＬＰＳ水溶液中及び０．１５Ｍ ＮａＣｌ溶液中で再試験された。この場合、２００ｍｇのＰ１７９３が処理され、５ｍｌの（１０ｍｇ／Ｌの）ＬＰＳ蒸留水溶液と共に２時間に亘って攪拌された１００ｍｇのＰ１７７６及びＰ１７８０と比較された。
【００６０】
Ｐ１７０８に関しては、２２８ｍｇが秤量され、０．１５Ｍ ＮａＣｌ中で３ｍｌの５０μｇ／ｍｌ ＬＰＳと共に２時間に亘って攪拌された。
【００６１】
この場合においても、溶液は、５０００ｒｐｍでの５分間に亘る遠心分離によって回収された。２つの部分標本（５００μｍ）は、各々、例１において説明されたフェノール／硫酸法を用いた測定に供された。
【表５】
【００６２】
エピクロルヒドリンで架橋されたシクロデキストリンに基づいた材料は良好な吸収値を示し、架橋された白色のＣＭＣ（Ｐ１４５８）によって示された吸収度の欠如を考察すると、架橋剤の架橋による寄与はないと考えても良いかもしれない。以下の吸収度スケールが観察された：ベータ＜ガンマ＜アルファ。ここで、材料中のＣＤ量は等しい。類似の結果がイオン力の存在下で観察された。
【００６３】
例４． 低圧カラムでの吸収
２００ｍｇの樹脂Ｐ１７９３が、終夜に亘って放置されて再水和され、次に、カラムにおいて、３００ｍｌのＨ2Ｏで洗浄された。２０ｍｌの１０μｇ／ｍｌ ＬＰＳ溶液が樹脂に通され、３ｍｌ（実験Ｉ）及び１ｍｌ（実験ＩＩ）部分が集められた。各々の部分が凍結乾燥され、例１において説明されたように、カルボシアニンの存在下の測定に供された。表４及び５に、各々の部分中のＬＰＳのμｇ／ｍｌでの濃度が、それぞれ、第１及び第２実験について報告されている。カラムの初期効果及び段階的飽和が記録されている。
【表６】
【表７】
【００６４】
例５．高圧での吸収
７９０ｍｇのＰ１７８０樹脂がＨＰＬＣカラムに詰められ、５時間に亘って、蒸留されたＨ2Ｏで洗浄され且つ水和された。５ｍｌの２０μｇ／ｍｌ ＬＰＳ溶液が、３０分間に亘る連続的な循環の中で樹脂に通され、次に、部分標本（５００μｇ／ｍｌ；溶液２）が、実験法１で説明されたフェノール／硫酸法を用いて、２倍量での測定に供された。比較のために、再循環前のＬＰＳ溶液（溶液１）の部分標本も測定に供された。表６に、測定されたＬＰＳ濃度が、μｇ／ｍｌで報告されている。ＬＰＳの６０％の吸収が見受けられた。
【表８】
【００６５】
同じ溶液が、ＬＡＬ試験法（CAMBREX）を用いて試験された。０．１２５ＥＵ／ｍｌと予想されるこの方法の感度閾値を利用するために、「最適な」希釈溶液が調製された。結果は表７に報告されている。
【表９】
【００６６】
所見：２つの調製間の比較は、２つの対応する希釈溶液に対する試験について異なる陽性結果を示しており、それゆえに、ガンマＣＤで処理された試料では、約６０％に等しいＬＰＳが除去されたという仮説が立てられるかもしれない。
【００６７】
利点
血液からのリポ多糖類の選択的除去のための血液濾過材を製造するための担持されたシクロデキストリンの使用は、敗血病に冒された人の健康に非常に有利に、１つの血液濾過材の費用を相当削減することを可能にする：シクロデキストリンは、容易に且つそれにより経済的に供給され得る化合物である。
【００６８】
更に、血液の解毒の効果は、他の現在入手可能な濾過材の効果よりも非常に高い。
【００６９】
担持されたシクロデキストリンの使用は、血漿のただ１回の濾過を行うことで内毒素の完全な除去を達成することを可能にし、これは、同じ結果に達するために繰り返しの適用を必要とする従来の解毒システムとは異なる。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】シクロデキストリンの切頭円錐構造を示す図。
【図２】β−シクロデキストリンの構造の１つの例を示す図。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
固体担体に担持されたシクロデキストリンの使用であって、血液中のリポ多糖類の除去用の血液濾過材を調製するための使用。
【請求項２】
請求項１記載の使用であって、前記固体担体がポリマー樹脂である使用。
【請求項３】
請求項２記載の使用であって、前記ポリマー樹脂が、エピクロロヒドリン、イソシアネート、ポリアミン、アクリレート、カーボネートの中から選択される架橋剤で架橋されたシクロデキストリンである使用。
【請求項４】
請求項２又は３記載の使用であって、前記ポリマー樹脂が、エピクロロヒドリンで架橋されており且つ２００〜９００μｍｏｌ／ｇの範囲内にあるシクロデキストリン含量を有したシクロデキストリンである使用。
【請求項５】
請求項４記載の使用であって、前記シクロデキストリン含量が６００〜８００μｍｏｌ／ｇの範囲内にある使用。
【請求項６】
請求項１乃至５の何れか１項記載の使用であって、前記固体担体が、ポリエチレンイミンで被覆されたシリカである使用。
【請求項７】
請求項１記載の使用であって、前記固体担体が、ヤーン又は織物又は不織布である使用。
【請求項８】
請求項７記載の使用であって、前記織物がセルロースであり、前記不織布がポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエステル、セルロースアセテートである使用。
【請求項９】
請求項７又は８記載の使用であって、前記不織布がポリプロピレンである使用。
【請求項１０】
請求項１乃至９の何れか１項記載の使用であって、前記シクロデキストリンが、前記ヤーン又は織物又は不織布に、リンカーモノマーによって結合されている使用。
【請求項１１】
請求項１０記載の使用であって、前記リンカーモノマーが、グリシジルメタクリレート（ＧＭＡ）、アクリル酸、Ｎ−ビニルピロリドン、アクリルアミド及びビニルアセテートの中から選択される使用。
【請求項１２】
請求項１１記載の使用であって、前記リンカーモノマーが、グリシジルメタクリレート（ＧＭＡ）である使用。
【請求項１３】
請求項１乃至１２の何れか１項記載の使用であって、前記シクロデキストリンが、アルファシクロデキストリン、ベータシクロデキストリン及びガンマシクロデキストリンの中から選択され、好ましくはアルファシクロデキストリンである使用。
【請求項１４】
請求項１乃至１３の何れか１項記載の使用であって、毒性物質及び／又は薬剤の不適切な摂取によって引き起こされた中毒の場合における使用。
【請求項１５】
血液の解毒方法であって、
ａ．血液を敗血症のおそれのある患者から取り出す工程と、
ｂ．血漿を前記血液の残りの部分から分離する工程と、
ｃ．前記血漿を、請求項１乃至１４の何れか１項記載の担持されたシクロデキストリンを用いて濾過する工程と、
ｄ．濾過された前記血漿を、先に分離した血液の前記部分と再び合わせる工程と
を含んだ方法。
【請求項１６】
請求項１５記載の方法であって、工程ｄ）後に、前記精製された血液を前記患者に戻す工程を含んだ方法。
【請求項１７】
請求項１５又は１６記載の方法であって、菌体内毒素及び外毒素が前記血液から除去される方法。
【請求項１８】
請求項１７記載の方法であって、前記菌体内毒素及び外毒素が、グラム陰性菌のリポ多糖類である方法。
【請求項１９】
請求項１５乃至１８の何れか１項記載の方法であって、敗血症症候群の予防のための方法。
【請求項２０】
請求項１５乃至１９の何れか１項記載の方法であって、前記血液からの、バルビツールなどの毒性物質及び／又は薬剤の除去のための方法。
【請求項１】
固体担体に担持されたシクロデキストリンの使用であって、血液中のリポ多糖類の除去用の血液濾過材を調製するための使用。
【請求項２】
請求項１記載の使用であって、前記固体担体がポリマー樹脂である使用。
【請求項３】
請求項２記載の使用であって、前記ポリマー樹脂が、エピクロロヒドリン、イソシアネート、ポリアミン、アクリレート、カーボネートの中から選択される架橋剤で架橋されたシクロデキストリンである使用。
【請求項４】
請求項２又は３記載の使用であって、前記ポリマー樹脂が、エピクロロヒドリンで架橋されており且つ２００〜９００μｍｏｌ／ｇの範囲内にあるシクロデキストリン含量を有したシクロデキストリンである使用。
【請求項５】
請求項４記載の使用であって、前記シクロデキストリン含量が６００〜８００μｍｏｌ／ｇの範囲内にある使用。
【請求項６】
請求項１乃至５の何れか１項記載の使用であって、前記固体担体が、ポリエチレンイミンで被覆されたシリカである使用。
【請求項７】
請求項１記載の使用であって、前記固体担体が、ヤーン又は織物又は不織布である使用。
【請求項８】
請求項７記載の使用であって、前記織物がセルロースであり、前記不織布がポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエステル、セルロースアセテートである使用。
【請求項９】
請求項７又は８記載の使用であって、前記不織布がポリプロピレンである使用。
【請求項１０】
請求項１乃至９の何れか１項記載の使用であって、前記シクロデキストリンが、前記ヤーン又は織物又は不織布に、リンカーモノマーによって結合されている使用。
【請求項１１】
請求項１０記載の使用であって、前記リンカーモノマーが、グリシジルメタクリレート（ＧＭＡ）、アクリル酸、Ｎ−ビニルピロリドン、アクリルアミド及びビニルアセテートの中から選択される使用。
【請求項１２】
請求項１１記載の使用であって、前記リンカーモノマーが、グリシジルメタクリレート（ＧＭＡ）である使用。
【請求項１３】
請求項１乃至１２の何れか１項記載の使用であって、前記シクロデキストリンが、アルファシクロデキストリン、ベータシクロデキストリン及びガンマシクロデキストリンの中から選択され、好ましくはアルファシクロデキストリンである使用。
【請求項１４】
請求項１乃至１３の何れか１項記載の使用であって、毒性物質及び／又は薬剤の不適切な摂取によって引き起こされた中毒の場合における使用。
【請求項１５】
血液の解毒方法であって、
ａ．血液を敗血症のおそれのある患者から取り出す工程と、
ｂ．血漿を前記血液の残りの部分から分離する工程と、
ｃ．前記血漿を、請求項１乃至１４の何れか１項記載の担持されたシクロデキストリンを用いて濾過する工程と、
ｄ．濾過された前記血漿を、先に分離した血液の前記部分と再び合わせる工程と
を含んだ方法。
【請求項１６】
請求項１５記載の方法であって、工程ｄ）後に、前記精製された血液を前記患者に戻す工程を含んだ方法。
【請求項１７】
請求項１５又は１６記載の方法であって、菌体内毒素及び外毒素が前記血液から除去される方法。
【請求項１８】
請求項１７記載の方法であって、前記菌体内毒素及び外毒素が、グラム陰性菌のリポ多糖類である方法。
【請求項１９】
請求項１５乃至１８の何れか１項記載の方法であって、敗血症症候群の予防のための方法。
【請求項２０】
請求項１５乃至１９の何れか１項記載の方法であって、前記血液からの、バルビツールなどの毒性物質及び／又は薬剤の除去のための方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２００９−５０２９０５（Ｐ２００９−５０２９０５Ａ）
【公表日】平成２１年１月２９日（２００９．１．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５２３５４９（Ｐ２００８−５２３５４９）
【出願日】平成１８年７月２７日（２００６．７．２７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＴ２００６／０００５８３
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０１３１２２
【国際公開日】平成１９年２月１日（２００７．２．１）
【出願人】（５０４３１２７７１）ヒューマニタス・ミラソーレ・エス．ピー．エー． (8)
【出願人】（５０８０２８５３１）
【氏名又は名称原語表記】Ｉｓｔｉｔｕｔｏ ｄｉ Ｒｉｃｅｒｃｈｅ Ｃｈｉｍｉｃｈｅ ｅ Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃｈｅ Ｇｉｕｌｉａｎａ Ｒｏｎｚｏｎｉ
【住所又は居所原語表記】Ｖｉａ Ｇ． Ｃｏｌｏｍｂｏ，８１，Ｉ−２０１３３ ＭＩＬＡＮＯ， Ｉｔａｌｙ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年１月２９日（２００９．１．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年７月２７日（２００６．７．２７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＴ２００６／０００５８３
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０１３１２２
【国際公開日】平成１９年２月１日（２００７．２．１）
【出願人】（５０４３１２７７１）ヒューマニタス・ミラソーレ・エス．ピー．エー． (8)
【出願人】（５０８０２８５３１）
【氏名又は名称原語表記】Ｉｓｔｉｔｕｔｏ ｄｉ Ｒｉｃｅｒｃｈｅ Ｃｈｉｍｉｃｈｅ ｅ Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃｈｅ Ｇｉｕｌｉａｎａ Ｒｏｎｚｏｎｉ
【住所又は居所原語表記】Ｖｉａ Ｇ． Ｃｏｌｏｍｂｏ，８１，Ｉ−２０１３３ ＭＩＬＡＮＯ， Ｉｔａｌｙ
【Ｆターム（参考）】
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