血液型判定法のシステムおよび装置
粒子懸濁液の一定容量および凝集剤を含む溶液または懸濁液の一定容量を、個々の非凝集粒子がフィルターの表面に対して垂直方向に通過することを許容するように構築された、フィルターの表面上の実質的に同じ選択位置に置くことを含む、粒子懸濁液中の粒子凝集の検出および／または視覚化のための方法を提供する。場合により前記凝集剤と実質的に同じ位置に洗浄液が置かれ、および前記表面を粒子の存在に関して観察する。また、血液型分類、逆分類および交差適合試験において使用されるような、凝集反応の検出のための方法を提供する。検査室以外の環境で検査機器を必要とせずに血液型分類、逆分類および交差適合試験を容易にする、本発明に基づく装置およびキットも特許請求する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に受容体−リガンド相互作用の検出に関し、より特定すると、輸血医学において用いるような正および逆の血液型判定および適合試験のための血液型抗原およびこれらの抗体の検出に関する。
【背景技術】
【０００２】
粒子凝集反応は、この簡単さ、迅速性および相対的感受性の故に抗原−抗体相互作用の検出と視覚化のために広く採用されている免疫学的方法である（Ｒｉｏｃｈｅｔ １９９３）。一般に細胞は、および特に赤血球は、様々な凝集反応法に適した粒子である。このように、赤血球の凝集反応（血球凝集）は、輸血前検査手順の重要な構成要素として、血液型判定または適合試験においてこれらの表面上の抗原およびこのような抗原に対する抗体の検出のために用いられている（Ｒｏｕｇｅｒ １９９３；Ｂｒｅｃｈｅｒ ２００２）。輸血前検査の目的は、供血者の血球と受血者の血球の間の免疫学的不適合性による血球の凝集反応または溶血から生じる有害反応を防ぐことである。「血液型分類」または「血液型適合試験」は、供血者の赤血球の抗原構造を検出し、このような抗原に対する受血者の反応を予測するために用いられる一連の検査である。
【０００３】
最も臨床的に重要な抗原系はＡＢＯ赤血球抗原系であり、この抗原系は、ヒト個体の大部分がこれらに対して積極的に免疫されていないのにこれらの抗原に対する抗体を産生するという点で独特である。すなわち、個体の赤血球はＡ、ＢまたはＡとＢの両方の抗原を提示し得る。個体群の約４０％はこれらの抗原のいずれも担持せず、従って「Ｏ」またはゼロと判定または分類される。Ｏ型個体の血液中の血漿または血清は、Ａ型とＢ型の両方の抗原に対する抗体を有する。ＡＢ型個体の血液中の血漿または血清は、しかしながら、Ａ型またはＢ型のいずれの抗原に対する抗体も示さない。従って、Ａ型個体の血液中の血漿または血清は、Ｂ型抗原に対する抗体を有し、一方Ｂ型個体の血液中の血漿または血清は、Ａ型抗原に対する抗体を有する。
【０００４】
ＡＢＯ抗原系における不適合性は強い有害反応を生じさせるが、これは供血者を受血者に適合させることによって予防できる。理想的には、供血者と受血者は同じ血液型に属すべきである。しかし、同一供血者が存在しない場合は、受血者の血清または血漿が供血者の赤血球に対する天然抗体を担持しない限り、代替血液型も適し得る。従ってＯ型は、この赤血球が、他の全ての型の血液中に存在する抗Ａまたは抗Ｂ抗体のいずれとも反応しないので、万能供血者である。ＡＢ型の個体は、全ての血液型のいずれに対する抗体も持たないので、全ての血液型から血液を受容することができる。
【０００５】
Ｒｈまたは「Ｄ」抗原も、上記「血液型分類」の一部として合わせて試験される。個体の赤血球は、Ｒｈ抗原を担持するか（Ｒｈ＋または「Ｒｈ陽性」）または担持しない（Ｒｈ−または「Ｒｈ陰性」）。ＡＢＯ抗原系と異なり、抗Ｒｈ（抗Ｄ）抗体は、Ｒｈ陰性血液型個体においては通常は存在しない。このような抗体は、これにもかかわらず、Ｒｈ陽性血液の輸血からまたはＲｈ陽性胎児の妊娠から生じる免疫増強作用後にＲｈ陰性個体で発現する。近代的輸血医学は、Ｒｈ陰性個体におけるＲｈ抗体の生成を防ぐためおよび抗Ｒｈ抗体を担持する個体での有害反応を予防するために、ＡＢＯ適合試験に加えて、供血者と受血者の間でのＲｈ適合試験を命じている。
【０００６】
Ａ、ＢおよびＲｈ抗原に加えて、赤血球は、時として「亜型」と称される、多種多様な他の抗原（詳細な検討については、Ｂｒｅｃｈｅｒ、２００２参照）を担持し得る。Ｒｈ抗原（および事実上ほとんどの抗原）と同様に、これらの抗原に対する抗体は、通常はヒト血液中に存在しないが、過去の輸血または抗原担持胎児の妊娠によって生じることがある。このような抗体は、「予期せぬ」または「まれ（ｒａｒｅ）」と称される。このような抗原および抗体による有害反応はまれまたは軽微であるが、供血者の血液供給が十分であり適切であるときは、先進国では受血者における予期せぬ抗体についておよび供血者赤血球上の関連抗原についての試験が実施される。
【０００７】
従って、血液凝集反応手順が輸血医学において重要な役割を果たすことは上記から明らかであり、各々の献血単位および各々の献血の潜在的受容者は、以下の全部または一部を含み得る、様々なレベルの試験を受ける。
【０００８】
血液型判定：全ての献血単位および新たな入院患者および／または潜在的受血者の血液を、赤血球上のＡＢＯ／Ｒｈ抗原の存在に関して試験する。
【０００９】
直接または正（ｆｏｒｗａｒｄ）血液型分類／判定：血液検体を、特定抗原に対する血清でこの赤血球上のＡＢＯ／Ｒｈ抗原の存在に関して試験することによるＡＢＯ／Ｒｈ血液型の判定。
【００１０】
逆（ｒｅｖｅｒｓｅ）血液型分類／判定：血液検体の血清または血漿分画を、定義された血液型の赤血球を使用することによってＡおよびＢ抗原に対する抗体の存在に関して試験することによる血液型の判定。
【００１１】
交差適合試験：これは輸血前試験の最後の段階であり、受血者の血清／血漿を選択された供血者の血液単位の赤血球と反応させる。一部の国では、交差適合試験は実際に検査室で実施されるのではなく、コンピュータに保存された試験データを適合させることによって行われる。また別の国では、例えばフランスでは、交差適合試験は受血者のベッドサイドで看護士によって実施される。
【００１２】
上記試験は、様々な標準マニュアルおよび自動粒子凝集反応法によって実施することができる。全ての粒子凝集反応法は、血清／血漿または人工的に作製された抗体試薬であり得る、凝集剤と粒子を混合すること、混合物を様々な長さの時間インキュベートすること、および最後に、混合物を凝集粒子の存在に関して観察することを含む。全ての方法において、赤血球は、これらの血中濃度と比較して１：１０以上に希釈され、血漿または血清痕跡を除去するためにこの細胞の洗浄が強く勧められるまたは明らかに必要である。
【００１３】
凝集反応の検出は、好ましくは平らな表面に展着された、混合物の裸眼での観察によって実施することができる（Ｒｉｏｃｈｅｔ、１９９３）。もしくは、凝集粒子と非凝集粒子の間の視覚的差異を増強するために様々な手段や装置が使用可能である。
【００１４】
「スライド凝集反応」法は、全く装置を必要とせずに、ほとんどどのような場所でも実施できる。顕微鏡のスライドの表面または他の何らかの水不透過性表面で希釈赤血球１滴を血清／血漿／抗体１滴と混合する。２つの成分を数分間棒で混合するかまたはスライドを渦動させることによって混合し、凝集に関して注意深く観察する。このアプローチの欠点の一部は、（ａ）数分間混合する必要があること；（ｂ）結果の主観的な視覚判定；（ｃ）乾燥によって誘導される偽陽性反応；および（ｄ）スライドが保存できないことを含む。
【００１５】
「試験管凝集反応」法では、規定容量の希釈赤血球懸濁液を、丸底またはＶ字状の底の透明な試験管において規定容量の血清／血漿／抗体と混合する。陰性反応の場合は、赤血球は試験管の底部の中央へと緩やかに下降し、透明な赤い「ボタン（ｂｕｔｔｏｎ）」を形成する。陽性反応の場合は、凝集した赤血球は格子を形成し、透明なボタンを形成せずに試験管の底の表面全体に広がる。この代わりに、細胞の「菌叢（ｌａｗｎ）」がはっきりと見える。細胞の緩やかな沈降を待つ代わりに、現在の慣例では（Ｂｒｅｃｈｅｒ、２００２；Ｇａｍｍａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、２００１）、赤血球と抗体溶液の混合物を遠心分離し、この後再懸濁する。陽性凝集反応の場合は細胞の塊が明瞭に見える。試験管凝集反応はまた、マイクロプレートのウエルにおいても実施することができ、従って試薬と血液の容量が低減され、処理量が増加し得る。試験管凝集反応の欠点の一部は、（ａ）検査装置、人員および環境の必要性；（ｂ）結果の主観的な視覚判定；（ｃ）細胞凝集塊は免疫凝集物であると推測され得るので、不正確な遠心分離速度および時間が偽陽性または偽陰性結果を生じさせ得ること；（ｄ）結果の直接記録がないこと；（ｅ）かさばった試験管；および（ｆ）破損や流出の危険性を含む。
【００１６】
「ゲルろ過」法では、赤血球と血清／血漿／抗体の混合物をゲル分離媒質（微粒子であり得る）のカラムに適用する。混合物を遠心分離によってゲルに通す。凝集した赤血球はゲルを通過することができず、ゲルの上部にとどまる。非凝集細胞はゲルカラムを通過して、この底部に達する。小さな凝集物はゲルカラムに入り得るが、この底部には達しない。
【００１７】
米国特許第５，３３８，６８９号に述べられているこのような方法の１つはゲル粒子のカラムを用いるものであり、ＤｉａＭｅｄ ＡＧ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄより入手可能な、血液型分類のための成功を収めている市販の製品ラインへと展開された。この方法の利点は、（ａ）使用の相対的容易さ；（ｂ）結果の明瞭な解釈；（ｃ）ゲルへの侵入度に基づいて凝集レベルを等級付けられることである。欠点は、（ａ）検査装置、人員および環境の必要性；（ｂ）結果の直接記録がないこと；（ｃ）かさばった試験機器（製造者が製品を「カード」と称しているが、実際にはホルダー内の一連の試験管であり、いかなる意味でも「カード」のように平らではない。）；および（ｄ）高いコストを生じさせる複雑な製造法（ゲルを狭い試験管内に挿入すること）である。
【００１８】
ある場合には、赤血球抗原に対する抗体は、これらが直接赤血球を凝集することができず、凝集を促進するために抗グロブリンおよび／または抗補体抗体（時として「クーム（Ｃｏｏｍｓ’）ス試薬」と称される。）の添加を必要とすることから「不完全」とみなされる（Ｃｏｏｍｂｓら、１９４５；Ｂｒｅｃｈｅｒ、２００２）。この現象は、血液亜型および時として主要血液型のある種の変異体のような、比較的弱い抗原に対する抗体を検出しようとするときに最も一般的である。上記３つの方法は全て、抗体反応した赤血球をクームス試薬に供する追加工程に適合させ得る。しかし、この工程はかなりの量の手動操作を必要とする。第一に、非反応免疫グロブリンを反応混合物から除去するために赤血球と不完全な抗体の混合物を十分に洗浄しなければならない。この後、洗浄した抗体被覆赤血球をクームス試薬と混合し、上述した方法の１つを用いて凝集反応に関して試験する。
【００１９】
赤血球以外の粒子を含む免疫学的試験において、凝集粒子と非凝集粒子を容易に分離するために規定孔径を有するフィルターが使用されてきた（例えば米国特許第４，４５９，３６１号および同第４，８４７，１９９号）。現在まで、このアプローチは、このアプローチが使用可能であるという一部の非常に初期の所見にもかかわらず、特に血液型分類や血液型適合試験手順に例示されるような、赤血球を凝集粒子とする凝集反応法のためには使用されていない。
【００２０】
保存細菌細胞に関するＣａｓｔａｎｅｄａ（１９５０）の予備的所見に基づき、ＭａｌｏｎｅとＳｔａｐｌｅｔｏｎ（１９５１）は、ろ紙上の赤血球の側方運動が血液型抗血清の添加によって影響を受け、無関係な抗血清と混合した赤血球（例えば抗ＢとＡ型細胞）は食塩水の添加後側方に移動し得るが、関連抗血清と混合した赤血球（例えば抗Ａ血清とＡ型細胞）はこれらの位置に「固定」され、食塩水の添加後も移動しないことを示した。高力価の抗血液型血清１滴を１片のろ紙（もとの用語では「吸い取り紙（ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｐａｐｅｒ）上に置く血液型分類法が提案された。血清の展着後、試料血液１滴を同じ位置に置き、部分的に乾燥させる（「光沢がなくなったとき」）。最後に食塩水２滴を添加する。陽性反応は、陰性反応よりも小さな血液のスポットで示される。抗血液型抗血清の効力の測定のための逆の手順も提案されており、血清１滴を吸い取り紙の上に置き、次に洗浄した赤血球１滴を置いた。部分的乾燥後、血液の上に食塩水２滴を添加した。抗血清の効力は、血球の側方展開の程度と逆相関した。
【００２１】
この相対的単純さにもかかわらず、この方法は、著者（ＤｕｎｓｆｏｒｄとＢｏｗｌｅｙ １９５５、１９６７）の研究室およびもう１つの研究室（ＦａｒｒとＧｏｄｗｉｎ １９５５）での抗血液型試薬の質の評価を除き、血液貯蔵施設（ｂｌｏｏｄ ｂａｎｋｉｎｇ）では実施されなかった。試験の最終段階の前に試薬の乾燥を待つ必要があることおよび赤い円の大きさに基づく、陽性反応と陰性反応の不明確な区別が大きな欠点であり、この方法への関心がずっと低かったことの理由であると考えられる。
【００２２】
この手法の変法（Ａｎｄｅｒｓｏｎ １９７０）において、血液と抗血清を混合し、３０分間インキュベートした。ろ紙の細片を混合物に挿入し、細片への混合物のウィッキング（すなわち側方流動）を追跡することによって赤血球凝集反応を検出した。陽性反応では、血球は流れのもとの位置にとどまるが、無細胞血清は細片の先端方向へと進み、一方陰性反応では、血球は血清と共に細片に沿って移動する。反応に必要な時間の長さおよび２つの別々のハードウエア成分（混合皿と細片）の必要性が、手順を複雑にし、誤りを誘導し得る難点である。
【００２３】
Ａｋｅｒｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．（Ｔｈｏｒｏｆａｒｅ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ、ＵＳＡ）は、Ａｎｄｅｒｓｏｎ（１９７０）の着想を改善し、Ａｋｅｒｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈに譲渡された米国特許第５，２３１，０３５号および同第５，５６５，３６６号に述べられている、内蔵型装置へと進化させた。カセット様の装置は、装置の上部パネルにある２つの開口部の各々（１つはＡ型用で他方はＢ型判定用）に大きな液滴を入れ、２分間待って、この後食塩水１滴を添加することにより、患者の血液型を判定することができる。陰性反応の場合は、血液は側方に移動し、２番目の開口部（ウインドウ）に出現する。陽性反応の場合は、赤血球は移動せず、２番目の開口部は透明なままである（または食塩水洗浄液の色を示す）。Ａｋｅｒｓの装置は、血液取り扱いの専門家でない者が検査室の外で（例えばベッドサイドで）使用できる程度にまで血液型判定を簡単にしたが、いくつかの不都合も有している。（ａ）比較的大きな容量の血液を必要とする；（ｂ）工程の時間を計るオペレーターを必要とする；（ｃ）正血液型分類だけが可能であり、交差適合試験（供血者の赤血球に対する受血者の抗体の活性を視覚化する）用ではない；（ｄ）結果の様相が紛らわしいことがある。陽性結果は結果ウインドウにおける赤色の不在によって示され、一方陰性反応は赤色の出現で終わる；および（ｅ）結果が食塩水洗浄液の添加の正確に１分後に視覚化されねばならない。この必要条件は、反応装置を安定な記録として保存することを妨げる。
【００２４】
標準血液型分類および交差適合試験法は、大きな労力を要し、誤りを招きやすく、検査室環境でこれらを操作するための専門的な人員を必要とすることは明らかである。血液取り扱いの専門家ではない操作者（フランスでのベッドサイド交差適合試験における看護士のような）によって検査室の外で血液型分類手順を実施する必要があるので、手順を簡単にし、操作の誤りを排除することを目指す製品が開発された。これらの製品は実際上ある程度まで血液型試験手順を単純化するが、誤りを完全に排除するわけではなく、一部の人にとっては複雑であり得る（ＲａｃｈｅｌとＰｌａｐｐ、１９９０；Ｍｉｇｅｏｔら、２００２）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２５】
背景技術は、規定された孔径のフィルターを通過する垂直運動に基づく、容易に持ち運び可能な装置を含み、この使用はほとんどもしくは全く特殊な訓練を必要とせず、直接記録可能な結果を提供する、迅速、簡単で正確な血液型試験手順を教示または示唆していない。
【００２６】
本発明は、検査室以外の環境で専門家ではない人による使用に適する、簡単な方法で様々な血液型分類、逆分類および交差適合試験を実施するための方法および装置を提供することにより、先行技術の不備を克服する。加えて、この結果は、場合により直接保管し、後日の参照のために保存／ファイルすることができる。
【課題を解決するための手段】
【００２７】
本発明の１つの態様によれば、粒子懸濁液の一定容量および溶液または懸濁液（前記溶液または懸濁液は凝集剤を含む。）の一定容量を、フィルターの表面上の実質的に同じ選択位置に置くこと（前記フィルターは個々の非凝集粒子が前記フィルターの前記表面に対して垂直方向に通過することを許容するように構築されている。）、場合により洗浄液を前記凝集剤と実質的に同じ位置に置くこと、および、前記選択位置の前記表面を粒子の存在に関して観察することを含む、粒子懸濁液中の粒子凝集の検出および／または視覚化のための方法が提供される。
【００２８】
場合によりおよび好ましくは、粒子懸濁液の一定容量は、凝集剤を含むの溶液または懸濁液の一定容量が置かれる前に選択位置に置かれる。
【００２９】
場合によりおよび好ましくは、フィルターは多孔体の多孔表面を含み、この表面のこれら孔は、少なくとも個々の粒子の通過を許容する大きさである。
【００３０】
場合によりおよび好ましくは、この多孔表面は、本質的に吸収性でありまたは吸収性物質に付された多孔層を含む。
【００３１】
前記の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、前記多孔層と前記吸収性物質の間に水溶性フィルムが位置する。
【００３２】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、前記方法は、フィルターを乾燥することをさらに含む。
【００３３】
場合によりおよび好ましくは、粒子懸濁液の容量および凝集剤の溶液または懸濁液の容量は、各々送達可能な容量を含む。場合によりおよびより好ましくは、送達可能な容量は少なくともマイクロリットルを含む。
【００３４】
場合によりおよび好ましくは、粒子懸濁液の粒子は、結合対の成員（ＭＢＰ）で被覆されている。場合によりおよびより好ましくは、凝集剤はＭＢＰを含む。
【００３５】
前記の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、粒子は少なくとも１個の天然粒子または合成粒子を含む。
【００３６】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、粒子は検出可能な標識を含む。場合によりおよび好ましくは、この標識は、色素、放射性物質、磁性または常磁性物質、蛍光物質および発光物質を含む群から選択される。
【００３７】
場合によりおよび好ましくは、粒子懸濁液は第一血液産物を含む。
【００３８】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、第一血液産物は全血を含む。
【００３９】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、第一血液産物は血液成分を含む。
【００４０】
場合によりおよび好ましくは、血液成分は懸濁液中に存在する。
【００４１】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、第一血液産物は赤血球を含む。
【００４２】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、第一血液産物は、未洗浄赤血球、未希釈赤血球または未洗浄および未希釈赤血球を含む群から選択される少なくとも１つを含む。
【００４３】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、本発明の方法は、遠心分離なしでもしくは粒子懸濁液または凝集剤と第一血液産物の予備混合なしで操作される。
【００４４】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、凝集剤は第二血液産物を含む。
【００４５】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、凝集剤は、血液型群に対する抗体を含む。
【００４６】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、凝集剤は血清または血漿を含む。
【００４７】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、凝集剤を含む溶液または懸濁液の一定容量は、一定容量の粒子懸濁液が置かれる前に選択位置に置かれる。
【００４８】
正血液型判定のために、フィルターは、場合によりおよび好ましくは、凝集剤が含浸させる。さらに場合により、フィルターは、抗グロブリン試薬および抗補体試薬を含む群から選択される試薬が含浸させる。
【００４９】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、この試薬はクームス（Ｃｏｏｍｂｓ）試薬を含む。
【００５０】
前記の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、洗浄液は塩溶液である。場合によりおよび好ましくは、この塩溶液は等張である。場合によりおよびより好ましくは、この塩溶液は食塩水である。場合によりおよびより好ましくは、この食塩水は緩衝されている。場合によりおよびより好ましくは、緩衝食塩水はリン酸緩衝食塩水である。
【００５１】
本発明の実施形態におけるさらなる特徴によれば、洗浄液は、追加の洗浄成分をさらに含む。場合によりおよび好ましくは、この追加の成分はポリマーを含む。場合により及よりび好ましくは、ポリマーは、ポリエチレングリコールおよびデキストラン硫酸ナトリウム塩を含む群から選択される。場合によりおよびより好ましくは、ポリマーの濃度範囲は、浸透圧平衡の維持のために適切である。場合によりおよび最も好ましくは、濃度範囲は約０．０００１から約２０％ｗ／ｖである。
【００５２】
前記の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、洗浄液は、洗浄剤および界面活性剤の少なくとも１つをさらに含む。場合によりおよび好ましくは、この洗浄剤はポリオキシエチレン−１０−トリデシルエーテルを含む。場合によりおよびより好ましくは、この洗浄剤または界面活性剤は、０．０００１から０．１％ｗ／ｖの範囲内の濃度を有する。場合によりおよび最も好ましくは、濃度は０．００１から０．０１％ｗ／ｖの範囲内である。
【００５３】
本発明のもう１つの態様によれば、フィルターの表面に置かれた個々の非凝集粒子が、前記表面に対して垂直方向に通過することを許容するように構築されているフィルターを含む、試料中の粒子凝集の検出および／または視覚化のための装置が提供される。
【００５４】
場合によりおよび好ましくは、この装置は、フィルターの上面に位置するメッシュをさらに含む。
【００５５】
本発明の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、この装置は、凝集剤を受け取り、凝集剤から粒子を除去するための追加のフィルターをさらに含む。場合によりおよび好ましくは、この追加のフィルターは、粒子含有凝集剤の添加後および粒子含有試料を第一フィルターに添加する前に取り除かれる。
【００５６】
場合によりおよび好ましくは、凝集剤は、全血または血液成分中の抗体を含む。
【００５７】
本発明のさらにもう１つの態様によれば、試料を受け取るためのフィルター；同じくフィルター上に置くための凝集剤；および場合により凝集剤と試料の後にフィルター上に置くための洗浄液を含む、本発明の方法を実施するためのキットが提供される。
【００５８】
場合によりおよび好ましくは、このキットは、凝集反応を検出するおよび／または測定するための計測器をさらに含む。場合によりおよびより好ましくは、この計測器は、フィルターの多孔表面に光を透過させるための光源、および多孔表面によって反射または散乱された光を測定するように位置づけられた光センサーを含む光度計を含む。
【００５９】
場合によりおよび好ましくは、このキットは、測定光を視覚信号に変換するための変換器および信号を表示するためのディスプレイをさらに含む。
【００６０】
このキットは、場合により少なくとも１つの追加の光センサーおよび／または少なくとも１つの付加的な光源をさらに含み得る。
【００６１】
場合によりおよび好ましくは、本発明のキットは処理回路をさらに含む。
【００６２】
場合によりおよび好ましくは、本発明のキットは、フィルターのためのホルダーをさらに含む。
【００６３】
場合によりおよび好ましくは、光源は着色光を提供する。
【００６４】
本発明の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、このキットは、凝集剤を受け取り、凝集剤から粒子を除去するための追加のフィルターをさらに含む。場合によりおよび好ましくは、この追加のフィルターは取り外し可能である。
【００６５】
本発明のさらなる態様によれば、試料と凝集剤を受け取るための、場合により試薬が含浸されたフィルター、および、凝集溶液と試料の後にフィルター上に置くための、場合により洗浄液を含む、本発明の方法を実施するためのキットが提供される。
【００６６】
場合によりおよび好ましくは、試薬はクームス試薬を含む。
【００６７】
場合によりおよび好ましくは、フィルターに含浸されている試薬は凝集剤である。
【００６８】
本発明のさらなる態様によれば、複数の試験成分の間の凝集反応の存在または不在を検出するための装置が提供される。この装置はフィルターを含み、前記フィルターは、上面を有し、試験成分の流動の方向が前記上面に対して垂直であるように構築されており、前記試験成分は、前記上面に適用され、場合により洗浄工程に供される。凝集反応を受けた試験成分は前記上面において検出可能である。
【００６９】
場合によりおよび好ましくは、この試験成分は、全血または血液分画または血液成分の少なくとも１つを含む。
【００７０】
前記の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、この装置は、場合により１以上の層を含み得るフィルターを特徴とする。このフィルターの寸法（好ましくは厚さまたは面積の少なくとも１つを含む。）は、好ましくは試験成分の流れの方向が、これらの成分を適用する表面に対して垂直であることを許容するように設計される。これらの成分は、場合により血液または血液分画または成分であり得、また場合により、分離すべき複数の異なる成分の混合物でもあり得る。好ましくは、これら反応成分は、分離がこの反応の結果に応じて異なって起こるように、フィルターの表面への適用前または適用中に何らかの方法で反応させられる。例えば血液成分に関して、この反応は、血液（またはこの成分）が凝集した場合、試験成分がフィルターに入らない（または短距離だけ入る）ように、場合により凝集反応であり得る。
【００７１】
場合によりおよびより好ましくは、この反応の存在または不在は視覚的に判定され、最も好ましくはフィルターを裸眼で見ることによって判定される。場合により、計測器を使用し得る。もしくは、他の種類の標識またはレポーターが、例えば（場合によりおよび好ましくは）標識またはレポーターの存在を検出するための計測器と共に、使用し得る。様々な例示的標識およびレポーターを以下で詳細に説明するが、いかなる適切な標識またはレポーターも使用でき、当業者によって選択され得る。この計測器は、当業者によって設計されるように、場合により標識またはレポーターと共にまたはこれらなしで使用できることに留意すべきである。
【００７２】
前記の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、結果の判定は、場合によりおよび好ましくは主観的因子を含まないかまたはさもなければ、好ましくは試験者の側の主観をほとんど含まない。
【００７３】
さらなる特徴によれば、この装置は、場合により容易に持ち運びし得る。
【００７４】
さらなる特徴によれば、この装置は、場合により専門家でない操作者によって容易に使用され得る。
【００７５】
さらなる特徴によれば、前記方法は、場合によりおよび好ましくは反応成分の予備混合を必要としない。
【００７６】
さらなる特徴によれば、未洗浄の全血が、場合により好ましく使用され得る。
【００７７】
さらなる特徴によれば、小容量の試料血液が、場合によりおよび好ましくは必要とされる。
【００７８】
前記の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、前記方法は、場合によりおよび好ましくは遠心分離工程を含まない。
【００７９】
さらなる特徴によれば、反応停止の最もよい時期は場合により必要しない。
【００８０】
さらなる特徴によれば、結果の直接記録が場合により得られる。
【００８１】
本発明の１つの利点は、場合によりおよび好ましくは、血液型分類と交差適合試験の両方に適することである。
【００８２】
本発明の１つの特徴は、試験成分の流動の方向が、好ましくは多孔体の表面に対して垂直であることである。
【００８３】
本発明の１つの利点は、方法と装置の使用が簡単であることである。
【００８４】
本発明のさらなる利点は、偽陽性結果が回避されることである。
【００８５】
本発明のさらなる利点は、結果が迅速で正確に、好ましくは非常に低い誤差範囲で、得られることである。
【００８６】
本明細書では、説明のためにのみおよび限定を意図せずに、以下で数多くの用語を論じる。他に定義されない限り、本明細書で使用する全ての技術および学術用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
【００８７】
結合対（ＢＰ）：抗原−抗体、相補的核酸、レクチン−炭水化物対、酵素−基質等を含むがこれらに限定されない、受容体−リガンド対。
【００８８】
結合対の成員（ＭＢＰ）：結合対の成員、例えば抗体は、抗原−抗体結合対のＭＢＰである。
【００８９】
血液型判定：本明細書中の「血液型分類」参照。
【００９０】
凝集剤：粒子を互いに結合させるものを含むが、これに限定されない物質。
【００９１】
滴：場合によりおよび好ましくは、ピペット、針、ビンまたは他の何らかの容器、細い突出した開口部を有するチューブまたは容器を含むがこれらに限定されない、分注装置の口から単一塊として落下するのに十分な重さの容量の液体、または場合により固体物質であり、滴の容量は、場合によりおよび好ましくは、必ずではないが、約２０から約５０μＬの容量である。
【００９２】
多孔体：その中に孔を有する物質塊。多孔体の非限定的な例は、フィルター、ろ紙、吸い取り紙などを含むが、これらに限定されない。
【００９３】
フィルター：懸濁微粒子物の少なくとも一部から液体を分離するために液体または気体を通過させることができる、紙または砂、またはこのような分離のために液体または気体を通過させることができる他の何らかの吸収性材料を含むがこれらに限定されない、多孔性物質または塊を含むがこれらに限定されない装置；またはこのような多孔性物質を含む装置。
【００９４】
側方運動：場合によりおよび好ましくは、平らな吸収（すなわち多孔性またはさもなければ吸収性）体（膜、紙を含むがこれらに限定されない）を含むがこれらに限定されない、物体の表面上または内側での、および物体の表面に対して平行な、例えば液体および／または粒子の運動。
【００９５】
垂直運動：平らな吸収（すなわち多孔性またはさもなければ吸収性）体（膜または紙を含むがこれらに限定されない）を含むがこれらに限定されない、物体を通る、および物体の表面に対して垂直な、例えば液体および／またはこのような液体中に懸濁した粒子の運動。
【００９６】
フロースルー（Ｆｌｏｗ Ｔｈｒｏｕｇｈ）：上記「垂直運動」参照。
【００９７】
多孔表面：例えば気体または液体の通過を許容するが、この液体または気体中に懸濁したまたは溶解した粒子の少なくとも一部の通過を許容せず、前記粒子が孔径よりも大きいサイズを有するかまたは孔の表面に付着する、孔または間隙（ｉｎｔｅｒｓｔｉｃｅｓ）を有する表面。
【００９８】
血液型分類：血液検体を、その赤血球上のＡＢＯ／Ｒｈ抗原の存在に関して試験することを含むがこれに限定されない試験方法による、または血液検体の血清または血漿分画をＡおよびＢ型抗原に対する抗体の存在に関して試験することによる、ＡＢＯ／Ｒｈ血液型の判定。
【００９９】
血液型判定：「血液型分類」参照。
【０１００】
直接または正血液型分類／判定：血液検体を、特定抗原に対する血清でその赤血球上のＡＢＯ／Ｒｈ抗原の存在に関して試験することによるＡＢＯ／Ｒｈ血液型の判定。
【０１０１】
逆血液型分類／判定：定義された血液型の赤血球を使用することにより、血液検体の血清または血漿分画をＡおよびＢ型抗原に対する抗体の存在に関して試験することによる血液型の判定。
【０１０２】
交差適合試験：受血者の血清／血漿を供血者の血液またはこの赤血球と反応させる、輸血前検査の最後の段階。
【０１０３】
適合：上記「交差適合試験」参照。
【０１０４】
輸血前交差適合試験：上記「交差適合試験」参照。
【０１０５】
亜型：ＡＢＯ／Ｒｈ抗原系に属さず、ＡＢＯ／Ｒｈ抗原とは独立して遺伝的に受け継がれる赤血球上の抗原を含むが、これに限定されない。
【０１０６】
予期せぬ抗体：例えばヒト血液の血清／血漿中で認められる、非ＡＢＯ／Ｒｈ抗原に対する抗体。
【０１０７】
標識：トレーサー；例えば化学的、生物学的または物理的実体に添加または結合して、この検出または視覚化を容易にするための、比較的容易に検出可能な物質または成分。生物医学分野で用いられる標識の例は、色素、放射性同位体、磁性または常磁性物質、蛍光物質、発光物質、酵素、粒子を含むが、これらに限定されない。
【０１０８】
同様の位置：好ましくは、一定容量の溶液または懸濁液を先に置いた位置に実質的に近い位置を含むが、これらに限定されず、場合により隣接または近接位置も含み得る。
【０１０９】
本発明を、例示としてのみ、添付の図面を参照しながらここで説明する。
【０１１０】
詳細な説明
本発明は、複数の試験化合物の粒子凝集反応（凝集反応）の検出または視覚化のための、例えば抗原−抗体相互作用を検出するための、方法および装置を提供する。この装置は、好ましくは上面を有するフィルターを特徴とする。試験成分の流れの方向は、主として上面に対して垂直である。流れの垂直方向は、好ましくは検体および洗浄試薬の容量に比して表面積を制限することによって維持される。非限定的な例として、約０．２から約０．２５ｃｍ２の表面積が、場合によりおよび好ましくは、５０μＬ以下の検体のために使用し得る。試験成分は、この試験成分が凝集反応を受ける場合、レポーターとしての機能を果たす、試験の目に見えるおよび／またはさもなければ検出可能な成分（例えば本発明の好ましい実施形態によれば赤血球）が、選択的洗浄工程後に表面上で目に見えるおよび／またはさもなければ検出可能であるようにフィルターを垂直方向に評価可能に横切らないように、上面に適用される。
【０１１１】
前記方法は、場合によりおよび好ましくは、フィルターの表面に粒子の懸濁液１滴を置くこと、同じかまたは同様の位置に凝集剤を含む溶液または懸濁液１滴を置くこと、および場合により洗浄液を同じかまたは同様の位置に置くことを含む。このフィルターは、その孔が、フィルターの表面に対して垂直な単一血球の通過を許容するが、凝集反応後の塊状細胞の通過は許容しないように選択される。凝集した細胞は、従って、フィルターの表面にとどまり、反応部位の赤いスポットの存在によって検出可能である。凝集剤は、凝集剤が試験試料と反応できるように、好ましくは試験試料（１または複数の試験成分）と実質的に同じ選択位置に置かれることに留意すべきである。従って「実質的に同じ選択位置」という用語は、凝集剤が試験試料と反応することを可能にする位置を指す。
【０１１２】
あるいは、複数の垂直に積み重なったフィルターを、好ましくは少なくとも第一フィルターとその下の積層の少なくとも１つのフィルターの間の液体通過速度を制御するための水溶性フィルムと共に、場合により使用し得る。第一フィルターは、結合対の成員（ＭＢＰ）の両方を受け取る。ＭＢＰは、以下で詳細に述べるように、抗原−抗体、相補的核酸、レクチン−炭水化物対等のような受容体−リガンド対である。従って、凝集剤は、粒子凝集反応および装置が結合対の成員の検出／判定のために使用できるように、ＭＢＰの相補的成員であり得る。好ましくは、第一フィルターは両方の成員を連続的に受け取る。凝集反応が起こる場合、洗浄液による第一フィルターの洗浄は、第一フィルターを第二フィルターへと垂直に通過させるＭＢＰの洗浄を生じさせない。凝集反応は、場合により視覚的にまたは標識の検出に従って検出され得る。
【０１１３】
単一の十分に厚いフィルターも、場合によりフィルター内に含浸された水溶性フィルムと共に、場合により使用し得る。フィルターは、非凝集粒子の運動の少なくとも実質的な部分がフィルターの表面に対して垂直の方向で起こり、一方凝集粒子はフィルターの表面にとどまるように、フィルターに沿った側方運動を最小限に抑えるように選択される。
【０１１４】
本発明は、血液型分類および交差適合試験のために使用し得る。本発明は、反応成分の予備混合を必要とせず、未洗浄の全血を使用し、陽性反応場合は透明な色のシグナルを提供し、記録として保存することができる、専門家でない操作者によって検査室の外で使用することができる方法および装置を提供する。
【０１１５】
フィルター上の試験成分の側方流動に基づく、上記で論じた先行技術の方法と異なり、本発明者は、運動の方向がフィルターを通る（すなわち方向がフィルターの表面に対して垂直である）場合、フィルターは、既存の方法に比べていくつかの明らかの利点を有する、赤血球凝集反応法（血液型分類および適合試験を含む）のために好都合に使用できることを発見した：（ａ）凝集と非凝集反応の区別が明瞭である。陽性反応場合は赤色のスポットが現われ、陰性反応（または反応なし）の場合はスポットが出現しない；（ｂ）赤血球およびこれらの凝集剤を、フィルターに置く前に全く混合および／またはインキュベートする必要がない；（ｃ）結果の視覚化を容易にするために非凝集赤血球から凝集赤血球を分離するための遠心分離を必要としない；（ｄ）洗浄赤血球の希釈（１から約５％）懸濁液の代わりに全血が使用できる；および（ｅ）反応フィルターを乾燥し、反応およびこの結果の明確な記録として保存／ファイルすることができる。本発明のシステムにおいて使用するフィルターは、粒子運動の少なくとも重要な割合がフィルターの表面に対して垂直な方向で起こることを確実にするのに適した寸法および性質を有する。
【０１１６】
本発明の好ましい実施形態によれば、粒子の懸濁液１滴を多孔体の多孔表面に置くこと、但し、この表面の寸法および孔は個々の粒子の垂直な通過を許容するように選択される；凝集剤を含む溶液または懸濁液１滴を粒子懸濁液の滴と同じかまたは同様の位置に置くこと；場合により洗浄液を前記滴と同じかまたは同様の位置に置くこと；この位置の表面を粒子の存在に関して観察し、このような存在が、粒子の凝集反応が起こったことを指示することを含む、粒子凝集反応の検出／視覚化のための方法が提供される。場合により多孔性物質を乾燥することにより、このような乾燥物質を記録として保存することができる。
【０１１７】
本発明の所望による実施形態によれば、先の実施形態の最初の２工程の順序は、血液型分類のための方法は逆さにしてよく、好ましくは血液型抗原に対する抗体を含む溶液１滴を多孔表面上に置くこと（但し、この表面の孔および寸法は少なくとも個々の赤血球の垂直な通過を許容する大きさである。）；場合により抗体溶液の滴と同じかまたは同様の位置に、赤血球の懸濁液１滴を置くこと；前記滴と同じかまたは同様の位置に場合により洗浄液を表面に置くこと；この位置の表面を赤色の存在に関して観察することを含むような方法にしてもよい。
【０１１８】
洗浄液は、場合によりおよび好ましくは浸透圧溶液、より好ましくは等張溶液である。より好ましくは、洗浄液は食塩水であり、最も好ましくは緩衝食塩水である。本発明の好ましい実施形態によれば、この洗浄液はリン酸緩衝食塩水を含む。
【０１１９】
この洗浄液は、場合により追加の洗浄成分もしくはポリマー、洗浄剤または界面活性剤を含む、さらなる成分を含み得る。この追加の洗浄成分は、好ましくはフィルターへの非特異的結合の低減を助けることができる。所望によるポリマーは、好ましくはポリエチレングリコールおよびデキストラン硫酸ナトリウム塩を含む群から選択される。場合によりおよび好ましくは、この所望によるポリマーは、浸透圧平衡の維持のために適切な濃度範囲で添加される。より好ましくは、濃度は約０．０００１から約２０％ｗ／ｖの範囲内である。この洗浄液は、場合により洗浄剤および／または１以上の界面活性剤を、より好ましくは約０．０００１から０．１％ｗ／ｖの濃度範囲内で含み得る。最も好ましくは、この洗浄剤または界面活性剤の濃度は、約０．００１から約０．０１％ｗ／ｖの範囲内である。
【０１２０】
粒子は、場合により結合対（ＭＢＰ）により被覆されることが出来る。ＭＢＰは、抗原−抗体、相補的核酸、レクチン−炭水化物対等のような受容体−リガンド対である。従って、凝集剤は、粒子凝集反応および装置が結合対の成員（試験成分）の検出／判定のために使用できるように、ＭＢＰの相補的成員であり得る。
【０１２１】
この粒子は、場合により天然（例えば細胞または細胞内部分）または合成（ラテックス、金属、金属酸化物、炭素、色素）であり得る。この粒子は、好ましくは容易な検出または視覚化を促進するために、例えば色素、放射性物質、磁性または常磁性物質、蛍光物質および発光物質で標識されるべきである。
【０１２２】
本発明の好ましい実施形態では、この粒子は赤血球である。このような実施形態では、ＭＢＰ中の抗原は、場合により、赤血球の表面に位置するＡＢＯ／Ｒｈ抗原系のような血液型抗原であり、抗体は、場合によりおよび好ましくは、血液の液体分画中に存在する、対応する抗血液型抗体である。
【０１２３】
本発明のもう１つの実施形態において、凝集性粒子として働く赤血球の懸濁液は、場合によりおよび好ましくは、全血を含む。全血を用いることは、血液型分類が、赤血球の懸濁液１滴を多孔表面上に置くこと（但し、この表面の孔および寸法は、少なくとも表面の平面に対して垂直な個々の赤血球の通過を許容するように選択される。）；場合により赤血球懸濁液の滴と同じかまたは同様の位置に、血液型抗原に対する抗体を含む溶液１滴を置くこと；前記滴と同じかまたは同様の位置に、場合により洗浄液を表面に置くこと；この位置の表面を赤色の存在に関して観察することによって実施されることを可能にし、このような色は、赤血球が抗体と反応したこと、およびこれらの赤血球が、抗体が対象とする抗原を担持すること、および／または赤血球が抗体に対応する血液型であることを示す。
【０１２４】
以下「赤色」は、赤い色調を有するまたは赤みを帯びた、または赤色と同様に見える、および／または赤血球の存在および／または血液が有し得る何らかの色に加えて、赤色を与える他の何らかの血液成分の存在を指示する色を含むが、これらに限定されない。
【０１２５】
多孔体の多孔表面は、場合により本質的に吸収性であるかもしくは吸収性物質に結合した多孔層である。多孔層および結合吸収性物質は、場合により平らなカードの形状を取り得る。多孔層は、多孔膜（例えばセルロース、酢酸または硝酸セルロース、Ｎｕｃｅｌｅｏｐｏｒｅ（登録商標）、繊維（例えばＳｅｆａｒ、Ｒｕｓｃｈｌｉｋｏｎ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄによって供給されるような）、メッシュ、吸収性材料（例えばＷｈａｔｍａｎ、Ｍａｉｄｓｔｏｎｅ、ＵＫから入手し得る、紙など）、深層ろ過媒質（例えばＡｈｌｓｔｒｏｍ、ＰＡ、ＵＳＡから入手し得る、ガラス繊維紙など）から作製することができる。ガラス繊維紙が好ましく、Ａｈｌｓｔｒｏｍ、Ｍｏｕｎｔ Ｈｏｌｌｅｙ Ｓｐｒｉｎｇｓ、ＰＡ、ＵＳＡによって供給されるような、結合剤で補強された紙が特に好ましい。
【０１２６】
この実施形態の変法においては、多孔性材料は抗体により含浸され、乾燥され、すぐに使用できる装置が、場合により新鮮抗体試薬を必要とせずに、血液検体の分類のために直ちに使用できるように、血液型分類試験が実施されるまでの期間保存されることができる。抗体による多孔性材料の含浸は、受動的、すなわち単に抗体溶液を多孔性材料に添加し、周囲温度または高温で、および大気圧下でまたは真空中で、乾燥させることによってであり得る。もしくはこの含浸は、場合により、グルタルアルデヒドを介した様々な物質への結合、臭化シアン、塩化シアヌルまたは過ヨウ素酸塩を介した多糖ベースの物質への結合、シランを介したガラスへの結合のような、当分野で周知の様々な方法による多孔性材料のマトリックスへの抗体の能動的化学結合を含み得る。加えて、抗体は、場合により最初に粒子（例えばラテックス）に結合させることができ、このような抗体被覆粒子を、次に、多孔性材料に包埋する。これらおよびさらなる方法は、ＤｅｎｔとＡｓｌａｍ、１９９８、Ｄｅａｎら、１９８５等によって詳述されている。
【０１２７】
本発明は、赤血球の懸濁液１滴を血液型に対する抗体をあらかじめ含浸させた多孔表面上に置くこと；洗浄液を前記滴の位置に置くこと；この位置の表面を赤色の存在に関して観察することを含む、血液型分類のための方法を提供する。
【０１２８】
上記血液型分類実施形態はまた、赤血球の血液型抗原の判定（正血液型分類）または定義された血液型の赤血球を用いるときは特異的抗血液型抗体の存在の判定（逆血液型分類）のいずれかのための方法を提供する。いずれの組合せにおいても、本発明の実施形態は、試験検体として分離されていない全血の使用を可能にする。全血検体の逆判定／分類のためにこの実施形態を用いるためには、試験において使用する前に赤血球を洗浄すべきである。
【０１２９】
従って、本発明の好ましい実施形態において、洗浄され、定義された赤血球の懸濁液を選択位置で多孔表面に置くこと；逆分類を判定すべき全血の検体を規定赤血球の位置に置くこと；さらに洗浄液を、全血の検体および規定赤血球の位置に置くこと；および選択位置の表面を赤色の存在に関して観察することを含む、全血検体の逆判定／分類のための方法が提供される。
【０１３０】
本発明の逆判定適用のさらなる実施形態において、前記手順への以下の変更を別々にまたは組み合わせて使用することができる。
【０１３１】
（ａ）洗浄液の配置を０．５から２０分間、好ましくは約１から約１０分間遅らせること；
（ｂ）多孔表面に、塩、糖、ポリマーおよびバイオポリマーを含むがこれらに限定されない、様々な物質を含浸させること、但し、前記ポリマーは、約０．１から約１０％ｗ／ｖ、好ましくは約０．５から約２％ｗ／ｖの濃度のＰＶＡ（ポリビニルアルコール）、ＰＶＰ（ポリビニルポリピロリドン）、ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）を含む。
【０１３２】
本発明の血液型判定適用の別の好ましい実施形態において、本発明を輸血前の交差適合試験のために使用することができる。この交差適合試験は、実際の輸血の前の最終試験工程である。この試験において医療スタッフは、受血者の血液中に供血者の血液に対する抗体が存在するかどうかを調べる。
【０１３３】
本発明の方法は、供血者の血液からの洗浄および／または希釈赤血球と受血者の血漿または血清の適合性を調べるために使用できる。しかし、交差適合試験法が、場合によりおよび好ましくは、受血者の血清または血漿１滴を多孔表面上に置くこと（但し、この表面の孔は個々の赤血球の垂直に通過することを許容する大きさである。）；場合により受血者の血液の滴と同じかまたは同様の位置に供血者の血液１滴を表面に置くこと；血液の滴の位置に洗浄液を置くこと；この位置の表面を赤色の存在に関して観察すること（このような色は、赤血球の凝集反応が起こったことおよび供血者の血液が受血者の血液と不適合であることを示す。）を含むように、受血者の血漿または血清との交差適合試験のための赤血球のソースとして供血者からの未処理全血を用いることにより、試験手順を著しく簡略化することができる。
【０１３４】
交差適合試験法はまた、場合により上記の最初の２工程の順序を逆にして実施することもできる。従って、本発明のさらなる実施形態は、好ましくは供血者の赤血球の懸濁液１滴を多孔表面上に置くこと（但し、この表面の孔は個々の赤血球の垂直に通過することを許容する大きさである。）；場合により赤血球懸濁液の滴と同じかまたは同様の位置で、受血者の血清または血漿１滴を表面に置くこと；場合により赤血球懸濁液の滴と同じかまたは同様の位置に、抗グロブリンまたは抗補体試薬を含む溶液１滴を表面に置くこと；前記滴の位置に洗浄液を置くこと；この位置の表面を赤色の存在に関して観察することを含む、予期せぬ血液型に関する輸血前交差適合試験を提供する。
【０１３５】
受血者の血液から血清または血漿を分離するために遠心分離のような検査装置が使用できない、ベッドサイドでの使用により一層適するように手順をさらに簡略化するために、以下の方法は、供血者と受血者からの全血検体を使用し、全血からの血球の通過を防ぐ第一フィルターを第二フィルターの多孔表面に置くこと（但し、第二フィルターの孔は個々の赤血球の通過を許容する大きさである。）；受血者の全血１滴を第一フィルター上に置き、全血のろ液が第二フィルターの表面をぬらすように、検体の少なくとも一部が第一フィルターに入るおよび／または第一フィルターによって吸収されるのを待つこと；第一フィルターを除去すること；場合により除去前の第一フィルターと同じかまたは同様の位置に、供血者の血液１滴を表面に置くこと；血液の滴の位置に洗浄液を置くこと；この位置の表面を赤色の存在に関して観察すること（このような色は、赤血球の凝集反応が起こったことおよび供血者の血液が受血者の血液と不適合であることを示す。）を含む。
【０１３６】
予期せぬまたは弱い血液型抗原および抗体を検出するために、血液型判定および交差適合試験手順は、このような抗原および抗体から可視凝集反応を得るために抗グロブリン試薬（クームス試薬とも呼ばれる。）または抗補体試薬の添加を必要とする。本発明のさらなる実施形態は、血液型分類および交差適合試験法へのこのような試薬の簡単な組込みを可能する。従って、本発明に従った血液型判定法は、場合により赤血球の懸濁液１滴を多孔表面上に置くこと（但し、この表面の孔は個々の赤血球の垂直通過を許容する大きさである。）；場合により赤血球懸濁液の滴と同じかまたは同様の位置に、血液型抗原に対する抗体を含む溶液１滴を表面に置くこと；場合により赤血球懸濁液の滴と同じかまたは同様の位置に、抗グロブリンまたは抗補体試薬を含む溶液１滴を表面に置くこと；場合により前記滴と同じかまたは同様の位置に、洗浄液を表面に置くこと；この位置の表面を赤色の存在に関して観察すること（このような色は、赤血球の凝集反応が起こったことおよび赤血球が、抗体が対象とする抗原を担持することを示す。）を含む。
【０１３７】
クームス試薬を含む前記方法において、本発明の性能を損なうことなく最初の３工程の順序を変更することができる。本発明のもう１つの実施形態において、クームス試薬をあらかじめフィルターに含浸させ、乾燥して、即時使用装置が、新鮮抗体試薬を必要とせずに血液検体の分類のために直ちに使用できるように、血液型分類または交差適合試験が実施されるまでの期間保存することができる。この実施形態によれば、クームス試薬を用いる血液型分類または適合試験のための方法は、好ましくは、受血者の血清または血漿１滴を、あらかじめクームス試薬を含浸させた多孔表面上に置くこと（但し、この表面の孔は個々の赤血球の垂直通過を許容する大きさである。）；場合により受血者の血清または血漿の滴と同じかまたは同様の位置に、供血者の赤血球の懸濁液１滴を多孔表面に置くこと；場合により前記滴と同じかまたは同様の位置に、洗浄液を表面に置くこと；この位置の表面を赤色の存在に関して観察することを含む。またこの実施形態は、場合により、最初の工程で受血者の全血を使用できるように除去可能な血球フィルターを装着することもできる。
【０１３８】
本発明の方法の説明の上記全ての場合に、（血液または血清／血漿または抗体試薬の）「滴」は、以下の１以上のような装置で送達される、より定義された容量の液体で置換され得る。ピペット、マイクロピペット、キャピラリー、点滴注入器、滴瓶、注射器、ループ、開放ループおよび／または液体の取り扱いのための他の何らかの機構、容器または装置。これらの装置は、試験を実施するために必要である、液体の全容量の送達を容易にするために多孔表面に接触していてもよい。
【０１３９】
図２を参照して、装置１００およびキットも本発明の教示に従って構築し得る。この装置は、上部のフィルター１０４（多孔層）、所望による吸着層１０６、所望によるカバー１０８、フィルター層（１０４）の上の所望によるメッシュ層１０９（フィルター内への試験成分の迅速な浸透およびこれらの試験成分の混合を促進する。）、および（試験検体を置き、試験を実施する位置を規定する穴１１２を有する）所望による表カバー１１０から形成されるカード１０２の構造をとることができる。表カバーの穴１１２は、規定容量の洗浄液（示していない。）による反応物の洗浄を容易にするために、壁に取り囲まれ得、これによって規定容量を有するウエルを創造し得る。加えて、フィルターを通る液体の流れの速度を低減し、これによって弱い抗原および／または低レベルの抗体に対する本発明の感受性を高めるために、場合により水溶性フィルムをフィルターと吸収層の間に配置してもよい（示していない。）。
【０１４０】
この装置の好ましい実施形態において、このカードは試験を実施するための多数の位置を有する。この位置は、場合により、形状の印刷、切り出し形状を有する接着フィルムのような様々な方法によって印付けすることができる。このカード全体を、場合によりケース１１４に納めることができる。装置１００は、反応区域を有するフィルターを取り出し、乾燥して、結果の記録としてファイル／保存することができるように、使用後の解体を許容するように構築し得る。このカードは、場合により、受血者および供血者の特定、日付、装置の特定その他のような様々な項目の情報を書き込むための領域を有し得る。１以上のカード、および必要な試薬、洗浄液、対照液および器具の全部または一部を含むキットは、本発明のもう１つの実施形態である。
【０１４１】
本発明の好ましい実施形態において、抗血液型抗体および／または抗グロブリンおよび抗補体試薬の全部または一部を、湿潤または好ましくは乾燥形態で、多孔表面に含浸させることができる。従って、誤りを予防し、手動操作の数を低減しながら、単一または多数の抗血液型および／または抗グロブリンおよび／または抗補体試薬を血液型の鑑別同定を促進するために使用可能にし得る。このような装置は、場合により陽性および陰性対照試験領域を含み得る。陰性対照領域は、場合により非免疫血清（例えば全く輸血を受けたことがないＡＢ／Ｒｈ陽性男性からの血清など）をこの位置でフィルターに含浸させることによって実現し得る。陽性対照領域は、場合により抗赤血球抗血清または抗体（例えば抗グリコホリン抗体など）をこの位置でフィルターに含浸させることによって実現し得る。
【０１４２】
本発明のさらにもう１つの実施形態において、多数の試験領域（単一検体の血液型分類用など）を有する装置が提供される。この装置は、試験検体および場合により洗浄液が一工程で試験領域全体に拡散するのを促進するように構築し得る。このような実施形態は、（ａ）試験領域全部を、好ましくは親水性の、１枚のメッシュで覆うこと；（ｂ）試験領域全体の上に非吸収性カバーを置くことによって試験領域の上にキャピラリー空隙を創造することのような、様々な設計要素によって実現できる。
【０１４３】
この装置はさらに、人間の視覚的評価を必要とせずに試験の結果を解釈することができる所望による計測器１１６を含み得る。計測器１１６は、好ましくは、計測器１１６が凝集反応を検出するために使用される標識またはレポーターを測定することができるようにカード１０２を受け入れている。場合により、計測器１１６は光度計であり、検体の置かれた位置から反射または散乱されるまたはこの位置を透過する光の量を測定し、これに応じて結果を判定する。この最も基本的な形態において、この計測器は、（ａ）検体の置かれた位置に入射光１１９の光線束を向ける光源１１８、（ｂ）多孔表面から反射または散乱されたまたは多孔表面を透過する光１２１を測定／検出するように位置づけられた光センサー１２０を含む。
【０１４４】
本発明のさらなる実施形態において、抗原は、場合により赤血球の検出を改善するために着色される。多孔反応表面が白色である場合、光は、場合によりおよび好ましくは、赤血球が白色表面から反射／散乱される光の量を低減するように、赤色以外、より好ましくは青色であるべきである。逆に、表面が赤色以外であるか、または場合によりおよび好ましくは黒色または青色であり、光が赤色である場合、赤血球は反射／散乱される光の量を増加させる。
【０１４５】
この計測器は、場合により以下の特徴の１以上をさらに有し得る。結果を提示するためのディスプレイおよび／またはプリンター；多数の反応領域を測定するための多数の光センサーおよび場合により多数の光源；センサーによって生成された信号を分析するための処理回路（場合によりプロセッサーおよび付属電子装置を含み得る）、フィルターまたは試験カードのためのホルダー、バッテリー、再交換可能なバッテリー、記憶装置、時間および日付機能、バーコード読取り器またはこのためのインターフェース、光学式文字認識、通信機能および医療診断装置の設計者および製造者に周知の他の特徴。この計測器は、好ましくは表示された結果を見るための透明または半透明のウインドウをさらに含む。
【０１４６】
（実施例）
以下の実施例は、本発明に従った方法およびシステムの例示的実施である。これらの実施例はいかなる意味においても限定を意図しない。
【実施例１】
【０１４７】
洗浄液
実施例を作製するときに使用した洗浄液は以下の通りであった。
Ａ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｂｅｉｔ Ｈａ’ｅｍｅｋ、Ｉｓｒａｅｌより入手したダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）。
Ｂ．４％ｗ／ｖポリエチレングリコール（ＰＥＧ）１５０００から２００００分子量（Ｆｌｕｋａ）および０．３％ｗ／ｖデキストラン硫酸ナトリウム塩（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を含む、水に１：１希釈したＰＢＳから作製した溶液。
Ｃ．０．００１から０．０１％ｗ／ｖポリオキシエチレン−１０−トリデシルエーテル（Ｓｉｇｍａ）を含むダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）。
【実施例２】
【０１４８】
血液型分類
Ａｈｌｓｔｒｏｍ Ｎｏ．１４２ろ紙の０．５×０．５ｃｍの１片を吸収性パッド上に置いた。全血２μＬをフィルターの中央にピペットで分注し、次いで抗血液型試薬（Ｇａｍｍａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．、Ｈｏｓｕｔｏｎ、ＴＸ、ＵＳＡ）２μＬを分注した。次にフィルターを洗浄液数滴（滴瓶から）で洗浄し、乾燥した。あるいは、直径４ｍｍの円のＡｈｌｓｔｒｏｍ Ｎｏ．１４２ろ紙、血液１０μＬおよび抗血液型試薬１０μＬ使用し、この後実施例１からの洗浄液Ｃ数滴を使用した。
【０１４９】
この試験を、様々な血液型の多数の血液検体（ｔｈｅ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｉｓｒａｅｌ Ｒｅｄ Ｍａｇｅｎ Ｄａｖｉｄ、Ｔｅｌ Ｈａｓｈｏｍｅｒ、Ｉｓｒａｅｌによって予備試験され、ここから受領した。）に関して反復し、これらの各々を抗Ａ、抗Ｂ、抗ＡＢおよび抗Ｄ（＝Ｒｈ）血液型試薬で検査した。Ａ−血液は、抗Ａおよび抗ＡＢ試薬でのみ赤色スポットを生じた。Ｂ−血液は、抗Ｂおよび抗ＡＢ試薬でスポットを生成した。ＡＢ−血液は、抗Ａ、抗Ｂおよび抗ＡＢ試薬と反応した。Ｏ−血液はいずれの試薬とも反応せず、Ｏ＋血液は抗Ｄ試薬とだけ反応した。
【実施例３】
【０１５０】
乾燥試薬による血液型分類
Ａｈｌｓｔｒｏｍ Ｎｏ．１４２ろ紙の０．５×０．５ｃｍ片を非吸収性表面（空の使い捨てペトリ皿の底部）に置いた。抗血液型試薬（Ｇａｍｍａ ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓＩｎｃ．、Ｈｏｓｕｔｏｎ、ＴＸ、ＵＳＡ）の５０μＬアリコートを各々のろ紙片にピペットで分注した。抗血液型試薬を含むろ紙片の入ったペトリ皿を３７℃で一晩インキュベートした。ろ紙片をこの時点で乾燥した。
【０１５１】
乾燥した抗体含浸ろ紙片が全血検体の血液型を正しく特定する能力を調べるため、これらを吸収性パッド上に置き、試験血液の１μＬアリコートを一連のろ紙パッドの各々のほぼ中央に置いた。一連のろ紙パッドは、各々抗Ａ、抗Ｂまたは抗Ｄ（＝Ｒｈ）試薬のいずれか１つを含浸させたパッドを含んだ。
【０１５２】
洗浄液ＡまたはＢの５から１０滴を置いてろ紙パッドから過剰の血液を洗浄した。次に記録保存のためにろ紙片を空気乾燥した。結果を図１に示す。Ａ−血液が、抗Ａ試薬を含浸させたろ紙片でのみスポットを生成したことは明らかである。Ｂ−血液は抗Ｂ含浸ろ紙片でスポットを生成した。ＡＢ−血液は、抗Ａおよび抗Ｂろ紙片の両方と反応した。Ｏ−血液は、ろ紙片のいずれとも反応せず、２つのＯ＋血液検体は、抗Ｄ試薬を含浸させたろ紙片とのみ反応した。
【０１５３】
手順への以下の変更は改善された信号を生じさせると思われ、場合によりおよび好ましくは本発明に含まれる。
１．フィルターとこの下の吸着パッドの間での液体移動速度を制御するために水溶性フィルムを四角いフィルターの下に置く。
２．フィルター１片当りの抗血液型抗血清の容量：２５μＬ
３．フィルター１片当りの血液検体の容量：１０μＬ
４．洗浄手順：洗浄液Ｂ２滴（実施例１）、続いてＰＢＳ数滴。
【０１５４】
上記容量は説明例として提示するものであり、いかなる意味においても本発明を限定することを意味しないことに留意すべきである。
【実施例４】
【０１５５】
交差適合試験
ＡＢＯ／Ｒｈ型について予備試験した全血検体をｔｈｅ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｉｓｒａｅｌ Ｒｅｄ Ｍａｇｅｎ Ｄａｖｉｄ、Ｔｅｌ Ｈａｓｈｏｍｅｒ、Ｉｓｒａｅｌから入手した。血漿分画は血液検体の一部に由来し、受血者検体についてのモデルとして使用した。
【０１５６】
Ａｈｌｓｔｒｏｍ Ｎｏ．１４２ろ紙の０．５×０．５ｃｍ片を吸収性パッド上に置いた。供血者の全血検体２μＬをフィルターの中央にピペットで分注し、次いで受血者の血漿１０μＬを分注した。次にフィルターを洗浄液数滴（滴瓶から）で洗浄し、乾燥した。以下の表に従って、受血者と供血者の間に不適合性が存在するときのみ、洗浄後にフィルターに赤色の血液の点が残った：
【０１５７】
【表１】
【０１５８】
従ってこれらの結果は、本発明が、血液型試験および／または判定法のために有用であるのに十分な感受性および十分な再現性と信頼性を有することを明らかに示す。
【実施例５】
【０１５９】
逆血液型分類
Ａｈｌｓｔｒｏｍ Ｎｏ．１４２ろ紙の直径４ｍｍの円を吸収性パッド上に置いた。定義されたＡ１またはＢ型試験赤血球（ＤｉａＭｅｄ ＡＧ、ｓ／Ｍｏｒａｔ、ＳｗｉｔｚｅｒｌａｎｄからのＩＤ−ＤｉａＣｅｌｌ）の１０Ｘ濃縮懸濁液１５μＬをフィルターの中央にピペットで分注し、次いで全血検体１０から５０μＬを分注した。次にフィルターを周囲室温で５分間インキュベートし、洗浄液Ａ（実施例１）数滴（滴瓶から）で洗って、洗浄したフィルター円上での赤色形成に関して観察した。
【０１６０】
この試験を、様々な血液型からの全血の多数の検体（ｔｈｅ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｉｓｒａｅｌ Ｒｅｄ Ｍａｇｅｎ Ｄａｖｉｄ、Ｔｅｌ Ｈａｓｈｏｍｅｒ、Ｉｓｒａｅｌによって予備試験され、ここから受領した。）に関して反復し、これらの各々をＡ１およびＢ赤血球試薬で検査した。Ａ１型血液型検体は、Ｂ型赤血球でのみ赤色スポットを生じた。Ｂ型血液型検体は、Ａ１型赤血球でのみスポットを生成した。ＡＢ型血液検体は、Ａ１またはＢ赤血球で赤色スポットを生成しなかった。Ｏ型血液型検体は、Ａ１またはＢ赤血球の両方で赤色スポットを生成した。
【０１６１】
本発明をこの特定の実施形態に関して説明したが、多くの代替法、修正および変法が当業者に明らかであることは明白である。従って、付属の特許請求の精神および広い範囲内に属するこのような全ての代替法、修正および変法を包含することが意図されている。この明細書の中で言及する全ての公報、特許および特許出願は、各々個々の公報、特許および特許出願が参照してここに組み込まれることを特定して個別に指示されているのと同程度に、これらの全体が参照して本明細書に組み込まれる。加えて、本出願のいかなる参考文献の引用または特定も、このような参考文献が本発明に対する先行技術として使用可能であることの容認と解釈されるべきではない。
【０１６２】
【表２】
【図面の簡単な説明】
【０１６３】
【図１】本発明の教示に従って実施した、血液型分類試験の結果を示す。
【図２】本発明の教示に従って構築した装置およびキットの図式的表示を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に受容体−リガンド相互作用の検出に関し、より特定すると、輸血医学において用いるような正および逆の血液型判定および適合試験のための血液型抗原およびこれらの抗体の検出に関する。
【背景技術】
【０００２】
粒子凝集反応は、この簡単さ、迅速性および相対的感受性の故に抗原−抗体相互作用の検出と視覚化のために広く採用されている免疫学的方法である（Ｒｉｏｃｈｅｔ １９９３）。一般に細胞は、および特に赤血球は、様々な凝集反応法に適した粒子である。このように、赤血球の凝集反応（血球凝集）は、輸血前検査手順の重要な構成要素として、血液型判定または適合試験においてこれらの表面上の抗原およびこのような抗原に対する抗体の検出のために用いられている（Ｒｏｕｇｅｒ １９９３；Ｂｒｅｃｈｅｒ ２００２）。輸血前検査の目的は、供血者の血球と受血者の血球の間の免疫学的不適合性による血球の凝集反応または溶血から生じる有害反応を防ぐことである。「血液型分類」または「血液型適合試験」は、供血者の赤血球の抗原構造を検出し、このような抗原に対する受血者の反応を予測するために用いられる一連の検査である。
【０００３】
最も臨床的に重要な抗原系はＡＢＯ赤血球抗原系であり、この抗原系は、ヒト個体の大部分がこれらに対して積極的に免疫されていないのにこれらの抗原に対する抗体を産生するという点で独特である。すなわち、個体の赤血球はＡ、ＢまたはＡとＢの両方の抗原を提示し得る。個体群の約４０％はこれらの抗原のいずれも担持せず、従って「Ｏ」またはゼロと判定または分類される。Ｏ型個体の血液中の血漿または血清は、Ａ型とＢ型の両方の抗原に対する抗体を有する。ＡＢ型個体の血液中の血漿または血清は、しかしながら、Ａ型またはＢ型のいずれの抗原に対する抗体も示さない。従って、Ａ型個体の血液中の血漿または血清は、Ｂ型抗原に対する抗体を有し、一方Ｂ型個体の血液中の血漿または血清は、Ａ型抗原に対する抗体を有する。
【０００４】
ＡＢＯ抗原系における不適合性は強い有害反応を生じさせるが、これは供血者を受血者に適合させることによって予防できる。理想的には、供血者と受血者は同じ血液型に属すべきである。しかし、同一供血者が存在しない場合は、受血者の血清または血漿が供血者の赤血球に対する天然抗体を担持しない限り、代替血液型も適し得る。従ってＯ型は、この赤血球が、他の全ての型の血液中に存在する抗Ａまたは抗Ｂ抗体のいずれとも反応しないので、万能供血者である。ＡＢ型の個体は、全ての血液型のいずれに対する抗体も持たないので、全ての血液型から血液を受容することができる。
【０００５】
Ｒｈまたは「Ｄ」抗原も、上記「血液型分類」の一部として合わせて試験される。個体の赤血球は、Ｒｈ抗原を担持するか（Ｒｈ＋または「Ｒｈ陽性」）または担持しない（Ｒｈ−または「Ｒｈ陰性」）。ＡＢＯ抗原系と異なり、抗Ｒｈ（抗Ｄ）抗体は、Ｒｈ陰性血液型個体においては通常は存在しない。このような抗体は、これにもかかわらず、Ｒｈ陽性血液の輸血からまたはＲｈ陽性胎児の妊娠から生じる免疫増強作用後にＲｈ陰性個体で発現する。近代的輸血医学は、Ｒｈ陰性個体におけるＲｈ抗体の生成を防ぐためおよび抗Ｒｈ抗体を担持する個体での有害反応を予防するために、ＡＢＯ適合試験に加えて、供血者と受血者の間でのＲｈ適合試験を命じている。
【０００６】
Ａ、ＢおよびＲｈ抗原に加えて、赤血球は、時として「亜型」と称される、多種多様な他の抗原（詳細な検討については、Ｂｒｅｃｈｅｒ、２００２参照）を担持し得る。Ｒｈ抗原（および事実上ほとんどの抗原）と同様に、これらの抗原に対する抗体は、通常はヒト血液中に存在しないが、過去の輸血または抗原担持胎児の妊娠によって生じることがある。このような抗体は、「予期せぬ」または「まれ（ｒａｒｅ）」と称される。このような抗原および抗体による有害反応はまれまたは軽微であるが、供血者の血液供給が十分であり適切であるときは、先進国では受血者における予期せぬ抗体についておよび供血者赤血球上の関連抗原についての試験が実施される。
【０００７】
従って、血液凝集反応手順が輸血医学において重要な役割を果たすことは上記から明らかであり、各々の献血単位および各々の献血の潜在的受容者は、以下の全部または一部を含み得る、様々なレベルの試験を受ける。
【０００８】
血液型判定：全ての献血単位および新たな入院患者および／または潜在的受血者の血液を、赤血球上のＡＢＯ／Ｒｈ抗原の存在に関して試験する。
【０００９】
直接または正（ｆｏｒｗａｒｄ）血液型分類／判定：血液検体を、特定抗原に対する血清でこの赤血球上のＡＢＯ／Ｒｈ抗原の存在に関して試験することによるＡＢＯ／Ｒｈ血液型の判定。
【００１０】
逆（ｒｅｖｅｒｓｅ）血液型分類／判定：血液検体の血清または血漿分画を、定義された血液型の赤血球を使用することによってＡおよびＢ抗原に対する抗体の存在に関して試験することによる血液型の判定。
【００１１】
交差適合試験：これは輸血前試験の最後の段階であり、受血者の血清／血漿を選択された供血者の血液単位の赤血球と反応させる。一部の国では、交差適合試験は実際に検査室で実施されるのではなく、コンピュータに保存された試験データを適合させることによって行われる。また別の国では、例えばフランスでは、交差適合試験は受血者のベッドサイドで看護士によって実施される。
【００１２】
上記試験は、様々な標準マニュアルおよび自動粒子凝集反応法によって実施することができる。全ての粒子凝集反応法は、血清／血漿または人工的に作製された抗体試薬であり得る、凝集剤と粒子を混合すること、混合物を様々な長さの時間インキュベートすること、および最後に、混合物を凝集粒子の存在に関して観察することを含む。全ての方法において、赤血球は、これらの血中濃度と比較して１：１０以上に希釈され、血漿または血清痕跡を除去するためにこの細胞の洗浄が強く勧められるまたは明らかに必要である。
【００１３】
凝集反応の検出は、好ましくは平らな表面に展着された、混合物の裸眼での観察によって実施することができる（Ｒｉｏｃｈｅｔ、１９９３）。もしくは、凝集粒子と非凝集粒子の間の視覚的差異を増強するために様々な手段や装置が使用可能である。
【００１４】
「スライド凝集反応」法は、全く装置を必要とせずに、ほとんどどのような場所でも実施できる。顕微鏡のスライドの表面または他の何らかの水不透過性表面で希釈赤血球１滴を血清／血漿／抗体１滴と混合する。２つの成分を数分間棒で混合するかまたはスライドを渦動させることによって混合し、凝集に関して注意深く観察する。このアプローチの欠点の一部は、（ａ）数分間混合する必要があること；（ｂ）結果の主観的な視覚判定；（ｃ）乾燥によって誘導される偽陽性反応；および（ｄ）スライドが保存できないことを含む。
【００１５】
「試験管凝集反応」法では、規定容量の希釈赤血球懸濁液を、丸底またはＶ字状の底の透明な試験管において規定容量の血清／血漿／抗体と混合する。陰性反応の場合は、赤血球は試験管の底部の中央へと緩やかに下降し、透明な赤い「ボタン（ｂｕｔｔｏｎ）」を形成する。陽性反応の場合は、凝集した赤血球は格子を形成し、透明なボタンを形成せずに試験管の底の表面全体に広がる。この代わりに、細胞の「菌叢（ｌａｗｎ）」がはっきりと見える。細胞の緩やかな沈降を待つ代わりに、現在の慣例では（Ｂｒｅｃｈｅｒ、２００２；Ｇａｍｍａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、２００１）、赤血球と抗体溶液の混合物を遠心分離し、この後再懸濁する。陽性凝集反応の場合は細胞の塊が明瞭に見える。試験管凝集反応はまた、マイクロプレートのウエルにおいても実施することができ、従って試薬と血液の容量が低減され、処理量が増加し得る。試験管凝集反応の欠点の一部は、（ａ）検査装置、人員および環境の必要性；（ｂ）結果の主観的な視覚判定；（ｃ）細胞凝集塊は免疫凝集物であると推測され得るので、不正確な遠心分離速度および時間が偽陽性または偽陰性結果を生じさせ得ること；（ｄ）結果の直接記録がないこと；（ｅ）かさばった試験管；および（ｆ）破損や流出の危険性を含む。
【００１６】
「ゲルろ過」法では、赤血球と血清／血漿／抗体の混合物をゲル分離媒質（微粒子であり得る）のカラムに適用する。混合物を遠心分離によってゲルに通す。凝集した赤血球はゲルを通過することができず、ゲルの上部にとどまる。非凝集細胞はゲルカラムを通過して、この底部に達する。小さな凝集物はゲルカラムに入り得るが、この底部には達しない。
【００１７】
米国特許第５，３３８，６８９号に述べられているこのような方法の１つはゲル粒子のカラムを用いるものであり、ＤｉａＭｅｄ ＡＧ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄより入手可能な、血液型分類のための成功を収めている市販の製品ラインへと展開された。この方法の利点は、（ａ）使用の相対的容易さ；（ｂ）結果の明瞭な解釈；（ｃ）ゲルへの侵入度に基づいて凝集レベルを等級付けられることである。欠点は、（ａ）検査装置、人員および環境の必要性；（ｂ）結果の直接記録がないこと；（ｃ）かさばった試験機器（製造者が製品を「カード」と称しているが、実際にはホルダー内の一連の試験管であり、いかなる意味でも「カード」のように平らではない。）；および（ｄ）高いコストを生じさせる複雑な製造法（ゲルを狭い試験管内に挿入すること）である。
【００１８】
ある場合には、赤血球抗原に対する抗体は、これらが直接赤血球を凝集することができず、凝集を促進するために抗グロブリンおよび／または抗補体抗体（時として「クーム（Ｃｏｏｍｓ’）ス試薬」と称される。）の添加を必要とすることから「不完全」とみなされる（Ｃｏｏｍｂｓら、１９４５；Ｂｒｅｃｈｅｒ、２００２）。この現象は、血液亜型および時として主要血液型のある種の変異体のような、比較的弱い抗原に対する抗体を検出しようとするときに最も一般的である。上記３つの方法は全て、抗体反応した赤血球をクームス試薬に供する追加工程に適合させ得る。しかし、この工程はかなりの量の手動操作を必要とする。第一に、非反応免疫グロブリンを反応混合物から除去するために赤血球と不完全な抗体の混合物を十分に洗浄しなければならない。この後、洗浄した抗体被覆赤血球をクームス試薬と混合し、上述した方法の１つを用いて凝集反応に関して試験する。
【００１９】
赤血球以外の粒子を含む免疫学的試験において、凝集粒子と非凝集粒子を容易に分離するために規定孔径を有するフィルターが使用されてきた（例えば米国特許第４，４５９，３６１号および同第４，８４７，１９９号）。現在まで、このアプローチは、このアプローチが使用可能であるという一部の非常に初期の所見にもかかわらず、特に血液型分類や血液型適合試験手順に例示されるような、赤血球を凝集粒子とする凝集反応法のためには使用されていない。
【００２０】
保存細菌細胞に関するＣａｓｔａｎｅｄａ（１９５０）の予備的所見に基づき、ＭａｌｏｎｅとＳｔａｐｌｅｔｏｎ（１９５１）は、ろ紙上の赤血球の側方運動が血液型抗血清の添加によって影響を受け、無関係な抗血清と混合した赤血球（例えば抗ＢとＡ型細胞）は食塩水の添加後側方に移動し得るが、関連抗血清と混合した赤血球（例えば抗Ａ血清とＡ型細胞）はこれらの位置に「固定」され、食塩水の添加後も移動しないことを示した。高力価の抗血液型血清１滴を１片のろ紙（もとの用語では「吸い取り紙（ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｐａｐｅｒ）上に置く血液型分類法が提案された。血清の展着後、試料血液１滴を同じ位置に置き、部分的に乾燥させる（「光沢がなくなったとき」）。最後に食塩水２滴を添加する。陽性反応は、陰性反応よりも小さな血液のスポットで示される。抗血液型抗血清の効力の測定のための逆の手順も提案されており、血清１滴を吸い取り紙の上に置き、次に洗浄した赤血球１滴を置いた。部分的乾燥後、血液の上に食塩水２滴を添加した。抗血清の効力は、血球の側方展開の程度と逆相関した。
【００２１】
この相対的単純さにもかかわらず、この方法は、著者（ＤｕｎｓｆｏｒｄとＢｏｗｌｅｙ １９５５、１９６７）の研究室およびもう１つの研究室（ＦａｒｒとＧｏｄｗｉｎ １９５５）での抗血液型試薬の質の評価を除き、血液貯蔵施設（ｂｌｏｏｄ ｂａｎｋｉｎｇ）では実施されなかった。試験の最終段階の前に試薬の乾燥を待つ必要があることおよび赤い円の大きさに基づく、陽性反応と陰性反応の不明確な区別が大きな欠点であり、この方法への関心がずっと低かったことの理由であると考えられる。
【００２２】
この手法の変法（Ａｎｄｅｒｓｏｎ １９７０）において、血液と抗血清を混合し、３０分間インキュベートした。ろ紙の細片を混合物に挿入し、細片への混合物のウィッキング（すなわち側方流動）を追跡することによって赤血球凝集反応を検出した。陽性反応では、血球は流れのもとの位置にとどまるが、無細胞血清は細片の先端方向へと進み、一方陰性反応では、血球は血清と共に細片に沿って移動する。反応に必要な時間の長さおよび２つの別々のハードウエア成分（混合皿と細片）の必要性が、手順を複雑にし、誤りを誘導し得る難点である。
【００２３】
Ａｋｅｒｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．（Ｔｈｏｒｏｆａｒｅ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ、ＵＳＡ）は、Ａｎｄｅｒｓｏｎ（１９７０）の着想を改善し、Ａｋｅｒｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈに譲渡された米国特許第５，２３１，０３５号および同第５，５６５，３６６号に述べられている、内蔵型装置へと進化させた。カセット様の装置は、装置の上部パネルにある２つの開口部の各々（１つはＡ型用で他方はＢ型判定用）に大きな液滴を入れ、２分間待って、この後食塩水１滴を添加することにより、患者の血液型を判定することができる。陰性反応の場合は、血液は側方に移動し、２番目の開口部（ウインドウ）に出現する。陽性反応の場合は、赤血球は移動せず、２番目の開口部は透明なままである（または食塩水洗浄液の色を示す）。Ａｋｅｒｓの装置は、血液取り扱いの専門家でない者が検査室の外で（例えばベッドサイドで）使用できる程度にまで血液型判定を簡単にしたが、いくつかの不都合も有している。（ａ）比較的大きな容量の血液を必要とする；（ｂ）工程の時間を計るオペレーターを必要とする；（ｃ）正血液型分類だけが可能であり、交差適合試験（供血者の赤血球に対する受血者の抗体の活性を視覚化する）用ではない；（ｄ）結果の様相が紛らわしいことがある。陽性結果は結果ウインドウにおける赤色の不在によって示され、一方陰性反応は赤色の出現で終わる；および（ｅ）結果が食塩水洗浄液の添加の正確に１分後に視覚化されねばならない。この必要条件は、反応装置を安定な記録として保存することを妨げる。
【００２４】
標準血液型分類および交差適合試験法は、大きな労力を要し、誤りを招きやすく、検査室環境でこれらを操作するための専門的な人員を必要とすることは明らかである。血液取り扱いの専門家ではない操作者（フランスでのベッドサイド交差適合試験における看護士のような）によって検査室の外で血液型分類手順を実施する必要があるので、手順を簡単にし、操作の誤りを排除することを目指す製品が開発された。これらの製品は実際上ある程度まで血液型試験手順を単純化するが、誤りを完全に排除するわけではなく、一部の人にとっては複雑であり得る（ＲａｃｈｅｌとＰｌａｐｐ、１９９０；Ｍｉｇｅｏｔら、２００２）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２５】
背景技術は、規定された孔径のフィルターを通過する垂直運動に基づく、容易に持ち運び可能な装置を含み、この使用はほとんどもしくは全く特殊な訓練を必要とせず、直接記録可能な結果を提供する、迅速、簡単で正確な血液型試験手順を教示または示唆していない。
【００２６】
本発明は、検査室以外の環境で専門家ではない人による使用に適する、簡単な方法で様々な血液型分類、逆分類および交差適合試験を実施するための方法および装置を提供することにより、先行技術の不備を克服する。加えて、この結果は、場合により直接保管し、後日の参照のために保存／ファイルすることができる。
【課題を解決するための手段】
【００２７】
本発明の１つの態様によれば、粒子懸濁液の一定容量および溶液または懸濁液（前記溶液または懸濁液は凝集剤を含む。）の一定容量を、フィルターの表面上の実質的に同じ選択位置に置くこと（前記フィルターは個々の非凝集粒子が前記フィルターの前記表面に対して垂直方向に通過することを許容するように構築されている。）、場合により洗浄液を前記凝集剤と実質的に同じ位置に置くこと、および、前記選択位置の前記表面を粒子の存在に関して観察することを含む、粒子懸濁液中の粒子凝集の検出および／または視覚化のための方法が提供される。
【００２８】
場合によりおよび好ましくは、粒子懸濁液の一定容量は、凝集剤を含むの溶液または懸濁液の一定容量が置かれる前に選択位置に置かれる。
【００２９】
場合によりおよび好ましくは、フィルターは多孔体の多孔表面を含み、この表面のこれら孔は、少なくとも個々の粒子の通過を許容する大きさである。
【００３０】
場合によりおよび好ましくは、この多孔表面は、本質的に吸収性でありまたは吸収性物質に付された多孔層を含む。
【００３１】
前記の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、前記多孔層と前記吸収性物質の間に水溶性フィルムが位置する。
【００３２】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、前記方法は、フィルターを乾燥することをさらに含む。
【００３３】
場合によりおよび好ましくは、粒子懸濁液の容量および凝集剤の溶液または懸濁液の容量は、各々送達可能な容量を含む。場合によりおよびより好ましくは、送達可能な容量は少なくともマイクロリットルを含む。
【００３４】
場合によりおよび好ましくは、粒子懸濁液の粒子は、結合対の成員（ＭＢＰ）で被覆されている。場合によりおよびより好ましくは、凝集剤はＭＢＰを含む。
【００３５】
前記の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、粒子は少なくとも１個の天然粒子または合成粒子を含む。
【００３６】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、粒子は検出可能な標識を含む。場合によりおよび好ましくは、この標識は、色素、放射性物質、磁性または常磁性物質、蛍光物質および発光物質を含む群から選択される。
【００３７】
場合によりおよび好ましくは、粒子懸濁液は第一血液産物を含む。
【００３８】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、第一血液産物は全血を含む。
【００３９】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、第一血液産物は血液成分を含む。
【００４０】
場合によりおよび好ましくは、血液成分は懸濁液中に存在する。
【００４１】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、第一血液産物は赤血球を含む。
【００４２】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、第一血液産物は、未洗浄赤血球、未希釈赤血球または未洗浄および未希釈赤血球を含む群から選択される少なくとも１つを含む。
【００４３】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、本発明の方法は、遠心分離なしでもしくは粒子懸濁液または凝集剤と第一血液産物の予備混合なしで操作される。
【００４４】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、凝集剤は第二血液産物を含む。
【００４５】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、凝集剤は、血液型群に対する抗体を含む。
【００４６】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、凝集剤は血清または血漿を含む。
【００４７】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、凝集剤を含む溶液または懸濁液の一定容量は、一定容量の粒子懸濁液が置かれる前に選択位置に置かれる。
【００４８】
正血液型判定のために、フィルターは、場合によりおよび好ましくは、凝集剤が含浸させる。さらに場合により、フィルターは、抗グロブリン試薬および抗補体試薬を含む群から選択される試薬が含浸させる。
【００４９】
好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、この試薬はクームス（Ｃｏｏｍｂｓ）試薬を含む。
【００５０】
前記の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、洗浄液は塩溶液である。場合によりおよび好ましくは、この塩溶液は等張である。場合によりおよびより好ましくは、この塩溶液は食塩水である。場合によりおよびより好ましくは、この食塩水は緩衝されている。場合によりおよびより好ましくは、緩衝食塩水はリン酸緩衝食塩水である。
【００５１】
本発明の実施形態におけるさらなる特徴によれば、洗浄液は、追加の洗浄成分をさらに含む。場合によりおよび好ましくは、この追加の成分はポリマーを含む。場合により及よりび好ましくは、ポリマーは、ポリエチレングリコールおよびデキストラン硫酸ナトリウム塩を含む群から選択される。場合によりおよびより好ましくは、ポリマーの濃度範囲は、浸透圧平衡の維持のために適切である。場合によりおよび最も好ましくは、濃度範囲は約０．０００１から約２０％ｗ／ｖである。
【００５２】
前記の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、洗浄液は、洗浄剤および界面活性剤の少なくとも１つをさらに含む。場合によりおよび好ましくは、この洗浄剤はポリオキシエチレン−１０−トリデシルエーテルを含む。場合によりおよびより好ましくは、この洗浄剤または界面活性剤は、０．０００１から０．１％ｗ／ｖの範囲内の濃度を有する。場合によりおよび最も好ましくは、濃度は０．００１から０．０１％ｗ／ｖの範囲内である。
【００５３】
本発明のもう１つの態様によれば、フィルターの表面に置かれた個々の非凝集粒子が、前記表面に対して垂直方向に通過することを許容するように構築されているフィルターを含む、試料中の粒子凝集の検出および／または視覚化のための装置が提供される。
【００５４】
場合によりおよび好ましくは、この装置は、フィルターの上面に位置するメッシュをさらに含む。
【００５５】
本発明の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、この装置は、凝集剤を受け取り、凝集剤から粒子を除去するための追加のフィルターをさらに含む。場合によりおよび好ましくは、この追加のフィルターは、粒子含有凝集剤の添加後および粒子含有試料を第一フィルターに添加する前に取り除かれる。
【００５６】
場合によりおよび好ましくは、凝集剤は、全血または血液成分中の抗体を含む。
【００５７】
本発明のさらにもう１つの態様によれば、試料を受け取るためのフィルター；同じくフィルター上に置くための凝集剤；および場合により凝集剤と試料の後にフィルター上に置くための洗浄液を含む、本発明の方法を実施するためのキットが提供される。
【００５８】
場合によりおよび好ましくは、このキットは、凝集反応を検出するおよび／または測定するための計測器をさらに含む。場合によりおよびより好ましくは、この計測器は、フィルターの多孔表面に光を透過させるための光源、および多孔表面によって反射または散乱された光を測定するように位置づけられた光センサーを含む光度計を含む。
【００５９】
場合によりおよび好ましくは、このキットは、測定光を視覚信号に変換するための変換器および信号を表示するためのディスプレイをさらに含む。
【００６０】
このキットは、場合により少なくとも１つの追加の光センサーおよび／または少なくとも１つの付加的な光源をさらに含み得る。
【００６１】
場合によりおよび好ましくは、本発明のキットは処理回路をさらに含む。
【００６２】
場合によりおよび好ましくは、本発明のキットは、フィルターのためのホルダーをさらに含む。
【００６３】
場合によりおよび好ましくは、光源は着色光を提供する。
【００６４】
本発明の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、このキットは、凝集剤を受け取り、凝集剤から粒子を除去するための追加のフィルターをさらに含む。場合によりおよび好ましくは、この追加のフィルターは取り外し可能である。
【００６５】
本発明のさらなる態様によれば、試料と凝集剤を受け取るための、場合により試薬が含浸されたフィルター、および、凝集溶液と試料の後にフィルター上に置くための、場合により洗浄液を含む、本発明の方法を実施するためのキットが提供される。
【００６６】
場合によりおよび好ましくは、試薬はクームス試薬を含む。
【００６７】
場合によりおよび好ましくは、フィルターに含浸されている試薬は凝集剤である。
【００６８】
本発明のさらなる態様によれば、複数の試験成分の間の凝集反応の存在または不在を検出するための装置が提供される。この装置はフィルターを含み、前記フィルターは、上面を有し、試験成分の流動の方向が前記上面に対して垂直であるように構築されており、前記試験成分は、前記上面に適用され、場合により洗浄工程に供される。凝集反応を受けた試験成分は前記上面において検出可能である。
【００６９】
場合によりおよび好ましくは、この試験成分は、全血または血液分画または血液成分の少なくとも１つを含む。
【００７０】
前記の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、この装置は、場合により１以上の層を含み得るフィルターを特徴とする。このフィルターの寸法（好ましくは厚さまたは面積の少なくとも１つを含む。）は、好ましくは試験成分の流れの方向が、これらの成分を適用する表面に対して垂直であることを許容するように設計される。これらの成分は、場合により血液または血液分画または成分であり得、また場合により、分離すべき複数の異なる成分の混合物でもあり得る。好ましくは、これら反応成分は、分離がこの反応の結果に応じて異なって起こるように、フィルターの表面への適用前または適用中に何らかの方法で反応させられる。例えば血液成分に関して、この反応は、血液（またはこの成分）が凝集した場合、試験成分がフィルターに入らない（または短距離だけ入る）ように、場合により凝集反応であり得る。
【００７１】
場合によりおよびより好ましくは、この反応の存在または不在は視覚的に判定され、最も好ましくはフィルターを裸眼で見ることによって判定される。場合により、計測器を使用し得る。もしくは、他の種類の標識またはレポーターが、例えば（場合によりおよび好ましくは）標識またはレポーターの存在を検出するための計測器と共に、使用し得る。様々な例示的標識およびレポーターを以下で詳細に説明するが、いかなる適切な標識またはレポーターも使用でき、当業者によって選択され得る。この計測器は、当業者によって設計されるように、場合により標識またはレポーターと共にまたはこれらなしで使用できることに留意すべきである。
【００７２】
前記の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、結果の判定は、場合によりおよび好ましくは主観的因子を含まないかまたはさもなければ、好ましくは試験者の側の主観をほとんど含まない。
【００７３】
さらなる特徴によれば、この装置は、場合により容易に持ち運びし得る。
【００７４】
さらなる特徴によれば、この装置は、場合により専門家でない操作者によって容易に使用され得る。
【００７５】
さらなる特徴によれば、前記方法は、場合によりおよび好ましくは反応成分の予備混合を必要としない。
【００７６】
さらなる特徴によれば、未洗浄の全血が、場合により好ましく使用され得る。
【００７７】
さらなる特徴によれば、小容量の試料血液が、場合によりおよび好ましくは必要とされる。
【００７８】
前記の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、前記方法は、場合によりおよび好ましくは遠心分離工程を含まない。
【００７９】
さらなる特徴によれば、反応停止の最もよい時期は場合により必要しない。
【００８０】
さらなる特徴によれば、結果の直接記録が場合により得られる。
【００８１】
本発明の１つの利点は、場合によりおよび好ましくは、血液型分類と交差適合試験の両方に適することである。
【００８２】
本発明の１つの特徴は、試験成分の流動の方向が、好ましくは多孔体の表面に対して垂直であることである。
【００８３】
本発明の１つの利点は、方法と装置の使用が簡単であることである。
【００８４】
本発明のさらなる利点は、偽陽性結果が回避されることである。
【００８５】
本発明のさらなる利点は、結果が迅速で正確に、好ましくは非常に低い誤差範囲で、得られることである。
【００８６】
本明細書では、説明のためにのみおよび限定を意図せずに、以下で数多くの用語を論じる。他に定義されない限り、本明細書で使用する全ての技術および学術用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
【００８７】
結合対（ＢＰ）：抗原−抗体、相補的核酸、レクチン−炭水化物対、酵素−基質等を含むがこれらに限定されない、受容体−リガンド対。
【００８８】
結合対の成員（ＭＢＰ）：結合対の成員、例えば抗体は、抗原−抗体結合対のＭＢＰである。
【００８９】
血液型判定：本明細書中の「血液型分類」参照。
【００９０】
凝集剤：粒子を互いに結合させるものを含むが、これに限定されない物質。
【００９１】
滴：場合によりおよび好ましくは、ピペット、針、ビンまたは他の何らかの容器、細い突出した開口部を有するチューブまたは容器を含むがこれらに限定されない、分注装置の口から単一塊として落下するのに十分な重さの容量の液体、または場合により固体物質であり、滴の容量は、場合によりおよび好ましくは、必ずではないが、約２０から約５０μＬの容量である。
【００９２】
多孔体：その中に孔を有する物質塊。多孔体の非限定的な例は、フィルター、ろ紙、吸い取り紙などを含むが、これらに限定されない。
【００９３】
フィルター：懸濁微粒子物の少なくとも一部から液体を分離するために液体または気体を通過させることができる、紙または砂、またはこのような分離のために液体または気体を通過させることができる他の何らかの吸収性材料を含むがこれらに限定されない、多孔性物質または塊を含むがこれらに限定されない装置；またはこのような多孔性物質を含む装置。
【００９４】
側方運動：場合によりおよび好ましくは、平らな吸収（すなわち多孔性またはさもなければ吸収性）体（膜、紙を含むがこれらに限定されない）を含むがこれらに限定されない、物体の表面上または内側での、および物体の表面に対して平行な、例えば液体および／または粒子の運動。
【００９５】
垂直運動：平らな吸収（すなわち多孔性またはさもなければ吸収性）体（膜または紙を含むがこれらに限定されない）を含むがこれらに限定されない、物体を通る、および物体の表面に対して垂直な、例えば液体および／またはこのような液体中に懸濁した粒子の運動。
【００９６】
フロースルー（Ｆｌｏｗ Ｔｈｒｏｕｇｈ）：上記「垂直運動」参照。
【００９７】
多孔表面：例えば気体または液体の通過を許容するが、この液体または気体中に懸濁したまたは溶解した粒子の少なくとも一部の通過を許容せず、前記粒子が孔径よりも大きいサイズを有するかまたは孔の表面に付着する、孔または間隙（ｉｎｔｅｒｓｔｉｃｅｓ）を有する表面。
【００９８】
血液型分類：血液検体を、その赤血球上のＡＢＯ／Ｒｈ抗原の存在に関して試験することを含むがこれに限定されない試験方法による、または血液検体の血清または血漿分画をＡおよびＢ型抗原に対する抗体の存在に関して試験することによる、ＡＢＯ／Ｒｈ血液型の判定。
【００９９】
血液型判定：「血液型分類」参照。
【０１００】
直接または正血液型分類／判定：血液検体を、特定抗原に対する血清でその赤血球上のＡＢＯ／Ｒｈ抗原の存在に関して試験することによるＡＢＯ／Ｒｈ血液型の判定。
【０１０１】
逆血液型分類／判定：定義された血液型の赤血球を使用することにより、血液検体の血清または血漿分画をＡおよびＢ型抗原に対する抗体の存在に関して試験することによる血液型の判定。
【０１０２】
交差適合試験：受血者の血清／血漿を供血者の血液またはこの赤血球と反応させる、輸血前検査の最後の段階。
【０１０３】
適合：上記「交差適合試験」参照。
【０１０４】
輸血前交差適合試験：上記「交差適合試験」参照。
【０１０５】
亜型：ＡＢＯ／Ｒｈ抗原系に属さず、ＡＢＯ／Ｒｈ抗原とは独立して遺伝的に受け継がれる赤血球上の抗原を含むが、これに限定されない。
【０１０６】
予期せぬ抗体：例えばヒト血液の血清／血漿中で認められる、非ＡＢＯ／Ｒｈ抗原に対する抗体。
【０１０７】
標識：トレーサー；例えば化学的、生物学的または物理的実体に添加または結合して、この検出または視覚化を容易にするための、比較的容易に検出可能な物質または成分。生物医学分野で用いられる標識の例は、色素、放射性同位体、磁性または常磁性物質、蛍光物質、発光物質、酵素、粒子を含むが、これらに限定されない。
【０１０８】
同様の位置：好ましくは、一定容量の溶液または懸濁液を先に置いた位置に実質的に近い位置を含むが、これらに限定されず、場合により隣接または近接位置も含み得る。
【０１０９】
本発明を、例示としてのみ、添付の図面を参照しながらここで説明する。
【０１１０】
詳細な説明
本発明は、複数の試験化合物の粒子凝集反応（凝集反応）の検出または視覚化のための、例えば抗原−抗体相互作用を検出するための、方法および装置を提供する。この装置は、好ましくは上面を有するフィルターを特徴とする。試験成分の流れの方向は、主として上面に対して垂直である。流れの垂直方向は、好ましくは検体および洗浄試薬の容量に比して表面積を制限することによって維持される。非限定的な例として、約０．２から約０．２５ｃｍ２の表面積が、場合によりおよび好ましくは、５０μＬ以下の検体のために使用し得る。試験成分は、この試験成分が凝集反応を受ける場合、レポーターとしての機能を果たす、試験の目に見えるおよび／またはさもなければ検出可能な成分（例えば本発明の好ましい実施形態によれば赤血球）が、選択的洗浄工程後に表面上で目に見えるおよび／またはさもなければ検出可能であるようにフィルターを垂直方向に評価可能に横切らないように、上面に適用される。
【０１１１】
前記方法は、場合によりおよび好ましくは、フィルターの表面に粒子の懸濁液１滴を置くこと、同じかまたは同様の位置に凝集剤を含む溶液または懸濁液１滴を置くこと、および場合により洗浄液を同じかまたは同様の位置に置くことを含む。このフィルターは、その孔が、フィルターの表面に対して垂直な単一血球の通過を許容するが、凝集反応後の塊状細胞の通過は許容しないように選択される。凝集した細胞は、従って、フィルターの表面にとどまり、反応部位の赤いスポットの存在によって検出可能である。凝集剤は、凝集剤が試験試料と反応できるように、好ましくは試験試料（１または複数の試験成分）と実質的に同じ選択位置に置かれることに留意すべきである。従って「実質的に同じ選択位置」という用語は、凝集剤が試験試料と反応することを可能にする位置を指す。
【０１１２】
あるいは、複数の垂直に積み重なったフィルターを、好ましくは少なくとも第一フィルターとその下の積層の少なくとも１つのフィルターの間の液体通過速度を制御するための水溶性フィルムと共に、場合により使用し得る。第一フィルターは、結合対の成員（ＭＢＰ）の両方を受け取る。ＭＢＰは、以下で詳細に述べるように、抗原−抗体、相補的核酸、レクチン−炭水化物対等のような受容体−リガンド対である。従って、凝集剤は、粒子凝集反応および装置が結合対の成員の検出／判定のために使用できるように、ＭＢＰの相補的成員であり得る。好ましくは、第一フィルターは両方の成員を連続的に受け取る。凝集反応が起こる場合、洗浄液による第一フィルターの洗浄は、第一フィルターを第二フィルターへと垂直に通過させるＭＢＰの洗浄を生じさせない。凝集反応は、場合により視覚的にまたは標識の検出に従って検出され得る。
【０１１３】
単一の十分に厚いフィルターも、場合によりフィルター内に含浸された水溶性フィルムと共に、場合により使用し得る。フィルターは、非凝集粒子の運動の少なくとも実質的な部分がフィルターの表面に対して垂直の方向で起こり、一方凝集粒子はフィルターの表面にとどまるように、フィルターに沿った側方運動を最小限に抑えるように選択される。
【０１１４】
本発明は、血液型分類および交差適合試験のために使用し得る。本発明は、反応成分の予備混合を必要とせず、未洗浄の全血を使用し、陽性反応場合は透明な色のシグナルを提供し、記録として保存することができる、専門家でない操作者によって検査室の外で使用することができる方法および装置を提供する。
【０１１５】
フィルター上の試験成分の側方流動に基づく、上記で論じた先行技術の方法と異なり、本発明者は、運動の方向がフィルターを通る（すなわち方向がフィルターの表面に対して垂直である）場合、フィルターは、既存の方法に比べていくつかの明らかの利点を有する、赤血球凝集反応法（血液型分類および適合試験を含む）のために好都合に使用できることを発見した：（ａ）凝集と非凝集反応の区別が明瞭である。陽性反応場合は赤色のスポットが現われ、陰性反応（または反応なし）の場合はスポットが出現しない；（ｂ）赤血球およびこれらの凝集剤を、フィルターに置く前に全く混合および／またはインキュベートする必要がない；（ｃ）結果の視覚化を容易にするために非凝集赤血球から凝集赤血球を分離するための遠心分離を必要としない；（ｄ）洗浄赤血球の希釈（１から約５％）懸濁液の代わりに全血が使用できる；および（ｅ）反応フィルターを乾燥し、反応およびこの結果の明確な記録として保存／ファイルすることができる。本発明のシステムにおいて使用するフィルターは、粒子運動の少なくとも重要な割合がフィルターの表面に対して垂直な方向で起こることを確実にするのに適した寸法および性質を有する。
【０１１６】
本発明の好ましい実施形態によれば、粒子の懸濁液１滴を多孔体の多孔表面に置くこと、但し、この表面の寸法および孔は個々の粒子の垂直な通過を許容するように選択される；凝集剤を含む溶液または懸濁液１滴を粒子懸濁液の滴と同じかまたは同様の位置に置くこと；場合により洗浄液を前記滴と同じかまたは同様の位置に置くこと；この位置の表面を粒子の存在に関して観察し、このような存在が、粒子の凝集反応が起こったことを指示することを含む、粒子凝集反応の検出／視覚化のための方法が提供される。場合により多孔性物質を乾燥することにより、このような乾燥物質を記録として保存することができる。
【０１１７】
本発明の所望による実施形態によれば、先の実施形態の最初の２工程の順序は、血液型分類のための方法は逆さにしてよく、好ましくは血液型抗原に対する抗体を含む溶液１滴を多孔表面上に置くこと（但し、この表面の孔および寸法は少なくとも個々の赤血球の垂直な通過を許容する大きさである。）；場合により抗体溶液の滴と同じかまたは同様の位置に、赤血球の懸濁液１滴を置くこと；前記滴と同じかまたは同様の位置に場合により洗浄液を表面に置くこと；この位置の表面を赤色の存在に関して観察することを含むような方法にしてもよい。
【０１１８】
洗浄液は、場合によりおよび好ましくは浸透圧溶液、より好ましくは等張溶液である。より好ましくは、洗浄液は食塩水であり、最も好ましくは緩衝食塩水である。本発明の好ましい実施形態によれば、この洗浄液はリン酸緩衝食塩水を含む。
【０１１９】
この洗浄液は、場合により追加の洗浄成分もしくはポリマー、洗浄剤または界面活性剤を含む、さらなる成分を含み得る。この追加の洗浄成分は、好ましくはフィルターへの非特異的結合の低減を助けることができる。所望によるポリマーは、好ましくはポリエチレングリコールおよびデキストラン硫酸ナトリウム塩を含む群から選択される。場合によりおよび好ましくは、この所望によるポリマーは、浸透圧平衡の維持のために適切な濃度範囲で添加される。より好ましくは、濃度は約０．０００１から約２０％ｗ／ｖの範囲内である。この洗浄液は、場合により洗浄剤および／または１以上の界面活性剤を、より好ましくは約０．０００１から０．１％ｗ／ｖの濃度範囲内で含み得る。最も好ましくは、この洗浄剤または界面活性剤の濃度は、約０．００１から約０．０１％ｗ／ｖの範囲内である。
【０１２０】
粒子は、場合により結合対（ＭＢＰ）により被覆されることが出来る。ＭＢＰは、抗原−抗体、相補的核酸、レクチン−炭水化物対等のような受容体−リガンド対である。従って、凝集剤は、粒子凝集反応および装置が結合対の成員（試験成分）の検出／判定のために使用できるように、ＭＢＰの相補的成員であり得る。
【０１２１】
この粒子は、場合により天然（例えば細胞または細胞内部分）または合成（ラテックス、金属、金属酸化物、炭素、色素）であり得る。この粒子は、好ましくは容易な検出または視覚化を促進するために、例えば色素、放射性物質、磁性または常磁性物質、蛍光物質および発光物質で標識されるべきである。
【０１２２】
本発明の好ましい実施形態では、この粒子は赤血球である。このような実施形態では、ＭＢＰ中の抗原は、場合により、赤血球の表面に位置するＡＢＯ／Ｒｈ抗原系のような血液型抗原であり、抗体は、場合によりおよび好ましくは、血液の液体分画中に存在する、対応する抗血液型抗体である。
【０１２３】
本発明のもう１つの実施形態において、凝集性粒子として働く赤血球の懸濁液は、場合によりおよび好ましくは、全血を含む。全血を用いることは、血液型分類が、赤血球の懸濁液１滴を多孔表面上に置くこと（但し、この表面の孔および寸法は、少なくとも表面の平面に対して垂直な個々の赤血球の通過を許容するように選択される。）；場合により赤血球懸濁液の滴と同じかまたは同様の位置に、血液型抗原に対する抗体を含む溶液１滴を置くこと；前記滴と同じかまたは同様の位置に、場合により洗浄液を表面に置くこと；この位置の表面を赤色の存在に関して観察することによって実施されることを可能にし、このような色は、赤血球が抗体と反応したこと、およびこれらの赤血球が、抗体が対象とする抗原を担持すること、および／または赤血球が抗体に対応する血液型であることを示す。
【０１２４】
以下「赤色」は、赤い色調を有するまたは赤みを帯びた、または赤色と同様に見える、および／または赤血球の存在および／または血液が有し得る何らかの色に加えて、赤色を与える他の何らかの血液成分の存在を指示する色を含むが、これらに限定されない。
【０１２５】
多孔体の多孔表面は、場合により本質的に吸収性であるかもしくは吸収性物質に結合した多孔層である。多孔層および結合吸収性物質は、場合により平らなカードの形状を取り得る。多孔層は、多孔膜（例えばセルロース、酢酸または硝酸セルロース、Ｎｕｃｅｌｅｏｐｏｒｅ（登録商標）、繊維（例えばＳｅｆａｒ、Ｒｕｓｃｈｌｉｋｏｎ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄによって供給されるような）、メッシュ、吸収性材料（例えばＷｈａｔｍａｎ、Ｍａｉｄｓｔｏｎｅ、ＵＫから入手し得る、紙など）、深層ろ過媒質（例えばＡｈｌｓｔｒｏｍ、ＰＡ、ＵＳＡから入手し得る、ガラス繊維紙など）から作製することができる。ガラス繊維紙が好ましく、Ａｈｌｓｔｒｏｍ、Ｍｏｕｎｔ Ｈｏｌｌｅｙ Ｓｐｒｉｎｇｓ、ＰＡ、ＵＳＡによって供給されるような、結合剤で補強された紙が特に好ましい。
【０１２６】
この実施形態の変法においては、多孔性材料は抗体により含浸され、乾燥され、すぐに使用できる装置が、場合により新鮮抗体試薬を必要とせずに、血液検体の分類のために直ちに使用できるように、血液型分類試験が実施されるまでの期間保存されることができる。抗体による多孔性材料の含浸は、受動的、すなわち単に抗体溶液を多孔性材料に添加し、周囲温度または高温で、および大気圧下でまたは真空中で、乾燥させることによってであり得る。もしくはこの含浸は、場合により、グルタルアルデヒドを介した様々な物質への結合、臭化シアン、塩化シアヌルまたは過ヨウ素酸塩を介した多糖ベースの物質への結合、シランを介したガラスへの結合のような、当分野で周知の様々な方法による多孔性材料のマトリックスへの抗体の能動的化学結合を含み得る。加えて、抗体は、場合により最初に粒子（例えばラテックス）に結合させることができ、このような抗体被覆粒子を、次に、多孔性材料に包埋する。これらおよびさらなる方法は、ＤｅｎｔとＡｓｌａｍ、１９９８、Ｄｅａｎら、１９８５等によって詳述されている。
【０１２７】
本発明は、赤血球の懸濁液１滴を血液型に対する抗体をあらかじめ含浸させた多孔表面上に置くこと；洗浄液を前記滴の位置に置くこと；この位置の表面を赤色の存在に関して観察することを含む、血液型分類のための方法を提供する。
【０１２８】
上記血液型分類実施形態はまた、赤血球の血液型抗原の判定（正血液型分類）または定義された血液型の赤血球を用いるときは特異的抗血液型抗体の存在の判定（逆血液型分類）のいずれかのための方法を提供する。いずれの組合せにおいても、本発明の実施形態は、試験検体として分離されていない全血の使用を可能にする。全血検体の逆判定／分類のためにこの実施形態を用いるためには、試験において使用する前に赤血球を洗浄すべきである。
【０１２９】
従って、本発明の好ましい実施形態において、洗浄され、定義された赤血球の懸濁液を選択位置で多孔表面に置くこと；逆分類を判定すべき全血の検体を規定赤血球の位置に置くこと；さらに洗浄液を、全血の検体および規定赤血球の位置に置くこと；および選択位置の表面を赤色の存在に関して観察することを含む、全血検体の逆判定／分類のための方法が提供される。
【０１３０】
本発明の逆判定適用のさらなる実施形態において、前記手順への以下の変更を別々にまたは組み合わせて使用することができる。
【０１３１】
（ａ）洗浄液の配置を０．５から２０分間、好ましくは約１から約１０分間遅らせること；
（ｂ）多孔表面に、塩、糖、ポリマーおよびバイオポリマーを含むがこれらに限定されない、様々な物質を含浸させること、但し、前記ポリマーは、約０．１から約１０％ｗ／ｖ、好ましくは約０．５から約２％ｗ／ｖの濃度のＰＶＡ（ポリビニルアルコール）、ＰＶＰ（ポリビニルポリピロリドン）、ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）を含む。
【０１３２】
本発明の血液型判定適用の別の好ましい実施形態において、本発明を輸血前の交差適合試験のために使用することができる。この交差適合試験は、実際の輸血の前の最終試験工程である。この試験において医療スタッフは、受血者の血液中に供血者の血液に対する抗体が存在するかどうかを調べる。
【０１３３】
本発明の方法は、供血者の血液からの洗浄および／または希釈赤血球と受血者の血漿または血清の適合性を調べるために使用できる。しかし、交差適合試験法が、場合によりおよび好ましくは、受血者の血清または血漿１滴を多孔表面上に置くこと（但し、この表面の孔は個々の赤血球の垂直に通過することを許容する大きさである。）；場合により受血者の血液の滴と同じかまたは同様の位置に供血者の血液１滴を表面に置くこと；血液の滴の位置に洗浄液を置くこと；この位置の表面を赤色の存在に関して観察すること（このような色は、赤血球の凝集反応が起こったことおよび供血者の血液が受血者の血液と不適合であることを示す。）を含むように、受血者の血漿または血清との交差適合試験のための赤血球のソースとして供血者からの未処理全血を用いることにより、試験手順を著しく簡略化することができる。
【０１３４】
交差適合試験法はまた、場合により上記の最初の２工程の順序を逆にして実施することもできる。従って、本発明のさらなる実施形態は、好ましくは供血者の赤血球の懸濁液１滴を多孔表面上に置くこと（但し、この表面の孔は個々の赤血球の垂直に通過することを許容する大きさである。）；場合により赤血球懸濁液の滴と同じかまたは同様の位置で、受血者の血清または血漿１滴を表面に置くこと；場合により赤血球懸濁液の滴と同じかまたは同様の位置に、抗グロブリンまたは抗補体試薬を含む溶液１滴を表面に置くこと；前記滴の位置に洗浄液を置くこと；この位置の表面を赤色の存在に関して観察することを含む、予期せぬ血液型に関する輸血前交差適合試験を提供する。
【０１３５】
受血者の血液から血清または血漿を分離するために遠心分離のような検査装置が使用できない、ベッドサイドでの使用により一層適するように手順をさらに簡略化するために、以下の方法は、供血者と受血者からの全血検体を使用し、全血からの血球の通過を防ぐ第一フィルターを第二フィルターの多孔表面に置くこと（但し、第二フィルターの孔は個々の赤血球の通過を許容する大きさである。）；受血者の全血１滴を第一フィルター上に置き、全血のろ液が第二フィルターの表面をぬらすように、検体の少なくとも一部が第一フィルターに入るおよび／または第一フィルターによって吸収されるのを待つこと；第一フィルターを除去すること；場合により除去前の第一フィルターと同じかまたは同様の位置に、供血者の血液１滴を表面に置くこと；血液の滴の位置に洗浄液を置くこと；この位置の表面を赤色の存在に関して観察すること（このような色は、赤血球の凝集反応が起こったことおよび供血者の血液が受血者の血液と不適合であることを示す。）を含む。
【０１３６】
予期せぬまたは弱い血液型抗原および抗体を検出するために、血液型判定および交差適合試験手順は、このような抗原および抗体から可視凝集反応を得るために抗グロブリン試薬（クームス試薬とも呼ばれる。）または抗補体試薬の添加を必要とする。本発明のさらなる実施形態は、血液型分類および交差適合試験法へのこのような試薬の簡単な組込みを可能する。従って、本発明に従った血液型判定法は、場合により赤血球の懸濁液１滴を多孔表面上に置くこと（但し、この表面の孔は個々の赤血球の垂直通過を許容する大きさである。）；場合により赤血球懸濁液の滴と同じかまたは同様の位置に、血液型抗原に対する抗体を含む溶液１滴を表面に置くこと；場合により赤血球懸濁液の滴と同じかまたは同様の位置に、抗グロブリンまたは抗補体試薬を含む溶液１滴を表面に置くこと；場合により前記滴と同じかまたは同様の位置に、洗浄液を表面に置くこと；この位置の表面を赤色の存在に関して観察すること（このような色は、赤血球の凝集反応が起こったことおよび赤血球が、抗体が対象とする抗原を担持することを示す。）を含む。
【０１３７】
クームス試薬を含む前記方法において、本発明の性能を損なうことなく最初の３工程の順序を変更することができる。本発明のもう１つの実施形態において、クームス試薬をあらかじめフィルターに含浸させ、乾燥して、即時使用装置が、新鮮抗体試薬を必要とせずに血液検体の分類のために直ちに使用できるように、血液型分類または交差適合試験が実施されるまでの期間保存することができる。この実施形態によれば、クームス試薬を用いる血液型分類または適合試験のための方法は、好ましくは、受血者の血清または血漿１滴を、あらかじめクームス試薬を含浸させた多孔表面上に置くこと（但し、この表面の孔は個々の赤血球の垂直通過を許容する大きさである。）；場合により受血者の血清または血漿の滴と同じかまたは同様の位置に、供血者の赤血球の懸濁液１滴を多孔表面に置くこと；場合により前記滴と同じかまたは同様の位置に、洗浄液を表面に置くこと；この位置の表面を赤色の存在に関して観察することを含む。またこの実施形態は、場合により、最初の工程で受血者の全血を使用できるように除去可能な血球フィルターを装着することもできる。
【０１３８】
本発明の方法の説明の上記全ての場合に、（血液または血清／血漿または抗体試薬の）「滴」は、以下の１以上のような装置で送達される、より定義された容量の液体で置換され得る。ピペット、マイクロピペット、キャピラリー、点滴注入器、滴瓶、注射器、ループ、開放ループおよび／または液体の取り扱いのための他の何らかの機構、容器または装置。これらの装置は、試験を実施するために必要である、液体の全容量の送達を容易にするために多孔表面に接触していてもよい。
【０１３９】
図２を参照して、装置１００およびキットも本発明の教示に従って構築し得る。この装置は、上部のフィルター１０４（多孔層）、所望による吸着層１０６、所望によるカバー１０８、フィルター層（１０４）の上の所望によるメッシュ層１０９（フィルター内への試験成分の迅速な浸透およびこれらの試験成分の混合を促進する。）、および（試験検体を置き、試験を実施する位置を規定する穴１１２を有する）所望による表カバー１１０から形成されるカード１０２の構造をとることができる。表カバーの穴１１２は、規定容量の洗浄液（示していない。）による反応物の洗浄を容易にするために、壁に取り囲まれ得、これによって規定容量を有するウエルを創造し得る。加えて、フィルターを通る液体の流れの速度を低減し、これによって弱い抗原および／または低レベルの抗体に対する本発明の感受性を高めるために、場合により水溶性フィルムをフィルターと吸収層の間に配置してもよい（示していない。）。
【０１４０】
この装置の好ましい実施形態において、このカードは試験を実施するための多数の位置を有する。この位置は、場合により、形状の印刷、切り出し形状を有する接着フィルムのような様々な方法によって印付けすることができる。このカード全体を、場合によりケース１１４に納めることができる。装置１００は、反応区域を有するフィルターを取り出し、乾燥して、結果の記録としてファイル／保存することができるように、使用後の解体を許容するように構築し得る。このカードは、場合により、受血者および供血者の特定、日付、装置の特定その他のような様々な項目の情報を書き込むための領域を有し得る。１以上のカード、および必要な試薬、洗浄液、対照液および器具の全部または一部を含むキットは、本発明のもう１つの実施形態である。
【０１４１】
本発明の好ましい実施形態において、抗血液型抗体および／または抗グロブリンおよび抗補体試薬の全部または一部を、湿潤または好ましくは乾燥形態で、多孔表面に含浸させることができる。従って、誤りを予防し、手動操作の数を低減しながら、単一または多数の抗血液型および／または抗グロブリンおよび／または抗補体試薬を血液型の鑑別同定を促進するために使用可能にし得る。このような装置は、場合により陽性および陰性対照試験領域を含み得る。陰性対照領域は、場合により非免疫血清（例えば全く輸血を受けたことがないＡＢ／Ｒｈ陽性男性からの血清など）をこの位置でフィルターに含浸させることによって実現し得る。陽性対照領域は、場合により抗赤血球抗血清または抗体（例えば抗グリコホリン抗体など）をこの位置でフィルターに含浸させることによって実現し得る。
【０１４２】
本発明のさらにもう１つの実施形態において、多数の試験領域（単一検体の血液型分類用など）を有する装置が提供される。この装置は、試験検体および場合により洗浄液が一工程で試験領域全体に拡散するのを促進するように構築し得る。このような実施形態は、（ａ）試験領域全部を、好ましくは親水性の、１枚のメッシュで覆うこと；（ｂ）試験領域全体の上に非吸収性カバーを置くことによって試験領域の上にキャピラリー空隙を創造することのような、様々な設計要素によって実現できる。
【０１４３】
この装置はさらに、人間の視覚的評価を必要とせずに試験の結果を解釈することができる所望による計測器１１６を含み得る。計測器１１６は、好ましくは、計測器１１６が凝集反応を検出するために使用される標識またはレポーターを測定することができるようにカード１０２を受け入れている。場合により、計測器１１６は光度計であり、検体の置かれた位置から反射または散乱されるまたはこの位置を透過する光の量を測定し、これに応じて結果を判定する。この最も基本的な形態において、この計測器は、（ａ）検体の置かれた位置に入射光１１９の光線束を向ける光源１１８、（ｂ）多孔表面から反射または散乱されたまたは多孔表面を透過する光１２１を測定／検出するように位置づけられた光センサー１２０を含む。
【０１４４】
本発明のさらなる実施形態において、抗原は、場合により赤血球の検出を改善するために着色される。多孔反応表面が白色である場合、光は、場合によりおよび好ましくは、赤血球が白色表面から反射／散乱される光の量を低減するように、赤色以外、より好ましくは青色であるべきである。逆に、表面が赤色以外であるか、または場合によりおよび好ましくは黒色または青色であり、光が赤色である場合、赤血球は反射／散乱される光の量を増加させる。
【０１４５】
この計測器は、場合により以下の特徴の１以上をさらに有し得る。結果を提示するためのディスプレイおよび／またはプリンター；多数の反応領域を測定するための多数の光センサーおよび場合により多数の光源；センサーによって生成された信号を分析するための処理回路（場合によりプロセッサーおよび付属電子装置を含み得る）、フィルターまたは試験カードのためのホルダー、バッテリー、再交換可能なバッテリー、記憶装置、時間および日付機能、バーコード読取り器またはこのためのインターフェース、光学式文字認識、通信機能および医療診断装置の設計者および製造者に周知の他の特徴。この計測器は、好ましくは表示された結果を見るための透明または半透明のウインドウをさらに含む。
【０１４６】
（実施例）
以下の実施例は、本発明に従った方法およびシステムの例示的実施である。これらの実施例はいかなる意味においても限定を意図しない。
【実施例１】
【０１４７】
洗浄液
実施例を作製するときに使用した洗浄液は以下の通りであった。
Ａ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｂｅｉｔ Ｈａ’ｅｍｅｋ、Ｉｓｒａｅｌより入手したダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）。
Ｂ．４％ｗ／ｖポリエチレングリコール（ＰＥＧ）１５０００から２００００分子量（Ｆｌｕｋａ）および０．３％ｗ／ｖデキストラン硫酸ナトリウム塩（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を含む、水に１：１希釈したＰＢＳから作製した溶液。
Ｃ．０．００１から０．０１％ｗ／ｖポリオキシエチレン−１０−トリデシルエーテル（Ｓｉｇｍａ）を含むダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）。
【実施例２】
【０１４８】
血液型分類
Ａｈｌｓｔｒｏｍ Ｎｏ．１４２ろ紙の０．５×０．５ｃｍの１片を吸収性パッド上に置いた。全血２μＬをフィルターの中央にピペットで分注し、次いで抗血液型試薬（Ｇａｍｍａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．、Ｈｏｓｕｔｏｎ、ＴＸ、ＵＳＡ）２μＬを分注した。次にフィルターを洗浄液数滴（滴瓶から）で洗浄し、乾燥した。あるいは、直径４ｍｍの円のＡｈｌｓｔｒｏｍ Ｎｏ．１４２ろ紙、血液１０μＬおよび抗血液型試薬１０μＬ使用し、この後実施例１からの洗浄液Ｃ数滴を使用した。
【０１４９】
この試験を、様々な血液型の多数の血液検体（ｔｈｅ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｉｓｒａｅｌ Ｒｅｄ Ｍａｇｅｎ Ｄａｖｉｄ、Ｔｅｌ Ｈａｓｈｏｍｅｒ、Ｉｓｒａｅｌによって予備試験され、ここから受領した。）に関して反復し、これらの各々を抗Ａ、抗Ｂ、抗ＡＢおよび抗Ｄ（＝Ｒｈ）血液型試薬で検査した。Ａ−血液は、抗Ａおよび抗ＡＢ試薬でのみ赤色スポットを生じた。Ｂ−血液は、抗Ｂおよび抗ＡＢ試薬でスポットを生成した。ＡＢ−血液は、抗Ａ、抗Ｂおよび抗ＡＢ試薬と反応した。Ｏ−血液はいずれの試薬とも反応せず、Ｏ＋血液は抗Ｄ試薬とだけ反応した。
【実施例３】
【０１５０】
乾燥試薬による血液型分類
Ａｈｌｓｔｒｏｍ Ｎｏ．１４２ろ紙の０．５×０．５ｃｍ片を非吸収性表面（空の使い捨てペトリ皿の底部）に置いた。抗血液型試薬（Ｇａｍｍａ ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓＩｎｃ．、Ｈｏｓｕｔｏｎ、ＴＸ、ＵＳＡ）の５０μＬアリコートを各々のろ紙片にピペットで分注した。抗血液型試薬を含むろ紙片の入ったペトリ皿を３７℃で一晩インキュベートした。ろ紙片をこの時点で乾燥した。
【０１５１】
乾燥した抗体含浸ろ紙片が全血検体の血液型を正しく特定する能力を調べるため、これらを吸収性パッド上に置き、試験血液の１μＬアリコートを一連のろ紙パッドの各々のほぼ中央に置いた。一連のろ紙パッドは、各々抗Ａ、抗Ｂまたは抗Ｄ（＝Ｒｈ）試薬のいずれか１つを含浸させたパッドを含んだ。
【０１５２】
洗浄液ＡまたはＢの５から１０滴を置いてろ紙パッドから過剰の血液を洗浄した。次に記録保存のためにろ紙片を空気乾燥した。結果を図１に示す。Ａ−血液が、抗Ａ試薬を含浸させたろ紙片でのみスポットを生成したことは明らかである。Ｂ−血液は抗Ｂ含浸ろ紙片でスポットを生成した。ＡＢ−血液は、抗Ａおよび抗Ｂろ紙片の両方と反応した。Ｏ−血液は、ろ紙片のいずれとも反応せず、２つのＯ＋血液検体は、抗Ｄ試薬を含浸させたろ紙片とのみ反応した。
【０１５３】
手順への以下の変更は改善された信号を生じさせると思われ、場合によりおよび好ましくは本発明に含まれる。
１．フィルターとこの下の吸着パッドの間での液体移動速度を制御するために水溶性フィルムを四角いフィルターの下に置く。
２．フィルター１片当りの抗血液型抗血清の容量：２５μＬ
３．フィルター１片当りの血液検体の容量：１０μＬ
４．洗浄手順：洗浄液Ｂ２滴（実施例１）、続いてＰＢＳ数滴。
【０１５４】
上記容量は説明例として提示するものであり、いかなる意味においても本発明を限定することを意味しないことに留意すべきである。
【実施例４】
【０１５５】
交差適合試験
ＡＢＯ／Ｒｈ型について予備試験した全血検体をｔｈｅ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｉｓｒａｅｌ Ｒｅｄ Ｍａｇｅｎ Ｄａｖｉｄ、Ｔｅｌ Ｈａｓｈｏｍｅｒ、Ｉｓｒａｅｌから入手した。血漿分画は血液検体の一部に由来し、受血者検体についてのモデルとして使用した。
【０１５６】
Ａｈｌｓｔｒｏｍ Ｎｏ．１４２ろ紙の０．５×０．５ｃｍ片を吸収性パッド上に置いた。供血者の全血検体２μＬをフィルターの中央にピペットで分注し、次いで受血者の血漿１０μＬを分注した。次にフィルターを洗浄液数滴（滴瓶から）で洗浄し、乾燥した。以下の表に従って、受血者と供血者の間に不適合性が存在するときのみ、洗浄後にフィルターに赤色の血液の点が残った：
【０１５７】
【表１】
【０１５８】
従ってこれらの結果は、本発明が、血液型試験および／または判定法のために有用であるのに十分な感受性および十分な再現性と信頼性を有することを明らかに示す。
【実施例５】
【０１５９】
逆血液型分類
Ａｈｌｓｔｒｏｍ Ｎｏ．１４２ろ紙の直径４ｍｍの円を吸収性パッド上に置いた。定義されたＡ１またはＢ型試験赤血球（ＤｉａＭｅｄ ＡＧ、ｓ／Ｍｏｒａｔ、ＳｗｉｔｚｅｒｌａｎｄからのＩＤ−ＤｉａＣｅｌｌ）の１０Ｘ濃縮懸濁液１５μＬをフィルターの中央にピペットで分注し、次いで全血検体１０から５０μＬを分注した。次にフィルターを周囲室温で５分間インキュベートし、洗浄液Ａ（実施例１）数滴（滴瓶から）で洗って、洗浄したフィルター円上での赤色形成に関して観察した。
【０１６０】
この試験を、様々な血液型からの全血の多数の検体（ｔｈｅ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｂｌｏｏｄ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｉｓｒａｅｌ Ｒｅｄ Ｍａｇｅｎ Ｄａｖｉｄ、Ｔｅｌ Ｈａｓｈｏｍｅｒ、Ｉｓｒａｅｌによって予備試験され、ここから受領した。）に関して反復し、これらの各々をＡ１およびＢ赤血球試薬で検査した。Ａ１型血液型検体は、Ｂ型赤血球でのみ赤色スポットを生じた。Ｂ型血液型検体は、Ａ１型赤血球でのみスポットを生成した。ＡＢ型血液検体は、Ａ１またはＢ赤血球で赤色スポットを生成しなかった。Ｏ型血液型検体は、Ａ１またはＢ赤血球の両方で赤色スポットを生成した。
【０１６１】
本発明をこの特定の実施形態に関して説明したが、多くの代替法、修正および変法が当業者に明らかであることは明白である。従って、付属の特許請求の精神および広い範囲内に属するこのような全ての代替法、修正および変法を包含することが意図されている。この明細書の中で言及する全ての公報、特許および特許出願は、各々個々の公報、特許および特許出願が参照してここに組み込まれることを特定して個別に指示されているのと同程度に、これらの全体が参照して本明細書に組み込まれる。加えて、本出願のいかなる参考文献の引用または特定も、このような参考文献が本発明に対する先行技術として使用可能であることの容認と解釈されるべきではない。
【０１６２】
【表２】
【図面の簡単な説明】
【０１６３】
【図１】本発明の教示に従って実施した、血液型分類試験の結果を示す。
【図２】本発明の教示に従って構築した装置およびキットの図式的表示を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
粒子懸濁液の一定容量および溶液または懸濁液（前記溶液または懸濁液は凝集剤を含む。）の一定容量を、フィルターの表面上の実質的に同じ選択位置に置くこと（前記フィルターは個々の非凝集粒子が前記フィルターの前記表面に対して垂直方向に通過することを許容するように構築されている。）、
場合により洗浄液を前記凝集剤と実質的に同じ位置に置くこと、および
前記選択位置の前記表面を粒子の存在に関して観察すること
を含む、粒子懸濁液中の粒子凝集の検出および／または視覚化のための方法。
【請求項２】
前記粒子懸濁液の前記容量が、凝集剤を含む前記溶液または懸濁液の前記容量が置かれる前に前記選択位置に置かれる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記フィルターが、多孔体の多孔表面を含み、前記表面の孔が少なくとも個々の粒子の通過を許容する大きさである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記多孔表面が、本質的に吸収性でありまたは吸収性物質に結合した多孔層を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記多孔層と前記吸収性物質の間に位置する水溶性フィルムをさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記フィルターを乾燥することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記粒子懸濁液の前記容量および前記凝集剤の溶液または懸濁液の前記容量が、各々送達可能な容量を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記送達可能容量が少なくともマイクロリットルを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記粒子懸濁液の粒子が結合対の成員（ＭＢＰ）で被覆されている、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記凝集剤がＭＢＰを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記粒子が少なくとも１個の天然粒子または合成粒子を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記粒子が検出可能な標識を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記標識が、色素、放射性物質、磁性または常磁性物質、蛍光物質および発光物質を含む群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記粒子懸濁液が第一血液産物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記第一血液産物が全血を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記第一血液産物が血液成分を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記血液成分が懸濁液中に存在する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記第一血液産物が赤血球を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記第一血液産物が、未洗浄赤血球、未希釈赤血球または未洗浄および未希釈赤血球を含む群から選択される少なくとも１つを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記方法が、遠心分離なしでもしくは前記粒子懸濁液または前記凝集剤と前記第一血液産物の予備混合なしで操作される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記凝集剤が第二血液産物を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２２】
前記凝集剤が血液型群に対する抗体を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記凝集剤が血清または血漿を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
凝集剤を含む前記溶液または懸濁液の前記容量が、前記粒子懸濁液の前記容量が置かれる前に前記選択位置に置かれる、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記フィルターが、前記凝集剤が含浸されている、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記フィルターが、抗グロブリン試薬および抗補体試薬を含む群から選択される試薬が含浸されている、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記試薬がクームス（Ｃｏｏｍｂｓ）試薬を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記洗浄液が塩溶液である、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記塩溶液が等張である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記塩溶液が食塩水である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記食塩水が緩衝されている、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記緩衝食塩水がリン酸緩衝食塩水である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記洗浄液が付加的な洗浄成分をさらに含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
前記付加的成分がポリマーを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ポリマーが、ポリエチレングリコールおよびデキストラン硫酸ナトリウム塩を含む群から選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ポリマーの濃度範囲が浸透圧平衡の維持のために適切である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記濃度範囲が、約０．０００１から約２０％ｗ／ｖである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記洗浄液が、洗浄剤および界面活性剤の少なくとも１つをさらに含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３９】
前記洗浄剤が、ポリオキシエチレン−１０−トリデシルエーテルを含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記洗浄剤または界面活性剤が、０．０００１から０．１％ｗ／ｖの範囲内の濃度を有する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記濃度が、０．００１から０．０１％ｗ／ｖの範囲内である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
フィルター（前記フィルターは、前記フィルターの表面に置かれた個々の非凝集粒子が前記表面に対して垂直方向に通過することを許容するように構築されている。）を含む、試料中の粒子凝集の検出および／または視覚化のための装置。
【請求項４３】
前記フィルターの上面に位置するメッシュをさらに含む、請求項４２に記載の装置。
【請求項４４】
前記凝集剤を受け取り、前記凝集剤から粒子を除去するための追加のフィルターをさらに含む、請求項４２に記載の装置。
【請求項４５】
前記凝集剤が、全血または血液成分中の抗体を含む、請求項４４に記載の装置。
【請求項４６】
前記追加のフィルターが、前記粒子含有凝集剤の添加後および粒子含有試料が前記第一フィルターに添加される前に取り除かれる、請求項４４に記載の装置。
【請求項４７】
試料を受け取るためのフィルター；
同じく前記フィルター上に置くための凝集剤；および
前記凝集剤と試料の後に前記フィルター上に置くための、場合により洗浄液
を含む、請求項１に記載の方法を実施するためのキット。
【請求項４８】
凝集反応を検出するおよび／または測定するための計測器をさらに含む、請求項４７に記載のキット。
【請求項４９】
前記計測器が光度計を含み、前記光度計が、（ａ）前記フィルターの前記多孔表面に光を送るための光源、（ｂ）前記多孔表面によって反射または散乱された光を測定するように位置づけられた光センサーを含む、請求項４８に記載のキット。
【請求項５０】
前記測定光を視覚信号に変換するための変換器および前記信号を表示するためのディスプレイをさらに含む、請求項４９に記載のキット。
【請求項５１】
少なくとも１つの追加の光センサーをさらに含む、請求項４９に記載のキット。
【請求項５２】
少なくとも１つの追加の光源をさらに含む、請求項４９に記載のキット。
【請求項５３】
処理回路をさらに含む、請求項４９に記載のキット。
【請求項５４】
前記フィルターのためのホルダーをさらに含む、請求項４９に記載のキット。
【請求項５５】
前記光源が着色光を提供する、請求項４９に記載のキット。
【請求項５６】
前記凝集剤を受け取り、前記凝集剤から粒子を除去するための追加のフィルターをさらに含む、請求項４９に記載のキット。
【請求項５７】
前記追加のフィルターが取り外し可能である、請求項５６に記載のキット。
【請求項５８】
試料と前記凝集剤を受け取るための、試薬が場合により含浸されているフィルター；および
前記凝集溶液と試料の後に前記フィルター上に置くための、場合により洗浄液
を含む、請求項１に記載の方法を実施するためのキット。
【請求項５９】
前記試薬がクームス（Ｃｏｏｍｂｓ’）試薬を含む、請求項５８に記載のキット。
【請求項６０】
前記フィルターに含浸されている前記試薬が凝集剤である、請求項５８に記載のキット。
【請求項６１】
複数の試験成分の間の凝集反応の存在または不在を検出するための装置であり、
前記装置はフィルターを含み、前記フィルターは、上面を有し、試験成分の流動の方向が前記上面に対して垂直であるように構築されており、
前記試験成分は、前記上面に適用され、場合により洗浄工程に供され、
凝集反応を受けた試験成分は前記上面において検出可能である、前記装置。
【請求項６２】
試験成分が、全血または血液分画または血液成分の少なくとも１つを含む、請求項６１に記載の装置。
【請求項６３】
凝集反応の存在または不在が視覚的に検出される、請求項６１に記載の装置。
【請求項６４】
前記存在または不在が、フィルターを裸眼で見ることによって検出される、請求項６３に記載の装置。
【請求項６５】
凝集反応の存在または不在を検出するための計測器をさらに含む、請求項６１に記載の装置。
【請求項６６】
第一血液産物の一定容量および溶液または懸濁液（前記溶液または懸濁液は凝集剤を含む。）の一定容量を、フィルターの表面上の実質的に同じ選択位置に置くこと（前記フィルターは個々の非凝集粒子が前記フィルターの前記表面に対して垂直方向に通過することを許容するように構築されている。）、
場合により洗浄液を前記凝集剤と実質的に同じ位置に置くこと；および
前記選択位置の前記表面を粒子の存在に関して観察すること
を含み、
前記粒子の存在は前記第一血液産物と前記第二血液産物の間の抗原−抗体相互作用の存在を示す、第一血液産物の型別のための方法。
【請求項６７】
知られていない抗原成分の第一血液産物の一定容量および溶液または懸濁液（前記溶液または懸濁液は知られている抗体を含む凝集剤を含有している。）の一定容量を、フィルターの表面上の実質的に同じ選択位置に置くこと（前記フィルターは個々の非凝集粒子がフィルターの表面に対して垂直方向に通過することを許容するように構築されている。）、
場合により洗浄液を前記凝集剤と実質的に同じ位置に置くこと、および
前記選択位置の前記表面を粒子の存在に関して観察すること
を含み、
前記粒子の存在は、前記知られている抗体が結合する抗原が前記第一血液産物中に存在することを示す、知られていない抗原成分の、第一血液産物の正血液型判定のための方法。
【請求項６８】
前記第一血液産物が赤血球を含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記赤血球が、前記フィルターの前記表面に置かれる前に洗浄される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記凝集剤が第二血液産物を含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項７１】
前記凝集剤が血清または血漿を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記第二血液産物が全血を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
前記第二血液産物が血液成分を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７４】
前記第二血液成分が懸濁液中に存在する、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記第二血液産物が赤血球を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７６】
前記第二血液産物が、未洗浄赤血球、未希釈赤血球または未洗浄および未希釈赤血球を含む群から選択される少なくとも１つを含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
知られていない抗原成分の第一血液産物の一定容量および溶液または懸濁液（前記溶液または懸濁液は知られている抗体を含む凝集剤を含有している。）の一定容量を、フィルターの表面上の実質的に同じ選択位置に置くこと（前記フィルターは個々の非凝集粒子がフィルターの表面に対して垂直方向に通過することを許容するように構築されている。）、
場合により洗浄液を前記凝集剤と実質的に同じ位置に置くこと、および
前記選択位置の前記表面を粒子の存在に関して観察すること
を含み、
前記粒子の存在は、前記知られている抗体が結合する抗原が前記第一血液産物中に存在することを示す、知られていない抗原成分の、第一血液産物の逆血液型判定のための方法。
【請求項７８】
前記第一血液産物が全血を含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記第一血液産物が赤血球を含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
前記赤血球が、前記フィルターの前記表面に置かれる前に洗浄される、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記凝集剤が第二血液産物を含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項８２】
前記凝集剤が血清または血漿を含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記第二血液産物が全血を含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８４】
前記第二血液産物が血液成分を含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８５】
前記血液成分が懸濁液中に存在する、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記第二血液産物が赤血球を含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８７】
前記第二血液産物が、未洗浄赤血球、未希釈赤血球、未洗浄および未希釈赤血球。洗浄赤血球、洗浄および希釈赤血球、濃縮赤血球または洗浄および未希釈赤血球を含む群から選択される少なくとも１つを含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８８】
前記洗浄液を置くことが、前記凝集剤を置いた後の約０．５から約２０分の期間に実施される、請求項７７に記載の方法。
【請求項８９】
前記洗浄液を置くことが、前記凝集剤を置いた後の約１から約１０分の期間に実施される、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記フィルターが、塩、糖、ポリマー、バイオポリマーならびにこれらの組合せおよび混合物から成る群より選択される物質が含浸されている、請求項７７に記載の方法。
【請求項９１】
前記ポリマーが、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンおよびポリエチレングリコールから成る群より選択される、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記ポリマーの濃度が、約０．１から約１０％ｗ／ｖの範囲内である、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記濃度が約０．５から約２％ｗ／ｖの範囲内である、請求項９２に記載の方法。
【請求項１】
粒子懸濁液の一定容量および溶液または懸濁液（前記溶液または懸濁液は凝集剤を含む。）の一定容量を、フィルターの表面上の実質的に同じ選択位置に置くこと（前記フィルターは個々の非凝集粒子が前記フィルターの前記表面に対して垂直方向に通過することを許容するように構築されている。）、
場合により洗浄液を前記凝集剤と実質的に同じ位置に置くこと、および
前記選択位置の前記表面を粒子の存在に関して観察すること
を含む、粒子懸濁液中の粒子凝集の検出および／または視覚化のための方法。
【請求項２】
前記粒子懸濁液の前記容量が、凝集剤を含む前記溶液または懸濁液の前記容量が置かれる前に前記選択位置に置かれる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記フィルターが、多孔体の多孔表面を含み、前記表面の孔が少なくとも個々の粒子の通過を許容する大きさである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記多孔表面が、本質的に吸収性でありまたは吸収性物質に結合した多孔層を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記多孔層と前記吸収性物質の間に位置する水溶性フィルムをさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記フィルターを乾燥することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記粒子懸濁液の前記容量および前記凝集剤の溶液または懸濁液の前記容量が、各々送達可能な容量を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記送達可能容量が少なくともマイクロリットルを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記粒子懸濁液の粒子が結合対の成員（ＭＢＰ）で被覆されている、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記凝集剤がＭＢＰを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記粒子が少なくとも１個の天然粒子または合成粒子を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記粒子が検出可能な標識を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記標識が、色素、放射性物質、磁性または常磁性物質、蛍光物質および発光物質を含む群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記粒子懸濁液が第一血液産物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記第一血液産物が全血を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記第一血液産物が血液成分を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記血液成分が懸濁液中に存在する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記第一血液産物が赤血球を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記第一血液産物が、未洗浄赤血球、未希釈赤血球または未洗浄および未希釈赤血球を含む群から選択される少なくとも１つを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記方法が、遠心分離なしでもしくは前記粒子懸濁液または前記凝集剤と前記第一血液産物の予備混合なしで操作される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記凝集剤が第二血液産物を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２２】
前記凝集剤が血液型群に対する抗体を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記凝集剤が血清または血漿を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
凝集剤を含む前記溶液または懸濁液の前記容量が、前記粒子懸濁液の前記容量が置かれる前に前記選択位置に置かれる、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記フィルターが、前記凝集剤が含浸されている、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記フィルターが、抗グロブリン試薬および抗補体試薬を含む群から選択される試薬が含浸されている、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記試薬がクームス（Ｃｏｏｍｂｓ）試薬を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記洗浄液が塩溶液である、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記塩溶液が等張である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記塩溶液が食塩水である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記食塩水が緩衝されている、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記緩衝食塩水がリン酸緩衝食塩水である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記洗浄液が付加的な洗浄成分をさらに含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
前記付加的成分がポリマーを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ポリマーが、ポリエチレングリコールおよびデキストラン硫酸ナトリウム塩を含む群から選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ポリマーの濃度範囲が浸透圧平衡の維持のために適切である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記濃度範囲が、約０．０００１から約２０％ｗ／ｖである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記洗浄液が、洗浄剤および界面活性剤の少なくとも１つをさらに含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３９】
前記洗浄剤が、ポリオキシエチレン−１０−トリデシルエーテルを含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記洗浄剤または界面活性剤が、０．０００１から０．１％ｗ／ｖの範囲内の濃度を有する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記濃度が、０．００１から０．０１％ｗ／ｖの範囲内である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
フィルター（前記フィルターは、前記フィルターの表面に置かれた個々の非凝集粒子が前記表面に対して垂直方向に通過することを許容するように構築されている。）を含む、試料中の粒子凝集の検出および／または視覚化のための装置。
【請求項４３】
前記フィルターの上面に位置するメッシュをさらに含む、請求項４２に記載の装置。
【請求項４４】
前記凝集剤を受け取り、前記凝集剤から粒子を除去するための追加のフィルターをさらに含む、請求項４２に記載の装置。
【請求項４５】
前記凝集剤が、全血または血液成分中の抗体を含む、請求項４４に記載の装置。
【請求項４６】
前記追加のフィルターが、前記粒子含有凝集剤の添加後および粒子含有試料が前記第一フィルターに添加される前に取り除かれる、請求項４４に記載の装置。
【請求項４７】
試料を受け取るためのフィルター；
同じく前記フィルター上に置くための凝集剤；および
前記凝集剤と試料の後に前記フィルター上に置くための、場合により洗浄液
を含む、請求項１に記載の方法を実施するためのキット。
【請求項４８】
凝集反応を検出するおよび／または測定するための計測器をさらに含む、請求項４７に記載のキット。
【請求項４９】
前記計測器が光度計を含み、前記光度計が、（ａ）前記フィルターの前記多孔表面に光を送るための光源、（ｂ）前記多孔表面によって反射または散乱された光を測定するように位置づけられた光センサーを含む、請求項４８に記載のキット。
【請求項５０】
前記測定光を視覚信号に変換するための変換器および前記信号を表示するためのディスプレイをさらに含む、請求項４９に記載のキット。
【請求項５１】
少なくとも１つの追加の光センサーをさらに含む、請求項４９に記載のキット。
【請求項５２】
少なくとも１つの追加の光源をさらに含む、請求項４９に記載のキット。
【請求項５３】
処理回路をさらに含む、請求項４９に記載のキット。
【請求項５４】
前記フィルターのためのホルダーをさらに含む、請求項４９に記載のキット。
【請求項５５】
前記光源が着色光を提供する、請求項４９に記載のキット。
【請求項５６】
前記凝集剤を受け取り、前記凝集剤から粒子を除去するための追加のフィルターをさらに含む、請求項４９に記載のキット。
【請求項５７】
前記追加のフィルターが取り外し可能である、請求項５６に記載のキット。
【請求項５８】
試料と前記凝集剤を受け取るための、試薬が場合により含浸されているフィルター；および
前記凝集溶液と試料の後に前記フィルター上に置くための、場合により洗浄液
を含む、請求項１に記載の方法を実施するためのキット。
【請求項５９】
前記試薬がクームス（Ｃｏｏｍｂｓ’）試薬を含む、請求項５８に記載のキット。
【請求項６０】
前記フィルターに含浸されている前記試薬が凝集剤である、請求項５８に記載のキット。
【請求項６１】
複数の試験成分の間の凝集反応の存在または不在を検出するための装置であり、
前記装置はフィルターを含み、前記フィルターは、上面を有し、試験成分の流動の方向が前記上面に対して垂直であるように構築されており、
前記試験成分は、前記上面に適用され、場合により洗浄工程に供され、
凝集反応を受けた試験成分は前記上面において検出可能である、前記装置。
【請求項６２】
試験成分が、全血または血液分画または血液成分の少なくとも１つを含む、請求項６１に記載の装置。
【請求項６３】
凝集反応の存在または不在が視覚的に検出される、請求項６１に記載の装置。
【請求項６４】
前記存在または不在が、フィルターを裸眼で見ることによって検出される、請求項６３に記載の装置。
【請求項６５】
凝集反応の存在または不在を検出するための計測器をさらに含む、請求項６１に記載の装置。
【請求項６６】
第一血液産物の一定容量および溶液または懸濁液（前記溶液または懸濁液は凝集剤を含む。）の一定容量を、フィルターの表面上の実質的に同じ選択位置に置くこと（前記フィルターは個々の非凝集粒子が前記フィルターの前記表面に対して垂直方向に通過することを許容するように構築されている。）、
場合により洗浄液を前記凝集剤と実質的に同じ位置に置くこと；および
前記選択位置の前記表面を粒子の存在に関して観察すること
を含み、
前記粒子の存在は前記第一血液産物と前記第二血液産物の間の抗原−抗体相互作用の存在を示す、第一血液産物の型別のための方法。
【請求項６７】
知られていない抗原成分の第一血液産物の一定容量および溶液または懸濁液（前記溶液または懸濁液は知られている抗体を含む凝集剤を含有している。）の一定容量を、フィルターの表面上の実質的に同じ選択位置に置くこと（前記フィルターは個々の非凝集粒子がフィルターの表面に対して垂直方向に通過することを許容するように構築されている。）、
場合により洗浄液を前記凝集剤と実質的に同じ位置に置くこと、および
前記選択位置の前記表面を粒子の存在に関して観察すること
を含み、
前記粒子の存在は、前記知られている抗体が結合する抗原が前記第一血液産物中に存在することを示す、知られていない抗原成分の、第一血液産物の正血液型判定のための方法。
【請求項６８】
前記第一血液産物が赤血球を含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記赤血球が、前記フィルターの前記表面に置かれる前に洗浄される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記凝集剤が第二血液産物を含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項７１】
前記凝集剤が血清または血漿を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記第二血液産物が全血を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
前記第二血液産物が血液成分を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７４】
前記第二血液成分が懸濁液中に存在する、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記第二血液産物が赤血球を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７６】
前記第二血液産物が、未洗浄赤血球、未希釈赤血球または未洗浄および未希釈赤血球を含む群から選択される少なくとも１つを含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
知られていない抗原成分の第一血液産物の一定容量および溶液または懸濁液（前記溶液または懸濁液は知られている抗体を含む凝集剤を含有している。）の一定容量を、フィルターの表面上の実質的に同じ選択位置に置くこと（前記フィルターは個々の非凝集粒子がフィルターの表面に対して垂直方向に通過することを許容するように構築されている。）、
場合により洗浄液を前記凝集剤と実質的に同じ位置に置くこと、および
前記選択位置の前記表面を粒子の存在に関して観察すること
を含み、
前記粒子の存在は、前記知られている抗体が結合する抗原が前記第一血液産物中に存在することを示す、知られていない抗原成分の、第一血液産物の逆血液型判定のための方法。
【請求項７８】
前記第一血液産物が全血を含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記第一血液産物が赤血球を含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
前記赤血球が、前記フィルターの前記表面に置かれる前に洗浄される、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記凝集剤が第二血液産物を含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項８２】
前記凝集剤が血清または血漿を含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記第二血液産物が全血を含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８４】
前記第二血液産物が血液成分を含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８５】
前記血液成分が懸濁液中に存在する、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記第二血液産物が赤血球を含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８７】
前記第二血液産物が、未洗浄赤血球、未希釈赤血球、未洗浄および未希釈赤血球。洗浄赤血球、洗浄および希釈赤血球、濃縮赤血球または洗浄および未希釈赤血球を含む群から選択される少なくとも１つを含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８８】
前記洗浄液を置くことが、前記凝集剤を置いた後の約０．５から約２０分の期間に実施される、請求項７７に記載の方法。
【請求項８９】
前記洗浄液を置くことが、前記凝集剤を置いた後の約１から約１０分の期間に実施される、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記フィルターが、塩、糖、ポリマー、バイオポリマーならびにこれらの組合せおよび混合物から成る群より選択される物質が含浸されている、請求項７７に記載の方法。
【請求項９１】
前記ポリマーが、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンおよびポリエチレングリコールから成る群より選択される、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記ポリマーの濃度が、約０．１から約１０％ｗ／ｖの範囲内である、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記濃度が約０．５から約２％ｗ／ｖの範囲内である、請求項９２に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２００８−５２０９６８（Ｐ２００８−５２０９６８Ａ）
【公表日】平成２０年６月１９日（２００８．６．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５４０８３５（Ｐ２００７−５４０８３５）
【出願日】平成１７年１１月１５日（２００５．１１．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＬ２００５／００１１９９
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０５１５４８
【国際公開日】平成１８年５月１８日（２００６．５．１８）
【出願人】（３０２０４４５９１）インバーネス・メデイカル・スウイツツアーランド・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング (38)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年６月１９日（２００８．６．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１１月１５日（２００５．１１．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＬ２００５／００１１９９
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０５１５４８
【国際公開日】平成１８年５月１８日（２００６．５．１８）
【出願人】（３０２０４４５９１）インバーネス・メデイカル・スウイツツアーランド・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング (38)
【Ｆターム（参考）】
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