診断試験のキャリブレーションを調整するための方法
本発明は、事前に検量した試薬を用いる機器で実施する医学生物学的診断試験のための事前に規定されたキャリブレーションカーブ（プレキャリブレーションカーブ）又は機器によって測定されたシグナル又は計算された活性のいずれかを調整するための方法であって、以下の工程：（ｉ）試験化合物の事前に決定した濃度又は活性を有する１つ又は２つのキャリブレーション調整物について、標準値と称されるシグナル又は活性値を規定し、標準シグナル又は活性値と機器によって測定したシグナル又はプレキャリブレーションカーブを使用して算出した活性値のいずれかの値との間の差を、前記調整物について測定する工程、測定した差が許容し得る値を有する場合には、（ｉｉ）１つ又は双方の調整物についてプレキャリブレーションカーブで測定されたシグナル又は算出された活性の値が、１つの調整物又は２つの調整物の各々について工程（ｉ）で決定した標準シグナル又は活性値と同一のシグナル又は活性値となるように、機器によって測定したシグナル値若しくは機器によって算出された活性の値又はプレキャリブレーションカーブの値を調整する工程、（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）と同じ調整を、前記事前に検量した試薬を用いてシグナル又は活性が測定される試験サンプルの全てについて適用する工程、を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医学生物学、とりわけ、止血の分野において、診断試験を実施するための適切な試薬について、事前に規定されたキャリブレーションの調整をするための直接的又は間接的な方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
止血は、出血を妨げる又は止めることに関わる一連の生理的なメカニズムであると解される。
【０００３】
血液の流動性は、凝固因子アクチベーターとインヒビターとの間のバランスによって維持されるため、止血は多くの場合において基準と比較される。
【０００４】
このバランスにおける何らかの欠陥は、病理プロセス：インヒビター欠乏によって引き起こされる傾向がある凝血塊の形成による血栓症、又は凝固因子欠乏によって引き起こされる傾向がある出血へと向わせる。
【０００５】
凝固活性化因子又は凝固阻害因子の分析及びアッセイは、かくして、各種の臨床的状況における血栓症又は出血の素因又はリスクを診断することを可能にする。
【０００６】
これらの試験は、主に、半自動化又は自動化された態様で、試験研究所又は病院において日常的に実施されている。
【０００７】
一般的には、実施した試験又は使用した機器に依存して、結果が、機器によって測定したシグナル又は機器によって算出された生物学的活性のいずれかからなる。
【０００８】
試験系において実施される大半の生物学的試験について、自動化止血試験を実施する際に、直接的に試験因子のレベル又は活性を算出するためにキャリブレーションが必要とされる。これらのキャリブレーションデータは、一般的には、標的試験物質のよく特徴付けられた活性又は濃度を有するキャリブレーターを使用して得られ、それらに基づいてキャリブレーションカーブを規定して、所定のシグナル強度に対する濃度又は活性を決定することが可能である。
【０００９】
しかしながら、異なる区分の系に対して同じ試験を頻繁に実施する可能性がある場合には、機器間の変動が多くの場合において認められる。この変動のために、同じ標準キャリブレーションを常に使用して異なる機器で得られた結果を、同じ試験について、常に直接的な比較ができるわけではない。
【００１０】
さらに、多数の試薬が液体の形態にあるため、これらの試薬は、凍結乾燥状態の試薬よりも経時的な現象の影響をより受けやすい可能性がある。そのため、これらの試薬がある時点において機能的な状態であっても、その感度は部分的に低減しているか又は経時的に変化し得る。
【００１１】
これによって、同じ試薬を使用しているが、異なる期間に亘って実施した試験に由来する結果を解釈することが困難になる。
【００１２】
米国出願第２００７／００２０７６５号は、サンプルの凝固時間を標準化するための方法であって、サンプルに適用したのと同じ試験系において標準凝固時間を事前に決定するために、少なくとも２つのキャリブレーターが使用され、それに基づいて、事前に決定した標準時間と使用した試験で同じキャリブレーターについて実際に測定した時間との間でキャリブレーションカーブを規定する、方法を開示している。
【００１３】
サンプルについて測定した凝固時間は、規定したキャリブレーションカーブを使用して標準化された凝固時間に変換される。
【００１４】
したがって、この方法は、新しいキットを使用して止血試験において凝固時間を測定する際は常に、限定的にキャリブレーションを作成することからなる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】米国出願第２００７／００２０７６５号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明の目的は、試験機器及び事前に検量した試薬を調整するための方法であって、経時的に得られた結果の変動及び／又は試験に使用した機器のタイプによる結果の変動を限定又は避けることを可能にする、方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
かくして、本発明は、事前に検量した試薬を用いる機器で実施される医学生物学的診断試験のための、機器又は事前に規定したキャリブレーションカーブ（プレキャリブレーションカーブ）によって測定されたシグナル又は算出された活性のいずれかを調整するための方法であって、以下の工程：
（ｉ）試験化合物の事前に決定した濃度又は活性を有する１つ又は２つのキャリブレーション調整物について、標準値と称されるシグナル又は活性値を規定し、標準シグナル又は活性値と機器によって測定したシグナル又はプレキャリブレーションカーブを使用して算出された活性値のいずれかの値との間の差を、前記調整物について測定する工程、
（ｉｉ）１つ又は双方の調整物についてプレキャリブレーションカーブで測定されたシグナル又は算出された活性の値が、１つの調整物又は２つの調整物の各々について工程（ｉ）で決定した標準シグナル又は活性値と同一のシグナル又は活性値となるように、機器によって測定したシグナル若しくは機器によって算出した活性の値又はプレキャリブレーションカーブの値を調整する工程、
（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）と同じ調整を、前記事前に検量した試薬を用いてシグナル又は活性が測定される試験サンプルの全てについて適用する工程、
を含む、方法に関する。
【００１８】
好適には、本発明に係る方法は、血液凝固検査に使用される。
【００１９】
測定した差異が「許容し得る値」を有するなる用語は、使用する試薬及び機器について、当業者に許容され得ると解される値である、２つの値の間にある差異を示す。
【００２０】
この差異は、使用した試験の感度及び測定したシグナルの大きさによって変化し得る。
【００２１】
このために、プレキャリブレーションの調整が許容され得ない上限は、使用する試験及び機器のタイプに関連して規定されなければならない。
【００２２】
自動試験装置によって得られる結果を分析するのに慣れた当業者は、試験を実施する際に、使用した試薬又は機器のいずれかによる、異常であると解される結果の値を容易に検出することが可能である。
【００２３】
かくして、当業者は、使用した試薬又は装置の異常を隠さないような十分に小さいものである、本発明に係る方法の工程（ｉ）による標準シグナル又は活性の値と機器によって測定されるシグナル値又はプレキャリブレーションカーブで算出される活性値との間の差を規定することが可能である。
【００２４】
好ましくは、測定される差は２０から３０％を超えない。
【００２５】
１つの好ましい代替的な実施態様によれば、本発明に係る方法は１つの調整物を用いて実施される。
【００２６】
本発明の１つの特定の実施態様によれば、本発明に係る方法の工程（ｉ）及び（ｉｉ）による、所定の試験の一部として測定されるシグナルの、１つの調整物を用いた調製は、以下のように実施されてよい。
【００２７】
−標準値を規定する工程（ｉ）については、以下の手法が適用される。
【００２８】
前記調製物に割り当てられる標準シグナル値は、問題となっているもののプレキャリブレーションを決定するための工程の間に決定される結果に基づいて算出される。プレキャリブレーションの決定は、試験物質（試験化合物）の既知のレベルを有する標準物質を複数の機器のパネル上に流すことからなる。前記標準物質の各々を各機器において二回、三回、四回重複して流す。
【００２９】
同時に、シグナルの漸増する調整物質も、同じ機器において同時に二回、三回、又は四回重複して流す。
【００３０】
次いで、数学的平均値、切断分布平均値（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ ｍｅａｎ）、又は中央値を、各標準物質及び調整物について別々に、得られたシグナル値の全てに対して、機器の外部で算出する。
【００３１】
プレキャリブレーション方程式の決定は、各種のペア（シグナルの平均値又は中央値；標準濃度）に対して最小二乗回帰を用いて、機器の外部で算出される。
【００３２】
調整物の標準シグナル値は、各々、選択した計算方法によるプレキャリブレーション決定の一部として当該調整物に対して測定した全てのシグナル値の数学的平均値、切断分布平均値、又は中央値に対応する。この調整物について計算した標準シグナル値は、事前に検量したものの特定のバッチについて有効であるにすぎない。
【００３３】
したがって、１つ又は複数の調整物の標準シグナル又は活性値（以下の記載を参照のこと）は、かくして、診断試験からは独立して事前に実施されてよい。（１つ又は複数の）調整物の標準シグナル（又は活性）値は、したがって、使用する試薬のバッチ及び調製物（１つ又は複数）を用いる診断試験の使用者に提供されてよい。
【００３４】
−調整物及び試験サンプルについて測定した値を調整するための工程（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）に関しては、以下の手法が適用される。
【００３５】
その事前に検量したもののバッチについて、調整物に割り当てた標準シグナル値はＳと称される。この調整物が、その事前に検量したもののバッチを用いて二回、三回、又は四回重複して機器に流される際に、Ｓを決定するために選択した計算方法によって、これらの各種の測定したシグナルの数学的平均値、切断分布平均値、又は中央値に対応するシグナルＴが機器によって算出される。ＳとＴとの間の差異が機器によって既知の許容基準に合致する場合は、前記機器は、Ｔに対するＳの比率と等しい調整係数Ｃ（Ｃ＝Ｓ／Ｔ）を算出する。調整物について機器によって測定されたシグナルＴを、Ｓ／Ｔと等しい当該調整係数Ｃによって乗算すると、調整物のシグナルの調整された値がＳと等しい。同様に、アッセイサンプルを同じ機器に流す際には、調整係数Ｃによって測定値を乗算することによって、得られたシグナルの測定値が調整される。次いで、アッセイする試験物の濃度又は活性が、この調整したシグナル値にプレキャリブレーションを適用することによって算出される。
【００３６】
本発明の更なる特定の実施態様によれば、１つの調整物を用いた調整が、本発明に係る方法の工程（ｉ）及び（ｉｉ）によって、試験機器によって算出された活性に対して以下のように実施される。
【００３７】
−標準値を規定するための工程（ｉ）について
標準活性値は、滴定によって調整物に割り当てられる。この目的のために、各種の系において事前に検量した試薬の１つ又は様々なバッチを用いて、複数の試験が実施される。測定回数は、問題のパラメータによって変化するであろうが、常に３以上である。この滴定は、プレキャリブレーションによる決定とは別のものである。
【００３８】
調整物（例えば、賦形剤とともに、対照物／キャリブレータータイプの凍結乾燥血漿に基づく試薬）を、各測定の間に二回、三回、又は四回重複して試験する。プレキャリブレーションで測定したシグナルを読取ることによって、その標準活性を推定する。
【００３９】
次いで、数学的平均値、切断分布平均値、又は中央値を、各調整物について各自動装置において事前に検量した試薬の各バッチを用いて得られた活性の全てに対して、機器の外部で算出する。調整物の標準活性値又は滴定量は、採用した計算方法によって、当該滴定の一部として調整物に対して測定した全ての活性値の数学的平均値、切断分布平均値、又は中央値に対応する。標準活性は、事前に検量したものの１つ又は複数のバッチについて有効であり得る。
【００４０】
可能である場合には、調整物の滴定は、パラメータの内部標準と相関させる。これによって、問題の系における均一性に加え、国際的な系の一貫性を確実にする。
【００４１】
−測定した活性を調整するための工程（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）について
調整物に割り当てた滴定量はＳと称される。この調整物が、対応する事前に検量したものの１つ又は複数のバッチを用いて機器に二回、三回、又は四回重複して流される際に、機器は、測定したシグナルに基づいて、Ｓを決定するために選択した計算方法によって、当該各種の測定シグナルの数学的平均値、切断分布平均値、又は中央値に対応する活性Ｔを算出する。ＳとＴとの間の差異が機器によって既知の許容基準に合致する場合には、機器は、Ｔに対するＳの比率と等しい調整係数Ｃ（Ｃ＝Ｓ／Ｔ）を算出する。このようにして、Ｓ／Ｔと等しい当該調整係数Ｃによって、調整物について機器によって測定したシグナルＴを乗算すると、調整物のシグナルの調整した値がＳに等しい。同様に、アッセイするサンプルを同じ機器において流す際には、測定したシグナルを、試薬のプレキャリブレーションの式を用いて活性に変換する。次いで、得られた活性を、前記調整係数Ｃによって乗算することによって調整する。
【００４２】
本発明に係る方法の範囲内で使用される調整物は、以下のものである。
−新しい試薬のバッチを使用する間に、プレキャリブレーションを使用するとともに、試験を実施するために使用する機器に対して、戻ってきた試験結果を調整するための組成物（対照が体系的に相殺される際に対照を再調整することを目的とする）、
−経時的に、例えばその経時変化による試薬の感度の損失を補償するための組成物（上述のように、この点は、特に凍結乾燥試薬よりも経時的に安定ではない液体試薬に適用可能である）。
【００４３】
凝固因子又は他の構成成分について調整物の組成は、実施する試験によって規定される。
【００４４】
前記調整物は、その濃度又は活性が事前に決定されている、使用する試験において試験する化合物を少なくとも含有する必要がある。
【００４５】
血液凝固検査の場合には、調整物は、好ましくは、安定化した凍結乾燥血漿又は安定化した凍結乾燥血漿プールからなる。
【００４６】
前記調整物は、精製又は半精製した血漿タンパク質からなってもよく、前記タンパク質は、実施する試験の一部として生じる反応を実施するために必要とされる因子を供給するものであり、さらにその濃度又は活性が事前に決定されている試験化合物（試験因子とも称される）を含む。
【００４７】
調整物に使用する、試験因子の濃度（又は活性レベル）は、プレキャリブレーションの補正における潜在的なバックグランドノイズの影響を最小化するように選択されなければならない。
【００４８】
この目的のために、調整物の試験化合物濃度又は活性が、シグナル／バックグランドノイズ比が高くなるように規定される。
【００４９】
使用する試験のタイプによって、測定したシグナルと調整物の試験化合物の活性又は濃度との間の関係が異なる。このために、試験によって異なるプロフィールを有するカーブが得られる。
【００５０】
例えば、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏによって市販されているＳＴＡ−Ｓｔａｃｈｒｏｍ ＡＴＩＩＩキットによって提案されているものなどの抗トロンビン（ＡＴ）アッセイの場合には、ＡＴＩＩＩ濃度が増大する際にＤＯＤ（デルタＯＤ）が低減する。
【００５１】
しかしながら、ＡＴＩＩＩ濃度は正常状態よりも疾患状態で低いため、本発明に係る調整方法を実施するための調整物のＡＴ濃度は、調整物が疾患状態における値（すなわち、低量のＡＴＩＩＩ）を網羅する範囲に位置するように選択されるであろう。
【００５２】
逆に、ＳＴＡ−ＳｔａｃｈｒｏｍプロテインCキット（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏ）によって提案されているものなどのプロテインＣアッセイの場合には、測定されるシグナルはプロテインＣの量に比例して増大し、正常な範囲はプロテインＣレベルの値の上限によって範囲が定まるため、前記調整物は、清浄なプロテインＣ濃度に対応する範囲に位置するであろう、
【００５３】
例えばＳＴＡ−Ｌｉａｔｅｓｔ Ｄ−Ｄｉ キット（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏ）によって実施されるものなどのＤ−二量体アッセイの場合には、Ｄ−Ｄｉの量と共にシグナルが増大するのが認められる。しかしながら、正常な状態では、Ｄ−二量体レベルは疾患状態よりも低い。かくして、観察されるシグナルが疾患状態における範囲に位置するように、本発明に係る調整物が選択される。ＳＴＡ−Ｌｉａｔｅｓｔ Ｋｉｔを使用するアッセイの場合には、前記調整物は、ＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｃｏｎｔｒｏｌ ＰまたはＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｎ試薬の組成を有してよい。
【００５４】
本発明に係る方法は、ＡＰＴＴ（活性化部分トロンボプラスチン時間）、ＰＴ（プロトロンビン時間又はクイックタイム（Ｑｕｉｃｋ ｔｉｍｅ）、若しくはＴＴ（トロンビン時間）、又は吸光度（ＯＤ）若しくは時間測定に基づく任意の他の従来の酵素学的試験などの任意のタイプの血液凝固検査のために使用してよい。
【００５５】
ミクロスフェア懸濁物の濁度における増大の光学的測定に基づいて、分散固相免疫学的アッセイに適用してもよい。
【００５６】
以下の実施例によって、本発明を説明する。
【実施例】
【００５７】
実施例１
ＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｄ−Ｄｉのプレキャリブレーションの調整についての試験：経時的な試薬に関連する反応性の損失に対する１つの点によるＤＯＤ補正の実行可能性
本発明に係る方法を、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ ＳｔａｇｏによるＳＴＡ−Ｌｉａｔｅｓｔ Ｄ−Ｄｉという名称で市販されている試験に適用する。
【００５８】
前記試験は、２つの抗Ｄ−二量体モノクローナル抗体で被覆したラテックスミクロスフェアを使用する免疫比濁法による血漿Ｄ−二量体（Ｄ−Ｄｉ）アッセイキットからなる。
【００５９】
試験物質（Ｄ−二量体）の存在下において、抗原／抗体タイプの反応が、ラテックス粒子の凝集を誘導し、反応混合物の濁度における増大を誘導する。
【００６０】
これは、ＳＴＡ ｒａｎｇｅ ａｎａｌｙｓｅｒ（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｔａｇｏ）で、１４０秒に亘って５４０ｎｍの動力学モードで、キットの包装内に含まれている説明書に従って測定される。
【００６１】
吸光度における増大は、試験サンプルのＤ−二量体濃度に比例する。
【００６２】
キット試薬は液体であり、直ぐに使用できる。
【００６３】
各試薬バッチについて、プレキャリブレーションは、バーコードラベルによって与えられる。かくして、使用したバッチのプレキャリブレーション係数は、バーコードラベルを単純にスキャンして機器に直接送られる。
【００６４】
対照血漿（陽性対照及び陰性対照）を使用して、キャリブレーションを検証し、アッセイを実施する。
【００６５】
Ｄ−Ｄｉ濃度測定は、ＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｄ−Ｄｉの特定のバッチを用いて４つの血漿サンプルに対してＴ＝０において最初に実施し（表１）、２０ヵ月後（Ｔ＝２０月の時点）に同じサンプル及び同じバッチに対して２回目を実施した（表２）。
【００６６】
使用した血漿は、測定したパラメータについて規定されている目標値（目標値＝多数の実験で決定した平均値）を有する標準血漿である：
−ＲＩＮ２は、０．５８μｇ／ｍｌの目標Ｄ−Ｄｉ値を有する血漿である
−ＰＮ２は、０．８３μｇ／ｍｌの目標Ｄ−Ｄｉ値を有する血漿である
−ＬＣＰは、２．４０μｇ／ｍｌのＤ−Ｄｉを目標とする疾患状態の対照血漿（ＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｐ）である
−Ｐ２は、更なる疾患状態の血漿である。
【００６７】
この実施例において使用した調整点は、「ＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｐ」（ＬＣＰ）である。
【００６８】
ＤＯＤは、１０のＳＴＡ ｒａｎｇｅ機器において測定する。
【００６９】
各機器によって測定されるＤＯＤを、各機器において四回重複して実施して得られたＤＯＤの平均値に対する、０．１２９に等しい、この試薬の標準ＤＯＤの比率によって算出される係数によって補正した。
【００７０】
０．１２９である当該標準ＤＯＤは、使用したＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｄ−Ｄｉのバッチのプレキャリブレーションの決定の間に、ＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｐ（本実施例のＬＣＰ）のバッチに対して得られた平均ＤＯＤに相当する。
【００７１】
Ｔ＝０において事前に検量した特定のＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｄ−Ｄｉバッチに対して、四つの濃度レベルについて試験した。
【００７２】
表１及び２は、Ｔ＝０で得られた結果（表１）およびＴ＝２０月で得られた結果（表２）の各々を与える。
【００７３】
表３の結果は、ＬＣＰによって調整した後のＴ＝２０ヶ月後に得られたものであり、Ｔ＝０で最初に得られたもの（表１）と非常に類似している。
【００７４】
結論、ＤＯＤの一点による調整によって、Ｔ＝０で事前に検量した試薬を用いて、２０ヵ月後に、Ｔ＝０で得られたもの（表１）と同等の平均濃度が取り戻される（表３）。
【００７５】
したがって、測定したＤＯＤの一点による調整は、ＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｄ−Ｄｉの感度の損失を補償するため有効である。
【００７６】
【表１】
【００７７】
【表２】
【００７８】
【表３】
【００７９】
実施例２
ＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｆｒｅｅ ＰＳについてのプレキャリブレーション調整試験
Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｔａｇｏ社によって市販されている別のキットであるＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｆｒｅｅ ＰＳを用いて、試験を実施する。
【００８０】
前記キットは、免疫比濁方法を使用する遊離のプロテインＳの定量アッセイのための、実施例１で使用したキットと同じタイプのものである。
【００８１】
測定は、１０のＳＴＡ機器において実施した。
【００８２】
前記測定は、異なる血漿バッチ、すなわち、
−正常な対照血漿及び疾患状態の対照血漿（ＬＣＮ及びＬＣＰ：ＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｎ＋Ｐ−）；
−５３％血漿（凍結乾燥した疾患状態の血漿）；
−凍結単位血漿プール（Ｓｔａｇｏプール）；
−凍結単位血漿
に対して実施した。
【００８３】
表４は、内部キャリブレーターを用いた各装置のキャリブレーションによって得られた遊離プロテインＳ濃度（％）を与える。
【００８４】
表５は、調整せずに適用した市販のプレキャリブレーションを用いて得られた遊離プロテインＳ濃度（％）を与える（非調整プレキャリブレーション）。
【００８５】
表６は、Ｓｔａｇｏプールにおいて一点によるＤＯＤ調整後の市販のプレキャリブレーションを用いて得られた遊離プロテインＳ濃度（％）を与える（調整プレキャリブレーション）。
【００８６】
【表４】
【００８７】
【表５】
【００８８】
【表６】
【００８９】
事前に検量したＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｆｒｅｅ ＰＳ（非調整プレキャリブレーション）を用いて、５０％を超える濃度についての１０のＳＴＡに対して測定した機器間の変動は顕著に区別される。ＬＣＮに対する機器間のＣＶは、非調整プレキャリブレーションにおいて９．１６％であるのに対し、各機器のキャリブレーションでは２．７８％であり、調整プレキャリブレーションでは２．４５％である。
【００９０】
同様に、機器間の変動は、プレキャリブレーションが調整された際に、５３％血漿及び２６％ＬＣＰにおいて（明白な範囲で）改善された：
５３％血漿：ＣＶ機器キャリブレーション＝３．４０％、ＣＶ非調整プレキャリブレーション＝６．６２％、ＣＶ調整プレキャリブレーション＝１．９７％；
２６％ＬＣＰ血漿；ＣＶ機器キャリブレーション＝２．４５％、ＣＶ非調整プレキャリブレーション＝２．４５％、ＣＶ調整プレキャリブレーション＝２．２２％。
【００９１】
したがって、全ての濃度レベルにおいて、一点によるプレキャリブレーション調整は、機器間ＣＶ値を与え、これは、
−非調整プレキャリブレーションを用いて得られたものよりも優れており、
−少なくとも、内部キャリブレーターによる各機器のキャリブレーションを用いて得られたものと等しい。
【００９２】
結論として、機器間の変動は、本発明に係る一点によるＤＯＤ調整方法を用いたＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｆｒｅｅ ＰＳで顕著に改善される。
【００９３】
実施例３
ＳＴＡ−Ｆｉｂ２プレキャリブレーション調整試験：対照のアラインメントに対するレベル（ｇ／ｌ）の補正の実行可能性（目標値に最も近い得られた値＝所定の系について与えられる範囲の中心）。
【００９４】
本発明に係る方法は、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ ＳｔａｇｏによってＳＴＡ−Ｆｉｂ２なる名称で市販されている試験に適用した。
【００９５】
前記試験は、Ｃｌａｕｓｓ法を使用する血漿フィブリノゲンアッセイキットからなる。
【００９６】
過剰なトロンビンの存在下において、適切な割合で希釈した血漿の凝固時間は、血漿のフィブリノゲンレベルに反比例した。
【００９７】
キット試薬は凍結乾燥されている。各試薬バッチについて、プレキャリブレーションがバーコードラベルで与えられる。使用したバッチのプレキャリブレーション係数は、かくして、バーコードラベルを単純にスキャンすることによって機器に直接送られる。
【００９８】
対照血漿（清浄及び低フィブリノゲン血症）を使用して、キャリブレーションを評価し、アッセイを実行する。
【００９９】
血漿フィブリノゲンレベルの測定は、約４０のＳＴＡ−Ｒ、約１０のＳＴＡｃ、及びＳＴＡ−Ｓａｔｅｌｌｉｔｅシステムを含む７１の機器の系の群に対して各種の対照血漿において実施した。
【０１００】
使用した対照は、測定パラメータについて以下の目標値：
−ＣＣＮは２．９５ｇ／ｌの目標値を有する血漿である；
−ＣＣＰは１．３０ｇ／ｌの目標値を有する血漿である；
−ＨＹＰＥＲは５．２７ｇ／ｌの目標値を有する血漿である
を有する標準血漿である。
【０１０１】
調整物としての役割を有する血漿は、３．２０ｇ／ｌの目標値を有するＡＪＰ血漿であった。
【０１０２】
本試験のために、各試験機器についてｎ＝５でレベルを測定した。各系におけるＡＪＰ血漿について得られた値に基づいて、レベルを調整した（算出された活性に対する調整のため、本願で開示した方法を用いて）。
【０１０３】
下表は、調整有り又は無しで得られた平均レベル（問題のバッチをプレキャリブレートすることによって得られたレベル）を、試験対照の目標値と得られた全体の標準偏差との関連で与えるものである。
【０１０４】
【表７】
【０１０５】
結論として、調整によって、試験した群について均一な標準偏差を保持しながら、その目標値に関して各種の血漿で得られたレベルを再調整する。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医学生物学、とりわけ、止血の分野において、診断試験を実施するための適切な試薬について、事前に規定されたキャリブレーションの調整をするための直接的又は間接的な方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
止血は、出血を妨げる又は止めることに関わる一連の生理的なメカニズムであると解される。
【０００３】
血液の流動性は、凝固因子アクチベーターとインヒビターとの間のバランスによって維持されるため、止血は多くの場合において基準と比較される。
【０００４】
このバランスにおける何らかの欠陥は、病理プロセス：インヒビター欠乏によって引き起こされる傾向がある凝血塊の形成による血栓症、又は凝固因子欠乏によって引き起こされる傾向がある出血へと向わせる。
【０００５】
凝固活性化因子又は凝固阻害因子の分析及びアッセイは、かくして、各種の臨床的状況における血栓症又は出血の素因又はリスクを診断することを可能にする。
【０００６】
これらの試験は、主に、半自動化又は自動化された態様で、試験研究所又は病院において日常的に実施されている。
【０００７】
一般的には、実施した試験又は使用した機器に依存して、結果が、機器によって測定したシグナル又は機器によって算出された生物学的活性のいずれかからなる。
【０００８】
試験系において実施される大半の生物学的試験について、自動化止血試験を実施する際に、直接的に試験因子のレベル又は活性を算出するためにキャリブレーションが必要とされる。これらのキャリブレーションデータは、一般的には、標的試験物質のよく特徴付けられた活性又は濃度を有するキャリブレーターを使用して得られ、それらに基づいてキャリブレーションカーブを規定して、所定のシグナル強度に対する濃度又は活性を決定することが可能である。
【０００９】
しかしながら、異なる区分の系に対して同じ試験を頻繁に実施する可能性がある場合には、機器間の変動が多くの場合において認められる。この変動のために、同じ標準キャリブレーションを常に使用して異なる機器で得られた結果を、同じ試験について、常に直接的な比較ができるわけではない。
【００１０】
さらに、多数の試薬が液体の形態にあるため、これらの試薬は、凍結乾燥状態の試薬よりも経時的な現象の影響をより受けやすい可能性がある。そのため、これらの試薬がある時点において機能的な状態であっても、その感度は部分的に低減しているか又は経時的に変化し得る。
【００１１】
これによって、同じ試薬を使用しているが、異なる期間に亘って実施した試験に由来する結果を解釈することが困難になる。
【００１２】
米国出願第２００７／００２０７６５号は、サンプルの凝固時間を標準化するための方法であって、サンプルに適用したのと同じ試験系において標準凝固時間を事前に決定するために、少なくとも２つのキャリブレーターが使用され、それに基づいて、事前に決定した標準時間と使用した試験で同じキャリブレーターについて実際に測定した時間との間でキャリブレーションカーブを規定する、方法を開示している。
【００１３】
サンプルについて測定した凝固時間は、規定したキャリブレーションカーブを使用して標準化された凝固時間に変換される。
【００１４】
したがって、この方法は、新しいキットを使用して止血試験において凝固時間を測定する際は常に、限定的にキャリブレーションを作成することからなる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】米国出願第２００７／００２０７６５号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明の目的は、試験機器及び事前に検量した試薬を調整するための方法であって、経時的に得られた結果の変動及び／又は試験に使用した機器のタイプによる結果の変動を限定又は避けることを可能にする、方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
かくして、本発明は、事前に検量した試薬を用いる機器で実施される医学生物学的診断試験のための、機器又は事前に規定したキャリブレーションカーブ（プレキャリブレーションカーブ）によって測定されたシグナル又は算出された活性のいずれかを調整するための方法であって、以下の工程：
（ｉ）試験化合物の事前に決定した濃度又は活性を有する１つ又は２つのキャリブレーション調整物について、標準値と称されるシグナル又は活性値を規定し、標準シグナル又は活性値と機器によって測定したシグナル又はプレキャリブレーションカーブを使用して算出された活性値のいずれかの値との間の差を、前記調整物について測定する工程、
（ｉｉ）１つ又は双方の調整物についてプレキャリブレーションカーブで測定されたシグナル又は算出された活性の値が、１つの調整物又は２つの調整物の各々について工程（ｉ）で決定した標準シグナル又は活性値と同一のシグナル又は活性値となるように、機器によって測定したシグナル若しくは機器によって算出した活性の値又はプレキャリブレーションカーブの値を調整する工程、
（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）と同じ調整を、前記事前に検量した試薬を用いてシグナル又は活性が測定される試験サンプルの全てについて適用する工程、
を含む、方法に関する。
【００１８】
好適には、本発明に係る方法は、血液凝固検査に使用される。
【００１９】
測定した差異が「許容し得る値」を有するなる用語は、使用する試薬及び機器について、当業者に許容され得ると解される値である、２つの値の間にある差異を示す。
【００２０】
この差異は、使用した試験の感度及び測定したシグナルの大きさによって変化し得る。
【００２１】
このために、プレキャリブレーションの調整が許容され得ない上限は、使用する試験及び機器のタイプに関連して規定されなければならない。
【００２２】
自動試験装置によって得られる結果を分析するのに慣れた当業者は、試験を実施する際に、使用した試薬又は機器のいずれかによる、異常であると解される結果の値を容易に検出することが可能である。
【００２３】
かくして、当業者は、使用した試薬又は装置の異常を隠さないような十分に小さいものである、本発明に係る方法の工程（ｉ）による標準シグナル又は活性の値と機器によって測定されるシグナル値又はプレキャリブレーションカーブで算出される活性値との間の差を規定することが可能である。
【００２４】
好ましくは、測定される差は２０から３０％を超えない。
【００２５】
１つの好ましい代替的な実施態様によれば、本発明に係る方法は１つの調整物を用いて実施される。
【００２６】
本発明の１つの特定の実施態様によれば、本発明に係る方法の工程（ｉ）及び（ｉｉ）による、所定の試験の一部として測定されるシグナルの、１つの調整物を用いた調製は、以下のように実施されてよい。
【００２７】
−標準値を規定する工程（ｉ）については、以下の手法が適用される。
【００２８】
前記調製物に割り当てられる標準シグナル値は、問題となっているもののプレキャリブレーションを決定するための工程の間に決定される結果に基づいて算出される。プレキャリブレーションの決定は、試験物質（試験化合物）の既知のレベルを有する標準物質を複数の機器のパネル上に流すことからなる。前記標準物質の各々を各機器において二回、三回、四回重複して流す。
【００２９】
同時に、シグナルの漸増する調整物質も、同じ機器において同時に二回、三回、又は四回重複して流す。
【００３０】
次いで、数学的平均値、切断分布平均値（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ ｍｅａｎ）、又は中央値を、各標準物質及び調整物について別々に、得られたシグナル値の全てに対して、機器の外部で算出する。
【００３１】
プレキャリブレーション方程式の決定は、各種のペア（シグナルの平均値又は中央値；標準濃度）に対して最小二乗回帰を用いて、機器の外部で算出される。
【００３２】
調整物の標準シグナル値は、各々、選択した計算方法によるプレキャリブレーション決定の一部として当該調整物に対して測定した全てのシグナル値の数学的平均値、切断分布平均値、又は中央値に対応する。この調整物について計算した標準シグナル値は、事前に検量したものの特定のバッチについて有効であるにすぎない。
【００３３】
したがって、１つ又は複数の調整物の標準シグナル又は活性値（以下の記載を参照のこと）は、かくして、診断試験からは独立して事前に実施されてよい。（１つ又は複数の）調整物の標準シグナル（又は活性）値は、したがって、使用する試薬のバッチ及び調製物（１つ又は複数）を用いる診断試験の使用者に提供されてよい。
【００３４】
−調整物及び試験サンプルについて測定した値を調整するための工程（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）に関しては、以下の手法が適用される。
【００３５】
その事前に検量したもののバッチについて、調整物に割り当てた標準シグナル値はＳと称される。この調整物が、その事前に検量したもののバッチを用いて二回、三回、又は四回重複して機器に流される際に、Ｓを決定するために選択した計算方法によって、これらの各種の測定したシグナルの数学的平均値、切断分布平均値、又は中央値に対応するシグナルＴが機器によって算出される。ＳとＴとの間の差異が機器によって既知の許容基準に合致する場合は、前記機器は、Ｔに対するＳの比率と等しい調整係数Ｃ（Ｃ＝Ｓ／Ｔ）を算出する。調整物について機器によって測定されたシグナルＴを、Ｓ／Ｔと等しい当該調整係数Ｃによって乗算すると、調整物のシグナルの調整された値がＳと等しい。同様に、アッセイサンプルを同じ機器に流す際には、調整係数Ｃによって測定値を乗算することによって、得られたシグナルの測定値が調整される。次いで、アッセイする試験物の濃度又は活性が、この調整したシグナル値にプレキャリブレーションを適用することによって算出される。
【００３６】
本発明の更なる特定の実施態様によれば、１つの調整物を用いた調整が、本発明に係る方法の工程（ｉ）及び（ｉｉ）によって、試験機器によって算出された活性に対して以下のように実施される。
【００３７】
−標準値を規定するための工程（ｉ）について
標準活性値は、滴定によって調整物に割り当てられる。この目的のために、各種の系において事前に検量した試薬の１つ又は様々なバッチを用いて、複数の試験が実施される。測定回数は、問題のパラメータによって変化するであろうが、常に３以上である。この滴定は、プレキャリブレーションによる決定とは別のものである。
【００３８】
調整物（例えば、賦形剤とともに、対照物／キャリブレータータイプの凍結乾燥血漿に基づく試薬）を、各測定の間に二回、三回、又は四回重複して試験する。プレキャリブレーションで測定したシグナルを読取ることによって、その標準活性を推定する。
【００３９】
次いで、数学的平均値、切断分布平均値、又は中央値を、各調整物について各自動装置において事前に検量した試薬の各バッチを用いて得られた活性の全てに対して、機器の外部で算出する。調整物の標準活性値又は滴定量は、採用した計算方法によって、当該滴定の一部として調整物に対して測定した全ての活性値の数学的平均値、切断分布平均値、又は中央値に対応する。標準活性は、事前に検量したものの１つ又は複数のバッチについて有効であり得る。
【００４０】
可能である場合には、調整物の滴定は、パラメータの内部標準と相関させる。これによって、問題の系における均一性に加え、国際的な系の一貫性を確実にする。
【００４１】
−測定した活性を調整するための工程（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）について
調整物に割り当てた滴定量はＳと称される。この調整物が、対応する事前に検量したものの１つ又は複数のバッチを用いて機器に二回、三回、又は四回重複して流される際に、機器は、測定したシグナルに基づいて、Ｓを決定するために選択した計算方法によって、当該各種の測定シグナルの数学的平均値、切断分布平均値、又は中央値に対応する活性Ｔを算出する。ＳとＴとの間の差異が機器によって既知の許容基準に合致する場合には、機器は、Ｔに対するＳの比率と等しい調整係数Ｃ（Ｃ＝Ｓ／Ｔ）を算出する。このようにして、Ｓ／Ｔと等しい当該調整係数Ｃによって、調整物について機器によって測定したシグナルＴを乗算すると、調整物のシグナルの調整した値がＳに等しい。同様に、アッセイするサンプルを同じ機器において流す際には、測定したシグナルを、試薬のプレキャリブレーションの式を用いて活性に変換する。次いで、得られた活性を、前記調整係数Ｃによって乗算することによって調整する。
【００４２】
本発明に係る方法の範囲内で使用される調整物は、以下のものである。
−新しい試薬のバッチを使用する間に、プレキャリブレーションを使用するとともに、試験を実施するために使用する機器に対して、戻ってきた試験結果を調整するための組成物（対照が体系的に相殺される際に対照を再調整することを目的とする）、
−経時的に、例えばその経時変化による試薬の感度の損失を補償するための組成物（上述のように、この点は、特に凍結乾燥試薬よりも経時的に安定ではない液体試薬に適用可能である）。
【００４３】
凝固因子又は他の構成成分について調整物の組成は、実施する試験によって規定される。
【００４４】
前記調整物は、その濃度又は活性が事前に決定されている、使用する試験において試験する化合物を少なくとも含有する必要がある。
【００４５】
血液凝固検査の場合には、調整物は、好ましくは、安定化した凍結乾燥血漿又は安定化した凍結乾燥血漿プールからなる。
【００４６】
前記調整物は、精製又は半精製した血漿タンパク質からなってもよく、前記タンパク質は、実施する試験の一部として生じる反応を実施するために必要とされる因子を供給するものであり、さらにその濃度又は活性が事前に決定されている試験化合物（試験因子とも称される）を含む。
【００４７】
調整物に使用する、試験因子の濃度（又は活性レベル）は、プレキャリブレーションの補正における潜在的なバックグランドノイズの影響を最小化するように選択されなければならない。
【００４８】
この目的のために、調整物の試験化合物濃度又は活性が、シグナル／バックグランドノイズ比が高くなるように規定される。
【００４９】
使用する試験のタイプによって、測定したシグナルと調整物の試験化合物の活性又は濃度との間の関係が異なる。このために、試験によって異なるプロフィールを有するカーブが得られる。
【００５０】
例えば、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏによって市販されているＳＴＡ−Ｓｔａｃｈｒｏｍ ＡＴＩＩＩキットによって提案されているものなどの抗トロンビン（ＡＴ）アッセイの場合には、ＡＴＩＩＩ濃度が増大する際にＤＯＤ（デルタＯＤ）が低減する。
【００５１】
しかしながら、ＡＴＩＩＩ濃度は正常状態よりも疾患状態で低いため、本発明に係る調整方法を実施するための調整物のＡＴ濃度は、調整物が疾患状態における値（すなわち、低量のＡＴＩＩＩ）を網羅する範囲に位置するように選択されるであろう。
【００５２】
逆に、ＳＴＡ−ＳｔａｃｈｒｏｍプロテインCキット（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏ）によって提案されているものなどのプロテインＣアッセイの場合には、測定されるシグナルはプロテインＣの量に比例して増大し、正常な範囲はプロテインＣレベルの値の上限によって範囲が定まるため、前記調整物は、清浄なプロテインＣ濃度に対応する範囲に位置するであろう、
【００５３】
例えばＳＴＡ−Ｌｉａｔｅｓｔ Ｄ−Ｄｉ キット（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ Ｓｔａｇｏ）によって実施されるものなどのＤ−二量体アッセイの場合には、Ｄ−Ｄｉの量と共にシグナルが増大するのが認められる。しかしながら、正常な状態では、Ｄ−二量体レベルは疾患状態よりも低い。かくして、観察されるシグナルが疾患状態における範囲に位置するように、本発明に係る調整物が選択される。ＳＴＡ−Ｌｉａｔｅｓｔ Ｋｉｔを使用するアッセイの場合には、前記調整物は、ＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｃｏｎｔｒｏｌ ＰまたはＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｎ試薬の組成を有してよい。
【００５４】
本発明に係る方法は、ＡＰＴＴ（活性化部分トロンボプラスチン時間）、ＰＴ（プロトロンビン時間又はクイックタイム（Ｑｕｉｃｋ ｔｉｍｅ）、若しくはＴＴ（トロンビン時間）、又は吸光度（ＯＤ）若しくは時間測定に基づく任意の他の従来の酵素学的試験などの任意のタイプの血液凝固検査のために使用してよい。
【００５５】
ミクロスフェア懸濁物の濁度における増大の光学的測定に基づいて、分散固相免疫学的アッセイに適用してもよい。
【００５６】
以下の実施例によって、本発明を説明する。
【実施例】
【００５７】
実施例１
ＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｄ−Ｄｉのプレキャリブレーションの調整についての試験：経時的な試薬に関連する反応性の損失に対する１つの点によるＤＯＤ補正の実行可能性
本発明に係る方法を、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ ＳｔａｇｏによるＳＴＡ−Ｌｉａｔｅｓｔ Ｄ−Ｄｉという名称で市販されている試験に適用する。
【００５８】
前記試験は、２つの抗Ｄ−二量体モノクローナル抗体で被覆したラテックスミクロスフェアを使用する免疫比濁法による血漿Ｄ−二量体（Ｄ−Ｄｉ）アッセイキットからなる。
【００５９】
試験物質（Ｄ−二量体）の存在下において、抗原／抗体タイプの反応が、ラテックス粒子の凝集を誘導し、反応混合物の濁度における増大を誘導する。
【００６０】
これは、ＳＴＡ ｒａｎｇｅ ａｎａｌｙｓｅｒ（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｔａｇｏ）で、１４０秒に亘って５４０ｎｍの動力学モードで、キットの包装内に含まれている説明書に従って測定される。
【００６１】
吸光度における増大は、試験サンプルのＤ−二量体濃度に比例する。
【００６２】
キット試薬は液体であり、直ぐに使用できる。
【００６３】
各試薬バッチについて、プレキャリブレーションは、バーコードラベルによって与えられる。かくして、使用したバッチのプレキャリブレーション係数は、バーコードラベルを単純にスキャンして機器に直接送られる。
【００６４】
対照血漿（陽性対照及び陰性対照）を使用して、キャリブレーションを検証し、アッセイを実施する。
【００６５】
Ｄ−Ｄｉ濃度測定は、ＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｄ−Ｄｉの特定のバッチを用いて４つの血漿サンプルに対してＴ＝０において最初に実施し（表１）、２０ヵ月後（Ｔ＝２０月の時点）に同じサンプル及び同じバッチに対して２回目を実施した（表２）。
【００６６】
使用した血漿は、測定したパラメータについて規定されている目標値（目標値＝多数の実験で決定した平均値）を有する標準血漿である：
−ＲＩＮ２は、０．５８μｇ／ｍｌの目標Ｄ−Ｄｉ値を有する血漿である
−ＰＮ２は、０．８３μｇ／ｍｌの目標Ｄ−Ｄｉ値を有する血漿である
−ＬＣＰは、２．４０μｇ／ｍｌのＤ−Ｄｉを目標とする疾患状態の対照血漿（ＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｐ）である
−Ｐ２は、更なる疾患状態の血漿である。
【００６７】
この実施例において使用した調整点は、「ＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｐ」（ＬＣＰ）である。
【００６８】
ＤＯＤは、１０のＳＴＡ ｒａｎｇｅ機器において測定する。
【００６９】
各機器によって測定されるＤＯＤを、各機器において四回重複して実施して得られたＤＯＤの平均値に対する、０．１２９に等しい、この試薬の標準ＤＯＤの比率によって算出される係数によって補正した。
【００７０】
０．１２９である当該標準ＤＯＤは、使用したＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｄ−Ｄｉのバッチのプレキャリブレーションの決定の間に、ＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｐ（本実施例のＬＣＰ）のバッチに対して得られた平均ＤＯＤに相当する。
【００７１】
Ｔ＝０において事前に検量した特定のＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｄ−Ｄｉバッチに対して、四つの濃度レベルについて試験した。
【００７２】
表１及び２は、Ｔ＝０で得られた結果（表１）およびＴ＝２０月で得られた結果（表２）の各々を与える。
【００７３】
表３の結果は、ＬＣＰによって調整した後のＴ＝２０ヶ月後に得られたものであり、Ｔ＝０で最初に得られたもの（表１）と非常に類似している。
【００７４】
結論、ＤＯＤの一点による調整によって、Ｔ＝０で事前に検量した試薬を用いて、２０ヵ月後に、Ｔ＝０で得られたもの（表１）と同等の平均濃度が取り戻される（表３）。
【００７５】
したがって、測定したＤＯＤの一点による調整は、ＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｄ−Ｄｉの感度の損失を補償するため有効である。
【００７６】
【表１】
【００７７】
【表２】
【００７８】
【表３】
【００７９】
実施例２
ＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｆｒｅｅ ＰＳについてのプレキャリブレーション調整試験
Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｔａｇｏ社によって市販されている別のキットであるＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｆｒｅｅ ＰＳを用いて、試験を実施する。
【００８０】
前記キットは、免疫比濁方法を使用する遊離のプロテインＳの定量アッセイのための、実施例１で使用したキットと同じタイプのものである。
【００８１】
測定は、１０のＳＴＡ機器において実施した。
【００８２】
前記測定は、異なる血漿バッチ、すなわち、
−正常な対照血漿及び疾患状態の対照血漿（ＬＣＮ及びＬＣＰ：ＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｎ＋Ｐ−）；
−５３％血漿（凍結乾燥した疾患状態の血漿）；
−凍結単位血漿プール（Ｓｔａｇｏプール）；
−凍結単位血漿
に対して実施した。
【００８３】
表４は、内部キャリブレーターを用いた各装置のキャリブレーションによって得られた遊離プロテインＳ濃度（％）を与える。
【００８４】
表５は、調整せずに適用した市販のプレキャリブレーションを用いて得られた遊離プロテインＳ濃度（％）を与える（非調整プレキャリブレーション）。
【００８５】
表６は、Ｓｔａｇｏプールにおいて一点によるＤＯＤ調整後の市販のプレキャリブレーションを用いて得られた遊離プロテインＳ濃度（％）を与える（調整プレキャリブレーション）。
【００８６】
【表４】
【００８７】
【表５】
【００８８】
【表６】
【００８９】
事前に検量したＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｆｒｅｅ ＰＳ（非調整プレキャリブレーション）を用いて、５０％を超える濃度についての１０のＳＴＡに対して測定した機器間の変動は顕著に区別される。ＬＣＮに対する機器間のＣＶは、非調整プレキャリブレーションにおいて９．１６％であるのに対し、各機器のキャリブレーションでは２．７８％であり、調整プレキャリブレーションでは２．４５％である。
【００９０】
同様に、機器間の変動は、プレキャリブレーションが調整された際に、５３％血漿及び２６％ＬＣＰにおいて（明白な範囲で）改善された：
５３％血漿：ＣＶ機器キャリブレーション＝３．４０％、ＣＶ非調整プレキャリブレーション＝６．６２％、ＣＶ調整プレキャリブレーション＝１．９７％；
２６％ＬＣＰ血漿；ＣＶ機器キャリブレーション＝２．４５％、ＣＶ非調整プレキャリブレーション＝２．４５％、ＣＶ調整プレキャリブレーション＝２．２２％。
【００９１】
したがって、全ての濃度レベルにおいて、一点によるプレキャリブレーション調整は、機器間ＣＶ値を与え、これは、
−非調整プレキャリブレーションを用いて得られたものよりも優れており、
−少なくとも、内部キャリブレーターによる各機器のキャリブレーションを用いて得られたものと等しい。
【００９２】
結論として、機器間の変動は、本発明に係る一点によるＤＯＤ調整方法を用いたＳＴＡ Ｌｉａｔｅｓｔ Ｆｒｅｅ ＰＳで顕著に改善される。
【００９３】
実施例３
ＳＴＡ−Ｆｉｂ２プレキャリブレーション調整試験：対照のアラインメントに対するレベル（ｇ／ｌ）の補正の実行可能性（目標値に最も近い得られた値＝所定の系について与えられる範囲の中心）。
【００９４】
本発明に係る方法は、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ ＳｔａｇｏによってＳＴＡ−Ｆｉｂ２なる名称で市販されている試験に適用した。
【００９５】
前記試験は、Ｃｌａｕｓｓ法を使用する血漿フィブリノゲンアッセイキットからなる。
【００９６】
過剰なトロンビンの存在下において、適切な割合で希釈した血漿の凝固時間は、血漿のフィブリノゲンレベルに反比例した。
【００９７】
キット試薬は凍結乾燥されている。各試薬バッチについて、プレキャリブレーションがバーコードラベルで与えられる。使用したバッチのプレキャリブレーション係数は、かくして、バーコードラベルを単純にスキャンすることによって機器に直接送られる。
【００９８】
対照血漿（清浄及び低フィブリノゲン血症）を使用して、キャリブレーションを評価し、アッセイを実行する。
【００９９】
血漿フィブリノゲンレベルの測定は、約４０のＳＴＡ−Ｒ、約１０のＳＴＡｃ、及びＳＴＡ−Ｓａｔｅｌｌｉｔｅシステムを含む７１の機器の系の群に対して各種の対照血漿において実施した。
【０１００】
使用した対照は、測定パラメータについて以下の目標値：
−ＣＣＮは２．９５ｇ／ｌの目標値を有する血漿である；
−ＣＣＰは１．３０ｇ／ｌの目標値を有する血漿である；
−ＨＹＰＥＲは５．２７ｇ／ｌの目標値を有する血漿である
を有する標準血漿である。
【０１０１】
調整物としての役割を有する血漿は、３．２０ｇ／ｌの目標値を有するＡＪＰ血漿であった。
【０１０２】
本試験のために、各試験機器についてｎ＝５でレベルを測定した。各系におけるＡＪＰ血漿について得られた値に基づいて、レベルを調整した（算出された活性に対する調整のため、本願で開示した方法を用いて）。
【０１０３】
下表は、調整有り又は無しで得られた平均レベル（問題のバッチをプレキャリブレートすることによって得られたレベル）を、試験対照の目標値と得られた全体の標準偏差との関連で与えるものである。
【０１０４】
【表７】
【０１０５】
結論として、調整によって、試験した群について均一な標準偏差を保持しながら、その目標値に関して各種の血漿で得られたレベルを再調整する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
事前に検量した試薬を用いる機器で実施される、医学生物学的診断試験のための、機器又は事前に規定されているキャリブレーションカーブ（プレキャリブレーションカーブ）によって測定されたシグナル又は算出された活性のいずれかのための方法であって、以下の工程：
（ｉ）試験化合物の事前に決定された濃度又は活性を有する１つ又は２つのキャリブレーション調整物について、標準値として参照される、シグナル又は活性値を規定し、前記調整物について、標準シグナル又は活性値と、機器によって測定した値又はプレキャリブレーションカーブを使用して算出した活性値のいずれかの値との差を測定する工程、及び
前記測定した差が許容可能な値である場合には、
（ｉｉ）１つ又は双方の調整物について測定したシグナル又はプレキャリブレーションカーブで算出した活性の値が、１つの調整物又は２つの調整物の各々について工程（ｉ）で決定した標準シグナル又は活性値と同一のシグナル又は活性値となるように、機器によって測定したシグナル若しくは機器によって算出した活性の値を調整するか、又はプレキャリブレーションカーブの値を調整する工程、
（ｉｉｉ）前記事前に検量した試薬を用いてシグナル又は活性が測定される試験サンプルの全てに、（ｉｉ）に記載のものと同じ調整を適用する工程
を含む、方法。
【請求項２】
血液凝固検査に使用されることを特徴とする、請求項１に記載の調整方法。
【請求項３】
シグナル／ノイズ比が問題の試験において高いように、前記調整物の試験化合物濃度又は活性が規定される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
１つの調整物を使用することを特徴とする、請求項１又は２に記載の調整方法。
【請求項５】
前記工程（ｉ）で測定した差が２０から３０％以下であることを特徴とする、請求項２に記載の調整方法。
【請求項６】
前記調整物の組成が凝固因子に関して前記凝固検査にしたがって規定され、前記調整物が、濃度又は活性が事前に決定されている、使用する試験において試験する化合物を少なくとも含有することを特徴とする、請求項２から５のいずれか一項に記載の調整方法。
【請求項７】
前記調整物が、安定化凍結乾燥血漿又は安定化凍結乾燥血漿プールからなることを特徴とする、請求項２から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記調整物が精製又は半精製血漿タンパク質からなり、前記タンパク質が、実施する試験の一部として生じる反応を実施するために必要な因子を供給し、濃度又は活性が事前に決定されている試験化合物を更に含むことを特徴とする、請求項２から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記血液凝固検査が分散固相免疫学的アッセイ試験であることを特徴とする、請求項２から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
機能検査がＤ−二量体アッセイ試験である、請求項２から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記凝固検査が、ＡＰＴＴ試験、ＰＴ試験、ＴＴ試験、又は任意の他の従来の酵素学的試験である、請求項２から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記調整物がプレキャリブレーションカーブを作成するために使用されない、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
特に試薬の保存期間による、医学生物学的診断試験を実施するための所定の自動装置において使用する、各種の試薬、特に液体試薬の影響を補正するための、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法の使用。
【請求項１４】
医学生物学的診断試験に使用する機器の影響を補正するための、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法の使用。
【請求項１５】
前記試験が血液凝固検査であることを特徴とする、請求項１３又は１４に記載の使用。
【請求項１６】
血液凝固検査のためのキャリブレーション調整物であって、前記調整物が安定化凍結乾燥血漿又は安定化凍結乾燥血漿プールからなり、凝固検査の試験化合物の濃度又は活性が事前に決定されていることを特徴とする、キャリブレーション調整物。
【請求項１７】
血液凝固検査のためのキャリブレーション調整物であって、前記調整物が精製又は半精製血漿タンパク質からなり、前記タンパク質が、実施する試験の一部として生じる反応を実施するために必要とされる因子を供給し、その濃度又は活性が事前に決定されている試験化合物を更に含むことを特徴とする、キャリブレーション調整物。
【請求項１８】
試験化合物の濃度又は活性が、前記検査について高いシグナル／ノイズ比に対応する範囲において選択されることを特徴とする、請求項１６又は１７に記載のキャリブレーション調整物。
【請求項１】
事前に検量した試薬を用いる機器で実施される、医学生物学的診断試験のための、機器又は事前に規定されているキャリブレーションカーブ（プレキャリブレーションカーブ）によって測定されたシグナル又は算出された活性のいずれかのための方法であって、以下の工程：
（ｉ）試験化合物の事前に決定された濃度又は活性を有する１つ又は２つのキャリブレーション調整物について、標準値として参照される、シグナル又は活性値を規定し、前記調整物について、標準シグナル又は活性値と、機器によって測定した値又はプレキャリブレーションカーブを使用して算出した活性値のいずれかの値との差を測定する工程、及び
前記測定した差が許容可能な値である場合には、
（ｉｉ）１つ又は双方の調整物について測定したシグナル又はプレキャリブレーションカーブで算出した活性の値が、１つの調整物又は２つの調整物の各々について工程（ｉ）で決定した標準シグナル又は活性値と同一のシグナル又は活性値となるように、機器によって測定したシグナル若しくは機器によって算出した活性の値を調整するか、又はプレキャリブレーションカーブの値を調整する工程、
（ｉｉｉ）前記事前に検量した試薬を用いてシグナル又は活性が測定される試験サンプルの全てに、（ｉｉ）に記載のものと同じ調整を適用する工程
を含む、方法。
【請求項２】
血液凝固検査に使用されることを特徴とする、請求項１に記載の調整方法。
【請求項３】
シグナル／ノイズ比が問題の試験において高いように、前記調整物の試験化合物濃度又は活性が規定される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
１つの調整物を使用することを特徴とする、請求項１又は２に記載の調整方法。
【請求項５】
前記工程（ｉ）で測定した差が２０から３０％以下であることを特徴とする、請求項２に記載の調整方法。
【請求項６】
前記調整物の組成が凝固因子に関して前記凝固検査にしたがって規定され、前記調整物が、濃度又は活性が事前に決定されている、使用する試験において試験する化合物を少なくとも含有することを特徴とする、請求項２から５のいずれか一項に記載の調整方法。
【請求項７】
前記調整物が、安定化凍結乾燥血漿又は安定化凍結乾燥血漿プールからなることを特徴とする、請求項２から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記調整物が精製又は半精製血漿タンパク質からなり、前記タンパク質が、実施する試験の一部として生じる反応を実施するために必要な因子を供給し、濃度又は活性が事前に決定されている試験化合物を更に含むことを特徴とする、請求項２から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記血液凝固検査が分散固相免疫学的アッセイ試験であることを特徴とする、請求項２から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
機能検査がＤ−二量体アッセイ試験である、請求項２から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記凝固検査が、ＡＰＴＴ試験、ＰＴ試験、ＴＴ試験、又は任意の他の従来の酵素学的試験である、請求項２から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記調整物がプレキャリブレーションカーブを作成するために使用されない、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
特に試薬の保存期間による、医学生物学的診断試験を実施するための所定の自動装置において使用する、各種の試薬、特に液体試薬の影響を補正するための、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法の使用。
【請求項１４】
医学生物学的診断試験に使用する機器の影響を補正するための、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法の使用。
【請求項１５】
前記試験が血液凝固検査であることを特徴とする、請求項１３又は１４に記載の使用。
【請求項１６】
血液凝固検査のためのキャリブレーション調整物であって、前記調整物が安定化凍結乾燥血漿又は安定化凍結乾燥血漿プールからなり、凝固検査の試験化合物の濃度又は活性が事前に決定されていることを特徴とする、キャリブレーション調整物。
【請求項１７】
血液凝固検査のためのキャリブレーション調整物であって、前記調整物が精製又は半精製血漿タンパク質からなり、前記タンパク質が、実施する試験の一部として生じる反応を実施するために必要とされる因子を供給し、その濃度又は活性が事前に決定されている試験化合物を更に含むことを特徴とする、キャリブレーション調整物。
【請求項１８】
試験化合物の濃度又は活性が、前記検査について高いシグナル／ノイズ比に対応する範囲において選択されることを特徴とする、請求項１６又は１７に記載のキャリブレーション調整物。
【公表番号】特表２０１０−５４０９５０（Ｐ２０１０−５４０９５０Ａ）
【公表日】平成２２年１２月２４日（２０１０．１２．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２７４９５（Ｐ２０１０−５２７４９５）
【出願日】平成２０年１０月２日（２００８．１０．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００８／００１３７９
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０７７６７８
【国際公開日】平成２１年６月２５日（２００９．６．２５）
【出願人】（５０８３２８８００）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１２月２４日（２０１０．１２．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１０月２日（２００８．１０．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００８／００１３７９
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０７７６７８
【国際公開日】平成２１年６月２５日（２００９．６．２５）
【出願人】（５０８３２８８００）
【Ｆターム（参考）】
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