過敏性腸症候群の診断方法
本発明は、捕捉抗体としてのウサギ抗トリプターゼ及び検出抗体としてのアルカリホスファターゼにコンジュゲートされたＧ３を使用して血清マスト細胞β−トリプターゼレベルを決定するためのＥＬＩＳＡアッセイを提供する。アッセイ感度を向上させるため、発光基質ＣＰＳＤを使用した。β−トリプターゼ、ヒスタミン及び／又はプロスタグランジンＥ２の血清レベルを検出することによって過敏性腸症候群の診断を補助する方法も提供される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の診断を補助する方法であって、
（ａ）対象からの血液又は血清試料を、試料中に存在するβ−トリプターゼがβ−トリプターゼ及びβ−トリプターゼ結合部分を含む複合体に転換するのに好適な条件下において、β−トリプターゼ結合部分と接触させること；及び
（ｂ）前記複合体のレベルを決定し、これによって試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルを決定すること
を含む方法。
【請求項２】
（ｃ）試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルと対照レベルとを比較することをさらに含み、対照レベルに対する試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルの差が、前記対象がＩＢＳである可能性の増加を示す、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
対照レベルが、健常対象からの血液又は血清試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
対照レベルに対する試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルの増加が、前記対象がＩＢＳである可能性の増加を示す、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
対照レベルに対する試料中に存在するβ−トリプターゼの同一又は低減したレベルが、前記対象がＩＢＳでない可能性の増加を示す、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
対照レベルが、ＩＢＳの対象からの血液又は血清試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルである、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
対照レベルに対する試料中に存在するβ−トリプターゼの同一又は増加したレベルが、前記対象がＩＢＳである可能性の増加を示す、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
対照レベルに対する試料中に存在するβ−トリプターゼの低減したレベルが、前記対象がＩＢＳでない可能性の増加を示す、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
試料中に存在するヒスタミン及び／又はプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）のレベルを決定することをさらに含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
対象におけるＩＢＳの診断を補助する方法であって、
（ａ）対象からの血液又は血清試料を、試料中に存在するヒスタミンがヒスタミン及びヒスタミン結合部分を含む複合体に転換するのに好適な条件下において、ヒスタミン結合部分と接触させること；及び
（ｂ）前記複合体のレベルを決定し、これによって試料中に存在するヒスタミンのレベルを決定すること
を含む方法。
【請求項１１】
（ｃ）試料中に存在するヒスタミンのレベルと対照レベルとを比較することをさらに含み、対照レベルに対する試料中に存在するヒスタミンのレベルの差が、前記対象がＩＢＳである可能性の増加を示す、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
対照レベルが、健常対象からの血液又は血清試料中に存在するヒスタミンのレベルである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
対照レベルに対する試料中に存在するヒスタミンの増加したレベルが、前記対象がＩＢＳである可能性の増加を示す、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
対照レベルに対する試料中に存在するヒスタミンの同一又は低減したレベルが、前記対象がＩＢＳでない可能性の増加を示す、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
対照レベルが、ＩＢＳの対象からの血液又は血清試料中に存在するヒスタミンのレベルである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
対照レベルに対する試料中に存在するヒスタミンの同一又は増加したレベルが、前記対象がＩＢＳである可能性の増加を示す、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
対照レベルに対する試料中に存在するヒスタミンの低減したレベルが、前記対象がＩＢＳでない可能性の増加を示す、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
試料中に存在するβ−トリプターゼ及び／又はプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）のレベルを決定することをさらに含む、請求項１０〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
対象におけるＩＢＳの診断を補助する方法であって、
（ａ）対象からの血液又は血清試料を、試料中に存在するＰＧＥ２がＰＧＥ２及びＰＧＥ２結合部分を含む複合体に転換するのに好適な条件下において、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）結合部分と接触させること；及び
（ｂ）前記複合体のレベルを決定し、これによって試料中に存在するＰＧＥ２のレベルを決定すること
を含む方法。
【請求項２０】
（ｃ）試料中に存在するＰＧＥ２のレベルと対照レベルとを比較することをさらに含み、対照レベルに対する試料中に存在するＰＧＥ２のレベルの差が、前記対象がＩＢＳである可能性の増加を示す、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
対照レベルが、健常対象からの血液又は血清試料中に存在するＰＧＥ２のレベルである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
対照レベルに対する試料中に存在するＰＧＥ２の増加したレベルが、前記対象がＩＢＳである可能性の増加を示す、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
対照レベルに対する試料中に存在するＰＧＥ２の同一又は低減したレベルが、前記対象がＩＢＳでない可能性の増加を示す、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
対照レベルが、ＩＢＳの対象からの血液又は血清試料中に存在するＰＧＥ２のレベルである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
対照レベルに対する試料中に存在するＰＧＥ２の同一又は増加したレベルが、前記対象がＩＢＳである可能性の増加を示す、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
対照レベルに対する試料中に存在するＰＧＥ２の低減したレベルが、前記対象がＩＢＳでない可能性の増加を示す、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
試料中に存在するβ−トリプターゼ及び／又はヒスタミンのレベルを決定することをさらに含む、請求項１９〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
対象がＩＢＳの疑いがある、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
結合部分が抗体を含む、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ＥＬＩＳＡがサンドイッチＥＬＩＳＡである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
サンドイッチＥＬＩＳＡが、アッセイ感度を向上させるため、検出抗体としてのアルカリホスファターゼにコンジュゲートされた抗トリプターゼ抗体、及びＣＰＳＤ含有発光基質の使用を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
対象からの生物試料中の少なくとも１種の追加のバイオマーカーのレベルを検出することをさらに含み、前記バイオマーカーが、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子（ＴＷＥＡＫ）、成長関連癌遺伝子アルファ（ＧＲＯ−α）、インターロイキン−１ベータ（ＩＬ−１β）、組織メタロプロテイナーゼ阻害因子−１（ＴＩＭＰ−１）、抗サッカロマイセス・セレビシエ抗体（ＡＳＣＡ−ＩｇＡ）、抗ＣＢｉｒ−１抗体（ＣＢｉｒ１）、抗ヒト好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）、抗ヒト組織トランスグルタミナーゼＩｇＡ（ｔＴＧ）及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１〜３２のいずれか一項に記載に方法。
【請求項３４】
前記生物試料が、血清、血漿、全血及び糞便からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
（ｄ）対象についての症状プロファイルを決定することであって、前記症状プロファイルは、前記対象における少なくとも１種の症状の存在又は重症度を同定することによって決定され；及び
（ｅ）ＩＢＳバイオマーカーのレベル及びシステムプロファイルに基づくアルゴリズムを使用して対象がＩＢＳであること又はＩＢＳでないことを診断すること
をさらに含む、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記少なくとも１種の症状が、胸痛、胸部不快感、胸焼け、普通量の食事後の不快な膨満感、普通量の食事の完食不能、腹痛、腹部不快感、便秘、下痢、膨満感、腹部膨張、疼痛又は不快感を有することに伴う消極的な思考又は感情及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記少なくとも１種の症状の存在又は重症度が、質問票を使用して同定される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記アルゴリズムが統計的アルゴリズムを含む、請求項３５〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記統計的アルゴリズムが学習統計的分類子システムを含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記統計的アルゴリズムが、少なくとも２種の学習統計的分類子システムの組合せを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
少なくとも２種の学習統計的分類子システムの組合せが、ランダムフォレスト分類子及びニューラルネットワーク分類子を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
対象がＩＢＳである確率を提供することを含む、請求項３５〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
ＩＢＳの診断を、ＩＢＳ便秘型（ＩＢＳ−Ｃ）、ＩＢＳ下痢型（ＩＢＳ−Ｄ）、ＩＢＳ混合型（ＩＢＳ−Ｍ）、ＩＢＳ交替型（ＩＢＳ−Ａ）又は感染後ＩＢＳ（ＩＢＳ−ＰＩ）として分類することをさらに含む、請求項３５〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
ＩＢＳでない対象をＩＢＤである、ＩＢＤでない、又は健常対象であるとして診断することをさらに含む、請求項３５〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
対象における過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の進行又は退縮をモニタリングする方法であって、
（ａ）１回目に対象から採取された第１の血液又は血清試料を、試料中に存在するβ−トリプターゼがβ−トリプターゼ及びβ−トリプターゼ結合部分を含む複合体に転換するのに好適な条件下において、β−トリプターゼ結合部分と接触させること；
（ｂ）前記複合体のレベルを決定し、これによって第１の試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルを決定すること；
（ｃ）２回目に対象から採取された第２の血液又は血清試料を、試料中に存在するβ−トリプターゼがβ−トリプターゼ及びβ−トリプターゼ結合部分を含む複合体に転換するのに好適な条件下において、β−トリプターゼ結合部分と接触させること；
（ｄ）前記複合体のレベルを決定し、これによって第２の試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルを決定すること；及び
（ｅ）第１の試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルと第２の試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルとを比較すること
を含み、
第２の試料中のβ−トリプターゼのレベルが第１の試料と比べて高ければ、対象におけるＩＢＳの進行を示し、第２の試料中のβ−トリプターゼのレベルが第１の試料に比べて低ければ、対象におけるＩＢＳの退縮を示す方法。
【請求項４６】
試料中に存在するヒスタミン及び／又はプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）のレベルを決定することをさらに含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
対象における過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の進行又は退縮をモニタリングする方法であって、
（ａ）１回目に対象から採取された第１の血液又は血清試料を、試料中に存在するヒスタミンがヒスタミン及びヒスタミン結合部分を含む複合体に転換するのに好適な条件下において、ヒスタミン結合部分と接触させること；
（ｂ）前記複合体のレベルを決定し、これにより第１の試料中に存在するヒスタミンのレベルを決定すること；
（ｃ）２回目に対象から採取された第２の血液又は血清試料を、試料中に存在するヒスタミンがヒスタミン及びヒスタミン結合部分を含む複合体に転換するのに好適な条件下において、ヒスタミン結合部分と接触させること；
（ｄ）前記複合体のレベルを決定し、これにより第２の試料中に存在するヒスタミンのレベルを決定すること；及び
（ｅ）第１の試料中に存在するヒスタミンのレベルと第２の試料中に存在するヒスタミンのレベルとを比較すること
を含み、
第２の試料中のヒスタミンのレベルが第１の試料と比べて高ければ、対象におけるＩＢＳの進行を示し、第２の試料中のヒスタミンのレベルが第１の試料と比べて低ければ、対象におけるＩＢＳの退縮を示す方法。
【請求項４８】
試料中に存在するβ−トリプターゼ及び／又はプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）のレベルを決定することをさらに含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
対象における過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の進行又は退縮をモニタリングする方法であって、
（ａ）１回目に対象から採取された第１の血液又は血清試料を、試料中に存在するＰＧＥ２がＰＧＥ２及びＰＧＥ２結合部分を含む複合体に転換するのに好適な条件下において、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）結合部分と接触させること；
（ｂ）前記複合体のレベルを決定し、これによって第１の試料中に存在するＰＧＥ２のレベルを決定すること；
（ｃ）２回目に対象から採取された第２の血液又は血清試料を、試料中に存在するＰＧＥ２がＰＧＥ２及びＰＧＥ２結合部分を含む複合体に転換するのに好適な条件下において、ＰＧＥ２結合部分と接触させること；
（ｄ）前記複合体のレベルを決定し、これによって第２の試料中に存在するＰＧＥ２のレベルを決定すること；及び
（ｅ）第１の試料中に存在するＰＧＥ２のレベルと第２の試料中に存在するＰＧＥ２のレベルとを比較すること
を含み、
第２の試料中のＰＧＥ２のレベルが第１の試料と比べて高ければ、対象におけるＩＢＳの進行を示し、第２の試料中のＰＧＥ２のレベルが第１の試料と比べて低ければ、対象におけるＩＢＳの退縮を示す方法。
【請求項５０】
試料中に存在するβ−トリプターゼ及び／又はヒスタミンのレベルを決定することをさらに含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
対象からの生物試料中の少なくとも１種の追加のバイオマーカーのレベルを決定することをさらに含み、バイオマーカーは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子（ＴＷＥＡＫ）、成長関連癌遺伝子アルファ（ＧＲＯ−α）、インターロイキン−１ベータ（ＩＬ−１β）、組織メタロプロテイナーゼ阻害因子−１（ＴＩＭＰ−１）、抗サッカロマイセス・セレビシエ抗体（ＡＳＣＡ−ＩｇＡ）、抗ＣＢｉｒ−１抗体（ＣＢｉｒ１）、抗ヒト好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）、抗ヒト組織トランスグルタミナーゼＩｇＡ（ｔＴＧ）及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項４５〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
対象についての症状プロファイルを決定することをさらに含み、前記症状プロファイルは、前記対象における少なくとも１種の症状の存在又は重症度を同定することによって決定される、請求項４５〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記少なくとも１種の症状が、胸痛、胸部不快感、胸焼け、普通量の食事後の不快な膨満感、普通量の食事の完食不能、腹痛、腹部不快感、便秘、下痢、膨満感、腹部膨張、疼痛又は不快感を有することに伴う消極的な思考又は感情及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
ＩＢＳバイオマーカーのレベルに基づくアルゴリズムの使用を含む、請求項４５〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
アルゴリズムが、さらにシステムプロファイルに基づく、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記アルゴリズムが統計的アルゴリズムを含む、請求項５４又は５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記統計的アルゴリズムが学習統計的分類子システムを含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記統計的アルゴリズムが、少なくとも２種の学習統計的分類子システムの組合せを含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
少なくとも２種の学習統計的分類子システムの組合せが、ランダムフォレスト分類子及びニューラルネットワーク分類子を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の治療に有用な薬物を服用する対象における薬物の効力をモニタリングすることを含む、請求項４５〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
１種以上のプロセッサを制御して対象からの血液又は血清試料が過敏性腸症候群（ＩＢＳ）と関連するか否かを分類するコードを含むコンピュータ読取可能媒体であって、前記コードは、
診断マーカープロファイルを含むデータセットに統計処理を適用して前記診断マーカープロファイルに基づき前記試料をＩＢＳ試料又は非ＩＢＳ試料として分類する統計的に導出される判定を生成するための指示を含み、
前記診断マーカープロファイルは、β−トリプターゼ、ヒスタミン、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）及びこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１種の診断マーカーのレベルを示すコンピュータ読取可能媒体。
【請求項６２】
診断マーカープロファイルが、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子（ＴＷＥＡＫ）、成長関連癌遺伝子アルファ（ＧＲＯ−α）、インターロイキン−１ベータ（ＩＬ−１β）、組織メタロプロテイナーゼ阻害因子−１（ＴＩＭＰ−１）、抗サッカロマイセス・セレビシエ抗体（ＡＳＣＡ−ＩｇＡ）、抗ＣＢｉｒ−１抗体（ＣＢｉｒ１）、抗ヒト好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）、抗ヒト組織トランスグルタミナーゼＩｇＡ（ｔＴＧ）及びこれらの組合せからなる群から選択される、対象からの生物試料中の少なくとも１種の追加のバイオマーカーのレベルを示す、請求項６１に記載のコンピュータ読取可能媒体。
【請求項６３】
前記対象における少なくとも１種の症状の存在又は重症度を示す症状プロファイルと組み合わせて前記診断マーカープロファイルを含むデータセットに統計処理を適用して前記診断マーカープロファイル及び前記症状プロファイルに基づき前記試料をＩＢＳ試料又は非ＩＢＳ試料として分類する統計的に導出される判定を生成するための指示を含む、請求項６１又は６２に記載のコンピュータ読取可能媒体。
【請求項６４】
前記統計処理が、単一の学習統計的分類子システムを含む、請求項６３に記載のコンピュータ読取可能媒体。
【請求項６５】
前記統計処理が、少なくとも２種の学習統計的分類子システムの組合せを含む、請求項６３に記載のコンピュータ読取可能媒体。
【請求項６６】
対象からの血清又は血液試料が過敏性腸症候群（ＩＢＳ）と関連するか否かを分類するシステムであって、
（ａ）診断マーカープロファイルを含むデータセットを生成するように構成されたデータ収集モジュール（前記診断マーカープロファイルは、β−トリプターゼ、ヒスタミン、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）及びこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１種の診断マーカーの存在又はレベルを示す）；
（ｂ）統計処理をデータセットに適用することによってデータセットを処理して前記診断マーカープロファイルに基づき前記試料をＩＢＳ試料又は非ＩＢＳ試料として分類する統計的に導出される判定を生成するように構成されたデータ処理モジュール；及び
（ｃ）統計的に導出される判定を表示するように構成されたディスプレイモジュール
を含むシステム。
【請求項６７】
診断マーカープロファイルが、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子（ＴＷＥＡＫ）、成長関連癌遺伝子アルファ（ＧＲＯ−α）、インターロイキン−１ベータ（ＩＬ−１β）、組織メタロプロテイナーゼ阻害因子−１（ＴＩＭＰ−１）、抗サッカロマイセス・セレビシエ抗体（ＡＳＣＡ−ＩｇＡ）、抗ＣＢｉｒ−１抗体（ＣＢｉｒ１）、抗ヒト好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）、抗ヒト組織トランスグルタミナーゼＩｇＡ（ｔＴＧ）及びこれらの組合せからなる群から選択される、対象からの生物試料中の少なくとも１種の追加の診断マーカーのレベルを示す、請求項６６に記載のシステム。
【請求項６８】
前記対象における少なくとも１種の症状の存在又は重症度を示す症状プロファイルと組み合わせて前記診断マーカープロファイルを含むデータセットを生成するように構成されたデータ収集モジュール；データセットに統計処理を適用することによってデータセットを処理して前記診断マーカープロファイル及び前記症状プロファイルに基づき前記試料をＩＢＳ試料又は非ＩＢＳ試料として分類する統計的に導出される判定を生成するように構成されたデータ処理モジュール；及び統計的に導出される判定を表示するように構成されたディスプレイモジュールを含む、請求項６６又は６７に記載のシステム。
【請求項６９】
前記統計処理が、単一の学習統計的分類子システムを含む、請求項６８に記載のシステム。
【請求項７０】
前記統計処理が、少なくとも２種の学習統計的分類子システムの組合せを含む、請求項６９に記載のシステム。
【請求項７１】
血液又は血清試料中のβ−トリプターゼを検出する方法であって、
（ａ）固相表面を第１の抗β−トリプターゼ捕捉抗体によってコーティングする工程；
（ｂ）固相表面を血液又は血清試料と、試料中に存在するβ−トリプターゼがβ−トリプターゼ及び抗β−トリプターゼ捕捉抗体を含む複合体に転換するのに好適な条件下で接触させる工程；
（ｃ）β−トリプターゼ及び抗β−トリプターゼ複合体を、アルカリホスファターゼにコンジュゲートされた第２の検出抗体と、三重複合体を形成するのに好適な条件下で接触させる工程；及び
（ｄ）三重複合体を、ＣＰＳＤ発光基質と接触させる工程
を含む方法。
【請求項７２】
血液又は血清試料中のβ−トリプターゼの検出限界が、約１００ｐｇ／ｍＬ未満である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
血液又は血清試料中のβ−トリプターゼの検出限界が、約２５ｐｇ／ｍＬ未満である、請求項７２に記載の方法。
【請求項１】
対象における過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の診断を補助する方法であって、
（ａ）対象からの血液又は血清試料を、試料中に存在するβ−トリプターゼがβ−トリプターゼ及びβ−トリプターゼ結合部分を含む複合体に転換するのに好適な条件下において、β−トリプターゼ結合部分と接触させること；及び
（ｂ）前記複合体のレベルを決定し、これによって試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルを決定すること
を含む方法。
【請求項２】
（ｃ）試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルと対照レベルとを比較することをさらに含み、対照レベルに対する試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルの差が、前記対象がＩＢＳである可能性の増加を示す、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
対照レベルが、健常対象からの血液又は血清試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
対照レベルに対する試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルの増加が、前記対象がＩＢＳである可能性の増加を示す、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
対照レベルに対する試料中に存在するβ−トリプターゼの同一又は低減したレベルが、前記対象がＩＢＳでない可能性の増加を示す、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
対照レベルが、ＩＢＳの対象からの血液又は血清試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルである、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
対照レベルに対する試料中に存在するβ−トリプターゼの同一又は増加したレベルが、前記対象がＩＢＳである可能性の増加を示す、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
対照レベルに対する試料中に存在するβ−トリプターゼの低減したレベルが、前記対象がＩＢＳでない可能性の増加を示す、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
試料中に存在するヒスタミン及び／又はプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）のレベルを決定することをさらに含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
対象におけるＩＢＳの診断を補助する方法であって、
（ａ）対象からの血液又は血清試料を、試料中に存在するヒスタミンがヒスタミン及びヒスタミン結合部分を含む複合体に転換するのに好適な条件下において、ヒスタミン結合部分と接触させること；及び
（ｂ）前記複合体のレベルを決定し、これによって試料中に存在するヒスタミンのレベルを決定すること
を含む方法。
【請求項１１】
（ｃ）試料中に存在するヒスタミンのレベルと対照レベルとを比較することをさらに含み、対照レベルに対する試料中に存在するヒスタミンのレベルの差が、前記対象がＩＢＳである可能性の増加を示す、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
対照レベルが、健常対象からの血液又は血清試料中に存在するヒスタミンのレベルである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
対照レベルに対する試料中に存在するヒスタミンの増加したレベルが、前記対象がＩＢＳである可能性の増加を示す、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
対照レベルに対する試料中に存在するヒスタミンの同一又は低減したレベルが、前記対象がＩＢＳでない可能性の増加を示す、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
対照レベルが、ＩＢＳの対象からの血液又は血清試料中に存在するヒスタミンのレベルである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
対照レベルに対する試料中に存在するヒスタミンの同一又は増加したレベルが、前記対象がＩＢＳである可能性の増加を示す、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
対照レベルに対する試料中に存在するヒスタミンの低減したレベルが、前記対象がＩＢＳでない可能性の増加を示す、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
試料中に存在するβ−トリプターゼ及び／又はプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）のレベルを決定することをさらに含む、請求項１０〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
対象におけるＩＢＳの診断を補助する方法であって、
（ａ）対象からの血液又は血清試料を、試料中に存在するＰＧＥ２がＰＧＥ２及びＰＧＥ２結合部分を含む複合体に転換するのに好適な条件下において、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）結合部分と接触させること；及び
（ｂ）前記複合体のレベルを決定し、これによって試料中に存在するＰＧＥ２のレベルを決定すること
を含む方法。
【請求項２０】
（ｃ）試料中に存在するＰＧＥ２のレベルと対照レベルとを比較することをさらに含み、対照レベルに対する試料中に存在するＰＧＥ２のレベルの差が、前記対象がＩＢＳである可能性の増加を示す、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
対照レベルが、健常対象からの血液又は血清試料中に存在するＰＧＥ２のレベルである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
対照レベルに対する試料中に存在するＰＧＥ２の増加したレベルが、前記対象がＩＢＳである可能性の増加を示す、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
対照レベルに対する試料中に存在するＰＧＥ２の同一又は低減したレベルが、前記対象がＩＢＳでない可能性の増加を示す、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
対照レベルが、ＩＢＳの対象からの血液又は血清試料中に存在するＰＧＥ２のレベルである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
対照レベルに対する試料中に存在するＰＧＥ２の同一又は増加したレベルが、前記対象がＩＢＳである可能性の増加を示す、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
対照レベルに対する試料中に存在するＰＧＥ２の低減したレベルが、前記対象がＩＢＳでない可能性の増加を示す、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
試料中に存在するβ−トリプターゼ及び／又はヒスタミンのレベルを決定することをさらに含む、請求項１９〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
対象がＩＢＳの疑いがある、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
結合部分が抗体を含む、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ＥＬＩＳＡがサンドイッチＥＬＩＳＡである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
サンドイッチＥＬＩＳＡが、アッセイ感度を向上させるため、検出抗体としてのアルカリホスファターゼにコンジュゲートされた抗トリプターゼ抗体、及びＣＰＳＤ含有発光基質の使用を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
対象からの生物試料中の少なくとも１種の追加のバイオマーカーのレベルを検出することをさらに含み、前記バイオマーカーが、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子（ＴＷＥＡＫ）、成長関連癌遺伝子アルファ（ＧＲＯ−α）、インターロイキン−１ベータ（ＩＬ−１β）、組織メタロプロテイナーゼ阻害因子−１（ＴＩＭＰ−１）、抗サッカロマイセス・セレビシエ抗体（ＡＳＣＡ−ＩｇＡ）、抗ＣＢｉｒ−１抗体（ＣＢｉｒ１）、抗ヒト好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）、抗ヒト組織トランスグルタミナーゼＩｇＡ（ｔＴＧ）及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１〜３２のいずれか一項に記載に方法。
【請求項３４】
前記生物試料が、血清、血漿、全血及び糞便からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
（ｄ）対象についての症状プロファイルを決定することであって、前記症状プロファイルは、前記対象における少なくとも１種の症状の存在又は重症度を同定することによって決定され；及び
（ｅ）ＩＢＳバイオマーカーのレベル及びシステムプロファイルに基づくアルゴリズムを使用して対象がＩＢＳであること又はＩＢＳでないことを診断すること
をさらに含む、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記少なくとも１種の症状が、胸痛、胸部不快感、胸焼け、普通量の食事後の不快な膨満感、普通量の食事の完食不能、腹痛、腹部不快感、便秘、下痢、膨満感、腹部膨張、疼痛又は不快感を有することに伴う消極的な思考又は感情及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記少なくとも１種の症状の存在又は重症度が、質問票を使用して同定される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記アルゴリズムが統計的アルゴリズムを含む、請求項３５〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記統計的アルゴリズムが学習統計的分類子システムを含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記統計的アルゴリズムが、少なくとも２種の学習統計的分類子システムの組合せを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
少なくとも２種の学習統計的分類子システムの組合せが、ランダムフォレスト分類子及びニューラルネットワーク分類子を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
対象がＩＢＳである確率を提供することを含む、請求項３５〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
ＩＢＳの診断を、ＩＢＳ便秘型（ＩＢＳ−Ｃ）、ＩＢＳ下痢型（ＩＢＳ−Ｄ）、ＩＢＳ混合型（ＩＢＳ−Ｍ）、ＩＢＳ交替型（ＩＢＳ−Ａ）又は感染後ＩＢＳ（ＩＢＳ−ＰＩ）として分類することをさらに含む、請求項３５〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
ＩＢＳでない対象をＩＢＤである、ＩＢＤでない、又は健常対象であるとして診断することをさらに含む、請求項３５〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
対象における過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の進行又は退縮をモニタリングする方法であって、
（ａ）１回目に対象から採取された第１の血液又は血清試料を、試料中に存在するβ−トリプターゼがβ−トリプターゼ及びβ−トリプターゼ結合部分を含む複合体に転換するのに好適な条件下において、β−トリプターゼ結合部分と接触させること；
（ｂ）前記複合体のレベルを決定し、これによって第１の試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルを決定すること；
（ｃ）２回目に対象から採取された第２の血液又は血清試料を、試料中に存在するβ−トリプターゼがβ−トリプターゼ及びβ−トリプターゼ結合部分を含む複合体に転換するのに好適な条件下において、β−トリプターゼ結合部分と接触させること；
（ｄ）前記複合体のレベルを決定し、これによって第２の試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルを決定すること；及び
（ｅ）第１の試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルと第２の試料中に存在するβ−トリプターゼのレベルとを比較すること
を含み、
第２の試料中のβ−トリプターゼのレベルが第１の試料と比べて高ければ、対象におけるＩＢＳの進行を示し、第２の試料中のβ−トリプターゼのレベルが第１の試料に比べて低ければ、対象におけるＩＢＳの退縮を示す方法。
【請求項４６】
試料中に存在するヒスタミン及び／又はプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）のレベルを決定することをさらに含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
対象における過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の進行又は退縮をモニタリングする方法であって、
（ａ）１回目に対象から採取された第１の血液又は血清試料を、試料中に存在するヒスタミンがヒスタミン及びヒスタミン結合部分を含む複合体に転換するのに好適な条件下において、ヒスタミン結合部分と接触させること；
（ｂ）前記複合体のレベルを決定し、これにより第１の試料中に存在するヒスタミンのレベルを決定すること；
（ｃ）２回目に対象から採取された第２の血液又は血清試料を、試料中に存在するヒスタミンがヒスタミン及びヒスタミン結合部分を含む複合体に転換するのに好適な条件下において、ヒスタミン結合部分と接触させること；
（ｄ）前記複合体のレベルを決定し、これにより第２の試料中に存在するヒスタミンのレベルを決定すること；及び
（ｅ）第１の試料中に存在するヒスタミンのレベルと第２の試料中に存在するヒスタミンのレベルとを比較すること
を含み、
第２の試料中のヒスタミンのレベルが第１の試料と比べて高ければ、対象におけるＩＢＳの進行を示し、第２の試料中のヒスタミンのレベルが第１の試料と比べて低ければ、対象におけるＩＢＳの退縮を示す方法。
【請求項４８】
試料中に存在するβ−トリプターゼ及び／又はプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）のレベルを決定することをさらに含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
対象における過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の進行又は退縮をモニタリングする方法であって、
（ａ）１回目に対象から採取された第１の血液又は血清試料を、試料中に存在するＰＧＥ２がＰＧＥ２及びＰＧＥ２結合部分を含む複合体に転換するのに好適な条件下において、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）結合部分と接触させること；
（ｂ）前記複合体のレベルを決定し、これによって第１の試料中に存在するＰＧＥ２のレベルを決定すること；
（ｃ）２回目に対象から採取された第２の血液又は血清試料を、試料中に存在するＰＧＥ２がＰＧＥ２及びＰＧＥ２結合部分を含む複合体に転換するのに好適な条件下において、ＰＧＥ２結合部分と接触させること；
（ｄ）前記複合体のレベルを決定し、これによって第２の試料中に存在するＰＧＥ２のレベルを決定すること；及び
（ｅ）第１の試料中に存在するＰＧＥ２のレベルと第２の試料中に存在するＰＧＥ２のレベルとを比較すること
を含み、
第２の試料中のＰＧＥ２のレベルが第１の試料と比べて高ければ、対象におけるＩＢＳの進行を示し、第２の試料中のＰＧＥ２のレベルが第１の試料と比べて低ければ、対象におけるＩＢＳの退縮を示す方法。
【請求項５０】
試料中に存在するβ−トリプターゼ及び／又はヒスタミンのレベルを決定することをさらに含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
対象からの生物試料中の少なくとも１種の追加のバイオマーカーのレベルを決定することをさらに含み、バイオマーカーは、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子（ＴＷＥＡＫ）、成長関連癌遺伝子アルファ（ＧＲＯ−α）、インターロイキン−１ベータ（ＩＬ−１β）、組織メタロプロテイナーゼ阻害因子−１（ＴＩＭＰ−１）、抗サッカロマイセス・セレビシエ抗体（ＡＳＣＡ−ＩｇＡ）、抗ＣＢｉｒ−１抗体（ＣＢｉｒ１）、抗ヒト好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）、抗ヒト組織トランスグルタミナーゼＩｇＡ（ｔＴＧ）及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項４５〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
対象についての症状プロファイルを決定することをさらに含み、前記症状プロファイルは、前記対象における少なくとも１種の症状の存在又は重症度を同定することによって決定される、請求項４５〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記少なくとも１種の症状が、胸痛、胸部不快感、胸焼け、普通量の食事後の不快な膨満感、普通量の食事の完食不能、腹痛、腹部不快感、便秘、下痢、膨満感、腹部膨張、疼痛又は不快感を有することに伴う消極的な思考又は感情及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
ＩＢＳバイオマーカーのレベルに基づくアルゴリズムの使用を含む、請求項４５〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
アルゴリズムが、さらにシステムプロファイルに基づく、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記アルゴリズムが統計的アルゴリズムを含む、請求項５４又は５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記統計的アルゴリズムが学習統計的分類子システムを含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記統計的アルゴリズムが、少なくとも２種の学習統計的分類子システムの組合せを含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
少なくとも２種の学習統計的分類子システムの組合せが、ランダムフォレスト分類子及びニューラルネットワーク分類子を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の治療に有用な薬物を服用する対象における薬物の効力をモニタリングすることを含む、請求項４５〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
１種以上のプロセッサを制御して対象からの血液又は血清試料が過敏性腸症候群（ＩＢＳ）と関連するか否かを分類するコードを含むコンピュータ読取可能媒体であって、前記コードは、
診断マーカープロファイルを含むデータセットに統計処理を適用して前記診断マーカープロファイルに基づき前記試料をＩＢＳ試料又は非ＩＢＳ試料として分類する統計的に導出される判定を生成するための指示を含み、
前記診断マーカープロファイルは、β−トリプターゼ、ヒスタミン、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）及びこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１種の診断マーカーのレベルを示すコンピュータ読取可能媒体。
【請求項６２】
診断マーカープロファイルが、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子（ＴＷＥＡＫ）、成長関連癌遺伝子アルファ（ＧＲＯ−α）、インターロイキン−１ベータ（ＩＬ−１β）、組織メタロプロテイナーゼ阻害因子−１（ＴＩＭＰ−１）、抗サッカロマイセス・セレビシエ抗体（ＡＳＣＡ−ＩｇＡ）、抗ＣＢｉｒ−１抗体（ＣＢｉｒ１）、抗ヒト好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）、抗ヒト組織トランスグルタミナーゼＩｇＡ（ｔＴＧ）及びこれらの組合せからなる群から選択される、対象からの生物試料中の少なくとも１種の追加のバイオマーカーのレベルを示す、請求項６１に記載のコンピュータ読取可能媒体。
【請求項６３】
前記対象における少なくとも１種の症状の存在又は重症度を示す症状プロファイルと組み合わせて前記診断マーカープロファイルを含むデータセットに統計処理を適用して前記診断マーカープロファイル及び前記症状プロファイルに基づき前記試料をＩＢＳ試料又は非ＩＢＳ試料として分類する統計的に導出される判定を生成するための指示を含む、請求項６１又は６２に記載のコンピュータ読取可能媒体。
【請求項６４】
前記統計処理が、単一の学習統計的分類子システムを含む、請求項６３に記載のコンピュータ読取可能媒体。
【請求項６５】
前記統計処理が、少なくとも２種の学習統計的分類子システムの組合せを含む、請求項６３に記載のコンピュータ読取可能媒体。
【請求項６６】
対象からの血清又は血液試料が過敏性腸症候群（ＩＢＳ）と関連するか否かを分類するシステムであって、
（ａ）診断マーカープロファイルを含むデータセットを生成するように構成されたデータ収集モジュール（前記診断マーカープロファイルは、β−トリプターゼ、ヒスタミン、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）及びこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１種の診断マーカーの存在又はレベルを示す）；
（ｂ）統計処理をデータセットに適用することによってデータセットを処理して前記診断マーカープロファイルに基づき前記試料をＩＢＳ試料又は非ＩＢＳ試料として分類する統計的に導出される判定を生成するように構成されたデータ処理モジュール；及び
（ｃ）統計的に導出される判定を表示するように構成されたディスプレイモジュール
を含むシステム。
【請求項６７】
診断マーカープロファイルが、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）、ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子（ＴＷＥＡＫ）、成長関連癌遺伝子アルファ（ＧＲＯ−α）、インターロイキン−１ベータ（ＩＬ−１β）、組織メタロプロテイナーゼ阻害因子−１（ＴＩＭＰ−１）、抗サッカロマイセス・セレビシエ抗体（ＡＳＣＡ−ＩｇＡ）、抗ＣＢｉｒ−１抗体（ＣＢｉｒ１）、抗ヒト好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）、抗ヒト組織トランスグルタミナーゼＩｇＡ（ｔＴＧ）及びこれらの組合せからなる群から選択される、対象からの生物試料中の少なくとも１種の追加の診断マーカーのレベルを示す、請求項６６に記載のシステム。
【請求項６８】
前記対象における少なくとも１種の症状の存在又は重症度を示す症状プロファイルと組み合わせて前記診断マーカープロファイルを含むデータセットを生成するように構成されたデータ収集モジュール；データセットに統計処理を適用することによってデータセットを処理して前記診断マーカープロファイル及び前記症状プロファイルに基づき前記試料をＩＢＳ試料又は非ＩＢＳ試料として分類する統計的に導出される判定を生成するように構成されたデータ処理モジュール；及び統計的に導出される判定を表示するように構成されたディスプレイモジュールを含む、請求項６６又は６７に記載のシステム。
【請求項６９】
前記統計処理が、単一の学習統計的分類子システムを含む、請求項６８に記載のシステム。
【請求項７０】
前記統計処理が、少なくとも２種の学習統計的分類子システムの組合せを含む、請求項６９に記載のシステム。
【請求項７１】
血液又は血清試料中のβ−トリプターゼを検出する方法であって、
（ａ）固相表面を第１の抗β−トリプターゼ捕捉抗体によってコーティングする工程；
（ｂ）固相表面を血液又は血清試料と、試料中に存在するβ−トリプターゼがβ−トリプターゼ及び抗β−トリプターゼ捕捉抗体を含む複合体に転換するのに好適な条件下で接触させる工程；
（ｃ）β−トリプターゼ及び抗β−トリプターゼ複合体を、アルカリホスファターゼにコンジュゲートされた第２の検出抗体と、三重複合体を形成するのに好適な条件下で接触させる工程；及び
（ｄ）三重複合体を、ＣＰＳＤ発光基質と接触させる工程
を含む方法。
【請求項７２】
血液又は血清試料中のβ−トリプターゼの検出限界が、約１００ｐｇ／ｍＬ未満である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
血液又は血清試料中のβ−トリプターゼの検出限界が、約２５ｐｇ／ｍＬ未満である、請求項７２に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【公表番号】特表２０１２−５３１５９３（Ｐ２０１２−５３１５９３Ａ）
【公表日】平成２４年１２月１０日（２０１２．１２．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５１７７４２（Ｐ２０１２−５１７７４２）
【出願日】平成２２年６月２４日（２０１０．６．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３９８６６
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１５１６９９
【国際公開日】平成２２年１２月２９日（２０１０．１２．２９）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．フロッピー
２．ＪＡＶＡ
３．ＪＡＶＡＳＣＲＩＰＴ
４．ＥＴＨＥＲＮＥＴ
【出願人】（５９９１３２９０４）ネステク ソシエテ アノニム (637)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１２月１０日（２０１２．１２．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年６月２４日（２０１０．６．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３９８６６
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１５１６９９
【国際公開日】平成２２年１２月２９日（２０１０．１２．２９）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．フロッピー
２．ＪＡＶＡ
３．ＪＡＶＡＳＣＲＩＰＴ
４．ＥＴＨＥＲＮＥＴ
【出願人】（５９９１３２９０４）ネステク ソシエテ アノニム (637)
【Ｆターム（参考）】
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