遺伝子発現の特異的阻害のためのダイサー基質剤及び方法
本発明は、細胞を、細胞中の標的遺伝子の発現を低下させるのに有効な量の分離された二重鎖核酸（ｄｓＮＡ）と接触させることを含む、細胞中の標的遺伝子の発現を低下させる組成物及び方法を提供する。本発明のｄｓＮＡｓは一本鎖伸長を有する（ほとんどの実施態様においては、一本鎖伸長は、少なくとも１種の修飾ヌクレオチド及び／又はホスフェート骨格修飾を含む）。このような一本鎖伸長Ｄｉｃｅｒ基質ｓｉＲＮＡｓ（ＤｓｉＲＮＡｓ）は、対応する二重鎖ＤｓｉＲＮＡｓと比較し、効果的なＲＮＡ阻害剤であることが証明された。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
５’末端及び３’末端を有する第一のオリゴヌクレオチド鎖と、５’末端及び３’末端を有する第二のオリゴヌクレオチド鎖とを有する単離された二本鎖核酸であって、前記５’末端の各々が５’末端ヌクレオチドを含み、かつ前記３’末端の各々が３’末端ヌクレオチドを含み：
前記第一の鎖が２５〜３０ヌクレオチド残基の長さを有し、５’末端ヌクレオチド（１位）から開始して、前記第一の鎖の１〜２３位が少なくとも８個のリボヌクレオチドを含み；
前記第二の鎖が３６〜６６ヌクレオチド残基の長さを有し、３’末端ヌクレオチドから開始して、前記第一の鎖の１〜２３位と対をなす位置に少なくとも８個のリボヌクレオチドを含んで二重鎖を形成し；
前記第二の鎖の少なくとも３’末端ヌクレオチドが前記第一の鎖と対をなさず、また６個までの連続した３’末端ヌクレオチドが、前記第一の鎖と対をなさず、それにより１〜６ヌクレオチドの３’の一本鎖オーバーハングを形成し；
前記第二の鎖の５’末端が、前記第一の鎖と対をなさない１０〜３０個の連続したヌクレオチドを含み、それにより１０〜３０ヌクレオチドの一本鎖の５’オーバーハングを形成し；
前記第一の鎖と第二の鎖とが最大相補性に関して整合された際に、少なくとも第一の鎖の５’末端及び３’末端ヌクレオチドが前記第二の鎖のヌクレオチドと塩基対をなし、それにより前記第一の鎖と第二の鎖との間に実質的に二重鎖の領域を形成し；
前記第二の鎖が、前記二本鎖核酸が哺乳動物細胞内に導入された際に標的遺伝子発現を低減するように、前記第二の鎖の少なくとも１９個のリボヌクレオチドの長さに沿って標的ＲＮＡに対して十分相補的である、単離された二本鎖核酸。
【請求項２】
前記第一の鎖の２４位から第一の鎖の３’末端ヌクレオチド残基までの間の及び前記第一の鎖の２４位と第一の鎖の３’末端ヌクレオチド残基とを含む前記第一の鎖の少なくとも一つのヌクレオチドが、デオキシリボヌクレオチドである、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３】
前記第二の鎖の不対３’末端ヌクレオチドを含まない、少なくとも１０個の連続したヌクレオチド及び多くて１５個の連続したヌクレオチドが、前記第一の鎖と対をなさず、それにより前記第二の鎖内に１０〜１５ヌクレオチドの一本鎖の５’オーバーハングを形成する、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項４】
前記第一の鎖２４位から第一の鎖の３’末端ヌクレオチド残基までに対応し及び従って塩基対をなす前記第二の鎖のヌクレオチドの間の及び該ヌクレオチドを含む前記第二の鎖の少なくとも一つのヌクレオチドが、リボヌクレオチドである、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５】
前記第一の鎖と第二の鎖との間の前記実質的に二重鎖の領域が、完全に二重鎖の領域を含み、前記完全に二重鎖の領域が、前記第二の鎖の対応するヌクレオチドと対をなす第一の鎖の５’末端ヌクレオチドと３’末端ヌクレオチドとの間において不対塩基を有さない、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６】
前記実質的に二重鎖の領域が、前記第二の鎖の対応するヌクレオチドと対をなす第一の鎖の５’末端ヌクレオチドと３’末端ヌクレオチドとの間に：１個の不対塩基対；２個の不対塩基対、３個の不対塩基対、４個の不対塩基対、及び５個の不対塩基対からなる群から選択される不対塩基対を含む、請求項５に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７】
前記不対塩基対が、連続又は不連続である、請求項６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項８】
前記第一の鎖が３０ヌクレオチドまでの長さを有し、前記第一の鎖の３’から前記第一の鎖の２３位までのヌクレオチドが：前記第二の鎖のヌクレオチドと塩基対をなすデオキシリボヌクレオチドである、前記第一の鎖の２４位から３’末端ヌクレオチド残基までの２、３、４、５及び６個のヌクレオチド残基からなる群から選択されるデオキシヌクレオチドを含む、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項９】
前記第二の鎖のヌクレオチドと塩基対をなす前記第一の鎖の前記デオキシリボヌクレオチドが、連続したデオキシリボヌクレオチドである、請求項８に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１０】
前記第一の鎖の２４〜３０位の二つ又はそれ以上の連続ヌクレオチド残基が、前記第二の鎖のヌクレオチドと塩基対をなすデオキシリボヌクレオチドである、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１１】
前記第一の鎖が３０ヌクレオチドまでの長さを有し：２４位及び２５位、２５位及び２６位、２６位及び２７位、２７位及び２８位、２８位及び２９位、並びに２９位及び３０位からなる群から選択される一対のデオキシリボヌクレオチドを含み、デオキシリボヌクレオチドの前記第一の鎖の対が、前記第二の鎖の対応するヌクレオチド対と塩基対をなす、請求項１０に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１２】
前記第一の鎖の１〜２８位の前記８個又はそれ以上のリボヌクレオチドが、連続したリボヌクレオチドである、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１３】
前記第一のオリゴヌクレオチド鎖の１〜２８位の各ヌクレオチド残基が、前記第二の鎖のヌクレオチドと塩基対をなすリボヌクレオチドである、請求項１２に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１４】
前記第二の鎖の前記３’の一本鎖オーバーハングが：１〜４ヌクレオチド、１〜３ヌクレオチド（nucleoties）、１〜２ヌクレオチド、及び２ヌクレオチド長からなる群から選択される長さを有する、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１５】
前記第二の鎖の３’オーバーハングの前記ヌクレオチドが修飾ヌクレオチドを含む、請求項１５に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１６】
前記修飾ヌクレオチド残基が２’−Ｏ−メチル、２’−メトキシエトキシ、２’−フルオロ、２’−アリル、２’−Ｏ−［２−（メチルアミノ）−２−オキソエチル］、４’−チオ、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’−ブリッジ、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’−ブリッジ、２’−ＬＮＡ、２’−アミノ及び２’−Ｏ−（Ｎ−メチルカルバメート）からなる群から選択される、請求項１５に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１７】
前記第二の鎖の３’オーバーハングの前記修飾ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドである、請求項１５に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１８】
前記第二の鎖の３’オーバーハングが２ヌクレオチド長であり、前記第二の鎖の３’オーバーハングの前記修飾ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチル修飾リボヌクレオチドである、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１９】
前記第一のオリゴヌクレオチド鎖の５’末端ヌクレオチド残基に対応する前記第二の鎖のヌクレオチド残基（１Ａ位）から開始する前記第二の鎖が、前記第一の鎖の３’末端残基に対応する、前記第二の鎖の１６Ａ位から５’残基までの全位置に非修飾ヌクレオチド残基を含む、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２０】
前記第二の鎖の３’末端における第一のヌクレオチド（１Ａ位）から開始して、前記第二の鎖の３’末端から１Ａ位、２Ａ位及び３Ａ位が修飾ヌクレオチドである、請求項１３に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２１】
前記第一のオリゴヌクレオチド鎖の５’末端ヌクレオチド残基に対応する前記第二の鎖のヌクレオチド残基（１Ａ位）から開始する前記第二のオリゴヌクレオチド鎖が、１Ａ位から１５Ａ位までに交互の修飾及び非修飾ヌクレオチド残基を含む、請求項１４に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２２】
前記第二の鎖の前記５’の一本鎖オーバーハングが：１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０ヌクレオチド長からなる群から選択される長さを有する、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２３】
前記第二の鎖の５’オーバーハングの前記ヌクレオチドがホスフェートバックボーン修飾を含む、請求項２２に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２４】
前記ホスフェートバックボーン修飾が、ホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホトリエステル、及びメチルホスホネート、ロックト核酸、モルホリノ及び二環式フラノース類似体からなる群から選択される、請求項２３に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２５】
前記第二の鎖の５’末端ヌクレオチド残基（１Ｂ位）から開始する前記第二の鎖が、２Ｂ位から、前記第一の鎖の３’末端残基に対応する前記第二の鎖の５’残基までのヌクレオチドの間にホスホロチオエートバックボーン修飾を含む、請求項２４に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２６】
前記第二の鎖の５’オーバーハングが、リボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドを含む、請求項２２に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２７】
前記第二の鎖の５’オーバーハングの前記ヌクレオチドが、修飾ヌクレオチドを含む、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２８】
前記修飾ヌクレオチド残基が、２’−Ｏ−メチル、２’−メトキシエトキシ、２’−フルオロ、２’−アリル、２’−Ｏ−［２−（メチルアミノ）−２−オキソエチル］、４’−チオ、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’−ブリッジ、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’−ブリッジ、２’−ＬＮＡ、２’−アミノ及び２’−Ｏ−（Ｎ−メチルカルバメート）からなる群から選択される、請求項２７に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２９】
前記第二の鎖の５’オーバーハングの前記修飾ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドである、請求項２７に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３０】
第二の鎖の５’末端ヌクレオチド残基が２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドである、請求項２７に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３１】
５’末端及び３’末端を有する第三のオリゴヌクレオチド鎖を更に含み：
前記第三の鎖が、１０〜３０ヌクレオチド残基の長さを有し；
前記第三の鎖の少なくとも１０個の連続したヌクレオチド及び多くて３０個の連続したヌクレオチドが、前記第二の鎖の５’末端と対をなす、請求項１のいずれかに記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３２】
前記第三の鎖がリボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドを含む、請求項３１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３３】
前記第二の鎖の５’オーバーハングの全ヌクレオチドがリボヌクレオチドである、請求項３１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３４】
前記第三の鎖の前記ヌクレオチドが、修飾ヌクレオチドを含む、請求項３１のいずれかに記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３５】
前記修飾ヌクレオチド残基が、２’−Ｏ−メチル、２’−メトキシエトキシ、２’−フルオロ、２’−アリル、２’−Ｏ−［２−（メチルアミノ）−２−オキソエチル］、４’−チオ、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’−ブリッジ、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’−ブリッジ、２’−ＬＮＡ、２’−アミノ及び２’−Ｏ−（Ｎ−メチルカルバメート）からなる群から選択される、請求項３１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３６】
前記第三の鎖の前記修飾ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドである、請求項３１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３７】
前記第三の鎖が、ホスフェートバックボーン修飾を含む、請求項３１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３８】
前記ホスフェートバックボーン修飾が、ホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホトリエステル、及びメチルホスホネート、ロックト核酸、モルホリノ及び二環式フラノース類似体からなる群から選択される、請求項３７に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３９】
前記第三の鎖の５’末端ヌクレオチド残基（１Ｃ位）から開始する前記第三の鎖が、１Ｃ位と２Ｃ位とのヌクレオチドの間にホスホロチオエートバックボーン修飾を含む、請求項３８に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項４０】
前記第二又は第一のオリゴヌクレオチド鎖のヌクレオチドが、ダイサー切断の指向を案内する修飾ヌクレオチドで置換されている、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項４１】
第一の鎖が、第二の鎖のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％相補的なヌクレオチド配列を有する、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項４２】
前記標的ＲＮＡがＫＲＡＳである、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項４３】
細胞内で標的遺伝子の発現を低減するための方法であって：
細胞を、参照ｄｓＲＮＡと比較して細胞内で標的遺伝子の発現を低減するのに有効な量の、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸と接触させることを含む、方法。
【請求項４４】
動物内で標的遺伝子の発現を低減するための方法であって：参照ｄｓＲＮＡと比較して動物の細胞内で標的遺伝子の発現を低減するのに有効な量の、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸で動物を処置することを含む、方法。
【請求項４５】
前記二本鎖核酸を化学的に又は酵素的に合成することを含む、請求項１に記載の二本鎖核酸の合成方法。
【請求項４６】
５’末端及び３’末端を有する第一のオリゴヌクレオチド鎖と、５’末端及び３’末端を有する第二のオリゴヌクレオチド鎖とを含む単離された二本鎖核酸であって、前記５’末端の各々が５’末端ヌクレオチドを含み、かつ前記３’末端の各々が３’末端ヌクレオチドを含み：
前記第一の鎖が３５〜６０ヌクレオチド残基の長さを有し、５’末端ヌクレオチド（１位）から開始して、前記第一の鎖の１〜２８位が少なくとも８個のリボヌクレオチドを含み；
前記第二の鎖が２６〜３６ヌクレオチド残基の長さを有し、３’末端ヌクレオチドから開始して、前記第一の鎖の１〜２３位と対をなす位置に少なくとも８個のリボヌクレオチドを含んで二重鎖を形成し；
前記第二の鎖の少なくとも３’末端ヌクレオチドが前記第一の鎖と対をなさず、また前記第二の鎖の６個までの連続した３’末端ヌクレオチドが、前記第一の鎖と対をなさず、それにより１〜６ヌクレオチドの３’の一本鎖オーバーハングを形成し；
前記第一の鎖の３’末端ヌクレオチドを含む１０〜３０個の連続したヌクレオチドが、前記第二の鎖の５’末端と対をなさず、それにより１０〜３０ヌクレオチドの一本鎖の３’オーバーハングを形成し；
前記第一の鎖と第二の鎖とが最大相補性に関して整合された際に、少なくとも第一の鎖の５’末端及び３’末端ヌクレオチドが前記第二の鎖のヌクレオチドと塩基対をなし、それにより前記第一の鎖と第二の鎖との間に実質的に二重鎖の領域を形成し；
前記第二の鎖が、前記二本鎖核酸が哺乳動物細胞内に導入された際に標的遺伝子発現を低減するように、前記第二の鎖の少なくとも１９個のリボヌクレオチドの長さに沿って標的ＲＮＡに対して十分相補的である、単離された二本鎖核酸。
【請求項４７】
前記第一の鎖の２４位から前記第一の鎖の３’末端ヌクレオチド残基までの間の及び前記第一の鎖の２４位と第一の鎖の３’末端ヌクレオチド残基とを含む前記第一の鎖の少なくとも一つのヌクレオチドが、前記第二の鎖と塩基対をなすデオキシリボヌクレオチドである、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項４８】
前記第一の鎖の３’末端ヌクレオチドを含む、少なくとも１０個の連続したヌクレオチド及び多くて１５個の連続したヌクレオチドが、前記第二の鎖の５’末端と対をなさず、それにより１０〜１５ヌクレオチドの一本鎖の３’オーバーハングを形成する、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項４９】
前記第一の鎖２４位から第一の鎖の３’末端ヌクレオチド残基までに対応し及び従って塩基対をなす前記第二の鎖のヌクレオチドの間の及び該ヌクレオチドを含む前記第二の鎖の少なくとも一つのヌクレオチドが、リボヌクレオチドである、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５０】
前記第一の鎖と第二の鎖との間の前記実質的に二重鎖の領域が、完全に二重鎖の領域を含み、前記完全に二重鎖の領域が、前記第二の鎖の対応するヌクレオチドと対をなす第一の鎖の５’末端ヌクレオチドと３’末端ヌクレオチドとの間において不対塩基を有さない、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５１】
前記実質的に二重鎖の領域が、前記第二の鎖の対応するヌクレオチドと対をなす第一の鎖の５’末端ヌクレオチドと３’末端ヌクレオチドとの間に；１個の不対塩基対；２個の不対塩基対、３個の不対塩基対、４個の不対塩基対、及び５個の不対塩基対からなる群から選択される不対塩基対を含む、請求項５０に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５２】
前記不対塩基対が、連続又は不連続である、請求項５１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５３】
前記第一の鎖が６６ヌクレオチドまでの長さを有し、前記第一の鎖の３’から前記第一の鎖の２３位までのヌクレオチドが：前記第二の鎖のヌクレオチドと塩基対をなすデオキシリボヌクレオチドである、前記第一の鎖の２４位から３’末端ヌクレオチド残基までの２、３、４、５及び６個のヌクレオチド残基からなる群から選択されるデオキシヌクレオチドを含む、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５４】
前記デオキシリボヌクレオチドが連続したデオキシリボヌクレオチドである、請求項５３に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５５】
前記第一の鎖の２４〜３０位の二つ又はそれ以上の連続ヌクレオチド残基が、前記第二の鎖のヌクレオチドと塩基対をなすデオキシリボヌクレオチドである、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５６】
前記第一の鎖が６６ヌクレオチドまでの長さを有し：２４位及び２５位、２５位及び２６位、２６位及び２７位、２７位及び２８位、２８位及び２９位、並びに２９位及び３０位からなる群から選択される一対のデオキシリボヌクレオチドを含み、デオキシリボヌクレオチドの前記第一の鎖の対が、前記第二の鎖の対応するヌクレオチド対と塩基対をなす、請求項５５に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５７】
前記第一の鎖の１〜２８位の前記８個又はそれ以上のリボヌクレオチドが、連続したリボヌクレオチドである、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５８】
前記第一のオリゴヌクレオチド鎖の１〜２８位の各ヌクレオチド残基が、前記第二の鎖のヌクレオチドと塩基対をなすリボヌクレオチドである、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５９】
前記第一の鎖の３’オーバーハングが：１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０ヌクレオチド長からなる群から選択される、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６０】
前記第一の鎖の３’オーバーハングが、リボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドを含む、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６１】
前記第一の鎖の３’オーバーハングの全ヌクレオチドがデオキシリボヌクレオチドである、請求項６０に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６２】
前記第一の鎖の３’オーバーハングの前記ヌクレオチドが、ホスフェートバックボーン修飾を含む、請求項５９のいずれかに記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６３】
前記ホスフェートバックボーン修飾が、ホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ロックト核酸、モルホリノ及び二環式フラノース類似体からなる群から選択される、請求項６２に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６４】
前記第一の鎖の３’末端ヌクレオチド残基（１Ｄ位）から開始する前記第一の鎖が、１Ｄ位から、前記第一の鎖の３’オーバーハングと連続した前記第一の鎖の５’残基までのヌクレオチドの間にメチルホスホネートバックボーン修飾を含む、請求項６３に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６５】
前記第一の鎖の３’末端ヌクレオチド残基（１Ｄ位）から開始する前記第一の鎖が、２Ｄ位から、前記第一の鎖の３’オーバーハングと連続した前記第一の鎖の５’残基までのヌクレオチドの間にメチルホスホネートバックボーン修飾を含む、請求項６３に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６６】
前記第一の鎖の３’末端ヌクレオチドがリボヌクレオチドである、請求項６５に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６７】
前記第一の鎖の３’オーバーハングの前記ヌクレオチドが修飾ヌクレオチドを含む、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６８】
前記修飾ヌクレオチド残基が、２’−Ｏ−メチル、２’−メトキシエトキシ、２’−フルオロ、２’−アリル、２’−Ｏ−［２−（メチルアミノ）−２−オキソエチル］、４’−チオ、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’−ブリッジ、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’−ブリッジ、２’−ＬＮＡ、２’−アミノ及び２’−Ｏ−（Ｎ−メチルカルバメート）からなる群から選択される、請求項６７に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６９】
前記第一の鎖の３’オーバーハングの前記修飾ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドである、請求項６８に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７０】
前記第二の鎖の前記３’オーバーハングが：１〜４ヌクレオチド、１〜３ヌクレオチド（nucleoties）、１〜２ヌクレオチド、及び２ヌクレオチド長からなる群から選択される長さを有する、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７１】
前記第二の鎖の３’オーバーハングの前記ヌクレオチドが、修飾ヌクレオチドを含む、請求項７０のいずれかに記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７２】
前記修飾ヌクレオチド残基が、２’−Ｏ−メチル、２’−メトキシエトキシ、２’−フルオロ、２’−アリル、２’−Ｏ−［２−（メチルアミノ）−２−オキソエチル］、４’−チオ、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’−ブリッジ、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’−ブリッジ、２’−ＬＮＡ、２’−アミノ及び２’−Ｏ−（Ｎ−メチルカルバメート）からなる群から選択される、請求項７１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７３】
前記第二の鎖の３’オーバーハングの前記修飾ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドである、請求項７２に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７４】
前記第二の鎖の３’オーバーハングが２ヌクレオチド長であり、前記第二の鎖の３’オーバーハングの前記修飾ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチル修飾リボヌクレオチドである、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７５】
前記第一のオリゴヌクレオチド鎖の５’末端ヌクレオチド残基に対応する前記第二の鎖のヌクレオチド残基（１Ａ位）から開始する前記第二の鎖が、前記第一の鎖の３’末端残基に対応する、前記第二の鎖の５’残基の１６Ａ位から最終の５’残基までの全位置に非修飾ヌクレオチド残基を含む、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７６】
前記第二の鎖の３’末端における第一のヌクレオチド（１Ａ位）から開始して、前記第二の鎖の３’末端から１Ａ位、２Ａ位、及び３Ａ位が修飾ヌクレオチドである、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７７】
前記第一のオリゴヌクレオチド鎖の５’末端ヌクレオチド残基に対応する前記第二の鎖のヌクレオチド残基（１Ａ位）から開始する前記第二のオリゴヌクレオチド鎖が、１Ａ位から１５Ａ位までに交互の修飾及び非修飾ヌクレオチド残基を含む、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７８】
前記第二又は第一のオリゴヌクレオチド鎖のヌクレオチドが、ダイサー切断の指向を案内する修飾ヌクレオチドで置換されている、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７９】
第一の鎖が、第二の鎖のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％相補的なヌクレオチド配列を有する、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項８０】
前記標的ＲＮＡがＫＲＡＳである、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項８１】
細胞内で標的遺伝子の発現を低減するための方法であって：
細胞を、参照ｄｓＲＮＡと比較して細胞内で標的遺伝子の発現を低減するのに有効な量の、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸と接触させることを含む、方法。
【請求項８２】
動物内で標的遺伝子の発現を低減するための方法であって：参照ｄｓＲＮＡと比較して動物の細胞内で標的遺伝子の発現を低減するのに有効な量の、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸で動物を処置することを含む、方法。
【請求項８３】
対象の細胞内で標的遺伝子の発現を低減するための医薬組成物であって、参照ｄｓＲＮＡと比較して細胞内で標的遺伝子の発現を低減するのに有効な量の請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸と、薬学的に許容され得る担体とを含有する、医薬組成物。
【請求項８４】
前記二本鎖核酸を化学的に又は酵素的に合成することを含む、請求項６７に記載の二本鎖核酸の合成方法。
【請求項８５】
図１〜６、８、１１、１４又は１５のいずれか一つに示される、単離された二本鎖核酸。
【請求項１】
５’末端及び３’末端を有する第一のオリゴヌクレオチド鎖と、５’末端及び３’末端を有する第二のオリゴヌクレオチド鎖とを有する単離された二本鎖核酸であって、前記５’末端の各々が５’末端ヌクレオチドを含み、かつ前記３’末端の各々が３’末端ヌクレオチドを含み：
前記第一の鎖が２５〜３０ヌクレオチド残基の長さを有し、５’末端ヌクレオチド（１位）から開始して、前記第一の鎖の１〜２３位が少なくとも８個のリボヌクレオチドを含み；
前記第二の鎖が３６〜６６ヌクレオチド残基の長さを有し、３’末端ヌクレオチドから開始して、前記第一の鎖の１〜２３位と対をなす位置に少なくとも８個のリボヌクレオチドを含んで二重鎖を形成し；
前記第二の鎖の少なくとも３’末端ヌクレオチドが前記第一の鎖と対をなさず、また６個までの連続した３’末端ヌクレオチドが、前記第一の鎖と対をなさず、それにより１〜６ヌクレオチドの３’の一本鎖オーバーハングを形成し；
前記第二の鎖の５’末端が、前記第一の鎖と対をなさない１０〜３０個の連続したヌクレオチドを含み、それにより１０〜３０ヌクレオチドの一本鎖の５’オーバーハングを形成し；
前記第一の鎖と第二の鎖とが最大相補性に関して整合された際に、少なくとも第一の鎖の５’末端及び３’末端ヌクレオチドが前記第二の鎖のヌクレオチドと塩基対をなし、それにより前記第一の鎖と第二の鎖との間に実質的に二重鎖の領域を形成し；
前記第二の鎖が、前記二本鎖核酸が哺乳動物細胞内に導入された際に標的遺伝子発現を低減するように、前記第二の鎖の少なくとも１９個のリボヌクレオチドの長さに沿って標的ＲＮＡに対して十分相補的である、単離された二本鎖核酸。
【請求項２】
前記第一の鎖の２４位から第一の鎖の３’末端ヌクレオチド残基までの間の及び前記第一の鎖の２４位と第一の鎖の３’末端ヌクレオチド残基とを含む前記第一の鎖の少なくとも一つのヌクレオチドが、デオキシリボヌクレオチドである、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３】
前記第二の鎖の不対３’末端ヌクレオチドを含まない、少なくとも１０個の連続したヌクレオチド及び多くて１５個の連続したヌクレオチドが、前記第一の鎖と対をなさず、それにより前記第二の鎖内に１０〜１５ヌクレオチドの一本鎖の５’オーバーハングを形成する、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項４】
前記第一の鎖２４位から第一の鎖の３’末端ヌクレオチド残基までに対応し及び従って塩基対をなす前記第二の鎖のヌクレオチドの間の及び該ヌクレオチドを含む前記第二の鎖の少なくとも一つのヌクレオチドが、リボヌクレオチドである、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５】
前記第一の鎖と第二の鎖との間の前記実質的に二重鎖の領域が、完全に二重鎖の領域を含み、前記完全に二重鎖の領域が、前記第二の鎖の対応するヌクレオチドと対をなす第一の鎖の５’末端ヌクレオチドと３’末端ヌクレオチドとの間において不対塩基を有さない、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６】
前記実質的に二重鎖の領域が、前記第二の鎖の対応するヌクレオチドと対をなす第一の鎖の５’末端ヌクレオチドと３’末端ヌクレオチドとの間に：１個の不対塩基対；２個の不対塩基対、３個の不対塩基対、４個の不対塩基対、及び５個の不対塩基対からなる群から選択される不対塩基対を含む、請求項５に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７】
前記不対塩基対が、連続又は不連続である、請求項６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項８】
前記第一の鎖が３０ヌクレオチドまでの長さを有し、前記第一の鎖の３’から前記第一の鎖の２３位までのヌクレオチドが：前記第二の鎖のヌクレオチドと塩基対をなすデオキシリボヌクレオチドである、前記第一の鎖の２４位から３’末端ヌクレオチド残基までの２、３、４、５及び６個のヌクレオチド残基からなる群から選択されるデオキシヌクレオチドを含む、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項９】
前記第二の鎖のヌクレオチドと塩基対をなす前記第一の鎖の前記デオキシリボヌクレオチドが、連続したデオキシリボヌクレオチドである、請求項８に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１０】
前記第一の鎖の２４〜３０位の二つ又はそれ以上の連続ヌクレオチド残基が、前記第二の鎖のヌクレオチドと塩基対をなすデオキシリボヌクレオチドである、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１１】
前記第一の鎖が３０ヌクレオチドまでの長さを有し：２４位及び２５位、２５位及び２６位、２６位及び２７位、２７位及び２８位、２８位及び２９位、並びに２９位及び３０位からなる群から選択される一対のデオキシリボヌクレオチドを含み、デオキシリボヌクレオチドの前記第一の鎖の対が、前記第二の鎖の対応するヌクレオチド対と塩基対をなす、請求項１０に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１２】
前記第一の鎖の１〜２８位の前記８個又はそれ以上のリボヌクレオチドが、連続したリボヌクレオチドである、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１３】
前記第一のオリゴヌクレオチド鎖の１〜２８位の各ヌクレオチド残基が、前記第二の鎖のヌクレオチドと塩基対をなすリボヌクレオチドである、請求項１２に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１４】
前記第二の鎖の前記３’の一本鎖オーバーハングが：１〜４ヌクレオチド、１〜３ヌクレオチド（nucleoties）、１〜２ヌクレオチド、及び２ヌクレオチド長からなる群から選択される長さを有する、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１５】
前記第二の鎖の３’オーバーハングの前記ヌクレオチドが修飾ヌクレオチドを含む、請求項１５に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１６】
前記修飾ヌクレオチド残基が２’−Ｏ−メチル、２’−メトキシエトキシ、２’−フルオロ、２’−アリル、２’−Ｏ−［２−（メチルアミノ）−２−オキソエチル］、４’−チオ、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’−ブリッジ、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’−ブリッジ、２’−ＬＮＡ、２’−アミノ及び２’−Ｏ−（Ｎ−メチルカルバメート）からなる群から選択される、請求項１５に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１７】
前記第二の鎖の３’オーバーハングの前記修飾ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドである、請求項１５に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１８】
前記第二の鎖の３’オーバーハングが２ヌクレオチド長であり、前記第二の鎖の３’オーバーハングの前記修飾ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチル修飾リボヌクレオチドである、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項１９】
前記第一のオリゴヌクレオチド鎖の５’末端ヌクレオチド残基に対応する前記第二の鎖のヌクレオチド残基（１Ａ位）から開始する前記第二の鎖が、前記第一の鎖の３’末端残基に対応する、前記第二の鎖の１６Ａ位から５’残基までの全位置に非修飾ヌクレオチド残基を含む、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２０】
前記第二の鎖の３’末端における第一のヌクレオチド（１Ａ位）から開始して、前記第二の鎖の３’末端から１Ａ位、２Ａ位及び３Ａ位が修飾ヌクレオチドである、請求項１３に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２１】
前記第一のオリゴヌクレオチド鎖の５’末端ヌクレオチド残基に対応する前記第二の鎖のヌクレオチド残基（１Ａ位）から開始する前記第二のオリゴヌクレオチド鎖が、１Ａ位から１５Ａ位までに交互の修飾及び非修飾ヌクレオチド残基を含む、請求項１４に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２２】
前記第二の鎖の前記５’の一本鎖オーバーハングが：１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０ヌクレオチド長からなる群から選択される長さを有する、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２３】
前記第二の鎖の５’オーバーハングの前記ヌクレオチドがホスフェートバックボーン修飾を含む、請求項２２に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２４】
前記ホスフェートバックボーン修飾が、ホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホトリエステル、及びメチルホスホネート、ロックト核酸、モルホリノ及び二環式フラノース類似体からなる群から選択される、請求項２３に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２５】
前記第二の鎖の５’末端ヌクレオチド残基（１Ｂ位）から開始する前記第二の鎖が、２Ｂ位から、前記第一の鎖の３’末端残基に対応する前記第二の鎖の５’残基までのヌクレオチドの間にホスホロチオエートバックボーン修飾を含む、請求項２４に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２６】
前記第二の鎖の５’オーバーハングが、リボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドを含む、請求項２２に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２７】
前記第二の鎖の５’オーバーハングの前記ヌクレオチドが、修飾ヌクレオチドを含む、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２８】
前記修飾ヌクレオチド残基が、２’−Ｏ−メチル、２’−メトキシエトキシ、２’−フルオロ、２’−アリル、２’−Ｏ−［２−（メチルアミノ）−２−オキソエチル］、４’−チオ、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’−ブリッジ、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’−ブリッジ、２’−ＬＮＡ、２’−アミノ及び２’−Ｏ−（Ｎ−メチルカルバメート）からなる群から選択される、請求項２７に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項２９】
前記第二の鎖の５’オーバーハングの前記修飾ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドである、請求項２７に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３０】
第二の鎖の５’末端ヌクレオチド残基が２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドである、請求項２７に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３１】
５’末端及び３’末端を有する第三のオリゴヌクレオチド鎖を更に含み：
前記第三の鎖が、１０〜３０ヌクレオチド残基の長さを有し；
前記第三の鎖の少なくとも１０個の連続したヌクレオチド及び多くて３０個の連続したヌクレオチドが、前記第二の鎖の５’末端と対をなす、請求項１のいずれかに記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３２】
前記第三の鎖がリボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドを含む、請求項３１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３３】
前記第二の鎖の５’オーバーハングの全ヌクレオチドがリボヌクレオチドである、請求項３１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３４】
前記第三の鎖の前記ヌクレオチドが、修飾ヌクレオチドを含む、請求項３１のいずれかに記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３５】
前記修飾ヌクレオチド残基が、２’−Ｏ−メチル、２’−メトキシエトキシ、２’−フルオロ、２’−アリル、２’−Ｏ−［２−（メチルアミノ）−２−オキソエチル］、４’−チオ、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’−ブリッジ、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’−ブリッジ、２’−ＬＮＡ、２’−アミノ及び２’−Ｏ−（Ｎ−メチルカルバメート）からなる群から選択される、請求項３１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３６】
前記第三の鎖の前記修飾ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドである、請求項３１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３７】
前記第三の鎖が、ホスフェートバックボーン修飾を含む、請求項３１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３８】
前記ホスフェートバックボーン修飾が、ホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホトリエステル、及びメチルホスホネート、ロックト核酸、モルホリノ及び二環式フラノース類似体からなる群から選択される、請求項３７に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項３９】
前記第三の鎖の５’末端ヌクレオチド残基（１Ｃ位）から開始する前記第三の鎖が、１Ｃ位と２Ｃ位とのヌクレオチドの間にホスホロチオエートバックボーン修飾を含む、請求項３８に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項４０】
前記第二又は第一のオリゴヌクレオチド鎖のヌクレオチドが、ダイサー切断の指向を案内する修飾ヌクレオチドで置換されている、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項４１】
第一の鎖が、第二の鎖のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％相補的なヌクレオチド配列を有する、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項４２】
前記標的ＲＮＡがＫＲＡＳである、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項４３】
細胞内で標的遺伝子の発現を低減するための方法であって：
細胞を、参照ｄｓＲＮＡと比較して細胞内で標的遺伝子の発現を低減するのに有効な量の、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸と接触させることを含む、方法。
【請求項４４】
動物内で標的遺伝子の発現を低減するための方法であって：参照ｄｓＲＮＡと比較して動物の細胞内で標的遺伝子の発現を低減するのに有効な量の、請求項１に記載の単離された二本鎖核酸で動物を処置することを含む、方法。
【請求項４５】
前記二本鎖核酸を化学的に又は酵素的に合成することを含む、請求項１に記載の二本鎖核酸の合成方法。
【請求項４６】
５’末端及び３’末端を有する第一のオリゴヌクレオチド鎖と、５’末端及び３’末端を有する第二のオリゴヌクレオチド鎖とを含む単離された二本鎖核酸であって、前記５’末端の各々が５’末端ヌクレオチドを含み、かつ前記３’末端の各々が３’末端ヌクレオチドを含み：
前記第一の鎖が３５〜６０ヌクレオチド残基の長さを有し、５’末端ヌクレオチド（１位）から開始して、前記第一の鎖の１〜２８位が少なくとも８個のリボヌクレオチドを含み；
前記第二の鎖が２６〜３６ヌクレオチド残基の長さを有し、３’末端ヌクレオチドから開始して、前記第一の鎖の１〜２３位と対をなす位置に少なくとも８個のリボヌクレオチドを含んで二重鎖を形成し；
前記第二の鎖の少なくとも３’末端ヌクレオチドが前記第一の鎖と対をなさず、また前記第二の鎖の６個までの連続した３’末端ヌクレオチドが、前記第一の鎖と対をなさず、それにより１〜６ヌクレオチドの３’の一本鎖オーバーハングを形成し；
前記第一の鎖の３’末端ヌクレオチドを含む１０〜３０個の連続したヌクレオチドが、前記第二の鎖の５’末端と対をなさず、それにより１０〜３０ヌクレオチドの一本鎖の３’オーバーハングを形成し；
前記第一の鎖と第二の鎖とが最大相補性に関して整合された際に、少なくとも第一の鎖の５’末端及び３’末端ヌクレオチドが前記第二の鎖のヌクレオチドと塩基対をなし、それにより前記第一の鎖と第二の鎖との間に実質的に二重鎖の領域を形成し；
前記第二の鎖が、前記二本鎖核酸が哺乳動物細胞内に導入された際に標的遺伝子発現を低減するように、前記第二の鎖の少なくとも１９個のリボヌクレオチドの長さに沿って標的ＲＮＡに対して十分相補的である、単離された二本鎖核酸。
【請求項４７】
前記第一の鎖の２４位から前記第一の鎖の３’末端ヌクレオチド残基までの間の及び前記第一の鎖の２４位と第一の鎖の３’末端ヌクレオチド残基とを含む前記第一の鎖の少なくとも一つのヌクレオチドが、前記第二の鎖と塩基対をなすデオキシリボヌクレオチドである、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項４８】
前記第一の鎖の３’末端ヌクレオチドを含む、少なくとも１０個の連続したヌクレオチド及び多くて１５個の連続したヌクレオチドが、前記第二の鎖の５’末端と対をなさず、それにより１０〜１５ヌクレオチドの一本鎖の３’オーバーハングを形成する、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項４９】
前記第一の鎖２４位から第一の鎖の３’末端ヌクレオチド残基までに対応し及び従って塩基対をなす前記第二の鎖のヌクレオチドの間の及び該ヌクレオチドを含む前記第二の鎖の少なくとも一つのヌクレオチドが、リボヌクレオチドである、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５０】
前記第一の鎖と第二の鎖との間の前記実質的に二重鎖の領域が、完全に二重鎖の領域を含み、前記完全に二重鎖の領域が、前記第二の鎖の対応するヌクレオチドと対をなす第一の鎖の５’末端ヌクレオチドと３’末端ヌクレオチドとの間において不対塩基を有さない、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５１】
前記実質的に二重鎖の領域が、前記第二の鎖の対応するヌクレオチドと対をなす第一の鎖の５’末端ヌクレオチドと３’末端ヌクレオチドとの間に；１個の不対塩基対；２個の不対塩基対、３個の不対塩基対、４個の不対塩基対、及び５個の不対塩基対からなる群から選択される不対塩基対を含む、請求項５０に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５２】
前記不対塩基対が、連続又は不連続である、請求項５１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５３】
前記第一の鎖が６６ヌクレオチドまでの長さを有し、前記第一の鎖の３’から前記第一の鎖の２３位までのヌクレオチドが：前記第二の鎖のヌクレオチドと塩基対をなすデオキシリボヌクレオチドである、前記第一の鎖の２４位から３’末端ヌクレオチド残基までの２、３、４、５及び６個のヌクレオチド残基からなる群から選択されるデオキシヌクレオチドを含む、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５４】
前記デオキシリボヌクレオチドが連続したデオキシリボヌクレオチドである、請求項５３に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５５】
前記第一の鎖の２４〜３０位の二つ又はそれ以上の連続ヌクレオチド残基が、前記第二の鎖のヌクレオチドと塩基対をなすデオキシリボヌクレオチドである、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５６】
前記第一の鎖が６６ヌクレオチドまでの長さを有し：２４位及び２５位、２５位及び２６位、２６位及び２７位、２７位及び２８位、２８位及び２９位、並びに２９位及び３０位からなる群から選択される一対のデオキシリボヌクレオチドを含み、デオキシリボヌクレオチドの前記第一の鎖の対が、前記第二の鎖の対応するヌクレオチド対と塩基対をなす、請求項５５に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５７】
前記第一の鎖の１〜２８位の前記８個又はそれ以上のリボヌクレオチドが、連続したリボヌクレオチドである、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５８】
前記第一のオリゴヌクレオチド鎖の１〜２８位の各ヌクレオチド残基が、前記第二の鎖のヌクレオチドと塩基対をなすリボヌクレオチドである、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項５９】
前記第一の鎖の３’オーバーハングが：１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０ヌクレオチド長からなる群から選択される、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６０】
前記第一の鎖の３’オーバーハングが、リボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドを含む、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６１】
前記第一の鎖の３’オーバーハングの全ヌクレオチドがデオキシリボヌクレオチドである、請求項６０に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６２】
前記第一の鎖の３’オーバーハングの前記ヌクレオチドが、ホスフェートバックボーン修飾を含む、請求項５９のいずれかに記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６３】
前記ホスフェートバックボーン修飾が、ホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ロックト核酸、モルホリノ及び二環式フラノース類似体からなる群から選択される、請求項６２に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６４】
前記第一の鎖の３’末端ヌクレオチド残基（１Ｄ位）から開始する前記第一の鎖が、１Ｄ位から、前記第一の鎖の３’オーバーハングと連続した前記第一の鎖の５’残基までのヌクレオチドの間にメチルホスホネートバックボーン修飾を含む、請求項６３に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６５】
前記第一の鎖の３’末端ヌクレオチド残基（１Ｄ位）から開始する前記第一の鎖が、２Ｄ位から、前記第一の鎖の３’オーバーハングと連続した前記第一の鎖の５’残基までのヌクレオチドの間にメチルホスホネートバックボーン修飾を含む、請求項６３に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６６】
前記第一の鎖の３’末端ヌクレオチドがリボヌクレオチドである、請求項６５に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６７】
前記第一の鎖の３’オーバーハングの前記ヌクレオチドが修飾ヌクレオチドを含む、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６８】
前記修飾ヌクレオチド残基が、２’−Ｏ−メチル、２’−メトキシエトキシ、２’−フルオロ、２’−アリル、２’−Ｏ−［２−（メチルアミノ）−２−オキソエチル］、４’−チオ、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’−ブリッジ、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’−ブリッジ、２’−ＬＮＡ、２’−アミノ及び２’−Ｏ−（Ｎ−メチルカルバメート）からなる群から選択される、請求項６７に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項６９】
前記第一の鎖の３’オーバーハングの前記修飾ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドである、請求項６８に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７０】
前記第二の鎖の前記３’オーバーハングが：１〜４ヌクレオチド、１〜３ヌクレオチド（nucleoties）、１〜２ヌクレオチド、及び２ヌクレオチド長からなる群から選択される長さを有する、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７１】
前記第二の鎖の３’オーバーハングの前記ヌクレオチドが、修飾ヌクレオチドを含む、請求項７０のいずれかに記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７２】
前記修飾ヌクレオチド残基が、２’−Ｏ−メチル、２’−メトキシエトキシ、２’−フルオロ、２’−アリル、２’−Ｏ−［２−（メチルアミノ）−２−オキソエチル］、４’−チオ、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’−ブリッジ、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’−ブリッジ、２’−ＬＮＡ、２’−アミノ及び２’−Ｏ−（Ｎ−メチルカルバメート）からなる群から選択される、請求項７１に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７３】
前記第二の鎖の３’オーバーハングの前記修飾ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドである、請求項７２に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７４】
前記第二の鎖の３’オーバーハングが２ヌクレオチド長であり、前記第二の鎖の３’オーバーハングの前記修飾ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチル修飾リボヌクレオチドである、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７５】
前記第一のオリゴヌクレオチド鎖の５’末端ヌクレオチド残基に対応する前記第二の鎖のヌクレオチド残基（１Ａ位）から開始する前記第二の鎖が、前記第一の鎖の３’末端残基に対応する、前記第二の鎖の５’残基の１６Ａ位から最終の５’残基までの全位置に非修飾ヌクレオチド残基を含む、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７６】
前記第二の鎖の３’末端における第一のヌクレオチド（１Ａ位）から開始して、前記第二の鎖の３’末端から１Ａ位、２Ａ位、及び３Ａ位が修飾ヌクレオチドである、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７７】
前記第一のオリゴヌクレオチド鎖の５’末端ヌクレオチド残基に対応する前記第二の鎖のヌクレオチド残基（１Ａ位）から開始する前記第二のオリゴヌクレオチド鎖が、１Ａ位から１５Ａ位までに交互の修飾及び非修飾ヌクレオチド残基を含む、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７８】
前記第二又は第一のオリゴヌクレオチド鎖のヌクレオチドが、ダイサー切断の指向を案内する修飾ヌクレオチドで置換されている、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項７９】
第一の鎖が、第二の鎖のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、９０％、９５％又は１００％相補的なヌクレオチド配列を有する、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項８０】
前記標的ＲＮＡがＫＲＡＳである、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸。
【請求項８１】
細胞内で標的遺伝子の発現を低減するための方法であって：
細胞を、参照ｄｓＲＮＡと比較して細胞内で標的遺伝子の発現を低減するのに有効な量の、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸と接触させることを含む、方法。
【請求項８２】
動物内で標的遺伝子の発現を低減するための方法であって：参照ｄｓＲＮＡと比較して動物の細胞内で標的遺伝子の発現を低減するのに有効な量の、請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸で動物を処置することを含む、方法。
【請求項８３】
対象の細胞内で標的遺伝子の発現を低減するための医薬組成物であって、参照ｄｓＲＮＡと比較して細胞内で標的遺伝子の発現を低減するのに有効な量の請求項４６に記載の単離された二本鎖核酸と、薬学的に許容され得る担体とを含有する、医薬組成物。
【請求項８４】
前記二本鎖核酸を化学的に又は酵素的に合成することを含む、請求項６７に記載の二本鎖核酸の合成方法。
【請求項８５】
図１〜６、８、１１、１４又は１５のいずれか一つに示される、単離された二本鎖核酸。
【図１Ａ−１】
【図１Ａ−２】
【図１Ｂ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図１Ａ−２】
【図１Ｂ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【公表番号】特表２０１３−５１４０８９（Ｐ２０１３−５１４０８９Ａ）
【公表日】平成２５年４月２５日（２０１３．４．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５４４４８７（Ｐ２０１２−５４４４８７）
【出願日】平成２２年６月２５日（２０１０．６．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０４００９４
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０７５１８８
【国際公開日】平成２３年６月２３日（２０１１．６．２３）
【出願人】（５１１０７２７４７）ダイセルナ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (6)
【氏名又は名称原語表記】ＤＩＣＥＲＮＡ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年４月２５日（２０１３．４．２５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年６月２５日（２０１０．６．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０４００９４
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０７５１８８
【国際公開日】平成２３年６月２３日（２０１１．６．２３）
【出願人】（５１１０７２７４７）ダイセルナ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (6)
【氏名又は名称原語表記】ＤＩＣＥＲＮＡ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
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