本発明は、特定の抗原を指向する重鎖抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする核酸又はヌクレオチド配列を作成又はクローニングする方法に関する。前記方法は、前記抗原で免疫したカメリドから細胞サンプル又は集団を提供する工程、前記抗原を指向する重鎖抗体を発現するか又は発現能力を有する少なくとも1つの細胞を前記サンプル又は集団から単離する工程、及び前記抗原を指向する重鎖抗体をコードするか、又は前記抗原を指向する重鎖抗体の抗原結合フラグメントをコードする核酸又はヌクレオチド配列を、前記少なくとも1つの細胞から入手する工程を含む。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程を含む、重鎖抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする核酸又はヌクレオチド配列を作出又はクローニングする方法であって、前記重鎖抗体又は抗原結合フラグメントが特定の抗原を指向する、前記作出又はクローニング方法：
（a）前記抗原で免疫したカメリドから細胞サンプル又は集団を提供する工程、ここで前記細胞サンプル又は集団は、前記抗原を指向する重鎖抗体を発現するか又は発現能力を有する少なくとも1つの細胞を含み；
（b）前記サンプル又は集団から、前記抗原を指向する重鎖抗体を発現するか又は発現能力を有する前記少なくとも1つの細胞を単離する工程；
（c）前記少なくとも1つの細胞から、前記抗原を指向する重鎖抗体をコードするか、又は前記抗原を指向する重鎖抗体の抗原結合フラグメントをコードする核酸若しくはヌクレオチド配列を入手する工程。
【請求項２】
工程（b）が以下の工程の任意の適切な組み合わせを含む、請求項1に記載の方法：
（b-1）抗体を発現しない細胞から抗体を発現する細胞を分離する工程；
（b-2）他の抗原を指向する抗体を発現する細胞から、所望の抗原に対する抗体を発現する細胞を分離する工程；
（b-3）通常の4-鎖抗体を発現する細胞から重鎖抗体を発現する細胞を分離する工程；
ここで、前記工程は任意の順序で実施することができ、さらに前記工程の各2つ又は3つ全てはまた単一工程としても実施できる。
【請求項３】
工程（b）の後でかつ工程（c）の前に個々の細胞を培養及び/又は刺激して、抗体を発現又は産生させ、その後で、個々の細胞の各々に由来する培養液又は上清を、所望の抗原に対する重鎖抗体の存在についてスクリーニングする、請求項1又は2に記載の方法。
【請求項４】
以下の工程を含む、重鎖抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする核酸又はヌクレオチド配列を作出又はクローニングする方法であって、前記重鎖抗体又は抗原結合フラグメントが特定の抗原を指向する、前記作出又はクローニング方法：
（a）前記抗原で免疫したカメリドから細胞サンプル又は集団を提供する工程、ここで前記細胞サンプル又は集団は、前記抗原を指向する重鎖抗体を発現するか又は発現能力を有する少なくとも1つの細胞を含み；
（b）前記サンプル又は集団から、重鎖抗体を発現する細胞を個々の細胞として又は個々の細胞のセットとして単離する工程；
（c）前記抗原を指向する重鎖抗体の発現について、前記個々の細胞又は個々の細胞のセットをスクリーニングする工程；
（d）前記抗原を指向する重鎖抗体をコードするか、又は前記抗原を指向する前記重鎖抗体の抗原結合フラグメントをコードする核酸又はヌクレオチド配列を、前記少なくとも1つの細胞から入手する工程。
【請求項５】
工程（c）で、個々の細胞を培養及び/又は刺激して、抗体を発現又は産生させ、その後で、個々の細胞の各々に由来する培養液又は上清を、所望の抗原に対する重鎖抗体の存在についてスクリーニングする、請求項4に記載の方法。
【請求項６】
以下の工程を含む、重鎖抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする核酸又はヌクレオチド配列を作出又はクローニングする方法であって、前記重鎖抗体又は抗原結合フラグメントが特定の抗原を指向する、前記作出又はクローニング方法：
（a）前記抗原で免疫したカメリドから細胞サンプル又は集団を提供する工程、ここで前記細胞サンプル又は集団は、前記抗原を指向する重鎖抗体を発現するか又は発現能力を有する少なくとも1つの細胞を含み；
（b）前記細胞サンプル又は集団を個々の細胞のセットに分ける工程；
（c）前記個々の細胞のセットを、前記抗原を指向する重鎖抗体を発現する細胞についてスクリーニングする工程；
（d）前記抗原を指向する重鎖抗体を発現する前記少なくとも1つの細胞から、前記抗原を指向する重鎖抗体をコードするか、又は前記抗原を指向する前記重鎖抗体の抗原結合フラグメントをコードする核酸又はヌクレオチド配列を入手する工程。
【請求項７】
工程（c）で、個々の細胞を培養及び/又は刺激して、抗体を発現又は産生させ、その後で、個々の細胞の各々に由来する培養液又は上清を、所望の抗原に対する重鎖抗体の存在についてスクリーニングする、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
請求項１から7のいずれかに記載の方法を用いて同定、選別、作出及び/又はクローニングされた核酸。
【請求項９】
前記核酸が遺伝的構築物の形態を有する、請求項8に記載の核酸。
【請求項１０】
請求項１から7のいずれかに記載の方法を用いて同定、選別、作出及び/又はクローニングされた核酸、及び場合によって遺伝的構築物のそれ自体公知の1つ以上の更なるエレメントを含む、遺伝的構築物。
【請求項１１】
重鎖抗体又はその抗原結合フラグメントを製造する方法であって、前記方法が、請求項8若しくは9のいずれかに記載の核酸、又は請求項10に記載の遺伝的構築物を適切な宿主細胞又は宿主生物で発現させることを含む、前記製造方法。
【請求項１２】
請求項8若しくは9のいずれかに記載の核酸、又は請求項10に記載の遺伝的構築物を含む、宿主細胞又は宿主生物。
【請求項１３】
請求項8若しくは9のいずれかに記載の核酸又は請求項10に記載の遺伝的構築物によってコードされるか、及び/又は請求項11に記載の方法によって入手される、重鎖抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項１４】
請求項13に記載の重鎖抗体又はその抗原結合フラグメントであって、前記抗原結合フラグメントがV_HHドメインである、前記抗体又はそのフラグメント。
【請求項１５】
そのアミノ酸配列が、請求項14に記載のV_HHドメインのアミノ酸配列を土台にし、及び/又は請求項8又は9に記載の核酸によってコードされるアミノ酸配列を土台にしているナノボディ。
【請求項１６】
請求項14に記載の少なくとも1つのV_HHドメイン及び/又は請求項15に記載の少なくとも1つのナノボディを含有するか又は含むタンパク質又はポリペプチド。
【請求項１７】
請求項16に記載のタンパク質又はポリペプチドをコードする、核酸又はヌクレオチド配列。
【請求項１８】
遺伝的構築物の形態を有する、請求項17に記載の核酸。
【請求項１９】
少なくとも1つのV_HHドメイン及び/又は少なくとも1つのナノボディを含有するか又は含むタンパク質又はポリペプチドを製造する方法であって、前記方法が、請求項17及び/又は18に記載の核酸又は請求項18に記載の遺伝的構築物を適切な宿主細胞又は宿主生物で発現させることを含む、前記タンパク質又はポリペプチドの製造方法。
【請求項２０】
請求項17及び/又は18に記載の核酸又は請求項19に記載の遺伝的構築物を含む、宿主細胞又は宿主生物。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図５Ａ】

【図５Ｂ】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１Ａ】

【図２１Ｂ】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２６−１】

【図２６−２】

【公表番号】特表２００８−５２８０１０（Ｐ２００８−５２８０１０Ａ）
【公表日】平成２０年７月３１日（２００８．７．３１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５５２５１１（Ｐ２００７−５５２５１１）
【出願日】平成１７年１１月４日（２００５．１１．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００５／０１１８１９
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０７９３７２
【国際公開日】平成１８年８月３日（２００６．８．３）
【出願人】（５０７１２３８４４）アブリンクス　ナームローゼ　フェンノートシャップ (4)
【Ｆターム（参考）】