高速液体クロマトグラフ装置及び高速液体クロマトグラフ装置の液体送液方法
【課題】定速グラジエント溶出法と同様の分離効果を得ることができ、かつ、測定時間を短縮することが可能な高速液体クロマトグラフ装置を実現する。
【解決手段】データ処理装置１３により過去の圧力値をトレースに基づいて定圧グラジエントプログラムに変換する場合は、圧力トレース記憶部１３ａに記憶された圧力値トレースファイルが選択されディスプレイに表示され、圧力値が設定される。定圧グラジエントプログラム変換部１３ｂにより定速グラジエントプログラム記憶１３ｃに記憶された定速グラジエントプログラムが定圧グラジエントプログラムに変換され、変換された定圧グラジエントプログラムによる数値が表示される。画面表示された定圧グラジエントプログラムに従って流速指示部１３ｄ、混合比率指示部１３ｃにより送液ポンプ４の送液部５、６が制御される。
【解決手段】データ処理装置１３により過去の圧力値をトレースに基づいて定圧グラジエントプログラムに変換する場合は、圧力トレース記憶部１３ａに記憶された圧力値トレースファイルが選択されディスプレイに表示され、圧力値が設定される。定圧グラジエントプログラム変換部１３ｂにより定速グラジエントプログラム記憶１３ｃに記憶された定速グラジエントプログラムが定圧グラジエントプログラムに変換され、変換された定圧グラジエントプログラムによる数値が表示される。画面表示された定圧グラジエントプログラムに従って流速指示部１３ｄ、混合比率指示部１３ｃにより送液ポンプ４の送液部５、６が制御される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グラジエント溶出法を使用する高速液体クロマトグラフ装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
高速液体クロマトグラフでは、測定時間を短縮するなどの目的で、二種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら送液するグラジエント溶出法が使用されてきたが、ピーク形状が悪くならないように流速は一般的に一定で行われている。
【０００３】
グラジェント溶出法を用いた液体クロマトグラフ装置の例は、特許文献１に記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】ＷＯ２００３／０７９０００号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ところで、近年、充填剤の粒子径が従来品よりも小さく、平均粒子径が約２．５マイクロメートル以下の分離カラムが開発された。充填剤の粒子径が大きい（５マイクロメートル程度）従来品は流速を上げるとピーク形状が悪くなるが、充填剤の粒子径が小さい分離カラムはピーク形状がほとんど悪くならないという特徴を持つ。
【０００６】
充填剤の粒子径が小さい分離カラムは、分離カラムの耐圧を超えない範囲であれば、流速を上げれば上げるほどピーク形状は維持されながら測定時間を短縮することができる。
【０００７】
しかし、従来技術における分離カラムではカラムごとに最適な流速を設定し、それから大きく離れた流速で使用することはあまりなかった。
【０００８】
ここで、水溶液と有機溶媒などを溶離液としてグラジエント溶出法を行ったときに、それぞれの液体の粘性が異なるので、測定中は混合比率によって圧力値が変化していく。
【０００９】
従来技術においても、充填剤の粒子径が小さい分離カラムがグラジエント溶出法に利用されているが、流速は一定で行われている。
【００１０】
この時の一定流速は、測定中に最も圧力値が高くなる時点を基準として、分離カラムの耐圧を超えないように調整される。
【００１１】
つまり、従来技術においては、調整された流速以上に流速を上げて測定時間を短縮することは考慮されていなかった。
【００１２】
本発明の目的は、定速グラジエント溶出法と同様の分離効果を得ることができ、かつ、測定時間を短縮することが可能な高速液体クロマトグラフ装置及び高速液体クロマトグラフ装置の送液方法を実現することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
上記目的を達成するため、本発明は次のように構成される。
【００１４】
本発明の高速液体クロマトグラフ装置は、２種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら溶離液を送液する送液手段と、送液された溶離液中に試料を注入する試料注入手段と、試料が注入された溶離液が供給され、試料中の目的成分を分離する分離カラムと、分離された目的成分を分析する検出器と、上記送液手段、上記試料注入手段、上記分離カラム、及び上記検出器の動作を制御する制御手段とを備える。
【００１５】
上記制御手段は、２種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら、一定速度で溶離液を送液するための定速グラジエントプログラムを記憶する定速グラジエントプログラム記憶部と、定速グラジエントプログラムを２種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら一定圧力で溶離液を送液するための定圧グラジエントプログラムに変換する定圧グラジエントプログラム変換部と、変換された定圧グラジエントプログラムに従って、送液される溶離液の流速を制御する流速指示部とを有する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、定速グラジエント溶出法と同様の分離効果を得ることができ、かつ、測定時間を短縮することが可能な高速液体クロマトグラフ装置及び高速液体クロマトグラフ装置の送液方法を実現することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明が適用される高速液体クロマトグラフ装置の概略構成図である。
【図２】本発明の定圧グラジエントプログラムの設定を行うデータ処理装置の表示画面例を示す図である。
【図３】本発明の定圧グラジエントプログラムを実行するデータ処理装置の内部概略機能構成図である。
【図４】本発明に適用される定速グラジエントプログラムのモデルを示す図である。
【図５】本発明における定圧グラジエントプログラムのモデルを示す図である。
【図６】本発明に用いる定速グラジエントプログラムの例を示す図である。
【図７】図６の定速グラジエントプログラムで測定したときのクロマトグラムを示す図である。
【図８】図６の定速グラジエントプログラムで測定したときの圧力値トレースである。
【図９】図６の定速グラジエントプログラムを細分化して、それぞれの時間毎の圧力値を図８から抽出して記載した図である。
【図１０】図９の定速グラジエントプログラムを定圧グラジエントプログラムに変換したデータを示す図である。
【図１１】図１０の定圧グラジエントプログラムで測定したときのクロマトグラムを示す図である。
【図１２】図１０の定圧グラジエントプログラムで測定したときの圧力値トレースを示す図である。
【図１３】本願発明の実施例１の全体動作フローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、図面に基づいて本発明の実施形態を説明する。
【実施例】
【００１９】
図１は、本発明が適用される高速液体クロマトグラフの装置の概略図である。図１において、試薬ラック１に置かれた溶離液Ａ２と溶離液Ｂ３はそれぞれ、送液ポンプ４に組み込まれた送液部Ａ５と送液部Ｂ６によって試料注入装置８へ送液される。送液部５、６は、例えばシリンジが使用される。
【００２０】
グラジエント溶出法を行う場合には、送液部５、６の動作速度を変更させることなどによって混合比率が調整される。通常、送液ポンプ４の吐出側には送液不良や流路内の詰まりを判断するために、圧力センサ７が内蔵されている。試料注入装置８で注入された試料は、一定温度に保つためのカラムオーブン９内に設置された分離カラム１０で目的成分が分離され、それが検出器１１で検知される。
【００２１】
データ処理装置１３は、それぞれのユニット（送液ポンプ４、試料注入装置８、カラムオーブン９、検出器１１）と信号ケーブル１２で接続され、各ユニットの動作制御だけではなく、検出器１１の信号強度や圧力センサ７の圧力値を記録保存する。また、データ処理装置１３はディスプレイ（表示装置）を備え、このディスプレイに必要な事項が表示される。
【００２２】
分離カラム１０には、平均粒子径が約２．５マイクロメートル以下の複数の粒子からなる充填材が使用されている。
【００２３】
図２は、定圧グラジエントプログラムを使用するときのデータ処理装置１３の設定画面例を示す図である。
【００２４】
図２において、項目１と項目２には、使用者が任意に入力した定速グラジエントプログラムが入力されている。図２に示した例においては、溶離液ＡとＢとの割合の時間経過との関係と、流速とが設定可能となっている。
【００２５】
使用者が項目３にチェックを入れることで、定圧グラジエントプログラムの利用を選択することができる。同時に、項目４に任意の数値を入力して、定速グラジエントプログラムのどの段階（時点）から定圧グラジエントプログラムを適用させるのかを決定することができる。
【００２６】
定速グラジエントプログラムで過去に測定したときの圧力値トレースを基に定圧グラジエントプログラムに変換する場合は、項目５にチェックを入れ、項目６に基となる圧力トレースのファイルを選択する。次に、項目７もしくは項目８を入力して、基準となる圧力値、過去の圧力トレース中で最も高い圧力値を決めることができる。
【００２７】
データ処理装置１３の内部で本発明における実施例の動作機能を模式化したものが図３である。
【００２８】
図３において、定速グラジエントプログラムで過去に測定したときの圧力値トレースを基に定圧グラジエントプログラムに変換する場合は、圧力値トレース記憶部１３ａに保存されている圧力値トレースと定速グラジエントプログラム記憶部１３ｃに保存されている定速グラジエントプログラムの情報が、定圧グラジエントプログラム変換部１３ｂに伝達される。
【００２９】
変換された定圧グラジエントプログラムの動作は流速指示部１３ｄと混合比率指示部１３ｅを介して、送液部５、６が実行する。
【００３０】
図４は、定速グラジエントプログラムを細分化して、その時間毎に実際に測定された圧力値を記載したモデルを示す表であり、図５は定圧グラジエントプログラムに変換した後のモデルを示す表である。
【００３１】
図４、図５において、まず、定圧グラジエントプログラムの流速ｆｍについて次式（１）を用いて算出する。
【００３２】
ｆｍ＝Ｆ・｛（Ｐｓ ｏｒ Ｐｍａｘ）／Ｐｍ｝ ・・・（１）
ただし、上記式（１）において、ｍは０以上の数であり、Ｆは一定流速、Ｐｓはカラム耐圧保証値などを基に使用者が定めた任意の圧力値、Ｐｍａｘは定速グラジエントプログラム中の最大圧力値、Ｐｍは実測した圧力値を示す。
【００３３】
次に、定圧グラジエントプログラムの時間ｔｎを、次式（２）を用いて算出する。
【００３４】
ｔｎ＝ｔｎ−１＋Ｆ・（Ｔｎ−Ｔｎ−１）／｛（ｆｎ−１＋ｆｎ）／２｝ ・・・（２）
ただし、上記式（１）において、ｎは１以上の数であり、Ｔｎ、Ｔｎ−１は定速グラジエントプログラムにおける時間、ｆｎ−１、ｆｎは定圧グラジエントプログラムに変換後の流速である。
【００３５】
定速グラジエントプログラムの細分化は、可能な限り短い時間間隔で行うのが好ましい。また、時間毎だけではなく、圧力変化量毎に細分化を行ってもよい。
【００３６】
図６は、定速グラジエントプログラムで測定した具体例を示す表であり、図７は図６の定速グラジエントプログラムで測定したクロマトグラムである。そして、図８はその時の圧力値トレースをあらわしている。
【００３７】
また、図９は０．５分間隔で、図６の定速グラジエントプログラムを細分化して、その時々の圧力値を図８から抽出して記載した表である。
【００３８】
図１０は０．５分以降を圧力値トレース中で最も高い圧力値を基準として、上記式（１）、（２）を用いて、定速グラジエントプログラムを定圧グラジエントプログラムに変換したものである。図９に示すように定速グラジエントプログラムでは１０分かかっていた測定が、図１０に示すように定圧グラジエントプログラムでは８．１５分に短縮された。
【００３９】
なお、定速グラジエントプログラム及び定圧グラジエントプログラムでの測定終了の判断は、予定流液量が全て流された時点である。つまり、予定流液量が全て流された時点が、定速グラジエントプログラムでは１０分であり、定圧グラジエントプログラムでは８．１５分である。
【００４０】
図９、図１０に示した表は、定速グラジエントプログラムを定圧グラジエントプログラムに変換した場合における測定経過時間予定が判断可能なように、データ処理装置１３のディスプレイに表示することができる。
【００４１】
図１１は定速グラジエントプログラムから変換した定圧グラジエントプログラムで測定したときのクロマトグラムを示す図であり、図１２はその時の、つまり、変換した定圧グラジエントプログラムで測定したときの圧力値トレースを示すグラフである。図１２に示すように、多少の脈動はあるものの圧力値は、終始ほぼ一定で、定速グラジエントプログラムと同様の分離効果（図１１）を得ることができた。
【００４２】
ここで、等加速送液では送液量は二次関数的に変化していく。高速液体クロマトグラフ装置により制御が可能であれば、より厳密に定速グラジエントプログラムから定圧グラジエントプログラムへ変換するために、定圧グラジエントプログラムのｔｐとｔｐ＋１間（所定時間間隔）の溶液混合比率Ｂｘを、例えば、次式（３）で二次関数的に変化させるのが好ましい。
【００４３】
Ｂｘ＝Ｂｐ＋［ｆｐ・（ｔｘ−ｔｐ）＋（ｔｘ−ｔｐ）・｛（ｆｐ＋１−ｆｐ）／（ｔｐ＋１−ｔ１）｝・（ｔｘ−ｔｐ）／２］／｛Ｆ・（Ｔｐ＋１−Ｔｐ）｝・（Ｂｐ＋１−Ｂｐ） ・・・（３）
ただし、（３）式において、Ｂｐ、Ｂｐ＋１は定速グラジエントプログラムにおける溶液混合比率、ｆｐ、ｆｐ＋１は変換後の流速、ｔｘはその時の時間、Ｔｐ、Ｔｐ＋１は定速グラジエントプログラムにおける時間、ｔ１は測定開始から一定時間経過後の時間（例えば、０．５分）である。
【００４４】
次に、過去の圧力値トレースデータに基づいて定圧グラジエントプログラムに変換するのではなく、リアルタイムに測定された圧力値に基いて調整する（プログラム変換する）場合について説明する。
【００４５】
リアルタイムに調整する場合は、図２の項目９にチェックを入れて、項目１０（指定圧力値）もしくは項目１１（測定開始時の圧力値）を入力して基準となる圧力値を決める。
【００４６】
この場合の動作について説明する。
【００４７】
図３に示した圧力センサ７で計測している現時点の圧力値と定速グラジエントプログラム記憶部１３ｃに保存されている定速グラジエントプログラムの情報が、定圧グラジエントプログラム変換部１３ｂに伝達される。
【００４８】
定圧グラジエントプログラム変換部１３ｂは、図２の項目１０もしくは項目１１で設定した基準となる圧力値になるように流速指示部１３ｄを介して、送液部５、６の流速を調整する。
【００４９】
平行して、定圧グラジエントプログラム変換部１３ｂは、測定を開始してからの総送液量を送液ポンプ４のモーター回転数などから算出する。例えば、総送液量が１０ｍＬの場合には、流速１ｍＬ／ｍｉｎの定速グラジエントプログラムで１０分時の混合比率になるように混合比率指示部１３ｅを介して、送液部５、６を調整する。
【００５０】
以上の動作の全体動作フローチャートを図１３に示す。この動作は、データ処理装置１３により各部に制御指示され、実行される。
【００５１】
図１３のステップＳ１において、図２の項目１、２にデータが入力される。次に、ステップＳ２において、定圧グラジエントプログラムを利用するか否かが判断され、定圧グラジエントプログラムを利用しない場合は、ステップＳ１２に進み、定速グラジエントプログラムが実行される。
【００５２】
ステップＳ２において、定圧グラジエントプログラムを利用する場合は、ステップＳ３に進み、図２に示した項目４のデータが入力され、ステップＳ４において、過去の圧力値をトレースに基づいて定圧グラジエントプログラムに変換するか（項目５）、リアルタイムに測定した圧力値に基づいて定圧グラジエントプログラムに変換するか（項目９）が選択される。
【００５３】
ステップＳ４において、過去の圧力値をトレースに基づいて定圧グラジエントプログラムに変換する（項目５）が選択された場合は、ステップＳ５に進み、過去の圧力値トレースファイルが選択され、選択されたトレースファイルがディスプレイに表示され（ステップＳ６）、圧力値が設定される（ステップＳ７）。
【００５４】
次に、定速グラジエントプログラムが定圧グラジエントプログラムに変換され（ステップＳ８）、変換された定圧グラジエントプログラムによる数値（図１０）が画面表示される。
【００５５】
画面表示された定圧グラジエントプログラムによる数値により実行するか否かが判断され（ステップＳ１０）、実行可能であればステップＳ１１に進み、実行される。
【００５６】
ステップＳ１０において、表示された数値での実行を望まない場合は、ステップＳ５に戻り、圧力値トレースファイルの選択から再開する。
【００５７】
ステップＳ４において、項目９が選択された場合は、ステップＳ１３に進み、基準圧力値、測定開始圧力値が入力される。そして、実測が行われ（ステップＳ１４）、実測された結果に基づいて定速グラジエントプログラムが定圧グラジエントプログラムに変換される（ステップＳ１５）。
【００５８】
そして、ステップＳ１６において、実測値が画面表示され、画面表示された数値により実行するか否かが判断され（ステップＳ１７）、実行可能であればステップＳ１８に進み、実行される。
【００５９】
ステップＳ１７において、表示された数値での実行を望まない場合は、ステップＳ１３に戻り、基準圧力値等の入力から再開する。
【００６０】
以上のように、本発明の実施例によれば、最適な最大圧力が得られるように溶液の流速を制御しているので、粒子径（平均粒子径約２．５マイクロメートル）が小さな充填剤の分離カラムが用いられた場合、最大圧力内で、溶液の流速を上昇させることができ、分析時間を短縮可能となる。充填剤の粒子径が小さい分離カラムの場合は、分離カラムの耐圧を超えない範囲であれば、流速を上げても、一定以上のピーク形状を維持可能である。
【００６１】
したがって、本発明の実施例１によれば、定速グラジエント溶出法と同様の分離効果を得ることができ、かつ、測定時間を短縮することが可能な高速液体クロマトグラフ装置及び高速液体クロマトグラフ装置の送液方法を実現することができる。
【００６２】
なお、分離カラムは使用を続けると、試料や溶離液中のゴミが徐々に詰まり、同じ組成の溶離液を同じ流速で送液しても圧力値は上昇してしまう。
【００６３】
そのため、リアルタイムで定圧グラジエントプログラムに変換して測定を行っていると、ピークの溶出時間が遅れていく。溶出時間の再現性を得るために、一度目はリアルタイムで変換を行って、その時の流速や混合比率の変化の様子を記録しておき、次回以降からは現時点の圧力値をフィードバックさせず、以前に記録した流速や混合率比率の変化を再現させて測定を行ってもよい。
【００６４】
また、本発明は、充填剤の粒子径が小さい（平均粒子径約２．５マイクロメートル）分離カラムを使用する高速液体クロマトグラム装置に適用することが最も好ましいが、充填剤の粒子径が通常（平均粒子径約５．０マイクロメートル）の分離カラムを使用する液体クロマトグラム装置にも適用可能である。
【００６５】
充填剤の粒子径が通常の分離カラムの場合、溶液の流速をあげると、ピーク形状が悪化する可能性はあるが測定時間の短縮は可能である。
【００６６】
したがって、測定精度が劣っていても、短時間で測定が可能なことを望む場合は、充填剤の粒子径が通常の分離カラムを用いる場合に好適である。
【００６７】
なお、ピーク形状の悪化は、ソフトウエア処理により改善するように構成することも可能である。
【符号の説明】
【００６８】
１・・・試薬ラック、２・・・溶離液Ａ、３・・・溶離液Ｂ、４・・・送液ポンプ、５・・・送液部Ａ、６・・・送液部Ｂ、７・・・圧力センサ、８・・・試料注入装置、９・・・カラムオーブン、１０・・・分離カラム、１１・・・検出器、１２・・・信号ケーブル、１３・・・データ処理装置、１３ａ・・・圧力値トレース記憶部、１３ｂ・・・定圧グラジエントプログラム変換部、１３ｃ・・・定速グラジエントプログラム記憶部、１３ｄ・・・流速指示部、１３ｅ・・・混合比率指示部
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グラジエント溶出法を使用する高速液体クロマトグラフ装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
高速液体クロマトグラフでは、測定時間を短縮するなどの目的で、二種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら送液するグラジエント溶出法が使用されてきたが、ピーク形状が悪くならないように流速は一般的に一定で行われている。
【０００３】
グラジェント溶出法を用いた液体クロマトグラフ装置の例は、特許文献１に記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】ＷＯ２００３／０７９０００号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ところで、近年、充填剤の粒子径が従来品よりも小さく、平均粒子径が約２．５マイクロメートル以下の分離カラムが開発された。充填剤の粒子径が大きい（５マイクロメートル程度）従来品は流速を上げるとピーク形状が悪くなるが、充填剤の粒子径が小さい分離カラムはピーク形状がほとんど悪くならないという特徴を持つ。
【０００６】
充填剤の粒子径が小さい分離カラムは、分離カラムの耐圧を超えない範囲であれば、流速を上げれば上げるほどピーク形状は維持されながら測定時間を短縮することができる。
【０００７】
しかし、従来技術における分離カラムではカラムごとに最適な流速を設定し、それから大きく離れた流速で使用することはあまりなかった。
【０００８】
ここで、水溶液と有機溶媒などを溶離液としてグラジエント溶出法を行ったときに、それぞれの液体の粘性が異なるので、測定中は混合比率によって圧力値が変化していく。
【０００９】
従来技術においても、充填剤の粒子径が小さい分離カラムがグラジエント溶出法に利用されているが、流速は一定で行われている。
【００１０】
この時の一定流速は、測定中に最も圧力値が高くなる時点を基準として、分離カラムの耐圧を超えないように調整される。
【００１１】
つまり、従来技術においては、調整された流速以上に流速を上げて測定時間を短縮することは考慮されていなかった。
【００１２】
本発明の目的は、定速グラジエント溶出法と同様の分離効果を得ることができ、かつ、測定時間を短縮することが可能な高速液体クロマトグラフ装置及び高速液体クロマトグラフ装置の送液方法を実現することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
上記目的を達成するため、本発明は次のように構成される。
【００１４】
本発明の高速液体クロマトグラフ装置は、２種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら溶離液を送液する送液手段と、送液された溶離液中に試料を注入する試料注入手段と、試料が注入された溶離液が供給され、試料中の目的成分を分離する分離カラムと、分離された目的成分を分析する検出器と、上記送液手段、上記試料注入手段、上記分離カラム、及び上記検出器の動作を制御する制御手段とを備える。
【００１５】
上記制御手段は、２種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら、一定速度で溶離液を送液するための定速グラジエントプログラムを記憶する定速グラジエントプログラム記憶部と、定速グラジエントプログラムを２種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら一定圧力で溶離液を送液するための定圧グラジエントプログラムに変換する定圧グラジエントプログラム変換部と、変換された定圧グラジエントプログラムに従って、送液される溶離液の流速を制御する流速指示部とを有する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、定速グラジエント溶出法と同様の分離効果を得ることができ、かつ、測定時間を短縮することが可能な高速液体クロマトグラフ装置及び高速液体クロマトグラフ装置の送液方法を実現することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明が適用される高速液体クロマトグラフ装置の概略構成図である。
【図２】本発明の定圧グラジエントプログラムの設定を行うデータ処理装置の表示画面例を示す図である。
【図３】本発明の定圧グラジエントプログラムを実行するデータ処理装置の内部概略機能構成図である。
【図４】本発明に適用される定速グラジエントプログラムのモデルを示す図である。
【図５】本発明における定圧グラジエントプログラムのモデルを示す図である。
【図６】本発明に用いる定速グラジエントプログラムの例を示す図である。
【図７】図６の定速グラジエントプログラムで測定したときのクロマトグラムを示す図である。
【図８】図６の定速グラジエントプログラムで測定したときの圧力値トレースである。
【図９】図６の定速グラジエントプログラムを細分化して、それぞれの時間毎の圧力値を図８から抽出して記載した図である。
【図１０】図９の定速グラジエントプログラムを定圧グラジエントプログラムに変換したデータを示す図である。
【図１１】図１０の定圧グラジエントプログラムで測定したときのクロマトグラムを示す図である。
【図１２】図１０の定圧グラジエントプログラムで測定したときの圧力値トレースを示す図である。
【図１３】本願発明の実施例１の全体動作フローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、図面に基づいて本発明の実施形態を説明する。
【実施例】
【００１９】
図１は、本発明が適用される高速液体クロマトグラフの装置の概略図である。図１において、試薬ラック１に置かれた溶離液Ａ２と溶離液Ｂ３はそれぞれ、送液ポンプ４に組み込まれた送液部Ａ５と送液部Ｂ６によって試料注入装置８へ送液される。送液部５、６は、例えばシリンジが使用される。
【００２０】
グラジエント溶出法を行う場合には、送液部５、６の動作速度を変更させることなどによって混合比率が調整される。通常、送液ポンプ４の吐出側には送液不良や流路内の詰まりを判断するために、圧力センサ７が内蔵されている。試料注入装置８で注入された試料は、一定温度に保つためのカラムオーブン９内に設置された分離カラム１０で目的成分が分離され、それが検出器１１で検知される。
【００２１】
データ処理装置１３は、それぞれのユニット（送液ポンプ４、試料注入装置８、カラムオーブン９、検出器１１）と信号ケーブル１２で接続され、各ユニットの動作制御だけではなく、検出器１１の信号強度や圧力センサ７の圧力値を記録保存する。また、データ処理装置１３はディスプレイ（表示装置）を備え、このディスプレイに必要な事項が表示される。
【００２２】
分離カラム１０には、平均粒子径が約２．５マイクロメートル以下の複数の粒子からなる充填材が使用されている。
【００２３】
図２は、定圧グラジエントプログラムを使用するときのデータ処理装置１３の設定画面例を示す図である。
【００２４】
図２において、項目１と項目２には、使用者が任意に入力した定速グラジエントプログラムが入力されている。図２に示した例においては、溶離液ＡとＢとの割合の時間経過との関係と、流速とが設定可能となっている。
【００２５】
使用者が項目３にチェックを入れることで、定圧グラジエントプログラムの利用を選択することができる。同時に、項目４に任意の数値を入力して、定速グラジエントプログラムのどの段階（時点）から定圧グラジエントプログラムを適用させるのかを決定することができる。
【００２６】
定速グラジエントプログラムで過去に測定したときの圧力値トレースを基に定圧グラジエントプログラムに変換する場合は、項目５にチェックを入れ、項目６に基となる圧力トレースのファイルを選択する。次に、項目７もしくは項目８を入力して、基準となる圧力値、過去の圧力トレース中で最も高い圧力値を決めることができる。
【００２７】
データ処理装置１３の内部で本発明における実施例の動作機能を模式化したものが図３である。
【００２８】
図３において、定速グラジエントプログラムで過去に測定したときの圧力値トレースを基に定圧グラジエントプログラムに変換する場合は、圧力値トレース記憶部１３ａに保存されている圧力値トレースと定速グラジエントプログラム記憶部１３ｃに保存されている定速グラジエントプログラムの情報が、定圧グラジエントプログラム変換部１３ｂに伝達される。
【００２９】
変換された定圧グラジエントプログラムの動作は流速指示部１３ｄと混合比率指示部１３ｅを介して、送液部５、６が実行する。
【００３０】
図４は、定速グラジエントプログラムを細分化して、その時間毎に実際に測定された圧力値を記載したモデルを示す表であり、図５は定圧グラジエントプログラムに変換した後のモデルを示す表である。
【００３１】
図４、図５において、まず、定圧グラジエントプログラムの流速ｆｍについて次式（１）を用いて算出する。
【００３２】
ｆｍ＝Ｆ・｛（Ｐｓ ｏｒ Ｐｍａｘ）／Ｐｍ｝ ・・・（１）
ただし、上記式（１）において、ｍは０以上の数であり、Ｆは一定流速、Ｐｓはカラム耐圧保証値などを基に使用者が定めた任意の圧力値、Ｐｍａｘは定速グラジエントプログラム中の最大圧力値、Ｐｍは実測した圧力値を示す。
【００３３】
次に、定圧グラジエントプログラムの時間ｔｎを、次式（２）を用いて算出する。
【００３４】
ｔｎ＝ｔｎ−１＋Ｆ・（Ｔｎ−Ｔｎ−１）／｛（ｆｎ−１＋ｆｎ）／２｝ ・・・（２）
ただし、上記式（１）において、ｎは１以上の数であり、Ｔｎ、Ｔｎ−１は定速グラジエントプログラムにおける時間、ｆｎ−１、ｆｎは定圧グラジエントプログラムに変換後の流速である。
【００３５】
定速グラジエントプログラムの細分化は、可能な限り短い時間間隔で行うのが好ましい。また、時間毎だけではなく、圧力変化量毎に細分化を行ってもよい。
【００３６】
図６は、定速グラジエントプログラムで測定した具体例を示す表であり、図７は図６の定速グラジエントプログラムで測定したクロマトグラムである。そして、図８はその時の圧力値トレースをあらわしている。
【００３７】
また、図９は０．５分間隔で、図６の定速グラジエントプログラムを細分化して、その時々の圧力値を図８から抽出して記載した表である。
【００３８】
図１０は０．５分以降を圧力値トレース中で最も高い圧力値を基準として、上記式（１）、（２）を用いて、定速グラジエントプログラムを定圧グラジエントプログラムに変換したものである。図９に示すように定速グラジエントプログラムでは１０分かかっていた測定が、図１０に示すように定圧グラジエントプログラムでは８．１５分に短縮された。
【００３９】
なお、定速グラジエントプログラム及び定圧グラジエントプログラムでの測定終了の判断は、予定流液量が全て流された時点である。つまり、予定流液量が全て流された時点が、定速グラジエントプログラムでは１０分であり、定圧グラジエントプログラムでは８．１５分である。
【００４０】
図９、図１０に示した表は、定速グラジエントプログラムを定圧グラジエントプログラムに変換した場合における測定経過時間予定が判断可能なように、データ処理装置１３のディスプレイに表示することができる。
【００４１】
図１１は定速グラジエントプログラムから変換した定圧グラジエントプログラムで測定したときのクロマトグラムを示す図であり、図１２はその時の、つまり、変換した定圧グラジエントプログラムで測定したときの圧力値トレースを示すグラフである。図１２に示すように、多少の脈動はあるものの圧力値は、終始ほぼ一定で、定速グラジエントプログラムと同様の分離効果（図１１）を得ることができた。
【００４２】
ここで、等加速送液では送液量は二次関数的に変化していく。高速液体クロマトグラフ装置により制御が可能であれば、より厳密に定速グラジエントプログラムから定圧グラジエントプログラムへ変換するために、定圧グラジエントプログラムのｔｐとｔｐ＋１間（所定時間間隔）の溶液混合比率Ｂｘを、例えば、次式（３）で二次関数的に変化させるのが好ましい。
【００４３】
Ｂｘ＝Ｂｐ＋［ｆｐ・（ｔｘ−ｔｐ）＋（ｔｘ−ｔｐ）・｛（ｆｐ＋１−ｆｐ）／（ｔｐ＋１−ｔ１）｝・（ｔｘ−ｔｐ）／２］／｛Ｆ・（Ｔｐ＋１−Ｔｐ）｝・（Ｂｐ＋１−Ｂｐ） ・・・（３）
ただし、（３）式において、Ｂｐ、Ｂｐ＋１は定速グラジエントプログラムにおける溶液混合比率、ｆｐ、ｆｐ＋１は変換後の流速、ｔｘはその時の時間、Ｔｐ、Ｔｐ＋１は定速グラジエントプログラムにおける時間、ｔ１は測定開始から一定時間経過後の時間（例えば、０．５分）である。
【００４４】
次に、過去の圧力値トレースデータに基づいて定圧グラジエントプログラムに変換するのではなく、リアルタイムに測定された圧力値に基いて調整する（プログラム変換する）場合について説明する。
【００４５】
リアルタイムに調整する場合は、図２の項目９にチェックを入れて、項目１０（指定圧力値）もしくは項目１１（測定開始時の圧力値）を入力して基準となる圧力値を決める。
【００４６】
この場合の動作について説明する。
【００４７】
図３に示した圧力センサ７で計測している現時点の圧力値と定速グラジエントプログラム記憶部１３ｃに保存されている定速グラジエントプログラムの情報が、定圧グラジエントプログラム変換部１３ｂに伝達される。
【００４８】
定圧グラジエントプログラム変換部１３ｂは、図２の項目１０もしくは項目１１で設定した基準となる圧力値になるように流速指示部１３ｄを介して、送液部５、６の流速を調整する。
【００４９】
平行して、定圧グラジエントプログラム変換部１３ｂは、測定を開始してからの総送液量を送液ポンプ４のモーター回転数などから算出する。例えば、総送液量が１０ｍＬの場合には、流速１ｍＬ／ｍｉｎの定速グラジエントプログラムで１０分時の混合比率になるように混合比率指示部１３ｅを介して、送液部５、６を調整する。
【００５０】
以上の動作の全体動作フローチャートを図１３に示す。この動作は、データ処理装置１３により各部に制御指示され、実行される。
【００５１】
図１３のステップＳ１において、図２の項目１、２にデータが入力される。次に、ステップＳ２において、定圧グラジエントプログラムを利用するか否かが判断され、定圧グラジエントプログラムを利用しない場合は、ステップＳ１２に進み、定速グラジエントプログラムが実行される。
【００５２】
ステップＳ２において、定圧グラジエントプログラムを利用する場合は、ステップＳ３に進み、図２に示した項目４のデータが入力され、ステップＳ４において、過去の圧力値をトレースに基づいて定圧グラジエントプログラムに変換するか（項目５）、リアルタイムに測定した圧力値に基づいて定圧グラジエントプログラムに変換するか（項目９）が選択される。
【００５３】
ステップＳ４において、過去の圧力値をトレースに基づいて定圧グラジエントプログラムに変換する（項目５）が選択された場合は、ステップＳ５に進み、過去の圧力値トレースファイルが選択され、選択されたトレースファイルがディスプレイに表示され（ステップＳ６）、圧力値が設定される（ステップＳ７）。
【００５４】
次に、定速グラジエントプログラムが定圧グラジエントプログラムに変換され（ステップＳ８）、変換された定圧グラジエントプログラムによる数値（図１０）が画面表示される。
【００５５】
画面表示された定圧グラジエントプログラムによる数値により実行するか否かが判断され（ステップＳ１０）、実行可能であればステップＳ１１に進み、実行される。
【００５６】
ステップＳ１０において、表示された数値での実行を望まない場合は、ステップＳ５に戻り、圧力値トレースファイルの選択から再開する。
【００５７】
ステップＳ４において、項目９が選択された場合は、ステップＳ１３に進み、基準圧力値、測定開始圧力値が入力される。そして、実測が行われ（ステップＳ１４）、実測された結果に基づいて定速グラジエントプログラムが定圧グラジエントプログラムに変換される（ステップＳ１５）。
【００５８】
そして、ステップＳ１６において、実測値が画面表示され、画面表示された数値により実行するか否かが判断され（ステップＳ１７）、実行可能であればステップＳ１８に進み、実行される。
【００５９】
ステップＳ１７において、表示された数値での実行を望まない場合は、ステップＳ１３に戻り、基準圧力値等の入力から再開する。
【００６０】
以上のように、本発明の実施例によれば、最適な最大圧力が得られるように溶液の流速を制御しているので、粒子径（平均粒子径約２．５マイクロメートル）が小さな充填剤の分離カラムが用いられた場合、最大圧力内で、溶液の流速を上昇させることができ、分析時間を短縮可能となる。充填剤の粒子径が小さい分離カラムの場合は、分離カラムの耐圧を超えない範囲であれば、流速を上げても、一定以上のピーク形状を維持可能である。
【００６１】
したがって、本発明の実施例１によれば、定速グラジエント溶出法と同様の分離効果を得ることができ、かつ、測定時間を短縮することが可能な高速液体クロマトグラフ装置及び高速液体クロマトグラフ装置の送液方法を実現することができる。
【００６２】
なお、分離カラムは使用を続けると、試料や溶離液中のゴミが徐々に詰まり、同じ組成の溶離液を同じ流速で送液しても圧力値は上昇してしまう。
【００６３】
そのため、リアルタイムで定圧グラジエントプログラムに変換して測定を行っていると、ピークの溶出時間が遅れていく。溶出時間の再現性を得るために、一度目はリアルタイムで変換を行って、その時の流速や混合比率の変化の様子を記録しておき、次回以降からは現時点の圧力値をフィードバックさせず、以前に記録した流速や混合率比率の変化を再現させて測定を行ってもよい。
【００６４】
また、本発明は、充填剤の粒子径が小さい（平均粒子径約２．５マイクロメートル）分離カラムを使用する高速液体クロマトグラム装置に適用することが最も好ましいが、充填剤の粒子径が通常（平均粒子径約５．０マイクロメートル）の分離カラムを使用する液体クロマトグラム装置にも適用可能である。
【００６５】
充填剤の粒子径が通常の分離カラムの場合、溶液の流速をあげると、ピーク形状が悪化する可能性はあるが測定時間の短縮は可能である。
【００６６】
したがって、測定精度が劣っていても、短時間で測定が可能なことを望む場合は、充填剤の粒子径が通常の分離カラムを用いる場合に好適である。
【００６７】
なお、ピーク形状の悪化は、ソフトウエア処理により改善するように構成することも可能である。
【符号の説明】
【００６８】
１・・・試薬ラック、２・・・溶離液Ａ、３・・・溶離液Ｂ、４・・・送液ポンプ、５・・・送液部Ａ、６・・・送液部Ｂ、７・・・圧力センサ、８・・・試料注入装置、９・・・カラムオーブン、１０・・・分離カラム、１１・・・検出器、１２・・・信号ケーブル、１３・・・データ処理装置、１３ａ・・・圧力値トレース記憶部、１３ｂ・・・定圧グラジエントプログラム変換部、１３ｃ・・・定速グラジエントプログラム記憶部、１３ｄ・・・流速指示部、１３ｅ・・・混合比率指示部
【特許請求の範囲】
【請求項１】
高速液体クロマトグラフ装置において、
２種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら溶離液を送液する送液手段と、
上記送液手段から送液された溶離液中に試料を注入する試料注入手段と、
上記試料注入手段により試料が注入された溶離液が供給され、試料中の目的成分を分離する分離カラムと、
上記分離カラムにより分離された目的成分を分析する検出器と、
上記送液手段、上記試料注入手段、上記分離カラム、及び上記検出器の動作を制御する制御手段と、
を備え、上記制御手段は、２種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら、一定速度で溶離液を送液するための定速グラジエントプログラムを記憶する定速グラジエントプログラム記憶部と、上記定速グラジエントプログラムを２種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら、一定圧力で溶離液を送液するための定圧グラジエントプログラムに変換する定圧グラジエントプログラム変換部と、上記変換部により変換された定圧グラジエントプログラムに従って、上記送液手段により送液される溶離液の流速を制御する流速指示部とを有することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置。
【請求項２】
請求項１に記載の高速液体クロマトグラフ装置において、上記送液手段から送液される溶離液の圧力を測定する圧力センサを備え、上記制御手段は、上記圧力センサにより測定された圧力値を記憶する圧力値トレース記憶部を有し、上記記憶手段の上記変換部は、上記圧力値トレース記憶部に記憶された圧力値に基づいて、上記定速グラジエントプログラムを定圧グラジエントプログラムに変換することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置。
【請求項３】
請求項１に記載の高速液体クロマトグラフ装置において、上記送液手段から送液される溶離液の圧力を測定する圧力センサを備え、上記制御手段は、上記圧力センサにより測定された現在の圧力値と、上記送液手段の送液量とに基づいて、上記定速グラジエントプログラムを定圧グラジエントプログラムに変換することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置。
【請求項４】
請求項２に記載の高速液体クロマトグラフ装置において、上記定速グラジエントプログラム記憶部は、複数の定速グラジエントプログラムを記憶し、上記制御手段は、複数の定速グラジエントプログラムのうちの一つと流速とが指定される指定部を有し、上記変換部は、指定部により指定された定速グラジエントプログラムと流速とに基づいて、定速グラジエントプログラムを定圧グラジエントプログラムに変換することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置。
【請求項５】
請求項４に記載の高速液体クロマトグラフ装置において、上記指定部には、定圧グラジエントプログラムが適用される時間が指定され、上記制御手段は、指定された時間以降に上記変換した定圧グラジエントプログラムに従って、上記送液手段により送液される溶離液の流速を制御することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置。
【請求項６】
請求項２に記載の高速液体クロマトグラフ装置において、上記制御手段は、表示部を有し、変換した定圧グラジエントプログラムに従った経過時間と、溶離液混合比率及び流速との関係を示すデータを上記表示部に表示させることを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置。
【請求項７】
請求項３に記載の高速液体クロマトグラフ装置において、上記制御手段は、表示部を有し、上記圧力センサにより測定された現在の圧力値を上記表示部に表示させることを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置。
【請求項８】
請求項１に記載の高速液体クロマトグラフ装置において、上記分離カラムの充填剤は、平均粒子径が約２．５マイクロメートル以下の複数の粒子であることを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置。
【請求項９】
２種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら溶離液を送液し、上記送液された溶離液中に試料を注入し、分離カラムに上記試料が注入された溶離液が供給され、試料中の目的成分を分離し、分離された目的成分を検出器により分析する 高速液体クロマトグラフ装置の液体送液方法において、
２種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら、一定速度で溶離液を送液するための定速グラジエントプログラムを記憶し、上記定速グラジエントプログラムを２種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら、一定圧力で溶離液を送液するための定圧グラジエントプログラムに変換し、変換した定圧グラジエントプログラムに従って、送液される溶離液の流速を制御することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置の液体送液方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の高速液体クロマトグラフの送液方法において、送液される溶離液の圧力を測定し、測定された圧力値を記憶し、記憶された圧力値に基づいて、上記定速グラジエントプログラムを定圧グラジエントプログラムに変換することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置の液体送液方法。
【請求項１１】
請求項９に記載の高速液体クロマトグラフ装置の送液方法において、上記送液される溶離液の圧力を測定し、測定された現在の圧力値と、送液量とに基づいて、上記定速グラジエントプログラムを定圧グラジエントプログラムに変換することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置の送液方法。
【請求項１２】
請求項１０に記載の高速液体クロマトグラフ装置の送液方法において、複数の定速グラジエントプログラムを記憶し、複数の定速グラジエントプログラムのうちの一つと流速とが指定され、指定された定速グラジエントプログラムと流速とに基づいて、定速グラジエントプログラムを定圧グラジエントプログラムに変換することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置の送液方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の高速液体クロマトグラフ装置の送液方法において、定圧グラジエントプログラムが適用される時間が指定され、指定された時間以降に上記変換した定圧グラジエントプログラムに従って、上記送液手段により送液される溶離液の流速を制御することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置の送液方法。
【請求項１４】
請求項１０に記載の高速液体クロマトグラフ装置の送液方法において、変換した定圧グラジエントプログラムに従った経過時間と、溶離液混合比率及び流速との関係を示すデータを表示部に表示させることを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置の送液方法。
【請求項１５】
請求項１１に記載の高速液体クロマトグラフ装置の送液方法において、測定された現在の圧力値を表示部に表示させることを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置の送液方法。
【請求項１６】
請求項９に記載の高速液体クロマトグラフ装置の送液方法において、上記分離カラムの充填剤は、平均粒子径が約２．５マイクロメートル以下の複数の粒子であることを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置の送液方法。
【請求項１】
高速液体クロマトグラフ装置において、
２種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら溶離液を送液する送液手段と、
上記送液手段から送液された溶離液中に試料を注入する試料注入手段と、
上記試料注入手段により試料が注入された溶離液が供給され、試料中の目的成分を分離する分離カラムと、
上記分離カラムにより分離された目的成分を分析する検出器と、
上記送液手段、上記試料注入手段、上記分離カラム、及び上記検出器の動作を制御する制御手段と、
を備え、上記制御手段は、２種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら、一定速度で溶離液を送液するための定速グラジエントプログラムを記憶する定速グラジエントプログラム記憶部と、上記定速グラジエントプログラムを２種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら、一定圧力で溶離液を送液するための定圧グラジエントプログラムに変換する定圧グラジエントプログラム変換部と、上記変換部により変換された定圧グラジエントプログラムに従って、上記送液手段により送液される溶離液の流速を制御する流速指示部とを有することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置。
【請求項２】
請求項１に記載の高速液体クロマトグラフ装置において、上記送液手段から送液される溶離液の圧力を測定する圧力センサを備え、上記制御手段は、上記圧力センサにより測定された圧力値を記憶する圧力値トレース記憶部を有し、上記記憶手段の上記変換部は、上記圧力値トレース記憶部に記憶された圧力値に基づいて、上記定速グラジエントプログラムを定圧グラジエントプログラムに変換することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置。
【請求項３】
請求項１に記載の高速液体クロマトグラフ装置において、上記送液手段から送液される溶離液の圧力を測定する圧力センサを備え、上記制御手段は、上記圧力センサにより測定された現在の圧力値と、上記送液手段の送液量とに基づいて、上記定速グラジエントプログラムを定圧グラジエントプログラムに変換することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置。
【請求項４】
請求項２に記載の高速液体クロマトグラフ装置において、上記定速グラジエントプログラム記憶部は、複数の定速グラジエントプログラムを記憶し、上記制御手段は、複数の定速グラジエントプログラムのうちの一つと流速とが指定される指定部を有し、上記変換部は、指定部により指定された定速グラジエントプログラムと流速とに基づいて、定速グラジエントプログラムを定圧グラジエントプログラムに変換することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置。
【請求項５】
請求項４に記載の高速液体クロマトグラフ装置において、上記指定部には、定圧グラジエントプログラムが適用される時間が指定され、上記制御手段は、指定された時間以降に上記変換した定圧グラジエントプログラムに従って、上記送液手段により送液される溶離液の流速を制御することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置。
【請求項６】
請求項２に記載の高速液体クロマトグラフ装置において、上記制御手段は、表示部を有し、変換した定圧グラジエントプログラムに従った経過時間と、溶離液混合比率及び流速との関係を示すデータを上記表示部に表示させることを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置。
【請求項７】
請求項３に記載の高速液体クロマトグラフ装置において、上記制御手段は、表示部を有し、上記圧力センサにより測定された現在の圧力値を上記表示部に表示させることを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置。
【請求項８】
請求項１に記載の高速液体クロマトグラフ装置において、上記分離カラムの充填剤は、平均粒子径が約２．５マイクロメートル以下の複数の粒子であることを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置。
【請求項９】
２種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら溶離液を送液し、上記送液された溶離液中に試料を注入し、分離カラムに上記試料が注入された溶離液が供給され、試料中の目的成分を分離し、分離された目的成分を検出器により分析する 高速液体クロマトグラフ装置の液体送液方法において、
２種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら、一定速度で溶離液を送液するための定速グラジエントプログラムを記憶し、上記定速グラジエントプログラムを２種類以上の溶離液の混合比率を変化させながら、一定圧力で溶離液を送液するための定圧グラジエントプログラムに変換し、変換した定圧グラジエントプログラムに従って、送液される溶離液の流速を制御することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置の液体送液方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の高速液体クロマトグラフの送液方法において、送液される溶離液の圧力を測定し、測定された圧力値を記憶し、記憶された圧力値に基づいて、上記定速グラジエントプログラムを定圧グラジエントプログラムに変換することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置の液体送液方法。
【請求項１１】
請求項９に記載の高速液体クロマトグラフ装置の送液方法において、上記送液される溶離液の圧力を測定し、測定された現在の圧力値と、送液量とに基づいて、上記定速グラジエントプログラムを定圧グラジエントプログラムに変換することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置の送液方法。
【請求項１２】
請求項１０に記載の高速液体クロマトグラフ装置の送液方法において、複数の定速グラジエントプログラムを記憶し、複数の定速グラジエントプログラムのうちの一つと流速とが指定され、指定された定速グラジエントプログラムと流速とに基づいて、定速グラジエントプログラムを定圧グラジエントプログラムに変換することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置の送液方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の高速液体クロマトグラフ装置の送液方法において、定圧グラジエントプログラムが適用される時間が指定され、指定された時間以降に上記変換した定圧グラジエントプログラムに従って、上記送液手段により送液される溶離液の流速を制御することを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置の送液方法。
【請求項１４】
請求項１０に記載の高速液体クロマトグラフ装置の送液方法において、変換した定圧グラジエントプログラムに従った経過時間と、溶離液混合比率及び流速との関係を示すデータを表示部に表示させることを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置の送液方法。
【請求項１５】
請求項１１に記載の高速液体クロマトグラフ装置の送液方法において、測定された現在の圧力値を表示部に表示させることを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置の送液方法。
【請求項１６】
請求項９に記載の高速液体クロマトグラフ装置の送液方法において、上記分離カラムの充填剤は、平均粒子径が約２．５マイクロメートル以下の複数の粒子であることを特徴とする高速液体クロマトグラフ装置の送液方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【公開番号】特開２０１１−１７９９６２（Ｐ２０１１−１７９９６２Ａ）
【公開日】平成２３年９月１５日（２０１１．９．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−４４３３２（Ｐ２０１０−４４３３２）
【出願日】平成２２年３月１日（２０１０．３．１）
【出願人】（５０１３８７８３９）株式会社日立ハイテクノロジーズ (4,325)
【公開日】平成２３年９月１５日（２０１１．９．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年３月１日（２０１０．３．１）
【出願人】（５０１３８７８３９）株式会社日立ハイテクノロジーズ (4,325)
[ Back to top ]