黒色腫の治療
免疫調節化合物を投与することにより、被験者において、黒色腫を治療、予防、阻害、又は低減する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、黒色腫（melanoma：メラノーマ）の治療の分野に関する。
【０００２】
［関連出願の相互参照］
本出願は、２００６年４月２０日に出願された米国特許仮出願第６０／７９３，２４３号の利益を主張する。
【背景技術】
【０００３】
黒色腫はメラニン細胞の悪性腫瘍である。主に皮膚腫瘍であるが、それほど頻繁ではないものの、目のメラニン細胞にも観察される（ブドウ膜黒色腫）。皮膚癌の比較的珍しい形態の１つを表すといっても、皮膚癌に関連した死の大多数の根底には黒色腫がある。長年の集中的な研究室及び臨床での研究にも関わらず、唯一の現行の有効な治療法は、厚みが１ｍｍ超に達する前の原発性腫瘍の外科的切除である。
【０００４】
皮膚の黒色腫は、毎年世界中で１６００００件の新規症例があり、白人での頻度がより高い。日のよく当たる気候に住む白人集団で特に一般的である。ＷＨＯの報告によれば、悪性黒色腫に起因する約４８０００件の死亡が一年に記録されている。
【０００５】
初期は、無害なあざ（mole）と同一に見えるか、又は全く色がない可能性があるため、黒色腫の診断には経験が必要となる。色又は形状が異常なあざは、悪性黒色腫又は前癌病変が疑われる。
【０００６】
現行の治療としては、補助治療；化学療法及び／又は免疫療法、及び／又は放射線療法を伴う、腫瘍の外科的切除が挙げられる。
【０００７】
概して、個体が黒色腫を発症するリスクは、２つの群の因子：内因子及び環境因子によって決まる。「内」因子は、概して個体の家族歴及び継承された遺伝子型である一方、最も関連のある環境因子は日光曝露である。
【０００８】
疫学調査から、紫外線（ＵＶＡ及びＵＶＢ）への曝露が、黒色腫発症の主要な誘因の１つであることが示唆される。紫外線は細胞のＤＮＡに損傷を引き起こし、これが修復されない場合には、細胞の遺伝子内に変異が生み出されるおそれがある。細胞が分裂する際、これらの変異は、新世代の細胞に伝播される。変異が腫瘍遺伝子又は腫瘍抑制遺伝子で起こる場合は、変異を有する細胞における有糸分裂の速度が制御できなくなり、腫瘍の形成につながるおそれがある。時折の極端な日光曝露（「日焼け」を生じる）は、必然的に黒色腫に結びつく。他の因子は、腫瘍抑制遺伝子内の変異又は腫瘍抑制遺伝子の全損である。（深く浸透するＵＶＡ線を用いる）サンベッドの使用は、黒色腫を含む皮膚癌の発症に結びついている。
【０００９】
リスクを判断する際に考えられる重要な要素としては、日光曝露の強度及び継続期間、日光曝露が起こる年齢、並びに皮膚着色の程度が挙げられる。小児期の曝露は、成人期の曝露よりも重大なリスク因子である。このことはオーストラリアにおける移住者調査で観察され、オーストラリアに成人として移住する場合、人々は出生国のリスクプロファイルを保持する傾向がある。（とりわけ人生の最初の２０年に）水疱を形成するか又は皮膚が剥脱するほどに日焼けした個体は、黒色腫に関するリスクが有意に大きい。
【００１０】
金髪及び赤毛の人々、複数の異型母斑又は異形成母斑を有する者、及び巨大な先天性の色素細胞性母斑を有して産まれた者は、リスクが増大している。
【００１１】
ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＤＫ４、及び幾つかの他の遺伝子における変異が、黒色腫傾向の家系で見出されているため、黒色腫の家族歴は人間のリスクを大きく増大させる。或る黒色腫の病歴を有する患者は、別の原発性腫瘍を発症するリスクが増大している。
【００１２】
黒色腫の発症率は近年増加しているが、行動、環境、又は早期発見における変化がどの程度関与するかは明確ではない。
【００１３】
家族性黒色腫は遺伝的に異質であり、家族性黒色腫に関する遺伝子座が染色体腕１ｐ、９ｐ、及び１２ｑ上に同定されている。黒色腫の発病には、複数の遺伝的事象が関連している。多発性腫瘍抑制因子１（ＣＤＫＮ２Ａ／ＭＴＳ１）遺伝子は、ヒト染色体９のｐ２１領域に局在化している、サイクリン依存性タンパク質キナーゼ（ＣＤＫ）の低分子量タンパク質阻害剤ｐ１６ＩＮＫ４ａをコードしている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
当該技術分野において黒色腫を治療、予防、阻害、又は低減する治療方法が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明によれば、被験者において、黒色腫若しくはその転移を治療、予防、阻害、若しくは低減する治療方法、又は黒色腫細胞の増殖若しくはその転移を治療、予防、阻害、若しくは低減する治療方法であって、被験者において、黒色腫若しくはその転移を治療、予防、阻害、若しくは低減するか、又は被験者において、黒色腫細胞の増殖若しくはその転移を治療、予防、阻害、若しくは低減するために、被験者に、黒色腫治療に有効な量の式Ａ：
【００１６】
【化１】
【００１７】
（式中、ｎは１又は２であり、Ｒは水素、アシル、アルキル、又はペプチド断片であり、且つＸは芳香族若しくは複素環アミノ酸又はそれらの誘導体である）
の免疫調節剤化合物を投与することを含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
一実施形態によれば、本発明は、哺乳類の被験者、好ましくはヒト患者に、免疫調節剤化合物を投与することによって、黒色腫を治療、予防、阻害、又は低減する治療方法に関する。
【００１９】
一実施形態において、疾患は黒色腫又はその転移である。本発明を利用して、被験者において、黒色腫細胞の増殖又はその転移を治療、予防、阻害、又は低減することができる。好ましくは、原発性黒色腫は、本発明の化合物による治療前、治療中又は治療後に、外科手術によって切除される。
【００２０】
本発明による免疫調節剤化合物は、式Ａ：
【００２１】
【化２】
【００２２】
の免疫調節剤を含む。
【００２３】
式Ａ中、ｎは１又は２であり、Ｒは水素、アシル、アルキル、又はペプチド断片であり、且つＸは芳香族若しくは複素環アミノ酸又はそれらの誘導体である。好ましくは、Ｘは、Ｌ−トリプトファン又はＤ−トリプトファン、最も好ましくはＬ−トリプトファンである。
【００２４】
「Ｘ」で表される芳香族又は複素環アミノ酸の適切な誘導体は、アミド、モノ又はジ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル置換アミド、アリールアミド、及び（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル又はアリールエステルである。「Ｒ」で表される適切なアシル又はアルキル部分は、炭素数１〜約６の分枝又は非分枝アルキル基、炭素数２〜約１０のアシル基、並びにカルボベンジルオキシ及びｔ−ブチルオキシカルボニル等の保護基である。好ましくは、式Ａに示すＣＨ基の炭素は、ｎが２の場合、Ｘの立体配置とは異なる立体配置を有する。
【００２５】
好ましい実施形態は、γ−Ｄ−グルタミル−Ｌ−トリプトファン、γ−Ｌ−グルタミル−Ｌ−トリプトファン、γ−Ｌ−グルタミル−Ｎin−ホルミル−Ｌ−トリプトファン、Ｎ−メチル−γ−Ｌ−グルタミル−Ｌ−トリプトファン、Ｎ−アセチル−γ−Ｌ−グルタミル−Ｌ−トリプトファン、γ−Ｌ−グルタミル−Ｄ−トリプトファン、β−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−トリプトファン、及びβ−Ｄ−アスパルチル−Ｌ−トリプトファン等の化合物を利用する。特に好ましい実施形態は、ＳＣＶ−０７と称されることもある、γ−Ｄ−グルタミル−Ｌ−トリプトファンを利用する。米国特許第５，９１６，８７８号明細書（参照して本明細書中の一部とする）には、これらの化合物、これらの化合物の調製方法、これらの化合物の医薬的に許容可能な塩、及びそれらの医薬製剤が開示されている。
【００２６】
ＳＣＶ−０７（γ−Ｄ−グルタミル−Ｌ−トリプトファン）は、γ−グルタミル又はβ−アスパルチル部分を保有する一群の免疫調節薬の一成員であり、ロシア人科学者によって発見され、米国ではSciClone Pharmaceuticals, Incによって幾つかの適応症での効能が調べられている。ＳＣＶ−０７は、ｉｎ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｔｒｏで多くの免疫調節活性を保有する。ＳＣＶ−０７は、Ｃｏｎ−Ａ誘発性の胸腺細胞及びリンパ球の増殖を増大し、脾臓リンパ球によるＣｏｎ−Ａ誘発性のインターロイキン−２（ＩＬ−２）産生及びＩＬ−２受容体発現を増大し、骨髄細胞上のＴｈｙ−１．２発現を刺激する。ｉｎ ｖｉｖｏで、ＳＣＶ−０７は、５−ＦＵで免疫抑制した動物に対して、また、ヒツジ赤血球による免疫モデルにおいて強い免疫賦活効果を有する。
【００２７】
式Ａの化合物は、任意の有効投与量、例えば、約０．００１ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲、好ましくは約０．１ｍｇ〜１００ｍｇ、最も好ましくは約１０ｍｇの投与量で投与され得る。投与量は、１週間に１回以上、例えば毎日投与してもよく、投与量は、１日に１回以上投与してもよい。経口、経鼻、経皮、舌下、注射、断続注入、連続注入等を含む任意の好適な方法で投与することができる。投与量は、筋肉内注射で投与してもよいが、他の注射及び注入形態を利用してもよく、経口吸入若しくは経鼻吸入又は経口摂取等、他の投与形態を用いてもよい。エアロゾル、溶液、懸濁液、分散液、錠剤、カプセル、シロップ等が利用され得る。
【００２８】
投与量は、１キログラム当たりのミリグラムで測定することも可能であり、投与量は、約０．００００１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲、より好ましくは約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。
【００２９】
ＳＣＶ−０７と実質的に同様の生物活性を保有する、置換部、欠失部、伸長部、代替部、又はそうでなければ修飾部を有する生物活性アナログとしては、例えば、ＳＣＶ−０７と実質的に同一の様式、実質的に同一の活性で機能するような、ＳＶＣ−０７との十分な相同性を有するＳＣＶ−０７由来のペプチドが挙げられる。
【００３０】
一実施形態によれば、式Ａの化合物は、治療又は予防期間中、有効量の式Ａの化合物が実質的に継続して被験者の循環系に維持されるように、被験者に投与され得る。本発明によれば、はるかに長い治療期間が考えられるが、本発明の実施形態は、少なくとも約６時間、１０時間、１２時間以上の治療期間中、有効量の式Ａの化合物を実質的に継続して患者の循環系に維持することを含む。他の実施形態において、治療期間は、少なくとも約１日間、さらには複数日間、例えば１週間以上である。しかしながら、上記で規定したような、有効量の式Ａの化合物が、実質的に継続して被験者の循環系に維持される治療は、同様又は異なる継続期間の非治療期間で分離され得ることが考えられる。
【００３１】
一実施形態によれば、式Ａの化合物は、治療期間中、有効量の式Ａの化合物が実質的に継続して被験者の循環系に維持されるように、例えば、静脈内注入によって被験者に継続して注入される。注入は、ミニポンプ等の任意の好適な手段によって実行され得る。代替的には、式Ａの化合物の注射レジメンを、実質的に継続して有効量の式Ａの化合物を被験者の循環系に維持するように維持することができる。好適な注射レジメンとしては、治療期間中、有効量の免疫調節剤化合物ペプチドが実質的に継続して被験者の循環系に維持されるような、例えば、１時間、２時間、４時間、６時間毎の注射が挙げられ得る。
【００３２】
式Ａの化合物の連続注入中、投与は、実質的に長めの継続期間になると考えられるが、一実施形態によれば、式Ａの化合物の連続注入は、少なくとも約１時間の治療期間である。より好ましくは、連続注入は、少なくとも約６、８、１０、１２時間以上の期間等、長期間実行される。他の実施形態において、連続注入は、少なくとも約１日間、さらには、１週間以上等、複数日間である。
【００３３】
幾つかの実施形態において、式Ａの化合物は、注射用水、生理食塩水等、医薬的に許容可能な液体キャリア中に、約０．００１μｇ／ｍｌ〜１０００μｇ／ｍｌ、より好ましくは約０．１μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの範囲内の濃度で存在する。
【００３４】
有効量の式Ａの化合物は、日常的な用量−滴定実験によって求めることができる。
【００３５】
式Ａの化合物は、他の薬剤と一緒に投与することもできる。例えば、癌の治療では、かかる薬剤として、化学療法剤及び／又は放射線が挙げられる。
【実施例】
【００３６】
（実施例１）
序論
ＳＣＶ−０７（γ−Ｄ−グルタミル−Ｌ−トリプトファン）は、Ｔ細胞分化及び機能、ｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍増殖の制御に必要な生物過程を増大させることによって免疫調節活性を示している合成ジペプチドである。
【００３７】
この１０年間での著しい進歩の１つは、ＴＨ（ＣＤ４+ Ｔ細胞）１型（ＴＨ１）から２型（ＴＨ２）表現型への免疫応答の極性化が、癌に対する細胞免疫の減少に関与すること、並びにＴＨ１細胞及びＴＨ２細胞の増殖を調節することによって、サイトカインが腫瘍の発症において中心的役割を果たすことである。
【００３８】
ＳＣＶ−０７に関する先行研究により、この免疫調節化合物が、ＴＨ１様免疫応答へのＴヘルパー細胞の移行を刺激すること、並びに胸腺細胞及び脾臓細胞の両方によるＩＦＮ−γ産生と血清中のその循環レベルとがＳＣＶ−０７処置によって増大することが示される。
【００３９】
黒色腫は、様々なタイプの免疫療法が適用されている、免疫原性腫瘍の基本型である。本試験において、本発明者らは、マウスＢ１６黒色腫モデルを使用して、ＳＣＶ−０７のｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでの生物活性を調査した。
【００４０】
方法
１×１０6個のＢ１６黒色腫細胞を、Ｃ５７／ＢＩ６同種マウスの後肢に皮下注射することによって腫瘍を誘発した。マウスを１０匹から成る５つの群にランダム化し、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、又は０．１０ｍｇ／ｋｇ用量のＳＣＶ−０７（３日間連続して腹腔内に毎日投与される）で腫瘍移植後３日目から２週間処置した。対照群を、生理食塩水又はダカルバジン（ＤＴＩＣ）で処置した（５０ｍｇ／ｋｇ用量、腹腔内、３日間）。腫瘍増殖をキャリパによって３日毎に評価し、腫瘍重量を死亡時に測定した。
【００４１】
ｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞感度試験をＢ１６細胞株に関して実施した。サブコンフルエントな黒色腫細胞を回収し、完全培地中で懸濁し、２４ウェルプレートに播種した（最終容量２ｍｌ／ウェル中、１０5細胞）。３連のウェルで２４時間、４８時間又は７２時間の培養の間、０．１μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの範囲の段階的濃度のＳＣＶ−０７で細胞を処理した。細胞増殖及び生存度を、トリパンブルー色素排除法により、血球計を用いて細胞を手動で計数することによって求めた。
【００４２】
アポトーシスを、ＤＮＡフローサイトメトリー分析によって評価した。各濃度のＳＣＶ−０７で、接着細胞をトリプシン処理でプレートから剥離し、浮遊細胞を集め、５０％アセトン：メタノール（１：４、ＰＢＳ中）で固定した。細胞を、５０μｇ／ｍｌのヨウ化プロピジウム（ＰＩ）及び１００ＫＵ／ｍｌのＲＮａｓｅを含有するＰＢＳ中で懸濁し（１×１０6／ｍｌ）、暗所、室温で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳｃａｎフローサイトメータ（Becton & Dickinson、カリフォルニア州サンノゼ）を使用してリニアスケールで測定されるＰＩ蛍光によって、一細胞当たりのＤＮＡ含量を評価した。アポトーシス細胞は、正常二倍体細胞のＧ０／Ｇ１集団の下で、赤色蛍光チャネルにおいて染色の消失を示し、アポトーシス事象に伴うＤＮＡ断片化に起因する幅広い低二倍体ピークで表される。これは、二倍体ＤＮＡ含量を有する細胞の狭いピークとは容易に区別可能である。したがって、前Ｇ１ピークを統合することによって、アポトーシス細胞の画分を算出した。
【００４３】
結果
ｉｎ ｖｉｖｏ
マウスにＢ１６黒色腫細胞を注射し、それぞれ１０匹のマウスから成る５つの群に分けた。対照マウスに、生理食塩水又はダカルバジン（ＤＴＩＣ）を注射した。異なる用量のＳＣＶ−０７の効果を、腫瘍増殖率及び生存時間に関して調べた。
【００４４】
結果から、表Ａに示す通り、ＳＣＶ−０７が用量に依存した様式で腫瘍増殖を阻害したことが示される。２４日後、腫瘍増殖の阻害は、それぞれ対照に対して、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、及び０．１ｍｇ／ｋｇの処置で６％、２２．６％、及び４２．７％であった（ＤＴＩＣ処置は、１９．０％の阻害をもたらした）。
【００４５】
【表１】
【００４６】
平均腫瘍重量は、低用量では２０％、ＤＴＩＣでは１５％少なかったのに対し、最高用量のＳＣＶ−０７で処置した動物では３５％少なかった。
【００４７】
異なる処置群のマウスの生存時間を、腫瘍注射後最大３０日監視した。２６日後、最高用量のＳＣＶ−０７で処置した動物のうち２１％は、腫瘍を有するものの、好状態で生存していた。低用量又はＤＴＩＣで処置した群には、生存している動物は全くいなかった。
【００４８】
ｉｎ ｖｉｔｒｏ
ＳＣＶ−０７の抗増殖活性を、培養２４時間及び４８時間後に直接細胞を計数することによってＢ１６黒色腫増殖に関して評価した。代表的な実験の結果から、ＳＣＶ−０７がＢ１６の細胞増殖に対して用量依存性の阻害効果を誘発したことが示される。低濃度では、ＳＣＶの効果は、実質的に細胞増殖抑制性であった一方、高濃度（１００μｇ／ｍｌ）では、ＳＣＶ−０７は、生細胞数の劇的な減少を伴う毒性効果を示した。しかしながら、ヨウ化プロピジウムによるフローサイトメトリー分析からは、アポトーシス細胞死の割合に対するＳＣＶ−０７の有意な効果を何も立証することができなかった。
【００４９】
結論
結果から、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ両方での黒色腫細胞の増殖阻害が示され、ＳＣＶ−０７治療は、宿主の抗腫瘍応答を調節し、腫瘍細胞を直接死滅させる結果として、有望な治療戦略になり得ることが示される。
【００５０】
（実施例２）
マウスＢ１６黒色腫モデルにおけるＳＣＶ−０７の抗腫瘍効果
略語
ＤＴＩＣ ダカルバジン
Ｆ 雌
ｇ グラム
ＩＲ 阻害率
ｋｇ キログラム
Ｌ 長径
Ｍ 雄
ｍＬ ミリリットル
ＳＤ 標準偏差
Ｗ 短径
【００５１】
概要
マウスＢ１６黒色腫モデルにおけるＳＣＶ−０７の抗腫瘍効果を、本試験で評価した。全部で６０匹のＣ５７／ＢＬ６マウス（雄３０匹及び雌３０匹）の皮下に、マウスＢ１６黒色腫細胞を移植した後、１４日間連続して処置した。５つの群のＣ５７／ＢＬ６マウスにそれぞれ、０ｍｇ／ｋｇ／日（第１群：ビヒクル対照群）、０．０１ｍｇ／ｋｇ／日（第３群）、０．１ｍｇ／ｋｇ／日（第４群）、１．０ｍｇ／ｋｇ／日（第５群）、及び５．０ｍｇ／ｋｇ／日（第６群）の用量で、１４日間連続して（１日目〜１４日目）皮下注射によりＳＣＶ−０７を投与した。第２群（陽性対照群）には、１日目から１４日目までダカルバジン（ＤＴＩＣ）（５０ｍｇ／ｋｇ／日）を皮下投与した。１７日目、安楽死後に腫瘍重量を計量した。
【００５２】
試験中、いずれの用量群でも死亡は全く見出されなかった。体重の統計結果からは、ＳＣＶ−０７処置群とビヒクル対照群との間に有意差はなく、ＳＣＶ−０７には体重増加に対する効果がないことが示唆された。しかしながら、結果から、ＤＴＩＣ処置群では、体重増加の有意な阻害（Ｐ＜０．０１）が示された。これはおそらくＤＴＩＣの毒性の結果である。
【００５３】
３日目及び６日目は、全ての群の腫瘍サイズが測定不能であった。９日目のＳＣＶ−０７処置群の平均腫瘍サイズは、ビヒクル対照群と比較して統計的差異を示さなかった。１２日目は、第３群、第５群、及び第６群の平均腫瘍サイズが、第１群よりも有意に小さかった。１２日目の第４群の平均腫瘍サイズは第１群よりも小さかったが、結果からは統計的有意性が示されなかった。１５日目は、第３群、第４群、第５群、及び第６群の平均腫瘍サイズが第１群よりも小さかったが、第５群及び第６群の結果からしか統計的有意性が示されなかった。１５日目の第６群（最高用量レベル）のＳＣＶ−０７の腫瘍増殖阻害率は３０．２％であり、ビヒクル対照群と比較して腫瘍増殖の有意な（ｐ＝０．０１）阻害が示唆された。第５群（用量レベル１．０ｍｇ／ｋｇのＳＣＶ−０７）も、１５日目の処置終了時に有意な腫瘍増殖阻害（１６．５％）を示した。腫瘍増殖曲線からも、ビヒクル対照群と比較してＳＣＶ−０７処置動物における腫瘍増殖が遅いことが示された。陽性対照群の動物は、平均腫瘍サイズが有意に減少した。その腫瘍増殖の阻害率は、９日目、１２日目、１５日目にそれぞれ９６．９％、９８．８％、及び９５．１％であった。これにより、本試験で使用した腫瘍モデルが妥当であることが証明される。
【００５４】
１７日目は、全てのＳＣＶ−０７処置群の平均腫瘍重量がビヒクル対照群よりも少なかった。しかしながら、第３群、第５群、及び第６群の結果からしか統計的有意性が示されなかった。第６群の腫瘍増殖阻害率は、第１群と比較して３０．８％（ｐ＝０．０１５）であった。第３群及び第５群もそれぞれ、２７．５％及び２３．５％という有意な腫瘍増殖阻害を示した。陽性対照群の動物は、平均腫瘍重量が有意に減少した。その腫瘍重量の阻害率は、１７日目に８５．０％であった。
【００５５】
結論として、本試験で使用した腫瘍モデルは妥当である。ＳＣＶ−０７を、１日１回、１４日間連続して皮下経路を介して投与することは、マウスＢ１６黒色腫の腫瘍増殖に対して有効である。３つの被験物質処置群の腫瘍重量は、ビヒクル対照群の腫瘍重量と比較して有意に低下した。全てのＳＣＶ−０７処置群の平均動物体重は、ＳＣＶ−０７で処置した後、ビヒクル対照群の平均動物体重と有意には異ならず、被験物質に毒性がないことを裏付けた。しかしながら、陽性化学療法対照であるＤＴＩＣによる処置は、ビヒクル対照群と比較して腫瘍サイズ及び腫瘍重量を有意に減少するが、体重増加の有意な阻害ももたらした。本試験のデータから、ＳＣＶ−０７を、用量レベル０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、１．０ｍｇ／ｋｇ／日、５．０ｍｇ／ｋｇ／日で１４日間投与することにより、体重増加に対する毒性効果なしに、Ｂ１６黒色腫の腫瘍増殖が有意に低減したことが示唆される。
【００５６】
序論
本試験を、移植可能なマウスＢ１６黒色腫モデルの使用によって開始し、潜在的な抗腫瘍薬としてのＳＣＶ−０７の有効性を評価した。
【００５７】
目的
本試験の目的は、それぞれ用量レベル０ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、及び５．０ｍｇ／ｋｇで、１４日間連続して皮下投与した場合の、マウスＢ１６黒色腫モデルにおけるＳＣＶ−０７の潜在的な抗腫瘍効果を評価することである。
【００５８】
材料及び方法
被験物質及び対照物質
被験物質製剤
被験物質ＳＣＶ−０７をスポンサーから入手し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ＮａＣｌ：１３７ｍＭ、ＫＣｌ：２．７ｍＭ；Ｋ2ＨＰＯ4：１．４ｍＭ；Ｎａ2ＨＰＯ4：１０．１ｍＭ、ｐＨ７．０）に溶解して、試験設計表に示すような、適切な用量レベルを達成した。製剤を氷上に保ち、光から保護し、１週間以内に使用した。この２週間の試験には、２つの新しい調製品が必要であった。
【００５９】
陽性対照物質
ダカルバジン（ＤＴＩＣ）を陽性対照物質として使用した。Sigma-Aldrich（コード番号：Ｄ２３５９）から購入し、１０ｍｇ／バイアルに分注した。使用前、１つのバイアルをＰＢＳ中に溶解して、試験設計表に示すような、適切な用量レベルを達成した。製剤を氷上に保ち、光から保護し、１週間以内に使用した。この２週間の試験には、２つの新しい調製品が必要であった。
【００６０】
試験系及び畜産
黒色腫細胞
マウスＢ１６黒色腫細胞は、中国医学科学院（Chinese Academy of Medical Sciences）（ＣＡＭＳ；中国北京）の細胞培養センター（Cell Culture Center）から入手した。
【００６１】
試験系
３０匹の雄及び３０匹の雌の健常未処置Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、ＣＡＭＳ（中国北京）の実験動物研究所（Institute of Laboratory Animal Science）から譲受した。これらの動物は、試験開始時、６週齢で、且つ１８ｇ〜２２ｇの重量であった。
【００６２】
畜産
上記動物を、オートクレーブした寝具材としての木材チップと一緒に、オートクレーブした狭い（shoe box）ケージ内に群で収容した。動物室の温度は２２℃〜２５℃に維持し、相対湿度は４０％〜６０％に維持した。試験関連の事象によって妨害される場合を除き、１２時間明／１２時間暗サイクルを維持した。動物に滅菌水及びScience Australia Unites Effortsの齧歯類食（Rodent Diet）を適宜(at libitum)与えた。全ての動物を、腫瘍接種前３日間、順化させた。
【００６３】
実験手順
腫瘍細胞調製
無菌の組織培養手順により、（ＣＡＭＳの細胞培養物センターによって供給された）Ｂ１６黒色腫細胞のうち１つのバイアルを解凍し、１０００ｒｐｍ、２０℃〜２５℃で５分間、遠心分離した。細胞ペレットを、標準生理食塩水（ＮＳ）０．１ｍＬ〜０．５ｍＬ中で懸濁し、各マウスの右腋窩に皮下注射した（およそ１×１０6細胞／マウス）。腫瘍直径がおよそ１ｃｍの場合（ノギスで測定された）、これらの動物をＣＯ2窒息で安楽死させ、腫瘍を切除した。先に説明した通り、腫瘍細胞を標準生理食塩水中で懸濁し、細胞適応サイクルを一回繰り返した。
【００６４】
腫瘍細胞接種
０日目、０．１ｍＬ容量の標準生理食塩水中の１×１０6個のＢ１６細胞を、マウスの右腋窩領域に皮下注射した。腫瘍接種日を０日目と定義した。
【００６５】
試験設計及び治療レジメン
１日目、平均体重が群間で統計的に有意とならないように、動物をその体重に基づいて異なる群にランダム化した。投薬は１日目に開始した。被験物質を、０．１ｍＬ／２０ｇ体重の用量（dose volume）で、１日１回、１４日間連続して皮下（ｓｃ）投与により投与した。ビヒクルも、同一用量で、１日１回、１４日間連続してｓｃ投与により投薬した。陽性対照であるＤＴＩＣを、同一用量で、毎日腹腔内投与により投与した。
【００６６】
以下の表に概略を示す通り、各療法群は、異なる処置レジメンを受けた。
【００６７】
【表２】
【００６８】
抗腫瘍効果の評価
観察期間中、腫瘍サイズ及び体重を、試験全体を通じて３日に１回測定した：キャリパで腫瘍サイズを、実験室天秤で体重を測定した。死亡（mortality）及び瀕死（moribundity）についての観察結果を毎日記録した。動物を、１７日目にＣＯ2窒息によって安楽死させた。腫瘍を切除、分離、秤量した。
【００６９】
腫瘍体積は、以下の式：
腫瘍体積＝長径×短径×短径／２
を使用して算出した。
【００７０】
腫瘍体積阻害率（ＩＲ）は、式：
ＩＲ（ＴＶ）＝（ＴＶビヒクル−ＴＶ薬物処置）／ＴＶビヒクル×１００％
に従って算出した。
【００７１】
ＴＶは、測定日の腫瘍体積である。
【００７２】
被験物質の抗腫瘍効果も、腫瘍重量によって評価した。各マウスの腫瘍重量を、安楽死後に記録し、腫瘍重量の阻害率は、式：
ＩＲ（ＴＷ）＝（腫瘍重量ビヒクル−腫瘍重量薬物処置）／腫瘍重量ビヒクル×１００％
に従って算出した。
【００７３】
平均及び標準偏差をＥｘｃｅｌを使用して算出し、スチューデントのｔ検定を統計的計算に使用した。
【００７４】
統計分析
各群（各用量のＳＣＶ−０７、ビヒクル対照、及びＤＴＩＣ対照）に対し、スチューデントのｔ検定を使用して、腫瘍体積、腫瘍重量、及び体重に関する群間比較を実施した。０．０５未満のＰ値を、統計的に有意であると見なした。
【００７５】
記録保管及び記録保管所
試験で生成した全てのデータを集め、記録した。
保管場所：中国協和医科大学（ＰＵＭＣ）＆ＣＡＭＳの基礎医学研究所（Institute of Basic Medical Sciences）。
【００７６】
結果及び考察
死亡
試験中、用量群のいずれにおいても死は全く見出されなかった。
【００７７】
腫瘍サイズ
腫瘍サイズの統計結果を表に列記する。図１に、腫瘍増殖曲線を示す。
【００７８】
表２〜表６に示す通り、３日目及び６日目は、全ての群の腫瘍サイズが測定不能であった。９日目のＳＣＶ−０７処置群の平均腫瘍サイズは、ビヒクル対照群と比較して統計的有意性を示さなかった。１２日目は、第３群、第５群、及び第６群の平均腫瘍サイズが第１群よりも有意に小さかった。１２日目の第４群の平均腫瘍サイズは第１群よりも小さかったが、結果からは統計的有意性が示されなかった。１５日目は、第３群、第４群、第５群、及び第６群の平均腫瘍サイズが第１群よりも小さかったが、第５群及び第６群の結果からしか統計的有意性が示されなかった。１５日目の第６群（最高用量レベル）のＳＣＶ−０７の腫瘍増殖阻害率は３０．２％であり、ビヒクル対照群と比較して腫瘍増殖の有意な阻害（ｐ＝０．０１）が示唆された。第５群（用量レベル１．０ｍｇ／ｋｇのＳＣＶ−０７）も、１５日目の処置終了時に有意な腫瘍増殖阻害（１６．５％）を示した。腫瘍増殖曲線からも、ビヒクル対照群と比較してＳＣＶ−０７処置動物における腫瘍増殖が遅いことが示された。陽性対照群の動物は、平均腫瘍サイズが有意に減少した。その腫瘍増殖の阻害率は、９日目、１２日目、１５日目にそれぞれ９６．９％、９８．８％、及び９５．１％であった。これにより、本試験で使用した腫瘍モデルが妥当であることが証明される。
【００７９】
図１は、ビヒクル対照群と比較した、ＳＣＶ−０７処置群における試験の経時での腫瘍サイズの成長低下を示す。
【００８０】
体重
表８〜表１４に、体重の統計結果を列記した。表に示す通り、ＳＣＶ−０７処置群とビヒクル対照群との間に有意差はない。しかしながら、結果から、ＤＴＩＣ処置群では、体重の有意な減少（Ｐ＜０．０１）が示された。これはおそらくＤＴＩＣの毒性の結果である。
【００８１】
腫瘍重量
表７に示す通り、１７日目は、全てのＳＣＶ−０７処置群の平均腫瘍重量がビヒクル対照群よりも少なかった。しかしながら、第３群、第５群、及び第６群の結果からしか統計的有意性が示されなかった。第６群の腫瘍増殖阻害率は、第１群と比較して３０．８％（ｐ＝０．０１５）であった。第３群及び第５群もそれぞれ、２７．５％及び２３．５％という有意な腫瘍増殖阻害を示した。陽性対照群の動物は、８５．０％と、平均腫瘍重量が有意に減少した。
【００８２】
図２は、試験終了時（１７日目）の腫瘍重量の減少を示す。
【００８３】
結論
結論として、本試験で使用した腫瘍モデルは妥当である。ＳＣＶ−０７を、１日１回、１４日間連続して皮下経路を介して投与することは、マウスＢ１６黒色腫の腫瘍増殖に対して有効である。３つの被験物質処置群の腫瘍重量は、ビヒクル対照群の腫瘍重量と比較して有意に低下した。全てのＳＣＶ−０７処置群の平均動物体重は、ＳＣＶ−０７で処置した後、ビヒクル対照群の平均動物体重と有意には異ならず、被験物質に毒性がないことを裏付けた。しかしながら、陽性化学療法対照であるＤＴＩＣによる処置は、ビヒクル対照群と比較して腫瘍サイズ及び腫瘍重量を有意に減少させるが、体重増加の有意な阻害ももたらした。本試験のデータから、ＳＣＶ−０７を、用量レベル０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、１．０ｍｇ／ｋｇ／日、５．０ｍｇ／ｋｇ／日で１４日間投与することにより、体重増加に対する毒性効果なしに、Ｂ１６黒色腫の腫瘍増殖が有意に低減したことが示唆される。
【００８４】
【表３】
【００８５】
【表４】
【００８６】
【表５】
【００８７】
【表６】
【００８８】
【表７】
【００８９】
【表８】
【００９０】
【表９】
【００９１】
【表１０】
【００９２】
【表１１】
【００９３】
【表１２】
【００９４】
【表１３】
【００９５】
【表１４】
【００９６】
【表１５】
【００９７】
付録（Appendix）
【表１６】
【００９８】
【表１７】
【００９９】
【表１８】
【０１００】
【表１９】
【０１０１】
【表２０】
【０１０２】
【表２１】
【０１０３】
【表２２】
【０１０４】
【表２３】
【０１０５】
【表２４】
【０１０６】
【表２５】
【０１０７】
【表２６】
【０１０８】
【表２７】
【０１０９】
【表２８】
【０１１０】
【表２９】
【０１１１】
【表３０】
【０１１２】
【表３１】
【０１１３】
【表３２】
【０１１４】
【表３３】
【図面の簡単な説明】
【０１１５】
【図１】異なる投与量での一実施形態の一試験における腫瘍増殖を表すグラフである。
【図２】異なる投与量での一実施形態の上記試験における腫瘍重量を表すグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、黒色腫（melanoma：メラノーマ）の治療の分野に関する。
【０００２】
［関連出願の相互参照］
本出願は、２００６年４月２０日に出願された米国特許仮出願第６０／７９３，２４３号の利益を主張する。
【背景技術】
【０００３】
黒色腫はメラニン細胞の悪性腫瘍である。主に皮膚腫瘍であるが、それほど頻繁ではないものの、目のメラニン細胞にも観察される（ブドウ膜黒色腫）。皮膚癌の比較的珍しい形態の１つを表すといっても、皮膚癌に関連した死の大多数の根底には黒色腫がある。長年の集中的な研究室及び臨床での研究にも関わらず、唯一の現行の有効な治療法は、厚みが１ｍｍ超に達する前の原発性腫瘍の外科的切除である。
【０００４】
皮膚の黒色腫は、毎年世界中で１６００００件の新規症例があり、白人での頻度がより高い。日のよく当たる気候に住む白人集団で特に一般的である。ＷＨＯの報告によれば、悪性黒色腫に起因する約４８０００件の死亡が一年に記録されている。
【０００５】
初期は、無害なあざ（mole）と同一に見えるか、又は全く色がない可能性があるため、黒色腫の診断には経験が必要となる。色又は形状が異常なあざは、悪性黒色腫又は前癌病変が疑われる。
【０００６】
現行の治療としては、補助治療；化学療法及び／又は免疫療法、及び／又は放射線療法を伴う、腫瘍の外科的切除が挙げられる。
【０００７】
概して、個体が黒色腫を発症するリスクは、２つの群の因子：内因子及び環境因子によって決まる。「内」因子は、概して個体の家族歴及び継承された遺伝子型である一方、最も関連のある環境因子は日光曝露である。
【０００８】
疫学調査から、紫外線（ＵＶＡ及びＵＶＢ）への曝露が、黒色腫発症の主要な誘因の１つであることが示唆される。紫外線は細胞のＤＮＡに損傷を引き起こし、これが修復されない場合には、細胞の遺伝子内に変異が生み出されるおそれがある。細胞が分裂する際、これらの変異は、新世代の細胞に伝播される。変異が腫瘍遺伝子又は腫瘍抑制遺伝子で起こる場合は、変異を有する細胞における有糸分裂の速度が制御できなくなり、腫瘍の形成につながるおそれがある。時折の極端な日光曝露（「日焼け」を生じる）は、必然的に黒色腫に結びつく。他の因子は、腫瘍抑制遺伝子内の変異又は腫瘍抑制遺伝子の全損である。（深く浸透するＵＶＡ線を用いる）サンベッドの使用は、黒色腫を含む皮膚癌の発症に結びついている。
【０００９】
リスクを判断する際に考えられる重要な要素としては、日光曝露の強度及び継続期間、日光曝露が起こる年齢、並びに皮膚着色の程度が挙げられる。小児期の曝露は、成人期の曝露よりも重大なリスク因子である。このことはオーストラリアにおける移住者調査で観察され、オーストラリアに成人として移住する場合、人々は出生国のリスクプロファイルを保持する傾向がある。（とりわけ人生の最初の２０年に）水疱を形成するか又は皮膚が剥脱するほどに日焼けした個体は、黒色腫に関するリスクが有意に大きい。
【００１０】
金髪及び赤毛の人々、複数の異型母斑又は異形成母斑を有する者、及び巨大な先天性の色素細胞性母斑を有して産まれた者は、リスクが増大している。
【００１１】
ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＤＫ４、及び幾つかの他の遺伝子における変異が、黒色腫傾向の家系で見出されているため、黒色腫の家族歴は人間のリスクを大きく増大させる。或る黒色腫の病歴を有する患者は、別の原発性腫瘍を発症するリスクが増大している。
【００１２】
黒色腫の発症率は近年増加しているが、行動、環境、又は早期発見における変化がどの程度関与するかは明確ではない。
【００１３】
家族性黒色腫は遺伝的に異質であり、家族性黒色腫に関する遺伝子座が染色体腕１ｐ、９ｐ、及び１２ｑ上に同定されている。黒色腫の発病には、複数の遺伝的事象が関連している。多発性腫瘍抑制因子１（ＣＤＫＮ２Ａ／ＭＴＳ１）遺伝子は、ヒト染色体９のｐ２１領域に局在化している、サイクリン依存性タンパク質キナーゼ（ＣＤＫ）の低分子量タンパク質阻害剤ｐ１６ＩＮＫ４ａをコードしている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
当該技術分野において黒色腫を治療、予防、阻害、又は低減する治療方法が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明によれば、被験者において、黒色腫若しくはその転移を治療、予防、阻害、若しくは低減する治療方法、又は黒色腫細胞の増殖若しくはその転移を治療、予防、阻害、若しくは低減する治療方法であって、被験者において、黒色腫若しくはその転移を治療、予防、阻害、若しくは低減するか、又は被験者において、黒色腫細胞の増殖若しくはその転移を治療、予防、阻害、若しくは低減するために、被験者に、黒色腫治療に有効な量の式Ａ：
【００１６】
【化１】
【００１７】
（式中、ｎは１又は２であり、Ｒは水素、アシル、アルキル、又はペプチド断片であり、且つＸは芳香族若しくは複素環アミノ酸又はそれらの誘導体である）
の免疫調節剤化合物を投与することを含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
一実施形態によれば、本発明は、哺乳類の被験者、好ましくはヒト患者に、免疫調節剤化合物を投与することによって、黒色腫を治療、予防、阻害、又は低減する治療方法に関する。
【００１９】
一実施形態において、疾患は黒色腫又はその転移である。本発明を利用して、被験者において、黒色腫細胞の増殖又はその転移を治療、予防、阻害、又は低減することができる。好ましくは、原発性黒色腫は、本発明の化合物による治療前、治療中又は治療後に、外科手術によって切除される。
【００２０】
本発明による免疫調節剤化合物は、式Ａ：
【００２１】
【化２】
【００２２】
の免疫調節剤を含む。
【００２３】
式Ａ中、ｎは１又は２であり、Ｒは水素、アシル、アルキル、又はペプチド断片であり、且つＸは芳香族若しくは複素環アミノ酸又はそれらの誘導体である。好ましくは、Ｘは、Ｌ−トリプトファン又はＤ−トリプトファン、最も好ましくはＬ−トリプトファンである。
【００２４】
「Ｘ」で表される芳香族又は複素環アミノ酸の適切な誘導体は、アミド、モノ又はジ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル置換アミド、アリールアミド、及び（Ｃ1〜Ｃ6）アルキル又はアリールエステルである。「Ｒ」で表される適切なアシル又はアルキル部分は、炭素数１〜約６の分枝又は非分枝アルキル基、炭素数２〜約１０のアシル基、並びにカルボベンジルオキシ及びｔ−ブチルオキシカルボニル等の保護基である。好ましくは、式Ａに示すＣＨ基の炭素は、ｎが２の場合、Ｘの立体配置とは異なる立体配置を有する。
【００２５】
好ましい実施形態は、γ−Ｄ−グルタミル−Ｌ−トリプトファン、γ−Ｌ−グルタミル−Ｌ−トリプトファン、γ−Ｌ−グルタミル−Ｎin−ホルミル−Ｌ−トリプトファン、Ｎ−メチル−γ−Ｌ−グルタミル−Ｌ−トリプトファン、Ｎ−アセチル−γ−Ｌ−グルタミル−Ｌ−トリプトファン、γ−Ｌ−グルタミル−Ｄ−トリプトファン、β−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−トリプトファン、及びβ−Ｄ−アスパルチル−Ｌ−トリプトファン等の化合物を利用する。特に好ましい実施形態は、ＳＣＶ−０７と称されることもある、γ−Ｄ−グルタミル−Ｌ−トリプトファンを利用する。米国特許第５，９１６，８７８号明細書（参照して本明細書中の一部とする）には、これらの化合物、これらの化合物の調製方法、これらの化合物の医薬的に許容可能な塩、及びそれらの医薬製剤が開示されている。
【００２６】
ＳＣＶ−０７（γ−Ｄ−グルタミル−Ｌ−トリプトファン）は、γ−グルタミル又はβ−アスパルチル部分を保有する一群の免疫調節薬の一成員であり、ロシア人科学者によって発見され、米国ではSciClone Pharmaceuticals, Incによって幾つかの適応症での効能が調べられている。ＳＣＶ−０７は、ｉｎ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｔｒｏで多くの免疫調節活性を保有する。ＳＣＶ−０７は、Ｃｏｎ−Ａ誘発性の胸腺細胞及びリンパ球の増殖を増大し、脾臓リンパ球によるＣｏｎ−Ａ誘発性のインターロイキン−２（ＩＬ−２）産生及びＩＬ−２受容体発現を増大し、骨髄細胞上のＴｈｙ−１．２発現を刺激する。ｉｎ ｖｉｖｏで、ＳＣＶ−０７は、５−ＦＵで免疫抑制した動物に対して、また、ヒツジ赤血球による免疫モデルにおいて強い免疫賦活効果を有する。
【００２７】
式Ａの化合物は、任意の有効投与量、例えば、約０．００１ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲、好ましくは約０．１ｍｇ〜１００ｍｇ、最も好ましくは約１０ｍｇの投与量で投与され得る。投与量は、１週間に１回以上、例えば毎日投与してもよく、投与量は、１日に１回以上投与してもよい。経口、経鼻、経皮、舌下、注射、断続注入、連続注入等を含む任意の好適な方法で投与することができる。投与量は、筋肉内注射で投与してもよいが、他の注射及び注入形態を利用してもよく、経口吸入若しくは経鼻吸入又は経口摂取等、他の投与形態を用いてもよい。エアロゾル、溶液、懸濁液、分散液、錠剤、カプセル、シロップ等が利用され得る。
【００２８】
投与量は、１キログラム当たりのミリグラムで測定することも可能であり、投与量は、約０．００００１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲、より好ましくは約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。
【００２９】
ＳＣＶ−０７と実質的に同様の生物活性を保有する、置換部、欠失部、伸長部、代替部、又はそうでなければ修飾部を有する生物活性アナログとしては、例えば、ＳＣＶ−０７と実質的に同一の様式、実質的に同一の活性で機能するような、ＳＶＣ−０７との十分な相同性を有するＳＣＶ−０７由来のペプチドが挙げられる。
【００３０】
一実施形態によれば、式Ａの化合物は、治療又は予防期間中、有効量の式Ａの化合物が実質的に継続して被験者の循環系に維持されるように、被験者に投与され得る。本発明によれば、はるかに長い治療期間が考えられるが、本発明の実施形態は、少なくとも約６時間、１０時間、１２時間以上の治療期間中、有効量の式Ａの化合物を実質的に継続して患者の循環系に維持することを含む。他の実施形態において、治療期間は、少なくとも約１日間、さらには複数日間、例えば１週間以上である。しかしながら、上記で規定したような、有効量の式Ａの化合物が、実質的に継続して被験者の循環系に維持される治療は、同様又は異なる継続期間の非治療期間で分離され得ることが考えられる。
【００３１】
一実施形態によれば、式Ａの化合物は、治療期間中、有効量の式Ａの化合物が実質的に継続して被験者の循環系に維持されるように、例えば、静脈内注入によって被験者に継続して注入される。注入は、ミニポンプ等の任意の好適な手段によって実行され得る。代替的には、式Ａの化合物の注射レジメンを、実質的に継続して有効量の式Ａの化合物を被験者の循環系に維持するように維持することができる。好適な注射レジメンとしては、治療期間中、有効量の免疫調節剤化合物ペプチドが実質的に継続して被験者の循環系に維持されるような、例えば、１時間、２時間、４時間、６時間毎の注射が挙げられ得る。
【００３２】
式Ａの化合物の連続注入中、投与は、実質的に長めの継続期間になると考えられるが、一実施形態によれば、式Ａの化合物の連続注入は、少なくとも約１時間の治療期間である。より好ましくは、連続注入は、少なくとも約６、８、１０、１２時間以上の期間等、長期間実行される。他の実施形態において、連続注入は、少なくとも約１日間、さらには、１週間以上等、複数日間である。
【００３３】
幾つかの実施形態において、式Ａの化合物は、注射用水、生理食塩水等、医薬的に許容可能な液体キャリア中に、約０．００１μｇ／ｍｌ〜１０００μｇ／ｍｌ、より好ましくは約０．１μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの範囲内の濃度で存在する。
【００３４】
有効量の式Ａの化合物は、日常的な用量−滴定実験によって求めることができる。
【００３５】
式Ａの化合物は、他の薬剤と一緒に投与することもできる。例えば、癌の治療では、かかる薬剤として、化学療法剤及び／又は放射線が挙げられる。
【実施例】
【００３６】
（実施例１）
序論
ＳＣＶ−０７（γ−Ｄ−グルタミル−Ｌ−トリプトファン）は、Ｔ細胞分化及び機能、ｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍増殖の制御に必要な生物過程を増大させることによって免疫調節活性を示している合成ジペプチドである。
【００３７】
この１０年間での著しい進歩の１つは、ＴＨ（ＣＤ４+ Ｔ細胞）１型（ＴＨ１）から２型（ＴＨ２）表現型への免疫応答の極性化が、癌に対する細胞免疫の減少に関与すること、並びにＴＨ１細胞及びＴＨ２細胞の増殖を調節することによって、サイトカインが腫瘍の発症において中心的役割を果たすことである。
【００３８】
ＳＣＶ−０７に関する先行研究により、この免疫調節化合物が、ＴＨ１様免疫応答へのＴヘルパー細胞の移行を刺激すること、並びに胸腺細胞及び脾臓細胞の両方によるＩＦＮ−γ産生と血清中のその循環レベルとがＳＣＶ−０７処置によって増大することが示される。
【００３９】
黒色腫は、様々なタイプの免疫療法が適用されている、免疫原性腫瘍の基本型である。本試験において、本発明者らは、マウスＢ１６黒色腫モデルを使用して、ＳＣＶ−０７のｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでの生物活性を調査した。
【００４０】
方法
１×１０6個のＢ１６黒色腫細胞を、Ｃ５７／ＢＩ６同種マウスの後肢に皮下注射することによって腫瘍を誘発した。マウスを１０匹から成る５つの群にランダム化し、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、又は０．１０ｍｇ／ｋｇ用量のＳＣＶ−０７（３日間連続して腹腔内に毎日投与される）で腫瘍移植後３日目から２週間処置した。対照群を、生理食塩水又はダカルバジン（ＤＴＩＣ）で処置した（５０ｍｇ／ｋｇ用量、腹腔内、３日間）。腫瘍増殖をキャリパによって３日毎に評価し、腫瘍重量を死亡時に測定した。
【００４１】
ｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞感度試験をＢ１６細胞株に関して実施した。サブコンフルエントな黒色腫細胞を回収し、完全培地中で懸濁し、２４ウェルプレートに播種した（最終容量２ｍｌ／ウェル中、１０5細胞）。３連のウェルで２４時間、４８時間又は７２時間の培養の間、０．１μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの範囲の段階的濃度のＳＣＶ−０７で細胞を処理した。細胞増殖及び生存度を、トリパンブルー色素排除法により、血球計を用いて細胞を手動で計数することによって求めた。
【００４２】
アポトーシスを、ＤＮＡフローサイトメトリー分析によって評価した。各濃度のＳＣＶ−０７で、接着細胞をトリプシン処理でプレートから剥離し、浮遊細胞を集め、５０％アセトン：メタノール（１：４、ＰＢＳ中）で固定した。細胞を、５０μｇ／ｍｌのヨウ化プロピジウム（ＰＩ）及び１００ＫＵ／ｍｌのＲＮａｓｅを含有するＰＢＳ中で懸濁し（１×１０6／ｍｌ）、暗所、室温で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳｃａｎフローサイトメータ（Becton & Dickinson、カリフォルニア州サンノゼ）を使用してリニアスケールで測定されるＰＩ蛍光によって、一細胞当たりのＤＮＡ含量を評価した。アポトーシス細胞は、正常二倍体細胞のＧ０／Ｇ１集団の下で、赤色蛍光チャネルにおいて染色の消失を示し、アポトーシス事象に伴うＤＮＡ断片化に起因する幅広い低二倍体ピークで表される。これは、二倍体ＤＮＡ含量を有する細胞の狭いピークとは容易に区別可能である。したがって、前Ｇ１ピークを統合することによって、アポトーシス細胞の画分を算出した。
【００４３】
結果
ｉｎ ｖｉｖｏ
マウスにＢ１６黒色腫細胞を注射し、それぞれ１０匹のマウスから成る５つの群に分けた。対照マウスに、生理食塩水又はダカルバジン（ＤＴＩＣ）を注射した。異なる用量のＳＣＶ−０７の効果を、腫瘍増殖率及び生存時間に関して調べた。
【００４４】
結果から、表Ａに示す通り、ＳＣＶ−０７が用量に依存した様式で腫瘍増殖を阻害したことが示される。２４日後、腫瘍増殖の阻害は、それぞれ対照に対して、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、及び０．１ｍｇ／ｋｇの処置で６％、２２．６％、及び４２．７％であった（ＤＴＩＣ処置は、１９．０％の阻害をもたらした）。
【００４５】
【表１】
【００４６】
平均腫瘍重量は、低用量では２０％、ＤＴＩＣでは１５％少なかったのに対し、最高用量のＳＣＶ−０７で処置した動物では３５％少なかった。
【００４７】
異なる処置群のマウスの生存時間を、腫瘍注射後最大３０日監視した。２６日後、最高用量のＳＣＶ−０７で処置した動物のうち２１％は、腫瘍を有するものの、好状態で生存していた。低用量又はＤＴＩＣで処置した群には、生存している動物は全くいなかった。
【００４８】
ｉｎ ｖｉｔｒｏ
ＳＣＶ−０７の抗増殖活性を、培養２４時間及び４８時間後に直接細胞を計数することによってＢ１６黒色腫増殖に関して評価した。代表的な実験の結果から、ＳＣＶ−０７がＢ１６の細胞増殖に対して用量依存性の阻害効果を誘発したことが示される。低濃度では、ＳＣＶの効果は、実質的に細胞増殖抑制性であった一方、高濃度（１００μｇ／ｍｌ）では、ＳＣＶ−０７は、生細胞数の劇的な減少を伴う毒性効果を示した。しかしながら、ヨウ化プロピジウムによるフローサイトメトリー分析からは、アポトーシス細胞死の割合に対するＳＣＶ−０７の有意な効果を何も立証することができなかった。
【００４９】
結論
結果から、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ両方での黒色腫細胞の増殖阻害が示され、ＳＣＶ−０７治療は、宿主の抗腫瘍応答を調節し、腫瘍細胞を直接死滅させる結果として、有望な治療戦略になり得ることが示される。
【００５０】
（実施例２）
マウスＢ１６黒色腫モデルにおけるＳＣＶ−０７の抗腫瘍効果
略語
ＤＴＩＣ ダカルバジン
Ｆ 雌
ｇ グラム
ＩＲ 阻害率
ｋｇ キログラム
Ｌ 長径
Ｍ 雄
ｍＬ ミリリットル
ＳＤ 標準偏差
Ｗ 短径
【００５１】
概要
マウスＢ１６黒色腫モデルにおけるＳＣＶ−０７の抗腫瘍効果を、本試験で評価した。全部で６０匹のＣ５７／ＢＬ６マウス（雄３０匹及び雌３０匹）の皮下に、マウスＢ１６黒色腫細胞を移植した後、１４日間連続して処置した。５つの群のＣ５７／ＢＬ６マウスにそれぞれ、０ｍｇ／ｋｇ／日（第１群：ビヒクル対照群）、０．０１ｍｇ／ｋｇ／日（第３群）、０．１ｍｇ／ｋｇ／日（第４群）、１．０ｍｇ／ｋｇ／日（第５群）、及び５．０ｍｇ／ｋｇ／日（第６群）の用量で、１４日間連続して（１日目〜１４日目）皮下注射によりＳＣＶ−０７を投与した。第２群（陽性対照群）には、１日目から１４日目までダカルバジン（ＤＴＩＣ）（５０ｍｇ／ｋｇ／日）を皮下投与した。１７日目、安楽死後に腫瘍重量を計量した。
【００５２】
試験中、いずれの用量群でも死亡は全く見出されなかった。体重の統計結果からは、ＳＣＶ−０７処置群とビヒクル対照群との間に有意差はなく、ＳＣＶ−０７には体重増加に対する効果がないことが示唆された。しかしながら、結果から、ＤＴＩＣ処置群では、体重増加の有意な阻害（Ｐ＜０．０１）が示された。これはおそらくＤＴＩＣの毒性の結果である。
【００５３】
３日目及び６日目は、全ての群の腫瘍サイズが測定不能であった。９日目のＳＣＶ−０７処置群の平均腫瘍サイズは、ビヒクル対照群と比較して統計的差異を示さなかった。１２日目は、第３群、第５群、及び第６群の平均腫瘍サイズが、第１群よりも有意に小さかった。１２日目の第４群の平均腫瘍サイズは第１群よりも小さかったが、結果からは統計的有意性が示されなかった。１５日目は、第３群、第４群、第５群、及び第６群の平均腫瘍サイズが第１群よりも小さかったが、第５群及び第６群の結果からしか統計的有意性が示されなかった。１５日目の第６群（最高用量レベル）のＳＣＶ−０７の腫瘍増殖阻害率は３０．２％であり、ビヒクル対照群と比較して腫瘍増殖の有意な（ｐ＝０．０１）阻害が示唆された。第５群（用量レベル１．０ｍｇ／ｋｇのＳＣＶ−０７）も、１５日目の処置終了時に有意な腫瘍増殖阻害（１６．５％）を示した。腫瘍増殖曲線からも、ビヒクル対照群と比較してＳＣＶ−０７処置動物における腫瘍増殖が遅いことが示された。陽性対照群の動物は、平均腫瘍サイズが有意に減少した。その腫瘍増殖の阻害率は、９日目、１２日目、１５日目にそれぞれ９６．９％、９８．８％、及び９５．１％であった。これにより、本試験で使用した腫瘍モデルが妥当であることが証明される。
【００５４】
１７日目は、全てのＳＣＶ−０７処置群の平均腫瘍重量がビヒクル対照群よりも少なかった。しかしながら、第３群、第５群、及び第６群の結果からしか統計的有意性が示されなかった。第６群の腫瘍増殖阻害率は、第１群と比較して３０．８％（ｐ＝０．０１５）であった。第３群及び第５群もそれぞれ、２７．５％及び２３．５％という有意な腫瘍増殖阻害を示した。陽性対照群の動物は、平均腫瘍重量が有意に減少した。その腫瘍重量の阻害率は、１７日目に８５．０％であった。
【００５５】
結論として、本試験で使用した腫瘍モデルは妥当である。ＳＣＶ−０７を、１日１回、１４日間連続して皮下経路を介して投与することは、マウスＢ１６黒色腫の腫瘍増殖に対して有効である。３つの被験物質処置群の腫瘍重量は、ビヒクル対照群の腫瘍重量と比較して有意に低下した。全てのＳＣＶ−０７処置群の平均動物体重は、ＳＣＶ−０７で処置した後、ビヒクル対照群の平均動物体重と有意には異ならず、被験物質に毒性がないことを裏付けた。しかしながら、陽性化学療法対照であるＤＴＩＣによる処置は、ビヒクル対照群と比較して腫瘍サイズ及び腫瘍重量を有意に減少するが、体重増加の有意な阻害ももたらした。本試験のデータから、ＳＣＶ−０７を、用量レベル０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、１．０ｍｇ／ｋｇ／日、５．０ｍｇ／ｋｇ／日で１４日間投与することにより、体重増加に対する毒性効果なしに、Ｂ１６黒色腫の腫瘍増殖が有意に低減したことが示唆される。
【００５６】
序論
本試験を、移植可能なマウスＢ１６黒色腫モデルの使用によって開始し、潜在的な抗腫瘍薬としてのＳＣＶ−０７の有効性を評価した。
【００５７】
目的
本試験の目的は、それぞれ用量レベル０ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、及び５．０ｍｇ／ｋｇで、１４日間連続して皮下投与した場合の、マウスＢ１６黒色腫モデルにおけるＳＣＶ−０７の潜在的な抗腫瘍効果を評価することである。
【００５８】
材料及び方法
被験物質及び対照物質
被験物質製剤
被験物質ＳＣＶ−０７をスポンサーから入手し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ＮａＣｌ：１３７ｍＭ、ＫＣｌ：２．７ｍＭ；Ｋ2ＨＰＯ4：１．４ｍＭ；Ｎａ2ＨＰＯ4：１０．１ｍＭ、ｐＨ７．０）に溶解して、試験設計表に示すような、適切な用量レベルを達成した。製剤を氷上に保ち、光から保護し、１週間以内に使用した。この２週間の試験には、２つの新しい調製品が必要であった。
【００５９】
陽性対照物質
ダカルバジン（ＤＴＩＣ）を陽性対照物質として使用した。Sigma-Aldrich（コード番号：Ｄ２３５９）から購入し、１０ｍｇ／バイアルに分注した。使用前、１つのバイアルをＰＢＳ中に溶解して、試験設計表に示すような、適切な用量レベルを達成した。製剤を氷上に保ち、光から保護し、１週間以内に使用した。この２週間の試験には、２つの新しい調製品が必要であった。
【００６０】
試験系及び畜産
黒色腫細胞
マウスＢ１６黒色腫細胞は、中国医学科学院（Chinese Academy of Medical Sciences）（ＣＡＭＳ；中国北京）の細胞培養センター（Cell Culture Center）から入手した。
【００６１】
試験系
３０匹の雄及び３０匹の雌の健常未処置Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、ＣＡＭＳ（中国北京）の実験動物研究所（Institute of Laboratory Animal Science）から譲受した。これらの動物は、試験開始時、６週齢で、且つ１８ｇ〜２２ｇの重量であった。
【００６２】
畜産
上記動物を、オートクレーブした寝具材としての木材チップと一緒に、オートクレーブした狭い（shoe box）ケージ内に群で収容した。動物室の温度は２２℃〜２５℃に維持し、相対湿度は４０％〜６０％に維持した。試験関連の事象によって妨害される場合を除き、１２時間明／１２時間暗サイクルを維持した。動物に滅菌水及びScience Australia Unites Effortsの齧歯類食（Rodent Diet）を適宜(at libitum)与えた。全ての動物を、腫瘍接種前３日間、順化させた。
【００６３】
実験手順
腫瘍細胞調製
無菌の組織培養手順により、（ＣＡＭＳの細胞培養物センターによって供給された）Ｂ１６黒色腫細胞のうち１つのバイアルを解凍し、１０００ｒｐｍ、２０℃〜２５℃で５分間、遠心分離した。細胞ペレットを、標準生理食塩水（ＮＳ）０．１ｍＬ〜０．５ｍＬ中で懸濁し、各マウスの右腋窩に皮下注射した（およそ１×１０6細胞／マウス）。腫瘍直径がおよそ１ｃｍの場合（ノギスで測定された）、これらの動物をＣＯ2窒息で安楽死させ、腫瘍を切除した。先に説明した通り、腫瘍細胞を標準生理食塩水中で懸濁し、細胞適応サイクルを一回繰り返した。
【００６４】
腫瘍細胞接種
０日目、０．１ｍＬ容量の標準生理食塩水中の１×１０6個のＢ１６細胞を、マウスの右腋窩領域に皮下注射した。腫瘍接種日を０日目と定義した。
【００６５】
試験設計及び治療レジメン
１日目、平均体重が群間で統計的に有意とならないように、動物をその体重に基づいて異なる群にランダム化した。投薬は１日目に開始した。被験物質を、０．１ｍＬ／２０ｇ体重の用量（dose volume）で、１日１回、１４日間連続して皮下（ｓｃ）投与により投与した。ビヒクルも、同一用量で、１日１回、１４日間連続してｓｃ投与により投薬した。陽性対照であるＤＴＩＣを、同一用量で、毎日腹腔内投与により投与した。
【００６６】
以下の表に概略を示す通り、各療法群は、異なる処置レジメンを受けた。
【００６７】
【表２】
【００６８】
抗腫瘍効果の評価
観察期間中、腫瘍サイズ及び体重を、試験全体を通じて３日に１回測定した：キャリパで腫瘍サイズを、実験室天秤で体重を測定した。死亡（mortality）及び瀕死（moribundity）についての観察結果を毎日記録した。動物を、１７日目にＣＯ2窒息によって安楽死させた。腫瘍を切除、分離、秤量した。
【００６９】
腫瘍体積は、以下の式：
腫瘍体積＝長径×短径×短径／２
を使用して算出した。
【００７０】
腫瘍体積阻害率（ＩＲ）は、式：
ＩＲ（ＴＶ）＝（ＴＶビヒクル−ＴＶ薬物処置）／ＴＶビヒクル×１００％
に従って算出した。
【００７１】
ＴＶは、測定日の腫瘍体積である。
【００７２】
被験物質の抗腫瘍効果も、腫瘍重量によって評価した。各マウスの腫瘍重量を、安楽死後に記録し、腫瘍重量の阻害率は、式：
ＩＲ（ＴＷ）＝（腫瘍重量ビヒクル−腫瘍重量薬物処置）／腫瘍重量ビヒクル×１００％
に従って算出した。
【００７３】
平均及び標準偏差をＥｘｃｅｌを使用して算出し、スチューデントのｔ検定を統計的計算に使用した。
【００７４】
統計分析
各群（各用量のＳＣＶ−０７、ビヒクル対照、及びＤＴＩＣ対照）に対し、スチューデントのｔ検定を使用して、腫瘍体積、腫瘍重量、及び体重に関する群間比較を実施した。０．０５未満のＰ値を、統計的に有意であると見なした。
【００７５】
記録保管及び記録保管所
試験で生成した全てのデータを集め、記録した。
保管場所：中国協和医科大学（ＰＵＭＣ）＆ＣＡＭＳの基礎医学研究所（Institute of Basic Medical Sciences）。
【００７６】
結果及び考察
死亡
試験中、用量群のいずれにおいても死は全く見出されなかった。
【００７７】
腫瘍サイズ
腫瘍サイズの統計結果を表に列記する。図１に、腫瘍増殖曲線を示す。
【００７８】
表２〜表６に示す通り、３日目及び６日目は、全ての群の腫瘍サイズが測定不能であった。９日目のＳＣＶ−０７処置群の平均腫瘍サイズは、ビヒクル対照群と比較して統計的有意性を示さなかった。１２日目は、第３群、第５群、及び第６群の平均腫瘍サイズが第１群よりも有意に小さかった。１２日目の第４群の平均腫瘍サイズは第１群よりも小さかったが、結果からは統計的有意性が示されなかった。１５日目は、第３群、第４群、第５群、及び第６群の平均腫瘍サイズが第１群よりも小さかったが、第５群及び第６群の結果からしか統計的有意性が示されなかった。１５日目の第６群（最高用量レベル）のＳＣＶ−０７の腫瘍増殖阻害率は３０．２％であり、ビヒクル対照群と比較して腫瘍増殖の有意な阻害（ｐ＝０．０１）が示唆された。第５群（用量レベル１．０ｍｇ／ｋｇのＳＣＶ−０７）も、１５日目の処置終了時に有意な腫瘍増殖阻害（１６．５％）を示した。腫瘍増殖曲線からも、ビヒクル対照群と比較してＳＣＶ−０７処置動物における腫瘍増殖が遅いことが示された。陽性対照群の動物は、平均腫瘍サイズが有意に減少した。その腫瘍増殖の阻害率は、９日目、１２日目、１５日目にそれぞれ９６．９％、９８．８％、及び９５．１％であった。これにより、本試験で使用した腫瘍モデルが妥当であることが証明される。
【００７９】
図１は、ビヒクル対照群と比較した、ＳＣＶ−０７処置群における試験の経時での腫瘍サイズの成長低下を示す。
【００８０】
体重
表８〜表１４に、体重の統計結果を列記した。表に示す通り、ＳＣＶ−０７処置群とビヒクル対照群との間に有意差はない。しかしながら、結果から、ＤＴＩＣ処置群では、体重の有意な減少（Ｐ＜０．０１）が示された。これはおそらくＤＴＩＣの毒性の結果である。
【００８１】
腫瘍重量
表７に示す通り、１７日目は、全てのＳＣＶ−０７処置群の平均腫瘍重量がビヒクル対照群よりも少なかった。しかしながら、第３群、第５群、及び第６群の結果からしか統計的有意性が示されなかった。第６群の腫瘍増殖阻害率は、第１群と比較して３０．８％（ｐ＝０．０１５）であった。第３群及び第５群もそれぞれ、２７．５％及び２３．５％という有意な腫瘍増殖阻害を示した。陽性対照群の動物は、８５．０％と、平均腫瘍重量が有意に減少した。
【００８２】
図２は、試験終了時（１７日目）の腫瘍重量の減少を示す。
【００８３】
結論
結論として、本試験で使用した腫瘍モデルは妥当である。ＳＣＶ−０７を、１日１回、１４日間連続して皮下経路を介して投与することは、マウスＢ１６黒色腫の腫瘍増殖に対して有効である。３つの被験物質処置群の腫瘍重量は、ビヒクル対照群の腫瘍重量と比較して有意に低下した。全てのＳＣＶ−０７処置群の平均動物体重は、ＳＣＶ−０７で処置した後、ビヒクル対照群の平均動物体重と有意には異ならず、被験物質に毒性がないことを裏付けた。しかしながら、陽性化学療法対照であるＤＴＩＣによる処置は、ビヒクル対照群と比較して腫瘍サイズ及び腫瘍重量を有意に減少させるが、体重増加の有意な阻害ももたらした。本試験のデータから、ＳＣＶ−０７を、用量レベル０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、１．０ｍｇ／ｋｇ／日、５．０ｍｇ／ｋｇ／日で１４日間投与することにより、体重増加に対する毒性効果なしに、Ｂ１６黒色腫の腫瘍増殖が有意に低減したことが示唆される。
【００８４】
【表３】
【００８５】
【表４】
【００８６】
【表５】
【００８７】
【表６】
【００８８】
【表７】
【００８９】
【表８】
【００９０】
【表９】
【００９１】
【表１０】
【００９２】
【表１１】
【００９３】
【表１２】
【００９４】
【表１３】
【００９５】
【表１４】
【００９６】
【表１５】
【００９７】
付録（Appendix）
【表１６】
【００９８】
【表１７】
【００９９】
【表１８】
【０１００】
【表１９】
【０１０１】
【表２０】
【０１０２】
【表２１】
【０１０３】
【表２２】
【０１０４】
【表２３】
【０１０５】
【表２４】
【０１０６】
【表２５】
【０１０７】
【表２６】
【０１０８】
【表２７】
【０１０９】
【表２８】
【０１１０】
【表２９】
【０１１１】
【表３０】
【０１１２】
【表３１】
【０１１３】
【表３２】
【０１１４】
【表３３】
【図面の簡単な説明】
【０１１５】
【図１】異なる投与量での一実施形態の一試験における腫瘍増殖を表すグラフである。
【図２】異なる投与量での一実施形態の上記試験における腫瘍重量を表すグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者において、黒色腫若しくはその転移、又は黒色腫細胞の増殖若しくはその転移を治療、予防、阻害、又は低減する治療方法であって、被験者において、黒色腫若しくはその転移を治療、予防、阻害、若しくは低減するか、又は被験者において、黒色腫細胞の増殖若しくはその転移を治療、予防、阻害、若しくは低減するために、該被験者に、有効量の式Ａ：
【化１】
（式中、ｎは１又は２であり、Ｒは水素、アシル、アルキル、又はペプチド断片であり、且つＸは芳香族若しくは複素環アミノ酸又はそれらの誘導体である）
の免疫調節剤化合物を投与することを含む、治療方法。
【請求項２】
ＸがＬ−トリプトファン又はＤ−トリプトファンである、請求項１に記載の治療方法。
【請求項３】
前記化合物がＳＣＶ−０７である、請求項１に記載の治療方法。
【請求項４】
前記化合物が、約０．００１ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲内の投与量で投与される、請求項１に記載の治療方法。
【請求項５】
前記化合物が、約０．０１ｍｇ〜１００ｍｇの範囲内の投与量で投与される、請求項１に記載の治療方法。
【請求項６】
前記化合物が、約０．００００１ｍｇ／ｋｇ被験者体重〜１００ｍｇ／ｋｇ被験者体重の範囲内の投与量で投与される、請求項１に記載の治療方法。
【請求項７】
前記化合物が、約０．０１ｍｇ／ｋｇ被験者体重〜１０ｍｇ／ｋｇ被験者体重の範囲内の投与量で投与される、請求項１に記載の治療方法。
【請求項８】
前記化合物がＳＣＶ−０７であり、且つ約０．００１ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲内の投与量で投与される、請求項１に記載の治療方法。
【請求項９】
前記化合物がＳＣＶ−０７であり、且つ約０．００００１ｍｇ／ｋｇ被験者体重〜１００ｍｇ／ｋｇ被験者体重の範囲内の投与量で投与される、請求項１に記載の治療方法。
【請求項１０】
前記治療が原発性黒色腫に対するものである、請求項３に記載の治療方法。
【請求項１１】
前記化合物が、約０．００１ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲内の投与量で投与される、請求項１０に記載の治療方法。
【請求項１２】
前記化合物が、約０．１ｍｇ〜１００ｍｇの範囲内の投与量で投与される、請求項１０に記載の治療方法。
【請求項１３】
前記化合物が、約０．００００１ｍｇ／ｋｇ被験者体重〜１００ｍｇ／ｋｇ被験者体重の範囲内の投与量で投与される、請求項１０に記載の治療方法。
【請求項１４】
前記化合物が、約０．０１ｍｇ／ｋｇ被験者体重〜１０ｍｇ／ｋｇ被験者体重の範囲内の投与量で投与される、請求項１０に記載の治療方法。
【請求項１５】
前記治療が黒色腫転移に対するものである、請求項３に記載の治療方法。
【請求項１６】
前記化合物が、約０．００１ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲内の投与量で投与される、請求項１５に記載の治療方法。
【請求項１７】
前記化合物が、約０．１ｍｇ〜１００ｍｇの範囲内の投与量で投与される、請求項１５に記載の治療方法。
【請求項１８】
前記化合物が、約０．００００１ｍｇ／ｋｇ被験者体重〜１００ｍｇ／ｋｇ被験者体重の範囲内の投与量で投与される、請求項１５に記載の治療方法。
【請求項１９】
前記化合物が、約０．０１ｍｇ／ｋｇ被験者体重〜１０ｍｇ／ｋｇ被験者体重の範囲内の投与量で投与される、請求項１５に記載の治療方法。
【請求項２０】
前記投与量が約１０ｍｇである、請求項１２に記載の治療方法。
【請求項２１】
前記投与量が約１０ｍｇである、請求項１７に記載の治療方法。
【請求項１】
被験者において、黒色腫若しくはその転移、又は黒色腫細胞の増殖若しくはその転移を治療、予防、阻害、又は低減する治療方法であって、被験者において、黒色腫若しくはその転移を治療、予防、阻害、若しくは低減するか、又は被験者において、黒色腫細胞の増殖若しくはその転移を治療、予防、阻害、若しくは低減するために、該被験者に、有効量の式Ａ：
【化１】
（式中、ｎは１又は２であり、Ｒは水素、アシル、アルキル、又はペプチド断片であり、且つＸは芳香族若しくは複素環アミノ酸又はそれらの誘導体である）
の免疫調節剤化合物を投与することを含む、治療方法。
【請求項２】
ＸがＬ−トリプトファン又はＤ−トリプトファンである、請求項１に記載の治療方法。
【請求項３】
前記化合物がＳＣＶ−０７である、請求項１に記載の治療方法。
【請求項４】
前記化合物が、約０．００１ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲内の投与量で投与される、請求項１に記載の治療方法。
【請求項５】
前記化合物が、約０．０１ｍｇ〜１００ｍｇの範囲内の投与量で投与される、請求項１に記載の治療方法。
【請求項６】
前記化合物が、約０．００００１ｍｇ／ｋｇ被験者体重〜１００ｍｇ／ｋｇ被験者体重の範囲内の投与量で投与される、請求項１に記載の治療方法。
【請求項７】
前記化合物が、約０．０１ｍｇ／ｋｇ被験者体重〜１０ｍｇ／ｋｇ被験者体重の範囲内の投与量で投与される、請求項１に記載の治療方法。
【請求項８】
前記化合物がＳＣＶ−０７であり、且つ約０．００１ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲内の投与量で投与される、請求項１に記載の治療方法。
【請求項９】
前記化合物がＳＣＶ−０７であり、且つ約０．００００１ｍｇ／ｋｇ被験者体重〜１００ｍｇ／ｋｇ被験者体重の範囲内の投与量で投与される、請求項１に記載の治療方法。
【請求項１０】
前記治療が原発性黒色腫に対するものである、請求項３に記載の治療方法。
【請求項１１】
前記化合物が、約０．００１ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲内の投与量で投与される、請求項１０に記載の治療方法。
【請求項１２】
前記化合物が、約０．１ｍｇ〜１００ｍｇの範囲内の投与量で投与される、請求項１０に記載の治療方法。
【請求項１３】
前記化合物が、約０．００００１ｍｇ／ｋｇ被験者体重〜１００ｍｇ／ｋｇ被験者体重の範囲内の投与量で投与される、請求項１０に記載の治療方法。
【請求項１４】
前記化合物が、約０．０１ｍｇ／ｋｇ被験者体重〜１０ｍｇ／ｋｇ被験者体重の範囲内の投与量で投与される、請求項１０に記載の治療方法。
【請求項１５】
前記治療が黒色腫転移に対するものである、請求項３に記載の治療方法。
【請求項１６】
前記化合物が、約０．００１ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲内の投与量で投与される、請求項１５に記載の治療方法。
【請求項１７】
前記化合物が、約０．１ｍｇ〜１００ｍｇの範囲内の投与量で投与される、請求項１５に記載の治療方法。
【請求項１８】
前記化合物が、約０．００００１ｍｇ／ｋｇ被験者体重〜１００ｍｇ／ｋｇ被験者体重の範囲内の投与量で投与される、請求項１５に記載の治療方法。
【請求項１９】
前記化合物が、約０．０１ｍｇ／ｋｇ被験者体重〜１０ｍｇ／ｋｇ被験者体重の範囲内の投与量で投与される、請求項１５に記載の治療方法。
【請求項２０】
前記投与量が約１０ｍｇである、請求項１２に記載の治療方法。
【請求項２１】
前記投与量が約１０ｍｇである、請求項１７に記載の治療方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２００９−５３４３８３（Ｐ２００９−５３４３８３Ａ）
【公表日】平成２１年９月２４日（２００９．９．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５０６５１６（Ｐ２００９−５０６５１６）
【出願日】平成１９年４月１３日（２００７．４．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／００９０４９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１２３８４７
【国際公開日】平成１９年１１月１日（２００７．１１．１）
【出願人】（５９３１９９５６３）サイクローン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド (17)
【氏名又は名称原語表記】ＳｃｉＣｌｏｎｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．
【住所又は居所原語表記】９５０ Ｔｏｗｅｒ Ｌａｎｅ， Ｓｕｉｔｅ ９００， Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ， Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ９４４０４， Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年９月２４日（２００９．９．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年４月１３日（２００７．４．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／００９０４９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１２３８４７
【国際公開日】平成１９年１１月１日（２００７．１１．１）
【出願人】（５９３１９９５６３）サイクローン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド (17)
【氏名又は名称原語表記】ＳｃｉＣｌｏｎｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．
【住所又は居所原語表記】９５０ Ｔｏｗｅｒ Ｌａｎｅ， Ｓｕｉｔｅ ９００， Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ， Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ９４４０４， Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ
【Ｆターム（参考）】
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