（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンの製造方法
【課題】
簡便、かつ安価な方法で、環境的にも負荷をかけることなく、高収率、高光学純度で、香料として有用な（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンの製造方法を提供する。
【解決手段】
（Ｅ）−２−アルキリデンシクロペンタノンをブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物の菌体またはその処理物と接触処理することを特徴とする（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンの製造方法。
簡便、かつ安価な方法で、環境的にも負荷をかけることなく、高収率、高光学純度で、香料として有用な（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンの製造方法を提供する。
【解決手段】
（Ｅ）−２−アルキリデンシクロペンタノンをブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物の菌体またはその処理物と接触処理することを特徴とする（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は食品用あるいは香粧品用の調合香料の素材として有用な（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンを製造するための技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
２−アルキルシクロペンタノンは香料化合物として知られている。特に２−ペンチルシクロペンタノンはジャスミン的フルーティー、フローラル香を有し、２−ヘプチルシクロペンタノンはジャスミン様でグリーン、フルーティー、フローラル、ハーバル香を有するフレグランス香料として重要な化合物である（非特許文献１）。これらの化合物は不斉炭素を有するため、両鏡像体が存在する。２−ペンチルシクロペンタノンおよび２−ヘプチルシクロペンタノンにおける光学異性体間では（Ｒ）−体の嗜好性が高いことが報告されている（非特許文献２）。したがって、香料を調合する場合、ラセミ体を用いた時に比べて、（Ｒ）−体を用いた方が、嗜好性の向上、天然感の付与など、香料品質が向上することは明らかである。
従来、光学活性なアルキルシクロペンタノンを合成する技術として、不斉触媒を用いた水素化により、光学活性２−ペンチルシクロペンタノンを得る方法（非特許文献２）が知られている。
【０００３】
【非特許文献１】合成香料―化学と商品知識（初版第１刷），（１９９６．３．６）印藤元一著 化学工業日報社，p．３５３〜３５６
【非特許文献２】第３７回ＴＥＡＣ要旨集（１９９３）依頼講演―１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、不斉触媒を使用する方法は、高価な触媒を用いて高圧下で反応させる必要があり、コスト的及び環境的な問題点があった。
したがって、本発明の目的は簡便、かつ安価な方法で、環境的にも負荷をかけることなく、高収率、高光学純度で製造することができる、香料として有用な（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンの製造方法を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは上記のごとき課題を解決すべく、鋭意研究を行った結果、今回、２−アルキリデンシクロペンタノンを基質として、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物を作用させることにより、基質中の二重結合を立体選択的に還元し、光学活性な（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンが得られることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち本発明は、下記式（２）
【０００６】
【化１】
【０００７】
（式中、Ｒ１は炭素数２〜９の直鎖または分岐のアルキル基を示す）
で表される、２−アルキリデンシクロペンタノンをブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物の菌体またはその処理物と接触処理することを特徴とする下記式（１）
【０００８】
【化２】
【０００９】
（式中、Ｒ１は炭素数２〜９の直鎖または分岐のアルキル基を示す）
で表される（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンの製造方法を提供するものである。
また、本発明は、２−アルキリデンシクロペンタノンが２−ペンチリデンシクロペンタノンであり、生成物が（Ｒ）−２−ペンチルシクロペンタノンである前記の（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンの製造方法を提供するものである。
さらに、本発明では、２−アルキリデンシクロペンタノンが２−ヘプチリデンシクロペンタノンであり、生成物が（Ｒ）−２−ヘプチルシクロペンタノンであることを特徴とする前記の（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンの製造方法を提供するものである。
さらにまた、本発明は、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物がブレビバクテリウム・ライネンス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｉｎｅｎｓ）またはブレビバクテリウム・カゼイ（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｓｅｉ）であることを特徴とする前記の（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンの製造方法を提供するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、香料化合物として有用な光学活性な（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンを、簡便、かつ安価な方法で、環境的にも負荷をかけることなく、高収率、高光学純度で製造することができる。また、本発明により製造された（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンを調合香料に使用することにより、ラセミ体を使用した場合と比べ、より自然で、より特徴的な香調を有する香料組成物を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明の出発物質である前記式（２）の２−アルキリデンシクロペンタノンは、従来公知の方法（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２１（１），２１５（１９７３）やケミカル アブストラクツ ７９巻、７８１７０ｆなど）に記載の方法に従い、シクロペンタノンとアルデヒドをアルドール縮合させることにより製造することができる。本発明で使用することのできる式（２）の２−アルキリデンシクロペンタノンの具体例としては、２−プロピリデンシクロペンタノン、２−ブチリデンシクロペンタノン、２−ペンチリデンシクロペンタノン、２−ヘキシリデンシクロペンタノン、２−へプチリデンシクロペンタノン、２−オクチリデンシクロペンタノン、２−ノニリデンシクロペンタノン、２−イソブチリデンシクロペンタノンなどを挙げることができる。これらのうち、２−ペンチリデンシクロペンタノンおよび２−へプチリデンシクロペンタノンを特に好ましく例示することができる。なお、出発原料であるシクロペンタノンとアルキルアルデヒドは市販で容易に入手することができる。
アルドール縮合の一態様を示せば、例えば、次の通りである。
【００１２】
【化３】
【００１３】
（式中、Ｒ１は炭素数２〜９の直鎖または分岐のアルキル基を示す）
まず、反応槽にシクロペンタノン、溶媒を仕込み、攪拌しながら、さらに、モルホリンおよび触媒を仕込み、溶媒の沸点温度で１〜２４時間反応させる。一旦、加熱を止めた後、炭素数３〜１０のアルキルアルデヒドを滴下後、再び溶媒の沸点温度で１〜２４時間反応させる。使用する溶媒としてはトルエン、シクロヘキサンなどの水と共沸効果を有する溶媒を使用し、溶媒の沸点温度で還流下に反応を行う。これにより、反応により生成する水を反応系から除去しながら反応を行うことができる。使用するモルホリンの量はシクロペンタノン１モルに対し０．５〜２モル、好ましくは０．８〜１．２モルを用いることができ、アルキアルデヒドの量はシクロペンタノン1モルに対し約１モルを使用することが好ましい。また、触媒としては、パラトルエンスルホン酸（ＰＴＳＡ）などの有機酸や塩酸、硫酸などの鉱酸を用いることができる。次いで塩酸、硫酸などの鉱酸の水溶液で反応液を処理し、式（２）の２−アルキリデンペンタノンを得ることができる。反応終了後、洗浄、抽出、乾燥、蒸留、カラムクロマトグラフィーなどの通常の分離手段を適宜に採用して式（２）の２−アルキリデンシクロペンタノンを精製する。
【００１４】
また、本発明で用いる式（２）の２−アルキリデンシクロペンタノンはトランス体を使用することが好ましい。アルドール縮合により得られた２−アルキリデンシクロペンタノンは一般にシス体、トランス体の異性体混合物として得られるため、これらの異性体を分別蒸留またはカラムクロマトグラフィーなどの手段によりトランス体を分離して用いることができる。
【００１５】
本発明では前記式（２）の２−アルキリデンシクロペンタノンをブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物の菌体またはその処理物と接触処理することにより、二重結合を還元し、（Ｒ）体の２−アルキルシクロペンタノンを選択的に生成せしめることができる。
【００１６】
本発明において用いることのできる微生物はブレビバクテリウム属に属する微生物であれば、いかなる種のものも使用することができ、また、野生株、変異株、又は細胞融合もしくは遺伝子組み替え法などの遺伝子手法により誘導される遺伝子組み換え株などのいずれの株も用いる事ができ、例えばブレビバクテリウム・アンチクアム（Ｂ．ａｎｔｉｑｕｕｍ）、ブレビバクテリウム・オーランチアカム（Ｂ．ａｕｒａｎｔｉａｃｕｍ）、ブレビバクテリウム・オーレウム（Ｂ．ａｕｒｅｕｍ）、ブレビバクテリウム・カゼイ（Ｂ．ｃａｓｅｉ）、ブレビバクテリウム・セレレ（Ｂ．ｃｅｌｅｒｅ）、ブレビバクテリウム・エピデルミディス（Ｂ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、ブレビバクテリウム・フィゴーチオレランス（Ｂ．ｆｉｇｏｒｔｉｏｌｅｒａｎｓ）、ブレビバクテリウム・フラバム（Ｂ．ｆｌａｖｕｍ）、ブレビバクテリウム・フスカム（Ｂ．ｆｕｓｃｕｍ）、ブレビバクテリウム・ハロトレランス（Ｂ．ｈａｌｏｔｏｒｅｒａｎｓ）、ブレビバクテリウム・ヘルボリュウム（Ｂ． ｈｅｒｂｏｒｅｕｍ）、ブレビバクテリウム・イオディナム（Ｂ．ｉｏｄｉｎｕｍ）、ブレビバクテリウム・ライネンス（Ｂ．ｌｉｎｅｎｓ）、ブレビバクテリウム・ケトグルタミカム（Ｂ．ｋｅｔｏｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）、ブレビバクテリウム・ルテオラム（Ｂ．ｌｕｔｅｏｌｕｍ）、ブレビバクテリウム・クブレルネリ（Ｂ．ｍｃｂｒｅｌｌｎｅｒｉ）、ブレビバクテリウム・サルファリュウム（Ｂ．ｓｕｌｆｕｒｅｕｍ）などを挙げることができるが、これらのうちブレビバクテリウム・ライネンスまたはブレビバクテリウム・カゼイを特に好ましく挙げることができる。
【００１７】
反応方法としては、菌体を分離し、菌体と基質を接触させる方法、菌体より粗酵素を抽出し、粗酵素を基質に作用させて反応を行う方法、液体培地に基質を添加し、菌を培養することにより基質を変換する方法などを採用することができるが、培地に基質を添加し、菌を培養することにより基質を変換する方法を好ましく例示することができる。
【００１８】
本発明に用いる培地は、菌が増殖し得る培地であれば特に制限はなく、炭素源として例えばショ糖、ブドウ、果糖などの糖類、エタノール、グリセロールなどのアルコール類、クエン酸、リンゴ酸、酢酸、プロピオン酸などの有機酸類、パラフィンなどの炭化水素類、その他の炭素源、又はこれらの混合物、窒素源として、ペプトン、硫酸アンモニウム、酵母エキス、尿素などの無機有機含窒素化合物、他に無機塩、微量金属塩、ビタミン類など、通常の培養に用いられる栄養源を適宜混合して用いることができる。
【００１９】
また、本発明の２−アルキリデンシクロペンタノンから（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンの製造を、（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンを溶解しうる、水に難溶性の溶媒の存在下に実施することにより、効率良く（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンを製造することが可能となる。かかる溶媒としては、例えば、大豆油、オリーブ油、米ぬか油、ＯＤＯ、ピーナッツ油、胡麻油、サフラワー油、あまに油、くるみ油、ひまわり油、なたね油、つばき油などのごとき植物性油脂類；いわし油、にしん油、さば油、たら肝油、いか肝油などのごとき動物性油脂類；脂肪酸モノグリセリド、脂肪酸ジグリセリド、脂肪酸トリグリセリド、脂肪酸、リン脂質、流動パラフィン、ヘキサン、トルエンなどを挙げることができる。水に難溶性の溶媒の添加量は該溶媒の種類、培養条件等により異なり一概に規定することはできないが、一般には２−アルキリデンシクロペンタノン１重量部に対して約０．５重量部〜約１０重量部の範囲内を例示することができる。また、必要に応じて微生物の増殖を促進する因子或いは培地のｐＨ保持の為の化合物などを添加することもできる。
好ましい培地の組成としては、窒素源を約０．６〜１５％、炭素源を約１〜３０％、無機塩を約０．１〜５％程度含む培地を例示することができる。
【００２０】
また、反応基質である２−アルキリデンシクロペンタノンは培地中にあらかじめ添加しておいてもよく、培養開始後に添加しても良い。
培養の、具体的態様を示すと以下の通りである。炭素源などの栄養源混合物に反応基質として２−アルキリデンシクロペンタノンを約０．１〜１０％を加えた培地に、ブレビバクテリウム属に属する微生物を１ｍｌ当たり１×１０５個〜１×１０１０個程度植菌し、培養を行う。反応の進行は、ガスクロマトグラフィーや薄層クロマトグラフィーなどで確認を行い、反応が最も進行した時点を終点とすることが好ましいが、例えば、約２０〜３５℃にて、１２時間〜１４日間程度培養することを例示することができる。
反応後は、菌体を分離し、分離液の油層を採取し蒸留する方法、培養液そのものを有機溶媒抽出する方法、培養液を水蒸気蒸留する方法などにより、（Ｒ）体の２−アルキルシクロペンタノンを得ることができる。
【００２１】
かくして得られた式（１）の（Ｒ）体の２−アルキルシクロペンタノンは、香料組成物に香料組成物全体量の０．１〜２０重量％、好ましくは０．５〜２重量％の範囲内で添加することにより天然感あふれる香りを付与することができる。
【００２２】
また、本発明によれば、式（１）の化合物を有効成分として含有する香料組成物を利用して、式（１）の化合物を香気香味成分として含有する飲食品類、香粧品類、保健・衛生・医薬品類などを提供することができる。
【００２３】
例えば、炭酸飲料、果汁飲料、果実酒飲料類、乳飲料などの飲料類；アイスクリーム類、シャーベット類、アイスキャンディー類などの冷菓類；和・洋菓子、チューインガム類、パン類、コーヒー、紅茶、お茶、タバコなどの嗜好品類；和風スープ類、洋風スープ類などのスープ類；ハム、ソーセージなどの畜肉加工品；風味調味料、各種インスタント飲料乃至食品類、各種のスナック類などに、式（１）の化合物を有効成分として含有する香料組成物の適当量を添加することにより、そのユニークな香気香味が賦与された飲食品類を提供することができる。また、例えば、シャンプー類、ヘアクリーム類、その他の毛髪化粧料基剤；オシロイ、口紅、その他の化粧用基剤や化粧用洗剤類基剤などに、式（１）の化合物を有効成分として含有する香料組成物の適当量を添加することにより、そのユニークな香気が賦与された化粧品類を提供することができる。さらにまた、式（１）の化合物を有効成分として含有する香料組成物の適当量が配合を洗濯用洗剤類、消毒用洗剤類、防臭洗剤類、その他各種の保健・衛生用洗剤類；歯磨き、ティシュー、トイレットペーパーなどに配合することにより、そのユニークな香気が賦与された各種保健・衛生材料類；医薬品類などを提供することができる。
以下、本発明を実施例により本発明を更に具体的に説明する。
【実施例】
【００２４】
参考例１
（Ｅ）−２−ペンチリデンシクロペンタノンの合成
下記反応式にしたがって（Ｅ）−２−ペンチリデンシクロペンタノンを製造した。
【００２５】
【化４】
【００２６】
フラスコにシクロペンタノン２５２ｇ（３．０モル）、およびトルエン１，２００ｍｌを仕込み、撹拌を行った。この中にモルホリン３１４ｇ(３．６モル)、パラトルエンスルホン酸１２ｇを加え加熱還流下、留出してくる水を除去しながら５時間撹拌を行った。加熱をやめ、反応液中にペンタナール２５８ｇ（３．０モル）を滴下した。滴下後再び加熱還流下、留出してくる水を除去しながら３時間撹拌を行った。反応後室温まで冷却し２０％硫酸水溶液１，５００ｍｌを加え室温下、１時間撹拌した。反応終了後、分液し、有機層を飽和食塩水、飽和炭酸ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。減圧下に溶媒を回収し得られた残渣を減圧蒸留により精製し８５〜８６℃ / ０．４ｋＰａの沸点の留分として２７１ｇを得た。
得られた留分を精密蒸留し８１−８２℃/ ０．４ｋＰａの沸点の留分を１１５ｇ得た。
（トランス：シス＝９９：１）収率２５％。
【００２７】
実施例１
下記反応式に従って（Ｒ）−２−ペンチルシクロペンタノンを製造した。
【００２８】
【化５】
【００２９】
精製水１Ｌあたり、イーストペプトン３０．０ｇ、塩化ナトリウム１０．０ｇ、大豆油６０．０ｇおよび（Ｅ）−２−ペンチリデンシクロペンタノン７．２ｇを加え、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ６．８５に調整した。この培地１５Ｌを５０Ｌジャーファーメンターに仕込み、滅菌を行った後、ブレビバクテリウム・ライネンス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｉｎｅｓ ＪＣＭ １３２８）の液体シード（菌数１０８個／ｍｌを３００ｍｌ）を添加し、３０℃、５００ｒｐｍで４日間、通気撹拌培養を行った。４日後、転換率は９５％であった。培養物にヘプタン２Ｌを加え、静置後、分液した。有機層にセライトを加え、ろ過及び分液を行った。溶媒を回収し粗製を１０５５ｇ得た。これを減圧蒸留し、沸点５５−６０℃／２７Ｐａの留分７５．５ｇを得た。収率６９％、光学純度７３．６％ｅｅ。
光学純度はキラル液層を用いたガスクロマトグラフィー法により決定した。
（測定条件）
ガスクロ装置：６８９０Ｎ−Ａｕｔｏｓａｎｍｐｌｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
カラム；ＣＨＩＲＡＬＤＥＸＴＭ Ｇ−ＤＰ（アステック社製）（０．２５ｍｍ×３０ｍ）
温度；６０℃〜１８０℃まで（毎分１℃昇温）。
【００３０】
実施例２
下記反応式に従って（Ｒ）−２−ペンチルシクロペンタノンを製造した
【００３１】
【化６】
【００３２】
イーストペプトン３０．０ｇ、塩化ナトリウム１０．０ｇ、大豆油６０．０ｇを精製水１Ｌに溶かし、（Ｅ）−２−ペンチリデンシクロペンタノン７．０ｇを加え、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ６．８５に調整後、オートクレーブ滅菌を行った。上記培地１Ｌを２Ｌジャーファーメンターに仕込み、ブレビバクテリウム・カゼイ（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｓｅｉ ＪＣＭ ２５９４）の液体シード（菌数１０８個／ｍｌを１００ｍｌ）を添加し、３０℃、５００ｒｐｍで４日間、通気撹拌培養を行った。４日後、転換率は９８．５％であった。培養物にセライトを添加してよく撹拌した後、ろ過し、ろ液を酢酸エチル５０ｍｌにて抽出した。有機層分離した後、有機層をソーダ灰と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過後、溶媒を回収して粗製を得た。これを減圧蒸留し、沸点５５−６０℃／２７Ｐａの留分を３．６ｇ得た。収率５０％、光学純度７８．３％ｅｅ。
【００３３】
実施例３
イーストペプトン３０．０ｇ、塩化ナトリウム１０．０ｇ、大豆油６０．０ｇを精製水１Ｌに溶かし、（Ｅ）−２−ペンチリデンシクロペンタノン１０．０ｇを加え、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ６．８５に調整した。上記培地１００ｍｌを５００ｍＬ三角フラスコに仕込み、オートクレーブにて滅菌した後、表１に示した菌株の菌体を植え、３０℃、１００ｒｐｍにて４日間振盪培養を行った。それぞれの転換率および光学純度を表１に示す。
【００３４】
【表１】
【００３５】
表１に示したとおり、転換率と光学純度がともに高い菌株はブレビバクテリウム・ライネンス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｉｎｅｎｓ）およびブレビバクテリウム・カゼイ（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｓｅｉ）であることが明らかである。
【００３６】
参考例２
（Ｅ）−２−ヘプチリデンシクロペンタノンの合成
下記反応式にしたがって（Ｅ）−２−ヘプチリデンシクロペンタノンを製造した。
【００３７】
【化７】
【００３８】
フラスコにシクロペンタノン２５２ｇ（３．０モル）、およびトルエン１，２００ｍｌを仕込み、撹拌を行った。この中にモルホリン３１４ｇ(３．６モル)、パラトルエンスルホン酸１２ｇを加え加熱還流下、留出してくる水を除去しながら５時間撹拌を行った。加熱をやめ、反応液中にヘプタナール３４２．６ｇ（３．０モル）を滴下した。滴下後再び加熱還流下、留出してくる水を除去しながら３時間撹拌を行った。反応後室温まで冷却し２０％硫酸水溶液１，５００ｍｌを加え室温下、１時間撹拌した。反応終了後、分液し、有機層を飽和食塩水、飽和炭酸ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。減圧下に溶媒を回収し得られた残渣を減圧蒸留により精製し９５〜９６℃／０．４ｋＰａの沸点の留分として３０３ｇを得た。（トランス：シス＝９４：６）収率５６％。
【００３９】
実施例４
下記反応式に従って（Ｒ）−２−ヘプチルシクロペンタノンを製造した。
【００４０】
【化８】
【００４１】
精製水１Ｌあたり、イーストペプトン３０．０ｇ、塩化ナトリウム１０．０ｇ、大豆油６０．０ｇおよび２−ヘプチリデンシクロペンタノン１０．０ｇを加え、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ６．８５に調整した。この培地１００ｍｌを５００ｍｌひだ付きフラスコに仕込み、滅菌を行った後、ブレビバクテリウム・ライネンス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｉｎｅｓ ＪＣＭ １３２８）の菌体を白金耳で１かき植菌し、３０℃、１００ｒｐｍで１４日間、振盪培養を行った。１４日後、転換率は９４％であった。培養物をエチルエーテル５０ｍｌにて抽出し、有機を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、ろ過し、溶媒を回収し粗製を得た。これを減圧蒸留し、沸点６５−７０℃／２５Ｐａの留分７０７ｍｇを得た。収率７０％、光学純度７８％ｅｅ。
【００４２】
実施例５
下記反応式に従って（Ｒ）−２−ヘプチルシクロペンタノンを製造した。
【００４３】
【化９】
【００４４】
精製水１Ｌあたり、イーストペプトン３０．０ｇ、塩化ナトリウム１０．０ｇ、大豆油６０．０ｇおよび２−ヘプチリデンシクロペンタノン１０．０ｇを加え、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ６．８５に調整した。この培地１００ｍｌを５００ｍｌひだ付きフラスコに仕込み、滅菌を行った後、ブレビバクテリウム・カゼイ（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｓｅｉ ＪＣＭ ２５９４）の菌体菌体を白金耳で１かき植菌し、３０℃、１００ｒｐｍで１４日間、振盪培養を行った。１４日後、転換率は８３％であった。培養物をエチルエーテル５０ｍｌにて抽出し、有機を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、ろ過し、溶媒を回収し粗製を得た。これを減圧蒸留し、沸点６５−７０℃／２５Ｐａの留分６０６ｍｇを得た（収率６０％、光学純度９１％ｅｅ）。
【技術分野】
【０００１】
本発明は食品用あるいは香粧品用の調合香料の素材として有用な（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンを製造するための技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
２−アルキルシクロペンタノンは香料化合物として知られている。特に２−ペンチルシクロペンタノンはジャスミン的フルーティー、フローラル香を有し、２−ヘプチルシクロペンタノンはジャスミン様でグリーン、フルーティー、フローラル、ハーバル香を有するフレグランス香料として重要な化合物である（非特許文献１）。これらの化合物は不斉炭素を有するため、両鏡像体が存在する。２−ペンチルシクロペンタノンおよび２−ヘプチルシクロペンタノンにおける光学異性体間では（Ｒ）−体の嗜好性が高いことが報告されている（非特許文献２）。したがって、香料を調合する場合、ラセミ体を用いた時に比べて、（Ｒ）−体を用いた方が、嗜好性の向上、天然感の付与など、香料品質が向上することは明らかである。
従来、光学活性なアルキルシクロペンタノンを合成する技術として、不斉触媒を用いた水素化により、光学活性２−ペンチルシクロペンタノンを得る方法（非特許文献２）が知られている。
【０００３】
【非特許文献１】合成香料―化学と商品知識（初版第１刷），（１９９６．３．６）印藤元一著 化学工業日報社，p．３５３〜３５６
【非特許文献２】第３７回ＴＥＡＣ要旨集（１９９３）依頼講演―１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、不斉触媒を使用する方法は、高価な触媒を用いて高圧下で反応させる必要があり、コスト的及び環境的な問題点があった。
したがって、本発明の目的は簡便、かつ安価な方法で、環境的にも負荷をかけることなく、高収率、高光学純度で製造することができる、香料として有用な（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンの製造方法を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは上記のごとき課題を解決すべく、鋭意研究を行った結果、今回、２−アルキリデンシクロペンタノンを基質として、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物を作用させることにより、基質中の二重結合を立体選択的に還元し、光学活性な（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンが得られることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち本発明は、下記式（２）
【０００６】
【化１】
【０００７】
（式中、Ｒ１は炭素数２〜９の直鎖または分岐のアルキル基を示す）
で表される、２−アルキリデンシクロペンタノンをブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物の菌体またはその処理物と接触処理することを特徴とする下記式（１）
【０００８】
【化２】
【０００９】
（式中、Ｒ１は炭素数２〜９の直鎖または分岐のアルキル基を示す）
で表される（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンの製造方法を提供するものである。
また、本発明は、２−アルキリデンシクロペンタノンが２−ペンチリデンシクロペンタノンであり、生成物が（Ｒ）−２−ペンチルシクロペンタノンである前記の（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンの製造方法を提供するものである。
さらに、本発明では、２−アルキリデンシクロペンタノンが２−ヘプチリデンシクロペンタノンであり、生成物が（Ｒ）−２−ヘプチルシクロペンタノンであることを特徴とする前記の（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンの製造方法を提供するものである。
さらにまた、本発明は、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物がブレビバクテリウム・ライネンス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｉｎｅｎｓ）またはブレビバクテリウム・カゼイ（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｓｅｉ）であることを特徴とする前記の（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンの製造方法を提供するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、香料化合物として有用な光学活性な（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンを、簡便、かつ安価な方法で、環境的にも負荷をかけることなく、高収率、高光学純度で製造することができる。また、本発明により製造された（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンを調合香料に使用することにより、ラセミ体を使用した場合と比べ、より自然で、より特徴的な香調を有する香料組成物を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明の出発物質である前記式（２）の２−アルキリデンシクロペンタノンは、従来公知の方法（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２１（１），２１５（１９７３）やケミカル アブストラクツ ７９巻、７８１７０ｆなど）に記載の方法に従い、シクロペンタノンとアルデヒドをアルドール縮合させることにより製造することができる。本発明で使用することのできる式（２）の２−アルキリデンシクロペンタノンの具体例としては、２−プロピリデンシクロペンタノン、２−ブチリデンシクロペンタノン、２−ペンチリデンシクロペンタノン、２−ヘキシリデンシクロペンタノン、２−へプチリデンシクロペンタノン、２−オクチリデンシクロペンタノン、２−ノニリデンシクロペンタノン、２−イソブチリデンシクロペンタノンなどを挙げることができる。これらのうち、２−ペンチリデンシクロペンタノンおよび２−へプチリデンシクロペンタノンを特に好ましく例示することができる。なお、出発原料であるシクロペンタノンとアルキルアルデヒドは市販で容易に入手することができる。
アルドール縮合の一態様を示せば、例えば、次の通りである。
【００１２】
【化３】
【００１３】
（式中、Ｒ１は炭素数２〜９の直鎖または分岐のアルキル基を示す）
まず、反応槽にシクロペンタノン、溶媒を仕込み、攪拌しながら、さらに、モルホリンおよび触媒を仕込み、溶媒の沸点温度で１〜２４時間反応させる。一旦、加熱を止めた後、炭素数３〜１０のアルキルアルデヒドを滴下後、再び溶媒の沸点温度で１〜２４時間反応させる。使用する溶媒としてはトルエン、シクロヘキサンなどの水と共沸効果を有する溶媒を使用し、溶媒の沸点温度で還流下に反応を行う。これにより、反応により生成する水を反応系から除去しながら反応を行うことができる。使用するモルホリンの量はシクロペンタノン１モルに対し０．５〜２モル、好ましくは０．８〜１．２モルを用いることができ、アルキアルデヒドの量はシクロペンタノン1モルに対し約１モルを使用することが好ましい。また、触媒としては、パラトルエンスルホン酸（ＰＴＳＡ）などの有機酸や塩酸、硫酸などの鉱酸を用いることができる。次いで塩酸、硫酸などの鉱酸の水溶液で反応液を処理し、式（２）の２−アルキリデンペンタノンを得ることができる。反応終了後、洗浄、抽出、乾燥、蒸留、カラムクロマトグラフィーなどの通常の分離手段を適宜に採用して式（２）の２−アルキリデンシクロペンタノンを精製する。
【００１４】
また、本発明で用いる式（２）の２−アルキリデンシクロペンタノンはトランス体を使用することが好ましい。アルドール縮合により得られた２−アルキリデンシクロペンタノンは一般にシス体、トランス体の異性体混合物として得られるため、これらの異性体を分別蒸留またはカラムクロマトグラフィーなどの手段によりトランス体を分離して用いることができる。
【００１５】
本発明では前記式（２）の２−アルキリデンシクロペンタノンをブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物の菌体またはその処理物と接触処理することにより、二重結合を還元し、（Ｒ）体の２−アルキルシクロペンタノンを選択的に生成せしめることができる。
【００１６】
本発明において用いることのできる微生物はブレビバクテリウム属に属する微生物であれば、いかなる種のものも使用することができ、また、野生株、変異株、又は細胞融合もしくは遺伝子組み替え法などの遺伝子手法により誘導される遺伝子組み換え株などのいずれの株も用いる事ができ、例えばブレビバクテリウム・アンチクアム（Ｂ．ａｎｔｉｑｕｕｍ）、ブレビバクテリウム・オーランチアカム（Ｂ．ａｕｒａｎｔｉａｃｕｍ）、ブレビバクテリウム・オーレウム（Ｂ．ａｕｒｅｕｍ）、ブレビバクテリウム・カゼイ（Ｂ．ｃａｓｅｉ）、ブレビバクテリウム・セレレ（Ｂ．ｃｅｌｅｒｅ）、ブレビバクテリウム・エピデルミディス（Ｂ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、ブレビバクテリウム・フィゴーチオレランス（Ｂ．ｆｉｇｏｒｔｉｏｌｅｒａｎｓ）、ブレビバクテリウム・フラバム（Ｂ．ｆｌａｖｕｍ）、ブレビバクテリウム・フスカム（Ｂ．ｆｕｓｃｕｍ）、ブレビバクテリウム・ハロトレランス（Ｂ．ｈａｌｏｔｏｒｅｒａｎｓ）、ブレビバクテリウム・ヘルボリュウム（Ｂ． ｈｅｒｂｏｒｅｕｍ）、ブレビバクテリウム・イオディナム（Ｂ．ｉｏｄｉｎｕｍ）、ブレビバクテリウム・ライネンス（Ｂ．ｌｉｎｅｎｓ）、ブレビバクテリウム・ケトグルタミカム（Ｂ．ｋｅｔｏｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）、ブレビバクテリウム・ルテオラム（Ｂ．ｌｕｔｅｏｌｕｍ）、ブレビバクテリウム・クブレルネリ（Ｂ．ｍｃｂｒｅｌｌｎｅｒｉ）、ブレビバクテリウム・サルファリュウム（Ｂ．ｓｕｌｆｕｒｅｕｍ）などを挙げることができるが、これらのうちブレビバクテリウム・ライネンスまたはブレビバクテリウム・カゼイを特に好ましく挙げることができる。
【００１７】
反応方法としては、菌体を分離し、菌体と基質を接触させる方法、菌体より粗酵素を抽出し、粗酵素を基質に作用させて反応を行う方法、液体培地に基質を添加し、菌を培養することにより基質を変換する方法などを採用することができるが、培地に基質を添加し、菌を培養することにより基質を変換する方法を好ましく例示することができる。
【００１８】
本発明に用いる培地は、菌が増殖し得る培地であれば特に制限はなく、炭素源として例えばショ糖、ブドウ、果糖などの糖類、エタノール、グリセロールなどのアルコール類、クエン酸、リンゴ酸、酢酸、プロピオン酸などの有機酸類、パラフィンなどの炭化水素類、その他の炭素源、又はこれらの混合物、窒素源として、ペプトン、硫酸アンモニウム、酵母エキス、尿素などの無機有機含窒素化合物、他に無機塩、微量金属塩、ビタミン類など、通常の培養に用いられる栄養源を適宜混合して用いることができる。
【００１９】
また、本発明の２−アルキリデンシクロペンタノンから（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンの製造を、（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンを溶解しうる、水に難溶性の溶媒の存在下に実施することにより、効率良く（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンを製造することが可能となる。かかる溶媒としては、例えば、大豆油、オリーブ油、米ぬか油、ＯＤＯ、ピーナッツ油、胡麻油、サフラワー油、あまに油、くるみ油、ひまわり油、なたね油、つばき油などのごとき植物性油脂類；いわし油、にしん油、さば油、たら肝油、いか肝油などのごとき動物性油脂類；脂肪酸モノグリセリド、脂肪酸ジグリセリド、脂肪酸トリグリセリド、脂肪酸、リン脂質、流動パラフィン、ヘキサン、トルエンなどを挙げることができる。水に難溶性の溶媒の添加量は該溶媒の種類、培養条件等により異なり一概に規定することはできないが、一般には２−アルキリデンシクロペンタノン１重量部に対して約０．５重量部〜約１０重量部の範囲内を例示することができる。また、必要に応じて微生物の増殖を促進する因子或いは培地のｐＨ保持の為の化合物などを添加することもできる。
好ましい培地の組成としては、窒素源を約０．６〜１５％、炭素源を約１〜３０％、無機塩を約０．１〜５％程度含む培地を例示することができる。
【００２０】
また、反応基質である２−アルキリデンシクロペンタノンは培地中にあらかじめ添加しておいてもよく、培養開始後に添加しても良い。
培養の、具体的態様を示すと以下の通りである。炭素源などの栄養源混合物に反応基質として２−アルキリデンシクロペンタノンを約０．１〜１０％を加えた培地に、ブレビバクテリウム属に属する微生物を１ｍｌ当たり１×１０５個〜１×１０１０個程度植菌し、培養を行う。反応の進行は、ガスクロマトグラフィーや薄層クロマトグラフィーなどで確認を行い、反応が最も進行した時点を終点とすることが好ましいが、例えば、約２０〜３５℃にて、１２時間〜１４日間程度培養することを例示することができる。
反応後は、菌体を分離し、分離液の油層を採取し蒸留する方法、培養液そのものを有機溶媒抽出する方法、培養液を水蒸気蒸留する方法などにより、（Ｒ）体の２−アルキルシクロペンタノンを得ることができる。
【００２１】
かくして得られた式（１）の（Ｒ）体の２−アルキルシクロペンタノンは、香料組成物に香料組成物全体量の０．１〜２０重量％、好ましくは０．５〜２重量％の範囲内で添加することにより天然感あふれる香りを付与することができる。
【００２２】
また、本発明によれば、式（１）の化合物を有効成分として含有する香料組成物を利用して、式（１）の化合物を香気香味成分として含有する飲食品類、香粧品類、保健・衛生・医薬品類などを提供することができる。
【００２３】
例えば、炭酸飲料、果汁飲料、果実酒飲料類、乳飲料などの飲料類；アイスクリーム類、シャーベット類、アイスキャンディー類などの冷菓類；和・洋菓子、チューインガム類、パン類、コーヒー、紅茶、お茶、タバコなどの嗜好品類；和風スープ類、洋風スープ類などのスープ類；ハム、ソーセージなどの畜肉加工品；風味調味料、各種インスタント飲料乃至食品類、各種のスナック類などに、式（１）の化合物を有効成分として含有する香料組成物の適当量を添加することにより、そのユニークな香気香味が賦与された飲食品類を提供することができる。また、例えば、シャンプー類、ヘアクリーム類、その他の毛髪化粧料基剤；オシロイ、口紅、その他の化粧用基剤や化粧用洗剤類基剤などに、式（１）の化合物を有効成分として含有する香料組成物の適当量を添加することにより、そのユニークな香気が賦与された化粧品類を提供することができる。さらにまた、式（１）の化合物を有効成分として含有する香料組成物の適当量が配合を洗濯用洗剤類、消毒用洗剤類、防臭洗剤類、その他各種の保健・衛生用洗剤類；歯磨き、ティシュー、トイレットペーパーなどに配合することにより、そのユニークな香気が賦与された各種保健・衛生材料類；医薬品類などを提供することができる。
以下、本発明を実施例により本発明を更に具体的に説明する。
【実施例】
【００２４】
参考例１
（Ｅ）−２−ペンチリデンシクロペンタノンの合成
下記反応式にしたがって（Ｅ）−２−ペンチリデンシクロペンタノンを製造した。
【００２５】
【化４】
【００２６】
フラスコにシクロペンタノン２５２ｇ（３．０モル）、およびトルエン１，２００ｍｌを仕込み、撹拌を行った。この中にモルホリン３１４ｇ(３．６モル)、パラトルエンスルホン酸１２ｇを加え加熱還流下、留出してくる水を除去しながら５時間撹拌を行った。加熱をやめ、反応液中にペンタナール２５８ｇ（３．０モル）を滴下した。滴下後再び加熱還流下、留出してくる水を除去しながら３時間撹拌を行った。反応後室温まで冷却し２０％硫酸水溶液１，５００ｍｌを加え室温下、１時間撹拌した。反応終了後、分液し、有機層を飽和食塩水、飽和炭酸ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。減圧下に溶媒を回収し得られた残渣を減圧蒸留により精製し８５〜８６℃ / ０．４ｋＰａの沸点の留分として２７１ｇを得た。
得られた留分を精密蒸留し８１−８２℃/ ０．４ｋＰａの沸点の留分を１１５ｇ得た。
（トランス：シス＝９９：１）収率２５％。
【００２７】
実施例１
下記反応式に従って（Ｒ）−２−ペンチルシクロペンタノンを製造した。
【００２８】
【化５】
【００２９】
精製水１Ｌあたり、イーストペプトン３０．０ｇ、塩化ナトリウム１０．０ｇ、大豆油６０．０ｇおよび（Ｅ）−２−ペンチリデンシクロペンタノン７．２ｇを加え、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ６．８５に調整した。この培地１５Ｌを５０Ｌジャーファーメンターに仕込み、滅菌を行った後、ブレビバクテリウム・ライネンス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｉｎｅｓ ＪＣＭ １３２８）の液体シード（菌数１０８個／ｍｌを３００ｍｌ）を添加し、３０℃、５００ｒｐｍで４日間、通気撹拌培養を行った。４日後、転換率は９５％であった。培養物にヘプタン２Ｌを加え、静置後、分液した。有機層にセライトを加え、ろ過及び分液を行った。溶媒を回収し粗製を１０５５ｇ得た。これを減圧蒸留し、沸点５５−６０℃／２７Ｐａの留分７５．５ｇを得た。収率６９％、光学純度７３．６％ｅｅ。
光学純度はキラル液層を用いたガスクロマトグラフィー法により決定した。
（測定条件）
ガスクロ装置：６８９０Ｎ−Ａｕｔｏｓａｎｍｐｌｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
カラム；ＣＨＩＲＡＬＤＥＸＴＭ Ｇ−ＤＰ（アステック社製）（０．２５ｍｍ×３０ｍ）
温度；６０℃〜１８０℃まで（毎分１℃昇温）。
【００３０】
実施例２
下記反応式に従って（Ｒ）−２−ペンチルシクロペンタノンを製造した
【００３１】
【化６】
【００３２】
イーストペプトン３０．０ｇ、塩化ナトリウム１０．０ｇ、大豆油６０．０ｇを精製水１Ｌに溶かし、（Ｅ）−２−ペンチリデンシクロペンタノン７．０ｇを加え、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ６．８５に調整後、オートクレーブ滅菌を行った。上記培地１Ｌを２Ｌジャーファーメンターに仕込み、ブレビバクテリウム・カゼイ（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｓｅｉ ＪＣＭ ２５９４）の液体シード（菌数１０８個／ｍｌを１００ｍｌ）を添加し、３０℃、５００ｒｐｍで４日間、通気撹拌培養を行った。４日後、転換率は９８．５％であった。培養物にセライトを添加してよく撹拌した後、ろ過し、ろ液を酢酸エチル５０ｍｌにて抽出した。有機層分離した後、有機層をソーダ灰と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過後、溶媒を回収して粗製を得た。これを減圧蒸留し、沸点５５−６０℃／２７Ｐａの留分を３．６ｇ得た。収率５０％、光学純度７８．３％ｅｅ。
【００３３】
実施例３
イーストペプトン３０．０ｇ、塩化ナトリウム１０．０ｇ、大豆油６０．０ｇを精製水１Ｌに溶かし、（Ｅ）−２−ペンチリデンシクロペンタノン１０．０ｇを加え、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ６．８５に調整した。上記培地１００ｍｌを５００ｍＬ三角フラスコに仕込み、オートクレーブにて滅菌した後、表１に示した菌株の菌体を植え、３０℃、１００ｒｐｍにて４日間振盪培養を行った。それぞれの転換率および光学純度を表１に示す。
【００３４】
【表１】
【００３５】
表１に示したとおり、転換率と光学純度がともに高い菌株はブレビバクテリウム・ライネンス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｉｎｅｎｓ）およびブレビバクテリウム・カゼイ（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｓｅｉ）であることが明らかである。
【００３６】
参考例２
（Ｅ）−２−ヘプチリデンシクロペンタノンの合成
下記反応式にしたがって（Ｅ）−２−ヘプチリデンシクロペンタノンを製造した。
【００３７】
【化７】
【００３８】
フラスコにシクロペンタノン２５２ｇ（３．０モル）、およびトルエン１，２００ｍｌを仕込み、撹拌を行った。この中にモルホリン３１４ｇ(３．６モル)、パラトルエンスルホン酸１２ｇを加え加熱還流下、留出してくる水を除去しながら５時間撹拌を行った。加熱をやめ、反応液中にヘプタナール３４２．６ｇ（３．０モル）を滴下した。滴下後再び加熱還流下、留出してくる水を除去しながら３時間撹拌を行った。反応後室温まで冷却し２０％硫酸水溶液１，５００ｍｌを加え室温下、１時間撹拌した。反応終了後、分液し、有機層を飽和食塩水、飽和炭酸ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。減圧下に溶媒を回収し得られた残渣を減圧蒸留により精製し９５〜９６℃／０．４ｋＰａの沸点の留分として３０３ｇを得た。（トランス：シス＝９４：６）収率５６％。
【００３９】
実施例４
下記反応式に従って（Ｒ）−２−ヘプチルシクロペンタノンを製造した。
【００４０】
【化８】
【００４１】
精製水１Ｌあたり、イーストペプトン３０．０ｇ、塩化ナトリウム１０．０ｇ、大豆油６０．０ｇおよび２−ヘプチリデンシクロペンタノン１０．０ｇを加え、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ６．８５に調整した。この培地１００ｍｌを５００ｍｌひだ付きフラスコに仕込み、滅菌を行った後、ブレビバクテリウム・ライネンス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｉｎｅｓ ＪＣＭ １３２８）の菌体を白金耳で１かき植菌し、３０℃、１００ｒｐｍで１４日間、振盪培養を行った。１４日後、転換率は９４％であった。培養物をエチルエーテル５０ｍｌにて抽出し、有機を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、ろ過し、溶媒を回収し粗製を得た。これを減圧蒸留し、沸点６５−７０℃／２５Ｐａの留分７０７ｍｇを得た。収率７０％、光学純度７８％ｅｅ。
【００４２】
実施例５
下記反応式に従って（Ｒ）−２−ヘプチルシクロペンタノンを製造した。
【００４３】
【化９】
【００４４】
精製水１Ｌあたり、イーストペプトン３０．０ｇ、塩化ナトリウム１０．０ｇ、大豆油６０．０ｇおよび２−ヘプチリデンシクロペンタノン１０．０ｇを加え、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ６．８５に調整した。この培地１００ｍｌを５００ｍｌひだ付きフラスコに仕込み、滅菌を行った後、ブレビバクテリウム・カゼイ（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｓｅｉ ＪＣＭ ２５９４）の菌体菌体を白金耳で１かき植菌し、３０℃、１００ｒｐｍで１４日間、振盪培養を行った。１４日後、転換率は８３％であった。培養物をエチルエーテル５０ｍｌにて抽出し、有機を飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、ろ過し、溶媒を回収し粗製を得た。これを減圧蒸留し、沸点６５−７０℃／２５Ｐａの留分６０６ｍｇを得た（収率６０％、光学純度９１％ｅｅ）。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（２）
【化１】
（式中、Ｒ１は炭素数２〜９の直鎖または分岐のアルキル基を示す）
で表される、２−アルキリデンシクロペンタノンをブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物の菌体またはその処理物と接触処理することを特徴とする下記式（１）
【化２】
（式中、Ｒ１は炭素数２〜９の直鎖または分岐のアルキル基を示す）
で表される（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンの製造方法。
【請求項２】
２−アルキリデンシクロペンタノンが２−ペンチリデンシクロペンタノンであり、（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタンが（Ｒ）−２−ペンチルシクロペンタノンであることを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
２−アルキリデンシクロペンタノンが２−ヘプチリデンシクロペンタノンであり、（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンが（Ｒ）−２−ヘプチルシクロペンタノンであることを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【請求項４】
ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物がブレビバクテリウム・ライネンス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｉｎｅｎｓ）またはブレビバクテリウム・カゼイ（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｓｅｉ）であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１】
下記式（２）
【化１】
（式中、Ｒ１は炭素数２〜９の直鎖または分岐のアルキル基を示す）
で表される、２−アルキリデンシクロペンタノンをブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物の菌体またはその処理物と接触処理することを特徴とする下記式（１）
【化２】
（式中、Ｒ１は炭素数２〜９の直鎖または分岐のアルキル基を示す）
で表される（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンの製造方法。
【請求項２】
２−アルキリデンシクロペンタノンが２−ペンチリデンシクロペンタノンであり、（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタンが（Ｒ）−２−ペンチルシクロペンタノンであることを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
２−アルキリデンシクロペンタノンが２−ヘプチリデンシクロペンタノンであり、（Ｒ）−２−アルキルシクロペンタノンが（Ｒ）−２−ヘプチルシクロペンタノンであることを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【請求項４】
ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物がブレビバクテリウム・ライネンス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｉｎｅｎｓ）またはブレビバクテリウム・カゼイ（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｓｅｉ）であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の製造方法。
【公開番号】特開２００９−３４０１２（Ｐ２００９−３４０１２Ａ）
【公開日】平成２１年２月１９日（２００９．２．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−１９９５１９（Ｐ２００７−１９９５１９）
【出願日】平成１９年７月３１日（２００７．７．３１）
【出願人】（０００２１４５３７）長谷川香料株式会社 (176)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年２月１９日（２００９．２．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年７月３１日（２００７．７．３１）
【出願人】（０００２１４５３７）長谷川香料株式会社 (176)
【Ｆターム（参考）】
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