ＥＧＦ受容体に対する抗体を含む医薬製剤
本発明は、内皮成長因子受容体（ＥＧＦ受容体）に対する抗体を含む水性医薬製剤に関する。前記製剤は高温においても高い保存安定性を有し、腫瘍治療に使用することができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対する抗体を含む安定した医薬製剤、およびその調製と利用に関する。
【背景技術】
【０００２】
さまざまなｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏ試験から、抗体によるＥＧＦＲの遮断は、例えば、癌細胞の増殖を阻害し、腫瘍による血管新生を減少させ、癌細胞のアポトーシスを誘発し、放射線療法や従来型の化学療法の毒性作用を増加させるなど、さまざまなレベルで腫瘍に対して作用することが明らかになっている。
【０００３】
ＭＡＢｃ２２５（ＩＮＮ：セツキシマブ）は、臨床的に実証されたＥＧＦ受容体に結合する抗体である。セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）は、その可変領域がマウス由来で、その定常領域がヒト由来のキメラ抗体である。セツキシマブは、Ｎａｒａｍｕｒａらにより、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ １９９３、３７：３４３−３４９およびＷＯ９６／４０２１０Ａ１で初めて記述された。
【０００４】
ＭＡＢ４２５は、腫瘍細胞、特にＡ４３１上皮性悪性腫瘍細胞において過剰発現するＥＧＦＲに対する、マウス由来の抗体である。そのヒト化型およびキメラ型が、例えば、ＥＰ０５３１４７２Ａ１；Ｋｅｔｔｌｅ ｂｏｒｏｕｇｈら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ１９９１、４：７７３−７８３；Ｂｉｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００１、４７：５１９−５２４；Ｂｉｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．１９９８、４６：１６７−１７３に開示されている。ＥＭＤ７２０００（ｈ４２５）は、臨床試験第Ｉ／ＩＩ相にあるＭＡＢ４２５の一形態であり、定常領域がκ鎖およびヒトγ−１鎖からなる。
【０００５】
ヒト抗ＥＧＦＲ抗体は、ＷＯ９１／１０７４１Ａ１、ＷＯ９４／０２６０２Ａ１およびＷＯ９６／３３７３５Ａ１に開示されているゼノマウス技術により提供することができる。この技術により生産され、現在臨床試験中の特異的抗体が、ＡＢＸ−ＥＧＦ（Ａｂｇｅｎｉｘ、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２００１、３８：１７−２３；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９９９、５９：１２３６−４３）である。
【０００６】
ＥＧＦＲに対するさらなる抗体は、例えば、ＥＰ０５８６００２Ｂ１およびＪ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．１９９３、８５：２７−３３（ＭＡＢ５２８）に記載されている。
【０００７】
他の抗体と同様に、抗ＥＧＦＲ抗体は治療用の液剤として非経口でも適用される。これらの抗体を含む溶液において特に問題となるのは、凝集する傾向や、タンパク質多量体を形成する傾向である。還元性多量体の場合、これは、接近する部分間の相互作用を通じて分子間のジスルフィド結合が偶発的に形成されることに帰すことができる。疎水性相互作用と、その結果として非還元性多量体が形成される可能性もある。さらに、脱アミド反応も生じるが、これはその後タンパク質分解反応をきたす結果となる。記載した変性反応は、特に高温での保存時や、例えば、輸送中に生じるような剪断応力を受ける際に起こる。
【０００８】
前記凝集傾向の結果、抗体溶液の保存時に製品の沈降が生じる。これは、溶液を入れた容器から再現性のある引き出しを行うことが疑わしいことを意味する。さらに、粒子を含有する溶液を非経口投与すると塞栓を生じる可能性がある。この結果、その都度必要な用量の抗ＥＧＦＲ抗体を患者に投与することは、抗体溶液では再現可能な方法で必ずしも保証されず、必要な信頼性を伴った投与を行うことはできない。
【０００９】
注入前のろ過により、凝集を阻止することは可能であるが、しかし、この方法はさらなるステップを含むため複雑であり、臨床治療に非常に適しているとは言えない。加えて、未知のごく少量の抗体が、どのような場合でも溶液から分離するため、用量の再現性の問題は未解決のままであり、ろ過後の粒子形成は安全性のリスクとなり続ける。
【００１０】
モノクロナール抗体安定化の一般的な方法は、抗体と補助剤とを含む溶液の凍結乾燥である。しかし、凍結乾燥は、きわめて時間およびエネルギーを費やすため費用がかかる。さらに、凍結乾燥品は、投与前にまず再構成を行わなければならない。
【００１１】
ＥＰ００７３３７１では、安定化のために３．５〜５．０のｐＨを有する免疫グロブリンを含む、静脈内投与用の製剤を記載している。しかし、そのような低いｐＨ値は、注入時に好ましくない不適合反応をきたす。
【００１２】
ＵＳ６１７１５８６Ｂ１では、等張性調整のためのＮａＣｌを除外した、抗体水性製剤における酢酸バッファーｐＨ４．４８〜５．５、界面活性剤およびポリオールの利用を開示している。等張性調整の欠如により、注入時の不適合反応が同様に生じる可能性がある。
【００１３】
特異的抗原を含むさらなる製剤の例として、現時点ではＥＰ０２８０３５８、ＥＰ０１７０９８３およびＵＳ５９４５０９８を参照することができる。
【００１４】
このうち、ＥＰ０２８０３５８では、特定のホルモンに対し安定化を図るために、抗体溶液にデキストランを添加することが記載されており、そこでは安定性が９ヵ月にわたり得られた。
【００１５】
ＥＰ０１７０９８３では、加水分解したオボアルブミンと共に加熱することによる、易熱性モノクロナール抗体の安定化を記載しており、その結果、抗体は４５℃で７日間保存した後も依然として安定していた。しかし、非経口投与用の製剤に他の種のタンパク質を添加することは、それに関連した問題、特に抗原性のため好ましくない。
【００１６】
ＵＳ５９４５０９８では、免疫グロブリンＧ水溶液の安定化のためのグリシン、ポリソルベート８０およびポリエチレングリコールの利用を開示している。
【００１７】
ＤＥ１０１３３３９４Ａ１では、抗体セツキシマブ水溶液の安定化のため、ｐＨ６からｐＨ８の範囲のリン酸バッファー、およびポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルの利用を開示している。これにより、目視可能な凝集物の形成は大幅に減少するが、特に応力条件下での化学安定性は著しく損なわれる。さらに、製剤は（超）熱応力、例えば、４０度での長期保存に対し安定性を示さない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
本発明の目的は、特にＥＧＦＲに対する抗体用の水性製剤であって、非経口投与に適し、十分に忍容され、少なくとも２４ヵ月間、室温での保存において安定している水性製剤を見出すことであった。保存安定性は、輸送中に剪断力が働く場合や、気候条件の変化、特に高温および高い大気湿度でも保持されなければならない。さらに、製剤は単純な構造を有し、毒物学的な観点から疑わしいいかなる補助剤も含んではならない。
【００１９】
驚くべきことに、これらの要件を満たす製剤は、上皮成長因子に対する抗体（抗ＥＧＦＲ抗体）に加えて、バッファー、アミノ酸および界面活性剤を含む溶液の形態で見出されている。したがって本発明は、抗ＥＧＦＲ抗体に加えて、バッファー、アミノ酸および界面活性剤を含む水性医薬製剤に関する。
【００２０】
本発明の目的のため、水性製剤は、いくつかの溶媒が存在し、水を含むものである。含まれてもよいさらなる溶媒の構成要素は、非経口使用に適したすべての溶媒であり、特にアルコール類、例えば、エタノール、プロパノール、プロパンジオールまたはグリセロールなどである。
水性製剤は好ましくは、水またはエタノール／水の混合物を溶媒として含むが、溶媒は水からなることが特に好ましい。
【００２１】
含まれる抗体は、いかなる抗ＥＧＦＲ抗体でもよく、特に冒頭に挙げたマウス抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体、および前記ゼノマウス技術を用いて調製した、および調製することができるヒト抗ＥＧＦＲ抗体である。好ましくは、抗ＥＧＦＲ抗体のセツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）またはＥＭＤ７２０００、またはそれらに対応するマウス抗体アナログ、ヒト化抗体アナログまたはキメラ抗体アナログの１つである。特に好ましくは、抗体としてセツキシマブまたはＥＭＤ７２０００を含む水性製剤である。
【００２２】
抗ＥＧＦＲ抗体は、本発明による製剤において、０．１ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは２ｍｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌ、特に好ましくは約５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在してもよい。
【００２３】
使用することのできるバッファーは基本的に、所望のｐＨを設定するために好適な、生理学的に忍容されるすべての物質であり、例えば、クエン酸塩、酢酸塩、ヒスチジン塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、リン酸塩または乳酸塩、および／またはそれらの各遊離酸または遊離塩基のほか、それらのさまざまな塩類および／または酸若しくは塩基の混合物である。このバッファーは好ましくは、1種または複数種のクエン酸塩、酢酸塩、ヒスチジン塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、リン酸塩または乳酸塩および／またはそれらの各遊離酸または遊離塩基、または前記さまざまな塩類の1種または複数種の混合物および／またはそれらの酸若しくは塩基の混合物からなる。ここでいう混合物という用語は、例えば、異なるクエン酸塩の混合物のような同じ酸の異なる塩類の混合物と、例えば、クエン酸塩と酢酸塩の混合物のような異なる酸の塩類の混合物の両方を対象としている。
【００２４】
バッファーは好ましくは、１種または複数種のクエン酸塩および／またはその遊離酸（例えばクエン酸、クエン酸１水和物、クエン酸３ナトリウム２水和物、クエン酸３カリウム１水和物など）、酢酸塩および／またはその遊離酸（例えば酢酸、酢酸ナトリウム、酢酸ナトリウム３水和物など）またはL−ヒスチジンおよび／または、例えば、L−ヒスチジン１塩酸塩１水和物といったその酸付加塩からなる。本発明による製剤は有効には、バッファーを１０〜１００ｍｍｏｌ／ｌ、好ましくは２〜２０ｍｍｏｌ／ｌ、特に好ましくは約１０ｍｍｏｌ／ｌの濃度で含む。
【００２５】
製剤のｐＨは、５．０〜６．０の範囲にあり、好ましくは５．２〜５．８、特に好ましくは約５．５である。
【００２６】
本発明による製剤は、生理学的に十分に忍容され、容易に調製することができ、正確に分注でき、かつ、分析ならびに保存期間中や繰り返し行われる凍結および解凍の処理中の分解生成物および凝集物ならびに機械的応力、に関して安定である。本発明による製剤は冷蔵庫温度（２〜８℃）での少なくとも３ヵ月から４年の期間にわたる保存において安定である。驚くべきことに、本発明による製剤は、高温かつより高い大気湿度、例えば温度２５℃、相対大気湿度６０％での最大２年間にわたる保存、または温度４０℃、相対大気湿度７５％での３ヵ月間にわたる保存においても安定である。
【００２７】
本発明に含まれるアミノ酸は、例えば、アルギニン、ヒスチジン、オルニチン、リジンなどの塩基性アミノ酸、または例えば、グリシン、メチオニン、イソロイシン、ロイシンおよびアラニンなどの中性アミノ酸、または例えば、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンなどの芳香族アミノ酸にすることができる。塩基性アミノ酸は、好ましくはその無機塩（有効には塩酸塩の形、すなわちアミノ酸塩酸塩として）の形で使用される。使用されるアミノ酸は、いずれの場合にもＬ型であることが好ましい。本発明による製剤に含まれるアミノ酸は、Ｌ−アルギニン、グリシンまたはＬ−メチオニンであることが特に好ましい。
【００２８】
製剤は、アミノ酸を、２〜２００ｍｍｏｌ／ｌ、好ましくは５０〜１５０ｍｍｏｌ／ｌ、特に好ましくは約１００ｍｍｏｌ／ｌの濃度で含む。
【００２９】
使用することができる界面活性剤は、医薬製剤に通常用いられるすべての界面活性剤であり、好ましくはポリエチレンソルビタン脂肪酸エステルおよびポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーである。ポリエチレンソルビタン脂肪酸エステルは、商標名ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）としても知られる。好適なポリエチレンソルビタン脂肪酸エステルは、特に、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテートおよびポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレートである。好ましくは、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレートおよびポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートであり、特に好ましくは、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートである。ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーは、登録商標ポロキサマー（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）としても知られる。特に好ましいポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーは、ポロキサマー４０７（ＣＡＳ９００３−１１−６）である。
【００３０】
界面活性剤は、０．００１重量％〜１．０重量％の濃度で製剤に含まれていてもよい。ポリエチレンソルビタン脂肪酸エステルが界面活性剤として含まれる場合、これらは好ましくは０．００５〜０．１重量％、特に好ましくは約０．０１重量％の量で存在する。ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーが含まれる場合、これらは好ましくは０．０１〜０．５重量％、特に好ましくは約０．１重量％の量で存在する。
【００３１】
非経口投与における忍容性を高めるために、浸透圧は等浸透圧の範囲にある、すなわち浸透圧が約２５０〜３５０ｍＯｓｏｌ／ｋｇであることが好ましい。その結果、製剤は静脈内、動脈内および皮下にも、実質上痛みを伴わずに直接投与することができる。
【００３２】
有効な実施形態によれば、したがって本発明による製剤は、等張性調整剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃｉｔｙ ｍｏｄｉｆｉｅｒ）、好ましくは、例えば塩化ナトリウムまたは塩化カリウムなどの生理学的に忍容される塩、または、例えばグルコースまたはグリセロールなどの生理学的に忍容されるポリオールを、等張性の調製に必要な濃度で追加で含む。そのためさらに本発明は、抗ＥＧＦＲ抗体、バッファー、アミノ酸、界面活性剤および等張性調整剤を、等張性の調製に必要な濃度で含む水性製剤に関する。塩化ナトリウムは、等張性調整剤として含まれることが特に好ましい。
【００３３】
さらに、本発明による溶液は、例えばアスコルビン酸またはグルタチオンなどの抗酸化物質、例えばフェノール、ｍ−クレゾール、メチル-もしくはプロピルパラベン、クロロブタノール、チオマーサルまたは塩化ベンザルコニウムなどの保存料、例えばＰＥＧ４００、ＰＥＧ３０００、３３５０、４０００もしくは６０００などのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、例えばトレハロースもしくはサッカロースなどの二糖類、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエチル−β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリンもしくはγ−シクロデキストリンなどのシクロデキストリンといった生理学的に忍容された補助剤をさらに含んでもよい。
【００３４】
本発明の特に有効な実施形態によれば、水性製剤は約５ｍｇ／ｍｌのセツキシマブもしくはＥＭＤ７２０００、ｐＨ約５．５を有する約１０ｍｍｏｌ／ｌのクエン酸もしくはヒスチジンのバッファー、約１００ｍｍｏｌ／ｌのグリシン、アルギニンもしくはＬ−メチオニン、約１００ｍｍｏｌ／ｌの塩化ナトリウム、および０．０１％のポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートを含む。
【００３５】
水性製剤は、前記補助剤を抗ＥＧＦＲ抗体を含む溶液に添加することで調製することができる。この目的のため、前記のさらなる補助剤を規定濃度で含む原液の規定量が、これを添加することで規定濃度に調製されるように抗ＥＧＦＲ抗体を含有する溶液に有利には添加され、所望する場合は、この混合物を事前に計算した濃度まで水またはバッファー溶液により希釈する。あるいは、補助剤は、抗ＥＧＦＲ抗体を含む開始溶液に固体として添加することもできる。抗ＥＧＦＲ抗体が固体の形態、例えば凍結乾燥物の形態にある場合、本発明による製剤は、まず、１種または複数種のさらなる補助剤を含む水または水溶液に各抗体を溶解させ、続いて、固形の形態の補助剤および/または水を含む原液のそれぞれの場合に必要とされる量を加えることにより調製することができる。抗ＥＧＦＲ抗体は、有効にはすべてのさらなる補助剤を含む溶液に直接溶解することもできる。
【００３６】
本発明による製剤に含まれる１種または複数種の補助剤は、有効には特定のＥＧＦＲ抗体の調製処理中または処理の最後に既に添加しておいてもよい。これは好ましくは、その調製後に行われる精製の最終ステップで、１種、１種類以上またはすべてのさらなる補助剤を含む水溶液に抗ＥＧＦＲ抗体を直接溶解させることで行うことができる。製剤を調製するために、それぞれのさらなる成分は、ひいてはいずれの場合も少量を添加する必要があるか、および／または全く添加する必要はない。各成分は、その調製後に行われる精製の最終ステップで、すべてのさらなる補助剤を含む水溶液に直接溶解させることが特に好ましい。
【００３７】
各抗体を含む溶液および補助剤が所望のｐＨにない場合、これは、酸または塩基を添加することで、好ましくは既にバッファーシステムに存在する酸または塩基を用いることで設定する。その後これを滅菌ろ過する。
【００３８】
本発明による水性製剤は、有効には腫瘍疾患治療に使用することができる。
【００３９】
実施例により本発明を説明するが、本発明はこれに限定されない。
【００４０】
実施例１（比較例１）
以下を含む水溶液：
２ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１０ｍｍｏｌ／ｌリン酸ナトリウムバッファーｐＨ７．２
１４５ｍｍｏｌ／ｌ塩化ナトリウム
調製は、規定濃度で各補助剤を含む規定容積の水溶液を混合することにより行う。以下の溶液を使用する：
以下を含む溶液Ａ（有効成分溶液）：
１８ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１０ｍｍｏｌ／ｌリン酸ナトリウムバッファーｐＨ７．２
（２．０７ｇ／ｌリン酸水素２ナトリウム７水和物および０．３１ｇ／ｌリン酸２水素ナトリウム１水和物からなる）
１４５ｍｍｏｌ／ｌ塩化ナトリウム
（この溶液は、有効成分の調製後にそれを精製する最終ステップで、接線流ろ過を援用して溶液Ｂに対し有効成分を再緩衝することにより得られる。）
溶液Ｂ（バッファー／塩溶液）
有効成分を含まないことを除いては溶液Ａと一致する。
【００４１】
比較溶液１を調製するには、体積比１．１１の溶液Ａと体積比８．８９の溶液Ｂを互いに混合する。
【００４２】
調製した溶液は、滅菌フィルターを用いてろ過した後、注入バイアルに移す。その後、注入バイアルを栓で密封しクリンプする。
【００４３】
実施例２（比較例２）
以下を含む水溶液：
２ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１０ｍｍｏｌ／ｌリン酸ナトリウムバッファーｐＨ７．２
１４５ｍｍｏｌ／ｌ塩化ナトリウム
０．０１重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート
調製は、規定濃度で各補助剤を含む規定容積の水溶液を混合することにより行う。溶液Ａのほかに以下の溶液を使用する。
【００４４】
溶液Ｃ（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートを含むバッファー／塩溶液）
０．０１２５重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートをさらに含むことを除いては溶液Ｂと一致する。
【００４５】
比較溶液２を調製するには、体積比１．１１の溶液Ａと体積比８．８９の溶液Ｃを互いに混合する。
【００４６】
調整した溶液は、滅菌フィルターを用いてろ過した後、注入バイアルに移す。その後、注入バイアルを栓で密封しクリンプする。
【００４７】
実施例３（本発明による製剤）
５ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸バッファーｐＨ５．５
１００ｍｍｏｌ／ｌグリシン
１００ｍｍｏｌ／ｌ塩化ナトリウム
０．０１重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート
調製は、規定濃度で各補助剤を含む規定容積の水溶液を混合することにより行う。
【００４８】
溶液Ｄ（クエン酸バッファーにおける有効成分溶液）
１６ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸バッファーｐＨ５．５
（２．１０１４ｇ／ｌクエン酸１水和物からなる）
（この溶液は、有効成分の調製後にそれを精製する最終ステップで、接線流ろ過を援用して溶液Ｅに対し有効成分を再緩衝することにより得られる。）
溶液Ｅ（バッファー溶液）：
有効成分を含まないことを除いては溶液Ｄと一致する。
【００４９】
溶液Ｆ（バッファー／塩溶液）：
１４５．５ｍｍｏｌ／ｌグリシンと、
１４５．５ｍｍｏｌ／ｌ塩化ナトリウムと
０．０１５重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートと、を含むことを除いては溶液Ｅと一致する。
【００５０】
本発明により製剤を調整するには、体積比３．１２５の溶液Ｄと体積比６．８７５の溶液Ｆを互いに混合する。
【００５１】
調整した溶液は、滅菌フィルターを用いてろ過した後、注入バイアルに移す。その後、注入バイアルを栓で密封しクリンプする。
【００５２】
実施例４
以下の溶液は、上記に記載した実施例の方法と同様に調製する。
【００５３】
実施例４．１、以下を含む溶液：
５ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１００ｍｍｏｌ／ｌグリシン
０．０１重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート
１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸バッファーｐＨ５．５
（２．９４１０ｇ／ｌクエン酸３ナトリウム２水和物からなる）
実施例４．２、以下を含む溶液：
５ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１００ｍｍｏｌ／ｌグリシン
１００ｍｍｏｌ／ｌ塩化ナトリウム
０．０１重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート
１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸バッファーｐＨ５．５
（２．１０１４ｇ／ｌクエン酸１水和物からなる）
実施例４．３、以下を含む溶液：
５ｍｇ／ｍｌＥＭＤ７２０００
１００ｍｍｏｌ／ｌグリシン
１００ｍｍｏｌ／ｌ塩化ナトリウム
０．０１重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート
１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸バッファーｐＨ５．５
（２．１０１４ｇ／ｌクエン酸１水和物からなる）
実施例４．４、以下を含む溶液：
５ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１００ｍｍｏｌ／ｌＬ−メチオニン
０．０１重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート
１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸バッファーｐＨ５．５
（２．１０１４ｇ／ｌクエン酸１水和物からなる）
実施例４．５、以下を含む溶液：
５ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１００ｍｍｏｌ／ｌグリシン
０．０１重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート
１０ｍｍｏｌ／ｌ酢酸バッファーｐＨ５．５
（１．３６０８ｇ／ｌ酢酸ナトリウム３水和物からなる）
実施例４．６、以下を含む溶液：
５ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１００ｍｍｏｌ／ｌグリシン
０．０１重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート
１０ｍｍｏｌ／ｌヒスチジンバッファーｐＨ５．５
（２．０６９ｇ／ｌＬ−ヒスチジン１塩酸塩１水和物からなる）
実施例４．７、以下を含む溶液：
５ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１００ｍｍｏｌ／ｌグリシン
０．０１重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート
１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸バッファーｐＨ５．５
（２．１０１４ｇ／ｌクエン酸１水和物からなる）
実施例４．８、以下を含む水溶液：
５ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１００ｍｍｏｌ／ｌグリシン
０．０１重量％のポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー４０７（ポロキサマー４０７）
１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸バッファーｐＨ５．５
（２．１０１４ｇ／ｌクエン酸１水和物からなる）
実施例５
本発明による製剤の安定性は、ストレス試験で検査した。このため、実施例３の溶液を含むバイアルと、比較のため実施例１および２の溶液を含むバイアルを、２５℃および相対大気湿度６０％、ならびに４０℃および相対大気湿度７５％にて保存した。さらに、実施例１、２および３の溶液を含むバイアルを、室温にて振盪機で振盪回数１５０ｍｉｎ-1で５日間振盪し、−２０℃にて連続３回凍結した後、＋５℃にて再び解凍した。保存前および規定の保存時間後に、バイアルを冷光源による直接照明にて目視評価し、濁度の尺度である３５０ｎｍの吸光度を溶液について測定した。保存または処置の影響を明らかにするため、開始時の値に対する相対濁度をそれぞれの場合において計算した。さらに、セツキシマブ、凝集物および分解生成物の含量について、ＨＰＬＣゲルろ過を用いてバイアルの分析を行った。
安定性検査の結果を表１に示す。
【００５４】
【表１】
【００５５】
【表２】
【００５６】
【表３】
【００５７】
結果は明らかに、本発明による製剤は、従来技術の比較溶液に比べて安定性が有意に向上していることを示している。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に対する抗体を含む安定した医薬製剤、およびその調製と利用に関する。
【背景技術】
【０００２】
さまざまなｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏ試験から、抗体によるＥＧＦＲの遮断は、例えば、癌細胞の増殖を阻害し、腫瘍による血管新生を減少させ、癌細胞のアポトーシスを誘発し、放射線療法や従来型の化学療法の毒性作用を増加させるなど、さまざまなレベルで腫瘍に対して作用することが明らかになっている。
【０００３】
ＭＡＢｃ２２５（ＩＮＮ：セツキシマブ）は、臨床的に実証されたＥＧＦ受容体に結合する抗体である。セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）は、その可変領域がマウス由来で、その定常領域がヒト由来のキメラ抗体である。セツキシマブは、Ｎａｒａｍｕｒａらにより、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ １９９３、３７：３４３−３４９およびＷＯ９６／４０２１０Ａ１で初めて記述された。
【０００４】
ＭＡＢ４２５は、腫瘍細胞、特にＡ４３１上皮性悪性腫瘍細胞において過剰発現するＥＧＦＲに対する、マウス由来の抗体である。そのヒト化型およびキメラ型が、例えば、ＥＰ０５３１４７２Ａ１；Ｋｅｔｔｌｅ ｂｏｒｏｕｇｈら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ１９９１、４：７７３−７８３；Ｂｉｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００１、４７：５１９−５２４；Ｂｉｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．１９９８、４６：１６７−１７３に開示されている。ＥＭＤ７２０００（ｈ４２５）は、臨床試験第Ｉ／ＩＩ相にあるＭＡＢ４２５の一形態であり、定常領域がκ鎖およびヒトγ−１鎖からなる。
【０００５】
ヒト抗ＥＧＦＲ抗体は、ＷＯ９１／１０７４１Ａ１、ＷＯ９４／０２６０２Ａ１およびＷＯ９６／３３７３５Ａ１に開示されているゼノマウス技術により提供することができる。この技術により生産され、現在臨床試験中の特異的抗体が、ＡＢＸ−ＥＧＦ（Ａｂｇｅｎｉｘ、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２００１、３８：１７−２３；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９９９、５９：１２３６−４３）である。
【０００６】
ＥＧＦＲに対するさらなる抗体は、例えば、ＥＰ０５８６００２Ｂ１およびＪ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．１９９３、８５：２７−３３（ＭＡＢ５２８）に記載されている。
【０００７】
他の抗体と同様に、抗ＥＧＦＲ抗体は治療用の液剤として非経口でも適用される。これらの抗体を含む溶液において特に問題となるのは、凝集する傾向や、タンパク質多量体を形成する傾向である。還元性多量体の場合、これは、接近する部分間の相互作用を通じて分子間のジスルフィド結合が偶発的に形成されることに帰すことができる。疎水性相互作用と、その結果として非還元性多量体が形成される可能性もある。さらに、脱アミド反応も生じるが、これはその後タンパク質分解反応をきたす結果となる。記載した変性反応は、特に高温での保存時や、例えば、輸送中に生じるような剪断応力を受ける際に起こる。
【０００８】
前記凝集傾向の結果、抗体溶液の保存時に製品の沈降が生じる。これは、溶液を入れた容器から再現性のある引き出しを行うことが疑わしいことを意味する。さらに、粒子を含有する溶液を非経口投与すると塞栓を生じる可能性がある。この結果、その都度必要な用量の抗ＥＧＦＲ抗体を患者に投与することは、抗体溶液では再現可能な方法で必ずしも保証されず、必要な信頼性を伴った投与を行うことはできない。
【０００９】
注入前のろ過により、凝集を阻止することは可能であるが、しかし、この方法はさらなるステップを含むため複雑であり、臨床治療に非常に適しているとは言えない。加えて、未知のごく少量の抗体が、どのような場合でも溶液から分離するため、用量の再現性の問題は未解決のままであり、ろ過後の粒子形成は安全性のリスクとなり続ける。
【００１０】
モノクロナール抗体安定化の一般的な方法は、抗体と補助剤とを含む溶液の凍結乾燥である。しかし、凍結乾燥は、きわめて時間およびエネルギーを費やすため費用がかかる。さらに、凍結乾燥品は、投与前にまず再構成を行わなければならない。
【００１１】
ＥＰ００７３３７１では、安定化のために３．５〜５．０のｐＨを有する免疫グロブリンを含む、静脈内投与用の製剤を記載している。しかし、そのような低いｐＨ値は、注入時に好ましくない不適合反応をきたす。
【００１２】
ＵＳ６１７１５８６Ｂ１では、等張性調整のためのＮａＣｌを除外した、抗体水性製剤における酢酸バッファーｐＨ４．４８〜５．５、界面活性剤およびポリオールの利用を開示している。等張性調整の欠如により、注入時の不適合反応が同様に生じる可能性がある。
【００１３】
特異的抗原を含むさらなる製剤の例として、現時点ではＥＰ０２８０３５８、ＥＰ０１７０９８３およびＵＳ５９４５０９８を参照することができる。
【００１４】
このうち、ＥＰ０２８０３５８では、特定のホルモンに対し安定化を図るために、抗体溶液にデキストランを添加することが記載されており、そこでは安定性が９ヵ月にわたり得られた。
【００１５】
ＥＰ０１７０９８３では、加水分解したオボアルブミンと共に加熱することによる、易熱性モノクロナール抗体の安定化を記載しており、その結果、抗体は４５℃で７日間保存した後も依然として安定していた。しかし、非経口投与用の製剤に他の種のタンパク質を添加することは、それに関連した問題、特に抗原性のため好ましくない。
【００１６】
ＵＳ５９４５０９８では、免疫グロブリンＧ水溶液の安定化のためのグリシン、ポリソルベート８０およびポリエチレングリコールの利用を開示している。
【００１７】
ＤＥ１０１３３３９４Ａ１では、抗体セツキシマブ水溶液の安定化のため、ｐＨ６からｐＨ８の範囲のリン酸バッファー、およびポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルの利用を開示している。これにより、目視可能な凝集物の形成は大幅に減少するが、特に応力条件下での化学安定性は著しく損なわれる。さらに、製剤は（超）熱応力、例えば、４０度での長期保存に対し安定性を示さない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
本発明の目的は、特にＥＧＦＲに対する抗体用の水性製剤であって、非経口投与に適し、十分に忍容され、少なくとも２４ヵ月間、室温での保存において安定している水性製剤を見出すことであった。保存安定性は、輸送中に剪断力が働く場合や、気候条件の変化、特に高温および高い大気湿度でも保持されなければならない。さらに、製剤は単純な構造を有し、毒物学的な観点から疑わしいいかなる補助剤も含んではならない。
【００１９】
驚くべきことに、これらの要件を満たす製剤は、上皮成長因子に対する抗体（抗ＥＧＦＲ抗体）に加えて、バッファー、アミノ酸および界面活性剤を含む溶液の形態で見出されている。したがって本発明は、抗ＥＧＦＲ抗体に加えて、バッファー、アミノ酸および界面活性剤を含む水性医薬製剤に関する。
【００２０】
本発明の目的のため、水性製剤は、いくつかの溶媒が存在し、水を含むものである。含まれてもよいさらなる溶媒の構成要素は、非経口使用に適したすべての溶媒であり、特にアルコール類、例えば、エタノール、プロパノール、プロパンジオールまたはグリセロールなどである。
水性製剤は好ましくは、水またはエタノール／水の混合物を溶媒として含むが、溶媒は水からなることが特に好ましい。
【００２１】
含まれる抗体は、いかなる抗ＥＧＦＲ抗体でもよく、特に冒頭に挙げたマウス抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体、および前記ゼノマウス技術を用いて調製した、および調製することができるヒト抗ＥＧＦＲ抗体である。好ましくは、抗ＥＧＦＲ抗体のセツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）またはＥＭＤ７２０００、またはそれらに対応するマウス抗体アナログ、ヒト化抗体アナログまたはキメラ抗体アナログの１つである。特に好ましくは、抗体としてセツキシマブまたはＥＭＤ７２０００を含む水性製剤である。
【００２２】
抗ＥＧＦＲ抗体は、本発明による製剤において、０．１ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは２ｍｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌ、特に好ましくは約５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在してもよい。
【００２３】
使用することのできるバッファーは基本的に、所望のｐＨを設定するために好適な、生理学的に忍容されるすべての物質であり、例えば、クエン酸塩、酢酸塩、ヒスチジン塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、リン酸塩または乳酸塩、および／またはそれらの各遊離酸または遊離塩基のほか、それらのさまざまな塩類および／または酸若しくは塩基の混合物である。このバッファーは好ましくは、1種または複数種のクエン酸塩、酢酸塩、ヒスチジン塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、リン酸塩または乳酸塩および／またはそれらの各遊離酸または遊離塩基、または前記さまざまな塩類の1種または複数種の混合物および／またはそれらの酸若しくは塩基の混合物からなる。ここでいう混合物という用語は、例えば、異なるクエン酸塩の混合物のような同じ酸の異なる塩類の混合物と、例えば、クエン酸塩と酢酸塩の混合物のような異なる酸の塩類の混合物の両方を対象としている。
【００２４】
バッファーは好ましくは、１種または複数種のクエン酸塩および／またはその遊離酸（例えばクエン酸、クエン酸１水和物、クエン酸３ナトリウム２水和物、クエン酸３カリウム１水和物など）、酢酸塩および／またはその遊離酸（例えば酢酸、酢酸ナトリウム、酢酸ナトリウム３水和物など）またはL−ヒスチジンおよび／または、例えば、L−ヒスチジン１塩酸塩１水和物といったその酸付加塩からなる。本発明による製剤は有効には、バッファーを１０〜１００ｍｍｏｌ／ｌ、好ましくは２〜２０ｍｍｏｌ／ｌ、特に好ましくは約１０ｍｍｏｌ／ｌの濃度で含む。
【００２５】
製剤のｐＨは、５．０〜６．０の範囲にあり、好ましくは５．２〜５．８、特に好ましくは約５．５である。
【００２６】
本発明による製剤は、生理学的に十分に忍容され、容易に調製することができ、正確に分注でき、かつ、分析ならびに保存期間中や繰り返し行われる凍結および解凍の処理中の分解生成物および凝集物ならびに機械的応力、に関して安定である。本発明による製剤は冷蔵庫温度（２〜８℃）での少なくとも３ヵ月から４年の期間にわたる保存において安定である。驚くべきことに、本発明による製剤は、高温かつより高い大気湿度、例えば温度２５℃、相対大気湿度６０％での最大２年間にわたる保存、または温度４０℃、相対大気湿度７５％での３ヵ月間にわたる保存においても安定である。
【００２７】
本発明に含まれるアミノ酸は、例えば、アルギニン、ヒスチジン、オルニチン、リジンなどの塩基性アミノ酸、または例えば、グリシン、メチオニン、イソロイシン、ロイシンおよびアラニンなどの中性アミノ酸、または例えば、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンなどの芳香族アミノ酸にすることができる。塩基性アミノ酸は、好ましくはその無機塩（有効には塩酸塩の形、すなわちアミノ酸塩酸塩として）の形で使用される。使用されるアミノ酸は、いずれの場合にもＬ型であることが好ましい。本発明による製剤に含まれるアミノ酸は、Ｌ−アルギニン、グリシンまたはＬ−メチオニンであることが特に好ましい。
【００２８】
製剤は、アミノ酸を、２〜２００ｍｍｏｌ／ｌ、好ましくは５０〜１５０ｍｍｏｌ／ｌ、特に好ましくは約１００ｍｍｏｌ／ｌの濃度で含む。
【００２９】
使用することができる界面活性剤は、医薬製剤に通常用いられるすべての界面活性剤であり、好ましくはポリエチレンソルビタン脂肪酸エステルおよびポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーである。ポリエチレンソルビタン脂肪酸エステルは、商標名ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）としても知られる。好適なポリエチレンソルビタン脂肪酸エステルは、特に、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテートおよびポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレートである。好ましくは、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレートおよびポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートであり、特に好ましくは、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートである。ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーは、登録商標ポロキサマー（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）としても知られる。特に好ましいポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーは、ポロキサマー４０７（ＣＡＳ９００３−１１−６）である。
【００３０】
界面活性剤は、０．００１重量％〜１．０重量％の濃度で製剤に含まれていてもよい。ポリエチレンソルビタン脂肪酸エステルが界面活性剤として含まれる場合、これらは好ましくは０．００５〜０．１重量％、特に好ましくは約０．０１重量％の量で存在する。ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーが含まれる場合、これらは好ましくは０．０１〜０．５重量％、特に好ましくは約０．１重量％の量で存在する。
【００３１】
非経口投与における忍容性を高めるために、浸透圧は等浸透圧の範囲にある、すなわち浸透圧が約２５０〜３５０ｍＯｓｏｌ／ｋｇであることが好ましい。その結果、製剤は静脈内、動脈内および皮下にも、実質上痛みを伴わずに直接投与することができる。
【００３２】
有効な実施形態によれば、したがって本発明による製剤は、等張性調整剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃｉｔｙ ｍｏｄｉｆｉｅｒ）、好ましくは、例えば塩化ナトリウムまたは塩化カリウムなどの生理学的に忍容される塩、または、例えばグルコースまたはグリセロールなどの生理学的に忍容されるポリオールを、等張性の調製に必要な濃度で追加で含む。そのためさらに本発明は、抗ＥＧＦＲ抗体、バッファー、アミノ酸、界面活性剤および等張性調整剤を、等張性の調製に必要な濃度で含む水性製剤に関する。塩化ナトリウムは、等張性調整剤として含まれることが特に好ましい。
【００３３】
さらに、本発明による溶液は、例えばアスコルビン酸またはグルタチオンなどの抗酸化物質、例えばフェノール、ｍ−クレゾール、メチル-もしくはプロピルパラベン、クロロブタノール、チオマーサルまたは塩化ベンザルコニウムなどの保存料、例えばＰＥＧ４００、ＰＥＧ３０００、３３５０、４０００もしくは６０００などのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、例えばトレハロースもしくはサッカロースなどの二糖類、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエチル−β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリンもしくはγ−シクロデキストリンなどのシクロデキストリンといった生理学的に忍容された補助剤をさらに含んでもよい。
【００３４】
本発明の特に有効な実施形態によれば、水性製剤は約５ｍｇ／ｍｌのセツキシマブもしくはＥＭＤ７２０００、ｐＨ約５．５を有する約１０ｍｍｏｌ／ｌのクエン酸もしくはヒスチジンのバッファー、約１００ｍｍｏｌ／ｌのグリシン、アルギニンもしくはＬ−メチオニン、約１００ｍｍｏｌ／ｌの塩化ナトリウム、および０．０１％のポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートを含む。
【００３５】
水性製剤は、前記補助剤を抗ＥＧＦＲ抗体を含む溶液に添加することで調製することができる。この目的のため、前記のさらなる補助剤を規定濃度で含む原液の規定量が、これを添加することで規定濃度に調製されるように抗ＥＧＦＲ抗体を含有する溶液に有利には添加され、所望する場合は、この混合物を事前に計算した濃度まで水またはバッファー溶液により希釈する。あるいは、補助剤は、抗ＥＧＦＲ抗体を含む開始溶液に固体として添加することもできる。抗ＥＧＦＲ抗体が固体の形態、例えば凍結乾燥物の形態にある場合、本発明による製剤は、まず、１種または複数種のさらなる補助剤を含む水または水溶液に各抗体を溶解させ、続いて、固形の形態の補助剤および/または水を含む原液のそれぞれの場合に必要とされる量を加えることにより調製することができる。抗ＥＧＦＲ抗体は、有効にはすべてのさらなる補助剤を含む溶液に直接溶解することもできる。
【００３６】
本発明による製剤に含まれる１種または複数種の補助剤は、有効には特定のＥＧＦＲ抗体の調製処理中または処理の最後に既に添加しておいてもよい。これは好ましくは、その調製後に行われる精製の最終ステップで、１種、１種類以上またはすべてのさらなる補助剤を含む水溶液に抗ＥＧＦＲ抗体を直接溶解させることで行うことができる。製剤を調製するために、それぞれのさらなる成分は、ひいてはいずれの場合も少量を添加する必要があるか、および／または全く添加する必要はない。各成分は、その調製後に行われる精製の最終ステップで、すべてのさらなる補助剤を含む水溶液に直接溶解させることが特に好ましい。
【００３７】
各抗体を含む溶液および補助剤が所望のｐＨにない場合、これは、酸または塩基を添加することで、好ましくは既にバッファーシステムに存在する酸または塩基を用いることで設定する。その後これを滅菌ろ過する。
【００３８】
本発明による水性製剤は、有効には腫瘍疾患治療に使用することができる。
【００３９】
実施例により本発明を説明するが、本発明はこれに限定されない。
【００４０】
実施例１（比較例１）
以下を含む水溶液：
２ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１０ｍｍｏｌ／ｌリン酸ナトリウムバッファーｐＨ７．２
１４５ｍｍｏｌ／ｌ塩化ナトリウム
調製は、規定濃度で各補助剤を含む規定容積の水溶液を混合することにより行う。以下の溶液を使用する：
以下を含む溶液Ａ（有効成分溶液）：
１８ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１０ｍｍｏｌ／ｌリン酸ナトリウムバッファーｐＨ７．２
（２．０７ｇ／ｌリン酸水素２ナトリウム７水和物および０．３１ｇ／ｌリン酸２水素ナトリウム１水和物からなる）
１４５ｍｍｏｌ／ｌ塩化ナトリウム
（この溶液は、有効成分の調製後にそれを精製する最終ステップで、接線流ろ過を援用して溶液Ｂに対し有効成分を再緩衝することにより得られる。）
溶液Ｂ（バッファー／塩溶液）
有効成分を含まないことを除いては溶液Ａと一致する。
【００４１】
比較溶液１を調製するには、体積比１．１１の溶液Ａと体積比８．８９の溶液Ｂを互いに混合する。
【００４２】
調製した溶液は、滅菌フィルターを用いてろ過した後、注入バイアルに移す。その後、注入バイアルを栓で密封しクリンプする。
【００４３】
実施例２（比較例２）
以下を含む水溶液：
２ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１０ｍｍｏｌ／ｌリン酸ナトリウムバッファーｐＨ７．２
１４５ｍｍｏｌ／ｌ塩化ナトリウム
０．０１重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート
調製は、規定濃度で各補助剤を含む規定容積の水溶液を混合することにより行う。溶液Ａのほかに以下の溶液を使用する。
【００４４】
溶液Ｃ（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートを含むバッファー／塩溶液）
０．０１２５重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートをさらに含むことを除いては溶液Ｂと一致する。
【００４５】
比較溶液２を調製するには、体積比１．１１の溶液Ａと体積比８．８９の溶液Ｃを互いに混合する。
【００４６】
調整した溶液は、滅菌フィルターを用いてろ過した後、注入バイアルに移す。その後、注入バイアルを栓で密封しクリンプする。
【００４７】
実施例３（本発明による製剤）
５ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸バッファーｐＨ５．５
１００ｍｍｏｌ／ｌグリシン
１００ｍｍｏｌ／ｌ塩化ナトリウム
０．０１重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート
調製は、規定濃度で各補助剤を含む規定容積の水溶液を混合することにより行う。
【００４８】
溶液Ｄ（クエン酸バッファーにおける有効成分溶液）
１６ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸バッファーｐＨ５．５
（２．１０１４ｇ／ｌクエン酸１水和物からなる）
（この溶液は、有効成分の調製後にそれを精製する最終ステップで、接線流ろ過を援用して溶液Ｅに対し有効成分を再緩衝することにより得られる。）
溶液Ｅ（バッファー溶液）：
有効成分を含まないことを除いては溶液Ｄと一致する。
【００４９】
溶液Ｆ（バッファー／塩溶液）：
１４５．５ｍｍｏｌ／ｌグリシンと、
１４５．５ｍｍｏｌ／ｌ塩化ナトリウムと
０．０１５重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートと、を含むことを除いては溶液Ｅと一致する。
【００５０】
本発明により製剤を調整するには、体積比３．１２５の溶液Ｄと体積比６．８７５の溶液Ｆを互いに混合する。
【００５１】
調整した溶液は、滅菌フィルターを用いてろ過した後、注入バイアルに移す。その後、注入バイアルを栓で密封しクリンプする。
【００５２】
実施例４
以下の溶液は、上記に記載した実施例の方法と同様に調製する。
【００５３】
実施例４．１、以下を含む溶液：
５ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１００ｍｍｏｌ／ｌグリシン
０．０１重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート
１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸バッファーｐＨ５．５
（２．９４１０ｇ／ｌクエン酸３ナトリウム２水和物からなる）
実施例４．２、以下を含む溶液：
５ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１００ｍｍｏｌ／ｌグリシン
１００ｍｍｏｌ／ｌ塩化ナトリウム
０．０１重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート
１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸バッファーｐＨ５．５
（２．１０１４ｇ／ｌクエン酸１水和物からなる）
実施例４．３、以下を含む溶液：
５ｍｇ／ｍｌＥＭＤ７２０００
１００ｍｍｏｌ／ｌグリシン
１００ｍｍｏｌ／ｌ塩化ナトリウム
０．０１重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート
１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸バッファーｐＨ５．５
（２．１０１４ｇ／ｌクエン酸１水和物からなる）
実施例４．４、以下を含む溶液：
５ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１００ｍｍｏｌ／ｌＬ−メチオニン
０．０１重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート
１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸バッファーｐＨ５．５
（２．１０１４ｇ／ｌクエン酸１水和物からなる）
実施例４．５、以下を含む溶液：
５ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１００ｍｍｏｌ／ｌグリシン
０．０１重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート
１０ｍｍｏｌ／ｌ酢酸バッファーｐＨ５．５
（１．３６０８ｇ／ｌ酢酸ナトリウム３水和物からなる）
実施例４．６、以下を含む溶液：
５ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１００ｍｍｏｌ／ｌグリシン
０．０１重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート
１０ｍｍｏｌ／ｌヒスチジンバッファーｐＨ５．５
（２．０６９ｇ／ｌＬ−ヒスチジン１塩酸塩１水和物からなる）
実施例４．７、以下を含む溶液：
５ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１００ｍｍｏｌ／ｌグリシン
０．０１重量％ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート
１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸バッファーｐＨ５．５
（２．１０１４ｇ／ｌクエン酸１水和物からなる）
実施例４．８、以下を含む水溶液：
５ｍｇ／ｍｌセツキシマブ
１００ｍｍｏｌ／ｌグリシン
０．０１重量％のポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー４０７（ポロキサマー４０７）
１０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸バッファーｐＨ５．５
（２．１０１４ｇ／ｌクエン酸１水和物からなる）
実施例５
本発明による製剤の安定性は、ストレス試験で検査した。このため、実施例３の溶液を含むバイアルと、比較のため実施例１および２の溶液を含むバイアルを、２５℃および相対大気湿度６０％、ならびに４０℃および相対大気湿度７５％にて保存した。さらに、実施例１、２および３の溶液を含むバイアルを、室温にて振盪機で振盪回数１５０ｍｉｎ-1で５日間振盪し、−２０℃にて連続３回凍結した後、＋５℃にて再び解凍した。保存前および規定の保存時間後に、バイアルを冷光源による直接照明にて目視評価し、濁度の尺度である３５０ｎｍの吸光度を溶液について測定した。保存または処置の影響を明らかにするため、開始時の値に対する相対濁度をそれぞれの場合において計算した。さらに、セツキシマブ、凝集物および分解生成物の含量について、ＨＰＬＣゲルろ過を用いてバイアルの分析を行った。
安定性検査の結果を表１に示す。
【００５４】
【表１】
【００５５】
【表２】
【００５６】
【表３】
【００５７】
結果は明らかに、本発明による製剤は、従来技術の比較溶液に比べて安定性が有意に向上していることを示している。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ＥＧＦＲ抗体、バッファー、アミノ酸および界面活性剤を含む水性製剤。
【請求項２】
抗体が、セツキシマブまたはＥＭＤ７２０００、あるいはそれらに対応するマウス抗体アナログ、ヒト化抗体アナログまたはキメラ抗体アナログの１つであることを特徴とする、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
抗体が、セツキシマブまたはＥＭＤ７２０００であることを特徴とする、請求項２に記載の製剤。
【請求項４】
バッファーが、１種または複数種のクエン酸塩、酢酸塩、ヒスチジン塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、リン酸塩または乳酸塩および／またはそれらの各遊離酸もしくは遊離塩基、あるいは前記さまざまな塩類の１種または複数種の混合物および／またはそれらの酸もしくは塩基の混合物、からなることを特徴とする、請求項１から３のうちの一項または複数項に記載の製剤。
【請求項５】
バッファーが、１種または複数種のクエン酸塩および／またはその遊離酸、１種または複数種の酢酸塩および／またはその遊離酸、あるいはＬ−ヒスチジンおよび／またはその酸付加塩、からなることを特徴とする、請求項４に記載の製剤。
【請求項６】
アミノ酸が、Ｌ−アルギニン、グリシン、またはＬ−メチオニンであることを特徴とする、請求項１から５のうちの一項または複数項に記載の製剤。
【請求項７】
界面活性剤が、ポリエチレンソルビタン脂肪酸エステルまたはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーであることを特徴とする、請求項１から６のうちの一項または複数項に記載の製剤。
【請求項８】
ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル界面活性剤が、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートまたはポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレートであることを特徴とする、請求項７に記載の製剤。
【請求項９】
界面活性剤が、ポロキサマー４０７であることを特徴とする、請求項７に記載の製剤。
【請求項１０】
等張性調整剤がさらに、等張性の調整に必要な濃度で存在することを特徴とする、請求項１から９のうちの一項または複数項に記載の製剤。
【請求項１１】
等張性調整剤が、塩化ナトリウムであることを特徴とする、請求項１０に記載の製剤。
【請求項１２】
５から７のｐＨ、好ましくはｐＨ５．２からｐＨ６．０を有することを特徴とする、請求項１から１１のうちの一項または複数項に記載の製剤。
【請求項１３】
約５．５のｐＨを有することを特徴とする、請求項１２に記載の製剤。
【請求項１４】
約５ｍｇ／ｍｌのセツキシマブまたはＥＭＤ７２０００と、
約１０ｍｍｏｌ／ｌのクエン酸バッファーまたはヒスチジンバッファーと、
約１００ｍｍｏｌ／ｌのグリシン、Ｌ−アルギニンまたはＬ−メチオニンと、
約１００ｍｍｏｌ／ｌの塩化ナトリウムと、
約０．０１％のポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートとを含み、
約５．５のｐＨを有することを特徴とする、請求項１から１３のうちの一項または複数項に記載の製剤。
【請求項１５】
抗ＥＧＦＲ抗体を含む水性製剤が、前記補助剤の１つに添加されることを特徴とする、請求項１から１４のうちの一項または複数項に記載の医薬製剤の調製法。
【請求項１６】
腫瘍疾患治療のための請求項１から１４のうちの一項または複数項に記載の製剤の使用。
【請求項１】
抗ＥＧＦＲ抗体、バッファー、アミノ酸および界面活性剤を含む水性製剤。
【請求項２】
抗体が、セツキシマブまたはＥＭＤ７２０００、あるいはそれらに対応するマウス抗体アナログ、ヒト化抗体アナログまたはキメラ抗体アナログの１つであることを特徴とする、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
抗体が、セツキシマブまたはＥＭＤ７２０００であることを特徴とする、請求項２に記載の製剤。
【請求項４】
バッファーが、１種または複数種のクエン酸塩、酢酸塩、ヒスチジン塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、リン酸塩または乳酸塩および／またはそれらの各遊離酸もしくは遊離塩基、あるいは前記さまざまな塩類の１種または複数種の混合物および／またはそれらの酸もしくは塩基の混合物、からなることを特徴とする、請求項１から３のうちの一項または複数項に記載の製剤。
【請求項５】
バッファーが、１種または複数種のクエン酸塩および／またはその遊離酸、１種または複数種の酢酸塩および／またはその遊離酸、あるいはＬ−ヒスチジンおよび／またはその酸付加塩、からなることを特徴とする、請求項４に記載の製剤。
【請求項６】
アミノ酸が、Ｌ−アルギニン、グリシン、またはＬ−メチオニンであることを特徴とする、請求項１から５のうちの一項または複数項に記載の製剤。
【請求項７】
界面活性剤が、ポリエチレンソルビタン脂肪酸エステルまたはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーであることを特徴とする、請求項１から６のうちの一項または複数項に記載の製剤。
【請求項８】
ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル界面活性剤が、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートまたはポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレートであることを特徴とする、請求項７に記載の製剤。
【請求項９】
界面活性剤が、ポロキサマー４０７であることを特徴とする、請求項７に記載の製剤。
【請求項１０】
等張性調整剤がさらに、等張性の調整に必要な濃度で存在することを特徴とする、請求項１から９のうちの一項または複数項に記載の製剤。
【請求項１１】
等張性調整剤が、塩化ナトリウムであることを特徴とする、請求項１０に記載の製剤。
【請求項１２】
５から７のｐＨ、好ましくはｐＨ５．２からｐＨ６．０を有することを特徴とする、請求項１から１１のうちの一項または複数項に記載の製剤。
【請求項１３】
約５．５のｐＨを有することを特徴とする、請求項１２に記載の製剤。
【請求項１４】
約５ｍｇ／ｍｌのセツキシマブまたはＥＭＤ７２０００と、
約１０ｍｍｏｌ／ｌのクエン酸バッファーまたはヒスチジンバッファーと、
約１００ｍｍｏｌ／ｌのグリシン、Ｌ−アルギニンまたはＬ−メチオニンと、
約１００ｍｍｏｌ／ｌの塩化ナトリウムと、
約０．０１％のポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートとを含み、
約５．５のｐＨを有することを特徴とする、請求項１から１３のうちの一項または複数項に記載の製剤。
【請求項１５】
抗ＥＧＦＲ抗体を含む水性製剤が、前記補助剤の１つに添加されることを特徴とする、請求項１から１４のうちの一項または複数項に記載の医薬製剤の調製法。
【請求項１６】
腫瘍疾患治療のための請求項１から１４のうちの一項または複数項に記載の製剤の使用。
【公表番号】特表２００７−５１２２６６（Ｐ２００７−５１２２６６Ａ）
【公表日】平成１９年５月１７日（２００７．５．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５４０２１４（Ｐ２００６−５４０２１４）
【出願日】平成１６年１０月２６日（２００４．１０．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／０１２０４４
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０５８３６５
【国際公開日】平成１７年６月３０日（２００５．６．３０）
【出願人】（５９１０３２５９６）メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング (1,043)
【氏名又は名称原語表記】Ｍｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍｉｔ ｂｅｓｃｈｒａｅｎｋｔｅｒ Ｈａｆｔｕｎｇ
【住所又は居所原語表記】Ｆｒａｎｋｆｕｒｔｅｒ Ｓｔｒ． ２５０，Ｄ−６４２９３ Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｆｅｄｅｒａｌ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｇｅｒｍａｎｙ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年５月１７日（２００７．５．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１０月２６日（２００４．１０．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／０１２０４４
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０５８３６５
【国際公開日】平成１７年６月３０日（２００５．６．３０）
【出願人】（５９１０３２５９６）メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング (1,043)
【氏名又は名称原語表記】Ｍｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍｉｔ ｂｅｓｃｈｒａｅｎｋｔｅｒ Ｈａｆｔｕｎｇ
【住所又は居所原語表記】Ｆｒａｎｋｆｕｒｔｅｒ Ｓｔｒ． ２５０，Ｄ−６４２９３ Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｆｅｄｅｒａｌ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｇｅｒｍａｎｙ
【Ｆターム（参考）】
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