本発明は抗原結合分子（ＡＢＭ）に関する。特定の実施形態によれば、本発明は組換モノクローナル抗体、例えばヒトＥＧＦＲに特異的なキメラ抗体、霊長類化抗体、ヒト化抗体に関する。また、本発明は、かかるＡＢＭをコードする核酸分子と、かかる核酸分子を含んでなるベクター及び宿主細胞に関する。さらに、本発明は、本発明のＡＢＭを作製する方法と、かかるＡＢＭを用いて疾患を治療する方法に関する。加えて、本発明は、グリコシル化が修飾され、治療特性が改善されたＡＢＭ、例えばＦｃ受容体への結合が増大し、エフェクター機能が向上した抗体に関する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラットＩＣＲ６２モノクローナル抗体の１又は２以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）の１又は２以上の特異性決定残基（ＳＤＲ）と、異種ポリペプチドに由来する配列とを含んでなる抗原結合分子（ＡＢＭ）であって、ＥＧＦＲに特異的に結合するとともに、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４９、配列番号５１、配列番号１２１からなるグループの中から選択される配列を有さないＡＢＭ。
【請求項２】
前記１又は２以上のＳＤＲが、１又は２以上の重鎖ＣＤＲ内に存在する、請求項１記載のＡＢＭ。
【請求項３】
前記１又は２以上の重鎖ＳＤＲが、Kabat２９位のフェニルアラニン、Kabat５２位のアスパラギン、Kabat５６位のチロシン、及びKabat１００ｂ位のバリンからなる群より選択される、請求項２記載のＡＢＭ。
【請求項４】
前記１又は２以上の重鎖ＳＤＲが、Kabat５６位のチロシン及びKabat１００ｂ位のバリンを含んでなる、請求項３記載のＡＢＭ。
【請求項５】
前記１又は２以上の重鎖ＳＤＲが、Kabat２９位のフェニルアラニン、Kabat５２位のアスパラギン、Kabat５６位のチロシン、Kabat１００ｂ位のバリンである、請求項３記載のＡＢＭ。
【請求項６】
前記１又は２以上のＳＤＲが、１又は２以上の軽鎖ＣＤＲ内に存在する、請求項１記載のＡＢＭ。
【請求項７】
前記１又は２以上の軽鎖ＳＤＲが、Kabat５０位のアスパラギンを含んでなる、請求項６記載のＡＢＭ。
【請求項８】
前記１又は２以上の軽鎖ＳＤＲが、Kabat３４位のアスパラギン及びKabat５０位のアスパラギンを含んでなる、請求項６記載のＡＢＭ。
【請求項９】
ラットＩＣＲ６２抗体のＣＤＲ、或いは、ＣＤＲの少なくともＳＤＲを有するその変異体又は切断形態を、少なくとも２つ含んでなる、請求項１記載のＡＢＭ。
【請求項１０】
ラットＩＣＲ６２抗体のＣＤＲ、或いは、ＣＤＲの少なくともＳＤＲを有するその変異体又は切断形態を、少なくとも３つ含んでなる、請求項９記載のＡＢＭ。
【請求項１１】
ラットＩＣＲ６２抗体のＣＤＲ、或いは、ＣＤＲの少なくともＳＤＲを有するその変異体又は切断形態を、少なくとも４つ含んでなる、請求項９記載のＡＢＭ。
【請求項１２】
ラットＩＣＲ６２抗体のＣＤＲ、或いは、ＣＤＲの少なくともＳＤＲを有するその変異体又は切断形態を、少なくとも５つ含んでなる、請求項９記載のＡＢＭ。
【請求項１３】
ラットＩＣＲ６２抗体のＣＤＲ、或いは、ＣＤＲの少なくともＳＤＲを有するその変異体又は切断形態を、少なくとも６つ含んでなる、請求項９記載のＡＢＭ。
【請求項１４】
ラットＩＣＲ６２抗体のＣＤＲが、１又は２以上のアミノ酸位置に置換を有し、前記ＡＢＭが、未置換のＡＢＭと比べて結合活性を保持する、請求項９〜１３の何れか一項に記載のＡＢＭ。
【請求項１５】
ラットＩＣＲ６２抗体のＣＤＲが、特異性決定残基以外の任意の位置に置換を有する、請求項１４記載のＡＢＭ。
【請求項１６】
ラットＩＣＲ６２抗体のＣＤＲが、特異性決定残基以外の全ての位置に置換を有する、請求項１５記載のＡＢＭ。
【請求項１７】
前記ＣＤＲが、Chothia重鎖ＣＤＲ１のKabat２７位、２８位、２９位、Kabat重鎖ＣＤＲ１の３１位、Kabat重鎖ＣＤＲ２のKabat５２位、５２ａ位、５３位、５７位、Kabat重鎖ＣＤＲ３のKabat１０２位のうちの１又は２以上に置換を有する、請求項１５記載のＡＢＭ。
【請求項１８】
前記ＣＤＲが、Kabat軽鎖ＣＤＲ１のKabat３０位、３２位、Kabat軽鎖ＣＤＲ２のKabat５１位、５２位、５３位、５６位、Kabat軽鎖ＣＤＲ３のKabat９４位のうちの１又は２以上に置換を有する、請求項１７記載のＡＢＭ。
【請求項１９】
結合に関するＥＣ₅₀濃度が、未置換のＡＢＭと比べて、約１０〜約０．００１倍未満の割合で増加する、請求項１〜１８の何れか一項に記載のＡＢＭ。
【請求項２０】
結合に関するＥＣ₅₀濃度が、未置換のＡＢＭと比べて、約１０〜約１倍未満の割合で増加する、請求項１９記載のＡＢＭ。
【請求項２１】
結合に関するＥＣ₅₀濃度が、未置換のＡＢＭと比べて、約１０〜約５倍未満の割合で増加する、請求項１９記載のＡＢＭ。
【請求項２２】
結合に関するＥＣ₅₀濃度が、未置換のＡＢＭと比べて、約５〜約０．１倍未満の割合で増加する、請求項１９記載のＡＢＭ。
【請求項２３】
結合に関するＥＣ₅₀濃度が、未置換のＡＢＭと比べて、約５〜約２倍未満の割合で増加する、請求項１９記載のＡＢＭ。
【請求項２４】
結合に関するＥＣ₅₀濃度が、未置換のＡＢＭと比べて、約３〜約１倍未満の割合で増加する、請求項１９記載のＡＢＭ。
【請求項２５】
結合に関するＥＣ₅₀濃度が、未置換のＡＢＭと比べて、約２倍未満の割合で増加する、請求項１９記載のＡＢＭ。
【請求項２６】
結合に関するＥＣ₅₀濃度が、未置換のＡＢＭと比べて、約１倍未満の割合で増加する、請求項１９記載のＡＢＭ。
【請求項２７】
結合に関するＥＣ₅₀濃度が、未置換のＡＢＭと比べて、約０．１倍未満の割合で増加する、請求項１９記載のＡＢＭ。
【請求項２８】
結合に関するＥＣ₅₀濃度が、未置換のＡＢＭと比べて、約０．００１倍未満の割合で増加する、請求項１９記載のＡＢＭ。
【請求項２９】
配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７からなる群から選択される配列を有するポリペプチドを含んでなる、請求項１記載のＡＢＭ。
【請求項３０】
ラットＩＣＲ６２モノクローナル抗体の変化した重鎖ＣＤＲと、１又は２以上のヒト生殖系列可変領域遺伝子配列に由来する重鎖フレームワーク領域とを含んでなる免疫グロブリン重鎖可変領域をコードする単離ポリペプチドであって、前記変化した重鎖ＣＤＲが、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、５２、５２ａ、５３、５４、５５、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１００ａ、１０１、１０２からなる群から選択されるKabat位、又はこれらの任意の組み合わせの位置に１又は２以上のアミノ酸置換を有するとともに、前記ポリペプチドが抗原結合分子の一部として、ヒトＥＧＦＲに特異的に結合する、ポリペプチド。
【請求項３１】
前記変化した重鎖ＣＤＲが、Kabat２７位、２８位、２９位、３１位、５２位、５３位、５４位、５８位、１０２位に１又は２以上のアミノ酸置換を有する、請求項３０記載のポリペプチド。
【請求項３２】
前記変化した重鎖ＣＤＲが、Kabat２７位、２８位、３１位、５３位、５４位、５８位に１又は２以上のアミノ酸置換を有する、請求項３０記載のポリペプチド。
【請求項３３】
前記変化した重鎖ＣＤＲが、Kabat及びChothia重鎖ＣＤＲ内のＳＤＲを除くあらゆる位置にアミノ酸置換を有する、請求項３０記載のポリペプチド。
【請求項３４】
前記変化した重鎖ＣＤＲが、Kabat及びChothia重鎖ＣＤＲ内のKabat位置２９位、５２位、５６位、１００ｂ位を除くあらゆる位置にアミノ酸置換を有する、請求項３０記載のポリペプチド。
【請求項３５】
ラットＩＣＲ６２モノクローナル抗体の変化した軽鎖ＣＤＲと、１又は２以上のヒト生殖系列可変領域遺伝子配列に由来する軽鎖フレームワーク領域とを含んでなる免疫グロブリン軽鎖可変領域をコードする単離ポリペプチドであって、変化した軽鎖ＣＤＲが、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、５１、５２、５３、５４、５５、５６、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７からなる群から選択されたKabat位、又はこれらの任意の組み合わせの位置に１又は２以上のアミノ酸置換を有するとともに、前記ポリペプチドが抗原結合分子の一部として、ヒトＥＧＦＲに特異的に結合する、ポリペプチド。
【請求項３６】
変化した軽鎖ＣＤＲが、Kabat及びChothia軽鎖ＣＤＲ内のＳＤＲを除くあらゆる位置にアミノ酸置換を有する、請求項３５記載のポリペプチド。
【請求項３７】
変化した軽鎖ＣＤＲが、Kabat及びChothia軽鎖ＣＤＲ内のKabat位置３４位及び５０位を除くあらゆる位置にアミノ酸置換を有する、請求項３５記載のポリペプチド。
【請求項３８】
請求項３０〜３７の何れか一項に記載のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項３９】
配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、及び配列番号１３８からなる群から選択される配列を含んでなるポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドであって、前記ポリペプチドが抗原結合分子の一部として、ヒトＥＧＦＲに特異的に結合する、ポリヌクレオチド。
【請求項４０】
配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６及び配列番号１４７からなる群から選択される配列を含んでなるポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドであって、前記ポリペプチドが抗原結合分子の一部として、ヒトＥＧＦＲに特異的に結合する、ポリヌクレオチド。
【請求項４１】
請求項３８〜４０の何れか一項に記載のポリヌクレオチドによりトランスフェクトされた宿主細胞。
【請求項４２】
請求項３８〜４０の何れか一項に記載のポリヌクレオチドを含んでなるベクター。
【請求項４３】
複製クローニングベクターである、請求項４２記載のベクター。
【請求項４４】
発現ベクターである、請求項４２記載のベクター。
【請求項４５】
請求項４２〜４４の何れか一項に記載のベクターを含んでなる宿主細胞。
【請求項４６】
ヒトＥＧＦＲに結合するラットＩＣＲ６２モノクローナル抗体と競合し得る抗原結合分子を作製する方法であって、
（ａ）請求項４１又は請求項４５に記載の宿主細胞を培地中、抗原結合分子をコードする１又は２以上のポリヌクレオチドを発現させる条件下で培養する工程；及び
（ｂ）前記抗原結合分子を回収する工程を含んでなる方法。
【請求項４７】
請求項３０〜３７の何れか一項に記載のポリペプチドを含んでなるＡＢＭ。
【請求項４８】
Ｆｃ領域を含んでなる、請求項１〜２９、４７の何れか一項に記載のＡＢＭ。
【請求項４９】
Ｆｃ領域が糖改変され、変化したオリゴ糖構造を有する、請求項４８記載のＡＢＭ。
【請求項５０】
Ｆｃ領域におけるフコース残基数が、対応する非糖改変ＡＢＭと比べて少ない、請求項４９記載のＡＢＭ。
【請求項５１】
Ｆｃ領域が糖改変されることにより、対応する非糖改変ＡＢＭと比べて、エフェクター機能が増大し、又はＦｃ受容体結合親和性が増大している、請求項４８記載のＡＢＭ。
【請求項５２】
対象に治療有効量を投与した場合に、臨床的に有意なレベルの毒性を引き起こさない、請求項１〜２９、４６〜５１の何れか一項に記載のＡＢＭ。
【請求項５３】
請求項１〜２９、４６〜５２の何れか一項に記載のＡＢＭと、医薬的に許容し得る担体とを含んでなる組成物。
【請求項５４】
対象においてＥＧＦＲを発現する細胞を標的とする方法であって、その対象に請求項５３記載の組成物を投与する工程を含んでなる方法。
【請求項５５】
前記細胞がＥＧＦＲを過剰に発現している、請求項５４記載の方法。
【請求項５６】
前記対象におけるＥＧＦＲ媒介性細胞シグナル伝達の遮断により治療し得る病気を治療するために実施される、請求項５４記載の方法。
【請求項５７】
ＥＧＦＲ媒介性細胞シグナル伝達の遮断により治療し得る病気を治療するための医薬の製造に使用される、請求項１〜２９、４６〜５２の何れか一項に記載のＡＢＭ。
【請求項５８】
ＥＧＦＲ媒介性細胞シグナル伝達の遮断により治療し得る病気を治療するための医薬の製造における、請求項１〜２９、４６〜５２の何れか一項に記載のＡＢＭの使用。
【請求項５９】
前記病気が細胞増殖疾患である、請求項５４記載の方法、請求項５７記載のＡＢＭ、又は請求項５８記載の使用。
【請求項６０】
前記細胞増殖疾患ががんである、請求項５９記載の方法、ＡＢＭ、又は使用。
【請求項６１】
前記がんが、乳がん、膀胱がん、頭部及び頸部のがん、皮膚がん、膵臓がん、肺がん、卵巣がん、直腸がん、前立腺がん、腎臓がん、脳腫瘍からなる群から選択される、請求項６０記載の方法、ＡＢＭ、又は使用。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０Ａ−Ｂ】

【図１１Ａ−Ｂ】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【公表番号】特表２０１０−５０００２０（Ｐ２０１０−５０００２０Ａ）
【公表日】平成２２年１月７日（２０１０．１．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５２３３７２（Ｐ２００９−５２３３７２）
【出願日】平成１９年８月９日（２００７．８．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００７／００３５４２
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０１７９６３
【国際公開日】平成２０年２月１４日（２００８．２．１４）
【出願人】（５０６１５３８１５）グリクアート　バイオテクノロジー　アクチェンゲゼルシャフト (25)
【Ｆターム（参考）】