ＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバント
【課題】粘膜、好ましくは呼吸器粘膜、例えば鼻腔粘膜に滞留的に投与することにより、効果的にＩｇＡ抗体の産生を誘導させる経鼻投与アジュバントと提供すること、更には、かかる経鼻投与アジュバントにより効率的に鼻づまり症状を改善させること。
【解決手段】アジュバント作用物質と共に、抗原としてインフルエンザワクチン、アレルギー抗原、又はツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）を含有し、ＩｇＡ抗体を誘導することを特徴とする経鼻投与アジュバントであり、さらにフクシン、フクシン酸又は塩基性フクシン、或いは細胞染色試薬、或いは増粘剤を含むことを特徴とするＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバントである。
【解決手段】アジュバント作用物質と共に、抗原としてインフルエンザワクチン、アレルギー抗原、又はツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）を含有し、ＩｇＡ抗体を誘導することを特徴とする経鼻投与アジュバントであり、さらにフクシン、フクシン酸又は塩基性フクシン、或いは細胞染色試薬、或いは増粘剤を含むことを特徴とするＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバントである。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、粘膜、特に呼吸器粘膜、例えば鼻腔粘膜に滞留的に投与することにより、効果的にＩｇＡ抗体の産生を誘導させ、鼻づまり等の鼻炎症状を緩和する経鼻投与アジュバントに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年の生活環境の変化に伴って、各種アレルゲンに起因するアレルギー症状に罹患する人が増大している。特に春先のスギ花粉に起因する花粉症患者の増大はめまぐるしく、スギ花粉に限らず、他の植物の花粉（例えば、ヒノキ、ブタクサ等の花粉）、ハウスダスト、或いは自動車の排気ガス等に起因するアレルギー症状の増大が社会的な問題となってきている。
【０００３】
このようなアレルギー症状の緩和には、一義的に各種抗アレルギー剤の投与が行われているが、これらの抗アレルギー剤には眠気等の副作用等の発現が多く、また、そのようなアレルギー症状に罹患した患者は特に鼻づまり等の鼻炎症状が一つの苦痛となり、通常の生活に支障を来すまでになっている。
【０００４】
最近アレルギー症状に対する一つの療法として減感作療法が行われている。減感作療法とは即時型アレルギーの原因となるアレルゲンを少量ずつアレルギー患者に投与することによって原因アレルゲンに対する感受性を低下させる療法であり、特に吸入型アレルゲン（花粉、ハウスダスト等）の場合に用いられ、例えば、花粉症の場合はスギ花粉などのエキスを、長い時間をかけ少しずつ注射し、身体を徐々に慣れさせていく治療法である。
【０００５】
その機序は、投与アレルゲンによって、アレルギー性疾患の原因となるレアギン（ＩｇＥ抗体の一種）とは異なる別個の抗体（阻止抗体または遮断抗体）が産生され、これが侵入するアレルゲンと結合することによってアレルゲンとレアギンが結合してアレルギー反応を起こすのを阻止すると考えられている。
【０００６】
本発明者も、アレルギー症状の緩和、特に鼻づまり等の鼻炎症状の緩和を目的として種々検討を加えてきている。
その中で、これまでにウイルスに対する粘膜投与型ワクチンをいくつか提案してきている（特許文献１〜３）。これまで提案してきている粘膜投与型ワクチンは、ウイルスの不活性抗原のワクチン効果をより完全なものとすることを目的として、ワクチンに対するアジュバント作用を有する物質を同時に効果的に鼻腔内粘膜上に投与するものであり、例えば、液状のワクチンをアジュバントと共に霧状に噴霧したり、或いは微粉末状にして噴霧したりするものであり、粘膜上におけるＩｇＡ抗体の誘導を確保したものであり、その点で特異的なものである。
【０００７】
ところで、アレルギー症状の緩和療法としての減感作療法においては、スギ花粉等のアレルゲンの投与ではＩｇＥ抗体（レアギン）だけしか誘導されず、即効的な花粉症対策にはならない。これに対して、上記経鼻投与型ワクチン投与では効率よくＩｇＡ抗体が産生され、それに基づく血清中でのＩｇＧ抗体応答が得られ、アレルギー症状の緩和を得ることができる。
かかる点を考慮すると、アジュバントと共に非特異的抗原、或いは特異的抗原を経鼻投与することによりＩｇＡ抗体が誘導され、誘導されたＩｇＡ抗体が外部抗原を中和し、効率的に鼻づまり等の鼻炎症状を緩和するものと考えられる。
【０００８】
本発明者は、上記の考えに基づいて、非特異的抗原、或いは特異的抗原に対するアジュバント作用を有する物質（アジュバント）と共に経鼻投与すれば、効率的に粘膜上でのＩｇＡ抗体分泌が行われ、かかるＩｇＡ抗体が外部抗原を中和することにより鼻づまり症状を改善する効果が認められることを確認し、本発明を完成させるに至った。
【特許文献１】特開２００５−０８２５８１号公報
【特許文献２】特開２００７−０７７０７３号公報
【特許文献３】特開２００８−２３１０３７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
したがって、本発明は、粘膜、好ましくは呼吸器粘膜、例えば鼻腔粘膜に滞留的に投与することにより、効果的にＩｇＡ抗体の産生を誘導させる経鼻投与アジュバントと提供すること、更には、かかる経鼻投与アジュバントにより効率的に鼻づまり症状を改善させることを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
かかる課題を解決するための本発明は、その基本的な一態様として、アジュバント作用物質と共に、抗原としてインフルエンザワクチン、アレルギー抗原、又はツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）を含有し、ＩｇＡ抗体を誘導することを特徴とする経鼻投与アジュバントである。
【００１１】
また本発明は、さらにフクシン、フクシン酸又は塩基性フクシン、或いは細胞染色試薬を含有するＩｇＡ抗体を誘導する経鼻アジュバントである。
【００１２】
また、本発明は上記の経鼻投与アジュバンであって、さらに増粘剤を含むことを特徴とするＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバントであり、増粘剤が、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、デンプンリン酸エステルナトリウム、メチルセルロース又はポリアクリル酸ナトリウムからなる群から選択されるものである経鼻投与アジュバントである。
【００１３】
より具体的には、本発明はアジュバントが、ＴＬＲ（Toll-Like Receptor）のリガンドである二重鎖または一重鎖ＲＮＡであり、当該一重鎖ＲＮＡが、Ｐｏｌｙ（Ｉ）又はＰｏｌｙ（Ｃ）であり、さらに二重鎖ＲＮＡが、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）又はＰｏｌｙ（Ａ：Ｃ）であるＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバントである。
【００１４】
最も具体的には、本発明は、アジュバントであるＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）又はＰｏｌｙ（Ａ：Ｃ）の分子サイズが１〜３００ｂｐ以上であるＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバントである。
【００１５】
また本発明は、アジュバントが、ＣＴＢ（コレラ毒素Ｂサブユニット）、キチン、キトサン、ホッキ貝又はホタテ貝の微粉末であるＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバントである。
【００１６】
さらに本発明は、別の態様として、アレルギー性鼻炎又は花粉症に基づく鼻づまり症状の治療のための上記したＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバントであり、アジュバントを凍結乾燥し粉末の形態にし、含有することを特徴とするＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバントである。
【００１７】
また更に本発明は、ヒト以外の動物に対するアレルギー症状の治療のための上記したＩｇＡ抗体を誘導することを特徴とする経鼻投与アジュバントである。
【発明の効果】
【００１８】
本発明が提供する経鼻投与アジュバントは、非特異的抗原或いは特異的抗原と共に経鼻投与されるものであり、粘膜上で効率的にＩｇＡ抗体を誘導し、産生されたＩｇＡ抗体が鼻づまり症状を惹起する外部抗原を中和することにより効果的に鼻づまり等の鼻炎症状を緩和することができる。
これまで、抗アレルギー剤の投与により鼻炎症状を緩和するしか方法がなかった現状下で、眠気等の副作用がなく、効果的、且つ即効的に鼻づまり等の鼻炎症状を緩和できる点で、特に有用なものである。
また、本発明が提供する経鼻投与アジュバントは、粉末状、或いは噴霧状の液体として簡便に鼻腔粘膜上に投与し得るものであり、その有用性は多大なものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
本発明が提供する経鼻投与アジュバントにおいて、アジュバントとして使用されるＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）誘導体は、Ｔｏｌｌ様レセプター（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＴＬＲ）のリガンドである二重鎖ＲＮＡであり、自然免疫系を刺激するＴＬＲのリガンドとして、病原菌あるいはウイルス等の微生物の攻撃に対する防御免疫獲得能を発揮する。
事実、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を含むＴＬＲのリガンドである二重鎖ＲＮＡが、アジュバントとしてワクチンと共に投与された場合には、そのワクチン能を増強させるのではなく、二重鎖ＲＮＡであるＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）自体が、種々の病原菌あるいはウイルス等の病原体の攻撃に対する防御免疫能を増強せしめ、特にウイルスまたは病原菌特異的ＩｇＡ抗体及びＩｇＧ抗体を誘導させることによって病原体による感染を防御する。
本発明においては、かかるＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）自体が産生するＩｇＡ抗体により外部抗原を中和するものであり、これにより鼻づまり等の鼻炎症状を緩和することとなる。
【００２０】
本発明で使用する二重鎖ＲＮＡであるＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）は、その分子の大きさとしては、その塩基対（ｂｐ）として低〜高サイズの種々のものを用いることが可能であるが、免疫応答に対してより優れた応答を発揮するものは、１〜３００ｂｐ以上の分子サイズを有することが必要であることが判明した。そのような分子サイズを有するものとして、例えば、１００〜１０００ｂｐのＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）は、容易に入手することができる。
【００２１】
アジュバントとしては上記したＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）誘導体に限定されるものではなく、一重鎖ＲＮＡであるＰｏｌｙ（Ｉ）又はＰｏｌｙ（Ｃ）であり、さらに二重鎖ＲＮＡとしてＰｏｌｙ（Ａ：Ｃ）等、アジュバント作用を有する物質であれば、広く本発明の経鼻投与アジュバントとして使用することができることはいうまでもない。
さらに、そのようなアジュバント作用を有する物質として、例えば、キチン、キトサン、ホッキ貝又はホタテ貝の微粉末、β−グルカン、マンノース誘導体、更にはＣＴＢ（コレラ毒素Ｂサブユニット）等を挙げることができる。
【００２２】
一方、本発明が提供する経鼻投与アジュバントにより、アジュバントと共に投与される非特異的抗原或いは特異的抗原としては、インフルエンザワクチン、アレルギー抗原、又はツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）等を挙げることができる。
しかしながら、これらに限定されるものではなく、鼻炎症状を惹起する各種の抗原を挙げることができる。
【００２３】
本発明が提供する経鼻投与アジュバントは、アジュバントであるＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）誘導体、または他のアジュバントにさらにフクシン、フクシン酸又は塩基性フクシン、或いは細胞染色試薬を含有させることができる。
フクシン、フクシン酸又は塩基性フクシンは、一般的に染色試薬として使用されている物質であるが、抗ウイルス作用や抗菌作用を持つことが知られているこれらの物質はアジュバント共に経鼻投与されることにより、より感染防御に役立つと考えられる。特にヒト生細胞を傷つけずに染色（生体染色）され得るため、一般細胞への毒性は極めて低い。
同様な観点から、細胞染色試薬もアジュバントと共に経鼻投与することにより効果的にＩｇＡ抗体を産生させるものであり、このような細胞染色試薬としてクリスタルバイオレットやゲンチアンバイオレットなどを挙げることができる。
【００２４】
また、本発明の経鼻投与アジュバントにおいては、アジュバントと共に増粘剤を一緒に投与するのが効果的である。
本発明でアジュバントと共に使用する増粘剤としては、例えば、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、デンプンリン酸エステルナトリウム、メチルセルロース又はポリアクリル酸ナトリウム等をあげることができる。
増粘剤としては、上記のものに限定されるものではなく、粘膜上で増粘作用を発揮し、アジュバントと共に粘膜上に滞留させ得るものであれば、どのようなものでも使用することができる。
なお、アジュバントとしてのキチン、キトサン、β−グルカン、キチン微粒子、或いはマンノース誘導体にあっては、増粘剤としての作用も発揮する。
【００２５】
本発明が提供する経鼻投与アジュバントの投与量として、投与する対象者の年齢、体重、投与方法により一概に限定し得ないが、通常成人１回当たり、０．０１〜１０ｍｇ、好ましくは、０．０１〜１ｍｇ程度であることより、これに対応した抗原、アジュバント、フクシン、フクシン酸等、更には増粘剤の量を調整すればよい。
具体的には、抗原としてのインフルエンザワクチン、アレルギー抗原、又はツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）の量としては、０．１〜５００μｇであり、フクシン、フクシン酸等の量としては抗原と同程度の０．１〜１０μｇを用いるのがよい。
また、増粘剤の量としては０．０１〜１０ｍｇの範囲で適宜調整することができる。
【００２６】
本発明の経鼻投与アジュバントの投与は、微粉末を鼻腔内粘膜上に噴霧することにより行うことができる。また、懸濁製剤として同様鼻腔内粘膜上に噴霧することにより行うことができる。ヒトの粘膜には、消化器、呼吸器、排出器、生殖器などの特に外通性の中腔器官の内壁が含まれる。しかしながら、本発明経鼻投与アジュバントとしては、鼻腔投与（経鼻投与）が好まし。鼻腔は特に、抗原進入の門戸であることから、粘膜投与により分泌型ＩｇＡ反応を引き起こし、粘膜上皮細胞中に分泌型ＩｇＡ抗体を産生させ、進入する抗原を中和し、鼻づまり等の鼻炎症状を緩和するものである。
【００２７】
さらに本発明は、ヒト以外の動物、例えば、イヌ、猫等の愛玩動物、或いは家畜等の動物に対するアレルギー症状の治療のためのＩｇＡ抗体を誘導することを特徴とする経鼻投与アジュバントを提供するものであり、最近の愛玩動物が罹患するアレルギー症状を効果的に緩和する点で、特に優れたものである。
【実施例】
【００２８】
以下に本発明を、実施例に代わる具体的試験例より、さらに詳細に説明する。
試験例１：マウスにおける実験（その１）
【００２９】
免疫スケジュールとしては、ワクチンとして全粒子不活性化ワクチンのベトナム株から得られたNIBRG14（A/Vietnam）１μｇを用い、アジュバントとしてＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を１０μｇ用いた。
マウス［ＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢、雌性）］で経鼻、若しくは皮下接種で２回接種後、チャレンジを３種のcladeの異なる、ワクチン株と同じ抗原性を持つベトナム株、あとは１９９７年に香港で流行を起こした香港株のＨ５Ｎ１株、あとはclade２に属するインドネシアで分離されたＨ５Ｎ１株（いずれもヒトから分離した株）で攻撃感染実験を実施した。
【００３０】
［結果］
（１）NIBRG14（A/Vietnam）に対する抗体誘導は、接種ルートを経鼻の場合と、皮下接種した場合を比較すると、皮下接種では鼻粘膜上のＩｇＡ抗体は全く誘導されなかった。
これに対して、経鼻接種した場合には、鼻粘膜上にＩｇＡ抗体が誘導され、血中の中和抗体価を調べた結果、中和抗体は、ベトナム株に対してのみ認められており、他の株では認められず、他の香港株、インドネシア株に対する中和抗体価は全く認められなかった。
【００３１】
次に、チャレンジした後の生存と、感染３日後の鼻腔内でのウイルス価を測定した。
まず、ワクチン株と同じ抗原性を有するベトナム株でチャレンジした場合、皮下接種群と経鼻接種群共に、生存率は１００％であったが、コントロール群としてワクチン接種をしない群のマウスでの死亡率は１００％であった。
ところが、鼻粘膜上のウイルス価を検討すると、皮下接種群では、有意にウイルス価は減少していたが、経鼻接種群では、生きたウイルスの分離は認められなかった。
このことは、経鼻接種により、ウイルス感染自体防御し、その結果１００％の生存率を得たこととなる。
【００３２】
（２）１９９７年の香港株でチャレンジした場合には、皮下接種群ではウイルスの減少は全く認められず、生存率も全く認められず、１００％の死亡を示していた。
これに対し、経鼻接種の場合には、生存率は８０％であり、ウイルス価の減少が認められた。
【００３３】
（３）１０００ＰＦＵのウイルス価で感染させるインドネシア株でチャレンジした場合には、経鼻接種群では有意に、また皮下接種群においてもウイルス価の減少は認められたが、生存率において、経鼻接種群は１００％、皮下接種群は４０％、コントロール群は２０％であった。
【００３４】
以上のように、マウスにおいてアジュバント効果を認めたので、ヒトに近い霊長類であるサルを用いて検討を行った。
【００３５】
試験例２：カニクイザルにおける実験
用いたワクチンは、全粒子不活性化ワクチンのベトナム株から得られたNIBRG14（A/Vietnam）を用い、抗原量として総蛋白は９０μｇ、アジュバントとしてＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を５００μｇ用いた。
感染は、ベトナム株のウイルスを用いた。
【００３６】
［方法］
免疫応答を確認するために、カニクイザル（各群３匹：雌２匹／雄１匹）にワクチンを感染チャレンジ前の３回（７週前、４週前及び２週前の３回）経鼻接種し、経時的に抗体応答を観察した。
最終ワクチン投与後２週目に感染チャレンジを行った。
なお、コントロール群としてワクチン接種を行わないで感染チャレンジをした群をおいた。
【００３７】
［結果］
図１及び図２に、各群における唾液中のＩｇＡ抗体量（平均値）の変化を示した。
図１はワクチン投与群の結果であり、図２はコントロール群の結果である。
図中に示した結果からも判明するように、ワクチン投与群においては、唾液中に良好に特異的ＩｇＡ抗体の産生が観察され、ウイルス感染チャレンジ後においてもＩｇＡ抗体の減少は認められたものの、高い抗体価で推移しているのが判明する。
これに対してコントロール群は、ワクチン投与期間においてＩｇＡ抗体の産生が低いものであり、ウイルス感染チャレンジ後に顕著にＩｇＡ抗体産生の低下が認められた。
【００３８】
図３及び図４に、血清中のＩｇＧ抗体量の変化を示した。
図３はワクチン投与群の結果であり、図４はコントロール群の結果である。
図中に示した結果からも判明するように、ワクチン投与群においては、２回の接種で血中のＩｇＧ抗体の産生がかなり高く誘導されており、この値はコントロール群に感染した２週間後の値よりも高いものであった。
【００３９】
症状としては、コントロール群においては、全てのサルにおいて摂食することがなくなり、うつうつの状態が継続し、鼻水、咳、下痢等の症状が観察され、その症状が２週間程度継続し、徐々に改善されていった。
これに対して、経鼻ワクチン投与群では、摂食行動に全くの変化はなく、臨床症状も全く観察されなかった。
【産業上の利用可能性】
【００４０】
以上記載のように、本発明の経鼻投与アジュバントは、非特異的抗原或いは特異的抗原と共に経鼻投与されるものであり、粘膜上で効率的にＩｇＡ抗体を誘導し、産生されたＩｇＡ抗体が鼻づまり症状を惹起する外部抗原を中和することにより効果的に鼻づまり等の鼻炎症状を緩和することができる。
これまで、抗アレルギー剤の投与により鼻炎症状を緩和するしか方法がなかった現状下で、眠気等の副作用がなく、効果的、且つ即効的に鼻づまり等の鼻炎症状を緩和できるものであり、特に粉末状、或いは噴霧状の液体として簡便に鼻腔粘膜上に投与し得る点で、その有用性は多大なものである。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】試験例２の結果を示す図であり、アカゲサルにおけるアジュバント投与群の唾液中ＩｇＡ抗体産生の程度を示す図である。
【図２】試験例２の結果を示す図であり、アカゲサルにおけるコントロール群の唾液中ＩｇＡ抗体産生の程度を示す図である。
【図３】試験例２の結果を示す図であり、アカゲサルにおけるアジュバント投与群の血清中ＩｇＧ抗体産生の程度を示す図である。
【図４】試験例２の結果を示す図であり、アカゲサルにおけるコントロール群の血清中ＩｇＧ抗体産生の程度を示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、粘膜、特に呼吸器粘膜、例えば鼻腔粘膜に滞留的に投与することにより、効果的にＩｇＡ抗体の産生を誘導させ、鼻づまり等の鼻炎症状を緩和する経鼻投与アジュバントに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年の生活環境の変化に伴って、各種アレルゲンに起因するアレルギー症状に罹患する人が増大している。特に春先のスギ花粉に起因する花粉症患者の増大はめまぐるしく、スギ花粉に限らず、他の植物の花粉（例えば、ヒノキ、ブタクサ等の花粉）、ハウスダスト、或いは自動車の排気ガス等に起因するアレルギー症状の増大が社会的な問題となってきている。
【０００３】
このようなアレルギー症状の緩和には、一義的に各種抗アレルギー剤の投与が行われているが、これらの抗アレルギー剤には眠気等の副作用等の発現が多く、また、そのようなアレルギー症状に罹患した患者は特に鼻づまり等の鼻炎症状が一つの苦痛となり、通常の生活に支障を来すまでになっている。
【０００４】
最近アレルギー症状に対する一つの療法として減感作療法が行われている。減感作療法とは即時型アレルギーの原因となるアレルゲンを少量ずつアレルギー患者に投与することによって原因アレルゲンに対する感受性を低下させる療法であり、特に吸入型アレルゲン（花粉、ハウスダスト等）の場合に用いられ、例えば、花粉症の場合はスギ花粉などのエキスを、長い時間をかけ少しずつ注射し、身体を徐々に慣れさせていく治療法である。
【０００５】
その機序は、投与アレルゲンによって、アレルギー性疾患の原因となるレアギン（ＩｇＥ抗体の一種）とは異なる別個の抗体（阻止抗体または遮断抗体）が産生され、これが侵入するアレルゲンと結合することによってアレルゲンとレアギンが結合してアレルギー反応を起こすのを阻止すると考えられている。
【０００６】
本発明者も、アレルギー症状の緩和、特に鼻づまり等の鼻炎症状の緩和を目的として種々検討を加えてきている。
その中で、これまでにウイルスに対する粘膜投与型ワクチンをいくつか提案してきている（特許文献１〜３）。これまで提案してきている粘膜投与型ワクチンは、ウイルスの不活性抗原のワクチン効果をより完全なものとすることを目的として、ワクチンに対するアジュバント作用を有する物質を同時に効果的に鼻腔内粘膜上に投与するものであり、例えば、液状のワクチンをアジュバントと共に霧状に噴霧したり、或いは微粉末状にして噴霧したりするものであり、粘膜上におけるＩｇＡ抗体の誘導を確保したものであり、その点で特異的なものである。
【０００７】
ところで、アレルギー症状の緩和療法としての減感作療法においては、スギ花粉等のアレルゲンの投与ではＩｇＥ抗体（レアギン）だけしか誘導されず、即効的な花粉症対策にはならない。これに対して、上記経鼻投与型ワクチン投与では効率よくＩｇＡ抗体が産生され、それに基づく血清中でのＩｇＧ抗体応答が得られ、アレルギー症状の緩和を得ることができる。
かかる点を考慮すると、アジュバントと共に非特異的抗原、或いは特異的抗原を経鼻投与することによりＩｇＡ抗体が誘導され、誘導されたＩｇＡ抗体が外部抗原を中和し、効率的に鼻づまり等の鼻炎症状を緩和するものと考えられる。
【０００８】
本発明者は、上記の考えに基づいて、非特異的抗原、或いは特異的抗原に対するアジュバント作用を有する物質（アジュバント）と共に経鼻投与すれば、効率的に粘膜上でのＩｇＡ抗体分泌が行われ、かかるＩｇＡ抗体が外部抗原を中和することにより鼻づまり症状を改善する効果が認められることを確認し、本発明を完成させるに至った。
【特許文献１】特開２００５−０８２５８１号公報
【特許文献２】特開２００７−０７７０７３号公報
【特許文献３】特開２００８−２３１０３７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
したがって、本発明は、粘膜、好ましくは呼吸器粘膜、例えば鼻腔粘膜に滞留的に投与することにより、効果的にＩｇＡ抗体の産生を誘導させる経鼻投与アジュバントと提供すること、更には、かかる経鼻投与アジュバントにより効率的に鼻づまり症状を改善させることを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
かかる課題を解決するための本発明は、その基本的な一態様として、アジュバント作用物質と共に、抗原としてインフルエンザワクチン、アレルギー抗原、又はツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）を含有し、ＩｇＡ抗体を誘導することを特徴とする経鼻投与アジュバントである。
【００１１】
また本発明は、さらにフクシン、フクシン酸又は塩基性フクシン、或いは細胞染色試薬を含有するＩｇＡ抗体を誘導する経鼻アジュバントである。
【００１２】
また、本発明は上記の経鼻投与アジュバンであって、さらに増粘剤を含むことを特徴とするＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバントであり、増粘剤が、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、デンプンリン酸エステルナトリウム、メチルセルロース又はポリアクリル酸ナトリウムからなる群から選択されるものである経鼻投与アジュバントである。
【００１３】
より具体的には、本発明はアジュバントが、ＴＬＲ（Toll-Like Receptor）のリガンドである二重鎖または一重鎖ＲＮＡであり、当該一重鎖ＲＮＡが、Ｐｏｌｙ（Ｉ）又はＰｏｌｙ（Ｃ）であり、さらに二重鎖ＲＮＡが、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）又はＰｏｌｙ（Ａ：Ｃ）であるＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバントである。
【００１４】
最も具体的には、本発明は、アジュバントであるＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）又はＰｏｌｙ（Ａ：Ｃ）の分子サイズが１〜３００ｂｐ以上であるＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバントである。
【００１５】
また本発明は、アジュバントが、ＣＴＢ（コレラ毒素Ｂサブユニット）、キチン、キトサン、ホッキ貝又はホタテ貝の微粉末であるＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバントである。
【００１６】
さらに本発明は、別の態様として、アレルギー性鼻炎又は花粉症に基づく鼻づまり症状の治療のための上記したＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバントであり、アジュバントを凍結乾燥し粉末の形態にし、含有することを特徴とするＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバントである。
【００１７】
また更に本発明は、ヒト以外の動物に対するアレルギー症状の治療のための上記したＩｇＡ抗体を誘導することを特徴とする経鼻投与アジュバントである。
【発明の効果】
【００１８】
本発明が提供する経鼻投与アジュバントは、非特異的抗原或いは特異的抗原と共に経鼻投与されるものであり、粘膜上で効率的にＩｇＡ抗体を誘導し、産生されたＩｇＡ抗体が鼻づまり症状を惹起する外部抗原を中和することにより効果的に鼻づまり等の鼻炎症状を緩和することができる。
これまで、抗アレルギー剤の投与により鼻炎症状を緩和するしか方法がなかった現状下で、眠気等の副作用がなく、効果的、且つ即効的に鼻づまり等の鼻炎症状を緩和できる点で、特に有用なものである。
また、本発明が提供する経鼻投与アジュバントは、粉末状、或いは噴霧状の液体として簡便に鼻腔粘膜上に投与し得るものであり、その有用性は多大なものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
本発明が提供する経鼻投与アジュバントにおいて、アジュバントとして使用されるＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）誘導体は、Ｔｏｌｌ様レセプター（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＴＬＲ）のリガンドである二重鎖ＲＮＡであり、自然免疫系を刺激するＴＬＲのリガンドとして、病原菌あるいはウイルス等の微生物の攻撃に対する防御免疫獲得能を発揮する。
事実、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を含むＴＬＲのリガンドである二重鎖ＲＮＡが、アジュバントとしてワクチンと共に投与された場合には、そのワクチン能を増強させるのではなく、二重鎖ＲＮＡであるＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）自体が、種々の病原菌あるいはウイルス等の病原体の攻撃に対する防御免疫能を増強せしめ、特にウイルスまたは病原菌特異的ＩｇＡ抗体及びＩｇＧ抗体を誘導させることによって病原体による感染を防御する。
本発明においては、かかるＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）自体が産生するＩｇＡ抗体により外部抗原を中和するものであり、これにより鼻づまり等の鼻炎症状を緩和することとなる。
【００２０】
本発明で使用する二重鎖ＲＮＡであるＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）は、その分子の大きさとしては、その塩基対（ｂｐ）として低〜高サイズの種々のものを用いることが可能であるが、免疫応答に対してより優れた応答を発揮するものは、１〜３００ｂｐ以上の分子サイズを有することが必要であることが判明した。そのような分子サイズを有するものとして、例えば、１００〜１０００ｂｐのＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）は、容易に入手することができる。
【００２１】
アジュバントとしては上記したＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）誘導体に限定されるものではなく、一重鎖ＲＮＡであるＰｏｌｙ（Ｉ）又はＰｏｌｙ（Ｃ）であり、さらに二重鎖ＲＮＡとしてＰｏｌｙ（Ａ：Ｃ）等、アジュバント作用を有する物質であれば、広く本発明の経鼻投与アジュバントとして使用することができることはいうまでもない。
さらに、そのようなアジュバント作用を有する物質として、例えば、キチン、キトサン、ホッキ貝又はホタテ貝の微粉末、β−グルカン、マンノース誘導体、更にはＣＴＢ（コレラ毒素Ｂサブユニット）等を挙げることができる。
【００２２】
一方、本発明が提供する経鼻投与アジュバントにより、アジュバントと共に投与される非特異的抗原或いは特異的抗原としては、インフルエンザワクチン、アレルギー抗原、又はツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）等を挙げることができる。
しかしながら、これらに限定されるものではなく、鼻炎症状を惹起する各種の抗原を挙げることができる。
【００２３】
本発明が提供する経鼻投与アジュバントは、アジュバントであるＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）誘導体、または他のアジュバントにさらにフクシン、フクシン酸又は塩基性フクシン、或いは細胞染色試薬を含有させることができる。
フクシン、フクシン酸又は塩基性フクシンは、一般的に染色試薬として使用されている物質であるが、抗ウイルス作用や抗菌作用を持つことが知られているこれらの物質はアジュバント共に経鼻投与されることにより、より感染防御に役立つと考えられる。特にヒト生細胞を傷つけずに染色（生体染色）され得るため、一般細胞への毒性は極めて低い。
同様な観点から、細胞染色試薬もアジュバントと共に経鼻投与することにより効果的にＩｇＡ抗体を産生させるものであり、このような細胞染色試薬としてクリスタルバイオレットやゲンチアンバイオレットなどを挙げることができる。
【００２４】
また、本発明の経鼻投与アジュバントにおいては、アジュバントと共に増粘剤を一緒に投与するのが効果的である。
本発明でアジュバントと共に使用する増粘剤としては、例えば、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、デンプンリン酸エステルナトリウム、メチルセルロース又はポリアクリル酸ナトリウム等をあげることができる。
増粘剤としては、上記のものに限定されるものではなく、粘膜上で増粘作用を発揮し、アジュバントと共に粘膜上に滞留させ得るものであれば、どのようなものでも使用することができる。
なお、アジュバントとしてのキチン、キトサン、β−グルカン、キチン微粒子、或いはマンノース誘導体にあっては、増粘剤としての作用も発揮する。
【００２５】
本発明が提供する経鼻投与アジュバントの投与量として、投与する対象者の年齢、体重、投与方法により一概に限定し得ないが、通常成人１回当たり、０．０１〜１０ｍｇ、好ましくは、０．０１〜１ｍｇ程度であることより、これに対応した抗原、アジュバント、フクシン、フクシン酸等、更には増粘剤の量を調整すればよい。
具体的には、抗原としてのインフルエンザワクチン、アレルギー抗原、又はツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）の量としては、０．１〜５００μｇであり、フクシン、フクシン酸等の量としては抗原と同程度の０．１〜１０μｇを用いるのがよい。
また、増粘剤の量としては０．０１〜１０ｍｇの範囲で適宜調整することができる。
【００２６】
本発明の経鼻投与アジュバントの投与は、微粉末を鼻腔内粘膜上に噴霧することにより行うことができる。また、懸濁製剤として同様鼻腔内粘膜上に噴霧することにより行うことができる。ヒトの粘膜には、消化器、呼吸器、排出器、生殖器などの特に外通性の中腔器官の内壁が含まれる。しかしながら、本発明経鼻投与アジュバントとしては、鼻腔投与（経鼻投与）が好まし。鼻腔は特に、抗原進入の門戸であることから、粘膜投与により分泌型ＩｇＡ反応を引き起こし、粘膜上皮細胞中に分泌型ＩｇＡ抗体を産生させ、進入する抗原を中和し、鼻づまり等の鼻炎症状を緩和するものである。
【００２７】
さらに本発明は、ヒト以外の動物、例えば、イヌ、猫等の愛玩動物、或いは家畜等の動物に対するアレルギー症状の治療のためのＩｇＡ抗体を誘導することを特徴とする経鼻投与アジュバントを提供するものであり、最近の愛玩動物が罹患するアレルギー症状を効果的に緩和する点で、特に優れたものである。
【実施例】
【００２８】
以下に本発明を、実施例に代わる具体的試験例より、さらに詳細に説明する。
試験例１：マウスにおける実験（その１）
【００２９】
免疫スケジュールとしては、ワクチンとして全粒子不活性化ワクチンのベトナム株から得られたNIBRG14（A/Vietnam）１μｇを用い、アジュバントとしてＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を１０μｇ用いた。
マウス［ＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢、雌性）］で経鼻、若しくは皮下接種で２回接種後、チャレンジを３種のcladeの異なる、ワクチン株と同じ抗原性を持つベトナム株、あとは１９９７年に香港で流行を起こした香港株のＨ５Ｎ１株、あとはclade２に属するインドネシアで分離されたＨ５Ｎ１株（いずれもヒトから分離した株）で攻撃感染実験を実施した。
【００３０】
［結果］
（１）NIBRG14（A/Vietnam）に対する抗体誘導は、接種ルートを経鼻の場合と、皮下接種した場合を比較すると、皮下接種では鼻粘膜上のＩｇＡ抗体は全く誘導されなかった。
これに対して、経鼻接種した場合には、鼻粘膜上にＩｇＡ抗体が誘導され、血中の中和抗体価を調べた結果、中和抗体は、ベトナム株に対してのみ認められており、他の株では認められず、他の香港株、インドネシア株に対する中和抗体価は全く認められなかった。
【００３１】
次に、チャレンジした後の生存と、感染３日後の鼻腔内でのウイルス価を測定した。
まず、ワクチン株と同じ抗原性を有するベトナム株でチャレンジした場合、皮下接種群と経鼻接種群共に、生存率は１００％であったが、コントロール群としてワクチン接種をしない群のマウスでの死亡率は１００％であった。
ところが、鼻粘膜上のウイルス価を検討すると、皮下接種群では、有意にウイルス価は減少していたが、経鼻接種群では、生きたウイルスの分離は認められなかった。
このことは、経鼻接種により、ウイルス感染自体防御し、その結果１００％の生存率を得たこととなる。
【００３２】
（２）１９９７年の香港株でチャレンジした場合には、皮下接種群ではウイルスの減少は全く認められず、生存率も全く認められず、１００％の死亡を示していた。
これに対し、経鼻接種の場合には、生存率は８０％であり、ウイルス価の減少が認められた。
【００３３】
（３）１０００ＰＦＵのウイルス価で感染させるインドネシア株でチャレンジした場合には、経鼻接種群では有意に、また皮下接種群においてもウイルス価の減少は認められたが、生存率において、経鼻接種群は１００％、皮下接種群は４０％、コントロール群は２０％であった。
【００３４】
以上のように、マウスにおいてアジュバント効果を認めたので、ヒトに近い霊長類であるサルを用いて検討を行った。
【００３５】
試験例２：カニクイザルにおける実験
用いたワクチンは、全粒子不活性化ワクチンのベトナム株から得られたNIBRG14（A/Vietnam）を用い、抗原量として総蛋白は９０μｇ、アジュバントとしてＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を５００μｇ用いた。
感染は、ベトナム株のウイルスを用いた。
【００３６】
［方法］
免疫応答を確認するために、カニクイザル（各群３匹：雌２匹／雄１匹）にワクチンを感染チャレンジ前の３回（７週前、４週前及び２週前の３回）経鼻接種し、経時的に抗体応答を観察した。
最終ワクチン投与後２週目に感染チャレンジを行った。
なお、コントロール群としてワクチン接種を行わないで感染チャレンジをした群をおいた。
【００３７】
［結果］
図１及び図２に、各群における唾液中のＩｇＡ抗体量（平均値）の変化を示した。
図１はワクチン投与群の結果であり、図２はコントロール群の結果である。
図中に示した結果からも判明するように、ワクチン投与群においては、唾液中に良好に特異的ＩｇＡ抗体の産生が観察され、ウイルス感染チャレンジ後においてもＩｇＡ抗体の減少は認められたものの、高い抗体価で推移しているのが判明する。
これに対してコントロール群は、ワクチン投与期間においてＩｇＡ抗体の産生が低いものであり、ウイルス感染チャレンジ後に顕著にＩｇＡ抗体産生の低下が認められた。
【００３８】
図３及び図４に、血清中のＩｇＧ抗体量の変化を示した。
図３はワクチン投与群の結果であり、図４はコントロール群の結果である。
図中に示した結果からも判明するように、ワクチン投与群においては、２回の接種で血中のＩｇＧ抗体の産生がかなり高く誘導されており、この値はコントロール群に感染した２週間後の値よりも高いものであった。
【００３９】
症状としては、コントロール群においては、全てのサルにおいて摂食することがなくなり、うつうつの状態が継続し、鼻水、咳、下痢等の症状が観察され、その症状が２週間程度継続し、徐々に改善されていった。
これに対して、経鼻ワクチン投与群では、摂食行動に全くの変化はなく、臨床症状も全く観察されなかった。
【産業上の利用可能性】
【００４０】
以上記載のように、本発明の経鼻投与アジュバントは、非特異的抗原或いは特異的抗原と共に経鼻投与されるものであり、粘膜上で効率的にＩｇＡ抗体を誘導し、産生されたＩｇＡ抗体が鼻づまり症状を惹起する外部抗原を中和することにより効果的に鼻づまり等の鼻炎症状を緩和することができる。
これまで、抗アレルギー剤の投与により鼻炎症状を緩和するしか方法がなかった現状下で、眠気等の副作用がなく、効果的、且つ即効的に鼻づまり等の鼻炎症状を緩和できるものであり、特に粉末状、或いは噴霧状の液体として簡便に鼻腔粘膜上に投与し得る点で、その有用性は多大なものである。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】試験例２の結果を示す図であり、アカゲサルにおけるアジュバント投与群の唾液中ＩｇＡ抗体産生の程度を示す図である。
【図２】試験例２の結果を示す図であり、アカゲサルにおけるコントロール群の唾液中ＩｇＡ抗体産生の程度を示す図である。
【図３】試験例２の結果を示す図であり、アカゲサルにおけるアジュバント投与群の血清中ＩｇＧ抗体産生の程度を示す図である。
【図４】試験例２の結果を示す図であり、アカゲサルにおけるコントロール群の血清中ＩｇＧ抗体産生の程度を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アジュバント作用物質と共に、抗原としてインフルエンザワクチン、アレルギー抗原、又はツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）を含有し、ＩｇＡ抗体を誘導することを特徴とする経鼻投与アジュバント。
【請求項２】
さらにフクシン、フクシン酸又は塩基性フクシンを含有する請求項１に記載のＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバント。
【請求項３】
さらに増粘剤を含むことを特徴とする請求項１又は２に記載のＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバント。
【請求項４】
アジュバントが、ＴＬＲ（Toll-Like Receptor）のリガンドである二重鎖または一重鎖ＲＮＡである請求項１、２又は３に記載のＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバント。
【請求項５】
一重鎖ＲＮＡが、Ｐｏｌｙ（Ｉ）又はＰｏｌｙ（Ｃ）である請求項４に記載のＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバント。
【請求項６】
二重鎖ＲＮＡが、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）又はＰｏｌｙ（Ａ：Ｃ）である請求項４に記載のＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバント。
【請求項７】
Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の分子サイズが３００ｂｐ以上である請求項６に記載のＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバント。
【請求項８】
アジュバントが、ＣＴＢ（コレラ毒素Ｂサブユニット）、キチン、キトサン、ホッキ貝又はホタテ貝の微粉末である請求項１に記載のＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバント。
【請求項９】
増粘剤が、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、デンプンリン酸エステルナトリウム、メチルセルロース又はポリアクリル酸ナトリウムからなる群から選択されるものである請求項２に記載のＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバント。
【請求項１０】
アジュバントを凍結乾燥し粉末の形態にし、含有することを特徴とする請求項１〜９のいずれかに記載のＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバント。
【請求項１１】
アレルギー性鼻炎又は花粉症に基づく鼻づまり症状の治療のための請求項１〜１０のいずれかに記載のＩｇＡ抗体を誘導することを特徴とする経鼻投与アジュバント。
【請求項１２】
ヒト以外の動物に対するアレルギー症状の治療のための請求項１〜１０のいずれかに記載のＩｇＡ抗体を誘導することを特徴とする経鼻投与アジュバント。
【請求項１】
アジュバント作用物質と共に、抗原としてインフルエンザワクチン、アレルギー抗原、又はツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）を含有し、ＩｇＡ抗体を誘導することを特徴とする経鼻投与アジュバント。
【請求項２】
さらにフクシン、フクシン酸又は塩基性フクシンを含有する請求項１に記載のＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバント。
【請求項３】
さらに増粘剤を含むことを特徴とする請求項１又は２に記載のＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバント。
【請求項４】
アジュバントが、ＴＬＲ（Toll-Like Receptor）のリガンドである二重鎖または一重鎖ＲＮＡである請求項１、２又は３に記載のＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバント。
【請求項５】
一重鎖ＲＮＡが、Ｐｏｌｙ（Ｉ）又はＰｏｌｙ（Ｃ）である請求項４に記載のＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバント。
【請求項６】
二重鎖ＲＮＡが、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）又はＰｏｌｙ（Ａ：Ｃ）である請求項４に記載のＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバント。
【請求項７】
Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の分子サイズが３００ｂｐ以上である請求項６に記載のＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバント。
【請求項８】
アジュバントが、ＣＴＢ（コレラ毒素Ｂサブユニット）、キチン、キトサン、ホッキ貝又はホタテ貝の微粉末である請求項１に記載のＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバント。
【請求項９】
増粘剤が、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、デンプンリン酸エステルナトリウム、メチルセルロース又はポリアクリル酸ナトリウムからなる群から選択されるものである請求項２に記載のＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバント。
【請求項１０】
アジュバントを凍結乾燥し粉末の形態にし、含有することを特徴とする請求項１〜９のいずれかに記載のＩｇＡ抗体を誘導する経鼻投与アジュバント。
【請求項１１】
アレルギー性鼻炎又は花粉症に基づく鼻づまり症状の治療のための請求項１〜１０のいずれかに記載のＩｇＡ抗体を誘導することを特徴とする経鼻投与アジュバント。
【請求項１２】
ヒト以外の動物に対するアレルギー症状の治療のための請求項１〜１０のいずれかに記載のＩｇＡ抗体を誘導することを特徴とする経鼻投与アジュバント。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２０１０−１８９３１４（Ｐ２０１０−１８９３１４Ａ）
【公開日】平成２２年９月２日（２０１０．９．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−３５４１３（Ｐ２００９−３５４１３）
【出願日】平成２１年２月１８日（２００９．２．１８）
【出願人】（５０１３６９６１７）
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年９月２日（２０１０．９．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年２月１８日（２００９．２．１８）
【出願人】（５０１３６９６１７）
【Ｆターム（参考）】
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