ｃＤＮＡからの非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの回収のための改良方法
ＲＮＡポリメラーゼをエンコードする発現ベクターで一過性にトランスフェクトされた宿主細胞において必須のウイルスタンパク質Ｎ、ＰおよびＬと共にウイルスｃＤＮＡを共発現させることを含む、モノネガウイルス目の感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成するための方法を提供する。別の方法では、ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターとＲＮＡポリメラーゼ、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質をエンコードする１つまたはそれ以上のベクターとを用いて宿主細胞がトランスフェクトされた後に、その宿主細胞は組換えウイルスの回収を増大させるのに十分な条件下で効果的な熱ショックに曝される。その他別の実施形態では、ウイルスレスキューが始まった後に宿主細胞はプラークエキスパンション細胞を含む共培養物中に移され、組み立てられた感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが共培養物中から回収される。また、本発明中で提供されるものとしては、モノネガウイルス目の感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成するための組成物、前記方法を用いて生成される組換えウイルスおよび組成物、並びにその組換えウイルスを用いた免疫原性組成物および方法がある。更なる実施形態では、本発明方法および組成物は増殖欠損または複製欠損非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスおよびサブウイルス粒子が生成されるために用いられる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
モノネガウイルス目の感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成するための方法であって、以下の工程：
（ａ）ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクターを宿主細胞に導入し、ここで該宿主細胞はＮタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質を発現し、一過性にトランスフェクトされた発現ベクターからＲＮＡポリメラーゼを一過性に発現するところの工程；および
（ｂ）該宿主細胞から組み立てられた感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項２】
ＲＮＡポリメラーゼがＴ７ＲＮＡポリメラーゼであるところの、請求項１記載の方法。
【請求項３】
一過性にトランスフェクトされた発現ベクターがプラスミドであるところの、請求項１記載の方法。
【請求項４】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードし、その一過性発現を指令する一過性発現ベクターが、ＤＮＡトランスフェクション混合物中で組み合わされており、同調的トランスフェクションを達成するよう宿主細胞培養物中に同時に加えられるところの、請求項１記載の方法。
【請求項５】
ＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性にトランスフェクトされる発現ベクターの導入の前に、ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターが宿主細胞中に導入されるところの、請求項１記載の方法。
【請求項６】
ＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性にトランスフェクトされる発現ベクターの導入後であり、該ＲＮＡポリメラーゼが検出可能なレベルに宿主細胞中で蓄積する前に、ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターが宿主細胞中に導入されるところの、請求項１記載の方法。
【請求項７】
１つまたはそれ以上のウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性にトランスフェクトされる発現ベクターが、リン酸カルシウムトランスフェクションまたはエレクトロポレーションにより宿主細胞中に導入されるところの、請求項１記載の方法。
【請求項８】
１つまたはそれ以上のウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性にトランスフェクトされる発現ベクターが宿主細胞中に導入された後、その宿主細胞が組換えウイルスの回収を増大させるのに十分な条件下で効果的な熱ショックに曝されるところの、請求項１記載の方法。
【請求項９】
宿主細胞が３７℃以上の熱ショック温度に曝されるところの、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
宿主細胞が約３７℃〜約５０℃の範囲の熱ショック温度に曝されるところの、請求項８記載の方法。
【請求項１１】
宿主細胞が約４１℃〜約４７℃の範囲の熱ショック温度に曝されるところの、請求項８記載の方法。
【請求項１２】
宿主細胞が少なくとも約５分間の効果的な熱ショックにかけられるところの、請求項８記載の方法。
【請求項１３】
宿主細胞が約１５分〜約２００分間の効果的な熱ショックにかけられるところの、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
宿主細胞が約３０分〜約１５０分間の効果的な熱ショックにかけられるところの、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードし、その発現を指令する一過性にトランスフェクトされた発現ベクターの発現を可能にするのに十分な時間の経過後に、宿主細胞を同一または異なる細胞型のプラークエキスパンジョン細胞と一緒に共培養し、レスキューされるウイルスがプラークエキスパンション細胞まで拡散することを可能とするところの、請求項１記載の方法。
【請求項１６】
宿主細胞がプラークエキスパンジョン細胞の少なくとも１つの層に移され、宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞の共培養を確立するところの、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
宿主細胞がプラークエキスパンション細胞と異なる細胞型であるところの、請求項１５記載の方法。
【請求項１８】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞がＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５およびＶｅｒｏ細胞からそれぞれ選択されるところの、請求項１５記載の方法。
【請求項１９】
宿主細胞が真核細胞であるところの、請求項１記載の方法。
【請求項２０】
宿主細胞が脊椎動物細胞であるところの、請求項１記載の方法。
【請求項２１】
宿主細胞がＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５およびＶｅｒｏ細胞から選択されるところの、請求項１記載の方法。
【請求項２２】
感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが完全ウイルスであるところの、請求項１記載の方法。
【請求項２３】
１つまたはそれ以上のＮ、ＰおよびＬタンパク質が異種の非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのものであるところの、請求項１記載の方法。
【請求項２４】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチド分子が、野生型の非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの配列をエンコードするところの、請求項１記載の方法。
【請求項２５】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがパラミクソウイルス科のメンバーであるところの、請求項１記載の方法。
【請求項２６】
非分節型、ネガティブ鎖ＲｎＡウイルスがラブドウイルス科のメンバーであるところの、請求項１記載の方法。
【請求項２７】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ヒト・パラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）、牛パラインフルエンザウイルス（ＢＰＩＶ）、キメラヒト−牛ＰＩＶ（ＨＢＰＩＶ）、麻疹ウイルス（ＭＶ）、または水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）から選択されるところの、請求項１記載の方法。
【請求項２８】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）の導入によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１記載の方法。
【請求項２９】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが１つまたはそれ以上の組換え技術的に導入された温度感受性（ｔｓ）弱毒性変異を組み込んでいるところの、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、生物学的に派生した変異非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスにおいて同定された１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）を組み込んでいるところの、請求項２８記載の方法。
【請求項３１】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、異種の、変異非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスにおいて同定された１つまたはそれ以上の変異に相当する１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）を組み込んでいるところの、請求項２８記載の方法。
【請求項３２】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、変異を特定するコドン中の２個または３個のヌクレオチド変化により特定される少なくとも１つの弱毒性変異を組み込んでいるところの、請求項２８記載の方法。
【請求項３３】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、増殖特徴の変化、弱毒性、温度感受性、低温適応、プラークサイズ、宿主域制限、または免疫原性の変化から選択される表現型変化を特定するヌクレオチド修飾によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１記載の方法。
【請求項３４】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、ウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内のＣ、Ｃ’、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨＡ、ＨＮ、Ｌ、Ｍ、Ｍ２−１、Ｍ２−２、ＮＳ１、ＮＳ２、ＳＨ、Ｖ、Ｙ１、および／またはＹ２読み取り枠（ＯＲＦ）および／または３’リーダー、５’トレーラー、および／または遺伝子間領域の１つまたはそれ以上を改変する組換え技術的修飾を組み込んでいるところの、請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの１つまたはそれ以上の遺伝子（群）が完全にもしくは部分的に欠失されているか、あるいはＲＮＡ修正部位における変異によって、フレームシフト変異によって、翻訳開始部位を改変する変異によって、遺伝子の読み取り枠（ＯＲＦ）中に１つまたはそれ以上のストップコドンを導入することによって、または転写シグナルにおける変異によって、該遺伝子（群）の発現が減少または除去されているところの、請求項１記載の方法。
【請求項３６】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、サイトカイン、Ｔ−ヘルパーエピトープ、制限部位マーカー、または哺乳動物宿主において免疫応答を誘発することができる微生物病原体もしくは寄生生物のタンパク質から選択される非ウイルス性分子をエンコードするように修飾されているところの、請求項１記載の方法。
【請求項３７】
該ゲノムまたは該アンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、キメラゲノムまたはアンチゲノムを形成するために、１つまたはそれ以上の異種病原体（群）の１つまたはそれ以上の抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）と組み合わされている部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノムを含むところの、請求項１記載の方法。
【請求項３８】
抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）が、余剰遺伝子（群）またはゲノム分節（群）として、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノムの非コード領域に隣接してまたは非コード領域内に付加されているところの、あるいは、抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）により、部分的なベクターゲノムまたはアンチゲノム中の１つまたはそれ以上の対応遺伝子（群）またはゲノム分節（群）が置換されているところの、請求項３７記載の方法。
【請求項３９】
異種遺伝子またはゲノム分節が、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノム内の対応遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子の順序位置（order position）に相当する位置に付加または置換されているところの、請求項３７記載の方法。
【請求項４０】
異種遺伝子またはゲノム分節が、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノム内の対応遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置と比較して、よりプロモーター近傍またはプロモーター遠位にある位置に付加または置換されているところの、請求項３７記載の方法。
【請求項４１】
ベクターゲノムまたはアンチゲノムが、キメラゲノムまたはアンチゲノムを形成するために、異種の非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの異種の抗原ドメイン、断片またはエピトープを１つまたはそれ以上組み込んでいるキメラ糖タンパク質をエンコードするように修飾されているところの、請求項３７記載の方法。
【請求項４２】
異種病原体が、麻疹ウイルス、サブグループＡおよびサブグループＢの呼吸器合胞体ウイルス、ヒト・パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ヒト・パピローマウイルス、１型および２型のヒト免疫不全ウイルス、単純疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス、狂犬病ウイルス、ヒト・メタプネウオモウイルス、エプスタイン・バーウイルス、フィロウイルス、ブンヤウイルス、フラビウイルス、アルファウイルス、またはインフルエンザウイルスから選択されるところの、請求項３７記載の方法。
【請求項４３】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）の導入によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項３７記載の方法。
【請求項４４】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、生物学的に派生した非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス変異体において同定された１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）を組み込んでいる、請求項３７記載の方法。
【請求項４５】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、増殖特徴の変化、弱毒性、温度感受性、低温適応、プラークサイズ、宿主域制限、または免疫原性の変化から選択される表現型変化を特定するヌクレオチド修飾によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項３７記載の方法。
【請求項４６】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、該ウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内のＣ、Ｃ’、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨＡ、ＨＮ、Ｌ、Ｍ、Ｍ２−１、Ｍ２−２、ＮＳ１、ＮＳ２、ＳＨ、Ｖ、Ｙ１、および／またはＹ２読み取り枠（ＯＲＦ）および／または３’リーダー、５’トレーラーおよび／または遺伝子間領域の１つまたはそれ以上を改変する組換え修飾を組み込んでいるところの、請求項３７記載の方法。
【請求項４７】
キメラゲノムまたはアンチゲノム内の１つまたはそれ以上の遺伝子（群）が完全にまたは部分的に欠失しているか、あるいは、該遺伝子（群）の発現がＲＮＡ修正部位における変異によって、フレームシフト変異によって、翻訳開始部位を改変する変異によって、遺伝子の読み取り枠（ＯＲＦ）中に１つまたはそれ以上のストップコドンを導入することによって、または転写シグナルにおける変異によって、低下または除去されているところの、請求項３７記載の方法。
【請求項４８】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、サイトカイン、Ｔ−ヘルパーエピトープ、制限部位マーカー、または哺乳動物宿主において免疫応答を誘発することができる微生物病原体もしくは寄生生物のタンパク質から選択される非ウイルス性分子をエンコードするように、修飾されているところの、請求項３７記載の方法。
【請求項４９】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、該非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内の遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置と比較して、よりプロモーター近傍またはプロモーター遠位にある位置に遺伝子またはゲノム分節の付加、置換あるいは転座によって修飾されているところの、請求項１記載の方法。
【請求項５０】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、遺伝子外性の３’リーダーもしくは５’トレーラー領域、遺伝子開始シグナル、遺伝子終止シグナル、修正領域、遺伝子間領域、または３’もしくは５’非コード領域を含む異種の調節要素を組み込むように修飾されているところの、請求項１記載の方法。
【請求項５１】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、該ゲノムまたはアンチゲノムの非コード領域（ＮＣＲ）中に、完全な読み取り枠（ＯＲＦ）を欠き、かつ非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの弱毒化表現型を特定する長さ１５０ヌクレオチド（ｎｔｓ）から４，０００ヌクレオチドのポリヌクレオチドの挿入をまたは分離した遺伝子単位（ＧＵ）として組み込むように修飾されているところの、請求項１記載の方法。
【請求項５２】
同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせを、宿主細胞中に同時導入および／または宿主細胞にて同時発現させることをさらに含む、請求項１記載の方法。
【請求項５３】
モノネガウイルス目の感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成するための方法であって、以下の工程：
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼ、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質をエンコードし、その一過性発現を指令する１つまたはそれ以上の一過性発現ベクターを、該ベクターの同時発現および組換えウイルスの生成を可能とするのに十分な条件下で、好適な宿主細胞中に導入する工程；
該宿主細胞をプラークエキスパンション細胞を含む共培養物中に移す工程；および
該共培養物中から組み立てられた感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項５４】
宿主細胞が同じもしくは異なる細胞型のプラークエキスパンション細胞と一緒に共培養され、レスキューされるウイルスをプラークエキスパンション細胞にまで拡散させるところの、請求項５３記載の方法。
【請求項５５】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞が、ＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５、またはＶｅｒｏ細胞からそれぞれ選択されるところの、請求項５３記載の方法。
【請求項５６】
１つまたはそれ以上のウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性発現ベクターが宿主細胞中に導入された後に、その宿主細胞が組換えウイルスの回収を増大させるのに十分な条件下で効果的な熱ショックに曝されるところの、請求項５３記載の方法。
【請求項５７】
同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせを、宿主細胞中に同時導入および／または宿主細胞にて同時発現させることをさらに含む、請求項５３記載の方法。
【請求項５８】
モノネガウイルス目の感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成するための方法であって、以下の工程：
（ａ）ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物を合成させるために発現制御配列と作動可能に連結された非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクターを、
（１）ＲＮＡポリメラーゼ、
（２）Ｎタンパク質、
（３）Ｐタンパク質、および
（４）Ｌタンパク質、
を一過性に発現させる宿主細胞であって、ＲＮＡポリメラーゼ、Ｎ、ＰおよびＬタンパク質のそれぞれが一過性にトランスフェクトされた発現ベクターから発現される宿主細胞中に導入する工程；および
（ｂ）該宿主細胞から組み立てられた感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項５９】
宿主細胞が、プラークエキスパンション細胞に対するレスキューされるウイルスの分散を可能とするために、同じもしくは異なる細胞型のプラークエキスパンション細胞と一緒に共培養されるところの、請求項５８記載の方法。
【請求項６０】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞が、ＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５、またはＶｅｒｏ細胞からそれぞれ選択されるところの、請求項５８記載の方法。
【請求項６１】
１つまたはそれ以上のウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性発現ベクターが宿主細胞中に導入された後に、その宿主細胞が組換えウイルスの回収を増大させるのに十分な条件下で効果的な熱ショックに曝されるところの、請求項５８記載の方法。
【請求項６２】
同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせを、宿主細胞中に同時導入および／または宿主細胞にて同時発現させることをさらに含む、請求項５８記載の方法。
【請求項６３】
モノネガウイルス目の感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成する方法であって、以下の工程：
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼ、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質をエンコードし、その一過性発現を指令する１つまたはそれ以上の一過性発現ベクターを、好適な宿主細胞中に導入する工程；
該宿主細胞から組み立てられた感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項６４】
少なくとも１つのＮ，ＰおよびＬタンパク質が発現制御プラスミドによってエンコードされているところの、請求項６３記載の方法。
【請求項６５】
宿主細胞が、プラークエキスパンション細胞に対するレスキューされるウイルスの分散を可能とするために、同じもしくは異なる細胞型のプラークエキスパンション細胞と一緒に共培養されるところの、請求項６３記載の方法。
【請求項６６】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞が、ＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５、またはＶｅｒｏ細胞からそれぞれ選択されるところの、請求項６３記載の方法。
【請求項６７】
１つまたはそれ以上のウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性発現ベクターが宿主細胞中に導入された後に、その宿主細胞が組換えウイルスの回収を増大させるのに十分な条件下で効果的な熱ショックに曝されるところの、請求項６３記載の方法。
【請求項６８】
同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせを、宿主細胞中に同時導入および／または宿主細胞にて同時発現させることをさらに含む、請求項６３記載の方法。
【請求項６９】
モノネガウイルス目の感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成するための組成物であって、
（ａ）好適な宿主細胞においてウイルスｃＤＮＡからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター；
（ｂ）宿主細胞にて
（１）Ｎタンパク質、
（２）Ｐタンパク質、および
（３）Ｌタンパク質、
をエンコードし、その発現を指令する、１つまたはそれ以上の補助ベクター；および、
（ｃ）ＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ宿主細胞中で一過性に発現させる一過性発現ベクター、
を含む組成物。
【請求項７０】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、Ｎ、ＰおよびＬをエンコードする１つまたはそれ以上の補助ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ一過性に発現させる一過性発現ベクターが、無細胞同時トランスフェクション混合物中にて提供されるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項７１】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、Ｎ、ＰおよびＬをエンコードする１つまたはそれ以上の補助ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ一過性に発現させる一過性発現ベクターが宿主細胞中にトランスフェクトされるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項７２】
ＲＮＡポリメラーゼがＴ７ＲＮＡポリメラーゼであるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項７３】
ＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ一過性に発現させる一過性発現ベクターがプラスミドであるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項７４】
プラークエキスパンション細胞に対する宿主細胞からレスキューされるウイルスの分散を可能とする、宿主細胞と同じもしくは異なる細胞型のプラークエキスパンション細胞をさらに含む、請求項６９記載の組成物。
【請求項７５】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞の共培養を確立するために、少なくとも１層のプラークエキスパンション細胞をさらに含む、請求項７４記載の組成物。
【請求項７６】
宿主細胞が、プラークエキスパンション細胞と異なる細胞型であるところの、請求項７４記載の組成物。
【請求項７７】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞が、ＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５、またはＶｅｒｏ細胞からそれぞれ選択されるところの、請求項７４記載の組成物。
【請求項７８】
宿主細胞が真核細胞であるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項７９】
宿主細胞が脊椎動物細胞であるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項８０】
宿主細胞が、ＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５、またはＶｅｒｏ細胞から選択されるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項８１】
感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが完全ウイルスであるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項８２】
１つまたはそれ以上のＮ，ＰおよびＬタンパク質が異種の非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのものであるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項８３】
ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチド分子が、野生型非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの配列をエンコードするところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項８４】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがパラミクソウイルス科のメンバーであるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項８５】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがラブドウイルス科のメンバーであるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項８６】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ヒト・パラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）、牛パラインフルエンザウイルス（ＢＰＩＶ）、キメラのヒト−牛ＰＩＶ（ＨＢＰＩＶ）、麻疹ウイルス（ＭＶ）、または水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）から選択されるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項８７】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）の導入によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項８８】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、組換え技術的に導入された温度感受性（ｔｓ）弱毒性変異を１つまたはそれ以上組み込んでいるところの、請求項８７記載の組成物。
【請求項８９】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、生物学的に派生した変異非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスにおいて同定された弱毒性変異（群）を１つまたはそれ以上組み込んでいるところの、請求項８７記載の組成物。
【請求項９０】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、異種の、非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスにおいて同定された１つまたはそれ以上の変異に相当する弱毒性変異（群）を１つまたはそれ以上組み込んでいるところの、請求項８７記載の組成物。
【請求項９１】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、変異を特定するコドン中の２個または３個のヌクレオチド変化によって特定される弱毒性変異を少なくとも１つ組み込んでいるところの、請求項８７記載の組成物。
【請求項９２】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、増殖特徴の変化、弱毒性、温度感受性、低温適応、プラークサイズ、宿主域制限、または免疫原性の変化から選択される、表現型変化を特定するヌクレオチド修飾によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項９３】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、該ウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内のＣ、Ｃ’、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨＡ、ＨＮ、Ｌ、Ｍ、Ｍ２−１、Ｍ２−２、ＮＳ１、ＮＳ２、ＳＨ、Ｖ、Ｙ１、および／またはＹ２読み取り枠（ＯＲＦ）および／または３’リーダー、５’トレーラー、および／または遺伝子間領域の１つまたはそれ以上を改変する組換え技術的修飾を組み込んでいるところの、請求項６９記載の方法。
【請求項９４】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの１つまたはそれ以上の遺伝子（群）が完全にもしくは部分的に欠失しているか、あるいは、該遺伝子（群）の発現がＲＮＡ修正部位における変異によって、フレームシフト変異によって、翻訳開始部位を改変する変異によって、遺伝子の読み取り枠（ＯＲＦ）中に１つまたはそれ以上のストップコドンを導入することによって、または転写シグナルにおける変異によって、低下または除去されているところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項９５】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、サイトカイン、Ｔ−ヘルパーエピトープ、制限部位マーカー、または哺乳動物宿主において免疫応答を誘発することができる微生物病原体もしくは寄生生物のタンパク質から選択される非ウイルス性分子をエンコードするように修飾されているところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項９６】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、キメラゲノムまたはアンチゲノムを形成するために、１つまたはそれ以上の異種病原体（群）の１つまたはそれ以上の抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）と組み合わされている、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノムを含むところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項９７】
抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）が、余剰遺伝子（群）またはゲノム分節（群）として、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノムの非コード領域に隣接してまたは非コード領域内に付加されているところの、あるいは、抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）により、部分的なベクターゲノムまたはアンチゲノム中の１つまたはそれ以上の対応遺伝子（群）またはゲノム分節（群）が置換されているところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項９８】
異種遺伝子またはゲノム分節が、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノム内の対応遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置に相当する位置に付加または置換されているところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項９９】
異種遺伝子またはゲノム分節が、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノム内の対応遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置と比較して、よりプロモーター近傍またはプロモーター遠位にある位置に付加または置換されているところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項１００】
ベクターゲノムまたはアンチゲノムが、キメラゲノムまたはアンチゲノムを形成するために、異種の非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの異種の抗原ドメイン、断片またはエピトープを１つまたはそれ以上組み込んでいるキメラ糖タンパク質をエンコードするように修飾されているところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項１０１】
異種病原体が、麻疹ウイルス、サブグループＡおよびサブグループＢの呼吸器合胞体ウイルス、ヒト・パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ヒト・パピローマウイルス、１型および２型のヒト免疫不全ウイルス、単純疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス、狂犬病ウイルス、ヒト・メタプネウオモウイルス、エプスタイン・バーウイルス、フィロウイルス、ブンヤウイルス、フラビウイルス、アルファウイルス、またはインフルエンザウイルスから選択されるところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項１０２】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）の導入によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項１０３】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、生物学的に派生した非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス変異体において同定された１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）を組み込んでいるところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項１０４】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、増殖特徴の変化、弱毒性、温度感受性、低温適応、プラークサイズ、宿主域制限、または免疫原性の変化から選択される、表現型変化を特定するヌクレオチド修飾によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項１０５】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、ウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内のＣ、Ｃ’、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨＡ、ＨＮ、Ｌ、Ｍ、Ｍ２−１、Ｍ２−２、ＮＳ１、ＮＳ２、ＳＨ、Ｖ、Ｙ１、および／またはＹ２読み取り枠（ＯＲＦｓ）および／または３’リーダー、５’トレーラー、および／または遺伝子間領域の１つまたはそれ以上を改変する組換え技術的修飾を組み込んでいるところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項１０６】
キメラゲノムまたはアンチゲノム内の１つまたはそれ以上の遺伝子（群）が完全にまたは部分的に欠失しているか、あるいは、該遺伝子（群）の発現がＲＮＡ修正部位における変異によって、フレームシフト変異によって、翻訳開始部位を改変する変異によって、遺伝子の読み取り枠（ＯＲＦ）中に１つまたはそれ以上のストップコドンを導入することによって、または転写シグナルにおける変異によって、低下または除去されているところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項１０７】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、サイトカイン、Ｔ−ヘルパーエピトープ、制限部位マーカー、または哺乳動物宿主において免疫応答を誘発することができる微生物病原体もしくは寄生生物のタンパク質から選択される非ウイルス性分子をエンコードするように修飾されているところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項１０８】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内の遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置と比較して、よりプロモーター近傍またはプロモーター遠位にある位置で、遺伝子またはゲノム分節の付加、置換または転座により修飾されているところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項１０９】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、遺伝子外性の３’リーダーもしくは５’トレーラー領域、遺伝子開始シグナル、遺伝子終止シグナル、修正領域、遺伝子間領域、または３’もしくは５’非コード領域を含む異種の調節要素を組み込むように修飾されているところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項１１０】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、該ゲノムまたはアンチゲノムの非コード領域（ＮＣＲ）中に、完全な読み取り枠（ＯＲＦ）を欠き、かつ非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの弱毒性表現型を特定する長さ１５０ヌクレオチド（ｎｔｓ）から４，０００ヌクレオチドのポリヌクレオチド挿入をまたは分離した遺伝子単位（ＧＵ）として組み込むように修飾されているところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項１１１】
１つまたはそれ以上の発現ベクター（群）が同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせをエンコードするところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項１１２】
モノネガウイルス目の感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスであって、以下の工程：
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質、およびＬタンパク質をエンコードし、その発現を指令する１つまたはそれ以上の補助ベクター（群）、並びに、ＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ一過性に発現させる一過性発現ベクターを、好適な宿主細胞中に導入し；そして
該宿主細胞から組み立てられた感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収すること、
によって生成されるウイルス。
【請求項１１３】
ＲＮＡポリメラーゼがＴ７ ＲＮＡポリメラーゼであるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１１４】
ＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ一過性に発現させる一過性発現ベクターがプラスミドであるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１１５】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質をエンコードし且つ発現させる１つまたはそれ以上の補助ベクター（群）、並びにＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ一過性に発現させる一過性発現ベクターが、ＤＮＡトランスフェクション混合液中に組み合わされており、同調的トランスフェクションを同時に達成するために宿主細胞培養物中に添加されるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１１６】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、およびＮタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質をエンコードし且つ発現させる１つまたはそれ以上の補助ベクター（群）が、ＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性発現ベクターの導入前に、宿主細胞中に導入されるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１１７】
ＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性発現ベクターの導入後であるが、ＲＮＡポリメラーゼが宿主細胞中で検出可能レベルに蓄積する前に、ウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、およびＮタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質をエンコードし且つ発現させる１つまたはそれ以上の補助ベクター（群）が宿主細胞中に導入されるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１１８】
１つまたはそれ以上の（ａ）ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよび（ｂ）ＲＮＡポリメラーゼ、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質、およびＬタンパク質をエンコードし且つ発現させる１つまたはそれ以上の補助ベクター（群）が、リン酸カルシウムトランスフェクション法またはエレクトロポレーション法により宿主細胞中に導入されるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１１９】
１つまたはそれ以上の（ａ）ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよび（ｂ）Ｎタンパク質、Ｐタンパク質、およびＬタンパク質をエンコードし且つ発現させる１つまたはそれ以上の補助ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ発現させる一過性発現ベクターが宿主細胞中に導入された後に、該宿主細胞が組換えウイルスの回収が向上するのに十分な条件下で効果的な熱ショックに曝さらされるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２０】
宿主細胞が、温度３７℃以上の熱ショック温度に曝されるところの、請求項１１９記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２１】
宿主細胞が、約３７℃〜約５０℃の範囲の熱ショック温度に曝されるところの、請求項１１９記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２２】
宿主細胞が、約４１℃〜約４７℃の範囲の熱ショック温度に曝されるところの、請求項１１９記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２３】
宿主細胞が、少なくとも約５分間の効果的な熱ショックにかけられるところの、請求項１１９記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２４】
宿主細胞が、約１５分〜約２００分間の効果的な熱ショックにかけられるところの、請求項１２３記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２５】
宿主細胞が、約３０分〜約１５０分間の効果的な熱ショックにかけられるところの、請求項１２４記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２６】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質、およびＬタンパク質をエンコードし且つ発現させる１つまたはそれ以上の補助ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ発現させる一過性発現ベクターの発現を行わせるのに十分な時間の経過後に、該宿主細胞がプラークエキスパンション細胞に対するレスキューされるウイルスの分散を可能とする同じもしくは異なる細胞型のプラークエキスパンション細胞と一緒に共培養されるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２７】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞の共培養を確立するために、宿主細胞が少なくとも１層のプラークエキスパンション細胞に移されるところの、請求項１２６記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２８】
宿主細胞がプラークエキスパンション細胞と異なる細胞型であるところの、請求項１２６記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２９】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞が、ＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５、またはＶｅｒｏ細胞からそれぞれ選択されるところの、請求項１２６記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３０】
宿主細胞が真核細胞であるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３１】
宿主細胞が脊椎動物細胞であるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３２】
宿主細胞が、ＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５、またはＶｅｒｏ細胞から選択されるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３３】
感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが完全ウイルスであるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３４】
１つまたはそれ以上のＮ、ＰおよびＬタンパク質が異種の非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのものであるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３５】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチド分子が、野生型の品文節方ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの配列をエンコードするところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３６】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがパラミクソウイルス科のメンバーであるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３７】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがラブドウイルス科のメンバーであるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３８】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ヒト・パラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）、牛パラインフルエンザウイルス（ＢＰＩＶ）、キメラのヒト−牛ＰＩＶ（ＨＢＰＩＶ）、麻疹ウイルス（ＭＶ）、または水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）から選択されるところの、請求項１０１記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３９】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）の導入によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４０】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、組換え技術的に導入された温度感受性（ｔｓ）弱毒性変異を１つまたはそれ以上組み込んでいるところの、請求項１３９記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４１】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、生物学的に派生した変異非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスにおいて同定される１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）を組み込んでいるところの、請求項１３９記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４２】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、異種の、変異非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスにおいて同定される１つまたはそれ以上の変異に相当する１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）を組み込んでいるところの、請求項１３９記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４３】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、変異を特定するコドン中の２個または３個のヌクレオチド変化により特定される少なくとも１つの弱毒性変異を組み込んでいるところの、請求項１３９記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４４】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、増殖特徴の変化、弱毒性、温度感受性、低温適応、プラークサイズ、宿主域制限、または免疫原性の変化から選択される、表現型変化を特定するヌクレオチド修飾によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４５】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、ウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内のＣ、Ｃ’、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨＡ、ＨＮ、Ｌ、Ｍ、Ｍ２−１、Ｍ２−２、ＮＳ１、ＮＳ２、ＳＨ、Ｖ、Ｙ１、および／またはＹ２読み取り枠（ＯＲＦ）および／または３’リーダー、５’トレーラー、および／または遺伝子間領域の１つまたはそれ以上を改変する組換え技術的修飾を組み込んでいるところの、請求項１４４記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４６】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの１つまたはそれ以上の遺伝子（群）が完全にもしくは部分的に欠失しているか、あるいは、該遺伝子（群）の発現が、ＲＮＡ修正部位における変異によって、フレームシフト変異によって、翻訳開始部位を改変する変異によって、遺伝子の読み取り枠（ＯＲＦ）中に１つまたはそれ以上のストップコドンを導入することによって、または転写シグナルにおける変異によって、低下または除去されているところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４７】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、サイトカイン、Ｔ−ヘルパーエピトープ、制限部位マーカー、または哺乳動物宿主において免疫応答を誘発することができる微生物病原体もしくは寄生生物のタンパク質から選択される非ウイルス性分子をエンコードするように修飾されているところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４８】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、キメラゲノムまたはアンチゲノムを形成するために、１つまたはそれ以上の異種病原体（群）の１つまたはそれ以上の抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）と組み合わされている部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノムを含むところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４９】
抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）が、余剰遺伝子（群）またはゲノム分節（群）として、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノムの非コード領域に隣接してまたは非コード領域内に付加されているところの、あるいは、抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）により、部分的なベクターゲノムまたはアンチゲノム中の１つまたはそれ以上の対応遺伝子（群）またはゲノム分節（群）が置換されているところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５０】
異種遺伝子またはゲノム分節が、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノム内の対応遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置に相当する位置に付加または置換されているところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５１】
異種遺伝子またはゲノム分節が、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノム内の対応遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置と比較して、よりプロモーター近傍またはプロモーター遠位にある位置に付加または置換されているところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５２】
ベクターゲノムまたはアンチゲノムが、キメラゲノムまたはアンチゲノムを形成するために、異種の非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの異種の抗原ドメイン、断片またはエピトープを１つまたはそれ以上組み込んでいるキメラ糖タンパク質をエンコードするように修飾されているところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５３】
異種病原体が、麻疹ウイルス、サブグループＡおよびサブグループＢの呼吸器合胞体ウイルス、ヒト・パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ヒト・パピローマウイルス、１型および２型のヒト免疫不全ウイルス、単純疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス、狂犬病ウイルス、ヒト・メタプネウオモウイルス、エプスタイン・バーウイルス、フィロウイルス、ブンヤウイルス、フラビウイルス、アルファウイルス、またはインフルエンザウイルスから選択されるところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５４】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）の導入によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５５】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、生物学的に派生した変異非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスにおいて同定された１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）を組み込んでいるところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５６】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、増殖特徴の変化、弱毒性、温度感受性、低温適応、プラークサイズ、宿主域制限、または免疫原性の変化から選択される、表現型変化を特定するヌクレオチド修飾によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５７】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、該ウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内のＣ、Ｃ’、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨＡ、ＨＮ、Ｌ、Ｍ、Ｍ２−１、Ｍ２−２、ＮＳ１、ＮＳ２、ＳＨ、Ｖ、Ｙ１、および／またはＹ２読み取り枠（ＯＲＦ）および／または３’リーダー、５’トレーラーおよび／または遺伝子間領域の１つまたはそれ以上を改変する組換え修飾を組み込んでいるところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５８】
キメラゲノムまたはアンチゲノム内の１つまたはそれ以上の遺伝子（群）が完全にまたは部分的に欠失しているか、あるいは、該遺伝子（群）の発現がＲＮＡ修正部位における変異によって、フレームシフト変異によって、翻訳開始部位を改変する変異によって、遺伝子の読み取り枠（ＯＲＦ）中に１つまたはそれ以上のストップコドンを導入することによって、または転写シグナルにおける変異によって、低下または除去されているところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５９】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、サイトカイン、Ｔ−ヘルパーエピトープ、制限部位マーカー、または哺乳動物宿主において免疫応答を誘発することができる微生物病原体もしくは寄生生物のタンパク質から選択される非ウイルス性分子をエンコードするように修飾されているところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１６０】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内の遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置と比較して、よりプロモーター近傍またはプロモーター遠位にある位置で、遺伝子またはゲノム分節の付加、置換または転座により修飾されているところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１６１】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、遺伝子外性の３’リーダーもしくは５’トレーラー領域、遺伝子開始シグナル、遺伝子終止シグナル、修正領域、遺伝子間領域、または３’もしくは５’非コード領域を含む異種の調節要素を組み込むように修飾されているところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１６２】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、該ゲノムまたはアンチゲノムの非コード領域（ＮＣＲ）中に、完全な読み取り枠（ＯＲＦ）を欠き、かつ非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの弱毒性表現型を特定する長さ１５０ヌクレオチド（ｎｔｓ）から４，０００ヌクレオチドのポリヌクレオチド挿入をまたは分離した遺伝子単位（ＧＵ）として組み込むように修飾されているところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１６３】
手順が、同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせを、宿主細胞中に同時導入および／または宿主細胞にて同時発現させることをさらに含むところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１６４】
医薬的に許容される担体中に、請求項１１２記載の手順に従って生成される、単離された感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの免疫原的有効量を含む、免疫原性組成物。
【請求項１６５】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、１０３〜１０７ＰＦＵの用量にて調剤されるところの、請求項１６４記載の免疫原性組成物。
【請求項１６６】
上部気道への投与のために調剤される、請求項１６４記載の免疫原性組成物。
【請求項１６７】
噴霧、液滴またはエアゾールによる投与のために調剤される、請求項１６４記載の免疫原性組成物。
【請求項１６８】
宿主細胞が、プラークエキスパンション細胞に対するレスキューされるウイルスの分散を可能とする、同じもしくは異なる細胞型のプラークエキスパンション細胞と一緒に共培養されるところの、請求項１６４記載の免疫原性組成物。
【請求項１６９】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞が、ＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５、またはＶｅｒｏ細胞からそれぞれ選択されるところの、請求項１６４記載の免疫原性組成物。
【請求項１７０】
１つまたはそれ以上のウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性発現ベクターが宿主細胞中に導入された後に、その宿主細胞が組換えウイルスの回収を増大させるのに十分な条件下で効果的な熱ショックに曝されるところの、請求項１６４記載の免疫原性組成物。
【請求項１７１】
同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせを、宿主細胞中に同時導入および／または宿主細胞にて同時発現させることをさらに含む、請求項１６４記載の免疫原性組成物。
【請求項１７２】
哺乳動物被検体に非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスに対する免疫応答を誘発するために該被検体の免疫系を刺激する方法であって、医薬的に許容される担体中の請求項１１２記載の手順に従って生成される、単離された感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの免疫原的有効量を、該被検体に投与することを含む方法。
【請求項１７３】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが１０３〜１０７ＰＦＵの用量にて投与されるところの、請求項１７２記載の方法。
【請求項１７４】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが上記気道に投与されるところの、請求項１７２記載の方法。
【請求項１７５】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが噴霧、液滴またはエアゾールによって投与されるところの、請求項１７２記載の方法。
【請求項１７６】
モノネガウイルス目の増殖−または複製−欠損非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成する方法であって、以下の工程：
（ａ）ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物を合成させるために発現制御配列と作動可能に連結された増殖−または複製−欠損非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクターを、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質を発現し且つ一過性にトランスフェクトされた発現ベクターからＲＮＡポリメラーゼを一過性に発現する宿主細胞中に導入する工程；および
（ｂ）該宿主細胞から組み立てられた増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項１７７】
該ウイルスが、宿主細胞中で組み立てられた後に一回の複製を完結できないところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１７８】
該ウイルスは、インビトロでの増殖および／または複製は可能であるが、インビボでの増殖−または複製−が欠損しているところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１７９】
一過性にトランスフェクトされた発現ベクターがプラスミドであるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１８０】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ一過性に発現させる一過性発現ベクターがＤＮＡトランスフェクション混合物中で組み合わされており、同時に同調的トランスフェクションを達成するよう宿主細胞培養物中に加えられるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１８１】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、およびＮ、Ｐ、Ｌタンパク質をエンコードする１つまたはそれ以上の補助ベクター（群）が、ＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性にトランスフェクトされた発現ベクターの導入前に、宿主細胞中に導入されるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１８２】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性にトランスフェクトされた発現ベクターが、リン酸カルシウムトランスフェクション法またはエレクトロポレーション法によって宿主細胞中に導入されるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１８３】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性にトランスフェクトされた発現ベクターが宿主細胞中に導入された後に、その宿主細胞が組換えウイルスの回収を増大させるのに十分な条件下で効果的な熱ショックに曝されるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１８４】
宿主細胞が３７℃以上の熱ショック温度に曝されるところの、請求項１８３記載の方法。
【請求項１８５】
宿主細胞が、少なくとも約５分間の効果的な熱ショックにかけられるところの、請求項１８３記載の方法。
【請求項１８６】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ発現させる一過性にトランスフェクトされた発現ベクターの発現を可能にするのに十分な時間の経過後に、宿主細胞が、プラークエキスパンション細胞に対してレスキューされるウイルスの分散を可能とする、同じもしくは異なる細胞型のプラークエキスパンション細胞と一緒に共培養されるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１８７】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞の共培養を確立するために、宿主細胞が少なくとも１層のプラークエキスパンション細胞に移されるところの、請求項１８６記載の方法。
【請求項１８８】
宿主細胞がプラークエキスパンション細胞と異なる細胞型であるところの、請求項１８６記載の方法。
【請求項１８９】
複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがサブウイルス粒子であるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１９０】
１つまたはそれ以上のＮ、ＰおよびＬタンパク質が異種の非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのものであるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１９１】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがパラミクソウイルス科のメンバーであるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１９２】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがラブドウイルス科のメンバーであるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１９３】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）の導入によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１９４】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、増殖特徴の変化、弱毒性、温度感受性、低温適応、プラークサイズ、宿主域制限、または免疫原性の変化から選択される、表現型変化を特定するヌクレオチド修飾によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１９５】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの１つまたはそれ以上の遺伝子（群）が完全にもしくは部分的に欠失しているか、あるいは、該遺伝子（群）の発現がＲＮＡ修正部位における変異によって、フレームシフト変異によって、翻訳開始部位を改変する変異によって、遺伝子の読み取り枠（ＯＲＦ）中に１つまたはそれ以上のストップコドンを導入することによって、または転写シグナルにおける変異によって、低下または除去されているところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１９６】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、キメラゲノムまたはアンチゲノムを形成するために、１つまたはそれ以上の異種病原体（群）の１つまたはそれ以上の抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）と組み合わされている部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノムを含むところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１９７】
異種遺伝子またはゲノム分節が、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノム内の対応遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置と比較して、よりプロモーター近傍またはプロモーター遠位にある位置に付加または置換されているところの、請求項１９６記載の方法。
【請求項１９８】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）の導入によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１９６記載の方法。
【請求項１９９】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、増殖特徴の変化、弱毒性、温度感受性、低温適応、プラークサイズ、宿主域制限、または免疫原性の変化から選択される、表現型変化を特定するヌクレオチド修飾によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１９６記載の方法。
【請求項２００】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内の遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置と比較して、よりプロモーター近傍またはプロモーター遠位にある位置で、遺伝子またはゲノム分節の付加、置換または転座により修飾されているところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項２０１】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、遺伝子外性の３’リーダーもしくは５’トレーラー領域、遺伝子開始シグナル、遺伝子終止シグナル、修正領域、遺伝子間領域、または３’もしくは５’非コード領域を含む異種の調節要素を組み込むように修飾されているところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項２０２】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、該ゲノムまたはアンチゲノムの非コード領域（ＮＣＲ）中に、完全な読み取り枠（ＯＲＦ）を欠き、かつ非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの弱毒性表現型を特定する長さ１５０ヌクレオチド（ｎｔｓ）から４，０００ヌクレオチドのポリヌクレオチド挿入をまたは分離した遺伝子単位（ＧＵ）として組み込むように修飾されているところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項２０３】
同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせを、宿主細胞中に同時導入および／または宿主細胞にて同時発現させることをさらに含む、請求項１７６記載の方法。
【請求項２０４】
モノネガウイルス目の増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成する方法であって、以下の工程：
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された増殖−または複製−欠損非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼ、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質をエンコードし、その一過性発現を指令する１つまたはそれ以上の一過性発現ベクターを、該ベクターの同時発現および組換えウイルスの生成を可能とするのに十分な条件下で、好適な宿主細胞中に導入する工程；
該宿主細胞をプラークエキスパンション細胞を含む共培養物中に移す工程；および
該共培養物中から組み立てられた増殖−または複製−欠損、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項２０５】
複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、宿主細胞中で組み立てられた後に一回の複製を完結できないか、あるいは、インビトロでの増殖および／または複製は可能であるが、インビボでの増殖−または複製−が欠損しているところの、請求項２０４記載の方法。
【請求項２０６】
モノネガウイルス目の増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成する方法であって、以下の工程：
（ａ）ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された増殖−または複製−欠損非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクターを、
（１）ＲＮＡポリメラーゼ
（２）Ｎタンパク質、
（３）Ｐタンパク質、および
（４）Ｌタンパク質
を一過性に発現する宿主細胞であって、ＲＮＡポリメラーゼ、Ｎ、ＰおよびＬタンパク質のそれぞれが一過性にトランスフェクトされた発現ベクターから発現される宿主細胞中に導入する工程；および
（ｂ）該宿主細胞から組み立てられた増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項２０７】
複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、宿主細胞中で組み立てられた後に一回の複製を完結できないか、あるいは、インビトロでの増殖および／または複製は可能であるが、インビボでの増殖−または複製−が欠損しているところの、請求項２０６記載の方法。
【請求項２０８】
同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせを、宿主細胞中に同時導入および／または宿主細胞にて同時発現させることさらに含む、請求項２０６記載の方法。
【請求項２０９】
モノネガウイルス目の増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成する方法であって、以下の工程：
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された増殖−または複製−欠損非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼ、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質をエンコードし、その一過性発現を指令する１つまたはそれ以上の一過性発現ベクターを、好適な宿主細胞中に導入する工程；および
該宿主細胞から組み立てられた増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項２１０】
同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせを、宿主細胞中に同時導入および／または宿主細胞にて同時発現させることをさらに含む、請求項２０９記載の方法。
【請求項２１１】
モノネガウイルス目の増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成するための組成物であって、
（ａ）ウイルスのｃＤＮＡからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された増殖−または複製−欠損非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター；
（ｂ）該宿主細胞にて
（１）Ｎタンパク質、
（２）Ｐタンパク質、および
（３）Ｌタンパク質
をエンコードし、一過性発現を指令する１つまたはそれ以上の発現ベクター；および
（ｃ）宿主細胞中にてＲＮＡポリメラーゼをエンコードし、その宿主細胞中で一過性発現を指令する一過性発現ベクター、
を含む組成物。
【請求項２１２】
該ウイルスが、宿主細胞中で組み立てられた後に一回の複製を完結できないか、あるいは、インビトロでの増殖および／または複製は可能であるが、インビボでの増殖−または複製−を欠損しているところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２１３】
ＲＮＡポリメラーゼがＴ７ ＲＮＡポリメラーゼであるところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２１４】
一過性にトランスフェクトされた発現ベクターがプラスミドであるところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２１５】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞の共培養を確立するために、少なくとも１層のプラークエキスパンション細胞をさらに含む、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２１６】
複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがサブウイルス粒子であるところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２１７】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがパラミクソウイルス科のメンバーであるところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２１８】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがラブドウイルス科のメンバーであるところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２１９】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）の導入によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２２０】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、増殖特徴の変化、弱毒性、温度感受性、低温適応、プラークサイズ、宿主域制限、または免疫原性の変化から選択される、表現型変化を特定するヌクレオチド修飾によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２２１】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの１つまたはそれ以上の遺伝子（群）が完全にもしくは部分的に欠失しているか、あるいは、該遺伝子（群）の発現がＲＮＡ修正部位における変異によって、フレームシフト変異によって、翻訳開始部位を改変する変異によって、遺伝子の読み取り枠（ＯＲＦ）中に１つまたはそれ以上のストップコドンを導入することによって、または転写シグナルにおける変異によって、低下または除去されているところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２２２】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、キメラゲノムまたはアンチゲノムを形成するために１つまたはそれ以上の異種病原体（群）の１つまたはそれ以上の抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）と組み合わされている部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノムを含むところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２２３】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内の遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置と比較して、よりプロモーター近傍またはプロモーター遠位にある位置で、遺伝子またはゲノム分節の付加、置換または転座により修飾されているところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２２４】
１つまたはそれ以上の発現ベクターが、同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）の１つ、またはいずれかの組み合わせを付加的にエンコードするところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２２５】
モノネガウイルス目の増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスであって、以下の手順：
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された増殖−または複製−欠損非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質、およびＬタンパク質をエンコードし、その発現を指令する１つまたはそれ以上の補助ベクター（群）、並びにＲＮＡポリメラーゼをエンコードし、その一時性発現を指令する一時性発現ベクターを適当な宿主細胞に導入し；および
該宿主細胞から組み立てられた増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収すること、
によって生成されるウイルス。
【請求項２２６】
医薬的に許容される担体中に、請求項２２５記載の手順に従って生成される、単離された増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの免疫原的有効量を含む、免疫原性組成物。
【請求項２２７】
哺乳動物被検体に非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスに対する免疫応答を誘発するために該被検体の免疫系を刺激する方法であって、医薬的に許容される担体中の請求項２２５記載の手順に従って生成される、単離された増殖−または複製−欠損、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの免疫原的有効量を、該被検体に投与することを含む方法。
【請求項１】
モノネガウイルス目の感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成するための方法であって、以下の工程：
（ａ）ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクターを宿主細胞に導入し、ここで該宿主細胞はＮタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質を発現し、一過性にトランスフェクトされた発現ベクターからＲＮＡポリメラーゼを一過性に発現するところの工程；および
（ｂ）該宿主細胞から組み立てられた感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項２】
ＲＮＡポリメラーゼがＴ７ＲＮＡポリメラーゼであるところの、請求項１記載の方法。
【請求項３】
一過性にトランスフェクトされた発現ベクターがプラスミドであるところの、請求項１記載の方法。
【請求項４】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードし、その一過性発現を指令する一過性発現ベクターが、ＤＮＡトランスフェクション混合物中で組み合わされており、同調的トランスフェクションを達成するよう宿主細胞培養物中に同時に加えられるところの、請求項１記載の方法。
【請求項５】
ＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性にトランスフェクトされる発現ベクターの導入の前に、ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターが宿主細胞中に導入されるところの、請求項１記載の方法。
【請求項６】
ＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性にトランスフェクトされる発現ベクターの導入後であり、該ＲＮＡポリメラーゼが検出可能なレベルに宿主細胞中で蓄積する前に、ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターが宿主細胞中に導入されるところの、請求項１記載の方法。
【請求項７】
１つまたはそれ以上のウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性にトランスフェクトされる発現ベクターが、リン酸カルシウムトランスフェクションまたはエレクトロポレーションにより宿主細胞中に導入されるところの、請求項１記載の方法。
【請求項８】
１つまたはそれ以上のウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性にトランスフェクトされる発現ベクターが宿主細胞中に導入された後、その宿主細胞が組換えウイルスの回収を増大させるのに十分な条件下で効果的な熱ショックに曝されるところの、請求項１記載の方法。
【請求項９】
宿主細胞が３７℃以上の熱ショック温度に曝されるところの、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
宿主細胞が約３７℃〜約５０℃の範囲の熱ショック温度に曝されるところの、請求項８記載の方法。
【請求項１１】
宿主細胞が約４１℃〜約４７℃の範囲の熱ショック温度に曝されるところの、請求項８記載の方法。
【請求項１２】
宿主細胞が少なくとも約５分間の効果的な熱ショックにかけられるところの、請求項８記載の方法。
【請求項１３】
宿主細胞が約１５分〜約２００分間の効果的な熱ショックにかけられるところの、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
宿主細胞が約３０分〜約１５０分間の効果的な熱ショックにかけられるところの、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードし、その発現を指令する一過性にトランスフェクトされた発現ベクターの発現を可能にするのに十分な時間の経過後に、宿主細胞を同一または異なる細胞型のプラークエキスパンジョン細胞と一緒に共培養し、レスキューされるウイルスがプラークエキスパンション細胞まで拡散することを可能とするところの、請求項１記載の方法。
【請求項１６】
宿主細胞がプラークエキスパンジョン細胞の少なくとも１つの層に移され、宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞の共培養を確立するところの、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
宿主細胞がプラークエキスパンション細胞と異なる細胞型であるところの、請求項１５記載の方法。
【請求項１８】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞がＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５およびＶｅｒｏ細胞からそれぞれ選択されるところの、請求項１５記載の方法。
【請求項１９】
宿主細胞が真核細胞であるところの、請求項１記載の方法。
【請求項２０】
宿主細胞が脊椎動物細胞であるところの、請求項１記載の方法。
【請求項２１】
宿主細胞がＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５およびＶｅｒｏ細胞から選択されるところの、請求項１記載の方法。
【請求項２２】
感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが完全ウイルスであるところの、請求項１記載の方法。
【請求項２３】
１つまたはそれ以上のＮ、ＰおよびＬタンパク質が異種の非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのものであるところの、請求項１記載の方法。
【請求項２４】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチド分子が、野生型の非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの配列をエンコードするところの、請求項１記載の方法。
【請求項２５】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがパラミクソウイルス科のメンバーであるところの、請求項１記載の方法。
【請求項２６】
非分節型、ネガティブ鎖ＲｎＡウイルスがラブドウイルス科のメンバーであるところの、請求項１記載の方法。
【請求項２７】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ヒト・パラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）、牛パラインフルエンザウイルス（ＢＰＩＶ）、キメラヒト−牛ＰＩＶ（ＨＢＰＩＶ）、麻疹ウイルス（ＭＶ）、または水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）から選択されるところの、請求項１記載の方法。
【請求項２８】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）の導入によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１記載の方法。
【請求項２９】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが１つまたはそれ以上の組換え技術的に導入された温度感受性（ｔｓ）弱毒性変異を組み込んでいるところの、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、生物学的に派生した変異非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスにおいて同定された１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）を組み込んでいるところの、請求項２８記載の方法。
【請求項３１】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、異種の、変異非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスにおいて同定された１つまたはそれ以上の変異に相当する１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）を組み込んでいるところの、請求項２８記載の方法。
【請求項３２】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、変異を特定するコドン中の２個または３個のヌクレオチド変化により特定される少なくとも１つの弱毒性変異を組み込んでいるところの、請求項２８記載の方法。
【請求項３３】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、増殖特徴の変化、弱毒性、温度感受性、低温適応、プラークサイズ、宿主域制限、または免疫原性の変化から選択される表現型変化を特定するヌクレオチド修飾によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１記載の方法。
【請求項３４】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、ウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内のＣ、Ｃ’、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨＡ、ＨＮ、Ｌ、Ｍ、Ｍ２−１、Ｍ２−２、ＮＳ１、ＮＳ２、ＳＨ、Ｖ、Ｙ１、および／またはＹ２読み取り枠（ＯＲＦ）および／または３’リーダー、５’トレーラー、および／または遺伝子間領域の１つまたはそれ以上を改変する組換え技術的修飾を組み込んでいるところの、請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの１つまたはそれ以上の遺伝子（群）が完全にもしくは部分的に欠失されているか、あるいはＲＮＡ修正部位における変異によって、フレームシフト変異によって、翻訳開始部位を改変する変異によって、遺伝子の読み取り枠（ＯＲＦ）中に１つまたはそれ以上のストップコドンを導入することによって、または転写シグナルにおける変異によって、該遺伝子（群）の発現が減少または除去されているところの、請求項１記載の方法。
【請求項３６】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、サイトカイン、Ｔ−ヘルパーエピトープ、制限部位マーカー、または哺乳動物宿主において免疫応答を誘発することができる微生物病原体もしくは寄生生物のタンパク質から選択される非ウイルス性分子をエンコードするように修飾されているところの、請求項１記載の方法。
【請求項３７】
該ゲノムまたは該アンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、キメラゲノムまたはアンチゲノムを形成するために、１つまたはそれ以上の異種病原体（群）の１つまたはそれ以上の抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）と組み合わされている部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノムを含むところの、請求項１記載の方法。
【請求項３８】
抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）が、余剰遺伝子（群）またはゲノム分節（群）として、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノムの非コード領域に隣接してまたは非コード領域内に付加されているところの、あるいは、抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）により、部分的なベクターゲノムまたはアンチゲノム中の１つまたはそれ以上の対応遺伝子（群）またはゲノム分節（群）が置換されているところの、請求項３７記載の方法。
【請求項３９】
異種遺伝子またはゲノム分節が、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノム内の対応遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子の順序位置（order position）に相当する位置に付加または置換されているところの、請求項３７記載の方法。
【請求項４０】
異種遺伝子またはゲノム分節が、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノム内の対応遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置と比較して、よりプロモーター近傍またはプロモーター遠位にある位置に付加または置換されているところの、請求項３７記載の方法。
【請求項４１】
ベクターゲノムまたはアンチゲノムが、キメラゲノムまたはアンチゲノムを形成するために、異種の非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの異種の抗原ドメイン、断片またはエピトープを１つまたはそれ以上組み込んでいるキメラ糖タンパク質をエンコードするように修飾されているところの、請求項３７記載の方法。
【請求項４２】
異種病原体が、麻疹ウイルス、サブグループＡおよびサブグループＢの呼吸器合胞体ウイルス、ヒト・パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ヒト・パピローマウイルス、１型および２型のヒト免疫不全ウイルス、単純疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス、狂犬病ウイルス、ヒト・メタプネウオモウイルス、エプスタイン・バーウイルス、フィロウイルス、ブンヤウイルス、フラビウイルス、アルファウイルス、またはインフルエンザウイルスから選択されるところの、請求項３７記載の方法。
【請求項４３】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）の導入によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項３７記載の方法。
【請求項４４】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、生物学的に派生した非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス変異体において同定された１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）を組み込んでいる、請求項３７記載の方法。
【請求項４５】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、増殖特徴の変化、弱毒性、温度感受性、低温適応、プラークサイズ、宿主域制限、または免疫原性の変化から選択される表現型変化を特定するヌクレオチド修飾によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項３７記載の方法。
【請求項４６】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、該ウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内のＣ、Ｃ’、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨＡ、ＨＮ、Ｌ、Ｍ、Ｍ２−１、Ｍ２−２、ＮＳ１、ＮＳ２、ＳＨ、Ｖ、Ｙ１、および／またはＹ２読み取り枠（ＯＲＦ）および／または３’リーダー、５’トレーラーおよび／または遺伝子間領域の１つまたはそれ以上を改変する組換え修飾を組み込んでいるところの、請求項３７記載の方法。
【請求項４７】
キメラゲノムまたはアンチゲノム内の１つまたはそれ以上の遺伝子（群）が完全にまたは部分的に欠失しているか、あるいは、該遺伝子（群）の発現がＲＮＡ修正部位における変異によって、フレームシフト変異によって、翻訳開始部位を改変する変異によって、遺伝子の読み取り枠（ＯＲＦ）中に１つまたはそれ以上のストップコドンを導入することによって、または転写シグナルにおける変異によって、低下または除去されているところの、請求項３７記載の方法。
【請求項４８】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、サイトカイン、Ｔ−ヘルパーエピトープ、制限部位マーカー、または哺乳動物宿主において免疫応答を誘発することができる微生物病原体もしくは寄生生物のタンパク質から選択される非ウイルス性分子をエンコードするように、修飾されているところの、請求項３７記載の方法。
【請求項４９】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、該非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内の遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置と比較して、よりプロモーター近傍またはプロモーター遠位にある位置に遺伝子またはゲノム分節の付加、置換あるいは転座によって修飾されているところの、請求項１記載の方法。
【請求項５０】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、遺伝子外性の３’リーダーもしくは５’トレーラー領域、遺伝子開始シグナル、遺伝子終止シグナル、修正領域、遺伝子間領域、または３’もしくは５’非コード領域を含む異種の調節要素を組み込むように修飾されているところの、請求項１記載の方法。
【請求項５１】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、該ゲノムまたはアンチゲノムの非コード領域（ＮＣＲ）中に、完全な読み取り枠（ＯＲＦ）を欠き、かつ非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの弱毒化表現型を特定する長さ１５０ヌクレオチド（ｎｔｓ）から４，０００ヌクレオチドのポリヌクレオチドの挿入をまたは分離した遺伝子単位（ＧＵ）として組み込むように修飾されているところの、請求項１記載の方法。
【請求項５２】
同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせを、宿主細胞中に同時導入および／または宿主細胞にて同時発現させることをさらに含む、請求項１記載の方法。
【請求項５３】
モノネガウイルス目の感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成するための方法であって、以下の工程：
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼ、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質をエンコードし、その一過性発現を指令する１つまたはそれ以上の一過性発現ベクターを、該ベクターの同時発現および組換えウイルスの生成を可能とするのに十分な条件下で、好適な宿主細胞中に導入する工程；
該宿主細胞をプラークエキスパンション細胞を含む共培養物中に移す工程；および
該共培養物中から組み立てられた感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項５４】
宿主細胞が同じもしくは異なる細胞型のプラークエキスパンション細胞と一緒に共培養され、レスキューされるウイルスをプラークエキスパンション細胞にまで拡散させるところの、請求項５３記載の方法。
【請求項５５】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞が、ＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５、またはＶｅｒｏ細胞からそれぞれ選択されるところの、請求項５３記載の方法。
【請求項５６】
１つまたはそれ以上のウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性発現ベクターが宿主細胞中に導入された後に、その宿主細胞が組換えウイルスの回収を増大させるのに十分な条件下で効果的な熱ショックに曝されるところの、請求項５３記載の方法。
【請求項５７】
同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせを、宿主細胞中に同時導入および／または宿主細胞にて同時発現させることをさらに含む、請求項５３記載の方法。
【請求項５８】
モノネガウイルス目の感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成するための方法であって、以下の工程：
（ａ）ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物を合成させるために発現制御配列と作動可能に連結された非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクターを、
（１）ＲＮＡポリメラーゼ、
（２）Ｎタンパク質、
（３）Ｐタンパク質、および
（４）Ｌタンパク質、
を一過性に発現させる宿主細胞であって、ＲＮＡポリメラーゼ、Ｎ、ＰおよびＬタンパク質のそれぞれが一過性にトランスフェクトされた発現ベクターから発現される宿主細胞中に導入する工程；および
（ｂ）該宿主細胞から組み立てられた感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項５９】
宿主細胞が、プラークエキスパンション細胞に対するレスキューされるウイルスの分散を可能とするために、同じもしくは異なる細胞型のプラークエキスパンション細胞と一緒に共培養されるところの、請求項５８記載の方法。
【請求項６０】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞が、ＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５、またはＶｅｒｏ細胞からそれぞれ選択されるところの、請求項５８記載の方法。
【請求項６１】
１つまたはそれ以上のウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性発現ベクターが宿主細胞中に導入された後に、その宿主細胞が組換えウイルスの回収を増大させるのに十分な条件下で効果的な熱ショックに曝されるところの、請求項５８記載の方法。
【請求項６２】
同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせを、宿主細胞中に同時導入および／または宿主細胞にて同時発現させることをさらに含む、請求項５８記載の方法。
【請求項６３】
モノネガウイルス目の感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成する方法であって、以下の工程：
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼ、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質をエンコードし、その一過性発現を指令する１つまたはそれ以上の一過性発現ベクターを、好適な宿主細胞中に導入する工程；
該宿主細胞から組み立てられた感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項６４】
少なくとも１つのＮ，ＰおよびＬタンパク質が発現制御プラスミドによってエンコードされているところの、請求項６３記載の方法。
【請求項６５】
宿主細胞が、プラークエキスパンション細胞に対するレスキューされるウイルスの分散を可能とするために、同じもしくは異なる細胞型のプラークエキスパンション細胞と一緒に共培養されるところの、請求項６３記載の方法。
【請求項６６】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞が、ＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５、またはＶｅｒｏ細胞からそれぞれ選択されるところの、請求項６３記載の方法。
【請求項６７】
１つまたはそれ以上のウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性発現ベクターが宿主細胞中に導入された後に、その宿主細胞が組換えウイルスの回収を増大させるのに十分な条件下で効果的な熱ショックに曝されるところの、請求項６３記載の方法。
【請求項６８】
同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせを、宿主細胞中に同時導入および／または宿主細胞にて同時発現させることをさらに含む、請求項６３記載の方法。
【請求項６９】
モノネガウイルス目の感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成するための組成物であって、
（ａ）好適な宿主細胞においてウイルスｃＤＮＡからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター；
（ｂ）宿主細胞にて
（１）Ｎタンパク質、
（２）Ｐタンパク質、および
（３）Ｌタンパク質、
をエンコードし、その発現を指令する、１つまたはそれ以上の補助ベクター；および、
（ｃ）ＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ宿主細胞中で一過性に発現させる一過性発現ベクター、
を含む組成物。
【請求項７０】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、Ｎ、ＰおよびＬをエンコードする１つまたはそれ以上の補助ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ一過性に発現させる一過性発現ベクターが、無細胞同時トランスフェクション混合物中にて提供されるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項７１】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、Ｎ、ＰおよびＬをエンコードする１つまたはそれ以上の補助ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ一過性に発現させる一過性発現ベクターが宿主細胞中にトランスフェクトされるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項７２】
ＲＮＡポリメラーゼがＴ７ＲＮＡポリメラーゼであるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項７３】
ＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ一過性に発現させる一過性発現ベクターがプラスミドであるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項７４】
プラークエキスパンション細胞に対する宿主細胞からレスキューされるウイルスの分散を可能とする、宿主細胞と同じもしくは異なる細胞型のプラークエキスパンション細胞をさらに含む、請求項６９記載の組成物。
【請求項７５】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞の共培養を確立するために、少なくとも１層のプラークエキスパンション細胞をさらに含む、請求項７４記載の組成物。
【請求項７６】
宿主細胞が、プラークエキスパンション細胞と異なる細胞型であるところの、請求項７４記載の組成物。
【請求項７７】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞が、ＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５、またはＶｅｒｏ細胞からそれぞれ選択されるところの、請求項７４記載の組成物。
【請求項７８】
宿主細胞が真核細胞であるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項７９】
宿主細胞が脊椎動物細胞であるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項８０】
宿主細胞が、ＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５、またはＶｅｒｏ細胞から選択されるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項８１】
感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが完全ウイルスであるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項８２】
１つまたはそれ以上のＮ，ＰおよびＬタンパク質が異種の非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのものであるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項８３】
ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチド分子が、野生型非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの配列をエンコードするところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項８４】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがパラミクソウイルス科のメンバーであるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項８５】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがラブドウイルス科のメンバーであるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項８６】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ヒト・パラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）、牛パラインフルエンザウイルス（ＢＰＩＶ）、キメラのヒト−牛ＰＩＶ（ＨＢＰＩＶ）、麻疹ウイルス（ＭＶ）、または水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）から選択されるところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項８７】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）の導入によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項８８】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、組換え技術的に導入された温度感受性（ｔｓ）弱毒性変異を１つまたはそれ以上組み込んでいるところの、請求項８７記載の組成物。
【請求項８９】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、生物学的に派生した変異非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスにおいて同定された弱毒性変異（群）を１つまたはそれ以上組み込んでいるところの、請求項８７記載の組成物。
【請求項９０】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、異種の、非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスにおいて同定された１つまたはそれ以上の変異に相当する弱毒性変異（群）を１つまたはそれ以上組み込んでいるところの、請求項８７記載の組成物。
【請求項９１】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、変異を特定するコドン中の２個または３個のヌクレオチド変化によって特定される弱毒性変異を少なくとも１つ組み込んでいるところの、請求項８７記載の組成物。
【請求項９２】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、増殖特徴の変化、弱毒性、温度感受性、低温適応、プラークサイズ、宿主域制限、または免疫原性の変化から選択される、表現型変化を特定するヌクレオチド修飾によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項９３】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、該ウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内のＣ、Ｃ’、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨＡ、ＨＮ、Ｌ、Ｍ、Ｍ２−１、Ｍ２−２、ＮＳ１、ＮＳ２、ＳＨ、Ｖ、Ｙ１、および／またはＹ２読み取り枠（ＯＲＦ）および／または３’リーダー、５’トレーラー、および／または遺伝子間領域の１つまたはそれ以上を改変する組換え技術的修飾を組み込んでいるところの、請求項６９記載の方法。
【請求項９４】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの１つまたはそれ以上の遺伝子（群）が完全にもしくは部分的に欠失しているか、あるいは、該遺伝子（群）の発現がＲＮＡ修正部位における変異によって、フレームシフト変異によって、翻訳開始部位を改変する変異によって、遺伝子の読み取り枠（ＯＲＦ）中に１つまたはそれ以上のストップコドンを導入することによって、または転写シグナルにおける変異によって、低下または除去されているところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項９５】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、サイトカイン、Ｔ−ヘルパーエピトープ、制限部位マーカー、または哺乳動物宿主において免疫応答を誘発することができる微生物病原体もしくは寄生生物のタンパク質から選択される非ウイルス性分子をエンコードするように修飾されているところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項９６】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、キメラゲノムまたはアンチゲノムを形成するために、１つまたはそれ以上の異種病原体（群）の１つまたはそれ以上の抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）と組み合わされている、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノムを含むところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項９７】
抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）が、余剰遺伝子（群）またはゲノム分節（群）として、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノムの非コード領域に隣接してまたは非コード領域内に付加されているところの、あるいは、抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）により、部分的なベクターゲノムまたはアンチゲノム中の１つまたはそれ以上の対応遺伝子（群）またはゲノム分節（群）が置換されているところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項９８】
異種遺伝子またはゲノム分節が、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノム内の対応遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置に相当する位置に付加または置換されているところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項９９】
異種遺伝子またはゲノム分節が、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノム内の対応遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置と比較して、よりプロモーター近傍またはプロモーター遠位にある位置に付加または置換されているところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項１００】
ベクターゲノムまたはアンチゲノムが、キメラゲノムまたはアンチゲノムを形成するために、異種の非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの異種の抗原ドメイン、断片またはエピトープを１つまたはそれ以上組み込んでいるキメラ糖タンパク質をエンコードするように修飾されているところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項１０１】
異種病原体が、麻疹ウイルス、サブグループＡおよびサブグループＢの呼吸器合胞体ウイルス、ヒト・パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ヒト・パピローマウイルス、１型および２型のヒト免疫不全ウイルス、単純疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス、狂犬病ウイルス、ヒト・メタプネウオモウイルス、エプスタイン・バーウイルス、フィロウイルス、ブンヤウイルス、フラビウイルス、アルファウイルス、またはインフルエンザウイルスから選択されるところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項１０２】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）の導入によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項１０３】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、生物学的に派生した非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス変異体において同定された１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）を組み込んでいるところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項１０４】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、増殖特徴の変化、弱毒性、温度感受性、低温適応、プラークサイズ、宿主域制限、または免疫原性の変化から選択される、表現型変化を特定するヌクレオチド修飾によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項１０５】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、ウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内のＣ、Ｃ’、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨＡ、ＨＮ、Ｌ、Ｍ、Ｍ２−１、Ｍ２−２、ＮＳ１、ＮＳ２、ＳＨ、Ｖ、Ｙ１、および／またはＹ２読み取り枠（ＯＲＦｓ）および／または３’リーダー、５’トレーラー、および／または遺伝子間領域の１つまたはそれ以上を改変する組換え技術的修飾を組み込んでいるところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項１０６】
キメラゲノムまたはアンチゲノム内の１つまたはそれ以上の遺伝子（群）が完全にまたは部分的に欠失しているか、あるいは、該遺伝子（群）の発現がＲＮＡ修正部位における変異によって、フレームシフト変異によって、翻訳開始部位を改変する変異によって、遺伝子の読み取り枠（ＯＲＦ）中に１つまたはそれ以上のストップコドンを導入することによって、または転写シグナルにおける変異によって、低下または除去されているところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項１０７】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、サイトカイン、Ｔ−ヘルパーエピトープ、制限部位マーカー、または哺乳動物宿主において免疫応答を誘発することができる微生物病原体もしくは寄生生物のタンパク質から選択される非ウイルス性分子をエンコードするように修飾されているところの、請求項９６記載の組成物。
【請求項１０８】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内の遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置と比較して、よりプロモーター近傍またはプロモーター遠位にある位置で、遺伝子またはゲノム分節の付加、置換または転座により修飾されているところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項１０９】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、遺伝子外性の３’リーダーもしくは５’トレーラー領域、遺伝子開始シグナル、遺伝子終止シグナル、修正領域、遺伝子間領域、または３’もしくは５’非コード領域を含む異種の調節要素を組み込むように修飾されているところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項１１０】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、該ゲノムまたはアンチゲノムの非コード領域（ＮＣＲ）中に、完全な読み取り枠（ＯＲＦ）を欠き、かつ非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの弱毒性表現型を特定する長さ１５０ヌクレオチド（ｎｔｓ）から４，０００ヌクレオチドのポリヌクレオチド挿入をまたは分離した遺伝子単位（ＧＵ）として組み込むように修飾されているところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項１１１】
１つまたはそれ以上の発現ベクター（群）が同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせをエンコードするところの、請求項６９記載の組成物。
【請求項１１２】
モノネガウイルス目の感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスであって、以下の工程：
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質、およびＬタンパク質をエンコードし、その発現を指令する１つまたはそれ以上の補助ベクター（群）、並びに、ＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ一過性に発現させる一過性発現ベクターを、好適な宿主細胞中に導入し；そして
該宿主細胞から組み立てられた感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収すること、
によって生成されるウイルス。
【請求項１１３】
ＲＮＡポリメラーゼがＴ７ ＲＮＡポリメラーゼであるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１１４】
ＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ一過性に発現させる一過性発現ベクターがプラスミドであるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１１５】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質をエンコードし且つ発現させる１つまたはそれ以上の補助ベクター（群）、並びにＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ一過性に発現させる一過性発現ベクターが、ＤＮＡトランスフェクション混合液中に組み合わされており、同調的トランスフェクションを同時に達成するために宿主細胞培養物中に添加されるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１１６】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、およびＮタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質をエンコードし且つ発現させる１つまたはそれ以上の補助ベクター（群）が、ＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性発現ベクターの導入前に、宿主細胞中に導入されるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１１７】
ＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性発現ベクターの導入後であるが、ＲＮＡポリメラーゼが宿主細胞中で検出可能レベルに蓄積する前に、ウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、およびＮタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質をエンコードし且つ発現させる１つまたはそれ以上の補助ベクター（群）が宿主細胞中に導入されるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１１８】
１つまたはそれ以上の（ａ）ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよび（ｂ）ＲＮＡポリメラーゼ、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質、およびＬタンパク質をエンコードし且つ発現させる１つまたはそれ以上の補助ベクター（群）が、リン酸カルシウムトランスフェクション法またはエレクトロポレーション法により宿主細胞中に導入されるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１１９】
１つまたはそれ以上の（ａ）ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよび（ｂ）Ｎタンパク質、Ｐタンパク質、およびＬタンパク質をエンコードし且つ発現させる１つまたはそれ以上の補助ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ発現させる一過性発現ベクターが宿主細胞中に導入された後に、該宿主細胞が組換えウイルスの回収が向上するのに十分な条件下で効果的な熱ショックに曝さらされるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２０】
宿主細胞が、温度３７℃以上の熱ショック温度に曝されるところの、請求項１１９記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２１】
宿主細胞が、約３７℃〜約５０℃の範囲の熱ショック温度に曝されるところの、請求項１１９記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２２】
宿主細胞が、約４１℃〜約４７℃の範囲の熱ショック温度に曝されるところの、請求項１１９記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２３】
宿主細胞が、少なくとも約５分間の効果的な熱ショックにかけられるところの、請求項１１９記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２４】
宿主細胞が、約１５分〜約２００分間の効果的な熱ショックにかけられるところの、請求項１２３記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２５】
宿主細胞が、約３０分〜約１５０分間の効果的な熱ショックにかけられるところの、請求項１２４記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２６】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質、およびＬタンパク質をエンコードし且つ発現させる１つまたはそれ以上の補助ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ発現させる一過性発現ベクターの発現を行わせるのに十分な時間の経過後に、該宿主細胞がプラークエキスパンション細胞に対するレスキューされるウイルスの分散を可能とする同じもしくは異なる細胞型のプラークエキスパンション細胞と一緒に共培養されるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２７】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞の共培養を確立するために、宿主細胞が少なくとも１層のプラークエキスパンション細胞に移されるところの、請求項１２６記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２８】
宿主細胞がプラークエキスパンション細胞と異なる細胞型であるところの、請求項１２６記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１２９】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞が、ＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５、またはＶｅｒｏ細胞からそれぞれ選択されるところの、請求項１２６記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３０】
宿主細胞が真核細胞であるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３１】
宿主細胞が脊椎動物細胞であるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３２】
宿主細胞が、ＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５、またはＶｅｒｏ細胞から選択されるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３３】
感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが完全ウイルスであるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３４】
１つまたはそれ以上のＮ、ＰおよびＬタンパク質が異種の非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのものであるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３５】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチド分子が、野生型の品文節方ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの配列をエンコードするところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３６】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがパラミクソウイルス科のメンバーであるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３７】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがラブドウイルス科のメンバーであるところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３８】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ヒト・パラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）、牛パラインフルエンザウイルス（ＢＰＩＶ）、キメラのヒト−牛ＰＩＶ（ＨＢＰＩＶ）、麻疹ウイルス（ＭＶ）、または水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）から選択されるところの、請求項１０１記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１３９】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）の導入によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４０】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、組換え技術的に導入された温度感受性（ｔｓ）弱毒性変異を１つまたはそれ以上組み込んでいるところの、請求項１３９記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４１】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、生物学的に派生した変異非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスにおいて同定される１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）を組み込んでいるところの、請求項１３９記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４２】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、異種の、変異非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスにおいて同定される１つまたはそれ以上の変異に相当する１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）を組み込んでいるところの、請求項１３９記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４３】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、変異を特定するコドン中の２個または３個のヌクレオチド変化により特定される少なくとも１つの弱毒性変異を組み込んでいるところの、請求項１３９記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４４】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、増殖特徴の変化、弱毒性、温度感受性、低温適応、プラークサイズ、宿主域制限、または免疫原性の変化から選択される、表現型変化を特定するヌクレオチド修飾によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４５】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、ウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内のＣ、Ｃ’、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨＡ、ＨＮ、Ｌ、Ｍ、Ｍ２−１、Ｍ２−２、ＮＳ１、ＮＳ２、ＳＨ、Ｖ、Ｙ１、および／またはＹ２読み取り枠（ＯＲＦ）および／または３’リーダー、５’トレーラー、および／または遺伝子間領域の１つまたはそれ以上を改変する組換え技術的修飾を組み込んでいるところの、請求項１４４記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４６】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの１つまたはそれ以上の遺伝子（群）が完全にもしくは部分的に欠失しているか、あるいは、該遺伝子（群）の発現が、ＲＮＡ修正部位における変異によって、フレームシフト変異によって、翻訳開始部位を改変する変異によって、遺伝子の読み取り枠（ＯＲＦ）中に１つまたはそれ以上のストップコドンを導入することによって、または転写シグナルにおける変異によって、低下または除去されているところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４７】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、サイトカイン、Ｔ−ヘルパーエピトープ、制限部位マーカー、または哺乳動物宿主において免疫応答を誘発することができる微生物病原体もしくは寄生生物のタンパク質から選択される非ウイルス性分子をエンコードするように修飾されているところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４８】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、キメラゲノムまたはアンチゲノムを形成するために、１つまたはそれ以上の異種病原体（群）の１つまたはそれ以上の抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）と組み合わされている部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノムを含むところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１４９】
抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）が、余剰遺伝子（群）またはゲノム分節（群）として、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノムの非コード領域に隣接してまたは非コード領域内に付加されているところの、あるいは、抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）により、部分的なベクターゲノムまたはアンチゲノム中の１つまたはそれ以上の対応遺伝子（群）またはゲノム分節（群）が置換されているところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５０】
異種遺伝子またはゲノム分節が、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノム内の対応遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置に相当する位置に付加または置換されているところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５１】
異種遺伝子またはゲノム分節が、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノム内の対応遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置と比較して、よりプロモーター近傍またはプロモーター遠位にある位置に付加または置換されているところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５２】
ベクターゲノムまたはアンチゲノムが、キメラゲノムまたはアンチゲノムを形成するために、異種の非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの異種の抗原ドメイン、断片またはエピトープを１つまたはそれ以上組み込んでいるキメラ糖タンパク質をエンコードするように修飾されているところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５３】
異種病原体が、麻疹ウイルス、サブグループＡおよびサブグループＢの呼吸器合胞体ウイルス、ヒト・パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ヒト・パピローマウイルス、１型および２型のヒト免疫不全ウイルス、単純疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス、狂犬病ウイルス、ヒト・メタプネウオモウイルス、エプスタイン・バーウイルス、フィロウイルス、ブンヤウイルス、フラビウイルス、アルファウイルス、またはインフルエンザウイルスから選択されるところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５４】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）の導入によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５５】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、生物学的に派生した変異非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスにおいて同定された１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）を組み込んでいるところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５６】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、増殖特徴の変化、弱毒性、温度感受性、低温適応、プラークサイズ、宿主域制限、または免疫原性の変化から選択される、表現型変化を特定するヌクレオチド修飾によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５７】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、該ウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内のＣ、Ｃ’、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨＡ、ＨＮ、Ｌ、Ｍ、Ｍ２−１、Ｍ２−２、ＮＳ１、ＮＳ２、ＳＨ、Ｖ、Ｙ１、および／またはＹ２読み取り枠（ＯＲＦ）および／または３’リーダー、５’トレーラーおよび／または遺伝子間領域の１つまたはそれ以上を改変する組換え修飾を組み込んでいるところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５８】
キメラゲノムまたはアンチゲノム内の１つまたはそれ以上の遺伝子（群）が完全にまたは部分的に欠失しているか、あるいは、該遺伝子（群）の発現がＲＮＡ修正部位における変異によって、フレームシフト変異によって、翻訳開始部位を改変する変異によって、遺伝子の読み取り枠（ＯＲＦ）中に１つまたはそれ以上のストップコドンを導入することによって、または転写シグナルにおける変異によって、低下または除去されているところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１５９】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、サイトカイン、Ｔ−ヘルパーエピトープ、制限部位マーカー、または哺乳動物宿主において免疫応答を誘発することができる微生物病原体もしくは寄生生物のタンパク質から選択される非ウイルス性分子をエンコードするように修飾されているところの、請求項１４８記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１６０】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内の遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置と比較して、よりプロモーター近傍またはプロモーター遠位にある位置で、遺伝子またはゲノム分節の付加、置換または転座により修飾されているところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１６１】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、遺伝子外性の３’リーダーもしくは５’トレーラー領域、遺伝子開始シグナル、遺伝子終止シグナル、修正領域、遺伝子間領域、または３’もしくは５’非コード領域を含む異種の調節要素を組み込むように修飾されているところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１６２】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、該ゲノムまたはアンチゲノムの非コード領域（ＮＣＲ）中に、完全な読み取り枠（ＯＲＦ）を欠き、かつ非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの弱毒性表現型を特定する長さ１５０ヌクレオチド（ｎｔｓ）から４，０００ヌクレオチドのポリヌクレオチド挿入をまたは分離した遺伝子単位（ＧＵ）として組み込むように修飾されているところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１６３】
手順が、同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせを、宿主細胞中に同時導入および／または宿主細胞にて同時発現させることをさらに含むところの、請求項１１２記載の手順に従って生成される感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス。
【請求項１６４】
医薬的に許容される担体中に、請求項１１２記載の手順に従って生成される、単離された感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの免疫原的有効量を含む、免疫原性組成物。
【請求項１６５】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、１０３〜１０７ＰＦＵの用量にて調剤されるところの、請求項１６４記載の免疫原性組成物。
【請求項１６６】
上部気道への投与のために調剤される、請求項１６４記載の免疫原性組成物。
【請求項１６７】
噴霧、液滴またはエアゾールによる投与のために調剤される、請求項１６４記載の免疫原性組成物。
【請求項１６８】
宿主細胞が、プラークエキスパンション細胞に対するレスキューされるウイルスの分散を可能とする、同じもしくは異なる細胞型のプラークエキスパンション細胞と一緒に共培養されるところの、請求項１６４記載の免疫原性組成物。
【請求項１６９】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞が、ＨＥｐ−２、ＨｅＬａ、ＨＥＫ、ＢＨＫ、ＦＲｈＬ−ＤＢＳ２、ＬＬＣ−ＭＫ２、ＭＲＣ−５、またはＶｅｒｏ細胞からそれぞれ選択されるところの、請求項１６４記載の免疫原性組成物。
【請求項１７０】
１つまたはそれ以上のウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性発現ベクターが宿主細胞中に導入された後に、その宿主細胞が組換えウイルスの回収を増大させるのに十分な条件下で効果的な熱ショックに曝されるところの、請求項１６４記載の免疫原性組成物。
【請求項１７１】
同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせを、宿主細胞中に同時導入および／または宿主細胞にて同時発現させることをさらに含む、請求項１６４記載の免疫原性組成物。
【請求項１７２】
哺乳動物被検体に非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスに対する免疫応答を誘発するために該被検体の免疫系を刺激する方法であって、医薬的に許容される担体中の請求項１１２記載の手順に従って生成される、単離された感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの免疫原的有効量を、該被検体に投与することを含む方法。
【請求項１７３】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが１０３〜１０７ＰＦＵの用量にて投与されるところの、請求項１７２記載の方法。
【請求項１７４】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが上記気道に投与されるところの、請求項１７２記載の方法。
【請求項１７５】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが噴霧、液滴またはエアゾールによって投与されるところの、請求項１７２記載の方法。
【請求項１７６】
モノネガウイルス目の増殖−または複製−欠損非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成する方法であって、以下の工程：
（ａ）ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物を合成させるために発現制御配列と作動可能に連結された増殖−または複製−欠損非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクターを、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質を発現し且つ一過性にトランスフェクトされた発現ベクターからＲＮＡポリメラーゼを一過性に発現する宿主細胞中に導入する工程；および
（ｂ）該宿主細胞から組み立てられた増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項１７７】
該ウイルスが、宿主細胞中で組み立てられた後に一回の複製を完結できないところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１７８】
該ウイルスは、インビトロでの増殖および／または複製は可能であるが、インビボでの増殖−または複製−が欠損しているところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１７９】
一過性にトランスフェクトされた発現ベクターがプラスミドであるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１８０】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ一過性に発現させる一過性発現ベクターがＤＮＡトランスフェクション混合物中で組み合わされており、同時に同調的トランスフェクションを達成するよう宿主細胞培養物中に加えられるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１８１】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、およびＮ、Ｐ、Ｌタンパク質をエンコードする１つまたはそれ以上の補助ベクター（群）が、ＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性にトランスフェクトされた発現ベクターの導入前に、宿主細胞中に導入されるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１８２】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性にトランスフェクトされた発現ベクターが、リン酸カルシウムトランスフェクション法またはエレクトロポレーション法によって宿主細胞中に導入されるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１８３】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性にトランスフェクトされた発現ベクターが宿主細胞中に導入された後に、その宿主細胞が組換えウイルスの回収を増大させるのに十分な条件下で効果的な熱ショックに曝されるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１８４】
宿主細胞が３７℃以上の熱ショック温度に曝されるところの、請求項１８３記載の方法。
【請求項１８５】
宿主細胞が、少なくとも約５分間の効果的な熱ショックにかけられるところの、請求項１８３記載の方法。
【請求項１８６】
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターおよびＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ発現させる一過性にトランスフェクトされた発現ベクターの発現を可能にするのに十分な時間の経過後に、宿主細胞が、プラークエキスパンション細胞に対してレスキューされるウイルスの分散を可能とする、同じもしくは異なる細胞型のプラークエキスパンション細胞と一緒に共培養されるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１８７】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞の共培養を確立するために、宿主細胞が少なくとも１層のプラークエキスパンション細胞に移されるところの、請求項１８６記載の方法。
【請求項１８８】
宿主細胞がプラークエキスパンション細胞と異なる細胞型であるところの、請求項１８６記載の方法。
【請求項１８９】
複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがサブウイルス粒子であるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１９０】
１つまたはそれ以上のＮ、ＰおよびＬタンパク質が異種の非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのものであるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１９１】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがパラミクソウイルス科のメンバーであるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１９２】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがラブドウイルス科のメンバーであるところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１９３】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）の導入によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１９４】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、増殖特徴の変化、弱毒性、温度感受性、低温適応、プラークサイズ、宿主域制限、または免疫原性の変化から選択される、表現型変化を特定するヌクレオチド修飾によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１９５】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの１つまたはそれ以上の遺伝子（群）が完全にもしくは部分的に欠失しているか、あるいは、該遺伝子（群）の発現がＲＮＡ修正部位における変異によって、フレームシフト変異によって、翻訳開始部位を改変する変異によって、遺伝子の読み取り枠（ＯＲＦ）中に１つまたはそれ以上のストップコドンを導入することによって、または転写シグナルにおける変異によって、低下または除去されているところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１９６】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、キメラゲノムまたはアンチゲノムを形成するために、１つまたはそれ以上の異種病原体（群）の１つまたはそれ以上の抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）と組み合わされている部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノムを含むところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項１９７】
異種遺伝子またはゲノム分節が、部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノム内の対応遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置と比較して、よりプロモーター近傍またはプロモーター遠位にある位置に付加または置換されているところの、請求項１９６記載の方法。
【請求項１９８】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）の導入によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１９６記載の方法。
【請求項１９９】
キメラゲノムまたはアンチゲノムが、増殖特徴の変化、弱毒性、温度感受性、低温適応、プラークサイズ、宿主域制限、または免疫原性の変化から選択される、表現型変化を特定するヌクレオチド修飾によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項１９６記載の方法。
【請求項２００】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内の遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置と比較して、よりプロモーター近傍またはプロモーター遠位にある位置で、遺伝子またはゲノム分節の付加、置換または転座により修飾されているところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項２０１】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、遺伝子外性の３’リーダーもしくは５’トレーラー領域、遺伝子開始シグナル、遺伝子終止シグナル、修正領域、遺伝子間領域、または３’もしくは５’非コード領域を含む異種の調節要素を組み込むように修飾されているところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項２０２】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、該ゲノムまたはアンチゲノムの非コード領域（ＮＣＲ）中に、完全な読み取り枠（ＯＲＦ）を欠き、かつ非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの弱毒性表現型を特定する長さ１５０ヌクレオチド（ｎｔｓ）から４，０００ヌクレオチドのポリヌクレオチド挿入をまたは分離した遺伝子単位（ＧＵ）として組み込むように修飾されているところの、請求項１７６記載の方法。
【請求項２０３】
同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせを、宿主細胞中に同時導入および／または宿主細胞にて同時発現させることをさらに含む、請求項１７６記載の方法。
【請求項２０４】
モノネガウイルス目の増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成する方法であって、以下の工程：
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された増殖−または複製−欠損非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼ、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質をエンコードし、その一過性発現を指令する１つまたはそれ以上の一過性発現ベクターを、該ベクターの同時発現および組換えウイルスの生成を可能とするのに十分な条件下で、好適な宿主細胞中に導入する工程；
該宿主細胞をプラークエキスパンション細胞を含む共培養物中に移す工程；および
該共培養物中から組み立てられた増殖−または複製−欠損、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項２０５】
複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、宿主細胞中で組み立てられた後に一回の複製を完結できないか、あるいは、インビトロでの増殖および／または複製は可能であるが、インビボでの増殖−または複製−が欠損しているところの、請求項２０４記載の方法。
【請求項２０６】
モノネガウイルス目の増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成する方法であって、以下の工程：
（ａ）ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された増殖−または複製−欠損非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクターを、
（１）ＲＮＡポリメラーゼ
（２）Ｎタンパク質、
（３）Ｐタンパク質、および
（４）Ｌタンパク質
を一過性に発現する宿主細胞であって、ＲＮＡポリメラーゼ、Ｎ、ＰおよびＬタンパク質のそれぞれが一過性にトランスフェクトされた発現ベクターから発現される宿主細胞中に導入する工程；および
（ｂ）該宿主細胞から組み立てられた増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項２０７】
複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、宿主細胞中で組み立てられた後に一回の複製を完結できないか、あるいは、インビトロでの増殖および／または複製は可能であるが、インビボでの増殖−または複製−が欠損しているところの、請求項２０６記載の方法。
【請求項２０８】
同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせを、宿主細胞中に同時導入および／または宿主細胞にて同時発現させることさらに含む、請求項２０６記載の方法。
【請求項２０９】
モノネガウイルス目の増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成する方法であって、以下の工程：
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された増殖−または複製−欠損非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼ、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質をエンコードし、その一過性発現を指令する１つまたはそれ以上の一過性発現ベクターを、好適な宿主細胞中に導入する工程；および
該宿主細胞から組み立てられた増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項２１０】
同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）のいずれか、またはいずれかの組み合わせを、宿主細胞中に同時導入および／または宿主細胞にて同時発現させることをさらに含む、請求項２０９記載の方法。
【請求項２１１】
モノネガウイルス目の増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成するための組成物であって、
（ａ）ウイルスのｃＤＮＡからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された増殖−または複製−欠損非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター；
（ｂ）該宿主細胞にて
（１）Ｎタンパク質、
（２）Ｐタンパク質、および
（３）Ｌタンパク質
をエンコードし、一過性発現を指令する１つまたはそれ以上の発現ベクター；および
（ｃ）宿主細胞中にてＲＮＡポリメラーゼをエンコードし、その宿主細胞中で一過性発現を指令する一過性発現ベクター、
を含む組成物。
【請求項２１２】
該ウイルスが、宿主細胞中で組み立てられた後に一回の複製を完結できないか、あるいは、インビトロでの増殖および／または複製は可能であるが、インビボでの増殖−または複製−を欠損しているところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２１３】
ＲＮＡポリメラーゼがＴ７ ＲＮＡポリメラーゼであるところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２１４】
一過性にトランスフェクトされた発現ベクターがプラスミドであるところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２１５】
宿主細胞およびプラークエキスパンション細胞の共培養を確立するために、少なくとも１層のプラークエキスパンション細胞をさらに含む、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２１６】
複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがサブウイルス粒子であるところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２１７】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがパラミクソウイルス科のメンバーであるところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２１８】
非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスがラブドウイルス科のメンバーであるところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２１９】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、１つまたはそれ以上の弱毒性変異（群）の導入によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２２０】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスが、増殖特徴の変化、弱毒性、温度感受性、低温適応、プラークサイズ、宿主域制限、または免疫原性の変化から選択される、表現型変化を特定するヌクレオチド修飾によって組換え技術的に修飾されているところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２２１】
非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの１つまたはそれ以上の遺伝子（群）が完全にもしくは部分的に欠失しているか、あるいは、該遺伝子（群）の発現がＲＮＡ修正部位における変異によって、フレームシフト変異によって、翻訳開始部位を改変する変異によって、遺伝子の読み取り枠（ＯＲＦ）中に１つまたはそれ以上のストップコドンを導入することによって、または転写シグナルにおける変異によって、低下または除去されているところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２２２】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、キメラゲノムまたはアンチゲノムを形成するために１つまたはそれ以上の異種病原体（群）の１つまたはそれ以上の抗原決定基（群）をエンコードする１つまたはそれ以上の異種遺伝子（群）またはゲノム分節（群）と組み合わされている部分的なまたは完全なベクターゲノムまたはアンチゲノムを含むところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２２３】
該ゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドが、非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノム内の遺伝子またはゲノム分節の野生型遺伝子順序位置と比較して、よりプロモーター近傍またはプロモーター遠位にある位置で、遺伝子またはゲノム分節の付加、置換または転座により修飾されているところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２２４】
１つまたはそれ以上の発現ベクターが、同じもしくは異なる非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの構造タンパク質（群）の１つ、またはいずれかの組み合わせを付加的にエンコードするところの、請求項２１１記載の組成物。
【請求項２２５】
モノネガウイルス目の増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスであって、以下の手順：
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された増殖−または複製−欠損非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質、およびＬタンパク質をエンコードし、その発現を指令する１つまたはそれ以上の補助ベクター（群）、並びにＲＮＡポリメラーゼをエンコードし、その一時性発現を指令する一時性発現ベクターを適当な宿主細胞に導入し；および
該宿主細胞から組み立てられた増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収すること、
によって生成されるウイルス。
【請求項２２６】
医薬的に許容される担体中に、請求項２２５記載の手順に従って生成される、単離された増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの免疫原的有効量を含む、免疫原性組成物。
【請求項２２７】
哺乳動物被検体に非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスに対する免疫応答を誘発するために該被検体の免疫系を刺激する方法であって、医薬的に許容される担体中の請求項２２５記載の手順に従って生成される、単離された増殖−または複製−欠損、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスの免疫原的有効量を、該被検体に投与することを含む方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図２】
【図２】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【公表番号】特表２００７−５０００１７（Ｐ２００７−５０００１７Ａ）
【公表日】平成１９年１月１１日（２００７．１．１１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５３３６４５（Ｐ２００６−５３３６４５）
【出願日】平成１６年６月８日（２００４．６．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１８３０５
【国際公開番号】ＷＯ２００４／１１３５１７
【国際公開日】平成１６年１２月２９日（２００４．１２．２９）
【出願人】（５９１０１１５０２）ワイス (573)
【氏名又は名称原語表記】Ｗｙｅｔｈ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年１月１１日（２００７．１．１１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年６月８日（２００４．６．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１８３０５
【国際公開番号】ＷＯ２００４／１１３５１７
【国際公開日】平成１６年１２月２９日（２００４．１２．２９）
【出願人】（５９１０１１５０２）ワイス (573)
【氏名又は名称原語表記】Ｗｙｅｔｈ
【Ｆターム（参考）】
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