造影剤
【課題】 過剰コラーゲン形成に関係する疾患の診断及び治療モニタリングに有用な新規造影剤の提供。
【解決手段】一般式（Ｉ）の造影剤。
Ｚ1−Ｌ−Ｖ−Ｚ2（Ｉ）
式中、Ｚ1及びＺ2のいずれかはヒト又は動物の身体のインビボイメージングで検出できる同一又は異なるレポーター部分であり、Ｖはコラーゲン形成領域との結合親和性を有するターゲッティング部分であり、Ｌは共有結合、バイオモディファイヤー基又はリンカー基である。
【解決手段】一般式（Ｉ）の造影剤。
Ｚ1−Ｌ−Ｖ−Ｚ2（Ｉ）
式中、Ｚ1及びＺ2のいずれかはヒト又は動物の身体のインビボイメージングで検出できる同一又は異なるレポーター部分であり、Ｖはコラーゲン形成領域との結合親和性を有するターゲッティング部分であり、Ｌは共有結合、バイオモディファイヤー基又はリンカー基である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規造影剤及びその画像診断法における使用に関する。具体的には、本発明は、コラーゲン形成領域及び細胞外マトリックス（ＥＣＭ）に結合するターゲッティングベクターを含む造影剤に関する。かかる造影剤は、活動性の線維症（コラーゲン沈着）のターゲッティング、並びに例えば心不全、肝及び肺線維症、後腹膜線維症、アテローム性動脈硬化症、関節炎、癌及び皮膚障害のような数多くの病態の診断に使用できる。かかる造影剤は、さらに、慢性瘢痕を形成する炎症、瘢痕組織及び癒着の表示、梗塞サイズの検査、初期梗塞の表示、うっ血性心不全の診断にも使用できる。
【背景技術】
【０００２】
コラーゲンは動物界で最も豊富に存在するタンパク質である。現在２５種類が知られている。その基本構造単位はトリプルヘリックスであって、コラーゲンＩでは、ヘリックスは各々１０５０アミノ酸からなる３本のポリペプチドからなる。コラーゲン原繊維は３本鎖ヘリックスのラテラルな相互作用によって形成される。ある種のコラーゲン、特にコラーゲンＩＶは二次元シートを形成する。
【０００３】
コラーゲン分子のアミノ酸配列は高い繰返しを有し、この規則性がコラーゲン原繊維の構造に反映される。コラーゲンＩのアミノ酸配列は、３アミノ酸残基ごとにグリシンが存在する１８種類のアミノ酸モチーフを２０コピー含んでいる。
【０００４】
各種コラーゲンは線維芽細胞及びある種の上皮性細胞で産生される。最初の転写物はプロコラーゲンポリペプチドであり、細胞から輸送するためのシグナル配列と、会合してトリプルヘリックスを形成するのを防ぐプロペプチドとを含んでいる。プロコラーゲン鎖のプロリン残基の約５０％及びリシン残基の１５〜２０％が細胞内プロセシングを受けてヒドロキシプロリン及びヒドロキシリジンを形成する。これらの修飾はコラーゲンの機械的特性に重要である。細胞外でプロペプチドが切断され、自己集合し始める。
【０００５】
コラーゲンは骨や腱のような構造体の基本成分であり、一般に細胞外マトリックスの基本成分でもある。例えば、コラーゲンＩＶは基底膜の基本網状構造を形成し、これに上皮及び内皮細胞が付着する。コラーゲンの多様性はコラーゲンが種々存在することによってある程度説明できるが、多種多様なコラーゲン関連分子も存在している。コラーゲン繊維は通常プロテオグリカンと結合している。コアポリペプチドと１以上のグルコサミノグリカン側鎖からなるこれらのタンパク質も、多種多様なクラスに分類される。基底膜では、ラミニン及びエンタクチン（ニドゲン）が重要な成分である。フィビュリン（ｆｉｂｕｌｉｎ）は数種の基底膜タンパク質との結合部位を有するタンパク質である。ウンドゥリン（ｕｎｄｕｌｉｎ）は、コラーゲンと共に正常な肝臓では少量、線維症の肝臓では多量に認められる繊維形成タンパク質である。
【０００６】
結合組織中のコラーゲンその他のタンパク質はＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐアミノ酸配列を含んでおり、インテグリン類の細胞接着分子との結合部位を与える。他のアミノ酸配列がコア結合モチーフを構成していることもあり、リガンドの他の部分が特異性及び親和性に寄与していることもある。β１インテグリンはコラーゲン結合に重要である。その他のコラーゲン結合タンパク質としてはジスコイジンドメイン受容体が挙げられるが、これはチロシンキナーゼの活性化によってコラーゲンに応答する。
【０００７】
コラーゲン繊維は横方向には柔軟であるが、弾性でも圧縮性でもない。結合組織の弾性は、タンパク質エラスチンとその関連タンパク質であるオキシタラン及びエラウニンに由来するものである。その他のタンパク質として、フィブリリン１及び２がエラスチンその他の構造成分（ミクロフィブリル結合糖タンパク質）と共に弾性繊維を形成する。異常弾性繊維は肝線維症の領域に見出される。
【０００８】
コラーゲンの沈着は創傷治癒における共通の過程であり、よく知られた「瘢痕組織」の形成をもたらす。コラーゲン沈着は組織の機能を低下させる過程である。これは組織の弾性が重要である場合に明らかであり、その顕著な例は心筋梗塞の治癒時に形成される瘢痕組織である。肝臓では、剛性繊維の影響はさほど顕著ではない。肝線維症の過程では、肝細胞と肝類洞の有窓内皮との間の空間での細胞外マトリックス物質の沈着と同時に類洞から通常の基底膜を有する毛細管への変換が起こる。この変換によって、血液と肝細胞の間の溶質移動が妨害され、肝臓の機能が低下する。
【０００９】
肝線維症は、肝細胞の損傷又は細胞死を引き起こす損傷によって開始する。損傷は炎症反応を惹起する。サイトカイン、走化性因子及びＥＣＭマトリックスタンパク質（コラーゲン及びフィブロネクチン）断片の放出によって、肝細胞の活性化と顆粒球のような炎症細胞の動員が起こる。酸化ストレスを始めとする炎症が肝線維症の多くの原因の一般要因である。重要な事象は星状細胞（脂肪摂取細胞とも伊東細胞ともいう）の活性化である。正常な肝臓でのこれらの細胞の最もよく知られた機能はビタミンＡの貯蔵である。活性化によって細胞はビタミンＡを喪失し、筋線維芽細胞に分化する。これらの細胞はコラーゲン産生細胞である。
【００１０】
肝線維症の原因物質は、アルコール、肝炎ウイルス、胆管炎、ヘモクロマトーシス、ウィルソン病及び住血吸虫症など数多く存在する。実験動物（通常ラット）では、四塩化炭素又はチオアセタミドで線維症を誘起できる。これらの物質の大半は、コラーゲン沈着を始めとする明瞭な肝損傷パターンを生じる。炎症反応の役割は多様であり、例えばヘモクロマトーシスのような病態では酸化ストレスが重要である。
【００１１】
損傷の程度及び時期が限られていれば、生じる線維症は可逆的である。肝臓での長期のストレスは、全般的損傷、再生結節の形成及び肝臓の構造を歪める線維症で特徴付けられる肝硬変を招きかねない。ラットでは、Ｉ型コラーゲンの半減期は３０日であり、ＩＩＩ型コラーゲンの半減期は１５日である。四塩化炭素で肝硬変を誘起すると、両コラーゲン共に半減期が５０％低下する。コラーゲン量は正常値よりも５〜１０倍高いレベルに達する（ただし、３０〜３５ｍｇ／ｇを超えることはない）。
【００１２】
肝線維症の診断及び治療のポイントは、不可逆的肝損傷及びそれに伴う機能低下を防ぐことである。コラーゲン沈着の量の増加及びパターン変化は肝線維症の指標となる。陽性の生検はその決定的な証拠と考えられる。生検は侵襲的方法であり、重大な合併症を１〜５％の頻度で引き起こす。ガイドなしの一回の生検では、症例の１０〜３０％で肝硬変の見落としを生じる。３つの標本を検査すれば、正確な診断を１００％に増すことができる。合併症の発生率は生検の回数と共に増加するので、３回の生検を行うと合併症の発生率は１０％のオーダーに増しかねない。さらに生検の評価は決して単純なものではない。
【００１３】
肝疾患のどのステージでも、線維症の領域で最大４倍もの変動がみられ、さらには、異なるステージ間でも線維症の領域に実質的なオーバーラップがみられる。したがって、コンピュータ画像解析で算出したコラーゲン量は線維症のステージの決定にはあまり価値がない。熟練観察者が標準化評価スキームを用いれば、ステージングに関する信頼性の高い情報が得られる。事実、これらのシステムはうまく機能するので、コラーゲン以外の組織マーカーを探す動機はほとんどない。しかし、ＥＣＭマトリックスタンパク質の一種であるテネイシンは所期病変に沈着し、成熟瘢痕組織には存在しないことが多いが、ビトロネクチンは成熟線維組織のマーカーである。
【００１４】
従前使用されてきた肝線維症の血清マーカーは、肝機能変化のマーカー（血小板数、肝トランスアミナーゼ）と、ＥＣＭターンオーバーのマーカーとの２種類に大別できる。後者には、コラーゲン沈着（例えば循環コラーゲンプロペプチド）及び／又はコラーゲン分解（例えばコラーゲンＩＶの循環断片）のマーカーがある。慎重に選択した複数のマーカーの組合せは単独マーカーよりも精度の高い結果を与える可能性があるが、この点については普遍的合意が存在するわけではない。
【００１５】
不可逆的損傷が起こる前の初期段階の線維症を診断できる信頼性の高い試験に対するニーズが明らかに存在する。将来の試験法に非常に望まれる特徴は、ＥＣＭの変化を定量できることである。
【００１６】
上述の通り、コラーゲンの過剰沈着は組織の弾性を低下させる。これは、心筋梗塞の治癒時に形成される瘢痕組織も含む。心臓の損傷又は心臓壁でのストレスの持続的増加の後に、心臓はリモデリングによる修復を試みる。このプロセスは、心室腔のサイズ及び形状の進行性の変化と心筋の組成変化とを伴う。典型的な反応には、生存筋細胞の肥大、並びにコラーゲンの種類、架橋及び濃度の変化が挙げられる。最初に、心臓筋細胞の肥大と同時に細胞外マトリックスが部分的に分解すると考えられる。その後、コラーゲン濃度が正常に戻ると慢性代償期に入る。しかし、心臓が代償できないときは、顕著な線維症にもかかわらず、リモデリングによって顕著な心室拡大を生じる。心不全の最終段階は、筋原線維の組織崩壊及び筋細胞の損失と併せて、細胞外マトリックスのさらなるリモデリングによって特徴付けられる。コラーゲンは蓄積し続けるが、コラーゲン原繊維は不規則に蓄えられる。
【００１７】
線維症は２００種以上の肺疾患の構成要素である。反復損傷又は持続的ストレス（例えば炎症及び／又は吸入粒子）が、結合組織の堆積の方向にバランスを移す遺伝要因と共に一般的な病因である。その一例はα1−プロテアーゼインヒビターの欠損であり、このタンパク質の活性は喫煙によっても低下する。その主な機能は好中球エラスターゼの阻害である。他の器官での線維症と同様、合成と分解のアンバランスによって、機能を実際に損なう修復プロセスが開始さることがある。心臓又は肝臓の線維症のように、病理には筋線維芽細胞が顕著に関係する。これらはまず線維芽細胞として動員され、その後で分化する。知覚できる炎症のないまま「修復プロセス」が継続し、進行性の機能低下を生じることもあると考えられる。
【００１８】
国際公開第８９／１０７５８号には、生体粒子の表面膜に結合させるための化合物が記載されている。これらの化合物は生理作用物質と１以上の炭化水素置換基とを含んでおり、炭化水素置換基は化合物が十分に非極性となって脂質結合性をもつように選択され、生理作用物質はシアニン色素であってもよい。
【００１９】
国際公開第９３／１１１２０号には、例えば細胞及びウイルスのような脂質含有生体適合性粒子に結合する化合物が記載されている。これらの化合物は、脂質結合性を担保するのに十分な非極性をもつように選択される。
【特許文献１】国際公開第８９／１０７５８号パンフレット
【特許文献２】国際公開第９３／１１１２０号パンフレット
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明は、過剰コラーゲン形成に関連する疾患の診断及び治療モニタリングに有用な新規造影剤を提供する。過剰コラーゲン沈着に関連する疾患及び適応症は、例えば心不全、肺及び肝線維症、アテローム性動脈硬化症、関節炎並びに皮膚障害である。
【００２１】
そこで、本発明は、上述したような心不全その他の過剰コラーゲン沈着が関与する疾患の診断に有用な造影剤であって、ターゲッティング部分に１以上の造影性部分を組み込んでなる造影剤を提供する。造影性部分は、被検体に投与したときに被検体の少なくとも造影剤が分布した部分の画像を、例えば放射線イメージング、単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）、磁気共鳴断層撮影（ＭＲＩ）、Ｘ線イメージング、光学イメージング（ＯＩ）、超音波（ＵＳ）イメージング、電気インピーダンス又は磁気的画像モダリティで生成できるものであればよい。
【００２２】
本発明はさらに、上記疾患のイメージング法、並びにかかる疾患に対する治療経過のモニタリング法を提供する。本発明は、新規医薬組成物及び診断用造影剤の製造用前駆体も提供する。造影剤のキット、特に放射性造影剤の製造用キットも提供される。
【００２３】
本発明の造影剤は一般式（Ｉ）で表される。
【００２４】
Ｚ1−Ｌ−Ｖ−Ｚ2 （Ｉ）
以下、これについて詳細に説明する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
一態様では、本発明は、特許請求の範囲に規定する式（Ｉ）の造影剤を提供する。
【００２６】
Ｚ1−Ｌ−Ｖ−Ｚ2 （Ｉ）
一般式（Ｉ）の造影剤において、Ｚ1及びＺ2は少なくともその一方が存在していてヒト又は動物の身体におけるインビボイメージングで検出できるレポーター部分であり、Ｖはコラーゲン形成領域に親和性をもつターゲッティング部分であり、Ｌは共有結合、バイオモディファイヤー又はリンカー基である。
【００２７】
以下、ＺはＺ1及びＺ2の少なくとも一方を意味する。Ｚは、いかなる造影性部分であってよい。
【００２８】
診断、特にインビボ診断に有用な造影剤については、Ｚ部分は１以上の造影性部分を含む。造影性部分自体をＶ又はＬ（存在する場合）に直接結合できない場合、例えば造影性部分が金属粒子又は金属イオン（以下、Ｍと記す）である場合、ＺはＹ1Ｍ部分を含むが、Ｙ1はＶ又はＬ（存在する場合）に結合できて、同時にＭを担持する基である。担持とは、化学結合（例えば共有結合、電気原子価結合又はイオン結合）又は吸収その他の種類の会合など、成分Ｙ1とＭとのあらゆる形態の結合を意味する。Ｍが金属粒子又は金属イオンである場合、Ｙ1はキレート剤を表す。
【００２９】
Ｚ及び／又はＹ1Ｍの性状は、診断に利用される画像モダリティに依存する。Ｚ及び／又はＹ1Ｍはインビボ画像診断で直接又は間接的に検出できるものでなければならず、例えば、検出可能な放射線を（放射性崩壊、蛍光励起、スピン共鳴励起などによって）放出する成分もしくは放出を誘起する成分、局所的電磁場に影響を与える成分（例えば、常磁性、超常磁性、フェリ磁性又は強磁性種）、放射線エネルギーを吸収又は散乱する成分（例えば、発色団、粒子（気体又は液体含有ベシクルも包含する。）、重元素及びその化合物など）、並びに検出可能な物質を生成する成分（例えば、気体マイクロバブル発生剤）などである。
【００３０】
後記の式（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）のキレート剤が特に好ましい。
【００３１】
多種多様な適当な造影性部分が知られており、例えば国際公開第９８／１８４９６号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００３２】
以下、画像モダリティ及び造影性部分Ｚ及びＭに関してさらに詳しく説明する。
【００３３】
第一の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のＺ部分は、放射線及びＳＰＥＣＴ画像モダリティに有用な１以上の造影性部分Ｍを担持する部分Ｙ1を含む。好ましくは、Ｍはα線及びβ線をほとんど或いは全く放射しない半減期１時間以上のγ放射体である。好ましいＭ成分は、放射性核種67Ｇａ、111Ｉｎ、123Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、81mＫｒ、99Ｍｏ、99mＴｃ、201ＴＩ及び133Ｘｅである。最も好ましいのは99mＴｃである。
【００３４】
Ｍは、イメージング及び治療のいずれの用途にも使用できる以下に挙げる同位体又は同位体対であってもよく、放射性標識法又はキレート剤を変更する必要はない：47Ｓｃ21、141Ｃｅ58、188Ｒｅ75、177Ｌｕ71、199Ａｕ79、47Ｓｃ21、131Ｉ53、67Ｃｕ29、131Ｉ53と123Ｉ53、188Ｒｅ75と99mＴｃ43、90Ｙ39と87Ｙ39、47Ｓｃ21と44Ｓｃ21、90Ｙ39と123Ｉ53、146Ｓｍ62と153Ｓｍ62、及び90Ｙ39と111Ｉｎ49。
【００３５】
Ｍが金属放射性核種を表す場合、Ｙ1は、Ｍとの安定キレートの形成に適したキレート剤を表す。かかるキレート剤は当技術分野で周知であり、かかるキレート剤の典型例は国際公開第０１／７７１４５号の表Ｉに記載されている。
【００３６】
特に好ましいのは、次の式（ＩＩ）のキレート剤Ｙ1である。
【００３７】
【化１】
式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は各々独立にＨ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ3-10アルキルアリール、Ｃ2-10アルコキシアルキル、Ｃ1-10ヒドロキシアルキル、Ｃ1-10アルキルアミン又はＣ1-10フルオロアルキル基であるか、或いは２以上のＲ基がそれらに結合した原子と共に炭素環、複素環、飽和又は不飽和環を形成するものである。
【００３８】
特に好ましいのは、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3が水素又はメチル基であり、Ｒ4がアルキルアミン基である式（ＩＩ）のキレート剤Ｙ1であり、特に次の式（ＩＩＩ）の化合物（本明細書ではｃＰＮ１２６という。）である。
【００３９】
【化２】
Ｚとして最も好ましいのはｃＰＮ２１６と99mＴｃのキレートである。
【００４０】
式（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）のキレート剤の合成は国際公開第０３／００６０７０号に記載されている。
【００４１】
123Ｉ、125Ｉ及び131Ｉのような非金属放射性核種からなるＺ基は、当技術分野で周知の置換又は付加反応によって、Ｖ及びＬ（存在する場合）に共有結合させることができる。
【００４２】
第二の実施形態では、式（Ｉ）の化合物はＰＥＴ画像モダリティに有用なＺ部分を含む。この場合、Ｚは陽電子放出性をもつ放射線放出体を表す。好ましいＺ基は、放射性核種11Ｃ、18Ｆ、68Ｇａ、13Ｎ、15Ｏ及び82Ｒｂである。18Ｆが特に好ましい。キレート剤Ｙ1でキレート化された金属放射線放出体82Ｒｂ及び68Ｇａも好ましい。
【００４３】
チオールカップリングの化学、18Ｆシントン及びチオールカップリング反応を用いて調製される標識ペプチドは、国際公開第０３／０８０５４４号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００４４】
チオールカップリング反応を用いた標識ペプチドの詳細は、国際公開第２００５／０１２３３５号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００４５】
別の好ましい実施形態では、Ｙ1はＤＯＴＡキレート剤であり、Ｍは68Ｇａであってマイクロ波化学で容易にキレート剤に導入し得る。
【００４６】
18Ｆのような非金属放射性核種からなるＺ基は、当技術分野で周知の置換又は付加反応によって、Ｖ及びＬ（存在する場合）に共有結合させることができ、かかる反応は例えば国際公開第０３／０８０５４４号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００４７】
第三の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のＺ部分は、ＭＲ（磁気共鳴）画像モダリティに有用な１以上の造影性部分Ｍを担持する部分Ｙ1を含む。この場合、Ｍは米国特許第４６４７４４７号に記載されているような常磁性金属イオンを表す。常磁性金属イオンＧｄ3+、Ｄｙ3+、Ｆｅ3+及びＭｎ2+が特に好ましい。Ｙ1はキレート剤、特に米国特許第４６４７４４７号及び国際公開第８６／０２８４１号などに記載されているような非環式又は環式ポリアミノカルボキシレートのようなキレート剤（例えばＤＴＰＡ、ＤＴＰＡ−ＢＭＡ、ＤＯＴＡ及びＤＯ３Ａ）を表す。
【００４８】
ＭＲ造影法では、Ｍは、超常磁性種、フェリ磁性種又は強磁性種のような金属酸化物であってもよく、これらは例えばＺが金属酸化物のコーティングとして機能するようにＺに吸収される。ＭＲ造影剤として用いられる金属酸化物は、例えば米国特許第６２３０７７７号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００４９】
第四の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のＺ部分は、Ｘ線画像モダリティに有用な１以上の造影性部分Ｍを担持する部分Ｙ1を含む。この場合、ＭはＷ、Ａｕ及びＢｉのような重金属であって、Ｚに吸収され得る酸化物の形態、或いは金属の形態（酸化数０）にある。Ｚは、Ｘ線造影剤として周知のヨウ素化アリール誘導体、例えばＩｏｐａｍｉｒｏｎ（商標）及びＯｍｎｉｐａｑｕｅ（商標）であってもよい。これらの造影剤は、そのアミド又はアミン官能基を介して式（Ｉ）のＶ又はＬ（存在する場合）に結合させることができる。
【００５０】
他の実施形態では、式（Ｉ）の化合物はガス充填マイクロベシクルの形態のＺを含む。かかる超音波造影剤は受容体のイメージングに利用することができ、例えば国際公開第９８／１８５００号のような従来技術に記載の通り、官能化してペプチドに結合させればよい。
【００５１】
本発明の第六の実施形態では、式（Ｉ）の部分Ｚは、光学イメージング法で直接又は間接的に検出し得る基であってもよい。検出性基は、光散乱体（例えば着色又は無着色粒子）でも、光吸収体でも、発光体でもよい。さらに好ましくは、Ｚは発色団又は蛍光化合物のような色素である。Ｚ基は紫外乃至近赤外域の波長を有する電磁スペクトルの光と相互作用する色素であればよい。好ましい形態ではＺは蛍光性を有する。
【００５２】
好ましい有機色素基としては、広く非局在化した電子系を有する基、例えばシアニン、メロシアニン、インドシアニン、フタロシアニン、ナフタロシアニン、トリフェニルメチン、ポルフィリン、ピリリウム色素、チアピリリウム色素、スクアリリウム色素、クロコニウム色素、アズレニウム色素、インドアニリン、ベンゾフェノキサジニウム色素、ベンゾチアフェノチアジニウム色素、アントラキノン、ナフトキノン、インダスレン、フタロイルアクリドン、トリスフェノキノン、アゾ色素、分子内及び分子間電荷移動色素及び色素錯体、トロポン、テトラジン、ビス（ジチオレン）錯体、ビス（ベンゼン−ジチオレート）錯体、ヨードアニリン色素、ビス（Ｓ，Ｏ−ジチオレン）錯体が挙げられる。蛍光タンパク質、例えば緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）及び吸収／発光特性の異なるＧＦＰ修飾物も有用である。ある種の希土類金属（例えばユーロピウム、サマリウム、テルビウム又はジスプロシウム）の錯体も、蛍光ナノ結晶（量子ドット）のような特定の状況で用いられる。
【００５３】
光学造影性基の好ましい例は、シアニン色素（ＣｙＤｙｅ（商標））である。シアニン色素は、交互に並んだ炭素−炭素単結合と炭素−炭素多重結合（好ましくは二重結合）で奇数個の炭素原子が結合してなるポリエン鎖として定義される化合物であり、いずれかの末端はアミノ基であり、その１つは四級化されている。シアニン及び類似のアリール−リンカー−アリール発色団は適宜側鎖置換基又は縮合環置換基を有していてもよい。シアニン色素及びその合成についての概説は、米国特許第６０４８９８２号、同第５２６８４８６号及び欧州特許第１０３７９４７号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。シアニン色素は、広範なスペクトル特性及び様々な構造のものが利用できるため、特に有用である。幅広いシアニン色素が周知であり試験されているが、それらは毒性が低く、市販されている（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社（以前の社名はＡｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ））。シアニン色素は極めて強い色素の一群であり、良好な水溶性を有する。これらはｐＨ３〜１０でｐＨ非感受性であり、非特異的結合も低く、フルオレセインよりも光安定性が高い。
【００５４】
シアニン色素は、好ましくは以下の一般式のカルバシアニン、オキサシアニン、チアシアニン及びアザシアニンからなる群から選択される。
【００５５】
【化３】
これらの構造において、Ｊ１基は同一又は異なるもので、置換又は非置換アルキル基、好ましくはＣ1−Ｃ6アルキル基であり、エーテル又はＮ−ＣＯ−Ｎ−を含んでもよい。アルキル基は、カルボキシ、スルホン酸、アミン、アンモニウム又はエステル基で適宜置換されていてもよい。Ｊ１基はポリエン鎖のいずれかの炭素原子と、例えば−Ｎ−ＣＯ−Ｎ−基又はエーテル基によって、架橋を形成していてもよい。Ｊ２基も同一又は異なるもので、置換又は非置換アルキル基である。アルキル基はカルボキシ又はスルホン酸基で適宜置換されていてもよいが、好ましくはＪ２基はＣ1−Ｃ6アルキルのような低級アルキル基であり、最も好ましくはメチル基である。任意要素としての芳香族基は点線で示してあり、縮合ベンゾ環及び縮合ナフト環を含む構造を包含する。環は置換又は非置換である。環は、スルホン酸基、カルボキシル基、ヒドロキシル基、アルキル（スルホアルキル）アミノ基、ビス（スルホアルキル）アミノ基、スルホアルコキシ基、スルホアルキルスルホニル基、アルキル基、置換アルキル基又はスルホアルキルアミノ基で置換されていてもよい。アルキル基は好ましくは低級アルキル（例えば炭素原子数１〜６のもの）である。Ｙは水素、ハライド基、アミン基又はスルホニルから選択され、好ましくは水素である。シアニン色素のポリエン鎖も、ポリエン鎖の２以上の炭素原子間で架橋を形成する１以上の環状基を含んでいてもよく、例えばスクアライン色素のように鎖の２つの炭素原子の間に−ＣＯ−基を含んでいてもよいし、或いはアルキル架橋を含んでいてもよい。これらの架橋は色素の化学的又は光安定性を高める作用をもつことがある。
【００５６】
式ＶＩ〜ＩＸにおいて、ｌは１、２、３又は４の正の整数であり、炭素原子数３の炭素架橋を有するトリメチンシアニン、ペンタメチンシアニン、ヘプタメチンシアニン又はノナメチンシアニン色素を与える。好ましくは、シアニン色素は各々炭素原子数５及び７の炭素架橋を有する色素である。
【００５７】
Ｊ１及びＪ２は、適宜リンカー基Ｌを介して色素をターゲティング部分Ｖに結合するための潜在的連結部位であるが、Ｊ１が好ましい。好ましい態様では、一方のＪ１基がターゲッティング部分Ｖと結合し、残りのＪ１基はＣ1−Ｃ6アルキル基で適宜置換される。
【００５８】
光学イメージング法に適した基についての詳細は、国際公開第２００５／００３１６６号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００５９】
式（Ｉ）の化合物の部分Ｖはコラーゲン形成領域に親和性をもつアミノ酸配列Ｘ3−Ｇ−Ｄを含む。化合物は好ましくは追加のアミノ酸と適宜追加の基を含んでいるが、Ｘ3−Ｇ−Ｄ配列が、コラーゲン形成領域に結合するベクターとして機能するペプチドベクターの結合座である。
【００６０】
本発明の式（Ｉ）の化合物は、例えばペプチドベクターの部分において１以上の環化架橋が形成されたものに限定してもよい。単環式ペプチド化合物はアミノ酸間のジスルフィド結合又はチオエーテル結合の形成によって得ることができる。式（Ｉ）の化合物は好ましくは化合物の異なるアミノ酸の間の２つの環化架橋を含む。「環化架橋」という用語は、アミノ酸同士、又は、架橋導入を可能にする官能基を有する−（ＣＨ2）n−又は−（ＣＨ2）n−Ｃ6Ｈ4−基とアミノ酸との任意の結合を指す。ｎは１〜１０までの正の整数である。好ましい例は、ジスルフィド架橋、例えば−（ＣＨ2）4−カルバ架橋のようなジスルフィド類似体、チオアセタール、チオエーテル架橋（シスタチオン又はランチオニン）、並びにエステル及びエーテルを含む架橋である。好ましくは、第一の架橋がジスルフィド結合を形成し、第二の架橋がチオエーテル（スルフィド）結合を含む。
【００６１】
その他の実施形態では、式（Ｉ）におけるベクターＶは式（ＶＩ）で表され、２つの環化架橋を含む。
【００６２】
Ｒa−Ｃ（＝Ｏ）−Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｇ−Ｄ−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6 （ＶＩ）
式中、Ｘ1は共有結合又は１、２、３、４又は５個のアミノ酸残基であり、これらのアミノ酸残基のうちの１つはリンカー基Ｌで適宜官能化されていてもよく、好ましくはアミノ酸残基は酸又はアミン基のような官能側鎖を有するもの、好ましくはアスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、オルニチン、ジアミノ酪酸又はジアミノプロピオン酸から選択される。
Ｘ2及びＸ4は独立に環化架橋を形成できるアミノ酸残基、例えばジスルフィド結合又はチオエーテル結合を形成するシステイン又はホモシステイン残基、或いはアスパラギン酸及びリシンのような環化架橋を形成できる他のアミノ酸残基であり、好ましくはＸ2及びＸ4はシステイン又はホモシステイン残基である。
Ｘ3はアルギニン、Ｎ−メチルアルギニン又はアルギニン模倣体である。
Ｘ5は疎水性アミノ酸又はその誘導体であり、好ましくはチロシン、フェニルアラニン、３−ヨードチロシン又はナフチルアラニン残基、さらに好ましくはフェニルアラニン又は３−ヨードチロシン残基である。
Ｘ6は環化架橋を形成できるアミノ酸残基であり、好ましくはチオール含有アミノ酸残基、好ましくはシステイン又はホモシステイン残基である。
ＲaはＸ2、Ｘ4又はＸ6のいずれかと架橋を形成できる−（ＣＨ2）n−又は（ＣＨ2）n−Ｃ6Ｈ4−基である。
ｎは１〜１０の正の整数である。
【００６３】
本発明の一実施形態では、式（Ｉ）における部分Ｌは、均質バイオモディファイヤー基、好ましくは単分散ＰＥＧ構成単位を１〜１０単位含むものであり、バイオモディファイヤーは薬剤の薬物動態及び血中クリアランス速度を変化させる機能を有する。Ｌは１〜１０個のアミノ酸残基、好ましくはグリシン、リシン、アスパラギン酸又はセリンを表すものでもよい。好ましい実施形態では、Ｌは式（Ｖ）の１７−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸の単分散ＰＥＧ様構造からなるバイオモディファイヤー単位を表す。
【００６４】
【化４】
式中、ｍは１〜１０の整数であり、Ｃ末端単位はアミド基である。
【００６５】
上述の通り、バイオモディファイヤー基（Ｌ）は化合物の薬物動態及び血液クリアランス速度を変化させる。バイオモディファイヤー基は化合物の組織（筋肉、肝臓など）への取り込みを低減するように作用し、そのためバックグラウンド干渉が低減するので診断画像が向上する。分泌は主に腎臓を経るが、これもバイオモディファイヤーの利点として挙げられる。
【００６６】
Ｌは、好ましくはグルタル酸及び／又はコハク酸及び／又はポリエチレングリコール系単位及び／又は上記の式（Ｖ）の単位から誘導されるものであってもよい。
【００６７】
その他の代表的なＬ要素としては、構造多糖類、貯蔵多糖類、ポリアミノ酸及びそのメチル及びエチルエステル、ポリペプチド、オリゴ糖及びオリゴヌクレオチドが挙げられ、酵素切断部位を含んでいても含んでいなくてもよい。
【００６８】
本発明のペプチドは、あらゆる公知の化学合成法で合成できるが、特に有用な方法は自動ペプチド合成装置を用いたＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄの固相法である（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９（１９６４））。合成法の標準的手順は、Ｅ．Ａｔｈｅｒｔｏｎ ＆ Ｒ．Ｃ．Ｓｈｅｐｐａｒｄ， “Ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ： ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ， １９８９， ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ， Ｏｘｆｏｒｄに記載されている。
【００６９】
酸不安定リンカー基を有する樹脂を用いて、これに、所望の保護Ｃ末端アミノ酸残基をアミド結合形成によって結合させる。例えば、（ジメトキシフェニル−アミノメチル）−フェノキシ系リンカーを有するいわゆるＲｉｎｋ ａｍｉｄｅ ＡＭ樹脂が応用できる（Ｒｉｎｋ，Ｈ．（１９８７），Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３０，ｐ．３７８７）。この樹脂からペプチドを酸分解で切り離せば、ペプチドアミドが得られる。別法として、Ｏ−ビス−（アミノエチル）エチレングリコールトリチル樹脂（Ｋ．Ｂａｒｌｏｓ ｅｔ ａｌ（１９８８）， Ｌｉｅｂｉｇｓ Ａｎｎ． Ｃｈｅｍ， ｐ．１０７９）を用いることもでき、酸分解で切り離せば、第一アミンハンドルを有するペプチドが得られる。
【００７０】
ペプチジル樹脂はＣ末端からＮ末端の方向に合成される。まずＣ末端アミノ酸のＮ−アミノ保護基を外し、適当な縮合剤を用いて配列の２番目のアミノ酸をカップリングさせる。次いで、所望の配列が構築されるまでＮ−アミノ保護基の脱保護とカップリングのサイクルを交互に繰り返す。
【００７１】
一般に、ペプチド合成中、存在する反応性の基はすべて保護される。アミノ酸の保護基としては多種多様なものが知られている（例えばＧｒｅｅｎｅ， Ｔ．Ｗ． ＆ Ｗｕｔｓ， Ｐ．Ｇ．Ｍ．（１９９１） Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ参照）。オルトゴナル保護法（Ｂａｒａｎｙ，Ｇら、（１９７７）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，９９，ｐ７３６３）を用いることもできる。例えば、ピペリジン不安定性の９−フルオレニルメトキシ−カルボニル（Ｆｍｏｃ）基と超酸不安定性の４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）基、ヒドラジン不安定性の２−アセチルジメドン（Ｄｄｅ）基と酸不安定性のｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）基のように、異なるアミン保護基を組合せると、異なるアミン部位に異なる部分を選択的に導入できる。さらに、Ｃｙｓ側鎖用の酸不安定トリチル（Ｔｒｔ）保護基と、他のＣｙｓ残基用のｔｅｒｔ−ブチル保護基（酸性酸化条件下（例えばＴＦＡ−２％ジメチルスルホキシド）下で不安定）とを組合せると、選択的ジスルフィド形成がなされる。
【００７２】
完成したペプチジル樹脂をＮ末端でクロロアセチル化すれば、Ｎ末端とＣｙｓ残基との間にチオエーテル架橋を導入することができる。
【００７３】
ペプチドは、当技術分野で公知の通り、蒸留した無酸素の緩衝液（ｐＨ約９）に溶解し、窒素雰囲気下に維持した化合物をＳｎ−ＭＤＰ及びＮａ99mＴｃＯ4溶液で処理することによって99mＴｃ標識される
非限定的な実施例１〜４によって本発明をさらに例示する。実施例では、２種類のＺ及び／又はＹ1Ｍ部分を有する化合物の合成について記載する。化合物の99mＴｃでの標識化についても記載する。
【００７４】
ペプチドにおける各種アミノ酸の位置は上付きの番号で示す（例えばＣｙｓ2）。
【実施例】
【００７５】
実施例１
Ｃｙｓ２−６；ｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（Ｎ−（５−スルホ−ナフタレン−２−イル）−Ｓｕｃｃ）−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−ＧｌｕｔｃＰｎ２１６）−ＮＨ2（４）及びその99mＴｃキレート（４ａ）
【００７６】
【化５】
ＣｌＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂１の固相合成
上記配列に対応するペプチジル樹脂を、標準的な固相ペプチド化学合成法（Ｂａｒａｎｙ，Ｇ；Ｋｎｅｉｂ−Ｃｏｒｄｏｎｉｅｒ，Ｎ；Ｍｕｌｌｅｎｍ Ｄ．Ｇ．（１９８７）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３０，７０５−７３９）を用いて、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂（０．７３ｍｍｏｌ／ｇ；ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ社製）で合成した。Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社）モデル４３３Ａペプチド合成装置を用いた。これらの残基は（カルボキシル末端から）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）中の４倍モル過剰のＮα−Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（１ｍｍｏｌカートリッジ）及び２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）／１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）／ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）によるカップリングサイクル２．５時間のシングルカップリングによって０．２５ｍｍｏｌスケールで構築した。Ｆｍｏｃの脱保護はＮＭＰ中の２０％ピペリジン溶液を用いて、電導度をモニターしながら行った。使用したアミノ酸側鎖保護基は、Ｌｙｓ1には４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、Ｃｙｓ2、Ｃｙｓ6及びＡｓｐにはｔｅｒｔ−ブチル（ｔＢｕ）、Ａｒｇには２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）、Ｃｙｓ8にはトリチル（Ｔｒｔ）、Ｌｙｓ10にはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）であった。
【００７７】
構築したペプチジル樹脂を、手動窒素バブラー装置（Ｗｅｌｌｉｎｇｓ，Ｄ．Ａ．，Ａｔｈｅｒｔｏｎ，Ｅ．（１９９７）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｆｉｅｌｄｓ，Ｇ．編），２８９，ｐ．５３−５４，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ社（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）に記載）に移した。Ｎ末端のＦｍｏｃを脱保護し、ジクロロメタン（ＤＣＭ）中でクロロ酢酸（２０当量）とＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（１０当量）を反応させて得た１０倍モル過剰の対称酸無水物を用いてジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中でクロロアセチル化した。５％のトリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）と１％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含むＤＣＭで、５×２分間又は濾液が無色になるまでペプチジル樹脂を処理することによって、Ｎε−Ｌｙｓ1のＭｔｔ保護基を選択的に外した。完成したＣｌＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂１を、ＤＭＦ中の５％ＤＩＥＡ溶液で中和し、最後にＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄し、減圧乾燥した。
【００７８】
Ｃｙｓ２−６；ｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（Ｎ−（５−スルホ−ナフタレン−２−イル）−Ｓｕｃｃ−）−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ2（３）の合成
６−アミノ−１−ナフタレンスルホン酸（Ｄａｈｌ酸）（１当量、０．５ｍｍｏｌ）を、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）（２当量）を含むＤＭＦに溶解し、無水コハク酸（１０当量）を加えた。一晩反応させた後、溶媒を減圧下で除去し、生成物を分取用ＲＰ−ＨＰＬＣ（逆相ＨＰＬＣ）で精製した。カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １０μ、２２×２５０ｍｍ）は、流速１０ｍｌ／分で４０分間、０．１％ＴＦＡ水溶液中の５〜１５％アセトニトリル（ＡＣＮ）濃度勾配で溶出した。操作を６回繰り返し、所望のピークを含む画分を回収し、凍結乾燥し、１４６ｍｇの純粋なＮ−（−５−スルホ−ナフタレン−２−イル）−スクシンアミド酸（２）を得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析条件：ｔR＝１６．７分（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ、４．６×２５０ｍｍ、流速１ｍｌ／分、２０分間で０．１％ＴＦＡ水溶液中のＡＣＮ濃度５〜１５％、λ＝２１４ｎｍ）。エレクトロスプレーＭＳ：生成物の［Ｍ＋Ｈ］+の予想値３２４．０ｍ／ｚ、実測値３２４．０ｍ／ｚ。
【００７９】
ＮＭＭ（１５当量）を含むＤＭＦ中のＮ−（−５−スルホ−ナフタレン−２−イル）−スクシンアミド酸２（５当量）及びＮ−［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ−［４，５−ｂ］ピリジン−１−イルメチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキシド（ＨＡＴＵ）の溶液をペプチジル樹脂（１）に添加した。手動窒素バブラー装置内で一晩反応を進行させた。
【００８０】
得られたペプチジル樹脂を、２．５％のＴＩＳと２．５％の水を含むＴＦＡで処理して、Ｃｙｓ2,6−ｔＢｕ保護ペプチドを樹脂から切断すると同時に、他の側鎖保護基をすべてペプチドから外した。樹脂残渣を濾別し、少量の純ＴＦＡで洗浄した。濾液及び洗浄液を回収し、ロータリーエバポレータで濃縮し、ジエチルエーテルで倍散し、粗生成物を得た。沈殿を遠心分離で単離し、エーテルで洗浄した後、５０％ＡＣＮ−０．１％ＴＦＡ水溶液から凍結乾燥し、６０ｍｇの粗生成物を得た。
【００８１】
線状ペプチドの環化を、まずｐＨ７．５（アンモニア水で調節）の５０％ＡＣＮ水溶液中で０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドを室温で６０分間撹拌してチオエーテル架橋を形成することによって行った。環化生成物を凍結乾燥で単離した。次に、ＴＦＡ−２％ジメチルスルホキシド中０．５ｍｇ／ｍｌ濃度でｔＢｕの脱保護とジスルフィド形成を同時に室温で６０分間かけて行うことによって、内部ジスルフィド架橋を形成した。ＴＦＡを減圧除去し、上記と同様にペプチドをエーテルから単離し、乾燥し、６２ｍｇの環化生成物を得た。粗生成物を分取用ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １０μ、５０×２５０ｍｍ）は、流速５０ｍｌ／分で６０分間、０．１％ＴＦＡ水溶液中の１５〜２０％アセトニトリル（ＡＣＮ）濃度勾配で溶出した。所望のピークを含む画分を回収し、凍結乾燥し、１２ｍｇの純粋な生成物（３）を得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析条件：ｔR＝１２．９分（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ、４．６×２５０ｍｍ）、流速１ｍｌ／分、２０分間で０．１％ＴＦＡ水溶液中のＡＣＮ濃度１５〜２０％、λ＝２１４ｎｍ。エレクトロスプレーＭＳ：生成物の［Ｍ＋Ｈ］+の予想値１４５８．５ｍ／ｚ、実測値１４５８．２ｍ／ｚ。
【００８２】
ｃＰＮ２１６−グルタリル基のペプチド（３）への結合
ＤＭＦ中のｃＰＮ２１６−グルタリル−テトラフルオロチオフェニルエステル（２当量）溶液を、ＤＭＦ中のペプチド３（１当量、０．００８ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、次いでＮＭＭ（６当量）を添加した。反応混合物を一晩撹拌した後、反応混合物から溶媒を減圧除去し、次いで分取用ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １０μ、２２×２５０ｍｍ）は、流速１０ｍｌ／分で６０分間、０．１％ＴＦＡ水溶液中の１３〜２０％ＡＣＮ濃度勾配で溶出した。所望のピークを含む画分を回収し、凍結乾燥し、８ｍｇの純粋な化合物４を得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析条件：ｔR＝１８．４分（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ、４．６×２５０ｍｍ、流速１ｍｌ／分、２０分間で０．１％ＴＦＡ水溶液中のＡＣＮ含量１５〜２５％、λ＝２１４ｎｍ）。エレクトロスプレーＭＳ：生成物の［Ｍ＋Ｈ］2+の予想値９４９．４ｍ／ｚ、実測値９４９．５ｍ／ｚ。
【００８３】
ペプチド（４）の99mＴｃによる標識
ペプチド（４）（０．１ｍｇ）を、生理食塩水又はメタノール（０．１ｍｌ）中で再構成し、賦形剤の凍結乾燥ツールボックスキット内に移した。アミンによるキレート化に適した汎用放射性標識条件を与えるよう設計されたツールボックスキットは、無水塩化スズ（ＩＩ）（１６μｇ）、メチレンジホスホン酸（２５μｇ）、炭酸水素ナトリウム（４５００μｇ）、炭酸ナトリウム（６００μｇ）、ｐ−アミノ安息香酸ナトリウム（２００μｇ）を含んでおり、キットのｐＨ＝９．２である。過テクネチウム（99mＴｃ）酸ナトリウム生理食塩水注射液（２．１ＧＢｑ）（３ｍｌ）を添加し、キットを数回反転させて内容物を溶解し、室温で１５〜２０分間インキュベートした。試料をすぐにＨＰＬＣ及びＩＴＬＣで分析し、99mＴｃ標識ペプチドを、キットの再構成から１〜３時間後に被検体に投与した。
【００８４】
実施例２
Ｃｙｓ２−６；ｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（Ｎ−［５−スルホ−ナフタレン−２−イル］−Ｓｕｃｃ−Ｌｙｓ（Ｎ−［５−スルホ−ナフタレン−２−イル］−Ｓｕｃｃ）−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−（Ｇｌｕｔ−ｃＰｎ２１６）−ＮＨ2（９）及びその99mＴｃキレート（９ａ）
【００８５】
【化６】
Ｃｙｓ２−６；ｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−（Ｇｌｕｔ−ｃＰｎ２１６）−ＮＨ2 化合物７の合成
上記の実施例１に記載のペプチジル樹脂（１）を、手動窒素バブラー装置を用いてＤＭＦ中の２−アセチルジメドン（Ｄｄｅ−ＯＨ）の溶液で２時間処理して、Ｎε−Ｌｙｓ1を保護した。２．５％のＴＩＳと２．５％の水を含むＴＦＡで２時間処理して、部分保護ペプチドを樹脂から切り離した。反応混合物を実施例１と同様に処理し、ペプチドをエーテルから単離し、凍結乾燥して、７０ｍｇのＣｌＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ2（５）を得た。
【００８６】
線状ペプチド（５）を、上記の実施例１に記載したチオエーテル架橋の形成によって環化し、粗生成物（７８ｍｇ）を分取用ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １０μ、５０×２５０ｍｍ）は、流速５０ｍｌ／分で６０分間、０．１％ＴＦＡ水溶液中の２０〜４５％ＡＣＮ濃度勾配で溶出した。所望のピークを含む画分を回収し、凍結乾燥し、２６ｍｇの精製ｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ2（６）を得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析条件：ｔR＝１６．３５分（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ、４．６×２５０ｍｍ、流速１ｍｌ／分、２０分間で０．１％ＴＦＡ水溶液中のＡＣＮ濃度２０〜５０％、λ＝２１４ｎｍ）。エレクトロスプレーＭＳ：生成物の［Ｍ＋Ｈ］2+の予想値７１６．８ｍ／ｚ、実測値７１６．７ｍ／ｚ。
【００８７】
ＤＭＦ中のｃＰＮ２１６−グルタリル−テトラフルオロチオフェニルエステルキレート基（２当量）の溶液をペプチド６（１当量、０．００９ｍｍｏｌ）に添加し、次いでＮＭＭ（３当量）を添加し、混合物を一晩撹拌した。反応混合物に、２％溶液となるよう十分な量のヒドラジンを添加し、Ｎε−Ｌｙｓ1のＤｄｅ基を外した。３０分後、溶媒を減圧除去し、上記と同様の沈殿及び凍結乾燥によって生成物を単離した。最後にｔＢｕの脱保護及びジスルフィド形成を実施例１に記載の通り行って、１８ｍｇのペプチド（７）を得た。
【００８８】
ペプチド７のＮε−Ｌｙｓ1部位への分岐Ｄａｈｌ酸基の導入
ＤＭＦ中のＮ−（Ｎα,ε−ジ−Ｂｏｃ−リジルオキシ）スクシンイミド（３当量）の溶液を、ペプチド７（１当量、０．００６ｍｍｏｌ）に添加し、次いでＮＭＭ（５当量）を添加した。１８時間後に反応を完結し、溶媒を減圧下で除去した。ペプチド残基を、２．５％のＴＩＳと２．５％の水を含むＴＦＡで１５分間処理して、Ｃｙｓ２−６；ｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（Ｎ−Ｌｙｓ）−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−（Ｇｌｕｔ−ｃＰｎ２１６）−ＮＨ2（８）を得て、これを上記と同様に沈殿及び凍結乾燥した。
【００８９】
Ｎ−（−５−スルホ−ナフタレン−２−イル）−スクシンアミド酸（３）（１０当量）を、ＮＭＭ（３０当量）を含むＤＭＦ中のＨＡＴＵ（１０当量）で活性化した。３０分後に、この混合物を、ＤＭＦ中のペプチド（８）（１当量）の溶液に添加して２４時間反応させた。混合物を上記と同様に処理し、凍結乾燥ペプチド生成物を、分取用ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １０μ、１０×２５０ｍｍ）は、流速５ｍｌ／分で４０分間、０．１％ＴＦＡ水溶液中の１０〜３０％アセトニトリル（ＡＣＮ）濃度勾配で溶出した。所望のピークを含む画分を回収し、凍結乾燥し、２ｍｇの純粋なペプチド（９）を得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析条件：ｔR＝１７．４分（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ、４．６×２５０ｍｍ、流速１ｍｌ／分、２０分間で０．１％ＴＦＡ水溶液中のＡＣＮ濃度５〜３０％、λ＝２１４ｎｍ）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：生成物の［Ｍ＋Ｈ］+の予想値２３３０．９５ｍ／ｚ、実測値２３３０．２７ｍ／ｚ。
【００９０】
ペプチド９の99mＴｃ標識
実施例１のペプチド４の標識について記載した条件下で、ペプチド９を99mＴｃで標識した。
【００９１】
実施例３
Ｃｙｓ２，６；ｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（Ｃｙ５．５）−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｇｌｕｔ−ｃＰｎ２１６）−ＮＨ2（１０）及びその99mＴｃキレート（１０ａ）
【００９２】
【化７】
Ｃｙ５．５とペプチド７とのカップリング
Ｃｙ５．５−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（２当量）をＮＭＰに溶解し、溶液をペプチド７（１当量、０．００５ｍｍｏｌ）に添加し、次いでＮＭＭ（５当量）を添加した。反応は暗所で２日間進行せしめた。反応混合物を４５℃のロータリーエバポレータで濃縮した後、０．１％ＴＦＡ水溶液で希釈し、分取用ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １０μ、２２×２５０ｍｍ）は、流速１０ｍｌ／分で６０分間、０．１％ＴＦＡ水溶液中の１５〜３０％ＡＣＮ濃度勾配で溶出した。所望のピークを含む画分を回収し、凍結乾燥し、３．２ｍｇの純粋なペプチド（１０）を得た。分析ＲＰ−ＨＰＬＣ：ｔR＝２０．９分（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ、４．６×２５０ｍｍ、流速１ｍｌ／分、２０分間で０．１％ＴＦＡ水溶液中のＡＣＮ濃度１５〜３０％、λ＝２１４ｎｍ）。エレクトロスプレーＭＳ：生成物の［Ｍ＋Ｈ］2+の予想値１２４５．９７ｍ／ｚ、実測値１２４６．１ｍ／ｚ。
【００９３】
ペプチド１０の99mＴｃ標識
実施例１のペプチド４の標識について記載した条件下で、ペプチド１０を99mＴｃで標識した。
【００９４】
実施例４
Ｃｙｓ２，６；ｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（８−チオウリル−ピレン−１，３，６−トリスルホン酸）−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−Ｇｌｙ−ＢＡＥＧ−Ｇｌｕｔ−ｃＰｎ２１６−ＮＨ2（１４）及びその99mＴｃキレート（１４ａ）
【００９５】
【化８】
Ｃｙｓ２，６；ｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−Ｇｌｙ−ＢＡＥＧ−Ｇｌｕｔ−ｃＰｎ２１６−ＮＨ2 化合物１３の合成
上記配列に対応するペプチジル樹脂を、Ｏ−ビス−（アミノエチル）エチレングリコール（ＢＡＥＧ）トリチル樹脂（０．４４ｍｍｏｌ／ｇ；ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ社製）で、実施例１のペプチジル樹脂と同様の方法を用いて合成した。Ｎε−Ｌｙｓ1の保護基は、１−（４，４−デメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシ−１−リデン）エチル（Ｄｄｅ）であった。構築したペプチジル樹脂を手動窒素バブラー装置に移し、Ｎ末端のＦｍｏｃを脱保護し、ＤＭＦ中でクロロ酢酸（２０当量）とＤＩＣ（１０当量）をＤＣＭ中で反応させて得たＤＭＦ中の１０倍モル過剰の対称酸無水物を用いてクロロアセチル化した。２．５％のＴＩＳと２．５％の水を含むＴＦＡ中でペプチジル樹脂を２時間処理して、部分保護ペプチドを樹脂から切り離した。上記の実施例１と同様に反応混合物を処理し、ペプチドＣｌＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−ＤＥＧ−ＮＨ2（１１）をエーテルから単離し、凍結乾燥した。
【００９６】
線状ペプチド（１１）（３０ｍｇ）を実施例１に記載のチオエーテル架橋の形成によって環化させ、粗生成物を分取用ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。Ｃ−１８カラム（Ｖｙｄａｃ ２１８ＴＰ１０２２ １０μ、２２×２５０ｍｍ）は、流速１０ｍｌ／分で６０分間、０．１％ＴＦＡ水溶液中の２５〜４０％ＡＣＮ濃度勾配で溶出した。所望のピークを含む画分を回収し、凍結乾燥して、１５ｍｇの純粋なペプチドｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−Ｇｌｙ−ＤＥＧ−ＮＨ2（１２）を得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析条件：ｔR＝１９．２分（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ、４．６×２５０ｍｍ、流速１ｍｌ／分、２０分間で０．１％ＴＦＡ水溶液中のＡＣＮ濃度２５〜４０％、λ＝２１４ｎｍ）。エレクトロスプレーＭＳ：生成物の［Ｍ＋Ｈ］+の予想値１４３４ｍ／ｚ、実測値１４３４．６ｍ／ｚ。
【００９７】
ペプチド（１２）（１当量、１５ｍｇ）をＤＭＦに溶解し、ｃＰＮ２１６−グルタリル−テトラフルオロチオフェニルエステルキレート基（２当量）、次いでＮＭＭ（３当量）を添加し、混合物を一晩撹拌した。２％溶液とするのに十分な量のヒドラジンを反応混合物に添加してＮε−Ｌｙｓ1のＤｄｅ基を外した。３０分後、溶媒を減圧除去し、上記と同様の沈殿及び凍結乾燥によって生成物を単離した。最後にｔＢｕの脱保護及びジスルフィド形成を実施例１に記載の通り行った。完全に環化したペプチド（１３）１８ｍｇが得られた。
【００９８】
８−イソチオシアノピレン−１，３，６−トリスルホン酸とペプチド１３との結合
ペプチド１３（１当量、５ｍｇ）をＤＭＦに溶解し、ＮＭＭを少量添加し、ｐＨ８に調整した。ＤＭＦ中の８−イソチオシアノピレン−１，３，６−トリスルホン酸３ナトリウム塩（５当量）の溶液を添加し、反応混合物を一晩撹拌した。ＲＰ−ＨＰＬＣ及びＭＳ分析で反応をモニターし、生成物を分取用ＲＰ−ＨＰＬＣを用いて精製した。カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １０μ、２２×２５０ｍｍ）は、流速１０ｍｌ／分で６０分間、０．１％ＴＦＡ水溶液中の５〜６０％ＡＣＮ濃度勾配で溶出した。所望のピークを含む画分を回収し、凍結乾燥し、０．８ｍｇの純粋なペプチド１４を得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析条件：ｔR＝２．０４分（ブロードなピーク）（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ、４．６×５ｍｍ、流速２ｍｌ／分、１０分間で０．１％ＴＦＡ水溶液中のＡＣＮ含量１０〜８０％、λ＝２１４ｎｍ）。エレクトロスプレーＭＳ：生成物の［Ｍ＋Ｈ］2+の予想値１０４７．８ｍ／ｚ、実測値１０４８．２ｍ／ｚ。
【００９９】
ペプチド１４の99mＴｃ標識
実施例１のペプチド４の標識について記載した条件下で、ペプチド１４を99mＴｃで標識した。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規造影剤及びその画像診断法における使用に関する。具体的には、本発明は、コラーゲン形成領域及び細胞外マトリックス（ＥＣＭ）に結合するターゲッティングベクターを含む造影剤に関する。かかる造影剤は、活動性の線維症（コラーゲン沈着）のターゲッティング、並びに例えば心不全、肝及び肺線維症、後腹膜線維症、アテローム性動脈硬化症、関節炎、癌及び皮膚障害のような数多くの病態の診断に使用できる。かかる造影剤は、さらに、慢性瘢痕を形成する炎症、瘢痕組織及び癒着の表示、梗塞サイズの検査、初期梗塞の表示、うっ血性心不全の診断にも使用できる。
【背景技術】
【０００２】
コラーゲンは動物界で最も豊富に存在するタンパク質である。現在２５種類が知られている。その基本構造単位はトリプルヘリックスであって、コラーゲンＩでは、ヘリックスは各々１０５０アミノ酸からなる３本のポリペプチドからなる。コラーゲン原繊維は３本鎖ヘリックスのラテラルな相互作用によって形成される。ある種のコラーゲン、特にコラーゲンＩＶは二次元シートを形成する。
【０００３】
コラーゲン分子のアミノ酸配列は高い繰返しを有し、この規則性がコラーゲン原繊維の構造に反映される。コラーゲンＩのアミノ酸配列は、３アミノ酸残基ごとにグリシンが存在する１８種類のアミノ酸モチーフを２０コピー含んでいる。
【０００４】
各種コラーゲンは線維芽細胞及びある種の上皮性細胞で産生される。最初の転写物はプロコラーゲンポリペプチドであり、細胞から輸送するためのシグナル配列と、会合してトリプルヘリックスを形成するのを防ぐプロペプチドとを含んでいる。プロコラーゲン鎖のプロリン残基の約５０％及びリシン残基の１５〜２０％が細胞内プロセシングを受けてヒドロキシプロリン及びヒドロキシリジンを形成する。これらの修飾はコラーゲンの機械的特性に重要である。細胞外でプロペプチドが切断され、自己集合し始める。
【０００５】
コラーゲンは骨や腱のような構造体の基本成分であり、一般に細胞外マトリックスの基本成分でもある。例えば、コラーゲンＩＶは基底膜の基本網状構造を形成し、これに上皮及び内皮細胞が付着する。コラーゲンの多様性はコラーゲンが種々存在することによってある程度説明できるが、多種多様なコラーゲン関連分子も存在している。コラーゲン繊維は通常プロテオグリカンと結合している。コアポリペプチドと１以上のグルコサミノグリカン側鎖からなるこれらのタンパク質も、多種多様なクラスに分類される。基底膜では、ラミニン及びエンタクチン（ニドゲン）が重要な成分である。フィビュリン（ｆｉｂｕｌｉｎ）は数種の基底膜タンパク質との結合部位を有するタンパク質である。ウンドゥリン（ｕｎｄｕｌｉｎ）は、コラーゲンと共に正常な肝臓では少量、線維症の肝臓では多量に認められる繊維形成タンパク質である。
【０００６】
結合組織中のコラーゲンその他のタンパク質はＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐアミノ酸配列を含んでおり、インテグリン類の細胞接着分子との結合部位を与える。他のアミノ酸配列がコア結合モチーフを構成していることもあり、リガンドの他の部分が特異性及び親和性に寄与していることもある。β１インテグリンはコラーゲン結合に重要である。その他のコラーゲン結合タンパク質としてはジスコイジンドメイン受容体が挙げられるが、これはチロシンキナーゼの活性化によってコラーゲンに応答する。
【０００７】
コラーゲン繊維は横方向には柔軟であるが、弾性でも圧縮性でもない。結合組織の弾性は、タンパク質エラスチンとその関連タンパク質であるオキシタラン及びエラウニンに由来するものである。その他のタンパク質として、フィブリリン１及び２がエラスチンその他の構造成分（ミクロフィブリル結合糖タンパク質）と共に弾性繊維を形成する。異常弾性繊維は肝線維症の領域に見出される。
【０００８】
コラーゲンの沈着は創傷治癒における共通の過程であり、よく知られた「瘢痕組織」の形成をもたらす。コラーゲン沈着は組織の機能を低下させる過程である。これは組織の弾性が重要である場合に明らかであり、その顕著な例は心筋梗塞の治癒時に形成される瘢痕組織である。肝臓では、剛性繊維の影響はさほど顕著ではない。肝線維症の過程では、肝細胞と肝類洞の有窓内皮との間の空間での細胞外マトリックス物質の沈着と同時に類洞から通常の基底膜を有する毛細管への変換が起こる。この変換によって、血液と肝細胞の間の溶質移動が妨害され、肝臓の機能が低下する。
【０００９】
肝線維症は、肝細胞の損傷又は細胞死を引き起こす損傷によって開始する。損傷は炎症反応を惹起する。サイトカイン、走化性因子及びＥＣＭマトリックスタンパク質（コラーゲン及びフィブロネクチン）断片の放出によって、肝細胞の活性化と顆粒球のような炎症細胞の動員が起こる。酸化ストレスを始めとする炎症が肝線維症の多くの原因の一般要因である。重要な事象は星状細胞（脂肪摂取細胞とも伊東細胞ともいう）の活性化である。正常な肝臓でのこれらの細胞の最もよく知られた機能はビタミンＡの貯蔵である。活性化によって細胞はビタミンＡを喪失し、筋線維芽細胞に分化する。これらの細胞はコラーゲン産生細胞である。
【００１０】
肝線維症の原因物質は、アルコール、肝炎ウイルス、胆管炎、ヘモクロマトーシス、ウィルソン病及び住血吸虫症など数多く存在する。実験動物（通常ラット）では、四塩化炭素又はチオアセタミドで線維症を誘起できる。これらの物質の大半は、コラーゲン沈着を始めとする明瞭な肝損傷パターンを生じる。炎症反応の役割は多様であり、例えばヘモクロマトーシスのような病態では酸化ストレスが重要である。
【００１１】
損傷の程度及び時期が限られていれば、生じる線維症は可逆的である。肝臓での長期のストレスは、全般的損傷、再生結節の形成及び肝臓の構造を歪める線維症で特徴付けられる肝硬変を招きかねない。ラットでは、Ｉ型コラーゲンの半減期は３０日であり、ＩＩＩ型コラーゲンの半減期は１５日である。四塩化炭素で肝硬変を誘起すると、両コラーゲン共に半減期が５０％低下する。コラーゲン量は正常値よりも５〜１０倍高いレベルに達する（ただし、３０〜３５ｍｇ／ｇを超えることはない）。
【００１２】
肝線維症の診断及び治療のポイントは、不可逆的肝損傷及びそれに伴う機能低下を防ぐことである。コラーゲン沈着の量の増加及びパターン変化は肝線維症の指標となる。陽性の生検はその決定的な証拠と考えられる。生検は侵襲的方法であり、重大な合併症を１〜５％の頻度で引き起こす。ガイドなしの一回の生検では、症例の１０〜３０％で肝硬変の見落としを生じる。３つの標本を検査すれば、正確な診断を１００％に増すことができる。合併症の発生率は生検の回数と共に増加するので、３回の生検を行うと合併症の発生率は１０％のオーダーに増しかねない。さらに生検の評価は決して単純なものではない。
【００１３】
肝疾患のどのステージでも、線維症の領域で最大４倍もの変動がみられ、さらには、異なるステージ間でも線維症の領域に実質的なオーバーラップがみられる。したがって、コンピュータ画像解析で算出したコラーゲン量は線維症のステージの決定にはあまり価値がない。熟練観察者が標準化評価スキームを用いれば、ステージングに関する信頼性の高い情報が得られる。事実、これらのシステムはうまく機能するので、コラーゲン以外の組織マーカーを探す動機はほとんどない。しかし、ＥＣＭマトリックスタンパク質の一種であるテネイシンは所期病変に沈着し、成熟瘢痕組織には存在しないことが多いが、ビトロネクチンは成熟線維組織のマーカーである。
【００１４】
従前使用されてきた肝線維症の血清マーカーは、肝機能変化のマーカー（血小板数、肝トランスアミナーゼ）と、ＥＣＭターンオーバーのマーカーとの２種類に大別できる。後者には、コラーゲン沈着（例えば循環コラーゲンプロペプチド）及び／又はコラーゲン分解（例えばコラーゲンＩＶの循環断片）のマーカーがある。慎重に選択した複数のマーカーの組合せは単独マーカーよりも精度の高い結果を与える可能性があるが、この点については普遍的合意が存在するわけではない。
【００１５】
不可逆的損傷が起こる前の初期段階の線維症を診断できる信頼性の高い試験に対するニーズが明らかに存在する。将来の試験法に非常に望まれる特徴は、ＥＣＭの変化を定量できることである。
【００１６】
上述の通り、コラーゲンの過剰沈着は組織の弾性を低下させる。これは、心筋梗塞の治癒時に形成される瘢痕組織も含む。心臓の損傷又は心臓壁でのストレスの持続的増加の後に、心臓はリモデリングによる修復を試みる。このプロセスは、心室腔のサイズ及び形状の進行性の変化と心筋の組成変化とを伴う。典型的な反応には、生存筋細胞の肥大、並びにコラーゲンの種類、架橋及び濃度の変化が挙げられる。最初に、心臓筋細胞の肥大と同時に細胞外マトリックスが部分的に分解すると考えられる。その後、コラーゲン濃度が正常に戻ると慢性代償期に入る。しかし、心臓が代償できないときは、顕著な線維症にもかかわらず、リモデリングによって顕著な心室拡大を生じる。心不全の最終段階は、筋原線維の組織崩壊及び筋細胞の損失と併せて、細胞外マトリックスのさらなるリモデリングによって特徴付けられる。コラーゲンは蓄積し続けるが、コラーゲン原繊維は不規則に蓄えられる。
【００１７】
線維症は２００種以上の肺疾患の構成要素である。反復損傷又は持続的ストレス（例えば炎症及び／又は吸入粒子）が、結合組織の堆積の方向にバランスを移す遺伝要因と共に一般的な病因である。その一例はα1−プロテアーゼインヒビターの欠損であり、このタンパク質の活性は喫煙によっても低下する。その主な機能は好中球エラスターゼの阻害である。他の器官での線維症と同様、合成と分解のアンバランスによって、機能を実際に損なう修復プロセスが開始さることがある。心臓又は肝臓の線維症のように、病理には筋線維芽細胞が顕著に関係する。これらはまず線維芽細胞として動員され、その後で分化する。知覚できる炎症のないまま「修復プロセス」が継続し、進行性の機能低下を生じることもあると考えられる。
【００１８】
国際公開第８９／１０７５８号には、生体粒子の表面膜に結合させるための化合物が記載されている。これらの化合物は生理作用物質と１以上の炭化水素置換基とを含んでおり、炭化水素置換基は化合物が十分に非極性となって脂質結合性をもつように選択され、生理作用物質はシアニン色素であってもよい。
【００１９】
国際公開第９３／１１１２０号には、例えば細胞及びウイルスのような脂質含有生体適合性粒子に結合する化合物が記載されている。これらの化合物は、脂質結合性を担保するのに十分な非極性をもつように選択される。
【特許文献１】国際公開第８９／１０７５８号パンフレット
【特許文献２】国際公開第９３／１１１２０号パンフレット
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明は、過剰コラーゲン形成に関連する疾患の診断及び治療モニタリングに有用な新規造影剤を提供する。過剰コラーゲン沈着に関連する疾患及び適応症は、例えば心不全、肺及び肝線維症、アテローム性動脈硬化症、関節炎並びに皮膚障害である。
【００２１】
そこで、本発明は、上述したような心不全その他の過剰コラーゲン沈着が関与する疾患の診断に有用な造影剤であって、ターゲッティング部分に１以上の造影性部分を組み込んでなる造影剤を提供する。造影性部分は、被検体に投与したときに被検体の少なくとも造影剤が分布した部分の画像を、例えば放射線イメージング、単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）、磁気共鳴断層撮影（ＭＲＩ）、Ｘ線イメージング、光学イメージング（ＯＩ）、超音波（ＵＳ）イメージング、電気インピーダンス又は磁気的画像モダリティで生成できるものであればよい。
【００２２】
本発明はさらに、上記疾患のイメージング法、並びにかかる疾患に対する治療経過のモニタリング法を提供する。本発明は、新規医薬組成物及び診断用造影剤の製造用前駆体も提供する。造影剤のキット、特に放射性造影剤の製造用キットも提供される。
【００２３】
本発明の造影剤は一般式（Ｉ）で表される。
【００２４】
Ｚ1−Ｌ−Ｖ−Ｚ2 （Ｉ）
以下、これについて詳細に説明する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
一態様では、本発明は、特許請求の範囲に規定する式（Ｉ）の造影剤を提供する。
【００２６】
Ｚ1−Ｌ−Ｖ−Ｚ2 （Ｉ）
一般式（Ｉ）の造影剤において、Ｚ1及びＺ2は少なくともその一方が存在していてヒト又は動物の身体におけるインビボイメージングで検出できるレポーター部分であり、Ｖはコラーゲン形成領域に親和性をもつターゲッティング部分であり、Ｌは共有結合、バイオモディファイヤー又はリンカー基である。
【００２７】
以下、ＺはＺ1及びＺ2の少なくとも一方を意味する。Ｚは、いかなる造影性部分であってよい。
【００２８】
診断、特にインビボ診断に有用な造影剤については、Ｚ部分は１以上の造影性部分を含む。造影性部分自体をＶ又はＬ（存在する場合）に直接結合できない場合、例えば造影性部分が金属粒子又は金属イオン（以下、Ｍと記す）である場合、ＺはＹ1Ｍ部分を含むが、Ｙ1はＶ又はＬ（存在する場合）に結合できて、同時にＭを担持する基である。担持とは、化学結合（例えば共有結合、電気原子価結合又はイオン結合）又は吸収その他の種類の会合など、成分Ｙ1とＭとのあらゆる形態の結合を意味する。Ｍが金属粒子又は金属イオンである場合、Ｙ1はキレート剤を表す。
【００２９】
Ｚ及び／又はＹ1Ｍの性状は、診断に利用される画像モダリティに依存する。Ｚ及び／又はＹ1Ｍはインビボ画像診断で直接又は間接的に検出できるものでなければならず、例えば、検出可能な放射線を（放射性崩壊、蛍光励起、スピン共鳴励起などによって）放出する成分もしくは放出を誘起する成分、局所的電磁場に影響を与える成分（例えば、常磁性、超常磁性、フェリ磁性又は強磁性種）、放射線エネルギーを吸収又は散乱する成分（例えば、発色団、粒子（気体又は液体含有ベシクルも包含する。）、重元素及びその化合物など）、並びに検出可能な物質を生成する成分（例えば、気体マイクロバブル発生剤）などである。
【００３０】
後記の式（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）のキレート剤が特に好ましい。
【００３１】
多種多様な適当な造影性部分が知られており、例えば国際公開第９８／１８４９６号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００３２】
以下、画像モダリティ及び造影性部分Ｚ及びＭに関してさらに詳しく説明する。
【００３３】
第一の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のＺ部分は、放射線及びＳＰＥＣＴ画像モダリティに有用な１以上の造影性部分Ｍを担持する部分Ｙ1を含む。好ましくは、Ｍはα線及びβ線をほとんど或いは全く放射しない半減期１時間以上のγ放射体である。好ましいＭ成分は、放射性核種67Ｇａ、111Ｉｎ、123Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、81mＫｒ、99Ｍｏ、99mＴｃ、201ＴＩ及び133Ｘｅである。最も好ましいのは99mＴｃである。
【００３４】
Ｍは、イメージング及び治療のいずれの用途にも使用できる以下に挙げる同位体又は同位体対であってもよく、放射性標識法又はキレート剤を変更する必要はない：47Ｓｃ21、141Ｃｅ58、188Ｒｅ75、177Ｌｕ71、199Ａｕ79、47Ｓｃ21、131Ｉ53、67Ｃｕ29、131Ｉ53と123Ｉ53、188Ｒｅ75と99mＴｃ43、90Ｙ39と87Ｙ39、47Ｓｃ21と44Ｓｃ21、90Ｙ39と123Ｉ53、146Ｓｍ62と153Ｓｍ62、及び90Ｙ39と111Ｉｎ49。
【００３５】
Ｍが金属放射性核種を表す場合、Ｙ1は、Ｍとの安定キレートの形成に適したキレート剤を表す。かかるキレート剤は当技術分野で周知であり、かかるキレート剤の典型例は国際公開第０１／７７１４５号の表Ｉに記載されている。
【００３６】
特に好ましいのは、次の式（ＩＩ）のキレート剤Ｙ1である。
【００３７】
【化１】
式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は各々独立にＨ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ3-10アルキルアリール、Ｃ2-10アルコキシアルキル、Ｃ1-10ヒドロキシアルキル、Ｃ1-10アルキルアミン又はＣ1-10フルオロアルキル基であるか、或いは２以上のＲ基がそれらに結合した原子と共に炭素環、複素環、飽和又は不飽和環を形成するものである。
【００３８】
特に好ましいのは、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3が水素又はメチル基であり、Ｒ4がアルキルアミン基である式（ＩＩ）のキレート剤Ｙ1であり、特に次の式（ＩＩＩ）の化合物（本明細書ではｃＰＮ１２６という。）である。
【００３９】
【化２】
Ｚとして最も好ましいのはｃＰＮ２１６と99mＴｃのキレートである。
【００４０】
式（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）のキレート剤の合成は国際公開第０３／００６０７０号に記載されている。
【００４１】
123Ｉ、125Ｉ及び131Ｉのような非金属放射性核種からなるＺ基は、当技術分野で周知の置換又は付加反応によって、Ｖ及びＬ（存在する場合）に共有結合させることができる。
【００４２】
第二の実施形態では、式（Ｉ）の化合物はＰＥＴ画像モダリティに有用なＺ部分を含む。この場合、Ｚは陽電子放出性をもつ放射線放出体を表す。好ましいＺ基は、放射性核種11Ｃ、18Ｆ、68Ｇａ、13Ｎ、15Ｏ及び82Ｒｂである。18Ｆが特に好ましい。キレート剤Ｙ1でキレート化された金属放射線放出体82Ｒｂ及び68Ｇａも好ましい。
【００４３】
チオールカップリングの化学、18Ｆシントン及びチオールカップリング反応を用いて調製される標識ペプチドは、国際公開第０３／０８０５４４号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００４４】
チオールカップリング反応を用いた標識ペプチドの詳細は、国際公開第２００５／０１２３３５号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００４５】
別の好ましい実施形態では、Ｙ1はＤＯＴＡキレート剤であり、Ｍは68Ｇａであってマイクロ波化学で容易にキレート剤に導入し得る。
【００４６】
18Ｆのような非金属放射性核種からなるＺ基は、当技術分野で周知の置換又は付加反応によって、Ｖ及びＬ（存在する場合）に共有結合させることができ、かかる反応は例えば国際公開第０３／０８０５４４号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００４７】
第三の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のＺ部分は、ＭＲ（磁気共鳴）画像モダリティに有用な１以上の造影性部分Ｍを担持する部分Ｙ1を含む。この場合、Ｍは米国特許第４６４７４４７号に記載されているような常磁性金属イオンを表す。常磁性金属イオンＧｄ3+、Ｄｙ3+、Ｆｅ3+及びＭｎ2+が特に好ましい。Ｙ1はキレート剤、特に米国特許第４６４７４４７号及び国際公開第８６／０２８４１号などに記載されているような非環式又は環式ポリアミノカルボキシレートのようなキレート剤（例えばＤＴＰＡ、ＤＴＰＡ−ＢＭＡ、ＤＯＴＡ及びＤＯ３Ａ）を表す。
【００４８】
ＭＲ造影法では、Ｍは、超常磁性種、フェリ磁性種又は強磁性種のような金属酸化物であってもよく、これらは例えばＺが金属酸化物のコーティングとして機能するようにＺに吸収される。ＭＲ造影剤として用いられる金属酸化物は、例えば米国特許第６２３０７７７号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００４９】
第四の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のＺ部分は、Ｘ線画像モダリティに有用な１以上の造影性部分Ｍを担持する部分Ｙ1を含む。この場合、ＭはＷ、Ａｕ及びＢｉのような重金属であって、Ｚに吸収され得る酸化物の形態、或いは金属の形態（酸化数０）にある。Ｚは、Ｘ線造影剤として周知のヨウ素化アリール誘導体、例えばＩｏｐａｍｉｒｏｎ（商標）及びＯｍｎｉｐａｑｕｅ（商標）であってもよい。これらの造影剤は、そのアミド又はアミン官能基を介して式（Ｉ）のＶ又はＬ（存在する場合）に結合させることができる。
【００５０】
他の実施形態では、式（Ｉ）の化合物はガス充填マイクロベシクルの形態のＺを含む。かかる超音波造影剤は受容体のイメージングに利用することができ、例えば国際公開第９８／１８５００号のような従来技術に記載の通り、官能化してペプチドに結合させればよい。
【００５１】
本発明の第六の実施形態では、式（Ｉ）の部分Ｚは、光学イメージング法で直接又は間接的に検出し得る基であってもよい。検出性基は、光散乱体（例えば着色又は無着色粒子）でも、光吸収体でも、発光体でもよい。さらに好ましくは、Ｚは発色団又は蛍光化合物のような色素である。Ｚ基は紫外乃至近赤外域の波長を有する電磁スペクトルの光と相互作用する色素であればよい。好ましい形態ではＺは蛍光性を有する。
【００５２】
好ましい有機色素基としては、広く非局在化した電子系を有する基、例えばシアニン、メロシアニン、インドシアニン、フタロシアニン、ナフタロシアニン、トリフェニルメチン、ポルフィリン、ピリリウム色素、チアピリリウム色素、スクアリリウム色素、クロコニウム色素、アズレニウム色素、インドアニリン、ベンゾフェノキサジニウム色素、ベンゾチアフェノチアジニウム色素、アントラキノン、ナフトキノン、インダスレン、フタロイルアクリドン、トリスフェノキノン、アゾ色素、分子内及び分子間電荷移動色素及び色素錯体、トロポン、テトラジン、ビス（ジチオレン）錯体、ビス（ベンゼン−ジチオレート）錯体、ヨードアニリン色素、ビス（Ｓ，Ｏ−ジチオレン）錯体が挙げられる。蛍光タンパク質、例えば緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）及び吸収／発光特性の異なるＧＦＰ修飾物も有用である。ある種の希土類金属（例えばユーロピウム、サマリウム、テルビウム又はジスプロシウム）の錯体も、蛍光ナノ結晶（量子ドット）のような特定の状況で用いられる。
【００５３】
光学造影性基の好ましい例は、シアニン色素（ＣｙＤｙｅ（商標））である。シアニン色素は、交互に並んだ炭素−炭素単結合と炭素−炭素多重結合（好ましくは二重結合）で奇数個の炭素原子が結合してなるポリエン鎖として定義される化合物であり、いずれかの末端はアミノ基であり、その１つは四級化されている。シアニン及び類似のアリール−リンカー−アリール発色団は適宜側鎖置換基又は縮合環置換基を有していてもよい。シアニン色素及びその合成についての概説は、米国特許第６０４８９８２号、同第５２６８４８６号及び欧州特許第１０３７９４７号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。シアニン色素は、広範なスペクトル特性及び様々な構造のものが利用できるため、特に有用である。幅広いシアニン色素が周知であり試験されているが、それらは毒性が低く、市販されている（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社（以前の社名はＡｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ））。シアニン色素は極めて強い色素の一群であり、良好な水溶性を有する。これらはｐＨ３〜１０でｐＨ非感受性であり、非特異的結合も低く、フルオレセインよりも光安定性が高い。
【００５４】
シアニン色素は、好ましくは以下の一般式のカルバシアニン、オキサシアニン、チアシアニン及びアザシアニンからなる群から選択される。
【００５５】
【化３】
これらの構造において、Ｊ１基は同一又は異なるもので、置換又は非置換アルキル基、好ましくはＣ1−Ｃ6アルキル基であり、エーテル又はＮ−ＣＯ−Ｎ−を含んでもよい。アルキル基は、カルボキシ、スルホン酸、アミン、アンモニウム又はエステル基で適宜置換されていてもよい。Ｊ１基はポリエン鎖のいずれかの炭素原子と、例えば−Ｎ−ＣＯ−Ｎ−基又はエーテル基によって、架橋を形成していてもよい。Ｊ２基も同一又は異なるもので、置換又は非置換アルキル基である。アルキル基はカルボキシ又はスルホン酸基で適宜置換されていてもよいが、好ましくはＪ２基はＣ1−Ｃ6アルキルのような低級アルキル基であり、最も好ましくはメチル基である。任意要素としての芳香族基は点線で示してあり、縮合ベンゾ環及び縮合ナフト環を含む構造を包含する。環は置換又は非置換である。環は、スルホン酸基、カルボキシル基、ヒドロキシル基、アルキル（スルホアルキル）アミノ基、ビス（スルホアルキル）アミノ基、スルホアルコキシ基、スルホアルキルスルホニル基、アルキル基、置換アルキル基又はスルホアルキルアミノ基で置換されていてもよい。アルキル基は好ましくは低級アルキル（例えば炭素原子数１〜６のもの）である。Ｙは水素、ハライド基、アミン基又はスルホニルから選択され、好ましくは水素である。シアニン色素のポリエン鎖も、ポリエン鎖の２以上の炭素原子間で架橋を形成する１以上の環状基を含んでいてもよく、例えばスクアライン色素のように鎖の２つの炭素原子の間に−ＣＯ−基を含んでいてもよいし、或いはアルキル架橋を含んでいてもよい。これらの架橋は色素の化学的又は光安定性を高める作用をもつことがある。
【００５６】
式ＶＩ〜ＩＸにおいて、ｌは１、２、３又は４の正の整数であり、炭素原子数３の炭素架橋を有するトリメチンシアニン、ペンタメチンシアニン、ヘプタメチンシアニン又はノナメチンシアニン色素を与える。好ましくは、シアニン色素は各々炭素原子数５及び７の炭素架橋を有する色素である。
【００５７】
Ｊ１及びＪ２は、適宜リンカー基Ｌを介して色素をターゲティング部分Ｖに結合するための潜在的連結部位であるが、Ｊ１が好ましい。好ましい態様では、一方のＪ１基がターゲッティング部分Ｖと結合し、残りのＪ１基はＣ1−Ｃ6アルキル基で適宜置換される。
【００５８】
光学イメージング法に適した基についての詳細は、国際公開第２００５／００３１６６号に記載されており、その開示内容は援用によって本明細書の内容の一部をなす。
【００５９】
式（Ｉ）の化合物の部分Ｖはコラーゲン形成領域に親和性をもつアミノ酸配列Ｘ3−Ｇ−Ｄを含む。化合物は好ましくは追加のアミノ酸と適宜追加の基を含んでいるが、Ｘ3−Ｇ−Ｄ配列が、コラーゲン形成領域に結合するベクターとして機能するペプチドベクターの結合座である。
【００６０】
本発明の式（Ｉ）の化合物は、例えばペプチドベクターの部分において１以上の環化架橋が形成されたものに限定してもよい。単環式ペプチド化合物はアミノ酸間のジスルフィド結合又はチオエーテル結合の形成によって得ることができる。式（Ｉ）の化合物は好ましくは化合物の異なるアミノ酸の間の２つの環化架橋を含む。「環化架橋」という用語は、アミノ酸同士、又は、架橋導入を可能にする官能基を有する−（ＣＨ2）n−又は−（ＣＨ2）n−Ｃ6Ｈ4−基とアミノ酸との任意の結合を指す。ｎは１〜１０までの正の整数である。好ましい例は、ジスルフィド架橋、例えば−（ＣＨ2）4−カルバ架橋のようなジスルフィド類似体、チオアセタール、チオエーテル架橋（シスタチオン又はランチオニン）、並びにエステル及びエーテルを含む架橋である。好ましくは、第一の架橋がジスルフィド結合を形成し、第二の架橋がチオエーテル（スルフィド）結合を含む。
【００６１】
その他の実施形態では、式（Ｉ）におけるベクターＶは式（ＶＩ）で表され、２つの環化架橋を含む。
【００６２】
Ｒa−Ｃ（＝Ｏ）−Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｇ−Ｄ−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6 （ＶＩ）
式中、Ｘ1は共有結合又は１、２、３、４又は５個のアミノ酸残基であり、これらのアミノ酸残基のうちの１つはリンカー基Ｌで適宜官能化されていてもよく、好ましくはアミノ酸残基は酸又はアミン基のような官能側鎖を有するもの、好ましくはアスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、オルニチン、ジアミノ酪酸又はジアミノプロピオン酸から選択される。
Ｘ2及びＸ4は独立に環化架橋を形成できるアミノ酸残基、例えばジスルフィド結合又はチオエーテル結合を形成するシステイン又はホモシステイン残基、或いはアスパラギン酸及びリシンのような環化架橋を形成できる他のアミノ酸残基であり、好ましくはＸ2及びＸ4はシステイン又はホモシステイン残基である。
Ｘ3はアルギニン、Ｎ−メチルアルギニン又はアルギニン模倣体である。
Ｘ5は疎水性アミノ酸又はその誘導体であり、好ましくはチロシン、フェニルアラニン、３−ヨードチロシン又はナフチルアラニン残基、さらに好ましくはフェニルアラニン又は３−ヨードチロシン残基である。
Ｘ6は環化架橋を形成できるアミノ酸残基であり、好ましくはチオール含有アミノ酸残基、好ましくはシステイン又はホモシステイン残基である。
ＲaはＸ2、Ｘ4又はＸ6のいずれかと架橋を形成できる−（ＣＨ2）n−又は（ＣＨ2）n−Ｃ6Ｈ4−基である。
ｎは１〜１０の正の整数である。
【００６３】
本発明の一実施形態では、式（Ｉ）における部分Ｌは、均質バイオモディファイヤー基、好ましくは単分散ＰＥＧ構成単位を１〜１０単位含むものであり、バイオモディファイヤーは薬剤の薬物動態及び血中クリアランス速度を変化させる機能を有する。Ｌは１〜１０個のアミノ酸残基、好ましくはグリシン、リシン、アスパラギン酸又はセリンを表すものでもよい。好ましい実施形態では、Ｌは式（Ｖ）の１７−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸の単分散ＰＥＧ様構造からなるバイオモディファイヤー単位を表す。
【００６４】
【化４】
式中、ｍは１〜１０の整数であり、Ｃ末端単位はアミド基である。
【００６５】
上述の通り、バイオモディファイヤー基（Ｌ）は化合物の薬物動態及び血液クリアランス速度を変化させる。バイオモディファイヤー基は化合物の組織（筋肉、肝臓など）への取り込みを低減するように作用し、そのためバックグラウンド干渉が低減するので診断画像が向上する。分泌は主に腎臓を経るが、これもバイオモディファイヤーの利点として挙げられる。
【００６６】
Ｌは、好ましくはグルタル酸及び／又はコハク酸及び／又はポリエチレングリコール系単位及び／又は上記の式（Ｖ）の単位から誘導されるものであってもよい。
【００６７】
その他の代表的なＬ要素としては、構造多糖類、貯蔵多糖類、ポリアミノ酸及びそのメチル及びエチルエステル、ポリペプチド、オリゴ糖及びオリゴヌクレオチドが挙げられ、酵素切断部位を含んでいても含んでいなくてもよい。
【００６８】
本発明のペプチドは、あらゆる公知の化学合成法で合成できるが、特に有用な方法は自動ペプチド合成装置を用いたＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄの固相法である（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９（１９６４））。合成法の標準的手順は、Ｅ．Ａｔｈｅｒｔｏｎ ＆ Ｒ．Ｃ．Ｓｈｅｐｐａｒｄ， “Ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ： ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ， １９８９， ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ， Ｏｘｆｏｒｄに記載されている。
【００６９】
酸不安定リンカー基を有する樹脂を用いて、これに、所望の保護Ｃ末端アミノ酸残基をアミド結合形成によって結合させる。例えば、（ジメトキシフェニル−アミノメチル）−フェノキシ系リンカーを有するいわゆるＲｉｎｋ ａｍｉｄｅ ＡＭ樹脂が応用できる（Ｒｉｎｋ，Ｈ．（１９８７），Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３０，ｐ．３７８７）。この樹脂からペプチドを酸分解で切り離せば、ペプチドアミドが得られる。別法として、Ｏ−ビス−（アミノエチル）エチレングリコールトリチル樹脂（Ｋ．Ｂａｒｌｏｓ ｅｔ ａｌ（１９８８）， Ｌｉｅｂｉｇｓ Ａｎｎ． Ｃｈｅｍ， ｐ．１０７９）を用いることもでき、酸分解で切り離せば、第一アミンハンドルを有するペプチドが得られる。
【００７０】
ペプチジル樹脂はＣ末端からＮ末端の方向に合成される。まずＣ末端アミノ酸のＮ−アミノ保護基を外し、適当な縮合剤を用いて配列の２番目のアミノ酸をカップリングさせる。次いで、所望の配列が構築されるまでＮ−アミノ保護基の脱保護とカップリングのサイクルを交互に繰り返す。
【００７１】
一般に、ペプチド合成中、存在する反応性の基はすべて保護される。アミノ酸の保護基としては多種多様なものが知られている（例えばＧｒｅｅｎｅ， Ｔ．Ｗ． ＆ Ｗｕｔｓ， Ｐ．Ｇ．Ｍ．（１９９１） Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ参照）。オルトゴナル保護法（Ｂａｒａｎｙ，Ｇら、（１９７７）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，９９，ｐ７３６３）を用いることもできる。例えば、ピペリジン不安定性の９−フルオレニルメトキシ−カルボニル（Ｆｍｏｃ）基と超酸不安定性の４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）基、ヒドラジン不安定性の２−アセチルジメドン（Ｄｄｅ）基と酸不安定性のｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）基のように、異なるアミン保護基を組合せると、異なるアミン部位に異なる部分を選択的に導入できる。さらに、Ｃｙｓ側鎖用の酸不安定トリチル（Ｔｒｔ）保護基と、他のＣｙｓ残基用のｔｅｒｔ−ブチル保護基（酸性酸化条件下（例えばＴＦＡ−２％ジメチルスルホキシド）下で不安定）とを組合せると、選択的ジスルフィド形成がなされる。
【００７２】
完成したペプチジル樹脂をＮ末端でクロロアセチル化すれば、Ｎ末端とＣｙｓ残基との間にチオエーテル架橋を導入することができる。
【００７３】
ペプチドは、当技術分野で公知の通り、蒸留した無酸素の緩衝液（ｐＨ約９）に溶解し、窒素雰囲気下に維持した化合物をＳｎ−ＭＤＰ及びＮａ99mＴｃＯ4溶液で処理することによって99mＴｃ標識される
非限定的な実施例１〜４によって本発明をさらに例示する。実施例では、２種類のＺ及び／又はＹ1Ｍ部分を有する化合物の合成について記載する。化合物の99mＴｃでの標識化についても記載する。
【００７４】
ペプチドにおける各種アミノ酸の位置は上付きの番号で示す（例えばＣｙｓ2）。
【実施例】
【００７５】
実施例１
Ｃｙｓ２−６；ｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（Ｎ−（５−スルホ−ナフタレン−２−イル）−Ｓｕｃｃ）−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−ＧｌｕｔｃＰｎ２１６）−ＮＨ2（４）及びその99mＴｃキレート（４ａ）
【００７６】
【化５】
ＣｌＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂１の固相合成
上記配列に対応するペプチジル樹脂を、標準的な固相ペプチド化学合成法（Ｂａｒａｎｙ，Ｇ；Ｋｎｅｉｂ−Ｃｏｒｄｏｎｉｅｒ，Ｎ；Ｍｕｌｌｅｎｍ Ｄ．Ｇ．（１９８７）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３０，７０５−７３９）を用いて、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂（０．７３ｍｍｏｌ／ｇ；ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ社製）で合成した。Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社）モデル４３３Ａペプチド合成装置を用いた。これらの残基は（カルボキシル末端から）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）中の４倍モル過剰のＮα−Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（１ｍｍｏｌカートリッジ）及び２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）／１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）／ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）によるカップリングサイクル２．５時間のシングルカップリングによって０．２５ｍｍｏｌスケールで構築した。Ｆｍｏｃの脱保護はＮＭＰ中の２０％ピペリジン溶液を用いて、電導度をモニターしながら行った。使用したアミノ酸側鎖保護基は、Ｌｙｓ1には４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、Ｃｙｓ2、Ｃｙｓ6及びＡｓｐにはｔｅｒｔ−ブチル（ｔＢｕ）、Ａｒｇには２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）、Ｃｙｓ8にはトリチル（Ｔｒｔ）、Ｌｙｓ10にはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）であった。
【００７７】
構築したペプチジル樹脂を、手動窒素バブラー装置（Ｗｅｌｌｉｎｇｓ，Ｄ．Ａ．，Ａｔｈｅｒｔｏｎ，Ｅ．（１９９７）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｆｉｅｌｄｓ，Ｇ．編），２８９，ｐ．５３−５４，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ社（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）に記載）に移した。Ｎ末端のＦｍｏｃを脱保護し、ジクロロメタン（ＤＣＭ）中でクロロ酢酸（２０当量）とＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（１０当量）を反応させて得た１０倍モル過剰の対称酸無水物を用いてジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中でクロロアセチル化した。５％のトリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）と１％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含むＤＣＭで、５×２分間又は濾液が無色になるまでペプチジル樹脂を処理することによって、Ｎε−Ｌｙｓ1のＭｔｔ保護基を選択的に外した。完成したＣｌＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂１を、ＤＭＦ中の５％ＤＩＥＡ溶液で中和し、最後にＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄し、減圧乾燥した。
【００７８】
Ｃｙｓ２−６；ｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（Ｎ−（５−スルホ−ナフタレン−２−イル）−Ｓｕｃｃ−）−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ2（３）の合成
６−アミノ−１−ナフタレンスルホン酸（Ｄａｈｌ酸）（１当量、０．５ｍｍｏｌ）を、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）（２当量）を含むＤＭＦに溶解し、無水コハク酸（１０当量）を加えた。一晩反応させた後、溶媒を減圧下で除去し、生成物を分取用ＲＰ−ＨＰＬＣ（逆相ＨＰＬＣ）で精製した。カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １０μ、２２×２５０ｍｍ）は、流速１０ｍｌ／分で４０分間、０．１％ＴＦＡ水溶液中の５〜１５％アセトニトリル（ＡＣＮ）濃度勾配で溶出した。操作を６回繰り返し、所望のピークを含む画分を回収し、凍結乾燥し、１４６ｍｇの純粋なＮ−（−５−スルホ−ナフタレン−２−イル）−スクシンアミド酸（２）を得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析条件：ｔR＝１６．７分（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ、４．６×２５０ｍｍ、流速１ｍｌ／分、２０分間で０．１％ＴＦＡ水溶液中のＡＣＮ濃度５〜１５％、λ＝２１４ｎｍ）。エレクトロスプレーＭＳ：生成物の［Ｍ＋Ｈ］+の予想値３２４．０ｍ／ｚ、実測値３２４．０ｍ／ｚ。
【００７９】
ＮＭＭ（１５当量）を含むＤＭＦ中のＮ−（−５−スルホ−ナフタレン−２−イル）−スクシンアミド酸２（５当量）及びＮ−［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ−［４，５−ｂ］ピリジン−１−イルメチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスフェートＮ−オキシド（ＨＡＴＵ）の溶液をペプチジル樹脂（１）に添加した。手動窒素バブラー装置内で一晩反応を進行させた。
【００８０】
得られたペプチジル樹脂を、２．５％のＴＩＳと２．５％の水を含むＴＦＡで処理して、Ｃｙｓ2,6−ｔＢｕ保護ペプチドを樹脂から切断すると同時に、他の側鎖保護基をすべてペプチドから外した。樹脂残渣を濾別し、少量の純ＴＦＡで洗浄した。濾液及び洗浄液を回収し、ロータリーエバポレータで濃縮し、ジエチルエーテルで倍散し、粗生成物を得た。沈殿を遠心分離で単離し、エーテルで洗浄した後、５０％ＡＣＮ−０．１％ＴＦＡ水溶液から凍結乾燥し、６０ｍｇの粗生成物を得た。
【００８１】
線状ペプチドの環化を、まずｐＨ７．５（アンモニア水で調節）の５０％ＡＣＮ水溶液中で０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドを室温で６０分間撹拌してチオエーテル架橋を形成することによって行った。環化生成物を凍結乾燥で単離した。次に、ＴＦＡ−２％ジメチルスルホキシド中０．５ｍｇ／ｍｌ濃度でｔＢｕの脱保護とジスルフィド形成を同時に室温で６０分間かけて行うことによって、内部ジスルフィド架橋を形成した。ＴＦＡを減圧除去し、上記と同様にペプチドをエーテルから単離し、乾燥し、６２ｍｇの環化生成物を得た。粗生成物を分取用ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １０μ、５０×２５０ｍｍ）は、流速５０ｍｌ／分で６０分間、０．１％ＴＦＡ水溶液中の１５〜２０％アセトニトリル（ＡＣＮ）濃度勾配で溶出した。所望のピークを含む画分を回収し、凍結乾燥し、１２ｍｇの純粋な生成物（３）を得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析条件：ｔR＝１２．９分（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ、４．６×２５０ｍｍ）、流速１ｍｌ／分、２０分間で０．１％ＴＦＡ水溶液中のＡＣＮ濃度１５〜２０％、λ＝２１４ｎｍ。エレクトロスプレーＭＳ：生成物の［Ｍ＋Ｈ］+の予想値１４５８．５ｍ／ｚ、実測値１４５８．２ｍ／ｚ。
【００８２】
ｃＰＮ２１６−グルタリル基のペプチド（３）への結合
ＤＭＦ中のｃＰＮ２１６−グルタリル−テトラフルオロチオフェニルエステル（２当量）溶液を、ＤＭＦ中のペプチド３（１当量、０．００８ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、次いでＮＭＭ（６当量）を添加した。反応混合物を一晩撹拌した後、反応混合物から溶媒を減圧除去し、次いで分取用ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １０μ、２２×２５０ｍｍ）は、流速１０ｍｌ／分で６０分間、０．１％ＴＦＡ水溶液中の１３〜２０％ＡＣＮ濃度勾配で溶出した。所望のピークを含む画分を回収し、凍結乾燥し、８ｍｇの純粋な化合物４を得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析条件：ｔR＝１８．４分（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ、４．６×２５０ｍｍ、流速１ｍｌ／分、２０分間で０．１％ＴＦＡ水溶液中のＡＣＮ含量１５〜２５％、λ＝２１４ｎｍ）。エレクトロスプレーＭＳ：生成物の［Ｍ＋Ｈ］2+の予想値９４９．４ｍ／ｚ、実測値９４９．５ｍ／ｚ。
【００８３】
ペプチド（４）の99mＴｃによる標識
ペプチド（４）（０．１ｍｇ）を、生理食塩水又はメタノール（０．１ｍｌ）中で再構成し、賦形剤の凍結乾燥ツールボックスキット内に移した。アミンによるキレート化に適した汎用放射性標識条件を与えるよう設計されたツールボックスキットは、無水塩化スズ（ＩＩ）（１６μｇ）、メチレンジホスホン酸（２５μｇ）、炭酸水素ナトリウム（４５００μｇ）、炭酸ナトリウム（６００μｇ）、ｐ−アミノ安息香酸ナトリウム（２００μｇ）を含んでおり、キットのｐＨ＝９．２である。過テクネチウム（99mＴｃ）酸ナトリウム生理食塩水注射液（２．１ＧＢｑ）（３ｍｌ）を添加し、キットを数回反転させて内容物を溶解し、室温で１５〜２０分間インキュベートした。試料をすぐにＨＰＬＣ及びＩＴＬＣで分析し、99mＴｃ標識ペプチドを、キットの再構成から１〜３時間後に被検体に投与した。
【００８４】
実施例２
Ｃｙｓ２−６；ｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（Ｎ−［５−スルホ−ナフタレン−２−イル］−Ｓｕｃｃ−Ｌｙｓ（Ｎ−［５−スルホ−ナフタレン−２−イル］−Ｓｕｃｃ）−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−（Ｇｌｕｔ−ｃＰｎ２１６）−ＮＨ2（９）及びその99mＴｃキレート（９ａ）
【００８５】
【化６】
Ｃｙｓ２−６；ｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−（Ｇｌｕｔ−ｃＰｎ２１６）−ＮＨ2 化合物７の合成
上記の実施例１に記載のペプチジル樹脂（１）を、手動窒素バブラー装置を用いてＤＭＦ中の２−アセチルジメドン（Ｄｄｅ−ＯＨ）の溶液で２時間処理して、Ｎε−Ｌｙｓ1を保護した。２．５％のＴＩＳと２．５％の水を含むＴＦＡで２時間処理して、部分保護ペプチドを樹脂から切り離した。反応混合物を実施例１と同様に処理し、ペプチドをエーテルから単離し、凍結乾燥して、７０ｍｇのＣｌＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ2（５）を得た。
【００８６】
線状ペプチド（５）を、上記の実施例１に記載したチオエーテル架橋の形成によって環化し、粗生成物（７８ｍｇ）を分取用ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １０μ、５０×２５０ｍｍ）は、流速５０ｍｌ／分で６０分間、０．１％ＴＦＡ水溶液中の２０〜４５％ＡＣＮ濃度勾配で溶出した。所望のピークを含む画分を回収し、凍結乾燥し、２６ｍｇの精製ｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ2（６）を得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析条件：ｔR＝１６．３５分（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ、４．６×２５０ｍｍ、流速１ｍｌ／分、２０分間で０．１％ＴＦＡ水溶液中のＡＣＮ濃度２０〜５０％、λ＝２１４ｎｍ）。エレクトロスプレーＭＳ：生成物の［Ｍ＋Ｈ］2+の予想値７１６．８ｍ／ｚ、実測値７１６．７ｍ／ｚ。
【００８７】
ＤＭＦ中のｃＰＮ２１６−グルタリル−テトラフルオロチオフェニルエステルキレート基（２当量）の溶液をペプチド６（１当量、０．００９ｍｍｏｌ）に添加し、次いでＮＭＭ（３当量）を添加し、混合物を一晩撹拌した。反応混合物に、２％溶液となるよう十分な量のヒドラジンを添加し、Ｎε−Ｌｙｓ1のＤｄｅ基を外した。３０分後、溶媒を減圧除去し、上記と同様の沈殿及び凍結乾燥によって生成物を単離した。最後にｔＢｕの脱保護及びジスルフィド形成を実施例１に記載の通り行って、１８ｍｇのペプチド（７）を得た。
【００８８】
ペプチド７のＮε−Ｌｙｓ1部位への分岐Ｄａｈｌ酸基の導入
ＤＭＦ中のＮ−（Ｎα,ε−ジ−Ｂｏｃ−リジルオキシ）スクシンイミド（３当量）の溶液を、ペプチド７（１当量、０．００６ｍｍｏｌ）に添加し、次いでＮＭＭ（５当量）を添加した。１８時間後に反応を完結し、溶媒を減圧下で除去した。ペプチド残基を、２．５％のＴＩＳと２．５％の水を含むＴＦＡで１５分間処理して、Ｃｙｓ２−６；ｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（Ｎ−Ｌｙｓ）−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−（Ｇｌｕｔ−ｃＰｎ２１６）−ＮＨ2（８）を得て、これを上記と同様に沈殿及び凍結乾燥した。
【００８９】
Ｎ−（−５−スルホ−ナフタレン−２−イル）−スクシンアミド酸（３）（１０当量）を、ＮＭＭ（３０当量）を含むＤＭＦ中のＨＡＴＵ（１０当量）で活性化した。３０分後に、この混合物を、ＤＭＦ中のペプチド（８）（１当量）の溶液に添加して２４時間反応させた。混合物を上記と同様に処理し、凍結乾燥ペプチド生成物を、分取用ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １０μ、１０×２５０ｍｍ）は、流速５ｍｌ／分で４０分間、０．１％ＴＦＡ水溶液中の１０〜３０％アセトニトリル（ＡＣＮ）濃度勾配で溶出した。所望のピークを含む画分を回収し、凍結乾燥し、２ｍｇの純粋なペプチド（９）を得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析条件：ｔR＝１７．４分（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ、４．６×２５０ｍｍ、流速１ｍｌ／分、２０分間で０．１％ＴＦＡ水溶液中のＡＣＮ濃度５〜３０％、λ＝２１４ｎｍ）。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ：生成物の［Ｍ＋Ｈ］+の予想値２３３０．９５ｍ／ｚ、実測値２３３０．２７ｍ／ｚ。
【００９０】
ペプチド９の99mＴｃ標識
実施例１のペプチド４の標識について記載した条件下で、ペプチド９を99mＴｃで標識した。
【００９１】
実施例３
Ｃｙｓ２，６；ｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（Ｃｙ５．５）−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｇｌｕｔ−ｃＰｎ２１６）−ＮＨ2（１０）及びその99mＴｃキレート（１０ａ）
【００９２】
【化７】
Ｃｙ５．５とペプチド７とのカップリング
Ｃｙ５．５−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（２当量）をＮＭＰに溶解し、溶液をペプチド７（１当量、０．００５ｍｍｏｌ）に添加し、次いでＮＭＭ（５当量）を添加した。反応は暗所で２日間進行せしめた。反応混合物を４５℃のロータリーエバポレータで濃縮した後、０．１％ＴＦＡ水溶液で希釈し、分取用ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １０μ、２２×２５０ｍｍ）は、流速１０ｍｌ／分で６０分間、０．１％ＴＦＡ水溶液中の１５〜３０％ＡＣＮ濃度勾配で溶出した。所望のピークを含む画分を回収し、凍結乾燥し、３．２ｍｇの純粋なペプチド（１０）を得た。分析ＲＰ−ＨＰＬＣ：ｔR＝２０．９分（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ、４．６×２５０ｍｍ、流速１ｍｌ／分、２０分間で０．１％ＴＦＡ水溶液中のＡＣＮ濃度１５〜３０％、λ＝２１４ｎｍ）。エレクトロスプレーＭＳ：生成物の［Ｍ＋Ｈ］2+の予想値１２４５．９７ｍ／ｚ、実測値１２４６．１ｍ／ｚ。
【００９３】
ペプチド１０の99mＴｃ標識
実施例１のペプチド４の標識について記載した条件下で、ペプチド１０を99mＴｃで標識した。
【００９４】
実施例４
Ｃｙｓ２，６；ｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（８−チオウリル−ピレン−１，３，６−トリスルホン酸）−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−Ｇｌｙ−ＢＡＥＧ−Ｇｌｕｔ−ｃＰｎ２１６−ＮＨ2（１４）及びその99mＴｃキレート（１４ａ）
【００９５】
【化８】
Ｃｙｓ２，６；ｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−Ｇｌｙ−ＢＡＥＧ−Ｇｌｕｔ−ｃＰｎ２１６−ＮＨ2 化合物１３の合成
上記配列に対応するペプチジル樹脂を、Ｏ−ビス−（アミノエチル）エチレングリコール（ＢＡＥＧ）トリチル樹脂（０．４４ｍｍｏｌ／ｇ；ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ社製）で、実施例１のペプチジル樹脂と同様の方法を用いて合成した。Ｎε−Ｌｙｓ1の保護基は、１−（４，４−デメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシ−１−リデン）エチル（Ｄｄｅ）であった。構築したペプチジル樹脂を手動窒素バブラー装置に移し、Ｎ末端のＦｍｏｃを脱保護し、ＤＭＦ中でクロロ酢酸（２０当量）とＤＩＣ（１０当量）をＤＣＭ中で反応させて得たＤＭＦ中の１０倍モル過剰の対称酸無水物を用いてクロロアセチル化した。２．５％のＴＩＳと２．５％の水を含むＴＦＡ中でペプチジル樹脂を２時間処理して、部分保護ペプチドを樹脂から切り離した。上記の実施例１と同様に反応混合物を処理し、ペプチドＣｌＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−ＤＥＧ−ＮＨ2（１１）をエーテルから単離し、凍結乾燥した。
【００９６】
線状ペプチド（１１）（３０ｍｇ）を実施例１に記載のチオエーテル架橋の形成によって環化させ、粗生成物を分取用ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。Ｃ−１８カラム（Ｖｙｄａｃ ２１８ＴＰ１０２２ １０μ、２２×２５０ｍｍ）は、流速１０ｍｌ／分で６０分間、０．１％ＴＦＡ水溶液中の２５〜４０％ＡＣＮ濃度勾配で溶出した。所望のピークを含む画分を回収し、凍結乾燥して、１５ｍｇの純粋なペプチドｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−Ｇｌｙ−ＤＥＧ−ＮＨ2（１２）を得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析条件：ｔR＝１９．２分（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ、４．６×２５０ｍｍ、流速１ｍｌ／分、２０分間で０．１％ＴＦＡ水溶液中のＡＣＮ濃度２５〜４０％、λ＝２１４ｎｍ）。エレクトロスプレーＭＳ：生成物の［Ｍ＋Ｈ］+の予想値１４３４ｍ／ｚ、実測値１４３４．６ｍ／ｚ。
【００９７】
ペプチド（１２）（１当量、１５ｍｇ）をＤＭＦに溶解し、ｃＰＮ２１６−グルタリル−テトラフルオロチオフェニルエステルキレート基（２当量）、次いでＮＭＭ（３当量）を添加し、混合物を一晩撹拌した。２％溶液とするのに十分な量のヒドラジンを反応混合物に添加してＮε−Ｌｙｓ1のＤｄｅ基を外した。３０分後、溶媒を減圧除去し、上記と同様の沈殿及び凍結乾燥によって生成物を単離した。最後にｔＢｕの脱保護及びジスルフィド形成を実施例１に記載の通り行った。完全に環化したペプチド（１３）１８ｍｇが得られた。
【００９８】
８−イソチオシアノピレン−１，３，６−トリスルホン酸とペプチド１３との結合
ペプチド１３（１当量、５ｍｇ）をＤＭＦに溶解し、ＮＭＭを少量添加し、ｐＨ８に調整した。ＤＭＦ中の８−イソチオシアノピレン−１，３，６−トリスルホン酸３ナトリウム塩（５当量）の溶液を添加し、反応混合物を一晩撹拌した。ＲＰ−ＨＰＬＣ及びＭＳ分析で反応をモニターし、生成物を分取用ＲＰ−ＨＰＬＣを用いて精製した。カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８ １０μ、２２×２５０ｍｍ）は、流速１０ｍｌ／分で６０分間、０．１％ＴＦＡ水溶液中の５〜６０％ＡＣＮ濃度勾配で溶出した。所望のピークを含む画分を回収し、凍結乾燥し、０．８ｍｇの純粋なペプチド１４を得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析条件：ｔR＝２．０４分（ブロードなピーク）（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ、４．６×５ｍｍ、流速２ｍｌ／分、１０分間で０．１％ＴＦＡ水溶液中のＡＣＮ含量１０〜８０％、λ＝２１４ｎｍ）。エレクトロスプレーＭＳ：生成物の［Ｍ＋Ｈ］2+の予想値１０４７．８ｍ／ｚ、実測値１０４８．２ｍ／ｚ。
【００９９】
ペプチド１４の99mＴｃ標識
実施例１のペプチド４の標識について記載した条件下で、ペプチド１４を99mＴｃで標識した。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）記載の造影剤。
Ｚ1−Ｌ−Ｖ−Ｚ2 （Ｉ）
式中、Ｚ1及びＺ2は少なくともその一方が存在していてヒト又は動物の身体におけるインビボイメージングで検出できる同一又は異なるレポーター部分であり、Ｖはコラーゲン形成領域及び細胞外マトリックスに結合するターゲッティング部分であり、Ｌは共有結合、バイオモディファイヤー又はリンカー基である。
【請求項２】
Ｖがアミノ酸配列−Ｘ3−Ｇ−Ｄ−を含み、Ｘ3がアルギニン、Ｎ−メチルアルギニン又はアルギニン類似体である、請求項１記載の造影剤。
【請求項３】
Ｖが次の式（ＶＩ）の基であって、２つの環化架橋を含む、請求項１又は請求項２記載の造影剤。
Ｒa−Ｃ（＝Ｏ）−Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｇ−Ｄ−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6 （ＶＩ）
式中、Ｘ1は共有結合又は１、２、３、４又は５個のアミノ酸残基であり、
Ｘ2及びＸ4は独立に環化架橋を形成できるアミノ酸残基であり、
Ｘ3はアルギニン、Ｎ−メチルアルギニン又はアルギニン模倣体であり、
Ｘ5は疎水性アミノ酸又はその誘導体であり、
Ｘ6は環化架橋を形成できるアミノ酸残基であり、
ＲaはＸ2、Ｘ4又はＸ6のいずれかと架橋を形成できる−（ＣＨ2）n−又は（ＣＨ2）n−Ｃ6Ｈ4−基であり、
ｎは１〜１０の正の整数である。
【請求項４】
Ｘ1が１、２、３、４又は５個のアミノ酸残基であって、１以上のアミノ酸残基が酸又はアミン基のような官能性側鎖を有するもの、好ましくはアスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、オルニチン、ジアミノ酪酸又はジアミノプロピオン酸から選択されるものである、請求項３記載の造影剤。
【請求項５】
Ｘ2及びＸ4が独立にジスルフィド結合又はチオエーテル結合を形成するシステイン又はホモシステイン残基、或いはアスパラギン酸及びリシンのような環化架橋を形成できるアミノ酸残基である、請求項３又は請求項４記載の造影剤。
【請求項６】
Ｘ2及びＸ4が独立にシステイン又はホモシステイン残基である、請求項３乃至請求項５のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項７】
Ｘ5がチロシン、フェニルアラニン、３−ヨードチロシン又はナフチルアラニン残基である、請求項３乃至請求項６のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項８】
Ｘ6がチオール含有アミノ酸残基である、請求項３乃至請求項７のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項９】
Ｘ6がシステイン又はホモシステイン残基である、請求項３乃至請求項８のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項１０】
Ｌがアミノ酸残基数１〜１０のペプチドである、請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項１１】
Ｌがグリシン、リシン、アスパラギン酸又はセリン残基である、請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項１２】
Ｌが１以上のジカルボン酸単位、エチレングリコール単位若しくはＰＥＧ様成分又はそれらの組合せを含む、請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項１３】
Ｌが１以上のジグリコリル単位、グリコリル単位若しくはスクシニル単位又はそれらの組合せを含む、請求項１乃至請求項９及び請求項１２のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項１４】
Ｌが、式（Ｖ）の１７−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸の単分散ＰＥＧ様構造からなるバイオモディファイヤー単位である、請求項１乃至請求項９及び請求項１２乃至請求項１３のいずれか１項記載の造影剤。
【化１】
式中、ｍは１〜１０の整数であり、Ｃ末端単位はアミド基である。
【請求項１５】
Ｚ1及びＺ2が、放射線を放射する及び／又は局所的電磁場に影響を与える及び／又は放射線エネルギーを吸収若しくは散乱する同一又は異なるレポーター部分である、請求項１乃至請求項１４のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項１６】
Ｚ1及びＺ2が、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ又は光学画像モダリティでイメージングできるレポーター部分である、請求項１５記載の造影剤。
【請求項１７】
Ｚ1及びＺ2の少なくとも一方が、Ｖ及び／又はＬ部分と共有結合した非金属放射性核種を含む、請求項１５又は請求項１６記載の造影剤。
【請求項１８】
Ｚ1及びＺ2の少なくとも一方が、11Ｃ、18Ｆ、123Ｉ、125Ｉ及び／又は131Ｉを含む、請求項１７記載の造影剤。
【請求項１９】
Ｚ1及びＺ2の少なくとも一方が式Ｙ1Ｍのレポーター部分であり、Ｍが金属、好ましくは金属イオンであり、Ｙ1がＶ及び／又はＬと結合できてＭを担持するキレート剤である、請求項１８記載の造影剤。
【請求項２０】
Ｙ1が次の式（ＩＩ）のキレート剤である、請求項１９記載の造影剤。
【化２】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は各々独立にＨ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ3-10アルキルアリール、Ｃ2-10アルコキシアルキル、Ｃ1-10ヒドロキシアルキル、Ｃ1-10アルキルアミン、Ｃ1-10フルオロアルキル基であるか、或いは２以上のＲ基がそれらに結合した原子と共に炭素環、複素環、飽和又は不飽和環を形成するものである。
【請求項２１】
前記キレート剤が次の式（ＩＩＩ）のものである、請求項２０記載の造影剤。
【化３】
【請求項２２】
Ｍが金属放射性核種、常磁性金属イオン、蛍光金属イオン、重金属イオン又はクラスターイオンである、請求項１９乃至請求項２１記載の造影剤。
【請求項２３】
Ｍが、90Ｙ、99mＴｃ、111Ｉｎ、47Ｓｃ、67Ｇａ、51Ｃｒ、177mＳｎ、67Ｃｕ、167Ｔｍ、97Ｒｕ、188Ｒｅ、177Ｌｕ、199Ａｕ、203Ｐｂ、141Ｃｅ又は18Ｆからなる群から選択される、請求項１９乃至請求項２２記載の造影剤。
【請求項２４】
Ｚ1及びＺ2の一方が２以上のスルホン酸基を含むシアニン色素であり、Ｚ1及びＺ2の他方が放射性放出体で標識された式（ＩＩＩ）の部分である、請求項１５乃至請求項２３記載の造影剤。
【請求項２５】
前記キレート剤Ｙ1がＤＯＴＡである、請求項１９記載の造影剤。
【請求項２６】
前記レポーター部分がＳＰＥＣＴイメージング用の99mＴｃ若しくはヨウ素同位体、又はＰＥＴイメージング用の11Ｃ、18Ｆ若しくは68Ｇａ同位体、又はＭＲイメージング用のＧｄ3+である、請求項１乃至請求項２５のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項２７】
インビボイメージングにおける画像コントラスト強調のための有効量の一般式（Ｉ）の造影剤又はその塩を、薬学的に許容される１種以上の補助剤、賦形剤又は希釈剤と共に含んでなる医薬組成物。
【請求項２８】
コラーゲン形成に関連した疾患の診断に用いられる造影剤の製造における、式（Ｉ）の造影剤の使用。
【請求項２９】
式（Ｉ）の造影剤を含む造影剤組成物を投与したヒト又は動物の身体の強調画像を生成させる方法であって、当該方法が身体の少なくとも一部分の画像を生成させることを含む方法。
【請求項３０】
式（Ｉ）の造影剤を含む造影剤組成物を予め投与しておいたヒト又は動物の身体の強調画像を生成させる方法であって、当該方法が身体の少なくとも一部分の画像を生成させることを含む方法。
【請求項３１】
リガンド−キレートコンジュゲート及び還元剤を含んでなる、式（Ｉ）の放射性医薬組成物の製造用キット。
【請求項３２】
前記還元剤がスズ塩である、請求項３１記載のキット。
【請求項３３】
さらに１種以上の安定化剤、抗酸化剤、凍結乾燥用構造形成剤及び可溶化剤を含む、請求項３１又は請求項３２記載のキット。
【請求項１】
一般式（Ｉ）記載の造影剤。
Ｚ1−Ｌ−Ｖ−Ｚ2 （Ｉ）
式中、Ｚ1及びＺ2は少なくともその一方が存在していてヒト又は動物の身体におけるインビボイメージングで検出できる同一又は異なるレポーター部分であり、Ｖはコラーゲン形成領域及び細胞外マトリックスに結合するターゲッティング部分であり、Ｌは共有結合、バイオモディファイヤー又はリンカー基である。
【請求項２】
Ｖがアミノ酸配列−Ｘ3−Ｇ−Ｄ−を含み、Ｘ3がアルギニン、Ｎ−メチルアルギニン又はアルギニン類似体である、請求項１記載の造影剤。
【請求項３】
Ｖが次の式（ＶＩ）の基であって、２つの環化架橋を含む、請求項１又は請求項２記載の造影剤。
Ｒa−Ｃ（＝Ｏ）−Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｇ−Ｄ−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6 （ＶＩ）
式中、Ｘ1は共有結合又は１、２、３、４又は５個のアミノ酸残基であり、
Ｘ2及びＸ4は独立に環化架橋を形成できるアミノ酸残基であり、
Ｘ3はアルギニン、Ｎ−メチルアルギニン又はアルギニン模倣体であり、
Ｘ5は疎水性アミノ酸又はその誘導体であり、
Ｘ6は環化架橋を形成できるアミノ酸残基であり、
ＲaはＸ2、Ｘ4又はＸ6のいずれかと架橋を形成できる−（ＣＨ2）n−又は（ＣＨ2）n−Ｃ6Ｈ4−基であり、
ｎは１〜１０の正の整数である。
【請求項４】
Ｘ1が１、２、３、４又は５個のアミノ酸残基であって、１以上のアミノ酸残基が酸又はアミン基のような官能性側鎖を有するもの、好ましくはアスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、オルニチン、ジアミノ酪酸又はジアミノプロピオン酸から選択されるものである、請求項３記載の造影剤。
【請求項５】
Ｘ2及びＸ4が独立にジスルフィド結合又はチオエーテル結合を形成するシステイン又はホモシステイン残基、或いはアスパラギン酸及びリシンのような環化架橋を形成できるアミノ酸残基である、請求項３又は請求項４記載の造影剤。
【請求項６】
Ｘ2及びＸ4が独立にシステイン又はホモシステイン残基である、請求項３乃至請求項５のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項７】
Ｘ5がチロシン、フェニルアラニン、３−ヨードチロシン又はナフチルアラニン残基である、請求項３乃至請求項６のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項８】
Ｘ6がチオール含有アミノ酸残基である、請求項３乃至請求項７のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項９】
Ｘ6がシステイン又はホモシステイン残基である、請求項３乃至請求項８のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項１０】
Ｌがアミノ酸残基数１〜１０のペプチドである、請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項１１】
Ｌがグリシン、リシン、アスパラギン酸又はセリン残基である、請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項１２】
Ｌが１以上のジカルボン酸単位、エチレングリコール単位若しくはＰＥＧ様成分又はそれらの組合せを含む、請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項１３】
Ｌが１以上のジグリコリル単位、グリコリル単位若しくはスクシニル単位又はそれらの組合せを含む、請求項１乃至請求項９及び請求項１２のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項１４】
Ｌが、式（Ｖ）の１７−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸の単分散ＰＥＧ様構造からなるバイオモディファイヤー単位である、請求項１乃至請求項９及び請求項１２乃至請求項１３のいずれか１項記載の造影剤。
【化１】
式中、ｍは１〜１０の整数であり、Ｃ末端単位はアミド基である。
【請求項１５】
Ｚ1及びＺ2が、放射線を放射する及び／又は局所的電磁場に影響を与える及び／又は放射線エネルギーを吸収若しくは散乱する同一又は異なるレポーター部分である、請求項１乃至請求項１４のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項１６】
Ｚ1及びＺ2が、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ又は光学画像モダリティでイメージングできるレポーター部分である、請求項１５記載の造影剤。
【請求項１７】
Ｚ1及びＺ2の少なくとも一方が、Ｖ及び／又はＬ部分と共有結合した非金属放射性核種を含む、請求項１５又は請求項１６記載の造影剤。
【請求項１８】
Ｚ1及びＺ2の少なくとも一方が、11Ｃ、18Ｆ、123Ｉ、125Ｉ及び／又は131Ｉを含む、請求項１７記載の造影剤。
【請求項１９】
Ｚ1及びＺ2の少なくとも一方が式Ｙ1Ｍのレポーター部分であり、Ｍが金属、好ましくは金属イオンであり、Ｙ1がＶ及び／又はＬと結合できてＭを担持するキレート剤である、請求項１８記載の造影剤。
【請求項２０】
Ｙ1が次の式（ＩＩ）のキレート剤である、請求項１９記載の造影剤。
【化２】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は各々独立にＨ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ3-10アルキルアリール、Ｃ2-10アルコキシアルキル、Ｃ1-10ヒドロキシアルキル、Ｃ1-10アルキルアミン、Ｃ1-10フルオロアルキル基であるか、或いは２以上のＲ基がそれらに結合した原子と共に炭素環、複素環、飽和又は不飽和環を形成するものである。
【請求項２１】
前記キレート剤が次の式（ＩＩＩ）のものである、請求項２０記載の造影剤。
【化３】
【請求項２２】
Ｍが金属放射性核種、常磁性金属イオン、蛍光金属イオン、重金属イオン又はクラスターイオンである、請求項１９乃至請求項２１記載の造影剤。
【請求項２３】
Ｍが、90Ｙ、99mＴｃ、111Ｉｎ、47Ｓｃ、67Ｇａ、51Ｃｒ、177mＳｎ、67Ｃｕ、167Ｔｍ、97Ｒｕ、188Ｒｅ、177Ｌｕ、199Ａｕ、203Ｐｂ、141Ｃｅ又は18Ｆからなる群から選択される、請求項１９乃至請求項２２記載の造影剤。
【請求項２４】
Ｚ1及びＺ2の一方が２以上のスルホン酸基を含むシアニン色素であり、Ｚ1及びＺ2の他方が放射性放出体で標識された式（ＩＩＩ）の部分である、請求項１５乃至請求項２３記載の造影剤。
【請求項２５】
前記キレート剤Ｙ1がＤＯＴＡである、請求項１９記載の造影剤。
【請求項２６】
前記レポーター部分がＳＰＥＣＴイメージング用の99mＴｃ若しくはヨウ素同位体、又はＰＥＴイメージング用の11Ｃ、18Ｆ若しくは68Ｇａ同位体、又はＭＲイメージング用のＧｄ3+である、請求項１乃至請求項２５のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項２７】
インビボイメージングにおける画像コントラスト強調のための有効量の一般式（Ｉ）の造影剤又はその塩を、薬学的に許容される１種以上の補助剤、賦形剤又は希釈剤と共に含んでなる医薬組成物。
【請求項２８】
コラーゲン形成に関連した疾患の診断に用いられる造影剤の製造における、式（Ｉ）の造影剤の使用。
【請求項２９】
式（Ｉ）の造影剤を含む造影剤組成物を投与したヒト又は動物の身体の強調画像を生成させる方法であって、当該方法が身体の少なくとも一部分の画像を生成させることを含む方法。
【請求項３０】
式（Ｉ）の造影剤を含む造影剤組成物を予め投与しておいたヒト又は動物の身体の強調画像を生成させる方法であって、当該方法が身体の少なくとも一部分の画像を生成させることを含む方法。
【請求項３１】
リガンド−キレートコンジュゲート及び還元剤を含んでなる、式（Ｉ）の放射性医薬組成物の製造用キット。
【請求項３２】
前記還元剤がスズ塩である、請求項３１記載のキット。
【請求項３３】
さらに１種以上の安定化剤、抗酸化剤、凍結乾燥用構造形成剤及び可溶化剤を含む、請求項３１又は請求項３２記載のキット。
【公開番号】特開２０１２−２０７０２７（Ｐ２０１２−２０７０２７Ａ）
【公開日】平成２４年１０月２５日（２０１２．１０．２５）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１２−１４４８７０（Ｐ２０１２−１４４８７０）
【出願日】平成２４年６月２８日（２０１２．６．２８）
【分割の表示】特願２００７−５４２９５５（Ｐ２００７−５４２９５５）の分割
【原出願日】平成１７年１１月２１日（２００５．１１．２１）
【出願人】（３９６０１９３８７）ジーイー・ヘルスケア・アクスイェ・セルスカプ (82)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１０月２５日（２０１２．１０．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−１４４８７０（Ｐ２０１２−１４４８７０）
【出願日】平成２４年６月２８日（２０１２．６．２８）
【分割の表示】特願２００７−５４２９５５（Ｐ２００７−５４２９５５）の分割
【原出願日】平成１７年１１月２１日（２００５．１１．２１）
【出願人】（３９６０１９３８７）ジーイー・ヘルスケア・アクスイェ・セルスカプ (82)
【Ｆターム（参考）】
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