アクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤及び皮膚水分保持機能改善剤
【課題】優れたアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進作用を有し、かつ、安全性の高いアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤及び／又は皮膚水分保持機能改善剤を提供すること。
【解決手段】本発明のアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤及び／又は皮膚水分保持機能改善剤は、アスパラサスリネアリス、コガネバナ、カンゾウ、ドクダミ、チョウジ、マロニエ、マチルスオドラチシマ及びヘチマから選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を有効成分として含有せしめる。
【解決手段】本発明のアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤及び／又は皮膚水分保持機能改善剤は、アスパラサスリネアリス、コガネバナ、カンゾウ、ドクダミ、チョウジ、マロニエ、マチルスオドラチシマ及びヘチマから選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を有効成分として含有せしめる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物からの抽出物を有効成分とするアクアポリン（ＡＱＰ）３ｍＲＮＡ発現促進剤及び皮膚水分保持機能改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚細胞では、水チャンネルとして知られるアクアポリンが、細胞膜上に発現して、細胞間隙の水をはじめとする低分子物質を細胞内へ取り込む役割を担っていることが知られている。ヒトでは、１３種類のアクアポリン（ＡＱＰ０〜ＡＱＰ１２）の存在が知られている。表皮細胞においては、主としてアクアポリン３が存在しており、水に加えて、水分保持作用に関与するグリセロールや尿素等の低分子化合物をも取り込む役割を担っていると考えられている。しかしながら、アクアポリン３は加齢とともに減少し、このことが水分保持機能の低下の一因であることが示唆されていることから、アクアポリン３の発現を促進することにより、加齢による水分保持能やバリア機能等を制御することが可能であると考えられる（非特許文献１参照）。このような考えに基づき、アクアポリン３発現促進作用を有するものとして、例えば、ノウゼンハレン科植物より得られる抽出物（特許文献１参照）、トコフェリルレチノエート（特許文献２参照）等が知られている。
【０００３】
【特許文献１】特開２００４−１６８７３２号公報
【特許文献２】特開２００６−２９０８７３号公報
【非特許文献１】「フレグランスジャーナル」，２００６年，Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．１０，ｐ．１９−２３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明においては、天然物の中から、表皮においてアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進作用を有する成分を見出し、これらを有効成分として含有するアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤並びに皮膚水分保持機能改善剤を提供することを目的とした。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
前記課題を解決するために、種々検討を行ったところアスパラサスリネアリス、コガネバナ、カンゾウ、ドクダミ、チョウジ、マロニエ、マチルスオドラチシマ及びヘチマの各植物抽出物にアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進作用を見出し、本発明を完成するに至った。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によると、アスパラサスリネアリス、コガネバナ、カンゾウ、ドクダミ、チョウジ、マロニエ、マチルスオドラチシマ及びヘチマの各抽出物から選択される少なくとも１種を含有してなるアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤が、優れたアクアポリン−３ｍＲＮＡ発現促進作用を有し、表皮水分保持機能の正常化による乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎や各種感染症などの皮膚症状の予防・改善を効果的に行うことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明のアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤は、アスパラサスリネアリス、コガネバナ、カンゾウ、ドクダミ、チョウジ、マロニエ、マチルスオドラチシマ及びヘチマの各抽出物から選択される少なくとも１種を含有してなり、さらに必要に応じてその他の成分を含有してなる。
【０００８】
アスパラサスリネアリス（学名：Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ ｌｉｎｅａｒｉｓ）は、マメ科の植物であり、南アフリカ等で栽培されておりこれらの地域から容易に入手可能である。抽出原料として使用し得る部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、好ましくは全草である。
【０００９】
コガネバナ（学名：Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ）は、中国北部から東北部、モンゴル等に分布しているシソ科タツナミソウ属に属する多年草であり、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、葉、花、根、樹皮、枝又はこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも、根が好ましい。コガネバナの根を生薬名でオウゴンといい、従来、健胃薬、抗アレルギー剤等として使用されている。
【００１０】
カンゾウは、マメ科カンゾウ属に属し、古代より薬用又は甘味料の原料として利用されている有用植物である。抽出原料として使用するカンゾウの種類は特に限定されるものではなく、例えば、グリチリーザ グラブラ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｇｌａｂｒａ）、グリチリーザ インフラータ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｉｎｆｌａｔａ）、グリチリーザ ウラレンシス（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）、グリチリーザ アスペラ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ａｓｐｅｒａ）、グリチリーザ パリディフロラ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｐａｌｌｉｄｉｆｌｏｒａ）等を抽出原料として使用することが出来るが、好ましくはグリチリーザ グラブラ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｇｌａｂｒａ）、グリチリーザ インフラータ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｉｎｆｌａｔａ）、グリチリーザ ウラレンシス（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）である。また、抽出原料として使用し得るカンゾウの構成部位としては、例えば、葉部、枝部、樹皮部、幹部、茎部、果実部、種子部、花部等の地上部、根部、根茎部又はこれらの混合物等が挙げられるが、好ましくは葉部及び枝部である。
【００１１】
ドクダミ（学名：Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ ｃｏｒｄａｔａ）は、ドクダミ科の植物であり、日本各地に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。抽出原料として使用し得る部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば葉、枝、茎、花、蕾、果実、根茎、地上部またはこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも地上部が好ましく、生薬名でジュウヤクと呼ばれる。
【００１２】
チョウジ（学名：Ｓｙｚｙｇｉｕｍ ａｒｏｍａｔｉｃｕｍ）は、フトモモ科の植物であり、インドネシア、タンザニア、マダガスカル、マレーシア等で栽培されており、これらの地域から容易に入手可能である。抽出原料として使用し得る部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば葉、茎、根、花、蕾、種子、果実、果皮、果核、地上部、全草またはこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも前記蕾が好ましい。
【００１３】
マロニエ（学名：Ａｅｓｃｕｌｕｓ ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎｕｍ）は、トチノキ科の植物であり、ヨーロッパ、北アメリカ等で栽培されておりこれらの地域から容易に入手可能である。抽出原料として使用し得る部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば葉、枝、茎、花、蕾、種子、樹皮、根、塊根、地上部またはこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも種子が好ましい。
【００１４】
マチルスオドラチシマ（学名：Ｍａｃｈｉｌｕｓ ｏｄｏｒａｔｉｓｓｉｍａ）は、クスノキ科の植物であり、亜熱帯に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。抽出原料として使用し得る部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば葉、茎、花、根、樹皮、枝またはこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも樹皮が好ましい。
【００１５】
ヘチマ（学名：Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａ）は、ウリ科の植物であり、日本各地で栽培されており、これらの地域から容易に入手可能である。抽出原料として使用し得る部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば葉、茎、花、蕾、果実、果皮、果核、地上部またはこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも地上部が好ましい。
【００１６】
なお、前記アスパラサスリネアリス、コガネバナ、カンゾウ、ドクダミ、チョウジ、マロニエ、マチルスオドラチシマ及びヘチマの各抽出物が含有する有効成分であるアクアポリン−３ｍＲＮＡ発現促進作用物質の詳細については不明であるが、これらの有効成分は植物の抽出に一般に用いられている方法により抽出したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。前記抽出物には、抽出処理によって抽出原料から得られる抽出液、該抽出液の希釈液もしくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１７】
前記抽出原料は、採取後ただちに乾燥し粉砕したものが適当である。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。
【００１８】
前記抽出に用いる溶媒としては、水若しくは親水性有機溶媒又はこれらの混合液を室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。各植物に含まれるアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進作用を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって容易に抽出することができる。
【００１９】
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２０】
前記親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、該親水性有機溶媒と水との混合溶媒などを用いることができる。
【００２１】
なお、前記水と親水性有機溶媒との抽出溶媒を使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１〜４０質量部添加することが好ましい。多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜９０質量部添加することが好ましい。
【００２２】
本発明において、前記各抽出原料からアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進物質を抽出するにあたって特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の装置を用いて抽出することができる。
【００２３】
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽に各抽出原料を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分〜４時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物が得られる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０〜９５℃で１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０〜８０℃で３０分〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであればそのまま配合して本発明のアクアポリン−３ｍＲＮＡ発現促進剤及び／又は皮膚水分保持機能改善剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。
【００２４】
得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００２５】
なお、得られた抽出液はそのままでもアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤及び／又は皮膚水分保持機能改善剤として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。乾燥物を得るにあたっては、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。
【００２６】
また、各抽出原料は特有の匂いと味を有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、化粧料に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。精製は、具体的には活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００２７】
本発明のアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤及び／又は皮膚水分保持機能改善剤は、製剤化により粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形とすることができる。
【実施例】
【００２８】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。なお、本試験例においては、試料として表１に示す製品（全て丸善製薬社製）の凍結乾燥品を使用した（試料１〜８）。
【００２９】
〔表１〕
試料 抽出原料 製品名
１ アスパラサスリネアリス全草 アスパラサスリネアリス抽出液
２ コガネバナ根 オウゴン抽出液
３ カンゾウ葉 甘草葉抽出液
４ ドクダミ地上部 ジュウヤク抽出液
５ チョウジ蕾 チョウジ抽出液
６ マロニエ種子 マロニエ抽出液
７ マチルスオドラチシマ樹皮 マチルス樹皮抽出液
８ ヘチマ地上部 ヘチマ抽出液
【００３０】
〔試験例１〕アクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進作用試験
上記の各抽出物について、下記の方法によりアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進作用の試験をした。
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｋｅｔｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ；ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（Ｅｐｉｌｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下にて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。
回収した細胞を３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で、Ｅｐｉｌｉｆｅ−ＫＧ２を用いて一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、Ｅｐｉｌｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した試料溶液を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下にて２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン社製，Ｃａｔ． Ｎｏ． ３１１−０２５０１）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００μｇ／ｍＬになるように総ＲＮＡを調製した。
この総ＲＮＡを鋳型とし、アクアポリン３及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Ｓｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ（Ｃｅｐｈｅｉｄ社製）を用いて、ＴａＫａＲａ ＳＹＢＥＲ Ｐｒｉｍｅ Ｓｃｒｉｐｔ ＲＴ−ＰＣＲ ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ，ｃｏｄｅ Ｎｏ． ＲＲ０６３Ａ）によるリアルタイム２Ｓｔｅｐ ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。アクアポリン３の発現量は、「試料無添加」で及び「試料添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、さらに「試料無添加」の補正値を１００としたときの「試料添加」の補正値を算出した。得られた結果から、下記式により、アクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進率（％）を算出した。
アクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時の補正値」を表し、Ｂは「試料無添加時の補正値」を表す。
上記試験の結果を表２に示す。なお、上記計算式において、試料無添加のアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進率は１００％となる。
【００３１】
〔表２〕
試料 試料濃度（μｇ／ｍＬ） アクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進率（％）
１ １２．５ １３２．８
２ １．０ １１０．６
３ １０．０ １１４．９
４ １．０ １１６．６
５ １．０ １２５．１
１０．０ １３４．１
６ １．０ １１５．２
７ １．０ １６８．０
８ １２．５ １０２．８
５０．０ １３０．６
【００３２】
表２に示すように、アスパラサスリネアリス、コガネバナ、カンゾウ、ドクダミ、チョウジ、マロニエ、マチルスオドラチシマ及びヘチマの各抽出物は、いずれも高いアクアポリン−３ｍＲＮＡ発現促進率を示した。この結果から、これらの抽出物は、優れたアクアポリン−３ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００３３】
本発明のアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤及び皮膚水分保持機能改善剤は、表皮におけるアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進作用によって皮膚の水分保持機能を改善させることにより、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎などの各種皮膚症状の予防・改善に大きく貢献できる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物からの抽出物を有効成分とするアクアポリン（ＡＱＰ）３ｍＲＮＡ発現促進剤及び皮膚水分保持機能改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚細胞では、水チャンネルとして知られるアクアポリンが、細胞膜上に発現して、細胞間隙の水をはじめとする低分子物質を細胞内へ取り込む役割を担っていることが知られている。ヒトでは、１３種類のアクアポリン（ＡＱＰ０〜ＡＱＰ１２）の存在が知られている。表皮細胞においては、主としてアクアポリン３が存在しており、水に加えて、水分保持作用に関与するグリセロールや尿素等の低分子化合物をも取り込む役割を担っていると考えられている。しかしながら、アクアポリン３は加齢とともに減少し、このことが水分保持機能の低下の一因であることが示唆されていることから、アクアポリン３の発現を促進することにより、加齢による水分保持能やバリア機能等を制御することが可能であると考えられる（非特許文献１参照）。このような考えに基づき、アクアポリン３発現促進作用を有するものとして、例えば、ノウゼンハレン科植物より得られる抽出物（特許文献１参照）、トコフェリルレチノエート（特許文献２参照）等が知られている。
【０００３】
【特許文献１】特開２００４−１６８７３２号公報
【特許文献２】特開２００６−２９０８７３号公報
【非特許文献１】「フレグランスジャーナル」，２００６年，Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．１０，ｐ．１９−２３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明においては、天然物の中から、表皮においてアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進作用を有する成分を見出し、これらを有効成分として含有するアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤並びに皮膚水分保持機能改善剤を提供することを目的とした。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
前記課題を解決するために、種々検討を行ったところアスパラサスリネアリス、コガネバナ、カンゾウ、ドクダミ、チョウジ、マロニエ、マチルスオドラチシマ及びヘチマの各植物抽出物にアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進作用を見出し、本発明を完成するに至った。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によると、アスパラサスリネアリス、コガネバナ、カンゾウ、ドクダミ、チョウジ、マロニエ、マチルスオドラチシマ及びヘチマの各抽出物から選択される少なくとも１種を含有してなるアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤が、優れたアクアポリン−３ｍＲＮＡ発現促進作用を有し、表皮水分保持機能の正常化による乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎や各種感染症などの皮膚症状の予防・改善を効果的に行うことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明のアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤は、アスパラサスリネアリス、コガネバナ、カンゾウ、ドクダミ、チョウジ、マロニエ、マチルスオドラチシマ及びヘチマの各抽出物から選択される少なくとも１種を含有してなり、さらに必要に応じてその他の成分を含有してなる。
【０００８】
アスパラサスリネアリス（学名：Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ ｌｉｎｅａｒｉｓ）は、マメ科の植物であり、南アフリカ等で栽培されておりこれらの地域から容易に入手可能である。抽出原料として使用し得る部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、好ましくは全草である。
【０００９】
コガネバナ（学名：Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ）は、中国北部から東北部、モンゴル等に分布しているシソ科タツナミソウ属に属する多年草であり、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、葉、花、根、樹皮、枝又はこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも、根が好ましい。コガネバナの根を生薬名でオウゴンといい、従来、健胃薬、抗アレルギー剤等として使用されている。
【００１０】
カンゾウは、マメ科カンゾウ属に属し、古代より薬用又は甘味料の原料として利用されている有用植物である。抽出原料として使用するカンゾウの種類は特に限定されるものではなく、例えば、グリチリーザ グラブラ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｇｌａｂｒａ）、グリチリーザ インフラータ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｉｎｆｌａｔａ）、グリチリーザ ウラレンシス（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）、グリチリーザ アスペラ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ａｓｐｅｒａ）、グリチリーザ パリディフロラ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｐａｌｌｉｄｉｆｌｏｒａ）等を抽出原料として使用することが出来るが、好ましくはグリチリーザ グラブラ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｇｌａｂｒａ）、グリチリーザ インフラータ（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｉｎｆｌａｔａ）、グリチリーザ ウラレンシス（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）である。また、抽出原料として使用し得るカンゾウの構成部位としては、例えば、葉部、枝部、樹皮部、幹部、茎部、果実部、種子部、花部等の地上部、根部、根茎部又はこれらの混合物等が挙げられるが、好ましくは葉部及び枝部である。
【００１１】
ドクダミ（学名：Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ ｃｏｒｄａｔａ）は、ドクダミ科の植物であり、日本各地に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。抽出原料として使用し得る部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば葉、枝、茎、花、蕾、果実、根茎、地上部またはこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも地上部が好ましく、生薬名でジュウヤクと呼ばれる。
【００１２】
チョウジ（学名：Ｓｙｚｙｇｉｕｍ ａｒｏｍａｔｉｃｕｍ）は、フトモモ科の植物であり、インドネシア、タンザニア、マダガスカル、マレーシア等で栽培されており、これらの地域から容易に入手可能である。抽出原料として使用し得る部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば葉、茎、根、花、蕾、種子、果実、果皮、果核、地上部、全草またはこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも前記蕾が好ましい。
【００１３】
マロニエ（学名：Ａｅｓｃｕｌｕｓ ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎｕｍ）は、トチノキ科の植物であり、ヨーロッパ、北アメリカ等で栽培されておりこれらの地域から容易に入手可能である。抽出原料として使用し得る部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば葉、枝、茎、花、蕾、種子、樹皮、根、塊根、地上部またはこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも種子が好ましい。
【００１４】
マチルスオドラチシマ（学名：Ｍａｃｈｉｌｕｓ ｏｄｏｒａｔｉｓｓｉｍａ）は、クスノキ科の植物であり、亜熱帯に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。抽出原料として使用し得る部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば葉、茎、花、根、樹皮、枝またはこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも樹皮が好ましい。
【００１５】
ヘチマ（学名：Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａ）は、ウリ科の植物であり、日本各地で栽培されており、これらの地域から容易に入手可能である。抽出原料として使用し得る部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば葉、茎、花、蕾、果実、果皮、果核、地上部またはこれらの混合物が挙げられ、これらの中でも地上部が好ましい。
【００１６】
なお、前記アスパラサスリネアリス、コガネバナ、カンゾウ、ドクダミ、チョウジ、マロニエ、マチルスオドラチシマ及びヘチマの各抽出物が含有する有効成分であるアクアポリン−３ｍＲＮＡ発現促進作用物質の詳細については不明であるが、これらの有効成分は植物の抽出に一般に用いられている方法により抽出したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。前記抽出物には、抽出処理によって抽出原料から得られる抽出液、該抽出液の希釈液もしくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１７】
前記抽出原料は、採取後ただちに乾燥し粉砕したものが適当である。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。
【００１８】
前記抽出に用いる溶媒としては、水若しくは親水性有機溶媒又はこれらの混合液を室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。各植物に含まれるアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進作用を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって容易に抽出することができる。
【００１９】
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２０】
前記親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、該親水性有機溶媒と水との混合溶媒などを用いることができる。
【００２１】
なお、前記水と親水性有機溶媒との抽出溶媒を使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１〜４０質量部添加することが好ましい。多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜９０質量部添加することが好ましい。
【００２２】
本発明において、前記各抽出原料からアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進物質を抽出するにあたって特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の装置を用いて抽出することができる。
【００２３】
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽に各抽出原料を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分〜４時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物が得られる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０〜９５℃で１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０〜８０℃で３０分〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであればそのまま配合して本発明のアクアポリン−３ｍＲＮＡ発現促進剤及び／又は皮膚水分保持機能改善剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。
【００２４】
得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００２５】
なお、得られた抽出液はそのままでもアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤及び／又は皮膚水分保持機能改善剤として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。乾燥物を得るにあたっては、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。
【００２６】
また、各抽出原料は特有の匂いと味を有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、化粧料に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。精製は、具体的には活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００２７】
本発明のアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤及び／又は皮膚水分保持機能改善剤は、製剤化により粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形とすることができる。
【実施例】
【００２８】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。なお、本試験例においては、試料として表１に示す製品（全て丸善製薬社製）の凍結乾燥品を使用した（試料１〜８）。
【００２９】
〔表１〕
試料 抽出原料 製品名
１ アスパラサスリネアリス全草 アスパラサスリネアリス抽出液
２ コガネバナ根 オウゴン抽出液
３ カンゾウ葉 甘草葉抽出液
４ ドクダミ地上部 ジュウヤク抽出液
５ チョウジ蕾 チョウジ抽出液
６ マロニエ種子 マロニエ抽出液
７ マチルスオドラチシマ樹皮 マチルス樹皮抽出液
８ ヘチマ地上部 ヘチマ抽出液
【００３０】
〔試験例１〕アクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進作用試験
上記の各抽出物について、下記の方法によりアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進作用の試験をした。
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｋｅｔｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ；ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（Ｅｐｉｌｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下にて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。
回収した細胞を３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で、Ｅｐｉｌｉｆｅ−ＫＧ２を用いて一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、Ｅｐｉｌｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した試料溶液を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下にて２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン社製，Ｃａｔ． Ｎｏ． ３１１−０２５０１）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００μｇ／ｍＬになるように総ＲＮＡを調製した。
この総ＲＮＡを鋳型とし、アクアポリン３及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Ｓｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ（Ｃｅｐｈｅｉｄ社製）を用いて、ＴａＫａＲａ ＳＹＢＥＲ Ｐｒｉｍｅ Ｓｃｒｉｐｔ ＲＴ−ＰＣＲ ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ，ｃｏｄｅ Ｎｏ． ＲＲ０６３Ａ）によるリアルタイム２Ｓｔｅｐ ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。アクアポリン３の発現量は、「試料無添加」で及び「試料添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、さらに「試料無添加」の補正値を１００としたときの「試料添加」の補正値を算出した。得られた結果から、下記式により、アクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進率（％）を算出した。
アクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時の補正値」を表し、Ｂは「試料無添加時の補正値」を表す。
上記試験の結果を表２に示す。なお、上記計算式において、試料無添加のアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進率は１００％となる。
【００３１】
〔表２〕
試料 試料濃度（μｇ／ｍＬ） アクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進率（％）
１ １２．５ １３２．８
２ １．０ １１０．６
３ １０．０ １１４．９
４ １．０ １１６．６
５ １．０ １２５．１
１０．０ １３４．１
６ １．０ １１５．２
７ １．０ １６８．０
８ １２．５ １０２．８
５０．０ １３０．６
【００３２】
表２に示すように、アスパラサスリネアリス、コガネバナ、カンゾウ、ドクダミ、チョウジ、マロニエ、マチルスオドラチシマ及びヘチマの各抽出物は、いずれも高いアクアポリン−３ｍＲＮＡ発現促進率を示した。この結果から、これらの抽出物は、優れたアクアポリン−３ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００３３】
本発明のアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤及び皮膚水分保持機能改善剤は、表皮におけるアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進作用によって皮膚の水分保持機能を改善させることにより、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎などの各種皮膚症状の予防・改善に大きく貢献できる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アスパラサスリネアリス、コガネバナ、カンゾウ、ドクダミ、チョウジ、マロニエ、マチルスオドラチシマ及びヘチマから選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を有効成分として含有することを特徴とするアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤。
【請求項２】
請求項１記載の植物抽出物を有効成分として含有することを特徴とする皮膚水分保持機能改善剤。
【請求項１】
アスパラサスリネアリス、コガネバナ、カンゾウ、ドクダミ、チョウジ、マロニエ、マチルスオドラチシマ及びヘチマから選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物を有効成分として含有することを特徴とするアクアポリン３ｍＲＮＡ発現促進剤。
【請求項２】
請求項１記載の植物抽出物を有効成分として含有することを特徴とする皮膚水分保持機能改善剤。
【公開番号】特開２００９−２５６２７１（Ｐ２００９−２５６２７１Ａ）
【公開日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１０９３７１（Ｐ２００８−１０９３７１）
【出願日】平成２０年４月１８日（２００８．４．１８）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年４月１８日（２００８．４．１８）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
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