アポトーシスの検出に適した化合物
【課題】アポトーシスが生体内で生じていることを可視化するために用いられる物質を提供する。
【解決手段】一般式（I-a）で代表される化合物。
【解決手段】一般式（I-a）で代表される化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アポトーシスの検出に適した化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アポトーシスとは、生理的条件下で細胞が自ら引き起こす細胞死のことである。癌化した細胞も通常はアポトーシスで排除されるが、何らかの原因によりその機序が働かなくなると悪性腫瘍へと成長する。脳梗塞等の虚血性疾患並びにアルツハイマー病及びパーキンソン病等の神経変性疾患においては、アポトーシスにより神経細胞の脱落が起こっていると考えられている（非特許文献１、２及び３）。また、脳梗塞を治療する際に血栓溶解剤を投与して脳の血流を元に戻してもアポトーシスが生じ、やはり神経細胞が脱落する（非特許文献１、４及び５）。
【０００３】
アポトーシスが生じる機構については、ミトコンドリア外膜上に存在する種々のタンパク質が互いに結合してホモダイマーやヘテロダイマーを形成することでアポトーシスを抑制又は誘導することが知られており、これらのタンパク質を利用してアポトーシスを制御する研究が行われてきた（非特許文献１及び６）。
【０００４】
アポトーシスの制御は、癌治療や虚血性疾患及び神経変性疾患における治療につながる。例えば、癌細胞でアポトーシスを積極的に生じさせる抗癌剤は癌治療に用いられている。また、アポトーシスを抑制するアポトーシス抑制剤は、虚血性疾患や神経変性疾患における神経細胞の脱落を阻止するために用いられる。疾患の治療においては、これらの薬剤が生体内で有効に作用しているかどうかを評価することが重要であり、この評価を可能にするための技術が求められている。
【非特許文献１】田熊一敞、日本薬理学雑誌、１２７巻、３４９〜３５４頁（２００６年）
【非特許文献２】Ｇｒａｅｂｅｒ ＭＢ． ｅｔ ａｌ．、Ｂｒａｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．、１２巻、３８５〜３９０頁（２００２年）
【非特許文献３】Ｍａｔｔｓｏｎ ＭＰ、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．、１巻、１２０〜１２９頁（２０００年）
【非特許文献４】Ｄｉｒｎａｇｌ Ｕ． ｅｔ ａｌ．、Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、２２巻、３９１〜３９７頁（１９９９年）
【非特許文献５】Ｂｅｎｃｈｏｕａ Ａ． ｅｔ ａｌ．、Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、２１巻、７１２７〜７１３４頁（２００１年）
【非特許文献６】Ｂｅａｕｐａｒｌａｎｔ Ｐ． ｅｔ ａｌ．、Ｃｕｒｒ.Ｏｐｉｎ.Ｄｒｕｇ.Ｄｉｓｃｏｖ.Ｄｅｖ．、６巻（２）、１７９〜１８７頁（２００３年）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
アポトーシス制御を利用した薬剤の薬効を評価するために、被験者の生体内で生じているアポトーシスを可視化することが有効であると考えられる。従って、本発明の目的の一つは、アポトーシスが生体内で生じていることを可視化するために用いられる物質を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、下記一般式（I）で表される化合物を提供する。
【化１】
（式（Ｉ）中、Ｘはヨウ素原子又は臭素原子であり、Ｙは水酸基又はメトキシ基である。）
【０００７】
式（I）で表される化合物はアポトーシスが生じている細胞に集積する傾向がある。また、式（I）で表される化合物により放出されるポジトロンはすぐに電子と結合してγ線（消滅放射線）を放出するため、このγ線を陽電子放出型断層撮影装置（以下、「ＰＥＴ」という）で測定することにより、式（I）で表される化合物の体内分布を定量的かつ経時的に画像化することができる。従って上記式（I）で表される化合物を用いることで、被験者の生体内でアポトーシスが生じている部位を経時的に可視化できる。
【０００８】
本発明は下記一般式（ＩＩ）で表される化合物を提供する。
【化２】
（式（ＩＩ）中、Ｘはヨウ素原子又は臭素原子であり、Ｙは水酸基又はメトキシ基である。）
【０００９】
式（ＩＩ）で表される化合物をポジトロン核種で標識することにより、効率良く式（Ｉ）で表される化合物を提供することができる。
【００１０】
式（Ｉ）で表される化合物は、アポトーシスの検出用試薬として有用である。該アポトーシスの検出用試薬によれば、簡便に生体中のアポトーシスが生じている部位を検出することができる。
【００１１】
式（Ｉ）で表される化合物は、抗癌剤の薬効評価用試薬としても用いられる。該抗癌剤の薬効評価用試薬によれば、癌細胞でアポトーシスが生じているかどうかを患者が生存した状態で検出することができるために、癌患者に適用して抗癌剤の薬効評価をすることができる。
【００１２】
式（Ｉ）で表される化合物は、アポトーシス抑制剤の評価用試薬としても有用である。アポトーシス抑制剤は虚血性疾患や神経変性疾患等における神経脱落を予防するのに用いられる。アポトーシス抑制剤の上記評価用試薬によれば、アポトーシス抑制剤により生体中でアポトーシスが効果的に抑制されているかどうかを経時的に評価することができる。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、アポトーシスが生体内で生じていることを可視化するために用いられる物質が提供される。更に、アポトーシス検出用試薬、抗癌剤の薬効評価試薬及びアポトーシス抑制剤の薬効評価用試薬が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明の化合物は、下記一般式（Ｉ）：
【化３】
（式（Ｉ）中、Ｘはヨウ素原子又は臭素原子であり、Ｙは水酸基又はメトキシ基である。）で表され、より具体的には、
下記一般式（Ｉ−ａ）;
【化４】
で表されるＮ−｛２−クロロ−５−（４−［１８Ｆ］フルオロフェニルスルホニル）フェニル｝−５−クロロ−２−ヒドロキシ−３−ヨードベンズアミド（以下「［１８Ｆ］ＦＢＨＩ」という）、
下記一般式（Ｉ−ｂ）；
【化５】
で表されるＮ−｛２−クロロ−５−（４−［１８Ｆ］フルオロフェニルスルホニル）フェニル｝−３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシベンズアミド（以下「［１８Ｆ］ＦＢＨＢ」という）、
下記一般式（Ｉ−ｃ）；
【化６】
で表されるＮ−｛２−クロロ−５−（４−［１８Ｆ］フルオロフェニルスルホニル）フェニル｝−５−クロロ−３−ヨード−２−メトキシベンズアミド（以下「［１８Ｆ］ＦＢＭＩ」という）、及び、
下記一般式（Ｉ−ｄ）；
【化７】
で表されるＮ−｛２−クロロ−５−（４−［１８Ｆ］フルオロフェニルスルホニル）フェニル｝−３−ブロモ−５−クロロ−２−メトキシベンズアミド（以下「［１８Ｆ］ＦＢＭＢ」という）である。
【００１５】
下記一般式（ＩＩ）で表される化合物（以下、「化合物（ＩＩ）」という）は、上記一般式（Ｉ）で表される化合物（以下、「化合物（Ｉ）」という）の前駆体である。
【化８】
（式（ＩＩ）中、Ｘはヨウ素原子又は臭素原子であり、Ｙは水酸基又はメトキシ基である。）
【００１６】
化合物（Ｉ）は化合物（ＩＩ）から、下記反応式（ＩＩＩ）を経て合成できる。
【化９】
（式（ＩＩＩ）中、Ｘはヨウ素原子又は臭素原子であり、Ｙは水酸基又はメトキシ基である。）
【００１７】
化合物（ＩＩ）は実施例１に記載の方法で化学合成でき、化合物（Ｉ）は実施例２に記載の方法で化学合成できる。
【００１８】
化合物（Ｉ）は、生体に投与した場合、アポトーシスが生じている細胞に集積する傾向がある。また、化合物（Ｉ）により放出されるポジトロンはすぐに電子と結合してγ線を放出するため、このγ線をＰＥＴで測定することにより、化合物（Ｉ）の体内分布を定量的に画像化することができる。したがって、化合物（Ｉ）を用いることで、被験者の生体内でアポトーシスが生じている部位を検出し、その度合い、変化を経時的に可視化できる。
【００１９】
化合物（Ｉ）は、アポトーシスの検出用試薬として有用である。ここで、本発明のアポトーシス検出用試薬は、化合物（Ｉ）を含み、生体に投与されると、生体中の化合物（Ｉ）から放出されるγ線をＰＥＴで計測することにより、アポトーシスが生じている部位を検出できる。
【００２０】
化合物（Ｉ）は、抗癌剤の薬効評価用試薬としても有用である。ここで、「抗癌剤の薬効評価用試薬」とは、生体に投与された抗癌剤がその薬効により生体中の癌細胞をアポトーシスで消失させる機能が働いているかどうかを評価する試薬である。本発明の抗癌剤の薬効評価用試薬は化合物（Ｉ）を含むため、抗癌剤で治療中の生体に投与すると、癌細胞でアポトーシスが生じていれば、患部に化合物（Ｉ）が集積する。集積した化合物（Ｉ）から放出されるγ線をＰＥＴで計測することにより、癌細胞でアポトーシスが生じているかどうかを判断できる。従って、抗癌剤が効いているかどうかを本発明の抗癌剤の薬効評価用試薬により判断できる。
【００２１】
上記抗癌剤の薬効評価用試薬に含まれる化合物（Ｉ）として、［１８Ｆ］ＦＢＭＢ又は［１８Ｆ］ＦＢＭＩが好ましい。これらの化合物は、特に癌細胞で生じるアポトーシスに対して集積する傾向がある。
【００２２】
化合物（Ｉ）は、アポトーシス抑制剤の評価用試薬として使用できる。ここで、「アポトーシス抑制剤の評価用試薬」とは、生体に投与されたアポトーシス抑制剤によってアポトーシスが該生体内の標的部で抑制されているかどうかを、評価する試薬である。アポトーシス抑制剤を生体に投与し、該アポトーシス抑制剤の薬効が標的部で有効であれば、標的部でアポトーシスが抑制される。そこで本発明のアポトーシス抑制剤の評価用試薬を該生体に投与し、ＰＥＴ計測をすると、本発明のアポトーシス抑制剤は化合物（Ｉ）を含むにもかかわらず、γ線が該標的部から放出されていないこと、すなわち、化合物（Ｉ）が標的部に集積していないことがわかる。化合物（Ｉ）が集積していないことから、アポトーシスが抑制されており、アポトーシス抑制剤の薬効が有効であることを判断できる。逆にアポトーシス抑制剤が標的部で有効に作用していなければ、本発明の評価剤に含まれる化合物（Ｉ）が標的部に集積することから、アポトーシスが生じていること、すなわちアポトーシス抑制剤が効いていないことを判断できる。
【００２３】
アポトーシス抑制剤の薬効評価用試薬に含まれる化合物（Ｉ）として、［１８Ｆ］ＦＢＨＢ又は［１８Ｆ］ＦＢＨＩが好ましい。これらの化合物は、特に神経変性疾患、虚血性疾患で生じるアポトーシスに対して集積する傾向がある。アポトーシス抑制剤は神経変性疾患や虚血性疾患で生じる神経細胞の脱落の予防に主に用いられ、そのような神経変性疾患や虚血性疾患におけるアポトーシス抑制剤の薬効評価用試薬は有効である。
【００２４】
上記アポトーシス検出用試薬、上記抗癌剤の薬効評価用試薬又は上記アポトーシス抑制剤の薬効評価用試薬は、例えば、化合物（Ｉ）を任意の緩衝液に溶解することにより製造することができる。かかる場合、当該試薬は溶液として提供され、上記の緩衝成分の他、界面活性剤、防腐剤、安定化剤等のその他の成分を含有させることもできる。投与方法は、通常、静脈内投与である。
【００２５】
また、上記アポトーシス検出用試薬、上記抗癌剤の薬効評価用試薬又は上記アポトーシス抑制剤の薬効評価用試薬の対象として、ヒトを含む動物の脳、器官、臓器、組織、細胞等を挙げることができるがこれらに限定されるものではない。また、本発明の化合物（Ｉ）を用いてＰＥＴ測定を行うに際し、その測定方法は特に制限されず、公知の方法に準じて実施することができる。
【実施例】
【００２６】
（実施例１）化合物（ＩＩ）の化学合成
（１−１ａ）［１８Ｆ］ＦＢＨＩの前駆体の化学合成
［１８Ｆ］ＦＢＨＩの前駆体であるＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−５−クロロ−２−ヒドロキシ−３−ヨードベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩（下記式（ＩＶ）中に示す化合物（ＩＩ−ａ））を以下のように作製した。下記式（ＩＶ）に、合成スキームを示す。
【化１０】
【００２７】
上記式（ＩＶ）において、まず化合物（３Ｈ−Ｉ）を以下のように作製した。ジムロート冷却管及び温度計を取り付けた３００ｍＬ４つ口コルベンに、５−クロロサリチル酸３０．０ｇ（０．１７ｍｏｌ）及び酢酸１５０ｍＬを仕込み加熱撹拌した。この懸濁溶液中に塩化ヨウ素３２．０ｇ（０．１８ｍｏｌ）の酢酸溶液９０ｍＬを１．５時間かけて滴下し、１００℃にて５時間撹拌した。この溶液を室温まで放冷後、５％亜硫酸ナトリウム水溶液４００ｍＬへ投入した。この溶液を３０分間撹拌後、析出した白色結晶を濾取した。この結晶を減圧乾燥し、２５ｇの粗精製物を得た。酢酸１８０ｍＬにて再結晶を行い、上記式（ＩＶ）中に示す化合物（３Ｈ−Ｉ）１４ｇ（収率２７％）を得た。
【００２８】
ジムロート冷却管を取り付けた１００ｍＬナスコルベンに、室温で、化合物（３Ｈ−Ｉ）３．８７ｇ（１３ｍｍｏｌ）、下記式（ＶＩＩＩ）中に示す化合物（７）４．００ｇ（１３ｍｍｏｌ）及びトルエン５０ｍＬを入れ、９０℃に加熱し、均一溶液とした。この溶液にＰＯＣｌ３２．０ｇ（１３ｍｍｏｌ）／トルエン５．０ｍＬを滴下した。１８時間加熱還流後、全ての溶媒を留去し、得られた固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／アセトン＝１０／１）で精製し、上記式（ＩＶ）中に示す化合物（９Ｈ-Ｉ）１．３ｇ（収率１７％）を得た。
【００２９】
１００ｍＬナスコルベンに、室温で、化合物（９Ｈ−Ｉ）１．３ｇ（２．２ｍｍｏｌ）を脱水ジクロロメタン５０ｍＬに溶解した。この溶液にトリフルオロメタンスルホン酸メチル０．４０ｇ（２．４２ｍｍｏｌ）×２回／脱水ジクロロメタン５ｍＬを加えて、室温で２０時間攪拌した。析出物を濾過し、濾物をジクロロメタン１０ｍＬで洗浄し、真空乾燥することにより、［１８Ｆ］ＦＢＨＩの前駆体であるＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−５−クロロ−２−ヒドロキシ−３−ヨードベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩（上記式（ＩＶ）中に示す化合物（ＩＩ−ａ））０．７０ｇ（収率４２％、純度９９％）を得た。
【００３０】
（１−１ｂ）［１８Ｆ］ＦＢＨＢの前駆体の化学合成
［１８Ｆ］ＦＢＨＢの前駆体であるＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩（下記式（Ｖ）中に示す化合物（ＩＩ−ｂ））を以下のように作製した。下記式（Ｖ）に、合成スキームを示す。
【化１１】
【００３１】
上記式（Ｖ）において、まず化合物（１）を以下のように作製した。メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた１Ｌ４つ口コルベンに、室温で５−クロロサリチル酸５０．０ｇ（２８９．７ｍｍｏｌ）とメタノール５００ｍＬを入れ、攪拌しながら、濃硫酸３ｍＬを添加した。この溶液を１５分かけて内温７２℃まで昇温、還流状態とし、同温にて攪拌した。１４時間後、この溶液を室温まで冷却し、溶媒留去を行うと無色固体が得られた。この固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１／１）で精製することにより無色固体として上記式（Ｖ）中に示す化合物（１）４１．８ｇ（収率７７％、純度９９．５％）を得た。
【００３２】
メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた５０ｍＬ四つ口コルベンに、室温で、化合物（１）１５．０ｇ（８０．４ｍｍｏｌ）、４０％ＨＢｒ−酢酸溶液９ｍＬ及び酢酸９ｍＬを入れ、攪拌しながら、６０℃に加温した。この溶液に、ＮａＣｌＯ３３．５ｇ／蒸留水２０ｍＬを５分かけて滴下すると、臭素の発生が確認され、固体が析出した。溶液を８時間加熱した後、得られた固体を濾取することにより、淡黄色固体として上記式（Ｖ）中に示す化合物（２−Ｂｒ）２２．４ｇ（収率１０５％）を得た。
【００３３】
メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた３００ｍＬ４つ口コルベンに、化合物（２−Ｂｒ）２２．４ｇ（８４．４ｍｍｏｌ）、メタノール１００ｍＬ及び２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液１００ｍＬを入れ、攪拌した。この溶液を１５分かけて還流状態とし、同温にて攪拌した。２４時間後、この溶液を室温まで冷却し、液量を１／５まで濃縮した。この溶液に６Ｎ塩酸５０ｍＬを加え、ｐＨ２程度にした。析出している固体を濾別し、水１００ｍＬで洗浄し、真空乾燥することにより、無色結晶として上記式（Ｖ）中に示す化合物（３Ｈ−Ｂｒ）１８．３ｇ（収率８３％）を得た。
【００３４】
ジムロート冷却管を取り付けた１Ｌナスコルベンに、室温で、化合物（３Ｈ−Ｂｒ）７．５０ｇ（２９．８ｍｍｏｌ）、下記式（ＶＩＩＩ）中に示す化合物（７）９．３６ｇ（３０．１ｍｍｏｌ）及びトルエン５００ｍＬを入れ、９０℃に加熱し、均一溶液とした。この溶液にＰＯＣｌ３１０ｍＬ／トルエン１００ｍＬを１時間かけて滴下した。この溶液を２４時間加熱還流後、全ての溶媒を留去し、得られた固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１／１）で分離し、濃縮後、得られた固体をクロロホルム／メタノールから再結晶することにより、無色固体として上記式（Ｖ）中に示す化合物（９Ｈ−Ｂｒ）３．２４ｇ（収率２０％、純度９８％）を得た。
【００３５】
３００ｍＬナスコルベンに、室温で、化合物（９Ｈ−Ｂｒ）３．０２ｇ（５．５５ｍｍｏｌ）を脱水ジクロロメタン２００ｍＬに溶解した。この溶液にトリフルオロメタンスルホン酸メチル１．００ｇ／脱水ジクロロメタン１ｍＬを加えて、室温で２６時間攪拌した。析出物を濾過し、濾物を熱したテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）４０ｍＬに溶解し、ジクロロメタン１０ｍＬを加えて、静置し、析出した固体を濾過し、ＴＨＦ１０ｍＬで洗浄した後、真空乾燥することで無色固体として［１８Ｆ］ＦＢＨＢの前駆体であるＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩（上記式（Ｖ）中に示す化合物（ＩＩ−ｂ））１．３８ｇ（収率３５％、純度９９％）を得た。
【００３６】
（１−１ｃ）［１８Ｆ］ＦＢＭＩの前駆体の化学合成
［１８Ｆ］ＦＢＭＩの前駆体であるＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−５−クロロ−３−ヨード−２−メトキシベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩（下記式（ＶＩ）中に示す化合物（ＩＩ−ｃ））を以下のように作製した。下記式（ＶＩ）に、合成スキームを示す。
【化１２】
【００３７】
上記化学式（ＶＩ）において化合物（１）を、上記（１−１ｂ）［１８Ｆ］ＦＢＨＢの前駆体の化学合成における化合物（１）の合成と同様の方法で合成した。こうして合成した化合物（１）３７．３ｇ（１９９．９ｍｍｏｌ）を、ヨウ化ナトリウム３０．４ｇ（２０２．８ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）４００ｍＬと共に、室温で、メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた１Ｌ４つ口コルベンに入れ、攪拌しながら、クロラミン−Ｔ ｎ水和物４５．６ｇ（２００．３ｍｍｏｌ）を４５分かけてこの溶液に添加した。この溶液を室温にて１．５時間攪拌した後、氷水２Ｌと飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液１００ｍＬに注ぎ込み、酢酸エチル４Ｌで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、有機層を溶媒留去した。得られた黄色固体と黄色油状物に９０％メタノール２００ｍＬを加え、１５分攪拌した。析出した固体を濾過し、メタノール２００ｍＬで２回洗浄した後、真空乾燥することにより、無色結晶として上記式（ＶＩ）中に示す化合物（２−Ｉ）４２．１ｇ（収率８３％）を得た。
【００３８】
メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた２Ｌ４つ口コルベンに、室温で、化合物（２−Ｉ）３５．０ｇ（１１２．０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム５５．２ｇ（３９９．４ｍｍｏｌ）及びアセトン１．３Ｌを入れ、攪拌しながら、ジメチル硫酸２６．９ｇ（２１３．３ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を１５分かけて還流状態とし、同温にて攪拌した。１４時間後、この溶液を室温まで冷却し、析出している固体を濾別し、濾液を濃縮した。得られた赤色油状物４０．０ｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１０／１）で精製することにより、橙色油状物として上記式（ＶＩ）に示す化合物（３−Ｉ）３４．３ｇ（収率９４％、純度９８％）を得た。
【００３９】
メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた１Ｌ四つ口コルベンに、室温で、化合物（３−Ｉ）３０．０ｇ（９１．９ｍｍｏｌ）、エタノール３００ｍＬ及び２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液３００ｍＬを入れ、攪拌した。この溶液を１５分かけて還流状態とし、同温にて攪拌した。４時間後、この溶液を室温まで冷却し、濃塩酸４０ｍＬを加え、溶液をｐＨ２程度にした。析出している固体を濾別し、真空乾燥することにより、無色結晶として上記式（ＶＩ）中に示す化合物（４−Ｉ）２３．９ｇ（収率８３％）を得た。
【００４０】
ジムロート冷却管を取り付けた１００ｍＬナスコルベンに、室温で、化合物（４−Ｉ）２．９１ｇ（９．３１ｍｍｏｌ）、塩化チオニル４．０ｍＬ及びトルエン３０ｍＬを入れた。この溶液にＤＭＦ５滴を加えて、１００℃で４時間、加熱攪拌した。この溶液を室温まで冷却し、溶媒を留去することで、中間体を黄色油状物として得た。この中間体を脱水ＴＨＦ５０ｍＬに溶解し、下記式（ＶＩＩＩ）に示す化合物（７）２．９１ｇ（９．３１ｍｍｏｌ）を添加した。トリエチルアミン１．５６ｍＬを滴下して、室温で４時間攪拌した。この溶液を水１００ｍＬに注ぎ込み、クロロホルム３００ｍＬで抽出し、有機層を水１００ｍＬで２回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒留去し、無色固体を得た。この固体にエーテル１００ｍＬを加えて５分間超音波洗浄を行い、析出物を濾過、真空乾燥することにより、無色固体として上記式（ＶＩ）に示す化合物（９−Ｉ）３．８４ｇ（収率６８％、純度９９％）を得た。
【００４１】
３００ｍＬナスコルベンに、室温で、化合物（９−Ｉ）３．０２ｇ（４．９９ｍｍｏｌ）を脱水ジクロロメタン１５０ｍＬに溶解した。この溶液にトリフルオロメタンスルホン酸メチル１．００ｇ／脱水ジクロロメタン１ｍＬを加えて、室温で２６時間攪拌した。析出物を濾過し、濾物をジクロロメタン２０ｍＬで洗浄後、真空乾燥することにより、無色固体として［１８Ｆ］ＦＢＭＩの前駆体であるＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−５−クロロ−３−ヨード−２−メトキシベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩（上記式（ＶＩ）中に示す、化合物（ＩＩ−ｃ））２．５９ｇ（収率６７％、純度９９％）を得た。
【００４２】
（１−１ｄ）［１８Ｆ］ＦＢＭＢの前駆体の化学合成
［１８Ｆ］ＦＢＭＢの前駆体であるＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−３−ブロモ−５−クロロ−２−メトキシベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩（下記式（ＶＩＩ）中に示す化合物（ＩＩ−ｄ））は以下のように作製した。下記式（ＶＩＩ）に、合成スキームを示す。
【化１３】
【００４３】
上記式（ＶＩＩ）において化合物（２−Ｂｒ）を、上記（１−１ｂ）［１８Ｆ］ＦＢＨＢの前駆体の化学合成における化合物（２−Ｂｒ）の合成と同様の方法で合成した。こうして合成した化合物（２−Ｂｒ）３０．０ｇ（０．１１ｍｏｌ）と共に炭酸カリウム４６．９ｇ(０．３４ｍｏｌ)及びアセトン１．３Ｌを、メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた２Ｌ四つ口コルベンに室温で入れ、攪拌しながら、ジメチル硫酸２７．１ｇ（０．２１ｍｏｌ）を添加した。この溶液を１５分かけて還流状態とし、同温にて攪拌した。１４時間後、この溶液を室温まで冷却し、析出している固体を濾別し、濾液を濃縮した。得られた赤色油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１０／１）で精製することにより、橙色油状物として上記式（ＶＩＩ）中に示す化合物（３−Ｂｒ）２８．４ｇ（収率９０％）を得た。
【００４４】
メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた１Ｌ４つ口コルベンに、室温で、化合物（３−Ｂｒ）２５．６ｇ（９１．９ｍｍｏｌ）、エタノール３００ｍＬ及び２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液３００ｍＬを入れ、攪拌した。この溶液を１５分かけて還流状態とし、同温にて攪拌した。４時間後、この溶液を室温まで冷却し、濃塩酸４０ｍＬを加え、溶液をｐＨ２程度にした。析出している固体を濾別し、真空乾燥することにより無色結晶として上記式（ＶＩＩ）中に示す化合物（４−Ｂｒ）１９．５ｇ（収率８０％）を得た。
【００４５】
ジムロート冷却管を取り付けた１００ｍＬナスコルベンに、室温で、化合物（４−Ｂｒ）２．４７ｇ（９．３１ｍｍｏｌ）及び塩化チオニル４．０ｍＬ、トルエン３０ｍＬを入れた。この溶液にＤＭＦ５滴を加えて、１００℃で４時間、加熱攪拌した。この溶液を室温まで冷却し、溶媒を留去することで、中間体を黄色油状物として得た。この中間体を脱水ＴＨＦ５０ｍＬに溶解し、下記式（ＶＩＩＩ）中に示す化合物（７）を２．９１ｇ（９．３１ｍｍｏｌ）添加した。この溶液にトリエチルアミン１．５６ｍＬを滴下して、室温で４時間攪拌した。この溶液を水１００ｍＬに注ぎ込み、クロロホルム３００ｍＬで抽出し、有機層を水１００ｍＬで２回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒留去し、無色固体を得た。この固体にエーテル１００ｍＬを加えて５分間超音波洗浄を行い、析出物を濾過、真空乾燥することにより、無色固体として上記式（ＶＩＩ）中に示す化合物（９−Ｂｒ）２．９５ｇ（収率６０％、純度９９％）を得た。
【００４６】
３００ｍＬナスコルベンに、室温で、化合物(９−Ｂｒ)２．６３ｇ(４．９９ｍｍｏｌ)を脱水ジクロロメタン１５０ｍＬに溶解した。この溶液にトリフルオロメタンスルホン酸メチル１．００ｇ／脱水ジクロロメタン１ｍＬを加えて、室温で２６時間攪拌した。析出物を濾過し、濾物をジクロロメタン２０ｍＬで洗浄後、真空乾燥することにより、［１８Ｆ］ＦＢＭＢの前駆体として、無色固体のＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−３−ブロモ−５−クロロ−２−メトキシベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩（上記式（ＶＩＩ）中に示す化合物（ＩＩ−ｄ））１．８０ｇ（収率５０％、純度９９％）を得た。
【００４７】
なお、上記［１８Ｆ］ＦＢＨＢの前駆体、［１８Ｆ］ＦＢＭＩの前駆体及び［１８Ｆ］ＦＢＭＢの前駆体を作製する際に用いた化合物（７）は下記式（ＶＩＩＩ）で示す合成スキームにより作製した。
【化１４】
【００４８】
上記式（ＶＩＩＩ）に示す化合物（５）は以下のようにして合成した。メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた１Ｌ４つ口コルベンに、室温で、４−クロロ−３−ニトロベンゼンスルホニルクロリド５０．０ｇ（１９５ｍｍｏｌ）及びフルオロベンゼン２００ｍＬを入れ、攪拌しながら、無水塩化アルミニウム３０．０ｇ（２２４．８ｍｍｏｌ）を３０分かけて添加した。この溶液を５０℃に加温しながら１８時間反応させた。この溶液を室温まで冷却し、氷水５００ｍＬに注ぎ込み、濃塩酸１００ｍＬを加えて攪拌した。この溶液を酢酸エチル１Ｌで抽出し、有機層を水５００ｍＬで洗浄後、飽和重曹水５００ｍＬ及び水５００ｍＬで洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒留去し、赤色固体を得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝４／１）で精製することにより、橙色油状物として上記式（ＶＩＩＩ）に示す化合物（５）３４．６ｇ（収率５６％、純度９２％）を得た。
【００４９】
メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた５００ｍＬ４つ口コルベンに、室温で、化合物（５）１０．５ｇ（３３．３ｍｍｏｌ）、エタノール１６０ｍＬ、酢酸１６０ｍＬ及び蒸留水８０ｍＬを入れ、攪拌しながら、６０℃に加温した。この溶液に還元鉄１３．０ｇ（２３２．８ｍｍｏｌ）を１３回に分けて添加し、さらに同温で１０分間攪拌した。この溶液に濃塩酸１ｍＬを添加後、７０℃で２時間加熱すると原料の消失が確認された。この溶液を室温まで冷却し、氷水１Ｌに注ぎ込み、飽和重曹水５００ｍＬで中和し、酢酸エチル１Ｌで抽出し、有機層を水５００ｍＬで３回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒留去し、黄白色固体を得た。ヘキサン１００ｍＬを加えて５分間超音波洗浄を行い、析出物を濾過、真空乾燥することにより、無色固体として上記式（ＶＩＩＩ）中に示す化合物（６）９．３４ｇ（収率９８％、純度９２％）を得た。
【００５０】
ジムロート冷却管、温度計を取り付けた１００ｍＬ４つ口コルベンに、室温で、化合物（６）９．００ｇ（３１．５ｍｍｏｌ）及びヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ）７５ｍＬを入れ、１６０℃で２０時間、加熱攪拌した。この溶液を室温まで冷却し、氷水５００ｍＬに注ぎ込み、酢酸エチル１．５Ｌで抽出し、有機層を水５００ｍＬで３回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒留去し、褐色油状物を得た。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１／１）で精製し、濃縮後に得られた固体にヘキサン５０ｍＬを加えて５分間超音波洗浄を行い、析出物を濾過、真空乾燥することにより、無色固体として上記式（ＶＩＩＩ）中に示す化合物（７）７．３０ｇ（収率７５％、純度９９％）を得た。こうして得られた化合物（７）を、［１８Ｆ］ＦＢＨＢの前駆体、［１８Ｆ］ＦＢＭＩの前駆体及び［１８Ｆ］ＦＢＭＢの前駆体の化学合成に用いた。
【００５１】
（実施例２）化合物（Ｉ）の化学合成
（２−１）［１８Ｆ］の作製
サイクロトロン（ＨＭ−１８、住友重機械工業製）にて１８ＭｅＶに加速した陽子を２０μＡの電流値で、１８Ｏ−Ｈ２Ｏおよそ２ｍＬを封入したターゲット水に照射して、１８Ｏ（ｐ，ｎ）１８Ｆ核反応により［１８Ｆ］を生成させた。ターゲット水中で［１８Ｆ］は［１８Ｆ］Ｆ−の化学形で存在する。生成された［１８Ｆ］Ｆ−を含むターゲット水を自動合成装置に導入した。［１８Ｆ］Ｆ−を含むターゲット水をＨｅ圧でトラップ用イオン交換樹脂カラムを通過させて、［１８Ｆ］Ｆ−イオンを樹脂に吸着させた。この樹脂に０．５ｍｇＫ２ＣＯ３水溶液０．５ｍＬを導入して［１８Ｆ］Ｆ−イオンを脱着し、反応容器に［１８Ｆ］ＫＦ水溶液として回収した。反応容器内の［１８Ｆ］ＫＦ水溶液に３ｍｇの４，７，１３，１６，２１，２４−Ｈｅｘａｏｘａ−１，１０−ｄｉａｚａｂｉｃｙｃｌｏ［８，８，８］ｈｅｘａｃｏｓａｎｅ（商品名：Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）２２２、メルク社）を含むアセトニトリル２ｍＬ（Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ３ｍｇ／アセトニトリル２ｍＬ）を加えてＨｅ気流下に加熱して５分間共沸脱水し、アセトニトリル１ｍＬを追加して２分間共沸脱水を続けた。さらにアセトニトリル１ｍＬを追加して乾固するまで共沸脱水し、真空ポンプで９０秒間減圧留去し、９０秒間Ｈｅパージを行って系内の水分を完全に除き、残渣を室温付近まで冷却した。
【００５２】
（２−２ａ）［１８Ｆ］ＦＢＨＩの合成
（２−１）で得た残渣に、上記（１−１ａ）で合成した［１８Ｆ］ＦＢＨＩの前駆体Ｎ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−５−クロロ−２−ヒドロキシ−３−ヨードベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩４ｍｇ／ＤＭＳＯ０．３ｍＬ溶液を加え、１００℃で１０分間フッ素化を行い、反応終了後、生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）の移動相として用いるものと同じ溶媒で希釈し、Ｓｅｐ−Ｐａｋ Ｐｌｕｓ Ａｌｕｍｉｎａ Ｎカラムで未反応の［１８Ｆ］Ｆ−イオンを取り除き、溶出液をＨＰＬＣにて精製した。カラムとしてμＢｏｎｄａ−Ｐａｋ Ｃ１８（カラム内径７．８ｍｍ、カラム長３００ｍｍ、Ｗａｔｅｒｓ社）、移動相としてアセトニトリル／０．１Ｍ酢酸ナトリウム／酢酸＝４００／６００／１を用い、流速６ｍＬ／ｍｉｎ、検出波長２５４ｎｍで分取を行った。［１８Ｆ］ＦＢＨＩのフラクションを２５μＬのＴｗｅｅｎ８０を添加したナスコルベンに分取し、加熱減圧下でＨＰＬＣの溶媒を留去した。さらに残渣を注射用生理食塩水に再溶解し、無菌バイアルに［１８Ｆ］ＦＢＨＩを回収した。
【００５３】
（２−２ｂ）［１８Ｆ］ＦＢＨＢの合成
上記（２−１）と同様にサイクロトロン（ＨＭ−１８、住友重機械工業製）にて１８Ｏ−Ｈ２Ｏを用いて生成させた［１８Ｆ］Ｆ−を含むターゲット水を自動合成装置に導入した。［１８Ｆ］Ｆ−を含むターゲット水をＨｅ圧でトラップ用イオン交換樹脂カラムを通過させて、［１８Ｆ］Ｆ−イオンを樹脂に吸着させた。この樹脂にＴｅｔｒａｂｕｔｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｃａｒｂｏｎａｔｅ水溶液／アセトニトリル（１／１）溶液０．５ｍＬを導入して［１８Ｆ］Ｆ−イオンを樹脂から脱着し、反応容器に回収した。反応容器内の［１８Ｆ］水溶液にアセトニトリル２ｍＬを加え、Ｈｅ気流下加熱して５分間共沸脱水した。アセトニトリル１ｍＬを追加して２分間共沸脱水を続けた。さらにアセトニトリル１ｍＬを追加して乾固するまで共沸脱水し、真空ポンプで９０秒間減圧留去し、Ｈｅパージを９０秒間行って系内の水分を完全に除き、残渣を室温付近まで冷却した。この残渣に、［１８Ｆ］ＦＢＨＢの前駆体として上記（１−１ｂ）で合成したＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩０．５ｍｇ／ＤＭＳＯ０．３ｍＬ溶液を加え、１００℃で１０分間フッ素化を行った。フッ素化後、ＨＰＬＣの移動相としてアセトニトリル／０．１Ｍ酢酸ナトリウム／酢酸＝３５０／６５０／１を用いたこと以外は上記（２−２ａ）［１８Ｆ］ＦＢＨＩの合成と同様にＨＰＬＣで精製して［１８Ｆ］ＦＢＨＢを得た。
【００５４】
（２−２ｃ）［１８Ｆ］ＦＢＭＩの合成
（２−１）で得た残渣に、［１８Ｆ］ＦＢＭＩの前駆体として上記（１−１ｃ）で合成したＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−５−クロロ−３−ヨード−２−メトキシベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩４ｍｇ／ＤＭＳＯ０．３ｍＬ溶液を加え、ＨＰＬＣの移動相としてアセトニトリル／０．１Ｍ酢酸ナトリウム／酢酸＝５８０／４２０／１を用いたこと以外は上記（２−２ａ）［１８Ｆ］ＦＢＨＩの合成と同様にして［１８Ｆ］ＦＢＭＩを得た。
【００５５】
（２−２ｄ）［１８Ｆ］ＦＢＭＢの合成
（２−１）で得た残渣に、［１８Ｆ］ＦＢＭＢの前駆体として上記（１−１ｄ）で合成したＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−３−ブロモ−５−クロロ−２−メトキシベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩４ｍｇ／ＤＭＳＯ０．３ｍＬ溶液を加え、ＨＰＬＣの移動相としてアセトニトリル／０．１Ｍ酢酸ナトリウム／酢酸＝５８０／４２０／１を用いたこと以外は上記（２−２ａ）［１８Ｆ］ＦＢＨＩの合成と同様にして［１８Ｆ］ＦＢＭＢを得た。
【００５６】
（２−３）化合物（Ｉ）の分析
得られた［１８Ｆ］ＦＢＨＩ、［１８Ｆ］ＦＢＨＢ、［１８Ｆ］ＦＢＭＩ及び［１８Ｆ］ＦＢＭＢを逆相ＨＰＬＣで定性分析を行った。定性分析は、カラムとしてＩｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ−３（カラム内径４．６ｍｍ、カラム長１５０ｍｍ、ＧＬサイエンス社）、移動相としてアセトニトリル／３０ｍＭ酢酸アンモニウム／酢酸＝５００／５００／２を用い、流速２ｍＬ／ｍｉｎ、検出波長２３０ｎｍの条件で行った。結果を表１に示す。
【表１】
【００５７】
（実施例３）細胞増殖能の異なる癌細胞を移植したマウスを用いた実験
癌細胞にはヒト子宮頚癌細胞ＨｅＬａである、ｓｔｒａｉｎ：１５Ｓ３Ｄ（ＨｅＬａ−Ｋ）とＪＣＲＢ９００４（ＨｅＬａ−Ｂ）を用いた。ＨｅＬａ−Ｋは５×１０６個、ＨｅＬａ−Ｂは２×１０７個を、メスＢＡＬＢ／ｃＡ Ｊｃｌ−ｎｕヌードマウス（ＨｅＬａ−Ｋ：６週齢、ＨｅＬａ−Ｂ:４又は６週齢）の大腿皮下に移植した。ＨｅＬａ−Ｋ移植マウスは移植２週間後、ＨｅＬａ−Ｂ移植マウスは４週間又は２週間後に、それぞれ８週齢となったところで実験に用いた。
【００５８】
担癌マウスにおける化合物（Ｉ）の集積と腫瘍組織の増殖速度の関係を見るために、腫瘍の大きさを連日計測した。倍加時間（ｄｏｕｂｌｉｎｇ ｔｉｍｅ：ＤＴ）の計算は、Ｓｃｈｗａｒｔｚの提案した計算式：ＤＴ＝ｔ×ｌｏｇ２（Ｖ１／Ｖ０）にて算出した。なおｔは腫瘍体積がＶ０（ｍｍ３）からＶ１（ｍｍ３）になるまでの日数を示し、腫瘍体積（ｍｍ３）は、腫瘍の長径及び幅をもとに計算式：１／２×長径（ｍｍ）×（幅）２（ｍｍ２）で計算した。
【００５９】
［１８Ｆ］ＦＢＨＩ、［１８Ｆ］ＦＢＨＢ、［１８Ｆ］ＦＢＭＩ又は［１８Ｆ］ＦＢＭＢの生理食塩水溶液０．３ｍＬをマウスの尾静脈より投与し、６０分後にマウスを断頭屠殺し、血液、心臓、肺、肝臓、腎臓、脾臓、大腿骨、筋肉、腫瘍、小腸、消化管、膵臓、脳を採取した。臓器重量及び放射能を測定し、各化合物の集積量を求めた。
【００６０】
ＨｅＬａ−Ｋ及びＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織の体積の増加曲線を図１に示す。このように、同じＨｅＬａ細胞でも、継代条件により、その増殖に違いがあることが確認され、ＨｅＬａ−Ｋ腫瘍の方がＨｅＬａ−Ｂ腫瘍よりも増殖が早かった。ＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織のサイズがＨｅＬａ−Ｋの腫瘍組織のサイズとほぼ同じとなるＨｅＬａ−Ｂ移植後４週目と、移植後の日数をＨｅＬａ−Ｋと同一にしたＨｅＬａ−Ｂ移植後２週目の２つの条件で実験を行った。
【００６１】
図２に、ＨｅＬａ−Ｋ腫瘍組織とＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織への［１８Ｆ］ＦＢＨＩ、［１８Ｆ］ＦＢＨＢ、［１８Ｆ］ＦＢＭＩ及び［１８Ｆ］ＦＢＭＢの単位体重あたりの投与量に対する集積量であるＳＵＶを示す。なお、ＳＵＶは以下の式により算出した。
ＳＵＶ＝（組織中の放射能（Ｂｑ）／組織重量（ｇ））／（トレーサーの投与量（Ｂｑ）／体重（ｇ））
ここで、ＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織のサイズがＨｅＬａ−Ｋの腫瘍組織のサイズとほぼ同じとなるＨｅＬａ−Ｂ移植後４週目と、移植後の日数をＨｅＬａ−Ｋと同一にしたＨｅＬａ−Ｂ移植後２週目の２つの条件の間で、ＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織におけるＳＵＶはデータに差がなかったため、図２には移植後２週目のデータのみ示した。
【００６２】
図３に、ＨｅＬａ−Ｋ移植マウスとＨｅＬａ−Ｂ移植マウスでの、［１８Ｆ］ＦＢＨＩ、［１８Ｆ］ＦＢＨＢ、［１８Ｆ］ＦＢＭＩ及び［１８Ｆ］ＦＢＭＢの血液への集積に対する腫瘍への集積の比（化合物（Ｉ）の腫瘍ＳＵＶ／化合物（Ｉ）の血液ＳＵＶ）を示す。ここで、ＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織のサイズがＨｅＬａ−Ｋの腫瘍組織のサイズとほぼ同じとなるＨｅＬａ−Ｂ移植後４週目と、移植後の日数をＨｅＬａ−Ｋと同一にしたＨｅＬａ−Ｂ移植後２週目の２つの条件の間で、ＨｅＬａ−Ｂ移植マウスにおける集積比はデータに差がなかったため、図３には移植後２週目のデータのみ示した。
【００６３】
図２及び図３で示すように、細胞増殖速度の速いＨｅＬａ−Ｋ腫瘍組織への化合物（Ｉ）の集積がＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織への化合物（Ｉ）の集積より低かった。特に［１８Ｆ］ＦＢＭＩ及び［１８Ｆ］ＦＢＭＢで、ＨｅＬａ−Ｋ腫瘍組織とＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織との差が大きかった。細胞増殖が遅いことはアポトーシスが積極的に生じていると考えられ、逆に細胞増殖が速いことはアポトーシスが生じている割合が低いと考えられる。ＨｅＬａ−Ｋ腫瘍組織よりもアポトーシスが積極的に生じていると考えられるＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織への化合物（Ｉ）の集積が高いことを示す結果となった。
【００６４】
（実施例４）抗癌剤投与マウスを用いた実験
ヒト子宮頚癌細胞ＨｅＬａ（ｓｔｒａｉｎ：１５Ｓ３Ｄ）細胞５×１０６個を、６週齢のメスＢＡＬＢ／ｃＡ Ｊｃｌ−ｎｕヌードマウスの大腿皮下に移植し担癌マウスを作製した。移植後２週間目に抗癌剤として、シスプラチン（ＣＤＤＰ）２ｍｇ／ｋｇ又はＣＤＤＰ６ｍｇ／ｋｇを含む生理食塩溶液を腹腔内に投与し、抗癌剤投与マウスを２群作製した。コントロールの担癌マウスには抗癌剤を含まない生理食塩溶液を腹腔内に投与した。
【００６５】
図４に抗癌剤を投与された担癌マウスの腫瘍体積（ｍｍ３）の変化を示す。癌を移植して２週間後にＣＤＤＰ投与を行い、さらに最初の投与から７日後に再度投与を行った。図４にはＣＤＤＰを最初に投与した日を第０日として示してある。ＣＤＤＰ２ｍｇ／ｋｇ投与群は、８匹中７匹が第４〜５日に死亡した。ＣＤＤＰ６ｍｇ／ｋｇ投与群は第４日まで腫瘍体積が減少し、その後再び増加し始めた。２回目の投与で再び減少したが、やはり２回目投与から４日（第１１日）の後に再び腫瘍体積の増加が見られた。ＣＤＤＰ２ｍｇ／ｋｇ投与群はコントロールに対して腫瘍体積の減少があまり見られなかった。
【００６６】
第２日に上記担癌マウスをプラナーイメージング装置（ＰＰＩＳ）に固定し、［１８Ｆ］ＦＢＨＩ、［１８Ｆ］ＦＢＨＢ、［１８Ｆ］ＦＢＭＩ又は［１８Ｆ］ＦＢＭＢの生理食塩水溶液０．３ｍＬを尾静脈より投与し、プラナー画像を得た。化合物投与から６５分後にマウスを断頭屠殺し、血液、心臓、肺、肝臓、腎臓、脾臓、大腿骨、筋肉、腫瘍、小腸、消化管、膵臓、脳を採取した。臓器重量、及び放射能を測定し、各化合物の集積（ＳＵＶ）を求めた。
【００６７】
図５は上記担癌マウスの腫瘍への［１８Ｆ］ＦＢＨＩ、［１８Ｆ］ＦＢＨＢ、［１８Ｆ］ＦＢＭＩ及び［１８Ｆ］ＦＢＭＢの集積（ＳＵＶ）を示している。［１８Ｆ］ＦＢＨＩは腫瘍への集積が低く、抗癌剤治療による集積の増加が見られなかった。［１８Ｆ］ＦＢＨＢも腫瘍への集積が低かったが、ＣＤＤＰ６ｍｇ／ｋｇ投与群では他の群より若干高かった。［１８Ｆ］ＦＢＭＩは、ＣＤＤＰ投与量と比例して腫瘍への集積が高くなる傾向にあった。［１８Ｆ］ＦＢＭＢはＣＤＤＰ投与で集積の増加が見られ、その増加の割合はＣＤＤＰ６ｍｇ／ｋｇ＞ＣＤＤＰ２ｍｇ／ｋｇであった。
【００６８】
図６に上記担癌マウスの写真と、コントロール、ＣＤＤＰ２ｍｇ／ｋｇ群及びＣＤＤＰ６ｍｇ／ｋｇ群マウスの［１８Ｆ］ＦＢＭＢのプラナー画像写真を示す。マウス写真において右大腿部の丸く囲んだ部分が腫瘍部位である。プラナー画像においても腫瘍部位への［１８Ｆ］ＦＢＭＢの集積が見られた。
【００６９】
（実施例５）脳虚血ラットを用いた実験
麻酔下のラットの中大脳動脈を露出させ、ローズベンガル試薬を投与し、光を血管外部より照射し、照射位置の血管内部に血栓を作った。こうして、脳虚血ラットを作製した。虚血から２４時間後に化合物（Ｉ）を投与した。化合物（Ｉ）の投与から３０分及び９０分後に断頭屠殺し、脳を取り出し、２ｍｍ厚の脳スライス片を作製した。脳スライス片を染色し、その後イメージングプレートを用いて脳スライス片の放射能分布を画像化した。また、関心領域における化合物（Ｉ）の集積を求めた。
【００７０】
図７に脳虚血ラットの脳スライス片の染色写真及び［１８Ｆ］ＦＢＨＩの集積画像を示す。脳スライス片の染色写真で赤い部位は、細胞の活性があるために染色されている部位で、白い部分は虚血により細胞死を起こしたために染色されなかった部位（虚血部位）である。集積画像では、放射能量が高い部位から低い部位の色が、赤-オレンジ-黄-黄緑-緑-青-藍で表されている。脳スライス片の写真と集積画像を対応させると、［１８Ｆ］ＦＢＨＩの集積が高い部分（集積画像中、赤−オレンジの部分）が虚血部位周辺にあることがわかる。
【００７１】
虚血部位及び虚血部位周辺部（虚血側）と、虚血を起こしていない反対側の脳の対応する部位（正常側）とを関心領域として設定し、化合物（Ｉ）の関心領域への集積比（虚血側への化合物（Ｉ）の集積（ＳＵＶ）／正常側への化合物（Ｉ）の集積（ＳＵＶ））を求めた。結果を図８に示す。いずれの化合物においても、アポトーシスが生じていることが予見される虚血側への集積が正常側への集積よりも高くなっていた。また、化合物（Ｉ）同士で比較すると、上記集積比は［１８Ｆ］ＦＢＨＩ及び［１８Ｆ］ＦＢＨＢが、［１８Ｆ］ＦＢＭＩ及び［１８Ｆ］ＦＢＭＢに対して高くなっていた。
【００７２】
（実施例６）脳虚血サルを用いた実験
サルに塩酸ケタミン及び硫酸アトロピンを筋肉内投与して麻酔導入した。口腔内にリドカインを噴霧して局所表面麻酔を施し、気管内挿管し、Ｎ２Ｏ：Ｏ２＝０．７：０．３（Ｌ／ｍｉｎ）＋イソフルレン（０．８〜０．３％）又はＮ２Ｏ：Ｏ２＝１．４：０．６（Ｌ／ｍｉｎ）＋イソフルレン（０．８〜０．３％）で麻酔を開始した。筋弛緩剤である臭化パンクロニウムを、０．０５ｍｇ／ｋｇ／ｈ（静脈内投与）又は０．１ｍｇ／ｋｇ／２ｈ（筋肉内投与）を追加して麻酔を維持した。上記麻酔下で片側眼球を摘出し、硬膜を露出し、中大脳動脈を確保し、以下のようにして中大脳動脈の閉塞を行った。手術用実体顕微鏡下で中大脳動脈を露出し、２個の動脈瘤クリップを用いて、クリップ間に出来る限り多くの側枝が含まれる様に留意した。３時間閉塞を行った後、クリップを外して再潅流を行った。中大脳動脈を再灌流する際は、直視下又は手術用実体顕微鏡下でクリップを外した。こうして、大脳半球の片側が虚血側、その反対側が正常側の脳虚血サルモデルを作製した。
【００７３】
再潅流を開始した３時間後に[１８Ｆ]ＦＢＨＩ又は[１８Ｆ]ＦＤＧを投与してＰＥＴ計測を行った。[１８Ｆ]ＦＤＧは細胞の活性が高い部分に集積する化合物である。再潅流から３日後及び７日後に［１８Ｆ］ＦＤＧのＰＥＴ計測を行った。
【００７４】
図９に脳虚血サルの再潅流後の脳スライス片の［１８Ｆ］ＦＢＨＩ及び[１８Ｆ]ＦＤＧの集積画像を示す。再潅流から３時間後、[１８Ｆ]ＦＢＨＩでは虚血側に高い集積が観察された。一方［１８Ｆ］ＦＤＧでは再潅流から３時間後、虚血側と正常側で集積の差が観察されなかった。再潅流から３日後及び７日後、虚血側で［１８Ｆ］ＦＤＧの集積の低下が観察された。[１８Ｆ]ＦＢＨＩは、神経細胞の活性が数日後に低下する部位に高く集積した。この結果から、アポトーシスにより神経細胞の脱落が生じる部位を、[１８Ｆ]ＦＢＨＩを用いて検出できることが示唆された。
【産業上の利用可能性】
【００７５】
本発明の化合物（Ｉ）によれば、生体内で生じているアポトーシスを検出することが可能となる。また、［１８Ｆ］ＦＢＭＩ及び［１８Ｆ］ＦＢＭＢは腫瘍縮退におけるアポトーシスの検出に有効であると考えられ、抗癌剤の評価試薬として使用できる。一方、［１８Ｆ］ＦＢＨＩ及び［１８Ｆ］ＦＢＨＢは神経系のアポトーシス検出に有効であると考えられ、虚血性疾患におけるアポトーシス抑制剤の評価試薬として使用できる。
【図面の簡単な説明】
【００７６】
【図１】ＨｅＬａ−Ｋ及びＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織の体積の増加曲線を示したグラフである。
【図２】腫瘍組織への化合物（Ｉ）の集積を示したグラフである。
【図３】化合物（Ｉ）の血液への集積に対する腫瘍への集積の比を示したグラフである。
【図４】抗癌剤治療マウスの治療経過日数と腫瘍体積の関係を示したグラフである。
【図５】抗癌剤治療マウスの腫瘍への化合物（Ｉ）の集積を示したグラフである。
【図６】担癌マウスの写真と、抗癌剤治療マウスの［１８Ｆ］ＦＢＭＢのプラナー画像の写真である。
【図７】脳虚血ラットの脳スライス片の染色写真及び［１８Ｆ］ＦＢＨＩの集積画像の写真である。
【図８】脳虚血ラットの脳における化合物（Ｉ）の正常側への集積に対する虚血側への集積の比を示したグラフである。
【図９】脳虚血サルの再潅流後の脳スライス片の［１８Ｆ］ＦＢＨＩ及び[１８Ｆ]ＦＤＧの集積画像の写真である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アポトーシスの検出に適した化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アポトーシスとは、生理的条件下で細胞が自ら引き起こす細胞死のことである。癌化した細胞も通常はアポトーシスで排除されるが、何らかの原因によりその機序が働かなくなると悪性腫瘍へと成長する。脳梗塞等の虚血性疾患並びにアルツハイマー病及びパーキンソン病等の神経変性疾患においては、アポトーシスにより神経細胞の脱落が起こっていると考えられている（非特許文献１、２及び３）。また、脳梗塞を治療する際に血栓溶解剤を投与して脳の血流を元に戻してもアポトーシスが生じ、やはり神経細胞が脱落する（非特許文献１、４及び５）。
【０００３】
アポトーシスが生じる機構については、ミトコンドリア外膜上に存在する種々のタンパク質が互いに結合してホモダイマーやヘテロダイマーを形成することでアポトーシスを抑制又は誘導することが知られており、これらのタンパク質を利用してアポトーシスを制御する研究が行われてきた（非特許文献１及び６）。
【０００４】
アポトーシスの制御は、癌治療や虚血性疾患及び神経変性疾患における治療につながる。例えば、癌細胞でアポトーシスを積極的に生じさせる抗癌剤は癌治療に用いられている。また、アポトーシスを抑制するアポトーシス抑制剤は、虚血性疾患や神経変性疾患における神経細胞の脱落を阻止するために用いられる。疾患の治療においては、これらの薬剤が生体内で有効に作用しているかどうかを評価することが重要であり、この評価を可能にするための技術が求められている。
【非特許文献１】田熊一敞、日本薬理学雑誌、１２７巻、３４９〜３５４頁（２００６年）
【非特許文献２】Ｇｒａｅｂｅｒ ＭＢ． ｅｔ ａｌ．、Ｂｒａｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．、１２巻、３８５〜３９０頁（２００２年）
【非特許文献３】Ｍａｔｔｓｏｎ ＭＰ、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．、１巻、１２０〜１２９頁（２０００年）
【非特許文献４】Ｄｉｒｎａｇｌ Ｕ． ｅｔ ａｌ．、Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、２２巻、３９１〜３９７頁（１９９９年）
【非特許文献５】Ｂｅｎｃｈｏｕａ Ａ． ｅｔ ａｌ．、Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、２１巻、７１２７〜７１３４頁（２００１年）
【非特許文献６】Ｂｅａｕｐａｒｌａｎｔ Ｐ． ｅｔ ａｌ．、Ｃｕｒｒ.Ｏｐｉｎ.Ｄｒｕｇ.Ｄｉｓｃｏｖ.Ｄｅｖ．、６巻（２）、１７９〜１８７頁（２００３年）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
アポトーシス制御を利用した薬剤の薬効を評価するために、被験者の生体内で生じているアポトーシスを可視化することが有効であると考えられる。従って、本発明の目的の一つは、アポトーシスが生体内で生じていることを可視化するために用いられる物質を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、下記一般式（I）で表される化合物を提供する。
【化１】
（式（Ｉ）中、Ｘはヨウ素原子又は臭素原子であり、Ｙは水酸基又はメトキシ基である。）
【０００７】
式（I）で表される化合物はアポトーシスが生じている細胞に集積する傾向がある。また、式（I）で表される化合物により放出されるポジトロンはすぐに電子と結合してγ線（消滅放射線）を放出するため、このγ線を陽電子放出型断層撮影装置（以下、「ＰＥＴ」という）で測定することにより、式（I）で表される化合物の体内分布を定量的かつ経時的に画像化することができる。従って上記式（I）で表される化合物を用いることで、被験者の生体内でアポトーシスが生じている部位を経時的に可視化できる。
【０００８】
本発明は下記一般式（ＩＩ）で表される化合物を提供する。
【化２】
（式（ＩＩ）中、Ｘはヨウ素原子又は臭素原子であり、Ｙは水酸基又はメトキシ基である。）
【０００９】
式（ＩＩ）で表される化合物をポジトロン核種で標識することにより、効率良く式（Ｉ）で表される化合物を提供することができる。
【００１０】
式（Ｉ）で表される化合物は、アポトーシスの検出用試薬として有用である。該アポトーシスの検出用試薬によれば、簡便に生体中のアポトーシスが生じている部位を検出することができる。
【００１１】
式（Ｉ）で表される化合物は、抗癌剤の薬効評価用試薬としても用いられる。該抗癌剤の薬効評価用試薬によれば、癌細胞でアポトーシスが生じているかどうかを患者が生存した状態で検出することができるために、癌患者に適用して抗癌剤の薬効評価をすることができる。
【００１２】
式（Ｉ）で表される化合物は、アポトーシス抑制剤の評価用試薬としても有用である。アポトーシス抑制剤は虚血性疾患や神経変性疾患等における神経脱落を予防するのに用いられる。アポトーシス抑制剤の上記評価用試薬によれば、アポトーシス抑制剤により生体中でアポトーシスが効果的に抑制されているかどうかを経時的に評価することができる。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、アポトーシスが生体内で生じていることを可視化するために用いられる物質が提供される。更に、アポトーシス検出用試薬、抗癌剤の薬効評価試薬及びアポトーシス抑制剤の薬効評価用試薬が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明の化合物は、下記一般式（Ｉ）：
【化３】
（式（Ｉ）中、Ｘはヨウ素原子又は臭素原子であり、Ｙは水酸基又はメトキシ基である。）で表され、より具体的には、
下記一般式（Ｉ−ａ）;
【化４】
で表されるＮ−｛２−クロロ−５−（４−［１８Ｆ］フルオロフェニルスルホニル）フェニル｝−５−クロロ−２−ヒドロキシ−３−ヨードベンズアミド（以下「［１８Ｆ］ＦＢＨＩ」という）、
下記一般式（Ｉ−ｂ）；
【化５】
で表されるＮ−｛２−クロロ−５−（４−［１８Ｆ］フルオロフェニルスルホニル）フェニル｝−３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシベンズアミド（以下「［１８Ｆ］ＦＢＨＢ」という）、
下記一般式（Ｉ−ｃ）；
【化６】
で表されるＮ−｛２−クロロ−５−（４−［１８Ｆ］フルオロフェニルスルホニル）フェニル｝−５−クロロ−３−ヨード−２−メトキシベンズアミド（以下「［１８Ｆ］ＦＢＭＩ」という）、及び、
下記一般式（Ｉ−ｄ）；
【化７】
で表されるＮ−｛２−クロロ−５−（４−［１８Ｆ］フルオロフェニルスルホニル）フェニル｝−３−ブロモ−５−クロロ−２−メトキシベンズアミド（以下「［１８Ｆ］ＦＢＭＢ」という）である。
【００１５】
下記一般式（ＩＩ）で表される化合物（以下、「化合物（ＩＩ）」という）は、上記一般式（Ｉ）で表される化合物（以下、「化合物（Ｉ）」という）の前駆体である。
【化８】
（式（ＩＩ）中、Ｘはヨウ素原子又は臭素原子であり、Ｙは水酸基又はメトキシ基である。）
【００１６】
化合物（Ｉ）は化合物（ＩＩ）から、下記反応式（ＩＩＩ）を経て合成できる。
【化９】
（式（ＩＩＩ）中、Ｘはヨウ素原子又は臭素原子であり、Ｙは水酸基又はメトキシ基である。）
【００１７】
化合物（ＩＩ）は実施例１に記載の方法で化学合成でき、化合物（Ｉ）は実施例２に記載の方法で化学合成できる。
【００１８】
化合物（Ｉ）は、生体に投与した場合、アポトーシスが生じている細胞に集積する傾向がある。また、化合物（Ｉ）により放出されるポジトロンはすぐに電子と結合してγ線を放出するため、このγ線をＰＥＴで測定することにより、化合物（Ｉ）の体内分布を定量的に画像化することができる。したがって、化合物（Ｉ）を用いることで、被験者の生体内でアポトーシスが生じている部位を検出し、その度合い、変化を経時的に可視化できる。
【００１９】
化合物（Ｉ）は、アポトーシスの検出用試薬として有用である。ここで、本発明のアポトーシス検出用試薬は、化合物（Ｉ）を含み、生体に投与されると、生体中の化合物（Ｉ）から放出されるγ線をＰＥＴで計測することにより、アポトーシスが生じている部位を検出できる。
【００２０】
化合物（Ｉ）は、抗癌剤の薬効評価用試薬としても有用である。ここで、「抗癌剤の薬効評価用試薬」とは、生体に投与された抗癌剤がその薬効により生体中の癌細胞をアポトーシスで消失させる機能が働いているかどうかを評価する試薬である。本発明の抗癌剤の薬効評価用試薬は化合物（Ｉ）を含むため、抗癌剤で治療中の生体に投与すると、癌細胞でアポトーシスが生じていれば、患部に化合物（Ｉ）が集積する。集積した化合物（Ｉ）から放出されるγ線をＰＥＴで計測することにより、癌細胞でアポトーシスが生じているかどうかを判断できる。従って、抗癌剤が効いているかどうかを本発明の抗癌剤の薬効評価用試薬により判断できる。
【００２１】
上記抗癌剤の薬効評価用試薬に含まれる化合物（Ｉ）として、［１８Ｆ］ＦＢＭＢ又は［１８Ｆ］ＦＢＭＩが好ましい。これらの化合物は、特に癌細胞で生じるアポトーシスに対して集積する傾向がある。
【００２２】
化合物（Ｉ）は、アポトーシス抑制剤の評価用試薬として使用できる。ここで、「アポトーシス抑制剤の評価用試薬」とは、生体に投与されたアポトーシス抑制剤によってアポトーシスが該生体内の標的部で抑制されているかどうかを、評価する試薬である。アポトーシス抑制剤を生体に投与し、該アポトーシス抑制剤の薬効が標的部で有効であれば、標的部でアポトーシスが抑制される。そこで本発明のアポトーシス抑制剤の評価用試薬を該生体に投与し、ＰＥＴ計測をすると、本発明のアポトーシス抑制剤は化合物（Ｉ）を含むにもかかわらず、γ線が該標的部から放出されていないこと、すなわち、化合物（Ｉ）が標的部に集積していないことがわかる。化合物（Ｉ）が集積していないことから、アポトーシスが抑制されており、アポトーシス抑制剤の薬効が有効であることを判断できる。逆にアポトーシス抑制剤が標的部で有効に作用していなければ、本発明の評価剤に含まれる化合物（Ｉ）が標的部に集積することから、アポトーシスが生じていること、すなわちアポトーシス抑制剤が効いていないことを判断できる。
【００２３】
アポトーシス抑制剤の薬効評価用試薬に含まれる化合物（Ｉ）として、［１８Ｆ］ＦＢＨＢ又は［１８Ｆ］ＦＢＨＩが好ましい。これらの化合物は、特に神経変性疾患、虚血性疾患で生じるアポトーシスに対して集積する傾向がある。アポトーシス抑制剤は神経変性疾患や虚血性疾患で生じる神経細胞の脱落の予防に主に用いられ、そのような神経変性疾患や虚血性疾患におけるアポトーシス抑制剤の薬効評価用試薬は有効である。
【００２４】
上記アポトーシス検出用試薬、上記抗癌剤の薬効評価用試薬又は上記アポトーシス抑制剤の薬効評価用試薬は、例えば、化合物（Ｉ）を任意の緩衝液に溶解することにより製造することができる。かかる場合、当該試薬は溶液として提供され、上記の緩衝成分の他、界面活性剤、防腐剤、安定化剤等のその他の成分を含有させることもできる。投与方法は、通常、静脈内投与である。
【００２５】
また、上記アポトーシス検出用試薬、上記抗癌剤の薬効評価用試薬又は上記アポトーシス抑制剤の薬効評価用試薬の対象として、ヒトを含む動物の脳、器官、臓器、組織、細胞等を挙げることができるがこれらに限定されるものではない。また、本発明の化合物（Ｉ）を用いてＰＥＴ測定を行うに際し、その測定方法は特に制限されず、公知の方法に準じて実施することができる。
【実施例】
【００２６】
（実施例１）化合物（ＩＩ）の化学合成
（１−１ａ）［１８Ｆ］ＦＢＨＩの前駆体の化学合成
［１８Ｆ］ＦＢＨＩの前駆体であるＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−５−クロロ−２−ヒドロキシ−３−ヨードベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩（下記式（ＩＶ）中に示す化合物（ＩＩ−ａ））を以下のように作製した。下記式（ＩＶ）に、合成スキームを示す。
【化１０】
【００２７】
上記式（ＩＶ）において、まず化合物（３Ｈ−Ｉ）を以下のように作製した。ジムロート冷却管及び温度計を取り付けた３００ｍＬ４つ口コルベンに、５−クロロサリチル酸３０．０ｇ（０．１７ｍｏｌ）及び酢酸１５０ｍＬを仕込み加熱撹拌した。この懸濁溶液中に塩化ヨウ素３２．０ｇ（０．１８ｍｏｌ）の酢酸溶液９０ｍＬを１．５時間かけて滴下し、１００℃にて５時間撹拌した。この溶液を室温まで放冷後、５％亜硫酸ナトリウム水溶液４００ｍＬへ投入した。この溶液を３０分間撹拌後、析出した白色結晶を濾取した。この結晶を減圧乾燥し、２５ｇの粗精製物を得た。酢酸１８０ｍＬにて再結晶を行い、上記式（ＩＶ）中に示す化合物（３Ｈ−Ｉ）１４ｇ（収率２７％）を得た。
【００２８】
ジムロート冷却管を取り付けた１００ｍＬナスコルベンに、室温で、化合物（３Ｈ−Ｉ）３．８７ｇ（１３ｍｍｏｌ）、下記式（ＶＩＩＩ）中に示す化合物（７）４．００ｇ（１３ｍｍｏｌ）及びトルエン５０ｍＬを入れ、９０℃に加熱し、均一溶液とした。この溶液にＰＯＣｌ３２．０ｇ（１３ｍｍｏｌ）／トルエン５．０ｍＬを滴下した。１８時間加熱還流後、全ての溶媒を留去し、得られた固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／アセトン＝１０／１）で精製し、上記式（ＩＶ）中に示す化合物（９Ｈ-Ｉ）１．３ｇ（収率１７％）を得た。
【００２９】
１００ｍＬナスコルベンに、室温で、化合物（９Ｈ−Ｉ）１．３ｇ（２．２ｍｍｏｌ）を脱水ジクロロメタン５０ｍＬに溶解した。この溶液にトリフルオロメタンスルホン酸メチル０．４０ｇ（２．４２ｍｍｏｌ）×２回／脱水ジクロロメタン５ｍＬを加えて、室温で２０時間攪拌した。析出物を濾過し、濾物をジクロロメタン１０ｍＬで洗浄し、真空乾燥することにより、［１８Ｆ］ＦＢＨＩの前駆体であるＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−５−クロロ−２−ヒドロキシ−３−ヨードベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩（上記式（ＩＶ）中に示す化合物（ＩＩ−ａ））０．７０ｇ（収率４２％、純度９９％）を得た。
【００３０】
（１−１ｂ）［１８Ｆ］ＦＢＨＢの前駆体の化学合成
［１８Ｆ］ＦＢＨＢの前駆体であるＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩（下記式（Ｖ）中に示す化合物（ＩＩ−ｂ））を以下のように作製した。下記式（Ｖ）に、合成スキームを示す。
【化１１】
【００３１】
上記式（Ｖ）において、まず化合物（１）を以下のように作製した。メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた１Ｌ４つ口コルベンに、室温で５−クロロサリチル酸５０．０ｇ（２８９．７ｍｍｏｌ）とメタノール５００ｍＬを入れ、攪拌しながら、濃硫酸３ｍＬを添加した。この溶液を１５分かけて内温７２℃まで昇温、還流状態とし、同温にて攪拌した。１４時間後、この溶液を室温まで冷却し、溶媒留去を行うと無色固体が得られた。この固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１／１）で精製することにより無色固体として上記式（Ｖ）中に示す化合物（１）４１．８ｇ（収率７７％、純度９９．５％）を得た。
【００３２】
メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた５０ｍＬ四つ口コルベンに、室温で、化合物（１）１５．０ｇ（８０．４ｍｍｏｌ）、４０％ＨＢｒ−酢酸溶液９ｍＬ及び酢酸９ｍＬを入れ、攪拌しながら、６０℃に加温した。この溶液に、ＮａＣｌＯ３３．５ｇ／蒸留水２０ｍＬを５分かけて滴下すると、臭素の発生が確認され、固体が析出した。溶液を８時間加熱した後、得られた固体を濾取することにより、淡黄色固体として上記式（Ｖ）中に示す化合物（２−Ｂｒ）２２．４ｇ（収率１０５％）を得た。
【００３３】
メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた３００ｍＬ４つ口コルベンに、化合物（２−Ｂｒ）２２．４ｇ（８４．４ｍｍｏｌ）、メタノール１００ｍＬ及び２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液１００ｍＬを入れ、攪拌した。この溶液を１５分かけて還流状態とし、同温にて攪拌した。２４時間後、この溶液を室温まで冷却し、液量を１／５まで濃縮した。この溶液に６Ｎ塩酸５０ｍＬを加え、ｐＨ２程度にした。析出している固体を濾別し、水１００ｍＬで洗浄し、真空乾燥することにより、無色結晶として上記式（Ｖ）中に示す化合物（３Ｈ−Ｂｒ）１８．３ｇ（収率８３％）を得た。
【００３４】
ジムロート冷却管を取り付けた１Ｌナスコルベンに、室温で、化合物（３Ｈ−Ｂｒ）７．５０ｇ（２９．８ｍｍｏｌ）、下記式（ＶＩＩＩ）中に示す化合物（７）９．３６ｇ（３０．１ｍｍｏｌ）及びトルエン５００ｍＬを入れ、９０℃に加熱し、均一溶液とした。この溶液にＰＯＣｌ３１０ｍＬ／トルエン１００ｍＬを１時間かけて滴下した。この溶液を２４時間加熱還流後、全ての溶媒を留去し、得られた固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１／１）で分離し、濃縮後、得られた固体をクロロホルム／メタノールから再結晶することにより、無色固体として上記式（Ｖ）中に示す化合物（９Ｈ−Ｂｒ）３．２４ｇ（収率２０％、純度９８％）を得た。
【００３５】
３００ｍＬナスコルベンに、室温で、化合物（９Ｈ−Ｂｒ）３．０２ｇ（５．５５ｍｍｏｌ）を脱水ジクロロメタン２００ｍＬに溶解した。この溶液にトリフルオロメタンスルホン酸メチル１．００ｇ／脱水ジクロロメタン１ｍＬを加えて、室温で２６時間攪拌した。析出物を濾過し、濾物を熱したテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）４０ｍＬに溶解し、ジクロロメタン１０ｍＬを加えて、静置し、析出した固体を濾過し、ＴＨＦ１０ｍＬで洗浄した後、真空乾燥することで無色固体として［１８Ｆ］ＦＢＨＢの前駆体であるＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩（上記式（Ｖ）中に示す化合物（ＩＩ−ｂ））１．３８ｇ（収率３５％、純度９９％）を得た。
【００３６】
（１−１ｃ）［１８Ｆ］ＦＢＭＩの前駆体の化学合成
［１８Ｆ］ＦＢＭＩの前駆体であるＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−５−クロロ−３−ヨード−２−メトキシベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩（下記式（ＶＩ）中に示す化合物（ＩＩ−ｃ））を以下のように作製した。下記式（ＶＩ）に、合成スキームを示す。
【化１２】
【００３７】
上記化学式（ＶＩ）において化合物（１）を、上記（１−１ｂ）［１８Ｆ］ＦＢＨＢの前駆体の化学合成における化合物（１）の合成と同様の方法で合成した。こうして合成した化合物（１）３７．３ｇ（１９９．９ｍｍｏｌ）を、ヨウ化ナトリウム３０．４ｇ（２０２．８ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）４００ｍＬと共に、室温で、メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた１Ｌ４つ口コルベンに入れ、攪拌しながら、クロラミン−Ｔ ｎ水和物４５．６ｇ（２００．３ｍｍｏｌ）を４５分かけてこの溶液に添加した。この溶液を室温にて１．５時間攪拌した後、氷水２Ｌと飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液１００ｍＬに注ぎ込み、酢酸エチル４Ｌで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、有機層を溶媒留去した。得られた黄色固体と黄色油状物に９０％メタノール２００ｍＬを加え、１５分攪拌した。析出した固体を濾過し、メタノール２００ｍＬで２回洗浄した後、真空乾燥することにより、無色結晶として上記式（ＶＩ）中に示す化合物（２−Ｉ）４２．１ｇ（収率８３％）を得た。
【００３８】
メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた２Ｌ４つ口コルベンに、室温で、化合物（２−Ｉ）３５．０ｇ（１１２．０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム５５．２ｇ（３９９．４ｍｍｏｌ）及びアセトン１．３Ｌを入れ、攪拌しながら、ジメチル硫酸２６．９ｇ（２１３．３ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を１５分かけて還流状態とし、同温にて攪拌した。１４時間後、この溶液を室温まで冷却し、析出している固体を濾別し、濾液を濃縮した。得られた赤色油状物４０．０ｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１０／１）で精製することにより、橙色油状物として上記式（ＶＩ）に示す化合物（３−Ｉ）３４．３ｇ（収率９４％、純度９８％）を得た。
【００３９】
メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた１Ｌ四つ口コルベンに、室温で、化合物（３−Ｉ）３０．０ｇ（９１．９ｍｍｏｌ）、エタノール３００ｍＬ及び２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液３００ｍＬを入れ、攪拌した。この溶液を１５分かけて還流状態とし、同温にて攪拌した。４時間後、この溶液を室温まで冷却し、濃塩酸４０ｍＬを加え、溶液をｐＨ２程度にした。析出している固体を濾別し、真空乾燥することにより、無色結晶として上記式（ＶＩ）中に示す化合物（４−Ｉ）２３．９ｇ（収率８３％）を得た。
【００４０】
ジムロート冷却管を取り付けた１００ｍＬナスコルベンに、室温で、化合物（４−Ｉ）２．９１ｇ（９．３１ｍｍｏｌ）、塩化チオニル４．０ｍＬ及びトルエン３０ｍＬを入れた。この溶液にＤＭＦ５滴を加えて、１００℃で４時間、加熱攪拌した。この溶液を室温まで冷却し、溶媒を留去することで、中間体を黄色油状物として得た。この中間体を脱水ＴＨＦ５０ｍＬに溶解し、下記式（ＶＩＩＩ）に示す化合物（７）２．９１ｇ（９．３１ｍｍｏｌ）を添加した。トリエチルアミン１．５６ｍＬを滴下して、室温で４時間攪拌した。この溶液を水１００ｍＬに注ぎ込み、クロロホルム３００ｍＬで抽出し、有機層を水１００ｍＬで２回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒留去し、無色固体を得た。この固体にエーテル１００ｍＬを加えて５分間超音波洗浄を行い、析出物を濾過、真空乾燥することにより、無色固体として上記式（ＶＩ）に示す化合物（９−Ｉ）３．８４ｇ（収率６８％、純度９９％）を得た。
【００４１】
３００ｍＬナスコルベンに、室温で、化合物（９−Ｉ）３．０２ｇ（４．９９ｍｍｏｌ）を脱水ジクロロメタン１５０ｍＬに溶解した。この溶液にトリフルオロメタンスルホン酸メチル１．００ｇ／脱水ジクロロメタン１ｍＬを加えて、室温で２６時間攪拌した。析出物を濾過し、濾物をジクロロメタン２０ｍＬで洗浄後、真空乾燥することにより、無色固体として［１８Ｆ］ＦＢＭＩの前駆体であるＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−５−クロロ−３−ヨード−２−メトキシベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩（上記式（ＶＩ）中に示す、化合物（ＩＩ−ｃ））２．５９ｇ（収率６７％、純度９９％）を得た。
【００４２】
（１−１ｄ）［１８Ｆ］ＦＢＭＢの前駆体の化学合成
［１８Ｆ］ＦＢＭＢの前駆体であるＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−３−ブロモ−５−クロロ−２−メトキシベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩（下記式（ＶＩＩ）中に示す化合物（ＩＩ−ｄ））は以下のように作製した。下記式（ＶＩＩ）に、合成スキームを示す。
【化１３】
【００４３】
上記式（ＶＩＩ）において化合物（２−Ｂｒ）を、上記（１−１ｂ）［１８Ｆ］ＦＢＨＢの前駆体の化学合成における化合物（２−Ｂｒ）の合成と同様の方法で合成した。こうして合成した化合物（２−Ｂｒ）３０．０ｇ（０．１１ｍｏｌ）と共に炭酸カリウム４６．９ｇ(０．３４ｍｏｌ)及びアセトン１．３Ｌを、メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた２Ｌ四つ口コルベンに室温で入れ、攪拌しながら、ジメチル硫酸２７．１ｇ（０．２１ｍｏｌ）を添加した。この溶液を１５分かけて還流状態とし、同温にて攪拌した。１４時間後、この溶液を室温まで冷却し、析出している固体を濾別し、濾液を濃縮した。得られた赤色油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１０／１）で精製することにより、橙色油状物として上記式（ＶＩＩ）中に示す化合物（３−Ｂｒ）２８．４ｇ（収率９０％）を得た。
【００４４】
メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた１Ｌ４つ口コルベンに、室温で、化合物（３−Ｂｒ）２５．６ｇ（９１．９ｍｍｏｌ）、エタノール３００ｍＬ及び２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液３００ｍＬを入れ、攪拌した。この溶液を１５分かけて還流状態とし、同温にて攪拌した。４時間後、この溶液を室温まで冷却し、濃塩酸４０ｍＬを加え、溶液をｐＨ２程度にした。析出している固体を濾別し、真空乾燥することにより無色結晶として上記式（ＶＩＩ）中に示す化合物（４−Ｂｒ）１９．５ｇ（収率８０％）を得た。
【００４５】
ジムロート冷却管を取り付けた１００ｍＬナスコルベンに、室温で、化合物（４−Ｂｒ）２．４７ｇ（９．３１ｍｍｏｌ）及び塩化チオニル４．０ｍＬ、トルエン３０ｍＬを入れた。この溶液にＤＭＦ５滴を加えて、１００℃で４時間、加熱攪拌した。この溶液を室温まで冷却し、溶媒を留去することで、中間体を黄色油状物として得た。この中間体を脱水ＴＨＦ５０ｍＬに溶解し、下記式（ＶＩＩＩ）中に示す化合物（７）を２．９１ｇ（９．３１ｍｍｏｌ）添加した。この溶液にトリエチルアミン１．５６ｍＬを滴下して、室温で４時間攪拌した。この溶液を水１００ｍＬに注ぎ込み、クロロホルム３００ｍＬで抽出し、有機層を水１００ｍＬで２回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒留去し、無色固体を得た。この固体にエーテル１００ｍＬを加えて５分間超音波洗浄を行い、析出物を濾過、真空乾燥することにより、無色固体として上記式（ＶＩＩ）中に示す化合物（９−Ｂｒ）２．９５ｇ（収率６０％、純度９９％）を得た。
【００４６】
３００ｍＬナスコルベンに、室温で、化合物(９−Ｂｒ)２．６３ｇ(４．９９ｍｍｏｌ)を脱水ジクロロメタン１５０ｍＬに溶解した。この溶液にトリフルオロメタンスルホン酸メチル１．００ｇ／脱水ジクロロメタン１ｍＬを加えて、室温で２６時間攪拌した。析出物を濾過し、濾物をジクロロメタン２０ｍＬで洗浄後、真空乾燥することにより、［１８Ｆ］ＦＢＭＢの前駆体として、無色固体のＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−３−ブロモ−５−クロロ−２−メトキシベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩（上記式（ＶＩＩ）中に示す化合物（ＩＩ−ｄ））１．８０ｇ（収率５０％、純度９９％）を得た。
【００４７】
なお、上記［１８Ｆ］ＦＢＨＢの前駆体、［１８Ｆ］ＦＢＭＩの前駆体及び［１８Ｆ］ＦＢＭＢの前駆体を作製する際に用いた化合物（７）は下記式（ＶＩＩＩ）で示す合成スキームにより作製した。
【化１４】
【００４８】
上記式（ＶＩＩＩ）に示す化合物（５）は以下のようにして合成した。メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた１Ｌ４つ口コルベンに、室温で、４−クロロ−３−ニトロベンゼンスルホニルクロリド５０．０ｇ（１９５ｍｍｏｌ）及びフルオロベンゼン２００ｍＬを入れ、攪拌しながら、無水塩化アルミニウム３０．０ｇ（２２４．８ｍｍｏｌ）を３０分かけて添加した。この溶液を５０℃に加温しながら１８時間反応させた。この溶液を室温まで冷却し、氷水５００ｍＬに注ぎ込み、濃塩酸１００ｍＬを加えて攪拌した。この溶液を酢酸エチル１Ｌで抽出し、有機層を水５００ｍＬで洗浄後、飽和重曹水５００ｍＬ及び水５００ｍＬで洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒留去し、赤色固体を得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝４／１）で精製することにより、橙色油状物として上記式（ＶＩＩＩ）に示す化合物（５）３４．６ｇ（収率５６％、純度９２％）を得た。
【００４９】
メカニカルスターラー、ジムロート冷却管、温度計を取り付けた５００ｍＬ４つ口コルベンに、室温で、化合物（５）１０．５ｇ（３３．３ｍｍｏｌ）、エタノール１６０ｍＬ、酢酸１６０ｍＬ及び蒸留水８０ｍＬを入れ、攪拌しながら、６０℃に加温した。この溶液に還元鉄１３．０ｇ（２３２．８ｍｍｏｌ）を１３回に分けて添加し、さらに同温で１０分間攪拌した。この溶液に濃塩酸１ｍＬを添加後、７０℃で２時間加熱すると原料の消失が確認された。この溶液を室温まで冷却し、氷水１Ｌに注ぎ込み、飽和重曹水５００ｍＬで中和し、酢酸エチル１Ｌで抽出し、有機層を水５００ｍＬで３回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒留去し、黄白色固体を得た。ヘキサン１００ｍＬを加えて５分間超音波洗浄を行い、析出物を濾過、真空乾燥することにより、無色固体として上記式（ＶＩＩＩ）中に示す化合物（６）９．３４ｇ（収率９８％、純度９２％）を得た。
【００５０】
ジムロート冷却管、温度計を取り付けた１００ｍＬ４つ口コルベンに、室温で、化合物（６）９．００ｇ（３１．５ｍｍｏｌ）及びヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ）７５ｍＬを入れ、１６０℃で２０時間、加熱攪拌した。この溶液を室温まで冷却し、氷水５００ｍＬに注ぎ込み、酢酸エチル１．５Ｌで抽出し、有機層を水５００ｍＬで３回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒留去し、褐色油状物を得た。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１／１）で精製し、濃縮後に得られた固体にヘキサン５０ｍＬを加えて５分間超音波洗浄を行い、析出物を濾過、真空乾燥することにより、無色固体として上記式（ＶＩＩＩ）中に示す化合物（７）７．３０ｇ（収率７５％、純度９９％）を得た。こうして得られた化合物（７）を、［１８Ｆ］ＦＢＨＢの前駆体、［１８Ｆ］ＦＢＭＩの前駆体及び［１８Ｆ］ＦＢＭＢの前駆体の化学合成に用いた。
【００５１】
（実施例２）化合物（Ｉ）の化学合成
（２−１）［１８Ｆ］の作製
サイクロトロン（ＨＭ−１８、住友重機械工業製）にて１８ＭｅＶに加速した陽子を２０μＡの電流値で、１８Ｏ−Ｈ２Ｏおよそ２ｍＬを封入したターゲット水に照射して、１８Ｏ（ｐ，ｎ）１８Ｆ核反応により［１８Ｆ］を生成させた。ターゲット水中で［１８Ｆ］は［１８Ｆ］Ｆ−の化学形で存在する。生成された［１８Ｆ］Ｆ−を含むターゲット水を自動合成装置に導入した。［１８Ｆ］Ｆ−を含むターゲット水をＨｅ圧でトラップ用イオン交換樹脂カラムを通過させて、［１８Ｆ］Ｆ−イオンを樹脂に吸着させた。この樹脂に０．５ｍｇＫ２ＣＯ３水溶液０．５ｍＬを導入して［１８Ｆ］Ｆ−イオンを脱着し、反応容器に［１８Ｆ］ＫＦ水溶液として回収した。反応容器内の［１８Ｆ］ＫＦ水溶液に３ｍｇの４，７，１３，１６，２１，２４−Ｈｅｘａｏｘａ−１，１０−ｄｉａｚａｂｉｃｙｃｌｏ［８，８，８］ｈｅｘａｃｏｓａｎｅ（商品名：Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（商標）２２２、メルク社）を含むアセトニトリル２ｍＬ（Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ３ｍｇ／アセトニトリル２ｍＬ）を加えてＨｅ気流下に加熱して５分間共沸脱水し、アセトニトリル１ｍＬを追加して２分間共沸脱水を続けた。さらにアセトニトリル１ｍＬを追加して乾固するまで共沸脱水し、真空ポンプで９０秒間減圧留去し、９０秒間Ｈｅパージを行って系内の水分を完全に除き、残渣を室温付近まで冷却した。
【００５２】
（２−２ａ）［１８Ｆ］ＦＢＨＩの合成
（２−１）で得た残渣に、上記（１−１ａ）で合成した［１８Ｆ］ＦＢＨＩの前駆体Ｎ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−５−クロロ−２−ヒドロキシ−３−ヨードベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩４ｍｇ／ＤＭＳＯ０．３ｍＬ溶液を加え、１００℃で１０分間フッ素化を行い、反応終了後、生成物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）の移動相として用いるものと同じ溶媒で希釈し、Ｓｅｐ−Ｐａｋ Ｐｌｕｓ Ａｌｕｍｉｎａ Ｎカラムで未反応の［１８Ｆ］Ｆ−イオンを取り除き、溶出液をＨＰＬＣにて精製した。カラムとしてμＢｏｎｄａ−Ｐａｋ Ｃ１８（カラム内径７．８ｍｍ、カラム長３００ｍｍ、Ｗａｔｅｒｓ社）、移動相としてアセトニトリル／０．１Ｍ酢酸ナトリウム／酢酸＝４００／６００／１を用い、流速６ｍＬ／ｍｉｎ、検出波長２５４ｎｍで分取を行った。［１８Ｆ］ＦＢＨＩのフラクションを２５μＬのＴｗｅｅｎ８０を添加したナスコルベンに分取し、加熱減圧下でＨＰＬＣの溶媒を留去した。さらに残渣を注射用生理食塩水に再溶解し、無菌バイアルに［１８Ｆ］ＦＢＨＩを回収した。
【００５３】
（２−２ｂ）［１８Ｆ］ＦＢＨＢの合成
上記（２−１）と同様にサイクロトロン（ＨＭ−１８、住友重機械工業製）にて１８Ｏ−Ｈ２Ｏを用いて生成させた［１８Ｆ］Ｆ−を含むターゲット水を自動合成装置に導入した。［１８Ｆ］Ｆ−を含むターゲット水をＨｅ圧でトラップ用イオン交換樹脂カラムを通過させて、［１８Ｆ］Ｆ−イオンを樹脂に吸着させた。この樹脂にＴｅｔｒａｂｕｔｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｃａｒｂｏｎａｔｅ水溶液／アセトニトリル（１／１）溶液０．５ｍＬを導入して［１８Ｆ］Ｆ−イオンを樹脂から脱着し、反応容器に回収した。反応容器内の［１８Ｆ］水溶液にアセトニトリル２ｍＬを加え、Ｈｅ気流下加熱して５分間共沸脱水した。アセトニトリル１ｍＬを追加して２分間共沸脱水を続けた。さらにアセトニトリル１ｍＬを追加して乾固するまで共沸脱水し、真空ポンプで９０秒間減圧留去し、Ｈｅパージを９０秒間行って系内の水分を完全に除き、残渣を室温付近まで冷却した。この残渣に、［１８Ｆ］ＦＢＨＢの前駆体として上記（１−１ｂ）で合成したＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩０．５ｍｇ／ＤＭＳＯ０．３ｍＬ溶液を加え、１００℃で１０分間フッ素化を行った。フッ素化後、ＨＰＬＣの移動相としてアセトニトリル／０．１Ｍ酢酸ナトリウム／酢酸＝３５０／６５０／１を用いたこと以外は上記（２−２ａ）［１８Ｆ］ＦＢＨＩの合成と同様にＨＰＬＣで精製して［１８Ｆ］ＦＢＨＢを得た。
【００５４】
（２−２ｃ）［１８Ｆ］ＦＢＭＩの合成
（２−１）で得た残渣に、［１８Ｆ］ＦＢＭＩの前駆体として上記（１−１ｃ）で合成したＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−５−クロロ−３−ヨード−２−メトキシベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩４ｍｇ／ＤＭＳＯ０．３ｍＬ溶液を加え、ＨＰＬＣの移動相としてアセトニトリル／０．１Ｍ酢酸ナトリウム／酢酸＝５８０／４２０／１を用いたこと以外は上記（２−２ａ）［１８Ｆ］ＦＢＨＩの合成と同様にして［１８Ｆ］ＦＢＭＩを得た。
【００５５】
（２−２ｄ）［１８Ｆ］ＦＢＭＢの合成
（２−１）で得た残渣に、［１８Ｆ］ＦＢＭＢの前駆体として上記（１−１ｄ）で合成したＮ−｛２−クロロ−５−（４−トリメチルアンモニウムフェニルスルホニル）フェニル｝−３−ブロモ−５−クロロ−２−メトキシベンズアミド トリフルオロメタンスルホン酸塩４ｍｇ／ＤＭＳＯ０．３ｍＬ溶液を加え、ＨＰＬＣの移動相としてアセトニトリル／０．１Ｍ酢酸ナトリウム／酢酸＝５８０／４２０／１を用いたこと以外は上記（２−２ａ）［１８Ｆ］ＦＢＨＩの合成と同様にして［１８Ｆ］ＦＢＭＢを得た。
【００５６】
（２−３）化合物（Ｉ）の分析
得られた［１８Ｆ］ＦＢＨＩ、［１８Ｆ］ＦＢＨＢ、［１８Ｆ］ＦＢＭＩ及び［１８Ｆ］ＦＢＭＢを逆相ＨＰＬＣで定性分析を行った。定性分析は、カラムとしてＩｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ−３（カラム内径４．６ｍｍ、カラム長１５０ｍｍ、ＧＬサイエンス社）、移動相としてアセトニトリル／３０ｍＭ酢酸アンモニウム／酢酸＝５００／５００／２を用い、流速２ｍＬ／ｍｉｎ、検出波長２３０ｎｍの条件で行った。結果を表１に示す。
【表１】
【００５７】
（実施例３）細胞増殖能の異なる癌細胞を移植したマウスを用いた実験
癌細胞にはヒト子宮頚癌細胞ＨｅＬａである、ｓｔｒａｉｎ：１５Ｓ３Ｄ（ＨｅＬａ−Ｋ）とＪＣＲＢ９００４（ＨｅＬａ−Ｂ）を用いた。ＨｅＬａ−Ｋは５×１０６個、ＨｅＬａ−Ｂは２×１０７個を、メスＢＡＬＢ／ｃＡ Ｊｃｌ−ｎｕヌードマウス（ＨｅＬａ−Ｋ：６週齢、ＨｅＬａ−Ｂ:４又は６週齢）の大腿皮下に移植した。ＨｅＬａ−Ｋ移植マウスは移植２週間後、ＨｅＬａ−Ｂ移植マウスは４週間又は２週間後に、それぞれ８週齢となったところで実験に用いた。
【００５８】
担癌マウスにおける化合物（Ｉ）の集積と腫瘍組織の増殖速度の関係を見るために、腫瘍の大きさを連日計測した。倍加時間（ｄｏｕｂｌｉｎｇ ｔｉｍｅ：ＤＴ）の計算は、Ｓｃｈｗａｒｔｚの提案した計算式：ＤＴ＝ｔ×ｌｏｇ２（Ｖ１／Ｖ０）にて算出した。なおｔは腫瘍体積がＶ０（ｍｍ３）からＶ１（ｍｍ３）になるまでの日数を示し、腫瘍体積（ｍｍ３）は、腫瘍の長径及び幅をもとに計算式：１／２×長径（ｍｍ）×（幅）２（ｍｍ２）で計算した。
【００５９】
［１８Ｆ］ＦＢＨＩ、［１８Ｆ］ＦＢＨＢ、［１８Ｆ］ＦＢＭＩ又は［１８Ｆ］ＦＢＭＢの生理食塩水溶液０．３ｍＬをマウスの尾静脈より投与し、６０分後にマウスを断頭屠殺し、血液、心臓、肺、肝臓、腎臓、脾臓、大腿骨、筋肉、腫瘍、小腸、消化管、膵臓、脳を採取した。臓器重量及び放射能を測定し、各化合物の集積量を求めた。
【００６０】
ＨｅＬａ−Ｋ及びＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織の体積の増加曲線を図１に示す。このように、同じＨｅＬａ細胞でも、継代条件により、その増殖に違いがあることが確認され、ＨｅＬａ−Ｋ腫瘍の方がＨｅＬａ−Ｂ腫瘍よりも増殖が早かった。ＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織のサイズがＨｅＬａ−Ｋの腫瘍組織のサイズとほぼ同じとなるＨｅＬａ−Ｂ移植後４週目と、移植後の日数をＨｅＬａ−Ｋと同一にしたＨｅＬａ−Ｂ移植後２週目の２つの条件で実験を行った。
【００６１】
図２に、ＨｅＬａ−Ｋ腫瘍組織とＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織への［１８Ｆ］ＦＢＨＩ、［１８Ｆ］ＦＢＨＢ、［１８Ｆ］ＦＢＭＩ及び［１８Ｆ］ＦＢＭＢの単位体重あたりの投与量に対する集積量であるＳＵＶを示す。なお、ＳＵＶは以下の式により算出した。
ＳＵＶ＝（組織中の放射能（Ｂｑ）／組織重量（ｇ））／（トレーサーの投与量（Ｂｑ）／体重（ｇ））
ここで、ＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織のサイズがＨｅＬａ−Ｋの腫瘍組織のサイズとほぼ同じとなるＨｅＬａ−Ｂ移植後４週目と、移植後の日数をＨｅＬａ−Ｋと同一にしたＨｅＬａ−Ｂ移植後２週目の２つの条件の間で、ＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織におけるＳＵＶはデータに差がなかったため、図２には移植後２週目のデータのみ示した。
【００６２】
図３に、ＨｅＬａ−Ｋ移植マウスとＨｅＬａ−Ｂ移植マウスでの、［１８Ｆ］ＦＢＨＩ、［１８Ｆ］ＦＢＨＢ、［１８Ｆ］ＦＢＭＩ及び［１８Ｆ］ＦＢＭＢの血液への集積に対する腫瘍への集積の比（化合物（Ｉ）の腫瘍ＳＵＶ／化合物（Ｉ）の血液ＳＵＶ）を示す。ここで、ＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織のサイズがＨｅＬａ−Ｋの腫瘍組織のサイズとほぼ同じとなるＨｅＬａ−Ｂ移植後４週目と、移植後の日数をＨｅＬａ−Ｋと同一にしたＨｅＬａ−Ｂ移植後２週目の２つの条件の間で、ＨｅＬａ−Ｂ移植マウスにおける集積比はデータに差がなかったため、図３には移植後２週目のデータのみ示した。
【００６３】
図２及び図３で示すように、細胞増殖速度の速いＨｅＬａ−Ｋ腫瘍組織への化合物（Ｉ）の集積がＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織への化合物（Ｉ）の集積より低かった。特に［１８Ｆ］ＦＢＭＩ及び［１８Ｆ］ＦＢＭＢで、ＨｅＬａ−Ｋ腫瘍組織とＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織との差が大きかった。細胞増殖が遅いことはアポトーシスが積極的に生じていると考えられ、逆に細胞増殖が速いことはアポトーシスが生じている割合が低いと考えられる。ＨｅＬａ−Ｋ腫瘍組織よりもアポトーシスが積極的に生じていると考えられるＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織への化合物（Ｉ）の集積が高いことを示す結果となった。
【００６４】
（実施例４）抗癌剤投与マウスを用いた実験
ヒト子宮頚癌細胞ＨｅＬａ（ｓｔｒａｉｎ：１５Ｓ３Ｄ）細胞５×１０６個を、６週齢のメスＢＡＬＢ／ｃＡ Ｊｃｌ−ｎｕヌードマウスの大腿皮下に移植し担癌マウスを作製した。移植後２週間目に抗癌剤として、シスプラチン（ＣＤＤＰ）２ｍｇ／ｋｇ又はＣＤＤＰ６ｍｇ／ｋｇを含む生理食塩溶液を腹腔内に投与し、抗癌剤投与マウスを２群作製した。コントロールの担癌マウスには抗癌剤を含まない生理食塩溶液を腹腔内に投与した。
【００６５】
図４に抗癌剤を投与された担癌マウスの腫瘍体積（ｍｍ３）の変化を示す。癌を移植して２週間後にＣＤＤＰ投与を行い、さらに最初の投与から７日後に再度投与を行った。図４にはＣＤＤＰを最初に投与した日を第０日として示してある。ＣＤＤＰ２ｍｇ／ｋｇ投与群は、８匹中７匹が第４〜５日に死亡した。ＣＤＤＰ６ｍｇ／ｋｇ投与群は第４日まで腫瘍体積が減少し、その後再び増加し始めた。２回目の投与で再び減少したが、やはり２回目投与から４日（第１１日）の後に再び腫瘍体積の増加が見られた。ＣＤＤＰ２ｍｇ／ｋｇ投与群はコントロールに対して腫瘍体積の減少があまり見られなかった。
【００６６】
第２日に上記担癌マウスをプラナーイメージング装置（ＰＰＩＳ）に固定し、［１８Ｆ］ＦＢＨＩ、［１８Ｆ］ＦＢＨＢ、［１８Ｆ］ＦＢＭＩ又は［１８Ｆ］ＦＢＭＢの生理食塩水溶液０．３ｍＬを尾静脈より投与し、プラナー画像を得た。化合物投与から６５分後にマウスを断頭屠殺し、血液、心臓、肺、肝臓、腎臓、脾臓、大腿骨、筋肉、腫瘍、小腸、消化管、膵臓、脳を採取した。臓器重量、及び放射能を測定し、各化合物の集積（ＳＵＶ）を求めた。
【００６７】
図５は上記担癌マウスの腫瘍への［１８Ｆ］ＦＢＨＩ、［１８Ｆ］ＦＢＨＢ、［１８Ｆ］ＦＢＭＩ及び［１８Ｆ］ＦＢＭＢの集積（ＳＵＶ）を示している。［１８Ｆ］ＦＢＨＩは腫瘍への集積が低く、抗癌剤治療による集積の増加が見られなかった。［１８Ｆ］ＦＢＨＢも腫瘍への集積が低かったが、ＣＤＤＰ６ｍｇ／ｋｇ投与群では他の群より若干高かった。［１８Ｆ］ＦＢＭＩは、ＣＤＤＰ投与量と比例して腫瘍への集積が高くなる傾向にあった。［１８Ｆ］ＦＢＭＢはＣＤＤＰ投与で集積の増加が見られ、その増加の割合はＣＤＤＰ６ｍｇ／ｋｇ＞ＣＤＤＰ２ｍｇ／ｋｇであった。
【００６８】
図６に上記担癌マウスの写真と、コントロール、ＣＤＤＰ２ｍｇ／ｋｇ群及びＣＤＤＰ６ｍｇ／ｋｇ群マウスの［１８Ｆ］ＦＢＭＢのプラナー画像写真を示す。マウス写真において右大腿部の丸く囲んだ部分が腫瘍部位である。プラナー画像においても腫瘍部位への［１８Ｆ］ＦＢＭＢの集積が見られた。
【００６９】
（実施例５）脳虚血ラットを用いた実験
麻酔下のラットの中大脳動脈を露出させ、ローズベンガル試薬を投与し、光を血管外部より照射し、照射位置の血管内部に血栓を作った。こうして、脳虚血ラットを作製した。虚血から２４時間後に化合物（Ｉ）を投与した。化合物（Ｉ）の投与から３０分及び９０分後に断頭屠殺し、脳を取り出し、２ｍｍ厚の脳スライス片を作製した。脳スライス片を染色し、その後イメージングプレートを用いて脳スライス片の放射能分布を画像化した。また、関心領域における化合物（Ｉ）の集積を求めた。
【００７０】
図７に脳虚血ラットの脳スライス片の染色写真及び［１８Ｆ］ＦＢＨＩの集積画像を示す。脳スライス片の染色写真で赤い部位は、細胞の活性があるために染色されている部位で、白い部分は虚血により細胞死を起こしたために染色されなかった部位（虚血部位）である。集積画像では、放射能量が高い部位から低い部位の色が、赤-オレンジ-黄-黄緑-緑-青-藍で表されている。脳スライス片の写真と集積画像を対応させると、［１８Ｆ］ＦＢＨＩの集積が高い部分（集積画像中、赤−オレンジの部分）が虚血部位周辺にあることがわかる。
【００７１】
虚血部位及び虚血部位周辺部（虚血側）と、虚血を起こしていない反対側の脳の対応する部位（正常側）とを関心領域として設定し、化合物（Ｉ）の関心領域への集積比（虚血側への化合物（Ｉ）の集積（ＳＵＶ）／正常側への化合物（Ｉ）の集積（ＳＵＶ））を求めた。結果を図８に示す。いずれの化合物においても、アポトーシスが生じていることが予見される虚血側への集積が正常側への集積よりも高くなっていた。また、化合物（Ｉ）同士で比較すると、上記集積比は［１８Ｆ］ＦＢＨＩ及び［１８Ｆ］ＦＢＨＢが、［１８Ｆ］ＦＢＭＩ及び［１８Ｆ］ＦＢＭＢに対して高くなっていた。
【００７２】
（実施例６）脳虚血サルを用いた実験
サルに塩酸ケタミン及び硫酸アトロピンを筋肉内投与して麻酔導入した。口腔内にリドカインを噴霧して局所表面麻酔を施し、気管内挿管し、Ｎ２Ｏ：Ｏ２＝０．７：０．３（Ｌ／ｍｉｎ）＋イソフルレン（０．８〜０．３％）又はＮ２Ｏ：Ｏ２＝１．４：０．６（Ｌ／ｍｉｎ）＋イソフルレン（０．８〜０．３％）で麻酔を開始した。筋弛緩剤である臭化パンクロニウムを、０．０５ｍｇ／ｋｇ／ｈ（静脈内投与）又は０．１ｍｇ／ｋｇ／２ｈ（筋肉内投与）を追加して麻酔を維持した。上記麻酔下で片側眼球を摘出し、硬膜を露出し、中大脳動脈を確保し、以下のようにして中大脳動脈の閉塞を行った。手術用実体顕微鏡下で中大脳動脈を露出し、２個の動脈瘤クリップを用いて、クリップ間に出来る限り多くの側枝が含まれる様に留意した。３時間閉塞を行った後、クリップを外して再潅流を行った。中大脳動脈を再灌流する際は、直視下又は手術用実体顕微鏡下でクリップを外した。こうして、大脳半球の片側が虚血側、その反対側が正常側の脳虚血サルモデルを作製した。
【００７３】
再潅流を開始した３時間後に[１８Ｆ]ＦＢＨＩ又は[１８Ｆ]ＦＤＧを投与してＰＥＴ計測を行った。[１８Ｆ]ＦＤＧは細胞の活性が高い部分に集積する化合物である。再潅流から３日後及び７日後に［１８Ｆ］ＦＤＧのＰＥＴ計測を行った。
【００７４】
図９に脳虚血サルの再潅流後の脳スライス片の［１８Ｆ］ＦＢＨＩ及び[１８Ｆ]ＦＤＧの集積画像を示す。再潅流から３時間後、[１８Ｆ]ＦＢＨＩでは虚血側に高い集積が観察された。一方［１８Ｆ］ＦＤＧでは再潅流から３時間後、虚血側と正常側で集積の差が観察されなかった。再潅流から３日後及び７日後、虚血側で［１８Ｆ］ＦＤＧの集積の低下が観察された。[１８Ｆ]ＦＢＨＩは、神経細胞の活性が数日後に低下する部位に高く集積した。この結果から、アポトーシスにより神経細胞の脱落が生じる部位を、[１８Ｆ]ＦＢＨＩを用いて検出できることが示唆された。
【産業上の利用可能性】
【００７５】
本発明の化合物（Ｉ）によれば、生体内で生じているアポトーシスを検出することが可能となる。また、［１８Ｆ］ＦＢＭＩ及び［１８Ｆ］ＦＢＭＢは腫瘍縮退におけるアポトーシスの検出に有効であると考えられ、抗癌剤の評価試薬として使用できる。一方、［１８Ｆ］ＦＢＨＩ及び［１８Ｆ］ＦＢＨＢは神経系のアポトーシス検出に有効であると考えられ、虚血性疾患におけるアポトーシス抑制剤の評価試薬として使用できる。
【図面の簡単な説明】
【００７６】
【図１】ＨｅＬａ−Ｋ及びＨｅＬａ−Ｂ腫瘍組織の体積の増加曲線を示したグラフである。
【図２】腫瘍組織への化合物（Ｉ）の集積を示したグラフである。
【図３】化合物（Ｉ）の血液への集積に対する腫瘍への集積の比を示したグラフである。
【図４】抗癌剤治療マウスの治療経過日数と腫瘍体積の関係を示したグラフである。
【図５】抗癌剤治療マウスの腫瘍への化合物（Ｉ）の集積を示したグラフである。
【図６】担癌マウスの写真と、抗癌剤治療マウスの［１８Ｆ］ＦＢＭＢのプラナー画像の写真である。
【図７】脳虚血ラットの脳スライス片の染色写真及び［１８Ｆ］ＦＢＨＩの集積画像の写真である。
【図８】脳虚血ラットの脳における化合物（Ｉ）の正常側への集積に対する虚血側への集積の比を示したグラフである。
【図９】脳虚血サルの再潅流後の脳スライス片の［１８Ｆ］ＦＢＨＩ及び[１８Ｆ]ＦＤＧの集積画像の写真である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（I）で表される化合物。
【化１】
（式（Ｉ）中、Ｘはヨウ素原子又は臭素原子であり、Ｙは水酸基又はメトキシ基である。）
【請求項２】
下記一般式（ＩＩ）で表される化合物。
【化２】
（式（ＩＩ）中、Ｘはヨウ素原子又は臭素原子であり、Ｙは水酸基又はメトキシ基である。）
【請求項３】
請求項１に記載の化合物を含む、アポトーシスの検出用試薬。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物を含む、抗癌剤の薬効評価用試薬。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物を含む、アポトーシス抑制剤の評価用試薬。
【請求項１】
下記一般式（I）で表される化合物。
【化１】
（式（Ｉ）中、Ｘはヨウ素原子又は臭素原子であり、Ｙは水酸基又はメトキシ基である。）
【請求項２】
下記一般式（ＩＩ）で表される化合物。
【化２】
（式（ＩＩ）中、Ｘはヨウ素原子又は臭素原子であり、Ｙは水酸基又はメトキシ基である。）
【請求項３】
請求項１に記載の化合物を含む、アポトーシスの検出用試薬。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物を含む、抗癌剤の薬効評価用試薬。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物を含む、アポトーシス抑制剤の評価用試薬。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図８】
【図６】
【図７】
【図９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図８】
【図６】
【図７】
【図９】
【公開番号】特開２０１０−２４１７２（Ｐ２０１０−２４１７２Ａ）
【公開日】平成２２年２月４日（２０１０．２．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１８６３７８（Ｐ２００８−１８６３７８）
【出願日】平成２０年７月１７日（２００８．７．１７）
【出願人】（０００２３６４３６）浜松ホトニクス株式会社 (1,479)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年２月４日（２０１０．２．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年７月１７日（２００８．７．１７）
【出願人】（０００２３６４３６）浜松ホトニクス株式会社 (1,479)
【Ｆターム（参考）】
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