インフルエンザワクチンのアジュバント
【課題】インフルエンザウイルスＰＲ８株などから調製されたインフルエンザワクチンの効果を増強する作用を有する、安全な天然由来の乳酸菌（植物性乳酸菌）を有効成分として含有するインフルエンザワクチンのアジュバントを提供すること。
【解決手段】ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株（受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−２１１０６）を有効成分として含有する、インフルエンザワクチンのアジュバント。本発明のインフルエンザワクチンのアジュバントは、インフルエンザワクチンの投与前に継続的に摂取しておくことが好ましく、インフルエンザワクチンの投与の少なくとも７日前から継続的に摂取しておくことがより好ましい。
【解決手段】ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株（受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−２１１０６）を有効成分として含有する、インフルエンザワクチンのアジュバント。本発明のインフルエンザワクチンのアジュバントは、インフルエンザワクチンの投与前に継続的に摂取しておくことが好ましく、インフルエンザワクチンの投与の少なくとも７日前から継続的に摂取しておくことがより好ましい。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インフルエンザワクチンのアジュバントに関する。アジュバントとは、薬剤の効果を増強する添加剤（助剤、免疫強化剤、免疫調整剤などとも呼ばれている）のことであり、本発明のアジュバントは、インフルエンザウイルスＰＲ８株などから調製されたインフルエンザワクチンの効果を増強する作用を有するものである。
【背景技術】
【０００２】
インフルエンザウイルスＰＲ８株などから調製されたインフルエンザワクチンのアジュバントとして、種々の物質が知られている。例えば、コレラ毒素、ポリリボ（イノシン：シチジル）酸、キチン微粉末、貝殻微粉末などが、インフルエンザワクチンのアジュバントとして検討されている（非特許文献１〜５参照）。これらの他、多数の非特許文献に見られるように、インフルエンザワクチンのアジュバントとしての効能を試験する際には、インフルエンザウイルスＰＲ８株を代表株として用いられることが知られている。
【０００３】
【非特許文献１】JOURNAL OF VIROLOGY, Mar. 2005, p.2910-2919
【非特許文献２】Journal of Medical Virology 75:130-136 (2005)
【非特許文献３】Journal of Medical Virology 78:954-963 (2006)
【非特許文献４】Vaccine, Vol. 8, June 1990 p.243
【非特許文献５】Vaccine 17 (1999) 2918-2926
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、インフルエンザウイルスＰＲ８株などから調製されたインフルエンザワクチンの効果を増強する作用を有する、安全な天然由来の乳酸菌（植物性乳酸菌）を有効成分として含有するインフルエンザワクチンのアジュバントを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記目的を達成すべく種々検討した結果、パン生地から分離したラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）に属する特定の乳酸菌を、インフルエンザウイルスＰＲ８株などから調製されたインフルエンザワクチンの投与前に継続的に摂取しておくことにより、インフルエンザワクチンの効果が増強することを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株を有効成分として含有する、インフルエンザワクチンのアジュバントを提供するものである。
ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株は、パン生地から分離された株であり、オリエンタル酵母工業株式会社（東京都板橋区小豆沢３丁目６番１０号）により、２００６年１１月２９日付で独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６）に、受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−２１１０６として寄託されている。
なお、ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株は、特開２００８−１７９５９５号公報に記載された乳酸菌であり、これを用いて麦を乳酸菌発酵させた産物を有効成分とする脂肪細胞分化促進剤も同公開公報に記載されている。さらに、ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株は、特願２００７−３９０１９号に係る腸管免疫力増強剤の有効成分としても提案されているが、ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株単体がインフルエンザワクチンのアジュバントとしての効能を持つことは、本発明者らによって初めて見い出されたことである。
【発明の効果】
【０００６】
本発明のインフルエンザワクチンのアジュバントは、インフルエンザウイルスＰＲ８株などから調製されたインフルエンザワクチンの投与前に継続的に摂取しておくことにより、インフルエンザワクチンの効果を増強する作用を有する。また、本発明のインフルエンザワクチンのアジュバントは、有効成分であるラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株が食経験のある天然食品素材から分離した乳酸菌であるので、安全性にも優れている。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
乳酸菌ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株の菌学的性質を下記に示す。
ＭＲＳ液体培地（ＤＩＦＣＯ社）を用いて、３０℃、１８時間培養したときの菌の形態（１）菌の形態 桿菌
（２）グラム染色 陽性
（３）運動性 なし
（４）胞子 なし
（５）カタラーゼ なし
（６）通性嫌気性
（７）ブドウ糖の代謝 ５０％以上乳酸に転換する
（８）生育温度範囲 １５℃、３０℃および３５℃では生育を認めるが、４５℃では生育を認めない
（９）乳酸発酵 ホモ型
（１０）乳酸の旋光性 ＤＬ
（１１）炭水化物の発酵性 グリセロールは陽性、Ｄ−アラビノースは陰性、Ｌ−アラビノースは陽性、リボースは陽性、Ｄ−キシロースは陰性、ガラクトースは陽性、グルコースは陽性、フルクトースは陽性、マンノースは陽性、ラムノースは陽性、マンニトールは陽性、ソルビトールは陽性、αメチルＤグルコシドは陰性、アミグダリンは陽性、エスクリンは陽性、サリシンは陽性、セロビオースは陽性、マルトースは陽性、ラクトースは陽性、メリビオースは陽性、シュクロースは陽性、トレハロースは陽性、イヌリンは陰性、メレジトースは陽性、ラフィノースは陽性、スターチは陰性、グルコン酸は陽性。
【０００８】
乳酸菌ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株は、食経験が豊富な素材（パン生地）から分離したものであるため、安全に利用することができる。
【０００９】
乳酸菌ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株は、そのままあるいは必要に応じて薬学的に許容される種々の担体、賦形剤、その他の添加剤、その他の成分を適宜配合して製剤化することによって、インフルエンザワクチンのアジュバントとすることができる。
【００１０】
また、本発明のインフルエンザワクチンのアジュバントは、食品の形態、例えば、パン、菓子、クッキー、ケーキ、麺、粥、雑炊、シリアルバー、ドリンク、ヨーグルトなどの形態で提供することもできる。
【００１１】
本発明のインフルエンザワクチンのアジュバント中の乳酸菌ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株の含有量は、制限されるものではなく、使用形態、アジュバントの剤形や投与又は摂取する者の年齢性別などによって適宜変化させることができる。本発明のアジュバントを経口投与又は摂取させる場合には、１人１日当たりのラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株の投与量又は摂取量が１ｍｇ〜２０ｇとなるように、ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株を本発明のアジュバント中に含有させることが好ましい。
【００１２】
本発明のインフルエンザワクチンのアジュバントは、インフルエンザウイルスＰＲ８株などから調製されたインフルエンザワクチンの投与前に継続的に摂取しておくことが好ましく、インフルエンザワクチンの投与の少なくとも７日前から継続的に摂取しておくことがより好ましい。
【実施例】
【００１３】
次に本発明をさらに具体的に説明するために実施例を挙げるが、本発明は、以下の実施例に制限されるものではない。
【００１４】
実施例１
（乳酸菌試料の調製）
ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株を、１０μｇ／ｍｌシクロヘキシミドを含むＭＲＳ（ｄｅ Ｍａｎ−Ｒｏｇｏｓａ−Ｓｈａｒｐｅ）培地を用いて３７℃で４８時間培養した。その後、遠心分離によって集菌し、滅菌水で３回洗浄した後、滅菌水に懸濁し、１２１℃で３０分間オートクレーブ処理し、これを凍結乾燥して乳酸菌試料を得た。
【００１５】
ＢＡＬＢ／ｃマウス（各群４匹）に餌を７２日間投与した後、インフルエンザウイルスＰＲ８株をフォルムアミドで不活化したワクチン（１５０μｇ／２００μｌ ０．２Ｍ ＮａＨＣＯ3）を経口投与した。餌として、対照群にはＡＩＮ−９３Ｇ（カゼイン２０質量％、Ｌ-シスチン０．３質量％、コーンスターチ３９．７４８６質量％、α化コーンスターチ１３．２質量％、シュークロース１０質量％、大豆油７質量％、セルロースパウダー５質量％、ＡＩＮ−９３Ｇミネラル混合３．５質量％、ＡＩＮ−９３Ｇビタミン混合１質量％、重酒石酸コリン０．２５質量％、第三ブチルヒドロキノン０．００１４質量％）をペレット化し、γ線滅菌したものを投与し、乳酸菌試料投与群にはＡＩＮ−９３Ｇに上記乳酸菌試料を５質量％含有させたものをペレット化し、γ線滅菌したものを投与した。ワクチン投与後５９日目にインフルエンザウイルスＰＲ８株２０ＬＤ５０（８４０００ＴＣＩＤ５０／２０μｌ）をＢＡＬＢ／ｃマウスに経鼻感染させ、その３日目に解剖し、小腸を切除し、大腸側（回腸側）の洗浄液中のＰＲ８特異的ＩｇＡ濃度をＥＬＩＳＡ法により測定した。
その結果、図１に示すように、乳酸菌試料投与群の回腸側のＰＲ８特異的ＩｇＡ濃度は、対照群に比べて有意（危険率５％）に上昇していた。
【００１６】
実施例２
ＢＡＬＢ／ｃマウス（各群６匹）に餌を４２日間投与した後、インフルエンザウイルスＰＲ８株をフォルムアミドで不活化したワクチン（１５０μｇ／２００μｌ ０．２Ｍ ＮａＨＣＯ3）を経口投与した。餌として、対照群にはＡＩＮ９７をペレット化し、γ線滅菌したものを投与し、乳酸菌試料投与群にはＡＩＮ９７に上記乳酸菌試料を５質量％含有させたものをペレット化し、γ線滅菌したものを投与した。ワクチン投与後１４日目にインフルエンザウイルスＰＲ８株２０ＬＤ５０（８４０００ＴＣＩＤ５０／２０μｌ）をＢＡＬＢ／ｃマウスに経鼻感染させ、その３日目に解剖し、小腸を切除し、大腸側（回腸側）の洗浄液中のＰＲ８特異的ＩｇＡ濃度をＥＬＩＳＡ法により測定した。
その結果、図２に示すように、乳酸菌試料投与群の回腸側のＰＲ８特異的ＩｇＡ濃度は、対照群に比べて有意に上昇していた。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】実施例１の対照群および乳酸菌試料投与群におけるＰＲ８特異的ＩｇＡ濃度を測定した結果を示す図である。
【図２】実施例２の対照群および乳酸菌試料投与群におけるＰＲ８特異的ＩｇＡ濃度を測定した結果を示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インフルエンザワクチンのアジュバントに関する。アジュバントとは、薬剤の効果を増強する添加剤（助剤、免疫強化剤、免疫調整剤などとも呼ばれている）のことであり、本発明のアジュバントは、インフルエンザウイルスＰＲ８株などから調製されたインフルエンザワクチンの効果を増強する作用を有するものである。
【背景技術】
【０００２】
インフルエンザウイルスＰＲ８株などから調製されたインフルエンザワクチンのアジュバントとして、種々の物質が知られている。例えば、コレラ毒素、ポリリボ（イノシン：シチジル）酸、キチン微粉末、貝殻微粉末などが、インフルエンザワクチンのアジュバントとして検討されている（非特許文献１〜５参照）。これらの他、多数の非特許文献に見られるように、インフルエンザワクチンのアジュバントとしての効能を試験する際には、インフルエンザウイルスＰＲ８株を代表株として用いられることが知られている。
【０００３】
【非特許文献１】JOURNAL OF VIROLOGY, Mar. 2005, p.2910-2919
【非特許文献２】Journal of Medical Virology 75:130-136 (2005)
【非特許文献３】Journal of Medical Virology 78:954-963 (2006)
【非特許文献４】Vaccine, Vol. 8, June 1990 p.243
【非特許文献５】Vaccine 17 (1999) 2918-2926
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、インフルエンザウイルスＰＲ８株などから調製されたインフルエンザワクチンの効果を増強する作用を有する、安全な天然由来の乳酸菌（植物性乳酸菌）を有効成分として含有するインフルエンザワクチンのアジュバントを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記目的を達成すべく種々検討した結果、パン生地から分離したラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）に属する特定の乳酸菌を、インフルエンザウイルスＰＲ８株などから調製されたインフルエンザワクチンの投与前に継続的に摂取しておくことにより、インフルエンザワクチンの効果が増強することを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株を有効成分として含有する、インフルエンザワクチンのアジュバントを提供するものである。
ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株は、パン生地から分離された株であり、オリエンタル酵母工業株式会社（東京都板橋区小豆沢３丁目６番１０号）により、２００６年１１月２９日付で独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６）に、受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−２１１０６として寄託されている。
なお、ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株は、特開２００８−１７９５９５号公報に記載された乳酸菌であり、これを用いて麦を乳酸菌発酵させた産物を有効成分とする脂肪細胞分化促進剤も同公開公報に記載されている。さらに、ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株は、特願２００７−３９０１９号に係る腸管免疫力増強剤の有効成分としても提案されているが、ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株単体がインフルエンザワクチンのアジュバントとしての効能を持つことは、本発明者らによって初めて見い出されたことである。
【発明の効果】
【０００６】
本発明のインフルエンザワクチンのアジュバントは、インフルエンザウイルスＰＲ８株などから調製されたインフルエンザワクチンの投与前に継続的に摂取しておくことにより、インフルエンザワクチンの効果を増強する作用を有する。また、本発明のインフルエンザワクチンのアジュバントは、有効成分であるラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株が食経験のある天然食品素材から分離した乳酸菌であるので、安全性にも優れている。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
乳酸菌ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株の菌学的性質を下記に示す。
ＭＲＳ液体培地（ＤＩＦＣＯ社）を用いて、３０℃、１８時間培養したときの菌の形態（１）菌の形態 桿菌
（２）グラム染色 陽性
（３）運動性 なし
（４）胞子 なし
（５）カタラーゼ なし
（６）通性嫌気性
（７）ブドウ糖の代謝 ５０％以上乳酸に転換する
（８）生育温度範囲 １５℃、３０℃および３５℃では生育を認めるが、４５℃では生育を認めない
（９）乳酸発酵 ホモ型
（１０）乳酸の旋光性 ＤＬ
（１１）炭水化物の発酵性 グリセロールは陽性、Ｄ−アラビノースは陰性、Ｌ−アラビノースは陽性、リボースは陽性、Ｄ−キシロースは陰性、ガラクトースは陽性、グルコースは陽性、フルクトースは陽性、マンノースは陽性、ラムノースは陽性、マンニトールは陽性、ソルビトールは陽性、αメチルＤグルコシドは陰性、アミグダリンは陽性、エスクリンは陽性、サリシンは陽性、セロビオースは陽性、マルトースは陽性、ラクトースは陽性、メリビオースは陽性、シュクロースは陽性、トレハロースは陽性、イヌリンは陰性、メレジトースは陽性、ラフィノースは陽性、スターチは陰性、グルコン酸は陽性。
【０００８】
乳酸菌ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株は、食経験が豊富な素材（パン生地）から分離したものであるため、安全に利用することができる。
【０００９】
乳酸菌ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株は、そのままあるいは必要に応じて薬学的に許容される種々の担体、賦形剤、その他の添加剤、その他の成分を適宜配合して製剤化することによって、インフルエンザワクチンのアジュバントとすることができる。
【００１０】
また、本発明のインフルエンザワクチンのアジュバントは、食品の形態、例えば、パン、菓子、クッキー、ケーキ、麺、粥、雑炊、シリアルバー、ドリンク、ヨーグルトなどの形態で提供することもできる。
【００１１】
本発明のインフルエンザワクチンのアジュバント中の乳酸菌ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株の含有量は、制限されるものではなく、使用形態、アジュバントの剤形や投与又は摂取する者の年齢性別などによって適宜変化させることができる。本発明のアジュバントを経口投与又は摂取させる場合には、１人１日当たりのラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株の投与量又は摂取量が１ｍｇ〜２０ｇとなるように、ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株を本発明のアジュバント中に含有させることが好ましい。
【００１２】
本発明のインフルエンザワクチンのアジュバントは、インフルエンザウイルスＰＲ８株などから調製されたインフルエンザワクチンの投与前に継続的に摂取しておくことが好ましく、インフルエンザワクチンの投与の少なくとも７日前から継続的に摂取しておくことがより好ましい。
【実施例】
【００１３】
次に本発明をさらに具体的に説明するために実施例を挙げるが、本発明は、以下の実施例に制限されるものではない。
【００１４】
実施例１
（乳酸菌試料の調製）
ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株を、１０μｇ／ｍｌシクロヘキシミドを含むＭＲＳ（ｄｅ Ｍａｎ−Ｒｏｇｏｓａ−Ｓｈａｒｐｅ）培地を用いて３７℃で４８時間培養した。その後、遠心分離によって集菌し、滅菌水で３回洗浄した後、滅菌水に懸濁し、１２１℃で３０分間オートクレーブ処理し、これを凍結乾燥して乳酸菌試料を得た。
【００１５】
ＢＡＬＢ／ｃマウス（各群４匹）に餌を７２日間投与した後、インフルエンザウイルスＰＲ８株をフォルムアミドで不活化したワクチン（１５０μｇ／２００μｌ ０．２Ｍ ＮａＨＣＯ3）を経口投与した。餌として、対照群にはＡＩＮ−９３Ｇ（カゼイン２０質量％、Ｌ-シスチン０．３質量％、コーンスターチ３９．７４８６質量％、α化コーンスターチ１３．２質量％、シュークロース１０質量％、大豆油７質量％、セルロースパウダー５質量％、ＡＩＮ−９３Ｇミネラル混合３．５質量％、ＡＩＮ−９３Ｇビタミン混合１質量％、重酒石酸コリン０．２５質量％、第三ブチルヒドロキノン０．００１４質量％）をペレット化し、γ線滅菌したものを投与し、乳酸菌試料投与群にはＡＩＮ−９３Ｇに上記乳酸菌試料を５質量％含有させたものをペレット化し、γ線滅菌したものを投与した。ワクチン投与後５９日目にインフルエンザウイルスＰＲ８株２０ＬＤ５０（８４０００ＴＣＩＤ５０／２０μｌ）をＢＡＬＢ／ｃマウスに経鼻感染させ、その３日目に解剖し、小腸を切除し、大腸側（回腸側）の洗浄液中のＰＲ８特異的ＩｇＡ濃度をＥＬＩＳＡ法により測定した。
その結果、図１に示すように、乳酸菌試料投与群の回腸側のＰＲ８特異的ＩｇＡ濃度は、対照群に比べて有意（危険率５％）に上昇していた。
【００１６】
実施例２
ＢＡＬＢ／ｃマウス（各群６匹）に餌を４２日間投与した後、インフルエンザウイルスＰＲ８株をフォルムアミドで不活化したワクチン（１５０μｇ／２００μｌ ０．２Ｍ ＮａＨＣＯ3）を経口投与した。餌として、対照群にはＡＩＮ９７をペレット化し、γ線滅菌したものを投与し、乳酸菌試料投与群にはＡＩＮ９７に上記乳酸菌試料を５質量％含有させたものをペレット化し、γ線滅菌したものを投与した。ワクチン投与後１４日目にインフルエンザウイルスＰＲ８株２０ＬＤ５０（８４０００ＴＣＩＤ５０／２０μｌ）をＢＡＬＢ／ｃマウスに経鼻感染させ、その３日目に解剖し、小腸を切除し、大腸側（回腸側）の洗浄液中のＰＲ８特異的ＩｇＡ濃度をＥＬＩＳＡ法により測定した。
その結果、図２に示すように、乳酸菌試料投与群の回腸側のＰＲ８特異的ＩｇＡ濃度は、対照群に比べて有意に上昇していた。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】実施例１の対照群および乳酸菌試料投与群におけるＰＲ８特異的ＩｇＡ濃度を測定した結果を示す図である。
【図２】実施例２の対照群および乳酸菌試料投与群におけるＰＲ８特異的ＩｇＡ濃度を測定した結果を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株（受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−２１１０６）を有効成分として含有する、インフルエンザワクチンのアジュバント。
【請求項１】
ラクトバチルス・プランタラムＡＹＡ株（受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−２１１０６）を有効成分として含有する、インフルエンザワクチンのアジュバント。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１０−４７４８５（Ｐ２０１０−４７４８５Ａ）
【公開日】平成２２年３月４日（２０１０．３．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２１０４８４（Ｐ２００８−２１０４８４）
【出願日】平成２０年８月１９日（２００８．８．１９）
【出願人】（０００２２６９９８）株式会社日清製粉グループ本社 (125)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年３月４日（２０１０．３．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年８月１９日（２００８．８．１９）
【出願人】（０００２２６９９８）株式会社日清製粉グループ本社 (125)
【Ｆターム（参考）】
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