ウルソデオキシコール酸の製造方法
【課題】ウルソデオキシコール酸（３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）を工業的に製造する際に生じる不純物を除去して、ウルソデオキシコール酸を効率的に単離精製するための方法を提供することを解決すべき課題とした。
【解決手段】３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、および３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
【解決手段】３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、および３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウルソデオキシコール酸の製造方法に関する。より詳細には、多孔質合成吸着剤を用いて不純物を除去することを特徴とする、ウルソデオキシコール酸の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
医薬として有用なステロイド化合物であるウルソデオキシコール酸（３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）は、工業的にはコール酸を原料として、ケノデオキシコール酸（３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）から直接、または３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を経て製造されるが、不純物としてケノデオキシコール酸、３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、コール酸、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸などを含み、その純度は通常８０〜９５％である。
【０００３】
ウルソデオキシコール酸を精製する方法としては、（１）低級アルキルエステル化し、含水メタノールで再結晶、加水分解する方法（例えば、特許文献１を参照）、（２）メチルエステル化し、アルミナ・クロマトグラフィーを行う方法（例えば、特許文献２を参照）、（３）ナトリウム、又はリチウム塩とし、クロロホルム含有水溶液中で酸を加えて結晶を析出させる方法（例えば、特許文献３を参照）、（４）有機溶媒中、シリル化して結晶を析出させ、次いで塩酸で脱シリル化して酢酸エチルで結晶を析出させる方法（例えば、特許文献４を参照）、（５）ウルソデオキシコール酸とケノデオキシコール酸との混合物を水、または有機溶媒中に懸濁し、これにＮーメチルモルホリンを添加し不溶性酸を分離する方法（例えば、特許文献５を参照）、および（６）トリエチルアミンなどの塩として晶析などにより精製する方法（例えば、特許文献６を参照）が知られている。
【０００４】
また、（７）逆相系シリカゲルや合成吸着剤などによるクロマトグラフィーによる単離精製法も知られている。合成吸着剤を用いるウルソデオキシコール酸の精製方法では、粗ウルソデオキシコール酸中に含まれるコール酸やケノデオキシコール酸、リトコール酸が分離除去されている（例えば、特許文献７を参照）。
【０００５】
上記の（１）〜（６）のいずれの場合も、煩雑な操作を必要とし、また精製により得られてくる目的物の回収量や純度は必ずしも十分なものではない。また、（７）の場合には、記載されている不純物（コール酸やケノデオキシコール酸、リトコール酸）以外の除去についてはいっさい情報がなく、クロマトグラフィーの手法についても、誘導化原料を用いるなどの方法は知られていない。
【０００６】
一方、糖質から醗酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として、４位２重結合の還元飽和化による５β立体構築を鍵反応とする３，７−ジオキソ−５β−コラン酸（ＤＫＣＡ）の製造方法が知られている（例えば、特許文献８を参照）。この方法で得られる３，７−ジオキソ−５β−コラン酸（ＤＫＣＡ）粗生成物中には、４位２重結合の還元飽和化の際副生する５位の立体化学がαであるステロイド化合物類が不純物として混入する可能性がある。
【０００７】
また、この３，７−ジオキソ−５β−コラン酸（ＤＫＣＡ）を用い、公知の方法により３位および７位のオキソ基をヒドロキシ基へ還元して誘導できる３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸（７K）、およびウルソデオキシコール酸にも、同様な理由により、５αの立体化学を有するステロイド化合物類が不純物として含有される。
【０００８】
これらの５α異性体不純物類は、コール酸を由来とするウルソデオキシコール酸合成経路には含まれえないものであり、その分離除去に関しては、工業的に、簡便に実施できる方法はまったく知られていない。
【０００９】
さらには、原料や製法の違いによらず、工業的に大きなスケールで継続的なウルソデオキシコール酸の製造を行う際、多段階の合成工程間に毎回精製処理を実施することは製造コストの面から不利である。よって、精製処理の回数は限定されるため、各反応工程での副生成物や廃棄物などが蓄積され易い。そのような場合一般的に、サイズ選択クロマトグラフィー分析（SEC）にて検出されうるステロイド化合物類由来の分子量の大きな副生成
物（分子量７００以上）の含有が問題となることがある。たとえば上述した糖質から醗酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料とする方法においては、明細書中に開示されている処方より精製処理法や回数を簡略化した場合、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸（ＤＫＣＡ）粗体中にステロイド化合物類の数量体またはステロイド化合物類の分解物の数量体程度の副生物（分子量７００以上）が最大で数１０％程度含まれる可能性がある。しかしながら、それらの除去方法に関してはまったく知られていない。
【００１０】
以上のように、ウルソデオキシコール酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸（７K）および３，７−ジオキソ−５β−コラン酸（ＤＫＣＡ）に関して、より高純度な単離品を得る手段が望まれている。
【００１１】
【特許文献１】特公昭５３−１００６３号公報
【特許文献２】特公昭５３−３５９４６号公報
【特許文献３】特開昭５５−１５４９９９号公報
【特許文献４】特開昭５６−３２５００号公報
【特許文献５】特開昭５８−１４６５９７号公報
【特許文献６】特開２００１−２６１６９６号公報
【特許文献７】特開昭５６−５９７９６号公報
【特許文献８】特開２００６−５６８７７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
ウルソデオキシコール酸（３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）を工業的に製造する際、（１）コール酸を原料とする一般的製法においては、副生物としてケノデオキシコール酸、３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、コール酸、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸などが知られており、また３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸も副生する可能性があり、（２）糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として、４位２重結合の還元飽和化による５β立体構築を行う工程を含む方法で製造する場合には、３、５および７位の立体化学の異なる異性体類が生成する。これらを効率的に単離精製するには、従来知られている方法では不十分であり、より高純度な単離品を得る手段が望まれている。即ち、本発明は、ウルソデオキシコール酸（３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）を工業的に製造する際に生じる不純物を除去して、ウルソデオキシコール酸を効率的に単離精製するための方法を提供することを解決すべき課題とした。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねた結果、不純物を含む粗ウルソデオキシコール酸（３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）を多孔質合成吸着剤と接触させて精製することにより、上述した不純物類を効率的に除去できることを見出し本発明を完成するに至った。即ち、本発明によれば、以下の発明が提供される。
【００１４】
（１） ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、および３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
（２） ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、ステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、高分子量体の含有量を１％未満とすることを特徴とする、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
【００１５】
（３） ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、５位の立体化学がα体であるステロイド化合物類を不純物として含み、さらに３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸および３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
（４） ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、（１）から（３）の何れかに記載の方法。
【００１６】
（５） ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、５位の立体化学がα体であるステロイド化合物類、３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、および３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸の製造方法。
（６） ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、ステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、高分子量体の含有量を１％未満とすることを特徴とする、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸の製造方法。
（７） ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、（５）又は（６）に記載の方法。
【００１７】
（８） ３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸の製造方法。
（９） ３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、ステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、高分子量体の含有量を１％未満とすることを特徴とする、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸の製造方法。
（１０） ３，７−ジオキソ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、（８）又は（９）に記載の方法。
（１１） ３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を、カルボン酸塩の状態にて多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸の製造方法。
（１２） ３，７−ジオキソ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、（１１）に記載の方法。
（１３） ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、および３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物を、カルボン酸塩の状態にて多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
（１４） ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、（１３）に記載の方法。
（１５） ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を、カルボン酸塩の状態にて多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸の製造方法。
（１６） ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、（１５）に記載の方法。
（１７） ３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を、カルボン酸塩の状態にて多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によれば、ウルソデオキシコール酸（３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）を工業的に製造する際に生じる不純物を除去して、ウルソデオキシコール酸を効率的に単離精製することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明の方法は、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸または３，７−ジオキソ−５β−コラン酸から選択される主成分に加えて、各種の不純物を含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする方法である。本発明で言う「不純物を除去する」とは、当該不純物が検出できなくなる程度まで除去する場合のみならず、多孔質合成吸着剤と接触させる前の混合物中に存在する不純物の一部を除去する場合も含むことを意味する。好ましくは、多孔質合成吸着剤と接触させて処理した後の混合物中に含まれる各不純物の含有量は２％未満であり、さらに好ましくは１％未満である。
【００２０】
（吸着処理される混合物）
本発明にて多孔質合成吸着剤によって処理される混合物とは、以下のようなものである。
（ａ） ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、および３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物；
（ｂ） ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、ステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物；
（ｃ） ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、５位の立体化学がα体であるステロイド化合物類を不純物として含み、さらに３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸および３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物；
【００２１】
（ｄ） ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、５位の立体化学がα体であるステロイド化合物類、３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、および３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物；
（ｅ） ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、ステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物；
【００２２】
（ｆ） ３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物；
（ｇ） ３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、ステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物；
（ｈ）３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、および３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物；
（ｉ）３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物；
【００２３】
なお、上記において、高分子量体の含有量は、例えば、１％以上のものを挙げることができる。ただし、高分子量体含有量の分析は、示差屈折計を検出器とするサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)で行うことができる。
【００２４】
上記（ａ）から（ｃ）に記載の混合物の具体例としては、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、５位の立体化学がα体であるステロイド化合物類、３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、およびステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物を挙げることができる。
【００２５】
上記（ｄ）及び（ｅ）に記載の混合物の具体例としては、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、５位の立体化学がα体であるステロイド化合物類、３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸、およびステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物を挙げることができる。
【００２６】
上記（ｆ）及び（ｇ）に記載の混合物の具体例としては、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸、およびステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物を挙げることができる。
上記（ｈ）に記載の混合物の具体例としては、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を挙げることができる。
上記（ｉ）に記載の混合物の具体例としては、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を挙げることができる。
【００２７】
これらの化合物混合物は、あらかじめ製造反応液から公知の方法により単離された粗生成物であっても、製造反応液を濃縮したままの粗固体であってもよい。さらには、製造反応液を分離に供することのできる溶媒組成に調製したものでも構わない。 また、カルボン酸の塩の状態に変換したものでも構わない。
以下に本発明で用いる化合物の構造と化合物名を示す。
【００２８】
【化１】
ａ： ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸：ウルソデオキシコール酸
【００２９】
【化２】
ｂ： ３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸：エピウルソデオキシコール酸
【００３０】
【化３】
ｃ： ３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸：ケノデオキシコール酸
【００３１】
【化４】
ｄ： ３α，７β−ジヒドロキシ−５α−コラン酸：アロウルソデオキシコール酸
【００３２】
【化５】
ｅ： ３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸：リトコール酸
【００３３】
【化６】
ｆ： ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸：７K
【００３４】
【化７】
ｇ： ３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸：エピ７K
【００３５】
【化８】
ｈ： ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５α−コラン酸：５α７K
【００３６】
【化９】
ｉ： ３，７−ジオキソ−５β−コラン酸：ＤＫＣＡ
【００３７】
【化１０】
j： ３−オキソ−５β−コラン酸：ケトリトコール酸
【００３８】
（多孔質合成吸着剤）
本発明にて使用される多孔質合成吸着剤とは、細孔を有する不溶性の三次元架橋構造をもつ合成樹脂粒子であり、たとえばスチレン−ジビニルベンゼンの共重合体、モノメタアクリレート−ジメタアクリレートの共重合体などが知られている。スチレン−ジビニルベンゼン系の合成吸着剤としては具体的に、「ダイヤイオン」（三菱化学社製）のＨＰ−１０、ＨＰ−２０、ＨＰ−２０ＳＳ、ＨＰ−２１、ＨＰ−３０、ＨＰ−４０、ＨＰ−５０や、「セパビーズ」（三菱化学社製）のＳＰ−８００、ＳＰ−８２５、セパビーズＳＰ−８５０、ＳＰ−８７５、ＳＰ−２０６、ＳＰ−２０７、「アンバーライト」（オルガノ社製）のＸＡＤ４、ＡＤ７ＨＰ、ＸＡＤ１６ＨＰ、ＸＡＤ１１８０、ＸＡＤ２０００などの商品を挙げることができる。また、モノメタアクリレート−ジメタアクリレート系の合成吸着剤としては、「ダイヤイオン」（三菱化学社製）のＨＰ１ＭＧ、ＨＰ２ＭＧ、「アンバーライト」（オルガノ社製）のＸＡＤ７などが挙げられる。
【００３９】
本発明で用いる多孔質合成吸着剤は、多孔性の架橋重合体であり、有意量の比表面積および細孔容積を有する。比表面積については１００ｍ2／ｇ以上、好ましくは４００ｍ2／ｇ以上を有し、細孔容積については０．１ｍＬ／ｇ以上、好ましくは０．５ｍＬ以上を有するものがよい。また平均粒子径は０．３〜１．０ｍｍ程度、見かけ比重０．６〜０．８ｇ／ｍｌ程度のものが用いられる。
【００４０】
（処理方法）
本発明における混合物と多孔質吸着剤との接触方法は、公知の方法、たとえば回分式、半回分式、連続式などで行うことができる。特に、連続的に大量の処理を行う場合には、カラムクロマトグラフィーが適している。具体的には、分離に供する混合物は、遊離酸の状態のまま、または予め混合物に塩基を加えてカルボン酸塩としたもの、をあらかじめ溶媒に溶解しこれを吸着剤に吸着させ、回分式・半回分式では溶媒で選択的に抽出分離し、カラムクロマトグラフィーの場合には溶媒で溶出させる。またカラムクロマトグラフィーでは、固定床式、流動床式、擬似移動床式などの一般的に知られている装置方式を任意に使用することができる。
【００４１】
接触処理に使用する溶媒としては、接触処理する混合物が溶解するものであればよく、具体的には、水、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、２−プロパノール、ｎ−ブタノールなどのアルコール類、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンなどのケトン類、テトラヒドロフラン、エチレングリコールジメチルエーテル、ジオキサンなどのエーテル類、アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類、ジメチルホルムアミド、アセトアミドなどのアミド類、ベンゼン、トルエンなどの芳香族炭化水素類、ヘキサン、ヘプタンなどの脂肪族炭化水素類、酢酸、プロピオン酸、トリフルオロ酢酸などの有機酸類、酢酸エチル、酢酸ブチルなどの有機酸エステル類、および水などの極性溶媒類があげられる。これらの溶媒は互いに混合可能であれば２種以上を混合して使用することもでき、混合比によって吸着分離能を高めることもできる。また溶媒の種類や混合比率を順次変更しながら使用してもよい。好ましくはアルコール類と水との混合溶媒、およびニトリル類と水との混合溶媒、およびケトン類と水との混合溶媒であり、より好ましくはメタノールと水、およびアセトニトリルと水、およびアセトンと水との混合溶媒である。
【００４２】
また溶媒に添加物を加えて使用することもできる。たとえばメタノールと水やアセトニトリルと水との混合溶媒に対して、ごく少量の酢酸やトリフルオロ酢酸を加え、吸着分離能を高めることもできる。好ましい添加量は溶媒に対し、０．０５〜１０容量％であり、より好ましくは０．０５〜１．０容量％である。
【００４３】
吸着剤の使用量には特に制限はないが、少なすぎると吸着分離能力が下がるため好ましくなく、多すぎると溶出させるための溶媒量が莫大なものとなるので好ましくない。よって適当な値に設置する必要があり、大まかな目安としては、分離に供する粗体の２〜１０００重量倍、好ましくは５〜５００重量倍、より好ましくは１０〜１００重量倍がよい。
【００４４】
接触処理を行う温度としては、０℃〜７０℃が好ましく、さらに好ましくは５℃〜５０℃の範囲内であることが望ましい。
【００４５】
接触時間については、吸着が十分平衡に到達するまでであれば特に制限はないが、カラムクロマトグラフィーを用いる場合には空間速度として、好ましくは０．０１［ｈ-1］〜１００［ｈ-1］、さらに好ましくは、０．１［ｈ-1］〜１０［ｈ-1］である。空間速度が１００［ｈ-1］より大きいと、不純物の除去が不十分となったり、破過が速くなるなどの問題が生じることがある。一方、空間速度が０．０１［ｈ-1］より小さいと、生産性が低下するなどの問題が生じることがある。
【００４６】
分離に供する混合物は、上述した溶媒に溶解して接触処理を行う。混合物溶液の濃度は処理温度において析出しない濃度であれば特に制限はない。
【００４７】
吸着処理する混合物溶液の量は、使用する吸着剤容量の１〜５０容積％、好ましくは２〜３０容積％、より好ましくは３〜２０容積％である。
【００４８】
(前処理)
また、分離に供する前に、混合物の前処理を行うことができる。前処理の例としては、酸や塩基による中和またはｐＨ調整処理、混合物溶液中不溶物のろ別処理、活性炭・活性白土などの吸着脱色処理などが例示される。
（後処理）
吸着分離精製された溶出液から、含有有機溶媒を濃縮して析出する固体を濾取するか、有機溶媒で分液抽出し、溶媒を留去することで目的物を取得できる。また、カルボン酸塩の状態にて吸着分離した場合は、酸性にしたのち、析出する固体を濾取するか、有機溶媒で分液抽出し、溶媒を留去することで目的物を取得できる。
【実施例】
【００４９】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はその要旨を超えない限り、以下の実施例に限定されるものではない。なお、精製前原料および分取物の分析は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）およびサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）にて行った。以下に分析条件を示す。
【００５０】
ＨＰＬＣ
カラム：ＭＣＩ ＧＥＬ ＯＤＳ−１ＨＵ ４．６ｍｍＩＤ×２５０ｍｍＬ （３５℃）
溶離液Ａ：アセトニトリル（５０ｖ／ｖ％）−Ｈ2Ｏ（５０ｖ／ｖ％）−トリフルオロ酢酸
（０．１ｖ／ｖ％） ０．５ｍｌ／ｍｉｎ
溶離液Ｂ：アセトニトリル（８０ｖ／ｖ％）−Ｈ2Ｏ（２０ｖ／ｖ％）
０．５ｍｌ／ｍｉｎ
検出器：示差屈折計（ＲＩ）
【００５１】
ＳＥＣ
カラム：ＴＯＳＯＨ ＴＳＫｇｅｌ Ｇ２０００ＨXL×２ （４０℃）
溶離液：１００％テトラヒドロフラン １ｍｌ／ｍｉｎ
検出器：示差屈折計（ＲＩ）
【００５２】
実施例１
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオンＨＰ２０ＳＳ）８ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これにＭｅＯＨ／水（７５／２５体積比）を流通させ十分置換した。特開２００６−５６８７７号公報に記載の方法および特開昭５２−７８８６３号公報、特開昭５２−７８８６４号公報、特開平５−３２６９２号公報に記載の方法で得た、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸７９．９％を主成分として含み、３α，７β−ジヒドロキシ−５α−コラン酸１．６％、３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸１．９％、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸３．８％、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸２．８％、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸４．９％、３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸１．４％（以上逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％）、および高分子量体１．２重量％（ＳＥＣ分析値）を不純物として含む混合物２０ｍｇを、ＭｅＯＨ／水（７５／２５体積比）０．３mＬで溶解させた溶液を上記吸着剤カラム上面に乗せ、ＭｅＯＨ／水を体積比７５／２５から７７．５／２２．５までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．４−０．８［ｈ-1］で流通させた。留出液の各分画留分を逆相（ＯＤＳ）ＨＰＬＣ分析し、体積比７７．５／２２．５の留分から３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を９８．８％、３α，７β−ジヒドロキシ−５α−コラン酸０．１％、３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸０．３％、３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸０．２％（以上逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％）の含有率で含む白色固体１４ｍｇを得た。またその固体中には高分子量体および、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸は検出されなかった。収率８６％。
【００５３】
実施例２
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオンＨＰ２０ＳＳ）８ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これにＭｅＯＨ／水（８５／１５体積比）を流通させ十分置換した。特開２００６−５６８７７号公報に記載の方法および特開昭５２−７８８６３号公報、特開昭５２−７８８６４号公報に記載の方法で得た、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸９０．８％を主成分として含み、３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸２．７％、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５α−コラン酸１．０％、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸２．５％（以上逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％）、および高分子量体１．７重量％（ＳＥＣ分析値）を不純物として含む混合物２０ｍｇを、ＭｅＯＨ／水（８５／１５体積比）０．４mＬで溶解させた溶液を上記吸着剤カラム上面に乗せ、ＭｅＯＨ／水を体積比８５／１５から１００／０までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．６［ｈ-1］で流通させた。留出液の各分画留分を逆相（ＯＤＳ）ＨＰＬＣ分析し、体積比８５／１５の留分から３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を９７．１％、３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を１．７％、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５α−コラン酸を０．２％の含有率で含む白色固体１７ｍｇを得た。またその固体中には高分子量体および、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸は検出されなかった。収率９５％。
【００５４】
実施例３
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオン ＨＰ２０）８ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これにアセトニトリル／水（４０／６０体積比）を流通させ十分置換した。特開２００６−５６８７７号公報に記載の方法で得た、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を６６．７％を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸２．２％（以上逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％）、および高分子量体５．２重量％（ＳＥＣ分析値）を不純物として含む混合物１５７ｍｇを、アセトニトリル／水（３０／７０体積比）０．６４mＬで溶解させた溶液を上記吸着剤カラム上面に乗せ、アセトニトリル／水を体積比４０／６０、空間速度（ＳＶ）＝０．６−２．０［ｈ-1］で流通させた。留出液の各分画留分を逆相（ＯＤＳ）ＨＰＬＣ分析し、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を８９．２％の含有率で含む白色固体９８ｍｇを得た。またその固体中には高分子量体および、３−オキソ−５β−コラン酸は検出されなかった。収率８６％。
【００５５】
実施例４
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオンＨＰ２０ＳＳ）１６ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これにアセトン／水（３３／６７体積比）を流通させ十分置換した。特開２００６−５６８７７号公報に記載の方法で得た、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸６３．２％を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸２．３％（以上逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％）、および高分子量体４．６重量％（ＳＥＣ分析値）を不純物として含む混合物１４４０ｍｇを、アセトン／水（４０／６０体積比）３．３６mＬで溶解させた溶液を上記吸着剤カラム上面に乗せ、アセトン／水を体積比５０／５０から６０／４０までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．３−０．９［ｈ-1］で流通させた。留出液の各分画留分を逆相（ＯＤＳ）ＨＰＬＣ分析し、体積比６０／４０の留分から３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を６６．８％の含有率で含む白色固体１１５２ｍｇを得た。またその固体中の高分子量体は０．７重量％であり、３−オキソ−５β−コラン酸は検出されなかった。収率９７％。
【００５６】
実施例５
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 セパビーズ ＳＰ８５０）８ｍL
をガラス製クロマト管へ充填し、これにアセトニトリル／水（４０／６０体積比）を流通させ十分置換した。特開２００６−５６８７７号公報に記載の方法で得た、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸６４．９％を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸１．１％（以上逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％）、および高分子量体５．５重量％（ＳＥＣ分析値）を不純物として含む混合物８５ｍｇを、アセトニトリル／水（４０／６０体積比）０．５４mＬで溶解させた溶液を上記吸着剤カラム上面に乗せ、アセトニトリル／水を体積比４０／６０から５５／４５までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．６［ｈ-1］で流通させた。留出液の各分画留分を逆相（ＯＤＳ）ＨＰＬＣ分析し、体積比５５／４５の留分から３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を８６％の含有率で含む白色固体４３ｍｇを得た。またその固体中の高分子量体は０．３重量％であり、３−オキソ−５β−コラン酸は検出されなかった。収率８３％。
【００５７】
実施例６
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオン ＨＰ２１）１６ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これにアセトン／水（３３／６７体積比）を流通させ十分置換した。特開２００６−５６８７７号公報に記載の方法で得た、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸６６．４％を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸２．３％（以上逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％）、および高分子量体４．６重量％（ＳＥＣ分析値）を不純物として含む混合物１１１２ｍｇを、アセトン／水（２５／７５体積比）２．４２mＬで溶解させた溶液を上記吸着剤カラム上面に乗せ、アセトン／水を体積比５０／５０から６０／４０までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．８−１．０［ｈ-1］で流通させた。留出液の各分画留分を逆相（ＯＤＳ）ＨＰＬＣ分析し、体積比６０／４０の留分から３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を７０．９％の含有率で含む白色固体９４７ｍｇを得た。またその固体中の高分子量体は０．４重量％であり、３−オキソ−５β−コラン酸は０．２％であった。収率９７％。
【００５８】
実施例７
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオン ＨＰ２０ＳＳ）１６ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これに水を流通させ十分置換した。特開２００６−５６８７７号公報に記載の方法で得た、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸６３．３％を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸２．９％（以上逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％）を不純物として含む混合物２２２９ｍｇを、トルエン２２ｍｌに溶解させ、水１１ｍｌで２回分液洗浄し、次いで３１３μＬのトリエチルアミンおよび水６ｍｌを加えて分液洗浄し、さらに１０１μＬのトリエチルアミンおよび水６ｍｌを加えて分液洗浄したトルエン溶液を、８８６ｍｇのＫ2ＣＯ3を含む水６．７ｍｌおよび水１ｍｌで順次抽出して得た、粗ＤＫＣＡのカリウム塩水溶液９．９２ｇのうち、８．２０ｇを上記吸着剤カラム上面に乗せ、アセトン／水を体積比０／１００から９０／１０までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．３−１．３［ｈ-1］で流通させた。留出液のアセトン／水の体積比０／１００〜２０／８０の留分を集めて、希硫酸を加えてｐＨ１にて析出した固体を濾取水洗し、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を８６．７％の含有率で含む白色固体１１２１ｍｇを得た。またその固体中には３−オキソ−５β−コラン酸は検出されなかった。収率８８％。
【００５９】
実施例８
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオン ＨＰ２０ＳＳ）１６ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これに水を流通させ十分置換した。特開２００６−５６８７７号公報に記載の方法で得た、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸６６．７％を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸２．２％（以上逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％）を不純物として含む混合物７１７ｍｇを、トルエン３ｍｌに溶解させ、２．３ｍｌのトリエチルアミンおよび水２ｍｌを加えて分液抽出し、残ったトルエン溶液にさらに２ｍｌの水を加えて再度分液抽出して得た、粗ＤＫＣＡのトリエチルアミン塩水溶液計約４ｍｌを上記吸着剤カラム上面に乗せ、アセトン／水を体積比０／１００から１００／０までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．５−１．５［ｈ-1］で流通させた。留出液のアセトン／水の体積比０／１００〜２０／８０の留分を集めて、希硫酸を加えてｐＨ１として酢酸エチルで抽出し、濃縮乾固して、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を７６．８％の含有率で含む白色固体６６８ｍｇを得た。またその固体中には３−オキソ−５β−コラン酸は検出されなかった。収率９７％。
【００６０】
実施例９
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオン ＨＰ２０ＳＳ）１３ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これに水を流通させ十分置換した。３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸２２ｍｇ、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸１２ｍｇ、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸２３０ｍｇの混合物に、水１．６５ｍｌおよび１４６ｍｇのＫ2ＣＯ3を加えて均一なカリウム塩混合物の水溶液としたものを、上記吸着剤カラム上面に乗せ、メタノール／水を体積比０／１００から９０／１０までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．４−１．３［ｈ-1］で流通させた。留出液のメタノール／水の体積比０／１００〜４０／６０の留分を集めて、減圧下にメタノールを留去し、これに希硫酸を加えてｐＨ１として析出した固体を濾取水洗し、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸１８８ｍｇを得た。この固体中には３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸のいずれも検出されなかった。収率８２％。
【００６１】
実施例１０
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオン ＨＰ２０ＳＳ）１３ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これに水を流通させ十分置換した。３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸２０ｍｇ、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸２４４ｍｇの混合物に、水１．６５ｍｌおよび１４１ｍｇのＫ2ＣＯ3を加えて均一なカリウム塩混合物の水溶液としたものを、上記吸着剤カラム上面に乗せ、メタノール／水を体積比０／１００から１００／０までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．５−１．３［ｈ-1］で流通させた。留出液のメタノール／水の体積比５０／５０〜６０／４０の留分を集めて、減圧下にメタノールを留去し、これに希硫酸を加えてｐＨ１として析出した固体を濾取水洗し、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸２１０ｍｇを得た。この固体中には３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸は検出されなかった。収率８６％。
【００６２】
実施例１１
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオン ＨＰ２０ＳＳ）１３ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これにメタノール／水（３０／７０体積比）を流通させ十分置換した。３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸２３ｍｇ、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸２４４ｍｇの混合物に、水１．６５ｍｌ、メタノール０．８ｍｌおよび１４１ｍｇのＫ2ＣＯ3を加えて均一なカリウム塩混合物の水溶液としたものを、上記吸着剤カラム上面に乗せ、メタノール／水を体積比３０／７０から１００／０までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．６−１．２［ｈ-1］で流通させた。留出液のメタノール／水の体積比６０／４０〜７０／３０の留分を集めて、減圧下にメタノールを留去し、これに希硫酸を加えてｐＨ１として析出した固体を濾取水洗し、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸２３５ｍｇを得た。この固体中には３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸は検出されなかった。収率９６％。
【００６３】
【表１】
【００６４】
表中の値は逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％（ａ〜j）
表中の値はＳＥＣ分析値、重量％（k）
【００６５】
ａ： ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸： ウルソデオキシコール酸
ｂ： ３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸： エピウルソデオキシコール酸
ｃ： ３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸： ケノデオキシコール酸
ｄ： ３α，７β−ジヒドロキシ−５α−コラン酸： アロウルソデオキシコール酸
ｅ： ３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸： リトコール酸
ｆ： ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸： ７K
ｇ： ３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸： エピ７K
ｈ： ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５α−コラン酸： ５α７K
ｉ： ３，７−ジオキソ−５β−コラン酸： ＤＫＣＡ
j： ３−オキソ−５β−コラン酸： ケトリトコール酸
k： 高分子量体
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウルソデオキシコール酸の製造方法に関する。より詳細には、多孔質合成吸着剤を用いて不純物を除去することを特徴とする、ウルソデオキシコール酸の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
医薬として有用なステロイド化合物であるウルソデオキシコール酸（３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）は、工業的にはコール酸を原料として、ケノデオキシコール酸（３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）から直接、または３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を経て製造されるが、不純物としてケノデオキシコール酸、３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、コール酸、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸などを含み、その純度は通常８０〜９５％である。
【０００３】
ウルソデオキシコール酸を精製する方法としては、（１）低級アルキルエステル化し、含水メタノールで再結晶、加水分解する方法（例えば、特許文献１を参照）、（２）メチルエステル化し、アルミナ・クロマトグラフィーを行う方法（例えば、特許文献２を参照）、（３）ナトリウム、又はリチウム塩とし、クロロホルム含有水溶液中で酸を加えて結晶を析出させる方法（例えば、特許文献３を参照）、（４）有機溶媒中、シリル化して結晶を析出させ、次いで塩酸で脱シリル化して酢酸エチルで結晶を析出させる方法（例えば、特許文献４を参照）、（５）ウルソデオキシコール酸とケノデオキシコール酸との混合物を水、または有機溶媒中に懸濁し、これにＮーメチルモルホリンを添加し不溶性酸を分離する方法（例えば、特許文献５を参照）、および（６）トリエチルアミンなどの塩として晶析などにより精製する方法（例えば、特許文献６を参照）が知られている。
【０００４】
また、（７）逆相系シリカゲルや合成吸着剤などによるクロマトグラフィーによる単離精製法も知られている。合成吸着剤を用いるウルソデオキシコール酸の精製方法では、粗ウルソデオキシコール酸中に含まれるコール酸やケノデオキシコール酸、リトコール酸が分離除去されている（例えば、特許文献７を参照）。
【０００５】
上記の（１）〜（６）のいずれの場合も、煩雑な操作を必要とし、また精製により得られてくる目的物の回収量や純度は必ずしも十分なものではない。また、（７）の場合には、記載されている不純物（コール酸やケノデオキシコール酸、リトコール酸）以外の除去についてはいっさい情報がなく、クロマトグラフィーの手法についても、誘導化原料を用いるなどの方法は知られていない。
【０００６】
一方、糖質から醗酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として、４位２重結合の還元飽和化による５β立体構築を鍵反応とする３，７−ジオキソ−５β−コラン酸（ＤＫＣＡ）の製造方法が知られている（例えば、特許文献８を参照）。この方法で得られる３，７−ジオキソ−５β−コラン酸（ＤＫＣＡ）粗生成物中には、４位２重結合の還元飽和化の際副生する５位の立体化学がαであるステロイド化合物類が不純物として混入する可能性がある。
【０００７】
また、この３，７−ジオキソ−５β−コラン酸（ＤＫＣＡ）を用い、公知の方法により３位および７位のオキソ基をヒドロキシ基へ還元して誘導できる３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸（７K）、およびウルソデオキシコール酸にも、同様な理由により、５αの立体化学を有するステロイド化合物類が不純物として含有される。
【０００８】
これらの５α異性体不純物類は、コール酸を由来とするウルソデオキシコール酸合成経路には含まれえないものであり、その分離除去に関しては、工業的に、簡便に実施できる方法はまったく知られていない。
【０００９】
さらには、原料や製法の違いによらず、工業的に大きなスケールで継続的なウルソデオキシコール酸の製造を行う際、多段階の合成工程間に毎回精製処理を実施することは製造コストの面から不利である。よって、精製処理の回数は限定されるため、各反応工程での副生成物や廃棄物などが蓄積され易い。そのような場合一般的に、サイズ選択クロマトグラフィー分析（SEC）にて検出されうるステロイド化合物類由来の分子量の大きな副生成
物（分子量７００以上）の含有が問題となることがある。たとえば上述した糖質から醗酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料とする方法においては、明細書中に開示されている処方より精製処理法や回数を簡略化した場合、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸（ＤＫＣＡ）粗体中にステロイド化合物類の数量体またはステロイド化合物類の分解物の数量体程度の副生物（分子量７００以上）が最大で数１０％程度含まれる可能性がある。しかしながら、それらの除去方法に関してはまったく知られていない。
【００１０】
以上のように、ウルソデオキシコール酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸（７K）および３，７−ジオキソ−５β−コラン酸（ＤＫＣＡ）に関して、より高純度な単離品を得る手段が望まれている。
【００１１】
【特許文献１】特公昭５３−１００６３号公報
【特許文献２】特公昭５３−３５９４６号公報
【特許文献３】特開昭５５−１５４９９９号公報
【特許文献４】特開昭５６−３２５００号公報
【特許文献５】特開昭５８−１４６５９７号公報
【特許文献６】特開２００１−２６１６９６号公報
【特許文献７】特開昭５６−５９７９６号公報
【特許文献８】特開２００６−５６８７７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
ウルソデオキシコール酸（３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）を工業的に製造する際、（１）コール酸を原料とする一般的製法においては、副生物としてケノデオキシコール酸、３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、コール酸、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸などが知られており、また３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸も副生する可能性があり、（２）糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として、４位２重結合の還元飽和化による５β立体構築を行う工程を含む方法で製造する場合には、３、５および７位の立体化学の異なる異性体類が生成する。これらを効率的に単離精製するには、従来知られている方法では不十分であり、より高純度な単離品を得る手段が望まれている。即ち、本発明は、ウルソデオキシコール酸（３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）を工業的に製造する際に生じる不純物を除去して、ウルソデオキシコール酸を効率的に単離精製するための方法を提供することを解決すべき課題とした。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねた結果、不純物を含む粗ウルソデオキシコール酸（３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）を多孔質合成吸着剤と接触させて精製することにより、上述した不純物類を効率的に除去できることを見出し本発明を完成するに至った。即ち、本発明によれば、以下の発明が提供される。
【００１４】
（１） ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、および３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
（２） ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、ステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、高分子量体の含有量を１％未満とすることを特徴とする、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
【００１５】
（３） ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、５位の立体化学がα体であるステロイド化合物類を不純物として含み、さらに３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸および３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
（４） ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、（１）から（３）の何れかに記載の方法。
【００１６】
（５） ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、５位の立体化学がα体であるステロイド化合物類、３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、および３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸の製造方法。
（６） ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、ステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、高分子量体の含有量を１％未満とすることを特徴とする、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸の製造方法。
（７） ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、（５）又は（６）に記載の方法。
【００１７】
（８） ３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸の製造方法。
（９） ３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、ステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、高分子量体の含有量を１％未満とすることを特徴とする、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸の製造方法。
（１０） ３，７−ジオキソ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、（８）又は（９）に記載の方法。
（１１） ３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を、カルボン酸塩の状態にて多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸の製造方法。
（１２） ３，７−ジオキソ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、（１１）に記載の方法。
（１３） ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、および３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物を、カルボン酸塩の状態にて多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
（１４） ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、（１３）に記載の方法。
（１５） ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を、カルボン酸塩の状態にて多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸の製造方法。
（１６） ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、（１５）に記載の方法。
（１７） ３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を、カルボン酸塩の状態にて多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によれば、ウルソデオキシコール酸（３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸）を工業的に製造する際に生じる不純物を除去して、ウルソデオキシコール酸を効率的に単離精製することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明の方法は、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸または３，７−ジオキソ−５β−コラン酸から選択される主成分に加えて、各種の不純物を含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする方法である。本発明で言う「不純物を除去する」とは、当該不純物が検出できなくなる程度まで除去する場合のみならず、多孔質合成吸着剤と接触させる前の混合物中に存在する不純物の一部を除去する場合も含むことを意味する。好ましくは、多孔質合成吸着剤と接触させて処理した後の混合物中に含まれる各不純物の含有量は２％未満であり、さらに好ましくは１％未満である。
【００２０】
（吸着処理される混合物）
本発明にて多孔質合成吸着剤によって処理される混合物とは、以下のようなものである。
（ａ） ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、および３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物；
（ｂ） ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、ステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物；
（ｃ） ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、５位の立体化学がα体であるステロイド化合物類を不純物として含み、さらに３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸および３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物；
【００２１】
（ｄ） ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、５位の立体化学がα体であるステロイド化合物類、３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、および３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物；
（ｅ） ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、ステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物；
【００２２】
（ｆ） ３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物；
（ｇ） ３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、ステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物；
（ｈ）３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、および３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物；
（ｉ）３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物；
【００２３】
なお、上記において、高分子量体の含有量は、例えば、１％以上のものを挙げることができる。ただし、高分子量体含有量の分析は、示差屈折計を検出器とするサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)で行うことができる。
【００２４】
上記（ａ）から（ｃ）に記載の混合物の具体例としては、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、５位の立体化学がα体であるステロイド化合物類、３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、およびステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物を挙げることができる。
【００２５】
上記（ｄ）及び（ｅ）に記載の混合物の具体例としては、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、５位の立体化学がα体であるステロイド化合物類、３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸、およびステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物を挙げることができる。
【００２６】
上記（ｆ）及び（ｇ）に記載の混合物の具体例としては、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸、およびステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物を挙げることができる。
上記（ｈ）に記載の混合物の具体例としては、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を挙げることができる。
上記（ｉ）に記載の混合物の具体例としては、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を挙げることができる。
【００２７】
これらの化合物混合物は、あらかじめ製造反応液から公知の方法により単離された粗生成物であっても、製造反応液を濃縮したままの粗固体であってもよい。さらには、製造反応液を分離に供することのできる溶媒組成に調製したものでも構わない。 また、カルボン酸の塩の状態に変換したものでも構わない。
以下に本発明で用いる化合物の構造と化合物名を示す。
【００２８】
【化１】
ａ： ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸：ウルソデオキシコール酸
【００２９】
【化２】
ｂ： ３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸：エピウルソデオキシコール酸
【００３０】
【化３】
ｃ： ３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸：ケノデオキシコール酸
【００３１】
【化４】
ｄ： ３α，７β−ジヒドロキシ−５α−コラン酸：アロウルソデオキシコール酸
【００３２】
【化５】
ｅ： ３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸：リトコール酸
【００３３】
【化６】
ｆ： ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸：７K
【００３４】
【化７】
ｇ： ３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸：エピ７K
【００３５】
【化８】
ｈ： ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５α−コラン酸：５α７K
【００３６】
【化９】
ｉ： ３，７−ジオキソ−５β−コラン酸：ＤＫＣＡ
【００３７】
【化１０】
j： ３−オキソ−５β−コラン酸：ケトリトコール酸
【００３８】
（多孔質合成吸着剤）
本発明にて使用される多孔質合成吸着剤とは、細孔を有する不溶性の三次元架橋構造をもつ合成樹脂粒子であり、たとえばスチレン−ジビニルベンゼンの共重合体、モノメタアクリレート−ジメタアクリレートの共重合体などが知られている。スチレン−ジビニルベンゼン系の合成吸着剤としては具体的に、「ダイヤイオン」（三菱化学社製）のＨＰ−１０、ＨＰ−２０、ＨＰ−２０ＳＳ、ＨＰ−２１、ＨＰ−３０、ＨＰ−４０、ＨＰ−５０や、「セパビーズ」（三菱化学社製）のＳＰ−８００、ＳＰ−８２５、セパビーズＳＰ−８５０、ＳＰ−８７５、ＳＰ−２０６、ＳＰ−２０７、「アンバーライト」（オルガノ社製）のＸＡＤ４、ＡＤ７ＨＰ、ＸＡＤ１６ＨＰ、ＸＡＤ１１８０、ＸＡＤ２０００などの商品を挙げることができる。また、モノメタアクリレート−ジメタアクリレート系の合成吸着剤としては、「ダイヤイオン」（三菱化学社製）のＨＰ１ＭＧ、ＨＰ２ＭＧ、「アンバーライト」（オルガノ社製）のＸＡＤ７などが挙げられる。
【００３９】
本発明で用いる多孔質合成吸着剤は、多孔性の架橋重合体であり、有意量の比表面積および細孔容積を有する。比表面積については１００ｍ2／ｇ以上、好ましくは４００ｍ2／ｇ以上を有し、細孔容積については０．１ｍＬ／ｇ以上、好ましくは０．５ｍＬ以上を有するものがよい。また平均粒子径は０．３〜１．０ｍｍ程度、見かけ比重０．６〜０．８ｇ／ｍｌ程度のものが用いられる。
【００４０】
（処理方法）
本発明における混合物と多孔質吸着剤との接触方法は、公知の方法、たとえば回分式、半回分式、連続式などで行うことができる。特に、連続的に大量の処理を行う場合には、カラムクロマトグラフィーが適している。具体的には、分離に供する混合物は、遊離酸の状態のまま、または予め混合物に塩基を加えてカルボン酸塩としたもの、をあらかじめ溶媒に溶解しこれを吸着剤に吸着させ、回分式・半回分式では溶媒で選択的に抽出分離し、カラムクロマトグラフィーの場合には溶媒で溶出させる。またカラムクロマトグラフィーでは、固定床式、流動床式、擬似移動床式などの一般的に知られている装置方式を任意に使用することができる。
【００４１】
接触処理に使用する溶媒としては、接触処理する混合物が溶解するものであればよく、具体的には、水、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、２−プロパノール、ｎ−ブタノールなどのアルコール類、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンなどのケトン類、テトラヒドロフラン、エチレングリコールジメチルエーテル、ジオキサンなどのエーテル類、アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類、ジメチルホルムアミド、アセトアミドなどのアミド類、ベンゼン、トルエンなどの芳香族炭化水素類、ヘキサン、ヘプタンなどの脂肪族炭化水素類、酢酸、プロピオン酸、トリフルオロ酢酸などの有機酸類、酢酸エチル、酢酸ブチルなどの有機酸エステル類、および水などの極性溶媒類があげられる。これらの溶媒は互いに混合可能であれば２種以上を混合して使用することもでき、混合比によって吸着分離能を高めることもできる。また溶媒の種類や混合比率を順次変更しながら使用してもよい。好ましくはアルコール類と水との混合溶媒、およびニトリル類と水との混合溶媒、およびケトン類と水との混合溶媒であり、より好ましくはメタノールと水、およびアセトニトリルと水、およびアセトンと水との混合溶媒である。
【００４２】
また溶媒に添加物を加えて使用することもできる。たとえばメタノールと水やアセトニトリルと水との混合溶媒に対して、ごく少量の酢酸やトリフルオロ酢酸を加え、吸着分離能を高めることもできる。好ましい添加量は溶媒に対し、０．０５〜１０容量％であり、より好ましくは０．０５〜１．０容量％である。
【００４３】
吸着剤の使用量には特に制限はないが、少なすぎると吸着分離能力が下がるため好ましくなく、多すぎると溶出させるための溶媒量が莫大なものとなるので好ましくない。よって適当な値に設置する必要があり、大まかな目安としては、分離に供する粗体の２〜１０００重量倍、好ましくは５〜５００重量倍、より好ましくは１０〜１００重量倍がよい。
【００４４】
接触処理を行う温度としては、０℃〜７０℃が好ましく、さらに好ましくは５℃〜５０℃の範囲内であることが望ましい。
【００４５】
接触時間については、吸着が十分平衡に到達するまでであれば特に制限はないが、カラムクロマトグラフィーを用いる場合には空間速度として、好ましくは０．０１［ｈ-1］〜１００［ｈ-1］、さらに好ましくは、０．１［ｈ-1］〜１０［ｈ-1］である。空間速度が１００［ｈ-1］より大きいと、不純物の除去が不十分となったり、破過が速くなるなどの問題が生じることがある。一方、空間速度が０．０１［ｈ-1］より小さいと、生産性が低下するなどの問題が生じることがある。
【００４６】
分離に供する混合物は、上述した溶媒に溶解して接触処理を行う。混合物溶液の濃度は処理温度において析出しない濃度であれば特に制限はない。
【００４７】
吸着処理する混合物溶液の量は、使用する吸着剤容量の１〜５０容積％、好ましくは２〜３０容積％、より好ましくは３〜２０容積％である。
【００４８】
(前処理)
また、分離に供する前に、混合物の前処理を行うことができる。前処理の例としては、酸や塩基による中和またはｐＨ調整処理、混合物溶液中不溶物のろ別処理、活性炭・活性白土などの吸着脱色処理などが例示される。
（後処理）
吸着分離精製された溶出液から、含有有機溶媒を濃縮して析出する固体を濾取するか、有機溶媒で分液抽出し、溶媒を留去することで目的物を取得できる。また、カルボン酸塩の状態にて吸着分離した場合は、酸性にしたのち、析出する固体を濾取するか、有機溶媒で分液抽出し、溶媒を留去することで目的物を取得できる。
【実施例】
【００４９】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はその要旨を超えない限り、以下の実施例に限定されるものではない。なお、精製前原料および分取物の分析は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）およびサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）にて行った。以下に分析条件を示す。
【００５０】
ＨＰＬＣ
カラム：ＭＣＩ ＧＥＬ ＯＤＳ−１ＨＵ ４．６ｍｍＩＤ×２５０ｍｍＬ （３５℃）
溶離液Ａ：アセトニトリル（５０ｖ／ｖ％）−Ｈ2Ｏ（５０ｖ／ｖ％）−トリフルオロ酢酸
（０．１ｖ／ｖ％） ０．５ｍｌ／ｍｉｎ
溶離液Ｂ：アセトニトリル（８０ｖ／ｖ％）−Ｈ2Ｏ（２０ｖ／ｖ％）
０．５ｍｌ／ｍｉｎ
検出器：示差屈折計（ＲＩ）
【００５１】
ＳＥＣ
カラム：ＴＯＳＯＨ ＴＳＫｇｅｌ Ｇ２０００ＨXL×２ （４０℃）
溶離液：１００％テトラヒドロフラン １ｍｌ／ｍｉｎ
検出器：示差屈折計（ＲＩ）
【００５２】
実施例１
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオンＨＰ２０ＳＳ）８ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これにＭｅＯＨ／水（７５／２５体積比）を流通させ十分置換した。特開２００６−５６８７７号公報に記載の方法および特開昭５２−７８８６３号公報、特開昭５２−７８８６４号公報、特開平５−３２６９２号公報に記載の方法で得た、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸７９．９％を主成分として含み、３α，７β−ジヒドロキシ−５α−コラン酸１．６％、３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸１．９％、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸３．８％、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸２．８％、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸４．９％、３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸１．４％（以上逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％）、および高分子量体１．２重量％（ＳＥＣ分析値）を不純物として含む混合物２０ｍｇを、ＭｅＯＨ／水（７５／２５体積比）０．３mＬで溶解させた溶液を上記吸着剤カラム上面に乗せ、ＭｅＯＨ／水を体積比７５／２５から７７．５／２２．５までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．４−０．８［ｈ-1］で流通させた。留出液の各分画留分を逆相（ＯＤＳ）ＨＰＬＣ分析し、体積比７７．５／２２．５の留分から３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を９８．８％、３α，７β−ジヒドロキシ−５α−コラン酸０．１％、３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸０．３％、３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸０．２％（以上逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％）の含有率で含む白色固体１４ｍｇを得た。またその固体中には高分子量体および、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸は検出されなかった。収率８６％。
【００５３】
実施例２
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオンＨＰ２０ＳＳ）８ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これにＭｅＯＨ／水（８５／１５体積比）を流通させ十分置換した。特開２００６−５６８７７号公報に記載の方法および特開昭５２−７８８６３号公報、特開昭５２−７８８６４号公報に記載の方法で得た、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸９０．８％を主成分として含み、３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸２．７％、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５α−コラン酸１．０％、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸２．５％（以上逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％）、および高分子量体１．７重量％（ＳＥＣ分析値）を不純物として含む混合物２０ｍｇを、ＭｅＯＨ／水（８５／１５体積比）０．４mＬで溶解させた溶液を上記吸着剤カラム上面に乗せ、ＭｅＯＨ／水を体積比８５／１５から１００／０までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．６［ｈ-1］で流通させた。留出液の各分画留分を逆相（ＯＤＳ）ＨＰＬＣ分析し、体積比８５／１５の留分から３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を９７．１％、３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を１．７％、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５α−コラン酸を０．２％の含有率で含む白色固体１７ｍｇを得た。またその固体中には高分子量体および、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸は検出されなかった。収率９５％。
【００５４】
実施例３
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオン ＨＰ２０）８ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これにアセトニトリル／水（４０／６０体積比）を流通させ十分置換した。特開２００６−５６８７７号公報に記載の方法で得た、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を６６．７％を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸２．２％（以上逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％）、および高分子量体５．２重量％（ＳＥＣ分析値）を不純物として含む混合物１５７ｍｇを、アセトニトリル／水（３０／７０体積比）０．６４mＬで溶解させた溶液を上記吸着剤カラム上面に乗せ、アセトニトリル／水を体積比４０／６０、空間速度（ＳＶ）＝０．６−２．０［ｈ-1］で流通させた。留出液の各分画留分を逆相（ＯＤＳ）ＨＰＬＣ分析し、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を８９．２％の含有率で含む白色固体９８ｍｇを得た。またその固体中には高分子量体および、３−オキソ−５β−コラン酸は検出されなかった。収率８６％。
【００５５】
実施例４
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオンＨＰ２０ＳＳ）１６ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これにアセトン／水（３３／６７体積比）を流通させ十分置換した。特開２００６−５６８７７号公報に記載の方法で得た、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸６３．２％を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸２．３％（以上逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％）、および高分子量体４．６重量％（ＳＥＣ分析値）を不純物として含む混合物１４４０ｍｇを、アセトン／水（４０／６０体積比）３．３６mＬで溶解させた溶液を上記吸着剤カラム上面に乗せ、アセトン／水を体積比５０／５０から６０／４０までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．３−０．９［ｈ-1］で流通させた。留出液の各分画留分を逆相（ＯＤＳ）ＨＰＬＣ分析し、体積比６０／４０の留分から３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を６６．８％の含有率で含む白色固体１１５２ｍｇを得た。またその固体中の高分子量体は０．７重量％であり、３−オキソ−５β−コラン酸は検出されなかった。収率９７％。
【００５６】
実施例５
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 セパビーズ ＳＰ８５０）８ｍL
をガラス製クロマト管へ充填し、これにアセトニトリル／水（４０／６０体積比）を流通させ十分置換した。特開２００６−５６８７７号公報に記載の方法で得た、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸６４．９％を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸１．１％（以上逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％）、および高分子量体５．５重量％（ＳＥＣ分析値）を不純物として含む混合物８５ｍｇを、アセトニトリル／水（４０／６０体積比）０．５４mＬで溶解させた溶液を上記吸着剤カラム上面に乗せ、アセトニトリル／水を体積比４０／６０から５５／４５までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．６［ｈ-1］で流通させた。留出液の各分画留分を逆相（ＯＤＳ）ＨＰＬＣ分析し、体積比５５／４５の留分から３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を８６％の含有率で含む白色固体４３ｍｇを得た。またその固体中の高分子量体は０．３重量％であり、３−オキソ−５β−コラン酸は検出されなかった。収率８３％。
【００５７】
実施例６
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオン ＨＰ２１）１６ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これにアセトン／水（３３／６７体積比）を流通させ十分置換した。特開２００６−５６８７７号公報に記載の方法で得た、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸６６．４％を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸２．３％（以上逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％）、および高分子量体４．６重量％（ＳＥＣ分析値）を不純物として含む混合物１１１２ｍｇを、アセトン／水（２５／７５体積比）２．４２mＬで溶解させた溶液を上記吸着剤カラム上面に乗せ、アセトン／水を体積比５０／５０から６０／４０までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．８−１．０［ｈ-1］で流通させた。留出液の各分画留分を逆相（ＯＤＳ）ＨＰＬＣ分析し、体積比６０／４０の留分から３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を７０．９％の含有率で含む白色固体９４７ｍｇを得た。またその固体中の高分子量体は０．４重量％であり、３−オキソ−５β−コラン酸は０．２％であった。収率９７％。
【００５８】
実施例７
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオン ＨＰ２０ＳＳ）１６ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これに水を流通させ十分置換した。特開２００６−５６８７７号公報に記載の方法で得た、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸６３．３％を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸２．９％（以上逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％）を不純物として含む混合物２２２９ｍｇを、トルエン２２ｍｌに溶解させ、水１１ｍｌで２回分液洗浄し、次いで３１３μＬのトリエチルアミンおよび水６ｍｌを加えて分液洗浄し、さらに１０１μＬのトリエチルアミンおよび水６ｍｌを加えて分液洗浄したトルエン溶液を、８８６ｍｇのＫ2ＣＯ3を含む水６．７ｍｌおよび水１ｍｌで順次抽出して得た、粗ＤＫＣＡのカリウム塩水溶液９．９２ｇのうち、８．２０ｇを上記吸着剤カラム上面に乗せ、アセトン／水を体積比０／１００から９０／１０までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．３−１．３［ｈ-1］で流通させた。留出液のアセトン／水の体積比０／１００〜２０／８０の留分を集めて、希硫酸を加えてｐＨ１にて析出した固体を濾取水洗し、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を８６．７％の含有率で含む白色固体１１２１ｍｇを得た。またその固体中には３−オキソ−５β−コラン酸は検出されなかった。収率８８％。
【００５９】
実施例８
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオン ＨＰ２０ＳＳ）１６ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これに水を流通させ十分置換した。特開２００６−５６８７７号公報に記載の方法で得た、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸６６．７％を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸２．２％（以上逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％）を不純物として含む混合物７１７ｍｇを、トルエン３ｍｌに溶解させ、２．３ｍｌのトリエチルアミンおよび水２ｍｌを加えて分液抽出し、残ったトルエン溶液にさらに２ｍｌの水を加えて再度分液抽出して得た、粗ＤＫＣＡのトリエチルアミン塩水溶液計約４ｍｌを上記吸着剤カラム上面に乗せ、アセトン／水を体積比０／１００から１００／０までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．５−１．５［ｈ-1］で流通させた。留出液のアセトン／水の体積比０／１００〜２０／８０の留分を集めて、希硫酸を加えてｐＨ１として酢酸エチルで抽出し、濃縮乾固して、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を７６．８％の含有率で含む白色固体６６８ｍｇを得た。またその固体中には３−オキソ−５β−コラン酸は検出されなかった。収率９７％。
【００６０】
実施例９
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオン ＨＰ２０ＳＳ）１３ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これに水を流通させ十分置換した。３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸２２ｍｇ、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸１２ｍｇ、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸２３０ｍｇの混合物に、水１．６５ｍｌおよび１４６ｍｇのＫ2ＣＯ3を加えて均一なカリウム塩混合物の水溶液としたものを、上記吸着剤カラム上面に乗せ、メタノール／水を体積比０／１００から９０／１０までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．４−１．３［ｈ-1］で流通させた。留出液のメタノール／水の体積比０／１００〜４０／６０の留分を集めて、減圧下にメタノールを留去し、これに希硫酸を加えてｐＨ１として析出した固体を濾取水洗し、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸１８８ｍｇを得た。この固体中には３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸のいずれも検出されなかった。収率８２％。
【００６１】
実施例１０
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオン ＨＰ２０ＳＳ）１３ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これに水を流通させ十分置換した。３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸２０ｍｇ、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸２４４ｍｇの混合物に、水１．６５ｍｌおよび１４１ｍｇのＫ2ＣＯ3を加えて均一なカリウム塩混合物の水溶液としたものを、上記吸着剤カラム上面に乗せ、メタノール／水を体積比０／１００から１００／０までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．５−１．３［ｈ-1］で流通させた。留出液のメタノール／水の体積比５０／５０〜６０／４０の留分を集めて、減圧下にメタノールを留去し、これに希硫酸を加えてｐＨ１として析出した固体を濾取水洗し、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸２１０ｍｇを得た。この固体中には３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸は検出されなかった。収率８６％。
【００６２】
実施例１１
ポリスチレン系多孔質合成吸着剤（三菱化学（株）製 ダイヤイオン ＨＰ２０ＳＳ）１３ｍLをガラス製クロマト管へ充填し、これにメタノール／水（３０／７０体積比）を流通させ十分置換した。３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸２３ｍｇ、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸２４４ｍｇの混合物に、水１．６５ｍｌ、メタノール０．８ｍｌおよび１４１ｍｇのＫ2ＣＯ3を加えて均一なカリウム塩混合物の水溶液としたものを、上記吸着剤カラム上面に乗せ、メタノール／水を体積比３０／７０から１００／０までグラジエントさせながら空間速度（ＳＶ）＝０．６−１．２［ｈ-1］で流通させた。留出液のメタノール／水の体積比６０／４０〜７０／３０の留分を集めて、減圧下にメタノールを留去し、これに希硫酸を加えてｐＨ１として析出した固体を濾取水洗し、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸２３５ｍｇを得た。この固体中には３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸は検出されなかった。収率９６％。
【００６３】
【表１】
【００６４】
表中の値は逆相ＨＰＬＣ分析値、面積％（ａ〜j）
表中の値はＳＥＣ分析値、重量％（k）
【００６５】
ａ： ３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸： ウルソデオキシコール酸
ｂ： ３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸： エピウルソデオキシコール酸
ｃ： ３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸： ケノデオキシコール酸
ｄ： ３α，７β−ジヒドロキシ−５α−コラン酸： アロウルソデオキシコール酸
ｅ： ３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸： リトコール酸
ｆ： ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸： ７K
ｇ： ３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸： エピ７K
ｈ： ３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５α−コラン酸： ５α７K
ｉ： ３，７−ジオキソ−５β−コラン酸： ＤＫＣＡ
j： ３−オキソ−５β−コラン酸： ケトリトコール酸
k： 高分子量体
【特許請求の範囲】
【請求項１】
３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、および３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項２】
３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、ステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、高分子量体の含有量を１％未満とすることを特徴とする、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項３】
３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、５位の立体化学がα体であるステロイド化合物類を不純物として含み、さらに３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸および３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項４】
３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、請求項１から３の何れかに記載の方法。
【請求項５】
３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、５位の立体化学がα体であるステロイド化合物類、３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、および３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項６】
３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、ステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、高分子量体の含有量を１％未満とすることを特徴とする、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項７】
３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、請求項５又は６に記載の方法。
【請求項８】
３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項９】
３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、ステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、高分子量体の含有量を１％未満とすることを特徴とする、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項１０】
３，７−ジオキソ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、請求項８又は９に記載の方法。
【請求項１１】
３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を、カルボン酸塩の状態にて多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項１２】
３，７−ジオキソ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、および３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物を、カルボン酸塩の状態にて多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項１４】
３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を、カルボン酸塩の状態にて多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項１６】
３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を、カルボン酸塩の状態にて多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項１】
３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、および３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項２】
３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、ステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、高分子量体の含有量を１％未満とすることを特徴とする、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項３】
３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、５位の立体化学がα体であるステロイド化合物類を不純物として含み、さらに３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸および３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項４】
３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、請求項１から３の何れかに記載の方法。
【請求項５】
３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、５位の立体化学がα体であるステロイド化合物類、３β−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸、および３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項６】
３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、ステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、高分子量体の含有量を１％未満とすることを特徴とする、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項７】
３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、請求項５又は６に記載の方法。
【請求項８】
３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項９】
３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、ステロイド化合物類由来の分子量７００以上の高分子量体を不純物として含む混合物を、多孔質合成吸着剤と接触させて、高分子量体の含有量を１％未満とすることを特徴とする、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項１０】
３，７−ジオキソ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、請求項８又は９に記載の方法。
【請求項１１】
３，７−ジオキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、３−オキソ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を、カルボン酸塩の状態にて多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３，７−ジオキソ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項１２】
３，７−ジオキソ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸、および３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸からなる群から選択される少なくとも１種以上を不純物として含む混合物を、カルボン酸塩の状態にて多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項１４】
３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を、カルボン酸塩の状態にて多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸の製造方法。
【請求項１６】
３α−ヒドロキシ−７−オキソ−５β−コラン酸が、糖質から発酵法で生成された炭素数２２以上のステロイド化合物を原料として得られたものである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸を主成分として含み、３α−ヒドロキシ−５β−コラン酸を不純物として含む混合物を、カルボン酸塩の状態にて多孔質合成吸着剤と接触させて、上記不純物を除去することを特徴とする、３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン酸の製造方法。
【公開番号】特開２００９−８４２７５（Ｐ２００９−８４２７５Ａ）
【公開日】平成２１年４月２３日（２００９．４．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２３４２１６（Ｐ２００８−２３４２１６）
【出願日】平成２０年９月１２日（２００８．９．１２）
【出願人】（０００００５９６８）三菱化学株式会社 (4,356)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年４月２３日（２００９．４．２３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年９月１２日（２００８．９．１２）
【出願人】（０００００５９６８）三菱化学株式会社 (4,356)
【Ｆターム（参考）】
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