ガングリオシドおよびガングリオシド模倣物の生合成のためのＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒグリコシルトランスフェラーゼ
【課題】大規模生産に受け入れられるガングリオシド合成に関与する新規の酵素、およびガングリオシドを合成するためのより有効な方法を提供すること。
【解決手段】原核生物のグリコシルトランスフェラーゼ酵素、原核生物のグリコシルトランスフェラーゼ酵素をコードする核酸、ガングリオシドを合成するための上記原核生物のグリコシルトランスフェラーゼ酵素を使用する方法、およびガングリオシドを合成するための上記原核生物のグリコシルトランスフェラーゼ酵素をコードする核酸を使用する方法。
【解決手段】原核生物のグリコシルトランスフェラーゼ酵素、原核生物のグリコシルトランスフェラーゼ酵素をコードする核酸、ガングリオシドを合成するための上記原核生物のグリコシルトランスフェラーゼ酵素を使用する方法、およびガングリオシドを合成するための上記原核生物のグリコシルトランスフェラーゼ酵素をコードする核酸を使用する方法。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された核酸分子または組換え核酸分子であって、該核酸分子は、
β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列
を含み、該ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドは、配列番号１３に示されるアミノ酸配列と少なくとも約７７％同一であるアミノ酸配列を含む、
核酸分子。
【請求項２】
請求項１に記載の核酸分子であって、
前記ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドは、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む、
核酸分子。
【請求項３】
請求項１に記載の核酸分子であって、
前記β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１２に示される核酸配列と少なくとも約７５％同一である、
核酸分子。
【請求項４】
請求項１に記載の核酸分子であって、
前記ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１２に示される核酸配列を有する、
核酸分子。
【請求項５】
請求項１に記載の単離された核酸分子または組換え核酸分子であって、該核酸は、
β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼ活性を有するＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列
を含み、該ポリヌクレオチド配列は、配列番号１２と少なくとも８５％同一である、
核酸分子。
【請求項６】
請求項１に記載の単離された核酸分子または組換え核酸分子であって、該核酸は、
β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼ活性を有するＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列
を含み、該ポリヌクレオチド配列は、配列番号１２と少なくとも９５％同一である、
核酸分子。
【請求項７】
請求項１に記載の核酸分子を含む、発現カセット。
【請求項８】
請求項７に記載の発現カセットを含む、発現ベクター。
【請求項９】
請求項８に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項１０】
β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼ活性を有する、単離されたポリペプチドまたは組換え産生されたポリペプチドであって、
該ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドは、配列番号１３に示されるアミノ酸配列と少なくとも約７７％同一であるアミノ酸配列を含む、
ポリペプチド。
【請求項１１】
組換え産生されかつ少なくとも部分精製されている、請求項１０に記載の単離されたポリペプチドまたは組換え産生されたポリペプチド。
【請求項１２】
異種宿主細胞によって発現された、請求項１０に記載の単離されたポリペプチドまたは組換えポリペプチド。
【請求項１３】
前記宿主細胞がＥ．ｃｏｌｉである、請求項１２に記載の単離されたポリペプチドまたは組換え産生されたポリペプチド。
【請求項１４】
前記β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドが、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を有する、請求項１０に記載の単離されたポリペプチドまたは組換え産生されたポリペプチド。
【請求項１５】
前記β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドが、配列番号１３と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１０に記載の単離されたポリペプチドまたは組換え産生されたポリペプチド。
【請求項１６】
前記β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドが、配列番号１３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１０に記載の単離されたポリペプチドまたは組換え産生されたポリペプチド。
【請求項１７】
ＧａｌＮＡｃ残基を含むオリゴサッカリドを生成するための方法であって、該方法は、
アクセプターサッカリドを、ＵＤＰ−ＧａｌＮＡｃおよびβ１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドと接触させる工程；
を包含し、該β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドは、配列番号１３と少なくとも約７７％同一であるアミノ酸配列を含み、該β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドは、該ＧａｌＮＡｃ残基を、該ＵＤＰ−ＧａｌＮＡｃから該アクセプターサッカリドへと転移させて、ＧａｌＮａｃ残基を含むオリゴサッカリドを形成させる、
方法。
【請求項１８】
前記アミノ酸配列が、配列番号１３と少なくとも８０％同一である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記アミノ酸配列が、配列番号１３と少なくとも９０％同一である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記アミノ酸配列が、配列番号１３である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記オリゴサッカリドが、ガングリオシド、リゾガングリオシド、ガングリオシド模倣物、リゾガングリオシド模倣物、およびこれらの分子の炭水化物部分からなる群より選択されるメンバーである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
前記オリゴサッカリドが、タンパク質、糖タンパク質、脂質またはプロテオグリカンからなる群より選択されるメンバーに付着している、請求項１７に記載の方法。
【請求項１】
単離された核酸分子または組換え核酸分子であって、該核酸分子は、
β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列
を含み、該ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドは、配列番号１３に示されるアミノ酸配列と少なくとも約７７％同一であるアミノ酸配列を含む、
核酸分子。
【請求項２】
請求項１に記載の核酸分子であって、
前記ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドは、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む、
核酸分子。
【請求項３】
請求項１に記載の核酸分子であって、
前記β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１２に示される核酸配列と少なくとも約７５％同一である、
核酸分子。
【請求項４】
請求項１に記載の核酸分子であって、
前記ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１２に示される核酸配列を有する、
核酸分子。
【請求項５】
請求項１に記載の単離された核酸分子または組換え核酸分子であって、該核酸は、
β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼ活性を有するＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列
を含み、該ポリヌクレオチド配列は、配列番号１２と少なくとも８５％同一である、
核酸分子。
【請求項６】
請求項１に記載の単離された核酸分子または組換え核酸分子であって、該核酸は、
β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼ活性を有するＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列
を含み、該ポリヌクレオチド配列は、配列番号１２と少なくとも９５％同一である、
核酸分子。
【請求項７】
請求項１に記載の核酸分子を含む、発現カセット。
【請求項８】
請求項７に記載の発現カセットを含む、発現ベクター。
【請求項９】
請求項８に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項１０】
β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼ活性を有する、単離されたポリペプチドまたは組換え産生されたポリペプチドであって、
該ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドは、配列番号１３に示されるアミノ酸配列と少なくとも約７７％同一であるアミノ酸配列を含む、
ポリペプチド。
【請求項１１】
組換え産生されかつ少なくとも部分精製されている、請求項１０に記載の単離されたポリペプチドまたは組換え産生されたポリペプチド。
【請求項１２】
異種宿主細胞によって発現された、請求項１０に記載の単離されたポリペプチドまたは組換えポリペプチド。
【請求項１３】
前記宿主細胞がＥ．ｃｏｌｉである、請求項１２に記載の単離されたポリペプチドまたは組換え産生されたポリペプチド。
【請求項１４】
前記β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドが、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を有する、請求項１０に記載の単離されたポリペプチドまたは組換え産生されたポリペプチド。
【請求項１５】
前記β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドが、配列番号１３と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１０に記載の単離されたポリペプチドまたは組換え産生されたポリペプチド。
【請求項１６】
前記β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドが、配列番号１３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１０に記載の単離されたポリペプチドまたは組換え産生されたポリペプチド。
【請求項１７】
ＧａｌＮＡｃ残基を含むオリゴサッカリドを生成するための方法であって、該方法は、
アクセプターサッカリドを、ＵＤＰ−ＧａｌＮＡｃおよびβ１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドと接触させる工程；
を包含し、該β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドは、配列番号１３と少なくとも約７７％同一であるアミノ酸配列を含み、該β１，４−ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼポリペプチドは、該ＧａｌＮＡｃ残基を、該ＵＤＰ−ＧａｌＮＡｃから該アクセプターサッカリドへと転移させて、ＧａｌＮａｃ残基を含むオリゴサッカリドを形成させる、
方法。
【請求項１８】
前記アミノ酸配列が、配列番号１３と少なくとも８０％同一である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記アミノ酸配列が、配列番号１３と少なくとも９０％同一である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記アミノ酸配列が、配列番号１３である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記オリゴサッカリドが、ガングリオシド、リゾガングリオシド、ガングリオシド模倣物、リゾガングリオシド模倣物、およびこれらの分子の炭水化物部分からなる群より選択されるメンバーである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
前記オリゴサッカリドが、タンパク質、糖タンパク質、脂質またはプロテオグリカンからなる群より選択されるメンバーに付着している、請求項１７に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２００８−２５９５１５（Ｐ２００８−２５９５１５Ａ）
【公開日】平成２０年１０月３０日（２００８．１０．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１６３８８８（Ｐ２００８−１６３８８８）
【出願日】平成２０年６月２３日（２００８．６．２３）
【分割の表示】特願２０００−５９７４３８（Ｐ２０００−５９７４３８）の分割
【原出願日】平成１２年２月１日（２０００．２．１）
【出願人】（５００２７６４８２）ナショナル リサーチ カウンシル オブ カナダ (5)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年１０月３０日（２００８．１０．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年６月２３日（２００８．６．２３）
【分割の表示】特願２０００−５９７４３８（Ｐ２０００−５９７４３８）の分割
【原出願日】平成１２年２月１日（２０００．２．１）
【出願人】（５００２７６４８２）ナショナル リサーチ カウンシル オブ カナダ (5)
【Ｆターム（参考）】
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