クローン化されたヌクレオチド配列からの弱毒化パラインフルエンザウィルスワクチンの製造
【課題】単離されたポリヌクレオチド分子は、組換えPIV ワクチンの生成のための組換え PIVゲノム又はアンチゲノムを提供する。
【解決手段】その組換えゲノム又はアンチゲノムは、単離された感染性PIV 粒子を生成するために、ヌクレオチドタンパク質（Ｎ）、リンタンパク質（Ｐ）及び大きな（Ｌ）ポリメラーゼタンパク質と共に発現され得る。組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムは、所望する変化を生成するために、たとえば、生物学的に誘導されたPIV 変異体からの弱毒化突然変異を組込むために、又はキメラPIV クローンを創造するために、すなわちワクチン使用のための弱毒化された免疫原ウィルスを生成するために修飾され得る。
【解決手段】その組換えゲノム又はアンチゲノムは、単離された感染性PIV 粒子を生成するために、ヌクレオチドタンパク質（Ｎ）、リンタンパク質（Ｐ）及び大きな（Ｌ）ポリメラーゼタンパク質と共に発現され得る。組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムは、所望する変化を生成するために、たとえば、生物学的に誘導されたPIV 変異体からの弱毒化突然変異を組込むために、又はキメラPIV クローンを創造するために、すなわちワクチン使用のための弱毒化された免疫原ウィルスを生成するために修飾され得る。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
作用可能に連結された転写プロモーター、PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードするポリヌクレオチド配列、及び転写ターミネーターを含んで成る単離されたポリヌクレオチド分子であって、ここで前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、キメラPIV ゲノム又はアンチゲノムを形成するために、HPIV１配列、HPIV２配列、HPIV３配列、BPIV配列又はMPIV配列から選択された異種PIV 配列の導入により修飾されていることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２】
ヒト PIV３の遺伝子又は遺伝子セグメントが、異種PIV からのカウンターパート遺伝子又は遺伝子セグメントにより置換される請求の範囲第１項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３】
前記カウンターパート遺伝子又は遺伝子セグメントが、HPIV１又はHPIV２のHN又はＦ糖タンパク質遺伝子又は遺伝子セグメントである請求の範囲第２項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４】
PIV１又は PIV２のHN又はＦ糖タンパク質遺伝子がHPIV３のカウンターパートHN又はＦ糖タンパク質遺伝子により置換される請求の範囲第２項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項５】
前記ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列がBPIV遺伝子又は遺伝子セグメントを含む請求の範囲第１項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項６】
RSV からの異種配列を組込む請求の範囲第１項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項７】
RSV からの前記異種配列が、Ｇ又はＦ遺伝子又は遺伝子セグメントである請求の範囲第６項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項８】
麻疹ウィルスからの異種配列を含む請求の範囲第１項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項９】
麻疹ウィルスからの前記異種配列がHA又はＦ遺伝子又は遺伝子セグメントである請求の範囲第８項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１０】
作用可能に連結された転写プロモーター、PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードするポリヌクレオチド配列、及び転写ターミネーターを含んで成る単離されたポリヌクレオチド分子であって、ここで前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、
ｉ）ｐ218 (131)(配列番号１）；
ii）ｐ３／７ (131)（配列番号14）；
iii ）ｐ３／７ (131)２Ｇ（配列番号15）；又は
iv）HPIV１配列、HPIV２配列、BPIV配列もしくはMPIV配列
から選択された異種PIV 配列の導入により、又はPIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープの変化から選択された表現型変更を特定する、ヌクレオチド挿入、転位、欠失又は置換により修飾されている、ｉ）、ii）又はiii ）の単離されたポリヌクレオチド、から成る群から選択されることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１１】
作用可能に連結された転写プロモーター、PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードするポリヌクレオチド配列、及び転写ターミネーターを含んで成る単離されたポリヌクレオチド分子であって、前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、ヌクレオチド挿入、転位、欠失又は置換により修飾されることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１２】
前記ヌクレオチド挿入、転位、欠失又は置換が、PIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープの変化から選択された表現型変更を特定する請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１３】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が複数のts突然変異を組込む請求の範囲第12項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１４】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が複数の非ts突然変異を組込む請求の範囲第12項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１５】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列がJS cp45 の１又は複数の突然変異を含む請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１６】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、ポリメラーゼＬタンパク質における少なくとも１つのアミノ酸置換をコードする請求の範囲第15項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１７】
前記ポリメラーゼＬタンパク質における前記アミノ酸置換が、JS cp45 のTyr９４２, Leu９９２、又はThr１５５８ に対応する位置で生じる請求の範囲第16項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１８】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、Ｎタンパク質における少なくとも１つのアミノ酸置換をコードする請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１９】
前記Ｎタンパク質における前記アミノ酸置換が、JS cp45 の残基Val５６ 又はSer３８９に対応する位置で生じる請求の範囲第18項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２０】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、Ｃタンパク質におけるアミノ酸置換をコードする請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２１】
前記Ｃタンパク質における前記アミノ酸置換が、JS cp45 のIle９６ に対応する位置で生じる請求の範囲第20項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２２】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、Ｆタンパク質における少なくとも１つのアミノ酸置換をコードする請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２３】
前記Ｆタンパク質における前記アミノ酸置換が、JS cp45 のIle420又はAla450に対応する位置で生じる請求の範囲第22項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２４】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、HNタンパク質におけるアミノ酸置換をコードする請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２５】
前記HNタンパク質における前記アミノ酸置換が、JS cp45 の残基Val381に対応する位置で生じる請求の範囲第24項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２６】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が３’リーダー配列における少なくとも１つの突然変異を組込む請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２７】
前記３’リーダーにおける突然変異が、JS cp45 のヌクレオチド23，24，28又は45に対応する位置で生じる請求の範囲第26項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２８】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、Ｎ遺伝子開始配列における突然変異を組込む請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２９】
前記Ｎ遺伝子開始配列における突然変異がJS cp45 のヌクレオチド62に対応する位置で生じる請求の範囲第28項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３０】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、rcp45, rcp45 3'NCMFHN, rcp45 3'NL, rcp45 3'N、又はrcp45 Ｆに存在する、多くの及び十分な数までの突然変異を含む請求の範囲第12項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３１】
rcp45, rcp45 3'NCMFHN, rcp45 3'NL, rcp45 3'N, rcp45 L, rcp45 F, rcp45 M, rcp45 HN 又はrcp45 Ｃから選択されたアンチゲノムcDNAである請求の範囲第12項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３２】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、突然変異を特定するコドンにおける複数のヌクレオチド置換により安定化された突然変異を組込む請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３３】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、キメラゲノム又はアンチゲノムを形成するために、HPIV１，HPIV２，HPIV３，BPIV又はMPIVからの異種配列を組込む請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３４】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、１又は複数のts突然変異を組込む請求の範囲第33項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３５】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、１又は複数の非−ts弱毒化突然変異を組込む請求の範囲第33項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３６】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、JS cp45 の１又は複数の突然変異を組込む請求の範囲第33項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３７】
前記JS cp45 の１又は複数の突然変異が、Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｃ，Ｆ、又はHNから選択された１又は複数のPIV タンパク質において、又は３’リーダー又はＮ−遺伝子開始配列から選択されたPIV 遺伝子外配列において生じる請求の範囲第36項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３８】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、又は宿主範囲制限から選択された表現型をそれぞれ特定する複数の突然変異を組込む請求の範囲第33項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３９】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、rcp45, rcp45 3'NCMFHN, rcp45 3'NL, rcp45 3'N、又はrcp45 Ｆに存在する、少なくとも１つの及び十分な数までの突然変異を組込む請求の範囲第33項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４０】
PIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限又は免疫原性エピトープにおける変化から選択された表現型変更を特定する突然変異が、１又は複数のカウンターパート PIV１又は PIV２ HN 及びＦ糖タンパク質遺伝子により置換された、１又は複数の PIV３ HN 又はＦ糖タンパク質遺伝子を有するゲノム又はアンチゲノムを含んで成るキメラPIV バックグラウンドに組込まれる請求の範囲第33項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４１】
前記異種配列が、PIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープにおける変化から選択された表現型変更を特定する請求の範囲第33項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４２】
HPIV１，HPIV２，BPIV又はMPIVのシス−作用性調節配列を組込む請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４３】
RSV からの異種配列を組込む請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４４】
前記RSV からの異種配列が、Ｇ又はＰ遺伝子又は遺伝子セグメントである請求の範囲第43項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４５】
麻疹ウィルスからの異種配列を組込む請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４６】
前記麻疹ウィルスからの異種配列がHA又はＦ遺伝子又は遺伝子セグメントである請求の範囲第45項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４７】
哺乳類宿主において保護免疫応答を誘発することができる、サイトカイン、Ｔ−ヘルパーエピトープ、制限部位マーカー、又は微生物病原体のタンパク質から選択された非−PIV 分子をコードするポリヌクレオチド配列を組込む請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４８】
PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする単離されたポリヌクレオチド分子を含んで成る発現ベクター、及びPIV のＮ，Ｐ及びＬタンパク質をコードする１又は複数の単離されたポリヌクレオチド分子を含んで成る発現ベクターを包含し、それにより、前記PIVゲノム又はアンチゲノム、及びＮ，Ｐ、及びＬタンパク質の発現が感染性PIV 粒子を生成する細胞又は細胞−フリー組成物。
【請求項４９】
前記感染性RIV 粒子がウィルスである請求の範囲第48項記載の細胞又は細胞−フリー組成物。
【請求項５０】
前記感染性PIV 粒子がサブウィルス粒子である請求の範囲第48項記載の細胞又は細胞−フリー組成物。
【請求項５１】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードするポリヌクレオチド、及びPIV のＮ，Ｐ及びＬタンパク質をコードする１又は複数のポリヌクレオチドが、単一のベクター内に組込まれる請求の範囲第48項記載の細胞又は細胞−フリー組成物。
【請求項５２】
感染性PIV 粒子をコードする１又は複数の単離されたポリヌクレオチド分子から前記PIV 粒子を生成するための方法であって、PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードするポリヌクレオチド分子を含んで成る発現ベクター、及びＮ，Ｐ及びＬタンパク質をコードする１又は複数のポリヌクレオチド分子を含んで成る発現ベクターを、細胞又は細胞−フリーシステムにおいて同時発現し、それにより、感染性PIV 粒子を生成することを含んで成る方法。
【請求項５３】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノム、及び前記Ｎ，Ｐ及びＬタンパク質が同じ発現ベクターにより発現される請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項５４】
前記Ｎ，Ｐ、及びＬタンパク質が、２又は３種の異なった発現ベクター上にコードされる請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項５５】
前記Ｎ，Ｐ及びＬタンパク質の少なくとも１つが、PIV による同時感染により供給される請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項５６】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子がcDNAである請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項５７】
前記感染性PIV 粒子がウィルスである請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項５８】
前記感染性PIV 粒子がサブウィルス粒子である請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項５９】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、ヒト、ウシ、又はネズミPIV 配列である請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項６０】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、野生型PIV 株の配列をコードする請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項６１】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、HPIV３をコードする請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項６２】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、生物学的に誘導されたPIV 株からの弱毒化突然変異を組込む請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項６３】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、１又は複数のts突然変異を組込む請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項６４】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、１又は複数の非−ts弱毒化突然変異を組込む請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項６５】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、JS cp45 の少なくとも１つの突然変異を組込む請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項６６】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、JS cp45 の複数の突然変異を組込む請求の範囲第65項記載の方法。
【請求項６７】
前記JS cp45 の突然変異が、ポリメラーゼＬタンパク質における少なくとも１つのアミノ酸置換を特定する請求の範囲第65項記載の方法。
【請求項６８】
前記ポリメラーゼＬにおける前記アミノ酸置換が、JS cp45のTyr９４２, Leu９９２、又はThr１５５６に対応する位置で生じる請求の範囲第67項記載の方法。
【請求項６９】
前記JS cp45 の突然変異が、Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｃ，Ｆ、又はHNから選択されたPIV タンパク質、又は３’リーダー又はＮ遺伝子開始配列から選択されたPIV 遺伝子外配列における変化を特定する請求の範囲第65項記載の方法。
【請求項７０】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、突然変異を特定するコドンにおける複数のヌクレオチド置換により安定化される突然変異を組込む請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項７１】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、rcp45, rcp45 3'NCMFHN, rcp45 3'NL, rcp45 3'N又はrcp45 Ｆに存在する、多くの及び十分な数までの突然変異を組込む請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項７２】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、rcp45, rcp45 3'NCMFHN, rcp45 3'NF, rcp45 3'N, rcp45 L, rcp45 F, rcp45 M, rcp45 HN 又はrcp45 Ｃから選択されたアンチゲノムcDNAである請求の範囲第69項記載の方法。
【請求項７３】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、キメラゲノム又はアンチゲノムを形成するために、HPIV１，HPIV２，HPIV３，BPIV又はMPIVからの異種配列を組込む請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項７４】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、HPIV３配列、及びHPIV１，HPIV２，BPIV又はMPIV配列のキメラである請求の範囲第73項記載の方法。
【請求項７５】
HN又はＦ糖タンパク質の遺伝子又は遺伝子セグメントをコードする、HPIV１又はHPIV２からの異種配列が、HPIV３の対応する遺伝子又は遺伝子セグメントにより置換される請求の範囲第74項記載の方法。
【請求項７６】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが１又は複数のts突然変異を組込む請求の範囲第73項記載の方法。
【請求項７７】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが１又は複数の非−ts弱毒化突然変異を組込む請求の範囲第73項記載の方法。
【請求項７８】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムがJS cp45 の１又は複数の突然変異を組込む請求の範囲第73項記載の方法。
【請求項７９】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ又は宿主範囲制限が選択された表現型をそれぞれ特定する複数の突然変異を組込む請求の範囲第73項記載の方法。
【請求項８０】
PIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限又は免疫原性エピトープにおける変化から選択された表現型変更を特定する突然変異が、１又は複数のカウンターパート PIV１又は PIV２ HN 及びＦ糖タンパク質遺伝子により置換された、１又は複数の PIV３ HN 又はＦ糖タンパク質遺伝子を有するゲノム又はアンチゲノムを含んで成るキメラPIV バックグラウンドに組込まれる請求の範囲第73項記載の方法。
【請求項８１】
JS cp45 の１又は複数の突然変異が、カウンターパート PIV１又は PIV２ HN 及びＦ糖タンパク質遺伝子により置換された両 PIV３ HN 及びＦ糖タンパク質遺伝子を有するゲノム又はアンチゲノムを含んで成るキメラバックグラウンドにおいて組込まれる請求の範囲第80項記載の方法。
【請求項８２】
前記JS cp45 の１又は複数の突然変異が、Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｃ，Ｆ、又はHNから選択された１又は複数のPIV タンパク質、又は３’リーダー又はＮ遺伝子開始配列から選択されたPIV 遺伝子外配列において生じる請求の範囲第81項記載の方法。
【請求項８３】
前記異種配列が、PIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープにおける変化から選択された表現型変更を特定する請求の範囲第73項記載の方法。
【請求項８４】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、RSV からの異種配列を組込む請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項８５】
前記RSV からの異種配列が、Ｇ又はＦ遺伝子又は遺伝子セグメントである請求の範囲第84項記載の方法。
【請求項８６】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチドが麻疹ウィルスからの異種配列を組込む請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項８７】
前記麻疹ウィルスからの異種配列が、HA又はＦ遺伝子又は遺伝子セグメントである請求の範囲第86項記載の方法。
【請求項８８】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、
ｉ）ｐ218 (131)(配列番号１）；
ii）ｐ３／７ (131)（配列番号14）；
iii ）ｐ３／７ (131)２Ｇ（配列番号15）；又は
iv）HPIV１配列、HPIV２配列、BPIV配列又はMPIV配列
から選択された異種PIV 配列の導入により、又はPIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープの変化から選択された表現型変更を特定する、ヌクレオチド挿入、転位、欠失又は置換により修飾されている、ｉ）、ii）又はiii ）のポリヌクレオチド分子から選択される請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項８９】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、
ｉ）ｐ218 (131)(配列番号１）；
ii）ｐ３／７ (131)（配列番号14）；
iii ）ｐ３／７ (131)２Ｇ（配列番号15）；又は
iv）HPIV１配列、HPIV２配列、BPIV配列又はMPIV配列
から選択された異種PIV 配列の導入により、又はPIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープの変化から選択された表現型変更を特定する前記異種PIV 配列の前記導入とは異なる、ヌクレオチド挿入、転位、欠失又は置換により修飾されている、ｉ）、ii）又はiii ）のポリヌクレオチド分子から選択される請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項９０】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、哺乳類宿主において保護免疫応答を誘発することができる、サイトカイン、Ｔ−ヘルパーエピトープ、制限部位マーカー、又は微生物病原体のタンパク質から選択された非−PIV 分子をコードするよう修飾される請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項９１】
組換えPIV ゲノム又はアンチゲノム、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質、及びＬタンパク質を含んで成る単離された感染性PIV 粒子。
【請求項９２】
サブウィルス粒子である請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項９３】
ウィルスである請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項９４】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムがRSV 又は麻疹ウィルスからの異種配列を組込む請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項９５】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムがcDNAである請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項９６】
ヒトPIV である請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項９７】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、HPIV１，HPIV２，HPIV３，BPIV、又はMPIV配列から選択された異種PIV 配列のキメラである請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項９８】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、
ｉ）ｐ218 (131)(配列番号１）；
ii）ｐ３／７ (131)（配列番号14）；
iii ）ｐ３／７ (131)２Ｇ（配列番号15）；又は
iv）HPIV１配列、HPIV２配列、BPIV配列又はMPIV配列
から選択された異種PIV 配列の導入により、又はPIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープの変化から選択された表現型変更を特定する、ヌクレオチド挿入、転位、欠失又は置換により修飾されている、ｉ）、ii）又はiii ）のゲノム又はアンチゲノムから選択される請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項９９】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、
ｉ）ｐ218 (131)(配列番号１）；
ii）ｐ３／７ (131)（配列番号14）；
iii ）ｐ３／７ (131)２Ｇ（配列番号15）；又は
iv）HPIV１配列、HPIV２配列、BPIV配列又はMPIV配列
から選択された異種PIV 配列の導入により、又はPIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープの変化から選択された表現型変更を特定する前記異種PIV 配列の前記導入とは異なる、ヌクレオチド挿入、転位、欠失又は置換により修飾されている、ｉ）、ii）又はiii ）のゲノム又はアンチゲノムから選択される請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１００】
前記カウンターパート遺伝子又は遺伝子セグメントが、HPIV１又はHPIV２のHN又はＦ糖タンパク質遺伝子の遺伝子又は遺伝子セグメントである請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１０１】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムがRSV 又は麻疹ウィルスからの異種配列を組込む請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１０２】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、PIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープにおける変化から選択された表現型変更をコードする、ヌクレオチド挿入、転位、欠失又は置換により修飾される請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１０３】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、複数のts突然変異を組込む請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１０４】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、複数の非−ts弱毒化突然変異を組込む請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１０５】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、JS cp45 の少なくとも１つの突然変異を組込む請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１０６】
前記JS cp45 の突然変異が、前記ポリメラーゼ Ｌタンパク質におけるアミノ酸置換を特定する請求の範囲第 105項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１０７】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、１又は複数のts突然変異を組込む請求の範囲第97項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１０８】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、１又は複数の非−ts弱毒化突然変異を仕込む請求の範囲第97項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１０９】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、JS cp45 の１又は複数の突然変異を組込む請求の範囲第97項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１１０】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、又は宿主範囲制限から選択された表現型をそれぞれ特定する複数の突然変異を組込む請求の範囲第 109項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１１１】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、rcp45, rcp45 3'NCMFHN, rcp45 3'NL, rcp45 3'N、又はrcp45 Ｆに存在する、少なくとも１つの及び十分な数までの突然変異を組込む請求の範囲第 109項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１１２】
PIV の弱毒化、感温性、低温適合体、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限又は免疫原性エピトープにおける変化から選択された表現型変更を特定する突然変異が、１又は複数のカウンターパート PIV１又は PIV２ HN 及びＦ糖タンパク質遺伝子により置換された、１又は複数の PIV３ HN 又はＦ糖タンパク質遺伝子を有するゲノム又はアンチゲノムを含んで成るキメラ PIVバックグラウンドに組込まれる請求の範囲第91項記載の単離された感染性 PIV粒子。
【請求項１１３】
JS cp45 の１又は複数の突然変異が、前記キメラバックグラウンドにおいて組込まれる請求の範囲第 112項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１１４】
前記JS cp45 の１又は複数の突然変異が、Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｃ，Ｆ、又はHNから選択された１又は複数のPIV タンパク質において、又は３’リーダー又はＮ−遺伝子開始配列から選択されたPIV 遺伝子外配列において生じる請求の範囲第 113項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１１５】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、哺乳類宿主において保護免疫応答を誘発することができる、サイトカイン、Ｔ−ヘルパーエピトープ；制限部位マーカー、又は微生物病原体のタンパク質から選択された非−PIV 分子をコードするよう修飾される請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１１６】
哺乳類宿主において、RSV に対して保護免疫性を誘発するRSV 抗原又はエピトープをさらに含んで成る請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１１７】
ｒ942,ｒ992,ｒ1558, ｒ942 ／992,ｒ992 ／1558，ｒ942／1558、又はｒ942 ／992 ／1558，rcp45 3'N, rcp45 C, rcp45 M, rcp45 F, rcp45 HN, rcp45L, rcp45 3'NL, rcp45 3'NCMFHN、及びrcp45 から選択される請求の範囲第91項記載の単離された感染性PI V 粒子。
【請求項１１８】
医薬的に許容できるキャリヤーに、組換え PIVゲノム又はアンチゲノム、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質及びＬタンパク質を含んで成る感染性PIV 粒子の免疫原的有効量を含んで成る免疫原組成物。
【請求項１１９】
前記感染性PIV 粒子が、サブウィルス粒子である請求の範囲第 118項記載の免疫原組成物。
【請求項１２０】
前記感染性PIV 粒子がウィルスである請求の範囲第 118項記載の免疫原組成物。
【請求項１２１】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、RSV 又は麻疹ウィルスからの異種配列を組込む請求の範囲第 118項記載の免疫原組成物。
【請求項１２２】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、感染性キメラPIV 粒子を形成するために、HPIV１，HPIV２，HPIV３、BPIV、又はMPIV配列から選択された異種PIV 配列のキメラである請求の範囲第118項記載の免疫原組成物。
【請求項１２３】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムがヒトPIV をコードし、ここで遺伝子又は遺伝子セグメントが異種PIV からのカウンターパート遺伝子又は遺伝子セグメントにより置換される請求の範囲第 118項記載の免疫原組成物。
【請求項１２４】
HPIV１の１又は両HN及びＦ糖タンパク質遺伝子が、前記感染性キメラPIV 粒子を形成するために、HPIV３のHN及びＦ糖タンパク質遺伝子により置換される請求の範囲第 123項記載の免疫原組成物。
【請求項１２５】
前記感染性キメラPIV 粒子の組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、PIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープにおける変化から選択された表現型変更をコードする、ヌクレオチド挿入、転位、欠失又は置換により修飾される請求の範囲第 123項記載の免疫原組成物。
【請求項１２６】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、弱毒化された感染性キメラPIV 粒子を形成するために、ts及び非−ts弱毒化突然変異から選択された複数の突然変異を組込む請求の範囲第 125項記載の免疫原組成物。
【請求項１２７】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、JS cp45 の突然変異を組込む請求の範囲第 118項記載の免疫原組成物。
【請求項１２８】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、JS cp45 の複数の突然変異を組込む請求の範囲第 118項記載の免疫原組成物。
【請求項１】
作用可能に連結された転写プロモーター、PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードするポリヌクレオチド配列、及び転写ターミネーターを含んで成る単離されたポリヌクレオチド分子であって、ここで前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、キメラPIV ゲノム又はアンチゲノムを形成するために、HPIV１配列、HPIV２配列、HPIV３配列、BPIV配列又はMPIV配列から選択された異種PIV 配列の導入により修飾されていることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２】
ヒト PIV３の遺伝子又は遺伝子セグメントが、異種PIV からのカウンターパート遺伝子又は遺伝子セグメントにより置換される請求の範囲第１項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３】
前記カウンターパート遺伝子又は遺伝子セグメントが、HPIV１又はHPIV２のHN又はＦ糖タンパク質遺伝子又は遺伝子セグメントである請求の範囲第２項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４】
PIV１又は PIV２のHN又はＦ糖タンパク質遺伝子がHPIV３のカウンターパートHN又はＦ糖タンパク質遺伝子により置換される請求の範囲第２項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項５】
前記ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列がBPIV遺伝子又は遺伝子セグメントを含む請求の範囲第１項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項６】
RSV からの異種配列を組込む請求の範囲第１項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項７】
RSV からの前記異種配列が、Ｇ又はＦ遺伝子又は遺伝子セグメントである請求の範囲第６項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項８】
麻疹ウィルスからの異種配列を含む請求の範囲第１項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項９】
麻疹ウィルスからの前記異種配列がHA又はＦ遺伝子又は遺伝子セグメントである請求の範囲第８項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１０】
作用可能に連結された転写プロモーター、PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードするポリヌクレオチド配列、及び転写ターミネーターを含んで成る単離されたポリヌクレオチド分子であって、ここで前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、
ｉ）ｐ218 (131)(配列番号１）；
ii）ｐ３／７ (131)（配列番号14）；
iii ）ｐ３／７ (131)２Ｇ（配列番号15）；又は
iv）HPIV１配列、HPIV２配列、BPIV配列もしくはMPIV配列
から選択された異種PIV 配列の導入により、又はPIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープの変化から選択された表現型変更を特定する、ヌクレオチド挿入、転位、欠失又は置換により修飾されている、ｉ）、ii）又はiii ）の単離されたポリヌクレオチド、から成る群から選択されることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１１】
作用可能に連結された転写プロモーター、PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードするポリヌクレオチド配列、及び転写ターミネーターを含んで成る単離されたポリヌクレオチド分子であって、前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、ヌクレオチド挿入、転位、欠失又は置換により修飾されることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１２】
前記ヌクレオチド挿入、転位、欠失又は置換が、PIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープの変化から選択された表現型変更を特定する請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１３】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が複数のts突然変異を組込む請求の範囲第12項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１４】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が複数の非ts突然変異を組込む請求の範囲第12項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１５】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列がJS cp45 の１又は複数の突然変異を含む請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１６】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、ポリメラーゼＬタンパク質における少なくとも１つのアミノ酸置換をコードする請求の範囲第15項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１７】
前記ポリメラーゼＬタンパク質における前記アミノ酸置換が、JS cp45 のTyr９４２, Leu９９２、又はThr１５５８ に対応する位置で生じる請求の範囲第16項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１８】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、Ｎタンパク質における少なくとも１つのアミノ酸置換をコードする請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１９】
前記Ｎタンパク質における前記アミノ酸置換が、JS cp45 の残基Val５６ 又はSer３８９に対応する位置で生じる請求の範囲第18項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２０】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、Ｃタンパク質におけるアミノ酸置換をコードする請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２１】
前記Ｃタンパク質における前記アミノ酸置換が、JS cp45 のIle９６ に対応する位置で生じる請求の範囲第20項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２２】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、Ｆタンパク質における少なくとも１つのアミノ酸置換をコードする請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２３】
前記Ｆタンパク質における前記アミノ酸置換が、JS cp45 のIle420又はAla450に対応する位置で生じる請求の範囲第22項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２４】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、HNタンパク質におけるアミノ酸置換をコードする請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２５】
前記HNタンパク質における前記アミノ酸置換が、JS cp45 の残基Val381に対応する位置で生じる請求の範囲第24項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２６】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が３’リーダー配列における少なくとも１つの突然変異を組込む請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２７】
前記３’リーダーにおける突然変異が、JS cp45 のヌクレオチド23，24，28又は45に対応する位置で生じる請求の範囲第26項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２８】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、Ｎ遺伝子開始配列における突然変異を組込む請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項２９】
前記Ｎ遺伝子開始配列における突然変異がJS cp45 のヌクレオチド62に対応する位置で生じる請求の範囲第28項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３０】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、rcp45, rcp45 3'NCMFHN, rcp45 3'NL, rcp45 3'N、又はrcp45 Ｆに存在する、多くの及び十分な数までの突然変異を含む請求の範囲第12項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３１】
rcp45, rcp45 3'NCMFHN, rcp45 3'NL, rcp45 3'N, rcp45 L, rcp45 F, rcp45 M, rcp45 HN 又はrcp45 Ｃから選択されたアンチゲノムcDNAである請求の範囲第12項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３２】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、突然変異を特定するコドンにおける複数のヌクレオチド置換により安定化された突然変異を組込む請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３３】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、キメラゲノム又はアンチゲノムを形成するために、HPIV１，HPIV２，HPIV３，BPIV又はMPIVからの異種配列を組込む請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３４】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、１又は複数のts突然変異を組込む請求の範囲第33項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３５】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、１又は複数の非−ts弱毒化突然変異を組込む請求の範囲第33項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３６】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、JS cp45 の１又は複数の突然変異を組込む請求の範囲第33項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３７】
前記JS cp45 の１又は複数の突然変異が、Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｃ，Ｆ、又はHNから選択された１又は複数のPIV タンパク質において、又は３’リーダー又はＮ−遺伝子開始配列から選択されたPIV 遺伝子外配列において生じる請求の範囲第36項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３８】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、又は宿主範囲制限から選択された表現型をそれぞれ特定する複数の突然変異を組込む請求の範囲第33項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項３９】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、rcp45, rcp45 3'NCMFHN, rcp45 3'NL, rcp45 3'N、又はrcp45 Ｆに存在する、少なくとも１つの及び十分な数までの突然変異を組込む請求の範囲第33項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４０】
PIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限又は免疫原性エピトープにおける変化から選択された表現型変更を特定する突然変異が、１又は複数のカウンターパート PIV１又は PIV２ HN 及びＦ糖タンパク質遺伝子により置換された、１又は複数の PIV３ HN 又はＦ糖タンパク質遺伝子を有するゲノム又はアンチゲノムを含んで成るキメラPIV バックグラウンドに組込まれる請求の範囲第33項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４１】
前記異種配列が、PIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープにおける変化から選択された表現型変更を特定する請求の範囲第33項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４２】
HPIV１，HPIV２，BPIV又はMPIVのシス−作用性調節配列を組込む請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４３】
RSV からの異種配列を組込む請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４４】
前記RSV からの異種配列が、Ｇ又はＰ遺伝子又は遺伝子セグメントである請求の範囲第43項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４５】
麻疹ウィルスからの異種配列を組込む請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４６】
前記麻疹ウィルスからの異種配列がHA又はＦ遺伝子又は遺伝子セグメントである請求の範囲第45項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４７】
哺乳類宿主において保護免疫応答を誘発することができる、サイトカイン、Ｔ−ヘルパーエピトープ、制限部位マーカー、又は微生物病原体のタンパク質から選択された非−PIV 分子をコードするポリヌクレオチド配列を組込む請求の範囲第11項記載の単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項４８】
PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする単離されたポリヌクレオチド分子を含んで成る発現ベクター、及びPIV のＮ，Ｐ及びＬタンパク質をコードする１又は複数の単離されたポリヌクレオチド分子を含んで成る発現ベクターを包含し、それにより、前記PIVゲノム又はアンチゲノム、及びＮ，Ｐ、及びＬタンパク質の発現が感染性PIV 粒子を生成する細胞又は細胞−フリー組成物。
【請求項４９】
前記感染性RIV 粒子がウィルスである請求の範囲第48項記載の細胞又は細胞−フリー組成物。
【請求項５０】
前記感染性PIV 粒子がサブウィルス粒子である請求の範囲第48項記載の細胞又は細胞−フリー組成物。
【請求項５１】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードするポリヌクレオチド、及びPIV のＮ，Ｐ及びＬタンパク質をコードする１又は複数のポリヌクレオチドが、単一のベクター内に組込まれる請求の範囲第48項記載の細胞又は細胞−フリー組成物。
【請求項５２】
感染性PIV 粒子をコードする１又は複数の単離されたポリヌクレオチド分子から前記PIV 粒子を生成するための方法であって、PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードするポリヌクレオチド分子を含んで成る発現ベクター、及びＮ，Ｐ及びＬタンパク質をコードする１又は複数のポリヌクレオチド分子を含んで成る発現ベクターを、細胞又は細胞−フリーシステムにおいて同時発現し、それにより、感染性PIV 粒子を生成することを含んで成る方法。
【請求項５３】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノム、及び前記Ｎ，Ｐ及びＬタンパク質が同じ発現ベクターにより発現される請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項５４】
前記Ｎ，Ｐ、及びＬタンパク質が、２又は３種の異なった発現ベクター上にコードされる請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項５５】
前記Ｎ，Ｐ及びＬタンパク質の少なくとも１つが、PIV による同時感染により供給される請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項５６】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子がcDNAである請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項５７】
前記感染性PIV 粒子がウィルスである請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項５８】
前記感染性PIV 粒子がサブウィルス粒子である請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項５９】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、ヒト、ウシ、又はネズミPIV 配列である請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項６０】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、野生型PIV 株の配列をコードする請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項６１】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、HPIV３をコードする請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項６２】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、生物学的に誘導されたPIV 株からの弱毒化突然変異を組込む請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項６３】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、１又は複数のts突然変異を組込む請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項６４】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、１又は複数の非−ts弱毒化突然変異を組込む請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項６５】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、JS cp45 の少なくとも１つの突然変異を組込む請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項６６】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、JS cp45 の複数の突然変異を組込む請求の範囲第65項記載の方法。
【請求項６７】
前記JS cp45 の突然変異が、ポリメラーゼＬタンパク質における少なくとも１つのアミノ酸置換を特定する請求の範囲第65項記載の方法。
【請求項６８】
前記ポリメラーゼＬにおける前記アミノ酸置換が、JS cp45のTyr９４２, Leu９９２、又はThr１５５６に対応する位置で生じる請求の範囲第67項記載の方法。
【請求項６９】
前記JS cp45 の突然変異が、Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｃ，Ｆ、又はHNから選択されたPIV タンパク質、又は３’リーダー又はＮ遺伝子開始配列から選択されたPIV 遺伝子外配列における変化を特定する請求の範囲第65項記載の方法。
【請求項７０】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、突然変異を特定するコドンにおける複数のヌクレオチド置換により安定化される突然変異を組込む請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項７１】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、rcp45, rcp45 3'NCMFHN, rcp45 3'NL, rcp45 3'N又はrcp45 Ｆに存在する、多くの及び十分な数までの突然変異を組込む請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項７２】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、rcp45, rcp45 3'NCMFHN, rcp45 3'NF, rcp45 3'N, rcp45 L, rcp45 F, rcp45 M, rcp45 HN 又はrcp45 Ｃから選択されたアンチゲノムcDNAである請求の範囲第69項記載の方法。
【請求項７３】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、キメラゲノム又はアンチゲノムを形成するために、HPIV１，HPIV２，HPIV３，BPIV又はMPIVからの異種配列を組込む請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項７４】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、HPIV３配列、及びHPIV１，HPIV２，BPIV又はMPIV配列のキメラである請求の範囲第73項記載の方法。
【請求項７５】
HN又はＦ糖タンパク質の遺伝子又は遺伝子セグメントをコードする、HPIV１又はHPIV２からの異種配列が、HPIV３の対応する遺伝子又は遺伝子セグメントにより置換される請求の範囲第74項記載の方法。
【請求項７６】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが１又は複数のts突然変異を組込む請求の範囲第73項記載の方法。
【請求項７７】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが１又は複数の非−ts弱毒化突然変異を組込む請求の範囲第73項記載の方法。
【請求項７８】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムがJS cp45 の１又は複数の突然変異を組込む請求の範囲第73項記載の方法。
【請求項７９】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ又は宿主範囲制限が選択された表現型をそれぞれ特定する複数の突然変異を組込む請求の範囲第73項記載の方法。
【請求項８０】
PIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限又は免疫原性エピトープにおける変化から選択された表現型変更を特定する突然変異が、１又は複数のカウンターパート PIV１又は PIV２ HN 及びＦ糖タンパク質遺伝子により置換された、１又は複数の PIV３ HN 又はＦ糖タンパク質遺伝子を有するゲノム又はアンチゲノムを含んで成るキメラPIV バックグラウンドに組込まれる請求の範囲第73項記載の方法。
【請求項８１】
JS cp45 の１又は複数の突然変異が、カウンターパート PIV１又は PIV２ HN 及びＦ糖タンパク質遺伝子により置換された両 PIV３ HN 及びＦ糖タンパク質遺伝子を有するゲノム又はアンチゲノムを含んで成るキメラバックグラウンドにおいて組込まれる請求の範囲第80項記載の方法。
【請求項８２】
前記JS cp45 の１又は複数の突然変異が、Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｃ，Ｆ、又はHNから選択された１又は複数のPIV タンパク質、又は３’リーダー又はＮ遺伝子開始配列から選択されたPIV 遺伝子外配列において生じる請求の範囲第81項記載の方法。
【請求項８３】
前記異種配列が、PIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープにおける変化から選択された表現型変更を特定する請求の範囲第73項記載の方法。
【請求項８４】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、RSV からの異種配列を組込む請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項８５】
前記RSV からの異種配列が、Ｇ又はＦ遺伝子又は遺伝子セグメントである請求の範囲第84項記載の方法。
【請求項８６】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチドが麻疹ウィルスからの異種配列を組込む請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項８７】
前記麻疹ウィルスからの異種配列が、HA又はＦ遺伝子又は遺伝子セグメントである請求の範囲第86項記載の方法。
【請求項８８】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、
ｉ）ｐ218 (131)(配列番号１）；
ii）ｐ３／７ (131)（配列番号14）；
iii ）ｐ３／７ (131)２Ｇ（配列番号15）；又は
iv）HPIV１配列、HPIV２配列、BPIV配列又はMPIV配列
から選択された異種PIV 配列の導入により、又はPIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープの変化から選択された表現型変更を特定する、ヌクレオチド挿入、転位、欠失又は置換により修飾されている、ｉ）、ii）又はiii ）のポリヌクレオチド分子から選択される請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項８９】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、
ｉ）ｐ218 (131)(配列番号１）；
ii）ｐ３／７ (131)（配列番号14）；
iii ）ｐ３／７ (131)２Ｇ（配列番号15）；又は
iv）HPIV１配列、HPIV２配列、BPIV配列又はMPIV配列
から選択された異種PIV 配列の導入により、又はPIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープの変化から選択された表現型変更を特定する前記異種PIV 配列の前記導入とは異なる、ヌクレオチド挿入、転位、欠失又は置換により修飾されている、ｉ）、ii）又はiii ）のポリヌクレオチド分子から選択される請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項９０】
前記PIV ゲノム又はアンチゲノムをコードする前記ポリヌクレオチド分子が、哺乳類宿主において保護免疫応答を誘発することができる、サイトカイン、Ｔ−ヘルパーエピトープ、制限部位マーカー、又は微生物病原体のタンパク質から選択された非−PIV 分子をコードするよう修飾される請求の範囲第52項記載の方法。
【請求項９１】
組換えPIV ゲノム又はアンチゲノム、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質、及びＬタンパク質を含んで成る単離された感染性PIV 粒子。
【請求項９２】
サブウィルス粒子である請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項９３】
ウィルスである請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項９４】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムがRSV 又は麻疹ウィルスからの異種配列を組込む請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項９５】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムがcDNAである請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項９６】
ヒトPIV である請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項９７】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、HPIV１，HPIV２，HPIV３，BPIV、又はMPIV配列から選択された異種PIV 配列のキメラである請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項９８】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、
ｉ）ｐ218 (131)(配列番号１）；
ii）ｐ３／７ (131)（配列番号14）；
iii ）ｐ３／７ (131)２Ｇ（配列番号15）；又は
iv）HPIV１配列、HPIV２配列、BPIV配列又はMPIV配列
から選択された異種PIV 配列の導入により、又はPIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープの変化から選択された表現型変更を特定する、ヌクレオチド挿入、転位、欠失又は置換により修飾されている、ｉ）、ii）又はiii ）のゲノム又はアンチゲノムから選択される請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項９９】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、
ｉ）ｐ218 (131)(配列番号１）；
ii）ｐ３／７ (131)（配列番号14）；
iii ）ｐ３／７ (131)２Ｇ（配列番号15）；又は
iv）HPIV１配列、HPIV２配列、BPIV配列又はMPIV配列
から選択された異種PIV 配列の導入により、又はPIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープの変化から選択された表現型変更を特定する前記異種PIV 配列の前記導入とは異なる、ヌクレオチド挿入、転位、欠失又は置換により修飾されている、ｉ）、ii）又はiii ）のゲノム又はアンチゲノムから選択される請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１００】
前記カウンターパート遺伝子又は遺伝子セグメントが、HPIV１又はHPIV２のHN又はＦ糖タンパク質遺伝子の遺伝子又は遺伝子セグメントである請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１０１】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムがRSV 又は麻疹ウィルスからの異種配列を組込む請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１０２】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、PIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープにおける変化から選択された表現型変更をコードする、ヌクレオチド挿入、転位、欠失又は置換により修飾される請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１０３】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、複数のts突然変異を組込む請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１０４】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、複数の非−ts弱毒化突然変異を組込む請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１０５】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、JS cp45 の少なくとも１つの突然変異を組込む請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１０６】
前記JS cp45 の突然変異が、前記ポリメラーゼ Ｌタンパク質におけるアミノ酸置換を特定する請求の範囲第 105項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１０７】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、１又は複数のts突然変異を組込む請求の範囲第97項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１０８】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、１又は複数の非−ts弱毒化突然変異を仕込む請求の範囲第97項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１０９】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、JS cp45 の１又は複数の突然変異を組込む請求の範囲第97項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１１０】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、又は宿主範囲制限から選択された表現型をそれぞれ特定する複数の突然変異を組込む請求の範囲第 109項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１１１】
前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、rcp45, rcp45 3'NCMFHN, rcp45 3'NL, rcp45 3'N、又はrcp45 Ｆに存在する、少なくとも１つの及び十分な数までの突然変異を組込む請求の範囲第 109項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１１２】
PIV の弱毒化、感温性、低温適合体、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限又は免疫原性エピトープにおける変化から選択された表現型変更を特定する突然変異が、１又は複数のカウンターパート PIV１又は PIV２ HN 及びＦ糖タンパク質遺伝子により置換された、１又は複数の PIV３ HN 又はＦ糖タンパク質遺伝子を有するゲノム又はアンチゲノムを含んで成るキメラ PIVバックグラウンドに組込まれる請求の範囲第91項記載の単離された感染性 PIV粒子。
【請求項１１３】
JS cp45 の１又は複数の突然変異が、前記キメラバックグラウンドにおいて組込まれる請求の範囲第 112項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１１４】
前記JS cp45 の１又は複数の突然変異が、Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｃ，Ｆ、又はHNから選択された１又は複数のPIV タンパク質において、又は３’リーダー又はＮ−遺伝子開始配列から選択されたPIV 遺伝子外配列において生じる請求の範囲第 113項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１１５】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、哺乳類宿主において保護免疫応答を誘発することができる、サイトカイン、Ｔ−ヘルパーエピトープ；制限部位マーカー、又は微生物病原体のタンパク質から選択された非−PIV 分子をコードするよう修飾される請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１１６】
哺乳類宿主において、RSV に対して保護免疫性を誘発するRSV 抗原又はエピトープをさらに含んで成る請求の範囲第91項記載の単離された感染性PIV 粒子。
【請求項１１７】
ｒ942,ｒ992,ｒ1558, ｒ942 ／992,ｒ992 ／1558，ｒ942／1558、又はｒ942 ／992 ／1558，rcp45 3'N, rcp45 C, rcp45 M, rcp45 F, rcp45 HN, rcp45L, rcp45 3'NL, rcp45 3'NCMFHN、及びrcp45 から選択される請求の範囲第91項記載の単離された感染性PI V 粒子。
【請求項１１８】
医薬的に許容できるキャリヤーに、組換え PIVゲノム又はアンチゲノム、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質及びＬタンパク質を含んで成る感染性PIV 粒子の免疫原的有効量を含んで成る免疫原組成物。
【請求項１１９】
前記感染性PIV 粒子が、サブウィルス粒子である請求の範囲第 118項記載の免疫原組成物。
【請求項１２０】
前記感染性PIV 粒子がウィルスである請求の範囲第 118項記載の免疫原組成物。
【請求項１２１】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、RSV 又は麻疹ウィルスからの異種配列を組込む請求の範囲第 118項記載の免疫原組成物。
【請求項１２２】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、感染性キメラPIV 粒子を形成するために、HPIV１，HPIV２，HPIV３、BPIV、又はMPIV配列から選択された異種PIV 配列のキメラである請求の範囲第118項記載の免疫原組成物。
【請求項１２３】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムがヒトPIV をコードし、ここで遺伝子又は遺伝子セグメントが異種PIV からのカウンターパート遺伝子又は遺伝子セグメントにより置換される請求の範囲第 118項記載の免疫原組成物。
【請求項１２４】
HPIV１の１又は両HN及びＦ糖タンパク質遺伝子が、前記感染性キメラPIV 粒子を形成するために、HPIV３のHN及びＦ糖タンパク質遺伝子により置換される請求の範囲第 123項記載の免疫原組成物。
【請求項１２５】
前記感染性キメラPIV 粒子の組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、PIV の弱毒化、感温性、低温適合性、小さなプラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性エピトープにおける変化から選択された表現型変更をコードする、ヌクレオチド挿入、転位、欠失又は置換により修飾される請求の範囲第 123項記載の免疫原組成物。
【請求項１２６】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、弱毒化された感染性キメラPIV 粒子を形成するために、ts及び非−ts弱毒化突然変異から選択された複数の突然変異を組込む請求の範囲第 125項記載の免疫原組成物。
【請求項１２７】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、JS cp45 の突然変異を組込む請求の範囲第 118項記載の免疫原組成物。
【請求項１２８】
前記組換えPIV ゲノム又はアンチゲノムが、JS cp45 の複数の突然変異を組込む請求の範囲第 118項記載の免疫原組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１５Ａ】
【図１５Ｂ】
【図１６】
【図１７Ａ】
【図１７Ｂ】
【図１８】
【図１９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１５Ａ】
【図１５Ｂ】
【図１６】
【図１７Ａ】
【図１７Ｂ】
【図１８】
【図１９】
【公開番号】特開２００８−３０７０５５（Ｐ２００８−３０７０５５Ａ）
【公開日】平成２０年１２月２５日（２００８．１２．２５）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２００８−２０２３３５（Ｐ２００８−２０２３３５）
【出願日】平成２０年８月５日（２００８．８．５）
【分割の表示】特願平１０−５５０７０４の分割
【原出願日】平成１０年５月２２日（１９９８．５．２２）
【出願人】（５００１６２５８７）アメリカ合衆国 (8)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年１２月２５日（２００８．１２．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２０２３３５（Ｐ２００８−２０２３３５）
【出願日】平成２０年８月５日（２００８．８．５）
【分割の表示】特願平１０−５５０７０４の分割
【原出願日】平成１０年５月２２日（１９９８．５．２２）
【出願人】（５００１６２５８７）アメリカ合衆国 (8)
【Ｆターム（参考）】
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