ジオキソランヌクレオシド類似体の立体選択的製造方法
【課題】ジオキソランヌクレオシド類似体の立体選択的製造方法の提供。
【解決手段】本発明は、式（Ｉ）
【化１】
で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）豚肝臓エステラーゼ又は豚膵臓リパーゼから選択された適当量の酵素の存在下において、式（ＩＩ）
【化２】
で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式（Ｉ）で表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法に関する。本発明はまた、式（ＩＩＩ）
【化３】
で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）カンジダ アンタルクチカ‘‘Ａ’’リパーゼ、カンジダ アンタルクチカ‘‘Ｂ’’リパーゼ、カンジダ リポリチカリパーゼ又はリゾムコール ミエヘイリパーゼから選択された適当量の酵素の存在下において、式（ＩＶ）
【化４】
で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式（ＩＩＩ）で表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法を提供する。
【解決手段】本発明は、式（Ｉ）
【化１】
で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）豚肝臓エステラーゼ又は豚膵臓リパーゼから選択された適当量の酵素の存在下において、式（ＩＩ）
【化２】
で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式（Ｉ）で表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法に関する。本発明はまた、式（ＩＩＩ）
【化３】
で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）カンジダ アンタルクチカ‘‘Ａ’’リパーゼ、カンジダ アンタルクチカ‘‘Ｂ’’リパーゼ、カンジダ リポリチカリパーゼ又はリゾムコール ミエヘイリパーゼから選択された適当量の酵素の存在下において、式（ＩＶ）
【化４】
で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式（ＩＩＩ）で表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明分野
本発明は、ジオキソランヌクレオシド類似体及びそれらの中間体の立体選択的製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
ヌクレオシド類似体は、重要な種類の治療剤である。より特には、置換１，３−ジオキソランが天然ヌクレオシド中に見られる糖部分を置換しているジオキソランヌクレオシド類似体は、生物活性を有することが示されている。
【０００３】
ジオキソラン類似体は、最初に、ベレアウ他によって、１９８９年１０月１９日に公開された欧州特許第０３３７７１３号明細書、１９９１年８月２０日に発行された米国特許第５，０４１，４４９号明細書及び１９９３年１２月１４日に発行された米国特許第５，２７０，３１５号明細書中で報告された。
【０００４】
９−（β−Ｄ−２−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）−２，６−ジアミノプリン（β−Ｄ−ＤＡＰＤ）及び９−（β−Ｄ−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）−９−グアニン（β−Ｄ−ＤＸＧ）は、様々な細胞系中のＨＩＶ−１に対して有用な効力を有することが、グ他によって報告されている（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．（１９９９年），４３（１０），２３７６頁−２３８２頁及びＮｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ（１９９９年），１８（４＆５），８９１頁−８９２頁）。
【０００５】
更に、１−（β−Ｌ−２−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）−シトシン（β−Ｌ−ＯｄｄＣ、トロキサシタビン（ｔｒｏｘａｃｉｔａｂｉｎｅ））が、様々な形態（例えば、固形腫瘍、成人白血病及びリンパ腫）の癌の治療において効力を示すこともまた、報告されている（ウェイトマン他，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０００年），６（４），１５７４頁−１５７８頁及びガイルス他，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（２００１年），１９（３），７６２頁−７７１頁、及びまた、ゴウルデアウ他，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（２００１年），４７（３），２３６頁−２４０頁）。
【０００６】
２−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４−カルボキシレートエステル等のジオキソラン中間体は、１９９７年６月１９日、マンサワー，タレク他による国際公開第９７／２１７０６号パンフレット、２０００年８月１７日、シムポイア，アレックス他による国際公開第００／４７７５９号パンフレット及び２０００年７月６日、ングエン−バ，ングヘ他による国際公開第００／３９１４３号パンフレットに記載されたようなジオキソランヌクレオシド類似体の合成において使用される重要な中間体である。これまで、文献は、生物分割法の開発に注意を向けた努力を報告している。酵素的分割法は、経済的で、再利用可能であり、かつ環境に優しいという触媒量の酵素を使用することによる利点を有する。それ故、２−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４−カルボキシレートエステルのジアステレオマー分割を行うための適当な酵素の同定が強く望まれている。
【特許文献１】欧州特許第０３３７７１３号明細書
【特許文献２】米国特許第５，０４１，４４９号明細書
【特許文献３】米国特許第５，２７０，３１５号明細書
【非特許文献１】Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．（１９９９年），４３（１０），２３７６頁−２３８２頁
【非特許文献２】Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ（１９９９年），１８（４＆５），８９１頁−８９２頁
【非特許文献３】ウェイトマン他，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０００年），６（４），１５７４頁−１５７８頁
【非特許文献４】ガイルス他，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（２００１年），１９（３），７６２頁−７７１頁
【非特許文献５】ゴウルデアウ他，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（２００１年），４７（３），２３６頁−２４０頁
【特許文献４】国際公開第９７／２１７０６号パンフレット
【特許文献５】国際公開第００／４７７５９号パンフレット
【特許文献６】国際公開第００／３９１４３号パンフレット
【発明の開示】
【０００７】
発明の概要
１つの観点において、本発明は、式Ｉ
【化１】
（式中、Ｒ1は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基又は炭素原子数３ないし１０のヘテロアラルキル基から選択され、Ｒ2は、ヒドロキシル保護基を表わす。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）豚肝臓エステラーゼ又は豚膵臓リパーゼから選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＩ
【化２】
（式中、Ｒ1は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基又は炭素原子数３ないし１０のヘテロアラルキル基から選択され、Ｒ2は、ヒドロキシル保護基を表わす。）
で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式Ｉで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法を提供する。
【０００８】
他の観点において、式ＩＩＩ
【化３】
（式中、Ｒ11は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基又は炭素原子数３ないし１０のヘテロアラルキル基から選択され、Ｒ12は、ヒドロキシル保護基を表わす。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）カンジダ アンタルクチカ‘‘Ａ’’リパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ‘‘Ａ’’ ｌｉｐａｓｅ）、カンジダ アンタルクチカ‘‘Ｂ’’リパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ‘‘Ｂ’’ ｌｉｐａｓｅ）、カンジダ リポリチカリパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ Ｌｙｐｏｌｉｔｉｃａ ｌｉｐａｓｅ）又はリゾムコール ミエヘイリパーゼ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ Ｍｉｅｈｅｉ ｌｉｐａｓｅ）から選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＶ
【化４】
（式中、Ｒ11は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基又は炭素原子数３ないし１０のヘテロアラルキル基から選択され、Ｒ12は、ヒドロキシル保護基を表わす。）で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式ＩＩＩで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法を提供する。
【０００９】
本発明の詳細な説明
本発明は、一般的に、ジオキソランヌクレオシド類似体及びそれらの中間体の製造のための、酵素によるジアステレオマー分割法に関する。
【００１０】
１つの態様において、本発明の方法は、以下の態様が、独立して又は組合されて存在する方法を含む。
【００１１】
他に特に定義がない限りは、ここで使用される全ての技術及び科学用語は、本発明が属するところの当業者に一般的に理解されるものと同一の意味を有する。全ての刊行物、特許出願、特許及びここで言及された他の参照文献は、完全に参照文献として組込まれる。矛盾する場合、本願明細書は、定義を含め、調整され得る。更に、材料、方法及び実施例は、例証のみであり、制限することを意図しない。
【００１２】
本願で使用される用語‘‘アルキル基’’は、１つ以上のハロゲン原子、ニトロ基、ニトロソ基、ＳＯ3Ｒ12、ＰＯ3ＲｃＲｄ、ＣＯＮＲ13Ｒ14、炭素原子数１ないし６のアルキル基、炭素原子数２ないし６のアルケニル基、炭素原子数２ないし６のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子
数１ないし６のアルキルオキシ基、炭素原子数２ないし６のアルケニルオキシ基、炭素原子数２ないし６のアルキニルオキシ基、炭素原子数６ないし１２のアリールオキシ基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数１ないし６のアルキル基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数２ないし６のアルケニル基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数２ないし６のアルキニル基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数６ないし１２のアリール基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数６ないし１２のアラルキル基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、ヒドロキシル基、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＯＲ12、シアノ基、アジド基、アミジノ基又はグアニド基（ここで、Ｒ12、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒ13及びＲ14は、互いに独立して、Ｈ、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１４のアリール基、炭素原子数３ないし１２のヘテロ環式基、炭素原子数３ないし１８のヘテロアラルキル基、炭素原子数６ないし１８のアラルキル基から選択されるか；又は、Ｒｃ及びＲｄは、酸素原子と一緒になって、５ないし１０員のヘテロ環式基を形成するか；又は、Ｒ13及びＲ14は、窒素原子と一緒になって、３ないし１０員のヘテロ環式基を形成する。）によって所望により置換され得る直鎖、枝分かれ鎖又は環状炭化水素部分を表わす。アルキル基の有用な例は、イソプロピル基、エチル基、フルオロヘキシル基又はシクロプロピル基を含む。用語‘‘アルキル基’’はまた、１つ以上の水素原子が酸素原子（例えば、ベンゾイル基）又はハロゲン原子、より好ましくは、弗素原子（例えば、ＣＦ3−又はＣＦ3ＣＨ2−）によって置換され得るアルキル基を含むことを意味する。
【００１３】
用語‘‘アルケニル基’’及び‘‘アルキニル基’’は、少なくとも１つの不飽和基（例えば、アリル基）を含むアルキル基を表わす。
【００１４】
用語‘‘アルコキシ基’’は、酸素原子を通して隣接する原子に共有結合したアルキル基を表わす。
【００１５】
用語‘‘アリール基’’は、１つ以上のハロゲン原子、ニトロ基、ニトロソ基、ＳＯ3Ｒ12、ＰＯ3ＲｃＲｄ、ＣＯＮＲ13Ｒ14、炭素原子数１ないし６のアルキル基、炭素原子数２ないし６のアルケニル基、炭素原子数２ないし６のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数１ないし６のアルキルオキシ基、炭素原子数２ないし６のアルケニルオキシ基、炭素原子数２ないし６のアルキニルオキシ基、炭素原子数６ないし１２のアリールオキシ基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数１ないし６のアルキル基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数２ないし６のアルケニル基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数２ないし６のアルキニル基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数６ないし１２のアリール基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数６ないし１２のアラルキル基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、ヒドロキシル基、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＯＲ12、シアノ基、アジド基、アミジノ基又はグアニド基（ここで、Ｒ12、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒ13及びＲ14は、互いに独立して、Ｈ、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１４のアリール基、炭素原子数３ないし１２のヘテロ環式基、炭素原子数３ないし１８のヘテロアラルキル基、炭素原子数６ないし１８のアラルキル基から選択されるか；又は、Ｒｃ及びＲｄは、酸素原子と一緒になって、５ないし１０員のヘテロ環式基を形成するか；又は、Ｒ13及びＲ14は、窒素原子と一緒になって、３ないし１０員のヘテロ環式基を形成する。）によって所望により置換され得るベンゼノイド型環を少なくとも１つ含む炭素環式部分を表わす。アリール基の例は、フェニル基及びナフチル基を含む。
【００１６】
用語‘‘アリールアルキル基’’は、炭素原子数１ないし６のアルキル基によって隣接する原子に結合したアリール基（例えば、ベンジル基）を表わす。
【００１７】
用語‘‘アリールオキシ基’’は、酸素原子を通して隣接する原子に共有結合したアリール基を表わす。
【００１８】
用語‘‘アシル基’’は、−ＯＨ基の置換によって得られたカルボン酸から誘導された基として定義される。酸等に関連して、アシル基は、所望により１つ以上のハロゲン原子、ニトロ基、ニトロソ基、ＳＯ3Ｒ12、ＰＯ3ＲｃＲｄ、ＣＯＮＲ13Ｒ14、炭素原子数１ないし６のアルキル基、炭素原子数２ないし６のアルケニル基、炭素原子数２ないし６のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数１ないし６のアルキルオキシ基、炭素原子数２ないし６のアルケニルオキシ基、炭素原子数２ないし６のアルキニルオキシ基、炭素原子数６ないし１２のアリールオキシ基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数１ないし６のアルキル基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数２ないし６のアルケニル基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数２ないし６のアルキニル基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数６ないし１２のアリール基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数６ないし１２のアラルキル基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、ヒドロキシル基、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＯＲ12、シアノ基、アジド基、アミジノ基又はグアニド基（ここで、Ｒ12、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒ13及びＲ14は、互いに独立して、Ｈ、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１４のアリール基、炭素原子数３ないし１２のヘテロ環式基、炭素原子数３ないし１８のヘテロアラルキル基、炭素原子数６ないし１８のアラルキル基から選択されるか；又は、Ｒｃ及びＲｄは、酸素原子と一緒になって、５ないし１０員のヘテロ環式基を形成するか；又は、Ｒ13及びＲ14は、窒素原子と一緒になって、３ないし１０員のヘテロ環式基を形成する。）で置換された直鎖、枝分かれ鎖又は脂環式又は芳香族であり得る。有用なアシル基の例は、アセチル基、プロピオニル基、ピバロイル基、ヘキサノイル基、トリフルオロアセチル基、シクロヘキサノイル基及びベンゾイル基を含む。
【００１９】
‘‘アシルオキシ基’’は、酸素原子によって隣接する原子に結合したアシル基（例えば、アセトキシ基、ベンゾイルオキシ基）として定義される。
【００２０】
本願において使用される用語‘‘シクロアルキル基’’は、環を形成する上記で定義したような‘‘アルキル基’’（例えば、シクロプロピル基、シクロペンチル基又はシクロヘキシル基）を表わす。
【００２１】
用語‘‘シクロアルキルアミノ基’’は、窒素原子を通して隣接する原子に共有結合したシクロアルキル基を表わす。
【００２２】
用語‘‘アルカノール基’’は、水素原子の１つがヒドロキシル基によって置換された‘‘アルキル基’’部分（例えば、イソプロパノール、エタノール又はシクロプロパノール）を表わす。用語‘‘アルカノール基’’はまた、１つ以上の水素原子が、ハロゲン原子、より好ましくは弗素原子（例えば、ＣＦ3ＣＨ2ＯＨ）によって置換されたアルカノール基を含むことを意味する。
【００２３】
用語‘‘独立して’’は、置換基が、各項目において同じ又は異なる定義であり得ることを意味する。
【００２４】
用語‘‘ヒドロキシル保護基’’は、有機化学の分野でよく知られている。このような保護基は、Ｔ．グリーン，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐ Ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，（ジョン ウィリー＆サン，１９８１年）中で見られ得る。ヒドロキシル保護基の例は、ベンジル基、アセチル基、ベンゾイル基、ピバロイル基及びイソプロピルオキシカルボニル基を含むが、これらに制限されない。
【００２５】
‘‘ジオキソラン環’’は、以下に図示したように、環の１位及び３位に酸素原子を有する、いかなる置換又は未置換の５員の単環も表わす：
【化５】
【００２６】
ハロゲン原子は、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ及びＢｒから選択される。
【００２７】
本願で使用される用語‘‘プリン塩基又はピリミジン塩基、もしくはその類似体’’は、構造（原子の種類及びそれらの配列）は通常の塩基と同一であるが、更なる機能性を有し得るか又は通常の塩基の特定の機能性が欠けているという点で、このような塩基と類似するヌクレオチド又はその類似体中に見られるプリン塩基又はピリミジン塩基を意味する。このような類似体は、窒素原子によるＣＨ部分の置換によって誘導されたもの（例えば、５−アザシトシンのような５−アザピリミジン）又は、逆の置換によって誘導されたもの（例えば、７−デアザアデノシン又は７−デアザグアノシンのような７−デアザプリン）又は、両方の置換によって誘導されたもの（例えば、７−デアザ、８−アザプリン）を含む。このような塩基の類似体はまた、環置換基が、組込まれる、除去される又は従来技術で慣用の置換基、例えば、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、アミノ基、炭素原子数１ないし６のアルキル基によって変性されるところのそれらの化合物を含む。このようなプリン塩基又はピリミジン塩基、その類似体及び誘導体は、当業者によく知られ得る。
【００２８】
ここに記載された化合物はまた、前記化合物の薬学的に許容可能な塩を含む。
【００２９】
用語、前記化合物の‘‘薬学的に許容可能な塩’’は、薬学的に許容可能な無機及び有機酸及び塩基から誘導されたそれらの化合物を含むことを意味する。適当な酸の例は、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、琥珀酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸及びベンゼンスルホン酸を含む。
【００３０】
適当な塩基から誘導された塩は、アルカリ金属（例えば、ナトリウム）塩、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）塩、アンモニウム塩及びＮＲ4+塩（式中、Ｒは炭素原子数１ないし４のアルキル基を表わす。）を含む。
【００３１】
本願での使用において、本発明で使用され得る用語‘‘適当量の酵素’’は、特に制限されない。使用される酵素の量は、出発材料の十分な化学変換を得るために、所望の純度又は所望の収量の反応生成物、所望の反応時間又はそれらの組合せを得るために、選択され得ることが、当業者によって予期され得る。‘‘適当量の酵素’’の有用な例は、式ＩＩ又はＩＶで表わされる化合物に対して、酵素約１％ないし２００％の質量比であり得る。
【００３２】
酵素によるジアステレオマー分割は、様々な溶媒中で行われ得ることが当業者によって予期され得る。所望の方法を行うために有用なこのような溶媒は、反応に悪影響を及ぼすべきではない。溶媒の有用な例は、水、炭素原子数１ないし１２のアルカノール（例えば、エタノール、ブタノール、ｔ−アミルアルコール及び３−メチル−３−ペンタノール）、トルエン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホンアミド、Ｎ−メチルピロリドン、イソオクタン、ｔ−ブチルメチルエーテル及びこれらの混合物を含む。溶媒の混合物は、単相（例えば、水とイソプロパノールの混合物）
又は２相であり得り、所望により、従来技術でよく知られる相間移動触媒が使用され得る。
【００３３】
水性溶媒は、所望により、緩衝液であり得る。緩衝液の有用な例は、ホルメート、アセテート、ホスフェート、ＴＲＩＳ、シトレート及びボレートを含む。このような緩衝液又は異なる緩衝液がどのように製造され得るかは、当業者に容易に予期され得る。二者択一的に、ｐＨ値の範囲内でプレミックスされた緩衝液が、市販の実験室用供給品から購入され得る。緩衝溶液のｐＨを測定するために、ｐＨメーター（又は他のｐＨ測定器）の使用もまた可能である。
【００３４】
本発明において使用するために適当なｐＨ範囲は、この分野の当業者によって容易に決定され得る。選択されたｐＨは、該反応条件下で該方法を発生させ、かつ反応に悪影響を及ぼすこと又は酵素を多量に失活させることなく、所望の生成物を提供し得る。
【００３５】
本発明の更なる態様において：
該方法は、約４ないし９のｐＨ範囲で行われ；
該方法は、約６ないし８のｐＨ範囲で行われ；
該方法は、約６．８ないし７．２のｐＨ範囲で行われる。
【００３６】
本発明で使用され得る酵素の濃度範囲は、特に制限されない。例えば、溶媒又は溶液に対する酵素の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬないし約２００ｍｇ／ｍＬであり得る。二者択一的に、溶媒又は溶液に対する酵素の濃度は、
約１ｍｇ／ｍＬないし約１００ｍｇ／ｍＬ、
約５ｍｇ／ｍＬないし約２０ｍｇ／ｍＬ、
約１０ｍｇ／ｍＬ、
約７．５ｍｇ／ｍＬ
であり得る。
【００３７】
所望の方法を行うために有用な酵素は、標準方法（例えば、分別沈殿）によって単離され得る酵素又は粗酵素の供給源として使用される細胞残骸の除去後に得られる無細胞抽出液及び酵素として使用される結果として生じる粉末であり得ることもまた予期され得る。二者択一的に、固定化酵素、精製酵素、可溶性酵素又は組換え酵素（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｅｎｚｙｍｅ）が使用され得る。このような酵素技術の例は、カールヘインズ ドラウツ及びハーバート ウォルドマンによる‘‘Ｅｎｚｙｍｅ Ｃａｔａｌｙｓｉｓ ｉｎ
Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ’’，第２版（ウィリー出版社）で見られ得る。
【００３８】
１つの態様において、本発明の方法は、更に、酵素によるジアステレオマー分割に使用された酵素を回収する工程を含む。
【００３９】
本発明の使用のために適当な温度は、この分野の当業者によって容易に決定され得る。選択された温度は、該反応条件下で該方法を発生させ、かつ反応に悪影響を及ぼすこと又は酵素を多量に失活させることなく、所望の生成物を提供し得る。
【００４０】
本発明の更なる態様において：
該方法は、約５ないし５０℃の範囲の温度で行われ；
該方法は、約２０ないし４０℃の範囲の温度で行われ；
該方法は、約室温で行われ；
該方法は、約３０℃の温度で行われる。
【００４１】
本方法における化合物ＩＩ又はＩＶの濃度範囲は、０．１％ないし１００％以上であり得る。あるいは、濃度は、約１％ないし約５０％の範囲である。また、濃度は、約５％ないし約１５％の範囲である。あるいは、濃度は、約１２．５％又は約１１．２％である。濃度は、パーセント（％）で表わされ、かつ溶媒又は溶液の単位体積当りの化合物のグラム量で示される（例えば、化合物５０ｇ／水性ホスフェート緩衝液４００ｍＬ×１００＝１２．５％）。酵素によるジアステレオマー分割は、化合物ＩＩの溶液、エマルジョン又は懸濁液で行われ得る。
【００４２】
１つの態様において、本発明は、式Ｉ
【化６】
（式中、Ｒ1及びＲ2の各々は、上記で定義した通りである。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）豚肝臓エステラーゼ又は豚膵臓リパーゼから選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＩ
【化７】
（式中、Ｒ1及びＲ2の各々は、上記で定義した通りである。）
で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式Ｉで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法を提供する。
【００４３】
式ＩＩで表わされる化合物が、同様に、式ＩＩａ及びＩＩｂで表わされ得ることが当業者に予期され得る。式ＩＩａ及びＩＩｂで表わされる化合物の混合物は、ＩＩａ対ＩＩｂが約１％ないし約９９％（例えば、１：１又は１．５：１又は２：１）等の様々な比で存在し得る。全てのこのような可能な比は、本発明の範囲内に含まれる。
【化８】
【００４４】
更なる態様において：
Ｒ1は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基を表わし；
Ｒ1は、炭素原子数１ないし６のアルキル基を表わし；
Ｒ1は、メチル基を表わす。
【００４５】
更なる態様において：
Ｒ2は、ＣＯ−炭素原子数１ないし６のアルキル基、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリール基、ＣＯ−炭素原子数１ないし６のアルコキシ基、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリールオキシ基又はＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリールアルキル基から選択され；
Ｒ2は、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリール基を表わし；
Ｒ2は、ベンゾイル基を表わす。
【００４６】
１つの態様において、酵素は豚肝臓エステラーゼである。
【００４７】
他の態様において、酵素は豚膵臓リパーゼである。
【００４８】
１つの態様において、適当量の酵素は、式ＩＩで表わされる化合物に対して、約０．１％ないし約１００％の質量比で使用される。
【００４９】
１つの態様において、適当量の酵素は、式ＩＩで表わされる化合物に対して、約１％ないし約２５％の質量比で使用される。
【００５０】
更なる態様において、適当量の酵素は、式ＩＩで表わされる化合物に対して、約５％ないし約１０％の質量比で使用される。
【００５１】
更なる態様において：
式Ｉで表わされる化合物は、少なくとも８０％のジアステレオマー純度を有し；
式Ｉで表わされる化合物は、少なくとも９０％のジアステレオマー純度を有し；
式Ｉで表わされる化合物は、少なくとも９５％のジアステレオマー純度を有し；
式Ｉで表わされる化合物は、少なくとも９８％のジアステレオマー純度を有する。
【００５２】
１つの態様において、本発明は、式Ｉ
【化９】
（式中、Ｒ1及びＲ2の各々は、上記で定義した通りである。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）豚肝臓エステラーゼ又は豚膵臓リパーゼから選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＩ
【化１０】
（式中、Ｒ1及びＲ2の各々は、上記で定義した通りである。）で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式Ｉで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法、
及び、更に、
ｃ）式Ｉで表わされる化合物のＣ４位における官能基を置換し、式Ｖ
【化１１】
（式中、Ｂは、プリン塩基又はピリミジン塩基、もしくはその類似体を表わす。）
で表わされる化合物を製造する工程、
ｄ）式Ｖで表わされる前記化合物の基Ｒ2を除去する工程、
ｅ）式ＶＩ
【化１２】
（式中、Ｂは、プリン塩基又はピリミジン塩基、もしくはその類似体を表わす。）で表わされる化合物又はその薬学的に許容可能な塩を回収する工程
を含む前記方法を提供する。
【００５３】
１つの態様において、Ｂは、
【化１３】
［式中、
Ｒ3は、Ｈ、炭素原子数１ないし６のアルキル基、炭素原子数１ないし６のアシル基及びＣＯ−Ｒ9（式中、Ｒ9は、Ｈ又は炭素原子数１ないし６のアルキル基を表わす。）から選択され
Ｒ4及びＲ5は、互いに独立して、Ｈ、炭素原子数１ないし６のアルキル基、ブロミド、クロリド、フルオリド、ヨージド又はＣＦ3から選択され、
Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ブロミド、クロリド、フルオリド、ヨージド、アミノ基、ヒドロキシル基又は炭素原子数３ないし６のシクロアルキルアミノ基から選択される。］から選択される。
【００５４】
他の態様において、Ｂは、
【化１４】
から選択される。
【００５５】
１つの態様において、本発明は、式Ｉ
【化１５】
（式中、Ｒ1及びＲ2の各々は、上記で定義した通りである。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）豚肝臓エステラーゼ又は豚膵臓リパーゼから選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＩ
【化１６】
（式中、Ｒ1及びＲ2の各々は、上記で定義した通りである。）で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式Ｉで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法、
及び、更に、式ＶＩＩ
【化１７】
で表わされる化合物を回収する工程を含む前記方法を提供する。
【００５６】
１つの態様において、本発明は、式ＩＩＩ
【化１８】
（式中、Ｒ11及びＲ12は、上記に記載した通りである。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）カンジダ アンタルクチカ‘‘Ａ’’リパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ‘‘Ａ’’ ｌｉｐａｓｅ）、カンジダ アンタルクチカ‘‘Ｂ’’リパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ‘‘Ｂ’’ ｌｉｐａｓｅ）、カンジダ リポリチカリパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ Ｌｙｐｏｌｉｔｉｃａ ｌｉｐａｓｅ）又はリゾムコール ミエヘイリパーゼ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ Ｍｉｅｈｅｉ ｌｉｐａｓｅ）から選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＶ
【化１９】
（式中、Ｒ11及びＲ12は、上記に記載した通りである。）で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式ＩＩＩで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法を提供する。
【００５７】
式ＩＶで表わされる化合物が、同様に、式ＩＶａ及びＩＶｂで表わされ得ることが当業者に予期され得る。式ＩＶａ及びＩＶｂで表わされる化合物の混合物は、ＩＶａ対ＩＶｂが約１％ないし約９９％（例えば、１：１又は１．５：１又は２：１）等の様々な比で存在し得る。全てのこのような可能な比は、本発明の範囲内に含まれる。
【化２０】
【００５８】
更なる態様において：
Ｒ11は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基を表わし；
Ｒ11は、炭素原子数１ないし６のアルキル基を表わし；
Ｒ11は、メチル基を表わす。
【００５９】
更なる態様において：
Ｒ12は、ＣＯ−炭素原子数１ないし６のアルキル基、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリール基、ＣＯ−炭素原子数１ないし６のアルコキシ基、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリールオキシ基又はＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリールアルキル基から選択され；
Ｒ12は、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリール基を表わし；
Ｒ12は、ベンゾイル基を表わす。
【００６０】
１つの態様において、酵素はカンジダ アンタルクチカ‘‘Ａ’’リパーゼであるである。
【００６１】
更なる態様において、酵素はカンジダ アンタルクチカ‘‘Ｂ’’リパーゼである。
【００６２】
また、更なる態様において、酵素はカンジダ リポリチカリパーゼである。
【００６３】
また、更なる態様において、酵素はリゾムコール ミエヘイリパーゼである。
【００６４】
１つの態様において、適当量の酵素は、式ＩＶで表わされる化合物に対して、約０．１％ないし約１００％の質量比で使用される。
【００６５】
１つの態様において、適当量の酵素は、式ＩＶで表わされる化合物に対して、約１％ないし約２５％の質量比で使用される。
【００６６】
１つの態様において、適当量の酵素は、式ＩＶで表わされる化合物に対して、約５％ないし約１０％の質量比で使用される。
【００６７】
更なる態様において：
式ＩＩＩで表わされる化合物は、少なくとも８０％のジアステレオマー純度を有し；
式ＩＩＩで表わされる化合物は、少なくとも９０％のジアステレオマー純度を有し；
式ＩＩＩで表わされる化合物は、少なくとも９５％のジアステレオマー純度を有し；
式ＩＩＩで表わされる化合物は、少なくとも９８％のジアステレオマー純度を有する。
【００６８】
１つの態様において、本発明は、式ＩＩＩ
【化２１】
（式中、Ｒ11及びＲ12は、上記に記載した通りである。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）カンジダ アンタルクチカ‘‘Ａ’’リパーゼ、カンジダ アンタルクチカ‘‘Ｂ’’リパーゼ、カンジダ リポリチカリパーゼ又はリゾムコール ミエヘイリパーゼから選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＶ
【化２２】
（式中、Ｒ11及びＲ12は、上記に記載した通りである。）で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式ＩＩＩで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法、
及び、更に、
ｃ）式ＩＩＩで表わされる化合物のＣ４位における官能基を置換し、式ＶＩＩＩ
【化２３】
（式中、Ｂは、プリン塩基又はピリミジン塩基、もしくはその類似体を表わす。）
で表わされる化合物を製造する工程、
ｄ）式ＶＩＩＩで表わされる前記化合物の基Ｒ12を除去する工程、
ｅ）式ＩＸ
【化２４】
（式中、Ｂは、プリン塩基又はピリミジン塩基、もしくはその類似体を表わす。）で表わされる化合物又はその薬学的に許容可能な塩を回収する工程
を含む前記方法を提供する。
【００６９】
１つの態様において、Ｂは、
【化２５】
［式中、
Ｒ3は、Ｈ、炭素原子数１ないし６のアルキル基、炭素原子数１ないし６のアシル基及びＣＯ−Ｒ9（式中、Ｒ9は、Ｈ又は炭素原子数１ないし６のアルキル基を表わす。）から選択され
Ｒ4及びＲ5は、互いに独立して、Ｈ、炭素原子数１ないし６のアルキル基、ブロミド、クロリド、フルオリド、ヨージド又はＣＦ3から選択され、
Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ブロミド、クロリド、フルオリド、ヨージド、アミノ基、ヒドロキシル基又は炭素原子数３ないし６のシクロアルキルアミノ基から
選択される。］から選択される。
【００７０】
他の態様において、Ｂは、
【化２６】
から選択される。
【００７１】
１つの態様において、本発明は、式ＩＩＩ
【化２７】
（式中、Ｒ11及びＲ12は、上記に記載した通りである。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）カンジダ アンタルクチカ‘‘Ａ’’リパーゼ、カンジダ アンタルクチカ‘‘Ｂ’’リパーゼ、カンジダ リポリチカリパーゼ又はリゾムコール ミエヘイリパーゼから選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＶ
【化２８】
（式中、Ｒ11及びＲ12は、上記に記載した通りである。）で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式ＩＩＩで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法、
及び、更に、式Ｘ
【化２９】
で表わされる化合物を回収する工程を含む前記方法を提供する。
【００７２】
不均一な部分なく系をより完全に混合するために、オーバーヘッド攪拌機（Ｏｖｅｒｈｅａｄ Ｓｔｉｒｒｅｒ）又は磁気攪拌子を備えた丸底フラスコ又は標準実験室用反応器が使用され得ることもまた、当業者によって予期され得る。初めに、化合物ＩＩが、反応器の底に分離相を形成し得り、反応の進行につれて、より均一に分散する。
【００７３】
攪拌は、所望により使用され得ることが予期され得る。酵素の添加工程中、（試薬のために不適当であり得る高い局所的なｐＨを防止するための）塩基の添加中、又は方法中に連続して使用され得る適当な攪拌速度は、該反応条件下で該方法を発生させ、かつ反応に悪影響を及ぼすこと又は酵素を多量に失活させることなく、所望の生成物を提供させるために選択され得る。
【００７４】
当業者は、酵素によるジアステレオマー分割（スキーム１及び２）を行うために使用されるジオキソラン化合物は、既知の方法を使用して製造され得ることを予期し得る。このような方法の例は、
１．１９９７年６月１９日、マンサワー，タレク他による国際公開第９７／２１７０６号パンフレット、
２．２０００年８月１７日、シムポイア，アレックス他による国際公開第００／４７７５９号パンフレット、及び
３．２０００年７月６日、ングエン−バ，ングヘ他による国際公開第００／３９１４３号パンフレット
に記載されている。
【００７５】
１つの態様において、本発明の方法は、一般的なスキーム１又はスキーム２
【化３０】
に図示されたように行われ得る。
【００７６】
式Ｉ又は式ＩＩＩで表わされるジオキソラン化合物からのジオキソランヌクレオシド類似体の製造方法については、当業者に既知である様々な方法がある。例えば、ジオキソラン環のＣ−４位において、プリン塩基、ピリミジン塩基又は類似体を結合する方法が、国際公開第９７／２１７０６号パンフレット及び国際公開第００／３９１４３号パンフレットに記載されている。スキーム３及びスキーム４
【化３１】
は、ジオキソラン環にプリン塩基、ピリミジン塩基又は類似体を結合する方法を図示している。
【００７７】
メチルエステルの加水分解及び酸化的脱カルボキシ化の後、結果として生じたジオキソランは、プリン塩基、ピリミジン塩基、又は類似体に結合され、更に、脱保護され、所望のジオキソランヌクレオシド類似体が得られ得る。
【００７８】
以下の実施例は、本発明の様々な態様を説明するために提供され、範囲を制限するように解釈されるべきではない。
【実施例】
【００７９】
実施例
実施例１：２（Ｓ）−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステル
２−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステル（５０ｇ、１：１のシス対トランス比）及び磁気攪拌子を１Ｌ三角フラスコに入れた。その後、水性ホスフェート緩衝液（４００ｍＬ、０．３Ｍ、ｐＨ＝７．１）をフラスコに入れた。反応フラスコを、外部水浴を使用して３０℃まで加熱した。
反応混合物のｐＨを１Ｎ ＮａＯＨを用いて７に調整し、その後、豚膵臓リパーゼ粉末４ｇを少しずつ添加した。結果として生じた懸濁液を穏やかに攪拌し、ピペットを通して２Ｎ ＮａＯＨを定期的に添加するすることによって、ｐＨを６．８ないし７．２に維持した。２Ｎ ＮａＯＨ約３５ｍＬを、反応過程を通して添加した。該反応を、キラルカラム（キラセル（登録商標：ＣＨＩＲＡＣＥＬ）ＯＤ；０．４６×２５ｃｍ）を使用したＨＰＬＣ分析によって観察し、未反応エステルの光学純度と反応転化率を決定した（試料は、１、２、４、６及び８時間において回収した）。５時間後、反応進行が停止したため、豚膵臓リパーゼ１．５ｇを、更に添加した。シス−エステルとトランス−エステルの比が＞９８：２となったら（２．５時間追加）、酢酸エチル２００ｍＬを添加することによって、反応を停止させた。
珪藻土（１５ｇ）を添加し、２相混合物を５分間攪拌した。その後、混合物を穏やかな吸引を用いて濾過し、その濾過ケークを酢酸エチル２５ｍＬで２回洗浄した。２相混合物を分液漏斗に移し、該２相ができるだけ多く分離するまで処理した。下相の透明な水相（約４００ｍＬ）を排水し、その後、酢酸エチル（２５ｍＬで１回抽出した。組合せた有機層及びエマルジョン相を、飽和重炭酸ナトリウム１００ｍＬで２回洗浄し、飽和食塩水７５ｍＬで１回洗浄することによって乾燥させた（必要に応じて、生成物は、少量の無水硫酸ナトリウムで処理することによって、更に乾燥させられ得る。）。その後、溶媒を、減圧下で蒸発させ、２（Ｓ）−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステルを、淡黄色液体として得た（２５．８ｇ）。ＨＰＬＣによる分析は、２（Ｒ）−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステルが２％未満であることを示した。
【００８０】
実施例２：２（Ｒ）−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステル
２−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステル（２（Ｓ）−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステル及び２（Ｒ）−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステルの１：１．２７混合物 １．１２ｇ）を、攪拌子及び０．０４Ｍ、ｐＨ７．２のホスフェート緩衝液１０ｍＬを含む２５ｍＬビーカーに添加した。リゾムコール ミエヘイリパーゼ７５ｍｇをこれに添加し、２Ｎ ＮａＯＨを用いて、ｐＨを７．２に調整した。懸濁液を、磁気攪拌機を使用して攪拌し、反応を室温で進行させた。２Ｎ ＮａＯＨを定期的に添加することによって、ｐＨを再調整した。アリコート５０μを分離して、ＨＰＬＣ（キラセル（登録商標：ＣＨＩＲＡＣＥＬ）ＯＤ；０．４６×２５ｃｍ カラム）によって分析することによって、転化率を観察した。１時間後、加水分解度は２５％であった。９時間後、ジクロロメタン（１０ｍＬ）で抽出することによって、反応を停止させた。有機相を回収し、水相をジクロロメタン（１０ｍＬ）で再抽出した。持続性のエマルジョンが形成されたため、珪藻土（３ｇ）を添加し、混合物を、焼結ガラス漏斗を通して濾過し、濾過ケークをジクロロメタン（１０ｍＬ）で洗浄した。濾液を分離し、組合せた有機相を飽和重炭酸ナトリウム（２×２０ｍＬ）及び１回分の５％食塩水（１５ｍＬ）で抽出した。溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。約３．５％の２（Ｓ）−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステルを含む２（Ｒ）−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステル（０．４５ｇ）が黄色オイルとして得られた。
【００８１】
本発明の方法を行うために有用な酵素は、マサチューセッツ州、ケンブリッジのアルツス バイオロジックス インコーポレーテッドから得ることができる。
【技術分野】
【０００１】
発明分野
本発明は、ジオキソランヌクレオシド類似体及びそれらの中間体の立体選択的製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
ヌクレオシド類似体は、重要な種類の治療剤である。より特には、置換１，３−ジオキソランが天然ヌクレオシド中に見られる糖部分を置換しているジオキソランヌクレオシド類似体は、生物活性を有することが示されている。
【０００３】
ジオキソラン類似体は、最初に、ベレアウ他によって、１９８９年１０月１９日に公開された欧州特許第０３３７７１３号明細書、１９９１年８月２０日に発行された米国特許第５，０４１，４４９号明細書及び１９９３年１２月１４日に発行された米国特許第５，２７０，３１５号明細書中で報告された。
【０００４】
９−（β−Ｄ−２−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）−２，６−ジアミノプリン（β−Ｄ−ＤＡＰＤ）及び９−（β−Ｄ−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）−９−グアニン（β−Ｄ−ＤＸＧ）は、様々な細胞系中のＨＩＶ−１に対して有用な効力を有することが、グ他によって報告されている（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．（１９９９年），４３（１０），２３７６頁−２３８２頁及びＮｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ（１９９９年），１８（４＆５），８９１頁−８９２頁）。
【０００５】
更に、１−（β−Ｌ−２−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）−シトシン（β−Ｌ−ＯｄｄＣ、トロキサシタビン（ｔｒｏｘａｃｉｔａｂｉｎｅ））が、様々な形態（例えば、固形腫瘍、成人白血病及びリンパ腫）の癌の治療において効力を示すこともまた、報告されている（ウェイトマン他，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０００年），６（４），１５７４頁−１５７８頁及びガイルス他，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（２００１年），１９（３），７６２頁−７７１頁、及びまた、ゴウルデアウ他，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（２００１年），４７（３），２３６頁−２４０頁）。
【０００６】
２−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４−カルボキシレートエステル等のジオキソラン中間体は、１９９７年６月１９日、マンサワー，タレク他による国際公開第９７／２１７０６号パンフレット、２０００年８月１７日、シムポイア，アレックス他による国際公開第００／４７７５９号パンフレット及び２０００年７月６日、ングエン−バ，ングヘ他による国際公開第００／３９１４３号パンフレットに記載されたようなジオキソランヌクレオシド類似体の合成において使用される重要な中間体である。これまで、文献は、生物分割法の開発に注意を向けた努力を報告している。酵素的分割法は、経済的で、再利用可能であり、かつ環境に優しいという触媒量の酵素を使用することによる利点を有する。それ故、２−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４−カルボキシレートエステルのジアステレオマー分割を行うための適当な酵素の同定が強く望まれている。
【特許文献１】欧州特許第０３３７７１３号明細書
【特許文献２】米国特許第５，０４１，４４９号明細書
【特許文献３】米国特許第５，２７０，３１５号明細書
【非特許文献１】Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．（１９９９年），４３（１０），２３７６頁−２３８２頁
【非特許文献２】Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ（１９９９年），１８（４＆５），８９１頁−８９２頁
【非特許文献３】ウェイトマン他，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０００年），６（４），１５７４頁−１５７８頁
【非特許文献４】ガイルス他，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（２００１年），１９（３），７６２頁−７７１頁
【非特許文献５】ゴウルデアウ他，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（２００１年），４７（３），２３６頁−２４０頁
【特許文献４】国際公開第９７／２１７０６号パンフレット
【特許文献５】国際公開第００／４７７５９号パンフレット
【特許文献６】国際公開第００／３９１４３号パンフレット
【発明の開示】
【０００７】
発明の概要
１つの観点において、本発明は、式Ｉ
【化１】
（式中、Ｒ1は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基又は炭素原子数３ないし１０のヘテロアラルキル基から選択され、Ｒ2は、ヒドロキシル保護基を表わす。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）豚肝臓エステラーゼ又は豚膵臓リパーゼから選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＩ
【化２】
（式中、Ｒ1は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基又は炭素原子数３ないし１０のヘテロアラルキル基から選択され、Ｒ2は、ヒドロキシル保護基を表わす。）
で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式Ｉで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法を提供する。
【０００８】
他の観点において、式ＩＩＩ
【化３】
（式中、Ｒ11は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基又は炭素原子数３ないし１０のヘテロアラルキル基から選択され、Ｒ12は、ヒドロキシル保護基を表わす。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）カンジダ アンタルクチカ‘‘Ａ’’リパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ‘‘Ａ’’ ｌｉｐａｓｅ）、カンジダ アンタルクチカ‘‘Ｂ’’リパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ‘‘Ｂ’’ ｌｉｐａｓｅ）、カンジダ リポリチカリパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ Ｌｙｐｏｌｉｔｉｃａ ｌｉｐａｓｅ）又はリゾムコール ミエヘイリパーゼ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ Ｍｉｅｈｅｉ ｌｉｐａｓｅ）から選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＶ
【化４】
（式中、Ｒ11は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基又は炭素原子数３ないし１０のヘテロアラルキル基から選択され、Ｒ12は、ヒドロキシル保護基を表わす。）で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式ＩＩＩで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法を提供する。
【０００９】
本発明の詳細な説明
本発明は、一般的に、ジオキソランヌクレオシド類似体及びそれらの中間体の製造のための、酵素によるジアステレオマー分割法に関する。
【００１０】
１つの態様において、本発明の方法は、以下の態様が、独立して又は組合されて存在する方法を含む。
【００１１】
他に特に定義がない限りは、ここで使用される全ての技術及び科学用語は、本発明が属するところの当業者に一般的に理解されるものと同一の意味を有する。全ての刊行物、特許出願、特許及びここで言及された他の参照文献は、完全に参照文献として組込まれる。矛盾する場合、本願明細書は、定義を含め、調整され得る。更に、材料、方法及び実施例は、例証のみであり、制限することを意図しない。
【００１２】
本願で使用される用語‘‘アルキル基’’は、１つ以上のハロゲン原子、ニトロ基、ニトロソ基、ＳＯ3Ｒ12、ＰＯ3ＲｃＲｄ、ＣＯＮＲ13Ｒ14、炭素原子数１ないし６のアルキル基、炭素原子数２ないし６のアルケニル基、炭素原子数２ないし６のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子
数１ないし６のアルキルオキシ基、炭素原子数２ないし６のアルケニルオキシ基、炭素原子数２ないし６のアルキニルオキシ基、炭素原子数６ないし１２のアリールオキシ基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数１ないし６のアルキル基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数２ないし６のアルケニル基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数２ないし６のアルキニル基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数６ないし１２のアリール基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数６ないし１２のアラルキル基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、ヒドロキシル基、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＯＲ12、シアノ基、アジド基、アミジノ基又はグアニド基（ここで、Ｒ12、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒ13及びＲ14は、互いに独立して、Ｈ、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１４のアリール基、炭素原子数３ないし１２のヘテロ環式基、炭素原子数３ないし１８のヘテロアラルキル基、炭素原子数６ないし１８のアラルキル基から選択されるか；又は、Ｒｃ及びＲｄは、酸素原子と一緒になって、５ないし１０員のヘテロ環式基を形成するか；又は、Ｒ13及びＲ14は、窒素原子と一緒になって、３ないし１０員のヘテロ環式基を形成する。）によって所望により置換され得る直鎖、枝分かれ鎖又は環状炭化水素部分を表わす。アルキル基の有用な例は、イソプロピル基、エチル基、フルオロヘキシル基又はシクロプロピル基を含む。用語‘‘アルキル基’’はまた、１つ以上の水素原子が酸素原子（例えば、ベンゾイル基）又はハロゲン原子、より好ましくは、弗素原子（例えば、ＣＦ3−又はＣＦ3ＣＨ2−）によって置換され得るアルキル基を含むことを意味する。
【００１３】
用語‘‘アルケニル基’’及び‘‘アルキニル基’’は、少なくとも１つの不飽和基（例えば、アリル基）を含むアルキル基を表わす。
【００１４】
用語‘‘アルコキシ基’’は、酸素原子を通して隣接する原子に共有結合したアルキル基を表わす。
【００１５】
用語‘‘アリール基’’は、１つ以上のハロゲン原子、ニトロ基、ニトロソ基、ＳＯ3Ｒ12、ＰＯ3ＲｃＲｄ、ＣＯＮＲ13Ｒ14、炭素原子数１ないし６のアルキル基、炭素原子数２ないし６のアルケニル基、炭素原子数２ないし６のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数１ないし６のアルキルオキシ基、炭素原子数２ないし６のアルケニルオキシ基、炭素原子数２ないし６のアルキニルオキシ基、炭素原子数６ないし１２のアリールオキシ基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数１ないし６のアルキル基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数２ないし６のアルケニル基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数２ないし６のアルキニル基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数６ないし１２のアリール基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数６ないし１２のアラルキル基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、ヒドロキシル基、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＯＲ12、シアノ基、アジド基、アミジノ基又はグアニド基（ここで、Ｒ12、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒ13及びＲ14は、互いに独立して、Ｈ、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１４のアリール基、炭素原子数３ないし１２のヘテロ環式基、炭素原子数３ないし１８のヘテロアラルキル基、炭素原子数６ないし１８のアラルキル基から選択されるか；又は、Ｒｃ及びＲｄは、酸素原子と一緒になって、５ないし１０員のヘテロ環式基を形成するか；又は、Ｒ13及びＲ14は、窒素原子と一緒になって、３ないし１０員のヘテロ環式基を形成する。）によって所望により置換され得るベンゼノイド型環を少なくとも１つ含む炭素環式部分を表わす。アリール基の例は、フェニル基及びナフチル基を含む。
【００１６】
用語‘‘アリールアルキル基’’は、炭素原子数１ないし６のアルキル基によって隣接する原子に結合したアリール基（例えば、ベンジル基）を表わす。
【００１７】
用語‘‘アリールオキシ基’’は、酸素原子を通して隣接する原子に共有結合したアリール基を表わす。
【００１８】
用語‘‘アシル基’’は、−ＯＨ基の置換によって得られたカルボン酸から誘導された基として定義される。酸等に関連して、アシル基は、所望により１つ以上のハロゲン原子、ニトロ基、ニトロソ基、ＳＯ3Ｒ12、ＰＯ3ＲｃＲｄ、ＣＯＮＲ13Ｒ14、炭素原子数１ないし６のアルキル基、炭素原子数２ないし６のアルケニル基、炭素原子数２ないし６のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数１ないし６のアルキルオキシ基、炭素原子数２ないし６のアルケニルオキシ基、炭素原子数２ないし６のアルキニルオキシ基、炭素原子数６ないし１２のアリールオキシ基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数１ないし６のアルキル基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数２ないし６のアルケニル基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数２ないし６のアルキニル基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数６ないし１２のアリール基、Ｃ（Ｏ）炭素原子数６ないし１２のアラルキル基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、ヒドロキシル基、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＯＲ12、シアノ基、アジド基、アミジノ基又はグアニド基（ここで、Ｒ12、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒ13及びＲ14は、互いに独立して、Ｈ、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１４のアリール基、炭素原子数３ないし１２のヘテロ環式基、炭素原子数３ないし１８のヘテロアラルキル基、炭素原子数６ないし１８のアラルキル基から選択されるか；又は、Ｒｃ及びＲｄは、酸素原子と一緒になって、５ないし１０員のヘテロ環式基を形成するか；又は、Ｒ13及びＲ14は、窒素原子と一緒になって、３ないし１０員のヘテロ環式基を形成する。）で置換された直鎖、枝分かれ鎖又は脂環式又は芳香族であり得る。有用なアシル基の例は、アセチル基、プロピオニル基、ピバロイル基、ヘキサノイル基、トリフルオロアセチル基、シクロヘキサノイル基及びベンゾイル基を含む。
【００１９】
‘‘アシルオキシ基’’は、酸素原子によって隣接する原子に結合したアシル基（例えば、アセトキシ基、ベンゾイルオキシ基）として定義される。
【００２０】
本願において使用される用語‘‘シクロアルキル基’’は、環を形成する上記で定義したような‘‘アルキル基’’（例えば、シクロプロピル基、シクロペンチル基又はシクロヘキシル基）を表わす。
【００２１】
用語‘‘シクロアルキルアミノ基’’は、窒素原子を通して隣接する原子に共有結合したシクロアルキル基を表わす。
【００２２】
用語‘‘アルカノール基’’は、水素原子の１つがヒドロキシル基によって置換された‘‘アルキル基’’部分（例えば、イソプロパノール、エタノール又はシクロプロパノール）を表わす。用語‘‘アルカノール基’’はまた、１つ以上の水素原子が、ハロゲン原子、より好ましくは弗素原子（例えば、ＣＦ3ＣＨ2ＯＨ）によって置換されたアルカノール基を含むことを意味する。
【００２３】
用語‘‘独立して’’は、置換基が、各項目において同じ又は異なる定義であり得ることを意味する。
【００２４】
用語‘‘ヒドロキシル保護基’’は、有機化学の分野でよく知られている。このような保護基は、Ｔ．グリーン，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐ Ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，（ジョン ウィリー＆サン，１９８１年）中で見られ得る。ヒドロキシル保護基の例は、ベンジル基、アセチル基、ベンゾイル基、ピバロイル基及びイソプロピルオキシカルボニル基を含むが、これらに制限されない。
【００２５】
‘‘ジオキソラン環’’は、以下に図示したように、環の１位及び３位に酸素原子を有する、いかなる置換又は未置換の５員の単環も表わす：
【化５】
【００２６】
ハロゲン原子は、Ｆ、Ｃｌ、Ｉ及びＢｒから選択される。
【００２７】
本願で使用される用語‘‘プリン塩基又はピリミジン塩基、もしくはその類似体’’は、構造（原子の種類及びそれらの配列）は通常の塩基と同一であるが、更なる機能性を有し得るか又は通常の塩基の特定の機能性が欠けているという点で、このような塩基と類似するヌクレオチド又はその類似体中に見られるプリン塩基又はピリミジン塩基を意味する。このような類似体は、窒素原子によるＣＨ部分の置換によって誘導されたもの（例えば、５−アザシトシンのような５−アザピリミジン）又は、逆の置換によって誘導されたもの（例えば、７−デアザアデノシン又は７−デアザグアノシンのような７−デアザプリン）又は、両方の置換によって誘導されたもの（例えば、７−デアザ、８−アザプリン）を含む。このような塩基の類似体はまた、環置換基が、組込まれる、除去される又は従来技術で慣用の置換基、例えば、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、アミノ基、炭素原子数１ないし６のアルキル基によって変性されるところのそれらの化合物を含む。このようなプリン塩基又はピリミジン塩基、その類似体及び誘導体は、当業者によく知られ得る。
【００２８】
ここに記載された化合物はまた、前記化合物の薬学的に許容可能な塩を含む。
【００２９】
用語、前記化合物の‘‘薬学的に許容可能な塩’’は、薬学的に許容可能な無機及び有機酸及び塩基から誘導されたそれらの化合物を含むことを意味する。適当な酸の例は、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、琥珀酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸及びベンゼンスルホン酸を含む。
【００３０】
適当な塩基から誘導された塩は、アルカリ金属（例えば、ナトリウム）塩、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）塩、アンモニウム塩及びＮＲ4+塩（式中、Ｒは炭素原子数１ないし４のアルキル基を表わす。）を含む。
【００３１】
本願での使用において、本発明で使用され得る用語‘‘適当量の酵素’’は、特に制限されない。使用される酵素の量は、出発材料の十分な化学変換を得るために、所望の純度又は所望の収量の反応生成物、所望の反応時間又はそれらの組合せを得るために、選択され得ることが、当業者によって予期され得る。‘‘適当量の酵素’’の有用な例は、式ＩＩ又はＩＶで表わされる化合物に対して、酵素約１％ないし２００％の質量比であり得る。
【００３２】
酵素によるジアステレオマー分割は、様々な溶媒中で行われ得ることが当業者によって予期され得る。所望の方法を行うために有用なこのような溶媒は、反応に悪影響を及ぼすべきではない。溶媒の有用な例は、水、炭素原子数１ないし１２のアルカノール（例えば、エタノール、ブタノール、ｔ−アミルアルコール及び３−メチル−３−ペンタノール）、トルエン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホンアミド、Ｎ−メチルピロリドン、イソオクタン、ｔ−ブチルメチルエーテル及びこれらの混合物を含む。溶媒の混合物は、単相（例えば、水とイソプロパノールの混合物）
又は２相であり得り、所望により、従来技術でよく知られる相間移動触媒が使用され得る。
【００３３】
水性溶媒は、所望により、緩衝液であり得る。緩衝液の有用な例は、ホルメート、アセテート、ホスフェート、ＴＲＩＳ、シトレート及びボレートを含む。このような緩衝液又は異なる緩衝液がどのように製造され得るかは、当業者に容易に予期され得る。二者択一的に、ｐＨ値の範囲内でプレミックスされた緩衝液が、市販の実験室用供給品から購入され得る。緩衝溶液のｐＨを測定するために、ｐＨメーター（又は他のｐＨ測定器）の使用もまた可能である。
【００３４】
本発明において使用するために適当なｐＨ範囲は、この分野の当業者によって容易に決定され得る。選択されたｐＨは、該反応条件下で該方法を発生させ、かつ反応に悪影響を及ぼすこと又は酵素を多量に失活させることなく、所望の生成物を提供し得る。
【００３５】
本発明の更なる態様において：
該方法は、約４ないし９のｐＨ範囲で行われ；
該方法は、約６ないし８のｐＨ範囲で行われ；
該方法は、約６．８ないし７．２のｐＨ範囲で行われる。
【００３６】
本発明で使用され得る酵素の濃度範囲は、特に制限されない。例えば、溶媒又は溶液に対する酵素の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬないし約２００ｍｇ／ｍＬであり得る。二者択一的に、溶媒又は溶液に対する酵素の濃度は、
約１ｍｇ／ｍＬないし約１００ｍｇ／ｍＬ、
約５ｍｇ／ｍＬないし約２０ｍｇ／ｍＬ、
約１０ｍｇ／ｍＬ、
約７．５ｍｇ／ｍＬ
であり得る。
【００３７】
所望の方法を行うために有用な酵素は、標準方法（例えば、分別沈殿）によって単離され得る酵素又は粗酵素の供給源として使用される細胞残骸の除去後に得られる無細胞抽出液及び酵素として使用される結果として生じる粉末であり得ることもまた予期され得る。二者択一的に、固定化酵素、精製酵素、可溶性酵素又は組換え酵素（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｅｎｚｙｍｅ）が使用され得る。このような酵素技術の例は、カールヘインズ ドラウツ及びハーバート ウォルドマンによる‘‘Ｅｎｚｙｍｅ Ｃａｔａｌｙｓｉｓ ｉｎ
Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ’’，第２版（ウィリー出版社）で見られ得る。
【００３８】
１つの態様において、本発明の方法は、更に、酵素によるジアステレオマー分割に使用された酵素を回収する工程を含む。
【００３９】
本発明の使用のために適当な温度は、この分野の当業者によって容易に決定され得る。選択された温度は、該反応条件下で該方法を発生させ、かつ反応に悪影響を及ぼすこと又は酵素を多量に失活させることなく、所望の生成物を提供し得る。
【００４０】
本発明の更なる態様において：
該方法は、約５ないし５０℃の範囲の温度で行われ；
該方法は、約２０ないし４０℃の範囲の温度で行われ；
該方法は、約室温で行われ；
該方法は、約３０℃の温度で行われる。
【００４１】
本方法における化合物ＩＩ又はＩＶの濃度範囲は、０．１％ないし１００％以上であり得る。あるいは、濃度は、約１％ないし約５０％の範囲である。また、濃度は、約５％ないし約１５％の範囲である。あるいは、濃度は、約１２．５％又は約１１．２％である。濃度は、パーセント（％）で表わされ、かつ溶媒又は溶液の単位体積当りの化合物のグラム量で示される（例えば、化合物５０ｇ／水性ホスフェート緩衝液４００ｍＬ×１００＝１２．５％）。酵素によるジアステレオマー分割は、化合物ＩＩの溶液、エマルジョン又は懸濁液で行われ得る。
【００４２】
１つの態様において、本発明は、式Ｉ
【化６】
（式中、Ｒ1及びＲ2の各々は、上記で定義した通りである。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）豚肝臓エステラーゼ又は豚膵臓リパーゼから選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＩ
【化７】
（式中、Ｒ1及びＲ2の各々は、上記で定義した通りである。）
で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式Ｉで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法を提供する。
【００４３】
式ＩＩで表わされる化合物が、同様に、式ＩＩａ及びＩＩｂで表わされ得ることが当業者に予期され得る。式ＩＩａ及びＩＩｂで表わされる化合物の混合物は、ＩＩａ対ＩＩｂが約１％ないし約９９％（例えば、１：１又は１．５：１又は２：１）等の様々な比で存在し得る。全てのこのような可能な比は、本発明の範囲内に含まれる。
【化８】
【００４４】
更なる態様において：
Ｒ1は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基を表わし；
Ｒ1は、炭素原子数１ないし６のアルキル基を表わし；
Ｒ1は、メチル基を表わす。
【００４５】
更なる態様において：
Ｒ2は、ＣＯ−炭素原子数１ないし６のアルキル基、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリール基、ＣＯ−炭素原子数１ないし６のアルコキシ基、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリールオキシ基又はＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリールアルキル基から選択され；
Ｒ2は、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリール基を表わし；
Ｒ2は、ベンゾイル基を表わす。
【００４６】
１つの態様において、酵素は豚肝臓エステラーゼである。
【００４７】
他の態様において、酵素は豚膵臓リパーゼである。
【００４８】
１つの態様において、適当量の酵素は、式ＩＩで表わされる化合物に対して、約０．１％ないし約１００％の質量比で使用される。
【００４９】
１つの態様において、適当量の酵素は、式ＩＩで表わされる化合物に対して、約１％ないし約２５％の質量比で使用される。
【００５０】
更なる態様において、適当量の酵素は、式ＩＩで表わされる化合物に対して、約５％ないし約１０％の質量比で使用される。
【００５１】
更なる態様において：
式Ｉで表わされる化合物は、少なくとも８０％のジアステレオマー純度を有し；
式Ｉで表わされる化合物は、少なくとも９０％のジアステレオマー純度を有し；
式Ｉで表わされる化合物は、少なくとも９５％のジアステレオマー純度を有し；
式Ｉで表わされる化合物は、少なくとも９８％のジアステレオマー純度を有する。
【００５２】
１つの態様において、本発明は、式Ｉ
【化９】
（式中、Ｒ1及びＲ2の各々は、上記で定義した通りである。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）豚肝臓エステラーゼ又は豚膵臓リパーゼから選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＩ
【化１０】
（式中、Ｒ1及びＲ2の各々は、上記で定義した通りである。）で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式Ｉで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法、
及び、更に、
ｃ）式Ｉで表わされる化合物のＣ４位における官能基を置換し、式Ｖ
【化１１】
（式中、Ｂは、プリン塩基又はピリミジン塩基、もしくはその類似体を表わす。）
で表わされる化合物を製造する工程、
ｄ）式Ｖで表わされる前記化合物の基Ｒ2を除去する工程、
ｅ）式ＶＩ
【化１２】
（式中、Ｂは、プリン塩基又はピリミジン塩基、もしくはその類似体を表わす。）で表わされる化合物又はその薬学的に許容可能な塩を回収する工程
を含む前記方法を提供する。
【００５３】
１つの態様において、Ｂは、
【化１３】
［式中、
Ｒ3は、Ｈ、炭素原子数１ないし６のアルキル基、炭素原子数１ないし６のアシル基及びＣＯ−Ｒ9（式中、Ｒ9は、Ｈ又は炭素原子数１ないし６のアルキル基を表わす。）から選択され
Ｒ4及びＲ5は、互いに独立して、Ｈ、炭素原子数１ないし６のアルキル基、ブロミド、クロリド、フルオリド、ヨージド又はＣＦ3から選択され、
Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ブロミド、クロリド、フルオリド、ヨージド、アミノ基、ヒドロキシル基又は炭素原子数３ないし６のシクロアルキルアミノ基から選択される。］から選択される。
【００５４】
他の態様において、Ｂは、
【化１４】
から選択される。
【００５５】
１つの態様において、本発明は、式Ｉ
【化１５】
（式中、Ｒ1及びＲ2の各々は、上記で定義した通りである。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）豚肝臓エステラーゼ又は豚膵臓リパーゼから選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＩ
【化１６】
（式中、Ｒ1及びＲ2の各々は、上記で定義した通りである。）で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式Ｉで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法、
及び、更に、式ＶＩＩ
【化１７】
で表わされる化合物を回収する工程を含む前記方法を提供する。
【００５６】
１つの態様において、本発明は、式ＩＩＩ
【化１８】
（式中、Ｒ11及びＲ12は、上記に記載した通りである。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）カンジダ アンタルクチカ‘‘Ａ’’リパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ‘‘Ａ’’ ｌｉｐａｓｅ）、カンジダ アンタルクチカ‘‘Ｂ’’リパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ‘‘Ｂ’’ ｌｉｐａｓｅ）、カンジダ リポリチカリパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ Ｌｙｐｏｌｉｔｉｃａ ｌｉｐａｓｅ）又はリゾムコール ミエヘイリパーゼ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ Ｍｉｅｈｅｉ ｌｉｐａｓｅ）から選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＶ
【化１９】
（式中、Ｒ11及びＲ12は、上記に記載した通りである。）で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式ＩＩＩで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法を提供する。
【００５７】
式ＩＶで表わされる化合物が、同様に、式ＩＶａ及びＩＶｂで表わされ得ることが当業者に予期され得る。式ＩＶａ及びＩＶｂで表わされる化合物の混合物は、ＩＶａ対ＩＶｂが約１％ないし約９９％（例えば、１：１又は１．５：１又は２：１）等の様々な比で存在し得る。全てのこのような可能な比は、本発明の範囲内に含まれる。
【化２０】
【００５８】
更なる態様において：
Ｒ11は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基を表わし；
Ｒ11は、炭素原子数１ないし６のアルキル基を表わし；
Ｒ11は、メチル基を表わす。
【００５９】
更なる態様において：
Ｒ12は、ＣＯ−炭素原子数１ないし６のアルキル基、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリール基、ＣＯ−炭素原子数１ないし６のアルコキシ基、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリールオキシ基又はＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリールアルキル基から選択され；
Ｒ12は、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリール基を表わし；
Ｒ12は、ベンゾイル基を表わす。
【００６０】
１つの態様において、酵素はカンジダ アンタルクチカ‘‘Ａ’’リパーゼであるである。
【００６１】
更なる態様において、酵素はカンジダ アンタルクチカ‘‘Ｂ’’リパーゼである。
【００６２】
また、更なる態様において、酵素はカンジダ リポリチカリパーゼである。
【００６３】
また、更なる態様において、酵素はリゾムコール ミエヘイリパーゼである。
【００６４】
１つの態様において、適当量の酵素は、式ＩＶで表わされる化合物に対して、約０．１％ないし約１００％の質量比で使用される。
【００６５】
１つの態様において、適当量の酵素は、式ＩＶで表わされる化合物に対して、約１％ないし約２５％の質量比で使用される。
【００６６】
１つの態様において、適当量の酵素は、式ＩＶで表わされる化合物に対して、約５％ないし約１０％の質量比で使用される。
【００６７】
更なる態様において：
式ＩＩＩで表わされる化合物は、少なくとも８０％のジアステレオマー純度を有し；
式ＩＩＩで表わされる化合物は、少なくとも９０％のジアステレオマー純度を有し；
式ＩＩＩで表わされる化合物は、少なくとも９５％のジアステレオマー純度を有し；
式ＩＩＩで表わされる化合物は、少なくとも９８％のジアステレオマー純度を有する。
【００６８】
１つの態様において、本発明は、式ＩＩＩ
【化２１】
（式中、Ｒ11及びＲ12は、上記に記載した通りである。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）カンジダ アンタルクチカ‘‘Ａ’’リパーゼ、カンジダ アンタルクチカ‘‘Ｂ’’リパーゼ、カンジダ リポリチカリパーゼ又はリゾムコール ミエヘイリパーゼから選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＶ
【化２２】
（式中、Ｒ11及びＲ12は、上記に記載した通りである。）で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式ＩＩＩで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法、
及び、更に、
ｃ）式ＩＩＩで表わされる化合物のＣ４位における官能基を置換し、式ＶＩＩＩ
【化２３】
（式中、Ｂは、プリン塩基又はピリミジン塩基、もしくはその類似体を表わす。）
で表わされる化合物を製造する工程、
ｄ）式ＶＩＩＩで表わされる前記化合物の基Ｒ12を除去する工程、
ｅ）式ＩＸ
【化２４】
（式中、Ｂは、プリン塩基又はピリミジン塩基、もしくはその類似体を表わす。）で表わされる化合物又はその薬学的に許容可能な塩を回収する工程
を含む前記方法を提供する。
【００６９】
１つの態様において、Ｂは、
【化２５】
［式中、
Ｒ3は、Ｈ、炭素原子数１ないし６のアルキル基、炭素原子数１ないし６のアシル基及びＣＯ−Ｒ9（式中、Ｒ9は、Ｈ又は炭素原子数１ないし６のアルキル基を表わす。）から選択され
Ｒ4及びＲ5は、互いに独立して、Ｈ、炭素原子数１ないし６のアルキル基、ブロミド、クロリド、フルオリド、ヨージド又はＣＦ3から選択され、
Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ブロミド、クロリド、フルオリド、ヨージド、アミノ基、ヒドロキシル基又は炭素原子数３ないし６のシクロアルキルアミノ基から
選択される。］から選択される。
【００７０】
他の態様において、Ｂは、
【化２６】
から選択される。
【００７１】
１つの態様において、本発明は、式ＩＩＩ
【化２７】
（式中、Ｒ11及びＲ12は、上記に記載した通りである。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）カンジダ アンタルクチカ‘‘Ａ’’リパーゼ、カンジダ アンタルクチカ‘‘Ｂ’’リパーゼ、カンジダ リポリチカリパーゼ又はリゾムコール ミエヘイリパーゼから選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＶ
【化２８】
（式中、Ｒ11及びＲ12は、上記に記載した通りである。）で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式ＩＩＩで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法、
及び、更に、式Ｘ
【化２９】
で表わされる化合物を回収する工程を含む前記方法を提供する。
【００７２】
不均一な部分なく系をより完全に混合するために、オーバーヘッド攪拌機（Ｏｖｅｒｈｅａｄ Ｓｔｉｒｒｅｒ）又は磁気攪拌子を備えた丸底フラスコ又は標準実験室用反応器が使用され得ることもまた、当業者によって予期され得る。初めに、化合物ＩＩが、反応器の底に分離相を形成し得り、反応の進行につれて、より均一に分散する。
【００７３】
攪拌は、所望により使用され得ることが予期され得る。酵素の添加工程中、（試薬のために不適当であり得る高い局所的なｐＨを防止するための）塩基の添加中、又は方法中に連続して使用され得る適当な攪拌速度は、該反応条件下で該方法を発生させ、かつ反応に悪影響を及ぼすこと又は酵素を多量に失活させることなく、所望の生成物を提供させるために選択され得る。
【００７４】
当業者は、酵素によるジアステレオマー分割（スキーム１及び２）を行うために使用されるジオキソラン化合物は、既知の方法を使用して製造され得ることを予期し得る。このような方法の例は、
１．１９９７年６月１９日、マンサワー，タレク他による国際公開第９７／２１７０６号パンフレット、
２．２０００年８月１７日、シムポイア，アレックス他による国際公開第００／４７７５９号パンフレット、及び
３．２０００年７月６日、ングエン−バ，ングヘ他による国際公開第００／３９１４３号パンフレット
に記載されている。
【００７５】
１つの態様において、本発明の方法は、一般的なスキーム１又はスキーム２
【化３０】
に図示されたように行われ得る。
【００７６】
式Ｉ又は式ＩＩＩで表わされるジオキソラン化合物からのジオキソランヌクレオシド類似体の製造方法については、当業者に既知である様々な方法がある。例えば、ジオキソラン環のＣ−４位において、プリン塩基、ピリミジン塩基又は類似体を結合する方法が、国際公開第９７／２１７０６号パンフレット及び国際公開第００／３９１４３号パンフレットに記載されている。スキーム３及びスキーム４
【化３１】
は、ジオキソラン環にプリン塩基、ピリミジン塩基又は類似体を結合する方法を図示している。
【００７７】
メチルエステルの加水分解及び酸化的脱カルボキシ化の後、結果として生じたジオキソランは、プリン塩基、ピリミジン塩基、又は類似体に結合され、更に、脱保護され、所望のジオキソランヌクレオシド類似体が得られ得る。
【００７８】
以下の実施例は、本発明の様々な態様を説明するために提供され、範囲を制限するように解釈されるべきではない。
【実施例】
【００７９】
実施例
実施例１：２（Ｓ）−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステル
２−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステル（５０ｇ、１：１のシス対トランス比）及び磁気攪拌子を１Ｌ三角フラスコに入れた。その後、水性ホスフェート緩衝液（４００ｍＬ、０．３Ｍ、ｐＨ＝７．１）をフラスコに入れた。反応フラスコを、外部水浴を使用して３０℃まで加熱した。
反応混合物のｐＨを１Ｎ ＮａＯＨを用いて７に調整し、その後、豚膵臓リパーゼ粉末４ｇを少しずつ添加した。結果として生じた懸濁液を穏やかに攪拌し、ピペットを通して２Ｎ ＮａＯＨを定期的に添加するすることによって、ｐＨを６．８ないし７．２に維持した。２Ｎ ＮａＯＨ約３５ｍＬを、反応過程を通して添加した。該反応を、キラルカラム（キラセル（登録商標：ＣＨＩＲＡＣＥＬ）ＯＤ；０．４６×２５ｃｍ）を使用したＨＰＬＣ分析によって観察し、未反応エステルの光学純度と反応転化率を決定した（試料は、１、２、４、６及び８時間において回収した）。５時間後、反応進行が停止したため、豚膵臓リパーゼ１．５ｇを、更に添加した。シス−エステルとトランス−エステルの比が＞９８：２となったら（２．５時間追加）、酢酸エチル２００ｍＬを添加することによって、反応を停止させた。
珪藻土（１５ｇ）を添加し、２相混合物を５分間攪拌した。その後、混合物を穏やかな吸引を用いて濾過し、その濾過ケークを酢酸エチル２５ｍＬで２回洗浄した。２相混合物を分液漏斗に移し、該２相ができるだけ多く分離するまで処理した。下相の透明な水相（約４００ｍＬ）を排水し、その後、酢酸エチル（２５ｍＬで１回抽出した。組合せた有機層及びエマルジョン相を、飽和重炭酸ナトリウム１００ｍＬで２回洗浄し、飽和食塩水７５ｍＬで１回洗浄することによって乾燥させた（必要に応じて、生成物は、少量の無水硫酸ナトリウムで処理することによって、更に乾燥させられ得る。）。その後、溶媒を、減圧下で蒸発させ、２（Ｓ）−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステルを、淡黄色液体として得た（２５．８ｇ）。ＨＰＬＣによる分析は、２（Ｒ）−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステルが２％未満であることを示した。
【００８０】
実施例２：２（Ｒ）−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステル
２−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステル（２（Ｓ）−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステル及び２（Ｒ）−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステルの１：１．２７混合物 １．１２ｇ）を、攪拌子及び０．０４Ｍ、ｐＨ７．２のホスフェート緩衝液１０ｍＬを含む２５ｍＬビーカーに添加した。リゾムコール ミエヘイリパーゼ７５ｍｇをこれに添加し、２Ｎ ＮａＯＨを用いて、ｐＨを７．２に調整した。懸濁液を、磁気攪拌機を使用して攪拌し、反応を室温で進行させた。２Ｎ ＮａＯＨを定期的に添加することによって、ｐＨを再調整した。アリコート５０μを分離して、ＨＰＬＣ（キラセル（登録商標：ＣＨＩＲＡＣＥＬ）ＯＤ；０．４６×２５ｃｍ カラム）によって分析することによって、転化率を観察した。１時間後、加水分解度は２５％であった。９時間後、ジクロロメタン（１０ｍＬ）で抽出することによって、反応を停止させた。有機相を回収し、水相をジクロロメタン（１０ｍＬ）で再抽出した。持続性のエマルジョンが形成されたため、珪藻土（３ｇ）を添加し、混合物を、焼結ガラス漏斗を通して濾過し、濾過ケークをジクロロメタン（１０ｍＬ）で洗浄した。濾液を分離し、組合せた有機相を飽和重炭酸ナトリウム（２×２０ｍＬ）及び１回分の５％食塩水（１５ｍＬ）で抽出した。溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。約３．５％の２（Ｓ）−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステルを含む２（Ｒ）−ベンゾイルオキシメチル−［１，３］ジオキソラン−４（Ｓ）−カルボン酸メチルエステル（０．４５ｇ）が黄色オイルとして得られた。
【００８１】
本発明の方法を行うために有用な酵素は、マサチューセッツ州、ケンブリッジのアルツス バイオロジックス インコーポレーテッドから得ることができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
（式中、Ｒ1は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基又は炭素原子数３ないし１０のヘテロアラルキル基から選択され、Ｒ2は、ヒドロキシル保護基を表わす。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）豚肝臓エステラーゼ又は豚膵臓リパーゼから選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＩ
【化２】
（式中、Ｒ1は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基又は炭素原子数３ないし１０のヘテロアラルキル基から選択され、Ｒ2は、ヒドロキシル保護基を表わす。）
で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式Ｉで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法。
【請求項２】
Ｒ1が炭素原子数１ないし１２のアルキル基を表わす、請求項１記載の方法。
【請求項３】
Ｒ2が、ＣＯ−炭素原子数１ないし６のアルキル基、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリール基、ＣＯ−炭素原子数１ないし６のアルコキシ基、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリールオキシ基又はＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリールアルキル基から選択される、請求項１記載の方法。
【請求項４】
Ｒ2がＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリール基を表わす、請求項１記載の方法。
【請求項５】
酵素が豚肝臓エステラーゼである、請求項１記載の方法。
【請求項６】
酵素が豚膵臓リパーゼである、請求項１記載の方法。
【請求項７】
更に、
ａ）式Ｉで表わされる化合物のＣ４位における官能基を置換し、式Ｖ
【化３】
（式中、Ｂは、プリン塩基又はピリミジン塩基、もしくはその類似体を表わす。）
で表わされる化合物を製造する工程、
ｂ）式Ｖで表わされる前記化合物の基Ｒ2を除去する工程、
ｃ）式ＶＩ
【化４】
（式中、Ｂは、プリン塩基又はピリミジン塩基、もしくはその類似体を表わす。）で表わされる化合物又はその薬学的に許容可能な塩を回収する工程
を含む、請求項１記載の方法。
【請求項８】
Ｂが、
【化５】
［式中、
Ｒ3は、Ｈ、炭素原子数１ないし６のアルキル基、炭素原子数１ないし６のアシル基及びＣＯ−Ｒ9（式中、Ｒ9は、Ｈ又は炭素原子数１ないし６のアルキル基を表わす。）から選択され、
Ｒ4及びＲ5は、互いに独立して、Ｈ、炭素原子数１ないし６のアルキル基、ブロミド、クロリド、フルオリド、ヨージド又はＣＦ3から選択され、
Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ブロミド、クロリド、フルオリド、ヨージド、アミノ基、ヒドロキシル基又は炭素原子数３ないし６のシクロアルキルアミノ基から選択される。］から選択される、請求項７記載の方法。
【請求項９】
更に、式ＶＩＩ
【化６】
で表わされる化合物を回収する工程を含む請求項１記載の方法。
【請求項１０】
Ｒ1が炭素原子数１ないし１２のアルキル基を表わし、Ｒ2がＣＯ−炭素原子数６ないし
１２のアリール基を表わす、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
Ｒ1がメチル基を表わし、Ｒ2がベンゾイル基を表わす、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
式ＩＩＩ
【化７】
（式中、Ｒ11は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基又は炭素原子数３ないし１０のヘテロアラルキル基から選択され、Ｒ12は、ヒドロキシル保護基を表わす。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）カンジダ アンタルクチカ‘‘Ａ’’リパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ‘‘Ａ’’ ｌｉｐａｓｅ）、カンジダ アンタルクチカ‘‘Ｂ’’リパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ‘‘Ｂ’’ ｌｉｐａｓｅ）、カンジダ リポリチカリパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ Ｌｙｐｏｌｉｔｉｃａ ｌｉｐａｓｅ）又はリゾムコール ミエヘイリパーゼ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ Ｍｉｅｈｅｉ ｌｉｐａｓｅ）から選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＶ
【化８】
（式中、Ｒ11は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基又は炭素原子数３ないし１０のヘテロアラルキル基から選択され、Ｒ12は、ヒドロキシル保護基を表わす。）で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式ＩＩＩで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法。
【請求項１３】
Ｒ11が炭素原子数１ないし１２のアルキル基を表わす、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
Ｒ12が、ＣＯ−炭素原子数１ないし６のアルキル基、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリール基、ＣＯ−炭素原子数１ないし６のアルコキシ基、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリールオキシ基又はＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリールアルキル基から選択される、請求項１２記載の方法。
【請求項１５】
Ｒ12がＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリール基を表わす、請求項１２記載の方法。
【請求項１６】
酵素がカンジダ アンタルクチカ‘‘Ａ’’リパーゼである、請求項１２記載の方法。
【請求項１７】
酵素がカンジダ アンタルクチカ‘‘Ｂ’’リパーゼである、請求項１２記載の方法。
【請求項１８】
酵素がカンジダ リポリチカリパーゼである、請求項１２記載の方法。
【請求項１９】
酵素がリゾムコール ミエヘイリパーゼである、請求項１２記載の方法。
【請求項２０】
更に、
ａ）式ＩＩＩで表わされる化合物のＣ４位における官能基を置換し、式ＶＩＩＩ
【化９】
（式中、Ｂは、プリン塩基又はピリミジン塩基、もしくはその類似体を表わす。）
で表わされる化合物を製造する工程、
ｂ）式ＶＩＩＩで表わされる前記化合物の基Ｒ12を除去する工程、
ｃ）式ＩＸ
【化１０】
（式中、Ｂは、プリン塩基又はピリミジン塩基、もしくはその類似体を表わす。）で表わされる化合物又はその薬学的に許容可能な塩を回収する工程
を含む、請求項１２記載の方法。
【請求項２１】
Ｂが、
【化１１】
［式中、
Ｒ3は、Ｈ、炭素原子数１ないし６のアルキル基、炭素原子数１ないし６のアシル基及びＣＯ−Ｒ9（式中、Ｒ9は、Ｈ又は炭素原子数１ないし６のアルキル基を表わす。）から選択され
Ｒ4及びＲ5は、互いに独立して、Ｈ、炭素原子数１ないし６のアルキル基、ブロミド、クロリド、フルオリド、ヨージド又はＣＦ3から選択され、
Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ブロミド、クロリド、フルオリド、ヨージド、アミノ基、ヒドロキシル基又は炭素原子数３ないし６のシクロアルキルアミノ基から選択される。］から選択される、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
更に、式Ｘ
【化１２】
で表わされる化合物を回収する工程を含む請求項２６記載の方法。
【請求項２３】
Ｒ11が炭素原子数１ないし１２のアルキル基を表わし、Ｒ12がＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリール基を表わす、請求項１２記載の方法。
【請求項２４】
Ｒ11がメチル基を表わし、Ｒ12がベンゾイル基を表わす、請求項１２記載の方法。
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
（式中、Ｒ1は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基又は炭素原子数３ないし１０のヘテロアラルキル基から選択され、Ｒ2は、ヒドロキシル保護基を表わす。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）豚肝臓エステラーゼ又は豚膵臓リパーゼから選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＩ
【化２】
（式中、Ｒ1は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基又は炭素原子数３ないし１０のヘテロアラルキル基から選択され、Ｒ2は、ヒドロキシル保護基を表わす。）
で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式Ｉで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法。
【請求項２】
Ｒ1が炭素原子数１ないし１２のアルキル基を表わす、請求項１記載の方法。
【請求項３】
Ｒ2が、ＣＯ−炭素原子数１ないし６のアルキル基、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリール基、ＣＯ−炭素原子数１ないし６のアルコキシ基、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリールオキシ基又はＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリールアルキル基から選択される、請求項１記載の方法。
【請求項４】
Ｒ2がＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリール基を表わす、請求項１記載の方法。
【請求項５】
酵素が豚肝臓エステラーゼである、請求項１記載の方法。
【請求項６】
酵素が豚膵臓リパーゼである、請求項１記載の方法。
【請求項７】
更に、
ａ）式Ｉで表わされる化合物のＣ４位における官能基を置換し、式Ｖ
【化３】
（式中、Ｂは、プリン塩基又はピリミジン塩基、もしくはその類似体を表わす。）
で表わされる化合物を製造する工程、
ｂ）式Ｖで表わされる前記化合物の基Ｒ2を除去する工程、
ｃ）式ＶＩ
【化４】
（式中、Ｂは、プリン塩基又はピリミジン塩基、もしくはその類似体を表わす。）で表わされる化合物又はその薬学的に許容可能な塩を回収する工程
を含む、請求項１記載の方法。
【請求項８】
Ｂが、
【化５】
［式中、
Ｒ3は、Ｈ、炭素原子数１ないし６のアルキル基、炭素原子数１ないし６のアシル基及びＣＯ−Ｒ9（式中、Ｒ9は、Ｈ又は炭素原子数１ないし６のアルキル基を表わす。）から選択され、
Ｒ4及びＲ5は、互いに独立して、Ｈ、炭素原子数１ないし６のアルキル基、ブロミド、クロリド、フルオリド、ヨージド又はＣＦ3から選択され、
Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ブロミド、クロリド、フルオリド、ヨージド、アミノ基、ヒドロキシル基又は炭素原子数３ないし６のシクロアルキルアミノ基から選択される。］から選択される、請求項７記載の方法。
【請求項９】
更に、式ＶＩＩ
【化６】
で表わされる化合物を回収する工程を含む請求項１記載の方法。
【請求項１０】
Ｒ1が炭素原子数１ないし１２のアルキル基を表わし、Ｒ2がＣＯ−炭素原子数６ないし
１２のアリール基を表わす、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
Ｒ1がメチル基を表わし、Ｒ2がベンゾイル基を表わす、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
式ＩＩＩ
【化７】
（式中、Ｒ11は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基又は炭素原子数３ないし１０のヘテロアラルキル基から選択され、Ｒ12は、ヒドロキシル保護基を表わす。）で表わされる化合物の製造方法であって、該方法は、
ａ）カンジダ アンタルクチカ‘‘Ａ’’リパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ‘‘Ａ’’ ｌｉｐａｓｅ）、カンジダ アンタルクチカ‘‘Ｂ’’リパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ‘‘Ｂ’’ ｌｉｐａｓｅ）、カンジダ リポリチカリパーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ Ｌｙｐｏｌｉｔｉｃａ ｌｉｐａｓｅ）又はリゾムコール ミエヘイリパーゼ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ Ｍｉｅｈｅｉ ｌｉｐａｓｅ）から選択された適当量の酵素の存在下において、式ＩＶ
【化８】
（式中、Ｒ11は、炭素原子数１ないし１２のアルキル基、炭素原子数２ないし１２のアルケニル基、炭素原子数２ないし１２のアルキニル基、炭素原子数６ないし１２のアリール基、炭素原子数３ないし１０のヘテロ環式基、炭素原子数６ないし１２のアラルキル基又は炭素原子数３ないし１０のヘテロアラルキル基から選択され、Ｒ12は、ヒドロキシル保護基を表わす。）で表わされる化合物を酵素によるジアステレオマー分割に付す工程、
ｂ）式ＩＩＩで表わされる前記化合物を回収する工程
を含む方法。
【請求項１３】
Ｒ11が炭素原子数１ないし１２のアルキル基を表わす、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
Ｒ12が、ＣＯ−炭素原子数１ないし６のアルキル基、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリール基、ＣＯ−炭素原子数１ないし６のアルコキシ基、ＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリールオキシ基又はＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリールアルキル基から選択される、請求項１２記載の方法。
【請求項１５】
Ｒ12がＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリール基を表わす、請求項１２記載の方法。
【請求項１６】
酵素がカンジダ アンタルクチカ‘‘Ａ’’リパーゼである、請求項１２記載の方法。
【請求項１７】
酵素がカンジダ アンタルクチカ‘‘Ｂ’’リパーゼである、請求項１２記載の方法。
【請求項１８】
酵素がカンジダ リポリチカリパーゼである、請求項１２記載の方法。
【請求項１９】
酵素がリゾムコール ミエヘイリパーゼである、請求項１２記載の方法。
【請求項２０】
更に、
ａ）式ＩＩＩで表わされる化合物のＣ４位における官能基を置換し、式ＶＩＩＩ
【化９】
（式中、Ｂは、プリン塩基又はピリミジン塩基、もしくはその類似体を表わす。）
で表わされる化合物を製造する工程、
ｂ）式ＶＩＩＩで表わされる前記化合物の基Ｒ12を除去する工程、
ｃ）式ＩＸ
【化１０】
（式中、Ｂは、プリン塩基又はピリミジン塩基、もしくはその類似体を表わす。）で表わされる化合物又はその薬学的に許容可能な塩を回収する工程
を含む、請求項１２記載の方法。
【請求項２１】
Ｂが、
【化１１】
［式中、
Ｒ3は、Ｈ、炭素原子数１ないし６のアルキル基、炭素原子数１ないし６のアシル基及びＣＯ−Ｒ9（式中、Ｒ9は、Ｈ又は炭素原子数１ないし６のアルキル基を表わす。）から選択され
Ｒ4及びＲ5は、互いに独立して、Ｈ、炭素原子数１ないし６のアルキル基、ブロミド、クロリド、フルオリド、ヨージド又はＣＦ3から選択され、
Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ブロミド、クロリド、フルオリド、ヨージド、アミノ基、ヒドロキシル基又は炭素原子数３ないし６のシクロアルキルアミノ基から選択される。］から選択される、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
更に、式Ｘ
【化１２】
で表わされる化合物を回収する工程を含む請求項２６記載の方法。
【請求項２３】
Ｒ11が炭素原子数１ないし１２のアルキル基を表わし、Ｒ12がＣＯ−炭素原子数６ないし１２のアリール基を表わす、請求項１２記載の方法。
【請求項２４】
Ｒ11がメチル基を表わし、Ｒ12がベンゾイル基を表わす、請求項１２記載の方法。
【公表番号】特表２００６−５０６０９６（Ｐ２００６−５０６０９６Ａ）
【公表日】平成１８年２月２３日（２００６．２．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５５４１００（Ｐ２００４−５５４１００）
【出願日】平成１５年１１月１８日（２００３．１１．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＡ２００３／００１７９８
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０４８５９０
【国際公開日】平成１６年６月１０日（２００４．６．１０）
【出願人】（５０５１８２４０９）シェア バイオケム インコーポレーテッド (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年２月２３日（２００６．２．２３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１５年１１月１８日（２００３．１１．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＡ２００３／００１７９８
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０４８５９０
【国際公開日】平成１６年６月１０日（２００４．６．１０）
【出願人】（５０５１８２４０９）シェア バイオケム インコーポレーテッド (1)
【Ｆターム（参考）】
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