ストレプトリシンＯの変異体形態
有毒ではないが、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓに対する防御を誘導する能力をなお維持するＧＡＳ２５（ストレプトリシンＯ）の形態は、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓに対する防御を誘導するためのワクチン組成物で有用である。一実施形態において、本発明は、アミノ酸Ｐ４２７、Ｗ５３５、Ｃ５３０、Ａ２４８、およびＤ４８２からなる群より選択される１つまたは複数のアミノ酸位置にアミノ酸変化を含む精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質を提供し、ここで、このアミノ酸位置は配列番号１に従って番号付けられ、この変異体ＳＬＯタンパク質の溶血活性は野生型ＳＬＯに対して少なくとも５０％低下している。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、２００７年１２月２１日に出願されたＵＳ６１／０１６１９３および２００８年８月１３日に出願されたＵＳ６１／０８８３８１（これらの完全な内容は、参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、免疫学およびワクチン学の分野に関する。
【背景技術】
【０００３】
ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ；ＧＡＳ２５）は、ヒト病原体である化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（ＧＡＳ）の最も重要な病原性因子の一つである。ヒトにおいて初期の強い免疫応答を呼び起こすその能力のため、それは、ＧＡＳ感染の診断マーカーとして日常的に用いられている。
【０００４】
ＳＬＯは、細胞膜上のコレステロールとの相互作用、自己オリゴマー形成、およびポア形成を通してそれらの細胞溶解活性を発揮する高相同性チオール活性化細胞溶解素（ＴＡＣＹ）のファミリーに属する。さらに、ヒトＩｇＧのＦｃ領域に結合することによって古典的補体経路を直接、活性化するそれらの能力は、宿主細胞への直接的な補体媒介性攻撃を生じる可能性がある。ＴＡＣＹはまた、サイトカインおよび炎症性メディエーターの誘導によって宿主防御および免疫細胞機能に干渉することもできる。
【０００５】
一部のＴＡＣＹは、実験動物を受動的および能動的に防御することができる。非特許文献１参照。しかしながら、これらの毒素のワクチン候補としての使用は、それらの有害な副作用の複雑なパターンによって妨げられている。したがって、有毒でないＳＬＯタンパク質が当該分野で必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】ＦＥＭＳ Ｌｅｔｔ．１８２巻、２０００年、１９７〜２０５頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、有毒ではないが、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓに対する防御を誘導する能力をなお維持するストレプトリシンＯ（ＳＬＯ；ＧＡＳ２５）の変異体を提供する。変異体形態のＳＬＯは、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓに対する防御を誘導するためのワクチン組成物でとりわけ有用である。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】ＳＬＯの３次元コンピュータモデルを示す図である。プロリンは、空間充填として表されている。Ｐｒｏ４２７は白色で彩色されている。
【図２】野生型ＳＬＯおよびＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌを含むＥ．ｃｏｌｉ抽出物を用いる溶血アッセイの結果を示すグラフである。
【図３】精製ＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌを示すＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルの顕微鏡写真である。
【図４】精製野生型ＳＬＯおよびＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌを用いる溶血アッセイの結果を示すグラフである。
【図５】Ｅ．ｃｏｌｉ溶解物上清のＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルの顕微鏡写真である。レーンＡ、Ｅ．ｃｏｌｉネガティブコントロール；レーンＢ、タグなしのｒＳＬＯ野生型；レーンＣ、タグなしのｒＳＬＯ Ｐ４２７Ｌ；およびレーンＤ、タグなしの精製ｒＳＬＯ野生型（５ｍｇ）。
【図６】同じ条件下で、ＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌが野生型ＳＬＯの１０００分の１の溶血性であることを示すグラフである。
【図７】野生型ＳＬＯおよびＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌによる溶血へのコレステロールの効果を示すグラフである。
【図８Ａ】細胞抽出物におけるタグなし全タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の顕微鏡写真である。図８Ａ、ＳＬＯ野生型およびＰ４２７Ｌタグなしタンパク質の発現；図８Ｂ、ＳＬＯ Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５、Ｐ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ、およびＰ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ｗ５３５Ｆタグなしタンパク質の発現。
【図８Ｂ】細胞抽出物におけるタグなし全タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の顕微鏡写真である。図８Ａ、ＳＬＯ野生型およびＰ４２７Ｌタグなしタンパク質の発現；図８Ｂ、ＳＬＯ Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５、Ｐ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ、およびＰ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ｗ５３５Ｆタグなしタンパク質の発現。
【図９】細胞抽出物におけるＨｉｓタグ付き全タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の顕微鏡写真である。
【図１０】精製されたＨｉｓタグ付きタンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の顕微鏡写真である。
【図１１】精製されたタグなしタンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の顕微鏡写真である。図１１Ａ、レーン：Ａ、ＳＬＯ野生型タグなし；Ｂ、ＳＬＯ Ｐ４２７Ｌタグなし；分子量マーカー（１１６−６６．２−４５−３５−２５−１８．４−１４．４）；黒色矢印は、変異体クローンおよび野生型クローンから精製されたＳＬＯタンパク質を示す。図１１Ｂ、レーンＡ、ＳＬＯ野生型タグなし（３μｇ）、レーンＢ、ＳＬＯ Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５Ｆタグなし（３μｇ）；分子量マーカー（１１６−６６．２−４５−３５−２５−１８．４−１４．４）；黒色矢印は、変異体クローンおよび野生型クローンから精製されたＳＬＯタンパク質を示す。
【図１２】精製されたタグなしＳＬＯ野生型タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の顕微鏡写真である。野生型ＳＬＯの様々な精製ロットの試料を、還元条件下および非還元条件下で分析した。
【図１３】Ｈｉｓタグ付きＳＬＯ変異体の溶血試験の結果を示すグラフである。
【図１４】抗ＳＬＯ抗血清によるＳＬＯ誘導性溶血活性の阻害を示すグラフである。
【図１５】ＳＬＯ溶血の抗ＳＬＯ抗血清阻害の滴定を示すグラフである。
【図１６】ＳＬＯ溶血活性滴定を示すグラフである。
【図１７】野生型ＳＬＯ、化学的に解毒された野生型ＳＬＯ、およびＳＬＯ変異体（Ｐ４２７Ｌ；Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆ）の溶血活性の滴定を示すグラフである。
【図１８】野生型ＳＬＯおよびＳＬＯ変異体（Ｐ４２７Ｌ；Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆ）の溶血活性の滴定を示すグラフである。
【図１９】野生型ＳＬＯおよび化学的に解毒された野生型ＳＬＯの溶血活性の滴定を示すグラフである。
【図２０】ＳＬＯ溶血活性（５０ｎｇ／ｍｌのＳＬＯ）の５０％低下を得るのに必要とされるＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆに対する抗血清の希釈度を示すグラフである。
【図２１】ＳＬＯ溶血活性（１００ｎｇ／ｍｌのＳＬＯ）の５０％低下を得るのに必要とされるＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆに対する抗血清の希釈度を示すグラフである。
【図２２】溶血阻害アッセイが、１００％溶血を可能にする毒素濃度で行われたことを示す滴定曲線である。
【図２３−１】ＳＬＯタンパク質のアラインメントを示す図である。Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１；Ｍ１２＿２０９６、配列番号２；Ｍ１２＿９４２９、配列番号３；Ｍ１＿５００５、配列番号４；Ｍ２、配列番号５；Ｍ２８、配列番号６；Ｍ６、配列番号７；Ｍ１８、配列番号８；Ｍ５、配列番号９；Ｍ３、配列番号１０；Ｍ３＿ＳＳＩ、配列番号１１；およびＭ４、配列番号１２。
【図２３−２】ＳＬＯタンパク質のアラインメントを示す図である。Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１；Ｍ１２＿２０９６、配列番号２；Ｍ１２＿９４２９、配列番号３；Ｍ１＿５００５、配列番号４；Ｍ２、配列番号５；Ｍ２８、配列番号６；Ｍ６、配列番号７；Ｍ１８、配列番号８；Ｍ５、配列番号９；Ｍ３、配列番号１０；Ｍ３＿ＳＳＩ、配列番号１１；およびＭ４、配列番号１２。
【図２３−３】ＳＬＯタンパク質のアラインメントを示す図である。Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１；Ｍ１２＿２０９６、配列番号２；Ｍ１２＿９４２９、配列番号３；Ｍ１＿５００５、配列番号４；Ｍ２、配列番号５；Ｍ２８、配列番号６；Ｍ６、配列番号７；Ｍ１８、配列番号８；Ｍ５、配列番号９；Ｍ３、配列番号１０；Ｍ３＿ＳＳＩ、配列番号１１；およびＭ４、配列番号１２。
【図２３−４】ＳＬＯタンパク質のアラインメントを示す図である。Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１；Ｍ１２＿２０９６、配列番号２；Ｍ１２＿９４２９、配列番号３；Ｍ１＿５００５、配列番号４；Ｍ２、配列番号５；Ｍ２８、配列番号６；Ｍ６、配列番号７；Ｍ１８、配列番号８；Ｍ５、配列番号９；Ｍ３、配列番号１０；Ｍ３＿ＳＳＩ、配列番号１１；およびＭ４、配列番号１２。
【図２４−１】野生型ＳＬＯおよびＨｉｓタグ付きＳＬＯ変異体のアラインメントを示す図である。ＳＬＯ＿Ｍ１菌株ＳＦ３７０、配列番号１３；ＳＬＯ ＷＴ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１４；ＳＬＯｍｕｔ．Ｐ４２７Ｌ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１５；ＳＬＯｍｕｔ．Ｃ５３０Ｇ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１６；ＳＬＯｍｕｔ．ΔＡ２４８＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１７；ＳＬＯｍｕｔ．Ｗ５３５Ｆ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１８；およびＳＬＯｍｕｔ．Ｗ５３５Ｆ＆Ｄ４８２Ｎ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１９。
【図２４−２】野生型ＳＬＯおよびＨｉｓタグ付きＳＬＯ変異体のアラインメントを示す図である。ＳＬＯ＿Ｍ１菌株ＳＦ３７０、配列番号１３；ＳＬＯ ＷＴ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１４；ＳＬＯｍｕｔ．Ｐ４２７Ｌ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１５；ＳＬＯｍｕｔ．Ｃ５３０Ｇ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１６；ＳＬＯｍｕｔ．ΔＡ２４８＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１７；ＳＬＯｍｕｔ．Ｗ５３５Ｆ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１８；およびＳＬＯｍｕｔ．Ｗ５３５Ｆ＆Ｄ４８２Ｎ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１９。
【図２５】野生型ＳＬＯに対する抗血清およびＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆに対する抗血清によるＳＬＯ溶血活性の低下を比較するグラフである。
【図２６】アジュバントとしてミョウバンかまたはＭＦ５９のいずれかを用いる組換えＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆのインビボ防御特性を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
変異体ＳＬＯタンパク質
本発明による変異体形態のＳＬＯは、溶血アッセイによって決定される場合、野生型ＳＬＯと比較して、野生型ＳＬＯより少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）低い溶血活性を有するが、免疫原性であり、例えば、それらは、マウスモデルにおいてＧＡＳ致死的攻撃に対する防御を与える（実施例７参照）。本発明のＳＬＯ変異体には、ＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ（配列番号２０）、Ｗ５３５Ｆ（配列番号２１）、Ｃ５３０Ｇ（配列番号２２）、ΔＡ２４８（配列番号２３）、Ｗ５３５Ｆ＋Ｄ４８２Ｎ（配列番号２４）、Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆ（配列番号２５）、Ｐ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ（配列番号２６）、およびＰ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ｗ５３５Ｆ（配列番号２７）が含まれる。本発明はまた、これらの変異体のＨｉｓタグ付きバージョンを含む。例は図２４に示されている。
【００１０】
本発明のＳＬＯ変異体には、配列番号１に示された野生型ＳＬＯ配列に従って番号付けられたアミノ酸Ｐ４２７、Ｗ５３５、Ｃ５３０、Ａ２４８、およびＤ４８２の１つまたは複数においてアミノ酸変化（すなわち、置換、欠失、または挿入）を有するものが含まれる。図２３は、様々なＭ型に由来する野生型ＧＡＳ２５配列のアラインメントを提供する。
【００１１】
本発明のＳＬＯ変異体は、位置Ｐ４２７、Ｗ５３５、Ｃ５３０、Ａ２４８、および／またはＤ４８２に単一、二重、または三重のアミノ酸変化を含む（「単一変異体」、「二重変異体」、「三重変異体」）。したがって、ＳＬＯ変異体は、以下を含むことができる：
ｉ．Ｐ４２７Ｌ（配列番号２０）、Ｐ４２７Ｒ、Ｐ４２７Ｎ、Ｐ４２７Ｃ、Ｐ４２７Ｑ、Ｐ４２７Ｅ、Ｐ４２７Ｇ、Ｐ４２７Ｈ、Ｐ４２７Ｉ、Ｐ４２７Ｌ、Ｐ４２７Ｋ、Ｐ４２７Ｍ、Ｐ４２７Ｆ、Ｐ４２７Ａ、Ｐ４２７Ｓ、Ｐ４２７Ｔ、Ｐ４２７Ｗ、Ｐ４２７Ｙ、またはＰ４２７Ｖ；
ｉｉ．Ｗ５３５Ｆ（配列番号２１）、Ｗ５３５Ｒ、Ｗ５３５Ｎ、Ｗ５３５Ｄ、Ｗ５３５Ｃ、Ｗ５３５Ｑ、Ｗ５３５Ｅ、Ｗ５３５Ｇ、Ｗ５３５Ｉ、Ｗ５３５Ｌ、Ｗ５３５Ｋ、Ｗ５３５Ｍ、Ｗ５３５Ａ、Ｗ５３５Ｐ、Ｗ５３５Ｓ、Ｗ５３５Ｔ、Ｗ５３５Ｙ、またはＷ５３５Ｖ；
ｉｉｉ．Ｃ５３０Ｇ（配列番号２２）、Ｃ５３０Ｒ、Ｃ５３０Ｎ、Ｃ５３０Ｄ、Ｃ５３０Ｓ、Ｃ５３０Ｑ、Ｃ５３０Ｅ、Ｃ５３０Ａ、Ｃ５３０Ｈ、Ｃ５３０Ｉ、Ｃ５３０Ｌ、Ｃ５３０Ｋ、Ｃ５３０Ｍ、Ｃ５３０Ｆ、Ｃ５３０Ｐ、Ｃ５３０Ｔ、Ｃ５３０Ｗ、Ｃ５３０Ｙ、またはＣ５３０Ｖ；
ｉｖ．Ｄ４８２Ｌ、Ｄ４８２Ｒ、Ｄ４８２Ｎ、Ｄ４８２Ｃ、Ｄ４８２Ｑ、Ｄ４８２Ｅ、Ｄ４８２Ｇ、Ｄ４８２Ｈ、Ｄ４８２Ｉ、Ｄ４８２Ｌ、Ｄ４８２Ｋ、Ｄ４８２Ｍ、Ｄ４８２Ｆ、Ｄ４８２Ａ、Ｄ４８２Ｓ、Ｄ４８２Ｔ、Ｄ４８２Ｗ、Ｄ４８２Ｙ、またはＤ４８２Ｖ；
ｖ．Ａ２４８Ｌ、Ａ２４８Ｒ、Ａ２４８Ｎ、Ａ２４８Ｃ、Ａ２４８Ｑ、Ａ２４８Ｅ、Ａ２４８Ｇ、Ａ２４８Ｈ、Ａ２４８Ｉ、Ａ２４８Ｌ、Ａ２４８Ｋ、Ａ２４８Ｍ、Ａ２４８Ｆ、Ａ２４８Ｓ、Ａ２４８Ｔ、Ａ２４８Ｗ、Ａ２４８Ｙ、またはＡ２４８Ｖ
ｖｉ．ΔＰ４２７；またはΔＷ５３５；またはΔＣ５３０；またはΔＤ４８２；またはΔＡ２４８（配列番号２３）；ならびに
ｖｉｉ．Ｗ５３５Ｆ＋Ｄ４８２Ｎ（配列番号２４）、Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆ（配列番号２５）、Ｐ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ（配列番号２６）、およびＰ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ｗ５３５Ｆ（配列番号２７）などのそれらの組合せ。
【００１２】
本発明の二重変異体には、Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆ（配列番号２５）、Ｐ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ（配列番号２６）、Ｐ４２７Ｌ＋Ａ２４８Ｌ、Ｐ４２７Ｌ＋Ｄ４８２Ｌ、Ｗ５３５Ｆ＋Ｃ５３０Ｇ、Ｗ５３５Ｆ＋Ａ２４８Ｌ、Ｗ５３５Ｆ＋Ｄ４８２Ｌ、Ｃ５３０Ｇ＋Ａ２４８Ｌ、およびＡ２４８Ｌ＋Ｄ４８２Ｌが含まれる。三重変異体には、Ｐ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ａ２４８Ｌ、Ｐ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ｄ４８２Ｌ、Ｐ４２７Ｌ＋Ａ２４８Ｌ＋Ｄ４８２Ｌ、Ｐ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ｗ５３５Ｆ（配列番号２７）、Ｗ５３５Ｆ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ａ２４８Ｌ、Ｗ５３５Ｆ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ｄ４８２Ｌ、Ｗ５３５Ｆ＋Ａ２４８Ｌ＋Ｄ４８２Ｌ、およびＣ５３０Ｇ＋Ａ２４８Ｌ＋Ｄ４８２Ｌが含まれる。
【００１３】
本発明の変異体ＳＬＯタンパク質はまた、上記で開示されているような変異体ＳＬＯタンパク質および別のＧＡＳ抗原を含む融合ポリペプチドを含む。ＧＡＳ抗原は、例えば、ＷＯ０２／３４７７１に開示されており、それらには、ＧＡＳ３９（ｓｐｙ０２６６；ｇｉ−１５６７４４４６）、ＧＡＳ４０（ｓｐｙ０２６９；ｇｉ−１５６７４４４９）、ＧＡＳ４２（ｓｐｙ０２８７；ｇｉ−１５６７４４６１）、ＧＡＳ４５（Ｍ５００５＿ｓｐｙ０２４９；ｇｉ−７１９１００６３）、ＧＡＳ５７（ｓｐｙ０４１６；ｇｉ−１５６７４５４９）、ＧＡＳ５８（ｓｐｙ０４３０；ｇｉ−１５６７４５５６）、ＧＡＳ８４（ｓｐｙ１２７４；ｇｉ−１５６７５２２９）、ＧＡＳ９５（ｓｐｔ１７３３；ｇｉ−１５６７５５８２）、ＧＡＳ１１７（ｓｐｙ０４４８；ｇｉ−１５６７４５７１）、ＧＡＳ１３０（ｓｐｙ０５９１；ｇｉ−１５６７４６７７）、ＧＡＳ１３７（ｓｐｙ０６５２；ｇｉ−１５６７４７２０）、ＧＡＳ１５９（ｓｐｙ１１０５；ｇｉ−１５６７５０８８）、ＧＡＳ１９３（ｓｐｙ２０２５；ｇｉ−１５６７５８０２）、ＧＡＳ２０２（ｓｐｙ１３０９；ｇｉ−１５６７５２５８）、ＧＡＳ２１７（ｓｐｙ０９２５；ｇｉ−１５６７４９４５）、ＧＡＳ２３６（ｓｐｙ１１２６；ｇｉ−１５６７５１０６）、ＧＡＳ２５３（ｓｐｙ１５２４；ｇｉ−１５６７５４２３）、ＧＡＳ２７７（ｓｐｙ１９３９；ｇｉ−１５６７５７４２）、ＧＡＳ２９４（ｓｐｙ１１７３；ｇｉ−１５６７５１４５）、ＧＡＳ３０９（ｓｐｙ０１２４；ｇｉ−１５６７４３４１）、ＧＡＳ３６６（ｓｐｙ１５２５；ｇｉ−１５６７５４２４）、ＧＡＳ３７２（ｓｐｙ１６２５；ｇｉ−１５６７５５０１）、ＧＡＳ３８４（ｓｐｙ１８７４；ｇｉ−１５６７５６９３）、ＧＡＳ３８９（ｓｐｙ１９８１；ｇｉ−１５６７５７７２）、ＧＡＳ５０４（ｓｐｙ１７５１；ｇｉ−１５６７５６００）、ＧＡＳ５０９（ｓｐｙ１６１８；ｇｉ−１５６７５４９６）、ＧＡＳ２９０（ｓｐｙ１９５９；ｇｉ−１５６７５７５７）、ＧＡＳ５１１（ｓｐｙ１７４３；ｇｉ−１５６７５５９２）、ＧＡＳ５２７（ｓｐｙ１２０４；ｇｉ−１５６７５１６９）、ＧＡＳ５２９（ｓｐｙ１２８０；ｇｉ−１５６７５２３３）、およびＧＡＳ５３３（ｓｐｙ１８７７；ｇｉ−１５６７５６９６）が含まれるが、これらに限定されない。さらに、ＧＡＳ抗原には、ＧＡＳ６８（Ｓｐｙ０１６３；ｇｉ１３６２１４５６）、ＧＡＳ８４（Ｓｐｙ１２７４；ｇｉ１３６２２３９８）、ＧＡＳ８８（Ｓｐｙ１３６１；ｇｉ１３６２２４７０）、ＧＡＳ８９（Ｓｐｙ１３９０；ｇｉ１３６２２４９３）、ＧＡＳ９８（Ｓｐｙ１８８２；ｇｉ１３６２２９１６）、ＧＡＳ９９（Ｓｐｙ１９７９；ｇｉ１３６２２９９３）、ＧＡＳ１０２（Ｓｐｙ２０１６、ｇｉ１３６２３０２５）、ＧＡＳ１４６（Ｓｐｙ０７６３；ｇｉ１３６２１９４２）、ＧＡＳ１９５（Ｓｐｙ２０４３；ｇｉ１３６２３０４３）、ＧＡＳ５６１（Ｓｐｙ１１３４；ｇｉ１３６２２２６９）、ＧＡＳ１７９（Ｓｐｙ１７１８、ｇｉ１３６２２７７３）およびＧＡＳ６８１（ｓｐｙ１１５２；ｇｉ１３６２２２８）が含まれるが、これらに限定されない。
【００１４】
変異体ＳＬＯタンパク質をコードする核酸分子
本発明は、変異体ＳＬＯタンパク質をコードする核酸分子を含む。本発明はまた、かかる分子と少なくとも５０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む。特定の配列に依存して、配列同一性の程度は、好ましくは、５０％を超える（例えば、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれを超える）。ヌクレオチド配列間の同一性は、好ましくは、以下のパラメータ：ギャップオープンペナルティ＝１２およびギャップ伸長ペナルティ＝１を使用したアフィンギャップ検索を使用したＭＰＳＲＣＨプログラム（Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）で実行されるＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって決定される。
【００１５】
本発明はまた、これらの分子とハイブリッド形成することができる核酸分子を提供する。ハイブリッド形成反応を、異なる「ストリンジェンシー」条件下で行うことができる。ハイブリッド形成反応のストリンジェンシーを増加させる条件は、広く知られており、当該分野で公開されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋらの７．５２ページ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，１９８９を参照のこと。関連条件の例には、以下が含まれる（ストリンジェンシーが増加する順）：２５℃、３７℃、５０℃、５５℃、および６８℃でのインキュベーション；１０×ＳＳＣ、６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣ、および０．１×ＳＳＣの緩衝剤濃度（ＳＳＣは０．１５Ｍ ＮａＣｌおよび１５ｍＭクエン酸緩衝剤である）ならびに他の緩衝系を使用したその等価物；０％、２５％、５０％、および７５％のホルムアルデヒド濃度；５分間〜２４時間のインキュベーション時間；１回、２回、またはそれを超える洗浄工程；１、２、または１５分間の洗浄インキュベーション時間；ならびに６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣ、または脱イオン水の洗浄液。ハイブリッド形成技術およびその至適化は、当該分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９；Ａｕｓｕｂｅｌら、ｅｄｓ．，Ｓｈｏｒｔ
Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４ｔｈ ｅｄ．，１９９９；米国特許第５，７０７，８２９号；Ａｕｓｕｂｅｌら、ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ ３０，１９８７を参照のこと。
【００１６】
いくつかの実施形態では、本発明の核酸分子は、低ストリンジェンシー条件下で標的とハイブリッド形成し、他の実施形態では、本発明の核酸分子は中ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成し、好ましい実施形態では、本発明の核酸分子は高ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成する。低ストリンジェンシーハイブリッド形成条件の例は、５０℃および１０×ＳＳＣである。中ストリンジェンシーハイブリッド形成条件の例は、５５℃および１×ＳＳＣである。高ストリンジェンシーハイブリッド形成条件の例は、６８℃および０．１×ＳＳＣである。
【００１７】
変異体ＳＬＯタンパク質の産生
組換え産生
遺伝暗号の重複性は周知である。したがって、野生型ＳＬＯタンパク質または本発明のＳＬＯ変異タンパク質をコードする任意の核酸分子（ポリヌクレオチド）を用いて、そのタンパク質を組換えで産生することができる。野生型ＳＬＯ、ＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ、Ｗ５３５Ｆ、Ｃ５３０Ｇ、ΔＡ２４８、Ｗ５３５Ｆ＋Ｄ４８２Ｎ、Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆ、Ｐ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ、およびＰ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ｗ５３５Ｆをコードするヌクレオチド配列の例は、配列表（それぞれ、配列番号２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、および３６も参照）に提供されている。野生型ＳＬＯをコードする核酸分子はまた、標準核酸精製技術を用いて適当なＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ細菌から単離することができ、またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）などの増幅技術を用いて、もしくは自動合成機を用いることによって、合成することができる。Ｃａｒｕｔｈｅｒｓら、Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． Ｓｙｍｐ． Ｓｅｒ．２１５巻、２２３頁、１９８０年；Ｈｏｒｎら、Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． Ｓｙｍｐ． Ｓｅｒ．２２５巻、２３２頁、１９８０年；Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒら、Ｎａｕｒｅ ３１０巻、１０５〜１１頁、１９８４年；Ｇｒａｎｔｈａｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．９巻、ｒ４３〜ｒ７４頁、１９８１年参照。
【００１８】
ｃＤＮＡ分子を、テンプレートとしてｍＲＮＡを使用した標準的な分子生物学技術を使用して作製することができる。その後、ｃＤＮＡ分子を、当該分野で周知の分子生物学技術を使用して複製することができる。テンプレートとしてゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡのいずれかを使用したＰＣＲなどの増幅技術を使用して、本発明のポリヌクレオチドの更なる複製を得ることができる。
【００１９】
所望により、当該分野で一般的に知られている方法を使用してポリヌクレオチドを操作して、種々の理由で抗原コード配列を変化させることができる（ポリペプチドまたはｍＲＮＡ産物のクローニング、プロセシング、および／または発現を修飾する変更が含まれるが、これらに限定されない）。遺伝子フラグメントおよび合成オリゴヌクレオチドのランダム断片化およびＰＣＲ再アセンブリによるＤＮＡシャフリングを使用して、ヌクレオチド配列を操作することができる。例えば、部位特異的変異誘発を使用して、新規の制限部位の挿入、グリコシル化パターンの変更、コドン優先度の変化、スプライスバリアントの産生、および変異の導入などを行うことができる。
【００２０】
配列修飾（精製タグ配列の付加またはコドン至適化など）を使用して、発現を容易にすることができる。例えば、Ｎ末端リーダー配列を、タグタンパク質（ポリヒスチジン（「ＨＩＳ」）またはグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（「ＧＳＴ」）など）をコードする配列と置換することができる。かかるタグタンパク質を使用して、発現タンパク質の精製、検出、および安定性を促進することができる。特定の原核生物宿主または真核生物宿主に好まれるコドンを選択して、タンパク質発現率を増大させ、または所望の性質（天然に存在する配列から生成した転写物よりも長い半減期など）を有するＲＮＡ転写物を産生することができる。これらの方法は当該分野で周知であり、ＷＯ０５／０３２５８２号にさらに記載されている。
【００２１】
発現ベクター
変異体ＳＬＯタンパク質をコードする核酸分子を、挿入するコード配列の転写および翻訳に必要なエレメントを含む発現ベクターに挿入することができる。当業者に周知の方法を使用して、コード配列ならびに適切な転写調節エレメントおよび翻訳調節エレメントを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法には、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術、およびインビボ遺伝子組換えが含まれる。
【００２２】
宿主細胞
変異体ＳＬＯタンパク質を産生するための宿主細胞は、原核生物または真核生物であり得る。大腸菌は好ましい宿主細胞であるが、他の適切な宿主には、ラクトコッカス・ラクティス、ラクトコッカス・クレモリス、枯草菌、コレラ菌、チフス菌、ネズミチフス菌、ナイセリア・ラクタミカ、ナイセリア・シネレア、マイコバクテリア属（例えば、結核菌）、酵母、バキュロウイルス、哺乳動物細胞などが含まれる。
【００２３】
宿主細胞株を、所望の様式で挿入配列の発現を調整する、または発現ポリペプチドをプロセシングする能力について選択することができる。かかるポリペプチド修飾には、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、およびアシル化が含まれるが、これらに限定されない。ポリペプチドの「プレプロ」形態を切断する翻訳後プロセシングを使用して、正確な挿入、折り畳み、および／または機能を促進することもできる。翻訳後活性のための特定の細胞機構および特徴的なメカニズムを有する異なる宿主細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ ２０１１０−２２０９）から利用可能であり、外来タンパク質の正確な修飾およびプロセシングが確実になるように選択することができる。ＷＯ０１／９８３４０号を参照のこと。
【００２４】
十分に確立された技術（トランスフェリン−ポリカチオン媒介ＤＮＡ移入、裸またはカプセル化した核酸でのトランスフェクション、リポソーム媒介細胞融合、ＤＮＡコーティングラテックスビーズの細胞内輸送、プロトプラスト融合、ウイルス感染、エレクトロポレーション、「遺伝子銃」法、およびＤＥＡＥまたはリン酸カルシウム媒介トランスフェクションが含まれるが、これらに限定されない）を使用して、発現構築物を宿主細胞に導入することができる。
【００２５】
発現ベクターを使用して形質転換された宿主細胞を、細胞培養物からのタンパク質の発現および回収に適切な条件下で培養することができる。形質転換された細胞によって産生されたタンパク質を、使用したヌクレオチド配列および／または発現ベクターに応じて分泌し、または細胞内に含めることができる。当業者は、原核細胞膜または真核細胞膜を介した可溶性抗原の分泌を指示するシグナル配列を含むように発現ベクターをデザインすることができることを理解している。
【００２６】
精製
シグナル輸出（ｅｘｐｏｒｔ）配列は、組換え産生される変異体ＳＬＯタンパク質に含められ得、その結果、抗原は、公知の方法を使用して細胞培養培地から精製され得る。あるいは、本発明の組換え産生される変異体ＳＬＯタンパク質を、操作した宿主細胞から単離することができ、当該分野で周知の方法を使用して、細胞中の他の成分（タンパク質、炭水化物、または脂質など）から分離し得る。かかる方法には、サイズ排除クロマトグラフィ、硫酸アンモニウム分画、イオン交換クロマトグラフィ、アフィニティクロマトグラフィ、および分取ゲル電気泳動が含まれるが、これらに限定されない。精製変異体ＳＬＯタンパク質の調製物の純度は少なくとも８０％であり、好ましくは、調製物の純度は、９０％、９５％、または９９％である。調製物の純度を、当該分野で公知の任意の手段（ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動など）によって評価することができる。適切な場合には、変異体ＳＬＯタンパク質を、例えば、尿素を使用して可溶化することができる。
【００２７】
化学合成
変異体ＳＬＯタンパク質を、例えば、固相技術を使用して合成することができる。例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５，２１４９ ５４，１９６３；Ｒｏｂｅｒｇｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６９，２０２ ０４，１９９５を参照のこと。手動技術の使用または自動化によりタンパク質合成を行うことができる。例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ４３１Ａ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して、自動化された合成を行うことができる。任意選択的に、変異体ＳＬＯタンパク質のフラグメントを個別に合成し、化学的方法を使用して合わせて全長分子を産生することができる。
【００２８】
抗体
本発明は、本発明の変異体ＳＬＯタンパク質に特異的に結合できるが、野生型のＳＬＯタンパク質には結合しない抗体を提供する。用語「抗体」には、インタクトな免疫グロブリン分子、および抗原に結合することができるそのフラグメントが含まれる。これらには、ハイブリッド（キメラ）抗体分子（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３４９，２９３−９９，１９９１；米国特許第４，８１６，５６７号）；Ｆ（ａｂ’）２フラグメントおよびＦ（ａｂ）フラグメントならびにＦｖ分子；非共有結合性ヘテロ二量体（例えば、Ｉｎｂａｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．６９，２６５９−６２，１９７２；Ｅｈｒｌｉｃｈら、Ｂｉｏｃｈｅｍ １９，４０９１−９６，１９８０）；単鎖Ｆｖ分子（ｓＦｖ）（例えば、Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５，５８９７−８３，１９８８）；二量体および三量体抗体フラグメント構築物；ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）（例えば、Ｐａｃｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍ ３１，１５７９−８４，１９９２；Ｃｕｍｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４９Ｂ，１２０−２６，１９９２）；ヒト化抗体分子（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２，３２３−２７，１９８８；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９，１５３４−３６，１９８８；および１９９４年９月２１日公開の英国特許出願番号ＧＢ２，２７６，１６９号）；およびかかる分子から得た任意の機能的フラグメントならびにファージディスプレイなどの従来にない過程によって得た抗体が含まれる。好ましくは、抗体はモノクローナル抗体である。モノクローナル抗体を得る方法は、当該分野で周知である。
【００２９】
典型的には、エピトープを形成するのに少なくとも６、７、８、１０、または１２個の連続するアミノ酸が必要である。しかし、不連続アミノ酸を含むエピトープは、より多数（例えば、少なくとも１５、２５、または５０個のアミノ酸）を必要とし得る。種々の免疫アッセイ（例えば、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、放射免疫アッセイ、免疫組織化学アッセイ、免疫沈降、または当該分野で公知の他の免疫化学アッセイ）を使用して、所望の特異性を有する抗体を同定することができる。競合結合または免疫放射線測定法についての多数のプロトコールが当該分野で周知である。かかる免疫アッセイは、典型的には、免疫原と免疫原に特異的に結合する抗体との間の複合体形成の測定を含む。変異体ＳＬＯタンパク質に特異的に結合する抗体の調製物から、典型的には、免疫化学アッセイで使用した場合に他のタンパク質を使用して得られる検出シグナルの少なくとも５倍、１０倍、または２０倍の検出シグナルが得られ、かつ野生型ＳＬＯタンパク質と接触させた場合に、検出可能なシグナルは提供しない。好ましくは、抗体は、免疫化学アッセイにおいて他のタンパク質を検出せず、溶液由来の特定の抗原を免疫沈降することができる。
【００３０】
抗体の生成
変異体ＳＬＯタンパク質または非ＳＬＯポリペプチド抗原（下記）を使用して哺乳動物（マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、またはヒトなど）を免疫化して、ポリクローナル抗体を産生することができる。必要に応じて、抗原を、担体タンパク質（ウシ血清アルブミン、サイログロブリン、およびキーホールリンペットヘモシアニンなど）に接合することができる。宿主の種に応じて、種々のアジュバントを使用して、免疫学的応答を増大させることができる。かかるアジュバントには、フロイントアジュバント、ミネラルゲル（例えば、水酸化アルミニウム）、および界面活性物質（例えば、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油性乳濁液、キーホールリンペットヘモシアニン、およびジニトロフェノール）が含まれるが、これらに限定されない。ヒトで使用されるアジュバントのうち、ＢＣＧ（カルメット・ゲラン桿菌）およびコリネバクテリウム・パルバムが特に有用である。
【００３１】
抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を、培養物中の連続的な細胞株によって抗体分子を産生する任意の技術を使用して調製することができる。これらの技術には、ハイブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術、およびＥＢＶハイブリドーマ技術が含まれるが、これらに限定されない（Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ２５６，４９５ ４９７，１９８５；Ｋｏｚｂｏｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ８１，３１ ４２，１９８５；Ｃｏｔｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８０，２０２６ ２０３０，１９８３；Ｃｏｌｅら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．６２，１０９ １２０，１９８４）。
【００３２】
さらに、「キメラ抗体」の産生のために開発された技術（マウス抗体遺伝子をヒト抗体遺伝子にスプライシングして適切な抗原特異性および生物活性を有する分子を得る技術）を使用することができる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１，６８５１ ６８５５，１９８４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３１２，６０４ ６０８，１９８４；Ｔａｋｅｄａら、Ｎａｔｕｒｅ ３１４，４５２ ４５４，１９８５）。モノクローナル抗体および他の抗体を「ヒト化」して、治療で使用する場合に抗体に対する患者の免疫応答の開始を防止することもできる。かかる抗体は、療法で直接使用するのに配列が十分にヒト抗体と類似し得るか、少数の重要な残基を変化させる必要があり得る。げっ歯類抗体配列とヒト抗体配列との間の相違を、各残基の部位特異的変異誘発または相補性決定領域全体のグラフティング（ｇｒａｔｉｎｇ）によるヒト配列中の残基と異なる残基の置換によって最小にすることができる。
【００３３】
あるいは、下記の組換え方法を使用してヒト化抗体を産生することができる。米国特許第５，５６５，３３２号に開示のように、特定の抗原に特異的に結合する抗体は、部分的または完全にヒト化された抗原結合部位を含むことができる。
【００３４】
あるいは、単鎖抗体の産生について記載した技術を、当該分野公知の方法を使用して適合させて、特定の抗原に特異的に結合する単鎖抗体を産生することができる。関連する特異性を有するが、異なるイディオタイプ組成の抗体を、ランダム組み合わせ免疫グロブリンライブラリー由来のチェーンシャフリング（ｃｈａｉｎ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）によって生成することができる（Ｂｕｒｔｏｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８８，１１１２０ ２３，１９９１）。
【００３５】
単鎖抗体を、テンプレートとしてハイブリドーマｃＤＮＡを使用したＤＮＡ増幅方法（ＰＣＲなど）を使用して構築することができる（Ｔｈｉｒｉｏｎら、１９９６，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｐｒｅｖ．５，５０７−１１）。単鎖抗体は、単一特異性または二重特異性であり得、２価または４価であり得る。４価の二重特異性単鎖抗体の構築は、例えば、Ｃｏｌｏｍａ ＆ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９９７，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５，１５９−６３に教示されている。２価の二重特異性単鎖抗体は、Ｍａｌｌｅｎｄｅｒ ＆ Ｖｏｓｓ，１９９４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９，１９９−２０６に教示されている。
【００３６】
下記のように、単鎖抗体をコードするヌクレオチド配列を、手作業または自動化されたヌクレオチド合成によって構築し、標準的な組換えＤＮＡ法を使用して発現構築物にクローニングし、細胞に導入してコード配列を発現させることができる。あるいは、単鎖抗体を、例えば、繊維状ファージテクノロジーを使用して直接産生することができる（Ｖｅｒｈａａｒら、１９９５，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ６１，４９７−５０１；Ｎｉｃｈｏｌｌｓら、１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６５，８１−９１）。
【００３７】
特定の抗原に特異的に結合する抗体を、文献に開示のリンパ球集団におけるインビボ産生の誘導または免疫グロブリンライブラリーもしくは高度に特異的な結合試薬のパネルのスクリーニングによって産生することもできる（Ｏｒｌａｎｄｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６，３８３３ ３８３７，１９８９；Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３４９，２９３ ２９９，１９９１）。
【００３８】
キメラ抗体を、ＷＯ９３／０３１５１号に開示のように構築することができる。免疫グロブリンに由来し、多価または多重特異性の結合タンパク質（ＷＯ９４／１３８０４号に記載の「二特異性抗体」など）を調製することもできる。
【００３９】
抗体を、当該分野で周知の方法によって精製することができる。例えば、抗体を、関連抗原が結合するカラムの通過によってアフィニティ精製することができる。次いで、結合した抗体を、高塩濃度の緩衝剤を使用して、カラムから溶離することができる。
【００４０】
薬学的組成物
本発明はまた、薬物として（例えば、免疫原性組成物またはワクチンとして）用いる組成物を提供する。本発明の組成物は、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ感染の結果として引き起こされる疾患を予防および／または治療するのに有用であり、ポリペプチド、核酸分子、または抗体であり得る少なくとも１つの活性剤を含む。前記疾患は、例えば、菌血症、髄膜炎、産褥熱、猩紅熱、丹毒、咽頭炎、膿痂疹、壊死性筋膜炎、筋炎、または毒素性ショック症候群であり得る。
【００４１】
変異体ＳＬＯタンパク質を含む組成物は、好ましくは、免疫原性組成物であり、より好ましくは、ワクチン組成物である。かかる組成物のｐＨは、好ましくは、ｐＨ６とｐＨ８との間、好ましくは、約ｐＨ７である。ｐＨを緩衝剤の使用によって維持することができる。組成物は、無菌でありおよび／または発熱物質を含まなくあり得る。組成物は、ヒトに関して等張であり得る。
【００４２】
本発明のワクチンを、予防的または治療的に使用することができるが、典型的には、予防的であろう。したがって、本発明は、化膿連鎖球菌感染の治療的または予防的処置のための方法を含む。動物は、好ましくは哺乳動物であり、最も好ましくはヒトである。方法は、治療量または予防量の本発明の免疫原性組成物を動物に投与する工程を含む。
【００４３】
いくつかの本発明の組成物は、本明細書に記載の変異体ＳＬＯタンパク質を含む。他の本発明の組成物は、変異体ＳＬＯタンパク質、任意選択的に、組成物中に含めることができる他の抗原をコードする核酸分子を含む（以下を参照のこと）。例えば、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ＆ Ｔｏｒｒｅｓ（１９９７）Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９：２７１−２８３；Ｄｏｎｎｅｌｌｙら（１９９７）Ａｎｎ．Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５：６１７−６４８；Ｓｃｏｔｔ−Ｔａｙｌｏｒ ＆ Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ（２０００）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ ９：４７１−４８０；Ａｐｏｓｔｏｌｏｐｏｕｌｏｓ ＆ Ｐｌｅｂａｎｓｋｉ（２０００）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２：４４１−４４７；Ｉｌａｎ（１９９９）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ １：１１６−１２０；Ｄｕｂｅｎｓｋｙら（２０００）Ｍｏｌ Ｍｅｄ ６：７２３−７３２；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ＆ Ｐｅｒｔｍｅｒ（２０００）Ａｄｖ Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ ５５：１−７４；Ｄｏｎｎｅｌｌｙら（２０００）Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ １６２（４ Ｐｔ ２）：Ｓ１９０−１９３；Ｄａｖｉｓ（１９９９）Ｍｔ．Ｓｉｎａｉ Ｊ．Ｍｅｄ．６６：８４−９０を参照のこと。典型的には、核酸分子は、例えば、プラスミド形態のＤＮＡ分子である。
【００４４】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、１つまたは複数のさらなる活性剤を含むことができる。かかる薬剤には、（ａ）本発明の別の変異体ＳＬＯタンパク質、（ｂ）小児ワクチンで有用なポリペプチド抗原、（ｃ）高齢者または免疫無防備状態の個体のためのワクチンで有用なポリペプチド抗原、（ｄ）（ａ）〜（ｃ）をコードする核酸分子および（ａ）〜（ｃ）に特異的に結合する抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【００４５】
さらなる抗原
本発明の組成物を、本発明の治療方法、または予防方法で使用するための１つまたは複数の追加の抗原と組み合わせて投与することができる。適切な抗原には、以下に列挙した抗原が含まれる。さらに、本発明の組成物を使用して、任意の以下に列挙の病原体に起因する感染を治療または防止することができる。下記の抗原との組み合わせに加えて、本発明の組成物を、本明細書中に記載のアジュバントと組み合わせることもできる。
【００４６】
本発明と共に使用するための抗原には、下記の１つまたは複数の抗原または下記の１つまたは複数の病原体由来の抗原が含まれるが、これらに限定されない。
【００４７】
Ａ．細菌抗原
本発明での使用に適切な細菌抗原には、細菌から単離、精製、または由来することができるタンパク質、多糖類、リポ多糖類、外膜小胞が含まれる。さらに、細菌抗原には、細菌溶解物および不活化細菌処方物が含まれ得る。細菌抗原を、組換え発現によって産生することができる。細菌抗原には、好ましくは、その生活環の少なくとも１段階に細菌表面に曝露されるエピトープが含まれる。細菌抗原は、好ましくは、複数の血清型で保存される。細菌抗原には、下記の１つまたは複数の細菌由来の抗原および以下で同定した特定の抗原例が含まれる。
【００４８】
ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）：メニンギティディス抗原には、Ｎ．メニンギティディス血清群（Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙ、および／またはＢなど）から精製または由来したタンパク質（参考文献１〜７で同定されたタンパク質など）、糖類（多糖類、オリゴ糖、またはリポ多糖類が含まれる）、または外膜小胞（参考文献８、９、１０、１１）が含まれ得る。メニンギティディスタンパク質抗原を、接着剤、オートトランスポータ、毒素、Ｆｅ獲得タンパク質、および膜結合タンパク質（好ましくは、外膜内在性タンパク質（ｉｎｔｅｇｒａｌ ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ））から選択することができる。
【００４９】
肺炎連鎖球菌：肺炎連鎖球菌抗原には、肺炎連鎖球菌由来の糖類（多糖類またはオリゴ糖が含まれる）および／またはタンパク質が含まれ得る。糖類抗原を、血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆから選択することができる。タンパク質抗原を、ＷＯ９８／１８９３１号、ＷＯ９８／１８９３０号、米国特許第６，６９９，７０３号、米国特許第６，８００，７４４号、ＷＯ９７／４３３０３号、およびＷＯ９７／３７０２６号で同定されたタンパク質から選択することができる。肺炎連鎖球菌タンパク質を、ポリヒスチジントリアドファミリー（ＰｈｔＸ）、コリン結合タンパク質ファミリー（ＣｂｐＸ）、ＣｂｐＸ短縮物、ＬｙｔＸファミリー、ＬｙｔＸ短縮物、ＣｂｐＸ短縮物−ＬｙｔＸ短縮物キメラタンパク質、ニューモリシン（Ｐｌｙ）、ＰｓｐＡ、ＰｓａＡ、Ｓｐ１２８、Ｓｐ１０１、Ｓｐ１３０、Ｓｐ１２５、またはＳｐ１３３から選択することができる。
【００５０】
化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）：Ａ群連鎖球菌抗原には、ＷＯ０２／３４７７１号またはＷＯ２００５／０３２５８２号で同定されたタンパク質（ＧＡＳ３９（ｓｐｙ０２６６；ｇｉ−１５６７４４４６）、ＧＡＳ４０（ｓｐｙ０２６９；ｇｉ−１５６７４４４９）、ＧＡＳ４２（ｓｐｙ０２８７；ｇｉ−１５６７４４６１）、ＧＡＳ４５（Ｍ５００５＿ｓｐｙ０２４９；ｇｉ−７１９１００６３）、ＧＡＳ５７（ｓｐｙ０４１６；ｇｉ−１５６７４５４９）、ＧＡＳ５８（ｓｐｙ０４３０；ｇｉ−１５６７４５５６）、ＧＡＳ８４（ｓｐｙ１２７４；ｇｉ−１５６７５２２９）、ＧＡＳ９５（ｓｐｔ１７３３；ｇｉ−１５６７５５８２）、ＧＡＳ１１７（ｓｐｙ０４４８；ｇｉ−１５６７４５７１）、ＧＡＳ１３０（ｓｐｙ０５９１；ｇｉ−１５６７４６７７）、ＧＡＳ１３７（ｓｐｙ０６５２；ｇｉ−１５６７４７２０）、ＧＡＳ１５９（ｓｐｙ１１０５；ｇｉ−１５６７５０８８）、ＧＡＳ１９３（ｓｐｙ２０２５；ｇｉ−１５６７５８０２）、ＧＡＳ２０２（ｓｐｙ１３０９；ｇｉ−１５６７５２５８）、ＧＡＳ２１７（ｓｐｙ０９２５；ｇｉ−１５６７４９４５）、ＧＡＳ２３６（ｓｐｙ１１２６；ｇｉ−１５６７５１０６）、ＧＡＳ２５３（ｓｐｙ１５２４；ｇｉ−１５６７５４２３）、ＧＡＳ２７７（ｓｐｙ１９３９；ｇｉ−１５６７５７４２）、ＧＡＳ２９４（ｓｐｙ１１７３；ｇｉ−１５６７５１４５）、ＧＡＳ３０９（ｓｐｙ０１２４；ｇｉ−１５６７４３４１）、ＧＡＳ３６６（ｓｐｙ１５２５；ｇｉ−１５６７５４２４）、ＧＡＳ３７２（ｓｐｙ１６２５；ｇｉ−１５６７５５０１）、ＧＡＳ３８４（ｓｐｙ１８７４；ｇｉ−１５６７５６９３）、ＧＡＳ３８９（ｓｐｙ１９８１；ｇｉ−１５６７５７７２）、ＧＡＳ５０４（ｓｐｙ１７５１；ｇｉ−１５６７５６００）、ＧＡＳ５０９（ｓｐｙ１６１８；ｇｉ−１５６７５４９６）、ＧＡＳ２９０（ｓｐｙ１９５９；ｇｉ−１５６７５７５７）、ＧＡＳ５１１（ｓｐｙ１７４３；ｇｉ−１５６７５５９２）、ＧＡＳ５２７（ｓｐｙ１２０４；ｇｉ−１５６７５１６９）、ＧＡＳ５２９（ｓｐｙ１２８０；ｇｉ−１５６７５２３３）およびＧＡＳ５３３（ｓｐｙ１８７７；ｇｉ−１５６７５６９６）を含むが、これらに限定されない）、ＧＡＳ Ｍタンパク質のフラグメントの融合物（ＷＯ０２／０９４８５１号およびＤａｌｅ，Ｖａｃｃｉｎｅ（１９９９）１７：１９３−２００およびＤａｌｅ，Ｖａｃｃｉｎｅ １４（１０）：９４４−９４８に記載のものが含まれる）、フィブロネクチン結合タンパク質（Ｓｆｂ１）、連鎖球菌ヘム結合タンパク質（Ｓｈｐ）、およびストレプトリシンＳ（ＳａｇＡ）が含まれ得る。さらなるＧＡＳ抗原としては、ＧＡＳ６８（Ｓｐｙ０１６３；ｇｉ１３６２１４５６）、ＧＡＳ８４（Ｓｐｙ１２７４；ｇｉ１３６２２３９８）、ＧＡＳ８８（Ｓｐｙ１３６１；ｇｉ１３６２２４７０）、ＧＡＳ８９（Ｓｐｙ１３９０；ｇｉ１３６２２４９３）、ＧＡＳ９８（Ｓｐｙ１８８２；ｇｉ１３６２２９１６）、ＧＡＳ９９（Ｓｐｙ１９７９；ｇｉ１３６２２９９３）、ＧＡＳ１０２（Ｓｐｙ２０１６、ｇｉ１３６２３０２５）、ＧＡＳ１４６（Ｓｐｙ０７６３；ｇｉ１３６２１９４２）、ＧＡＳ１９５（Ｓｐｙ２０４３；ｇｉ１３６２３０４３）、ＧＡＳ５６１（Ｓｐｙ１１３４；ｇｉ１３６２２２６９）、ＧＡＳ１７９（Ｓｐｙ１７１８、ｇｉ１３６２２７７３）およびＧＡＳ６８１（ｓｐｙ１１５２；ｇｉ１３６２２２８）が挙げられる。
【００５１】
カタル球菌：モラクセラ抗原には、ＷＯ０２／１８５９５号およびＷＯ９９／５８５６２号で同定された抗原、外膜タンパク質抗原（ＨＭＷ−ＯＭＰ）、Ｃ抗原、および／またはＬＰＳが含まれる。
【００５２】
百日咳菌：百日咳抗原には、百日咳ホロトキシン（ｐｅｔｕｓｓｉｓ ｈｏｌｏｔｏｘｉｎ）（ＰＴ）および百日咳菌由来の繊維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）が含まれ、任意選択的に、パータクチンおよび／または凝集原２および３抗原との組み合わせも含まれる。
【００５３】
黄色ブドウ球菌：黄色ブドウ球菌抗原には、非毒性組換え緑膿菌外毒素Ａと任意選択的に接合した黄色ブドウ球菌５型および８型莢膜多糖類（ＳｔａｐｈＶＡＸ（商標）など）または表面タンパク質由来の抗原、インベイシン（ロイコシジン、キナーゼ、ヒアルロニダーゼ）、食細胞の貪食を阻害する表面因子（莢膜、プロテインＡ）、カロテノイド、カタラーゼ産物、プロテインＡ、凝固酵素、凝固因子、および／または真核生物細胞膜を溶解する膜損傷毒素（任意選択的に解毒した）（ヘモリシン、ロイコトキシン、ロイコシジン）が含まれる。
【００５４】
表皮ブドウ球菌：表皮ブドウ球菌抗原には、粘液結合抗原（ＳＡＡ）が含まれる。
【００５５】
破傷風菌（破傷風）：破傷風抗原には、本発明の組成物と接合した担体タンパク質として使用されることが好ましい破傷風トキソイド（ＴＴ）が含まれる。
【００５６】
ジフテリア菌（Ｃｏｒｎｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）（ジフテリア）：ジフテリア抗原には、好ましくは解毒されたジフテリア毒素（ＣＲＭ１９７など）が含まれる。さらに、ＡＤＰリボシル化を調整するか、阻害するか、これに関連することができる抗原は、本発明の組成物との組み合わせ／同時投与／接合が意図される。担体タンパク質としてジフテリアトキソイドを使用することができる。
【００５７】
インフルエンザ菌Ｂ（Ｈｉｂ）：Ｈｉｂ抗原には、Ｈｉｂ糖類抗原が含まれる。
【００５８】
緑膿菌：シュードモナス抗原には、内毒素Ａ、Ｗｚｚタンパク質、緑膿菌ＬＰＳ、より詳細にはＰＡＯ１から単離したＬＰＳ（Ｏ５血清型）、および／または外膜タンパク質（外膜タンパク質Ｆ（ＯｐｒＦ）が含まれる）（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００１ Ｍａｙ；６９（５）：３５１０−３５１５）が含まれる。
【００５９】
レジオネラ・ニューモフィラ。細菌毒素は、レジオネラ・ニューモフィラに由来し得る。
【００６０】
ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｂ群連鎖球菌）：Ｂ群連鎖球菌抗原には、ＷＯ０２／３４７７１号、ＷＯ０３／０９３３０６号、ＷＯ０４／０４１１５７号、またはＷＯ２００５／００２６１９号で同定されたタンパク質抗原または糖類抗原（タンパク質ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ２７６、およびＧＢＳ３２２、ならびに血清型Ｉａ、Ｉｂ、Ｉａ／ｃ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、およびＶＩＩＩ由来の糖類抗原が含まれる）が含まれる。
【００６１】
淋菌（Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）：ゴノレー抗原には、Ｐｏｒ（すなわち、ポリン）タンパク質（ＰｏｒＢ（Ｚｈｕら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００４）２２：６６０−６６９を参照のこと）など）、トランスフェリン結合タンパク質（ＴｂｐＡおよびＴｂｐＢ（Ｐｒｉｃｅら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００４）７１（１）：２７７−２８３を参照のこと）など）、混濁タンパク質（ｏｐａｃｉｔｙ ｐｒｏｔｅｉｎ）（Ｏｐａなど）、還元修飾性タンパク質（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ−ｍｏｄｉｆｉａｂｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）（Ｒｍｐ）、および外膜小胞（ＯＭＶ）調製物（Ｐｌａｎｔｅら、Ｊ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ（２０００）１８２：８４８−８５５を参照のこと、例えば、ＷＯ９９／２４５７８、ＷＯ９９／３６５４４、ＷＯ９９／５７２８０、ＷＯ０２／０７９２４３も参照のこと）が含まれる。
【００６２】
トラコーマクラミジア：トラコーマクラミジア抗原には、血清型Ａ、Ｂ、Ｂａ、およびＣ由来の抗原（トラコーマの作用因子、盲目の原因）、血清型Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３由来の抗原（性病性リンパ肉芽腫症に関連）、および血清型ＤからＫ由来の抗原が含まれる。トラコーマクラミジア抗原には、ＷＯ００／３７４９４号、ＷＯ０３／０４９７６２号、ＷＯ０３／０６８８１１号、またはＷＯ０５／００２６１９号で同定された抗原（ＰｅｐＡ（ＣＴ０４５）、ＬｃｒＥ（ＣＴ０８９）、ＡｒｔＪ（ＣＴ３８１）、ＤｎａＫ（ＣＴ３９６）、ＣＴ３９８、ＯｍｐＨ−ｌｉｋｅ（ＣＴ２４２）、Ｌ７／Ｌ１２（ＣＴ３１６）、ＯｍｃＡ（ＣＴ４４４）、ＡｔｏｓＳ（ＣＴ４６７）、ＣＴ５４７、Ｅｎｏ（ＣＴ５８７）、ＨｒｔＡ（ＣＴ８２３）、およびＭｕｒＧ（ＣＴ７６１）が含まれる）も含まれ得る。
【００６３】
梅毒トレポネーマ（梅毒）：梅毒抗原には、ＴｍｐＡ抗原が含まれる。
【００６４】
軟性下疳菌（軟性下疳の原因菌）：デュクレイ抗原には、外膜タンパク質（ＤｓｒＡ）が含まれる。
【００６５】
フェカリス菌またはフェシウム菌：抗原には、米国特許第６，７５６，３６１号に記載の三糖類反復または他の腸球菌由来の抗原が含まれる。
【００６６】
ピロリ菌：ピロリ菌抗原には、Ｃａｇ、Ｖａｃ、Ｎａｐ、ＨｏｐＸ、ＨｏｐＹ、および／またはウレアーゼ抗原が含まれる。
【００６７】
腐性ブドウ球菌（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ）：抗原には、腐性ブドウ球菌抗原の１６０ｋＤａ血球凝集素が含まれる。
【００６８】
エンテロコリチカ菌抗原には、ＬＰＳ（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００２ Ａｕｇｕｓｔ；７０（８）：４４１４）が含まれる。
【００６９】
大腸菌：大腸菌抗原は、毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）、腸管凝集性大腸菌（ＥＡｇｇＥＣ）、びまん付着性大腸菌（ＤＡＥＣ）、腸管病原性大腸菌（ＥＰＥＣ）、および／または腸管出血性大腸菌（ＥＨＥＣ）に由来し得る。
【００７０】
炭疽菌（炭疽病）：炭疽菌抗原は任意選択的に解毒されており、Ａ成分（致死因子（ＬＦ）および浮腫因子（ＥＦ））から選択することができ、その両方が、防御抗原（ＰＡ）として公知のＢ成分を共有することができる。
【００７１】
ペスト菌（ペスト）：ペスト抗原には、Ｆ１莢膜抗原（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００３ Ｊａｎ；７１（１））：３７４−３８３，ＬＰＳ（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．１９９９ Ｏｃｔ；６７（１０）：５３９５）、ペスト菌Ｖ抗原（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．１９９７ Ｎｏｖ；６５（１１）：４４７６−４４８２）が含まれる。
【００７２】
結核菌：結核抗原には、リポタンパク質、ＬＰＳ、ＢＣＧ抗原、抗原８５Ｂの融合タンパク質（Ａｇ８５Ｂ）および／または任意選択的にカチオン性脂質小胞中に配合されたＥＳＡＴ−６（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００４ Ｏｃｔｏｂｅｒ；７２（１０）：６１４８）、結核菌（Ｍｔｂ）イソクエン酸デヒドロゲナーゼ関連抗原（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００４ Ａｕｇ ２４；１０１（３４）：１２６５２）、および／またはＭＰＴ５１抗原（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００４ Ｊｕｌｙ；７２（７）：３８２９）が含まれる。
【００７３】
リケッチア属：抗原には、外膜タンパク質（外膜プロテインＡおよび／またはＢ（ＯｍｐＢ）が含まれる）（Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ．２００４ Ｎｏｖ １；１７０２（２）：１４５）、ＬＰＳ、および表面タンパク質抗原（ＳＰＡ）（Ｊ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．１９８９ Ｊｕｎ；２ Ｓｕｐｐｌ：８１）が含まれる。
【００７４】
リステリア菌。細菌抗原は、リステリア菌に由来し得る。
【００７５】
クラミジア・ニューモニエ：抗原には、ＷＯ０２／０２６０６号で同定された抗原が含まれる。
【００７６】
コレラ菌：抗原には、プロテイナーゼ抗原、ＬＰＳ（特に、コレラ菌ＩＩのリポ多糖類）、Ｏ１ Ｉｎａｂａ Ｏ−特異的多糖類、コレラ菌Ｏ１３９、ＩＥＭ１０８ワクチンの抗原（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００３ Ｏｃｔ；７１（１０）：５４９８−５０４）、および／または閉鎖帯毒素（Ｚｏｔ）が含まれる。
【００７７】
チフス菌（チフス熱）：抗原には、莢膜多糖類、好ましくは抱合体（Ｖｉ、すなわち、ｖａｘ−ＴｙＶｉ）が含まれる。
【００７８】
ライム病ボレリア（ライム病）：抗原には、リポタンパク質（ＯｓｐＡ、ＯｓｐＢ、ＯｓｐＣ、およびＯｓｐＤなど）、他の表面タンパク質（ＯｓｐＥ関連タンパク質（Ｅｒｐｓ）など）、デコリン結合タンパク質（ＤｂｐＡなど）、および抗原的に可変のＶＩタンパク質（Ｐ３９およびＰ１３に結合するタンパク質）（膜内在性タンパク質、Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００１ Ｍａｙ；６９（５）：３３２３−３３３４）、ＶｌｓＥ抗原変異タンパク質（Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９９９ Ｄｅｃ；３７（１２）：３９９７）など）が含まれる。
【００７９】
ジンジバリス菌：抗原には、ジンジバリス菌外膜タンパク質（ＯＭＰ）が含まれる。
【００８０】
クレブシエラ属：抗原には、ＯＭＰ（ＯＭＰ Ａが含まれる）または破傷風トキソイド任意選択的に接合した多糖類が含まれる。
【００８１】
さらなる本発明の細菌抗原は、上記のいずれかの莢膜抗原、多糖類抗原、またはタンパク質抗原であり得る。さらなる細菌抗原には、外膜小胞（ＯＭＶ）調製物も含まれ得る。さらに、抗原には、上記細菌のいずれかの生きたバージョン、弱毒化バージョン、および／または精製バージョンが含まれる。本発明の抗原は、グラム陰性細菌またはグラム陽性細菌に由来し得る。本発明の抗原は、好気性菌または嫌気性菌に由来し得る。
【００８２】
さらに、上記細菌由来糖類のいずれか（多糖類、ＬＰＳ、ＬＯＳ、またはオリゴ糖）を、別の作用因子または抗原（担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７など））と接合することができる。かかる接合は、米国特許第５，３６０，８９７号およびＣａｎ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１９８４ Ｍａｙ；６２（５）：２７０−５に記載のタンパク質上のアミノ基への糖類上のカルボニル部分の還元的アミド化によって生じる直接的接合であり得る。あるいは、糖類を、リンカーを介して、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９９６およびＣＲＣ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ，１９９３に記載のスクシンアミドまたは他の結合などを介して接合することができる。
【００８３】
Ｂ．ウイルス抗原
本発明での使用に適切なウイルス抗原には、不活化（または死滅）ウイルス、弱毒化ウイルス、スプリットウイルス処方物、精製サブユニット処方物、ウイルスから単離、精製、または由来することができるウイルスタンパク質、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）が含まれる。ウイルス抗原は、細胞培養物または他の基質上に増殖したウイルスに由来し得る。あるいは、ウイルス抗原を、組換え的に発現することができる。ウイルス抗原には、好ましくは、その生活環の少なくとも１段階に細菌表面に曝露されるエピトープが含まれる。細菌抗原は、好ましくは、複数の血清型または分離株で保存される。細菌抗原には、下記の１つまたは複数の細菌由来の抗原および以下で同定した特定の抗原例が含まれる。
【００８４】
オルソミクソウイルス：ウイルス抗原は、オルソミクソウイルス（インフルエンザＡ型、Ｂ型、およびＣ型など）に由来し得る。オルソミクソウイルス抗原を、１つまたは複数のウイルスタンパク質（血球凝集素（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、核タンパク質（ＮＰ）、基質タンパク質（Ｍ１）、膜タンパク質（Ｍ２）、１つまたは複数の転写酵素成分（ＰＢ１、ＰＢ２、およびＰＡ）が含まれる）から選択することができる。好ましい抗原には、ＨＡおよびＮＡが含まれる。
【００８５】
インフルエンザ抗原は、世界的流行間期の（年間流行性）インフルエンザ株に由来し得る。あるいは、インフルエンザ抗原は、世界的流行およびその発生を引き起こす可能性のある株（すなわち、現在広まっている株における赤血球凝集素と比較して新規の赤血球凝集素を有するインフルエンザ株、トリ被験体中で病原性を示し、且つヒト集団において水平伝播する可能性があるインフルエンザ株、またはヒトに病原性を示すインフルエンザ株）に由来し得る。
【００８６】
パラミクソウイルス科のウイルス：ウイルス抗原は、パラミクソウイルス科のウイルス（ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ）、およびモルビリウイルス（麻疹）など）に由来し得る。
【００８７】
ニューモウイルス：ウイルス抗原は、ニューモウイルス（ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ウシＲＳウイルス、マウス肺炎ウイルス、およびシチメンチョウ鼻気管炎ウイルスなど）に由来し得る。好ましくは、ニューモウイルスはＲＳＶである。ニューモウイルス抗原を、１つまたは複数の以下のタンパク質（表面タンパク質（融合物（Ｆ）、糖タンパク質（Ｇ）、および小疎水性タンパク質（ＳＨ））、基質タンパク質ＭおよびＭ２、ヌクレオカプシドタンパク質Ｎ、Ｐ、およびＬならびに非構造タンパク質ＮＳ１およびＮＳ２が含まれる）から選択することができる。好ましいニューモウイルス抗原には、Ｆ、Ｇ、およびＭが含まれる。例えば、Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．２００４ Ｎｏｖ；８５（Ｐｔ１１）：３２２９）を参照のこと。ニューモウイルス抗原を、キメラウイルス中に配合するか、これに由来することができる。例えば、キメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶおよびＰＩＶの両方の成分を含むことができる。
【００８８】
パラミクソウイルス：ウイルス抗原は、パラミクソウイルス（パラインフルエンザウイルス１型〜４型（ＰＩＶ）、ムンプス、センダイウイルス、サルウイルス５、ウシパラインフルエンザウイルス、およびニューカッスル病ウイルスなど）に由来し得る。好ましくは、パラミクソウイルスはＰＩＶまたはムンプスである。パラミクソウイルス抗原を、１つまたは複数の以下のタンパク質から選択することができる：血球凝集素−ノイラミニダーゼ（ＨＮ）、融合タンパク質Ｆ１およびＦ２、核タンパク質（ＮＰ）、リンタンパク質（Ｐ）、巨大タンパク質（Ｌ）、および基質タンパク質（Ｍ）。好ましいパラミクソウイルスタンパク質には、ＨＮ、Ｆ１、およびＦ２が含まれる。パラミクソウイルス抗原を、キメラウイルス中に配合するか、これに由来することができる。例えば、キメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶおよびＰＩＶの両方の成分を含むことができる。市販のムンプスワクチンには、１価の形態または麻疹ワクチンおよび風疹ワクチン（ＭＭＲ）と組み合わせた弱毒化生ムンプスウイルスが含まれる。
【００８９】
モルビリウイルス：ウイルス抗原は、モルビリウイルス（麻疹ウイルスなど）に由来し得る。モルビリウイルス抗原を、１つまたは複数の以下のタンパク質から選択することができる：血球凝集素（Ｈ）、糖タンパク質（Ｇ）、融合因子（Ｆ）、巨大タンパク質（Ｌ）、核タンパク質（ＮＰ）、ポリメラーゼリンタンパク質（Ｐ）、および基質（Ｍ）。市販の麻疹ワクチンには、典型的にはムンプスおよび風疹（ＭＭＲ）と組み合わせた弱毒化生麻疹ウイルスが含まれる。
【００９０】
ピコルナウイルス：ウイルス抗原は、ピコルナウイルス（エンテロウイルス、ライノウイルス、ヘパルナウイルス、カルジオウイルス、およびアフトウイルスなど）に由来し得る。エンテロウイルス（ポリオウイルスなど）由来の抗原が好ましい。
【００９１】
エンテロウイルス：ウイルス抗原は、エンテロウイルス（ポリオウイルス１型１、２型、または３型）、コクサッキーＡウイルス１〜２２型および２４型、コクサッキーＢウイルス１〜６型、エコーウイルス（ＥＣＨＯ）１〜９型、１１〜２７型、および２９〜３４型、ならびにエンテロウイルス６８〜７１など）に由来し得る。好ましくは、エンテロウイルスはポリオウイルスである。エンテロウイルス抗原は、好ましくは、１つまたは複数の以下のキャプシドタンパク質から選択される：ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、およびＶＰ４。市販のポリオワクチンには、不活化ポリオワクチン（ＩＰＶ）および経口ポリオウイルスワクチン（ＯＰＶ）が含まれる。
【００９２】
ヘパルナウイルス：ウイルス抗原は、ヘパルナウイルス（Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）など）に由来し得る。市販のＨＡＶワクチンには、不活化ＨＡＶワクチンが含まれる。
【００９３】
トガウイルス：ウイルス抗原は、トガウイルス（ルビウイルス、アルファウイルス、またはアルテリウイルスなど）に由来し得る。ルビウイルス（風疹ウイルスなど）由来の抗原が好ましい。トガウイルス抗原を、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｃ、ＮＳＰ−１、ＮＳＰＯ−２、ＮＳＰ−３、またはＮＳＰ−４から選択することができる。トガウイルス抗原を、好ましくは、Ｅ１、Ｅ２、またはＥ３から選択する。市販の風疹ワクチンには、典型的にはムンプスワクチンおよび麻疹ワクチン（ＭＭＲ）と組み合わせた低温適応の生きたウイルスが含まれる。
【００９４】
フラビウイルス：ウイルス抗原は、フラビウイルス（ダニ媒介性脳炎（ＴＢＥ）、デング熱（１、２、３、または４型）、黄熱病、日本脳炎、ウエストナイル脳炎、セントルイス脳炎、ロシア春夏脳炎、ポワッサン脳炎など）に由来し得る。フラビウイルス抗原を、ＰｒＭ、Ｍ、Ｃ、Ｅ、ＮＳ−１、ＮＳ−２ａ、ＮＳ２ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ４ｂ、およびＮＳ５から選択することができる。フラビウイルス抗原を、好ましくは、ＰｒＭ、Ｍ、およびＥから選択する。市販のＴＢＥワクチンには、不活化ウイルスワクチンが含まれる。
【００９５】
ペスチウイルス：ウイルス抗原は、ペスチウイルス（ウシウイルス性下痢（ＢＶＤＶ）、ブタコレラ（ＣＳＦＶ）、またはボーダー病（ＢＤＶ）など）に由来し得る。
【００９６】
ヘパドナウイルス：ウイルス抗原は、ヘパドナウイルス（Ｂ型肝炎ウイルスなど）に由来し得る。ヘパドナウイルス抗原を、表面抗原（Ｌ、Ｍ、およびＳ）、コア抗原（ＨＢｃ、ＨＢｅ）から選択することができる。市販のＨＢＶワクチンには、表面抗原Ｓタンパク質を含むサブユニットワクチンが含まれる。
【００９７】
Ｃ型肝炎ウイルス：ウイルス抗原は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に由来し得る。ＨＣＶ抗原を、１つまたは複数のＥ１、Ｅ２、Ｅ１／Ｅ２、ＮＳ３４５ポリタンパク質、ＮＳ３４５−コアポリタンパク質、コア、および／または非構造領域由来のペプチド（Ｈｏｕｇｈｔｏｎら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ（１９９１）１４：３８１）から選択することができる。
【００９８】
ラブドウイルス：ウイルス抗原は、ラブドウイルス（リッサウイルス（狂犬病ウイルス）およびベシクロウイルス（ＶＳＶ）など）に由来し得る。ラブドウイルス抗原を、糖タンパク質（Ｇ）、核タンパク質（Ｎ）、巨大タンパク質（Ｌ）、非構造タンパク質（ＮＳ）から選択することができる。市販の狂犬病ウイルスワクチンは、ヒト二倍体細胞またはアカゲザル胎児肺細胞で成長した死滅ウイルスを含む。
【００９９】
カリシウイルス科；ウイルス抗原は、カルシウイルス科（ノーウォークウイルスおよびノーウォーク様ウイルス（ハワイウイルスおよびスノーマウンテンウイルスなど）など）に由来し得る。
【０１００】
コロナウイルス：ウイルス抗原は、コロナウイルス、ＳＡＲＳ、ヒト呼吸器コロナウイルス、トリ伝染性気管支炎（ＩＢＶ）、マウス肝炎ウイルス（ＭＨＶ）、およびブタ伝染性胃腸炎ウイルス（ＴＧＥＶ）に由来し得る。コロナウイルス抗原を、スパイク（Ｓ）、エンベロープ（Ｅ）、基質（Ｍ）、ヌクレオカプシド（Ｎ）、および血球凝集素−エステラーゼ糖タンパク質（ＨＥ）から選択することができる。好ましくは、コロナウイルス抗原は、ＳＡＲＳウイルスに由来する。ＳＡＲＳウイルス抗原は、ＷＯ０４／９２３６０号に記載されている。
【０１０１】
レトロウイルス：ウイルス抗原は、レトロウイルス（オンコウイルス、レンチウイルス、またはスプーマウイルスなど）に由来し得る。オンコウイルス抗原は、ＨＴＬＶ−１、ＨＴＬＶ−２、またはＨＴＬＶ−５に由来し得る。レンチウイルス抗原は、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２に由来し得る。レトロウイルス抗原を、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、ｔａｘ、ｔａｔ、ｒｅｘ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、ｖｐｕ、およびｖｐｒから選択することができる。ＨＩＶ抗原を、ｇａｇ（ｐ２４ｇａｇおよびｐ５５ｇａｇ）、ｅｎｖ（ｇｐ１６０およびｇｐ４１）、ｐｏｌ、ｔａｔ、ｎｅｆ、ｒｅｖ ｖｐｕ、ミニタンパク質（好ましくは、ｐ５５ ｇａｇおよびｇｐ１４０ｖ欠失）から選択することができる。ＨＩＶ抗原は、１つまたは複数の以下の株に由来し得る：ＨＩＶＩＩＩｂ、ＨＩＶＳＦ２、ＨＩＶＬＡＶ、ＨＩＶＬＡＩ、ＨＩＶＭＮ、ＨＩＶ−１ＣＭ２３５、ＨＩＶ−１ＵＳ４。
【０１０２】
レオウイルス：ウイルス抗原は、レオウイルス（オルトレオウイルス、ロタウイルス、オルビウイルス、またはコルティウイルスなど）に由来し得る。レオウイルス抗原を、構造タンパク質λ１、λ２、λ３、μ１、μ２、σ１、σ２、もしくはσ３、または非構造タンパク質σＮＳ、μＮＳ、もしくはσ１ｓから選択することができる。好ましいレオウイルス抗原は、ロタウイルスに由来し得る。ロタウイルス抗原を、ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４（または切断産物ＶＰ５およびＶＰ８）、ＮＳＰ１、ＶＰ６、ＮＳＰ３、ＮＳＰ２、ＶＰ７、ＮＳＰ４、またはＮＳＰ５から選択することができる。好ましいロタウイルス抗原には、ＶＰ４（または切断産物ＶＰ５およびＶＰ８）、およびＶＰ７が含まれる。
【０１０３】
パルボウイルス：ウイルス抗原は、パルボウイルス（パルボウイルスＢ１９など）に由来し得る。パルボウイルス抗原を、ＶＰ−１、ＶＰ−２、ＶＰ−３、ＮＳ−１、およびＮＳ−２から選択することができる。好ましくは、パルボウイルス抗原は、キャプシドタンパク質ＶＰ−２である。
【０１０４】
デルタ肝炎ウイルス（ＨＤＶ）：ウイルス抗原は、ＨＤＶ、特に、ＨＤＶ由来のδ−抗原（例えば、米国特許第５，３７８，８１４号を参照のこと）に由来し得る。
【０１０５】
Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）：ウイルス抗原は、ＨＥＶに由来し得る。
【０１０６】
Ｇ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）：ウイルス抗原は、ＨＧＶに由来し得る。
【０１０７】
ヒトヘルペスウイルス：ウイルス抗原は、ヒトヘルペスウイルス（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ６）、ヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ７）、およびヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ８）など）に由来し得る。ヒトヘルペスウイルス抗原を、最初期タンパク質（α）、初期タンパク質（β）、および後期タンパク質（γ）から選択することができる。ＨＳＶ抗原は、ＨＳＶ−１株またはＨＳＶ−２株に由来し得る。ＨＳＶ抗原を、糖タンパク質ｇＢ、ｇＣ、ｇＤ、およびｇＨ、融合タンパク質（ｇＢ）、または免疫回避タンパク質（ｇＣ、ｇＥ、またはｇＩ）から選択することができる。ＶＺＶ抗原を、コアタンパク質、ヌクレオカプシドタンパク質、テグメントタンパク質、またはエンベロープタンパク質から選択することができる。弱毒化生ＶＺＶワクチンは市販されている。ＥＢＶ抗原を、初期抗原（ＥＡ）タンパク質、ウイルスキャプシド抗原（ＶＣＡ）、および膜抗原（ＭＡ）の糖タンパク質から選択することができる。ＣＭＶ抗原を、キャプシドタンパク質、エンベロープ糖タンパク質（ｇＢおよびｇＨなど）、およびテグメントタンパク質から選択することができる。
【０１０８】
パポーバウイルス：抗原は、パポーバウイルス（パピローマウイルスおよびポリオーマウイルスなど）に由来し得る。パピローマウイルスには、ＨＰＶ血清型１、２、４、５、６、８、１１、１３、１６、１８、３１、３３、３５、３９、４１、４２、４７、５１、５７、５８、６３、および６５が含まれる。好ましくは、ＨＰＶ抗原は、血清型６、１１、１６、または１８に由来する。ＨＰＶ抗原を、キャプシドタンパク質（Ｌ１）および（Ｌ２）またはＥ１〜Ｅ７、またはその融合物から選択することができる。ＨＰＶ抗原を、好ましくは、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）に配合する。ポリオーマウイルス（Ｐｏｌｙｏｍｙａｖｉｒｕｓ）には、ＢＫウイルスおよびＪＫウイルスが含まれる。ポリオーマウイルス抗原を、ＶＰ１、ＶＰ２、またはＶＰ３から選択することができる。
【０１０９】
Ｖａｃｃｉｎｅｓ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｐｌｏｔｋｉｎ ａｎｄ Ｏｒｅｎｓｔｅｉｎ ｅｄ．２００４）；Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍｕｒｒａｙら、ｅｄ．２００２）；Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗ．Ｋ．Ｊｏｋｌｉｋ ｅｄ．１９８８）；Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｂ．Ｎ．Ｆｉｅｌｄｓ ａｎｄ Ｄ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ，ｅｄｓ．１９９１）（本発明の組成物と併せて意図される）に含まれる抗原、組成物、方法、および微生物がさらに提供される。
【０１１０】
Ｃ．真菌抗原
本発明で用いる真菌抗原は、１つまたは複数の下記の真菌に由来し得る。
【０１１１】
真菌抗原は、皮膚糸状菌（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈｙｔｒｅｓ）（エピデルモフィトン・フロッコーサム（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ ｆｌｏｃｃｕｓｕｍ）、ミクロスポルム・オドウィニ（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ａｕｄｏｕｉｎｉ）、ミクロスポルム・カニス（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｃａｎｉｓ）、ミクロスポルム・ディストルツム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｄｉｓｔｏｒｔｕｍ）、ミクロスポルム・エクイヌム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｅｑｕｉｎｕｍ）、ミクロスポルム・ジプスム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｇｙｐｓｕｍ）、ミクロスポルム・ナヌム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｎｕｍ）、トリコフィトン・コンセントリクム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒｉｃｕｍ）、トリコフィトン・エクイヌム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｅｑｕｉｎｕｍ）、トリコフィトン・ガリネ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｇａｌｌｉｎａｅ）、トリコフィトン・ジプセウム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｇｙｐｓｅｕｍ）、トリコフィトン・メグニニ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｇｎｉｎｉ）、トリコフィトン・メンタグロフィテス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ）、トリコフィトン・キンケアヌム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｑｕｉｎｃｋｅａｎｕｍ）、トリコフィトン・ルブルム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｒｕｂｒｕｍ）、トリコフィトン・シェーンレイニ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｓｃｈｏｅｎｌｅｉｎｉ）、トリコフィトン・トンスランス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｔｏｎｓｕｒａｎｓ）、トリコフィトン・ベルコスム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ）、Ｔ．ベルコスム・アルブム変種（Ｔ．ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ ｖａｒ．ａｌｂｕｍ）、ジスコイデス変種（ｖａｒ．ｄｉｓｃｏｉｄｅｓ）、オクラセイム変種（ｖａｒ．ｏｃｈｒａｃｅｕｍ）、トリコフィトン・ビオラセウム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｖｉｏｌａｃｅｕｍ）、および／またはトリコフィトン・ファビホルメ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｆａｖｉｆｏｒｍｅ）が含まれる）に由来し得る。
【０１１２】
真菌病原体は、アスペルギルス・フミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アスペルギルス・フラバス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ）、クロコウジカビ、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・テレウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ）、アスペルギルス・シドウィ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉ）、アスペルギルス・フラバタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖａｔｕｓ）、アスペルギルス・グラウクス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｌａｕｃｕｓ）、ブラストシゾマイセス・カピタタス（Ｂｌａｓｔｏｓｃｈｉｚｏｍｙｃｅｓ ｃａｐｉｔａｔｕｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・エノラーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ ｅｎｏｌａｓｅ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、カンジダ・グラブラタ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ）、カンジダ・パラプシローシス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）、カンジダ・ステラトイデア（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ）、カンジダ・クセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｕｓｅｉ）、カンジダ・パラクエセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｋｗｓｅｉ）、カンジダ・ルシタニエ（Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ）、カンジダ・シュードトロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、カンジダ・グイリエルモンジ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉ）、クラドスポリム・カリオニイ（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃａｒｒｉｏｎｉｉ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、ブラストミセス・デルマチディス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｄｉｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ゲオトリクム・クラバタム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃｌａｖａｔｕｍ）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、肺炎桿菌、南アメリカ分芽菌、ニューモシスチス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ）、ピシウムン・インシジオスム（Ｐｙｔｈｉｕｍｎ ｉｎｓｉｄｉｏｓｕｍ）、ピチロスポルム・オバール（Ｐｉｔｙｒｏｓｐｏｒｕｍ ｏｖａｌｅ）、酵母（Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓａｅ）、サッカロマイセス・ブラウディ、サッカロミセス・ポンベ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）、スケドスポリウム・アピオスペルム（Ｓｃｅｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ａｐｉｏｓｐｅｒｕｍ）、スポロトリクス・シェンキ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ）、トリコスポロン・ベイゲリ（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｂｅｉｇｅｌｉｉ）、トキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、ペニシリウム・マルネフェイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）、マラセジア（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ）属菌種、フォンセケア（Ｆｏｎｓｅｃａｅａ）属菌種、ワンギエラ（Ｗａｎｇｉｅｌｌａ）属菌種、スポロトリクス（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ）属菌種、バシジオボラス（Ｂａｓｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）属菌種、コニディオボラス（Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）属菌種、リゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）属菌種、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）属菌種、アブシディア（Ａｂｓｉｄｉａ）属菌種、モルチエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属菌種、クニンガメラ（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ）属菌種、サクセネア（Ｓａｋｓｅｎａｅａ）属菌種、アルテルナリア（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）属菌種、カーブラリア（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ）属菌種、ヘルミントスポリウム（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ）属菌種、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属菌種、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属菌種、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属菌種、アモノリニア（Ｍｏｎｏｌｉｎｉａ）属菌種、リゾクトニア（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）属菌種、ペシロマイセス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）属菌種、ピトマイセス（Ｐｉｔｈｏｍｙｃｅｓ）属菌種、およびクラドスポリウム（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ）属菌種に由来し得る。
【０１１３】
真菌抗原の産生プロセスは、当該分野で周知である（米国特許第６，３３３，１６４号を参照のこと）。好ましい方法では、その細胞壁が実質的に除去されているか少なくとも部分的に除去された真菌細胞から得ることができる不溶性画分から抽出および分離した可溶化画分を、プロセスが、生きた真菌細胞を得る工程；その細胞壁が実質的に除去されているか少なくとも部分的に除去された真菌細胞を得る工程；その細胞壁が実質的に除去されているか少なくとも部分的に除去された真菌細胞を破裂させる工程；不溶性画分を得る工程；ならびに不溶性画分から可溶化画分を抽出および分離する工程を含むという点で特徴づけた。
【０１１４】
Ｄ．ＳＴＤ抗原
本発明の組成物は、１つまたは複数の性感染症（ＳＴＤ）由来の抗原を含むことができる。かかる抗原は、ＳＴＤ（クラミジア、陰部ヘルペス、肝炎（ＨＣＶなど）、陰部疣贅、淋病、梅毒、および／または軟性下疳など）を予防または治療することができる（ＷＯ００／１５２５５号を参照のこと）。抗原は、１つまたは複数のウイルスまたは細菌のＳＴＤに由来し得る。本発明で用いるウイルスＳＴＤ抗原は、例えば、ＨＩＶ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、および肝炎（ＨＣＶ）に由来し得る。本発明で用いる細菌ＳＴＤ抗原は、例えば、淋菌、トラコーマクラミジア、梅毒トレポネーマ、軟性下疳菌、大腸菌、およびストレプトコッカス・アガラクチアに由来し得る。これらの病原体由来の特異的抗原の例は、上に記載している。
【０１１５】
Ｅ．呼吸器抗原
本発明の組成物は、呼吸器疾患を引き起こす病原体由来の１つまたは複数の抗原を含むことができる。例えば、呼吸器抗原は、呼吸器ウイルス（オルソミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ）、モルビリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、ＶＺＶ、およびコロナウイルス（ＳＡＲＳ）など）に由来し得る。呼吸器抗原は、呼吸器疾患を引き起こす細菌（肺炎連鎖球菌、緑膿菌、百日咳菌、結核菌、肺炎マイコプラズマ、クラミジア・ニューモニエ、炭疽菌、およびカタル球菌など）に由来し得る。これらの病原体由来の特異的抗原の例は、上に記載している。
【０１１６】
Ｆ．小児ワクチン抗原
本発明の組成物は、小児被験体での使用に適切な１つまたは複数の抗原を含むことができる。小児被験体は、典型的には、約３歳未満、約２歳未満、または約１歳未満である。小児抗原を、６ヶ月、１年、２年、または３年にわたって複数回投与することができる。小児抗原は、小児集団を標的にすることができるウイルスおよび／または小児集団が感染に感受性を示すウイルスに由来し得る。小児ウイルス抗原には、１つまたは複数のオルソミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよびムンプス）、モルビリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、および水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）由来の抗原が含まれる。小児細菌抗原には、１つまたは複数の肺炎連鎖球菌、ナイセリア・メニンギティディス、化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）、カタル球菌、百日咳菌、黄色ブドウ球菌、破傷風菌（破傷風）、ジフテリア菌（ジフテリア）、インフルエンザ菌Ｂ（Ｈｉｂ）、緑膿菌、ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｂ群連鎖球菌）、および大腸菌由来の抗原が含まれる。これらの病原体由来の特異的抗原の例は、上に記載している。
【０１１７】
Ｇ．高齢者または免疫無防備状態の個体での使用に適切な抗原
本発明の組成物は、高齢者または免疫無防備状態の個体での使用に適切な１つまたは複数の抗原を含むことができる。かかる個体に、より頻繁に、標的化抗原に対するその免疫応答を改良するためにより高い用量またはアジュバント化（ａｄｊｕｖａｎｔｅｄ）処方物でワクチン接種することが必要であり得る。高齢者または免疫無防備状態の個体での使用のために標的化することができる抗原には、１つまたは複数の以下の病原体由来の抗原が含まれる：ナイセリア・メニンギティディス、肺炎連鎖球菌、化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）、カタル球菌、百日咳菌、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、破傷風菌（破傷風）、ジフテリア菌（ジフテリア）、インフルエンザ菌Ｂ（Ｈｉｂ）、緑膿菌、レジオネラ・ニューモフィラ、ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｂ群連鎖球菌）、フェカリス菌、ピロリ菌、肺炎クラミジア（Ｃｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、オルソミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよびムンプス）、モルビリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）。これらの病原体由来の特異的抗原の例は、上に記載している。
【０１１８】
Ｈ．青年期ワクチンでの使用に適切な抗原
本発明の組成物は、青年期被験体での使用に適切な１つまたは複数の抗原を含むことができる。青年期は、以前に投与した小児ワクチンの追加免疫が必要であり得る。青年期での使用に適切であり得る小児抗原は、上に記載されている。さらに、性行為の開始前に防御免疫または治療的免疫を確実にするために、ＳＴＤ病原体由来の抗原を投与するために青年期を標的化することができる。青年期での使用に適切であり得るＳＴＤ抗原は、上に記載されている。
【０１１９】
Ｉ．抗原処方物
本発明の他の態様では、吸着抗原を有する微粒子の生成方法を提供する。本方法は、（ａ）（ｉ）水、（ｉｉ）界面活性剤、（ｉｉｉ）有機溶媒、および（ｉｖ）ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルソエステル、ポリ酸無水物、およびポリシアノアクリラートからなる群より選択される生分解性ポリマーを含む混合物の分散によって乳濁液を準備する工程を含む。ポリマーは、典型的には、有機溶媒と比較して約１％〜約３％の濃度の混合物で存在する一方で、界面活性剤は、典型的には、約０．００００１：１〜約０．１：１（より典型的には、約０．０００１：１〜約０．１：１、約０．００１：１〜約０．１：１、または約０．００５：１〜約０．１：１）の水：水、界面活性剤：ポリマー比で混合物中に存在する、準備する工程、（ｂ）乳濁液から有機溶媒を除去する工程、および（ｃ）微粒子表面上に抗原を吸着させる工程を含む。一定の実施形態では、生分解性ポリマーは、有機溶媒と比較して約３％〜約１０％の濃度で存在する。
【０１２０】
本明細書中で使用するための微粒子を、滅菌可能で、非毒性を示し、生分解性を示す材料から形成するであろう。かかる材料には、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルソエステル、ポリ酸無水物、ＰＡＣＡ、およびポリシアノアクリラートが含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、本発明と共に使用するための微粒子は、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、特に、ポリ（ラクチド）（「ＰＬＡ」）またはＤ，Ｌ−ラクチドとグリコリドまたはグリコール酸とのコポリマー（ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリドなど）（「ＰＬＧ」または「ＰＬＧＡ」）、またはＤ，Ｌ−ラクチドとカプロラクトンとのコポリマーに由来する。微粒子は、種々の分子量、ＰＬＧなどのコポリマーの場合、種々のラクチド：グリコリド比を有する任意の種々の重合開始材料に由来し得、その選択は、同時投与される高分子に一部依存して、多くの選択肢があるであろう。これらのパラメータは、以下により完全に考察されている。
【０１２１】
さらなる抗原には、外膜小胞（ＯＭＶ）調製物も含まれ得る。
【０１２２】
さらなる処方方法および抗原（特に、腫瘍抗原）は、米国特許出願番号０９／５８１，７７２号に記載されている。
【０１２３】
Ｊ．抗原についての参考文献
以下の参考文献は、本発明の組成物と併せて有用な抗原を含む。
【０１２４】
【数１】
【０１２５】
【数２】
【０１２６】
【数３】
上記で引用した全ての特許、特許出願、および学術論文の内容は、本明細書中で完全に記載されているかのように参考として援用される。
【０１２７】
糖類抗原または炭水化物抗原を使用する場合、好ましくは、この抗原を担体タンパク質と接合して免疫原性を増強する。Ｒａｍｓａｙら（２００１）Ｌａｎｃｅｔ３５７（９２５１）：１９５−１９６；Ｌｉｎｄｂｅｒｇ（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ １７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ２８−３６；Ｂｕｔｔｅｒｙ ＆ Ｍｏｘｏｎ（２０００）Ｊ Ｒ Ｃｏｌｌ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ Ｌｏｎｄ ３４：１６３−１６８；Ａｈｍａｄ ＆ Ｃｈａｐｎｉｃｋ（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ １３：１１３−１３３，ｖｉｉ；Ｇｏｌｄｂｌａｔｔ（１９９８）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４７：５６３−５６７；欧州特許第０４７７５０８号；米国特許第５，３０６，４９２号；ＷＯ９８／４２７２１号；Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ（ｅｄｓ．Ｃｒｕｓｅら）ＩＳＢＮ ３８０５５４９３２６、特に、ｖｏｌ．１０：４８−１１４；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ＩＳＢＮ：０１２３４２３３６８ ｏｒ ０１２３４２３３５Ｘを参照のこと。好ましい担体タンパク質は、細菌毒素またはトキソイド（ジフテリアトキソイドまたは破傷風トキソイドなど）である。ＣＲＭ１９７ジフテリアトキソイドが特に好ましい。
【０１２８】
他の担体ポリペプチドには、髄膜炎菌外膜タンパク質（ＥＰ−Ａ−０３７２５０１号）、合成ペプチド（ＥＰ−Ａ−０３７８８８１号およびＥＰ−Ａ０４２７３４７号）、熱ショックタンパク質（ＷＯ９３／１７７１２号およびＷＯ９４／０３２０８号）、百日咳タンパク質（ＷＯ９８／５８６６８号およびＥＰ Ａ ０４７１１７７号）、インフルエンザ菌由来のタンパク質Ｄ（ＷＯ００／５６３６０号）、サイトカイン（ＷＯ９１／０１１４６号）、リンホカイン、ホルモン、成長因子、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素ＡまたはＢ（ＷＯ００／６１７６１号）、鉄取り込みタンパク質（ＷＯ０１／７２３３７号）などが含まれる。混合物がセリグラフ（ｓｅｒｉｇｒａｐｈ）ＡおよびＣの両方由来の莢膜糖類を含む場合、ＭｅｎＡ糖類：ＭｅｎＣ糖類の比（ｗ／ｗ）は１を超える（例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１、またはそれを超える）ことが好ましい場合がある。異なる糖類を、同型または異なる型の担体タンパク質に接合することができる。必要に応じて任意の適切なリンカーを使用した任意の適切な接合反応を使用することができる。
【０１２９】
必要に応じて、有毒タンパク質抗原を解毒することができる（例えば、化学的手段および／または遺伝子手段による百日咳毒素の解毒）。
【０１３０】
薬学的に許容可能な担体
本発明の組成物は、典型的には、上記成分に加えて、１つまたは複数の「薬学的に許容可能な担体」を含むであろう。これらには、担体自体が組成物を投与される個体に有害な抗体の産生を誘導しない任意の担体が含まれる。適切な担体は、典型的には、巨大でゆっくり代謝される高分子（タンパク質、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、高分子アミノ酸、アミノ酸コポリマー、および脂質凝集体（油滴またはリポソームなど）など）である。かかる担体は、当業者に周知である。組成物はまた、希釈剤（水、生理食塩水、グリセロールなど）を含むことができる。さらに、補助剤（湿潤剤または乳化剤およびｐＨ緩衝物質など）が存在し得る。薬学的に許容可能な成分の徹底的な考察は、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ．２０ｔｈ ｅｄ．，ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２で得られる。
【０１３１】
免疫調節薬
アジュバント
本発明のワクチンを、他の免疫調節薬と併せて投与することができる。特に、組成物は、通常、アジュバントを含むであろう。本発明と共に使用するためのアジュバントには、１つまたは複数の下記のアジュバントが含まれるが、これらに限定されない。
【０１３２】
Ａ．ミネラル含有組成物
本発明でのアジュバントとしての使用に適切なミネラル含有組成物は、ミネラル塩（アルミニウム塩およびカルシウム塩など）を含む。本発明は、水酸化物（例えば、オキシヒドロキシド）、リン酸塩（例えば、ヒドロキシホスフェート、オルトホスフェート）、硫酸塩などのミネラル塩（例えば、ｃｈａｐｔｅｒｓ８ ＆ ９ ｏｆ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ…（１９９５）ｅｄｓ．Ｐｏｗｅｌｌ ＆ Ｎｅｗｍａｎ．ＩＳＢＮ：０３０６４４８６７Ｘ．Ｐｌｅｎｕｍ．）または異なるミネラル化合物の混合物（例えば、リン酸塩アジュバントと水酸化物アジュバントとの混合物（任意選択的にリン酸塩が過剰））を含み、この化合物は任意の適切な形態（例えば、ゲル、血漿、無定形など）をとり、塩に吸着していることが好ましい。ミネラル含有組成物を、金属塩の粒子として処方することもできる（ＷＯ００／２３１０５号）。
【０１３３】
アルミニウム塩を、Ａｌ３＋の用量が０．２ｍｇ／用量と１．０ｍｇ／用量との間であるように本発明のワクチン中に含めることができる。
【０１３４】
１つの実施形態では、本発明で用いるアルミニウムベースのアジュバントは、ミョウバン（硫酸アルミニウムカリウム（ＡｌＫ（ＳＯ４）２））またはミョウバン誘導体（リン酸緩衝剤中で抗原とミョウバンとを混合し、その後に滴定し、水酸化アンモニウムまたは水酸化ナトリウムなどの塩基で沈殿させることによってインサイチュで形成したミョウバン誘導体など）である。
【０１３５】
本発明のワクチン処方で用いる別のアルミニウムベースのアジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバント（Ａｌ（ＯＨ）３）または結晶オキシ水酸化アルミニウム（ＡｌＯＯＨ）（優れた吸着剤であり、表面積が約５００ｍ２／ｇである）である。あるいは、リン酸アルミニウムアジュバント（ＡｌＰＯ４）またはヒドロキシリン酸アルミニウム（水酸化アルミニウムアジュバントのいくつかまたは全てのヒドロキシル基の代わりにリン酸基を含む）を提供する。本明細書中で提供する好ましいリン酸アルミニウムアジュバントは無定形であり、酸性、塩基性、および中性の媒質中に可溶である。
【０１３６】
別の実施形態では、本発明のアジュバントは、リン酸アルミニウムおよび水酸化アルミニウムの両方を含む。そのより特定の実施形態では、アジュバントは、水酸化アルミニウムよりも大量のリン酸アルミニウムを有する（２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、または９：１超などのリン酸アルミニウム：水酸化アルミニウムの重量比）。さらにより詳細には、ワクチン中のアルミニウム塩は、０．４〜１．０ｍｇ／ワクチン用量、０．４〜０．８ｍｇ／ワクチン用量、０．５〜０．７ｍｇ／ワクチン用量、または約０．６ｍｇ／ワクチン用量で存在する。
【０１３７】
一般に、好ましいアルミニウムベースのアジュバントまたは複数のアルミニウムベースのアジュバントの比率（リン酸アルミニウム：水酸化アルミニウムなど）を、抗原が所望のｐＨでアジュバントとして逆の電荷を有するように分子間の静電気引力を至適化することによって選択する。例えば、リン酸アルミニウムアジュバント（等電点＝４）はリゾチームを吸着するが、ｐＨ７．４でアルブミンを吸着しない。アルブミンが標的である場合、水酸化アルミニウムアジュバントを選択するであろう（ｉｅｐ １１．４）。あるいは、リン酸塩での水酸化アルミニウムの前処理によってその等電点が低下し、より塩基性の高い抗原に好ましいアジュバントとなる。
【０１３８】
Ｂ．油性乳濁液
本発明でのアジュバントとしての使用に適切な油性乳濁液組成物には、スクアレン−水乳濁液（ＭＦ５９（ミクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）を使用して、５％スクアレン、０．５％ＴＷＥＥＮ（商標）８０、および０．５％Ｓｐａｎ８５をサブミクロン粒子に処方したもの）など）が含まれる。ＷＯ９０／１４８３７号を参照のこと。Ｐｏｄｄａ，Ｖａｃｃｉｎｅ（２００１）１９：２６７３−２６８０；Ｆｒｅｙら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００３）２１：４２３４−４２３７も参照のこと。ＭＦ５９を、ＦＬＵＡＤ（商標）インフルエンザウイルス３価サブユニットワクチンにおけるアジュバントとして使用する。
【０１３９】
組成物中での使用に特に好ましいアジュバントは、サブミクロン水中油型乳濁液である。本明細書中での使用に好ましいサブミクロン水中油型乳濁液は、種々の量のＭＴＰ−ＰＥを任意選択的に含むスクアレン／水乳濁液（４〜５％ ｗ／ｖ スクアレン、０．２５〜１．０％ ｗ／ｖ ＴＷＥＥＮ（商標）８０□（ポリオキシエチレンソルビタン（ｐｏｌｙｏｘｙｅｌｔｈｙｌｅｎｅｓｏｒｂｉｔａｎ）モノオレアート、および／または０．２５〜１．０％ ＳＰＡＮ ８５（商標）（ソルビタントリオレアート）、および任意選択的にＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−ヒドロキシホスホホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）を含むサブミクロン水中油型乳濁液（例えば、「ＭＦ５９」として公知のサブミクロン水中油型乳濁液（国際公開番号ＷＯ９０／１４８３７号；米国特許第６，２９９，８８４号および同第６，４５１，３２５号、およびＯｔｔら、ｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．ａｎｄ Ｎｅｗｍａｎ，Ｍ．Ｊ．ｅｄｓ．）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９５，ｐｐ．２７７−２９６））など）である。ＭＦ５９は、４〜５％ ｗ／ｖ スクアレン（例えば、４．３％）、０．２５〜０．５％ ｗ／ｖ ＴＷＥＥＮ（商標）８０、および０．５％ ｗ／ｖ ＳＰＡＮ ８５（商標）を含み、任意選択的に種々の量のＭＴＰ−ＰＥを含み、これがＭｏｄｅｌ １１０Ｙミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ、Ｎｅｗｔｏｎ、ＭＡ）などのミクロフルイダイザーを使用してサブミクロン粒子に処方されている。例えば、ＭＴＰ−ＰＥは、約０〜５００μｇ／用量、より好ましくは０〜２５０μｇ／用量、最も好ましくは０〜１００μｇ／用量で存在し得る。本明細書中で使用される場合、用語「ＭＦ５９−０」は、ＭＴＰ−ＰＥを欠く上記サブミクロン水中油型乳濁液いう一方で、用語「ＭＦ５９−ＭＴＰ」は、ＭＴＰ−ＰＥを含む処方物を示す。例えば、「ＭＦ５９−１００」は、１００μｇ ＭＴＰ−ＰＥ／用量などを含む。ＭＦ６９（本明細書中で用いる別のサブミクロン水中油型乳濁液）は、４．３％ ｗ／ｖ スクアレン、０．２５％ ｗ／ｖ ＴＷＥＥＮ（商標）８０、および０．７５％ ｗ／ｖ ＳＰＡＮ ８５（商標）、および任意選択的にＭＴＰ−ＰＥを含む。さらに別のサブミクロン水中油型乳濁液は、ＳＡＦとしても公知のＭＦ７５であり、これは１０％スクアレン、０．４％ ＴＷＥＥＮ（商標）８０、５％プルロニックブロック重合体Ｌ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含み、サブミクロン乳濁液にミクロ流体化もされている。ＭＦ７５−ＭＴＰは、ＭＴＰ（１００〜４００μｇ ＭＴＰ−ＰＥ／用量など）を含むＭＦ７５処方物を示す。
【０１４０】
組成物で用いるサブミクロン水中油型乳濁液、その作製方法、および免疫賦活剤（ムラミルペプチドなど）は、ＷＯ９０／１４８３７号および米国特許第６，２９９，８８４号および同第６，４５１，３２５号に詳述されている。
【０１４１】
フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）およびフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）を、本発明でアジュバントとして使用することもできる。
【０１４２】
Ｃ．サポニン処方物
サポニン処方物を、本発明でアジュバントとして使用することもできる。サポニンは、ステロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドの異種群であり、広範な植物種の樹皮、葉、幹、根、さらに花弁中で見出される。キラヤサポナリア モリナ（Ｑｕｉｌｌａｌａｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａ）の木の樹皮から単離したサポニンは、アジュバントとして広く研究されている。スミラックス・オルナタ（Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔａ）（サルサパリラ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ））、シュッコンカスミソウ（Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ）（ブライドベール（ｂｒｉｄｅｓ ｖｅｉｌ））、およびサボンソウ（ソープルート（ｓｏａｐ ｒｏｏｔ））由来のサポニンを購入することもできる。サポニンアジュバント処方物には、精製処方物（ＱＳ２１など）および脂質処方物（ＩＳＣＯＭなど）が含まれる。
【０１４３】
サポニン組成物は、高速薄層クロマトグラフィ（ＨＰ−ＴＬＣ）および逆相高速液体クロマトグラフィ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を使用して精製されている。これらの技術を使用した特定の精製画分（ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−Ｂ、およびＱＨ−Ｃが含まれる）が同定されている。好ましくは、サポニンはＱＳ２１である。ＱＳ２１の生成方法は、米国特許第５，０５７，５４０号に開示されている。サポニン処方物はまた、コレステロールなどのステロールを含むこともできる（ＷＯ９６／３３７３９号を参照のこと）。
【０１４４】
サポニンとコレステロールとの組み合わせを使用して、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる固有の粒子を形成することができる。ＩＳＣＯＭは、典型的には、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンなどのリン脂質も含む。任意の公知のサポニンを、ＩＳＣＯＭで使用することができる。好ましくは、ＩＳＣＯＭは、１つまたは複数のＱｕｉｌ Ａ、ＱＨＡ、およびＱＨＣを含む。ＩＳＣＯＭは、ＥＰ０１０９９４２号、ＷＯ９６／１１７１１号、およびＷＯ９６／３３７３９号にさらに記載されている。任意選択的に、ＩＳＣＯＭＳは、さらなる界面活性剤を欠いていてもよい。ＷＯ００／０７６２１号を参照のこと。
【０１４５】
サポニンベースのアジュバント開発の概説を、Ｂａｒｒ，ら、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ（１９９８）３２：２４７−２７１に見出すことができる。Ｓｊｏｌａｎｄｅｒ，ら、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ（１９９８）３２：３２１−３３８も参照のこと。
【０１４６】
Ｄ．ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）
ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）を、本発明でアジュバントとして使用することもできる。これらの構造物は、一般に、任意選択的にリン脂質と組み合わせた、またはこれを用いて処方したウイルス由来の１つまたは複数のタンパク質を含む。これらは、一般に、非病原性で複製せず、一般に、任意の未変性のウイルスゲノムを含まない。ウイルスタンパク質を、組換え的に産生し、または全ウイルスから単離することができる。ビロソームまたはＶＬＰでの使用に適切なこれらのウイルスタンパク質には、インフルエンザウイルス（ＨＡまたはＮＡ）、Ｂ型肝炎ウイルス（コアタンパク質またはキャプシドタンパク質）、Ｅ型肝炎ウイルス、麻疹ウイルス、シンドビス・ウイルス、ロタウイルス、口蹄疫ウイルス、レトロウイルス、ノーウォークウイルス、ヒト乳頭腫ウイルス、ＨＩＶ、ＲＮＡ−ファージ、Ｑβ−ファージ（コートタンパク質など）、ＧＡ−ファージ、ｆｒ−ファージ、ＡＰ２０５ファージ、およびＴｙ（レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１など）由来のタンパク質が含まれる。ＶＬＰは、ＷＯ０３／０２４４８０号、ＷＯ０３／０２４４８１号、Ｎｉｉｋｕｒａら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２００２）２９３：２７３−２８０；Ｌｅｎｚら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１）５２４６−５３５５；Ｐｉｎｔｏ，ら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ（２００３）１８８：３２７−３３８；およびＧｅｒｂｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２００１）７５（１０）：４７５２−４７６０でさらに考察されている。ビロソームは、例えば、Ｇｌｕｃｋら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００２）２０：Ｂ１０−Ｂ１６でさらに考察されている。免疫増強する再構築されたインフルエンザビロソーム（ＩＲＩＶ）を、鼻腔内３価ＩＮＦＬＥＸＡＬ（商標）製品（Ｍｉｓｃｈｌｅｒ ＆ Ｍｅｔｃａｌｆｅ（２００２）Ｖａｃｃｉｎｅ ２０ Ｓｕｐｐｌ ５：Ｂ１７−２３）およびＩＮＦＬＵＶＡＣ ＰＬＵＳ（商標）製品におけるサブユニット抗原送達系として使用する。
【０１４７】
Ｅ．細菌または微生物誘導体
本発明での使用に適切なアジュバントには、以下などの細菌または微生物誘導体が含まれる。
【０１４８】
（１）腸内細菌リポ多糖類（ＬＰＳ）の非毒性誘導体
かかる誘導体には、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）が含まれる。３ｄＭＰＬは、３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａと４、５、または６アシル化鎖との混合物である。３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａの好ましい「小粒子」形態は、ＥＰ０６８９４５４号に開示されている。かかる３ｄＭＰＬの「小粒子」は、０．２２ミクロン膜で濾過滅菌するのに十分に小さい（ＥＰ０６８９４５４号）。他の非毒性ＬＰＳ誘導体には、モノホスホリル脂質Ａ模倣物（アミノアルキルグルコサミニドホスフェート誘導体（例えば、ＲＣ５２９）など）が含まれる。Ｊｏｈｎｓｏｎら（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ ９：２２７３−２２７８を参照のこと。
【０１４９】
（２）脂質Ａ誘導体
脂質Ａ誘導体には、大腸菌（ＯＭ−１７４）由来の脂質Ａ誘導体が含まれる。ＯＭ−１７４は、例えば、Ｍｅｒａｌｄｉら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００３）２１：２４８５−２４９１およびＰａｊａｋ，ら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００３）２１：８３６−８４２に記載されている。
【０１５０】
（３）免疫刺激性オリゴヌクレオチド
本発明でのアジュバントとしての使用に適切な免疫刺激性オリゴヌクレオチドには、ＣｐＧモチーフ（非メチル化シトシンの後にグアノシンを含み、リン酸結合によって結合した配列）を含むヌクレオチド配列が含まれる。回分配列またはポリ（ｄＧ）配列を含む細菌二本鎖ＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドも免疫刺激性を示すことが示されている。
【０１５１】
ＣｐＧは、ホスホロチオアート修飾物などのヌクレオチド修飾物／アナログが含まれ得、二本鎖または一本鎖であり得る。任意選択的に、グアノシンを、２’−デオキシ−７−デアザグアノシンなどのアナログと置換することができる。可能なアナログ置換の例については、Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００３）３１（９）：２３９３−２４００；ＷＯ０２／２６７５７号およびＷＯ９９／６２９２３号を参照のこと。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、Ｋｒｉｅｇ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００３）９（７）：８３１−８３５；ＭｃＣｌｕｓｋｉｅ，ら、ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（２００２）３２：１７９−１８５；ＷＯ９８／４０１００号；米国特許第６，２０７，６４６号；米国特許第６，２３９，１１６号および米国特許第６，４２９，１９９号でさらに考察されている。
【０１５２】
ＣｐＧ配列を、ＴＬＲ９（モチーフＧＴＣＧＴＴまたはＴＴＣＧＴＴなど）に指向することができる。Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ（２００３）３１（ｐａｒｔ ３）：６５４−６５８を参照のこと。ＣｐＧ配列は、Ｔｈ１免疫応答の誘導に特異的であり得るか（ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮなど）、Ｂ細胞応答の誘導により特異的であり得る（ＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮなど）。ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮおよびＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮは、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３）１７０（８）：４０６１−４０６８；Ｋｒｉｅｇ，ＴＲＥＮＤＳ ｉｎ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００２）２３（２）：６４−６５およびＷＯ０１／９５９３５号で考察されている。好ましくは、ＣｐＧはＣｐＧ−Ａ ＯＤＮである。
【０１５３】
好ましくは、５’末端が受容体認識のために接近することができるようにＣｐＧオリゴヌクレオチドを構築する。任意選択的に、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列をその３’末端で結合して、「イムノマー」を形成することができる。例えば、Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ら、ＢＢＲＣ（２００３）３０６：９４８−９５３；Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ（２００３）３１（ｐａｒｔ ３）：６６４−６５８；Ｂｈａｇａｔら、ＢＢＲＣ（２００３）３００：８５３−８６１、およびＷＯ０３／０３５８３６号を参照のこと。
【０１５４】
（４）ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒誘導体
細菌ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒誘導体を、本発明でアジュバントとして使用することができる。好ましくは、タンパク質は、大腸菌（すなわち、大腸菌熱不安定性エンテロトキシン（「ＬＴ」）、コレラ菌（「ＣＴ」）、または百日咳菌（「ＰＴ」）に由来する。粘膜アジュバントとしての解毒ＡＤＰ−リボシル化毒素の使用は、ＷＯ９５／１７２１１号に記載されており、非経口アジュバントとしてはＷＯ９８／４２３７５号に記載されている。好ましくは、アジュバントは、解毒ＬＴ変異体（ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２、およびＬＴＲ１９２Ｇなど）である。ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒誘導体（特に、ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２）のアジュバントとしての使用を、以下の参考文献で見出すことができる：Ｂｅｉｇｎｏｎ，ら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００２）７０（６）：３０１２−３０１９；Ｐｉｚｚａ，ら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００１）１９：２５３４−２５４１；Ｐｉｚｚａ，ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ（２０００）２９０（４−５）：４５５−４６１；Ｓｃｈａｒｔｏｎ−Ｋｅｒｓｔｅｎら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０００）６８（９）：５３０６−５３１３；Ｒｙａｎら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（１９９９）６７（１２）：６２７０−６２８０；Ｐａｒｔｉｄｏｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．（１９９９）６７（３）：２０９−２１６；Ｐｅｐｐｏｌｏｎｉら、Ｖａｃｃｉｎｅｓ（２００３）２（２）：２８５−２９３；およびＰｉｎｅら、（２００２）Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ（２００２）８５（１−３）：２６３−２７０。アミノ酸置換についての数値の基準は、好ましくは、Ｄｏｍｅｎｉｇｈｉｎｉら、Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ（１９９５）１５（６）：１１６５−１１６７に記載のＡＤＰ−リボシル化毒素のＡおよびＢサブユニットのアラインメントに基づく。
【０１５５】
Ｆ．生体接着剤および粘膜接着剤
生体接着剤および粘膜接着剤を、本発明でアジュバントとして使用することもできる。適切な生体接着剤には、エステル化ヒアルロン酸ミクロスフィア（Ｓｉｎｇｈら（２００１）Ｊ．Ｃｏｎｔ．Ｒｅｌｅ．７０：２６７−２７６）または粘膜接着剤（ポリアクリル酸の架橋誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、多糖類、およびカルボキシメチルセルロースなど）が含まれる。キトサンおよびその誘導体を、本発明でアジュバントとして使用することもできる。ＷＯ９９／２７９６０を参照のこと。
【０１５６】
Ｇ．微粒子
微粒子を、本発明でアジュバントとして使用することもできる。微粒子（すなわち、直径約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、より好ましくは直径約２００ｎｍ〜約３０μｍ、最も好ましくは直径約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）を、生分解性且つ非毒性の材料（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルソエステル、ポリ酸無水物、ポリカプロラクトンなど）（ポリ（ラクチドコグリコリド）が好ましい）から形成し、任意選択的に、負電荷の表面（例えば、ＳＤＳ）または正電荷の表面（例えば、ＣＴＡＢなどの陽イオン性界面活性剤）を有するように処理する。
【０１５７】
Ｈ．リポソーム
アジュバントとしての使用に適切なリポソーム処方物の例は、米国特許第６，０９０，４０６号、米国特許第５，９１６，５８８号、および欧州特許第０６２６１６９号に記載されている。
【０１５８】
Ｉ．ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル処方物
本発明での使用に適切なアジュバントには、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルが含まれる。ＷＯ９９／５２５４９号。かかる処方物には、さらに、オクトキシノール（ＷＯ０１／２１２０７）と組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤および少なくとも１つのさらなる非イオン性界面活性剤（オクトキシノールなど）と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステル界面活性剤（ＷＯ０１／２１１５２号）が含まれる。
【０１５９】
好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群から選択される：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ｌａｕｒｅｔｈ ９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテル、およびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル。
【０１６０】
Ｊ．ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ）
ＰＣＰＰ処方物は、例えば、Ａｎｄｒｉａｎｏｖら、“Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙｄｒｏｇｅｌ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ ｂｙ ｃｏａｃｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ａｑｕｅｏｕｓ ｐｏｌｙｐｈｏｐｈａｚｅｎｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ”，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（１９９８）１９（１−３）：１０９−１１５ ａｎｄ Ｐａｙｎｅら、“Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｌｅａｓｅ ｆｒｏｍ Ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｚｅｎｅ Ｍａｔｒｉｃｅｓ”，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗ（１９９８）３１（３）：１８５−１９６に記載されている。
【０１６１】
Ｋ．ムラミルペプチド
本発明でのアジュバントとしての使用に適切なムラミルペプチドの例には、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−ｌ−アラニル−ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、およびＮアセチルムラミル−ｌ−アラニル−ｄ−イソグルタミニル−ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミンＭＴＰ−ＰＥ）が含まれる。
【０１６２】
Ｌ．イミダゾキノリン化合物
本発明でのアジュバントとしての使用に適切なイミダゾキノリン化合物の例には、イミキモドおよびそのアナログが含まれ、Ｓｔａｎｌｅｙ，Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｄｅｒｍａｔｏｌ（２００２）２７（７）：５７１−５７７；Ｊｏｎｅｓ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ（２００３）４（２）：２１４−２１８；米国特許第４，６８９，３３８号、同第５，３８９，６４０号、同第５，２６８，３７６号、同第４，９２９，６２４号、同第５，２６６，５７５号、同第５，３５２，７８４号、同第５，４９４，９１６号、同第５，４８２，９３６号、同第５，３４６，９０５号、同第５，３９５，９３７号、同第５，２３８，９４４号、および同第５，５２５，６１２号にさらに記載されている。
【０１６３】
Ｍ．チオセミカルバゾン化合物
チオセミカルバゾン化合物、ならびに本発明でのアジュバントとしての使用に適切な全ての化合物の処方、製造、およびスクリーニング方法の例には、ＷＯ０４／６０３０８号に記載のものが含まれる。チオセミカルバゾンは、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの産生のためのヒト末梢血単核細胞の刺激で特に有効である。
【０１６４】
Ｎ．トリプタントリン化合物
トリプタントリン化合物、ならびに本発明でのアジュバントとしての使用に適切な全ての化合物の処方、製造、およびスクリーニング方法の例には、ＷＯ０４／６４７５９号に記載のものが含まれる。トリプタントリン化合物は、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの産生のためのヒト末梢血単核細胞の刺激で特に有効である。
【０１６５】
本発明はまた、上記で同定した１つまたは複数のアジュバントの態様の組み合わせを含むこともできる。例えば、以下のアジュバント組成物を、本発明で使用することができる。
【０１６６】
（１）サポニンおよび水中油型乳濁液（ＷＯ９９／１１２４１号）；
（２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）（ＷＯ９４／００１５３号を参照のこと）；
（３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；
（４）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ１２（任意選択的に、＋ステロール）（ＷＯ９８／５７６５９号）；
（５）３ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／または水中油型乳濁液との組み合わせ（欧州特許出願第０８３５３１８号、０７３５８９８号、および０７６１２３１号を参照のこと）；
（６）１０％スクアラン、０．４％Ｔｗｅｅｎ８０、５％プロニック−ブロック重合体Ｌ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含み、サブミクロン乳濁液にミクロ流体化されているか、ボルテックスしてより大きな粒子サイズの乳濁液を生成したＳＡＦ。
【０１６７】
（７）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０、およびモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコラート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）（好ましくは、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤＥＴＯＸ（商標））からなる群より選択される１つまたは複数の細菌細胞壁成分を含むＲＩＢＩ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）；および
（８）１つまたは複数のミネラル塩（アルミニウム塩など）＋ＬＰＳの非毒性誘導体（３ｄＰＭＬなど）。
【０１６８】
（９）１つまたは複数のミネラル塩（アルミニウム塩など）＋免疫刺激性オリゴヌクレオチド（ＣｐＧモチーフを含むヌクレオチド配列など）。
【０１６９】
Ｏ．ヒト免疫調節薬
本発明でアジュバントとしての使用に適切なヒト免疫調節薬には、サイトカイン（インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２など）、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子、および腫瘍壊死因子など）が含まれる。
【０１７０】
アルミニウム塩およびＭＦ５９は、注射用インフルエンザワクチンとの使用に好ましいアジュバントである。細菌毒素および生体接着剤は、粘膜由来ワクチン（経鼻用ワクチンなど）との使用に好ましいアジュバントである。
【０１７１】
上記で引用した全ての特許、特許出願、および学術論文の内容は、本明細書中で完全に記載されているかのように参考により組み込まれる。
【０１７２】
治療方法
本発明は、治療において使用するための、上記の組成物を提供する。本発明は、化膿連鎖球菌に対する免疫応答を誘導または増大させるための、上記の組成物を提供する。本発明は、上記組成物を使用して化膿連鎖球菌に対する免疫応答を誘導または増大させる方法を提供する。免疫応答は、好ましくは防御的であり、抗体および／または細胞−媒介性免疫（全身免疫および粘膜免疫が含まれる）が含まれ得る。免疫応答には、ブースター応答が含まれる。
【０１７３】
十代および小児（よちよち歩きの子どもおよび乳児が含まれる）に、予防的用途でワクチンを投与することができ、治療用ワクチンを、典型的には、十代または成人に投与する。小児使用を意図するワクチンを、例えば、安全性、投薬量、免疫原性などを評価する目的で成人に投与することもできる。
【０１７４】
本発明によって防止または治療することができる化膿連鎖球菌に起因する疾患には、咽頭炎（連鎖球菌性咽喉痛など）、猩紅熱、膿痂疹、丹毒、蜂巣炎、敗血、中毒性ショック症候群、壊死性筋膜炎、および後遺症（リウマチ熱および急性糸球体腎炎など）が含まれるが、これらに限定されない。組成物は、他の連鎖球菌（例えば、ＧＢＳ）に対しても有効であり得る。
【０１７５】
免疫応答の有効性を決定する試験
治療上の処置の有効性を評価する１つの方法は、本発明の組成物の投与後にＧＡＳ感染をモニタリングすることを含む。予防的治療の有効性を評価する１つの方法は、組成物の投与後に本発明の組成物における変異体ＳＬＯタンパク質に対する免疫応答をモニタリングすることを含む。
【０１７６】
本発明の免疫原性組成物の成分タンパク質の免疫原性を評価する別の方法は、組換え的に変異体ＳＬＯタンパク質を発現し、免疫ブロットによって患者の血清または粘膜分泌物をスクリーニングすることである。タンパク質と患者の血清との間の陽性反応は、患者が問題のタンパク質に対する免疫応答を事前に開始していることを示す（すなわち、タンパク質が免疫原である）。この方法を使用して、免疫優性タンパク質および／またはエピトープを同定することもできる。
【０１７７】
治療上の処置の有効性の別のチェック方法は、本発明の組成物の投与後のＧＡＳ感染のモニタリングを含む。予防的治療の有効性の１つのチェック方法は、組成物の投与後にＳＬＯに対する全身（ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ産生レベルのモニタリングなど）および粘膜（ＩｇＡ産生レベルのモニタリングなど）の両方の免疫応答をモニタリングすることを含む。典型的には、血清特異的抗体応答を免疫化後であるが攻撃誘発前に決定するのに対して、粘膜特異的抗体応答を免疫後且つ攻撃誘発後に決定する。
【０１７８】
本発明のワクチン組成物を、宿主（例えば、ヒト）投与前にインビトロおよびインビボ動物モデルで評価することができる。特に有用なマウスモデルには、腹腔内免疫化後に腹腔内攻撃誘発または鼻腔内攻撃誘発を行うマウスモデルが含まれる。
【０１７９】
本発明の免疫原性組成物の有効性を、動物モデル（例えば、モルモットまたはマウス）を免疫原性組成物で免疫化し、ＧＡＳによる攻撃誘発後に得られた保護のレベルを確認することによってインビボで決定することもできる。
【０１８０】
インビボ有効性モデルには、以下が含まれるが、これらに限定されない：（ｉ）ヒトＧＡＳ血清型を使用したマウス感染モデル、（ｉｉ）マウス適合ＧＡＳ株（特にマウスに病原性を示すＭ２３株など）を使用したマウスモデルであるマウス疾患モデル、および（ｉｉｉ）ヒトＧＡＳ分離株を使用した霊長類モデル。
【０１８１】
免疫応答は、ＴＨ１免疫応答およびＴＨ２免疫応答の一方または両方であり得る。免疫応答は、免疫応答の改良、増強、または変化であり得る。免疫応答は、全身免疫応答および粘膜免疫応答の一方または両方であり得る。好ましくは、免疫応答は、全身および／または粘膜の応答の増強である。
【０１８２】
全身免疫および／または粘膜免疫の増強は、ＴＨ１免疫応答および／またはＴＨ２免疫応答の増強を反映している。好ましくは、免疫応答の増強には、ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２ａおよび／またはＩｇＡ産生の増加が含まれる。
【０１８３】
好ましくは、粘膜免疫応答はＴＨ２免疫応答である。好ましくは、粘膜免疫応答には、ＩｇＡ産生の増加が含まれる。
【０１８４】
活性化ＴＨ２細胞は抗体産生を増強し、それにより、細胞外感染に対する応答で有益である。活性化ＴＨ２細胞は、１つまたは複数のＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０を分泌することができる。ＴＨ２免疫応答により、さらなる防御のためにＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡ、および記憶Ｂ細胞を産生することができる。
【０１８５】
ＴＨ２免疫応答には、ＴＨ２免疫応答に関連する１つまたは複数のサイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０など）の増加またはＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡ、および記憶Ｂ細胞産生の増加の１つまたは複数が含まれ得る。好ましくは、ＴＨ２免疫応答の増強には、ＩｇＧ１産生の増加が含まれるであろう。
【０１８６】
ＴＨ１免疫応答には、ＣＴＬｌの増加、ＴＨ１免疫応答に関連する１つまたは複数のサイトカイン（ＩＬ−２、ＩＦＮγ、およびＴＮＦβなど）の増加、活性化マクロファージの増加、ＮＫ活性の増加、またはＩｇＧ２ａ産生の増加の１つまたは複数が含まれ得る。好ましくは、ＴＨ１免疫応答の増強には、ＩｇＧ２ａ産生の増加が含まれるであろう。
【０１８７】
本発明の免疫原性組成物、特に、１つまたは複数の本発明の変異体ＳＬＯタンパク質を含む免疫原性組成物を、任意選択的にＴｈ１および／またはＴｈ２応答を誘発することができる免疫調節薬と共に、単独または他のＧＡＳ抗原と組み合わせて使用することができる。
【０１８８】
本発明はまた、１つまたは複数の免疫調節薬（ミネラル塩（アルミニウム塩など）など）およびＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドを含む免疫原性組成物を含む。最も好ましくは、免疫原性組成物には、アルミニウム塩およびＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドの両方を含む。あるいは、免疫原性組成物は、ＡＤＰリボシル化毒素（解毒ＡＤＰリボシル化毒素など）およびＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドを含む。好ましくは、１つまたは複数の免疫調節薬は、アジュバントを含む。アジュバントを、ＴＨ１アジュバントおよびＴＨ２アジュバントからなる群の１つまたは複数から選択することができる。
【０１８９】
本発明の組成物は、好ましくは、ＧＡＳ感染に有効に対処するために、細胞媒介性免疫および体液性免疫応答の両方を誘発するであろう。この免疫応答は、好ましくは、長期継続（例えば、中和）抗体および１つまたは複数のＧＡＳ抗原に曝露した場合に迅速に応答することができる細胞媒介性免疫を惹起するであろう。
【０１９０】
１つの特に好ましい実施形態では、免疫原性組成物は、中和抗体応答を誘発する変異体ＳＬＯタンパク質および細胞媒介性免疫応答を誘発する変異体ＳＬＯタンパク質を含む。このようにして、中和抗体応答は、最初のＧＡＳ感染を防止または阻害する一方で、増強されたＴｈ１細胞応答を誘発することができる細胞媒介性免疫応答はＧＡＳ感染のさらなる拡大を防止する。
【０１９１】
本発明の組成物を、一般に、患者に直接投与するであろう。本発明の組成物を、種々の異なる経路を介して単独または組成物の一部として投与することができる。一定の組成物は、より有効な免疫応答、好ましくはＣＭＩ応答が得られるか、副作用を誘導する可能性が低いか、投与がより容易になるように一定の経路を好み得る。
【０１９２】
送達方法には、非経口注射（例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、または間質注射）、直腸、経口（例えば、錠剤、スプレー）、膣、局所、経皮（例えば、ＷＯ９９／２７９６１号を参照のこと）、経皮（例えば、ＷＯ０２／０７４２４４号およびＷＯ０２／０６４１６２号を参照のこと）、鼻腔内（例えば、ＷＯ０３／０２８７６０号を参照のこと）、眼球、耳、および肺、または他の粘膜投与が含まれる。
【０１９３】
一例として、本発明の組成物を、全身経路、粘膜経路、または経皮経路を開始して投与することができるか、特定の組織に直接投与することができる。本明細書中で使用される場合、用語「全身投与」には、任意の非経口投与経路が含まれるが、これらに限定されない。特に、非経口投与には、皮下、腹腔内、静脈内、動脈内、筋肉内、または胸骨内注射、静脈内、動脈内、または腎臓透析注入技術が含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、全身非経口投与は筋肉内注射である。本明細書中で使用される場合、用語「粘膜投与」には、経口、鼻腔内、膣内、直腸内、気管内、腸、および眼投与が含まれるが、これらに限定されない。
【０１９４】
投薬治療は、単回投与計画または複数回投与計画であり得る。複数回投与を、初回免疫計画および／または追加免疫計画で使用することができる。複数回投与計画では、同一または異なる経路（例えば、非経口初回刺激および粘膜追加免疫、粘膜初回刺激および非経口追加免疫など）によって種々の回収で投与することができる。
【０１９５】
本発明の組成物を、種々の形態で調製することができる。例えば、組成物を、溶液または懸濁液のいずれかとして注射可能な組成物として調製することができる。注射前に溶液、懸濁液、または液体ビヒクルにするのに適切な固体形態（例えば、凍結乾燥組成物）を調製することもできる。経口投与のための組成物（錠剤もしくはカプセル、スプレーとして、またはシロップ（任意選択的に、風味づけする）としてなど）を調製することができる。肺投与のための組成物を、例えば、微粉またはスプレーを使用した吸入器として調製することができる。組成物を、坐剤またはペッサリーとして調製することができる。鼻、耳、または眼への投与のための組成物を、例えば、点滴薬として調製することができる。組成物は、患者への投与直前に組み合わせた組成物を再構成するようにデザインされたキット形態であり得る。かかるキットは、液体形態の１つまたは複数の変異体ＳＬＯまたは他の抗原および１つまたは複数の凍結乾燥抗原を含むことができる。
【０１９６】
ワクチンとして使用した免疫原性組成物は、免疫学的有効量の変異体ＳＬＯまたは他の抗原（または抗原をコードする核酸分子）、ならびに、必要に応じて、抗生物質などの任意の他の成分を含む。「免疫学的有効量」は、単回用量または一連の投与の一部として個体に投与した場合に測定可能な免疫応答を増加させるか臨床症状を防止または減少させる量である。
【０１９７】
本発明の免疫原性組成物を、抗生物質治療計画と組み合わせて投与することができる。１つの実施形態では、抗生物質を、本発明の抗原または１つまたは複数の本発明の変異体ＳＬＯタンパク質を含む組成物の投与前に投与する。
【０１９８】
別の実施形態では、抗生物質を、本発明の変異体ＳＬＯタンパク質の投与後に投与する。ＧＡＳ感染治療での使用に適切な抗生物質の例には、ペニシリンもしくはその誘導体またはクリンダマイシン、セファロスポリン、糖ペプチド（例えば、バンコマイシン）、およびシクロセリンが含まれるが、これらに限定されない。
【０１９９】
しかし、組成物中の活性剤の量は、治療を受ける個体の健康状態および生理的状態、年齢、治療を受ける個体の分類群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、個体の免疫系が抗体を合成する能力、所望の防御の程度、ワクチンの処方、治療を行う医師の医学的状況の評価、および他の関連要因に応じて変化する。この量は比較的広範であり、日常的試験によって決定することができる。
キット
本発明はまた、本発明の１つまたは複数の容器を含むキットを提供する。組成物は、個別の抗原と同様に、液体形態であり得るか凍結乾燥させることができる。組成物に適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、および試験管が含まれる。容器を、種々の材料（ガラスまたはプラスチックが含まれる）から形成することができる。容器は、滅菌アクセスポートを有することができる（例えば、容器は、静脈内注射用溶液のバッグまたは皮下注射針によって突き刺すことができるストッパを有するバイアルであり得る）。
【０２００】
キットは、さらに、薬学的に許容可能な緩衝剤（リン酸緩衝化生理食塩水、リンゲル液、またはデキストロース溶液など）を含む第２の容器を含む。キットはまた、末端利用者に有用な他の材料（他の緩衝剤、希釈剤、フィルタ、針、およびシリンジが含まれる）を含むことができる。キットはまた、別の活性剤（例えば、抗生物質）を含む第２または第３の容器を含むことができる。
【０２０１】
キットはまた、化膿連鎖球菌に対する免疫の誘導方法または化膿連鎖球菌感染の治療方法についての書面での指示を含む添付文書を含むことができる。添付文書は、未承認の添付文書であり得るか、食品医薬品局（ＦＤＡ）または他の規制機関によって承認された添付文書であり得る。
【０２０２】
本開示で引用した全ての特許、特許出願、および参考文献は、特に、本明細書中で参考として援用される。上記開示は、一般に、本発明を説明する。以下の特定の実施例を参照して、本発明をより完全に理解することができる。これらの実施例は、例示のみを目的とし、本発明の範囲を制限することを意図しない。
【実施例】
【０２０３】
（実施例１）
野生型および変異体ＳＬＯタンパク質のクローニング
野生型および変異体ＳＬＯタンパク質をコードする遺伝子を、表１に示されたＳＦ３７０ゲノム由来のプライマーを用いるＰＣＲによって増幅した。
【０２０４】
ＰＣＲ産物を、ＮｈｅＩ−ＸｈｏＩで消化し、その同じ酵素で切断されたｐｅｔ２４ｂ＋（Ｎｏｖａｇｅｎ）ベクターとライゲーションした。Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５αエレクトロコンピテント細胞を、ライゲーション反応物で形質転換した。ＬＢＰＴＫ培地を加え、２５０ｒｐｍで撹拌しながら、３７℃で１時間、インキュベートした後、５０μｇ／ｍｌのカナマイシンを含むＬＢＰＴＫプレート上に細菌を蒔いた。陽性コロニーをコロニーＰＣＲによって同定した。
【０２０５】
陽性コロニー由来のプラスミドを、５０μｇ／ｍｌのカナマイシンを含むＬＢＰＴＫ培地中での一晩の培養から調製し、ＤＮＡシーケンシングによって分析し、それによって、Ｔ７ポリメラーゼプロモーター下の予想される挿入遺伝子を確認した。クローニングされた遺伝子の最終のＤＮＡ配列およびタンパク質配列は、配列表に示されている。表２を参照されたい。
【０２０６】
【表１】
【０２０７】
【表２】
Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）（Ｎｏｖａｇｅｎ）コンピテント細胞を、正しい構築物で形質転換した。ＬＢＰＴＫ培地を加え、２５０ｒｐｍで撹拌しながら、３７℃で１時間、インキュベートした後、５０μｇ／ｍｌのカナマイシンを含むＬＢＰＴＫプレート上に細菌を蒔いた。ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｅｔ２４ｂ＋ＳＬＯ野生型タグなし細胞を、２５℃で増殖させ、１ｍＭのＩＰＴＧで誘導した。クローン発現を、ＳＤＳ ＰＡＧＥによって検証した（タグなし、図８Ａおよび８Ｂ；Ｈｉｓタグ付き、図９）。
【０２０８】
（実施例２）
Ｈｉｓタグ付きタンパク質の精製
Ｅ．ｃｏｌｉペレットを溶解緩衝液に懸濁し、室温で３０〜４０分間、混合した。溶解物を、３０〜４００００×ｇで、２０〜２５分間、遠心分離し、上清を、洗浄緩衝液Ａで平衡化したカラム（１ｍｌのＮｉ活性化キレート化セファロースファストフロー樹脂を含むＰｏｌｙ−Ｐｒｅｐ）に添加した。添加された樹脂を、洗浄緩衝液Ａで３回、洗浄緩衝液Ｂで３回、洗浄した。最終２ｍＭのＤＴＴを含むＥｐｐｅｎｄｏｒｆチューブにおいて溶出緩衝液でタンパク質を溶出した。全溶出タンパク質を、Ｂｒａｄｆｏｒｄ試薬で定量し、その後、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって分析した（図８および９）。
【０２０９】
緩衝液
溶解緩衝液：
１０ｍｌのＢ−ＰＥＲ（商標）（細菌タンパク質抽出試薬、Ｐｉｅｒｃｅカタログ７８２６６）
ＭｇＣｌ２ ０．１ｍＭの最終濃度
ＤＮＡｓｉ Ｉ（ＳｉｇｍａカタログＤ−４２６３） １００ユニット
リゾチーム（ＳｉｇｍａカタログＬ−７６５１） １ｍｇ／ｍｌの最終濃度
洗浄緩衝液Ａ：５０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、３００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ８．０
洗浄緩衝液Ｂ：２０ｍＭのイミダゾール、５０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、３００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ８．０
溶出緩衝液：２５０ｍＭのイミダゾール、５０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、３００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ８．０ 。
【０２１０】
（実施例３）
タグなしタンパク質の精製
溶解物調製
約８０〜１１０ｇの細菌培養ペレットを、６錠のＣＯＭＰＬＥＴＥ（登録商標）プロテアーゼ阻害剤、１０ｍｌの０．２Ｍ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．５（５ｍＭの最終濃度）、１０ｍｌの１００ｍｇ／ｍｌリゾチーム溶液、８ｍｌの１００００Ｋユニット／ｍｌデオキシリボヌクレアーゼＩ溶液、および１ｍｌの５０ｍＭ ＭｇＣｌ２溶液を追加した２００〜２８０ｍｌのＢ−ＰＥＲ（商標）試薬（Ｐｉｅｒｃｅ）に懸濁した。細菌懸濁液を６０分間、均一な懸濁液が得られるまで振盪することによって、細菌溶解を達成した。
【０２１１】
１３０００ｒｐｍ（２５４００×ｇ）での６０分間の遠心分離後、上清を、０．２２μｍのフィルターを用いて濾過し、１．８〜１．９ｍＳの伝導率が得られるまでＨ２Ｏで希釈する。ｐＨを８．０に調整した。タンパク質濃度を、Ｂｒａｄｆｏｒｄ法によって決定した。
【０２１２】
陰イオン交換クロマトグラフィー
上記のように処理された溶解物由来の上清を、３０ｍＭのＴＲＩＳ、ｐＨ８．０であらかじめ平衡化したＨＰ ５０／１０ Ｑセファロースカラム（約２００ｍｌ）に添加した。フロースルー（ｆｌｏｗ−ｔｈｒｏｕｇｈ）を収集した。ＧＡＳ２５タンパク質を含む画分をプールし、１０ｍＭのＮａホスフェート、ｐＨ６．８に対して透析した。タンパク質濃度を、Ｂｒａｄｆｏｒｄ法によって決定した。
緩衝液Ａ：３０ｍＭのＴＲＩＳ、ｐＨ８．０
緩衝液Ｂ：３０ｍＭのＴＲＩＳ、１ＭのＮａＣｌ、ｐＨ８．０
平衡および添加：０％Ｂ
勾配：０〜２５％Ｂの５ＣＶ−２５％Ｂの２ＣＶ
洗浄：１００％Ｂ ２ＣＶ＋３ＣＶ
流量：２０ｍｌ／分
画分容積：１４ｍｌ 。
【０２１３】
ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー
前に得たプールを、１０ｍＭのＮａホスフェート、ｐＨ６．８であらかじめ平衡化したＣＨＴ２０カラムに添加した。フロースルーを収集した。
緩衝液Ａ：１０ｍＭのＮａホスフェート、ｐＨ６．８
緩衝液Ｂ：５００ｍＭのＮａホスフェート、ｐＨ６．８
洗浄：８ＣＶ
洗浄：３０％Ｂ ６ＣＶ
勾配：３０〜１００％Ｂ（１０ＣＶ）
洗浄：１００％Ｂ
流量：５ｍｌ／分
画分容積：５ｍｌ 。
【０２１４】
画分アリコートを、還元条件および非還元条件下で１２％のＣｒｉｔｅｒｉｏｎゲルに添加した。ＧＡＳ２５タンパク質を含む画分をプールし、タンパク質濃度をＢｒａｄｆｏｒｄ法によって決定した。
【０２１５】
ゲル濾過クロマトグラフィー
収集されたプールを、１０ｍｌ未満の容積を得るためのＡｍｉｃｏｎフィルターを用いて濃縮した。濃縮した材料を、少なくとも３〜４カラム容積のＰＢＳで平衡化したＨｉＬｏａｄ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ２６／６０に添加した。
緩衝液：ＰＢＳ
溶出：アイソクラティック
流量：２．５ｍｌ／分
画分容積：５ｍｌ 。
【０２１６】
ＧＡＳ２５タンパク質を含む画分をプールし、タンパク質濃度をＢｒａｄｆｏｒｄによって決定した。タンパク質濃度のさらなる推定を、Ａｂｓ０．１％（＝１ ｇ／ｌ）を１．１１９とみなすＵＶ測定によって行った。タンパク質純度を、ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって分析する（図１１）。
【０２１７】
（実施例４）
溶血アッセイ
定量的溶血アッセイについてのプロトコール
毒素の段階希釈物を、ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡを用いて、Ｕ字形底の９６ウェルプレートに調製した。１ｍｌのヒツジ血液を、ＰＢＳ中で３回、洗浄し（３０００×ｇでの遠心分離で）、血球を５ｍｌのＰＢＳに懸濁した。等容積の懸濁液を、５０μｌの各毒素希釈物に加え、３７℃で３０分間、インキュベートした。水中のＴｒｉｔｏｎ（２％）を用いて、１００％溶血を得、ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡをネガティブコントロールとして用いた。その後、プレートを１，０００×ｇで５分間、遠心分離し、上清を、９６ウェル平底プレートへ慎重に移した。吸光度を５４０ｎｍで読み取った。
【０２１８】
野生型ＳＬＯおよびＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌを含むＥ．ｃｏｌｉ抽出物の比較
ＳＬＯ Ｐ４２７Ｌをコードする遺伝子を、ＳＦ３７０ Ｍ１ゲノムからＰＣＲを用いて増幅し、Ｈｉｓタグ付きタンパク質のＥ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１ＤＥ３における発現を可能にするベクターｐＥＴ２１ｂ＋へクローニングした。類似した量の野生型および変異したストレプトリシンＯタンパク質を発現するＥ．ｃｏｌｉの可溶性抽出物（図５参照）を用いて、溶血アッセイを行って、その２つの抗原の細胞溶解性を比較した。アッセイの結果は図２に示されており、変異したタンパク質は、毒性が野生型の多くとも１００分の１であることを実証している。
【０２１９】
精製された野生型ＳＬＯおよびＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌの比較
ＳＬＯ Ｐ４２７Ｌ変異体を、Ｈｉｓタグ付き組換えタンパク質についての精製標準手順に従って精製した（図３）。様々な濃度の精製された野生型（ｗｔ）および変異したタンパク質を用いて、溶血アッセイを繰り返し、細胞溶解活性の減少を確認した（図４）。
【０２２０】
Ｈｉｓタグ付きおよびタグなしの野生型ＳＬＯならびにＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌを含むＥ．ｃｏｌｉ抽出物の溶血活性
本発明者らは、Ｈｉｓタグなしの野生型組換えＳＬＯ（ｒＳＬＯ）（ＢＬ２１ ＤＥ３、Ｎｏｖａｇｅｎ Ｎｏ．７１３８２−ｐＥＴ２４）およびＨｉｓタグなしのＰ４２７Ｌ変異体ｒＳＬＯ（ＢＬ２１ ＤＥ３、Ｎｏｖａｇｅｎ Ｎｏ．７１３８２−ｐＥＴ２４）で形質転換されたＥ．ｃｏｌｉ溶解物の溶血活性を比較した。挿入なしのｐＥＴ２４で形質転換されたＥ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１ ＤＥ３（Ｎｏｖａｇｅｎ、Ｎｏ．７１３８２）をネガティブコントロールとして用いた。ポジティブコントロールは、水中Ｔｒｉｔｏｎ２％を含む低張溶液であった。ネガティブコントロールは、タンパク質希釈緩衝液（０．５％ＢＳＡを含むＰＢＳ、ｐＨ７．４）であった。
【０２２１】
溶血については、上清の５４０ｎｍにおける吸光度（Ａ５４０ｎｍ）を測定することによって、決定した。力価を、最大Ａ５４０ｎｍの５０％を有する希釈度（ｄｉｌｕｔｉｏｎ）として計算した。
【０２２２】
結果は、表３および４、ならびに図６に示されている。これらのデータは、同じ条件下で、変異体Ｐ４２７Ｌが、野生型ＳＬＯの１０００分の１の溶血性であることを示している。
【０２２３】
【表３】
【０２２４】
【表４】
野生型ＳＬＯと様々なＳＬＯ変異体の比較
野生型ＳＬＯの溶血活性を、いくつかの異なるＳＬＯ変異体の溶血活性と比較した。結果は、図１３および下記の表５に示されている。１溶血単位（ＨＵ）は、血球を２％Ｔｒｉｔｏｎで処理して得られた最大溶解の５０％を得るのに必要とされる毒素量として定義される。
【０２２５】
【表５】
タンパク質純度の違いによって、太字で示された変異体の溶血単位／ｍｇは過剰評価されている；しかしながら、（１）変異体Ｗ５３５Ｆは、変異体Ｃ５３０Ｇより溶血性が低いこと；（２）変異体Ｐ４２７Ｌは、野生型の約１０００分の１の溶血性であり、他の２つの変異体Ｗ５３５ＦおよびＣ５３０Ｇの約６分の１〜２５分の１の溶血性であること；ならびに（３）変異体ΔＡ２４８は、溶血性が野生型より確実に低いことは明らかである。
【０２２６】
コレステロールの効果
３０℃での細胞増殖、および２５℃での１ｍＭのＩＰＴＧでの誘導、およびＯＤ６００ｎｍ約０．４〜０．６の後に得られた、Ｅ．ｃｏｌｉ溶解物または２００ｍｇ／ｍｌのコレステロールを含むＥ．ｃｏｌｉ溶解物のＰＢＳ−ＢＳＡ０．５％における２〜５倍の段階希釈物を、それらの溶血活性についてアッセイした。誘導の３時間後、溶解緩衝液（Ｂ−ＰＥＲ溶液（ＰＩＥＲＣＥ）、１ｍＭのＭｇＣｌ２、１００Ｋユニット／ｍｌのデオキシリボヌクレアーゼ（Ｓｉｇｍａ）、およびリゾチーム（Ｓｉｇｍａ））で３０〜４０分間、細菌を溶解することによって得られた等容積のタンパク質調製物で、ＰＢＳ中２％ヒツジ赤血球溶液の５０マイクロリットルを処理した。その後、不溶性画分を遠心分離し（１５分間、２１０００×ｇ、４℃）、上清（Ｅ．ｃｏｌｉ溶解物）を、５ｍＭの最終濃度でＤＴＴを含む新しいＥｐｐｅｎｄｏｒｆチューブへ移した。
【０２２７】
この条件下で、コレステロールは、１００倍希釈率が用いられるまで、野生型も変異体形態ＳＬＯも阻害しなかった；したがって、変異体誘導溶解への効果はなかった。対照的に、野生型誘導溶解は大幅に低下した。ネガティブコントロールによって誘導された溶解は、コレステロールによって影響を及ぼされず、そのことにより、コレステロール誘導性阻害が特異的であることが示唆される。表６および図７参照。
【０２２８】
【表６】
（実施例５）
溶血の阻害
プロトコール
（アジュバントを含まない、またはアジュバントとしてミョウバンもしくはＭＦ５９（商標）を含む）野生型または変異体ＳＬＯタンパク質で免疫化したマウス由来の血清の２倍段階希釈物を、Ｕ字形底の９６ウェルプレートに、ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡを用いて調製した。必要に応じて、ＰＢＳで、またはアジュバントのみで免疫化したマウスの血清をネガティブコントロールとして用いた。ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ中の５０〜１００ｎｇ／ｍｌ（３．５〜７ＨＵ）の毒素溶液の等容積を加え、プレートを撹拌（８００ｒｐｍ）しながら室温で２０分間、インキュベートした。インキュベーション後、この溶液の５０ｍｌを新しい９６ウェルプレートに移し、（ＰＢＳ中で３回洗浄した）等容積のヒツジ赤血球懸濁液を加え、３７℃で３０分間、インキュベートした。その後、プレートを１，０００×ｇで１分間、遠心分離し、上清を９６ウェル平底プレートへ慎重に移し、吸光度を５４０ｎｍで読み取った。下記の結果において、阻害力価は、Ｔｒｉｔｏｎ誘導溶血を５０％低下させた血清希釈度として表される。
【０２２９】
野生型ＳＬＯ抗血清によるＳＬＯ溶血の阻害
抗野生型ＳＬＯ抗血清によるＳＬＯ溶血の阻害は、図１４、図１５、図１６、および表７〜９に示されている。抗ＳＬＯ血清力価は、１／７，０００〜１／１４，０００に含まれる（相加平均、１／１２，１６７±２，７１４）。ネガティブコントロール血清（フロイントアジュバント）力価は、１／３７５〜１／４，０００に含まれる（相加平均、１／１，８５４±１，３８４）。
【０２３０】
【表７】
【０２３１】
【表８】
【０２３２】
【表９】
野生型ＳＬＯ、化学的に解毒された野生型ＳＬＯ、およびＳＬＯ変異体の溶血活性の滴定
野生型ＳＬＯ、化学的に解毒された野生型ＳＬＯ、およびＳＬＯ変異体（Ｐ４２７Ｌ；Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆ）の溶血活性の滴定は、図１７〜１９および表１０に示されている。
【０２３３】
【表１０】
変異体ＳＬＯタンパク質に対する抗血清によるＳＬＯ溶血の阻害
変異体ＳＬＯタンパク質に対する抗血清によるＳＬＯ溶血の阻害は、図２０〜２２および表１１〜１３に示されている。５０ｎｇ／ｍｌ（３．５ＨＵ）の毒素を用いて、ＳＬＯ変異体Ｗ５３５−Ｐ４２７ＬについてのＳＬＯ溶血活性の５０％低下を得るのに必要とされる血清希釈度は、ミョウバンアジュバントを用いて１／１７，８６０であり、ＭＦ５９（商標）アジュバントを用いて１／７９９１である。ネガティブコントロール（アジュバントのみ）力価は、１／１，０００（ミョウバン）および１／１２５（ＭＦ５９（商標））である。
【０２３４】
【表１１】
【０２３５】
【表１２】
【０２３６】
【表１３】
野生型およびＳＬＯ変異体Ｗ５３５−Ｐ４２７Ｌについての、両方ともミョウバンアジュバントを用いてのＳＬＯ溶血活性の５０％低下を得るのに必要とされる血清希釈度の比較は、図２５に示されている。１００ｎｇ／ｍｌ（７ＨＵ）の毒素を用いて、ＳＬＯ変異体Ｗ５３５−Ｐ４２７ＬについてのＳＬＯ溶血活性の５０％低下を得るのに必要とされる血清希釈度は、１／８７５０＋／−１５００の血清希釈度と比較して、１／１２０００である。ネガティブコントロール（アジュバントのみ）希釈度は、約１／５０である。
【０２３７】
（実施例６）
インビボ防御実験
精製されたＳＬＯ Ｐ４２７Ｌタンパク質をフロイントアジュバントと共に、４０匹のマウスへ腹腔内に投与した。その後、３３４８ Ｍ１ ＧＡＳ菌株でマウスを鼻腔内で攻撃誘発した。表１４は、３つの別々の実験で得られたデータを報告し、１００％防御が全ての実験において一貫して達成されたことを示している。
【０２３８】
【表１４】
１０〜２０匹のマウスの群を２０μｇの組換えタンパク質で、０日目、２１日目、および３５日目に免疫化した。ネガティブコントロール群のマウスについては、用いられたＧＡＳ組換えタンパク質のバージョンに依存して、ＧＳＴのみかまたはＥ．ｃｏｌｉ夾雑物かのいずれかで免疫化した。３回目の免疫化から２週間後、血液試料を採取した。２〜３日後、１０８ｃｆｕ（５０μｌ）のＭ１ ３３４８ ＧＡＳ菌株で免疫化したマウスを鼻腔内で攻撃誘発した。マウス生存を１０〜１４日間、モニターした。異なる群から得られた免疫血清を、ＳＬＯ組換えタンパク質全体に関する免疫原性について試験した（ウェスタンブロット分析）。結果は表１５および１６に示されている。
【０２３９】
【表１５】
【０２４０】
【表１６】
ＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５ＦによるＧＡＳ Ｍ１菌株での鼻腔内攻撃誘発に対する防御
３０匹のマウスを、ＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５Ｆで、アジュバントとしてミョウバンかまたはＭＦ５９のいずれかと共に、腹腔内で免疫化し、ＧＡＳ Ｍ１菌株で鼻腔内攻撃誘発した。結果は図２６に示されている。ＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５Ｆおよびミョウバンで免疫化したマウスの７７パーセントが、（アジュバントのみで免疫化した）ネガティブコントロールマウスの３％と比較して、ＧＡＳ Ｍ１菌株での鼻腔内攻撃誘発に対して防御された。ＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５ＦおよびＭＦ５９で免疫化したマウスの９０パーセントが、（アジュバントのみで免疫化した）ネガティブコントロールマウスの１０％と比較して、ＧＡＳ Ｍ１菌株での鼻腔内攻撃誘発に対して防御された。これらの防御レベルは、野生型ＳＬＯでマウスを免疫化することによって得られたものに匹敵する。
【０２４１】
（実施例７）
プロトコール
ＳＬＯの静脈内注射。野生型ＳＬＯかまたは変異体ＳＬＯのいずれかのＰＢＳ中の溶液を、ＰＢＳ＋２ｍＭのＤＴＴの溶液中に希釈し、その後、マウスの尾静脈へ１００μｌを注射する。マウスを２〜３日間、観察する。野生型ＳＬＯの注射は、典型的には、数分以内で死をもたらす。
【０２４２】
インビボの致死性阻害アッセイ。免疫血清によって媒介される致死性阻害について、１０μｇ／マウスの野生型ＳＬＯ（ＰＢＳ、２ｍＭのＤＴＴ中１００μｇ／ｍｌの溶液）を、抗ＳＬＯ血清か、または（アジュバントのみで免疫化したマウスから得られた）コントロール血清かのいずれかと室温で、「転倒して」回転させながら２０分間、インキュベートする。インキュベーション後、その試料を、尾静脈への静脈内注射によってマウスに接種する。マウスを２〜３日間、観察する。
【０２４３】
野生型ＳＬＯおよび変異体ＳＬＯ Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５Ｆについての結果は表１７に示されている。
【０２４４】
【表１７】
インビボの急性毒性を、ポジティブコントロールとして１０μｇ／マウスの用量の野生型ＳＬＯ、ネガティブコントロールとしてフロイントアジュバントのみの注射を用いて評価した。１０μｇ／マウスの野生型ＳＬＯを、野生型ＳＬＯ抗血清かまたはコントロール血清のいずれかとインキュベートし、上記のようにマウスに接種した。結果は表１８に示されている。
【０２４５】
【表１８】
上記のように行われたもう一つの実験セットの結果は、表１９および２０に示されている。インビボの急性毒性を、５μｇ／マウスかまたは１０μｇ／マウスのいずれかの野生型ＳＬＯを用いて評価した。特に、１０μｇ／マウスの野生型ＳＬＯについては、ＧＡＳ２５ Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５ＦかまたはＰＢＳのみ（血清なし）かのいずれかで免疫化したマウス由来の血清とあらかじめインキュベートした。加えて、５μｇ／マウスの野生型ＳＬＯについては、ＧＡＳ２５ Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５Ｆで免疫化したマウス由来の血清か、またはネガティブコントロール血清としてＰＢＳとアジュバント（ミョウバン）で免疫化したマウス由来の血清のいずれかとあらかじめインキュベートした。
【０２４６】
結果は野生型ＳＬＯの致死用量は、抗ＳＬＯ Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５Ｆ血清によって中和されるが、同じ希釈度でのネガティブコントロール血清によっては中和されないことを示している。
【０２４７】
【表１９】
【０２４８】
【表２０】
（実施例８）
ＳＬＯ Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５Ｆでの免疫化は、野生型ＳＬＯの静脈内注射に対してマウスを防御する
５週齡のマウスを、野生型ＳＬＯかまたはＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５Ｆかのいずれかで、アジュバントとしてミョウバンを用いて（２ｍｇ／ｍｌ水酸化アルミニウム中２０μｇのタンパク質）、腹腔内に３回（０日目、２１日目、および３５日目）免疫化した。アジュバントのみで免疫化したマウスをネガティブコントロールとして用いた。５５日目、マウスに、ＰＢＳ、２ｍＭのＤＴＴ中の野生型ＳＬＯの様々な濃度の溶液を静脈内注射し、少なくとも７２時間、モニターした。結果は表２１に示されている。
【０２４９】
【表２１】
５μｇ／マウスの野生型ＳＬＯは、アジュバントのみで免疫化したマウスに致死的である；これらのマウスは、ＳＬＯ注射から数分内に死亡した。しかしながら、２０μｇ／マウスの同じ野生型ＳＬＯ調製物においてさえ、野生型ＳＬＯまたはＰ４２７Ｌ−Ｗ５３５Ｆ ＳＬＯ変異体のいずれで免疫化したマウスも死亡しなかった。
【技術分野】
【０００１】
この出願は、２００７年１２月２１日に出願されたＵＳ６１／０１６１９３および２００８年８月１３日に出願されたＵＳ６１／０８８３８１（これらの完全な内容は、参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、免疫学およびワクチン学の分野に関する。
【背景技術】
【０００３】
ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ；ＧＡＳ２５）は、ヒト病原体である化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（ＧＡＳ）の最も重要な病原性因子の一つである。ヒトにおいて初期の強い免疫応答を呼び起こすその能力のため、それは、ＧＡＳ感染の診断マーカーとして日常的に用いられている。
【０００４】
ＳＬＯは、細胞膜上のコレステロールとの相互作用、自己オリゴマー形成、およびポア形成を通してそれらの細胞溶解活性を発揮する高相同性チオール活性化細胞溶解素（ＴＡＣＹ）のファミリーに属する。さらに、ヒトＩｇＧのＦｃ領域に結合することによって古典的補体経路を直接、活性化するそれらの能力は、宿主細胞への直接的な補体媒介性攻撃を生じる可能性がある。ＴＡＣＹはまた、サイトカインおよび炎症性メディエーターの誘導によって宿主防御および免疫細胞機能に干渉することもできる。
【０００５】
一部のＴＡＣＹは、実験動物を受動的および能動的に防御することができる。非特許文献１参照。しかしながら、これらの毒素のワクチン候補としての使用は、それらの有害な副作用の複雑なパターンによって妨げられている。したがって、有毒でないＳＬＯタンパク質が当該分野で必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】ＦＥＭＳ Ｌｅｔｔ．１８２巻、２０００年、１９７〜２０５頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、有毒ではないが、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓに対する防御を誘導する能力をなお維持するストレプトリシンＯ（ＳＬＯ；ＧＡＳ２５）の変異体を提供する。変異体形態のＳＬＯは、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓに対する防御を誘導するためのワクチン組成物でとりわけ有用である。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】ＳＬＯの３次元コンピュータモデルを示す図である。プロリンは、空間充填として表されている。Ｐｒｏ４２７は白色で彩色されている。
【図２】野生型ＳＬＯおよびＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌを含むＥ．ｃｏｌｉ抽出物を用いる溶血アッセイの結果を示すグラフである。
【図３】精製ＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌを示すＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルの顕微鏡写真である。
【図４】精製野生型ＳＬＯおよびＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌを用いる溶血アッセイの結果を示すグラフである。
【図５】Ｅ．ｃｏｌｉ溶解物上清のＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルの顕微鏡写真である。レーンＡ、Ｅ．ｃｏｌｉネガティブコントロール；レーンＢ、タグなしのｒＳＬＯ野生型；レーンＣ、タグなしのｒＳＬＯ Ｐ４２７Ｌ；およびレーンＤ、タグなしの精製ｒＳＬＯ野生型（５ｍｇ）。
【図６】同じ条件下で、ＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌが野生型ＳＬＯの１０００分の１の溶血性であることを示すグラフである。
【図７】野生型ＳＬＯおよびＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌによる溶血へのコレステロールの効果を示すグラフである。
【図８Ａ】細胞抽出物におけるタグなし全タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の顕微鏡写真である。図８Ａ、ＳＬＯ野生型およびＰ４２７Ｌタグなしタンパク質の発現；図８Ｂ、ＳＬＯ Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５、Ｐ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ、およびＰ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ｗ５３５Ｆタグなしタンパク質の発現。
【図８Ｂ】細胞抽出物におけるタグなし全タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の顕微鏡写真である。図８Ａ、ＳＬＯ野生型およびＰ４２７Ｌタグなしタンパク質の発現；図８Ｂ、ＳＬＯ Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５、Ｐ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ、およびＰ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ｗ５３５Ｆタグなしタンパク質の発現。
【図９】細胞抽出物におけるＨｉｓタグ付き全タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の顕微鏡写真である。
【図１０】精製されたＨｉｓタグ付きタンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の顕微鏡写真である。
【図１１】精製されたタグなしタンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の顕微鏡写真である。図１１Ａ、レーン：Ａ、ＳＬＯ野生型タグなし；Ｂ、ＳＬＯ Ｐ４２７Ｌタグなし；分子量マーカー（１１６−６６．２−４５−３５−２５−１８．４−１４．４）；黒色矢印は、変異体クローンおよび野生型クローンから精製されたＳＬＯタンパク質を示す。図１１Ｂ、レーンＡ、ＳＬＯ野生型タグなし（３μｇ）、レーンＢ、ＳＬＯ Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５Ｆタグなし（３μｇ）；分子量マーカー（１１６−６６．２−４５−３５−２５−１８．４−１４．４）；黒色矢印は、変異体クローンおよび野生型クローンから精製されたＳＬＯタンパク質を示す。
【図１２】精製されたタグなしＳＬＯ野生型タンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の顕微鏡写真である。野生型ＳＬＯの様々な精製ロットの試料を、還元条件下および非還元条件下で分析した。
【図１３】Ｈｉｓタグ付きＳＬＯ変異体の溶血試験の結果を示すグラフである。
【図１４】抗ＳＬＯ抗血清によるＳＬＯ誘導性溶血活性の阻害を示すグラフである。
【図１５】ＳＬＯ溶血の抗ＳＬＯ抗血清阻害の滴定を示すグラフである。
【図１６】ＳＬＯ溶血活性滴定を示すグラフである。
【図１７】野生型ＳＬＯ、化学的に解毒された野生型ＳＬＯ、およびＳＬＯ変異体（Ｐ４２７Ｌ；Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆ）の溶血活性の滴定を示すグラフである。
【図１８】野生型ＳＬＯおよびＳＬＯ変異体（Ｐ４２７Ｌ；Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆ）の溶血活性の滴定を示すグラフである。
【図１９】野生型ＳＬＯおよび化学的に解毒された野生型ＳＬＯの溶血活性の滴定を示すグラフである。
【図２０】ＳＬＯ溶血活性（５０ｎｇ／ｍｌのＳＬＯ）の５０％低下を得るのに必要とされるＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆに対する抗血清の希釈度を示すグラフである。
【図２１】ＳＬＯ溶血活性（１００ｎｇ／ｍｌのＳＬＯ）の５０％低下を得るのに必要とされるＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆに対する抗血清の希釈度を示すグラフである。
【図２２】溶血阻害アッセイが、１００％溶血を可能にする毒素濃度で行われたことを示す滴定曲線である。
【図２３−１】ＳＬＯタンパク質のアラインメントを示す図である。Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１；Ｍ１２＿２０９６、配列番号２；Ｍ１２＿９４２９、配列番号３；Ｍ１＿５００５、配列番号４；Ｍ２、配列番号５；Ｍ２８、配列番号６；Ｍ６、配列番号７；Ｍ１８、配列番号８；Ｍ５、配列番号９；Ｍ３、配列番号１０；Ｍ３＿ＳＳＩ、配列番号１１；およびＭ４、配列番号１２。
【図２３−２】ＳＬＯタンパク質のアラインメントを示す図である。Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１；Ｍ１２＿２０９６、配列番号２；Ｍ１２＿９４２９、配列番号３；Ｍ１＿５００５、配列番号４；Ｍ２、配列番号５；Ｍ２８、配列番号６；Ｍ６、配列番号７；Ｍ１８、配列番号８；Ｍ５、配列番号９；Ｍ３、配列番号１０；Ｍ３＿ＳＳＩ、配列番号１１；およびＭ４、配列番号１２。
【図２３−３】ＳＬＯタンパク質のアラインメントを示す図である。Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１；Ｍ１２＿２０９６、配列番号２；Ｍ１２＿９４２９、配列番号３；Ｍ１＿５００５、配列番号４；Ｍ２、配列番号５；Ｍ２８、配列番号６；Ｍ６、配列番号７；Ｍ１８、配列番号８；Ｍ５、配列番号９；Ｍ３、配列番号１０；Ｍ３＿ＳＳＩ、配列番号１１；およびＭ４、配列番号１２。
【図２３−４】ＳＬＯタンパク質のアラインメントを示す図である。Ｍ１＿ＳＦ３７０、配列番号１；Ｍ１２＿２０９６、配列番号２；Ｍ１２＿９４２９、配列番号３；Ｍ１＿５００５、配列番号４；Ｍ２、配列番号５；Ｍ２８、配列番号６；Ｍ６、配列番号７；Ｍ１８、配列番号８；Ｍ５、配列番号９；Ｍ３、配列番号１０；Ｍ３＿ＳＳＩ、配列番号１１；およびＭ４、配列番号１２。
【図２４−１】野生型ＳＬＯおよびＨｉｓタグ付きＳＬＯ変異体のアラインメントを示す図である。ＳＬＯ＿Ｍ１菌株ＳＦ３７０、配列番号１３；ＳＬＯ ＷＴ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１４；ＳＬＯｍｕｔ．Ｐ４２７Ｌ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１５；ＳＬＯｍｕｔ．Ｃ５３０Ｇ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１６；ＳＬＯｍｕｔ．ΔＡ２４８＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１７；ＳＬＯｍｕｔ．Ｗ５３５Ｆ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１８；およびＳＬＯｍｕｔ．Ｗ５３５Ｆ＆Ｄ４８２Ｎ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１９。
【図２４−２】野生型ＳＬＯおよびＨｉｓタグ付きＳＬＯ変異体のアラインメントを示す図である。ＳＬＯ＿Ｍ１菌株ＳＦ３７０、配列番号１３；ＳＬＯ ＷＴ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１４；ＳＬＯｍｕｔ．Ｐ４２７Ｌ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１５；ＳＬＯｍｕｔ．Ｃ５３０Ｇ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１６；ＳＬＯｍｕｔ．ΔＡ２４８＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１７；ＳＬＯｍｕｔ．Ｗ５３５Ｆ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１８；およびＳＬＯｍｕｔ．Ｗ５３５Ｆ＆Ｄ４８２Ｎ＿ｈｉｓタグ付き、配列番号１９。
【図２５】野生型ＳＬＯに対する抗血清およびＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆに対する抗血清によるＳＬＯ溶血活性の低下を比較するグラフである。
【図２６】アジュバントとしてミョウバンかまたはＭＦ５９のいずれかを用いる組換えＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆのインビボ防御特性を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
変異体ＳＬＯタンパク質
本発明による変異体形態のＳＬＯは、溶血アッセイによって決定される場合、野生型ＳＬＯと比較して、野生型ＳＬＯより少なくとも５０％（例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）低い溶血活性を有するが、免疫原性であり、例えば、それらは、マウスモデルにおいてＧＡＳ致死的攻撃に対する防御を与える（実施例７参照）。本発明のＳＬＯ変異体には、ＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ（配列番号２０）、Ｗ５３５Ｆ（配列番号２１）、Ｃ５３０Ｇ（配列番号２２）、ΔＡ２４８（配列番号２３）、Ｗ５３５Ｆ＋Ｄ４８２Ｎ（配列番号２４）、Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆ（配列番号２５）、Ｐ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ（配列番号２６）、およびＰ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ｗ５３５Ｆ（配列番号２７）が含まれる。本発明はまた、これらの変異体のＨｉｓタグ付きバージョンを含む。例は図２４に示されている。
【００１０】
本発明のＳＬＯ変異体には、配列番号１に示された野生型ＳＬＯ配列に従って番号付けられたアミノ酸Ｐ４２７、Ｗ５３５、Ｃ５３０、Ａ２４８、およびＤ４８２の１つまたは複数においてアミノ酸変化（すなわち、置換、欠失、または挿入）を有するものが含まれる。図２３は、様々なＭ型に由来する野生型ＧＡＳ２５配列のアラインメントを提供する。
【００１１】
本発明のＳＬＯ変異体は、位置Ｐ４２７、Ｗ５３５、Ｃ５３０、Ａ２４８、および／またはＤ４８２に単一、二重、または三重のアミノ酸変化を含む（「単一変異体」、「二重変異体」、「三重変異体」）。したがって、ＳＬＯ変異体は、以下を含むことができる：
ｉ．Ｐ４２７Ｌ（配列番号２０）、Ｐ４２７Ｒ、Ｐ４２７Ｎ、Ｐ４２７Ｃ、Ｐ４２７Ｑ、Ｐ４２７Ｅ、Ｐ４２７Ｇ、Ｐ４２７Ｈ、Ｐ４２７Ｉ、Ｐ４２７Ｌ、Ｐ４２７Ｋ、Ｐ４２７Ｍ、Ｐ４２７Ｆ、Ｐ４２７Ａ、Ｐ４２７Ｓ、Ｐ４２７Ｔ、Ｐ４２７Ｗ、Ｐ４２７Ｙ、またはＰ４２７Ｖ；
ｉｉ．Ｗ５３５Ｆ（配列番号２１）、Ｗ５３５Ｒ、Ｗ５３５Ｎ、Ｗ５３５Ｄ、Ｗ５３５Ｃ、Ｗ５３５Ｑ、Ｗ５３５Ｅ、Ｗ５３５Ｇ、Ｗ５３５Ｉ、Ｗ５３５Ｌ、Ｗ５３５Ｋ、Ｗ５３５Ｍ、Ｗ５３５Ａ、Ｗ５３５Ｐ、Ｗ５３５Ｓ、Ｗ５３５Ｔ、Ｗ５３５Ｙ、またはＷ５３５Ｖ；
ｉｉｉ．Ｃ５３０Ｇ（配列番号２２）、Ｃ５３０Ｒ、Ｃ５３０Ｎ、Ｃ５３０Ｄ、Ｃ５３０Ｓ、Ｃ５３０Ｑ、Ｃ５３０Ｅ、Ｃ５３０Ａ、Ｃ５３０Ｈ、Ｃ５３０Ｉ、Ｃ５３０Ｌ、Ｃ５３０Ｋ、Ｃ５３０Ｍ、Ｃ５３０Ｆ、Ｃ５３０Ｐ、Ｃ５３０Ｔ、Ｃ５３０Ｗ、Ｃ５３０Ｙ、またはＣ５３０Ｖ；
ｉｖ．Ｄ４８２Ｌ、Ｄ４８２Ｒ、Ｄ４８２Ｎ、Ｄ４８２Ｃ、Ｄ４８２Ｑ、Ｄ４８２Ｅ、Ｄ４８２Ｇ、Ｄ４８２Ｈ、Ｄ４８２Ｉ、Ｄ４８２Ｌ、Ｄ４８２Ｋ、Ｄ４８２Ｍ、Ｄ４８２Ｆ、Ｄ４８２Ａ、Ｄ４８２Ｓ、Ｄ４８２Ｔ、Ｄ４８２Ｗ、Ｄ４８２Ｙ、またはＤ４８２Ｖ；
ｖ．Ａ２４８Ｌ、Ａ２４８Ｒ、Ａ２４８Ｎ、Ａ２４８Ｃ、Ａ２４８Ｑ、Ａ２４８Ｅ、Ａ２４８Ｇ、Ａ２４８Ｈ、Ａ２４８Ｉ、Ａ２４８Ｌ、Ａ２４８Ｋ、Ａ２４８Ｍ、Ａ２４８Ｆ、Ａ２４８Ｓ、Ａ２４８Ｔ、Ａ２４８Ｗ、Ａ２４８Ｙ、またはＡ２４８Ｖ
ｖｉ．ΔＰ４２７；またはΔＷ５３５；またはΔＣ５３０；またはΔＤ４８２；またはΔＡ２４８（配列番号２３）；ならびに
ｖｉｉ．Ｗ５３５Ｆ＋Ｄ４８２Ｎ（配列番号２４）、Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆ（配列番号２５）、Ｐ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ（配列番号２６）、およびＰ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ｗ５３５Ｆ（配列番号２７）などのそれらの組合せ。
【００１２】
本発明の二重変異体には、Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆ（配列番号２５）、Ｐ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ（配列番号２６）、Ｐ４２７Ｌ＋Ａ２４８Ｌ、Ｐ４２７Ｌ＋Ｄ４８２Ｌ、Ｗ５３５Ｆ＋Ｃ５３０Ｇ、Ｗ５３５Ｆ＋Ａ２４８Ｌ、Ｗ５３５Ｆ＋Ｄ４８２Ｌ、Ｃ５３０Ｇ＋Ａ２４８Ｌ、およびＡ２４８Ｌ＋Ｄ４８２Ｌが含まれる。三重変異体には、Ｐ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ａ２４８Ｌ、Ｐ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ｄ４８２Ｌ、Ｐ４２７Ｌ＋Ａ２４８Ｌ＋Ｄ４８２Ｌ、Ｐ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ｗ５３５Ｆ（配列番号２７）、Ｗ５３５Ｆ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ａ２４８Ｌ、Ｗ５３５Ｆ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ｄ４８２Ｌ、Ｗ５３５Ｆ＋Ａ２４８Ｌ＋Ｄ４８２Ｌ、およびＣ５３０Ｇ＋Ａ２４８Ｌ＋Ｄ４８２Ｌが含まれる。
【００１３】
本発明の変異体ＳＬＯタンパク質はまた、上記で開示されているような変異体ＳＬＯタンパク質および別のＧＡＳ抗原を含む融合ポリペプチドを含む。ＧＡＳ抗原は、例えば、ＷＯ０２／３４７７１に開示されており、それらには、ＧＡＳ３９（ｓｐｙ０２６６；ｇｉ−１５６７４４４６）、ＧＡＳ４０（ｓｐｙ０２６９；ｇｉ−１５６７４４４９）、ＧＡＳ４２（ｓｐｙ０２８７；ｇｉ−１５６７４４６１）、ＧＡＳ４５（Ｍ５００５＿ｓｐｙ０２４９；ｇｉ−７１９１００６３）、ＧＡＳ５７（ｓｐｙ０４１６；ｇｉ−１５６７４５４９）、ＧＡＳ５８（ｓｐｙ０４３０；ｇｉ−１５６７４５５６）、ＧＡＳ８４（ｓｐｙ１２７４；ｇｉ−１５６７５２２９）、ＧＡＳ９５（ｓｐｔ１７３３；ｇｉ−１５６７５５８２）、ＧＡＳ１１７（ｓｐｙ０４４８；ｇｉ−１５６７４５７１）、ＧＡＳ１３０（ｓｐｙ０５９１；ｇｉ−１５６７４６７７）、ＧＡＳ１３７（ｓｐｙ０６５２；ｇｉ−１５６７４７２０）、ＧＡＳ１５９（ｓｐｙ１１０５；ｇｉ−１５６７５０８８）、ＧＡＳ１９３（ｓｐｙ２０２５；ｇｉ−１５６７５８０２）、ＧＡＳ２０２（ｓｐｙ１３０９；ｇｉ−１５６７５２５８）、ＧＡＳ２１７（ｓｐｙ０９２５；ｇｉ−１５６７４９４５）、ＧＡＳ２３６（ｓｐｙ１１２６；ｇｉ−１５６７５１０６）、ＧＡＳ２５３（ｓｐｙ１５２４；ｇｉ−１５６７５４２３）、ＧＡＳ２７７（ｓｐｙ１９３９；ｇｉ−１５６７５７４２）、ＧＡＳ２９４（ｓｐｙ１１７３；ｇｉ−１５６７５１４５）、ＧＡＳ３０９（ｓｐｙ０１２４；ｇｉ−１５６７４３４１）、ＧＡＳ３６６（ｓｐｙ１５２５；ｇｉ−１５６７５４２４）、ＧＡＳ３７２（ｓｐｙ１６２５；ｇｉ−１５６７５５０１）、ＧＡＳ３８４（ｓｐｙ１８７４；ｇｉ−１５６７５６９３）、ＧＡＳ３８９（ｓｐｙ１９８１；ｇｉ−１５６７５７７２）、ＧＡＳ５０４（ｓｐｙ１７５１；ｇｉ−１５６７５６００）、ＧＡＳ５０９（ｓｐｙ１６１８；ｇｉ−１５６７５４９６）、ＧＡＳ２９０（ｓｐｙ１９５９；ｇｉ−１５６７５７５７）、ＧＡＳ５１１（ｓｐｙ１７４３；ｇｉ−１５６７５５９２）、ＧＡＳ５２７（ｓｐｙ１２０４；ｇｉ−１５６７５１６９）、ＧＡＳ５２９（ｓｐｙ１２８０；ｇｉ−１５６７５２３３）、およびＧＡＳ５３３（ｓｐｙ１８７７；ｇｉ−１５６７５６９６）が含まれるが、これらに限定されない。さらに、ＧＡＳ抗原には、ＧＡＳ６８（Ｓｐｙ０１６３；ｇｉ１３６２１４５６）、ＧＡＳ８４（Ｓｐｙ１２７４；ｇｉ１３６２２３９８）、ＧＡＳ８８（Ｓｐｙ１３６１；ｇｉ１３６２２４７０）、ＧＡＳ８９（Ｓｐｙ１３９０；ｇｉ１３６２２４９３）、ＧＡＳ９８（Ｓｐｙ１８８２；ｇｉ１３６２２９１６）、ＧＡＳ９９（Ｓｐｙ１９７９；ｇｉ１３６２２９９３）、ＧＡＳ１０２（Ｓｐｙ２０１６、ｇｉ１３６２３０２５）、ＧＡＳ１４６（Ｓｐｙ０７６３；ｇｉ１３６２１９４２）、ＧＡＳ１９５（Ｓｐｙ２０４３；ｇｉ１３６２３０４３）、ＧＡＳ５６１（Ｓｐｙ１１３４；ｇｉ１３６２２２６９）、ＧＡＳ１７９（Ｓｐｙ１７１８、ｇｉ１３６２２７７３）およびＧＡＳ６８１（ｓｐｙ１１５２；ｇｉ１３６２２２８）が含まれるが、これらに限定されない。
【００１４】
変異体ＳＬＯタンパク質をコードする核酸分子
本発明は、変異体ＳＬＯタンパク質をコードする核酸分子を含む。本発明はまた、かかる分子と少なくとも５０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む。特定の配列に依存して、配列同一性の程度は、好ましくは、５０％を超える（例えば、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれを超える）。ヌクレオチド配列間の同一性は、好ましくは、以下のパラメータ：ギャップオープンペナルティ＝１２およびギャップ伸長ペナルティ＝１を使用したアフィンギャップ検索を使用したＭＰＳＲＣＨプログラム（Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）で実行されるＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって決定される。
【００１５】
本発明はまた、これらの分子とハイブリッド形成することができる核酸分子を提供する。ハイブリッド形成反応を、異なる「ストリンジェンシー」条件下で行うことができる。ハイブリッド形成反応のストリンジェンシーを増加させる条件は、広く知られており、当該分野で公開されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋらの７．５２ページ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，１９８９を参照のこと。関連条件の例には、以下が含まれる（ストリンジェンシーが増加する順）：２５℃、３７℃、５０℃、５５℃、および６８℃でのインキュベーション；１０×ＳＳＣ、６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣ、および０．１×ＳＳＣの緩衝剤濃度（ＳＳＣは０．１５Ｍ ＮａＣｌおよび１５ｍＭクエン酸緩衝剤である）ならびに他の緩衝系を使用したその等価物；０％、２５％、５０％、および７５％のホルムアルデヒド濃度；５分間〜２４時間のインキュベーション時間；１回、２回、またはそれを超える洗浄工程；１、２、または１５分間の洗浄インキュベーション時間；ならびに６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣ、または脱イオン水の洗浄液。ハイブリッド形成技術およびその至適化は、当該分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９；Ａｕｓｕｂｅｌら、ｅｄｓ．，Ｓｈｏｒｔ
Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４ｔｈ ｅｄ．，１９９９；米国特許第５，７０７，８２９号；Ａｕｓｕｂｅｌら、ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ ３０，１９８７を参照のこと。
【００１６】
いくつかの実施形態では、本発明の核酸分子は、低ストリンジェンシー条件下で標的とハイブリッド形成し、他の実施形態では、本発明の核酸分子は中ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成し、好ましい実施形態では、本発明の核酸分子は高ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成する。低ストリンジェンシーハイブリッド形成条件の例は、５０℃および１０×ＳＳＣである。中ストリンジェンシーハイブリッド形成条件の例は、５５℃および１×ＳＳＣである。高ストリンジェンシーハイブリッド形成条件の例は、６８℃および０．１×ＳＳＣである。
【００１７】
変異体ＳＬＯタンパク質の産生
組換え産生
遺伝暗号の重複性は周知である。したがって、野生型ＳＬＯタンパク質または本発明のＳＬＯ変異タンパク質をコードする任意の核酸分子（ポリヌクレオチド）を用いて、そのタンパク質を組換えで産生することができる。野生型ＳＬＯ、ＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ、Ｗ５３５Ｆ、Ｃ５３０Ｇ、ΔＡ２４８、Ｗ５３５Ｆ＋Ｄ４８２Ｎ、Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆ、Ｐ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ、およびＰ４２７Ｌ＋Ｃ５３０Ｇ＋Ｗ５３５Ｆをコードするヌクレオチド配列の例は、配列表（それぞれ、配列番号２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、および３６も参照）に提供されている。野生型ＳＬＯをコードする核酸分子はまた、標準核酸精製技術を用いて適当なＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ細菌から単離することができ、またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）などの増幅技術を用いて、もしくは自動合成機を用いることによって、合成することができる。Ｃａｒｕｔｈｅｒｓら、Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． Ｓｙｍｐ． Ｓｅｒ．２１５巻、２２３頁、１９８０年；Ｈｏｒｎら、Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． Ｓｙｍｐ． Ｓｅｒ．２２５巻、２３２頁、１９８０年；Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒら、Ｎａｕｒｅ ３１０巻、１０５〜１１頁、１９８４年；Ｇｒａｎｔｈａｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．９巻、ｒ４３〜ｒ７４頁、１９８１年参照。
【００１８】
ｃＤＮＡ分子を、テンプレートとしてｍＲＮＡを使用した標準的な分子生物学技術を使用して作製することができる。その後、ｃＤＮＡ分子を、当該分野で周知の分子生物学技術を使用して複製することができる。テンプレートとしてゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡのいずれかを使用したＰＣＲなどの増幅技術を使用して、本発明のポリヌクレオチドの更なる複製を得ることができる。
【００１９】
所望により、当該分野で一般的に知られている方法を使用してポリヌクレオチドを操作して、種々の理由で抗原コード配列を変化させることができる（ポリペプチドまたはｍＲＮＡ産物のクローニング、プロセシング、および／または発現を修飾する変更が含まれるが、これらに限定されない）。遺伝子フラグメントおよび合成オリゴヌクレオチドのランダム断片化およびＰＣＲ再アセンブリによるＤＮＡシャフリングを使用して、ヌクレオチド配列を操作することができる。例えば、部位特異的変異誘発を使用して、新規の制限部位の挿入、グリコシル化パターンの変更、コドン優先度の変化、スプライスバリアントの産生、および変異の導入などを行うことができる。
【００２０】
配列修飾（精製タグ配列の付加またはコドン至適化など）を使用して、発現を容易にすることができる。例えば、Ｎ末端リーダー配列を、タグタンパク質（ポリヒスチジン（「ＨＩＳ」）またはグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（「ＧＳＴ」）など）をコードする配列と置換することができる。かかるタグタンパク質を使用して、発現タンパク質の精製、検出、および安定性を促進することができる。特定の原核生物宿主または真核生物宿主に好まれるコドンを選択して、タンパク質発現率を増大させ、または所望の性質（天然に存在する配列から生成した転写物よりも長い半減期など）を有するＲＮＡ転写物を産生することができる。これらの方法は当該分野で周知であり、ＷＯ０５／０３２５８２号にさらに記載されている。
【００２１】
発現ベクター
変異体ＳＬＯタンパク質をコードする核酸分子を、挿入するコード配列の転写および翻訳に必要なエレメントを含む発現ベクターに挿入することができる。当業者に周知の方法を使用して、コード配列ならびに適切な転写調節エレメントおよび翻訳調節エレメントを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法には、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術、およびインビボ遺伝子組換えが含まれる。
【００２２】
宿主細胞
変異体ＳＬＯタンパク質を産生するための宿主細胞は、原核生物または真核生物であり得る。大腸菌は好ましい宿主細胞であるが、他の適切な宿主には、ラクトコッカス・ラクティス、ラクトコッカス・クレモリス、枯草菌、コレラ菌、チフス菌、ネズミチフス菌、ナイセリア・ラクタミカ、ナイセリア・シネレア、マイコバクテリア属（例えば、結核菌）、酵母、バキュロウイルス、哺乳動物細胞などが含まれる。
【００２３】
宿主細胞株を、所望の様式で挿入配列の発現を調整する、または発現ポリペプチドをプロセシングする能力について選択することができる。かかるポリペプチド修飾には、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、およびアシル化が含まれるが、これらに限定されない。ポリペプチドの「プレプロ」形態を切断する翻訳後プロセシングを使用して、正確な挿入、折り畳み、および／または機能を促進することもできる。翻訳後活性のための特定の細胞機構および特徴的なメカニズムを有する異なる宿主細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ ２０１１０−２２０９）から利用可能であり、外来タンパク質の正確な修飾およびプロセシングが確実になるように選択することができる。ＷＯ０１／９８３４０号を参照のこと。
【００２４】
十分に確立された技術（トランスフェリン−ポリカチオン媒介ＤＮＡ移入、裸またはカプセル化した核酸でのトランスフェクション、リポソーム媒介細胞融合、ＤＮＡコーティングラテックスビーズの細胞内輸送、プロトプラスト融合、ウイルス感染、エレクトロポレーション、「遺伝子銃」法、およびＤＥＡＥまたはリン酸カルシウム媒介トランスフェクションが含まれるが、これらに限定されない）を使用して、発現構築物を宿主細胞に導入することができる。
【００２５】
発現ベクターを使用して形質転換された宿主細胞を、細胞培養物からのタンパク質の発現および回収に適切な条件下で培養することができる。形質転換された細胞によって産生されたタンパク質を、使用したヌクレオチド配列および／または発現ベクターに応じて分泌し、または細胞内に含めることができる。当業者は、原核細胞膜または真核細胞膜を介した可溶性抗原の分泌を指示するシグナル配列を含むように発現ベクターをデザインすることができることを理解している。
【００２６】
精製
シグナル輸出（ｅｘｐｏｒｔ）配列は、組換え産生される変異体ＳＬＯタンパク質に含められ得、その結果、抗原は、公知の方法を使用して細胞培養培地から精製され得る。あるいは、本発明の組換え産生される変異体ＳＬＯタンパク質を、操作した宿主細胞から単離することができ、当該分野で周知の方法を使用して、細胞中の他の成分（タンパク質、炭水化物、または脂質など）から分離し得る。かかる方法には、サイズ排除クロマトグラフィ、硫酸アンモニウム分画、イオン交換クロマトグラフィ、アフィニティクロマトグラフィ、および分取ゲル電気泳動が含まれるが、これらに限定されない。精製変異体ＳＬＯタンパク質の調製物の純度は少なくとも８０％であり、好ましくは、調製物の純度は、９０％、９５％、または９９％である。調製物の純度を、当該分野で公知の任意の手段（ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動など）によって評価することができる。適切な場合には、変異体ＳＬＯタンパク質を、例えば、尿素を使用して可溶化することができる。
【００２７】
化学合成
変異体ＳＬＯタンパク質を、例えば、固相技術を使用して合成することができる。例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５，２１４９ ５４，１９６３；Ｒｏｂｅｒｇｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６９，２０２ ０４，１９９５を参照のこと。手動技術の使用または自動化によりタンパク質合成を行うことができる。例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ４３１Ａ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して、自動化された合成を行うことができる。任意選択的に、変異体ＳＬＯタンパク質のフラグメントを個別に合成し、化学的方法を使用して合わせて全長分子を産生することができる。
【００２８】
抗体
本発明は、本発明の変異体ＳＬＯタンパク質に特異的に結合できるが、野生型のＳＬＯタンパク質には結合しない抗体を提供する。用語「抗体」には、インタクトな免疫グロブリン分子、および抗原に結合することができるそのフラグメントが含まれる。これらには、ハイブリッド（キメラ）抗体分子（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３４９，２９３−９９，１９９１；米国特許第４，８１６，５６７号）；Ｆ（ａｂ’）２フラグメントおよびＦ（ａｂ）フラグメントならびにＦｖ分子；非共有結合性ヘテロ二量体（例えば、Ｉｎｂａｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．６９，２６５９−６２，１９７２；Ｅｈｒｌｉｃｈら、Ｂｉｏｃｈｅｍ １９，４０９１−９６，１９８０）；単鎖Ｆｖ分子（ｓＦｖ）（例えば、Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５，５８９７−８３，１９８８）；二量体および三量体抗体フラグメント構築物；ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）（例えば、Ｐａｃｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍ ３１，１５７９−８４，１９９２；Ｃｕｍｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４９Ｂ，１２０−２６，１９９２）；ヒト化抗体分子（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２，３２３−２７，１９８８；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９，１５３４−３６，１９８８；および１９９４年９月２１日公開の英国特許出願番号ＧＢ２，２７６，１６９号）；およびかかる分子から得た任意の機能的フラグメントならびにファージディスプレイなどの従来にない過程によって得た抗体が含まれる。好ましくは、抗体はモノクローナル抗体である。モノクローナル抗体を得る方法は、当該分野で周知である。
【００２９】
典型的には、エピトープを形成するのに少なくとも６、７、８、１０、または１２個の連続するアミノ酸が必要である。しかし、不連続アミノ酸を含むエピトープは、より多数（例えば、少なくとも１５、２５、または５０個のアミノ酸）を必要とし得る。種々の免疫アッセイ（例えば、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、放射免疫アッセイ、免疫組織化学アッセイ、免疫沈降、または当該分野で公知の他の免疫化学アッセイ）を使用して、所望の特異性を有する抗体を同定することができる。競合結合または免疫放射線測定法についての多数のプロトコールが当該分野で周知である。かかる免疫アッセイは、典型的には、免疫原と免疫原に特異的に結合する抗体との間の複合体形成の測定を含む。変異体ＳＬＯタンパク質に特異的に結合する抗体の調製物から、典型的には、免疫化学アッセイで使用した場合に他のタンパク質を使用して得られる検出シグナルの少なくとも５倍、１０倍、または２０倍の検出シグナルが得られ、かつ野生型ＳＬＯタンパク質と接触させた場合に、検出可能なシグナルは提供しない。好ましくは、抗体は、免疫化学アッセイにおいて他のタンパク質を検出せず、溶液由来の特定の抗原を免疫沈降することができる。
【００３０】
抗体の生成
変異体ＳＬＯタンパク質または非ＳＬＯポリペプチド抗原（下記）を使用して哺乳動物（マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、またはヒトなど）を免疫化して、ポリクローナル抗体を産生することができる。必要に応じて、抗原を、担体タンパク質（ウシ血清アルブミン、サイログロブリン、およびキーホールリンペットヘモシアニンなど）に接合することができる。宿主の種に応じて、種々のアジュバントを使用して、免疫学的応答を増大させることができる。かかるアジュバントには、フロイントアジュバント、ミネラルゲル（例えば、水酸化アルミニウム）、および界面活性物質（例えば、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油性乳濁液、キーホールリンペットヘモシアニン、およびジニトロフェノール）が含まれるが、これらに限定されない。ヒトで使用されるアジュバントのうち、ＢＣＧ（カルメット・ゲラン桿菌）およびコリネバクテリウム・パルバムが特に有用である。
【００３１】
抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を、培養物中の連続的な細胞株によって抗体分子を産生する任意の技術を使用して調製することができる。これらの技術には、ハイブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術、およびＥＢＶハイブリドーマ技術が含まれるが、これらに限定されない（Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ２５６，４９５ ４９７，１９８５；Ｋｏｚｂｏｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ８１，３１ ４２，１９８５；Ｃｏｔｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８０，２０２６ ２０３０，１９８３；Ｃｏｌｅら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．６２，１０９ １２０，１９８４）。
【００３２】
さらに、「キメラ抗体」の産生のために開発された技術（マウス抗体遺伝子をヒト抗体遺伝子にスプライシングして適切な抗原特異性および生物活性を有する分子を得る技術）を使用することができる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１，６８５１ ６８５５，１９８４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３１２，６０４ ６０８，１９８４；Ｔａｋｅｄａら、Ｎａｔｕｒｅ ３１４，４５２ ４５４，１９８５）。モノクローナル抗体および他の抗体を「ヒト化」して、治療で使用する場合に抗体に対する患者の免疫応答の開始を防止することもできる。かかる抗体は、療法で直接使用するのに配列が十分にヒト抗体と類似し得るか、少数の重要な残基を変化させる必要があり得る。げっ歯類抗体配列とヒト抗体配列との間の相違を、各残基の部位特異的変異誘発または相補性決定領域全体のグラフティング（ｇｒａｔｉｎｇ）によるヒト配列中の残基と異なる残基の置換によって最小にすることができる。
【００３３】
あるいは、下記の組換え方法を使用してヒト化抗体を産生することができる。米国特許第５，５６５，３３２号に開示のように、特定の抗原に特異的に結合する抗体は、部分的または完全にヒト化された抗原結合部位を含むことができる。
【００３４】
あるいは、単鎖抗体の産生について記載した技術を、当該分野公知の方法を使用して適合させて、特定の抗原に特異的に結合する単鎖抗体を産生することができる。関連する特異性を有するが、異なるイディオタイプ組成の抗体を、ランダム組み合わせ免疫グロブリンライブラリー由来のチェーンシャフリング（ｃｈａｉｎ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）によって生成することができる（Ｂｕｒｔｏｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８８，１１１２０ ２３，１９９１）。
【００３５】
単鎖抗体を、テンプレートとしてハイブリドーマｃＤＮＡを使用したＤＮＡ増幅方法（ＰＣＲなど）を使用して構築することができる（Ｔｈｉｒｉｏｎら、１９９６，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｐｒｅｖ．５，５０７−１１）。単鎖抗体は、単一特異性または二重特異性であり得、２価または４価であり得る。４価の二重特異性単鎖抗体の構築は、例えば、Ｃｏｌｏｍａ ＆ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９９７，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５，１５９−６３に教示されている。２価の二重特異性単鎖抗体は、Ｍａｌｌｅｎｄｅｒ ＆ Ｖｏｓｓ，１９９４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９，１９９−２０６に教示されている。
【００３６】
下記のように、単鎖抗体をコードするヌクレオチド配列を、手作業または自動化されたヌクレオチド合成によって構築し、標準的な組換えＤＮＡ法を使用して発現構築物にクローニングし、細胞に導入してコード配列を発現させることができる。あるいは、単鎖抗体を、例えば、繊維状ファージテクノロジーを使用して直接産生することができる（Ｖｅｒｈａａｒら、１９９５，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ６１，４９７−５０１；Ｎｉｃｈｏｌｌｓら、１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６５，８１−９１）。
【００３７】
特定の抗原に特異的に結合する抗体を、文献に開示のリンパ球集団におけるインビボ産生の誘導または免疫グロブリンライブラリーもしくは高度に特異的な結合試薬のパネルのスクリーニングによって産生することもできる（Ｏｒｌａｎｄｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６，３８３３ ３８３７，１９８９；Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３４９，２９３ ２９９，１９９１）。
【００３８】
キメラ抗体を、ＷＯ９３／０３１５１号に開示のように構築することができる。免疫グロブリンに由来し、多価または多重特異性の結合タンパク質（ＷＯ９４／１３８０４号に記載の「二特異性抗体」など）を調製することもできる。
【００３９】
抗体を、当該分野で周知の方法によって精製することができる。例えば、抗体を、関連抗原が結合するカラムの通過によってアフィニティ精製することができる。次いで、結合した抗体を、高塩濃度の緩衝剤を使用して、カラムから溶離することができる。
【００４０】
薬学的組成物
本発明はまた、薬物として（例えば、免疫原性組成物またはワクチンとして）用いる組成物を提供する。本発明の組成物は、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ感染の結果として引き起こされる疾患を予防および／または治療するのに有用であり、ポリペプチド、核酸分子、または抗体であり得る少なくとも１つの活性剤を含む。前記疾患は、例えば、菌血症、髄膜炎、産褥熱、猩紅熱、丹毒、咽頭炎、膿痂疹、壊死性筋膜炎、筋炎、または毒素性ショック症候群であり得る。
【００４１】
変異体ＳＬＯタンパク質を含む組成物は、好ましくは、免疫原性組成物であり、より好ましくは、ワクチン組成物である。かかる組成物のｐＨは、好ましくは、ｐＨ６とｐＨ８との間、好ましくは、約ｐＨ７である。ｐＨを緩衝剤の使用によって維持することができる。組成物は、無菌でありおよび／または発熱物質を含まなくあり得る。組成物は、ヒトに関して等張であり得る。
【００４２】
本発明のワクチンを、予防的または治療的に使用することができるが、典型的には、予防的であろう。したがって、本発明は、化膿連鎖球菌感染の治療的または予防的処置のための方法を含む。動物は、好ましくは哺乳動物であり、最も好ましくはヒトである。方法は、治療量または予防量の本発明の免疫原性組成物を動物に投与する工程を含む。
【００４３】
いくつかの本発明の組成物は、本明細書に記載の変異体ＳＬＯタンパク質を含む。他の本発明の組成物は、変異体ＳＬＯタンパク質、任意選択的に、組成物中に含めることができる他の抗原をコードする核酸分子を含む（以下を参照のこと）。例えば、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ＆ Ｔｏｒｒｅｓ（１９９７）Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９：２７１−２８３；Ｄｏｎｎｅｌｌｙら（１９９７）Ａｎｎ．Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５：６１７−６４８；Ｓｃｏｔｔ−Ｔａｙｌｏｒ ＆ Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ（２０００）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ ９：４７１−４８０；Ａｐｏｓｔｏｌｏｐｏｕｌｏｓ ＆ Ｐｌｅｂａｎｓｋｉ（２０００）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２：４４１−４４７；Ｉｌａｎ（１９９９）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ １：１１６−１２０；Ｄｕｂｅｎｓｋｙら（２０００）Ｍｏｌ Ｍｅｄ ６：７２３−７３２；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ＆ Ｐｅｒｔｍｅｒ（２０００）Ａｄｖ Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ ５５：１−７４；Ｄｏｎｎｅｌｌｙら（２０００）Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ １６２（４ Ｐｔ ２）：Ｓ１９０−１９３；Ｄａｖｉｓ（１９９９）Ｍｔ．Ｓｉｎａｉ Ｊ．Ｍｅｄ．６６：８４−９０を参照のこと。典型的には、核酸分子は、例えば、プラスミド形態のＤＮＡ分子である。
【００４４】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、１つまたは複数のさらなる活性剤を含むことができる。かかる薬剤には、（ａ）本発明の別の変異体ＳＬＯタンパク質、（ｂ）小児ワクチンで有用なポリペプチド抗原、（ｃ）高齢者または免疫無防備状態の個体のためのワクチンで有用なポリペプチド抗原、（ｄ）（ａ）〜（ｃ）をコードする核酸分子および（ａ）〜（ｃ）に特異的に結合する抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【００４５】
さらなる抗原
本発明の組成物を、本発明の治療方法、または予防方法で使用するための１つまたは複数の追加の抗原と組み合わせて投与することができる。適切な抗原には、以下に列挙した抗原が含まれる。さらに、本発明の組成物を使用して、任意の以下に列挙の病原体に起因する感染を治療または防止することができる。下記の抗原との組み合わせに加えて、本発明の組成物を、本明細書中に記載のアジュバントと組み合わせることもできる。
【００４６】
本発明と共に使用するための抗原には、下記の１つまたは複数の抗原または下記の１つまたは複数の病原体由来の抗原が含まれるが、これらに限定されない。
【００４７】
Ａ．細菌抗原
本発明での使用に適切な細菌抗原には、細菌から単離、精製、または由来することができるタンパク質、多糖類、リポ多糖類、外膜小胞が含まれる。さらに、細菌抗原には、細菌溶解物および不活化細菌処方物が含まれ得る。細菌抗原を、組換え発現によって産生することができる。細菌抗原には、好ましくは、その生活環の少なくとも１段階に細菌表面に曝露されるエピトープが含まれる。細菌抗原は、好ましくは、複数の血清型で保存される。細菌抗原には、下記の１つまたは複数の細菌由来の抗原および以下で同定した特定の抗原例が含まれる。
【００４８】
ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）：メニンギティディス抗原には、Ｎ．メニンギティディス血清群（Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙ、および／またはＢなど）から精製または由来したタンパク質（参考文献１〜７で同定されたタンパク質など）、糖類（多糖類、オリゴ糖、またはリポ多糖類が含まれる）、または外膜小胞（参考文献８、９、１０、１１）が含まれ得る。メニンギティディスタンパク質抗原を、接着剤、オートトランスポータ、毒素、Ｆｅ獲得タンパク質、および膜結合タンパク質（好ましくは、外膜内在性タンパク質（ｉｎｔｅｇｒａｌ ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ））から選択することができる。
【００４９】
肺炎連鎖球菌：肺炎連鎖球菌抗原には、肺炎連鎖球菌由来の糖類（多糖類またはオリゴ糖が含まれる）および／またはタンパク質が含まれ得る。糖類抗原を、血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆから選択することができる。タンパク質抗原を、ＷＯ９８／１８９３１号、ＷＯ９８／１８９３０号、米国特許第６，６９９，７０３号、米国特許第６，８００，７４４号、ＷＯ９７／４３３０３号、およびＷＯ９７／３７０２６号で同定されたタンパク質から選択することができる。肺炎連鎖球菌タンパク質を、ポリヒスチジントリアドファミリー（ＰｈｔＸ）、コリン結合タンパク質ファミリー（ＣｂｐＸ）、ＣｂｐＸ短縮物、ＬｙｔＸファミリー、ＬｙｔＸ短縮物、ＣｂｐＸ短縮物−ＬｙｔＸ短縮物キメラタンパク質、ニューモリシン（Ｐｌｙ）、ＰｓｐＡ、ＰｓａＡ、Ｓｐ１２８、Ｓｐ１０１、Ｓｐ１３０、Ｓｐ１２５、またはＳｐ１３３から選択することができる。
【００５０】
化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）：Ａ群連鎖球菌抗原には、ＷＯ０２／３４７７１号またはＷＯ２００５／０３２５８２号で同定されたタンパク質（ＧＡＳ３９（ｓｐｙ０２６６；ｇｉ−１５６７４４４６）、ＧＡＳ４０（ｓｐｙ０２６９；ｇｉ−１５６７４４４９）、ＧＡＳ４２（ｓｐｙ０２８７；ｇｉ−１５６７４４６１）、ＧＡＳ４５（Ｍ５００５＿ｓｐｙ０２４９；ｇｉ−７１９１００６３）、ＧＡＳ５７（ｓｐｙ０４１６；ｇｉ−１５６７４５４９）、ＧＡＳ５８（ｓｐｙ０４３０；ｇｉ−１５６７４５５６）、ＧＡＳ８４（ｓｐｙ１２７４；ｇｉ−１５６７５２２９）、ＧＡＳ９５（ｓｐｔ１７３３；ｇｉ−１５６７５５８２）、ＧＡＳ１１７（ｓｐｙ０４４８；ｇｉ−１５６７４５７１）、ＧＡＳ１３０（ｓｐｙ０５９１；ｇｉ−１５６７４６７７）、ＧＡＳ１３７（ｓｐｙ０６５２；ｇｉ−１５６７４７２０）、ＧＡＳ１５９（ｓｐｙ１１０５；ｇｉ−１５６７５０８８）、ＧＡＳ１９３（ｓｐｙ２０２５；ｇｉ−１５６７５８０２）、ＧＡＳ２０２（ｓｐｙ１３０９；ｇｉ−１５６７５２５８）、ＧＡＳ２１７（ｓｐｙ０９２５；ｇｉ−１５６７４９４５）、ＧＡＳ２３６（ｓｐｙ１１２６；ｇｉ−１５６７５１０６）、ＧＡＳ２５３（ｓｐｙ１５２４；ｇｉ−１５６７５４２３）、ＧＡＳ２７７（ｓｐｙ１９３９；ｇｉ−１５６７５７４２）、ＧＡＳ２９４（ｓｐｙ１１７３；ｇｉ−１５６７５１４５）、ＧＡＳ３０９（ｓｐｙ０１２４；ｇｉ−１５６７４３４１）、ＧＡＳ３６６（ｓｐｙ１５２５；ｇｉ−１５６７５４２４）、ＧＡＳ３７２（ｓｐｙ１６２５；ｇｉ−１５６７５５０１）、ＧＡＳ３８４（ｓｐｙ１８７４；ｇｉ−１５６７５６９３）、ＧＡＳ３８９（ｓｐｙ１９８１；ｇｉ−１５６７５７７２）、ＧＡＳ５０４（ｓｐｙ１７５１；ｇｉ−１５６７５６００）、ＧＡＳ５０９（ｓｐｙ１６１８；ｇｉ−１５６７５４９６）、ＧＡＳ２９０（ｓｐｙ１９５９；ｇｉ−１５６７５７５７）、ＧＡＳ５１１（ｓｐｙ１７４３；ｇｉ−１５６７５５９２）、ＧＡＳ５２７（ｓｐｙ１２０４；ｇｉ−１５６７５１６９）、ＧＡＳ５２９（ｓｐｙ１２８０；ｇｉ−１５６７５２３３）およびＧＡＳ５３３（ｓｐｙ１８７７；ｇｉ−１５６７５６９６）を含むが、これらに限定されない）、ＧＡＳ Ｍタンパク質のフラグメントの融合物（ＷＯ０２／０９４８５１号およびＤａｌｅ，Ｖａｃｃｉｎｅ（１９９９）１７：１９３−２００およびＤａｌｅ，Ｖａｃｃｉｎｅ １４（１０）：９４４−９４８に記載のものが含まれる）、フィブロネクチン結合タンパク質（Ｓｆｂ１）、連鎖球菌ヘム結合タンパク質（Ｓｈｐ）、およびストレプトリシンＳ（ＳａｇＡ）が含まれ得る。さらなるＧＡＳ抗原としては、ＧＡＳ６８（Ｓｐｙ０１６３；ｇｉ１３６２１４５６）、ＧＡＳ８４（Ｓｐｙ１２７４；ｇｉ１３６２２３９８）、ＧＡＳ８８（Ｓｐｙ１３６１；ｇｉ１３６２２４７０）、ＧＡＳ８９（Ｓｐｙ１３９０；ｇｉ１３６２２４９３）、ＧＡＳ９８（Ｓｐｙ１８８２；ｇｉ１３６２２９１６）、ＧＡＳ９９（Ｓｐｙ１９７９；ｇｉ１３６２２９９３）、ＧＡＳ１０２（Ｓｐｙ２０１６、ｇｉ１３６２３０２５）、ＧＡＳ１４６（Ｓｐｙ０７６３；ｇｉ１３６２１９４２）、ＧＡＳ１９５（Ｓｐｙ２０４３；ｇｉ１３６２３０４３）、ＧＡＳ５６１（Ｓｐｙ１１３４；ｇｉ１３６２２２６９）、ＧＡＳ１７９（Ｓｐｙ１７１８、ｇｉ１３６２２７７３）およびＧＡＳ６８１（ｓｐｙ１１５２；ｇｉ１３６２２２８）が挙げられる。
【００５１】
カタル球菌：モラクセラ抗原には、ＷＯ０２／１８５９５号およびＷＯ９９／５８５６２号で同定された抗原、外膜タンパク質抗原（ＨＭＷ−ＯＭＰ）、Ｃ抗原、および／またはＬＰＳが含まれる。
【００５２】
百日咳菌：百日咳抗原には、百日咳ホロトキシン（ｐｅｔｕｓｓｉｓ ｈｏｌｏｔｏｘｉｎ）（ＰＴ）および百日咳菌由来の繊維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）が含まれ、任意選択的に、パータクチンおよび／または凝集原２および３抗原との組み合わせも含まれる。
【００５３】
黄色ブドウ球菌：黄色ブドウ球菌抗原には、非毒性組換え緑膿菌外毒素Ａと任意選択的に接合した黄色ブドウ球菌５型および８型莢膜多糖類（ＳｔａｐｈＶＡＸ（商標）など）または表面タンパク質由来の抗原、インベイシン（ロイコシジン、キナーゼ、ヒアルロニダーゼ）、食細胞の貪食を阻害する表面因子（莢膜、プロテインＡ）、カロテノイド、カタラーゼ産物、プロテインＡ、凝固酵素、凝固因子、および／または真核生物細胞膜を溶解する膜損傷毒素（任意選択的に解毒した）（ヘモリシン、ロイコトキシン、ロイコシジン）が含まれる。
【００５４】
表皮ブドウ球菌：表皮ブドウ球菌抗原には、粘液結合抗原（ＳＡＡ）が含まれる。
【００５５】
破傷風菌（破傷風）：破傷風抗原には、本発明の組成物と接合した担体タンパク質として使用されることが好ましい破傷風トキソイド（ＴＴ）が含まれる。
【００５６】
ジフテリア菌（Ｃｏｒｎｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）（ジフテリア）：ジフテリア抗原には、好ましくは解毒されたジフテリア毒素（ＣＲＭ１９７など）が含まれる。さらに、ＡＤＰリボシル化を調整するか、阻害するか、これに関連することができる抗原は、本発明の組成物との組み合わせ／同時投与／接合が意図される。担体タンパク質としてジフテリアトキソイドを使用することができる。
【００５７】
インフルエンザ菌Ｂ（Ｈｉｂ）：Ｈｉｂ抗原には、Ｈｉｂ糖類抗原が含まれる。
【００５８】
緑膿菌：シュードモナス抗原には、内毒素Ａ、Ｗｚｚタンパク質、緑膿菌ＬＰＳ、より詳細にはＰＡＯ１から単離したＬＰＳ（Ｏ５血清型）、および／または外膜タンパク質（外膜タンパク質Ｆ（ＯｐｒＦ）が含まれる）（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００１ Ｍａｙ；６９（５）：３５１０−３５１５）が含まれる。
【００５９】
レジオネラ・ニューモフィラ。細菌毒素は、レジオネラ・ニューモフィラに由来し得る。
【００６０】
ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｂ群連鎖球菌）：Ｂ群連鎖球菌抗原には、ＷＯ０２／３４７７１号、ＷＯ０３／０９３３０６号、ＷＯ０４／０４１１５７号、またはＷＯ２００５／００２６１９号で同定されたタンパク質抗原または糖類抗原（タンパク質ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ２７６、およびＧＢＳ３２２、ならびに血清型Ｉａ、Ｉｂ、Ｉａ／ｃ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、およびＶＩＩＩ由来の糖類抗原が含まれる）が含まれる。
【００６１】
淋菌（Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）：ゴノレー抗原には、Ｐｏｒ（すなわち、ポリン）タンパク質（ＰｏｒＢ（Ｚｈｕら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００４）２２：６６０−６６９を参照のこと）など）、トランスフェリン結合タンパク質（ＴｂｐＡおよびＴｂｐＢ（Ｐｒｉｃｅら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００４）７１（１）：２７７−２８３を参照のこと）など）、混濁タンパク質（ｏｐａｃｉｔｙ ｐｒｏｔｅｉｎ）（Ｏｐａなど）、還元修飾性タンパク質（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ−ｍｏｄｉｆｉａｂｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）（Ｒｍｐ）、および外膜小胞（ＯＭＶ）調製物（Ｐｌａｎｔｅら、Ｊ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ（２０００）１８２：８４８−８５５を参照のこと、例えば、ＷＯ９９／２４５７８、ＷＯ９９／３６５４４、ＷＯ９９／５７２８０、ＷＯ０２／０７９２４３も参照のこと）が含まれる。
【００６２】
トラコーマクラミジア：トラコーマクラミジア抗原には、血清型Ａ、Ｂ、Ｂａ、およびＣ由来の抗原（トラコーマの作用因子、盲目の原因）、血清型Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３由来の抗原（性病性リンパ肉芽腫症に関連）、および血清型ＤからＫ由来の抗原が含まれる。トラコーマクラミジア抗原には、ＷＯ００／３７４９４号、ＷＯ０３／０４９７６２号、ＷＯ０３／０６８８１１号、またはＷＯ０５／００２６１９号で同定された抗原（ＰｅｐＡ（ＣＴ０４５）、ＬｃｒＥ（ＣＴ０８９）、ＡｒｔＪ（ＣＴ３８１）、ＤｎａＫ（ＣＴ３９６）、ＣＴ３９８、ＯｍｐＨ−ｌｉｋｅ（ＣＴ２４２）、Ｌ７／Ｌ１２（ＣＴ３１６）、ＯｍｃＡ（ＣＴ４４４）、ＡｔｏｓＳ（ＣＴ４６７）、ＣＴ５４７、Ｅｎｏ（ＣＴ５８７）、ＨｒｔＡ（ＣＴ８２３）、およびＭｕｒＧ（ＣＴ７６１）が含まれる）も含まれ得る。
【００６３】
梅毒トレポネーマ（梅毒）：梅毒抗原には、ＴｍｐＡ抗原が含まれる。
【００６４】
軟性下疳菌（軟性下疳の原因菌）：デュクレイ抗原には、外膜タンパク質（ＤｓｒＡ）が含まれる。
【００６５】
フェカリス菌またはフェシウム菌：抗原には、米国特許第６，７５６，３６１号に記載の三糖類反復または他の腸球菌由来の抗原が含まれる。
【００６６】
ピロリ菌：ピロリ菌抗原には、Ｃａｇ、Ｖａｃ、Ｎａｐ、ＨｏｐＸ、ＨｏｐＹ、および／またはウレアーゼ抗原が含まれる。
【００６７】
腐性ブドウ球菌（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ）：抗原には、腐性ブドウ球菌抗原の１６０ｋＤａ血球凝集素が含まれる。
【００６８】
エンテロコリチカ菌抗原には、ＬＰＳ（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００２ Ａｕｇｕｓｔ；７０（８）：４４１４）が含まれる。
【００６９】
大腸菌：大腸菌抗原は、毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）、腸管凝集性大腸菌（ＥＡｇｇＥＣ）、びまん付着性大腸菌（ＤＡＥＣ）、腸管病原性大腸菌（ＥＰＥＣ）、および／または腸管出血性大腸菌（ＥＨＥＣ）に由来し得る。
【００７０】
炭疽菌（炭疽病）：炭疽菌抗原は任意選択的に解毒されており、Ａ成分（致死因子（ＬＦ）および浮腫因子（ＥＦ））から選択することができ、その両方が、防御抗原（ＰＡ）として公知のＢ成分を共有することができる。
【００７１】
ペスト菌（ペスト）：ペスト抗原には、Ｆ１莢膜抗原（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００３ Ｊａｎ；７１（１））：３７４−３８３，ＬＰＳ（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．１９９９ Ｏｃｔ；６７（１０）：５３９５）、ペスト菌Ｖ抗原（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．１９９７ Ｎｏｖ；６５（１１）：４４７６−４４８２）が含まれる。
【００７２】
結核菌：結核抗原には、リポタンパク質、ＬＰＳ、ＢＣＧ抗原、抗原８５Ｂの融合タンパク質（Ａｇ８５Ｂ）および／または任意選択的にカチオン性脂質小胞中に配合されたＥＳＡＴ−６（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００４ Ｏｃｔｏｂｅｒ；７２（１０）：６１４８）、結核菌（Ｍｔｂ）イソクエン酸デヒドロゲナーゼ関連抗原（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００４ Ａｕｇ ２４；１０１（３４）：１２６５２）、および／またはＭＰＴ５１抗原（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００４ Ｊｕｌｙ；７２（７）：３８２９）が含まれる。
【００７３】
リケッチア属：抗原には、外膜タンパク質（外膜プロテインＡおよび／またはＢ（ＯｍｐＢ）が含まれる）（Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ．２００４ Ｎｏｖ １；１７０２（２）：１４５）、ＬＰＳ、および表面タンパク質抗原（ＳＰＡ）（Ｊ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．１９８９ Ｊｕｎ；２ Ｓｕｐｐｌ：８１）が含まれる。
【００７４】
リステリア菌。細菌抗原は、リステリア菌に由来し得る。
【００７５】
クラミジア・ニューモニエ：抗原には、ＷＯ０２／０２６０６号で同定された抗原が含まれる。
【００７６】
コレラ菌：抗原には、プロテイナーゼ抗原、ＬＰＳ（特に、コレラ菌ＩＩのリポ多糖類）、Ｏ１ Ｉｎａｂａ Ｏ−特異的多糖類、コレラ菌Ｏ１３９、ＩＥＭ１０８ワクチンの抗原（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００３ Ｏｃｔ；７１（１０）：５４９８−５０４）、および／または閉鎖帯毒素（Ｚｏｔ）が含まれる。
【００７７】
チフス菌（チフス熱）：抗原には、莢膜多糖類、好ましくは抱合体（Ｖｉ、すなわち、ｖａｘ−ＴｙＶｉ）が含まれる。
【００７８】
ライム病ボレリア（ライム病）：抗原には、リポタンパク質（ＯｓｐＡ、ＯｓｐＢ、ＯｓｐＣ、およびＯｓｐＤなど）、他の表面タンパク質（ＯｓｐＥ関連タンパク質（Ｅｒｐｓ）など）、デコリン結合タンパク質（ＤｂｐＡなど）、および抗原的に可変のＶＩタンパク質（Ｐ３９およびＰ１３に結合するタンパク質）（膜内在性タンパク質、Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００１ Ｍａｙ；６９（５）：３３２３−３３３４）、ＶｌｓＥ抗原変異タンパク質（Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９９９ Ｄｅｃ；３７（１２）：３９９７）など）が含まれる。
【００７９】
ジンジバリス菌：抗原には、ジンジバリス菌外膜タンパク質（ＯＭＰ）が含まれる。
【００８０】
クレブシエラ属：抗原には、ＯＭＰ（ＯＭＰ Ａが含まれる）または破傷風トキソイド任意選択的に接合した多糖類が含まれる。
【００８１】
さらなる本発明の細菌抗原は、上記のいずれかの莢膜抗原、多糖類抗原、またはタンパク質抗原であり得る。さらなる細菌抗原には、外膜小胞（ＯＭＶ）調製物も含まれ得る。さらに、抗原には、上記細菌のいずれかの生きたバージョン、弱毒化バージョン、および／または精製バージョンが含まれる。本発明の抗原は、グラム陰性細菌またはグラム陽性細菌に由来し得る。本発明の抗原は、好気性菌または嫌気性菌に由来し得る。
【００８２】
さらに、上記細菌由来糖類のいずれか（多糖類、ＬＰＳ、ＬＯＳ、またはオリゴ糖）を、別の作用因子または抗原（担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７など））と接合することができる。かかる接合は、米国特許第５，３６０，８９７号およびＣａｎ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１９８４ Ｍａｙ；６２（５）：２７０−５に記載のタンパク質上のアミノ基への糖類上のカルボニル部分の還元的アミド化によって生じる直接的接合であり得る。あるいは、糖類を、リンカーを介して、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９９６およびＣＲＣ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ，１９９３に記載のスクシンアミドまたは他の結合などを介して接合することができる。
【００８３】
Ｂ．ウイルス抗原
本発明での使用に適切なウイルス抗原には、不活化（または死滅）ウイルス、弱毒化ウイルス、スプリットウイルス処方物、精製サブユニット処方物、ウイルスから単離、精製、または由来することができるウイルスタンパク質、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）が含まれる。ウイルス抗原は、細胞培養物または他の基質上に増殖したウイルスに由来し得る。あるいは、ウイルス抗原を、組換え的に発現することができる。ウイルス抗原には、好ましくは、その生活環の少なくとも１段階に細菌表面に曝露されるエピトープが含まれる。細菌抗原は、好ましくは、複数の血清型または分離株で保存される。細菌抗原には、下記の１つまたは複数の細菌由来の抗原および以下で同定した特定の抗原例が含まれる。
【００８４】
オルソミクソウイルス：ウイルス抗原は、オルソミクソウイルス（インフルエンザＡ型、Ｂ型、およびＣ型など）に由来し得る。オルソミクソウイルス抗原を、１つまたは複数のウイルスタンパク質（血球凝集素（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、核タンパク質（ＮＰ）、基質タンパク質（Ｍ１）、膜タンパク質（Ｍ２）、１つまたは複数の転写酵素成分（ＰＢ１、ＰＢ２、およびＰＡ）が含まれる）から選択することができる。好ましい抗原には、ＨＡおよびＮＡが含まれる。
【００８５】
インフルエンザ抗原は、世界的流行間期の（年間流行性）インフルエンザ株に由来し得る。あるいは、インフルエンザ抗原は、世界的流行およびその発生を引き起こす可能性のある株（すなわち、現在広まっている株における赤血球凝集素と比較して新規の赤血球凝集素を有するインフルエンザ株、トリ被験体中で病原性を示し、且つヒト集団において水平伝播する可能性があるインフルエンザ株、またはヒトに病原性を示すインフルエンザ株）に由来し得る。
【００８６】
パラミクソウイルス科のウイルス：ウイルス抗原は、パラミクソウイルス科のウイルス（ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ）、およびモルビリウイルス（麻疹）など）に由来し得る。
【００８７】
ニューモウイルス：ウイルス抗原は、ニューモウイルス（ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ウシＲＳウイルス、マウス肺炎ウイルス、およびシチメンチョウ鼻気管炎ウイルスなど）に由来し得る。好ましくは、ニューモウイルスはＲＳＶである。ニューモウイルス抗原を、１つまたは複数の以下のタンパク質（表面タンパク質（融合物（Ｆ）、糖タンパク質（Ｇ）、および小疎水性タンパク質（ＳＨ））、基質タンパク質ＭおよびＭ２、ヌクレオカプシドタンパク質Ｎ、Ｐ、およびＬならびに非構造タンパク質ＮＳ１およびＮＳ２が含まれる）から選択することができる。好ましいニューモウイルス抗原には、Ｆ、Ｇ、およびＭが含まれる。例えば、Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．２００４ Ｎｏｖ；８５（Ｐｔ１１）：３２２９）を参照のこと。ニューモウイルス抗原を、キメラウイルス中に配合するか、これに由来することができる。例えば、キメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶおよびＰＩＶの両方の成分を含むことができる。
【００８８】
パラミクソウイルス：ウイルス抗原は、パラミクソウイルス（パラインフルエンザウイルス１型〜４型（ＰＩＶ）、ムンプス、センダイウイルス、サルウイルス５、ウシパラインフルエンザウイルス、およびニューカッスル病ウイルスなど）に由来し得る。好ましくは、パラミクソウイルスはＰＩＶまたはムンプスである。パラミクソウイルス抗原を、１つまたは複数の以下のタンパク質から選択することができる：血球凝集素−ノイラミニダーゼ（ＨＮ）、融合タンパク質Ｆ１およびＦ２、核タンパク質（ＮＰ）、リンタンパク質（Ｐ）、巨大タンパク質（Ｌ）、および基質タンパク質（Ｍ）。好ましいパラミクソウイルスタンパク質には、ＨＮ、Ｆ１、およびＦ２が含まれる。パラミクソウイルス抗原を、キメラウイルス中に配合するか、これに由来することができる。例えば、キメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶおよびＰＩＶの両方の成分を含むことができる。市販のムンプスワクチンには、１価の形態または麻疹ワクチンおよび風疹ワクチン（ＭＭＲ）と組み合わせた弱毒化生ムンプスウイルスが含まれる。
【００８９】
モルビリウイルス：ウイルス抗原は、モルビリウイルス（麻疹ウイルスなど）に由来し得る。モルビリウイルス抗原を、１つまたは複数の以下のタンパク質から選択することができる：血球凝集素（Ｈ）、糖タンパク質（Ｇ）、融合因子（Ｆ）、巨大タンパク質（Ｌ）、核タンパク質（ＮＰ）、ポリメラーゼリンタンパク質（Ｐ）、および基質（Ｍ）。市販の麻疹ワクチンには、典型的にはムンプスおよび風疹（ＭＭＲ）と組み合わせた弱毒化生麻疹ウイルスが含まれる。
【００９０】
ピコルナウイルス：ウイルス抗原は、ピコルナウイルス（エンテロウイルス、ライノウイルス、ヘパルナウイルス、カルジオウイルス、およびアフトウイルスなど）に由来し得る。エンテロウイルス（ポリオウイルスなど）由来の抗原が好ましい。
【００９１】
エンテロウイルス：ウイルス抗原は、エンテロウイルス（ポリオウイルス１型１、２型、または３型）、コクサッキーＡウイルス１〜２２型および２４型、コクサッキーＢウイルス１〜６型、エコーウイルス（ＥＣＨＯ）１〜９型、１１〜２７型、および２９〜３４型、ならびにエンテロウイルス６８〜７１など）に由来し得る。好ましくは、エンテロウイルスはポリオウイルスである。エンテロウイルス抗原は、好ましくは、１つまたは複数の以下のキャプシドタンパク質から選択される：ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、およびＶＰ４。市販のポリオワクチンには、不活化ポリオワクチン（ＩＰＶ）および経口ポリオウイルスワクチン（ＯＰＶ）が含まれる。
【００９２】
ヘパルナウイルス：ウイルス抗原は、ヘパルナウイルス（Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）など）に由来し得る。市販のＨＡＶワクチンには、不活化ＨＡＶワクチンが含まれる。
【００９３】
トガウイルス：ウイルス抗原は、トガウイルス（ルビウイルス、アルファウイルス、またはアルテリウイルスなど）に由来し得る。ルビウイルス（風疹ウイルスなど）由来の抗原が好ましい。トガウイルス抗原を、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｃ、ＮＳＰ−１、ＮＳＰＯ−２、ＮＳＰ−３、またはＮＳＰ−４から選択することができる。トガウイルス抗原を、好ましくは、Ｅ１、Ｅ２、またはＥ３から選択する。市販の風疹ワクチンには、典型的にはムンプスワクチンおよび麻疹ワクチン（ＭＭＲ）と組み合わせた低温適応の生きたウイルスが含まれる。
【００９４】
フラビウイルス：ウイルス抗原は、フラビウイルス（ダニ媒介性脳炎（ＴＢＥ）、デング熱（１、２、３、または４型）、黄熱病、日本脳炎、ウエストナイル脳炎、セントルイス脳炎、ロシア春夏脳炎、ポワッサン脳炎など）に由来し得る。フラビウイルス抗原を、ＰｒＭ、Ｍ、Ｃ、Ｅ、ＮＳ−１、ＮＳ−２ａ、ＮＳ２ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ４ｂ、およびＮＳ５から選択することができる。フラビウイルス抗原を、好ましくは、ＰｒＭ、Ｍ、およびＥから選択する。市販のＴＢＥワクチンには、不活化ウイルスワクチンが含まれる。
【００９５】
ペスチウイルス：ウイルス抗原は、ペスチウイルス（ウシウイルス性下痢（ＢＶＤＶ）、ブタコレラ（ＣＳＦＶ）、またはボーダー病（ＢＤＶ）など）に由来し得る。
【００９６】
ヘパドナウイルス：ウイルス抗原は、ヘパドナウイルス（Ｂ型肝炎ウイルスなど）に由来し得る。ヘパドナウイルス抗原を、表面抗原（Ｌ、Ｍ、およびＳ）、コア抗原（ＨＢｃ、ＨＢｅ）から選択することができる。市販のＨＢＶワクチンには、表面抗原Ｓタンパク質を含むサブユニットワクチンが含まれる。
【００９７】
Ｃ型肝炎ウイルス：ウイルス抗原は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に由来し得る。ＨＣＶ抗原を、１つまたは複数のＥ１、Ｅ２、Ｅ１／Ｅ２、ＮＳ３４５ポリタンパク質、ＮＳ３４５−コアポリタンパク質、コア、および／または非構造領域由来のペプチド（Ｈｏｕｇｈｔｏｎら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ（１９９１）１４：３８１）から選択することができる。
【００９８】
ラブドウイルス：ウイルス抗原は、ラブドウイルス（リッサウイルス（狂犬病ウイルス）およびベシクロウイルス（ＶＳＶ）など）に由来し得る。ラブドウイルス抗原を、糖タンパク質（Ｇ）、核タンパク質（Ｎ）、巨大タンパク質（Ｌ）、非構造タンパク質（ＮＳ）から選択することができる。市販の狂犬病ウイルスワクチンは、ヒト二倍体細胞またはアカゲザル胎児肺細胞で成長した死滅ウイルスを含む。
【００９９】
カリシウイルス科；ウイルス抗原は、カルシウイルス科（ノーウォークウイルスおよびノーウォーク様ウイルス（ハワイウイルスおよびスノーマウンテンウイルスなど）など）に由来し得る。
【０１００】
コロナウイルス：ウイルス抗原は、コロナウイルス、ＳＡＲＳ、ヒト呼吸器コロナウイルス、トリ伝染性気管支炎（ＩＢＶ）、マウス肝炎ウイルス（ＭＨＶ）、およびブタ伝染性胃腸炎ウイルス（ＴＧＥＶ）に由来し得る。コロナウイルス抗原を、スパイク（Ｓ）、エンベロープ（Ｅ）、基質（Ｍ）、ヌクレオカプシド（Ｎ）、および血球凝集素−エステラーゼ糖タンパク質（ＨＥ）から選択することができる。好ましくは、コロナウイルス抗原は、ＳＡＲＳウイルスに由来する。ＳＡＲＳウイルス抗原は、ＷＯ０４／９２３６０号に記載されている。
【０１０１】
レトロウイルス：ウイルス抗原は、レトロウイルス（オンコウイルス、レンチウイルス、またはスプーマウイルスなど）に由来し得る。オンコウイルス抗原は、ＨＴＬＶ−１、ＨＴＬＶ−２、またはＨＴＬＶ−５に由来し得る。レンチウイルス抗原は、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２に由来し得る。レトロウイルス抗原を、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、ｔａｘ、ｔａｔ、ｒｅｘ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、ｖｐｕ、およびｖｐｒから選択することができる。ＨＩＶ抗原を、ｇａｇ（ｐ２４ｇａｇおよびｐ５５ｇａｇ）、ｅｎｖ（ｇｐ１６０およびｇｐ４１）、ｐｏｌ、ｔａｔ、ｎｅｆ、ｒｅｖ ｖｐｕ、ミニタンパク質（好ましくは、ｐ５５ ｇａｇおよびｇｐ１４０ｖ欠失）から選択することができる。ＨＩＶ抗原は、１つまたは複数の以下の株に由来し得る：ＨＩＶＩＩＩｂ、ＨＩＶＳＦ２、ＨＩＶＬＡＶ、ＨＩＶＬＡＩ、ＨＩＶＭＮ、ＨＩＶ−１ＣＭ２３５、ＨＩＶ−１ＵＳ４。
【０１０２】
レオウイルス：ウイルス抗原は、レオウイルス（オルトレオウイルス、ロタウイルス、オルビウイルス、またはコルティウイルスなど）に由来し得る。レオウイルス抗原を、構造タンパク質λ１、λ２、λ３、μ１、μ２、σ１、σ２、もしくはσ３、または非構造タンパク質σＮＳ、μＮＳ、もしくはσ１ｓから選択することができる。好ましいレオウイルス抗原は、ロタウイルスに由来し得る。ロタウイルス抗原を、ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４（または切断産物ＶＰ５およびＶＰ８）、ＮＳＰ１、ＶＰ６、ＮＳＰ３、ＮＳＰ２、ＶＰ７、ＮＳＰ４、またはＮＳＰ５から選択することができる。好ましいロタウイルス抗原には、ＶＰ４（または切断産物ＶＰ５およびＶＰ８）、およびＶＰ７が含まれる。
【０１０３】
パルボウイルス：ウイルス抗原は、パルボウイルス（パルボウイルスＢ１９など）に由来し得る。パルボウイルス抗原を、ＶＰ−１、ＶＰ−２、ＶＰ−３、ＮＳ−１、およびＮＳ−２から選択することができる。好ましくは、パルボウイルス抗原は、キャプシドタンパク質ＶＰ−２である。
【０１０４】
デルタ肝炎ウイルス（ＨＤＶ）：ウイルス抗原は、ＨＤＶ、特に、ＨＤＶ由来のδ−抗原（例えば、米国特許第５，３７８，８１４号を参照のこと）に由来し得る。
【０１０５】
Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）：ウイルス抗原は、ＨＥＶに由来し得る。
【０１０６】
Ｇ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）：ウイルス抗原は、ＨＧＶに由来し得る。
【０１０７】
ヒトヘルペスウイルス：ウイルス抗原は、ヒトヘルペスウイルス（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ６）、ヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ７）、およびヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ８）など）に由来し得る。ヒトヘルペスウイルス抗原を、最初期タンパク質（α）、初期タンパク質（β）、および後期タンパク質（γ）から選択することができる。ＨＳＶ抗原は、ＨＳＶ−１株またはＨＳＶ−２株に由来し得る。ＨＳＶ抗原を、糖タンパク質ｇＢ、ｇＣ、ｇＤ、およびｇＨ、融合タンパク質（ｇＢ）、または免疫回避タンパク質（ｇＣ、ｇＥ、またはｇＩ）から選択することができる。ＶＺＶ抗原を、コアタンパク質、ヌクレオカプシドタンパク質、テグメントタンパク質、またはエンベロープタンパク質から選択することができる。弱毒化生ＶＺＶワクチンは市販されている。ＥＢＶ抗原を、初期抗原（ＥＡ）タンパク質、ウイルスキャプシド抗原（ＶＣＡ）、および膜抗原（ＭＡ）の糖タンパク質から選択することができる。ＣＭＶ抗原を、キャプシドタンパク質、エンベロープ糖タンパク質（ｇＢおよびｇＨなど）、およびテグメントタンパク質から選択することができる。
【０１０８】
パポーバウイルス：抗原は、パポーバウイルス（パピローマウイルスおよびポリオーマウイルスなど）に由来し得る。パピローマウイルスには、ＨＰＶ血清型１、２、４、５、６、８、１１、１３、１６、１８、３１、３３、３５、３９、４１、４２、４７、５１、５７、５８、６３、および６５が含まれる。好ましくは、ＨＰＶ抗原は、血清型６、１１、１６、または１８に由来する。ＨＰＶ抗原を、キャプシドタンパク質（Ｌ１）および（Ｌ２）またはＥ１〜Ｅ７、またはその融合物から選択することができる。ＨＰＶ抗原を、好ましくは、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）に配合する。ポリオーマウイルス（Ｐｏｌｙｏｍｙａｖｉｒｕｓ）には、ＢＫウイルスおよびＪＫウイルスが含まれる。ポリオーマウイルス抗原を、ＶＰ１、ＶＰ２、またはＶＰ３から選択することができる。
【０１０９】
Ｖａｃｃｉｎｅｓ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｐｌｏｔｋｉｎ ａｎｄ Ｏｒｅｎｓｔｅｉｎ ｅｄ．２００４）；Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍｕｒｒａｙら、ｅｄ．２００２）；Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗ．Ｋ．Ｊｏｋｌｉｋ ｅｄ．１９８８）；Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｂ．Ｎ．Ｆｉｅｌｄｓ ａｎｄ Ｄ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ，ｅｄｓ．１９９１）（本発明の組成物と併せて意図される）に含まれる抗原、組成物、方法、および微生物がさらに提供される。
【０１１０】
Ｃ．真菌抗原
本発明で用いる真菌抗原は、１つまたは複数の下記の真菌に由来し得る。
【０１１１】
真菌抗原は、皮膚糸状菌（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈｙｔｒｅｓ）（エピデルモフィトン・フロッコーサム（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ ｆｌｏｃｃｕｓｕｍ）、ミクロスポルム・オドウィニ（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ａｕｄｏｕｉｎｉ）、ミクロスポルム・カニス（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｃａｎｉｓ）、ミクロスポルム・ディストルツム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｄｉｓｔｏｒｔｕｍ）、ミクロスポルム・エクイヌム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｅｑｕｉｎｕｍ）、ミクロスポルム・ジプスム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｇｙｐｓｕｍ）、ミクロスポルム・ナヌム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｎｕｍ）、トリコフィトン・コンセントリクム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒｉｃｕｍ）、トリコフィトン・エクイヌム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｅｑｕｉｎｕｍ）、トリコフィトン・ガリネ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｇａｌｌｉｎａｅ）、トリコフィトン・ジプセウム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｇｙｐｓｅｕｍ）、トリコフィトン・メグニニ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｇｎｉｎｉ）、トリコフィトン・メンタグロフィテス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ）、トリコフィトン・キンケアヌム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｑｕｉｎｃｋｅａｎｕｍ）、トリコフィトン・ルブルム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｒｕｂｒｕｍ）、トリコフィトン・シェーンレイニ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｓｃｈｏｅｎｌｅｉｎｉ）、トリコフィトン・トンスランス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｔｏｎｓｕｒａｎｓ）、トリコフィトン・ベルコスム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ）、Ｔ．ベルコスム・アルブム変種（Ｔ．ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ ｖａｒ．ａｌｂｕｍ）、ジスコイデス変種（ｖａｒ．ｄｉｓｃｏｉｄｅｓ）、オクラセイム変種（ｖａｒ．ｏｃｈｒａｃｅｕｍ）、トリコフィトン・ビオラセウム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｖｉｏｌａｃｅｕｍ）、および／またはトリコフィトン・ファビホルメ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｆａｖｉｆｏｒｍｅ）が含まれる）に由来し得る。
【０１１２】
真菌病原体は、アスペルギルス・フミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アスペルギルス・フラバス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ）、クロコウジカビ、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・テレウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ）、アスペルギルス・シドウィ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉ）、アスペルギルス・フラバタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖａｔｕｓ）、アスペルギルス・グラウクス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｌａｕｃｕｓ）、ブラストシゾマイセス・カピタタス（Ｂｌａｓｔｏｓｃｈｉｚｏｍｙｃｅｓ ｃａｐｉｔａｔｕｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・エノラーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ ｅｎｏｌａｓｅ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、カンジダ・グラブラタ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ）、カンジダ・パラプシローシス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）、カンジダ・ステラトイデア（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ）、カンジダ・クセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｕｓｅｉ）、カンジダ・パラクエセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｋｗｓｅｉ）、カンジダ・ルシタニエ（Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ）、カンジダ・シュードトロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、カンジダ・グイリエルモンジ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉ）、クラドスポリム・カリオニイ（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃａｒｒｉｏｎｉｉ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、ブラストミセス・デルマチディス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｄｉｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ゲオトリクム・クラバタム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃｌａｖａｔｕｍ）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、肺炎桿菌、南アメリカ分芽菌、ニューモシスチス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ）、ピシウムン・インシジオスム（Ｐｙｔｈｉｕｍｎ ｉｎｓｉｄｉｏｓｕｍ）、ピチロスポルム・オバール（Ｐｉｔｙｒｏｓｐｏｒｕｍ ｏｖａｌｅ）、酵母（Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓａｅ）、サッカロマイセス・ブラウディ、サッカロミセス・ポンベ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）、スケドスポリウム・アピオスペルム（Ｓｃｅｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ａｐｉｏｓｐｅｒｕｍ）、スポロトリクス・シェンキ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ）、トリコスポロン・ベイゲリ（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｂｅｉｇｅｌｉｉ）、トキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、ペニシリウム・マルネフェイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）、マラセジア（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ）属菌種、フォンセケア（Ｆｏｎｓｅｃａｅａ）属菌種、ワンギエラ（Ｗａｎｇｉｅｌｌａ）属菌種、スポロトリクス（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ）属菌種、バシジオボラス（Ｂａｓｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）属菌種、コニディオボラス（Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）属菌種、リゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）属菌種、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）属菌種、アブシディア（Ａｂｓｉｄｉａ）属菌種、モルチエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属菌種、クニンガメラ（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ）属菌種、サクセネア（Ｓａｋｓｅｎａｅａ）属菌種、アルテルナリア（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）属菌種、カーブラリア（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ）属菌種、ヘルミントスポリウム（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ）属菌種、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属菌種、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属菌種、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属菌種、アモノリニア（Ｍｏｎｏｌｉｎｉａ）属菌種、リゾクトニア（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）属菌種、ペシロマイセス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）属菌種、ピトマイセス（Ｐｉｔｈｏｍｙｃｅｓ）属菌種、およびクラドスポリウム（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ）属菌種に由来し得る。
【０１１３】
真菌抗原の産生プロセスは、当該分野で周知である（米国特許第６，３３３，１６４号を参照のこと）。好ましい方法では、その細胞壁が実質的に除去されているか少なくとも部分的に除去された真菌細胞から得ることができる不溶性画分から抽出および分離した可溶化画分を、プロセスが、生きた真菌細胞を得る工程；その細胞壁が実質的に除去されているか少なくとも部分的に除去された真菌細胞を得る工程；その細胞壁が実質的に除去されているか少なくとも部分的に除去された真菌細胞を破裂させる工程；不溶性画分を得る工程；ならびに不溶性画分から可溶化画分を抽出および分離する工程を含むという点で特徴づけた。
【０１１４】
Ｄ．ＳＴＤ抗原
本発明の組成物は、１つまたは複数の性感染症（ＳＴＤ）由来の抗原を含むことができる。かかる抗原は、ＳＴＤ（クラミジア、陰部ヘルペス、肝炎（ＨＣＶなど）、陰部疣贅、淋病、梅毒、および／または軟性下疳など）を予防または治療することができる（ＷＯ００／１５２５５号を参照のこと）。抗原は、１つまたは複数のウイルスまたは細菌のＳＴＤに由来し得る。本発明で用いるウイルスＳＴＤ抗原は、例えば、ＨＩＶ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、および肝炎（ＨＣＶ）に由来し得る。本発明で用いる細菌ＳＴＤ抗原は、例えば、淋菌、トラコーマクラミジア、梅毒トレポネーマ、軟性下疳菌、大腸菌、およびストレプトコッカス・アガラクチアに由来し得る。これらの病原体由来の特異的抗原の例は、上に記載している。
【０１１５】
Ｅ．呼吸器抗原
本発明の組成物は、呼吸器疾患を引き起こす病原体由来の１つまたは複数の抗原を含むことができる。例えば、呼吸器抗原は、呼吸器ウイルス（オルソミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ）、モルビリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、ＶＺＶ、およびコロナウイルス（ＳＡＲＳ）など）に由来し得る。呼吸器抗原は、呼吸器疾患を引き起こす細菌（肺炎連鎖球菌、緑膿菌、百日咳菌、結核菌、肺炎マイコプラズマ、クラミジア・ニューモニエ、炭疽菌、およびカタル球菌など）に由来し得る。これらの病原体由来の特異的抗原の例は、上に記載している。
【０１１６】
Ｆ．小児ワクチン抗原
本発明の組成物は、小児被験体での使用に適切な１つまたは複数の抗原を含むことができる。小児被験体は、典型的には、約３歳未満、約２歳未満、または約１歳未満である。小児抗原を、６ヶ月、１年、２年、または３年にわたって複数回投与することができる。小児抗原は、小児集団を標的にすることができるウイルスおよび／または小児集団が感染に感受性を示すウイルスに由来し得る。小児ウイルス抗原には、１つまたは複数のオルソミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよびムンプス）、モルビリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、および水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）由来の抗原が含まれる。小児細菌抗原には、１つまたは複数の肺炎連鎖球菌、ナイセリア・メニンギティディス、化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）、カタル球菌、百日咳菌、黄色ブドウ球菌、破傷風菌（破傷風）、ジフテリア菌（ジフテリア）、インフルエンザ菌Ｂ（Ｈｉｂ）、緑膿菌、ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｂ群連鎖球菌）、および大腸菌由来の抗原が含まれる。これらの病原体由来の特異的抗原の例は、上に記載している。
【０１１７】
Ｇ．高齢者または免疫無防備状態の個体での使用に適切な抗原
本発明の組成物は、高齢者または免疫無防備状態の個体での使用に適切な１つまたは複数の抗原を含むことができる。かかる個体に、より頻繁に、標的化抗原に対するその免疫応答を改良するためにより高い用量またはアジュバント化（ａｄｊｕｖａｎｔｅｄ）処方物でワクチン接種することが必要であり得る。高齢者または免疫無防備状態の個体での使用のために標的化することができる抗原には、１つまたは複数の以下の病原体由来の抗原が含まれる：ナイセリア・メニンギティディス、肺炎連鎖球菌、化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）、カタル球菌、百日咳菌、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、破傷風菌（破傷風）、ジフテリア菌（ジフテリア）、インフルエンザ菌Ｂ（Ｈｉｂ）、緑膿菌、レジオネラ・ニューモフィラ、ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｂ群連鎖球菌）、フェカリス菌、ピロリ菌、肺炎クラミジア（Ｃｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、オルソミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよびムンプス）、モルビリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）。これらの病原体由来の特異的抗原の例は、上に記載している。
【０１１８】
Ｈ．青年期ワクチンでの使用に適切な抗原
本発明の組成物は、青年期被験体での使用に適切な１つまたは複数の抗原を含むことができる。青年期は、以前に投与した小児ワクチンの追加免疫が必要であり得る。青年期での使用に適切であり得る小児抗原は、上に記載されている。さらに、性行為の開始前に防御免疫または治療的免疫を確実にするために、ＳＴＤ病原体由来の抗原を投与するために青年期を標的化することができる。青年期での使用に適切であり得るＳＴＤ抗原は、上に記載されている。
【０１１９】
Ｉ．抗原処方物
本発明の他の態様では、吸着抗原を有する微粒子の生成方法を提供する。本方法は、（ａ）（ｉ）水、（ｉｉ）界面活性剤、（ｉｉｉ）有機溶媒、および（ｉｖ）ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルソエステル、ポリ酸無水物、およびポリシアノアクリラートからなる群より選択される生分解性ポリマーを含む混合物の分散によって乳濁液を準備する工程を含む。ポリマーは、典型的には、有機溶媒と比較して約１％〜約３％の濃度の混合物で存在する一方で、界面活性剤は、典型的には、約０．００００１：１〜約０．１：１（より典型的には、約０．０００１：１〜約０．１：１、約０．００１：１〜約０．１：１、または約０．００５：１〜約０．１：１）の水：水、界面活性剤：ポリマー比で混合物中に存在する、準備する工程、（ｂ）乳濁液から有機溶媒を除去する工程、および（ｃ）微粒子表面上に抗原を吸着させる工程を含む。一定の実施形態では、生分解性ポリマーは、有機溶媒と比較して約３％〜約１０％の濃度で存在する。
【０１２０】
本明細書中で使用するための微粒子を、滅菌可能で、非毒性を示し、生分解性を示す材料から形成するであろう。かかる材料には、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルソエステル、ポリ酸無水物、ＰＡＣＡ、およびポリシアノアクリラートが含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、本発明と共に使用するための微粒子は、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、特に、ポリ（ラクチド）（「ＰＬＡ」）またはＤ，Ｌ−ラクチドとグリコリドまたはグリコール酸とのコポリマー（ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリドなど）（「ＰＬＧ」または「ＰＬＧＡ」）、またはＤ，Ｌ−ラクチドとカプロラクトンとのコポリマーに由来する。微粒子は、種々の分子量、ＰＬＧなどのコポリマーの場合、種々のラクチド：グリコリド比を有する任意の種々の重合開始材料に由来し得、その選択は、同時投与される高分子に一部依存して、多くの選択肢があるであろう。これらのパラメータは、以下により完全に考察されている。
【０１２１】
さらなる抗原には、外膜小胞（ＯＭＶ）調製物も含まれ得る。
【０１２２】
さらなる処方方法および抗原（特に、腫瘍抗原）は、米国特許出願番号０９／５８１，７７２号に記載されている。
【０１２３】
Ｊ．抗原についての参考文献
以下の参考文献は、本発明の組成物と併せて有用な抗原を含む。
【０１２４】
【数１】
【０１２５】
【数２】
【０１２６】
【数３】
上記で引用した全ての特許、特許出願、および学術論文の内容は、本明細書中で完全に記載されているかのように参考として援用される。
【０１２７】
糖類抗原または炭水化物抗原を使用する場合、好ましくは、この抗原を担体タンパク質と接合して免疫原性を増強する。Ｒａｍｓａｙら（２００１）Ｌａｎｃｅｔ３５７（９２５１）：１９５−１９６；Ｌｉｎｄｂｅｒｇ（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ １７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ２８−３６；Ｂｕｔｔｅｒｙ ＆ Ｍｏｘｏｎ（２０００）Ｊ Ｒ Ｃｏｌｌ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ Ｌｏｎｄ ３４：１６３−１６８；Ａｈｍａｄ ＆ Ｃｈａｐｎｉｃｋ（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ １３：１１３−１３３，ｖｉｉ；Ｇｏｌｄｂｌａｔｔ（１９９８）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４７：５６３−５６７；欧州特許第０４７７５０８号；米国特許第５，３０６，４９２号；ＷＯ９８／４２７２１号；Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ（ｅｄｓ．Ｃｒｕｓｅら）ＩＳＢＮ ３８０５５４９３２６、特に、ｖｏｌ．１０：４８−１１４；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ＩＳＢＮ：０１２３４２３３６８ ｏｒ ０１２３４２３３５Ｘを参照のこと。好ましい担体タンパク質は、細菌毒素またはトキソイド（ジフテリアトキソイドまたは破傷風トキソイドなど）である。ＣＲＭ１９７ジフテリアトキソイドが特に好ましい。
【０１２８】
他の担体ポリペプチドには、髄膜炎菌外膜タンパク質（ＥＰ−Ａ−０３７２５０１号）、合成ペプチド（ＥＰ−Ａ−０３７８８８１号およびＥＰ−Ａ０４２７３４７号）、熱ショックタンパク質（ＷＯ９３／１７７１２号およびＷＯ９４／０３２０８号）、百日咳タンパク質（ＷＯ９８／５８６６８号およびＥＰ Ａ ０４７１１７７号）、インフルエンザ菌由来のタンパク質Ｄ（ＷＯ００／５６３６０号）、サイトカイン（ＷＯ９１／０１１４６号）、リンホカイン、ホルモン、成長因子、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素ＡまたはＢ（ＷＯ００／６１７６１号）、鉄取り込みタンパク質（ＷＯ０１／７２３３７号）などが含まれる。混合物がセリグラフ（ｓｅｒｉｇｒａｐｈ）ＡおよびＣの両方由来の莢膜糖類を含む場合、ＭｅｎＡ糖類：ＭｅｎＣ糖類の比（ｗ／ｗ）は１を超える（例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１、またはそれを超える）ことが好ましい場合がある。異なる糖類を、同型または異なる型の担体タンパク質に接合することができる。必要に応じて任意の適切なリンカーを使用した任意の適切な接合反応を使用することができる。
【０１２９】
必要に応じて、有毒タンパク質抗原を解毒することができる（例えば、化学的手段および／または遺伝子手段による百日咳毒素の解毒）。
【０１３０】
薬学的に許容可能な担体
本発明の組成物は、典型的には、上記成分に加えて、１つまたは複数の「薬学的に許容可能な担体」を含むであろう。これらには、担体自体が組成物を投与される個体に有害な抗体の産生を誘導しない任意の担体が含まれる。適切な担体は、典型的には、巨大でゆっくり代謝される高分子（タンパク質、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、高分子アミノ酸、アミノ酸コポリマー、および脂質凝集体（油滴またはリポソームなど）など）である。かかる担体は、当業者に周知である。組成物はまた、希釈剤（水、生理食塩水、グリセロールなど）を含むことができる。さらに、補助剤（湿潤剤または乳化剤およびｐＨ緩衝物質など）が存在し得る。薬学的に許容可能な成分の徹底的な考察は、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ．２０ｔｈ ｅｄ．，ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２で得られる。
【０１３１】
免疫調節薬
アジュバント
本発明のワクチンを、他の免疫調節薬と併せて投与することができる。特に、組成物は、通常、アジュバントを含むであろう。本発明と共に使用するためのアジュバントには、１つまたは複数の下記のアジュバントが含まれるが、これらに限定されない。
【０１３２】
Ａ．ミネラル含有組成物
本発明でのアジュバントとしての使用に適切なミネラル含有組成物は、ミネラル塩（アルミニウム塩およびカルシウム塩など）を含む。本発明は、水酸化物（例えば、オキシヒドロキシド）、リン酸塩（例えば、ヒドロキシホスフェート、オルトホスフェート）、硫酸塩などのミネラル塩（例えば、ｃｈａｐｔｅｒｓ８ ＆ ９ ｏｆ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ…（１９９５）ｅｄｓ．Ｐｏｗｅｌｌ ＆ Ｎｅｗｍａｎ．ＩＳＢＮ：０３０６４４８６７Ｘ．Ｐｌｅｎｕｍ．）または異なるミネラル化合物の混合物（例えば、リン酸塩アジュバントと水酸化物アジュバントとの混合物（任意選択的にリン酸塩が過剰））を含み、この化合物は任意の適切な形態（例えば、ゲル、血漿、無定形など）をとり、塩に吸着していることが好ましい。ミネラル含有組成物を、金属塩の粒子として処方することもできる（ＷＯ００／２３１０５号）。
【０１３３】
アルミニウム塩を、Ａｌ３＋の用量が０．２ｍｇ／用量と１．０ｍｇ／用量との間であるように本発明のワクチン中に含めることができる。
【０１３４】
１つの実施形態では、本発明で用いるアルミニウムベースのアジュバントは、ミョウバン（硫酸アルミニウムカリウム（ＡｌＫ（ＳＯ４）２））またはミョウバン誘導体（リン酸緩衝剤中で抗原とミョウバンとを混合し、その後に滴定し、水酸化アンモニウムまたは水酸化ナトリウムなどの塩基で沈殿させることによってインサイチュで形成したミョウバン誘導体など）である。
【０１３５】
本発明のワクチン処方で用いる別のアルミニウムベースのアジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバント（Ａｌ（ＯＨ）３）または結晶オキシ水酸化アルミニウム（ＡｌＯＯＨ）（優れた吸着剤であり、表面積が約５００ｍ２／ｇである）である。あるいは、リン酸アルミニウムアジュバント（ＡｌＰＯ４）またはヒドロキシリン酸アルミニウム（水酸化アルミニウムアジュバントのいくつかまたは全てのヒドロキシル基の代わりにリン酸基を含む）を提供する。本明細書中で提供する好ましいリン酸アルミニウムアジュバントは無定形であり、酸性、塩基性、および中性の媒質中に可溶である。
【０１３６】
別の実施形態では、本発明のアジュバントは、リン酸アルミニウムおよび水酸化アルミニウムの両方を含む。そのより特定の実施形態では、アジュバントは、水酸化アルミニウムよりも大量のリン酸アルミニウムを有する（２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、または９：１超などのリン酸アルミニウム：水酸化アルミニウムの重量比）。さらにより詳細には、ワクチン中のアルミニウム塩は、０．４〜１．０ｍｇ／ワクチン用量、０．４〜０．８ｍｇ／ワクチン用量、０．５〜０．７ｍｇ／ワクチン用量、または約０．６ｍｇ／ワクチン用量で存在する。
【０１３７】
一般に、好ましいアルミニウムベースのアジュバントまたは複数のアルミニウムベースのアジュバントの比率（リン酸アルミニウム：水酸化アルミニウムなど）を、抗原が所望のｐＨでアジュバントとして逆の電荷を有するように分子間の静電気引力を至適化することによって選択する。例えば、リン酸アルミニウムアジュバント（等電点＝４）はリゾチームを吸着するが、ｐＨ７．４でアルブミンを吸着しない。アルブミンが標的である場合、水酸化アルミニウムアジュバントを選択するであろう（ｉｅｐ １１．４）。あるいは、リン酸塩での水酸化アルミニウムの前処理によってその等電点が低下し、より塩基性の高い抗原に好ましいアジュバントとなる。
【０１３８】
Ｂ．油性乳濁液
本発明でのアジュバントとしての使用に適切な油性乳濁液組成物には、スクアレン−水乳濁液（ＭＦ５９（ミクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）を使用して、５％スクアレン、０．５％ＴＷＥＥＮ（商標）８０、および０．５％Ｓｐａｎ８５をサブミクロン粒子に処方したもの）など）が含まれる。ＷＯ９０／１４８３７号を参照のこと。Ｐｏｄｄａ，Ｖａｃｃｉｎｅ（２００１）１９：２６７３−２６８０；Ｆｒｅｙら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００３）２１：４２３４−４２３７も参照のこと。ＭＦ５９を、ＦＬＵＡＤ（商標）インフルエンザウイルス３価サブユニットワクチンにおけるアジュバントとして使用する。
【０１３９】
組成物中での使用に特に好ましいアジュバントは、サブミクロン水中油型乳濁液である。本明細書中での使用に好ましいサブミクロン水中油型乳濁液は、種々の量のＭＴＰ−ＰＥを任意選択的に含むスクアレン／水乳濁液（４〜５％ ｗ／ｖ スクアレン、０．２５〜１．０％ ｗ／ｖ ＴＷＥＥＮ（商標）８０□（ポリオキシエチレンソルビタン（ｐｏｌｙｏｘｙｅｌｔｈｙｌｅｎｅｓｏｒｂｉｔａｎ）モノオレアート、および／または０．２５〜１．０％ ＳＰＡＮ ８５（商標）（ソルビタントリオレアート）、および任意選択的にＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−ヒドロキシホスホホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）を含むサブミクロン水中油型乳濁液（例えば、「ＭＦ５９」として公知のサブミクロン水中油型乳濁液（国際公開番号ＷＯ９０／１４８３７号；米国特許第６，２９９，８８４号および同第６，４５１，３２５号、およびＯｔｔら、ｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．ａｎｄ Ｎｅｗｍａｎ，Ｍ．Ｊ．ｅｄｓ．）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９５，ｐｐ．２７７−２９６））など）である。ＭＦ５９は、４〜５％ ｗ／ｖ スクアレン（例えば、４．３％）、０．２５〜０．５％ ｗ／ｖ ＴＷＥＥＮ（商標）８０、および０．５％ ｗ／ｖ ＳＰＡＮ ８５（商標）を含み、任意選択的に種々の量のＭＴＰ−ＰＥを含み、これがＭｏｄｅｌ １１０Ｙミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ、Ｎｅｗｔｏｎ、ＭＡ）などのミクロフルイダイザーを使用してサブミクロン粒子に処方されている。例えば、ＭＴＰ−ＰＥは、約０〜５００μｇ／用量、より好ましくは０〜２５０μｇ／用量、最も好ましくは０〜１００μｇ／用量で存在し得る。本明細書中で使用される場合、用語「ＭＦ５９−０」は、ＭＴＰ−ＰＥを欠く上記サブミクロン水中油型乳濁液いう一方で、用語「ＭＦ５９−ＭＴＰ」は、ＭＴＰ−ＰＥを含む処方物を示す。例えば、「ＭＦ５９−１００」は、１００μｇ ＭＴＰ−ＰＥ／用量などを含む。ＭＦ６９（本明細書中で用いる別のサブミクロン水中油型乳濁液）は、４．３％ ｗ／ｖ スクアレン、０．２５％ ｗ／ｖ ＴＷＥＥＮ（商標）８０、および０．７５％ ｗ／ｖ ＳＰＡＮ ８５（商標）、および任意選択的にＭＴＰ−ＰＥを含む。さらに別のサブミクロン水中油型乳濁液は、ＳＡＦとしても公知のＭＦ７５であり、これは１０％スクアレン、０．４％ ＴＷＥＥＮ（商標）８０、５％プルロニックブロック重合体Ｌ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含み、サブミクロン乳濁液にミクロ流体化もされている。ＭＦ７５−ＭＴＰは、ＭＴＰ（１００〜４００μｇ ＭＴＰ−ＰＥ／用量など）を含むＭＦ７５処方物を示す。
【０１４０】
組成物で用いるサブミクロン水中油型乳濁液、その作製方法、および免疫賦活剤（ムラミルペプチドなど）は、ＷＯ９０／１４８３７号および米国特許第６，２９９，８８４号および同第６，４５１，３２５号に詳述されている。
【０１４１】
フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）およびフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）を、本発明でアジュバントとして使用することもできる。
【０１４２】
Ｃ．サポニン処方物
サポニン処方物を、本発明でアジュバントとして使用することもできる。サポニンは、ステロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドの異種群であり、広範な植物種の樹皮、葉、幹、根、さらに花弁中で見出される。キラヤサポナリア モリナ（Ｑｕｉｌｌａｌａｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａ）の木の樹皮から単離したサポニンは、アジュバントとして広く研究されている。スミラックス・オルナタ（Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔａ）（サルサパリラ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ））、シュッコンカスミソウ（Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ）（ブライドベール（ｂｒｉｄｅｓ ｖｅｉｌ））、およびサボンソウ（ソープルート（ｓｏａｐ ｒｏｏｔ））由来のサポニンを購入することもできる。サポニンアジュバント処方物には、精製処方物（ＱＳ２１など）および脂質処方物（ＩＳＣＯＭなど）が含まれる。
【０１４３】
サポニン組成物は、高速薄層クロマトグラフィ（ＨＰ−ＴＬＣ）および逆相高速液体クロマトグラフィ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を使用して精製されている。これらの技術を使用した特定の精製画分（ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−Ｂ、およびＱＨ−Ｃが含まれる）が同定されている。好ましくは、サポニンはＱＳ２１である。ＱＳ２１の生成方法は、米国特許第５，０５７，５４０号に開示されている。サポニン処方物はまた、コレステロールなどのステロールを含むこともできる（ＷＯ９６／３３７３９号を参照のこと）。
【０１４４】
サポニンとコレステロールとの組み合わせを使用して、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる固有の粒子を形成することができる。ＩＳＣＯＭは、典型的には、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンなどのリン脂質も含む。任意の公知のサポニンを、ＩＳＣＯＭで使用することができる。好ましくは、ＩＳＣＯＭは、１つまたは複数のＱｕｉｌ Ａ、ＱＨＡ、およびＱＨＣを含む。ＩＳＣＯＭは、ＥＰ０１０９９４２号、ＷＯ９６／１１７１１号、およびＷＯ９６／３３７３９号にさらに記載されている。任意選択的に、ＩＳＣＯＭＳは、さらなる界面活性剤を欠いていてもよい。ＷＯ００／０７６２１号を参照のこと。
【０１４５】
サポニンベースのアジュバント開発の概説を、Ｂａｒｒ，ら、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ（１９９８）３２：２４７−２７１に見出すことができる。Ｓｊｏｌａｎｄｅｒ，ら、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ（１９９８）３２：３２１−３３８も参照のこと。
【０１４６】
Ｄ．ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）
ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）を、本発明でアジュバントとして使用することもできる。これらの構造物は、一般に、任意選択的にリン脂質と組み合わせた、またはこれを用いて処方したウイルス由来の１つまたは複数のタンパク質を含む。これらは、一般に、非病原性で複製せず、一般に、任意の未変性のウイルスゲノムを含まない。ウイルスタンパク質を、組換え的に産生し、または全ウイルスから単離することができる。ビロソームまたはＶＬＰでの使用に適切なこれらのウイルスタンパク質には、インフルエンザウイルス（ＨＡまたはＮＡ）、Ｂ型肝炎ウイルス（コアタンパク質またはキャプシドタンパク質）、Ｅ型肝炎ウイルス、麻疹ウイルス、シンドビス・ウイルス、ロタウイルス、口蹄疫ウイルス、レトロウイルス、ノーウォークウイルス、ヒト乳頭腫ウイルス、ＨＩＶ、ＲＮＡ−ファージ、Ｑβ−ファージ（コートタンパク質など）、ＧＡ−ファージ、ｆｒ−ファージ、ＡＰ２０５ファージ、およびＴｙ（レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１など）由来のタンパク質が含まれる。ＶＬＰは、ＷＯ０３／０２４４８０号、ＷＯ０３／０２４４８１号、Ｎｉｉｋｕｒａら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２００２）２９３：２７３−２８０；Ｌｅｎｚら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１）５２４６−５３５５；Ｐｉｎｔｏ，ら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ（２００３）１８８：３２７−３３８；およびＧｅｒｂｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２００１）７５（１０）：４７５２−４７６０でさらに考察されている。ビロソームは、例えば、Ｇｌｕｃｋら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００２）２０：Ｂ１０−Ｂ１６でさらに考察されている。免疫増強する再構築されたインフルエンザビロソーム（ＩＲＩＶ）を、鼻腔内３価ＩＮＦＬＥＸＡＬ（商標）製品（Ｍｉｓｃｈｌｅｒ ＆ Ｍｅｔｃａｌｆｅ（２００２）Ｖａｃｃｉｎｅ ２０ Ｓｕｐｐｌ ５：Ｂ１７−２３）およびＩＮＦＬＵＶＡＣ ＰＬＵＳ（商標）製品におけるサブユニット抗原送達系として使用する。
【０１４７】
Ｅ．細菌または微生物誘導体
本発明での使用に適切なアジュバントには、以下などの細菌または微生物誘導体が含まれる。
【０１４８】
（１）腸内細菌リポ多糖類（ＬＰＳ）の非毒性誘導体
かかる誘導体には、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）が含まれる。３ｄＭＰＬは、３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａと４、５、または６アシル化鎖との混合物である。３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａの好ましい「小粒子」形態は、ＥＰ０６８９４５４号に開示されている。かかる３ｄＭＰＬの「小粒子」は、０．２２ミクロン膜で濾過滅菌するのに十分に小さい（ＥＰ０６８９４５４号）。他の非毒性ＬＰＳ誘導体には、モノホスホリル脂質Ａ模倣物（アミノアルキルグルコサミニドホスフェート誘導体（例えば、ＲＣ５２９）など）が含まれる。Ｊｏｈｎｓｏｎら（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ ９：２２７３−２２７８を参照のこと。
【０１４９】
（２）脂質Ａ誘導体
脂質Ａ誘導体には、大腸菌（ＯＭ−１７４）由来の脂質Ａ誘導体が含まれる。ＯＭ−１７４は、例えば、Ｍｅｒａｌｄｉら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００３）２１：２４８５−２４９１およびＰａｊａｋ，ら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００３）２１：８３６−８４２に記載されている。
【０１５０】
（３）免疫刺激性オリゴヌクレオチド
本発明でのアジュバントとしての使用に適切な免疫刺激性オリゴヌクレオチドには、ＣｐＧモチーフ（非メチル化シトシンの後にグアノシンを含み、リン酸結合によって結合した配列）を含むヌクレオチド配列が含まれる。回分配列またはポリ（ｄＧ）配列を含む細菌二本鎖ＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドも免疫刺激性を示すことが示されている。
【０１５１】
ＣｐＧは、ホスホロチオアート修飾物などのヌクレオチド修飾物／アナログが含まれ得、二本鎖または一本鎖であり得る。任意選択的に、グアノシンを、２’−デオキシ−７−デアザグアノシンなどのアナログと置換することができる。可能なアナログ置換の例については、Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００３）３１（９）：２３９３−２４００；ＷＯ０２／２６７５７号およびＷＯ９９／６２９２３号を参照のこと。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、Ｋｒｉｅｇ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００３）９（７）：８３１−８３５；ＭｃＣｌｕｓｋｉｅ，ら、ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（２００２）３２：１７９−１８５；ＷＯ９８／４０１００号；米国特許第６，２０７，６４６号；米国特許第６，２３９，１１６号および米国特許第６，４２９，１９９号でさらに考察されている。
【０１５２】
ＣｐＧ配列を、ＴＬＲ９（モチーフＧＴＣＧＴＴまたはＴＴＣＧＴＴなど）に指向することができる。Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ（２００３）３１（ｐａｒｔ ３）：６５４−６５８を参照のこと。ＣｐＧ配列は、Ｔｈ１免疫応答の誘導に特異的であり得るか（ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮなど）、Ｂ細胞応答の誘導により特異的であり得る（ＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮなど）。ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮおよびＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮは、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３）１７０（８）：４０６１−４０６８；Ｋｒｉｅｇ，ＴＲＥＮＤＳ ｉｎ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００２）２３（２）：６４−６５およびＷＯ０１／９５９３５号で考察されている。好ましくは、ＣｐＧはＣｐＧ−Ａ ＯＤＮである。
【０１５３】
好ましくは、５’末端が受容体認識のために接近することができるようにＣｐＧオリゴヌクレオチドを構築する。任意選択的に、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列をその３’末端で結合して、「イムノマー」を形成することができる。例えば、Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ら、ＢＢＲＣ（２００３）３０６：９４８−９５３；Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ（２００３）３１（ｐａｒｔ ３）：６６４−６５８；Ｂｈａｇａｔら、ＢＢＲＣ（２００３）３００：８５３−８６１、およびＷＯ０３／０３５８３６号を参照のこと。
【０１５４】
（４）ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒誘導体
細菌ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒誘導体を、本発明でアジュバントとして使用することができる。好ましくは、タンパク質は、大腸菌（すなわち、大腸菌熱不安定性エンテロトキシン（「ＬＴ」）、コレラ菌（「ＣＴ」）、または百日咳菌（「ＰＴ」）に由来する。粘膜アジュバントとしての解毒ＡＤＰ−リボシル化毒素の使用は、ＷＯ９５／１７２１１号に記載されており、非経口アジュバントとしてはＷＯ９８／４２３７５号に記載されている。好ましくは、アジュバントは、解毒ＬＴ変異体（ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２、およびＬＴＲ１９２Ｇなど）である。ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒誘導体（特に、ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２）のアジュバントとしての使用を、以下の参考文献で見出すことができる：Ｂｅｉｇｎｏｎ，ら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００２）７０（６）：３０１２−３０１９；Ｐｉｚｚａ，ら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００１）１９：２５３４−２５４１；Ｐｉｚｚａ，ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ（２０００）２９０（４−５）：４５５−４６１；Ｓｃｈａｒｔｏｎ−Ｋｅｒｓｔｅｎら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０００）６８（９）：５３０６−５３１３；Ｒｙａｎら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（１９９９）６７（１２）：６２７０−６２８０；Ｐａｒｔｉｄｏｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．（１９９９）６７（３）：２０９−２１６；Ｐｅｐｐｏｌｏｎｉら、Ｖａｃｃｉｎｅｓ（２００３）２（２）：２８５−２９３；およびＰｉｎｅら、（２００２）Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ（２００２）８５（１−３）：２６３−２７０。アミノ酸置換についての数値の基準は、好ましくは、Ｄｏｍｅｎｉｇｈｉｎｉら、Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ（１９９５）１５（６）：１１６５−１１６７に記載のＡＤＰ−リボシル化毒素のＡおよびＢサブユニットのアラインメントに基づく。
【０１５５】
Ｆ．生体接着剤および粘膜接着剤
生体接着剤および粘膜接着剤を、本発明でアジュバントとして使用することもできる。適切な生体接着剤には、エステル化ヒアルロン酸ミクロスフィア（Ｓｉｎｇｈら（２００１）Ｊ．Ｃｏｎｔ．Ｒｅｌｅ．７０：２６７−２７６）または粘膜接着剤（ポリアクリル酸の架橋誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、多糖類、およびカルボキシメチルセルロースなど）が含まれる。キトサンおよびその誘導体を、本発明でアジュバントとして使用することもできる。ＷＯ９９／２７９６０を参照のこと。
【０１５６】
Ｇ．微粒子
微粒子を、本発明でアジュバントとして使用することもできる。微粒子（すなわち、直径約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、より好ましくは直径約２００ｎｍ〜約３０μｍ、最も好ましくは直径約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）を、生分解性且つ非毒性の材料（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルソエステル、ポリ酸無水物、ポリカプロラクトンなど）（ポリ（ラクチドコグリコリド）が好ましい）から形成し、任意選択的に、負電荷の表面（例えば、ＳＤＳ）または正電荷の表面（例えば、ＣＴＡＢなどの陽イオン性界面活性剤）を有するように処理する。
【０１５７】
Ｈ．リポソーム
アジュバントとしての使用に適切なリポソーム処方物の例は、米国特許第６，０９０，４０６号、米国特許第５，９１６，５８８号、および欧州特許第０６２６１６９号に記載されている。
【０１５８】
Ｉ．ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル処方物
本発明での使用に適切なアジュバントには、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルが含まれる。ＷＯ９９／５２５４９号。かかる処方物には、さらに、オクトキシノール（ＷＯ０１／２１２０７）と組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤および少なくとも１つのさらなる非イオン性界面活性剤（オクトキシノールなど）と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステル界面活性剤（ＷＯ０１／２１１５２号）が含まれる。
【０１５９】
好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群から選択される：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ｌａｕｒｅｔｈ ９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテル、およびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル。
【０１６０】
Ｊ．ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ）
ＰＣＰＰ処方物は、例えば、Ａｎｄｒｉａｎｏｖら、“Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙｄｒｏｇｅｌ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ ｂｙ ｃｏａｃｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ａｑｕｅｏｕｓ ｐｏｌｙｐｈｏｐｈａｚｅｎｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ”，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（１９９８）１９（１−３）：１０９−１１５ ａｎｄ Ｐａｙｎｅら、“Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｌｅａｓｅ ｆｒｏｍ Ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｚｅｎｅ Ｍａｔｒｉｃｅｓ”，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗ（１９９８）３１（３）：１８５−１９６に記載されている。
【０１６１】
Ｋ．ムラミルペプチド
本発明でのアジュバントとしての使用に適切なムラミルペプチドの例には、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−ｌ−アラニル−ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、およびＮアセチルムラミル−ｌ−アラニル−ｄ−イソグルタミニル−ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミンＭＴＰ−ＰＥ）が含まれる。
【０１６２】
Ｌ．イミダゾキノリン化合物
本発明でのアジュバントとしての使用に適切なイミダゾキノリン化合物の例には、イミキモドおよびそのアナログが含まれ、Ｓｔａｎｌｅｙ，Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｄｅｒｍａｔｏｌ（２００２）２７（７）：５７１−５７７；Ｊｏｎｅｓ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ（２００３）４（２）：２１４−２１８；米国特許第４，６８９，３３８号、同第５，３８９，６４０号、同第５，２６８，３７６号、同第４，９２９，６２４号、同第５，２６６，５７５号、同第５，３５２，７８４号、同第５，４９４，９１６号、同第５，４８２，９３６号、同第５，３４６，９０５号、同第５，３９５，９３７号、同第５，２３８，９４４号、および同第５，５２５，６１２号にさらに記載されている。
【０１６３】
Ｍ．チオセミカルバゾン化合物
チオセミカルバゾン化合物、ならびに本発明でのアジュバントとしての使用に適切な全ての化合物の処方、製造、およびスクリーニング方法の例には、ＷＯ０４／６０３０８号に記載のものが含まれる。チオセミカルバゾンは、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの産生のためのヒト末梢血単核細胞の刺激で特に有効である。
【０１６４】
Ｎ．トリプタントリン化合物
トリプタントリン化合物、ならびに本発明でのアジュバントとしての使用に適切な全ての化合物の処方、製造、およびスクリーニング方法の例には、ＷＯ０４／６４７５９号に記載のものが含まれる。トリプタントリン化合物は、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの産生のためのヒト末梢血単核細胞の刺激で特に有効である。
【０１６５】
本発明はまた、上記で同定した１つまたは複数のアジュバントの態様の組み合わせを含むこともできる。例えば、以下のアジュバント組成物を、本発明で使用することができる。
【０１６６】
（１）サポニンおよび水中油型乳濁液（ＷＯ９９／１１２４１号）；
（２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）（ＷＯ９４／００１５３号を参照のこと）；
（３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；
（４）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ１２（任意選択的に、＋ステロール）（ＷＯ９８／５７６５９号）；
（５）３ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／または水中油型乳濁液との組み合わせ（欧州特許出願第０８３５３１８号、０７３５８９８号、および０７６１２３１号を参照のこと）；
（６）１０％スクアラン、０．４％Ｔｗｅｅｎ８０、５％プロニック−ブロック重合体Ｌ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含み、サブミクロン乳濁液にミクロ流体化されているか、ボルテックスしてより大きな粒子サイズの乳濁液を生成したＳＡＦ。
【０１６７】
（７）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０、およびモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコラート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）（好ましくは、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤＥＴＯＸ（商標））からなる群より選択される１つまたは複数の細菌細胞壁成分を含むＲＩＢＩ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）；および
（８）１つまたは複数のミネラル塩（アルミニウム塩など）＋ＬＰＳの非毒性誘導体（３ｄＰＭＬなど）。
【０１６８】
（９）１つまたは複数のミネラル塩（アルミニウム塩など）＋免疫刺激性オリゴヌクレオチド（ＣｐＧモチーフを含むヌクレオチド配列など）。
【０１６９】
Ｏ．ヒト免疫調節薬
本発明でアジュバントとしての使用に適切なヒト免疫調節薬には、サイトカイン（インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２など）、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子、および腫瘍壊死因子など）が含まれる。
【０１７０】
アルミニウム塩およびＭＦ５９は、注射用インフルエンザワクチンとの使用に好ましいアジュバントである。細菌毒素および生体接着剤は、粘膜由来ワクチン（経鼻用ワクチンなど）との使用に好ましいアジュバントである。
【０１７１】
上記で引用した全ての特許、特許出願、および学術論文の内容は、本明細書中で完全に記載されているかのように参考により組み込まれる。
【０１７２】
治療方法
本発明は、治療において使用するための、上記の組成物を提供する。本発明は、化膿連鎖球菌に対する免疫応答を誘導または増大させるための、上記の組成物を提供する。本発明は、上記組成物を使用して化膿連鎖球菌に対する免疫応答を誘導または増大させる方法を提供する。免疫応答は、好ましくは防御的であり、抗体および／または細胞−媒介性免疫（全身免疫および粘膜免疫が含まれる）が含まれ得る。免疫応答には、ブースター応答が含まれる。
【０１７３】
十代および小児（よちよち歩きの子どもおよび乳児が含まれる）に、予防的用途でワクチンを投与することができ、治療用ワクチンを、典型的には、十代または成人に投与する。小児使用を意図するワクチンを、例えば、安全性、投薬量、免疫原性などを評価する目的で成人に投与することもできる。
【０１７４】
本発明によって防止または治療することができる化膿連鎖球菌に起因する疾患には、咽頭炎（連鎖球菌性咽喉痛など）、猩紅熱、膿痂疹、丹毒、蜂巣炎、敗血、中毒性ショック症候群、壊死性筋膜炎、および後遺症（リウマチ熱および急性糸球体腎炎など）が含まれるが、これらに限定されない。組成物は、他の連鎖球菌（例えば、ＧＢＳ）に対しても有効であり得る。
【０１７５】
免疫応答の有効性を決定する試験
治療上の処置の有効性を評価する１つの方法は、本発明の組成物の投与後にＧＡＳ感染をモニタリングすることを含む。予防的治療の有効性を評価する１つの方法は、組成物の投与後に本発明の組成物における変異体ＳＬＯタンパク質に対する免疫応答をモニタリングすることを含む。
【０１７６】
本発明の免疫原性組成物の成分タンパク質の免疫原性を評価する別の方法は、組換え的に変異体ＳＬＯタンパク質を発現し、免疫ブロットによって患者の血清または粘膜分泌物をスクリーニングすることである。タンパク質と患者の血清との間の陽性反応は、患者が問題のタンパク質に対する免疫応答を事前に開始していることを示す（すなわち、タンパク質が免疫原である）。この方法を使用して、免疫優性タンパク質および／またはエピトープを同定することもできる。
【０１７７】
治療上の処置の有効性の別のチェック方法は、本発明の組成物の投与後のＧＡＳ感染のモニタリングを含む。予防的治療の有効性の１つのチェック方法は、組成物の投与後にＳＬＯに対する全身（ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ産生レベルのモニタリングなど）および粘膜（ＩｇＡ産生レベルのモニタリングなど）の両方の免疫応答をモニタリングすることを含む。典型的には、血清特異的抗体応答を免疫化後であるが攻撃誘発前に決定するのに対して、粘膜特異的抗体応答を免疫後且つ攻撃誘発後に決定する。
【０１７８】
本発明のワクチン組成物を、宿主（例えば、ヒト）投与前にインビトロおよびインビボ動物モデルで評価することができる。特に有用なマウスモデルには、腹腔内免疫化後に腹腔内攻撃誘発または鼻腔内攻撃誘発を行うマウスモデルが含まれる。
【０１７９】
本発明の免疫原性組成物の有効性を、動物モデル（例えば、モルモットまたはマウス）を免疫原性組成物で免疫化し、ＧＡＳによる攻撃誘発後に得られた保護のレベルを確認することによってインビボで決定することもできる。
【０１８０】
インビボ有効性モデルには、以下が含まれるが、これらに限定されない：（ｉ）ヒトＧＡＳ血清型を使用したマウス感染モデル、（ｉｉ）マウス適合ＧＡＳ株（特にマウスに病原性を示すＭ２３株など）を使用したマウスモデルであるマウス疾患モデル、および（ｉｉｉ）ヒトＧＡＳ分離株を使用した霊長類モデル。
【０１８１】
免疫応答は、ＴＨ１免疫応答およびＴＨ２免疫応答の一方または両方であり得る。免疫応答は、免疫応答の改良、増強、または変化であり得る。免疫応答は、全身免疫応答および粘膜免疫応答の一方または両方であり得る。好ましくは、免疫応答は、全身および／または粘膜の応答の増強である。
【０１８２】
全身免疫および／または粘膜免疫の増強は、ＴＨ１免疫応答および／またはＴＨ２免疫応答の増強を反映している。好ましくは、免疫応答の増強には、ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２ａおよび／またはＩｇＡ産生の増加が含まれる。
【０１８３】
好ましくは、粘膜免疫応答はＴＨ２免疫応答である。好ましくは、粘膜免疫応答には、ＩｇＡ産生の増加が含まれる。
【０１８４】
活性化ＴＨ２細胞は抗体産生を増強し、それにより、細胞外感染に対する応答で有益である。活性化ＴＨ２細胞は、１つまたは複数のＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０を分泌することができる。ＴＨ２免疫応答により、さらなる防御のためにＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡ、および記憶Ｂ細胞を産生することができる。
【０１８５】
ＴＨ２免疫応答には、ＴＨ２免疫応答に関連する１つまたは複数のサイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０など）の増加またはＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡ、および記憶Ｂ細胞産生の増加の１つまたは複数が含まれ得る。好ましくは、ＴＨ２免疫応答の増強には、ＩｇＧ１産生の増加が含まれるであろう。
【０１８６】
ＴＨ１免疫応答には、ＣＴＬｌの増加、ＴＨ１免疫応答に関連する１つまたは複数のサイトカイン（ＩＬ−２、ＩＦＮγ、およびＴＮＦβなど）の増加、活性化マクロファージの増加、ＮＫ活性の増加、またはＩｇＧ２ａ産生の増加の１つまたは複数が含まれ得る。好ましくは、ＴＨ１免疫応答の増強には、ＩｇＧ２ａ産生の増加が含まれるであろう。
【０１８７】
本発明の免疫原性組成物、特に、１つまたは複数の本発明の変異体ＳＬＯタンパク質を含む免疫原性組成物を、任意選択的にＴｈ１および／またはＴｈ２応答を誘発することができる免疫調節薬と共に、単独または他のＧＡＳ抗原と組み合わせて使用することができる。
【０１８８】
本発明はまた、１つまたは複数の免疫調節薬（ミネラル塩（アルミニウム塩など）など）およびＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドを含む免疫原性組成物を含む。最も好ましくは、免疫原性組成物には、アルミニウム塩およびＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドの両方を含む。あるいは、免疫原性組成物は、ＡＤＰリボシル化毒素（解毒ＡＤＰリボシル化毒素など）およびＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドを含む。好ましくは、１つまたは複数の免疫調節薬は、アジュバントを含む。アジュバントを、ＴＨ１アジュバントおよびＴＨ２アジュバントからなる群の１つまたは複数から選択することができる。
【０１８９】
本発明の組成物は、好ましくは、ＧＡＳ感染に有効に対処するために、細胞媒介性免疫および体液性免疫応答の両方を誘発するであろう。この免疫応答は、好ましくは、長期継続（例えば、中和）抗体および１つまたは複数のＧＡＳ抗原に曝露した場合に迅速に応答することができる細胞媒介性免疫を惹起するであろう。
【０１９０】
１つの特に好ましい実施形態では、免疫原性組成物は、中和抗体応答を誘発する変異体ＳＬＯタンパク質および細胞媒介性免疫応答を誘発する変異体ＳＬＯタンパク質を含む。このようにして、中和抗体応答は、最初のＧＡＳ感染を防止または阻害する一方で、増強されたＴｈ１細胞応答を誘発することができる細胞媒介性免疫応答はＧＡＳ感染のさらなる拡大を防止する。
【０１９１】
本発明の組成物を、一般に、患者に直接投与するであろう。本発明の組成物を、種々の異なる経路を介して単独または組成物の一部として投与することができる。一定の組成物は、より有効な免疫応答、好ましくはＣＭＩ応答が得られるか、副作用を誘導する可能性が低いか、投与がより容易になるように一定の経路を好み得る。
【０１９２】
送達方法には、非経口注射（例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、または間質注射）、直腸、経口（例えば、錠剤、スプレー）、膣、局所、経皮（例えば、ＷＯ９９／２７９６１号を参照のこと）、経皮（例えば、ＷＯ０２／０７４２４４号およびＷＯ０２／０６４１６２号を参照のこと）、鼻腔内（例えば、ＷＯ０３／０２８７６０号を参照のこと）、眼球、耳、および肺、または他の粘膜投与が含まれる。
【０１９３】
一例として、本発明の組成物を、全身経路、粘膜経路、または経皮経路を開始して投与することができるか、特定の組織に直接投与することができる。本明細書中で使用される場合、用語「全身投与」には、任意の非経口投与経路が含まれるが、これらに限定されない。特に、非経口投与には、皮下、腹腔内、静脈内、動脈内、筋肉内、または胸骨内注射、静脈内、動脈内、または腎臓透析注入技術が含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、全身非経口投与は筋肉内注射である。本明細書中で使用される場合、用語「粘膜投与」には、経口、鼻腔内、膣内、直腸内、気管内、腸、および眼投与が含まれるが、これらに限定されない。
【０１９４】
投薬治療は、単回投与計画または複数回投与計画であり得る。複数回投与を、初回免疫計画および／または追加免疫計画で使用することができる。複数回投与計画では、同一または異なる経路（例えば、非経口初回刺激および粘膜追加免疫、粘膜初回刺激および非経口追加免疫など）によって種々の回収で投与することができる。
【０１９５】
本発明の組成物を、種々の形態で調製することができる。例えば、組成物を、溶液または懸濁液のいずれかとして注射可能な組成物として調製することができる。注射前に溶液、懸濁液、または液体ビヒクルにするのに適切な固体形態（例えば、凍結乾燥組成物）を調製することもできる。経口投与のための組成物（錠剤もしくはカプセル、スプレーとして、またはシロップ（任意選択的に、風味づけする）としてなど）を調製することができる。肺投与のための組成物を、例えば、微粉またはスプレーを使用した吸入器として調製することができる。組成物を、坐剤またはペッサリーとして調製することができる。鼻、耳、または眼への投与のための組成物を、例えば、点滴薬として調製することができる。組成物は、患者への投与直前に組み合わせた組成物を再構成するようにデザインされたキット形態であり得る。かかるキットは、液体形態の１つまたは複数の変異体ＳＬＯまたは他の抗原および１つまたは複数の凍結乾燥抗原を含むことができる。
【０１９６】
ワクチンとして使用した免疫原性組成物は、免疫学的有効量の変異体ＳＬＯまたは他の抗原（または抗原をコードする核酸分子）、ならびに、必要に応じて、抗生物質などの任意の他の成分を含む。「免疫学的有効量」は、単回用量または一連の投与の一部として個体に投与した場合に測定可能な免疫応答を増加させるか臨床症状を防止または減少させる量である。
【０１９７】
本発明の免疫原性組成物を、抗生物質治療計画と組み合わせて投与することができる。１つの実施形態では、抗生物質を、本発明の抗原または１つまたは複数の本発明の変異体ＳＬＯタンパク質を含む組成物の投与前に投与する。
【０１９８】
別の実施形態では、抗生物質を、本発明の変異体ＳＬＯタンパク質の投与後に投与する。ＧＡＳ感染治療での使用に適切な抗生物質の例には、ペニシリンもしくはその誘導体またはクリンダマイシン、セファロスポリン、糖ペプチド（例えば、バンコマイシン）、およびシクロセリンが含まれるが、これらに限定されない。
【０１９９】
しかし、組成物中の活性剤の量は、治療を受ける個体の健康状態および生理的状態、年齢、治療を受ける個体の分類群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、個体の免疫系が抗体を合成する能力、所望の防御の程度、ワクチンの処方、治療を行う医師の医学的状況の評価、および他の関連要因に応じて変化する。この量は比較的広範であり、日常的試験によって決定することができる。
キット
本発明はまた、本発明の１つまたは複数の容器を含むキットを提供する。組成物は、個別の抗原と同様に、液体形態であり得るか凍結乾燥させることができる。組成物に適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、および試験管が含まれる。容器を、種々の材料（ガラスまたはプラスチックが含まれる）から形成することができる。容器は、滅菌アクセスポートを有することができる（例えば、容器は、静脈内注射用溶液のバッグまたは皮下注射針によって突き刺すことができるストッパを有するバイアルであり得る）。
【０２００】
キットは、さらに、薬学的に許容可能な緩衝剤（リン酸緩衝化生理食塩水、リンゲル液、またはデキストロース溶液など）を含む第２の容器を含む。キットはまた、末端利用者に有用な他の材料（他の緩衝剤、希釈剤、フィルタ、針、およびシリンジが含まれる）を含むことができる。キットはまた、別の活性剤（例えば、抗生物質）を含む第２または第３の容器を含むことができる。
【０２０１】
キットはまた、化膿連鎖球菌に対する免疫の誘導方法または化膿連鎖球菌感染の治療方法についての書面での指示を含む添付文書を含むことができる。添付文書は、未承認の添付文書であり得るか、食品医薬品局（ＦＤＡ）または他の規制機関によって承認された添付文書であり得る。
【０２０２】
本開示で引用した全ての特許、特許出願、および参考文献は、特に、本明細書中で参考として援用される。上記開示は、一般に、本発明を説明する。以下の特定の実施例を参照して、本発明をより完全に理解することができる。これらの実施例は、例示のみを目的とし、本発明の範囲を制限することを意図しない。
【実施例】
【０２０３】
（実施例１）
野生型および変異体ＳＬＯタンパク質のクローニング
野生型および変異体ＳＬＯタンパク質をコードする遺伝子を、表１に示されたＳＦ３７０ゲノム由来のプライマーを用いるＰＣＲによって増幅した。
【０２０４】
ＰＣＲ産物を、ＮｈｅＩ−ＸｈｏＩで消化し、その同じ酵素で切断されたｐｅｔ２４ｂ＋（Ｎｏｖａｇｅｎ）ベクターとライゲーションした。Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５αエレクトロコンピテント細胞を、ライゲーション反応物で形質転換した。ＬＢＰＴＫ培地を加え、２５０ｒｐｍで撹拌しながら、３７℃で１時間、インキュベートした後、５０μｇ／ｍｌのカナマイシンを含むＬＢＰＴＫプレート上に細菌を蒔いた。陽性コロニーをコロニーＰＣＲによって同定した。
【０２０５】
陽性コロニー由来のプラスミドを、５０μｇ／ｍｌのカナマイシンを含むＬＢＰＴＫ培地中での一晩の培養から調製し、ＤＮＡシーケンシングによって分析し、それによって、Ｔ７ポリメラーゼプロモーター下の予想される挿入遺伝子を確認した。クローニングされた遺伝子の最終のＤＮＡ配列およびタンパク質配列は、配列表に示されている。表２を参照されたい。
【０２０６】
【表１】
【０２０７】
【表２】
Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）（Ｎｏｖａｇｅｎ）コンピテント細胞を、正しい構築物で形質転換した。ＬＢＰＴＫ培地を加え、２５０ｒｐｍで撹拌しながら、３７℃で１時間、インキュベートした後、５０μｇ／ｍｌのカナマイシンを含むＬＢＰＴＫプレート上に細菌を蒔いた。ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｅｔ２４ｂ＋ＳＬＯ野生型タグなし細胞を、２５℃で増殖させ、１ｍＭのＩＰＴＧで誘導した。クローン発現を、ＳＤＳ ＰＡＧＥによって検証した（タグなし、図８Ａおよび８Ｂ；Ｈｉｓタグ付き、図９）。
【０２０８】
（実施例２）
Ｈｉｓタグ付きタンパク質の精製
Ｅ．ｃｏｌｉペレットを溶解緩衝液に懸濁し、室温で３０〜４０分間、混合した。溶解物を、３０〜４００００×ｇで、２０〜２５分間、遠心分離し、上清を、洗浄緩衝液Ａで平衡化したカラム（１ｍｌのＮｉ活性化キレート化セファロースファストフロー樹脂を含むＰｏｌｙ−Ｐｒｅｐ）に添加した。添加された樹脂を、洗浄緩衝液Ａで３回、洗浄緩衝液Ｂで３回、洗浄した。最終２ｍＭのＤＴＴを含むＥｐｐｅｎｄｏｒｆチューブにおいて溶出緩衝液でタンパク質を溶出した。全溶出タンパク質を、Ｂｒａｄｆｏｒｄ試薬で定量し、その後、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって分析した（図８および９）。
【０２０９】
緩衝液
溶解緩衝液：
１０ｍｌのＢ−ＰＥＲ（商標）（細菌タンパク質抽出試薬、Ｐｉｅｒｃｅカタログ７８２６６）
ＭｇＣｌ２ ０．１ｍＭの最終濃度
ＤＮＡｓｉ Ｉ（ＳｉｇｍａカタログＤ−４２６３） １００ユニット
リゾチーム（ＳｉｇｍａカタログＬ−７６５１） １ｍｇ／ｍｌの最終濃度
洗浄緩衝液Ａ：５０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、３００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ８．０
洗浄緩衝液Ｂ：２０ｍＭのイミダゾール、５０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、３００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ８．０
溶出緩衝液：２５０ｍＭのイミダゾール、５０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、３００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ８．０ 。
【０２１０】
（実施例３）
タグなしタンパク質の精製
溶解物調製
約８０〜１１０ｇの細菌培養ペレットを、６錠のＣＯＭＰＬＥＴＥ（登録商標）プロテアーゼ阻害剤、１０ｍｌの０．２Ｍ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．５（５ｍＭの最終濃度）、１０ｍｌの１００ｍｇ／ｍｌリゾチーム溶液、８ｍｌの１００００Ｋユニット／ｍｌデオキシリボヌクレアーゼＩ溶液、および１ｍｌの５０ｍＭ ＭｇＣｌ２溶液を追加した２００〜２８０ｍｌのＢ−ＰＥＲ（商標）試薬（Ｐｉｅｒｃｅ）に懸濁した。細菌懸濁液を６０分間、均一な懸濁液が得られるまで振盪することによって、細菌溶解を達成した。
【０２１１】
１３０００ｒｐｍ（２５４００×ｇ）での６０分間の遠心分離後、上清を、０．２２μｍのフィルターを用いて濾過し、１．８〜１．９ｍＳの伝導率が得られるまでＨ２Ｏで希釈する。ｐＨを８．０に調整した。タンパク質濃度を、Ｂｒａｄｆｏｒｄ法によって決定した。
【０２１２】
陰イオン交換クロマトグラフィー
上記のように処理された溶解物由来の上清を、３０ｍＭのＴＲＩＳ、ｐＨ８．０であらかじめ平衡化したＨＰ ５０／１０ Ｑセファロースカラム（約２００ｍｌ）に添加した。フロースルー（ｆｌｏｗ−ｔｈｒｏｕｇｈ）を収集した。ＧＡＳ２５タンパク質を含む画分をプールし、１０ｍＭのＮａホスフェート、ｐＨ６．８に対して透析した。タンパク質濃度を、Ｂｒａｄｆｏｒｄ法によって決定した。
緩衝液Ａ：３０ｍＭのＴＲＩＳ、ｐＨ８．０
緩衝液Ｂ：３０ｍＭのＴＲＩＳ、１ＭのＮａＣｌ、ｐＨ８．０
平衡および添加：０％Ｂ
勾配：０〜２５％Ｂの５ＣＶ−２５％Ｂの２ＣＶ
洗浄：１００％Ｂ ２ＣＶ＋３ＣＶ
流量：２０ｍｌ／分
画分容積：１４ｍｌ 。
【０２１３】
ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー
前に得たプールを、１０ｍＭのＮａホスフェート、ｐＨ６．８であらかじめ平衡化したＣＨＴ２０カラムに添加した。フロースルーを収集した。
緩衝液Ａ：１０ｍＭのＮａホスフェート、ｐＨ６．８
緩衝液Ｂ：５００ｍＭのＮａホスフェート、ｐＨ６．８
洗浄：８ＣＶ
洗浄：３０％Ｂ ６ＣＶ
勾配：３０〜１００％Ｂ（１０ＣＶ）
洗浄：１００％Ｂ
流量：５ｍｌ／分
画分容積：５ｍｌ 。
【０２１４】
画分アリコートを、還元条件および非還元条件下で１２％のＣｒｉｔｅｒｉｏｎゲルに添加した。ＧＡＳ２５タンパク質を含む画分をプールし、タンパク質濃度をＢｒａｄｆｏｒｄ法によって決定した。
【０２１５】
ゲル濾過クロマトグラフィー
収集されたプールを、１０ｍｌ未満の容積を得るためのＡｍｉｃｏｎフィルターを用いて濃縮した。濃縮した材料を、少なくとも３〜４カラム容積のＰＢＳで平衡化したＨｉＬｏａｄ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ２６／６０に添加した。
緩衝液：ＰＢＳ
溶出：アイソクラティック
流量：２．５ｍｌ／分
画分容積：５ｍｌ 。
【０２１６】
ＧＡＳ２５タンパク質を含む画分をプールし、タンパク質濃度をＢｒａｄｆｏｒｄによって決定した。タンパク質濃度のさらなる推定を、Ａｂｓ０．１％（＝１ ｇ／ｌ）を１．１１９とみなすＵＶ測定によって行った。タンパク質純度を、ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって分析する（図１１）。
【０２１７】
（実施例４）
溶血アッセイ
定量的溶血アッセイについてのプロトコール
毒素の段階希釈物を、ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡを用いて、Ｕ字形底の９６ウェルプレートに調製した。１ｍｌのヒツジ血液を、ＰＢＳ中で３回、洗浄し（３０００×ｇでの遠心分離で）、血球を５ｍｌのＰＢＳに懸濁した。等容積の懸濁液を、５０μｌの各毒素希釈物に加え、３７℃で３０分間、インキュベートした。水中のＴｒｉｔｏｎ（２％）を用いて、１００％溶血を得、ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡをネガティブコントロールとして用いた。その後、プレートを１，０００×ｇで５分間、遠心分離し、上清を、９６ウェル平底プレートへ慎重に移した。吸光度を５４０ｎｍで読み取った。
【０２１８】
野生型ＳＬＯおよびＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌを含むＥ．ｃｏｌｉ抽出物の比較
ＳＬＯ Ｐ４２７Ｌをコードする遺伝子を、ＳＦ３７０ Ｍ１ゲノムからＰＣＲを用いて増幅し、Ｈｉｓタグ付きタンパク質のＥ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１ＤＥ３における発現を可能にするベクターｐＥＴ２１ｂ＋へクローニングした。類似した量の野生型および変異したストレプトリシンＯタンパク質を発現するＥ．ｃｏｌｉの可溶性抽出物（図５参照）を用いて、溶血アッセイを行って、その２つの抗原の細胞溶解性を比較した。アッセイの結果は図２に示されており、変異したタンパク質は、毒性が野生型の多くとも１００分の１であることを実証している。
【０２１９】
精製された野生型ＳＬＯおよびＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌの比較
ＳＬＯ Ｐ４２７Ｌ変異体を、Ｈｉｓタグ付き組換えタンパク質についての精製標準手順に従って精製した（図３）。様々な濃度の精製された野生型（ｗｔ）および変異したタンパク質を用いて、溶血アッセイを繰り返し、細胞溶解活性の減少を確認した（図４）。
【０２２０】
Ｈｉｓタグ付きおよびタグなしの野生型ＳＬＯならびにＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌを含むＥ．ｃｏｌｉ抽出物の溶血活性
本発明者らは、Ｈｉｓタグなしの野生型組換えＳＬＯ（ｒＳＬＯ）（ＢＬ２１ ＤＥ３、Ｎｏｖａｇｅｎ Ｎｏ．７１３８２−ｐＥＴ２４）およびＨｉｓタグなしのＰ４２７Ｌ変異体ｒＳＬＯ（ＢＬ２１ ＤＥ３、Ｎｏｖａｇｅｎ Ｎｏ．７１３８２−ｐＥＴ２４）で形質転換されたＥ．ｃｏｌｉ溶解物の溶血活性を比較した。挿入なしのｐＥＴ２４で形質転換されたＥ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１ ＤＥ３（Ｎｏｖａｇｅｎ、Ｎｏ．７１３８２）をネガティブコントロールとして用いた。ポジティブコントロールは、水中Ｔｒｉｔｏｎ２％を含む低張溶液であった。ネガティブコントロールは、タンパク質希釈緩衝液（０．５％ＢＳＡを含むＰＢＳ、ｐＨ７．４）であった。
【０２２１】
溶血については、上清の５４０ｎｍにおける吸光度（Ａ５４０ｎｍ）を測定することによって、決定した。力価を、最大Ａ５４０ｎｍの５０％を有する希釈度（ｄｉｌｕｔｉｏｎ）として計算した。
【０２２２】
結果は、表３および４、ならびに図６に示されている。これらのデータは、同じ条件下で、変異体Ｐ４２７Ｌが、野生型ＳＬＯの１０００分の１の溶血性であることを示している。
【０２２３】
【表３】
【０２２４】
【表４】
野生型ＳＬＯと様々なＳＬＯ変異体の比較
野生型ＳＬＯの溶血活性を、いくつかの異なるＳＬＯ変異体の溶血活性と比較した。結果は、図１３および下記の表５に示されている。１溶血単位（ＨＵ）は、血球を２％Ｔｒｉｔｏｎで処理して得られた最大溶解の５０％を得るのに必要とされる毒素量として定義される。
【０２２５】
【表５】
タンパク質純度の違いによって、太字で示された変異体の溶血単位／ｍｇは過剰評価されている；しかしながら、（１）変異体Ｗ５３５Ｆは、変異体Ｃ５３０Ｇより溶血性が低いこと；（２）変異体Ｐ４２７Ｌは、野生型の約１０００分の１の溶血性であり、他の２つの変異体Ｗ５３５ＦおよびＣ５３０Ｇの約６分の１〜２５分の１の溶血性であること；ならびに（３）変異体ΔＡ２４８は、溶血性が野生型より確実に低いことは明らかである。
【０２２６】
コレステロールの効果
３０℃での細胞増殖、および２５℃での１ｍＭのＩＰＴＧでの誘導、およびＯＤ６００ｎｍ約０．４〜０．６の後に得られた、Ｅ．ｃｏｌｉ溶解物または２００ｍｇ／ｍｌのコレステロールを含むＥ．ｃｏｌｉ溶解物のＰＢＳ−ＢＳＡ０．５％における２〜５倍の段階希釈物を、それらの溶血活性についてアッセイした。誘導の３時間後、溶解緩衝液（Ｂ−ＰＥＲ溶液（ＰＩＥＲＣＥ）、１ｍＭのＭｇＣｌ２、１００Ｋユニット／ｍｌのデオキシリボヌクレアーゼ（Ｓｉｇｍａ）、およびリゾチーム（Ｓｉｇｍａ））で３０〜４０分間、細菌を溶解することによって得られた等容積のタンパク質調製物で、ＰＢＳ中２％ヒツジ赤血球溶液の５０マイクロリットルを処理した。その後、不溶性画分を遠心分離し（１５分間、２１０００×ｇ、４℃）、上清（Ｅ．ｃｏｌｉ溶解物）を、５ｍＭの最終濃度でＤＴＴを含む新しいＥｐｐｅｎｄｏｒｆチューブへ移した。
【０２２７】
この条件下で、コレステロールは、１００倍希釈率が用いられるまで、野生型も変異体形態ＳＬＯも阻害しなかった；したがって、変異体誘導溶解への効果はなかった。対照的に、野生型誘導溶解は大幅に低下した。ネガティブコントロールによって誘導された溶解は、コレステロールによって影響を及ぼされず、そのことにより、コレステロール誘導性阻害が特異的であることが示唆される。表６および図７参照。
【０２２８】
【表６】
（実施例５）
溶血の阻害
プロトコール
（アジュバントを含まない、またはアジュバントとしてミョウバンもしくはＭＦ５９（商標）を含む）野生型または変異体ＳＬＯタンパク質で免疫化したマウス由来の血清の２倍段階希釈物を、Ｕ字形底の９６ウェルプレートに、ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡを用いて調製した。必要に応じて、ＰＢＳで、またはアジュバントのみで免疫化したマウスの血清をネガティブコントロールとして用いた。ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ中の５０〜１００ｎｇ／ｍｌ（３．５〜７ＨＵ）の毒素溶液の等容積を加え、プレートを撹拌（８００ｒｐｍ）しながら室温で２０分間、インキュベートした。インキュベーション後、この溶液の５０ｍｌを新しい９６ウェルプレートに移し、（ＰＢＳ中で３回洗浄した）等容積のヒツジ赤血球懸濁液を加え、３７℃で３０分間、インキュベートした。その後、プレートを１，０００×ｇで１分間、遠心分離し、上清を９６ウェル平底プレートへ慎重に移し、吸光度を５４０ｎｍで読み取った。下記の結果において、阻害力価は、Ｔｒｉｔｏｎ誘導溶血を５０％低下させた血清希釈度として表される。
【０２２９】
野生型ＳＬＯ抗血清によるＳＬＯ溶血の阻害
抗野生型ＳＬＯ抗血清によるＳＬＯ溶血の阻害は、図１４、図１５、図１６、および表７〜９に示されている。抗ＳＬＯ血清力価は、１／７，０００〜１／１４，０００に含まれる（相加平均、１／１２，１６７±２，７１４）。ネガティブコントロール血清（フロイントアジュバント）力価は、１／３７５〜１／４，０００に含まれる（相加平均、１／１，８５４±１，３８４）。
【０２３０】
【表７】
【０２３１】
【表８】
【０２３２】
【表９】
野生型ＳＬＯ、化学的に解毒された野生型ＳＬＯ、およびＳＬＯ変異体の溶血活性の滴定
野生型ＳＬＯ、化学的に解毒された野生型ＳＬＯ、およびＳＬＯ変異体（Ｐ４２７Ｌ；Ｐ４２７Ｌ＋Ｗ５３５Ｆ）の溶血活性の滴定は、図１７〜１９および表１０に示されている。
【０２３３】
【表１０】
変異体ＳＬＯタンパク質に対する抗血清によるＳＬＯ溶血の阻害
変異体ＳＬＯタンパク質に対する抗血清によるＳＬＯ溶血の阻害は、図２０〜２２および表１１〜１３に示されている。５０ｎｇ／ｍｌ（３．５ＨＵ）の毒素を用いて、ＳＬＯ変異体Ｗ５３５−Ｐ４２７ＬについてのＳＬＯ溶血活性の５０％低下を得るのに必要とされる血清希釈度は、ミョウバンアジュバントを用いて１／１７，８６０であり、ＭＦ５９（商標）アジュバントを用いて１／７９９１である。ネガティブコントロール（アジュバントのみ）力価は、１／１，０００（ミョウバン）および１／１２５（ＭＦ５９（商標））である。
【０２３４】
【表１１】
【０２３５】
【表１２】
【０２３６】
【表１３】
野生型およびＳＬＯ変異体Ｗ５３５−Ｐ４２７Ｌについての、両方ともミョウバンアジュバントを用いてのＳＬＯ溶血活性の５０％低下を得るのに必要とされる血清希釈度の比較は、図２５に示されている。１００ｎｇ／ｍｌ（７ＨＵ）の毒素を用いて、ＳＬＯ変異体Ｗ５３５−Ｐ４２７ＬについてのＳＬＯ溶血活性の５０％低下を得るのに必要とされる血清希釈度は、１／８７５０＋／−１５００の血清希釈度と比較して、１／１２０００である。ネガティブコントロール（アジュバントのみ）希釈度は、約１／５０である。
【０２３７】
（実施例６）
インビボ防御実験
精製されたＳＬＯ Ｐ４２７Ｌタンパク質をフロイントアジュバントと共に、４０匹のマウスへ腹腔内に投与した。その後、３３４８ Ｍ１ ＧＡＳ菌株でマウスを鼻腔内で攻撃誘発した。表１４は、３つの別々の実験で得られたデータを報告し、１００％防御が全ての実験において一貫して達成されたことを示している。
【０２３８】
【表１４】
１０〜２０匹のマウスの群を２０μｇの組換えタンパク質で、０日目、２１日目、および３５日目に免疫化した。ネガティブコントロール群のマウスについては、用いられたＧＡＳ組換えタンパク質のバージョンに依存して、ＧＳＴのみかまたはＥ．ｃｏｌｉ夾雑物かのいずれかで免疫化した。３回目の免疫化から２週間後、血液試料を採取した。２〜３日後、１０８ｃｆｕ（５０μｌ）のＭ１ ３３４８ ＧＡＳ菌株で免疫化したマウスを鼻腔内で攻撃誘発した。マウス生存を１０〜１４日間、モニターした。異なる群から得られた免疫血清を、ＳＬＯ組換えタンパク質全体に関する免疫原性について試験した（ウェスタンブロット分析）。結果は表１５および１６に示されている。
【０２３９】
【表１５】
【０２４０】
【表１６】
ＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５ＦによるＧＡＳ Ｍ１菌株での鼻腔内攻撃誘発に対する防御
３０匹のマウスを、ＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５Ｆで、アジュバントとしてミョウバンかまたはＭＦ５９のいずれかと共に、腹腔内で免疫化し、ＧＡＳ Ｍ１菌株で鼻腔内攻撃誘発した。結果は図２６に示されている。ＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５Ｆおよびミョウバンで免疫化したマウスの７７パーセントが、（アジュバントのみで免疫化した）ネガティブコントロールマウスの３％と比較して、ＧＡＳ Ｍ１菌株での鼻腔内攻撃誘発に対して防御された。ＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５ＦおよびＭＦ５９で免疫化したマウスの９０パーセントが、（アジュバントのみで免疫化した）ネガティブコントロールマウスの１０％と比較して、ＧＡＳ Ｍ１菌株での鼻腔内攻撃誘発に対して防御された。これらの防御レベルは、野生型ＳＬＯでマウスを免疫化することによって得られたものに匹敵する。
【０２４１】
（実施例７）
プロトコール
ＳＬＯの静脈内注射。野生型ＳＬＯかまたは変異体ＳＬＯのいずれかのＰＢＳ中の溶液を、ＰＢＳ＋２ｍＭのＤＴＴの溶液中に希釈し、その後、マウスの尾静脈へ１００μｌを注射する。マウスを２〜３日間、観察する。野生型ＳＬＯの注射は、典型的には、数分以内で死をもたらす。
【０２４２】
インビボの致死性阻害アッセイ。免疫血清によって媒介される致死性阻害について、１０μｇ／マウスの野生型ＳＬＯ（ＰＢＳ、２ｍＭのＤＴＴ中１００μｇ／ｍｌの溶液）を、抗ＳＬＯ血清か、または（アジュバントのみで免疫化したマウスから得られた）コントロール血清かのいずれかと室温で、「転倒して」回転させながら２０分間、インキュベートする。インキュベーション後、その試料を、尾静脈への静脈内注射によってマウスに接種する。マウスを２〜３日間、観察する。
【０２４３】
野生型ＳＬＯおよび変異体ＳＬＯ Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５Ｆについての結果は表１７に示されている。
【０２４４】
【表１７】
インビボの急性毒性を、ポジティブコントロールとして１０μｇ／マウスの用量の野生型ＳＬＯ、ネガティブコントロールとしてフロイントアジュバントのみの注射を用いて評価した。１０μｇ／マウスの野生型ＳＬＯを、野生型ＳＬＯ抗血清かまたはコントロール血清のいずれかとインキュベートし、上記のようにマウスに接種した。結果は表１８に示されている。
【０２４５】
【表１８】
上記のように行われたもう一つの実験セットの結果は、表１９および２０に示されている。インビボの急性毒性を、５μｇ／マウスかまたは１０μｇ／マウスのいずれかの野生型ＳＬＯを用いて評価した。特に、１０μｇ／マウスの野生型ＳＬＯについては、ＧＡＳ２５ Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５ＦかまたはＰＢＳのみ（血清なし）かのいずれかで免疫化したマウス由来の血清とあらかじめインキュベートした。加えて、５μｇ／マウスの野生型ＳＬＯについては、ＧＡＳ２５ Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５Ｆで免疫化したマウス由来の血清か、またはネガティブコントロール血清としてＰＢＳとアジュバント（ミョウバン）で免疫化したマウス由来の血清のいずれかとあらかじめインキュベートした。
【０２４６】
結果は野生型ＳＬＯの致死用量は、抗ＳＬＯ Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５Ｆ血清によって中和されるが、同じ希釈度でのネガティブコントロール血清によっては中和されないことを示している。
【０２４７】
【表１９】
【０２４８】
【表２０】
（実施例８）
ＳＬＯ Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５Ｆでの免疫化は、野生型ＳＬＯの静脈内注射に対してマウスを防御する
５週齡のマウスを、野生型ＳＬＯかまたはＳＬＯ変異体Ｐ４２７Ｌ−Ｗ５３５Ｆかのいずれかで、アジュバントとしてミョウバンを用いて（２ｍｇ／ｍｌ水酸化アルミニウム中２０μｇのタンパク質）、腹腔内に３回（０日目、２１日目、および３５日目）免疫化した。アジュバントのみで免疫化したマウスをネガティブコントロールとして用いた。５５日目、マウスに、ＰＢＳ、２ｍＭのＤＴＴ中の野生型ＳＬＯの様々な濃度の溶液を静脈内注射し、少なくとも７２時間、モニターした。結果は表２１に示されている。
【０２４９】
【表２１】
５μｇ／マウスの野生型ＳＬＯは、アジュバントのみで免疫化したマウスに致死的である；これらのマウスは、ＳＬＯ注射から数分内に死亡した。しかしながら、２０μｇ／マウスの同じ野生型ＳＬＯ調製物においてさえ、野生型ＳＬＯまたはＰ４２７Ｌ−Ｗ５３５Ｆ ＳＬＯ変異体のいずれで免疫化したマウスも死亡しなかった。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ酸Ｐ４２７、Ｗ５３５、Ｃ５３０、Ａ２４８、およびＤ４８２からなる群より選択される１つまたは複数のアミノ酸位置にアミノ酸変化を含む精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質であって、該アミノ酸位置が配列番号１に従って番号付けられ、該変異体ＳＬＯタンパク質の溶血活性が野生型ＳＬＯに対して少なくとも５０％低下している、精製された変異体ＳＬＯタンパク質。
【請求項２】
配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の精製された変異体ＳＬＯタンパク質。
【請求項３】
担体タンパク質にカップリングされている、請求項１に記載の精製された変異体ＳＬＯタンパク質。
【請求項４】
前記担体タンパク質が、細菌毒素、細菌トキソイド、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外膜タンパク質、熱ショックタンパク質、百日咳タンパク質、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅタンパク質Ｄ、サイトカイン、リンホカイン、ホルモン、成長因子、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ毒素Ａ、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ毒素Ｂ、および鉄取り込みタンパク質からなる群より選択される、請求項３に記載の精製された変異体ＳＬＯタンパク質。
【請求項５】
請求項１に記載の変異体ＳＬＯタンパク質をコードする核酸分子。
【請求項６】
前記変異体ＳＬＯタンパク質が配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の核酸分子。
【請求項７】
配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号５７、配列番号５８、および配列番号５９に示されたコード配列の群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項５に記載の核酸分子。
【請求項８】
（ａ）以下：
（ｉ）アミノ酸Ｐ４２７、Ｗ５３５、Ｃ５３０、Ａ２４８、およびＤ４８２からなる群より選択される１つまたは複数のアミノ酸位置にアミノ酸変化を含む精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質であって、該アミノ酸位置が配列番号１に従って番号付けられ、該変異体ＳＬＯタンパク質の溶血活性が野生型ＳＬＯに対して少なくとも５０％低下している、精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質、ならびに
（ｉｉ）該精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質をコードする核酸分子
から選択される活性剤、ならびに
（ｂ）薬学的に許容可能な担体
を含むワクチン組成物。
【請求項９】
（ｉｉｉ）ＧＡＳ抗原、および
（ｉｖ）ＧＡＳ抗原をコードする核酸分子
からなる群より選択される１つまたは複数の活性剤をさらに含む、請求項８に記載のワクチン組成物。
【請求項１０】
小児用ワクチンで有用な活性剤をさらに含む、請求項８に記載のワクチン組成物。
【請求項１１】
前記活性剤が
（ａ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ、Ｃｈｏｒｉｎｅｂａｃｔｅｒｉｍ ｄｉｐｈｔｅｒｉａｅ、ＲＳウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、風疹ウイルス、およびロタウイルスのポリペプチド抗原からなる群より選択される病原体のポリペプチド抗原、ならびに
（ｂ）該ポリペプチド抗原をコードする核酸分子
からなる群より選択される、請求項１０に記載のワクチン組成物。
【請求項１２】
高齢者または免疫無防備状態の個体のためのワクチンで有用な第２の活性剤をさらに含む、請求項８に記載のワクチン組成物。
【請求項１３】
前記第２の活性剤が
（ａ）Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅａｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、インフルエンザウイルス、およびパラインフルエンザウイルスのポリペプチド抗原からなる群より選択される病原体のポリペプチド抗原、ならびに
（ｂ）該ポリペプチド抗原をコードする核酸分子
からなる群より選択される、請求項１２に記載のワクチン組成物。
【請求項１４】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓによる感染を治療または予防する方法であって、
（ａ）以下：
（ｉ）アミノ酸Ｐ４２７、Ｗ５３５、Ｃ５３０、Ａ２４８、およびＤ４８２からなる群より選択される１つまたは複数のアミノ酸位置にアミノ酸変化を含む精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質であって、該アミノ酸位置が配列番号１に従って番号付けられ、該変異体ＳＬＯタンパク質の溶血活性が野生型ＳＬＯに対して少なくとも５０％低下している、精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質、および
（ｉｉ）該精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質をコードする核酸分子
から選択される活性剤、ならびに
（ｂ）薬学的に許容可能な担体
を含むワクチン組成物を、それを必要としている個体に有効量投与する工程を含む、方法。
【請求項１５】
前記ワクチン組成物が、
（ｉｉｉ）ＧＡＳ抗原、および
（ｉｖ）ＧＡＳ抗原をコードする核酸分子
からなる群より選択される１つまたは複数の活性剤をさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
（ａ）請求項８から１３のいずれか一項に記載のワクチン組成物を含む容器、および
（ｂ）該組成物を用いてＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓによる感染を治療または予防するための使用説明書
を含むキット。
【請求項１７】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓによる感染の予防または治療のためのワクチンを作製する方法であって、
（ａ）以下：
（ｉ）アミノ酸Ｐ４２７、Ｗ５３５、Ｃ５３０、Ａ２４８、およびＤ４８２からなる群より選択される１つまたは複数のアミノ酸位置にアミノ酸変化を含む精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質であって、該アミノ酸位置が配列番号１に従って番号付けられ、該変異体ＳＬＯタンパク質の溶血活性が野生型ＳＬＯに対して少なくとも５０％低下している、精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質、ならびに
（ｉｉ）該精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質をコードする核酸分子
から選択される活性剤と、
（ｂ）薬学的に許容可能な担体と、
を組み合わせる工程を含む、方法。
【請求項１８】
前記活性剤が前記精製された変異体ＳＬＯタンパク質であり、該変異体ＳＬＯタンパク質を：
（ａ）該変異体ＳＬＯタンパク質をコードする発現構築物を含む宿主細胞を培養する工程、および
（ｂ）該変異体ＳＬＯタンパク質を回収する工程
を含む方法によって作製する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
（ｉｉｉ）ＧＡＳ抗原、および
（ｉｖ）ＧＡＳ抗原をコードする核酸分子
からなる群より選択される１つまたは複数の活性剤を薬学的に許容可能な担体と組み合わせる工程をさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓによる感染を治療または予防するための薬物の製造における活性剤の使用であって、該活性剤が、
（ｉ）アミノ酸Ｐ４２７、Ｗ５３５、Ｃ５３０、Ａ２４８、およびＤ４８２からなる群より選択される１つまたは複数のアミノ酸位置にアミノ酸変化を含む精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質であって、該アミノ酸位置が配列番号１に従って番号付けられ、該変異体ＳＬＯタンパク質の溶血活性が野生型ＳＬＯに対して少なくとも５０％低下している、精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質、ならびに
（ｉｉ）該精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質をコードする核酸分子
からなる群より選択される、使用。
【請求項２１】
ワクチンとして使用する、請求項１から４のいずれか一項に記載の精製された変異体ＳＬＯタンパク質、または請求項５から７のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項２２】
治療で使用する、請求項１から４のいずれか一項に記載の精製された変異体ＳＬＯタンパク質、請求項５から７のいずれか一項に記載の核酸分子、または請求項８から１３のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項２３】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓによる感染を治療または予防するための、請求項１から４のいずれか一項に記載の精製された変異体ＳＬＯタンパク質、請求項５から７のいずれか一項に記載の核酸分子、または請求項８から１３のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項１】
アミノ酸Ｐ４２７、Ｗ５３５、Ｃ５３０、Ａ２４８、およびＤ４８２からなる群より選択される１つまたは複数のアミノ酸位置にアミノ酸変化を含む精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質であって、該アミノ酸位置が配列番号１に従って番号付けられ、該変異体ＳＬＯタンパク質の溶血活性が野生型ＳＬＯに対して少なくとも５０％低下している、精製された変異体ＳＬＯタンパク質。
【請求項２】
配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の精製された変異体ＳＬＯタンパク質。
【請求項３】
担体タンパク質にカップリングされている、請求項１に記載の精製された変異体ＳＬＯタンパク質。
【請求項４】
前記担体タンパク質が、細菌毒素、細菌トキソイド、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外膜タンパク質、熱ショックタンパク質、百日咳タンパク質、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅタンパク質Ｄ、サイトカイン、リンホカイン、ホルモン、成長因子、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ毒素Ａ、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ毒素Ｂ、および鉄取り込みタンパク質からなる群より選択される、請求項３に記載の精製された変異体ＳＬＯタンパク質。
【請求項５】
請求項１に記載の変異体ＳＬＯタンパク質をコードする核酸分子。
【請求項６】
前記変異体ＳＬＯタンパク質が配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の核酸分子。
【請求項７】
配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号５７、配列番号５８、および配列番号５９に示されたコード配列の群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項５に記載の核酸分子。
【請求項８】
（ａ）以下：
（ｉ）アミノ酸Ｐ４２７、Ｗ５３５、Ｃ５３０、Ａ２４８、およびＤ４８２からなる群より選択される１つまたは複数のアミノ酸位置にアミノ酸変化を含む精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質であって、該アミノ酸位置が配列番号１に従って番号付けられ、該変異体ＳＬＯタンパク質の溶血活性が野生型ＳＬＯに対して少なくとも５０％低下している、精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質、ならびに
（ｉｉ）該精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質をコードする核酸分子
から選択される活性剤、ならびに
（ｂ）薬学的に許容可能な担体
を含むワクチン組成物。
【請求項９】
（ｉｉｉ）ＧＡＳ抗原、および
（ｉｖ）ＧＡＳ抗原をコードする核酸分子
からなる群より選択される１つまたは複数の活性剤をさらに含む、請求項８に記載のワクチン組成物。
【請求項１０】
小児用ワクチンで有用な活性剤をさらに含む、請求項８に記載のワクチン組成物。
【請求項１１】
前記活性剤が
（ａ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ、Ｃｈｏｒｉｎｅｂａｃｔｅｒｉｍ ｄｉｐｈｔｅｒｉａｅ、ＲＳウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、風疹ウイルス、およびロタウイルスのポリペプチド抗原からなる群より選択される病原体のポリペプチド抗原、ならびに
（ｂ）該ポリペプチド抗原をコードする核酸分子
からなる群より選択される、請求項１０に記載のワクチン組成物。
【請求項１２】
高齢者または免疫無防備状態の個体のためのワクチンで有用な第２の活性剤をさらに含む、請求項８に記載のワクチン組成物。
【請求項１３】
前記第２の活性剤が
（ａ）Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅａｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、インフルエンザウイルス、およびパラインフルエンザウイルスのポリペプチド抗原からなる群より選択される病原体のポリペプチド抗原、ならびに
（ｂ）該ポリペプチド抗原をコードする核酸分子
からなる群より選択される、請求項１２に記載のワクチン組成物。
【請求項１４】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓによる感染を治療または予防する方法であって、
（ａ）以下：
（ｉ）アミノ酸Ｐ４２７、Ｗ５３５、Ｃ５３０、Ａ２４８、およびＤ４８２からなる群より選択される１つまたは複数のアミノ酸位置にアミノ酸変化を含む精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質であって、該アミノ酸位置が配列番号１に従って番号付けられ、該変異体ＳＬＯタンパク質の溶血活性が野生型ＳＬＯに対して少なくとも５０％低下している、精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質、および
（ｉｉ）該精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質をコードする核酸分子
から選択される活性剤、ならびに
（ｂ）薬学的に許容可能な担体
を含むワクチン組成物を、それを必要としている個体に有効量投与する工程を含む、方法。
【請求項１５】
前記ワクチン組成物が、
（ｉｉｉ）ＧＡＳ抗原、および
（ｉｖ）ＧＡＳ抗原をコードする核酸分子
からなる群より選択される１つまたは複数の活性剤をさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
（ａ）請求項８から１３のいずれか一項に記載のワクチン組成物を含む容器、および
（ｂ）該組成物を用いてＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓによる感染を治療または予防するための使用説明書
を含むキット。
【請求項１７】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓによる感染の予防または治療のためのワクチンを作製する方法であって、
（ａ）以下：
（ｉ）アミノ酸Ｐ４２７、Ｗ５３５、Ｃ５３０、Ａ２４８、およびＤ４８２からなる群より選択される１つまたは複数のアミノ酸位置にアミノ酸変化を含む精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質であって、該アミノ酸位置が配列番号１に従って番号付けられ、該変異体ＳＬＯタンパク質の溶血活性が野生型ＳＬＯに対して少なくとも５０％低下している、精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質、ならびに
（ｉｉ）該精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質をコードする核酸分子
から選択される活性剤と、
（ｂ）薬学的に許容可能な担体と、
を組み合わせる工程を含む、方法。
【請求項１８】
前記活性剤が前記精製された変異体ＳＬＯタンパク質であり、該変異体ＳＬＯタンパク質を：
（ａ）該変異体ＳＬＯタンパク質をコードする発現構築物を含む宿主細胞を培養する工程、および
（ｂ）該変異体ＳＬＯタンパク質を回収する工程
を含む方法によって作製する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
（ｉｉｉ）ＧＡＳ抗原、および
（ｉｖ）ＧＡＳ抗原をコードする核酸分子
からなる群より選択される１つまたは複数の活性剤を薬学的に許容可能な担体と組み合わせる工程をさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓによる感染を治療または予防するための薬物の製造における活性剤の使用であって、該活性剤が、
（ｉ）アミノ酸Ｐ４２７、Ｗ５３５、Ｃ５３０、Ａ２４８、およびＤ４８２からなる群より選択される１つまたは複数のアミノ酸位置にアミノ酸変化を含む精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質であって、該アミノ酸位置が配列番号１に従って番号付けられ、該変異体ＳＬＯタンパク質の溶血活性が野生型ＳＬＯに対して少なくとも５０％低下している、精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質、ならびに
（ｉｉ）該精製された変異体ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）タンパク質をコードする核酸分子
からなる群より選択される、使用。
【請求項２１】
ワクチンとして使用する、請求項１から４のいずれか一項に記載の精製された変異体ＳＬＯタンパク質、または請求項５から７のいずれか一項に記載の核酸分子。
【請求項２２】
治療で使用する、請求項１から４のいずれか一項に記載の精製された変異体ＳＬＯタンパク質、請求項５から７のいずれか一項に記載の核酸分子、または請求項８から１３のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項２３】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓによる感染を治療または予防するための、請求項１から４のいずれか一項に記載の精製された変異体ＳＬＯタンパク質、請求項５から７のいずれか一項に記載の核酸分子、または請求項８から１３のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【図１】
【図３】
【図５】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図２】
【図４】
【図６】
【図７】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【図９】
【図１０】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３−１】
【図２３−２】
【図２３−３】
【図２３−４】
【図２４−１】
【図２４−２】
【図２５】
【図２６】
【図３】
【図５】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図２】
【図４】
【図６】
【図７】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【図９】
【図１０】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３−１】
【図２３−２】
【図２３−３】
【図２３−４】
【図２４−１】
【図２４−２】
【図２５】
【図２６】
【公表番号】特表２０１１−５０７５００（Ｐ２０１１−５０７５００Ａ）
【公表日】平成２３年３月１０日（２０１１．３．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５３８９４６（Ｐ２０１０−５３８９４６）
【出願日】平成２０年１２月１８日（２００８．１２．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００８／００３７２５
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０８１２７４
【国際公開日】平成２１年７月２日（２００９．７．２）
【出願人】（５０４３８９９９１）ノバルティス アーゲー (806)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年３月１０日（２０１１．３．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１２月１８日（２００８．１２．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００８／００３７２５
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０８１２７４
【国際公開日】平成２１年７月２日（２００９．７．２）
【出願人】（５０４３８９９９１）ノバルティス アーゲー (806)
【Ｆターム（参考）】
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