本発明の一態様は、ｓｉＲＮＡとして有用であり、標的核酸に対するセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する２本鎖核酸に関し、該センス鎖は、１つ以上の修飾核酸塩基、またはアンチセンス鎖との１つ以上のミスマッチ塩基対形成を含有する。本発明の別の態様は、非天然核酸塩基を含む少なくとも１つのヌクレオシドを含む１本鎖オリゴヌクレオチドに関する。本発明の別の態様は、遺伝子サイレンシングの方法であって、それを必要とする哺乳動物にセンス鎖およびアンチセンス鎖を含有する治療有効量の２本鎖オリゴヌクレオチドを投与することを含み、センス鎖は、１つ以上の修飾核酸塩基、またはアンチセンス鎖との１つ以上のミスマッチ塩基対形成を含有する、方法に関する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
増加したＲＮＡｉサイレンシング活性を有する２本鎖ｉＲＮＡ剤であって、
ａ．標的遺伝子に相補的であるアンチセンス鎖と、
ｂ．前記アンチセンス鎖に相補的であり、前記標的切断部位に相当する領域に少なくとも１つの修飾核酸塩基を含む、センス鎖であって、前記修飾核酸塩基が、非天然核酸塩基であるか、一般核酸塩基であるか、または脱塩基性である、センス鎖と、
を含み、前記増加したＲＮＡｉサイレンシング活性が、ＲＮＡｉサイレンシングアッセイにおいてそれぞれのＩＣ_５０値を比較することによって決定される、対応する非修飾ｉＲＮＡ剤に対してである、ｉＲＮＡ剤。
【請求項２】
前記修飾核酸塩基を含むヌクレオチドが、２’−デオキシヌクレオチドである、請求項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項３】
前記修飾核酸塩基が、任意に置換されるジフルオロトリル、任意に置換されるインドリル、任意に置換されるピロリル、または任意に置換されるベンズイミダゾリルである、請求項または２に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項４】
前記修飾核酸塩基が、任意に置換されるジフルオロトリルであり、前記任意に置換されるジフルオロトリルは、２，４−ジフルオロトリルである、請求項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項５】
前記修飾核酸塩基が、任意に置換されるインドリルであり、前記任意に置換されるインドリルは、５−ニトロインドールである、請求項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項６】
前記ｉＲＮＡ剤が、前記対応する非修飾ｉＲＮＡ剤のＩＣ_５０値の約５０％以下のＩＣ_５０値を示す、請求項〜５のいずれか１項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項７】
前記ｉＲＮＡ剤が、前記対応する非修飾ｉＲＮＡ剤のＩＣ_５０値の約３３％以下のＩＣ_５０値を示す、請求項〜５のいずれか１項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項８】
前記ｉＲＮＡ剤が、前記対応する非修飾ｉＲＮＡ剤のＩＣ_５０値の約２０％以下のＩＣ_５０値を示す、請求項〜５のいずれか１項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項９】
前記ＩＣ_５０値が、インビトロシステムで測定される、請求項、７、または８に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１０】
前記ＩＣ_５０値が、インビボシステムで測定される、請求項６、７、または８に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１１】
前記修飾核酸塩基が、前記センス鎖の５’末端から切断部位領域の１位にある、請求項〜１０のいずれか１項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１２】
前記修飾核酸塩基が、前記センス鎖の５’末端から切断部位領域の２位にある、請求項〜１０のいずれか１項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１３】
前記修飾核酸塩基が、前記センス鎖の５’末端から切断部位領域の３位にある、請求項〜１０のいずれか１項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１４】
前記修飾核酸塩基が、前記センス鎖の５’末端から切断部位領域の４位にある、請求項〜１０のいずれか１項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１５】
増加したＲＮＡｉサイレンシング活性を有する２本鎖ｉＲＮＡ剤であって、
ａ．標的遺伝子に相補的であるアンチセンス鎖と、
ｂ．前記アンチセンス鎖に相補的であり、前記標的切断部位に相当する領域に前記アンチセンス鎖との１つまたは２つのミスマッチ塩基対形成を含む、センス鎖と、
を含み、前記増加したＲＮＡｉサイレンシング活性が、ＲＮＡｉサイレンシングアッセイにおいてそれぞれのＩＣ_５０値を比較することによって決定される、前記アンチセンス鎖との少なくとも１つ少ないミスマッチ塩基対形成を有する対応するｉＲＮＡ剤に対してである、ｉＲＮＡ剤。
【請求項１６】
前記ミスマッチが、前記センス鎖の５’末端から切断部位領域の１位にある、請求項５に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１７】
前記ミスマッチが、前記センス鎖の５’末端から切断部位領域の２位にある、請求項５に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１８】
前記ミスマッチが、前記センス鎖の５’末端から切断部位領域の３位にある、請求項５に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１９】
前記ミスマッチが、前記センス鎖の５’末端から切断部位領域の４位にある、請求項５に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項２０】
前記ミスマッチが、Ｇ：Ｇ、Ｇ：Ａ、Ｇ：Ｕ、Ｇ：Ｔ、Ａ：Ａ、Ａ：Ｃ、Ｃ：Ｃ、Ｃ：Ｕ、Ｃ：Ｔ、Ｕ：Ｕ、およびＵ：Ｔからなる群から選択される、請求項５〜１９のいずれか１項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項２１】
ミスマッチ対形成中の少なくとも１つの核酸塩基が、２’−デオキシ核酸塩基である、請求項５〜２０のいずれか１項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項２２】
前記２’−デオキシ核酸塩基が、前記センス鎖中にある、請求項２１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項２３】
前記センス鎖およびアンチセンス鎖が、それぞれ１５〜３０核酸塩基長である、請求項〜２２のいずれか１項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項２４】
前記センス鎖およびアンチセンス鎖が、それぞれ１９〜２５核酸塩基長である、請求項〜２２のいずれか１項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項２５】
前記センス鎖およびアンチセンス鎖が、それぞれ２１〜２３核酸塩基長である、請求項〜２２のいずれか１項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項２６】
前記センス鎖およびアンチセンス鎖が、それぞれ２１核酸塩基長である、請求項〜２２のいずれか１項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項２７】
前記ｉＲＮＡ剤が、少なくとも１つの終端に１本鎖オーバーハングを含む、請求項〜２２のいずれか１項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項２８】
前記１本鎖オーバーハングが、１つ、２つ、または３つの核酸塩基からな、請求項２７に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項２９】
細胞中の標的遺伝子の発現を減少させる方法であって、前記細胞を請求項１〜２８のいずれか１項に記載のｉＲＮＡ剤と接触させることを含む、方法。
【請求項３０】
前記ｉＲＮＡ剤が、２つの２１ヌクレオチド長の鎖を含み、前記鎖は、３’末端に２ヌクレオチドオーバーハングを有する、１９個の連続塩基対の２本鎖領域を形成し、前記切断部位領域は、前記センス鎖の５’末端からの９〜１２位に相当する、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項３１】
前記切断部位領域が、前記センス鎖の５’末端からの１０位または１１位に相当する、請求項３０に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項３２】
前記切断部位領域が、前記センス鎖の５’末端からの１０位に相当する、請求項３０に記載のｉＲＮＡ剤。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【公表番号】特表２０１１−５２８９１０（Ｐ２０１１−５２８９１０Ａ）
【公表日】平成２３年１２月１日（２０１１．１２．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５２０２１９（Ｐ２０１１−５２０２１９）
【出願日】平成２１年７月２４日（２００９．７．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０５１６４８
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０１１８９５
【国際公開日】平成２２年１月２８日（２０１０．１．２８）
【出願人】（５０６３３６７２８）アルニラム　ファーマスーティカルズ　インコーポレイテッド (13)
【氏名又は名称原語表記】ＡＬＮＹＬＡＭ　ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ，　ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】