タンパク質薬物の徐放性組成物
タンパク質薬物の徐放性組成物を開示する。組成物は、担体基質および担体基質に取り込まれたタンパク質薬物を含む。担体基質は本質的に、ヒアルロン酸またはその塩、アミノ酸、およびポリアルキルオキシドからなる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、担体基質および担体基質に取り込まれたタンパク質薬物を含んでなる徐放性組成物であって、担体基質が本質的に（ａ）ヒアルロン酸またはその塩、（ｂ）ポリアルキルオキシド、および（ｃ）アミノ酸からなる徐放性組成物に関する。本組成物により、長期間、好ましくは、１週間以上の生理的に活性な薬物の持続放出が可能になる。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質薬物は、生体内において高い生理活性および標的への高い特異性を有するので、様々な疾患を処置するのに有用であると報告されている。タンパク質薬物は、生体内における短い半減期および低い吸収率を有し、そしてそれが処置薬物としてのタンパク質薬物の利用可能性を制限していることも報告されている。タンパク質薬物は、通常、注射経路を介して患者に投与される。タンパク質薬物の患者への注射は、通常、痛みを伴う。注射されたタンパク質薬物の患者における半減期は、一般に、２〜４時間であり、患者は、毎日または一日おきに長期間、例えば１年以上、薬物を投与されることを必要とする。
【０００３】
タンパク質薬物の徐放性製剤が提案された。タンパク質薬物の徐放性製剤の開発の初期段階において、薬物を含有するリポソーム、マイクロカプセル、およびインプラントが提案された。しかしながら、これらの製剤は、製剤に含有されたタンパク質がその活性を失いやすく、かつ薬物の徐放を生じなかったので、満足できるものではなかった。タンパク質薬物を含有する高分子微粒子が提案されている。非生分解性高分子から形成された微粒子は、患者の体内で消化されず、ゆえに、時に、溶解されない残留物を取り出すための手術を必要とするという問題を有する。それらは生体にとって有害でもあり、薬物の徐放の制御は困難である。
【０００４】
非生分解性高分子の使用に関連する障害を克服するために、薬物が生分解性高分子内に封入された微粒子が提案されている。微粒子の生分解性高分子は、患者の体内においてゆっくり変性し、薬物が放出される。生分解性かつ生体適合性高分子として、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリホスファゼン、擬似ポリアミノ酸などの合成ポリエステルが利用されてきた。ＰＬＧＡなどのポリエステルから作られた微粒子は、１週間から１ヶ月間までの長期間、ペプチド薬物の徐放を生じる。しかしながら、ＰＬＧＡの疎水特性がタンパク質薬物の変性を引き起こし、そしてそれが薬物の生理活性を破壊するので、タンパク質薬物の徐放性製剤の生成におけるＰＬＧＡの使用は制限されていた。患者体内におけるＰＬＧＡ自体の変性は、酸を生じ、ゆえに微粒子のｐＨを低減するので、それはまたタンパク質薬物の変性および凝集を促進する。疎水性高分子を用いた微粒子の生成において一般に利用されている、有機溶媒の使用はまた、タンパク質薬物の不安定化を引き起こす。患者における高分子の比較的遅い消化はまた、外来物質を意識させる。
【０００５】
天然高分子から作られた徐放性製剤の使用も提案されてきた。ゼラチン、コラーゲン、キトサン、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、またはヒアルロン酸などの天然高分子は、水を吸収すると粘性ゲルを形成する。天然高分子のゲルは、タンパク質薬物を含む、薬物の徐放を生じる。しかしながら、ゲルの粘性および密度は、身体内部での高分子の消化およびゲルの希釈により、患者体内において速く低下するので、患者の身体に導入されたとき、ゲルは薬物を保持するその能力を容易に喪失する。従って、天然高分子ゲルは、満足する徐放を提供しない。
【０００６】
ヒアルロン酸は、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンおよびＤ−グルクロン酸で作られた天然の生分解性高分子量の高分子である。それは、生体内の種々の器官および組織において見られる。それは、眼の手術およびリウマチ処置において用いられる。徐放性製剤においてヒアルロン酸ゲルを使用することが試みられてきた。一般に、ヒアルロン酸ゲルの粘性が高ければ高いほど、タンパク質薬物の徐放を生み出すのにより効果的である。しかしながら、数％のヒアルロン酸ゲルを含有する組成物は、粘性が高くかつ難し過ぎて、注射によっては患者に導入されない。
【０００７】
他の天然高分子ゲル製剤のように、タンパク質薬物のヒアルロン酸ゲル製剤は、一度対象に導入されると、薬物の効果的な徐放をもたらさない。例えば、１％ ヒアルロン酸ゲルを含むインスリン製剤（特許文献１に記載）がウサギに注射された場合、グルコース血液レベル低下効果は、長くても注射後２４時間まで持続するものであった。特許文献２には、１．５％ヒアルロン酸および血漿タンパク質を含むインターフェロンの徐放性製剤が記載されている。インターフェロン製剤が対象に導入された場合、インターフェロンの血液レベルは、注射後２４時間以内にその開始時のレベルの１／１０まで急激に低下した。
【０００８】
ゲル製剤の代替として、スプレー乾燥により生成される、タンパク質薬物およびヒアルロン酸またはその塩を含む微粒子が提案されてきた。例えば、特許文献３には、スプレー乾燥を用いて、タンパク質薬物を含むヒアルロン酸微粒子を生成すること、前記微粒子をレシチンなどの親油性材料でコーティングすること、および前記コーティングされた微粒子を油中に分散させることにより製造された徐放性製剤が記載されている。コーティングされた微粒子は、水中油型エマルジョンに製剤されることも記載されている。インターフェロン−αのレシチンコート微粒子の水中油型エマルジョンがウサギに注射された場合、インターフェロン−αの血液レベルは長期間維持された。
【０００９】
上述のコーティング過程を撤廃するために、親油性材料が、ヒアルロン酸および有効成分を含有する溶液に分散されることができ、そして得られた溶液が乾燥（例えば、スプレー乾燥）の対象とされる（特許文献３）。
【００１０】
特許文献４には、制御された薬物放出速度を有する薬物組成物が開示されている。薬物組成物は、（ａ）生分解性、生体適合性、高分子量の物質および／または多価金属イオンまたは多価金属イオン源、および（ｂ）ヒアルロン酸またはその塩から形成されたマトリックス、および（ｃ）前記マトリックス中に成分として取り込まれた薬物を含む。成分（ａ）は、ゼラチン、カゼインナトリウム、アルブミン、塩化リゾチーム、ポリ−Ｌ−リジン、キトサン、Ｃａ２＋、Ａｌ３＋、およびＦｅ３＋を含む。薬物は、抗炎症薬物から関節炎治療剤まで、広範囲をカバーする。ヒアルロン酸またはその塩は、６００，０００〜２，０００，０００Ｄａ、特に、１，０００，０００〜２，０００，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。それは、タンパク質薬物の制御されたデリバリーを具体的に教示していない。特許文献４は、ヒアルロン酸またはその塩、アミノ酸、およびポリアルキルオキシドから本質的になる担体基質、および前記担体基質に取り込まれたタンパク質薬物を含み、タンパク質薬物の分子量（Ｄａ）対ポリアルキルオキシドの分子量（Ｄａ）の比が約１：０．５〜１：１０である、徐放性組成物を教示しない。
【００１１】
結論として、長期間の薬物の優れた徐放を示す一方、薬物の生理活性を保持している、タンパク質薬物の徐放性製剤の必要が依然として存在する。
【００１２】
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、ポリアルキルオキシドの一種である。低分子量のＰＥＧ（分子量１０００Ｄａ未満）は室温で液体であり、一方、高分子量のＰＥＧ（分子量１０００Ｄａ以上）は固体である。高分子量のＰＥＧは、可塑剤、座剤基剤、および親水性賦形剤として用いられてきた（非特許文献１）。低分子量のＰＥＧは、薬物組成物の溶媒またはビークルとして主に用いられてきた。低分子量のＰＥＧを安定剤として用いて、タンパク質薬物の液体製剤中のタンパク質薬物の結晶化または沈殿が予防されてきた（非特許文献２）。
【００１３】
液体形態中の低分子量のＰＥＧを、タンパク質の固体製剤のビークルとして用いることが提案された。例えば、特許文献５には、コラーゲンと混合されたＩＧＦ−１またはＢ−ｈＧＨなどのタンパク質が凍結乾燥され、粉砕されて粉末を生じ、次に、液体ＰＥＧに分散される方法が記載されている。特許文献６には、ＰＥＧの結晶インターフェロンのビークルとしての使用が記載されている。特許文献６によると、異なる分子量のＰＥＧの混合物が提案されている。例えば、それには、結晶インターフェロンの注射可能な徐放性組成物の生成におけるＰＥＧ３３５０およびＰＥＧ４００またはＰＥＧ４０，０００およびＰＥＧ５５０の混合物の使用が記載されている。分子量８０００Ｄａまたは３３５０ＤａのＰＥＧの使用も提案されている。しかしながら、特許文献６には、ヒアルロン酸またはその塩、アミノ酸およびポリアルキレンオキシドから本質的になる担体基質、および前記担体基質に取り込まれたタンパク質薬物を含み、前記タンパク質薬物の分子量（Ｄａ）対前記ポリアルキレンオキシドの分子量（Ｄａ）の比が約１：０．５〜１：１０である、徐放性製剤は、教示も開示もされていない。特許文献６により教示されるインターフェロン−αの徐放性組成物は、注射後４８時間までインターフェロン−αを放出した。
【００１４】
低分子量のＰＥＧをビークルとして含む薬物組成物は、薬物の徐放を短期間生じることが報告されてきた。例えば、特許文献７には、８０％ ＰＥＧ４００またはＰＥＧ３００溶液のソマトスタチンのビークルとしての使用が記載されている。３８％ ＰＥＧ４００溶液中に分散されたソマトスタチン溶液は、ソマトスタチンの徐放を４時間示した。特許文献８には、ＰＥＧ３００またはＰＥＧ６００を含む組成物からのタンパク質薬物の徐放が開示されている。容量４０％以上の高濃度のＰＥＧ３００は、注射部位の周りでの溶血作用を誘発し得るので、３０％未満のＰＥＧ３００を使用することがすすめられた（非特許文献１）。
【００１５】
【特許文献１】特開平１（１９８９）−２８７０４１号公報
【特許文献２】米国特許第５，４１６，０７１号明細書
【特許文献３】米国特許出願公開第２００３／００６４１０５号明細書
【特許文献４】米国特許第６，３７５，９８８号明細書
【特許文献５】米国特許第５，３８５，７３８号明細書
【特許文献６】米国特許第６，００４，５４９号明細書
【特許文献７】米国特許第４，０４１，１５５号明細書
【特許文献８】米国特許第６，０１１，０１１号明細書
【非特許文献１】Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、第２版、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（１９９４年）
【非特許文献２】Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、１８５、１２９−１８８頁（１９９９年）
【非特許文献３】Ｔｈｅ ＥＬＩＳＡ Ｇｕｉｄｅｂｏｏｋ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｊｏｈｎ Ｒ． Ｃｒｏｗｔｈｅｒ、２００１年
【非特許文献４】欧州薬局方「Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ａｌｆａ−２ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ」、ｌ８１２〜１８１５頁、２００５年、
【非特許文献５】Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、３７（２）、７５５〜７５８頁、（１９８１年）。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
技術的解決
担体基質および前記担体基質に取り込まれたタンパク質薬物を含んでなる徐放性組成物であって、前記担体基質が、（ａ）ヒアルロン酸またはその塩、（ｂ）ポリアルキルオキシド、および（ｃ）アミノ酸から本質的になり、前記タンパク質薬物の分子量（Ｄａ）対前記ポリアルキルオキシドの分子量（Ｄａ）の比が約１：０．５〜１：１０である、徐放性組成物。
【００１７】
本発明は、担体基質および前記担体基質に取り込まれた生理的に活性なタンパク質薬物を含んでなる徐放性組成物であって、前記担体基質が本質的に、前記タンパク質薬物の徐放を生じるのに十分な量のヒアルロン酸またはその塩、前記タンパク質薬物の徐放を生じるのに十分な量のポリアルキルオキシド、および前記タンパク質薬物の徐放を生じるのに十分な量のアミノ酸からなる徐放性組成物に関する。
【００１８】
本発明の組成物において、タンパク質薬物の分子量（Ｄａ）対ポリアルキルオキシドの分子量（Ｄａ）の比は、約１：０．５〜１：１０である。組成物は、好ましくは、タンパク質薬物の徐放をその有効な量またはそれより多い量で少なくとも７日間生じる。好ましくは、担体基質およびタンパク質薬物は、微粒子に形成され得る。微粒子は、１〜５００μｍの平均直径を有してもよい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
発明の形態
本発明の徐放性組成物に含有される担体基質は本質的に、ヒアルロン酸またはその塩、ポリアルキルオキシド、およびアミノ酸からなる。
【００２０】
本明細書で用いられる用語「担体基質」は、薬物の取り込みおよび徐放を可能にする基剤またはマトリックスを示す。担体基質は、組成物の乾燥重量に基づき約５０〜９９．９５重量％、好ましくは、約７０〜９９．９５重量％を占めてもよい。
【００２１】
本発明によると、ヒアルロン酸またはその塩、アミノ酸、およびポリアルキルオキシド間の物理的相互作用またはファン・デル・ワールス相互作用が、担体基質の形成をもたらす。ヒアルロン酸またはその塩、アミノ酸、およびポリアルキルオキシドから形成された微粒子の緻密な構造または緻密なテクスチャは、そこに取り込まれたタンパク質薬物の徐放を長期間生じることを可能にする。微粒子は、各成分間で形成された架橋結合または化学結合を有してもよい。この場合、必要ならば、架橋結合剤が用いられてもよい。架橋結合剤は、当業者に既知である。
【００２２】
本明細書で用いられる用語「本質的になる」は、担体基質が、ヒアルロン酸またはその塩、ポリアルキルオキシドおよびアミノ酸を必須成分として含有することを意味する。担体基質は、その徐放効果に実質的に作用しない他の非必須成分を含有してもよい。
【００２３】
本発明において用いられ得るヒアルロン酸は、遊離酸またはその塩であってもよい。塩は、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸アンモニウム、ヒアルロン酸カルシウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸亜鉛、およびヒアルロン酸コバルトを含み得るが、これらに限定されない。好ましくは、ヒアルロン酸ナトリウムが用いられ得る。ヒアルロン酸またはその塩は、単体で、または混合物として用いられてもよい。
【００２４】
抽出、精製、および測定の種々の方法を用いて、種々の分子量のヒアルロン酸が生成され得る。本発明において用いられるヒアルロン酸またはその塩は、１，０００，０００Ｄａ以上、好ましくは、３，０００，０００Ｄａ以上の分子量を有していてもよい。ヒアルロン酸またはその塩の分子量の上限はないが、現時点で、４，０００，０００〜６，０００，０００Ｄａまでのヒアルロン酸が市販されている。
【００２５】
ヒアルロン酸またはその塩は、組成物の乾燥重量に基づき５〜９０重量％、好ましくは、１０〜６０重量％、より好ましくは、２０〜５０重量％の量で本発明の組成物に取り込まれ得る。本発明の一実施形態において、本発明の組成物は、組成物の乾燥重量に基づき２０〜５０重量％の量で約３，０００，０００Ｄａの分子量のヒアルロン酸ナトリウムを含む。
【００２６】
本明細書で用いられる用語「乾燥重量」は、例えば、蒸発または濾過によって組成物から液体を除去することにより得られる固体重量を意味する。
【００２７】
本出願において用いられる用語「ポリアルキルオキシド」は、ポリアルキルオキシドおよびポリアルキレンオキシドを含む。それらは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、およびポリエチレンおよびポリプロピレングリコールの共重合体（例えば、ポロクサマー）により例示され得るが、これらに限定されない。それらは、単体で、または混合物として用いられてもよい。ポリアルキルオキシドは、好ましくは、ポリエチレングリコールである。
【００２８】
上述の通り、ＰＥＧは、医薬組成物、特に、徐放性組成物において用いられてきた。しかしながら、ヒアルロン酸およびアミノ酸と組み合わせた、タンパク質薬物の分子量と同様またはそれより大きい分子量を有するポリアルキルオキシド、特に、ポリエチレングリコールの使用は、タンパク質薬物の徐放を増強することは報告されていない。タンパク質薬物の分子量対ポリアルキルオキシドの分子量の比は、一般に、約１：０．５〜１：１０の範囲、好ましくは、約１：０．８〜１：５、より好ましくは、約１：１である。ＰＥＧ８０００、ＰＥＧ２０，０００、およびＰＥＧ３５，０００それぞれが、インターフェロン−α（Ｍ．Ｗ．２０，０００Ｄａ）の徐放性組成物において利用された場合、組成物のインターフェロン−αの血液レベルは、１００ｐｇ／ｍｌを５日間より長い間維持した（実施例３〜５）。特に、ＰＥＧ２０，０００を利用した実施例４の組成物が、最も長い徐放効果を示した。
【００２９】
ポリアルキルオキシドは、組成物の乾燥重量に基づき１〜９０重量％、好ましくは、５〜６０重量％、より好ましくは、１０〜４０重量％の量で本発明の組成物に取り込まれ得る。
【００３０】
アミノ酸は、単体で、または他の既知の医薬賦形剤との混合物として、タンパク質の安定剤として用いられてきた（非特許文献２）。本発明において、アミノ酸は、担体基質の成分の一つであり、組成物の乾燥重量に基づき５重量％以上、好ましくは、１０〜８０重量％以上、より好ましくは、２０〜６０重量％の量で利用され得る。
【００３１】
本発明によると、好ましくは、疎水性アミノ酸を用いて、タンパク質薬物の徐放が増強される（実験例５参照）。本出願で用いられる用語「疎水性アミノ酸」は、アスパラギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、セリン、トリプトファン、チロシン、またはバリンを含み得る。イソロイシン、ロイシン、メチオニン、またはバリンが都合良く用いられ得る。ロイシンが特に好ましい。置換基が組成物の疎水性または徐放性プロファイルに悪影響を与えない限り、アミノ酸は１個以上の置換基を有していてもよい。アミノ酸は、単体で、または混合物として用いられてもよい。
【００３２】
それぞれが適当な量で、一緒に用いられるとき、ヒアルロン酸またはその塩、ポリアルキルオキシド、およびアミノ酸は、それらが個々に、または２種類の成分の混合物（実験例２を参照）として用いられるときと比較して、タンパク質薬物の増強された徐放を生じる。ヒアルロン酸またはその塩、ポリアルキルオキシドおよびアミノ酸の総量は、組成物の乾燥重量に基づき約５０〜９９．９５重量％、好ましくは、約７０〜９９．９５重量％の範囲内であってもよい。
【００３３】
一実施形態において、本発明の組成物は、組成物の乾燥重量に基づき２０〜５０重量％の量の、約３，０００，０００Ｄａの分子量を有するヒアルロン酸ナトリウム、組成物の乾燥重量に基づき１０〜４０重量％の量の、組成物に含有されたタンパク質薬物の分子量とほぼ同じ分子量を有するポリエチレングリコール、および組成物の乾燥重量に基づき２０〜６０重量％の量の、ロイシンなどの疎水性アミノ酸から本質的になる担体基質、および組成物の乾燥重量に基づき０．０５〜５重量％の量のタンパク質薬物を含む。
【００３４】
本発明の組成物は、生理的に活性なタンパク質薬物を含む。本出願において用いられる用語「生理的に活性なタンパク質薬物」は、種々の生理現象に対してアンタゴニスト効果を発揮し、活性型で存在するタンパク質または（ポリ）ペプチドを示す。
【００３５】
本発明の組成物において用いられ得るタンパク質薬物の例は、ヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン、ブタ成長ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、成長ホルモン放出ペプチド、インターフェロンおよびインターフェロン受容体（例えば、インターフェロン−α、−β、および−γ、Ｉ型可溶型インターフェロン受容体）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ−１など）、骨形態形成タンパク質、卵胞刺激ホルモン、エキセンディン、Ｇタンパク質共役型受容体、インターロイキン（例えば、インターロイキン−１、−２、−３、−４、−５、−６、−７、−８、−９、−１０、−１１、−１２、−１３、−１４、−１５、−１６、−１７、−１８、−１９、−２０、−２１、−２２、−２３、−２４、−２５、−２６、−２７、−２８、−２９、−３０など）、インターロイキン受容体（例えば、ＩＬ−１受容体、ＩＬ−４受容体など）、酵素（例えば、グルコセレブロシダーゼ、イズロネート−２−スルファターゼ、α−ガラクトシダーゼ−Ａ、アガルシダーゼアルファ、β−またはα−Ｌ−イズロニダーゼ、ブチリルコリンエステラーゼ、キチナーゼ、グルタミン酸デカルボキシラーゼ、イミグルセラーゼ、リパーゼ、ウリカーゼ、血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼ、中性エンドペプシダーゼ、ミエロペルオキシダーゼなど）、インターロイキンまたはサイトカイン結合タンパク質（例えば、ＩＬ−１８ｂｐ、ＴＮＦ結合タンパク質）、マクロファージ活性化因子、マクロファージペプチド、Ｂ細胞因子、Ｔ細胞因子、タンパク質Ａ、アレルギーインヒビター、細胞壊死糖タンパク質、免疫毒素、リンパ毒素、腫瘍壊死因子、腫瘍抑制因子、転移成長因子、α１−アンチトリプシン、アルブミン、α−ラクトアルブミン、アポリポタンパク質−Ｅ、エリスロポエチン、高度にグリコシル化されたエリスロポエチン、アンジオポイエチン、ヘモグロビン、トロンビン、トロンビン受容体活性化ペプチド、トロンボモジュリン、血液因子ＶＩＩ、血液因子ＶＩＩａ、血液因子ＶＩＩＩ、血液因子ＩＸ、血液因子ＸＩＩＩ、プラスミノーゲン活性化因子、フィブリン結合ペプチド、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、ヒルジン、タンパク質Ｃ、Ｃ反応性タンパク質、レニンインヒビター、コラゲナーゼインヒビター、スーパーオキシド・ジスムターゼ、レプチン、血小板由来成長因子、上皮成長因子、表皮成長因子、アンギオスタチン、アンギオテンシン、骨髄造血性成長因子、骨髄造血刺激因子、カルシトニン、インスリン、アトリオペプチン、軟骨誘導因子、エルカトニン、関節組織活性化因子、組織因子経路インヒビター、卵胞刺激ホルモン、プロゲステロン形成ホルモン、プロゲステロン形成ホルモン放出ホルモン、神経成長因子（例えば、神経成長因子、繊毛様神経栄養因子、軸索形成因子−１、脳性ナトリウム利尿ペプチド、グリア細胞由来神経栄養因子、ネトリン、神経網抑制因子、神経栄養因子、ニュートリンなど）、パラトルモン、リラキシン、シクレチン、ソマトメジン、インスリン様成長因子、副腎皮質ホルモン、グルカゴン、コレシストキニン、膵ポリペプチド、ガストリン放出ペプチド、コルチコトロピン放出因子、甲状腺刺激ホルモン、オートタキシン、ラクトフェリン、ミオスタチン、受容体（例えば、ＴＮＦＲ（Ｐ７５）、ＴＮＦＲ（Ｐ５５）、ＩＬ−１受容体、ＶＥＧＦ受容体、Ｂ細胞活性化因子受容体など）、受容体アンタゴニスト（例えば、ＩＬ１−Ｒａなど）、細胞表面抗原（例えば、ＣＤ２、３、４、５、７、１１ａ、ｌ１ｂ、１８、１９、２０、２３、２５、３３、３８、４０、４５、６９など）、ウイルスワクチン抗原、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｄ）、ウイルス由来ワクチン抗原、成長因子（例えば、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＦＧＦなど）、抗体融合タンパク質、抗体フラグメント融合タンパク質などを含むが、これらに限定されない。
【００３６】
インターフェロン、エリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）などの、患者への頻繁な投与を必要とするタンパク質薬物が、本願発明において有利に用いられ得る。これらのタンパク質薬物のうち一種類を含有する徐放性組成物が、本発明により製造され、タンパク質薬物の徐放をその有効血清レベルで７日間より長い間生じる（実験例７および８）。
【００３７】
本明細書で用いられる用語「有効血清レベル」または「有効濃度」は、生物系において意図される生理的変化が生じるか、またはそれより上の、対象の血液における薬物の濃度を意味する。有効血清レベルの値は、用いられる薬物の種類および対象に伴い変動する。
【００３８】
担体基質および担体基質に取り込まれたタンパク質薬物を含む、本発明の組成物は、固体医薬組成物の種々の既知の生成方法により生成され得る。例えば、それは、フィルム、ペレット、糸状体、円柱体、桿状体または微粒子の形態に生成されてもよい。必要ならば、医薬的に許容される賦形剤が、組成物の生成のために用いられてもよい。医薬的に許容される賦形剤の種類および量は、当業者に既知である。
【００３９】
組成物は、好ましくは、微粒子内に製剤される。微粒子は、球形、非球形または不規則な形であってもよい。微粒子の平均サイズは、約１μｍ〜約５００μｍの範囲であってもよい。注射の目的上、微粒子は、好ましくは、約１００μｍ以下の平均サイズを有する。
【００４０】
微粒子は、当業者に既知の種々の方法により生成され得る。凍結乾燥またはスプレー乾燥が用いられてもよい。例えば、ヒアルロン酸またはその塩、アミノ酸、およびポリアルキルオキシドの水溶液が、タンパク質薬物の溶液と混合され、得られた混合物が凍結乾燥またはスプレー乾燥の対象とされ、タンパク質薬物が担体基質に取り込まれた微粒子が生成される。タンパク質薬物、ヒアルロン酸またはその塩、ポリアルキルオキシドおよびアミノ酸の均一溶液混合物は、均一溶液のスプレーされた微細液滴から水を蒸発させるため、スプレー乾燥に適用されてもよい。乾燥された微粒子は元の溶液と同じ組成を有するが、薬物分子は得られた微粒子に封入されている。
【００４１】
分散剤に容易に分散される、均一な球状微粒子を生成するので、スプレー乾燥が好ましくは用いられ得る。均一な球状微粒子は、皮下、筋肉内、病巣内または静脈内などの種々の注射方法により対象に投与されることも容易である。
【００４２】
本発明の組成物の構造と関連して本明細書において用いられる用語「取り込まれる」または「担体基質に取り込まれる」は、タンパク質薬物が、得られた担体基質内に封入されることを意味し、そしてそれは、例えば、好ましくは、微粒子の形態であってもよい。用語「封入される」は、分子が、担体基質マトリックス自体または薬物とマトリックスとの間のイオン／非イオン結合などの任意の手段により、三次元空間に閉じ込められることを意味する。
【００４３】
本発明の徐放性組成物は種々の経路により投与され得る。本明細書において用いられる用語「投与」は、種々の経路を介した患者へのある種の物質の導入またはデリバリーを意味する。薬物の標的組織へのデリバリーを可能にする限り、任意の経路が用いられ得る。例えば、腹腔内、静脈内、筋肉内、皮下、皮内、局所、鼻腔内、肺内、および直腸投与が用いられてもよい。注射投与が都合よく用いられ得る。皮下投与が好ましい。本発明の組成物はまた、吸入、内視鏡または腹腔鏡経路などの他の経路を介して投与されてもよい。
【００４４】
本発明の組成物は、投薬形態または投与経路に依存して、更なる担体を含んでいてもよい。タンパク質薬物の安定剤を用いてもよい。安定剤は、タンパク質薬物との共有結合または配位結合を形成してもよく、スクロース、ラクトース、またはグルコースなどの糖、マンニトールまたはグリセロールなどのポリオール、ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）、レシチン、リン酸塩、および無機塩類などの界面活性剤を含むが、これらに限定されない。安定剤は、単体で、或いは混合物として用いられてもよい。安定剤の種類または量を決定することは当業者の範疇である。
【００４５】
本発明者らは、本発明によるインターフェロン−αの組成物が、安定剤を含有するときより、安定剤を含有しないときにより長期間の徐放を発揮することを見出した。安定剤としてレシチンを含む組成物、およびレシチンを含まない別の組成物を用いた一の実験において、両方の組成物が、７日間より長い間、インターフェロン−αの徐放を生じた。興味深いことに、レシチンを含まない組成物は、より長い徐放を生じた（実験例６）。
【００４６】
この結果は、当該技術分野の刊行物の教示と対照的である。例えば、特許文献３には、微粒子がレシチンなどの親油性材料でコートされて、ヒアルロン酸微粒子の分散性、そしてその結果徐放が増強されている、ヒアルロン酸微粒子の徐放性組成物が記載されている。
【００４７】
本発明の組成物は、種々の注射経路により投与されてもよい。この目的上、組成物は、注射可能な溶液担体中に分散されてもよい。注射可能な溶液担体は、蒸留水または注射可能なバッファーなどの水性注射溶液、コーン油、ゴマ油、綿実油、大豆油、ピーナッツ油、モノ−、ジ−、およびトリ−グリセリド、鉱油、スクアランまたはそれらの混合物などの非水性注射溶液を含み得るが、これらに限定されない。必要ならば、注射用製剤は、分散剤、防腐剤、麻酔薬、バッファー、または保存剤を更に含んでいてもよい。
【００４８】
組成物の投与についての正確な用量および投薬計画は、必然的には、処置される個々の対象のニーズ、処置の種類、投与経路、個々の対象の年齢、性別および体重、苦痛または必要性の程度および医療従事者の判断、並びに薬物の種類に依存するだろう。
【００４９】
本発明は、以下の実施例により更に説明され、そこに記載された特定の手法および組成に、範囲または精神において本発明を制限するとして解されるべきではない。
【実施例】
【００５０】
実施例１：インターフェロン−α微粒子の調製
インターフェロン−αを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、インターフェロン−α溶液を調製した。ロイシン（３ｍｇ／ｍｌ）、メチオニン（１．５ｍｇ／ｍｌ）、およびＰＥＧ２０，０００（１．５ｍｇ／ｍｌ）を純水に溶解した。ヒアルロン酸ナトリウム（ＭＷ３，０００，０００Ｄａ）（３ｍｇ／ｍｌ）を得られた溶液に溶解した。
【００５１】
インターフェロン−α溶液をロイシン、メチオニン、ＰＥＧおよびヒアルロン酸ナトリウムの溶液に０．０１５ｍｇ／ｍｌの最終濃度まで添加し、溶液を得た。溶液を、スプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２ｍ〜２００ｍの間である。
【００５２】
実施例２：インターフェロン−α微粒子の調製
インターフェロン−αを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、インターフェロン−α溶液を調製した。レシチンを、５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。
【００５３】
ロイシン（３ｍｇ／ｍｌ）およびＰＥＧ２０，０００（１．５ｍｇ／ｍｌ）を純水に溶解した。得られた溶液に、分子量３，０００，０００Ｄａを有するヒアルロン酸ナトリウム（３ｍｇ／ｍｌ）を溶解した。
【００５４】
上で得た、ロイシン、ＰＥＧ２０，０００およびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液にレシチン分散液を０．５２５ｍｇ／ｍｌの濃度まで添加し、均一に混合した。インターフェロン−α溶液を０．０７５ｍｇ／ｍｌの最終濃度まで添加し、溶液を得た。得られた溶液を、スプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は２ｍ〜２００ｍの間である。
【００５５】
比較例１：ＰＥＧおよびアミノ酸を含まないインターフェロン−α微粒子の調製
インターフェロン−αを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、インターフェロン−α溶液を調製した。レシチンを５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。
【００５６】
ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を純水に３ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。レシチン分散液をヒアルロン酸ナトリウム溶液に０．５１ｍｇ／ｍｌの濃度まで添加し、均一に混合した。インターフェロン−α溶液を０．１５ｍｇ／ｍｌの最終濃度まで添加し、溶液を得た。溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２ｍ〜２００ｍの間である。
【００５７】
比較例２：ＰＥＧを含まないインターフェロン−α微粒子の調製
インターフェロン−αを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、インターフェロン−α溶液を調製した。レシチンを５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。
【００５８】
ロイシンを純水中に３ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、それに、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を３ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。
【００５９】
レシチン分散液を、ロイシンおよびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液に０．５０２５ｍｇ／ｍｌの濃度に添加し、均一に混合した。インターフェロン−α溶液を０．０７５ｍｇ／ｍｌの最終濃度に添加し、溶液を得た。溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。
【００６０】
比較例３：アミノ酸を含まないインターフェロン−α微粒子の調製
インターフェロン−αを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、インターフェロン−α溶液を調製した。レシチンを５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。
【００６１】
ＰＥＧ２０，０００を純水に１．５ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、それに、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を３ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。
【００６２】
レシチン分散液を、ＰＥＧおよびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液に０．５０２５ｍｇ／ｍｌの濃度まで添加し、均一に混合した。インターフェロン−α溶液を０．０７５ｍｇ／ｍｌの最終濃度まで添加し、溶液を得た。溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。
【００６３】
実施例３〜５：異なる分子量のＰＥＧを含むインターフェロン−α微粒子の調製
インターフェロン−αを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、インターフェロン−α溶液を調製した。レシチンを５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。
【００６４】
ロイシンおよびＰＥＧ（分子量８，０００（実施例３）、２０，０００（実施例４）、または３５，０００（実施例５））を純水中に以下の表１に示す濃度に溶解した。得られた溶液に、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を表１に示す濃度に溶解した。
【００６５】
レシチン分散液を、ロイシン、ＰＥＧおよびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液に０．５０２５ｍｇ／ｍｌの濃度まで添加し、均一に混合した。インターフェロン−α溶液を表１に示す最終濃度まで添加した。得られた溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。
【００６６】
【表１】
【００６７】
実施例６〜１０：種々の量のＰＥＧを含むインターフェロン−α微粒子の調製
レシチンを５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。インターフェロン−αを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、インターフェロン−α溶液を調製した。
【００６８】
ロイシンおよびＰＥＧ２０，０００を純水中に以下の表２に示す濃度に溶解した。得られた溶液中に、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を表２に示す濃度に溶解した。
【００６９】
レシチン分散液を、ロイシン、ＰＥＧおよびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液に表２に示す濃度まで添加し、均一に混合した。インターフェロン−α溶液を表２に示す最終濃度まで添加した。溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。
【００７０】
【表２】
【００７１】
実施例１１〜１４：種々のアミノ酸を含むインターフェロン−α微粒子の調製
レシチンを５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。インターフェロン−αを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、インターフェロン−α溶液を調製した。
【００７２】
表３に示す種々のアミノ酸およびＰＥＧ２０，０００を純水中に以下の表３に示す濃度に溶解した。得られた溶液中に、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を表３に示す濃度に溶解した。
【００７３】
レシチン分散液をアミノ酸、ＰＥＧおよびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液に表３に示す濃度まで添加し、均一に混合した。インターフェロン−α溶液を表３に示す最終濃度まで添加した。溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。
【００７４】
【表３】
【００７５】
実施例１５〜１９：インターフェロン−α微粒子の調製
レシチンを５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。インターフェロン−αを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、インターフェロン−α溶液を調製した。
【００７６】
アミノ酸（ロイシンまたはメチオニン）およびＰＥＧ２０，０００を純水中に表４に示す濃度に溶解した。得られた溶液に、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を表４に示す濃度に溶解した。
【００７７】
レシチン分散液を、アミノ酸、ＰＥＧおよびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液に表４に示す濃度まで添加し、均一に混合した。インターフェロン−α溶液を表４に示す最終濃度まで添加した。得られた溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。表４は、微粒子の乾燥重量に基づく、得られた微粒子の各成分の量を示す。
【００７８】
【表４】
【００７９】
実施例２０：エリスロポエチン微粒子の調製
レシチンを５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。ヒト組換えエリスロポエチンを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、ヒト組換えエリスロポエチン溶液を調製した。
【００８０】
ロイシンおよびＰＥＧ２０，０００を純水中にそれぞれ３ｍｇ／ｍｌおよび１．５ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。得られた溶液中に、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を３ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。
【００８１】
レシチン分散液を、ロイシン、ＰＥＧおよびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液に０．５０２５ｍｇ／ｍｌの濃度まで添加し、均一に混合した。ヒト組換えエリスロポエチン溶液を０．０７５ｍｇ／ｍｌの最終濃度まで添加した。得られた溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。
【００８２】
実施例２１：卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）微粒子の調製
レシチンを５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。
【００８３】
ロイシンおよびＰＥＧ３５，０００を純水中にそれぞれ３ｍｇ／ｍｌおよび１．５ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。得られた溶液中に、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を３ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。
【００８４】
レシチン分散液を、ロイシン、ＰＥＧおよびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液に０．５１ｍｇ／ｍｌの濃度まで添加し、均一に混合した。尿由来ＦＳＨ（ＭＷ４０，０００）を０．０１ｍｇ／ｍｌの濃度まで添加した。得られた溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。
【００８５】
実施例２２：エリスロポエチンの微粒子の調製
ヒト組換えエリスロポエチンを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、ヒト組換えエリスロポエチン溶液を調製した。
【００８６】
ロイシン、メチオニン、およびＰＥＧ２０，０００を純水中に、それぞれ３ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、および１．５ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。得られた溶液中に、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を３ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。
【００８７】
上で得たヒト組換えエリスロポエチン溶液を、ロイシン、メチオニンおよびＰＥＧ２０，０００溶液に０．０１５ｍｇ／ｍｌの濃度まで添加した。最終溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。
【００８８】
実施例２３：卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）微粒子の調製
ロイシン、メチオニン、およびＰＥＧ３５，０００を純水中にそれぞれ３ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌおよび１．５ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。得られた溶液中に、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を３ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。
【００８９】
ロイシン、メチオニン、ＰＥＧ、およびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液に、ヒト組換えＦＳＨ（ＭＷ約４０，０００）を０．０１５ｍｇ／ｍｌの濃度まで添加した。最終溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。
【００９０】
実験例１：本発明の微粒子の徐放
インターフェロン−α微粒子を、インターフェロン−αの徐放についてラットを用いて試験した。実施例１または比較例１のインターフェロン−α微粒子を、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）（ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に３３６μｇ ＩＦＮα／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。インターフェロン−α（２４μｇ／ｍｌ）を含む１０ｍＭ 酢酸バッファーを対照として用いた。
【００９１】
各微粒子分散液および対照（０．５ｍｌ）をスプラーグドーリーラット（オス、７〜８週齢）に皮下注射した。注射の８時間後、そして毎日１週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、インターフェロン−αの血液レベルを、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）（バイオトラック・ＥＬＩＳＡ・システム（Ｂｉｏｔｒａｋ ＥＬＩＳＡ Ｓｙｓｔｅｍ）（ＲＰＮ２７８９）、アマシャム・バイオサイエンス（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ））を用いて測定した。
【００９２】
結果を図１に示す。
【００９３】
図１に示すように、実施例１の微粒子の分散液を注射したラットのインターフェロン−αの血液レベルは、７日目で１×１０２ｐｇ／ｍｌより上であった。比較例１の微粒子の分散液を注射したラットのインターフェロン−αの血液レベルは、２日目に急激に低下し、４日目には検出できなくなった。対照は、１日目にほとんどのインターフェロン−αを放出した。
【００９４】
実験例２：本発明の微粒子の徐放
実施例２または比較例１、２または３のインターフェロン−α微粒子を、中鎖トリグリセリド（ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に３３６μｇ ＩＦＮα／ｍｌの濃度に分散させて、注射用分散液を得た。
【００９５】
各微粒子分散液（０．５ｍｌ）をスプラーグドーリーラット（オス、７〜８週齢）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、インターフェロン−αのレベル（ｐｇ／ｍｌ）を、ＥＬＩＳＡを用いて測定した。結果を表５に示す。
【００９６】
【表５】
【００９７】
表５に示すように、実施例２の微粒子の分散液を注射したラットのインターフェロン−αの血液レベルは、７日目で１×１０２ｐｇ／ｍｌより上であった。比較例１の微粒子の分散液を注射したラットのインターフェロン−αの血液レベルは、２日目に急激に低下し、３日目には１×１０２ｐｇ／ｍｌより低かった。
【００９８】
ＰＥＧを含まず、ヒアルロン酸ナトリウムおよびアミノ酸を含む、比較例２の微粒子の分散液を投与したラットのインターフェロン−αの血液レベルは、３日目まで１×１０２ｐｇ／ｍｌより上を維持した。ヒアルロン酸ナトリウムおよびＰＥＧを含むが、アミノ酸を含まない、比較例３の微粒子の分散液を投与したラットのインターフェロン−αの血液レベルは、およそ５日間１×１０２ｐｇ／ｍｌより上を維持した。
【００９９】
実験例３：徐放に対するＰＥＧの分子量の効果
微粒子の徐放プロファイルに対する微粒子中のＰＥＧの分子量の効果を評価した。
【０１００】
実施例３、４または５のインターフェロン−α微粒子を、中鎖トリグリセリド（ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に３３６μｇ ＩＦＮα／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。各微粒子分散液（０．５ｍｌ）をスプラーグドーリーラット（オス、７〜８週齢）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、インターフェロン−αのレベル（ｐｇ／ｍｌ）を、ＥＬＩＳＡを用いて測定した。結果を表６に示す。
【０１０１】
【表６】
【０１０２】
表６に示すように、実施例３の微粒子の分散液を注射したラットのインターフェロン−αの血液レベルは、およそ５日目まで１×１０２ｐｇ／ｍｌより上であった。対照的に、実施例４および５の微粒子の分散液を投与したラットのインターフェロン−αの血液レベルは、投与後７日間またはそれより長い間、１×１０２ｐｇ／ｍｌ以上を維持した。ＰＥＧ２０，０００を含む、実施例４の微粒子は、インターフェロン−αの最も長い徐放を示した。このことは、本発明の組成物が、タンパク質薬物の分子量と同様または実質的に同じ分子量を有するＰＥＧを用いたとき、タンパク質薬物の最も好ましい徐放を示すことを示している。
【０１０３】
表６の結果は、ポリアルキルオキシドの分子量が、タンパク質薬物の分子量と同様であるか、またはそれより大きいとき、より好ましくは、約１：１であるとき、組成物がタンパク質薬物の最も長い放出を生じたことを示す。
【０１０４】
実験例４：徐放に対するＰＥＧの量の効果
微粒子の徐放プロファイルに対する微粒子中のＰＥＧの量の効果を評価した。
【０１０５】
実施例６〜１０のインターフェロン−α微粒子を、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ、ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に３３６μｇ ＩＦＮα／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。各微粒子分散液（０．５ｍｌ）をスプラーグドーリーラット（オス、７〜８週齢）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、インターフェロン−αのレベル（ｐｇ／ｍｌ）を、ＥＬＩＳＡを用いて測定した。表７は、７日目のインターフェロン−αの血液レベル（Ｃ７）および注射時の微粒子中のＰＥＧの量を示す。
【０１０６】
【表７】
【０１０７】
表７に示すように、微粒子中のＰＥＧの含有量が約１０％（ｗ／ｗ）以上であるとき、７日目のラットのインターフェロン−αの血液レベルは、１×１０２ｐｇ／ｍｌより上であった。
【０１０８】
実験例５：アミノ酸の種類の効果
この実験は、本発明の微粒子に含有されるアミノ酸の種類の徐放に対する効果を試験する。
【０１０９】
実施例１１〜１４のインターフェロン−α微粒子を、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ、ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に３３６μｇ ＩＦＮα／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。各微粒子分散液（０．５ｍｌ）をスプラーグドーリーラット（オス、７〜８週齢）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、インターフェロン−αのレベル（ｐｇ／ｍｌ）を、ＥＬＩＳＡを用いて測定した。表８は、７日目のインターフェロン−αの血液レベル（Ｃ７）を示す。
【０１１０】
【表８】
【０１１１】
表８から見出されるように、ヒスチジン、アスパラギン酸、またはメチオニンを含む微粒子の分散液を投与したラットは、１〜７日目においてインターフェロン−αの血液レベル１×１０２ｐｇ／ｍｌより上を維持した。スレオニンを含む微粒子の分散液を注射したラットの血液レベルは、７日目に約１３ｐｇ／ｍｌのインターフェロン−αであった。スレオニンは高い水溶性である。スレオニン含有微粒子は、ヒスチジン、アスパラギン酸、またはメチオニンなどの疎水性アミノ酸を含有するものと比較して、対象の体内での体液吸収を速め、インターフェロン−αをより速く放出すると推測される。
【０１１２】
実験例６：レシチンを含む、または含まない、インターフェロン−α微粒子
この実験は、本発明の微粒子に含有された賦形剤（レシチン）のインターフェロン−αの徐放に対する効果を試験する。
【０１１３】
実施例１５〜１９のインターフェロン−α微粒子を、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ、ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に３３６μｇ ＩＦＮα／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。各微粒子分散液（０．５ｍｌ）をスプラーグドーリーラット（オス、７〜８週齢）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、インターフェロン−αのレベル（ｐｇ／ｍｌ）を、ＥＬＩＳＡを用いて測定した。表９は、７日目のインターフェロン−αの血液レベル（Ｃ７）を示す。
【０１１４】
【表９】
【０１１５】
実施例１５〜１９の分散液全てが、微粒子中に３０重量％以上の量のアミノ酸を含む。表９から見出されるように、試験した全ての分散液が、７日目に１×１０２ｐｇ／ｍｌより高い濃度でインターフェロン−αを放出した。興味深いことに、レシチンを含有しない実施例１５および１６の分散液は、レシチンを含有する実施例１７〜１９の分散液より、多い量のインターフェロン−αを７日目に放出した。
【０１１６】
実験例７：エリスロポエチン微粒子
本発明の微粒子のエリスロポエチンの徐放を試験した。
【０１１７】
実施例２０のエリスロポエチン微粒子を、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ、ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に８５μｇ ＥＰＯ／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。各微粒子分散液（０．５ｍｌ）をスプラーグドーリーラット（オス、７〜８週齢）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、エリスロポエチンのレベル（ｍＩＵ／ｍｌ）を、ＥＬＩＳＡ（カタログ番号ＤＥＰ００、アール・アンド・ディ・システムズ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、非特許文献３）を用いて測定した。結果を図２に示す。
【０１１８】
図２の結果は、本発明の組成物が、エリスポエチンに適用されたとき、７日間より長い間、徐放を有効に生じることを示す。
【０１１９】
実験例８：ＦＳＨ微粒子
本発明の微粒子のＦＳＨの徐放を試験した。
【０１２０】
実施例２１の卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）微粒子を、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ、ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に５３μｇ ＦＳＨ／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。各微粒子分散液（０．５ｍｌ）をスプラーグドーリーラット（オス、７〜８週齢）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、ＦＳＨのレベル（ｍＩＵ／ｍｌ）を、ＥＬＩＳＡ（カタログ番号ＲＥ５２１２１、ＩＢＬ、非特許文献３）を用いて測定した。結果を図３に示す。
【０１２１】
図３から見出されるように、７日目のラットにおいてＦＳＨを検出した。
【０１２２】
実験例９：インターフェロン−α微粒子
インターフェロン−α微粒子を、インターフェロン−αの徐放についてサルを用いて試験した。実施例１のインターフェロン−α微粒子を、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ、ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に１１０μｇ ＩＦＮα／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。
【０１２３】
微粒子分散液（１．５ｍｌ）をカニクイザル（オス）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、インターフェロン−αの血液レベル（ｐｇ／ｍｌ）を、ＣＰＥ（細胞変性効果阻害）アッセイおよびＥＬＩＳＡ（高感度ＩＦＮ−αＥＬＩＳＡシステム（アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）、ＲＰＮ２７８９）、非特許文献３）を用いて測定した。５日目、６日目および７日目のインターフェロン−αの血液レベル（それぞれ、Ｃ５、Ｃ６およびＣ７）を表１０および図６に示した。
【０１２４】
【表１０】
【０１２５】
ＣＰＥは、タンパク質活性を測定するためのアッセイである。細胞株ＭＤＢＫを、ＶＳＶ（水疱性口内炎ウイルス）の攻撃により殺傷する。この現象を、「細胞変性効果」と呼ぶ。ウイルスが細胞を攻撃する時点で、細胞がインターフェロン−αを含有しているとき、細胞変性効果が阻害、即ち、細胞はウイルスの致命的攻撃から防御される。インターフェロン−αの生理活性を、阻害を測定することにより決定することができる。
【０１２６】
ＭＤＢＫ細胞を９６ウェルマイクロタイタープレートにて２４時間培養した。予め決定した濃度のインターフェロン−α希釈溶液をウェルに添加し、２４時間培養した。ウェルをＤ−ＰＢＳで洗浄し、インターフェロン−αを除去し、ＶＳＶを投与した。細胞を更に成長させ、染色し、次に、吸光度（ＯＤ）を測定した（非特許文献４、非特許文献５）。
【０１２７】
表１０に示すように、ＥＬＩＳＡは、インターフェロン−αの血液レベルが、５日目、６日目および７日目に１００ｐｇ／ｍｌより上を維持されたことを示す。ＣＰＥの結果は、ＥＬＩＳＡの結果と実質的に同じであり、サル体内のインターフェロン−αが、７日目においてその生理活性を維持していることを示す。結果は、本発明の組成物が、長期間、例えば、７日間以上生理的に活性なインターフェロン−αの徐放を生じたことを示す。それゆえ、本発明によるインターフェロン−αの徐放性組成物は、７日間徐放性インターフェロン−α製剤に適している。
【０１２８】
実験例１０：エリスロポエチンの徐放
実施例２２のエリスロポエチン微粒子を、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ、ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に３３６ｇ ＥＰＯ／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。
【０１２９】
分散液（０．５ｍｌ）をスプラーグドーリーラット（オス、７〜８週齢）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、エリスロポエチンのレベル（ｍＩＵ／ｍｌ）を、ＥＬＩＳＡ（カタログ番号ＤＥＰ００、アール・アンド・ディ・システムズ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、非特許文献３）を用いて測定した。結果を図４に示す。
【０１３０】
図４の結果は、本発明の組成物が、エリスロポエチンの徐放性製剤における使用に適していることを示す。
【０１３１】
実験例１１：ＦＳＨの徐放
本発明による、ＦＳＨ含有組成物の徐放をラットにおいて決定した。
【０１３２】
実施例２３のＦＳＨ微粒子を、中鎖トリグリセリド（ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に３３６μｇ ＦＳＨ／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。分散液（０．５ｍｌ）をラット（スプラーグドーリーラット、オス、７〜８週齢）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、ＦＳＨのレベル（ｍＩＵ／ｍｌ）を、ＥＬＩＳＡ（カタログ番号ＲＥ５２１２１、ＩＢＬ、非特許文献３）を用いて測定した。結果を図５に示す。
【０１３３】
図５の結果は、本発明の組成物が、ＦＳＨの徐放性製剤における使用に適していることを示す。
【産業上の利用可能性】
【０１３４】
本発明は上で示した特定の実施形態と共に記載されてきたが、多くの代替、修飾およびそれらのバリエーションが当業者にとって明らかであろう。かかる代替、修飾およびバリエーションの全てが、本発明の精神および範囲内にあることが意図されている。
【図面の簡単な説明】
【０１３５】
【図１】実施例１（−●−）、比較例１（−○−）、および対照（−▼−）のインターフェロン−α微粒子のインビボ（ラット）放出プロファイルを示す。
【図２】実施例２０のエリスロポエチン微粒子のインビボ放出プロファイルを示す。
【図３】実施例２１のＦＳＨ微粒子のインビボ放出プロファイルを示す。
【図４】実施例２２のエリスロポエチン微粒子のインビボ放出プロファイルを示す。
【図５】実施例２３のＦＳＨ微粒子のインビボ放出プロファイルを示す。
【図６】ＥＬＩＳＡ（−●−）およびＣＰＥ（−□−）により測定された、実施例１のインターフェロン−α微粒子のインビボ（サルにおける）放出プロファイルを示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、担体基質および担体基質に取り込まれたタンパク質薬物を含んでなる徐放性組成物であって、担体基質が本質的に（ａ）ヒアルロン酸またはその塩、（ｂ）ポリアルキルオキシド、および（ｃ）アミノ酸からなる徐放性組成物に関する。本組成物により、長期間、好ましくは、１週間以上の生理的に活性な薬物の持続放出が可能になる。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質薬物は、生体内において高い生理活性および標的への高い特異性を有するので、様々な疾患を処置するのに有用であると報告されている。タンパク質薬物は、生体内における短い半減期および低い吸収率を有し、そしてそれが処置薬物としてのタンパク質薬物の利用可能性を制限していることも報告されている。タンパク質薬物は、通常、注射経路を介して患者に投与される。タンパク質薬物の患者への注射は、通常、痛みを伴う。注射されたタンパク質薬物の患者における半減期は、一般に、２〜４時間であり、患者は、毎日または一日おきに長期間、例えば１年以上、薬物を投与されることを必要とする。
【０００３】
タンパク質薬物の徐放性製剤が提案された。タンパク質薬物の徐放性製剤の開発の初期段階において、薬物を含有するリポソーム、マイクロカプセル、およびインプラントが提案された。しかしながら、これらの製剤は、製剤に含有されたタンパク質がその活性を失いやすく、かつ薬物の徐放を生じなかったので、満足できるものではなかった。タンパク質薬物を含有する高分子微粒子が提案されている。非生分解性高分子から形成された微粒子は、患者の体内で消化されず、ゆえに、時に、溶解されない残留物を取り出すための手術を必要とするという問題を有する。それらは生体にとって有害でもあり、薬物の徐放の制御は困難である。
【０００４】
非生分解性高分子の使用に関連する障害を克服するために、薬物が生分解性高分子内に封入された微粒子が提案されている。微粒子の生分解性高分子は、患者の体内においてゆっくり変性し、薬物が放出される。生分解性かつ生体適合性高分子として、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリホスファゼン、擬似ポリアミノ酸などの合成ポリエステルが利用されてきた。ＰＬＧＡなどのポリエステルから作られた微粒子は、１週間から１ヶ月間までの長期間、ペプチド薬物の徐放を生じる。しかしながら、ＰＬＧＡの疎水特性がタンパク質薬物の変性を引き起こし、そしてそれが薬物の生理活性を破壊するので、タンパク質薬物の徐放性製剤の生成におけるＰＬＧＡの使用は制限されていた。患者体内におけるＰＬＧＡ自体の変性は、酸を生じ、ゆえに微粒子のｐＨを低減するので、それはまたタンパク質薬物の変性および凝集を促進する。疎水性高分子を用いた微粒子の生成において一般に利用されている、有機溶媒の使用はまた、タンパク質薬物の不安定化を引き起こす。患者における高分子の比較的遅い消化はまた、外来物質を意識させる。
【０００５】
天然高分子から作られた徐放性製剤の使用も提案されてきた。ゼラチン、コラーゲン、キトサン、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、またはヒアルロン酸などの天然高分子は、水を吸収すると粘性ゲルを形成する。天然高分子のゲルは、タンパク質薬物を含む、薬物の徐放を生じる。しかしながら、ゲルの粘性および密度は、身体内部での高分子の消化およびゲルの希釈により、患者体内において速く低下するので、患者の身体に導入されたとき、ゲルは薬物を保持するその能力を容易に喪失する。従って、天然高分子ゲルは、満足する徐放を提供しない。
【０００６】
ヒアルロン酸は、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンおよびＤ−グルクロン酸で作られた天然の生分解性高分子量の高分子である。それは、生体内の種々の器官および組織において見られる。それは、眼の手術およびリウマチ処置において用いられる。徐放性製剤においてヒアルロン酸ゲルを使用することが試みられてきた。一般に、ヒアルロン酸ゲルの粘性が高ければ高いほど、タンパク質薬物の徐放を生み出すのにより効果的である。しかしながら、数％のヒアルロン酸ゲルを含有する組成物は、粘性が高くかつ難し過ぎて、注射によっては患者に導入されない。
【０００７】
他の天然高分子ゲル製剤のように、タンパク質薬物のヒアルロン酸ゲル製剤は、一度対象に導入されると、薬物の効果的な徐放をもたらさない。例えば、１％ ヒアルロン酸ゲルを含むインスリン製剤（特許文献１に記載）がウサギに注射された場合、グルコース血液レベル低下効果は、長くても注射後２４時間まで持続するものであった。特許文献２には、１．５％ヒアルロン酸および血漿タンパク質を含むインターフェロンの徐放性製剤が記載されている。インターフェロン製剤が対象に導入された場合、インターフェロンの血液レベルは、注射後２４時間以内にその開始時のレベルの１／１０まで急激に低下した。
【０００８】
ゲル製剤の代替として、スプレー乾燥により生成される、タンパク質薬物およびヒアルロン酸またはその塩を含む微粒子が提案されてきた。例えば、特許文献３には、スプレー乾燥を用いて、タンパク質薬物を含むヒアルロン酸微粒子を生成すること、前記微粒子をレシチンなどの親油性材料でコーティングすること、および前記コーティングされた微粒子を油中に分散させることにより製造された徐放性製剤が記載されている。コーティングされた微粒子は、水中油型エマルジョンに製剤されることも記載されている。インターフェロン−αのレシチンコート微粒子の水中油型エマルジョンがウサギに注射された場合、インターフェロン−αの血液レベルは長期間維持された。
【０００９】
上述のコーティング過程を撤廃するために、親油性材料が、ヒアルロン酸および有効成分を含有する溶液に分散されることができ、そして得られた溶液が乾燥（例えば、スプレー乾燥）の対象とされる（特許文献３）。
【００１０】
特許文献４には、制御された薬物放出速度を有する薬物組成物が開示されている。薬物組成物は、（ａ）生分解性、生体適合性、高分子量の物質および／または多価金属イオンまたは多価金属イオン源、および（ｂ）ヒアルロン酸またはその塩から形成されたマトリックス、および（ｃ）前記マトリックス中に成分として取り込まれた薬物を含む。成分（ａ）は、ゼラチン、カゼインナトリウム、アルブミン、塩化リゾチーム、ポリ−Ｌ−リジン、キトサン、Ｃａ２＋、Ａｌ３＋、およびＦｅ３＋を含む。薬物は、抗炎症薬物から関節炎治療剤まで、広範囲をカバーする。ヒアルロン酸またはその塩は、６００，０００〜２，０００，０００Ｄａ、特に、１，０００，０００〜２，０００，０００Ｄａの範囲の分子量を有する。それは、タンパク質薬物の制御されたデリバリーを具体的に教示していない。特許文献４は、ヒアルロン酸またはその塩、アミノ酸、およびポリアルキルオキシドから本質的になる担体基質、および前記担体基質に取り込まれたタンパク質薬物を含み、タンパク質薬物の分子量（Ｄａ）対ポリアルキルオキシドの分子量（Ｄａ）の比が約１：０．５〜１：１０である、徐放性組成物を教示しない。
【００１１】
結論として、長期間の薬物の優れた徐放を示す一方、薬物の生理活性を保持している、タンパク質薬物の徐放性製剤の必要が依然として存在する。
【００１２】
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、ポリアルキルオキシドの一種である。低分子量のＰＥＧ（分子量１０００Ｄａ未満）は室温で液体であり、一方、高分子量のＰＥＧ（分子量１０００Ｄａ以上）は固体である。高分子量のＰＥＧは、可塑剤、座剤基剤、および親水性賦形剤として用いられてきた（非特許文献１）。低分子量のＰＥＧは、薬物組成物の溶媒またはビークルとして主に用いられてきた。低分子量のＰＥＧを安定剤として用いて、タンパク質薬物の液体製剤中のタンパク質薬物の結晶化または沈殿が予防されてきた（非特許文献２）。
【００１３】
液体形態中の低分子量のＰＥＧを、タンパク質の固体製剤のビークルとして用いることが提案された。例えば、特許文献５には、コラーゲンと混合されたＩＧＦ−１またはＢ−ｈＧＨなどのタンパク質が凍結乾燥され、粉砕されて粉末を生じ、次に、液体ＰＥＧに分散される方法が記載されている。特許文献６には、ＰＥＧの結晶インターフェロンのビークルとしての使用が記載されている。特許文献６によると、異なる分子量のＰＥＧの混合物が提案されている。例えば、それには、結晶インターフェロンの注射可能な徐放性組成物の生成におけるＰＥＧ３３５０およびＰＥＧ４００またはＰＥＧ４０，０００およびＰＥＧ５５０の混合物の使用が記載されている。分子量８０００Ｄａまたは３３５０ＤａのＰＥＧの使用も提案されている。しかしながら、特許文献６には、ヒアルロン酸またはその塩、アミノ酸およびポリアルキレンオキシドから本質的になる担体基質、および前記担体基質に取り込まれたタンパク質薬物を含み、前記タンパク質薬物の分子量（Ｄａ）対前記ポリアルキレンオキシドの分子量（Ｄａ）の比が約１：０．５〜１：１０である、徐放性製剤は、教示も開示もされていない。特許文献６により教示されるインターフェロン−αの徐放性組成物は、注射後４８時間までインターフェロン−αを放出した。
【００１４】
低分子量のＰＥＧをビークルとして含む薬物組成物は、薬物の徐放を短期間生じることが報告されてきた。例えば、特許文献７には、８０％ ＰＥＧ４００またはＰＥＧ３００溶液のソマトスタチンのビークルとしての使用が記載されている。３８％ ＰＥＧ４００溶液中に分散されたソマトスタチン溶液は、ソマトスタチンの徐放を４時間示した。特許文献８には、ＰＥＧ３００またはＰＥＧ６００を含む組成物からのタンパク質薬物の徐放が開示されている。容量４０％以上の高濃度のＰＥＧ３００は、注射部位の周りでの溶血作用を誘発し得るので、３０％未満のＰＥＧ３００を使用することがすすめられた（非特許文献１）。
【００１５】
【特許文献１】特開平１（１９８９）−２８７０４１号公報
【特許文献２】米国特許第５，４１６，０７１号明細書
【特許文献３】米国特許出願公開第２００３／００６４１０５号明細書
【特許文献４】米国特許第６，３７５，９８８号明細書
【特許文献５】米国特許第５，３８５，７３８号明細書
【特許文献６】米国特許第６，００４，５４９号明細書
【特許文献７】米国特許第４，０４１，１５５号明細書
【特許文献８】米国特許第６，０１１，０１１号明細書
【非特許文献１】Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、第２版、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（１９９４年）
【非特許文献２】Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、１８５、１２９−１８８頁（１９９９年）
【非特許文献３】Ｔｈｅ ＥＬＩＳＡ Ｇｕｉｄｅｂｏｏｋ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｊｏｈｎ Ｒ． Ｃｒｏｗｔｈｅｒ、２００１年
【非特許文献４】欧州薬局方「Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ａｌｆａ−２ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ」、ｌ８１２〜１８１５頁、２００５年、
【非特許文献５】Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、３７（２）、７５５〜７５８頁、（１９８１年）。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
技術的解決
担体基質および前記担体基質に取り込まれたタンパク質薬物を含んでなる徐放性組成物であって、前記担体基質が、（ａ）ヒアルロン酸またはその塩、（ｂ）ポリアルキルオキシド、および（ｃ）アミノ酸から本質的になり、前記タンパク質薬物の分子量（Ｄａ）対前記ポリアルキルオキシドの分子量（Ｄａ）の比が約１：０．５〜１：１０である、徐放性組成物。
【００１７】
本発明は、担体基質および前記担体基質に取り込まれた生理的に活性なタンパク質薬物を含んでなる徐放性組成物であって、前記担体基質が本質的に、前記タンパク質薬物の徐放を生じるのに十分な量のヒアルロン酸またはその塩、前記タンパク質薬物の徐放を生じるのに十分な量のポリアルキルオキシド、および前記タンパク質薬物の徐放を生じるのに十分な量のアミノ酸からなる徐放性組成物に関する。
【００１８】
本発明の組成物において、タンパク質薬物の分子量（Ｄａ）対ポリアルキルオキシドの分子量（Ｄａ）の比は、約１：０．５〜１：１０である。組成物は、好ましくは、タンパク質薬物の徐放をその有効な量またはそれより多い量で少なくとも７日間生じる。好ましくは、担体基質およびタンパク質薬物は、微粒子に形成され得る。微粒子は、１〜５００μｍの平均直径を有してもよい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
発明の形態
本発明の徐放性組成物に含有される担体基質は本質的に、ヒアルロン酸またはその塩、ポリアルキルオキシド、およびアミノ酸からなる。
【００２０】
本明細書で用いられる用語「担体基質」は、薬物の取り込みおよび徐放を可能にする基剤またはマトリックスを示す。担体基質は、組成物の乾燥重量に基づき約５０〜９９．９５重量％、好ましくは、約７０〜９９．９５重量％を占めてもよい。
【００２１】
本発明によると、ヒアルロン酸またはその塩、アミノ酸、およびポリアルキルオキシド間の物理的相互作用またはファン・デル・ワールス相互作用が、担体基質の形成をもたらす。ヒアルロン酸またはその塩、アミノ酸、およびポリアルキルオキシドから形成された微粒子の緻密な構造または緻密なテクスチャは、そこに取り込まれたタンパク質薬物の徐放を長期間生じることを可能にする。微粒子は、各成分間で形成された架橋結合または化学結合を有してもよい。この場合、必要ならば、架橋結合剤が用いられてもよい。架橋結合剤は、当業者に既知である。
【００２２】
本明細書で用いられる用語「本質的になる」は、担体基質が、ヒアルロン酸またはその塩、ポリアルキルオキシドおよびアミノ酸を必須成分として含有することを意味する。担体基質は、その徐放効果に実質的に作用しない他の非必須成分を含有してもよい。
【００２３】
本発明において用いられ得るヒアルロン酸は、遊離酸またはその塩であってもよい。塩は、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸アンモニウム、ヒアルロン酸カルシウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸亜鉛、およびヒアルロン酸コバルトを含み得るが、これらに限定されない。好ましくは、ヒアルロン酸ナトリウムが用いられ得る。ヒアルロン酸またはその塩は、単体で、または混合物として用いられてもよい。
【００２４】
抽出、精製、および測定の種々の方法を用いて、種々の分子量のヒアルロン酸が生成され得る。本発明において用いられるヒアルロン酸またはその塩は、１，０００，０００Ｄａ以上、好ましくは、３，０００，０００Ｄａ以上の分子量を有していてもよい。ヒアルロン酸またはその塩の分子量の上限はないが、現時点で、４，０００，０００〜６，０００，０００Ｄａまでのヒアルロン酸が市販されている。
【００２５】
ヒアルロン酸またはその塩は、組成物の乾燥重量に基づき５〜９０重量％、好ましくは、１０〜６０重量％、より好ましくは、２０〜５０重量％の量で本発明の組成物に取り込まれ得る。本発明の一実施形態において、本発明の組成物は、組成物の乾燥重量に基づき２０〜５０重量％の量で約３，０００，０００Ｄａの分子量のヒアルロン酸ナトリウムを含む。
【００２６】
本明細書で用いられる用語「乾燥重量」は、例えば、蒸発または濾過によって組成物から液体を除去することにより得られる固体重量を意味する。
【００２７】
本出願において用いられる用語「ポリアルキルオキシド」は、ポリアルキルオキシドおよびポリアルキレンオキシドを含む。それらは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、およびポリエチレンおよびポリプロピレングリコールの共重合体（例えば、ポロクサマー）により例示され得るが、これらに限定されない。それらは、単体で、または混合物として用いられてもよい。ポリアルキルオキシドは、好ましくは、ポリエチレングリコールである。
【００２８】
上述の通り、ＰＥＧは、医薬組成物、特に、徐放性組成物において用いられてきた。しかしながら、ヒアルロン酸およびアミノ酸と組み合わせた、タンパク質薬物の分子量と同様またはそれより大きい分子量を有するポリアルキルオキシド、特に、ポリエチレングリコールの使用は、タンパク質薬物の徐放を増強することは報告されていない。タンパク質薬物の分子量対ポリアルキルオキシドの分子量の比は、一般に、約１：０．５〜１：１０の範囲、好ましくは、約１：０．８〜１：５、より好ましくは、約１：１である。ＰＥＧ８０００、ＰＥＧ２０，０００、およびＰＥＧ３５，０００それぞれが、インターフェロン−α（Ｍ．Ｗ．２０，０００Ｄａ）の徐放性組成物において利用された場合、組成物のインターフェロン−αの血液レベルは、１００ｐｇ／ｍｌを５日間より長い間維持した（実施例３〜５）。特に、ＰＥＧ２０，０００を利用した実施例４の組成物が、最も長い徐放効果を示した。
【００２９】
ポリアルキルオキシドは、組成物の乾燥重量に基づき１〜９０重量％、好ましくは、５〜６０重量％、より好ましくは、１０〜４０重量％の量で本発明の組成物に取り込まれ得る。
【００３０】
アミノ酸は、単体で、または他の既知の医薬賦形剤との混合物として、タンパク質の安定剤として用いられてきた（非特許文献２）。本発明において、アミノ酸は、担体基質の成分の一つであり、組成物の乾燥重量に基づき５重量％以上、好ましくは、１０〜８０重量％以上、より好ましくは、２０〜６０重量％の量で利用され得る。
【００３１】
本発明によると、好ましくは、疎水性アミノ酸を用いて、タンパク質薬物の徐放が増強される（実験例５参照）。本出願で用いられる用語「疎水性アミノ酸」は、アスパラギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、セリン、トリプトファン、チロシン、またはバリンを含み得る。イソロイシン、ロイシン、メチオニン、またはバリンが都合良く用いられ得る。ロイシンが特に好ましい。置換基が組成物の疎水性または徐放性プロファイルに悪影響を与えない限り、アミノ酸は１個以上の置換基を有していてもよい。アミノ酸は、単体で、または混合物として用いられてもよい。
【００３２】
それぞれが適当な量で、一緒に用いられるとき、ヒアルロン酸またはその塩、ポリアルキルオキシド、およびアミノ酸は、それらが個々に、または２種類の成分の混合物（実験例２を参照）として用いられるときと比較して、タンパク質薬物の増強された徐放を生じる。ヒアルロン酸またはその塩、ポリアルキルオキシドおよびアミノ酸の総量は、組成物の乾燥重量に基づき約５０〜９９．９５重量％、好ましくは、約７０〜９９．９５重量％の範囲内であってもよい。
【００３３】
一実施形態において、本発明の組成物は、組成物の乾燥重量に基づき２０〜５０重量％の量の、約３，０００，０００Ｄａの分子量を有するヒアルロン酸ナトリウム、組成物の乾燥重量に基づき１０〜４０重量％の量の、組成物に含有されたタンパク質薬物の分子量とほぼ同じ分子量を有するポリエチレングリコール、および組成物の乾燥重量に基づき２０〜６０重量％の量の、ロイシンなどの疎水性アミノ酸から本質的になる担体基質、および組成物の乾燥重量に基づき０．０５〜５重量％の量のタンパク質薬物を含む。
【００３４】
本発明の組成物は、生理的に活性なタンパク質薬物を含む。本出願において用いられる用語「生理的に活性なタンパク質薬物」は、種々の生理現象に対してアンタゴニスト効果を発揮し、活性型で存在するタンパク質または（ポリ）ペプチドを示す。
【００３５】
本発明の組成物において用いられ得るタンパク質薬物の例は、ヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン、ブタ成長ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、成長ホルモン放出ペプチド、インターフェロンおよびインターフェロン受容体（例えば、インターフェロン−α、−β、および−γ、Ｉ型可溶型インターフェロン受容体）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ−１など）、骨形態形成タンパク質、卵胞刺激ホルモン、エキセンディン、Ｇタンパク質共役型受容体、インターロイキン（例えば、インターロイキン−１、−２、−３、−４、−５、−６、−７、−８、−９、−１０、−１１、−１２、−１３、−１４、−１５、−１６、−１７、−１８、−１９、−２０、−２１、−２２、−２３、−２４、−２５、−２６、−２７、−２８、−２９、−３０など）、インターロイキン受容体（例えば、ＩＬ−１受容体、ＩＬ−４受容体など）、酵素（例えば、グルコセレブロシダーゼ、イズロネート−２−スルファターゼ、α−ガラクトシダーゼ−Ａ、アガルシダーゼアルファ、β−またはα−Ｌ−イズロニダーゼ、ブチリルコリンエステラーゼ、キチナーゼ、グルタミン酸デカルボキシラーゼ、イミグルセラーゼ、リパーゼ、ウリカーゼ、血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼ、中性エンドペプシダーゼ、ミエロペルオキシダーゼなど）、インターロイキンまたはサイトカイン結合タンパク質（例えば、ＩＬ−１８ｂｐ、ＴＮＦ結合タンパク質）、マクロファージ活性化因子、マクロファージペプチド、Ｂ細胞因子、Ｔ細胞因子、タンパク質Ａ、アレルギーインヒビター、細胞壊死糖タンパク質、免疫毒素、リンパ毒素、腫瘍壊死因子、腫瘍抑制因子、転移成長因子、α１−アンチトリプシン、アルブミン、α−ラクトアルブミン、アポリポタンパク質−Ｅ、エリスロポエチン、高度にグリコシル化されたエリスロポエチン、アンジオポイエチン、ヘモグロビン、トロンビン、トロンビン受容体活性化ペプチド、トロンボモジュリン、血液因子ＶＩＩ、血液因子ＶＩＩａ、血液因子ＶＩＩＩ、血液因子ＩＸ、血液因子ＸＩＩＩ、プラスミノーゲン活性化因子、フィブリン結合ペプチド、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、ヒルジン、タンパク質Ｃ、Ｃ反応性タンパク質、レニンインヒビター、コラゲナーゼインヒビター、スーパーオキシド・ジスムターゼ、レプチン、血小板由来成長因子、上皮成長因子、表皮成長因子、アンギオスタチン、アンギオテンシン、骨髄造血性成長因子、骨髄造血刺激因子、カルシトニン、インスリン、アトリオペプチン、軟骨誘導因子、エルカトニン、関節組織活性化因子、組織因子経路インヒビター、卵胞刺激ホルモン、プロゲステロン形成ホルモン、プロゲステロン形成ホルモン放出ホルモン、神経成長因子（例えば、神経成長因子、繊毛様神経栄養因子、軸索形成因子−１、脳性ナトリウム利尿ペプチド、グリア細胞由来神経栄養因子、ネトリン、神経網抑制因子、神経栄養因子、ニュートリンなど）、パラトルモン、リラキシン、シクレチン、ソマトメジン、インスリン様成長因子、副腎皮質ホルモン、グルカゴン、コレシストキニン、膵ポリペプチド、ガストリン放出ペプチド、コルチコトロピン放出因子、甲状腺刺激ホルモン、オートタキシン、ラクトフェリン、ミオスタチン、受容体（例えば、ＴＮＦＲ（Ｐ７５）、ＴＮＦＲ（Ｐ５５）、ＩＬ−１受容体、ＶＥＧＦ受容体、Ｂ細胞活性化因子受容体など）、受容体アンタゴニスト（例えば、ＩＬ１−Ｒａなど）、細胞表面抗原（例えば、ＣＤ２、３、４、５、７、１１ａ、ｌ１ｂ、１８、１９、２０、２３、２５、３３、３８、４０、４５、６９など）、ウイルスワクチン抗原、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｄ）、ウイルス由来ワクチン抗原、成長因子（例えば、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＦＧＦなど）、抗体融合タンパク質、抗体フラグメント融合タンパク質などを含むが、これらに限定されない。
【００３６】
インターフェロン、エリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）などの、患者への頻繁な投与を必要とするタンパク質薬物が、本願発明において有利に用いられ得る。これらのタンパク質薬物のうち一種類を含有する徐放性組成物が、本発明により製造され、タンパク質薬物の徐放をその有効血清レベルで７日間より長い間生じる（実験例７および８）。
【００３７】
本明細書で用いられる用語「有効血清レベル」または「有効濃度」は、生物系において意図される生理的変化が生じるか、またはそれより上の、対象の血液における薬物の濃度を意味する。有効血清レベルの値は、用いられる薬物の種類および対象に伴い変動する。
【００３８】
担体基質および担体基質に取り込まれたタンパク質薬物を含む、本発明の組成物は、固体医薬組成物の種々の既知の生成方法により生成され得る。例えば、それは、フィルム、ペレット、糸状体、円柱体、桿状体または微粒子の形態に生成されてもよい。必要ならば、医薬的に許容される賦形剤が、組成物の生成のために用いられてもよい。医薬的に許容される賦形剤の種類および量は、当業者に既知である。
【００３９】
組成物は、好ましくは、微粒子内に製剤される。微粒子は、球形、非球形または不規則な形であってもよい。微粒子の平均サイズは、約１μｍ〜約５００μｍの範囲であってもよい。注射の目的上、微粒子は、好ましくは、約１００μｍ以下の平均サイズを有する。
【００４０】
微粒子は、当業者に既知の種々の方法により生成され得る。凍結乾燥またはスプレー乾燥が用いられてもよい。例えば、ヒアルロン酸またはその塩、アミノ酸、およびポリアルキルオキシドの水溶液が、タンパク質薬物の溶液と混合され、得られた混合物が凍結乾燥またはスプレー乾燥の対象とされ、タンパク質薬物が担体基質に取り込まれた微粒子が生成される。タンパク質薬物、ヒアルロン酸またはその塩、ポリアルキルオキシドおよびアミノ酸の均一溶液混合物は、均一溶液のスプレーされた微細液滴から水を蒸発させるため、スプレー乾燥に適用されてもよい。乾燥された微粒子は元の溶液と同じ組成を有するが、薬物分子は得られた微粒子に封入されている。
【００４１】
分散剤に容易に分散される、均一な球状微粒子を生成するので、スプレー乾燥が好ましくは用いられ得る。均一な球状微粒子は、皮下、筋肉内、病巣内または静脈内などの種々の注射方法により対象に投与されることも容易である。
【００４２】
本発明の組成物の構造と関連して本明細書において用いられる用語「取り込まれる」または「担体基質に取り込まれる」は、タンパク質薬物が、得られた担体基質内に封入されることを意味し、そしてそれは、例えば、好ましくは、微粒子の形態であってもよい。用語「封入される」は、分子が、担体基質マトリックス自体または薬物とマトリックスとの間のイオン／非イオン結合などの任意の手段により、三次元空間に閉じ込められることを意味する。
【００４３】
本発明の徐放性組成物は種々の経路により投与され得る。本明細書において用いられる用語「投与」は、種々の経路を介した患者へのある種の物質の導入またはデリバリーを意味する。薬物の標的組織へのデリバリーを可能にする限り、任意の経路が用いられ得る。例えば、腹腔内、静脈内、筋肉内、皮下、皮内、局所、鼻腔内、肺内、および直腸投与が用いられてもよい。注射投与が都合よく用いられ得る。皮下投与が好ましい。本発明の組成物はまた、吸入、内視鏡または腹腔鏡経路などの他の経路を介して投与されてもよい。
【００４４】
本発明の組成物は、投薬形態または投与経路に依存して、更なる担体を含んでいてもよい。タンパク質薬物の安定剤を用いてもよい。安定剤は、タンパク質薬物との共有結合または配位結合を形成してもよく、スクロース、ラクトース、またはグルコースなどの糖、マンニトールまたはグリセロールなどのポリオール、ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）、レシチン、リン酸塩、および無機塩類などの界面活性剤を含むが、これらに限定されない。安定剤は、単体で、或いは混合物として用いられてもよい。安定剤の種類または量を決定することは当業者の範疇である。
【００４５】
本発明者らは、本発明によるインターフェロン−αの組成物が、安定剤を含有するときより、安定剤を含有しないときにより長期間の徐放を発揮することを見出した。安定剤としてレシチンを含む組成物、およびレシチンを含まない別の組成物を用いた一の実験において、両方の組成物が、７日間より長い間、インターフェロン−αの徐放を生じた。興味深いことに、レシチンを含まない組成物は、より長い徐放を生じた（実験例６）。
【００４６】
この結果は、当該技術分野の刊行物の教示と対照的である。例えば、特許文献３には、微粒子がレシチンなどの親油性材料でコートされて、ヒアルロン酸微粒子の分散性、そしてその結果徐放が増強されている、ヒアルロン酸微粒子の徐放性組成物が記載されている。
【００４７】
本発明の組成物は、種々の注射経路により投与されてもよい。この目的上、組成物は、注射可能な溶液担体中に分散されてもよい。注射可能な溶液担体は、蒸留水または注射可能なバッファーなどの水性注射溶液、コーン油、ゴマ油、綿実油、大豆油、ピーナッツ油、モノ−、ジ−、およびトリ−グリセリド、鉱油、スクアランまたはそれらの混合物などの非水性注射溶液を含み得るが、これらに限定されない。必要ならば、注射用製剤は、分散剤、防腐剤、麻酔薬、バッファー、または保存剤を更に含んでいてもよい。
【００４８】
組成物の投与についての正確な用量および投薬計画は、必然的には、処置される個々の対象のニーズ、処置の種類、投与経路、個々の対象の年齢、性別および体重、苦痛または必要性の程度および医療従事者の判断、並びに薬物の種類に依存するだろう。
【００４９】
本発明は、以下の実施例により更に説明され、そこに記載された特定の手法および組成に、範囲または精神において本発明を制限するとして解されるべきではない。
【実施例】
【００５０】
実施例１：インターフェロン−α微粒子の調製
インターフェロン−αを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、インターフェロン−α溶液を調製した。ロイシン（３ｍｇ／ｍｌ）、メチオニン（１．５ｍｇ／ｍｌ）、およびＰＥＧ２０，０００（１．５ｍｇ／ｍｌ）を純水に溶解した。ヒアルロン酸ナトリウム（ＭＷ３，０００，０００Ｄａ）（３ｍｇ／ｍｌ）を得られた溶液に溶解した。
【００５１】
インターフェロン−α溶液をロイシン、メチオニン、ＰＥＧおよびヒアルロン酸ナトリウムの溶液に０．０１５ｍｇ／ｍｌの最終濃度まで添加し、溶液を得た。溶液を、スプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２ｍ〜２００ｍの間である。
【００５２】
実施例２：インターフェロン−α微粒子の調製
インターフェロン−αを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、インターフェロン−α溶液を調製した。レシチンを、５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。
【００５３】
ロイシン（３ｍｇ／ｍｌ）およびＰＥＧ２０，０００（１．５ｍｇ／ｍｌ）を純水に溶解した。得られた溶液に、分子量３，０００，０００Ｄａを有するヒアルロン酸ナトリウム（３ｍｇ／ｍｌ）を溶解した。
【００５４】
上で得た、ロイシン、ＰＥＧ２０，０００およびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液にレシチン分散液を０．５２５ｍｇ／ｍｌの濃度まで添加し、均一に混合した。インターフェロン−α溶液を０．０７５ｍｇ／ｍｌの最終濃度まで添加し、溶液を得た。得られた溶液を、スプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は２ｍ〜２００ｍの間である。
【００５５】
比較例１：ＰＥＧおよびアミノ酸を含まないインターフェロン−α微粒子の調製
インターフェロン−αを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、インターフェロン−α溶液を調製した。レシチンを５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。
【００５６】
ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を純水に３ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。レシチン分散液をヒアルロン酸ナトリウム溶液に０．５１ｍｇ／ｍｌの濃度まで添加し、均一に混合した。インターフェロン−α溶液を０．１５ｍｇ／ｍｌの最終濃度まで添加し、溶液を得た。溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２ｍ〜２００ｍの間である。
【００５７】
比較例２：ＰＥＧを含まないインターフェロン−α微粒子の調製
インターフェロン−αを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、インターフェロン−α溶液を調製した。レシチンを５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。
【００５８】
ロイシンを純水中に３ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、それに、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を３ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。
【００５９】
レシチン分散液を、ロイシンおよびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液に０．５０２５ｍｇ／ｍｌの濃度に添加し、均一に混合した。インターフェロン−α溶液を０．０７５ｍｇ／ｍｌの最終濃度に添加し、溶液を得た。溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。
【００６０】
比較例３：アミノ酸を含まないインターフェロン−α微粒子の調製
インターフェロン−αを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、インターフェロン−α溶液を調製した。レシチンを５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。
【００６１】
ＰＥＧ２０，０００を純水に１．５ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、それに、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を３ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。
【００６２】
レシチン分散液を、ＰＥＧおよびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液に０．５０２５ｍｇ／ｍｌの濃度まで添加し、均一に混合した。インターフェロン−α溶液を０．０７５ｍｇ／ｍｌの最終濃度まで添加し、溶液を得た。溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。
【００６３】
実施例３〜５：異なる分子量のＰＥＧを含むインターフェロン−α微粒子の調製
インターフェロン−αを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、インターフェロン−α溶液を調製した。レシチンを５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。
【００６４】
ロイシンおよびＰＥＧ（分子量８，０００（実施例３）、２０，０００（実施例４）、または３５，０００（実施例５））を純水中に以下の表１に示す濃度に溶解した。得られた溶液に、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を表１に示す濃度に溶解した。
【００６５】
レシチン分散液を、ロイシン、ＰＥＧおよびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液に０．５０２５ｍｇ／ｍｌの濃度まで添加し、均一に混合した。インターフェロン−α溶液を表１に示す最終濃度まで添加した。得られた溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。
【００６６】
【表１】
【００６７】
実施例６〜１０：種々の量のＰＥＧを含むインターフェロン−α微粒子の調製
レシチンを５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。インターフェロン−αを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、インターフェロン−α溶液を調製した。
【００６８】
ロイシンおよびＰＥＧ２０，０００を純水中に以下の表２に示す濃度に溶解した。得られた溶液中に、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を表２に示す濃度に溶解した。
【００６９】
レシチン分散液を、ロイシン、ＰＥＧおよびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液に表２に示す濃度まで添加し、均一に混合した。インターフェロン−α溶液を表２に示す最終濃度まで添加した。溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。
【００７０】
【表２】
【００７１】
実施例１１〜１４：種々のアミノ酸を含むインターフェロン−α微粒子の調製
レシチンを５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。インターフェロン−αを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、インターフェロン−α溶液を調製した。
【００７２】
表３に示す種々のアミノ酸およびＰＥＧ２０，０００を純水中に以下の表３に示す濃度に溶解した。得られた溶液中に、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を表３に示す濃度に溶解した。
【００７３】
レシチン分散液をアミノ酸、ＰＥＧおよびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液に表３に示す濃度まで添加し、均一に混合した。インターフェロン−α溶液を表３に示す最終濃度まで添加した。溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。
【００７４】
【表３】
【００７５】
実施例１５〜１９：インターフェロン−α微粒子の調製
レシチンを５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。インターフェロン−αを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、インターフェロン−α溶液を調製した。
【００７６】
アミノ酸（ロイシンまたはメチオニン）およびＰＥＧ２０，０００を純水中に表４に示す濃度に溶解した。得られた溶液に、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を表４に示す濃度に溶解した。
【００７７】
レシチン分散液を、アミノ酸、ＰＥＧおよびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液に表４に示す濃度まで添加し、均一に混合した。インターフェロン−α溶液を表４に示す最終濃度まで添加した。得られた溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。表４は、微粒子の乾燥重量に基づく、得られた微粒子の各成分の量を示す。
【００７８】
【表４】
【００７９】
実施例２０：エリスロポエチン微粒子の調製
レシチンを５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。ヒト組換えエリスロポエチンを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、ヒト組換えエリスロポエチン溶液を調製した。
【００８０】
ロイシンおよびＰＥＧ２０，０００を純水中にそれぞれ３ｍｇ／ｍｌおよび１．５ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。得られた溶液中に、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を３ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。
【００８１】
レシチン分散液を、ロイシン、ＰＥＧおよびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液に０．５０２５ｍｇ／ｍｌの濃度まで添加し、均一に混合した。ヒト組換えエリスロポエチン溶液を０．０７５ｍｇ／ｍｌの最終濃度まで添加した。得られた溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。
【００８２】
実施例２１：卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）微粒子の調製
レシチンを５ｍｇ／ｍｌの濃度に純水で水和し、次に、ミクロフルイダイザー（ミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（商標））、ミクロフルイディクス・コーポレイション（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ））を通して、レシチン分散液を生成した。レシチン粒子は、５０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲のサイズを有する。
【００８３】
ロイシンおよびＰＥＧ３５，０００を純水中にそれぞれ３ｍｇ／ｍｌおよび１．５ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。得られた溶液中に、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を３ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。
【００８４】
レシチン分散液を、ロイシン、ＰＥＧおよびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液に０．５１ｍｇ／ｍｌの濃度まで添加し、均一に混合した。尿由来ＦＳＨ（ＭＷ４０，０００）を０．０１ｍｇ／ｍｌの濃度まで添加した。得られた溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。
【００８５】
実施例２２：エリスロポエチンの微粒子の調製
ヒト組換えエリスロポエチンを１０ｍＭ 酢酸バッファー中に１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、ヒト組換えエリスロポエチン溶液を調製した。
【００８６】
ロイシン、メチオニン、およびＰＥＧ２０，０００を純水中に、それぞれ３ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、および１．５ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。得られた溶液中に、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を３ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。
【００８７】
上で得たヒト組換えエリスロポエチン溶液を、ロイシン、メチオニンおよびＰＥＧ２０，０００溶液に０．０１５ｍｇ／ｍｌの濃度まで添加した。最終溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。
【００８８】
実施例２３：卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）微粒子の調製
ロイシン、メチオニン、およびＰＥＧ３５，０００を純水中にそれぞれ３ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌおよび１．５ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。得られた溶液中に、ヒアルロン酸ナトリウム（分子量３，０００，０００Ｄａ）を３ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。
【００８９】
ロイシン、メチオニン、ＰＥＧ、およびヒアルロン酸ナトリウム含有溶液に、ヒト組換えＦＳＨ（ＭＷ約４０，０００）を０．０１５ｍｇ／ｍｌの濃度まで添加した。最終溶液をスプレー乾燥機（モバイル マイナー（Ｍｏｂｉｌｅ Ｍｉｎｏｒ（商標））、ニーロ（Ｎｉｒｏ））に２０ｍｌ／分の速度で導入し、微粒子を生成した。注入口の空気の温度は１００℃であった。生成した微粒子の直径は、２μｍ〜２００μｍの間である。
【００９０】
実験例１：本発明の微粒子の徐放
インターフェロン−α微粒子を、インターフェロン−αの徐放についてラットを用いて試験した。実施例１または比較例１のインターフェロン−α微粒子を、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）（ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に３３６μｇ ＩＦＮα／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。インターフェロン−α（２４μｇ／ｍｌ）を含む１０ｍＭ 酢酸バッファーを対照として用いた。
【００９１】
各微粒子分散液および対照（０．５ｍｌ）をスプラーグドーリーラット（オス、７〜８週齢）に皮下注射した。注射の８時間後、そして毎日１週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、インターフェロン−αの血液レベルを、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）（バイオトラック・ＥＬＩＳＡ・システム（Ｂｉｏｔｒａｋ ＥＬＩＳＡ Ｓｙｓｔｅｍ）（ＲＰＮ２７８９）、アマシャム・バイオサイエンス（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ））を用いて測定した。
【００９２】
結果を図１に示す。
【００９３】
図１に示すように、実施例１の微粒子の分散液を注射したラットのインターフェロン−αの血液レベルは、７日目で１×１０２ｐｇ／ｍｌより上であった。比較例１の微粒子の分散液を注射したラットのインターフェロン−αの血液レベルは、２日目に急激に低下し、４日目には検出できなくなった。対照は、１日目にほとんどのインターフェロン−αを放出した。
【００９４】
実験例２：本発明の微粒子の徐放
実施例２または比較例１、２または３のインターフェロン−α微粒子を、中鎖トリグリセリド（ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に３３６μｇ ＩＦＮα／ｍｌの濃度に分散させて、注射用分散液を得た。
【００９５】
各微粒子分散液（０．５ｍｌ）をスプラーグドーリーラット（オス、７〜８週齢）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、インターフェロン−αのレベル（ｐｇ／ｍｌ）を、ＥＬＩＳＡを用いて測定した。結果を表５に示す。
【００９６】
【表５】
【００９７】
表５に示すように、実施例２の微粒子の分散液を注射したラットのインターフェロン−αの血液レベルは、７日目で１×１０２ｐｇ／ｍｌより上であった。比較例１の微粒子の分散液を注射したラットのインターフェロン−αの血液レベルは、２日目に急激に低下し、３日目には１×１０２ｐｇ／ｍｌより低かった。
【００９８】
ＰＥＧを含まず、ヒアルロン酸ナトリウムおよびアミノ酸を含む、比較例２の微粒子の分散液を投与したラットのインターフェロン−αの血液レベルは、３日目まで１×１０２ｐｇ／ｍｌより上を維持した。ヒアルロン酸ナトリウムおよびＰＥＧを含むが、アミノ酸を含まない、比較例３の微粒子の分散液を投与したラットのインターフェロン−αの血液レベルは、およそ５日間１×１０２ｐｇ／ｍｌより上を維持した。
【００９９】
実験例３：徐放に対するＰＥＧの分子量の効果
微粒子の徐放プロファイルに対する微粒子中のＰＥＧの分子量の効果を評価した。
【０１００】
実施例３、４または５のインターフェロン−α微粒子を、中鎖トリグリセリド（ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に３３６μｇ ＩＦＮα／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。各微粒子分散液（０．５ｍｌ）をスプラーグドーリーラット（オス、７〜８週齢）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、インターフェロン−αのレベル（ｐｇ／ｍｌ）を、ＥＬＩＳＡを用いて測定した。結果を表６に示す。
【０１０１】
【表６】
【０１０２】
表６に示すように、実施例３の微粒子の分散液を注射したラットのインターフェロン−αの血液レベルは、およそ５日目まで１×１０２ｐｇ／ｍｌより上であった。対照的に、実施例４および５の微粒子の分散液を投与したラットのインターフェロン−αの血液レベルは、投与後７日間またはそれより長い間、１×１０２ｐｇ／ｍｌ以上を維持した。ＰＥＧ２０，０００を含む、実施例４の微粒子は、インターフェロン−αの最も長い徐放を示した。このことは、本発明の組成物が、タンパク質薬物の分子量と同様または実質的に同じ分子量を有するＰＥＧを用いたとき、タンパク質薬物の最も好ましい徐放を示すことを示している。
【０１０３】
表６の結果は、ポリアルキルオキシドの分子量が、タンパク質薬物の分子量と同様であるか、またはそれより大きいとき、より好ましくは、約１：１であるとき、組成物がタンパク質薬物の最も長い放出を生じたことを示す。
【０１０４】
実験例４：徐放に対するＰＥＧの量の効果
微粒子の徐放プロファイルに対する微粒子中のＰＥＧの量の効果を評価した。
【０１０５】
実施例６〜１０のインターフェロン−α微粒子を、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ、ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に３３６μｇ ＩＦＮα／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。各微粒子分散液（０．５ｍｌ）をスプラーグドーリーラット（オス、７〜８週齢）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、インターフェロン−αのレベル（ｐｇ／ｍｌ）を、ＥＬＩＳＡを用いて測定した。表７は、７日目のインターフェロン−αの血液レベル（Ｃ７）および注射時の微粒子中のＰＥＧの量を示す。
【０１０６】
【表７】
【０１０７】
表７に示すように、微粒子中のＰＥＧの含有量が約１０％（ｗ／ｗ）以上であるとき、７日目のラットのインターフェロン−αの血液レベルは、１×１０２ｐｇ／ｍｌより上であった。
【０１０８】
実験例５：アミノ酸の種類の効果
この実験は、本発明の微粒子に含有されるアミノ酸の種類の徐放に対する効果を試験する。
【０１０９】
実施例１１〜１４のインターフェロン−α微粒子を、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ、ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に３３６μｇ ＩＦＮα／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。各微粒子分散液（０．５ｍｌ）をスプラーグドーリーラット（オス、７〜８週齢）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、インターフェロン−αのレベル（ｐｇ／ｍｌ）を、ＥＬＩＳＡを用いて測定した。表８は、７日目のインターフェロン−αの血液レベル（Ｃ７）を示す。
【０１１０】
【表８】
【０１１１】
表８から見出されるように、ヒスチジン、アスパラギン酸、またはメチオニンを含む微粒子の分散液を投与したラットは、１〜７日目においてインターフェロン−αの血液レベル１×１０２ｐｇ／ｍｌより上を維持した。スレオニンを含む微粒子の分散液を注射したラットの血液レベルは、７日目に約１３ｐｇ／ｍｌのインターフェロン−αであった。スレオニンは高い水溶性である。スレオニン含有微粒子は、ヒスチジン、アスパラギン酸、またはメチオニンなどの疎水性アミノ酸を含有するものと比較して、対象の体内での体液吸収を速め、インターフェロン−αをより速く放出すると推測される。
【０１１２】
実験例６：レシチンを含む、または含まない、インターフェロン−α微粒子
この実験は、本発明の微粒子に含有された賦形剤（レシチン）のインターフェロン−αの徐放に対する効果を試験する。
【０１１３】
実施例１５〜１９のインターフェロン−α微粒子を、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ、ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に３３６μｇ ＩＦＮα／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。各微粒子分散液（０．５ｍｌ）をスプラーグドーリーラット（オス、７〜８週齢）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、インターフェロン−αのレベル（ｐｇ／ｍｌ）を、ＥＬＩＳＡを用いて測定した。表９は、７日目のインターフェロン−αの血液レベル（Ｃ７）を示す。
【０１１４】
【表９】
【０１１５】
実施例１５〜１９の分散液全てが、微粒子中に３０重量％以上の量のアミノ酸を含む。表９から見出されるように、試験した全ての分散液が、７日目に１×１０２ｐｇ／ｍｌより高い濃度でインターフェロン−αを放出した。興味深いことに、レシチンを含有しない実施例１５および１６の分散液は、レシチンを含有する実施例１７〜１９の分散液より、多い量のインターフェロン−αを７日目に放出した。
【０１１６】
実験例７：エリスロポエチン微粒子
本発明の微粒子のエリスロポエチンの徐放を試験した。
【０１１７】
実施例２０のエリスロポエチン微粒子を、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ、ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に８５μｇ ＥＰＯ／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。各微粒子分散液（０．５ｍｌ）をスプラーグドーリーラット（オス、７〜８週齢）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、エリスロポエチンのレベル（ｍＩＵ／ｍｌ）を、ＥＬＩＳＡ（カタログ番号ＤＥＰ００、アール・アンド・ディ・システムズ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、非特許文献３）を用いて測定した。結果を図２に示す。
【０１１８】
図２の結果は、本発明の組成物が、エリスポエチンに適用されたとき、７日間より長い間、徐放を有効に生じることを示す。
【０１１９】
実験例８：ＦＳＨ微粒子
本発明の微粒子のＦＳＨの徐放を試験した。
【０１２０】
実施例２１の卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）微粒子を、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ、ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に５３μｇ ＦＳＨ／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。各微粒子分散液（０．５ｍｌ）をスプラーグドーリーラット（オス、７〜８週齢）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、ＦＳＨのレベル（ｍＩＵ／ｍｌ）を、ＥＬＩＳＡ（カタログ番号ＲＥ５２１２１、ＩＢＬ、非特許文献３）を用いて測定した。結果を図３に示す。
【０１２１】
図３から見出されるように、７日目のラットにおいてＦＳＨを検出した。
【０１２２】
実験例９：インターフェロン−α微粒子
インターフェロン−α微粒子を、インターフェロン−αの徐放についてサルを用いて試験した。実施例１のインターフェロン−α微粒子を、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ、ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に１１０μｇ ＩＦＮα／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。
【０１２３】
微粒子分散液（１．５ｍｌ）をカニクイザル（オス）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、インターフェロン−αの血液レベル（ｐｇ／ｍｌ）を、ＣＰＥ（細胞変性効果阻害）アッセイおよびＥＬＩＳＡ（高感度ＩＦＮ−αＥＬＩＳＡシステム（アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）、ＲＰＮ２７８９）、非特許文献３）を用いて測定した。５日目、６日目および７日目のインターフェロン−αの血液レベル（それぞれ、Ｃ５、Ｃ６およびＣ７）を表１０および図６に示した。
【０１２４】
【表１０】
【０１２５】
ＣＰＥは、タンパク質活性を測定するためのアッセイである。細胞株ＭＤＢＫを、ＶＳＶ（水疱性口内炎ウイルス）の攻撃により殺傷する。この現象を、「細胞変性効果」と呼ぶ。ウイルスが細胞を攻撃する時点で、細胞がインターフェロン−αを含有しているとき、細胞変性効果が阻害、即ち、細胞はウイルスの致命的攻撃から防御される。インターフェロン−αの生理活性を、阻害を測定することにより決定することができる。
【０１２６】
ＭＤＢＫ細胞を９６ウェルマイクロタイタープレートにて２４時間培養した。予め決定した濃度のインターフェロン−α希釈溶液をウェルに添加し、２４時間培養した。ウェルをＤ−ＰＢＳで洗浄し、インターフェロン−αを除去し、ＶＳＶを投与した。細胞を更に成長させ、染色し、次に、吸光度（ＯＤ）を測定した（非特許文献４、非特許文献５）。
【０１２７】
表１０に示すように、ＥＬＩＳＡは、インターフェロン−αの血液レベルが、５日目、６日目および７日目に１００ｐｇ／ｍｌより上を維持されたことを示す。ＣＰＥの結果は、ＥＬＩＳＡの結果と実質的に同じであり、サル体内のインターフェロン−αが、７日目においてその生理活性を維持していることを示す。結果は、本発明の組成物が、長期間、例えば、７日間以上生理的に活性なインターフェロン−αの徐放を生じたことを示す。それゆえ、本発明によるインターフェロン−αの徐放性組成物は、７日間徐放性インターフェロン−α製剤に適している。
【０１２８】
実験例１０：エリスロポエチンの徐放
実施例２２のエリスロポエチン微粒子を、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ、ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に３３６ｇ ＥＰＯ／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。
【０１２９】
分散液（０．５ｍｌ）をスプラーグドーリーラット（オス、７〜８週齢）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、エリスロポエチンのレベル（ｍＩＵ／ｍｌ）を、ＥＬＩＳＡ（カタログ番号ＤＥＰ００、アール・アンド・ディ・システムズ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、非特許文献３）を用いて測定した。結果を図４に示す。
【０１３０】
図４の結果は、本発明の組成物が、エリスロポエチンの徐放性製剤における使用に適していることを示す。
【０１３１】
実験例１１：ＦＳＨの徐放
本発明による、ＦＳＨ含有組成物の徐放をラットにおいて決定した。
【０１３２】
実施例２３のＦＳＨ微粒子を、中鎖トリグリセリド（ミグリオール（Ｍｙｇｌｙｏｌ）８１２、サソール（Ｓａｓｏｌ））中に３３６μｇ ＦＳＨ／ｍｌの濃度に分散させ、注射用分散液を得た。分散液（０．５ｍｌ）をラット（スプラーグドーリーラット、オス、７〜８週齢）に皮下注射した。一日一回一週間、血液試料を採取した。血清を血液試料から分離し、ＦＳＨのレベル（ｍＩＵ／ｍｌ）を、ＥＬＩＳＡ（カタログ番号ＲＥ５２１２１、ＩＢＬ、非特許文献３）を用いて測定した。結果を図５に示す。
【０１３３】
図５の結果は、本発明の組成物が、ＦＳＨの徐放性製剤における使用に適していることを示す。
【産業上の利用可能性】
【０１３４】
本発明は上で示した特定の実施形態と共に記載されてきたが、多くの代替、修飾およびそれらのバリエーションが当業者にとって明らかであろう。かかる代替、修飾およびバリエーションの全てが、本発明の精神および範囲内にあることが意図されている。
【図面の簡単な説明】
【０１３５】
【図１】実施例１（−●−）、比較例１（−○−）、および対照（−▼−）のインターフェロン−α微粒子のインビボ（ラット）放出プロファイルを示す。
【図２】実施例２０のエリスロポエチン微粒子のインビボ放出プロファイルを示す。
【図３】実施例２１のＦＳＨ微粒子のインビボ放出プロファイルを示す。
【図４】実施例２２のエリスロポエチン微粒子のインビボ放出プロファイルを示す。
【図５】実施例２３のＦＳＨ微粒子のインビボ放出プロファイルを示す。
【図６】ＥＬＩＳＡ（−●−）およびＣＰＥ（−□−）により測定された、実施例１のインターフェロン−α微粒子のインビボ（サルにおける）放出プロファイルを示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
担体基質および前記担体基質に取り込まれたタンパク質薬物を含んでなる徐放性組成物であって、
前記担体基質は本質的に（ａ）ヒアルロン酸またはその塩、（ｂ）ポリアルキルオキシドおよび（ｃ）アミノ酸からなり、
前記タンパク質薬物の分子量（Ｄａ）対ポリアルキルオキシドの分子量（Ｄａ）の比は１：０．５〜１：１０である
ことを特徴とする徐放性組成物。
【請求項２】
前記ヒアルロン酸またはその塩、前記ポリアルキルオキシドおよび前記アミノ酸の総量は、前記組成物の乾燥重量に基づき５０〜９９．９５重量％であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ヒアルロン酸またはその塩、前記ポリアルキルオキシドおよび前記アミノ酸の総量は、前記組成物の乾燥重量に基づき７０〜９９．９５重量％であることを特徴とする請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ヒアルロン酸またはその塩は、少なくとも１，０００，０００Ｄａの分子量を有することを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記ヒアルロン酸またはその塩は、少なくとも３，０００，０００Ｄａの分子量を有することを特徴とする請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記アミノ酸は疎水性アミノ酸であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記アミノ酸は、アスパラギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、セリン、トリプトファン、チロシンおよびバリンからなる群より選択される単体またはそれらの混合物であることを特徴とする請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記ポリアルキルオキシドは、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、それらの共重合体またはそれらの混合物であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記ポリアルキルオキシドはポリエチレングリコールであることを特徴とする請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ポリアルキルオキシドは少なくとも１，０００Ｄａの分子量を有することを特徴とする請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記タンパク質薬物は、インターフェロン、エリスロポエチンまたは卵胞刺激ホルモンであることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
安定剤を更に含んでなることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記タンパク質薬物の分子量（Ｄａ）対前記ポリアルキルオキシドの分子量（Ｄａ）の比は１：１であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
微粒子、ペレット、桿状体、糸状体、円柱体またはフィルムに製剤されることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
注射用媒体に分散された請求項１〜１４のいずれかに記載の組成物を含んでなる注射用医薬製剤。
【請求項１６】
前記注射用媒体は、注射用蒸留水、注射用バッファー、コーン油、ゴマ油、綿実油、大豆油、ピーナッツ油、モノ−、ジ−、およびトリ−グリセリド、鉱油、スクアランおよびそれらの混合物からなる群より選択されることを特徴とする請求項１５に記載の医薬製剤。
【請求項１７】
請求項１〜１４のいずれかに記載の組成物を含んでなるエアロゾル製剤。
【請求項１８】
担体基質および前記担体基質に取り込まれたタンパク質薬物を含んでなる徐放性組成物であって、
前記担体基質は本質的に（ａ）少なくとも１，０００，０００Ｄａの分子量を有するヒアルロン酸またはその塩、（ｂ）ポリエチレングリコールおよび（ｃ）疎水性アミノ酸からなり、
前記タンパク質薬物の分子量（Ｄａ）対前記ポリエチレングリコールの分子量（Ｄａ）の比は、１：０．５〜１：５であり、
前記ポリエチレングリコールの分子量は少なくとも１，０００Ｄａである
ことを特徴とする徐放性組成物。
【請求項１９】
前記タンパク質薬物は、前記組成物の乾燥重量に基づき０．０５〜５重量％の量で取り込まれることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ヒアルロン酸またはその塩は、前記組成物の乾燥重量に基づき２０〜５０重量％の量で取り込まれることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項２１】
前記ポリアルキルオキシドは、前記組成物の乾燥重量に基づき５〜６０重量％の量で取り込まれることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項２２】
前記アミノ酸は、前記組成物の乾燥重量に基づき１０〜８０重量％の量で取り込まれることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１】
担体基質および前記担体基質に取り込まれたタンパク質薬物を含んでなる徐放性組成物であって、
前記担体基質は本質的に（ａ）ヒアルロン酸またはその塩、（ｂ）ポリアルキルオキシドおよび（ｃ）アミノ酸からなり、
前記タンパク質薬物の分子量（Ｄａ）対ポリアルキルオキシドの分子量（Ｄａ）の比は１：０．５〜１：１０である
ことを特徴とする徐放性組成物。
【請求項２】
前記ヒアルロン酸またはその塩、前記ポリアルキルオキシドおよび前記アミノ酸の総量は、前記組成物の乾燥重量に基づき５０〜９９．９５重量％であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ヒアルロン酸またはその塩、前記ポリアルキルオキシドおよび前記アミノ酸の総量は、前記組成物の乾燥重量に基づき７０〜９９．９５重量％であることを特徴とする請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ヒアルロン酸またはその塩は、少なくとも１，０００，０００Ｄａの分子量を有することを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記ヒアルロン酸またはその塩は、少なくとも３，０００，０００Ｄａの分子量を有することを特徴とする請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記アミノ酸は疎水性アミノ酸であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記アミノ酸は、アスパラギン酸、アスパラギン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、セリン、トリプトファン、チロシンおよびバリンからなる群より選択される単体またはそれらの混合物であることを特徴とする請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記ポリアルキルオキシドは、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、それらの共重合体またはそれらの混合物であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記ポリアルキルオキシドはポリエチレングリコールであることを特徴とする請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ポリアルキルオキシドは少なくとも１，０００Ｄａの分子量を有することを特徴とする請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記タンパク質薬物は、インターフェロン、エリスロポエチンまたは卵胞刺激ホルモンであることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
安定剤を更に含んでなることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記タンパク質薬物の分子量（Ｄａ）対前記ポリアルキルオキシドの分子量（Ｄａ）の比は１：１であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
微粒子、ペレット、桿状体、糸状体、円柱体またはフィルムに製剤されることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
注射用媒体に分散された請求項１〜１４のいずれかに記載の組成物を含んでなる注射用医薬製剤。
【請求項１６】
前記注射用媒体は、注射用蒸留水、注射用バッファー、コーン油、ゴマ油、綿実油、大豆油、ピーナッツ油、モノ−、ジ−、およびトリ−グリセリド、鉱油、スクアランおよびそれらの混合物からなる群より選択されることを特徴とする請求項１５に記載の医薬製剤。
【請求項１７】
請求項１〜１４のいずれかに記載の組成物を含んでなるエアロゾル製剤。
【請求項１８】
担体基質および前記担体基質に取り込まれたタンパク質薬物を含んでなる徐放性組成物であって、
前記担体基質は本質的に（ａ）少なくとも１，０００，０００Ｄａの分子量を有するヒアルロン酸またはその塩、（ｂ）ポリエチレングリコールおよび（ｃ）疎水性アミノ酸からなり、
前記タンパク質薬物の分子量（Ｄａ）対前記ポリエチレングリコールの分子量（Ｄａ）の比は、１：０．５〜１：５であり、
前記ポリエチレングリコールの分子量は少なくとも１，０００Ｄａである
ことを特徴とする徐放性組成物。
【請求項１９】
前記タンパク質薬物は、前記組成物の乾燥重量に基づき０．０５〜５重量％の量で取り込まれることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ヒアルロン酸またはその塩は、前記組成物の乾燥重量に基づき２０〜５０重量％の量で取り込まれることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項２１】
前記ポリアルキルオキシドは、前記組成物の乾燥重量に基づき５〜６０重量％の量で取り込まれることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項２２】
前記アミノ酸は、前記組成物の乾燥重量に基づき１０〜８０重量％の量で取り込まれることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公表番号】特表２００８−５３０２０４（Ｐ２００８−５３０２０４Ａ）
【公表日】平成２０年８月７日（２００８．８．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５５６０７９（Ｐ２００７−５５６０７９）
【出願日】平成１８年２月２１日（２００６．２．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００６／０００５７１
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０８８３３６
【国際公開日】平成１８年８月２４日（２００６．８．２４）
【出願人】（５０７２７４７７７）エルジー ライフ サイエンス リミテッド (5)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年８月７日（２００８．８．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年２月２１日（２００６．２．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００６／０００５７１
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０８８３３６
【国際公開日】平成１８年８月２４日（２００６．８．２４）
【出願人】（５０７２７４７７７）エルジー ライフ サイエンス リミテッド (5)
【Ｆターム（参考）】
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