トピラメートに関する免疫アッセイ
一般的に、本発明は、スルファメート基、あるいは９位又は１０位に置換基がある、トピラメート類似体に関する。トピラメート類似体には、抗トピラメート抗体の調製に用いることができる免疫原性部分、又はトピラメートの免疫診断アッセイに用いることができる抗原性部分が含まれてもよい。また、トピラメート類似体には、免疫診断アッセイで類似体の存在又は量を検出するトレーサー部分が含まれてもよい。さらに、トピラメート類似体を免疫診断アッセイで用いて、抗トピラメート抗体との結合に関して、トピラメートと競合させることもできる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対するクロスリファレンス
［００１］本米国特許出願は、Anlong Ouyang博士らを発明者とする、２００４年１０月２５日に出願された、第６０／６２１，７７０号の「トピラメートに関する免疫アッセイ」と題する米国仮出願；及び２００５年１０月２０日に出願された、番号不明の「トピラメートに関する免疫アッセイ」と題する米国一般特許出願に優先権を請求し、どちらの出願も本明細書に援用される。
【０００２】
１．発明の分野
［００２］本発明は、トピラメート免疫診断試薬及びプロトコルに関する。より詳細には、本発明は、トピラメート、トピラメート類似体、トピラメート類似体から調製される免疫原及び抗原、トピラメートに基づく免疫原から調製される抗体、並びにこれらを作製し、用いる方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
２．関連技術
［００３］トピラメートは、化学的には２，３：４，５−ビス−Ｏ−（１−メチル−エチリデン−β−Ｄ−フルクトピラノーススルファメート又は２，３：４，５−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−ベータ−Ｄ−フルクトピラノーススルファメートと表され、以下に示される。トピラメートは、抗癲癇薬剤（「ＡＥＤ」）であり、現存する多くのＡＥＤには化学的に無関係である。トピラメートは、二次性全般化を伴う又は伴わない部分発作を起こす成人の治療で補助療法として用いる、１９９６年にＦＤＡに認可されたＴＯＰＡＭＡＸ（登録商標）中の活性成分であり、Ｌｅｎｎｏｘ−Ｇａｓｔａｕｔ症候群及び乳児痙攣にも有用でありうる。
【０００４】
【化１】
【０００５】
［００４］ＡＥＤ等の様々な薬剤は、異なる患者集団では、異なる薬物動態学的及び／又は薬力学的プロフィールを有する可能性があり、この結果、ＡＥＤの治療薬剤モニタリング（「ＴＤＭ」）が致命的に重要であることが周知である。ＴＤＭプログラムの目的の１つは、投与後の様々な時点での薬剤濃度の決定して、投薬計画を管理及び／又は最適化して、患者の臨床的結果を最適化することである。したがって、ＴＤＭに基づき、単一の患者又は患者集団に対して、薬剤用量及び投薬計画を調節することもできる。
【０００６】
［００５］いくつかのトピラメートの特質により、ＴＤＭを用いる場合は、臨床的に患者の療法を個別化する必要があることが示唆される。患者の血清濃度に対する用量は、個体間変動が大きいことが示唆されている。また、最適血清濃度を達成するのに必要なトピラメート投薬量の必要条件には、薬物動態学的変動が主な役割を果たす。
【０００７】
［００６］トピラメートの最適血清濃度の適切な範囲は、他のＡＥＤに加えて、１２５〜４００ｍｇのトピラメート用量を投与された患者で７〜２４μｍｏｌ／ｌであろうと示唆されている。何人かの患者は、最高２０００ｍｇという、極めて高用量を投与されており、全身トピラメート濃度が８０μｍｏｌ／ｌであった。有効ＴＤＭを用いて、治療指数内の適切なトピラメート濃度を獲得できる投薬計画を予測することもできる。
【０００８】
［００７］さらに、可能であれば単剤療法に進行することを見越して、トピラメートを用いた用量増大付加型研究が行われている。したがって、朝のトラフ血清トピラメート濃度を測定して発作制御及び関連する副作用と関連させた。その結果、１５〜７５μｍｏｌ／ｌの範囲の血清トピラメート濃度で発作制御は明らかに改善されたが、７５μｍｏｌ／ｌより高い血清濃度では発作制御は低下した。また、６０μｍｏｌ／ｌより高い血清濃度では、副作用が有意に増えた。したがって、トピラメートの暫定的な標的血清濃度範囲は約１５〜６０μｍｏｌ／ｌと示唆された；しかし、大部分の患者の血清濃度は、適切な投与計画で、低いか中程度の範囲である。
【０００９】
［００８］患者のトピラメートの全身濃度を決定する多くの方法が報告されている。Berry DJら Ther Drug Monit;22:460-4(2000)を参照されたい。キャピラリーガスクロマトグラフィー法は、水素炎イオン化検出及び窒素特異的検出を用いた、血清中のトピラメートの測定を報告している。Hollandら, J Chromatogr;433:276-281(1988)及びRiffitsら, J Pharm Biomed Anal;19:363-371(1999)、Tangら, Ther Drug Monitoring; 22: 195-201(2000)を参照されたい。さらに、トピラメート濃度を測定するため、ＭＳとともに、ＧＬＣ又はＨＰＬＣを用いる方法が示されている。Mozayani Aら J Anal Toxicol;23:556-558(1999)、Chen Sら, J Chromatogr;761:133-7(2001)、及びChristensenら, Ther Drug Monitoring;24:658-664(2002)を参照されたい。しかし、本方法は、例えば、試料調製時間が長く、アッセイ時間が長く、コストが高く、多大な労働力を伴う方法であるため商業的使用には非実用的である。したがって、有効なＴＤＭのためには、トピラメート血漿レベルを測定するための単純で迅速な分析法が必要である。
【００１０】
［００９］商業的に入手可能な（Seradyn, Inc.）ＦＰＩＡ免疫アッセイを用いて、血漿又は血清中のトピラメートを測定することもできる。参照によって本明細書に含まれる、米国特許第５，９５２，１８７号を参照されたい。現在のＦＰＩＡ免疫アッセイは、単純かつ迅速であるが、該免疫アッセイは、以前のトピラメート類似体の入手可能性が劣っており、かつ、ユーザーからみた機能性が劣っており、制限されている。
【００１１】
［０１０］免疫アッセイ技術は、生物学的試料中の様々な薬剤を検出するために開発され、商業的分析適用に非常に適する。したがって、免疫アッセイを用いて患者の血中の薬剤及び／又は薬剤代謝産物の量を迅速に評価することもできる。免疫アッセイの例としては、均一系（ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ）微粒子免疫アッセイ（例えば免疫比濁法）又は定量的微小球体系（「ＱＭＳ（登録商標）」）、蛍光偏光免疫アッセイ（「ＦＰＩＡ」）、クローニング酵素供与体免疫アッセイ（「ＣＥＤＩＡ」）、化学発光微粒子免疫アッセイ（「ＣＭＩＡ」）等があげられるが、これらに限定されるわけではない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
［０１１］したがって、患者の血液、血清、血漿及び／又は他の生物学的液体又は試料中のトピラメートを検出するために設定された免疫アッセイがあれば好適であろう。さらに、本免疫アッセイで用いるトピラメート類似体及び／又は抗トピラメート抗体を産生する際に用いるトピラメート類似体に基づく免疫原があれば好適であろう。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
発明の簡単な概要
［０１２］一般的に、本発明は、トピラメート類似体、及びトピラメートに関する免疫診断アッセイに関する。トピラメート類似体には、抗トピラメート抗体を調製するために用いる免疫原性部分等の作用基；トピラメートに関する免疫診断アッセイで使用できる抗原性部分；又は免疫診断アッセイで使用できるトレーサー部分等の作用基を含んでもよい。さらに、トピラメート類似体を免疫診断アッセイに用いて、抗トピラメート抗体に関してトピラメートと競合させてもよい。
【００１４】
［０１３］１の態様では、本発明に、は以下の式１又は式２の１つの化学構造を有するトピラメート類似体が含まれる。
【００１５】
【化２】
【００１６】
［０１４］式１及び式２に示すトピラメート類似体は、ＬがＳＯ２ ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ、ＮＨＣＯ、ＮＨＣＨ２Ｐｈ、ＣＯＯ、又はＯ基のうちの１つであることにより特定される。さらに、Ｘは、Ｌ及びＹ間の結合、１〜２の環を有する置換又は非置換の芳香族又は脂肪族基、あるいは１〜２０の炭素又はヘテロ鎖原子、及び最も好ましくは１〜１０の炭素又はヘテロ原子を有する、飽和又は不飽和、置換又は非置換、及び直鎖又は分枝鎖の少なくとも１つであってもよい。また、Ｙは、脂肪族、アルコール、アミン、アミド、カルボン酸、アルデヒド、エステル、活性化エステル、脂肪族エステル、イミドエステル、イソシアネート、イソチオシアネート、無水物、チオール、チオラクトン、ジアゾニウム、及びマレイミド基からなる群より選択することもできる。
【００１７】
［０１５］さらに、Ｙは、タンパク質、リポタンパク質、糖タンパク質、ポリペプチド、多糖、核酸、ポリヌクレオチド、テイコ酸、放射性同位体、酵素、酵素断片、酵素供与体断片、酵素受容体断片、酵素基質、酵素阻害剤、補酵素、触媒、蛍光部分、リン光部分、抗ストークス（ａｎｔｉ−ｓｔｏｋｅｓ）上方制御部分、化学発光部分、発光部分、色素、増感剤、粒子、微粒子、磁気粒子、固体支持体、リポソーム、リガンド、受容体、ハプテン放射性同位体、及びその組み合わせからなる群より選択される作用基にカップリングしたリンカー基であってもよい。より好ましくは、作用基は、アルブミン、血清タンパク質、グロブリン、眼球レンズのタンパク質、ウシ血清アルブミン、キーホールリンペット・ヘモシアニン、卵オボアルブミン、ウシ・ガンマ−グロブリン、合成ポリペプチド、デンプン、グリコーゲン、セルロース、炭水化物ゴム、アラビアゴム、寒天、ポリヌクレオチド、直径が少なくとも約０．０２ミクロン〜約１００ミクロンである粒子、細胞、赤血球、白血球、リンパ球、連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、大腸菌、ウイルス、リポソーム、ラテックス、リン脂質小胞、陽イオン性リポソーム、陰イオン性リポソーム、リポタンパク質及びリポポリマーからなる群より選択される。最も好ましくは、作用基は、アルブミン、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、キーホールリンペット・ヘモシアニン、又は蛍光部分等の化学発光部分の少なくとも１つである。
【００１８】
［０１６］１の態様では、トピラメートに関する免疫診断アッセイで用いるのに十分な力価の抗体を生成する免疫原を形成するため、類似体が免疫原性部分にカップリングしてもよい。また、類似体が免疫原性部分にカップリングして、類似体及びトピラメートと相互作用する抗体を生成する免疫原を形成することもできる。また、類似体がトレーサー部分にカップリングしてもよく、本類似体が、免疫診断アッセイで用いるのに十分な溶解度でありうる。さらに、類似体が抗原部分にカップリングすることができ、本類似体が、免疫診断アッセイで用いるのに十分な溶解度でありうる。さらに、類似体は、粒子又は微粒子上に、安定して装填されるか、又はこれらとカップリングし、あるいは酵素、酵素供与体、又は酵素受容体にカップリングすることができる。さらに、類似体は、抗トピラメート抗体との相互作用に関して、トピラメートと競合することができる。
【００１９】
［０１７］１の態様では、トピラメート類似体を作製する方法には、ハロゲン化物又は塩化物脱離基を有する塩化物等のトピラメートハロゲン化物を、ハロゲン化物又は塩化物脱離基を置換する一級アミンを有する反応物と反応させて、スルファメート基との共有結合を形成することを含んでいてもよい。あるいは、トピラメートを、一級アミンと反応するカルボキシル基を有する反応物と反応させて、アミドを形成させて類似体を作製してもよい。他の代替法としては、９−ヒドロキシ又は１０−ヒドロキシトピラメートを、イソシアネート官能基を有する反応物と反応させて類似体を作製することもできる。
【００２０】
［０１８］本発明の１つの態様としては、試料中のラモトリジンの存在を検出する免疫診断系で用いる抗体組成物があげられる。抗体組成物には、少なくとも１つの結合ドメインを有する抗トピラメート抗体であって、トピラメートに結合でき、トピラメート類似体に結合できる、前記抗体が含まれてもよい。また、抗体は、少なくとも約１：５，０００、より好ましくは少なくとも約１：１０，０００、さらにより好ましくは少なくとも約１：５０，０００、さらにより好ましくは少なくとも約１：１００，０００、そして最も好ましくは少なくとも約１：３００，０００の力価で存在してもよい。いくつかの場合、好ましくは、最低１：５，０００又は最高１：３００，０００の抗体力価を有しうる。
【００２１】
［０１９］さらに、抗体は、モノクローナル抗体及び／又はポリクローナル抗体である。抗体は、トピラメートに比較してトピラメート類似体に対して、均一系、不均一系（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ）、又は他の免疫診断アッセイに用いるのに十分な、親和性、特異性、又は結合活性の少なくとも１つを有してもよい。このように、抗体及びトピラメート類似体間の相互作用は、トピラメートに対する抗体の親和性、特異性又は結合活性の少なくとも１つの少なくとも５０％であり、さらにより好ましくは、ラモトリジンに対する抗体の親和性、特異性又は結合活性の少なくとも１つの少なくとも７０％であり、最も好ましくは、ラモトリジンに対する抗体の親和性、特異性又は結合活性の少なくとも１つの少なくとも９０％でもよい。場合により、トピラメート類似体に対する抗体の親和性、特異性又は結合活性の少なくとも１つは、トピラメートに対するものと実質的に同一である。
【００２２】
［０２０］１の態様では、本発明としては、試料中のトピラメートの存在を検出するための免疫診断アッセイで用いる系があげられる。当該系には、トピラメート類似体及び抗トピラメート抗体が含まれうる。さらに、トピラメート類似体又は抗トピラメート抗体の一方が、粒子、磁気粒子、微粒子、微小球体、支持体、酵素供与体又は酵素受容体の１つとカップリングしてもよい。
【００２３】
［０２１］１の態様では、系には、以下の少なくとも１つが含まれてもよい：（ａ）トピラメートのストック組成物；（ｂ）濃度勾配を形成する、異なる濃度のトピラメートを含有する一連の組成物；（ｃ）トレーサー部分にカップリングしたトピラメート類似体；（ｄ）微粒子にカップリングしたトピラメート類似体；（ｅ）微粒子にカップリングした抗体；（ｆ）酵素供与体にカップリングしたトピラメート類似体、並びに対応する酵素受容体；（ｇ）酵素受容体に共役化したトピラメート類似体並びに対応する酵素供与体；又は（ｈ）ろ過又は沈降による分離に適する粒子にカップリングした抗体。
【００２４】
［０２２］本発明としては、試料中のトピラメートの存在を検出するための免疫診断アッセイを行う方法もあげられる。本方法には、抗トピラメート抗体及びトピラメート類似体を、以前トピラメートを投与した被験体から得た試料と合わせて、第一の組成物を形成する工程が含まれてもよい。その後、試料由来のいかなる遊離（ｆｒｅｅ）トピラメート及びトピラメート類似体も、抗体との結合に関して競合できるようにする。競合的結合後にトピラメート類似体及び抗体間の結合を検出する。
【００２５】
［０２３］１の態様では、免疫診断アッセイは、後述のように、蛍光部分を含むトピラメート類似体を用いて本類似体と抗体及び試料を合わせる。第一の偏光量の偏光で、蛍光部分を励起することもでき、第二の偏光量の蛍光部分から放出される偏光を検出する。場合によって、第一の偏光量と第二の偏光量を比較して試料にトピラメートが存在するか否かを決定し、ここで第二の偏光量が、第一の偏光量と異なる場合は、試料中にトピラメートが存在する指標とする。さらに、免疫診断アッセイには、既知の量のトピラメートと、トピラメート類似体及び抗体を合わせて対照結合組成物を形成することによる対照が含まれてもよい。第三の偏光量を有する対照結合組成物で蛍光部分から放出される偏光を検出して第二の偏光量と比較する。その後、試料中に存在するトピラメート量を決定する。
【００２６】
［０２４］１の態様では、免疫診断アッセイは、微粒子にカップリングしたトピラメート類似体又は抗体を用いる。類似体、抗体及び試料を合わせて第一の組成物とするが、ここで、遊離トピラメートは抗体との結合に関して、類似体と競合する。次いで、第一の組成物に入射光線を照射して第一の組成物由来の透過光の第一の強度を検出する。トピラメート類似体及び抗体を有するが遊離トピラメートを有しない、対照結合組成物由来の透過光の最低強度を同定して透過光の第一の強度と比較する。トピラメートが試料に存在するか否かを決定し、ここで最低強度が第一の強度と異なるならば、試料中にトピラメートが存在する指標とする。さらに、免疫診断アッセイには、既知の量のトピラメートと、トピラメート類似体及び抗体を合わせて第二の対照結合組成物を形成することによる、対照が含むこともできる。次いで、第二の対照結合組成物に入射光線を照射して第二の対照結合組成物由来の透過光の第二の強度を検出する。その後、試料中に存在するトピラメートの量を決定することもできるが、ここで第一の強度と第二の強度との比較は、試料中に存在するトピラメート量の指標となる。
【００２７】
［０２５］１の態様では、免疫診断アッセイは、酵素供与体を有するトピラメート類似体を用いる。類似体、抗体、及び試料を合わせて第一の組成物とし、ここで、遊離トピラメートは抗体との結合に関して、類似体と競合する。第一の組成物と酵素受容体及び基質を合わせるが、ここで基質は、酵素供与体及び酵素受容体との相互作用により切断できる。次いで、酵素活性を検出する。さらに、免疫診断アッセイには、既知の量のトピラメート並びにトピラメート類似体及び抗体を合わせて、対照結合組成物を形成することによる、対照が含まれてもよく、その後、酵素受容体及び基質をこれと合わせる。試料中に存在するトピラメート量の指標を提供する、酵素活性と対照酵素活性との比較により、試料中に存在するトピラメートの量を決定する。
【００２８】
［０２６］１の態様では、免疫診断アッセイは、トレーサー部分を有するトピラメート類似体及び粒子とカップリングした抗体を用いる。類似体、抗体、及び試料を合わせて第一の組成物とし、ここで、遊離トピラメートは抗体との結合に関して、類似体と競合する。第一の組成物から抗体を分離して未結合のトピラメート類似体を抗体から分離する。その後、第一の組成物から、抗体と結合しているトレーサー部分を検出する。さらに、免疫診断アッセイには、既知の量のトピラメートと、トピラメート類似体及び抗体を合わせて、対照結合組成物を形成することによる、対照を含んでもよい。したがって、試料中に存在するトピラメート量の指標を提供するため、第一の組成物中のトレーサー部分の量及び対照結合組成物中のトレーサー部分の量を比較することにより、試料中に存在するトピラメートの量を決定してもよい。
【００２９】
［０２７］本発明の上記及び他の態様及び特徴は、以下の説明及び付随する請求項からより完全に明らかになるであろうし、又は以下に示す本発明の実施により確認できる。
【００３０】
［０２８］本発明の上記及び他の利点及び特徴をより明確にするため、添付の図面に例示する、本発明の特定の態様を参照して、本発明のより詳細な説明を提供する。本図面は本発明の典型的な態様のみを示すため、その範囲を限定すると見なしてはならないことは認識されよう。添付の図面を用いて、本発明をより具体的かつ詳細に記載し、説明する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
［０４９］一般的に、本発明は、トピラメート類似体及びトピラメートの免疫診断アッセイに関する。トピラメート類似体は、抗トピラメート抗体を調製するために用いうる免疫原性部分、トピラメートの免疫診断アッセイで用いうる抗原性部分若しくはトレーサー部分が含まれていてもよい。さらに、トピラメート類似体を免疫診断アッセイに用いて、抗トピラメート抗体に関してトピラメートと競合させることもできる。このように、以下の専門用語は、本発明の態様を説明するよう意味するが、限定することを意図したものではない。
【００３２】
［０５０］本明細書中、用語「ハプテン」は、部分的又は不完全な抗体を意味し、小分子又は薬剤でもよい。さらにハプテンは、タンパク質不含又はポリペプチド不含物質である低分子量分子でもよい。通常ハプテンは、単独で抗体形成を刺激できないが抗体と相互作用できる。そこで本発明のトピラメート及びトピラメート類似体はハプテンでもよい。
【００３３】
［０５１］本明細書中、用語「類似体」又は「誘導体」は、１以上の化学反応により、親化合物又は分子から作製される化学的化合物又は分子を意味する。そこで、類似体は、トピラメートの構造に類似であるか又はトピラメート骨格に基づくが、特定の構成要素又は構造的性質はトピラメートと異なる構造の化合物でもよく、代謝的に類似の作用又は反対の作用でありうる。本発明のトピラメートの類似体又は誘導体を用いて類似体及びトピラメートを共に認識する抗体との結合に関して競合させることもできる。また、類似体には、リンカー基を介したトピラメートにカップリングした作用基が含まれうる。
【００３４】
［０５２］本明細書中、用語「免疫原」及び「免疫原性」は、生物中で免疫応答を産生又は生成できる物質を意味する。免疫原はまた抗原でもよい。通常、免疫原は、非常に分子量が高く（例えば１０，０００より大きい）、したがって、本発明の免疫原を形成するために、タンパク質、リポタンパク質、多糖、核酸及び特定のテイコ酸等の様々な巨大分子をハプテンにカップリングしてもよい。
【００３５】
［０５３］本明細書中、用語「免疫原性」は、分子が免疫応答を誘導する能力を意味し、これは、注入される分子の固有の化学構造及び宿主動物が化合物を認識できるか否かで決定する。抗原の構造中の僅かな変化により化合物の免疫原性が大きく改変することもあり、当該変化は、抗体、特に、極めて高く保存されている抗原に対する抗体を得る機会を高める一般的な手段として広く用いられてきた。例えば、これらの修飾技術は、免疫原の領域を改変して、Ｔ細胞結合により優れた部位を提供するか、又はＢ細胞結合のための新規のエピトープを暴露するかである。
【００３６】
［０５４］本明細書中、用語「担体」、「免疫原性部分」、又は「免疫原性担体」は、ハプテンにカップリングすることができる免疫原性物質、一般的にはタンパク質である作用基を意味する。ハプテンにカップリングした免疫原性部分は、免疫応答を誘導することができ、ハプテンと特異的に結合できる抗体の産生を誘発できる。免疫原性部分は、異質（foreign）と認識されて宿主から免疫学的応答を誘発する、タンパク質、ポリペプチド、糖タンパク質、複合多糖、粒子、核酸、ポリヌクレオチド等を含む作用基である。さらに、リンカーには、修飾又は非修飾のヌクレオチド、ヌクレオシド、ポリマー、糖及び他の炭水化物、例えばポリエチレングリコール等のポリエーテル、ポリアルコール、ポリプロピレン、プロピレングリコール、エチレン及びプロピレングリコールの混合物、ポリアルキルアミン、スペルミジン等のポリアミン、ポリ（アクリル酸エチル）等のポリエステル、ポリホスホジエステル及びアルキレン含まれる。作用基及びそのリンカーの例としてはコレステロール−ＴＥＧ−ホスホロアミダイトがあり、ここでコレステロールは作用基であり、そしてテトラエチレングリコール及びホスフェートがリンカーとして機能する。
【００３７】
［０５５］一例として、作用基は免疫原性を刺激し、ハプテンに対する抗体形成を刺激するためにハプテンにカップリングさせることができる、免疫原性担体である。通常、免疫原性担体は、免疫原性が高くハプテンに対して免疫原性を供与できる、巨大分子である。例えば、異質のタンパク質は当該免疫学的応答を誘発できるため、タンパク質を免疫原性担体として用いうる。タンパク質担体は可溶性が高くてもよく、ハプテン分子との共役化を容易に促進できる官能基を含んでいてもよい。現在用いられている最も一般的な担体タンパク質のいくつかは、キーホールリンペット（keyhole limpet）・ヘモシアニン（ＫＬＨ；ＭＷ ４５０，０００〜１３，０００，０００）及びウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、ＭＷ ６７，０００）である。キーホールリンペット・ヘモシアニンは、海生キーホールリンペットの酸素運搬タンパク質であり、非常に巨大で、解離させてサブユニットにすると免疫原性が高まるが、これはおそらく他のエピトープ部位が免疫系に曝露されるためである。ＢＳＡは共役化に適した多くの官能基を含有する可溶性の高いタンパク質である。
【００３８】
［０５６］本明細書中、用語「抗体」は、体内の異質な分子の存在に応答して産生されるタンパク質を意味する。これらは、抗原及び免疫系の特異的な細胞又はタンパク質の両方に結合する能力で特徴付けできる。抗体は、５つのクラス、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、及びＩｇＤに分けられる、形質細胞により産生される免疫グロブリンである。
【００３９】
［０５７］本明細書中、用語「エピトープ」は、抗体と相互作用する抗原の領域を定義するよう意味する。したがって、抗原である分子又は他の物質としては、抗体活性がある少なくとも１のエピトープがあげられる。これにより、抗原が、同一抗体又は異なる抗体により認識される様々なエピトープがありうる。また、エピトープは任意の特定構造の固有の特性ではなく、抗体と相互作用する結合部位と定義できる。
【００４０】
［０５８］本明細書中、用語「親和性」は、エピトープ及び抗体間の結合強度の測定値を意味する。したがって、単一の抗体は、様々なエピトープに対する親和性が異なってもよい。これにより、単一の抗体は１のエピトープに強く結合し、他のエピトープにより弱く結合することが可能となる。つまり、抗体は、トピラメート等の薬剤に対して第一の親和性があり、トピラメート類似体に対して第二の親和性があってもよい。しかし、抗体はトピラメート及びトピラメート類似体類似体の両方に対する親和性が実質的に同等又は類似であってもよく、これにより、類似体を用いて、トピラメートに対する抗体を生成して、競合的結合試験に用いることが可能となる。したがって、本発明のトピラメート類似体を用いて、トピラメートに親和性がある抗体を生成することができる。
【００４１】
［０５９］本明細書中、用語「結合活性」は、抗体及び抗原の複合体の全体的な安定性の測定値を意味する。抗体−抗原相互作用の全体的な安定性は、以下の３つの主な要因に制御されうる：（ａ）エピトープに対する抗体固有の親和性；（ｂ）抗体及び抗原の価数；及び（ｃ）相互作用構成要素の幾何学的配置。つまり、上記パラメーター及び他のパラメーターを変化させて、抗体−抗原複合体の結合活性を調節することができる。
【００４２】
［０６０］本明細書中、用語「特異性」は、他の利用可能なエピトープと比較した、エピトープと抗体の優先的な結合を意味する。すなわち、抗体の特異性は、トピラメート代謝産物ではなく、トピラメート及び／又は類似体に優先的に結合できる。これを用いて、不都合な抗体−代謝産物結合が混入しないようにして、トピラメートの真の濃度を評価できるように、代謝産物よりもトピラメートと優先的に結合する、抗トピラメート抗体を生成することもできる。また、トピラメートとの結合に関する抗体の特異性を用いて、トピラメートの特異性が類似又は実質的に同一な類似体を調製することもできる。
【００４３】
［０６１］本明細書中、用語「結合速度（ｏｎ ｒａｔｅ）」、「解離速度（ｏｆｆ ｒａｔｅ）」、又は「結合−解離速度（ｏｎ−ｏｆｆ ｒａｔｅ）」は、抗体−抗原相互作用の動力学を記載する方法を意味する。すなわち「結合速度」は、Ｋａ（すなわち結合定数）を意味し、「解離速度」は、Ｋｄ（すなわち解離定数）を指すよう意味する。各抗体には、特定の抗原又はエピトープに対するＫａがあり、これは、通常は結合の親和性又は強度という。ポリクローナル抗体に関しては、「結合−解離速度」は、ポリクローナル抗体を形成する特定の抗体各々に関する、多くの異なるＫａ又はＫｄの合計を意味する。
【００４４】
［０６２］本明細書中、用語「ポリクローナル抗体」は、所定の抗原又はエピトープに対する特異性及び親和性の範囲が広い抗体の異種混合物を意味する。したがって、ポリクローナル抗体としては、各々他と区別でき、抗原と結合するか又は他の態様で相互作用する、複数の抗体があげられる。エピトープのある免疫原を動物内に注射して適切な時間の経過後、目的の抗体を含有する血液分画を収集して、場合により精製することにより、ポリクローナル抗体を含む、異なる抗体を産生するか又は生成することができる。抗体を産生する場合、ポリクローナル抗体の最終的な使用について、いくつかのパラメーターを考慮してもよい。これらのパラメーターとしては以下があげられる：（１）抗体の特異性（すなわち抗原を区別する能力）；（２）抗体の結合活性（すなわちエピトープに結合する強度）；及び（３）アッセイ系での抗体の最適な希釈を決定する、抗体力価。
【００４５】
［０６３］本明細書中、用語「モノクローナル抗体」は、正常な抗体産生細胞及び１の前駆細胞の培養物から単離された抗体を意味する。モノクローナル抗体の結合定数は、均一であってもよく、当該技術分野で周知である。
【００４６】
［０６４］本明細書中、「抗体力価」は、血清希釈の逆数を意味する。より好適に記載及び形式化するため、本態様で力価を記載する。１／５００００の力価は、抗原を１：５００００で希釈した場合に、抗体が、共に結合させた抗原のエピトープを有効に検出することを意味する。力価は、最大Ｏ．Ｄ．の約１０％である終点力価により計算される。
【００４７】
［０６５］本明細書中、用語「Ｂｍａｘ」は、力価と独立して、抗体及びリガンド（例えば類似体、抗原、標識等）間の最大結合を意味する。また、Ｂｍａｘは、結合活性と関連させてもよく、また結合活性から独立してもよく、抗体がどの程度良好にリガンドに結合して測定可能なシグナルを生じうるかを決定するための評価に用いることができる。さらに、Ｂｍａｘは、各標本の最大吸光度として決定でき、Ｂｏを計算するために用いてもよい。Ｂｍａｘの値は、３〜４ＯＤと同程度の高さで変化してもよく、モノクローナル抗体プログラムに関しては、さらに高くてもよい。
【００４８】
［０６６］本明細書中、用語「Ｂｏ」は、結合置換アッセイの吸光度選択を意味し、置換アッセイに関しては、Ｂｍａｘの約３０％〜５０％である。このように、Ｂｏを用いて、解離速度を迅速に測定してもよく、これを用いて結合活性をアッセイしてもよい。また、ＯＤがＢｍａｘの約半分である場合、５０％Ｂｍａｘを用いてもよいが、これは一般的に、１．７〜１ＯＤの範囲でありうる。ときに、５０％Ｂｍａｘが１．７程度のＯＤである場合もあり、この場合は、正確な測定には抗体が過剰供給されすぎている可能性もあり、しばしば結果として置換が劣る。したがって、抗体があまりに過剰供給されている場合は、３０％Ｂｍａｘを用いてもよい。適切なＢｏ値及び置換データを得るため、Ｂｍａｘは２．０〜２．５ＯＤ内でよく、Ｂｏは１．０〜１．２５ＯＤ内でもよい。
【００４９】
［０６７］本明細書中、用語「免疫アッセイ」又は「免疫診断」は、生物学的試料中の特定の抗原又は特定の抗体の少なくとも１つを同定及び／又は定量化するため、抗原及び抗体間の結合を利用する実験技術を意味する。現在、以下に記載するような３種の免疫アッセイがある：（１）抗体捕捉アッセイ；（２）抗原捕捉アッセイ；及び（３）２抗体サンドイッチアッセイ。さらに、新規免疫アッセイが開発され、本発明の類似体及び抗体を使用しうるであろうことが意図される。
【００５０】
［０６８］本明細書中、用語「競合的免疫アッセイ」は、既知量の同定可能な抗原が、抗体との結合に関して他の抗原と競合する、実験プロトコルを意味する。すなわち、既知の抗体と結合する既知の抗原を、その既知の抗体と結合する他の抗原を含有すると推測される試料と合わせる。これにより、該抗体上の結合部位で、既知の抗原及び他の抗原が共に競合することができる。例えば、抗トピラメート抗体と結合するトピラメート類似体を、トピラメートを含有すると推測される試料と合わせてもよく、当該類似体及びトピラメートが、抗トピラメート抗体との結合に関して競合する。その後、抗体との結合に関する競合を用いて、試料中にトピラメートが存在するか否かを決定してもよく、試料中のトピラメート量を定量化することもできる。
【００５１】
［０６９］本明細書中、用語「比濁検出」は、凝集粒子により散乱される光による、入射光線の透過における強度の減少又は吸光度の増加の測定値を意味する。透過光の強度の減少は、透過光のより高い出発バックグラウンド強度に対して測定される。通常、読取りは、光供給源と一列になった検出装置で行われ、粒子の凝集が光の透過を阻害する。したがって、トピラメート等の標的分析物の存在を評価する手段として、凝集の阻害又は促進を用いることもできる。比濁アッセイは、様々な臨床分析装置に容易に適応できる。
【００５２】
［０７０］本明細書中、用語「微粒子凝集アッセイ」は、標的分析物による微粒子の凝集を阻害する原理を用いる免疫アッセイを意味する。すなわち、標的分析物が存在すると凝集が減少する。例えば、標的薬剤の誘導体が微粒子表面に共有結合し、及び／又は増感粒子はモノクローナル抗体により凝集する。試料が遊離薬剤を含有する場合、凝集は薬剤濃度に比例して阻害され、吸光度と関連した薬剤濃度の古典的な阻害曲線が導かれる。
【００５３】
［０７１］本明細書中、用語「療法的濃度」は、所望の臨床効果を生じる場合の有効な薬剤の濃度を意味する。
【００５４】
［０７２］本明細書中、用語「作用基」は、リンカー基を介してトピラメートにカップリングした分子又は巨大分子を意味する。作用基としては、免疫原性部分、抗原部分、トレーサー部分等があげられる。さらに、本明細書記載の化学的骨格のＺ基が作用基である。つまり、作用基をＹリンカー基にカップリングさせ、類似体に他の機能を提供しうる。
【００５５】
［０７３］本明細書中、用語「活性エステル」又は「活性化エステル」は、例えばペプチド及びタンパク質等の化合物の遊離アミノ基と反応できるエステル基を意味する。活性エステルとしては、活性脱離基に連結されたカルボキシル基があげられる。しばしば、活性脱離基には、エステル酸素が含まれ、活性脱離基はエステル酸素を除去する。例えば活性エステルは、一級アミンによる置換に感受性であり、これにより、エステル酸素が除去され、アミド基が形成される。活性エステルを形成する活性脱離基の例としては、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（「ＮＨＳ」）、ｐ−ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾリル等があげられる。よって、用語「ＮＨＳ」を用いる場合は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドとして定義されることを意味する。
【００５６】
［０７４］本明細書中、用語「標識」、「検出剤分子」又は「トレーサー」は、検出可能シグナルを生じるか又は生じるように誘導できる、いかなる作用基をも意味する。標識をトピラメート、トピラメート類似体、ハプテン、分析物、免疫原、抗体、又は受容体又は受容体に結合できる分子等の他の分子に共役化できる。トレーサーの例としては、放射性同位体、酵素、酵素断片、酵素基質、酵素阻害剤、補酵素、触媒、フルオロフォア、色素、化学発光剤、発光剤、増感剤、非磁気又は磁気粒子、固体支持体、リポソーム、リガンド、受容体、ハプテン放射性同位体等があげられるがこれらに限定されない。本明細書中、類似体は、当該技術分野で周知の方法で様々な標識にカップリングして、様々な免疫アッセイ系で有用な様々な試薬を提供することもできる。免疫アッセイの結果を検出するため、フルオロフォア、例えばフルオレセイン、放射標識、又は化学発光基等の検出剤分子を類似体にカップリングして、トレーサーを産生することができる。
【００５７】
［０７５］本明細書中、用語「連結基」又は「リンカー」は、例えばトピラメート又はトピラメート類似体と作用基等の２以上の基礎構造（substructure）を連結する化学構造部分を意味する。連結基は、基礎構造間に伸長する、水素（又は他の一価の原子）以外の原子の少なくとも１の中断されていない鎖があってもよい。通常、連結基としては、置換されていても又は置換されていなくてもよい炭素原子又はヘテロ原子の鎖があげられる。連結基の原子及び連結基内の鎖の原子は、化学的結合で相互連結できる。例えば、リンカーは、直鎖又は分枝鎖、置換又は非置換、飽和又は不飽和鎖でもよく、鎖の原子としては、炭素及び／又はヘテロ原子があげられる。これには、鎖内又は鎖末端の１以上のヘテロ原子も含まれうる。さらに、連結基にはまた、鎖の一部として、又は鎖中の１の原子上の置換として、環状基及び／又は芳香族基もあげられる。連結されている基礎構造間の最短経路である鎖の主鎖の水素以外の原子の数を計測することにより、連結基又はリンカー中の原子の数を決定する。ハプテンをトレーサー、標識、担体、免疫原性部分等と共役化するため、連結基を用いて、利用できる部位をハプテン上に提供することができる。
【００５８】
［０７６］本明細書中、用語「ヘテロ原子」は、酸素、窒素、硫黄、リン等の炭素原子以外の原子を意味する。通常、連結基又は他の部分で用いられる、少なくとも２つの共有結合を形成できるように、ヘテロ原子は多価である。
【００５９】
［０７７］トピラメート類似体には、部分に共役化したトピラメート分子があげられる。部分は、トピラメートの物理化学特性を修飾できる広い範囲の化学的化合物でありうる。また、リンカーとして部分を用いるか又は部分がトピラメートに連結基を共役化できる。すなわち、部分としては、アルキル、脂肪族、直鎖脂肪族、分枝鎖脂肪族、置換脂肪族、環状脂肪族、複素環脂肪族、芳香族、複素環芳香族、多環芳香族等があげられる。
【００６０】
［０７８］本明細書中、用語「脂肪族」は、直鎖又は分枝鎖、飽和又は不飽和、及び／又は置換又は非置換であってもよく、主鎖中に２０以下の炭素又はヘテロ原子を有する、アルキル基等のヒドロカルビル部分を意味する。さらに、脂肪族には、主鎖中に１０以下の炭素又はヘテロ原子が含まれうる。脂肪族基は、直鎖、分枝鎖、環状及び／又は複素環である部分を含んでいてもよく、エーテル、ケトン、アルデヒド、カルボキシレート等の官能基を含有してもよい。典型的な脂肪族基としては、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、ノナデシル、エイコシル、より多数の炭素のアルキル基等、並びに２−メチルプロピル、２−メチル−４−エチルブチル、２，４−ジエチルプロピル、３−プロピルブチル、２，８−ジブチルデシル、６，６−ジメチルオクチル、６−プロピル−６−ブチルオクチル、２−メチルブチル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２−エチルヘキシル等の置換及び／又は非置換基が含まれるが、これらに限定されない。用語、脂肪族又はアルキルはまた、ビニル等のアルケニル基、アリル、アラルキル及びアルキニル基も含む。
【００６１】
［０７９］脂肪族基内の置換には、脂肪族部分で許容されうるいかなる原子又は基も含まれてよく、ハロゲン、硫黄、チオール、チオエステル、アミン（一級、二級、又は三級）、アミド、エーテル、エステル、アルコール、酸素等が含まれるが、これらに限定されない。脂肪族基としてはまた、例えば、アゾ基、ケト基、アルデヒド基、カルボニル基、カルボキシル基、ニトロ、ニトロソ又はニトリル基、イミダゾール等の複素環、ヒドラジノ又はヒドロキシルアミノ基、イソシアネート又はシアネート基、並びにスルホキシド、スルホン、スルフィド、及びジスルフィド等の硫黄含有基等の修飾も含んでよい。さらに、置換は、適切か又は可能な場合、単結合、二重結合、又は三重結合を介してもよい。
【００６２】
［０８０］さらに、脂肪族基はまた、例えば窒素、酸素、リン、又は硫黄等のヘテロ原子により炭素原子が置換されたヘテロ置換も含有しうる。つまり、置換脂肪族で構成されるリンカーは、炭素、窒素、酸素、硫黄、リン及び／又は同様のもので構成される主鎖を有しうる。複素環置換は、ヘテロ原子が１以上あるアルキル環をいう。複素環部分の例には、モルホリノ、イミダゾール、及びピロリジノが含まれるが、これらに限定されない。
【００６３】
［０８１］本明細書中、用語「芳香族」は、電子が原子の円形又は環状配置周囲を自由に循環し、互いに交互に単結合及び二重結合する分子をいう。より適切には、これらの結合が単結合及び二重結合のハイブリッドであり、環中の各結合が他のすべてと同一であるとみなすこともできる。ラモトリジン類似体中に存在しうる芳香族化合物の例としては、ベンゼン、ベンジル、トルエン、キシレン等があげられる。芳香族化合物には、ピリジン、フラン、テトラヒドロフラン等のヘテロ芳香族となるようなヘテロ原子を含んでいてもよい。また、芳香族は、ナフタレン、アントラセン、フェナントレン、多環芳香族炭化水素、インドール、キノリン、イソキノリン等の多環芳香族でもよい。
【００６４】
［０８２］本明細書中、用語「アミン」は、１、２、又は３の水素原子を、例えばアルキル基等の他の基で置換して、アンモニアに直接又は間接的に由来しうる部分を意味する。一級アミンの一般構造はＲＮＨ２であり、そして二級アミンの一般構造はＲ２ＮＨである。用語、アミンには、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、アニリン、シクロヘキシルアミン、ベンジルアミン、多環アミン、アリール及びアルキルアミンで置換されたヘテロ原子、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ジブチルアミン、メチルプロピルアミン、メチルヘキシルアミン、メチルシクロプロピルアミン、エチルシクロヘキシルアミン、メチルベンジルアミン、メチルシクロヘキシルメチルアミン、ブチルシクロヘキシルアミン、モルホリン、チオモルホリン、ピロリジン、ピペリジン、２，６−ジメチルピペリジン、ピペラジン、及びアルキル又はアリール二級アミンで置換されたヘテロ原子が含まれるが、これらに限定されない。
【００６５】
［０８３］本明細書中、用語「ポリ（アミノ酸）」又は「ポリペプチド」は、アミノ酸から形成されるポリアミドである。ポリ（アミノ酸）は、一般的に、分子量約２００〜２，０００又は分子量の範囲が約２，０００を超えるか又は、分子量上限がなく、通常、分子量が１０，０００，０００未満であり、最高でも約６００，０００ダルトンであろう。通常、免疫原性担体又は酵素が関与するか否かに応じて範囲が異なるであろう。
【００６６】
［０８４］本明細書中、用語「ペプチド」は、アミド（ペプチド）結合により２以上のアミノ酸の連結により形成されるいかなる化合物をも意味し、通常、直鎖中の各アミノ酸残基のα−アミノ基（ＮＨ２末端を除く）が、次の残基のα−カルボキシル基に連結されているα−アミノ酸のポリマーである。用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「ポリ（アミノ酸）」は、本明細書中、大きさの制限なくこの種の化合物を指すべく、同義的に用いられる。この種の最大のメンバーは、明確なポリペプチド配列があるタンパク質をいう。
【００６７】
［０８５］本明細書中、用語「生物学的試料」は、生命体から得られる固体又は液体試料を意味する。つまり、生物学的試料としては、ヒト及び他の動物等の、生物又は以前生存していたものに由来する、いかなる量の物質もあげられるが、これらに限定されない。本物質としては、血液、血清、血漿、尿、涙、細胞、臓器、組織、骨、骨髄、リンパ、リンパ節、滑膜組織、軟骨細胞、滑膜マクロファージ、内皮細胞、皮膚等があげられるが、これらに限定されない。
【００６８】
［０８６］本明細書中、用語「患者」は、ヒト及び他の動物被験体を意味する。より詳細には、患者は、トピラメート等の抗癲癇薬剤が必要なヒト又は他の動物被験体である。
【００６９】
［０８７］さらに、本発明を記載するために本明細書で用いる用語は、上記定義及び／又は当該技術分野で周知の定義を用いて解釈できる。つまり、上記命名法は、本発明を説明するよう意味し、そして限定することを意図したものではない。
【００７０】
Ｉ．トピラメート類似体
［０８８］１の態様では、本発明は、トピラメートの類似体に関する。このように、トピラメートを、トピラメートのスルファメート部分あるいは９炭素又は１０炭素メチル基で、類似体部分と共役化して、類似体を形成してもよい。９炭素又は１０炭素共役体は、多くの場合に実質的に区別できないように、化学反応及び／又は官能性が実質的に類似しており、ここで、９炭素又は９位はまた、１０炭素又は１０位も意味する。
【００７１】
［０８９］トピラメート類似体は、さらに、類似体部分又はリンカーを介して、免疫原性部分、抗原性部分及び／又はトレーサー部分にカップリングでき、免疫原、抗原及び／又はトレーサー等の他の類似体を形成する。さらに、抗体誘導及び認識に利用できるトピラメート類似体の部分が、トピラメート代謝産物、９−ヒドロキシトピラメートでは異なる領域であるため、特定の場合は、９炭素メチル基ではなくスルファメート部分を介した共役体が好適でありうる。
【００７２】
［０９０］１の態様では、本発明は、スルファメート・共役体を有するトピラメートの新規類似体である。すなわち、スルファメート基を、硫黄原子を介して連結部分にカップリングできる。リンカー部分は、類似体を形成するため、トピラメート骨格とカップリングしている置換基と見なしてもよい。リンカー部分は、以下により詳細に記載する、様々な化学物質でもよい。したがって、トピラメートのスルファメート置換類似体は、式１Ａ及び／又は式１Ｂの一般的な構造を有する：
【００７３】
【化３】
【００７４】
［０９１］他の態様において、トピラメート骨格には、１０−置換と実質的に類似する９−置換が含まれてもよい。したがって、トピラメートの９−置換類似体は、式２Ａ及び／又は式２Ｂの一般的な構造を有してもよい：
【００７５】
【化４】
【００７６】
［０９２］式１Ａ、１Ｂ、２Ａ及び／又は２Ｂに示すトピラメート骨格を、広い範囲の化学物質で置換できる。したがって、Ｌ基は、Ｏ、ＣＯ、ＣＯＯ、ＳＯ２、ＣＨ２、ＮＨ、ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ、ＮＨＣＯ又はＮＨＣＨ２Ｐｈでもよい。このように、Ｌ基を連結基として用いて類似体部分及び／又は共役部分をトピラメート骨格に共役化できる。
【００７７】
［０９３］さらに、式１Ａ、１Ｂ、２Ａ及び／又は２Ｄに関して用いる場合、Ｘ基は、１〜２０の炭素又はヘテロ原子、あるいはより好ましくは１〜１０の炭素又はヘテロ原子を有する、飽和又は不飽和、置換又は非置換及び／又は直鎖又は分枝鎖でもよい。置換基の例には、一級及び二級アミン、脂肪族基、カルボニル基、ハロゲン等が含まれる。また、Ｘ基としては、置換されているか又は置換されていない環状基、あるいは１〜２の環を有する置換又は非置換芳香族又は脂肪族基、多環芳香族、芳香族複素環等があげられる。Ｘ基はまた、環基の代わりに又は環基に加え、炭素又はヘテロ原子の１〜２０又は１〜１０鎖原子を含有する置換又は非置換脂肪族連結基でもよい。さらに、Ｘ基は、Ｌ及びＹ間のいかなる種類の結合でもよい。また、Ｘは、上記基のいかなる組み合わせでもよい。
【００７８】
［０９４］Ｙ基は、末端基又はカップリング基であってもよく、これを担体、標識、免疫原性部分等の作用基とリンカー基をカップリングするために用いてもよい。ある場合、当該技術分野で周知の化学合成を介して、末端基を、担体、トレーサー部分、又は免疫原性部分で誘導体化するか、又はこれらとカップリングでき、ここで、Ｙ基は、Ｚ基とカップリングするのに用いられる反応基である。このように、Ｙは、脂肪族、アルコール、アミン、アミド、カルボン酸、アルデヒド、エステル、活性化エステル、脂肪族エステル、イミドエステル、イソシアネート、イソチオシアネート、無水物、チオール、アルコール、チオラクトン、ジアゾニウム基、マレイミド基等並びにそれらに由来する基等の様々な基であってもよい。また、Ｙは、Ｙ１−Ｚであってもよく、Ｙ１は、Ｚ基にカップリングしているＹ末端基に由来できる。
【００７９】
［０９５］さらに、Ｚ基は、存在しないか、又はリンカー部分にカップリングできるいかなる部分でもあってもよい。このように、Ｌ−Ｘ−Ｙ基は、類似体部分と見なすこともできるし、そしてＺ基は作用基であってもよい。リンカー部分は、トピラメート骨格及び作用基間のリンカー又は連結基として機能的に作用できる。例えば、作用基は、担体、標識、トレーサー、タンパク質、酵素、蛍光化合物、リン光生成化合物、温度発色性（ｔｈｅｒｍｏｃｈｒｏｍｉｃ）化合物、光発色性化合物、抗ストークス（ａｎｔｉ−ｓｔｏｋｅｓ）上方制御化合物、化学発光物質、電気化学仲介剤、粒子、レポーター基、酵素阻害剤、核酸、ポリペプチド等であってもよい。
【００８０】
［０９６］例えば、式１Ａ、１Ｂ、２Ａ及び／又は２Ｂの各々において、Ｘ基は、結合又は１以上の原子の鎖であってもよく、存在する場合は、少なくとも１つの原子が炭素である。このように、Ｘは、Ｌ及びＹ間の共有結合であってもよい。具体例として、Ｘは、以下の基のいずれでもよい：ＣＨ２；（ＣＨ２）２；（ＣＨ２）３；（ＣＨ２）４；（ＣＨ２）５；（ＣＨ２）６；ＣＨ２ＣＯ；（ＣＨ２）２ＣＯ；（ＣＨ２）３ＣＯ；（ＣＨ２）４ＣＯ；（ＣＨ２）５ＣＯ；（ＣＨ２）６ＣＯ；ＣＨ２ＣＯＯ；（ＣＨ２）２ＣＯＯ；（ＣＨ２）３ＣＯＯ；（ＣＨ２）４ＣＯＯ；（ＣＨ２）５ＣＯＯ；（ＣＨ２）６ＣＯＯ；ＣＯ；ＣＯＯ；ＣＯＣＨ２；ＣＯ（ＣＨ２）２；ＣＯ（ＣＨ２）３；ＣＯ（ＣＨ２）４；ＣＯ（ＣＨ２）５；ＣＯ（ＣＨ２）６；ＣＯＣＨ２ＣＯ；ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯ；ＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯ；ＣＯ（ＣＨ２）４ＣＯ；ＣＯ（ＣＨ２）５ＣＯ；ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯ；ＣＯＣＨ２ＣＯＯ；ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ；ＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯ；ＣＯ（ＣＨ２）４ＣＯＯ；ＣＯ（ＣＨ２）５ＣＯＯ；ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ；ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨＣＨ２；ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２；Ｐｈ；ＣＯＮＨＣＨ２Ｐｈ；ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３；ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ；ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ；ＮＨＣＨ２；ＮＨ（ＣＨ２）２；ＮＨ（ＣＨ２）３；ＮＨ（ＣＨ２）４；ＮＨ（ＣＨ２）５；ＮＨ（ＣＨ２）６；ＮＨＣＨ２ＣＯ；ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＯ；ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ；ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＯ；ＮＨ（ＣＨ２）５ＣＯ；ＮＨ（ＣＨ２）６ＣＯ；ＮＨＣＨ２ＣＯＯ；ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＯＯ；ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ；ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＯＯ；ＮＨ（ＣＨ２）５ＣＯＯ；ＮＨ（ＣＨ２）６ＣＯＯ；ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２；ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６；ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯ；ＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯ；ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ；又はＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ；その組み合わせ等。より好ましくは、Ｘは、ＣＨ２、（ＣＨ２）２、（ＣＨ２）３、ＣＨ２ＣＯＯ、（ＣＨ２）２ＣＯ、（ＣＨ２）２ＣＯＯ、（ＣＨ２）３ＣＯ、（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）６、ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＣＯ、ＣＯＯ、Ｐｈ、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、その組み合わせ等からなる群より選択される。
【００８１】
［０９７］例えば、式１及び２の各々で、Ｙ基は、末端基又は末端基由来のリンカーを含んでもよく、常に存在する。具体例として、Ｙは、以下の末端基又はそれに由来するいかなるリンカー基でもよい：ＣＯＯＨ（カルボン酸）；ＣＯＯ；ＣＯＯ−ＮＨＳ（ＮＨＳ活性エステル）；ＮＨＳ；ｔｅｒｔブチル（ｔ−ブチル）；ＣＯＯ−ｔｅｒｔブチル；ＯＨ；Ｏ−ＮＨＳ（ＮＨＳ活性エステルリンカー）；ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３；ＣＯＯＣＨ３；ＯＣＨ２ＣＨ３；ＯＣＨ３；ＮＨ；ＮＨ２；ＮＨＣＯ（アミド）；その組み合わせ等。より好ましくは、Ｙが末端基である場合、Ｙは、ＮＨＳ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−ＮＨＳ、ＣＯＯ−ｔｅｒｔブチル、ｔｅｒｔブチル、ＯＨ、Ｏ−ＮＨＳ、ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＯＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＯＣＨ３、又はＮＨ２からなる群より選択できる。一方、Ｙがリンカーである場合、Ｙは、Ｙ１−Ｚであり、式中、Ｙ１は、好ましくはＣＯＯ、ＣＯ、Ｏ、ＣＯＮＨ、又はＮＨの少なくとも１つからなる群より選択されてもよく、Ｚは巨大分子である。
【００８２】
［０９８］したがって、Ｚ基又は作用基は、担体、トレーサー、又は標識、例えばタンパク質、酵素、蛍光化合物、化学発光物質、電気化学仲介剤、粒子、レポーター基、酵素阻害剤、及び／又は核酸であってもよい。具体例として、Ｚは、以下の巨大分子基のいずれでもよい：（ａ）ＢＳＡ；（ｂ）ＫＬＨ；（ｃ）蛍光トレーサー；及び（ｄ）これらと同等のもの。
【００８３】
［０９９］一般的に、類似体には、当該技術分野で周知の方法による様々な作用基が含まれ、様々な免疫アッセイ形式において有用な様々な試薬を提供することもできる。このように、フルオロフォア、放射標識、又は化学発光基等の検出剤分子を用いて、トレーサーを産生することもできる。また、ラテックス凝集及びクロマトグラフィー片試験におけるように、分光光度検出形式又は直接視覚的検出形式で用いるため、類似体を着色ラテックス等の微粒子に結合させてもよい。作用基はまた、エネルギー移動パートナー、酵素又は他の基等の、他の化学反応によって検出される間接的検出分子であってもよい。
【００８４】
［０１００］したがって、作用基をカップリングしうるいかなる化学反応によっても類似体と作用基のカップリングを達成できる。この連結又はカップリングには、多くの化学的機構が含まれてもよく、例えば共有結合、アフィニティー結合、インターカレーション、配位結合及び錯化が含まれうる。多くの場合、連結又はカップリングは共有結合を介して行われる。存在する側鎖の直接縮合又は外部架橋分子の取り込みのいずれかにより共有結合を達成できる。多くの二価又は多価連結剤は、担体等のタンパク質分子を類似体にカップリングする場合に有用でありうる。代表的なカップリング剤としては、チオエステル、カルボジイミド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン、及びヘキサメチレンジアミン等の有機化合物があげられる；しかし、このリストは、当該技術分野に公知の様々な種類のカップリング剤を包括的に編集したものではなく、むしろ、より一般的なカップリング剤の代表である。
【００８５】
［０１０１］１の態様では、ラモトリジン類似体は、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＯＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＯＮＨＳ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＮＨＳ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯＮＨＳ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯＮＨＳ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯＮＨＳ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＮＨＳ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＣＨ３、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＨ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＮＨＳ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯＨ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯＮＨＳ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯＨ、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯＮＨＳ、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＣ（ＣＨ３）３、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＨ、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＮＨＳ、ＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯＨ、
ＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯＮＨＳ、ＮＨＣＯＰｈＣＯＯＨ、ＮＨＣＯＰｈＣＯＯＮＨＳ、
ＯＯＣＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、ＯＯＣＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＣＨ３、
ＯＯＣＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＮＨＳ、ＯＯＣＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＨ、
ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＨ、ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＮＨＳ等からなる群より選択されるＬ−Ｘ−Ｙを有することもできる。
【００８６】
［０１０２］１の態様では、ラモトリジン類似体は、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ−ＢＳＡ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＢＳＡ、ＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨＣＯＰｈＣＯＯ−ＢＳＡ、ＯＯＣＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＢＳＡ等からなる群より選択されるＬ−Ｘ−Ｙ−Ｚを有することもできる。
【００８７】
［０１０３］１の態様では、治療剤として、式１Ａ、１Ｂ、２Ａ及び／又は２Ｂのトピラメート類似体を用いることもできる。このように、トピラメート類似体を、トピラメートと同様に抗癲癇薬剤として用いることもできる。しかし、トピラメート類似体を治療剤として用いる場合、Ｚは、好ましくは、免疫原を形成しないように存在しない。したがって、ヒトを含む動物のための抗癲癇治療でトピラメートの非免疫原性類似体を用いることもできる。
【００８８】
ＩＩ．トピラメート免疫原
［０１０４］トピラメート等の小分子の検出のために免疫アッセイを実行するのは、困難な場合もある。これは、当該小分子に抗原性がない場合があるためであり、そのため、トピラメートに対する抗体を生成することが困難になり、免疫原性がないトピラメートでは特に問題があるためである。免疫原性を高めるため、ウシ血清アルブミン、オボアルブミン、キーホールリンペット・ヘモシアニン等を含むが、これらに限定されない、より大きい抗原性化合物を薬剤にカップリングしてもよい。さらに、免疫アッセイで薬剤を検出する場合は、一般的に、抗体、トピラメート、又はトピラメート類似体に共役化された検出可能トレーサーを用いることが必要となる。
【００８９】
［０１０５］したがって、スルファメート部分又は９炭素メチル基で、トピラメートに作用基をカップリングして、免疫原によって誘導された抗体が、免疫原、トピラメート、及び他のトピラメート類似体と反応できるように、トピラメートと免疫学的に十分に類似であるトピラメート免疫原を提供することもできる。このように、トピラメートに基づく免疫原もまたトピラメート類似体と見なされる。免疫原性担体を含む、本発明記載のトピラメート類似体は、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体等の抗トピラメート抗体の産生を誘導できる。したがって、固有のトピラメート免疫原を用いて生成される抗体は、トピラメート及び他のトピラメート類似体と相互作用及び／又は結合することもできる。これらの抗体、免疫原、抗原、及び類似体は、生物学的試料中のトピラメートを検出するための免疫アッセイを調製し、実行する場合に有用でありうる。
【００９０】
［０１０６］トピラメート誘導体の官能基の１つと反応するリンカーを介して、トピラメートを抗原性担体タンパク質にカップリングさせて、免疫原を作製することもできる。トピラメート類似体に基づくトピラメート免疫原は、本明細書に援用される、米国特許第５，９５２，１８７号に記載されている。しかし、トピラメート類似体は、化学的性質反応が最適化されずに調製され、商業化レベルでトピラメート検出に適用するために用いるのに最適な類似体、免疫原、又は抗体を産生しなかった。したがって、本発明により調製される類似体及び免疫原は、化学的性質が改善され、リンカーを有する、商業的な適用に用いるのに十分な力価で、抗体を産生できる免疫原を産生する。
【００９１】
［０１０７］１つ態様では、トピラメート類似体の免疫原性を高めるため、キーホールリンペット・ヘモシアニン等の大きい抗原性化合物をトピラメート類似体にカップリングさせることもできる。また、ある場合、長いリンカーが長いほど、生じる抗体の親和性も高まることも見出されている。１つには、リンカーがより長いと抗原に接近できるようになると考えられるが、このような思考には束縛されない。また、暴露される抗原又はエピトープの表面積が増加するため、結合活性が高まる可能性もあり、これにより当該技術分野で改善がもたらされる。
【００９２】
［０１０８］１の態様では、本発明は、上記トピラメート類似体から調製される免疫原に関する。すなわち、式１Ｂ及び２Ｂの類似体には、上記リンカー部分が含まれてもよく、Ｚは、免疫原性部分であってもよい。つまり、Ｚは、免疫学的応答を誘発でき、トピラメート類似体の少なくとも一部を標的とする抗体の産生を提供できる、いかなる免疫原性部分であってもよい。
【００９３】
［０１０９］免疫原性部分には、免疫原性担体として機能できる、様々なタンパク質又はポリペプチドが含まれうる。これらの種類のポリペプチドとしては、アルブミン、血清タンパク質、グロブリン、眼球レンズのタンパク質、リポタンパク質、及びその一部があげられる。具体例となるタンパク質としては、ウシ血清アルブミン（「ＢＳＡ」）、キーホールリンペット・ヘモシアニン（「ＫＬＨ」）、卵オボアルブミン、ウシ・ガンマ−グロブリン（「ＢＧＧ」）等があげられる。あるいは、合成ポリペプチドを利用してもよい。さらに、免疫原性部分はまた、高分子量ポリマーである多糖でもよい。多糖の例は、デンプン、グリコーゲン、セルロース、アラビアゴム等の炭水化物ゴム、寒天等である。また、免疫原性部分は、ＤＮＡ又はＲＮＡ等のポリヌクレオチドでもよい。ポリヌクレオチドは修飾されても又は修飾されなくてもよく、担体及び／又は免疫原性機能を提供する限り、いかなる数の核酸で構成されてもよい。多糖はまた、ポリペプチド残基、ポリヌクレオチド残基、及び／又は脂質残基を含有又はこれらに連結できる。さらに、免疫原性部分はまた、単独の、又は上記ポリペプチド又は多糖の１つへの共役体のポリヌクレオチドでもよい。
【００９４】
［０１１０］免疫原性部分又は担体はまた粒子又は微粒子でもよい。免疫原性粒子は、一般的に、少なくとも直径約０．０２ミクロン（μｍ）で、約１００μｍ以下であり、通常、直径約０．０５μｍ〜１０μｍである。粒子は、有機又は無機、膨潤性又は非膨潤性、及び／又は多孔又は無孔でもよい。場合により、免疫原性粒子は、水に近い密度、一般的に約０．５〜１．５ｇ／ｍｌであり、透明、部分的透明、又は不透明であってもよい物質で構成される。免疫原性粒子は、赤血球、白血球、リンパ球、連鎖球菌属（Streptococcus）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）、大腸菌及びウイルス等を含むがこれらに限定されない、細胞及び微生物等の生物学的物質でもよい。粒子はまた、有機及び無機ポリマー、リポソーム、ラテックス、リン脂質小胞、リポソーム、陽イオン性リポソーム、陰イオン性リポソーム、リポタンパク質、リポポリマー等で構成されうる。
【００９５】
［０１１１］１の態様では、ラモトリジン類似体は、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ−ＫＬＨ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＫＬＨ、ＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨＣＯＰｈＣＯＯ−ＫＬＨ、ＯＯＣＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＫＬＨ等からなる群より選択される、Ｌ−Ｘ−Ｙ−Ｚがあってもよい。
【００９６】
［０１１２］したがって、本発明により調製された免疫原を用いて、トピラメート並びにトピラメート類似体に対する親和性がある抗体を生成することもできる。
【００９７】
ＩＩＩ．トピラメート及びトピラメート類似体に対する抗体
［０１１３］１の態様では、本発明のトピラメート類似体に基づく免疫原を、モノクローナル抗体及び／又はポリクローナル抗体を産生するための方法の態様において用いることができる。つまり、トピラメートに基づく免疫原から、抗体を産生でき、本抗体はトピラメートと相互作用及び／又は結合しうる。これにより、本発明の類似体が、トピラメートの存在を同定するの免疫アッセイで用いるの抗体を調製する場合に有用となることができる。また、免疫原を用いて抗体を産生する方法が当該技術分野に周知である。これにより、トピラメートと相互作用及び／又は結合するモノクローナル抗体及び／又はポリクローナル抗体に関してスクリーニングする場合に、本免疫原を用いることができる。
【００９８】
［０１１４］図１は、抗トピラメート抗体を得る方法の１の態様１０を例示する流れ図であり、トピラメート類似体に基づく免疫原を得ることができる（ブロック１２）。その後、免疫原を免疫原性配合物と合わせてもよい（ブロック１４）。簡潔には、約０．５ｍｌの免疫原組成物を、約０．５ｍｌのフロイント完全アジュバントと混合する；が、他の量の免疫原及び／又はアジュバントを用いてもよい。その後、抗体を産生する被験体に免疫原性配合物を投与してもよく（ブロック１６）、被験体は、ラット、マウス、ブタ、ウサギ、鳥類、ヒツジ及び／又は他の動物でもよいが、好ましくは哺乳動物である。投与は、尾静脈注射、皮下注射、静脈内注射又は他の周知の注射部位を介してもよい。続いて、最初の投与を受けた動物に、免疫原性追加免疫を投与してもよく（ブロック１８）、追加免疫は、最初の配合物と実質的に同じ成分を含んでもよく、所定の間隔で投与できる。例えば、最初の投与後、週１回、あるいは他のそれより長いか又は短い間隔で、その後追加免疫を行うことができる。少なくとも最初の投与後、そして場合によりその後の追加免疫後、動物により産生される抗トピラメート抗体を回収することができる（ブロック２０）。以前免疫原を投与された動物由来の血液、血清、血漿、又は他の生物学的試料を得て、抗体を回収できる。場合により、その後、当該技術分野に周知であるように、抗体含有組成物をプロセシングしてもよく（ブロック２２）、当該プロセシングには、抗体を、免疫診断アッセイを行うのに適した形式にする技術も含まれうる。あるいは、プロセシングには、周知の技術及び確立された技術による、ＥＬＩＳＡを用いた抗体のスクリーニングが含まれうる。つまり、プロセシングを用いて、ポリクローナル抗体を得ることができ（ブロック２４）、これによりポリクローナル抗体を精製することができる（ブロック２６）。あるいは、当該技術分野に周知の技術を用いて、モノクローナル抗体を得ることもでき、これによりモノクローナル抗体を精製することもできる。
【００９９】
ＩＶ．免疫診断アッセイ
［０１１５］血液、血漿、血清、組織等の試料中のトピラメートの存在を同定するため、モノクローナル又はポリクローナルの抗トピラメート抗体を、免疫アッセイで用いることもできる。これは、患者又は患者集団におけるトピラメートに関する薬物動態学的及び／又は薬力学的パラメーターを同定又は決定するのに有益でありうる。したがって、トピラメートの存在を同定し、場合によりトピラメートの量を定量化するためのアッセイを構成できるように、免疫診断アッセイにおいて、他の抗体の代わりに、抗トピラメート抗体を用いてもよい。さらに、免疫診断アッセイは、本発明記載のトピラメート類似体又は他のトピラメート類似体を用いてもよい。
【０１００】
Ａ．トピラメートに関する蛍光偏光免疫アッセイ
［０１１６］蛍光偏光免疫アッセイ（ＦＰＩＡ）技術は、試料中の抗原／薬剤と既知の濃度の標識抗原／薬剤との競合的結合に基づく。ＦＰＩＡ技術は、本明細書に援用される米国特許第４，５９３，０８９号、第４，４９２，７６２号、第４，６６８，６４０号、及び第４，７５１，１９０号に記載がある。したがって、援用される参考文献に記載されるＦＰＩＡ試薬、系、及び装置を、抗トピラメート類似体抗体でもある抗トピラメート抗体とともに用いることができる。
【０１０１】
［０１１７］トピラメートの存在を同定するため、及び試料中のトピラメートの量を定量化するアッセイで、ＦＰＩＡ技術を用いることができる。一つには、溶液中の分子の回転特性により、偏光の程度が分子の大きさに正比例させることができるようになる。したがって、偏光は、分子の大きさが大きくなるにつれて高まる。すなわち、溶液中で迅速に回転する小さい蛍光標識又は他の発光標識トピラメート又はその類似体を、直線偏光を用いて励起すると、放出される光の偏光は有意に解消される。蛍光標識トピラメート又は類似体が、抗体と相互作用するか又は抗体に結合すると、回転が遅くなり、放出される光の偏光が高まる。これは、抗体が有意に測定できる程度に複合体を大きくするためである。また、試料中の非標識トピラメートの量を増やすと、その結果、抗トピラメート抗体による蛍光標識トピラメート又は類似体の結合が減少して、試料から放出される光の偏光が低下する。既知の濃度のトピラメートを用いて、較正の偏光値を測定することにより、偏光と試料中の非標識トピラメートの濃度の間の定量的関係を確立することもできる。したがって、ＦＰＩＡを用いて試料中のトピラメートの存在及び濃度を同定することもできる。
【０１０２】
［０１１８］本発明の１の態様は、ＦＰＩＡアッセイ系である。ＦＰＩＡ系の構成要素の例としては、以下があげられる：ｉ）トピラメート及びトピラメート類似体へ特異的に結合できるモノクローナル又はポリクローナル抗トピラメート抗体；ｉｉ）トピラメートを含有すると推測される試料；及びｉｉｉ）フルオレセイン等の蛍光部分で標識されたトピラメート類似体である。あるいは、試料を除いたキットとして系を提供することもできる。さらに、系には、様々な緩衝剤組成物、トピラメート濃度勾配組成物又はトピラメートのストック組成物等を含んでもよい。
【０１０３】
［０１１９］図２は、ＦＰＩＡアッセイを行う方法の１の態様１１０を例示する流れ図である。このように、発光標識ラモトリジン又は類似体共役体を得ることができ（ブロック１１２）、抗トピラメート抗体を得ることもできる（ブロック１１４）。さらに、トピラメートを投与された患者由来の、トピラメートを含有すると推測される生物学的試料等の試料を得ることもできる（ブロック１１６）。競合的結合アッセイに用いるため、既知の量又は濃度の発光標識トピラメート共役体及び抗トピラメート抗体を得て、標準的緩衝剤系中等で、他の組成物中に配合することもできる（ブロック１１８）。その後、反応溶液中で、抗トピラメート抗体及び発光標識トピラメート共役体を生物学的試料と合わせる（ブロック１２０）。発光標識トピラメート共役体と生物学的試料中の未知の量のトピラメートとの間で、反応溶液中の抗トピラメート抗体との競合反応が起こる（ブロック１２２）。適切な期間及び／又は競合後、発光共役体に照射するが（ブロック１２４）、これは光照射、化学薬品照射、温度照射等によってもよい。その後、照射により放出される光の偏光を測定し（ブロック１２６）、そして既知量のトピラメート及び／又は発光共役体の偏光値と比較し（ブロック１２８）、これを用いて、試料中にトピラメートが存在するか否かを決定することができる（ブロック１３０）。さらに、既知の濃度の標準から得た標準化測定値と生物学的試料から得た測定値の比較を用いて、試料中トピラメートの量を定量化することができ（ブロック１３２）、それにより、患者におけるラモトリジン量を同定することができる（ブロック１３４）。
【０１０４】
Ｂ．トピラメートに関する均一系微粒子免疫アッセイ
［０１２０］免疫比濁アッセイという、均一系微粒子免疫アッセイ（「ＨＭＩ」）技術は、溶液中の粒子及び化合物の凝集に基づく。粒子及び／又は化学的化合物が凝集すると、粒子の大きさが増して溶液の濁度が高まる。したがって、試料中のトピラメートの存在、及び場合により量を評価するため、微粒子及びトピラメート類似体と共に抗トピラメート抗体を用いることもできる。免疫アッセイは血液、溶血溶液、血清、血漿、組織及び／又は他の試料で行うことができるため、ＨＭＩ技術は好適でありうる。微粒子上に装填されたトピラメート及び／又は類似体を用いるか、あるいは微粒子上に装填された抗トピラメート抗体を用いて行うようにＨＭＩアッセイを設定することもできる。微粒子に効率的に装填できるため、微粒子上に装填された類似体を用いることが特に好適でありうる。いずれにしても、ＨＭＩ又は免疫比濁アッセイは試料中の物質の凝集を測定するものとして、当該技術分野に周知である。
【０１０５】
［０１２１］免疫比濁アッセイ技術は、参照により本明細書に含まれる、米国特許第５，５７１，７２８号、第４，８４７，２０９号、第６，５１４，７７０号、第６，２４８，５９７号に記載される。簡潔には、均一系アッセイ法では、主に光減衰、ネフェロメトリー法、又は比濁法を用いる。試料内に導かれた入射光線の分散又は吸収で生じる変化により、トピラメート（Ａ）及び抗トピラメート抗体微粒子結合パートナー（Ｂ）からの凝集化合物ＡＢの形成を測定することができる。あるいは、抗トピラメート抗体（Ａ）を、微粒子に装填されたトピラメート又は類似体と結合させることもできる。結合パートナーが固定された懸濁可能な粒子を用いると、効果が増進され、これによりかなり低濃度でもトピラメート濃度を測定することができる。これらの均一系法は、迅速かつ簡易に実行でき、そして特に、以下により詳細に記載するような試料分析自動化が可能になる。
【０１０６】
［０１２２］例えば、大量スクリーニング用途では、分析法は完全に自動化されていることが望ましい。つまり、分析物との特異的反応の結果、増感されたラテックス粒子等の粒子による光散乱の変化を検出する装置を設計することができる。本装置を利用するアッセイは、ラテックス粒子懸濁物の表面積が広く及び光散乱の物理的原理のため高感度になりうる。検出の主な原理としては、２以上の粒子が凝集中に緊密に接触した際の光散乱変化があげられる。光線が非凝集粒子を含有する反応セルを通過する際、粒子による屈折、反射、吸収、及び回折のためにある程度の光散乱がありうる。したがって、この原理は、トピラメート等の標的分析物の粒子凝集阻害能を測定するために有益でありうる。抗体／抗原結合の初期段階中、複合体が形成され始める際に、本複合体はより大きい粒子のように作用するため、散乱光強度の角度分布を実質的に改変することができる。以下により詳細に記載する比濁検出及び他の方法により、凝集により、より大きい粒子が生成した結果の光散乱変化を測定することができる。SeradynのトピラメートＱＭＳ（登録商標）試薬により完全に自動化できるようになり、多くの臨床的化学反応分析装置に適用できる。
【０１０７】
［０１２３］図３は、トピラメート等の遊離薬剤がある生物学的試料及びトピラメート類似体でもよいハプテンをコーティングした粒子試薬と、抗体緩衝液を合わせる競合アッセイの図解である。生物学的試料がほとんど又は全くトピラメートを含有しない場合は凝集は阻害されない。試料中のトピラメート量が増加しても、部分的な凝集しかおこらず、部分的にしか阻害されない。さらに、試料中に多量のトピラメートがあれば、凝集は完全に阻害される。したがって、凝集の分析を用いて、トピラメートの存在を同定することもできる。また、図４に示すトピラメート濃度の標準化曲線を用いて、凝集からの吸光度変化に基づき、試料中のトピラメート量を同定することもできる。
【０１０８】
ｉ．トピラメートが装填された微粒子
［０１２４］図５は、ＨＭＩアッセイを行う方法の１の態様２１０を例示する流れ図である。これによれば、トピラメート類似体を得て（ブロック２１２）、微粒子上に装填してもよく（ブロック２１４）、微粒子は例えば、Seradyn, Inc.（インディアナ州インディアナポリス）により製造及び／又は販売された、ポリスチレン、カルボキシレートで修飾されたポリスチレン、ストレプトアビジンをコーティングした磁気粒子等を含んでもよい。トピラメートを投与した患者由来のトピラメートを含有すると推測される生物学的試料等の試料を得ることもできる（ブロック２１６）。本発明により、トピラメート及びトピラメート類似体に結合できるモノクローナル又はポリクローナル等の抗トピラメート抗体を得た（ブロック２１８）後、場合により、標準的緩衝剤系に配合する（ブロック２２０）。その後、抗体組成物をトピラメート微粒子及び生物学的試料と合わせるが（ブロック２２２）、ここで抗体及び微粒子に結合したトピラメート類似体の量は既知である。微粒子上に固定されたトピラメート類似体と生物学的試料中のトピラメートとの間で、反応溶液中の限定された量の抗トピラメート抗体への結合に関して、競合反応が起こる（ブロック２２４）。トピラメートが装填された微粒子の抗体での凝集は、生物学的試料中のトピラメートの存在で阻害されるが、凝集阻害は生物学的試料中のトピラメート濃度に正比例する。これにより、周知の比濁アッセイで、試料中のトピラメートの存在を測定できるようになる（ブロック２２６）。さらに、既知の濃度の標準から得た標準化測定値と生物学的試料から得た測定値との比較を用いて、試料中のトピラメート量を定量化して（ブロック２２８）、それにより患者のトピラメート量を同定することもできる（ブロック２３０）。
【０１０９】
［０１２５］本発明の１の態様は、トピラメート類似体が装填された微粒子のＨＭＩアッセイ系である。ＨＭＩ系の構成要素の例としては以下があげられる：ｉ）トピラメート及びトピラメート類似体に特異的に結合できるモノクローナル又はポリクローナル抗トピラメート抗体；ｉｉ）トピラメートを含有すると推測される試料；及びｉｉｉ）ポリスチレン微粒子等の微粒子にカップリングしたトピラメート類似体。あるいは、試料を含まないキットとして系を提供することもできる。さらに、系には、様々な緩衝剤組成物、トピラメート濃度勾配組成物又はトピラメートのストック組成物等を含んでもよい。
【０１１０】
ｉｉ．抗トピラメート抗体装填微粒子
［０１２６］トピラメートが装填された微粒子に関して、上記と類似の他の態様では、トピラメート及びトピラメート類似体に結合できる抗トピラメート抗体を微粒子上に装填する。トピラメート類似体には、例えばウシ血清アルブミン、オボアルブミン、デキストラン等の選択した作用基が含まれてもよい。トピラメート類似体と患者試料中のトピラメートとの間で、微粒子上に固定された抗トピラメート抗体への結合に関して、競合反応が起こる。ここでも、微粒子の凝集は、患者試料中にトピラメートがあると粒子の凝集は阻害される。
【０１１１】
［０１２７］図６は、ＨＭＩアッセイを行う方法の他の態様３１０を例示する流れ図である。これにより、トピラメート及びトピラメート類似体に特異的に結合できる抗トピラメート抗体を得て（ブロック３１２）、微粒子上に装填することができる（ブロック３１４）。を投与された患者由来の、トピラメートを含有すると推測される生物学的試料等の試料を得ることもできる（ブロック３１６）。適切な作用基を含むトピラメート類似体を得ることができる（ブロック３１８）。競合的結合アッセイで用いるために、既知の量又は濃度のトピラメート類似体及び抗トピラメート抗体が装填された微粒子を標準的緩衝剤系等の他の組成物中に配合する（ブロック３２０）。その後、抗体−微粒子組成物を、トピラメート類似体組成物及び生物学的試料と合わせる（ブロック３２２）。反応溶液中、トピラメート類似体と生物学的試料中のトピラメートとの間で、微粒子上に固定された抗トピラメート抗体との競合反応が起こる（ブロック３２４）。生物学的試料中にトピラメートがあると、抗トピラメート抗体が装填された微粒子のトピラメート類似体での凝集が阻害されるが、ここで、凝集阻害は生物学的試料中のトピラメート濃度に正比例する。これにより、周知の比濁アッセイで試料中のトピラメートの存在を測定できるようになる（ブロック３２６）。さらに、既知の濃度の標準から得た標準化測定値と生物学的試料から得た測定値との比較を用いて、試料中のトピラメート量を定量化することにより（ブロック３２８）、患者のトピラメート量を同定することもできる（ブロック３３０）。
【０１１２】
［０１２８］本発明の１の態様は、抗トピラメート抗体が装填された微粒子のＨＭＩアッセイ系である。ＨＭＩ系の構成要素の例としては、以下があげられる：ｉ）トピラメート及びトピラメート類似体に結合できるモノクローナル又はポリクローナル抗トピラメート抗体が装填された微粒子；ｉｉ）トピラメートを含有すると推測される試料；及びｉｉｉ）場合により作用基を含んでもよいトピラメート類似体。あるいは、試料を除いたキットとして、アッセイ系を提供してもよい。さらに、アッセイ系には、様々な緩衝剤組成物、ラモトリジン濃度勾配組成物、あるいはラモトリジン又は類似体のストック組成物等が含まれてもよい。
【０１１３】
Ｃ．トピラメートに関するクローニング酵素供与体免疫アッセイ
［０１２９］クローニング酵素供与体免疫アッセイ（「ＣＥＤＩＡ（登録商標）」、Roche Diagnosticsの商標）は、治療薬の存在を同定し、定量的測定を行うための非常に正確で有効な方法であることが立証されている。ＣＥＤＩＡ（登録商標）技術は、以下の特許に詳細に記載されている：（ａ）競合的均一系アッセイ法を開示する米国特許第４，７０８，９２９号；（ｂ）酵素供与体断片をコードする組換えＤＮＡ配列及び当該ベクターの宿主を開示する米国特許第５，１２０，６５３号；（ｃ）酵素供与体断片のアミノ酸配列を開示する米国特許第５，６０４，０９１号；及び（ｄ）ＣＥＤＩＡアッセイ用のキットを解説する米国特許第５，６４３，７３４号、ここで上記特許はすべて本明細書に援用される。簡潔には、ＣＥＤＩＡ（登録商標）技術は、トピラメートに結合できる抗体への結合に関する、大腸菌由来のβ−Ｄ−ガラクトシド・ガラクトヒドロラーゼ又はβ−ガラクトシダーゼ（「βｇａｌ」）由来等の、遺伝子操作された不活性酵素供与体（「ＥＤ」）断片にカップリングしている類似体と、生物学的試料中のトピラメートの競合に基づく。が試料中に存在する場合、トピラメートが抗体に結合して、ＥＤ−類似体共役体のＥＤ部分が自由になり、酵素受容体（「ＥＡ」）断片と会合できるようになるため、反応混合物中でβ−Ｄ−ガラクトシド・ガラクトヒドロラーゼ又はβｇａｌの酵素活性が回復する。その後、適当な基質に曝露されると、活性酵素を定量化できる反応産物を生じることができるようになる。好ましい基質はクロロフェノールレッド−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（「ＣＰＲＧ」）であり、ＥＤ及びＥＡ断片を有する活性酵素に切断されて、ガラクトース及びＣＰＲになることができ、約５７０ｎｍの波長の吸光度でＣＰＲを測定する。トピラメートが試料中に存在しない場合、抗体は、ＥＤ−類似体共役体に結合して、ＥＤ断片とＥＡ断片の会合を阻害して酵素活性の回復を阻害する。反応産物の量及び生じる吸光度変化は、試料中のトピラメート量に比例する。
【０１１４】
［０１３０］図７は、ＣＥＤＩＡ（登録商標）アッセイを行う方法の１の態様４１０を例示する流れ図である。これにより、トピラメート−ＥＤ共役体を得ることができるが（ブロック４１２）、これはトピラメート類似体とＥＤを共役化しても得ることができる。また、ＥＤと対応するＥＡを得ることができる（ブロック４１４）。さらに、トピラメートを投与した患者由来のトピラメートを含有すると推測される生物学的試料等の試料を得ることができる（ブロック４１６）。本発明記載の方法により、トピラメート−ＥＤ共役体とも相互作用できる抗トピラメート抗体得ることができる（ブロック４１８）。競合的結合アッセイで用いるため、既知の量又は濃度のトピラメート−ＥＤ共役体、ＥＡ、及び抗トピラメート抗体を得て、標準的緩衝剤系等の他の組成物中に配合する（ブロック４２０）。次いで、反応溶液中で、トピラメート−ＥＤ共役体及び抗体を生物学的試料と合わせる（ブロック４２２）。場合により、この時点又は抗体との競合的相互作用が起こるのに十分な時間が経過した後、反応溶液中で、ＥＡもまた合わせる。既知の量のトピラメート−ＥＤ共役体と生物学的試料中のトピラメートとの間で、反応溶液中の既知量の抗トピラメート抗体との競合反応が起こる（ブロック４２４）。競合反応後、ＥＡを反応溶液中に導入後、ＥＤ−ＥＡ酵素切断可能基質を反応溶液中に導入する（ブロック４２６）。ＥＤ−ＥＡ酵素と酵素を切断することができる基質との間の酵素活性を測定するが（ブロック４２８）、これは、切断産物の吸光度を測定するか又は他の周知の測定技術で測定することもできる。酵素活性の測定を用いて、試料中にトピラメートが存在するかどうかを決定することもできる（ブロック４３０）。さらに、既知の濃度の標準から得た標準化測定値と生物学的試料から得た測定値の比較を用いて、試料中のトピラメート量を定量化することもでき（ブロック４３２）、それにより、患者のトピラメート量を同定することもできる（ブロック４３４）。
【０１１５】
［０１３１］本発明の１の態様は、ＣＥＤＩＡ（登録商標）アッセイ系である。ＣＥＤＩＡ（登録商標）系の構成要素の例としては以下があげられる：ｉ）トピラメート、トピラメート類似体、及び／又はトピラメート−ＥＤ又はトピラメート−ＥＡに結合できるモノクローナル又はポリクローナル抗トピラメート抗体；ｉｉ）トピラメートを含有すると推測される試料；ｉｉｉ）ＥＤ又はＥＡにカップリングしたトピラメート類似体；並びにｉｖ）ＥＤ及びＥＡが系に存在するように、酵素活性を回復するためにトピラメート−ＥＤ又はトピラメート−ＥＡと会合するような、ＥＤ又はＥＡの一方。また、試料を除いてキットとしてアッセイ系を提供してもよい。さらにアッセイ系は、様々な緩衝剤組成物、トピラメート濃度勾配組成物又はトピラメートのストック組成物等を含んでもよい。
【０１１６】
Ｄ．トピラメートに関する化学発光不均一系免疫アッセイ
［０１３２］また、化学発光微粒子免疫アッセイ（「ＣＭＩＡ」）技術を用いた競合的アッセイを用いて試料中にトピラメートが存在するか否かを評価することもできる。不均一系免疫アッセイの技術分野で、試料中の化学物質の存在及び／又は量を決定するための様々な種類のＣＭＩＡ技術が周知であり、ＣＭＩＡ技術のいくつかは、本明細書に援用される、米国特許第６，４４８，０９１号、第５，７９８，０８３号、及び第５，８３４，２０６号に例示される。当該ＣＭＩＡアッセイには、特定の磁気粒子、又はろ過、沈降、及び／又は他の手段による分離に適した粒子等の粒子にカップリングした、トピラメート及びその類似体に結合できる抗トピラメート抗体を用いることを含む。さらに、適当な化学発光部分、例えばアクリジニウムエステルに連結されたトピラメート類似体を含んでもよいトレーサーを用いて、粒子上の限定量の抗トピラメート抗体に関して、患者試料中の遊離トピラメートと競合させることもできる。試料、トレーサー、及び抗体粒子が相互作用し、ルーチンの洗浄工程により未結合トレーサーを除去した後、抗体粒子に結合したトレーサーの量を、相対光単位（ＲＵＬＥ）で表される化学発光で測定することもできる。化学発光の量は、患者試料中の遊離薬剤の量に反比例し、既知の値の薬剤を用いた標準曲線を構築して、濃度を決定する。
【０１１７】
［０１３３］図８は、ＣＭＩＡアッセイを行う方法の１の態様５１０を例示する流れ図である。これによれば、抗トピラメート抗体−粒子共役体を得ることができ（ブロック５１２）、これは、磁気粒子等の粒子と抗体をカップリングすることにより実行される。また、化学発光部分を有するトピラメート類似体を含むトレーサー化合物を得ることができる（ブロック５１４）。さらに、トピラメートを投与された患者由来のトピラメートを含有すると推測される生物学的試料等の試料を得ることもできる（ブロック５１６）。競合的結合アッセイで用いるために、既知量又は濃度のトレーサー及び抗トピラメート抗体−粒子共役体を、標準的緩衝剤系等の別個の組成物中に配合配合することもできる（ブロック５１８）。その後、反応溶液中で抗トピラメート抗体−粒子共役体及びトレーサーを生物学的試料と合わせる（ブロック５２０）。反応溶液中、トレーサーと生物学的試料中のトピラメートとの間で、抗トピラメート抗体−粒子共役体との競合反応が起こる（ブロック５２２）。十分な期間及び／又は結合競合の後、抗体−粒子共役体を反応溶液から分離する（ブロック５２４）。場合により、洗浄又は他の分離技術により、抗体−粒子共役体から未結合未結合トピラメート及び／又はトレーサーを除去することができる（ブロック５２６）。化学発光部分が、リン光、蛍光、又は測定できる他の発光による光を放出するようにトレーサーを励起して化学発光量を決定することができる（ブロック５２８）。しばしば、化学発光は、ＲＬＵで測定される蛍光である。化学発光の測定を用いて、トピラメートが試料中に存在するか否かを決定することもできる（ブロック５３０）。さらに、既知の濃度の標準から得た標準化測定値と生物学的試料から得た測定値との比較を用いて、試料中のトピラメート量を定量化し（ブロック５３２）、それから患者のトピラメート量を同定することもできる（ブロック５３４）。
【０１１８】
［０１３４］本発明の１の態様は、ＣＭＩＡアッセイ系である。ＣＭＩＡ系の構成要素の例としては、以下があげられる：ｉ）トピラメート及びトピラメート類似体に結合できるモノクローナル又はポリクローナル抗トピラメート抗体が装填された粒子又は微粒子；ｉｉ）トピラメートを含有すると推測される試料；及びｉｉｉ）類似体トレーサー。または、試料を除いてキットとしてアッセイ系を提供することもできる。さらに、系には、様々な緩衝剤組成物、トピラメート濃度勾配組成物、あるいはトピラメート又は類似体のストック組成物等が含まれてもよい。
【０１１９】
Ｅ．トピラメートに関する他の免疫アッセイ
［０１３５］本明細書記載のトピラメート類似体、共役体、抗体、免疫原及び／又は他の共役体はまた、酵素又は蛍光を含むがこれらに限定されないある範囲の検出系を用いた、いくつかの他の不均一系免疫アッセイ、及び／又は迅速側方流動アッセイを含むがこれらに限定されない均一系免疫アッセイ、及び抗体アレイ、並びに未だに開発されていない形式のいずれにも適している。
【０１２０】
［０１３６］トピラメート類似体、共役体、抗体、免疫原及び／又はトレーサーを利用する、様々な免疫診断アッセイを本明細書に記載しているが、当該技術分野で周知のように、当該アッセイを修飾することもできる。つまり、本発明の範囲内で当該免疫アッセイを行うための工程又は行為に様々な修飾を施すこともできる。
【０１２１】
実施例
［０１３７］以下の実施例は、予防の態様を例示するために提供され、限定することを意図するものではない。したがって、ある例は実験を介して行われ、そしてあるものは当該技術分野に周知の技術、標準、及び結果に基づく予測である。また、本発明には、実施例に例示されない他の態様が含まれることが明らかであるべきである。さらに、本発明により調製されるトピラメート類似体、抗原、免疫原、及び抗トピラメート抗体を用いて、当該技術分野で周知の実験プロトコルを用いて多くの例が実行されている。したがって、こうした例は、すべて本明細書に援用される、以下の参考文献により補完される：（ａ）Caryl Griffinら, Microparticle Reagent Optimization: A Laboratory Reference Manual from the Authority on Microparticles, Seradyn(1994)；及び（ｂ）Boehringer Mannheim Corporation Technical Publications Department, Hitachi Operation Manual: Version B, Boehringer Mannheim Corporation Laboratory Diagnostic Division(1992)；及び（ｃ）ＮＣＣＬＳ認可指針、２００４年８月。
【実施例１】
【０１２２】
［０１３８］図９は、塩化トピラメート（１）をスルファメート・共役化アミノエチル−トピラメート類似体（２）に変換する化学反応の模式図である。丸底フラスコ中、約０．１６ｍｌのエチレンジアミン溶液を、約０．３ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン及び０．５ｍｌのＤＭＦの溶液に添加する。フラスコを氷槽中で冷却してアルゴン（「Ａｒ」）ガス下で攪拌した後、１．０ｍｌのＤＭＦ中の２０３ｍｇの塩化トピラメートの溶液を添加して反応混合物を形成する。反応混合物をＡｒガス下で１２時間攪拌する。減圧下で溶媒を蒸発させて残渣を形成し、これを、メタノール溶出剤を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製する。トピラメートのアミノエチル類似体（２）を含有する分画を合わせて濃縮し、約９０ｍｇを得る。
【実施例２】
【０１２３】
［０１３９］続いて図９を参照して、トピラメートのアミノエチル類似体（２）を、リンカーが長い活性エステルを有する他の類似体（３）に変換する化学反応の模式図を示す。氷槽中の丸底フラスコ中、約１５０ｍｇのＤＳＳを、２ｍｌの無水ＤＭＦ及び０．０５ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの溶液に添加し、次いで、Ａｒ下で攪拌する。次いで、１ｍｌのＤＭＦ中の約４５ｍｇのトピラメートのアミノエチル類似体（２）（氷槽中で予め冷却）をフラスコに滴下して反応混合物を形成する。反応混合物をＡｒ下、氷槽中で３時間攪拌後、減圧下で溶媒を蒸発させて残渣を形成し、これを、酢酸エチル・ヘキサン（８：２）溶出剤を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製する。トピラメートの活性エステル（３）を含有する分画を合わせて濃縮し、約２０ｍｇを得る。
【実施例３】
【０１２４】
［０１４０］図１０Ａは、トピラメートを、トピラメートのスルファメート・共役化スクシニル類似体（４）に変換する化学反応の模式図である。２５０ｍｌの丸底フラスコ中、２０ｍｌのＴＨＦ（無水）中の約２ｇのトピラメートの溶液を、約２ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンと合わせてＡｒ下で攪拌する。約１．２４ｇの無水コハク酸及び５０ｍｇのＤＭＡＰを上記溶液に添加して反応混合物を形成する。反応混合物をＡｒ下で１２時間攪拌して減圧下で溶媒を蒸発させて、残渣を形成する。溶出剤として酢酸エチルを用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。トピラメートのスクシニル誘導体（４）を含有する分画を合わせて濃縮し、約２００ｍｇを得る。
【実施例４】
【０１２５】
［０１４１］図１０Ｂは、トピラメートを、トピラメートのスルファメート・共役化グルタリル類似体（５）に変換する化学反応の模式図である。２５０ｍｌの丸底フラスコ中、１０ｍｌのＴＨＦ（無水）中の４００ｍｇのトピラメートの溶液を、０．８ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンと合わせてＡｒ下で攪拌する。次いで、約５２０ｍｇの無水グルタル酸及び２０ｍｇのＤＭＡＰを添加して反応混合物を形成する。反応混合物を６０℃で６０時間攪拌して減圧下で溶媒を蒸発させて、残渣を形成する。酢酸エチル溶出剤を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。トピラメートのグルタリル誘導体（５）を含有する分画を合わせて濃縮し、約１６０ｍｇを得る。
【実施例５】
【０１２６】
［０１４２］図１１は、トピラメートのアミノエチル類似体（２）を、脂肪族エステル基があるトピラメートのスルファメート・共役化類似体（６）に変換する化学反応の模式図である。２５０ｍｌの丸底フラスコ中、１０ｍｌのＤＭＦ（無水）中の５０ｍｇのアミノエチルトピラメート（２）の溶液を、０．８ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンと合わせてＡｒ下で攪拌する。次いで、約１００ｍｇのｔ−ブチル−４−ブロモブチレート及び２０ｍｇのＤＭＡＰを添加して反応混合物を形成する。反応混合物を８０℃で２４時間攪拌して減圧下で溶媒を蒸発させて、残渣を形成する。酢酸エチル溶出剤を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。トピラメートのスルファメート・共役化類似体（６）を含有する分画を合わせて濃縮し、約３０ｍｇを得る。
【実施例６】
【０１２７】
［０１４３］続いて図１１を参照して、トピラメートのスルファメート・共役化類似体（６）を、カルボン酸基を有するトピラメートの他のスルファメート・共役化類似体（７）に変換する化学反応の模式図を示す。２５０ｍｌの丸底フラスコ中、５ｍｌのトリフルオロ酢酸中の５０ｍｇのトピラメートのスルファメート・共役化類似体（６）の溶液を、５ｍｌのジクロロメタンと合わせてＡｒ下で攪拌する。反応混合物を室温で３０分間攪拌して減圧下で溶媒を蒸発させて残渣を形成する。酢酸エチル溶出剤を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。トピラメートのスルファメート・共役化類似体（７）を含有する分画を合わせ、濃縮して、約２０ｍｇを得る。
【実施例７】
【０１２８】
［０１４４］続いて図１１を参照して、トピラメートのスルファメート・共役化類似体（７）を、活性ＮＨＳ基を有するトピラメートの活性化エステル（８）に変換する化学反応の模式図を示す。具体的には、７ｍｌの無水ＤＭＦ中の１００ｍｇのトピラメート類似体（７）の溶液を０℃に冷却して０．１ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加して反応混合物を形成する。１１０ｍｇのＯ−（Ｎ−スクシンイミジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレートを添加して、反応混合物を反応させる。反応混合物を室温まで加温して一晩攪拌する。反応混合物を減圧下で濃縮して溶出剤として酢酸エチル／メタノールを用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製し、およそ６０ｍｇのトピラメートの活性エステル（８）を得る。
【実施例８】
【０１２９】
［０１４５］図１２は、トピラメートを、トピラメートのスルファメート・共役化フェニル類似体（９）に変換する化学反応の模式図である。２５０ｍｌの丸底フラスコ中、１０ｍｌのジクロロメタン中の１００ｍｇのトピラメートの溶液を、６０ｍｇの４−カルボキシベンズアルデヒド及び４０ｍｇのシアノ水素化ホウ素ナトリウムと合わせてＡｒ下で攪拌する。反応混合物を室温で１日攪拌する。水で反応停止して５０ｍｌのジクロロメタンで３回抽出する。有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、回転蒸発装置上で溶媒を除去する。酢酸エチル溶出剤を用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。トピラメートのフェニル類似体（９）を含有する分画を合わせて濃縮して、約５０ｍｇを得る。
【実施例９】
【０１３０】
［０１４６］続いて図１２を参照して、トピラメートのフェニル類似体（９）を、フェニル類似体の活性化ＮＨＳエステル（１０）に変換する化学反応の模式図を示す。具体的には、５ｍｌの無水ＤＭＦ中の９０ｍｇのトピラメートのフェニル類似体（９）の溶液を０℃に冷却して０．１ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加して反応混合物を形成する。９５ｍｇのＯ−（Ｎ−スクシンイミジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレートを添加して反応混合物を反応させる。反応混合物を室温まで加温して一晩攪拌する。反応混合物を減圧下で濃縮して溶出剤として酢酸エチル／メタノールを用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製して、およそ５０ｍｇのフェニル類似体の活性エステル（１０）を得る。
【実施例１０】
【０１３１】
［０１４７］図１３は、トピラメートを、トピラメートのスルファメート・共役化酪酸類似体（１１）に変換する化学反応の模式図である。２５０ｍｌの丸底フラスコ中、１０ｍｌのジクロロメタン中の４００ｍｇのトピラメートの溶液を、１００ｍｇのシアノ水素化ホウ素ナトリウム及び１００ｍｇのコハク酸セミアルデヒド（水中の重量１５％）と合わせて室温で一晩攪拌する。２０ｍｌの脱イオン水で反応停止して、０．１Ｎ ＨＣｌで酸化して４０ｍｌのジクロロメタンで３回抽出する。有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、回転蒸発装置上で溶媒を除去する。酢酸エチル溶出剤を用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。トピラメートの酪酸類似体（１１）を含有する分画を合わせて濃縮して、約１６０ｍｇを得る。
【実施例１１】
【０１３２】
［０１４８］続いて図１３を参照して、トピラメートの酪酸類似体（１１）を、酪酸類似体の活性化ＮＨＳエステル（１２）に変換する化学反応の模式図を示す。具体的には、５ｍｌの無水ＤＭＦ中の１００ｍｇのトピラメートの酪酸類似体（１１）の溶液を０℃に冷却して０．１ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加して反応混合物を形成する。１０５ｍｇのＯ−（Ｎ−スクシンイミジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレートを添加して反応混合物を反応させる。反応混合物を室温まで加温して一晩攪拌する。反応混合物を減圧下で濃縮して溶出剤として酢酸エチル／メタノールを用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製して、およそ５００ｍｇの酪酸類似体の活性エステル（１２）を得る。
【実施例１２】
【０１３３】
［０１４９］図１４は、トピラメートを、トピラメートの９−ヒドロキシ類似体（１３）に変換する化学反応の模式図である。１００ｍｌの丸底フラスコ中、１０ｍｌのＴＨＦ（無水）中の４０ｍｇの９−ヒドロキシトピラメートの溶液を、０．１ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン及び０．１ｍｌのエチル−４−イソシアノブチレートと合わせてＡｒ下で攪拌する。反応混合物を８０℃で２日間攪拌する。反応を室温に冷却して回転蒸発装置上で溶媒を除去して、残渣を生じる。酢酸エチル溶出剤を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。トピラメートのエチルエステル類似体（１３）を含有する分画を合わせて濃縮して、約２０ｍｇを得る。
【実施例１３】
【０１３４】
［０１５０］続いて図１４を参照して、トピラメートを、トピラメートの９ヒドロキシ類似体（１４）に変換する化学反応の模式図を示す。１００ｍｌの丸底フラスコ中、２ｍｌのメタノール中の４０ｍｇの９−ヒドロキシトピラメート類似体（１３）の溶液を、２ｍｌの水性１Ｎ ＮａＯＨと合わせる。反応混合物を室温で１日攪拌した後、減圧下で濃縮して、残渣を生じる。酢酸エチル溶出剤を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。トピラメートのカルボキシレート類似体（１４）を含有する分画を合わせて濃縮して、約２０ｍｇを得る。
【実施例１４】
【０１３５】
［０１５１］続いて図１４を参照して、トピラメートのカルボキシレート類似体（１４）を、トピラメート類似体の活性化ＮＨＳエステル（１５）に変換する化学反応の模式図を示す。具体的には、５ｍｌの無水ＤＭＦ中の１００ｍｇのトピラメートのカルボキシレート類似体（１１）の溶液を０℃に冷却して０．１ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加して反応混合物を形成する。１０５ｍｇのＯ−（Ｎ−スクシンイミジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレートを添加して反応混合物を反応させる。反応混合物を室温まで加温して一晩攪拌する。反応混合物を減圧下で濃縮して溶出剤として酢酸エチル／メタノールを用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製して、およそ５００ｍｇのトピラメート類似体の活性エステル（１５）を得る。
【実施例１５】
【０１３６】
［０１５２］図１５は、典型的な目的のため、トピラメート類似体をトピラメート抗原（１６）に変換する化学反応の模式図である。トピラメート抗原（１６）は米国特許第５，９５２，１８２号に基づく。２ｍｌのジメチルアセトアミド及び０．２ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン中の１０９ｍｇのＮ−カルボキシメチル−トピラメート及び４０ｍｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の溶液をドライアイス／イソプロパノール槽（−２０℃〜−１５℃）上で冷却して１００μｌの３．１５Ｍジシクロヘキシルカルボジイミド（ジメチルアセトアミド中の２４０ｍｇのＤＣＣ）で処理して反応混合物を形成する。反応混合物をドライアイス槽中で冷却しながら１５分間攪拌した後、他の１００μｌのＤＣＣ溶液を添加する。反応混合物をＡｒ下で一晩攪拌して室温まで加温する。磁気スターラーを入れた丸底フラスコ中で、約７０ｍｇのＢＳＡタンパク質を有する約４ｍｌのｐＨ７．２の０．１Ｍ ＰＢＳ緩衝液を氷槽中で冷却しながら攪拌する。タンパク質溶液を３０分間攪拌して１ｍｌのＤＭＳＯを滴下する。上記冷却タンパク質溶液を、トピラメート反応混合物に滴下して低温室（４℃）中で一晩攪拌させる。生じた共役体を透析チューブ（１０，０００ＭＷカットオフ）に入れて１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の２０％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ中、室温で連続透析した後、４℃でｐＨ７．２のＰＢＳと４回交換する（各１リットル、少なくとも各々６時間）。クーマシーブルータンパク質アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて、抗原（１６）のタンパク質濃度を、およそ５．０ｍｇ／ｍｌと決定する。
【実施例１６】
【０１３７】
［０１５３］図１５は、典型的な目的のため、トピラメート類似体をトピラメート免疫原（１７）に変換する化学反応の模式図である。トピラメート免疫原（１７）は、米国特許第５，９５２，１８２号に基づく。２ｍｌのジメチルアセトアミド及び０．２ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン中の１０９ｍｇのＮ−カルボキシメチル−トピラメート及び４０ｍｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の溶液をドライアイス／イソプロパノール槽（−２０℃〜−１５℃）上で冷却して１００μｌの３．１５Ｍジシクロヘキシルカルボジイミド（ジメチルアセトアミド中の２４０ｍｇのＤＣＣ）で処理して、反応混合物を形成する。反応混合物をドライアイス槽中で冷却しながら、１５分間攪拌した後、他の１００μｌのＤＣＣ溶液を添加する。反応混合物をＡｒ下で一晩攪拌して反応中に室温まで加温する。磁気スターラー入りの丸底フラスコ中で、約８０ｍｇのＫＬＨタンパク質を有する約８ｍｌのｐＨ７．２の０．１Ｍ ＰＢＳ緩衝液を氷槽中で冷却しながら攪拌する。タンパク質溶液を３０分間攪拌して１ｍｌのＤＭＳＯを滴下する。上記冷却タンパク質溶液を、トピラメート反応混合物に滴下して低温室（４℃）中で一晩攪拌させる。生じた共役体を透析チューブ（１０，０００ＭＷカットオフ）に入れて１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の２０％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ中、室温で連続透析した後、４℃でｐＨ７．２のＰＢＳと４回交換する（各１リットル、少なくとも各々６時間）。クーマシーブルータンパク質アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて、抗原（１７）のタンパク質濃度を、およそ１．６ｍｇ／ｍｌと決定する。
【実施例１７】
【０１３８】
［０１５４］図１６は、トピラメート類似体（３）を免疫原（１８）に変換する化学反応の模式図である。８ｍｌのｐＨ７．２のＰＢＳ（０．１Ｍリン酸ナトリウム、０．１５Ｍ塩化ナトリウム）中の８０ｍｇのキーホールリンペット・ヘモシアニン（ＫＬＨ）の溶液を氷槽中で冷却する。約５．４ｍｌのＤＭＳＯをＫＬＨ溶液に滴下して室温以下に維持する。１．６ｍｌのＤＭＳＯ中の２０．４ｍｇのトピラメート類似体（３）の溶液をＫＬＨ溶液に滴下して反応混合物を形成する。反応混合物を室温で４０時間攪拌させる。生じたＫＬＨ免疫原（１８）を透析チューブ（１０，０００ＭＷカットオフ）に入れて１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の３５％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ中、室温で連続透析した後、４℃でｐＨ７．２のＰＢＳと４回交換する（各１リットル、少なくとも各々６時間）。クーマシーブルータンパク質アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて、ＫＬＨ免疫原（１８）のタンパク質濃度を、およそ２．１９ｍｇ／ｍｌと決定する。
【実施例１８】
【０１３９】
［０１５５］図１７は、スクシニル又はグルタリルトピラメート類似体（４）を抗原（１９）に変換する化学反応の模式図である。約５００ｍｇのＢＳＡを２５０ｍｌの丸底フラスコに入れて約３７．５ｍｌのＰＢＳと合わせる。混合物を氷槽中で１時間攪拌して１２．５ｍｌのＤＭＳＯの溶液をＢＳＡ溶液に１滴ずつ１０分間添加する。生じた溶液を氷槽中でさらに３時間攪拌する。他の丸底フラスコ中、約１７０ｍｇのスクシニルトピラメート類似体（４）を、２ｍｌのＤＭＦ及び０．１５ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンと合わせてＡｒ下で２０分間氷槽中で攪拌する。約１３０ｍｇのＯ，Ｎ−スクシンイミジル，Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートをトピラメート類似体溶液に添加した後、ゴムの隔壁で停止して４℃で４時間攪拌する。トピラメート類似体混合物を上記ＢＳＡ溶液に１滴ずつ２０分間添加する。生じたトピラメート抗原を透析チューブ（１０，０００ＭＷカットオフ）に入れて１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の３０％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ中、室温で連続透析した後、４℃でｐＨ７．２のＰＢＳと４回交換する（各１リットル、少なくとも各々６時間）。クーマシーブルータンパク質アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて、トピラメート抗原（１９）のタンパク質濃度を、およそ５．０ｍｇ／ｍｌと決定する。
【実施例１９】
【０１４０】
［０１５６］図１８は、スクシニルトピラメート類似体（３）を抗原（２０）に変換する化学反応の模式図である。４ｍｌのｐＨ７．２のＰＢＳ（０．１Ｍリン酸ナトリウム、０．１５Ｍ塩化ナトリウム）中の８０ｍｇのＢＳＡの溶液を氷槽中で冷却する。約５．４ｍｌのＤＭＳＯをＢＳＡ溶液に滴下して室温以下に維持する。１．６ｍｌのＤＭＳＯ中の２０．４ｍｇのトピラメート類似体（３）の溶液をＢＳＡ溶液に滴下して反応混合物を形成する。反応混合物を室温で４０時間攪拌させる。生じたＢＳＡ共役体（２０）を透析チューブ（１０，０００ＭＷカットオフ）に入れて１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の３５％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ中、室温で連続透析した後、４℃でｐＨ７．２のＰＢＳと４回交換する（各１リットル、少なくとも各々６時間）。クーマシーブルータンパク質アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて、ＢＳＡ共役体（２０）のタンパク質濃度を、およそ５ｍｇ／ｍｌと決定する。
【実施例２０】
【０１４１】
［０１５７］ポリクローナル抗体含有組成物を得て、トピラメート及びトピラメート一次代謝産物とポリクローナル抗体との交差反応量を決定するアッセイを行う。既知量のトピラメートを用いて抗トピラメート抗体と反応させる。既知の濃度のトピラメートを用いて、抗体調製物及び図１９に示すようなヒドロキシ代謝産物（２１）の間の交差反応性の量を計算する。交差反応性パーセントは、μｇ／ｍｌのトピラメートの観察される濃度を１００倍した後、μｇ／ｍｌの添加した代謝産物の濃度で割ったものに等しい。これらの代謝産物を含有する標本では、交差反応性はまったく観察されない。
【実施例２１】
【０１４２】
［０１５８］免疫原性共役体を有するトピラメート類似体を用いて、トピラメートと結合するポリクローナル抗体を調製する。より詳細には、ＫＬＨ免疫原性部分を有するトピラメート免疫原（１７）及び（１８）を用いて抗トピラメートポリクローナル抗体を生成する。約０．５ｍｌの免疫原（１７）又は（１８）含有組成物と約０．５ｍｌのフロイントのアジュバントを混合して免疫原性組成物を調製する。次いで、生じた１ｍｌの免疫原性カクテルをヒツジ又はウサギ等の動物に注射する。続いて、動物に抗トピラメートポリクローナル抗体を産生させるため、同じカクテルを有する免疫原性注射を４週ごとに動物に投与する。以下に記載するように、同じ抗原を用いたＥＬＩＳＡを介して動物由来の血清をスクリーニングする。さらに、トピラメート抗原（１６）、（１９）、（２０）等を用いてポリクローナル抗体プログラムを実行してもよい。
【実施例２２】
【０１４３】
［０１５９］実施例２１に記載した調製したポリクローナル抗体を調べるため、ＥＬＩＳＡアッセイで使用するＥＬＩＳＡプレートを調製する。すなわち、様々なトピラメート抗原（１６）、（１９）、及び（２０）を、異なるＥＬＩＳＡプレート上にコーティング後、抗トピラメート抗体を供して遊離トピラメートと競合させる。より詳細には、コーティング緩衝液中でトピラメート抗原を希釈した後、ＥＬＩＳＡプレートのウェルに添加する。ＥＬＩＳＡプレートを３７℃で６０分間インキュベート後、コーティング緩衝液中の溶媒を注ぎ、ブロッキング緩衝液をプレートに添加する。プレートを再び、３７℃で６０分間インキュベートしてブロッキング緩衝液中の溶媒をプレートから注ぐ。次いで、ウェル中にブロッキング剤を含むＥＬＩＳＡプレートを２〜８℃で最長１週間保存する。
【実施例２３】
【０１４４】
［０１６０］（実施例２３）
［０１６１］実施例２２で調製したＥＬＩＳＡプレートを用いて、免疫原（１７）を用い実施例２１で調製したポリクローナル抗体の抗体力価を決定する。すなわち、連続希釈を行い、各ウェル中の体積を同一１００μｌにする。ｐＨ７．４、０．１％ＢＳＡを含有するＰＢＳで、１：１０〜１：２０００で抗体希釈を調製する。試料は１０倍希釈し、希釈を１：１００で開始してプレート上で１０倍で連続希釈する。続いて、１００μｌの抗体試料をＥＬＩＳＡプレート上の各ウェルに添加する。次いで、プレートを３７℃で６０分間インキュベートして０．０５％ｔｗｅｅｎを含む２５０μｌのＰＢＳ、ｐＨ７．４で３回洗浄する。次に、プレート上に先にコーティングした抗原とは異なる、１２５μｌの希釈した二次抗原（ＰＢＳ、ｐＨ７．４中）をプレートの各ウェルに添加する。プレートを３７℃で６０分間インキュベートしたものを、０．０５％ｔｗｅｅｎ含有２５０μｌのＰＢＳ、ｐＨ７．４で３回洗浄して力価を実験的に決定する。洗浄後、約１２５μｌのＡＢＴＳ基質をプレート中の各ウェルに添加してプレートを再び２０分間インキュベートする。プレートを４０５ｎｍで読み取り、力価結果を表１に提供する。
【０１４５】
表１
【０１４６】
【表１】
【０１４７】
［０１６２］これらの結果は、免疫原（１７）で生じた抗体力価が、微粒子凝集免疫アッセイには十分でないことを示す。すなわち、微粒子凝集免疫アッセイを極めて高い力価で行わなくてはならないためである。このように、免疫原（１７）は、商業的免疫診断アッセイプロトコルに用いる程度に十分な抗体を生じない。
【実施例２４】
【０１４８】
［０１６３］免疫原（１７）を用いて調製した抗トピラメート抗体の、トピラメート類似体に対する結合活性を結合阻害試験により決定する。すなわち、０．１％ＢＳＡを含む１ｍｌのＰＢＳ、ｐＨ７．４中で試料を調製する。３０％Ｂｍａｘ力価又は５０％Ｂｍａｘ力価を有する組成物を用いて得た力価値をおよそ半分の力価値に割る。３０％Ｂｍａｘを用いて、試料調製段階中に１：１００００の抗体力価を１：５０００に希釈する。次いで、異なる濃度又は標準物質値（０、２、４、８、１６、３２μｇ／ｍｌ）の約５０μｌのトピラメートを、実施例２２で調製したプレートに適用する。約５０μｌの希釈抗体をプレート内に分配してプレート中の組成物を水平プレート振盪装置上で１分間混合する。プレートは、トピラメートも抗トピラメート抗体も含有しない第１列で特定し、第１列を陰性対照として用いる。トピラメートを含有しない第２列を陽性対照として用いる。プレートを６０分間インキュベートして０．０５％ｔｗｅｅｎ含有２５０μｌのＰＢＳ、ｐＨ７．４で３回洗浄する。ＰＢＳ、ｐＨ７．４中の、抗原（１６）、（１９）、又は（２０）等の約１２５μｌの希釈二次抗体共役体をプレートの各ウェルに添加する。３７℃で６０分間インキュベートして０．０５％ｔｗｅｅｎを含む２５０μｌのＰＢＳ、ｐＨ７．４で３回洗浄して力価を実験的に決定する。続いて、約１２５μｌのＡＢＴＳ基質をプレートの各ウェルに添加して２０分間インキュベートする。プレートを４０５ｎｍで読み取り、結果を表２及び３に提供する。
【０１４９】
表２
【０１５０】
【表２】
【０１５１】
表３
【０１５２】
【表３】
【０１５３】
［０１６４］表２及び３中の阻害（Ｂ／Ｂｏ）プロフィールは、免疫原（１７）で生成される抗トピラメート抗体を示す。免疫原（１７）はまた、アッセイ範囲にわたり、阻害比率の増分変化を示す商業的ＦＰＩＡ免疫アッセイでも用いられる。
【実施例２５】
【０１５４】
［０１６５］実施例２２で調製したＥＬＩＳＡプレートを用いて、実施例２１により免疫原（１８）を用いて調製したポリクローナル抗体に関する抗体力価を決定する。実施例２３と実質的に類似の実験プロトコルを用いて力価を決定する。プレートを４０５ｎｍで読み取り、結果を表４に提供する。
【０１５５】
表４
【０１５６】
【表４】
【０１５７】
［０１６６］高力価（抗体を少ししか必要とせず、経済的である）かつ吸光度に優れる免疫診断アッセイを最適に実行することもできる。微粒子凝集免疫アッセイでは力価が高いことが特に重要である。免疫原（１８）は、よりアクセス可能なエピトープを提供する長いリンカーのため、免疫原（１７）よりも免疫原性である。表４の結果は、免疫原（１８）で生じる抗体力価が、微粒子凝集免疫アッセイ等の商業的トピラメート免疫診断アッセイで用いるのに十分であることを示す。
【実施例２６】
【０１５８】
［０１６７］実施例２４と実質的に類似の実験プロトコルを用いて行う結合阻害試験で、トピラメート類似体に対する免疫原（１８）で調製した抗トピラメート抗体の結合活性を決定する。プレートを４０５ｎｍで読み取り、結果を表５及び６に提供する。
【０１５９】
表５
【０１６０】
【表５】
【０１６１】
表６
【０１６２】
【表６】
【０１６３】
［０１６８］表５及び６は、免疫原（１８）で生成される抗トピラメート抗体の阻害（Ｂ／Ｂｏ）プロフィールを示す。Ｂ／Ｂｏの変化は、アッセイ範囲にわたり、増分的であるようである。したがって、本抗体は免疫アッセイに適している。
【実施例２７】
【０１６４】
［０１６９］均一系粒子増進免疫比濁実験である免疫比濁又はＱＭＳ（登録商標）アッセイを行って、実施例２１で調製したポリクローナル抗体を試験する。約０．０５％アジ化ナトリウムを含むｂｉｓ−ｔｒｉｓ緩衝液中、＜１％未満で、免疫原（１８）から調製したトピラメートと結合するヒツジ・ポリクローナル抗体で構成されるＲ１；及び０．０５％のアジ化ナトリウムを含み、抗原（２２）を含むトピラメートをコーティングした０．５％未満の微粒子で構成されるＲ２を含有する、使用準備済みの液体２試薬キットを用いて、トピラメートに関するＱＭＳ（登録商標）アッセイを行う。
【０１６５】
［０１７０］さらに、血清及び血漿から適切な標本を調製してもよい。標準的静脈穿刺技術により血清を収集してゲルバリアを含むか又は含まないガラス又はプラスチック試験管に入れる。遠心分離前に完全な血塊形成が起こっていることを確実にするため、ある標本、特に抗凝血剤又は血栓溶解剤療法を受けている患者由来の標本は、凝固時間が増したことを示しうる。血塊形成が完全になる前に標本を遠心分離した場合、フィブリンの存在により結果が誤ったものになる。したがって、収集後、出来るだけ速やかに赤血球から血清を分離してもよい。ヘパリンリチウム、ヘパリンナトリウム、ＥＤＴＡカリウム及びヘパリンゲル血漿分離剤等の許容しうる抗凝血剤とともに血漿を用いてもよい。標準的静脈穿刺技術によって血漿を収集してガラス又はプラスチック試験管に入れてもよい。また、遠心分離を用いて血小板の適切な除去を確実にする。収集後、出来るだけ速やかに赤血球から血漿を分離してもよい。粒子状物質又は赤血球を含有する標本の結果は一貫性が場合もあるが、試験前に、推奨される８，０００〜１０，０００ＲＣＦで１０分間遠心分離すると、適切な標本を得ることができる。
【０１６６】
［０１７１］トピラメートを含む標本を用いると、結果が最高標準物質値を超えることもありうるため、標本を希釈してアッセイ法を始める。すなわち、標本を手動又は自動化内蔵（ｏｎｂｏａｒｄ）希釈プロトコルを用いて希釈してもよい。アッセイは、試料中の薬剤と微粒子上にコーティングされた薬剤との間で、トピラメート特異的抗体結合部位に関する競合に基づく。トピラメートがコーティングされた微粒子試薬は、抗トピラメート抗体試薬があるが試料中に競合薬剤がなければ迅速に凝集する。吸光度変化速度は測光で測定し、そして、粒子の凝集速度に正比例する。ラモトリジンを含有する試料を添加すると、凝集反応が部分的に阻害され、吸光度変化速度が低下する。濃度依存性の古典的凝集阻害曲線を得ることもでき、この場合は、最低トピラメート濃度（ゼロμｇ／ｍｌ）の場合に凝集速度が最大となり、最高トピラメート濃度（３２μｇ／ｍｌ）の場合に凝集速度が最低となる。
【０１６７】
［０１７２］完全較正（６点）法を用いて較正した後、ＱＭＳ（登録商標）トピラメートアッセイを始める。当該技術分野の平均的な技術で、操作マニュアルの指示に従ってＱＭＳ（登録商標）を行う。結果を表７に示す。
【０１６８】
表７
【０１６９】
【表７】
【０１７０】
［０１７３］表７に示す結果から、トピラメート抗原（１９）をコーティングしたラテックス粒子が抗トピラメート抗体に関して、トピラメートと有効に競合できることが示される。すなわち、特にラテックス粒子とカップリングした場合、トピラメート抗原（１８）を免疫比濁アッセイで用いることができる。
【実施例２８】
【０１７１】
［０１７４］試験試料中の分析物の濃度に正比例する結果を提供する能力を例示するため、直線性を測定してもよい。すなわち、直線性は、典型的には、全体の系の応答を示し、公式化により公知か又は互いに比較して公知の分析物のレベルを試験して系の直線性を測定してもよい。系の結果をこれらの値に対してプロットする場合、プロットした曲線が直線に一致する程度が系の直線性の測定値である。
【０１７２】
［０１７５］定量的測定法の直線範囲を示すプロトコルは当該技術分野で周知である。簡潔には、本プロトコルを用いて直線性を評価して標本に適した基盤（ｍａｔｒｉｘ）の試料を分析する。以下の試料を調製する：ＣａｌＢ（２．０μｇ／ｍｌ）をＣａｌＡ（０μｇ／ｍｌ）で希釈して１μｇ／ｍｌのトピラメート試料を調製し；ＣａｌＣ（４．０μｇ／ｍｌ）をＣａｌＢ（２．０μｇ／ｍｌ）で希釈して３μｇ／ｍｌのトピラメート試料を調製し；ＣａｌＤ（８．０μｇ／ｍｌ）をＣａｌＣ（４．０μｇ／ｍｌ）で希釈して６μｇ／ｍｌのトピラメート試料を調製し；ＣａｌＥ（１５．９．０μｇ／ｍｌ）をＣａｌＣ（８．０μｇ／ｍｌ）で希釈し、１１．９μｇ／ｍｌのトピラメート試料を調製し；及びＣａｌＦ（３１．７μｇ／ｍｌ）をＣａｌＥ（１５．９μｇ／ｍｌ）で希釈して２３．５μｇ／ｍｌのトピラメート試料を調製する。
【０１７３】
［０１７６］試料又は品質管理物質をアッセイした後、データを収集して回収という平均試験結果として報告する。以下の等式に基づいて、回収パーセントを計算する：
回収％＝平均回収濃度ｘ１００％
予測濃度
［０１７７］１回の実験中に試料を無作為にアッセイして回収比率を表８に提供する。
【０１７４】
表８
【０１７５】
【表８】
【０１７６】
［０１７８］回収比率は１１５％〜８５％の範囲内である。データは商業的免疫診断アッセイに必要な感度及び精度の性能を裏付ける。結果の直線性を図２０にグラフで示す。
【０１７７】
［０１７９］本発明の精神又は本質的な特性から逸脱することなく、他の特定の形式で、本発明を具現することもできる。記載する態様は、全ての観点で単に例示的であり、限定的とはみなされない。したがって、本発明の範囲は上記説明ではなく、請求項に示される。請求項の意味及び等価の範囲内に属するすべての変化が、その範囲内に含まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１７８】
【図１】［０２９］図１は、抗トピラメート抗体を調製する方法の態様を例示する流れ図である。
【図２】［０３０］図２は、トピラメートに関する免疫診断アッセイを行う方法の態様を例示する流れ図である。
【図３】［０３１］図３は、蛍光偏光に基づく競合的結合試験の態様を例示する概略図である。
【図４】［０３２］図４は、トピラメートの較正曲線の態様を例示するグラフである。
【図５】［０３３］図５は、凝集に基づく競合的結合試験の態様を例示する流れ図である。
【図６】［０３４］図６は、凝集に基づく競合的結合試験の態様を例示する流れ図である。
【図７】［０３５］図７は、酵素活性に基づく競合的結合試験の態様を例示する流れ図である。
【図８】［０３６］図８は、化学発光に基づく競合的結合試験の態様を例示する流れ図である。
【図９】［０３７］図９は、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１０Ａ】［０３８］図１０Ａ及び１０Ｂは、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１０Ｂ】［０３８］図１０Ａ及び１０Ｂは、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１１】［０３９］図１１は、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１２】［０４０］図１２は、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１３】［０４１］図１３は、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１４】［０４２］図１４は、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１５】［０４３］図１５は、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１６】［０４４］図１６は、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１７】［０４５］図１７は、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１８】［０４６］図１８は、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１９】［０４７］図１９は、トピラメート代謝産物を例示する概略図である。
【図２０】［０４８］図２０は、凝集免疫アッセイの態様からのトピラメート回収を例示するグラフである。
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対するクロスリファレンス
［００１］本米国特許出願は、Anlong Ouyang博士らを発明者とする、２００４年１０月２５日に出願された、第６０／６２１，７７０号の「トピラメートに関する免疫アッセイ」と題する米国仮出願；及び２００５年１０月２０日に出願された、番号不明の「トピラメートに関する免疫アッセイ」と題する米国一般特許出願に優先権を請求し、どちらの出願も本明細書に援用される。
【０００２】
１．発明の分野
［００２］本発明は、トピラメート免疫診断試薬及びプロトコルに関する。より詳細には、本発明は、トピラメート、トピラメート類似体、トピラメート類似体から調製される免疫原及び抗原、トピラメートに基づく免疫原から調製される抗体、並びにこれらを作製し、用いる方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
２．関連技術
［００３］トピラメートは、化学的には２，３：４，５−ビス−Ｏ−（１−メチル−エチリデン−β−Ｄ−フルクトピラノーススルファメート又は２，３：４，５−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−ベータ−Ｄ−フルクトピラノーススルファメートと表され、以下に示される。トピラメートは、抗癲癇薬剤（「ＡＥＤ」）であり、現存する多くのＡＥＤには化学的に無関係である。トピラメートは、二次性全般化を伴う又は伴わない部分発作を起こす成人の治療で補助療法として用いる、１９９６年にＦＤＡに認可されたＴＯＰＡＭＡＸ（登録商標）中の活性成分であり、Ｌｅｎｎｏｘ−Ｇａｓｔａｕｔ症候群及び乳児痙攣にも有用でありうる。
【０００４】
【化１】
【０００５】
［００４］ＡＥＤ等の様々な薬剤は、異なる患者集団では、異なる薬物動態学的及び／又は薬力学的プロフィールを有する可能性があり、この結果、ＡＥＤの治療薬剤モニタリング（「ＴＤＭ」）が致命的に重要であることが周知である。ＴＤＭプログラムの目的の１つは、投与後の様々な時点での薬剤濃度の決定して、投薬計画を管理及び／又は最適化して、患者の臨床的結果を最適化することである。したがって、ＴＤＭに基づき、単一の患者又は患者集団に対して、薬剤用量及び投薬計画を調節することもできる。
【０００６】
［００５］いくつかのトピラメートの特質により、ＴＤＭを用いる場合は、臨床的に患者の療法を個別化する必要があることが示唆される。患者の血清濃度に対する用量は、個体間変動が大きいことが示唆されている。また、最適血清濃度を達成するのに必要なトピラメート投薬量の必要条件には、薬物動態学的変動が主な役割を果たす。
【０００７】
［００６］トピラメートの最適血清濃度の適切な範囲は、他のＡＥＤに加えて、１２５〜４００ｍｇのトピラメート用量を投与された患者で７〜２４μｍｏｌ／ｌであろうと示唆されている。何人かの患者は、最高２０００ｍｇという、極めて高用量を投与されており、全身トピラメート濃度が８０μｍｏｌ／ｌであった。有効ＴＤＭを用いて、治療指数内の適切なトピラメート濃度を獲得できる投薬計画を予測することもできる。
【０００８】
［００７］さらに、可能であれば単剤療法に進行することを見越して、トピラメートを用いた用量増大付加型研究が行われている。したがって、朝のトラフ血清トピラメート濃度を測定して発作制御及び関連する副作用と関連させた。その結果、１５〜７５μｍｏｌ／ｌの範囲の血清トピラメート濃度で発作制御は明らかに改善されたが、７５μｍｏｌ／ｌより高い血清濃度では発作制御は低下した。また、６０μｍｏｌ／ｌより高い血清濃度では、副作用が有意に増えた。したがって、トピラメートの暫定的な標的血清濃度範囲は約１５〜６０μｍｏｌ／ｌと示唆された；しかし、大部分の患者の血清濃度は、適切な投与計画で、低いか中程度の範囲である。
【０００９】
［００８］患者のトピラメートの全身濃度を決定する多くの方法が報告されている。Berry DJら Ther Drug Monit;22:460-4(2000)を参照されたい。キャピラリーガスクロマトグラフィー法は、水素炎イオン化検出及び窒素特異的検出を用いた、血清中のトピラメートの測定を報告している。Hollandら, J Chromatogr;433:276-281(1988)及びRiffitsら, J Pharm Biomed Anal;19:363-371(1999)、Tangら, Ther Drug Monitoring; 22: 195-201(2000)を参照されたい。さらに、トピラメート濃度を測定するため、ＭＳとともに、ＧＬＣ又はＨＰＬＣを用いる方法が示されている。Mozayani Aら J Anal Toxicol;23:556-558(1999)、Chen Sら, J Chromatogr;761:133-7(2001)、及びChristensenら, Ther Drug Monitoring;24:658-664(2002)を参照されたい。しかし、本方法は、例えば、試料調製時間が長く、アッセイ時間が長く、コストが高く、多大な労働力を伴う方法であるため商業的使用には非実用的である。したがって、有効なＴＤＭのためには、トピラメート血漿レベルを測定するための単純で迅速な分析法が必要である。
【００１０】
［００９］商業的に入手可能な（Seradyn, Inc.）ＦＰＩＡ免疫アッセイを用いて、血漿又は血清中のトピラメートを測定することもできる。参照によって本明細書に含まれる、米国特許第５，９５２，１８７号を参照されたい。現在のＦＰＩＡ免疫アッセイは、単純かつ迅速であるが、該免疫アッセイは、以前のトピラメート類似体の入手可能性が劣っており、かつ、ユーザーからみた機能性が劣っており、制限されている。
【００１１】
［０１０］免疫アッセイ技術は、生物学的試料中の様々な薬剤を検出するために開発され、商業的分析適用に非常に適する。したがって、免疫アッセイを用いて患者の血中の薬剤及び／又は薬剤代謝産物の量を迅速に評価することもできる。免疫アッセイの例としては、均一系（ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ）微粒子免疫アッセイ（例えば免疫比濁法）又は定量的微小球体系（「ＱＭＳ（登録商標）」）、蛍光偏光免疫アッセイ（「ＦＰＩＡ」）、クローニング酵素供与体免疫アッセイ（「ＣＥＤＩＡ」）、化学発光微粒子免疫アッセイ（「ＣＭＩＡ」）等があげられるが、これらに限定されるわけではない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
［０１１］したがって、患者の血液、血清、血漿及び／又は他の生物学的液体又は試料中のトピラメートを検出するために設定された免疫アッセイがあれば好適であろう。さらに、本免疫アッセイで用いるトピラメート類似体及び／又は抗トピラメート抗体を産生する際に用いるトピラメート類似体に基づく免疫原があれば好適であろう。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
発明の簡単な概要
［０１２］一般的に、本発明は、トピラメート類似体、及びトピラメートに関する免疫診断アッセイに関する。トピラメート類似体には、抗トピラメート抗体を調製するために用いる免疫原性部分等の作用基；トピラメートに関する免疫診断アッセイで使用できる抗原性部分；又は免疫診断アッセイで使用できるトレーサー部分等の作用基を含んでもよい。さらに、トピラメート類似体を免疫診断アッセイに用いて、抗トピラメート抗体に関してトピラメートと競合させてもよい。
【００１４】
［０１３］１の態様では、本発明に、は以下の式１又は式２の１つの化学構造を有するトピラメート類似体が含まれる。
【００１５】
【化２】
【００１６】
［０１４］式１及び式２に示すトピラメート類似体は、ＬがＳＯ２ ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ、ＮＨＣＯ、ＮＨＣＨ２Ｐｈ、ＣＯＯ、又はＯ基のうちの１つであることにより特定される。さらに、Ｘは、Ｌ及びＹ間の結合、１〜２の環を有する置換又は非置換の芳香族又は脂肪族基、あるいは１〜２０の炭素又はヘテロ鎖原子、及び最も好ましくは１〜１０の炭素又はヘテロ原子を有する、飽和又は不飽和、置換又は非置換、及び直鎖又は分枝鎖の少なくとも１つであってもよい。また、Ｙは、脂肪族、アルコール、アミン、アミド、カルボン酸、アルデヒド、エステル、活性化エステル、脂肪族エステル、イミドエステル、イソシアネート、イソチオシアネート、無水物、チオール、チオラクトン、ジアゾニウム、及びマレイミド基からなる群より選択することもできる。
【００１７】
［０１５］さらに、Ｙは、タンパク質、リポタンパク質、糖タンパク質、ポリペプチド、多糖、核酸、ポリヌクレオチド、テイコ酸、放射性同位体、酵素、酵素断片、酵素供与体断片、酵素受容体断片、酵素基質、酵素阻害剤、補酵素、触媒、蛍光部分、リン光部分、抗ストークス（ａｎｔｉ−ｓｔｏｋｅｓ）上方制御部分、化学発光部分、発光部分、色素、増感剤、粒子、微粒子、磁気粒子、固体支持体、リポソーム、リガンド、受容体、ハプテン放射性同位体、及びその組み合わせからなる群より選択される作用基にカップリングしたリンカー基であってもよい。より好ましくは、作用基は、アルブミン、血清タンパク質、グロブリン、眼球レンズのタンパク質、ウシ血清アルブミン、キーホールリンペット・ヘモシアニン、卵オボアルブミン、ウシ・ガンマ−グロブリン、合成ポリペプチド、デンプン、グリコーゲン、セルロース、炭水化物ゴム、アラビアゴム、寒天、ポリヌクレオチド、直径が少なくとも約０．０２ミクロン〜約１００ミクロンである粒子、細胞、赤血球、白血球、リンパ球、連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、大腸菌、ウイルス、リポソーム、ラテックス、リン脂質小胞、陽イオン性リポソーム、陰イオン性リポソーム、リポタンパク質及びリポポリマーからなる群より選択される。最も好ましくは、作用基は、アルブミン、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、キーホールリンペット・ヘモシアニン、又は蛍光部分等の化学発光部分の少なくとも１つである。
【００１８】
［０１６］１の態様では、トピラメートに関する免疫診断アッセイで用いるのに十分な力価の抗体を生成する免疫原を形成するため、類似体が免疫原性部分にカップリングしてもよい。また、類似体が免疫原性部分にカップリングして、類似体及びトピラメートと相互作用する抗体を生成する免疫原を形成することもできる。また、類似体がトレーサー部分にカップリングしてもよく、本類似体が、免疫診断アッセイで用いるのに十分な溶解度でありうる。さらに、類似体が抗原部分にカップリングすることができ、本類似体が、免疫診断アッセイで用いるのに十分な溶解度でありうる。さらに、類似体は、粒子又は微粒子上に、安定して装填されるか、又はこれらとカップリングし、あるいは酵素、酵素供与体、又は酵素受容体にカップリングすることができる。さらに、類似体は、抗トピラメート抗体との相互作用に関して、トピラメートと競合することができる。
【００１９】
［０１７］１の態様では、トピラメート類似体を作製する方法には、ハロゲン化物又は塩化物脱離基を有する塩化物等のトピラメートハロゲン化物を、ハロゲン化物又は塩化物脱離基を置換する一級アミンを有する反応物と反応させて、スルファメート基との共有結合を形成することを含んでいてもよい。あるいは、トピラメートを、一級アミンと反応するカルボキシル基を有する反応物と反応させて、アミドを形成させて類似体を作製してもよい。他の代替法としては、９−ヒドロキシ又は１０−ヒドロキシトピラメートを、イソシアネート官能基を有する反応物と反応させて類似体を作製することもできる。
【００２０】
［０１８］本発明の１つの態様としては、試料中のラモトリジンの存在を検出する免疫診断系で用いる抗体組成物があげられる。抗体組成物には、少なくとも１つの結合ドメインを有する抗トピラメート抗体であって、トピラメートに結合でき、トピラメート類似体に結合できる、前記抗体が含まれてもよい。また、抗体は、少なくとも約１：５，０００、より好ましくは少なくとも約１：１０，０００、さらにより好ましくは少なくとも約１：５０，０００、さらにより好ましくは少なくとも約１：１００，０００、そして最も好ましくは少なくとも約１：３００，０００の力価で存在してもよい。いくつかの場合、好ましくは、最低１：５，０００又は最高１：３００，０００の抗体力価を有しうる。
【００２１】
［０１９］さらに、抗体は、モノクローナル抗体及び／又はポリクローナル抗体である。抗体は、トピラメートに比較してトピラメート類似体に対して、均一系、不均一系（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ）、又は他の免疫診断アッセイに用いるのに十分な、親和性、特異性、又は結合活性の少なくとも１つを有してもよい。このように、抗体及びトピラメート類似体間の相互作用は、トピラメートに対する抗体の親和性、特異性又は結合活性の少なくとも１つの少なくとも５０％であり、さらにより好ましくは、ラモトリジンに対する抗体の親和性、特異性又は結合活性の少なくとも１つの少なくとも７０％であり、最も好ましくは、ラモトリジンに対する抗体の親和性、特異性又は結合活性の少なくとも１つの少なくとも９０％でもよい。場合により、トピラメート類似体に対する抗体の親和性、特異性又は結合活性の少なくとも１つは、トピラメートに対するものと実質的に同一である。
【００２２】
［０２０］１の態様では、本発明としては、試料中のトピラメートの存在を検出するための免疫診断アッセイで用いる系があげられる。当該系には、トピラメート類似体及び抗トピラメート抗体が含まれうる。さらに、トピラメート類似体又は抗トピラメート抗体の一方が、粒子、磁気粒子、微粒子、微小球体、支持体、酵素供与体又は酵素受容体の１つとカップリングしてもよい。
【００２３】
［０２１］１の態様では、系には、以下の少なくとも１つが含まれてもよい：（ａ）トピラメートのストック組成物；（ｂ）濃度勾配を形成する、異なる濃度のトピラメートを含有する一連の組成物；（ｃ）トレーサー部分にカップリングしたトピラメート類似体；（ｄ）微粒子にカップリングしたトピラメート類似体；（ｅ）微粒子にカップリングした抗体；（ｆ）酵素供与体にカップリングしたトピラメート類似体、並びに対応する酵素受容体；（ｇ）酵素受容体に共役化したトピラメート類似体並びに対応する酵素供与体；又は（ｈ）ろ過又は沈降による分離に適する粒子にカップリングした抗体。
【００２４】
［０２２］本発明としては、試料中のトピラメートの存在を検出するための免疫診断アッセイを行う方法もあげられる。本方法には、抗トピラメート抗体及びトピラメート類似体を、以前トピラメートを投与した被験体から得た試料と合わせて、第一の組成物を形成する工程が含まれてもよい。その後、試料由来のいかなる遊離（ｆｒｅｅ）トピラメート及びトピラメート類似体も、抗体との結合に関して競合できるようにする。競合的結合後にトピラメート類似体及び抗体間の結合を検出する。
【００２５】
［０２３］１の態様では、免疫診断アッセイは、後述のように、蛍光部分を含むトピラメート類似体を用いて本類似体と抗体及び試料を合わせる。第一の偏光量の偏光で、蛍光部分を励起することもでき、第二の偏光量の蛍光部分から放出される偏光を検出する。場合によって、第一の偏光量と第二の偏光量を比較して試料にトピラメートが存在するか否かを決定し、ここで第二の偏光量が、第一の偏光量と異なる場合は、試料中にトピラメートが存在する指標とする。さらに、免疫診断アッセイには、既知の量のトピラメートと、トピラメート類似体及び抗体を合わせて対照結合組成物を形成することによる対照が含まれてもよい。第三の偏光量を有する対照結合組成物で蛍光部分から放出される偏光を検出して第二の偏光量と比較する。その後、試料中に存在するトピラメート量を決定する。
【００２６】
［０２４］１の態様では、免疫診断アッセイは、微粒子にカップリングしたトピラメート類似体又は抗体を用いる。類似体、抗体及び試料を合わせて第一の組成物とするが、ここで、遊離トピラメートは抗体との結合に関して、類似体と競合する。次いで、第一の組成物に入射光線を照射して第一の組成物由来の透過光の第一の強度を検出する。トピラメート類似体及び抗体を有するが遊離トピラメートを有しない、対照結合組成物由来の透過光の最低強度を同定して透過光の第一の強度と比較する。トピラメートが試料に存在するか否かを決定し、ここで最低強度が第一の強度と異なるならば、試料中にトピラメートが存在する指標とする。さらに、免疫診断アッセイには、既知の量のトピラメートと、トピラメート類似体及び抗体を合わせて第二の対照結合組成物を形成することによる、対照が含むこともできる。次いで、第二の対照結合組成物に入射光線を照射して第二の対照結合組成物由来の透過光の第二の強度を検出する。その後、試料中に存在するトピラメートの量を決定することもできるが、ここで第一の強度と第二の強度との比較は、試料中に存在するトピラメート量の指標となる。
【００２７】
［０２５］１の態様では、免疫診断アッセイは、酵素供与体を有するトピラメート類似体を用いる。類似体、抗体、及び試料を合わせて第一の組成物とし、ここで、遊離トピラメートは抗体との結合に関して、類似体と競合する。第一の組成物と酵素受容体及び基質を合わせるが、ここで基質は、酵素供与体及び酵素受容体との相互作用により切断できる。次いで、酵素活性を検出する。さらに、免疫診断アッセイには、既知の量のトピラメート並びにトピラメート類似体及び抗体を合わせて、対照結合組成物を形成することによる、対照が含まれてもよく、その後、酵素受容体及び基質をこれと合わせる。試料中に存在するトピラメート量の指標を提供する、酵素活性と対照酵素活性との比較により、試料中に存在するトピラメートの量を決定する。
【００２８】
［０２６］１の態様では、免疫診断アッセイは、トレーサー部分を有するトピラメート類似体及び粒子とカップリングした抗体を用いる。類似体、抗体、及び試料を合わせて第一の組成物とし、ここで、遊離トピラメートは抗体との結合に関して、類似体と競合する。第一の組成物から抗体を分離して未結合のトピラメート類似体を抗体から分離する。その後、第一の組成物から、抗体と結合しているトレーサー部分を検出する。さらに、免疫診断アッセイには、既知の量のトピラメートと、トピラメート類似体及び抗体を合わせて、対照結合組成物を形成することによる、対照を含んでもよい。したがって、試料中に存在するトピラメート量の指標を提供するため、第一の組成物中のトレーサー部分の量及び対照結合組成物中のトレーサー部分の量を比較することにより、試料中に存在するトピラメートの量を決定してもよい。
【００２９】
［０２７］本発明の上記及び他の態様及び特徴は、以下の説明及び付随する請求項からより完全に明らかになるであろうし、又は以下に示す本発明の実施により確認できる。
【００３０】
［０２８］本発明の上記及び他の利点及び特徴をより明確にするため、添付の図面に例示する、本発明の特定の態様を参照して、本発明のより詳細な説明を提供する。本図面は本発明の典型的な態様のみを示すため、その範囲を限定すると見なしてはならないことは認識されよう。添付の図面を用いて、本発明をより具体的かつ詳細に記載し、説明する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
［０４９］一般的に、本発明は、トピラメート類似体及びトピラメートの免疫診断アッセイに関する。トピラメート類似体は、抗トピラメート抗体を調製するために用いうる免疫原性部分、トピラメートの免疫診断アッセイで用いうる抗原性部分若しくはトレーサー部分が含まれていてもよい。さらに、トピラメート類似体を免疫診断アッセイに用いて、抗トピラメート抗体に関してトピラメートと競合させることもできる。このように、以下の専門用語は、本発明の態様を説明するよう意味するが、限定することを意図したものではない。
【００３２】
［０５０］本明細書中、用語「ハプテン」は、部分的又は不完全な抗体を意味し、小分子又は薬剤でもよい。さらにハプテンは、タンパク質不含又はポリペプチド不含物質である低分子量分子でもよい。通常ハプテンは、単独で抗体形成を刺激できないが抗体と相互作用できる。そこで本発明のトピラメート及びトピラメート類似体はハプテンでもよい。
【００３３】
［０５１］本明細書中、用語「類似体」又は「誘導体」は、１以上の化学反応により、親化合物又は分子から作製される化学的化合物又は分子を意味する。そこで、類似体は、トピラメートの構造に類似であるか又はトピラメート骨格に基づくが、特定の構成要素又は構造的性質はトピラメートと異なる構造の化合物でもよく、代謝的に類似の作用又は反対の作用でありうる。本発明のトピラメートの類似体又は誘導体を用いて類似体及びトピラメートを共に認識する抗体との結合に関して競合させることもできる。また、類似体には、リンカー基を介したトピラメートにカップリングした作用基が含まれうる。
【００３４】
［０５２］本明細書中、用語「免疫原」及び「免疫原性」は、生物中で免疫応答を産生又は生成できる物質を意味する。免疫原はまた抗原でもよい。通常、免疫原は、非常に分子量が高く（例えば１０，０００より大きい）、したがって、本発明の免疫原を形成するために、タンパク質、リポタンパク質、多糖、核酸及び特定のテイコ酸等の様々な巨大分子をハプテンにカップリングしてもよい。
【００３５】
［０５３］本明細書中、用語「免疫原性」は、分子が免疫応答を誘導する能力を意味し、これは、注入される分子の固有の化学構造及び宿主動物が化合物を認識できるか否かで決定する。抗原の構造中の僅かな変化により化合物の免疫原性が大きく改変することもあり、当該変化は、抗体、特に、極めて高く保存されている抗原に対する抗体を得る機会を高める一般的な手段として広く用いられてきた。例えば、これらの修飾技術は、免疫原の領域を改変して、Ｔ細胞結合により優れた部位を提供するか、又はＢ細胞結合のための新規のエピトープを暴露するかである。
【００３６】
［０５４］本明細書中、用語「担体」、「免疫原性部分」、又は「免疫原性担体」は、ハプテンにカップリングすることができる免疫原性物質、一般的にはタンパク質である作用基を意味する。ハプテンにカップリングした免疫原性部分は、免疫応答を誘導することができ、ハプテンと特異的に結合できる抗体の産生を誘発できる。免疫原性部分は、異質（foreign）と認識されて宿主から免疫学的応答を誘発する、タンパク質、ポリペプチド、糖タンパク質、複合多糖、粒子、核酸、ポリヌクレオチド等を含む作用基である。さらに、リンカーには、修飾又は非修飾のヌクレオチド、ヌクレオシド、ポリマー、糖及び他の炭水化物、例えばポリエチレングリコール等のポリエーテル、ポリアルコール、ポリプロピレン、プロピレングリコール、エチレン及びプロピレングリコールの混合物、ポリアルキルアミン、スペルミジン等のポリアミン、ポリ（アクリル酸エチル）等のポリエステル、ポリホスホジエステル及びアルキレン含まれる。作用基及びそのリンカーの例としてはコレステロール−ＴＥＧ−ホスホロアミダイトがあり、ここでコレステロールは作用基であり、そしてテトラエチレングリコール及びホスフェートがリンカーとして機能する。
【００３７】
［０５５］一例として、作用基は免疫原性を刺激し、ハプテンに対する抗体形成を刺激するためにハプテンにカップリングさせることができる、免疫原性担体である。通常、免疫原性担体は、免疫原性が高くハプテンに対して免疫原性を供与できる、巨大分子である。例えば、異質のタンパク質は当該免疫学的応答を誘発できるため、タンパク質を免疫原性担体として用いうる。タンパク質担体は可溶性が高くてもよく、ハプテン分子との共役化を容易に促進できる官能基を含んでいてもよい。現在用いられている最も一般的な担体タンパク質のいくつかは、キーホールリンペット（keyhole limpet）・ヘモシアニン（ＫＬＨ；ＭＷ ４５０，０００〜１３，０００，０００）及びウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、ＭＷ ６７，０００）である。キーホールリンペット・ヘモシアニンは、海生キーホールリンペットの酸素運搬タンパク質であり、非常に巨大で、解離させてサブユニットにすると免疫原性が高まるが、これはおそらく他のエピトープ部位が免疫系に曝露されるためである。ＢＳＡは共役化に適した多くの官能基を含有する可溶性の高いタンパク質である。
【００３８】
［０５６］本明細書中、用語「抗体」は、体内の異質な分子の存在に応答して産生されるタンパク質を意味する。これらは、抗原及び免疫系の特異的な細胞又はタンパク質の両方に結合する能力で特徴付けできる。抗体は、５つのクラス、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、及びＩｇＤに分けられる、形質細胞により産生される免疫グロブリンである。
【００３９】
［０５７］本明細書中、用語「エピトープ」は、抗体と相互作用する抗原の領域を定義するよう意味する。したがって、抗原である分子又は他の物質としては、抗体活性がある少なくとも１のエピトープがあげられる。これにより、抗原が、同一抗体又は異なる抗体により認識される様々なエピトープがありうる。また、エピトープは任意の特定構造の固有の特性ではなく、抗体と相互作用する結合部位と定義できる。
【００４０】
［０５８］本明細書中、用語「親和性」は、エピトープ及び抗体間の結合強度の測定値を意味する。したがって、単一の抗体は、様々なエピトープに対する親和性が異なってもよい。これにより、単一の抗体は１のエピトープに強く結合し、他のエピトープにより弱く結合することが可能となる。つまり、抗体は、トピラメート等の薬剤に対して第一の親和性があり、トピラメート類似体に対して第二の親和性があってもよい。しかし、抗体はトピラメート及びトピラメート類似体類似体の両方に対する親和性が実質的に同等又は類似であってもよく、これにより、類似体を用いて、トピラメートに対する抗体を生成して、競合的結合試験に用いることが可能となる。したがって、本発明のトピラメート類似体を用いて、トピラメートに親和性がある抗体を生成することができる。
【００４１】
［０５９］本明細書中、用語「結合活性」は、抗体及び抗原の複合体の全体的な安定性の測定値を意味する。抗体−抗原相互作用の全体的な安定性は、以下の３つの主な要因に制御されうる：（ａ）エピトープに対する抗体固有の親和性；（ｂ）抗体及び抗原の価数；及び（ｃ）相互作用構成要素の幾何学的配置。つまり、上記パラメーター及び他のパラメーターを変化させて、抗体−抗原複合体の結合活性を調節することができる。
【００４２】
［０６０］本明細書中、用語「特異性」は、他の利用可能なエピトープと比較した、エピトープと抗体の優先的な結合を意味する。すなわち、抗体の特異性は、トピラメート代謝産物ではなく、トピラメート及び／又は類似体に優先的に結合できる。これを用いて、不都合な抗体−代謝産物結合が混入しないようにして、トピラメートの真の濃度を評価できるように、代謝産物よりもトピラメートと優先的に結合する、抗トピラメート抗体を生成することもできる。また、トピラメートとの結合に関する抗体の特異性を用いて、トピラメートの特異性が類似又は実質的に同一な類似体を調製することもできる。
【００４３】
［０６１］本明細書中、用語「結合速度（ｏｎ ｒａｔｅ）」、「解離速度（ｏｆｆ ｒａｔｅ）」、又は「結合−解離速度（ｏｎ−ｏｆｆ ｒａｔｅ）」は、抗体−抗原相互作用の動力学を記載する方法を意味する。すなわち「結合速度」は、Ｋａ（すなわち結合定数）を意味し、「解離速度」は、Ｋｄ（すなわち解離定数）を指すよう意味する。各抗体には、特定の抗原又はエピトープに対するＫａがあり、これは、通常は結合の親和性又は強度という。ポリクローナル抗体に関しては、「結合−解離速度」は、ポリクローナル抗体を形成する特定の抗体各々に関する、多くの異なるＫａ又はＫｄの合計を意味する。
【００４４】
［０６２］本明細書中、用語「ポリクローナル抗体」は、所定の抗原又はエピトープに対する特異性及び親和性の範囲が広い抗体の異種混合物を意味する。したがって、ポリクローナル抗体としては、各々他と区別でき、抗原と結合するか又は他の態様で相互作用する、複数の抗体があげられる。エピトープのある免疫原を動物内に注射して適切な時間の経過後、目的の抗体を含有する血液分画を収集して、場合により精製することにより、ポリクローナル抗体を含む、異なる抗体を産生するか又は生成することができる。抗体を産生する場合、ポリクローナル抗体の最終的な使用について、いくつかのパラメーターを考慮してもよい。これらのパラメーターとしては以下があげられる：（１）抗体の特異性（すなわち抗原を区別する能力）；（２）抗体の結合活性（すなわちエピトープに結合する強度）；及び（３）アッセイ系での抗体の最適な希釈を決定する、抗体力価。
【００４５】
［０６３］本明細書中、用語「モノクローナル抗体」は、正常な抗体産生細胞及び１の前駆細胞の培養物から単離された抗体を意味する。モノクローナル抗体の結合定数は、均一であってもよく、当該技術分野で周知である。
【００４６】
［０６４］本明細書中、「抗体力価」は、血清希釈の逆数を意味する。より好適に記載及び形式化するため、本態様で力価を記載する。１／５００００の力価は、抗原を１：５００００で希釈した場合に、抗体が、共に結合させた抗原のエピトープを有効に検出することを意味する。力価は、最大Ｏ．Ｄ．の約１０％である終点力価により計算される。
【００４７】
［０６５］本明細書中、用語「Ｂｍａｘ」は、力価と独立して、抗体及びリガンド（例えば類似体、抗原、標識等）間の最大結合を意味する。また、Ｂｍａｘは、結合活性と関連させてもよく、また結合活性から独立してもよく、抗体がどの程度良好にリガンドに結合して測定可能なシグナルを生じうるかを決定するための評価に用いることができる。さらに、Ｂｍａｘは、各標本の最大吸光度として決定でき、Ｂｏを計算するために用いてもよい。Ｂｍａｘの値は、３〜４ＯＤと同程度の高さで変化してもよく、モノクローナル抗体プログラムに関しては、さらに高くてもよい。
【００４８】
［０６６］本明細書中、用語「Ｂｏ」は、結合置換アッセイの吸光度選択を意味し、置換アッセイに関しては、Ｂｍａｘの約３０％〜５０％である。このように、Ｂｏを用いて、解離速度を迅速に測定してもよく、これを用いて結合活性をアッセイしてもよい。また、ＯＤがＢｍａｘの約半分である場合、５０％Ｂｍａｘを用いてもよいが、これは一般的に、１．７〜１ＯＤの範囲でありうる。ときに、５０％Ｂｍａｘが１．７程度のＯＤである場合もあり、この場合は、正確な測定には抗体が過剰供給されすぎている可能性もあり、しばしば結果として置換が劣る。したがって、抗体があまりに過剰供給されている場合は、３０％Ｂｍａｘを用いてもよい。適切なＢｏ値及び置換データを得るため、Ｂｍａｘは２．０〜２．５ＯＤ内でよく、Ｂｏは１．０〜１．２５ＯＤ内でもよい。
【００４９】
［０６７］本明細書中、用語「免疫アッセイ」又は「免疫診断」は、生物学的試料中の特定の抗原又は特定の抗体の少なくとも１つを同定及び／又は定量化するため、抗原及び抗体間の結合を利用する実験技術を意味する。現在、以下に記載するような３種の免疫アッセイがある：（１）抗体捕捉アッセイ；（２）抗原捕捉アッセイ；及び（３）２抗体サンドイッチアッセイ。さらに、新規免疫アッセイが開発され、本発明の類似体及び抗体を使用しうるであろうことが意図される。
【００５０】
［０６８］本明細書中、用語「競合的免疫アッセイ」は、既知量の同定可能な抗原が、抗体との結合に関して他の抗原と競合する、実験プロトコルを意味する。すなわち、既知の抗体と結合する既知の抗原を、その既知の抗体と結合する他の抗原を含有すると推測される試料と合わせる。これにより、該抗体上の結合部位で、既知の抗原及び他の抗原が共に競合することができる。例えば、抗トピラメート抗体と結合するトピラメート類似体を、トピラメートを含有すると推測される試料と合わせてもよく、当該類似体及びトピラメートが、抗トピラメート抗体との結合に関して競合する。その後、抗体との結合に関する競合を用いて、試料中にトピラメートが存在するか否かを決定してもよく、試料中のトピラメート量を定量化することもできる。
【００５１】
［０６９］本明細書中、用語「比濁検出」は、凝集粒子により散乱される光による、入射光線の透過における強度の減少又は吸光度の増加の測定値を意味する。透過光の強度の減少は、透過光のより高い出発バックグラウンド強度に対して測定される。通常、読取りは、光供給源と一列になった検出装置で行われ、粒子の凝集が光の透過を阻害する。したがって、トピラメート等の標的分析物の存在を評価する手段として、凝集の阻害又は促進を用いることもできる。比濁アッセイは、様々な臨床分析装置に容易に適応できる。
【００５２】
［０７０］本明細書中、用語「微粒子凝集アッセイ」は、標的分析物による微粒子の凝集を阻害する原理を用いる免疫アッセイを意味する。すなわち、標的分析物が存在すると凝集が減少する。例えば、標的薬剤の誘導体が微粒子表面に共有結合し、及び／又は増感粒子はモノクローナル抗体により凝集する。試料が遊離薬剤を含有する場合、凝集は薬剤濃度に比例して阻害され、吸光度と関連した薬剤濃度の古典的な阻害曲線が導かれる。
【００５３】
［０７１］本明細書中、用語「療法的濃度」は、所望の臨床効果を生じる場合の有効な薬剤の濃度を意味する。
【００５４】
［０７２］本明細書中、用語「作用基」は、リンカー基を介してトピラメートにカップリングした分子又は巨大分子を意味する。作用基としては、免疫原性部分、抗原部分、トレーサー部分等があげられる。さらに、本明細書記載の化学的骨格のＺ基が作用基である。つまり、作用基をＹリンカー基にカップリングさせ、類似体に他の機能を提供しうる。
【００５５】
［０７３］本明細書中、用語「活性エステル」又は「活性化エステル」は、例えばペプチド及びタンパク質等の化合物の遊離アミノ基と反応できるエステル基を意味する。活性エステルとしては、活性脱離基に連結されたカルボキシル基があげられる。しばしば、活性脱離基には、エステル酸素が含まれ、活性脱離基はエステル酸素を除去する。例えば活性エステルは、一級アミンによる置換に感受性であり、これにより、エステル酸素が除去され、アミド基が形成される。活性エステルを形成する活性脱離基の例としては、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（「ＮＨＳ」）、ｐ−ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾリル等があげられる。よって、用語「ＮＨＳ」を用いる場合は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドとして定義されることを意味する。
【００５６】
［０７４］本明細書中、用語「標識」、「検出剤分子」又は「トレーサー」は、検出可能シグナルを生じるか又は生じるように誘導できる、いかなる作用基をも意味する。標識をトピラメート、トピラメート類似体、ハプテン、分析物、免疫原、抗体、又は受容体又は受容体に結合できる分子等の他の分子に共役化できる。トレーサーの例としては、放射性同位体、酵素、酵素断片、酵素基質、酵素阻害剤、補酵素、触媒、フルオロフォア、色素、化学発光剤、発光剤、増感剤、非磁気又は磁気粒子、固体支持体、リポソーム、リガンド、受容体、ハプテン放射性同位体等があげられるがこれらに限定されない。本明細書中、類似体は、当該技術分野で周知の方法で様々な標識にカップリングして、様々な免疫アッセイ系で有用な様々な試薬を提供することもできる。免疫アッセイの結果を検出するため、フルオロフォア、例えばフルオレセイン、放射標識、又は化学発光基等の検出剤分子を類似体にカップリングして、トレーサーを産生することができる。
【００５７】
［０７５］本明細書中、用語「連結基」又は「リンカー」は、例えばトピラメート又はトピラメート類似体と作用基等の２以上の基礎構造（substructure）を連結する化学構造部分を意味する。連結基は、基礎構造間に伸長する、水素（又は他の一価の原子）以外の原子の少なくとも１の中断されていない鎖があってもよい。通常、連結基としては、置換されていても又は置換されていなくてもよい炭素原子又はヘテロ原子の鎖があげられる。連結基の原子及び連結基内の鎖の原子は、化学的結合で相互連結できる。例えば、リンカーは、直鎖又は分枝鎖、置換又は非置換、飽和又は不飽和鎖でもよく、鎖の原子としては、炭素及び／又はヘテロ原子があげられる。これには、鎖内又は鎖末端の１以上のヘテロ原子も含まれうる。さらに、連結基にはまた、鎖の一部として、又は鎖中の１の原子上の置換として、環状基及び／又は芳香族基もあげられる。連結されている基礎構造間の最短経路である鎖の主鎖の水素以外の原子の数を計測することにより、連結基又はリンカー中の原子の数を決定する。ハプテンをトレーサー、標識、担体、免疫原性部分等と共役化するため、連結基を用いて、利用できる部位をハプテン上に提供することができる。
【００５８】
［０７６］本明細書中、用語「ヘテロ原子」は、酸素、窒素、硫黄、リン等の炭素原子以外の原子を意味する。通常、連結基又は他の部分で用いられる、少なくとも２つの共有結合を形成できるように、ヘテロ原子は多価である。
【００５９】
［０７７］トピラメート類似体には、部分に共役化したトピラメート分子があげられる。部分は、トピラメートの物理化学特性を修飾できる広い範囲の化学的化合物でありうる。また、リンカーとして部分を用いるか又は部分がトピラメートに連結基を共役化できる。すなわち、部分としては、アルキル、脂肪族、直鎖脂肪族、分枝鎖脂肪族、置換脂肪族、環状脂肪族、複素環脂肪族、芳香族、複素環芳香族、多環芳香族等があげられる。
【００６０】
［０７８］本明細書中、用語「脂肪族」は、直鎖又は分枝鎖、飽和又は不飽和、及び／又は置換又は非置換であってもよく、主鎖中に２０以下の炭素又はヘテロ原子を有する、アルキル基等のヒドロカルビル部分を意味する。さらに、脂肪族には、主鎖中に１０以下の炭素又はヘテロ原子が含まれうる。脂肪族基は、直鎖、分枝鎖、環状及び／又は複素環である部分を含んでいてもよく、エーテル、ケトン、アルデヒド、カルボキシレート等の官能基を含有してもよい。典型的な脂肪族基としては、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、ノナデシル、エイコシル、より多数の炭素のアルキル基等、並びに２−メチルプロピル、２−メチル−４−エチルブチル、２，４−ジエチルプロピル、３−プロピルブチル、２，８−ジブチルデシル、６，６−ジメチルオクチル、６−プロピル−６−ブチルオクチル、２−メチルブチル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２−エチルヘキシル等の置換及び／又は非置換基が含まれるが、これらに限定されない。用語、脂肪族又はアルキルはまた、ビニル等のアルケニル基、アリル、アラルキル及びアルキニル基も含む。
【００６１】
［０７９］脂肪族基内の置換には、脂肪族部分で許容されうるいかなる原子又は基も含まれてよく、ハロゲン、硫黄、チオール、チオエステル、アミン（一級、二級、又は三級）、アミド、エーテル、エステル、アルコール、酸素等が含まれるが、これらに限定されない。脂肪族基としてはまた、例えば、アゾ基、ケト基、アルデヒド基、カルボニル基、カルボキシル基、ニトロ、ニトロソ又はニトリル基、イミダゾール等の複素環、ヒドラジノ又はヒドロキシルアミノ基、イソシアネート又はシアネート基、並びにスルホキシド、スルホン、スルフィド、及びジスルフィド等の硫黄含有基等の修飾も含んでよい。さらに、置換は、適切か又は可能な場合、単結合、二重結合、又は三重結合を介してもよい。
【００６２】
［０８０］さらに、脂肪族基はまた、例えば窒素、酸素、リン、又は硫黄等のヘテロ原子により炭素原子が置換されたヘテロ置換も含有しうる。つまり、置換脂肪族で構成されるリンカーは、炭素、窒素、酸素、硫黄、リン及び／又は同様のもので構成される主鎖を有しうる。複素環置換は、ヘテロ原子が１以上あるアルキル環をいう。複素環部分の例には、モルホリノ、イミダゾール、及びピロリジノが含まれるが、これらに限定されない。
【００６３】
［０８１］本明細書中、用語「芳香族」は、電子が原子の円形又は環状配置周囲を自由に循環し、互いに交互に単結合及び二重結合する分子をいう。より適切には、これらの結合が単結合及び二重結合のハイブリッドであり、環中の各結合が他のすべてと同一であるとみなすこともできる。ラモトリジン類似体中に存在しうる芳香族化合物の例としては、ベンゼン、ベンジル、トルエン、キシレン等があげられる。芳香族化合物には、ピリジン、フラン、テトラヒドロフラン等のヘテロ芳香族となるようなヘテロ原子を含んでいてもよい。また、芳香族は、ナフタレン、アントラセン、フェナントレン、多環芳香族炭化水素、インドール、キノリン、イソキノリン等の多環芳香族でもよい。
【００６４】
［０８２］本明細書中、用語「アミン」は、１、２、又は３の水素原子を、例えばアルキル基等の他の基で置換して、アンモニアに直接又は間接的に由来しうる部分を意味する。一級アミンの一般構造はＲＮＨ２であり、そして二級アミンの一般構造はＲ２ＮＨである。用語、アミンには、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン、アニリン、シクロヘキシルアミン、ベンジルアミン、多環アミン、アリール及びアルキルアミンで置換されたヘテロ原子、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ジブチルアミン、メチルプロピルアミン、メチルヘキシルアミン、メチルシクロプロピルアミン、エチルシクロヘキシルアミン、メチルベンジルアミン、メチルシクロヘキシルメチルアミン、ブチルシクロヘキシルアミン、モルホリン、チオモルホリン、ピロリジン、ピペリジン、２，６−ジメチルピペリジン、ピペラジン、及びアルキル又はアリール二級アミンで置換されたヘテロ原子が含まれるが、これらに限定されない。
【００６５】
［０８３］本明細書中、用語「ポリ（アミノ酸）」又は「ポリペプチド」は、アミノ酸から形成されるポリアミドである。ポリ（アミノ酸）は、一般的に、分子量約２００〜２，０００又は分子量の範囲が約２，０００を超えるか又は、分子量上限がなく、通常、分子量が１０，０００，０００未満であり、最高でも約６００，０００ダルトンであろう。通常、免疫原性担体又は酵素が関与するか否かに応じて範囲が異なるであろう。
【００６６】
［０８４］本明細書中、用語「ペプチド」は、アミド（ペプチド）結合により２以上のアミノ酸の連結により形成されるいかなる化合物をも意味し、通常、直鎖中の各アミノ酸残基のα−アミノ基（ＮＨ２末端を除く）が、次の残基のα−カルボキシル基に連結されているα−アミノ酸のポリマーである。用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「ポリ（アミノ酸）」は、本明細書中、大きさの制限なくこの種の化合物を指すべく、同義的に用いられる。この種の最大のメンバーは、明確なポリペプチド配列があるタンパク質をいう。
【００６７】
［０８５］本明細書中、用語「生物学的試料」は、生命体から得られる固体又は液体試料を意味する。つまり、生物学的試料としては、ヒト及び他の動物等の、生物又は以前生存していたものに由来する、いかなる量の物質もあげられるが、これらに限定されない。本物質としては、血液、血清、血漿、尿、涙、細胞、臓器、組織、骨、骨髄、リンパ、リンパ節、滑膜組織、軟骨細胞、滑膜マクロファージ、内皮細胞、皮膚等があげられるが、これらに限定されない。
【００６８】
［０８６］本明細書中、用語「患者」は、ヒト及び他の動物被験体を意味する。より詳細には、患者は、トピラメート等の抗癲癇薬剤が必要なヒト又は他の動物被験体である。
【００６９】
［０８７］さらに、本発明を記載するために本明細書で用いる用語は、上記定義及び／又は当該技術分野で周知の定義を用いて解釈できる。つまり、上記命名法は、本発明を説明するよう意味し、そして限定することを意図したものではない。
【００７０】
Ｉ．トピラメート類似体
［０８８］１の態様では、本発明は、トピラメートの類似体に関する。このように、トピラメートを、トピラメートのスルファメート部分あるいは９炭素又は１０炭素メチル基で、類似体部分と共役化して、類似体を形成してもよい。９炭素又は１０炭素共役体は、多くの場合に実質的に区別できないように、化学反応及び／又は官能性が実質的に類似しており、ここで、９炭素又は９位はまた、１０炭素又は１０位も意味する。
【００７１】
［０８９］トピラメート類似体は、さらに、類似体部分又はリンカーを介して、免疫原性部分、抗原性部分及び／又はトレーサー部分にカップリングでき、免疫原、抗原及び／又はトレーサー等の他の類似体を形成する。さらに、抗体誘導及び認識に利用できるトピラメート類似体の部分が、トピラメート代謝産物、９−ヒドロキシトピラメートでは異なる領域であるため、特定の場合は、９炭素メチル基ではなくスルファメート部分を介した共役体が好適でありうる。
【００７２】
［０９０］１の態様では、本発明は、スルファメート・共役体を有するトピラメートの新規類似体である。すなわち、スルファメート基を、硫黄原子を介して連結部分にカップリングできる。リンカー部分は、類似体を形成するため、トピラメート骨格とカップリングしている置換基と見なしてもよい。リンカー部分は、以下により詳細に記載する、様々な化学物質でもよい。したがって、トピラメートのスルファメート置換類似体は、式１Ａ及び／又は式１Ｂの一般的な構造を有する：
【００７３】
【化３】
【００７４】
［０９１］他の態様において、トピラメート骨格には、１０−置換と実質的に類似する９−置換が含まれてもよい。したがって、トピラメートの９−置換類似体は、式２Ａ及び／又は式２Ｂの一般的な構造を有してもよい：
【００７５】
【化４】
【００７６】
［０９２］式１Ａ、１Ｂ、２Ａ及び／又は２Ｂに示すトピラメート骨格を、広い範囲の化学物質で置換できる。したがって、Ｌ基は、Ｏ、ＣＯ、ＣＯＯ、ＳＯ２、ＣＨ２、ＮＨ、ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ、ＮＨＣＯ又はＮＨＣＨ２Ｐｈでもよい。このように、Ｌ基を連結基として用いて類似体部分及び／又は共役部分をトピラメート骨格に共役化できる。
【００７７】
［０９３］さらに、式１Ａ、１Ｂ、２Ａ及び／又は２Ｄに関して用いる場合、Ｘ基は、１〜２０の炭素又はヘテロ原子、あるいはより好ましくは１〜１０の炭素又はヘテロ原子を有する、飽和又は不飽和、置換又は非置換及び／又は直鎖又は分枝鎖でもよい。置換基の例には、一級及び二級アミン、脂肪族基、カルボニル基、ハロゲン等が含まれる。また、Ｘ基としては、置換されているか又は置換されていない環状基、あるいは１〜２の環を有する置換又は非置換芳香族又は脂肪族基、多環芳香族、芳香族複素環等があげられる。Ｘ基はまた、環基の代わりに又は環基に加え、炭素又はヘテロ原子の１〜２０又は１〜１０鎖原子を含有する置換又は非置換脂肪族連結基でもよい。さらに、Ｘ基は、Ｌ及びＹ間のいかなる種類の結合でもよい。また、Ｘは、上記基のいかなる組み合わせでもよい。
【００７８】
［０９４］Ｙ基は、末端基又はカップリング基であってもよく、これを担体、標識、免疫原性部分等の作用基とリンカー基をカップリングするために用いてもよい。ある場合、当該技術分野で周知の化学合成を介して、末端基を、担体、トレーサー部分、又は免疫原性部分で誘導体化するか、又はこれらとカップリングでき、ここで、Ｙ基は、Ｚ基とカップリングするのに用いられる反応基である。このように、Ｙは、脂肪族、アルコール、アミン、アミド、カルボン酸、アルデヒド、エステル、活性化エステル、脂肪族エステル、イミドエステル、イソシアネート、イソチオシアネート、無水物、チオール、アルコール、チオラクトン、ジアゾニウム基、マレイミド基等並びにそれらに由来する基等の様々な基であってもよい。また、Ｙは、Ｙ１−Ｚであってもよく、Ｙ１は、Ｚ基にカップリングしているＹ末端基に由来できる。
【００７９】
［０９５］さらに、Ｚ基は、存在しないか、又はリンカー部分にカップリングできるいかなる部分でもあってもよい。このように、Ｌ−Ｘ−Ｙ基は、類似体部分と見なすこともできるし、そしてＺ基は作用基であってもよい。リンカー部分は、トピラメート骨格及び作用基間のリンカー又は連結基として機能的に作用できる。例えば、作用基は、担体、標識、トレーサー、タンパク質、酵素、蛍光化合物、リン光生成化合物、温度発色性（ｔｈｅｒｍｏｃｈｒｏｍｉｃ）化合物、光発色性化合物、抗ストークス（ａｎｔｉ−ｓｔｏｋｅｓ）上方制御化合物、化学発光物質、電気化学仲介剤、粒子、レポーター基、酵素阻害剤、核酸、ポリペプチド等であってもよい。
【００８０】
［０９６］例えば、式１Ａ、１Ｂ、２Ａ及び／又は２Ｂの各々において、Ｘ基は、結合又は１以上の原子の鎖であってもよく、存在する場合は、少なくとも１つの原子が炭素である。このように、Ｘは、Ｌ及びＹ間の共有結合であってもよい。具体例として、Ｘは、以下の基のいずれでもよい：ＣＨ２；（ＣＨ２）２；（ＣＨ２）３；（ＣＨ２）４；（ＣＨ２）５；（ＣＨ２）６；ＣＨ２ＣＯ；（ＣＨ２）２ＣＯ；（ＣＨ２）３ＣＯ；（ＣＨ２）４ＣＯ；（ＣＨ２）５ＣＯ；（ＣＨ２）６ＣＯ；ＣＨ２ＣＯＯ；（ＣＨ２）２ＣＯＯ；（ＣＨ２）３ＣＯＯ；（ＣＨ２）４ＣＯＯ；（ＣＨ２）５ＣＯＯ；（ＣＨ２）６ＣＯＯ；ＣＯ；ＣＯＯ；ＣＯＣＨ２；ＣＯ（ＣＨ２）２；ＣＯ（ＣＨ２）３；ＣＯ（ＣＨ２）４；ＣＯ（ＣＨ２）５；ＣＯ（ＣＨ２）６；ＣＯＣＨ２ＣＯ；ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯ；ＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯ；ＣＯ（ＣＨ２）４ＣＯ；ＣＯ（ＣＨ２）５ＣＯ；ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯ；ＣＯＣＨ２ＣＯＯ；ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ；ＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯ；ＣＯ（ＣＨ２）４ＣＯＯ；ＣＯ（ＣＨ２）５ＣＯＯ；ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ；ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨＣＨ２；ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２；Ｐｈ；ＣＯＮＨＣＨ２Ｐｈ；ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３；ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ；ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ；ＮＨＣＨ２；ＮＨ（ＣＨ２）２；ＮＨ（ＣＨ２）３；ＮＨ（ＣＨ２）４；ＮＨ（ＣＨ２）５；ＮＨ（ＣＨ２）６；ＮＨＣＨ２ＣＯ；ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＯ；ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ；ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＯ；ＮＨ（ＣＨ２）５ＣＯ；ＮＨ（ＣＨ２）６ＣＯ；ＮＨＣＨ２ＣＯＯ；ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＯＯ；ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ；ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＯＯ；ＮＨ（ＣＨ２）５ＣＯＯ；ＮＨ（ＣＨ２）６ＣＯＯ；ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２；ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６；ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯ；ＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯ；ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ；又はＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ；その組み合わせ等。より好ましくは、Ｘは、ＣＨ２、（ＣＨ２）２、（ＣＨ２）３、ＣＨ２ＣＯＯ、（ＣＨ２）２ＣＯ、（ＣＨ２）２ＣＯＯ、（ＣＨ２）３ＣＯ、（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）６、ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＣＯ、ＣＯＯ、Ｐｈ、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、その組み合わせ等からなる群より選択される。
【００８１】
［０９７］例えば、式１及び２の各々で、Ｙ基は、末端基又は末端基由来のリンカーを含んでもよく、常に存在する。具体例として、Ｙは、以下の末端基又はそれに由来するいかなるリンカー基でもよい：ＣＯＯＨ（カルボン酸）；ＣＯＯ；ＣＯＯ−ＮＨＳ（ＮＨＳ活性エステル）；ＮＨＳ；ｔｅｒｔブチル（ｔ−ブチル）；ＣＯＯ−ｔｅｒｔブチル；ＯＨ；Ｏ−ＮＨＳ（ＮＨＳ活性エステルリンカー）；ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３；ＣＯＯＣＨ３；ＯＣＨ２ＣＨ３；ＯＣＨ３；ＮＨ；ＮＨ２；ＮＨＣＯ（アミド）；その組み合わせ等。より好ましくは、Ｙが末端基である場合、Ｙは、ＮＨＳ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−ＮＨＳ、ＣＯＯ−ｔｅｒｔブチル、ｔｅｒｔブチル、ＯＨ、Ｏ−ＮＨＳ、ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＯＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＯＣＨ３、又はＮＨ２からなる群より選択できる。一方、Ｙがリンカーである場合、Ｙは、Ｙ１−Ｚであり、式中、Ｙ１は、好ましくはＣＯＯ、ＣＯ、Ｏ、ＣＯＮＨ、又はＮＨの少なくとも１つからなる群より選択されてもよく、Ｚは巨大分子である。
【００８２】
［０９８］したがって、Ｚ基又は作用基は、担体、トレーサー、又は標識、例えばタンパク質、酵素、蛍光化合物、化学発光物質、電気化学仲介剤、粒子、レポーター基、酵素阻害剤、及び／又は核酸であってもよい。具体例として、Ｚは、以下の巨大分子基のいずれでもよい：（ａ）ＢＳＡ；（ｂ）ＫＬＨ；（ｃ）蛍光トレーサー；及び（ｄ）これらと同等のもの。
【００８３】
［０９９］一般的に、類似体には、当該技術分野で周知の方法による様々な作用基が含まれ、様々な免疫アッセイ形式において有用な様々な試薬を提供することもできる。このように、フルオロフォア、放射標識、又は化学発光基等の検出剤分子を用いて、トレーサーを産生することもできる。また、ラテックス凝集及びクロマトグラフィー片試験におけるように、分光光度検出形式又は直接視覚的検出形式で用いるため、類似体を着色ラテックス等の微粒子に結合させてもよい。作用基はまた、エネルギー移動パートナー、酵素又は他の基等の、他の化学反応によって検出される間接的検出分子であってもよい。
【００８４】
［０１００］したがって、作用基をカップリングしうるいかなる化学反応によっても類似体と作用基のカップリングを達成できる。この連結又はカップリングには、多くの化学的機構が含まれてもよく、例えば共有結合、アフィニティー結合、インターカレーション、配位結合及び錯化が含まれうる。多くの場合、連結又はカップリングは共有結合を介して行われる。存在する側鎖の直接縮合又は外部架橋分子の取り込みのいずれかにより共有結合を達成できる。多くの二価又は多価連結剤は、担体等のタンパク質分子を類似体にカップリングする場合に有用でありうる。代表的なカップリング剤としては、チオエステル、カルボジイミド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン、及びヘキサメチレンジアミン等の有機化合物があげられる；しかし、このリストは、当該技術分野に公知の様々な種類のカップリング剤を包括的に編集したものではなく、むしろ、より一般的なカップリング剤の代表である。
【００８５】
［０１０１］１の態様では、ラモトリジン類似体は、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＯＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＯＮＨＳ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＮＨＳ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯＮＨＳ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯＮＨＳ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯＮＨＳ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＮＨＳ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＣＨ３、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＨ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＮＨＳ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯＨ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯＮＨＳ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯＨ、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯＮＨＳ、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＣ（ＣＨ３）３、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＨ、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＮＨＳ、ＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯＨ、
ＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯＮＨＳ、ＮＨＣＯＰｈＣＯＯＨ、ＮＨＣＯＰｈＣＯＯＮＨＳ、
ＯＯＣＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、ＯＯＣＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＣＨ３、
ＯＯＣＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＮＨＳ、ＯＯＣＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＨ、
ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＨ、ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯＮＨＳ等からなる群より選択されるＬ−Ｘ−Ｙを有することもできる。
【００８６】
［０１０２］１の態様では、ラモトリジン類似体は、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ−ＢＳＡ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＢＳＡ、ＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨＣＯＰｈＣＯＯ−ＢＳＡ、ＯＯＣＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＢＳＡ、
ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＢＳＡ等からなる群より選択されるＬ−Ｘ−Ｙ−Ｚを有することもできる。
【００８７】
［０１０３］１の態様では、治療剤として、式１Ａ、１Ｂ、２Ａ及び／又は２Ｂのトピラメート類似体を用いることもできる。このように、トピラメート類似体を、トピラメートと同様に抗癲癇薬剤として用いることもできる。しかし、トピラメート類似体を治療剤として用いる場合、Ｚは、好ましくは、免疫原を形成しないように存在しない。したがって、ヒトを含む動物のための抗癲癇治療でトピラメートの非免疫原性類似体を用いることもできる。
【００８８】
ＩＩ．トピラメート免疫原
［０１０４］トピラメート等の小分子の検出のために免疫アッセイを実行するのは、困難な場合もある。これは、当該小分子に抗原性がない場合があるためであり、そのため、トピラメートに対する抗体を生成することが困難になり、免疫原性がないトピラメートでは特に問題があるためである。免疫原性を高めるため、ウシ血清アルブミン、オボアルブミン、キーホールリンペット・ヘモシアニン等を含むが、これらに限定されない、より大きい抗原性化合物を薬剤にカップリングしてもよい。さらに、免疫アッセイで薬剤を検出する場合は、一般的に、抗体、トピラメート、又はトピラメート類似体に共役化された検出可能トレーサーを用いることが必要となる。
【００８９】
［０１０５］したがって、スルファメート部分又は９炭素メチル基で、トピラメートに作用基をカップリングして、免疫原によって誘導された抗体が、免疫原、トピラメート、及び他のトピラメート類似体と反応できるように、トピラメートと免疫学的に十分に類似であるトピラメート免疫原を提供することもできる。このように、トピラメートに基づく免疫原もまたトピラメート類似体と見なされる。免疫原性担体を含む、本発明記載のトピラメート類似体は、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体等の抗トピラメート抗体の産生を誘導できる。したがって、固有のトピラメート免疫原を用いて生成される抗体は、トピラメート及び他のトピラメート類似体と相互作用及び／又は結合することもできる。これらの抗体、免疫原、抗原、及び類似体は、生物学的試料中のトピラメートを検出するための免疫アッセイを調製し、実行する場合に有用でありうる。
【００９０】
［０１０６］トピラメート誘導体の官能基の１つと反応するリンカーを介して、トピラメートを抗原性担体タンパク質にカップリングさせて、免疫原を作製することもできる。トピラメート類似体に基づくトピラメート免疫原は、本明細書に援用される、米国特許第５，９５２，１８７号に記載されている。しかし、トピラメート類似体は、化学的性質反応が最適化されずに調製され、商業化レベルでトピラメート検出に適用するために用いるのに最適な類似体、免疫原、又は抗体を産生しなかった。したがって、本発明により調製される類似体及び免疫原は、化学的性質が改善され、リンカーを有する、商業的な適用に用いるのに十分な力価で、抗体を産生できる免疫原を産生する。
【００９１】
［０１０７］１つ態様では、トピラメート類似体の免疫原性を高めるため、キーホールリンペット・ヘモシアニン等の大きい抗原性化合物をトピラメート類似体にカップリングさせることもできる。また、ある場合、長いリンカーが長いほど、生じる抗体の親和性も高まることも見出されている。１つには、リンカーがより長いと抗原に接近できるようになると考えられるが、このような思考には束縛されない。また、暴露される抗原又はエピトープの表面積が増加するため、結合活性が高まる可能性もあり、これにより当該技術分野で改善がもたらされる。
【００９２】
［０１０８］１の態様では、本発明は、上記トピラメート類似体から調製される免疫原に関する。すなわち、式１Ｂ及び２Ｂの類似体には、上記リンカー部分が含まれてもよく、Ｚは、免疫原性部分であってもよい。つまり、Ｚは、免疫学的応答を誘発でき、トピラメート類似体の少なくとも一部を標的とする抗体の産生を提供できる、いかなる免疫原性部分であってもよい。
【００９３】
［０１０９］免疫原性部分には、免疫原性担体として機能できる、様々なタンパク質又はポリペプチドが含まれうる。これらの種類のポリペプチドとしては、アルブミン、血清タンパク質、グロブリン、眼球レンズのタンパク質、リポタンパク質、及びその一部があげられる。具体例となるタンパク質としては、ウシ血清アルブミン（「ＢＳＡ」）、キーホールリンペット・ヘモシアニン（「ＫＬＨ」）、卵オボアルブミン、ウシ・ガンマ−グロブリン（「ＢＧＧ」）等があげられる。あるいは、合成ポリペプチドを利用してもよい。さらに、免疫原性部分はまた、高分子量ポリマーである多糖でもよい。多糖の例は、デンプン、グリコーゲン、セルロース、アラビアゴム等の炭水化物ゴム、寒天等である。また、免疫原性部分は、ＤＮＡ又はＲＮＡ等のポリヌクレオチドでもよい。ポリヌクレオチドは修飾されても又は修飾されなくてもよく、担体及び／又は免疫原性機能を提供する限り、いかなる数の核酸で構成されてもよい。多糖はまた、ポリペプチド残基、ポリヌクレオチド残基、及び／又は脂質残基を含有又はこれらに連結できる。さらに、免疫原性部分はまた、単独の、又は上記ポリペプチド又は多糖の１つへの共役体のポリヌクレオチドでもよい。
【００９４】
［０１１０］免疫原性部分又は担体はまた粒子又は微粒子でもよい。免疫原性粒子は、一般的に、少なくとも直径約０．０２ミクロン（μｍ）で、約１００μｍ以下であり、通常、直径約０．０５μｍ〜１０μｍである。粒子は、有機又は無機、膨潤性又は非膨潤性、及び／又は多孔又は無孔でもよい。場合により、免疫原性粒子は、水に近い密度、一般的に約０．５〜１．５ｇ／ｍｌであり、透明、部分的透明、又は不透明であってもよい物質で構成される。免疫原性粒子は、赤血球、白血球、リンパ球、連鎖球菌属（Streptococcus）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）、大腸菌及びウイルス等を含むがこれらに限定されない、細胞及び微生物等の生物学的物質でもよい。粒子はまた、有機及び無機ポリマー、リポソーム、ラテックス、リン脂質小胞、リポソーム、陽イオン性リポソーム、陰イオン性リポソーム、リポタンパク質、リポポリマー等で構成されうる。
【００９５】
［０１１１］１の態様では、ラモトリジン類似体は、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ−ＫＬＨ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＫＬＨ、ＮＨＣＨ２ＰｈＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨＣＯＰｈＣＯＯ−ＫＬＨ、ＯＯＣＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＫＬＨ、
ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ−ＫＬＨ等からなる群より選択される、Ｌ−Ｘ−Ｙ−Ｚがあってもよい。
【００９６】
［０１１２］したがって、本発明により調製された免疫原を用いて、トピラメート並びにトピラメート類似体に対する親和性がある抗体を生成することもできる。
【００９７】
ＩＩＩ．トピラメート及びトピラメート類似体に対する抗体
［０１１３］１の態様では、本発明のトピラメート類似体に基づく免疫原を、モノクローナル抗体及び／又はポリクローナル抗体を産生するための方法の態様において用いることができる。つまり、トピラメートに基づく免疫原から、抗体を産生でき、本抗体はトピラメートと相互作用及び／又は結合しうる。これにより、本発明の類似体が、トピラメートの存在を同定するの免疫アッセイで用いるの抗体を調製する場合に有用となることができる。また、免疫原を用いて抗体を産生する方法が当該技術分野に周知である。これにより、トピラメートと相互作用及び／又は結合するモノクローナル抗体及び／又はポリクローナル抗体に関してスクリーニングする場合に、本免疫原を用いることができる。
【００９８】
［０１１４］図１は、抗トピラメート抗体を得る方法の１の態様１０を例示する流れ図であり、トピラメート類似体に基づく免疫原を得ることができる（ブロック１２）。その後、免疫原を免疫原性配合物と合わせてもよい（ブロック１４）。簡潔には、約０．５ｍｌの免疫原組成物を、約０．５ｍｌのフロイント完全アジュバントと混合する；が、他の量の免疫原及び／又はアジュバントを用いてもよい。その後、抗体を産生する被験体に免疫原性配合物を投与してもよく（ブロック１６）、被験体は、ラット、マウス、ブタ、ウサギ、鳥類、ヒツジ及び／又は他の動物でもよいが、好ましくは哺乳動物である。投与は、尾静脈注射、皮下注射、静脈内注射又は他の周知の注射部位を介してもよい。続いて、最初の投与を受けた動物に、免疫原性追加免疫を投与してもよく（ブロック１８）、追加免疫は、最初の配合物と実質的に同じ成分を含んでもよく、所定の間隔で投与できる。例えば、最初の投与後、週１回、あるいは他のそれより長いか又は短い間隔で、その後追加免疫を行うことができる。少なくとも最初の投与後、そして場合によりその後の追加免疫後、動物により産生される抗トピラメート抗体を回収することができる（ブロック２０）。以前免疫原を投与された動物由来の血液、血清、血漿、又は他の生物学的試料を得て、抗体を回収できる。場合により、その後、当該技術分野に周知であるように、抗体含有組成物をプロセシングしてもよく（ブロック２２）、当該プロセシングには、抗体を、免疫診断アッセイを行うのに適した形式にする技術も含まれうる。あるいは、プロセシングには、周知の技術及び確立された技術による、ＥＬＩＳＡを用いた抗体のスクリーニングが含まれうる。つまり、プロセシングを用いて、ポリクローナル抗体を得ることができ（ブロック２４）、これによりポリクローナル抗体を精製することができる（ブロック２６）。あるいは、当該技術分野に周知の技術を用いて、モノクローナル抗体を得ることもでき、これによりモノクローナル抗体を精製することもできる。
【００９９】
ＩＶ．免疫診断アッセイ
［０１１５］血液、血漿、血清、組織等の試料中のトピラメートの存在を同定するため、モノクローナル又はポリクローナルの抗トピラメート抗体を、免疫アッセイで用いることもできる。これは、患者又は患者集団におけるトピラメートに関する薬物動態学的及び／又は薬力学的パラメーターを同定又は決定するのに有益でありうる。したがって、トピラメートの存在を同定し、場合によりトピラメートの量を定量化するためのアッセイを構成できるように、免疫診断アッセイにおいて、他の抗体の代わりに、抗トピラメート抗体を用いてもよい。さらに、免疫診断アッセイは、本発明記載のトピラメート類似体又は他のトピラメート類似体を用いてもよい。
【０１００】
Ａ．トピラメートに関する蛍光偏光免疫アッセイ
［０１１６］蛍光偏光免疫アッセイ（ＦＰＩＡ）技術は、試料中の抗原／薬剤と既知の濃度の標識抗原／薬剤との競合的結合に基づく。ＦＰＩＡ技術は、本明細書に援用される米国特許第４，５９３，０８９号、第４，４９２，７６２号、第４，６６８，６４０号、及び第４，７５１，１９０号に記載がある。したがって、援用される参考文献に記載されるＦＰＩＡ試薬、系、及び装置を、抗トピラメート類似体抗体でもある抗トピラメート抗体とともに用いることができる。
【０１０１】
［０１１７］トピラメートの存在を同定するため、及び試料中のトピラメートの量を定量化するアッセイで、ＦＰＩＡ技術を用いることができる。一つには、溶液中の分子の回転特性により、偏光の程度が分子の大きさに正比例させることができるようになる。したがって、偏光は、分子の大きさが大きくなるにつれて高まる。すなわち、溶液中で迅速に回転する小さい蛍光標識又は他の発光標識トピラメート又はその類似体を、直線偏光を用いて励起すると、放出される光の偏光は有意に解消される。蛍光標識トピラメート又は類似体が、抗体と相互作用するか又は抗体に結合すると、回転が遅くなり、放出される光の偏光が高まる。これは、抗体が有意に測定できる程度に複合体を大きくするためである。また、試料中の非標識トピラメートの量を増やすと、その結果、抗トピラメート抗体による蛍光標識トピラメート又は類似体の結合が減少して、試料から放出される光の偏光が低下する。既知の濃度のトピラメートを用いて、較正の偏光値を測定することにより、偏光と試料中の非標識トピラメートの濃度の間の定量的関係を確立することもできる。したがって、ＦＰＩＡを用いて試料中のトピラメートの存在及び濃度を同定することもできる。
【０１０２】
［０１１８］本発明の１の態様は、ＦＰＩＡアッセイ系である。ＦＰＩＡ系の構成要素の例としては、以下があげられる：ｉ）トピラメート及びトピラメート類似体へ特異的に結合できるモノクローナル又はポリクローナル抗トピラメート抗体；ｉｉ）トピラメートを含有すると推測される試料；及びｉｉｉ）フルオレセイン等の蛍光部分で標識されたトピラメート類似体である。あるいは、試料を除いたキットとして系を提供することもできる。さらに、系には、様々な緩衝剤組成物、トピラメート濃度勾配組成物又はトピラメートのストック組成物等を含んでもよい。
【０１０３】
［０１１９］図２は、ＦＰＩＡアッセイを行う方法の１の態様１１０を例示する流れ図である。このように、発光標識ラモトリジン又は類似体共役体を得ることができ（ブロック１１２）、抗トピラメート抗体を得ることもできる（ブロック１１４）。さらに、トピラメートを投与された患者由来の、トピラメートを含有すると推測される生物学的試料等の試料を得ることもできる（ブロック１１６）。競合的結合アッセイに用いるため、既知の量又は濃度の発光標識トピラメート共役体及び抗トピラメート抗体を得て、標準的緩衝剤系中等で、他の組成物中に配合することもできる（ブロック１１８）。その後、反応溶液中で、抗トピラメート抗体及び発光標識トピラメート共役体を生物学的試料と合わせる（ブロック１２０）。発光標識トピラメート共役体と生物学的試料中の未知の量のトピラメートとの間で、反応溶液中の抗トピラメート抗体との競合反応が起こる（ブロック１２２）。適切な期間及び／又は競合後、発光共役体に照射するが（ブロック１２４）、これは光照射、化学薬品照射、温度照射等によってもよい。その後、照射により放出される光の偏光を測定し（ブロック１２６）、そして既知量のトピラメート及び／又は発光共役体の偏光値と比較し（ブロック１２８）、これを用いて、試料中にトピラメートが存在するか否かを決定することができる（ブロック１３０）。さらに、既知の濃度の標準から得た標準化測定値と生物学的試料から得た測定値の比較を用いて、試料中トピラメートの量を定量化することができ（ブロック１３２）、それにより、患者におけるラモトリジン量を同定することができる（ブロック１３４）。
【０１０４】
Ｂ．トピラメートに関する均一系微粒子免疫アッセイ
［０１２０］免疫比濁アッセイという、均一系微粒子免疫アッセイ（「ＨＭＩ」）技術は、溶液中の粒子及び化合物の凝集に基づく。粒子及び／又は化学的化合物が凝集すると、粒子の大きさが増して溶液の濁度が高まる。したがって、試料中のトピラメートの存在、及び場合により量を評価するため、微粒子及びトピラメート類似体と共に抗トピラメート抗体を用いることもできる。免疫アッセイは血液、溶血溶液、血清、血漿、組織及び／又は他の試料で行うことができるため、ＨＭＩ技術は好適でありうる。微粒子上に装填されたトピラメート及び／又は類似体を用いるか、あるいは微粒子上に装填された抗トピラメート抗体を用いて行うようにＨＭＩアッセイを設定することもできる。微粒子に効率的に装填できるため、微粒子上に装填された類似体を用いることが特に好適でありうる。いずれにしても、ＨＭＩ又は免疫比濁アッセイは試料中の物質の凝集を測定するものとして、当該技術分野に周知である。
【０１０５】
［０１２１］免疫比濁アッセイ技術は、参照により本明細書に含まれる、米国特許第５，５７１，７２８号、第４，８４７，２０９号、第６，５１４，７７０号、第６，２４８，５９７号に記載される。簡潔には、均一系アッセイ法では、主に光減衰、ネフェロメトリー法、又は比濁法を用いる。試料内に導かれた入射光線の分散又は吸収で生じる変化により、トピラメート（Ａ）及び抗トピラメート抗体微粒子結合パートナー（Ｂ）からの凝集化合物ＡＢの形成を測定することができる。あるいは、抗トピラメート抗体（Ａ）を、微粒子に装填されたトピラメート又は類似体と結合させることもできる。結合パートナーが固定された懸濁可能な粒子を用いると、効果が増進され、これによりかなり低濃度でもトピラメート濃度を測定することができる。これらの均一系法は、迅速かつ簡易に実行でき、そして特に、以下により詳細に記載するような試料分析自動化が可能になる。
【０１０６】
［０１２２］例えば、大量スクリーニング用途では、分析法は完全に自動化されていることが望ましい。つまり、分析物との特異的反応の結果、増感されたラテックス粒子等の粒子による光散乱の変化を検出する装置を設計することができる。本装置を利用するアッセイは、ラテックス粒子懸濁物の表面積が広く及び光散乱の物理的原理のため高感度になりうる。検出の主な原理としては、２以上の粒子が凝集中に緊密に接触した際の光散乱変化があげられる。光線が非凝集粒子を含有する反応セルを通過する際、粒子による屈折、反射、吸収、及び回折のためにある程度の光散乱がありうる。したがって、この原理は、トピラメート等の標的分析物の粒子凝集阻害能を測定するために有益でありうる。抗体／抗原結合の初期段階中、複合体が形成され始める際に、本複合体はより大きい粒子のように作用するため、散乱光強度の角度分布を実質的に改変することができる。以下により詳細に記載する比濁検出及び他の方法により、凝集により、より大きい粒子が生成した結果の光散乱変化を測定することができる。SeradynのトピラメートＱＭＳ（登録商標）試薬により完全に自動化できるようになり、多くの臨床的化学反応分析装置に適用できる。
【０１０７】
［０１２３］図３は、トピラメート等の遊離薬剤がある生物学的試料及びトピラメート類似体でもよいハプテンをコーティングした粒子試薬と、抗体緩衝液を合わせる競合アッセイの図解である。生物学的試料がほとんど又は全くトピラメートを含有しない場合は凝集は阻害されない。試料中のトピラメート量が増加しても、部分的な凝集しかおこらず、部分的にしか阻害されない。さらに、試料中に多量のトピラメートがあれば、凝集は完全に阻害される。したがって、凝集の分析を用いて、トピラメートの存在を同定することもできる。また、図４に示すトピラメート濃度の標準化曲線を用いて、凝集からの吸光度変化に基づき、試料中のトピラメート量を同定することもできる。
【０１０８】
ｉ．トピラメートが装填された微粒子
［０１２４］図５は、ＨＭＩアッセイを行う方法の１の態様２１０を例示する流れ図である。これによれば、トピラメート類似体を得て（ブロック２１２）、微粒子上に装填してもよく（ブロック２１４）、微粒子は例えば、Seradyn, Inc.（インディアナ州インディアナポリス）により製造及び／又は販売された、ポリスチレン、カルボキシレートで修飾されたポリスチレン、ストレプトアビジンをコーティングした磁気粒子等を含んでもよい。トピラメートを投与した患者由来のトピラメートを含有すると推測される生物学的試料等の試料を得ることもできる（ブロック２１６）。本発明により、トピラメート及びトピラメート類似体に結合できるモノクローナル又はポリクローナル等の抗トピラメート抗体を得た（ブロック２１８）後、場合により、標準的緩衝剤系に配合する（ブロック２２０）。その後、抗体組成物をトピラメート微粒子及び生物学的試料と合わせるが（ブロック２２２）、ここで抗体及び微粒子に結合したトピラメート類似体の量は既知である。微粒子上に固定されたトピラメート類似体と生物学的試料中のトピラメートとの間で、反応溶液中の限定された量の抗トピラメート抗体への結合に関して、競合反応が起こる（ブロック２２４）。トピラメートが装填された微粒子の抗体での凝集は、生物学的試料中のトピラメートの存在で阻害されるが、凝集阻害は生物学的試料中のトピラメート濃度に正比例する。これにより、周知の比濁アッセイで、試料中のトピラメートの存在を測定できるようになる（ブロック２２６）。さらに、既知の濃度の標準から得た標準化測定値と生物学的試料から得た測定値との比較を用いて、試料中のトピラメート量を定量化して（ブロック２２８）、それにより患者のトピラメート量を同定することもできる（ブロック２３０）。
【０１０９】
［０１２５］本発明の１の態様は、トピラメート類似体が装填された微粒子のＨＭＩアッセイ系である。ＨＭＩ系の構成要素の例としては以下があげられる：ｉ）トピラメート及びトピラメート類似体に特異的に結合できるモノクローナル又はポリクローナル抗トピラメート抗体；ｉｉ）トピラメートを含有すると推測される試料；及びｉｉｉ）ポリスチレン微粒子等の微粒子にカップリングしたトピラメート類似体。あるいは、試料を含まないキットとして系を提供することもできる。さらに、系には、様々な緩衝剤組成物、トピラメート濃度勾配組成物又はトピラメートのストック組成物等を含んでもよい。
【０１１０】
ｉｉ．抗トピラメート抗体装填微粒子
［０１２６］トピラメートが装填された微粒子に関して、上記と類似の他の態様では、トピラメート及びトピラメート類似体に結合できる抗トピラメート抗体を微粒子上に装填する。トピラメート類似体には、例えばウシ血清アルブミン、オボアルブミン、デキストラン等の選択した作用基が含まれてもよい。トピラメート類似体と患者試料中のトピラメートとの間で、微粒子上に固定された抗トピラメート抗体への結合に関して、競合反応が起こる。ここでも、微粒子の凝集は、患者試料中にトピラメートがあると粒子の凝集は阻害される。
【０１１１】
［０１２７］図６は、ＨＭＩアッセイを行う方法の他の態様３１０を例示する流れ図である。これにより、トピラメート及びトピラメート類似体に特異的に結合できる抗トピラメート抗体を得て（ブロック３１２）、微粒子上に装填することができる（ブロック３１４）。を投与された患者由来の、トピラメートを含有すると推測される生物学的試料等の試料を得ることもできる（ブロック３１６）。適切な作用基を含むトピラメート類似体を得ることができる（ブロック３１８）。競合的結合アッセイで用いるために、既知の量又は濃度のトピラメート類似体及び抗トピラメート抗体が装填された微粒子を標準的緩衝剤系等の他の組成物中に配合する（ブロック３２０）。その後、抗体−微粒子組成物を、トピラメート類似体組成物及び生物学的試料と合わせる（ブロック３２２）。反応溶液中、トピラメート類似体と生物学的試料中のトピラメートとの間で、微粒子上に固定された抗トピラメート抗体との競合反応が起こる（ブロック３２４）。生物学的試料中にトピラメートがあると、抗トピラメート抗体が装填された微粒子のトピラメート類似体での凝集が阻害されるが、ここで、凝集阻害は生物学的試料中のトピラメート濃度に正比例する。これにより、周知の比濁アッセイで試料中のトピラメートの存在を測定できるようになる（ブロック３２６）。さらに、既知の濃度の標準から得た標準化測定値と生物学的試料から得た測定値との比較を用いて、試料中のトピラメート量を定量化することにより（ブロック３２８）、患者のトピラメート量を同定することもできる（ブロック３３０）。
【０１１２】
［０１２８］本発明の１の態様は、抗トピラメート抗体が装填された微粒子のＨＭＩアッセイ系である。ＨＭＩ系の構成要素の例としては、以下があげられる：ｉ）トピラメート及びトピラメート類似体に結合できるモノクローナル又はポリクローナル抗トピラメート抗体が装填された微粒子；ｉｉ）トピラメートを含有すると推測される試料；及びｉｉｉ）場合により作用基を含んでもよいトピラメート類似体。あるいは、試料を除いたキットとして、アッセイ系を提供してもよい。さらに、アッセイ系には、様々な緩衝剤組成物、ラモトリジン濃度勾配組成物、あるいはラモトリジン又は類似体のストック組成物等が含まれてもよい。
【０１１３】
Ｃ．トピラメートに関するクローニング酵素供与体免疫アッセイ
［０１２９］クローニング酵素供与体免疫アッセイ（「ＣＥＤＩＡ（登録商標）」、Roche Diagnosticsの商標）は、治療薬の存在を同定し、定量的測定を行うための非常に正確で有効な方法であることが立証されている。ＣＥＤＩＡ（登録商標）技術は、以下の特許に詳細に記載されている：（ａ）競合的均一系アッセイ法を開示する米国特許第４，７０８，９２９号；（ｂ）酵素供与体断片をコードする組換えＤＮＡ配列及び当該ベクターの宿主を開示する米国特許第５，１２０，６５３号；（ｃ）酵素供与体断片のアミノ酸配列を開示する米国特許第５，６０４，０９１号；及び（ｄ）ＣＥＤＩＡアッセイ用のキットを解説する米国特許第５，６４３，７３４号、ここで上記特許はすべて本明細書に援用される。簡潔には、ＣＥＤＩＡ（登録商標）技術は、トピラメートに結合できる抗体への結合に関する、大腸菌由来のβ−Ｄ−ガラクトシド・ガラクトヒドロラーゼ又はβ−ガラクトシダーゼ（「βｇａｌ」）由来等の、遺伝子操作された不活性酵素供与体（「ＥＤ」）断片にカップリングしている類似体と、生物学的試料中のトピラメートの競合に基づく。が試料中に存在する場合、トピラメートが抗体に結合して、ＥＤ−類似体共役体のＥＤ部分が自由になり、酵素受容体（「ＥＡ」）断片と会合できるようになるため、反応混合物中でβ−Ｄ−ガラクトシド・ガラクトヒドロラーゼ又はβｇａｌの酵素活性が回復する。その後、適当な基質に曝露されると、活性酵素を定量化できる反応産物を生じることができるようになる。好ましい基質はクロロフェノールレッド−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（「ＣＰＲＧ」）であり、ＥＤ及びＥＡ断片を有する活性酵素に切断されて、ガラクトース及びＣＰＲになることができ、約５７０ｎｍの波長の吸光度でＣＰＲを測定する。トピラメートが試料中に存在しない場合、抗体は、ＥＤ−類似体共役体に結合して、ＥＤ断片とＥＡ断片の会合を阻害して酵素活性の回復を阻害する。反応産物の量及び生じる吸光度変化は、試料中のトピラメート量に比例する。
【０１１４】
［０１３０］図７は、ＣＥＤＩＡ（登録商標）アッセイを行う方法の１の態様４１０を例示する流れ図である。これにより、トピラメート−ＥＤ共役体を得ることができるが（ブロック４１２）、これはトピラメート類似体とＥＤを共役化しても得ることができる。また、ＥＤと対応するＥＡを得ることができる（ブロック４１４）。さらに、トピラメートを投与した患者由来のトピラメートを含有すると推測される生物学的試料等の試料を得ることができる（ブロック４１６）。本発明記載の方法により、トピラメート−ＥＤ共役体とも相互作用できる抗トピラメート抗体得ることができる（ブロック４１８）。競合的結合アッセイで用いるため、既知の量又は濃度のトピラメート−ＥＤ共役体、ＥＡ、及び抗トピラメート抗体を得て、標準的緩衝剤系等の他の組成物中に配合する（ブロック４２０）。次いで、反応溶液中で、トピラメート−ＥＤ共役体及び抗体を生物学的試料と合わせる（ブロック４２２）。場合により、この時点又は抗体との競合的相互作用が起こるのに十分な時間が経過した後、反応溶液中で、ＥＡもまた合わせる。既知の量のトピラメート−ＥＤ共役体と生物学的試料中のトピラメートとの間で、反応溶液中の既知量の抗トピラメート抗体との競合反応が起こる（ブロック４２４）。競合反応後、ＥＡを反応溶液中に導入後、ＥＤ−ＥＡ酵素切断可能基質を反応溶液中に導入する（ブロック４２６）。ＥＤ−ＥＡ酵素と酵素を切断することができる基質との間の酵素活性を測定するが（ブロック４２８）、これは、切断産物の吸光度を測定するか又は他の周知の測定技術で測定することもできる。酵素活性の測定を用いて、試料中にトピラメートが存在するかどうかを決定することもできる（ブロック４３０）。さらに、既知の濃度の標準から得た標準化測定値と生物学的試料から得た測定値の比較を用いて、試料中のトピラメート量を定量化することもでき（ブロック４３２）、それにより、患者のトピラメート量を同定することもできる（ブロック４３４）。
【０１１５】
［０１３１］本発明の１の態様は、ＣＥＤＩＡ（登録商標）アッセイ系である。ＣＥＤＩＡ（登録商標）系の構成要素の例としては以下があげられる：ｉ）トピラメート、トピラメート類似体、及び／又はトピラメート−ＥＤ又はトピラメート−ＥＡに結合できるモノクローナル又はポリクローナル抗トピラメート抗体；ｉｉ）トピラメートを含有すると推測される試料；ｉｉｉ）ＥＤ又はＥＡにカップリングしたトピラメート類似体；並びにｉｖ）ＥＤ及びＥＡが系に存在するように、酵素活性を回復するためにトピラメート−ＥＤ又はトピラメート−ＥＡと会合するような、ＥＤ又はＥＡの一方。また、試料を除いてキットとしてアッセイ系を提供してもよい。さらにアッセイ系は、様々な緩衝剤組成物、トピラメート濃度勾配組成物又はトピラメートのストック組成物等を含んでもよい。
【０１１６】
Ｄ．トピラメートに関する化学発光不均一系免疫アッセイ
［０１３２］また、化学発光微粒子免疫アッセイ（「ＣＭＩＡ」）技術を用いた競合的アッセイを用いて試料中にトピラメートが存在するか否かを評価することもできる。不均一系免疫アッセイの技術分野で、試料中の化学物質の存在及び／又は量を決定するための様々な種類のＣＭＩＡ技術が周知であり、ＣＭＩＡ技術のいくつかは、本明細書に援用される、米国特許第６，４４８，０９１号、第５，７９８，０８３号、及び第５，８３４，２０６号に例示される。当該ＣＭＩＡアッセイには、特定の磁気粒子、又はろ過、沈降、及び／又は他の手段による分離に適した粒子等の粒子にカップリングした、トピラメート及びその類似体に結合できる抗トピラメート抗体を用いることを含む。さらに、適当な化学発光部分、例えばアクリジニウムエステルに連結されたトピラメート類似体を含んでもよいトレーサーを用いて、粒子上の限定量の抗トピラメート抗体に関して、患者試料中の遊離トピラメートと競合させることもできる。試料、トレーサー、及び抗体粒子が相互作用し、ルーチンの洗浄工程により未結合トレーサーを除去した後、抗体粒子に結合したトレーサーの量を、相対光単位（ＲＵＬＥ）で表される化学発光で測定することもできる。化学発光の量は、患者試料中の遊離薬剤の量に反比例し、既知の値の薬剤を用いた標準曲線を構築して、濃度を決定する。
【０１１７】
［０１３３］図８は、ＣＭＩＡアッセイを行う方法の１の態様５１０を例示する流れ図である。これによれば、抗トピラメート抗体−粒子共役体を得ることができ（ブロック５１２）、これは、磁気粒子等の粒子と抗体をカップリングすることにより実行される。また、化学発光部分を有するトピラメート類似体を含むトレーサー化合物を得ることができる（ブロック５１４）。さらに、トピラメートを投与された患者由来のトピラメートを含有すると推測される生物学的試料等の試料を得ることもできる（ブロック５１６）。競合的結合アッセイで用いるために、既知量又は濃度のトレーサー及び抗トピラメート抗体−粒子共役体を、標準的緩衝剤系等の別個の組成物中に配合配合することもできる（ブロック５１８）。その後、反応溶液中で抗トピラメート抗体−粒子共役体及びトレーサーを生物学的試料と合わせる（ブロック５２０）。反応溶液中、トレーサーと生物学的試料中のトピラメートとの間で、抗トピラメート抗体−粒子共役体との競合反応が起こる（ブロック５２２）。十分な期間及び／又は結合競合の後、抗体−粒子共役体を反応溶液から分離する（ブロック５２４）。場合により、洗浄又は他の分離技術により、抗体−粒子共役体から未結合未結合トピラメート及び／又はトレーサーを除去することができる（ブロック５２６）。化学発光部分が、リン光、蛍光、又は測定できる他の発光による光を放出するようにトレーサーを励起して化学発光量を決定することができる（ブロック５２８）。しばしば、化学発光は、ＲＬＵで測定される蛍光である。化学発光の測定を用いて、トピラメートが試料中に存在するか否かを決定することもできる（ブロック５３０）。さらに、既知の濃度の標準から得た標準化測定値と生物学的試料から得た測定値との比較を用いて、試料中のトピラメート量を定量化し（ブロック５３２）、それから患者のトピラメート量を同定することもできる（ブロック５３４）。
【０１１８】
［０１３４］本発明の１の態様は、ＣＭＩＡアッセイ系である。ＣＭＩＡ系の構成要素の例としては、以下があげられる：ｉ）トピラメート及びトピラメート類似体に結合できるモノクローナル又はポリクローナル抗トピラメート抗体が装填された粒子又は微粒子；ｉｉ）トピラメートを含有すると推測される試料；及びｉｉｉ）類似体トレーサー。または、試料を除いてキットとしてアッセイ系を提供することもできる。さらに、系には、様々な緩衝剤組成物、トピラメート濃度勾配組成物、あるいはトピラメート又は類似体のストック組成物等が含まれてもよい。
【０１１９】
Ｅ．トピラメートに関する他の免疫アッセイ
［０１３５］本明細書記載のトピラメート類似体、共役体、抗体、免疫原及び／又は他の共役体はまた、酵素又は蛍光を含むがこれらに限定されないある範囲の検出系を用いた、いくつかの他の不均一系免疫アッセイ、及び／又は迅速側方流動アッセイを含むがこれらに限定されない均一系免疫アッセイ、及び抗体アレイ、並びに未だに開発されていない形式のいずれにも適している。
【０１２０】
［０１３６］トピラメート類似体、共役体、抗体、免疫原及び／又はトレーサーを利用する、様々な免疫診断アッセイを本明細書に記載しているが、当該技術分野で周知のように、当該アッセイを修飾することもできる。つまり、本発明の範囲内で当該免疫アッセイを行うための工程又は行為に様々な修飾を施すこともできる。
【０１２１】
実施例
［０１３７］以下の実施例は、予防の態様を例示するために提供され、限定することを意図するものではない。したがって、ある例は実験を介して行われ、そしてあるものは当該技術分野に周知の技術、標準、及び結果に基づく予測である。また、本発明には、実施例に例示されない他の態様が含まれることが明らかであるべきである。さらに、本発明により調製されるトピラメート類似体、抗原、免疫原、及び抗トピラメート抗体を用いて、当該技術分野で周知の実験プロトコルを用いて多くの例が実行されている。したがって、こうした例は、すべて本明細書に援用される、以下の参考文献により補完される：（ａ）Caryl Griffinら, Microparticle Reagent Optimization: A Laboratory Reference Manual from the Authority on Microparticles, Seradyn(1994)；及び（ｂ）Boehringer Mannheim Corporation Technical Publications Department, Hitachi Operation Manual: Version B, Boehringer Mannheim Corporation Laboratory Diagnostic Division(1992)；及び（ｃ）ＮＣＣＬＳ認可指針、２００４年８月。
【実施例１】
【０１２２】
［０１３８］図９は、塩化トピラメート（１）をスルファメート・共役化アミノエチル−トピラメート類似体（２）に変換する化学反応の模式図である。丸底フラスコ中、約０．１６ｍｌのエチレンジアミン溶液を、約０．３ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン及び０．５ｍｌのＤＭＦの溶液に添加する。フラスコを氷槽中で冷却してアルゴン（「Ａｒ」）ガス下で攪拌した後、１．０ｍｌのＤＭＦ中の２０３ｍｇの塩化トピラメートの溶液を添加して反応混合物を形成する。反応混合物をＡｒガス下で１２時間攪拌する。減圧下で溶媒を蒸発させて残渣を形成し、これを、メタノール溶出剤を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製する。トピラメートのアミノエチル類似体（２）を含有する分画を合わせて濃縮し、約９０ｍｇを得る。
【実施例２】
【０１２３】
［０１３９］続いて図９を参照して、トピラメートのアミノエチル類似体（２）を、リンカーが長い活性エステルを有する他の類似体（３）に変換する化学反応の模式図を示す。氷槽中の丸底フラスコ中、約１５０ｍｇのＤＳＳを、２ｍｌの無水ＤＭＦ及び０．０５ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの溶液に添加し、次いで、Ａｒ下で攪拌する。次いで、１ｍｌのＤＭＦ中の約４５ｍｇのトピラメートのアミノエチル類似体（２）（氷槽中で予め冷却）をフラスコに滴下して反応混合物を形成する。反応混合物をＡｒ下、氷槽中で３時間攪拌後、減圧下で溶媒を蒸発させて残渣を形成し、これを、酢酸エチル・ヘキサン（８：２）溶出剤を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製する。トピラメートの活性エステル（３）を含有する分画を合わせて濃縮し、約２０ｍｇを得る。
【実施例３】
【０１２４】
［０１４０］図１０Ａは、トピラメートを、トピラメートのスルファメート・共役化スクシニル類似体（４）に変換する化学反応の模式図である。２５０ｍｌの丸底フラスコ中、２０ｍｌのＴＨＦ（無水）中の約２ｇのトピラメートの溶液を、約２ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンと合わせてＡｒ下で攪拌する。約１．２４ｇの無水コハク酸及び５０ｍｇのＤＭＡＰを上記溶液に添加して反応混合物を形成する。反応混合物をＡｒ下で１２時間攪拌して減圧下で溶媒を蒸発させて、残渣を形成する。溶出剤として酢酸エチルを用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。トピラメートのスクシニル誘導体（４）を含有する分画を合わせて濃縮し、約２００ｍｇを得る。
【実施例４】
【０１２５】
［０１４１］図１０Ｂは、トピラメートを、トピラメートのスルファメート・共役化グルタリル類似体（５）に変換する化学反応の模式図である。２５０ｍｌの丸底フラスコ中、１０ｍｌのＴＨＦ（無水）中の４００ｍｇのトピラメートの溶液を、０．８ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンと合わせてＡｒ下で攪拌する。次いで、約５２０ｍｇの無水グルタル酸及び２０ｍｇのＤＭＡＰを添加して反応混合物を形成する。反応混合物を６０℃で６０時間攪拌して減圧下で溶媒を蒸発させて、残渣を形成する。酢酸エチル溶出剤を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。トピラメートのグルタリル誘導体（５）を含有する分画を合わせて濃縮し、約１６０ｍｇを得る。
【実施例５】
【０１２６】
［０１４２］図１１は、トピラメートのアミノエチル類似体（２）を、脂肪族エステル基があるトピラメートのスルファメート・共役化類似体（６）に変換する化学反応の模式図である。２５０ｍｌの丸底フラスコ中、１０ｍｌのＤＭＦ（無水）中の５０ｍｇのアミノエチルトピラメート（２）の溶液を、０．８ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンと合わせてＡｒ下で攪拌する。次いで、約１００ｍｇのｔ−ブチル−４−ブロモブチレート及び２０ｍｇのＤＭＡＰを添加して反応混合物を形成する。反応混合物を８０℃で２４時間攪拌して減圧下で溶媒を蒸発させて、残渣を形成する。酢酸エチル溶出剤を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。トピラメートのスルファメート・共役化類似体（６）を含有する分画を合わせて濃縮し、約３０ｍｇを得る。
【実施例６】
【０１２７】
［０１４３］続いて図１１を参照して、トピラメートのスルファメート・共役化類似体（６）を、カルボン酸基を有するトピラメートの他のスルファメート・共役化類似体（７）に変換する化学反応の模式図を示す。２５０ｍｌの丸底フラスコ中、５ｍｌのトリフルオロ酢酸中の５０ｍｇのトピラメートのスルファメート・共役化類似体（６）の溶液を、５ｍｌのジクロロメタンと合わせてＡｒ下で攪拌する。反応混合物を室温で３０分間攪拌して減圧下で溶媒を蒸発させて残渣を形成する。酢酸エチル溶出剤を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。トピラメートのスルファメート・共役化類似体（７）を含有する分画を合わせ、濃縮して、約２０ｍｇを得る。
【実施例７】
【０１２８】
［０１４４］続いて図１１を参照して、トピラメートのスルファメート・共役化類似体（７）を、活性ＮＨＳ基を有するトピラメートの活性化エステル（８）に変換する化学反応の模式図を示す。具体的には、７ｍｌの無水ＤＭＦ中の１００ｍｇのトピラメート類似体（７）の溶液を０℃に冷却して０．１ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加して反応混合物を形成する。１１０ｍｇのＯ−（Ｎ−スクシンイミジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレートを添加して、反応混合物を反応させる。反応混合物を室温まで加温して一晩攪拌する。反応混合物を減圧下で濃縮して溶出剤として酢酸エチル／メタノールを用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製し、およそ６０ｍｇのトピラメートの活性エステル（８）を得る。
【実施例８】
【０１２９】
［０１４５］図１２は、トピラメートを、トピラメートのスルファメート・共役化フェニル類似体（９）に変換する化学反応の模式図である。２５０ｍｌの丸底フラスコ中、１０ｍｌのジクロロメタン中の１００ｍｇのトピラメートの溶液を、６０ｍｇの４−カルボキシベンズアルデヒド及び４０ｍｇのシアノ水素化ホウ素ナトリウムと合わせてＡｒ下で攪拌する。反応混合物を室温で１日攪拌する。水で反応停止して５０ｍｌのジクロロメタンで３回抽出する。有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、回転蒸発装置上で溶媒を除去する。酢酸エチル溶出剤を用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。トピラメートのフェニル類似体（９）を含有する分画を合わせて濃縮して、約５０ｍｇを得る。
【実施例９】
【０１３０】
［０１４６］続いて図１２を参照して、トピラメートのフェニル類似体（９）を、フェニル類似体の活性化ＮＨＳエステル（１０）に変換する化学反応の模式図を示す。具体的には、５ｍｌの無水ＤＭＦ中の９０ｍｇのトピラメートのフェニル類似体（９）の溶液を０℃に冷却して０．１ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加して反応混合物を形成する。９５ｍｇのＯ−（Ｎ−スクシンイミジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレートを添加して反応混合物を反応させる。反応混合物を室温まで加温して一晩攪拌する。反応混合物を減圧下で濃縮して溶出剤として酢酸エチル／メタノールを用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製して、およそ５０ｍｇのフェニル類似体の活性エステル（１０）を得る。
【実施例１０】
【０１３１】
［０１４７］図１３は、トピラメートを、トピラメートのスルファメート・共役化酪酸類似体（１１）に変換する化学反応の模式図である。２５０ｍｌの丸底フラスコ中、１０ｍｌのジクロロメタン中の４００ｍｇのトピラメートの溶液を、１００ｍｇのシアノ水素化ホウ素ナトリウム及び１００ｍｇのコハク酸セミアルデヒド（水中の重量１５％）と合わせて室温で一晩攪拌する。２０ｍｌの脱イオン水で反応停止して、０．１Ｎ ＨＣｌで酸化して４０ｍｌのジクロロメタンで３回抽出する。有機相を合わせて無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、回転蒸発装置上で溶媒を除去する。酢酸エチル溶出剤を用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。トピラメートの酪酸類似体（１１）を含有する分画を合わせて濃縮して、約１６０ｍｇを得る。
【実施例１１】
【０１３２】
［０１４８］続いて図１３を参照して、トピラメートの酪酸類似体（１１）を、酪酸類似体の活性化ＮＨＳエステル（１２）に変換する化学反応の模式図を示す。具体的には、５ｍｌの無水ＤＭＦ中の１００ｍｇのトピラメートの酪酸類似体（１１）の溶液を０℃に冷却して０．１ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加して反応混合物を形成する。１０５ｍｇのＯ−（Ｎ−スクシンイミジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレートを添加して反応混合物を反応させる。反応混合物を室温まで加温して一晩攪拌する。反応混合物を減圧下で濃縮して溶出剤として酢酸エチル／メタノールを用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製して、およそ５００ｍｇの酪酸類似体の活性エステル（１２）を得る。
【実施例１２】
【０１３３】
［０１４９］図１４は、トピラメートを、トピラメートの９−ヒドロキシ類似体（１３）に変換する化学反応の模式図である。１００ｍｌの丸底フラスコ中、１０ｍｌのＴＨＦ（無水）中の４０ｍｇの９−ヒドロキシトピラメートの溶液を、０．１ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン及び０．１ｍｌのエチル−４−イソシアノブチレートと合わせてＡｒ下で攪拌する。反応混合物を８０℃で２日間攪拌する。反応を室温に冷却して回転蒸発装置上で溶媒を除去して、残渣を生じる。酢酸エチル溶出剤を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。トピラメートのエチルエステル類似体（１３）を含有する分画を合わせて濃縮して、約２０ｍｇを得る。
【実施例１３】
【０１３４】
［０１５０］続いて図１４を参照して、トピラメートを、トピラメートの９ヒドロキシ類似体（１４）に変換する化学反応の模式図を示す。１００ｍｌの丸底フラスコ中、２ｍｌのメタノール中の４０ｍｇの９−ヒドロキシトピラメート類似体（１３）の溶液を、２ｍｌの水性１Ｎ ＮａＯＨと合わせる。反応混合物を室温で１日攪拌した後、減圧下で濃縮して、残渣を生じる。酢酸エチル溶出剤を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。トピラメートのカルボキシレート類似体（１４）を含有する分画を合わせて濃縮して、約２０ｍｇを得る。
【実施例１４】
【０１３５】
［０１５１］続いて図１４を参照して、トピラメートのカルボキシレート類似体（１４）を、トピラメート類似体の活性化ＮＨＳエステル（１５）に変換する化学反応の模式図を示す。具体的には、５ｍｌの無水ＤＭＦ中の１００ｍｇのトピラメートのカルボキシレート類似体（１１）の溶液を０℃に冷却して０．１ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加して反応混合物を形成する。１０５ｍｇのＯ−（Ｎ−スクシンイミジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレートを添加して反応混合物を反応させる。反応混合物を室温まで加温して一晩攪拌する。反応混合物を減圧下で濃縮して溶出剤として酢酸エチル／メタノールを用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで残渣を精製して、およそ５００ｍｇのトピラメート類似体の活性エステル（１５）を得る。
【実施例１５】
【０１３６】
［０１５２］図１５は、典型的な目的のため、トピラメート類似体をトピラメート抗原（１６）に変換する化学反応の模式図である。トピラメート抗原（１６）は米国特許第５，９５２，１８２号に基づく。２ｍｌのジメチルアセトアミド及び０．２ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン中の１０９ｍｇのＮ−カルボキシメチル−トピラメート及び４０ｍｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の溶液をドライアイス／イソプロパノール槽（−２０℃〜−１５℃）上で冷却して１００μｌの３．１５Ｍジシクロヘキシルカルボジイミド（ジメチルアセトアミド中の２４０ｍｇのＤＣＣ）で処理して反応混合物を形成する。反応混合物をドライアイス槽中で冷却しながら１５分間攪拌した後、他の１００μｌのＤＣＣ溶液を添加する。反応混合物をＡｒ下で一晩攪拌して室温まで加温する。磁気スターラーを入れた丸底フラスコ中で、約７０ｍｇのＢＳＡタンパク質を有する約４ｍｌのｐＨ７．２の０．１Ｍ ＰＢＳ緩衝液を氷槽中で冷却しながら攪拌する。タンパク質溶液を３０分間攪拌して１ｍｌのＤＭＳＯを滴下する。上記冷却タンパク質溶液を、トピラメート反応混合物に滴下して低温室（４℃）中で一晩攪拌させる。生じた共役体を透析チューブ（１０，０００ＭＷカットオフ）に入れて１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の２０％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ中、室温で連続透析した後、４℃でｐＨ７．２のＰＢＳと４回交換する（各１リットル、少なくとも各々６時間）。クーマシーブルータンパク質アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて、抗原（１６）のタンパク質濃度を、およそ５．０ｍｇ／ｍｌと決定する。
【実施例１６】
【０１３７】
［０１５３］図１５は、典型的な目的のため、トピラメート類似体をトピラメート免疫原（１７）に変換する化学反応の模式図である。トピラメート免疫原（１７）は、米国特許第５，９５２，１８２号に基づく。２ｍｌのジメチルアセトアミド及び０．２ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン中の１０９ｍｇのＮ−カルボキシメチル−トピラメート及び４０ｍｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の溶液をドライアイス／イソプロパノール槽（−２０℃〜−１５℃）上で冷却して１００μｌの３．１５Ｍジシクロヘキシルカルボジイミド（ジメチルアセトアミド中の２４０ｍｇのＤＣＣ）で処理して、反応混合物を形成する。反応混合物をドライアイス槽中で冷却しながら、１５分間攪拌した後、他の１００μｌのＤＣＣ溶液を添加する。反応混合物をＡｒ下で一晩攪拌して反応中に室温まで加温する。磁気スターラー入りの丸底フラスコ中で、約８０ｍｇのＫＬＨタンパク質を有する約８ｍｌのｐＨ７．２の０．１Ｍ ＰＢＳ緩衝液を氷槽中で冷却しながら攪拌する。タンパク質溶液を３０分間攪拌して１ｍｌのＤＭＳＯを滴下する。上記冷却タンパク質溶液を、トピラメート反応混合物に滴下して低温室（４℃）中で一晩攪拌させる。生じた共役体を透析チューブ（１０，０００ＭＷカットオフ）に入れて１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の２０％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ中、室温で連続透析した後、４℃でｐＨ７．２のＰＢＳと４回交換する（各１リットル、少なくとも各々６時間）。クーマシーブルータンパク質アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて、抗原（１７）のタンパク質濃度を、およそ１．６ｍｇ／ｍｌと決定する。
【実施例１７】
【０１３８】
［０１５４］図１６は、トピラメート類似体（３）を免疫原（１８）に変換する化学反応の模式図である。８ｍｌのｐＨ７．２のＰＢＳ（０．１Ｍリン酸ナトリウム、０．１５Ｍ塩化ナトリウム）中の８０ｍｇのキーホールリンペット・ヘモシアニン（ＫＬＨ）の溶液を氷槽中で冷却する。約５．４ｍｌのＤＭＳＯをＫＬＨ溶液に滴下して室温以下に維持する。１．６ｍｌのＤＭＳＯ中の２０．４ｍｇのトピラメート類似体（３）の溶液をＫＬＨ溶液に滴下して反応混合物を形成する。反応混合物を室温で４０時間攪拌させる。生じたＫＬＨ免疫原（１８）を透析チューブ（１０，０００ＭＷカットオフ）に入れて１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の３５％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ中、室温で連続透析した後、４℃でｐＨ７．２のＰＢＳと４回交換する（各１リットル、少なくとも各々６時間）。クーマシーブルータンパク質アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて、ＫＬＨ免疫原（１８）のタンパク質濃度を、およそ２．１９ｍｇ／ｍｌと決定する。
【実施例１８】
【０１３９】
［０１５５］図１７は、スクシニル又はグルタリルトピラメート類似体（４）を抗原（１９）に変換する化学反応の模式図である。約５００ｍｇのＢＳＡを２５０ｍｌの丸底フラスコに入れて約３７．５ｍｌのＰＢＳと合わせる。混合物を氷槽中で１時間攪拌して１２．５ｍｌのＤＭＳＯの溶液をＢＳＡ溶液に１滴ずつ１０分間添加する。生じた溶液を氷槽中でさらに３時間攪拌する。他の丸底フラスコ中、約１７０ｍｇのスクシニルトピラメート類似体（４）を、２ｍｌのＤＭＦ及び０．１５ｍｌのＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンと合わせてＡｒ下で２０分間氷槽中で攪拌する。約１３０ｍｇのＯ，Ｎ−スクシンイミジル，Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートをトピラメート類似体溶液に添加した後、ゴムの隔壁で停止して４℃で４時間攪拌する。トピラメート類似体混合物を上記ＢＳＡ溶液に１滴ずつ２０分間添加する。生じたトピラメート抗原を透析チューブ（１０，０００ＭＷカットオフ）に入れて１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の３０％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ中、室温で連続透析した後、４℃でｐＨ７．２のＰＢＳと４回交換する（各１リットル、少なくとも各々６時間）。クーマシーブルータンパク質アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて、トピラメート抗原（１９）のタンパク質濃度を、およそ５．０ｍｇ／ｍｌと決定する。
【実施例１９】
【０１４０】
［０１５６］図１８は、スクシニルトピラメート類似体（３）を抗原（２０）に変換する化学反応の模式図である。４ｍｌのｐＨ７．２のＰＢＳ（０．１Ｍリン酸ナトリウム、０．１５Ｍ塩化ナトリウム）中の８０ｍｇのＢＳＡの溶液を氷槽中で冷却する。約５．４ｍｌのＤＭＳＯをＢＳＡ溶液に滴下して室温以下に維持する。１．６ｍｌのＤＭＳＯ中の２０．４ｍｇのトピラメート類似体（３）の溶液をＢＳＡ溶液に滴下して反応混合物を形成する。反応混合物を室温で４０時間攪拌させる。生じたＢＳＡ共役体（２０）を透析チューブ（１０，０００ＭＷカットオフ）に入れて１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の３５％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ、次いで１ｌのｐＨ７．２のＰＢＳ中の１０％ＤＭＳＯ中、室温で連続透析した後、４℃でｐＨ７．２のＰＢＳと４回交換する（各１リットル、少なくとも各々６時間）。クーマシーブルータンパク質アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて、ＢＳＡ共役体（２０）のタンパク質濃度を、およそ５ｍｇ／ｍｌと決定する。
【実施例２０】
【０１４１】
［０１５７］ポリクローナル抗体含有組成物を得て、トピラメート及びトピラメート一次代謝産物とポリクローナル抗体との交差反応量を決定するアッセイを行う。既知量のトピラメートを用いて抗トピラメート抗体と反応させる。既知の濃度のトピラメートを用いて、抗体調製物及び図１９に示すようなヒドロキシ代謝産物（２１）の間の交差反応性の量を計算する。交差反応性パーセントは、μｇ／ｍｌのトピラメートの観察される濃度を１００倍した後、μｇ／ｍｌの添加した代謝産物の濃度で割ったものに等しい。これらの代謝産物を含有する標本では、交差反応性はまったく観察されない。
【実施例２１】
【０１４２】
［０１５８］免疫原性共役体を有するトピラメート類似体を用いて、トピラメートと結合するポリクローナル抗体を調製する。より詳細には、ＫＬＨ免疫原性部分を有するトピラメート免疫原（１７）及び（１８）を用いて抗トピラメートポリクローナル抗体を生成する。約０．５ｍｌの免疫原（１７）又は（１８）含有組成物と約０．５ｍｌのフロイントのアジュバントを混合して免疫原性組成物を調製する。次いで、生じた１ｍｌの免疫原性カクテルをヒツジ又はウサギ等の動物に注射する。続いて、動物に抗トピラメートポリクローナル抗体を産生させるため、同じカクテルを有する免疫原性注射を４週ごとに動物に投与する。以下に記載するように、同じ抗原を用いたＥＬＩＳＡを介して動物由来の血清をスクリーニングする。さらに、トピラメート抗原（１６）、（１９）、（２０）等を用いてポリクローナル抗体プログラムを実行してもよい。
【実施例２２】
【０１４３】
［０１５９］実施例２１に記載した調製したポリクローナル抗体を調べるため、ＥＬＩＳＡアッセイで使用するＥＬＩＳＡプレートを調製する。すなわち、様々なトピラメート抗原（１６）、（１９）、及び（２０）を、異なるＥＬＩＳＡプレート上にコーティング後、抗トピラメート抗体を供して遊離トピラメートと競合させる。より詳細には、コーティング緩衝液中でトピラメート抗原を希釈した後、ＥＬＩＳＡプレートのウェルに添加する。ＥＬＩＳＡプレートを３７℃で６０分間インキュベート後、コーティング緩衝液中の溶媒を注ぎ、ブロッキング緩衝液をプレートに添加する。プレートを再び、３７℃で６０分間インキュベートしてブロッキング緩衝液中の溶媒をプレートから注ぐ。次いで、ウェル中にブロッキング剤を含むＥＬＩＳＡプレートを２〜８℃で最長１週間保存する。
【実施例２３】
【０１４４】
［０１６０］（実施例２３）
［０１６１］実施例２２で調製したＥＬＩＳＡプレートを用いて、免疫原（１７）を用い実施例２１で調製したポリクローナル抗体の抗体力価を決定する。すなわち、連続希釈を行い、各ウェル中の体積を同一１００μｌにする。ｐＨ７．４、０．１％ＢＳＡを含有するＰＢＳで、１：１０〜１：２０００で抗体希釈を調製する。試料は１０倍希釈し、希釈を１：１００で開始してプレート上で１０倍で連続希釈する。続いて、１００μｌの抗体試料をＥＬＩＳＡプレート上の各ウェルに添加する。次いで、プレートを３７℃で６０分間インキュベートして０．０５％ｔｗｅｅｎを含む２５０μｌのＰＢＳ、ｐＨ７．４で３回洗浄する。次に、プレート上に先にコーティングした抗原とは異なる、１２５μｌの希釈した二次抗原（ＰＢＳ、ｐＨ７．４中）をプレートの各ウェルに添加する。プレートを３７℃で６０分間インキュベートしたものを、０．０５％ｔｗｅｅｎ含有２５０μｌのＰＢＳ、ｐＨ７．４で３回洗浄して力価を実験的に決定する。洗浄後、約１２５μｌのＡＢＴＳ基質をプレート中の各ウェルに添加してプレートを再び２０分間インキュベートする。プレートを４０５ｎｍで読み取り、力価結果を表１に提供する。
【０１４５】
表１
【０１４６】
【表１】
【０１４７】
［０１６２］これらの結果は、免疫原（１７）で生じた抗体力価が、微粒子凝集免疫アッセイには十分でないことを示す。すなわち、微粒子凝集免疫アッセイを極めて高い力価で行わなくてはならないためである。このように、免疫原（１７）は、商業的免疫診断アッセイプロトコルに用いる程度に十分な抗体を生じない。
【実施例２４】
【０１４８】
［０１６３］免疫原（１７）を用いて調製した抗トピラメート抗体の、トピラメート類似体に対する結合活性を結合阻害試験により決定する。すなわち、０．１％ＢＳＡを含む１ｍｌのＰＢＳ、ｐＨ７．４中で試料を調製する。３０％Ｂｍａｘ力価又は５０％Ｂｍａｘ力価を有する組成物を用いて得た力価値をおよそ半分の力価値に割る。３０％Ｂｍａｘを用いて、試料調製段階中に１：１００００の抗体力価を１：５０００に希釈する。次いで、異なる濃度又は標準物質値（０、２、４、８、１６、３２μｇ／ｍｌ）の約５０μｌのトピラメートを、実施例２２で調製したプレートに適用する。約５０μｌの希釈抗体をプレート内に分配してプレート中の組成物を水平プレート振盪装置上で１分間混合する。プレートは、トピラメートも抗トピラメート抗体も含有しない第１列で特定し、第１列を陰性対照として用いる。トピラメートを含有しない第２列を陽性対照として用いる。プレートを６０分間インキュベートして０．０５％ｔｗｅｅｎ含有２５０μｌのＰＢＳ、ｐＨ７．４で３回洗浄する。ＰＢＳ、ｐＨ７．４中の、抗原（１６）、（１９）、又は（２０）等の約１２５μｌの希釈二次抗体共役体をプレートの各ウェルに添加する。３７℃で６０分間インキュベートして０．０５％ｔｗｅｅｎを含む２５０μｌのＰＢＳ、ｐＨ７．４で３回洗浄して力価を実験的に決定する。続いて、約１２５μｌのＡＢＴＳ基質をプレートの各ウェルに添加して２０分間インキュベートする。プレートを４０５ｎｍで読み取り、結果を表２及び３に提供する。
【０１４９】
表２
【０１５０】
【表２】
【０１５１】
表３
【０１５２】
【表３】
【０１５３】
［０１６４］表２及び３中の阻害（Ｂ／Ｂｏ）プロフィールは、免疫原（１７）で生成される抗トピラメート抗体を示す。免疫原（１７）はまた、アッセイ範囲にわたり、阻害比率の増分変化を示す商業的ＦＰＩＡ免疫アッセイでも用いられる。
【実施例２５】
【０１５４】
［０１６５］実施例２２で調製したＥＬＩＳＡプレートを用いて、実施例２１により免疫原（１８）を用いて調製したポリクローナル抗体に関する抗体力価を決定する。実施例２３と実質的に類似の実験プロトコルを用いて力価を決定する。プレートを４０５ｎｍで読み取り、結果を表４に提供する。
【０１５５】
表４
【０１５６】
【表４】
【０１５７】
［０１６６］高力価（抗体を少ししか必要とせず、経済的である）かつ吸光度に優れる免疫診断アッセイを最適に実行することもできる。微粒子凝集免疫アッセイでは力価が高いことが特に重要である。免疫原（１８）は、よりアクセス可能なエピトープを提供する長いリンカーのため、免疫原（１７）よりも免疫原性である。表４の結果は、免疫原（１８）で生じる抗体力価が、微粒子凝集免疫アッセイ等の商業的トピラメート免疫診断アッセイで用いるのに十分であることを示す。
【実施例２６】
【０１５８】
［０１６７］実施例２４と実質的に類似の実験プロトコルを用いて行う結合阻害試験で、トピラメート類似体に対する免疫原（１８）で調製した抗トピラメート抗体の結合活性を決定する。プレートを４０５ｎｍで読み取り、結果を表５及び６に提供する。
【０１５９】
表５
【０１６０】
【表５】
【０１６１】
表６
【０１６２】
【表６】
【０１６３】
［０１６８］表５及び６は、免疫原（１８）で生成される抗トピラメート抗体の阻害（Ｂ／Ｂｏ）プロフィールを示す。Ｂ／Ｂｏの変化は、アッセイ範囲にわたり、増分的であるようである。したがって、本抗体は免疫アッセイに適している。
【実施例２７】
【０１６４】
［０１６９］均一系粒子増進免疫比濁実験である免疫比濁又はＱＭＳ（登録商標）アッセイを行って、実施例２１で調製したポリクローナル抗体を試験する。約０．０５％アジ化ナトリウムを含むｂｉｓ−ｔｒｉｓ緩衝液中、＜１％未満で、免疫原（１８）から調製したトピラメートと結合するヒツジ・ポリクローナル抗体で構成されるＲ１；及び０．０５％のアジ化ナトリウムを含み、抗原（２２）を含むトピラメートをコーティングした０．５％未満の微粒子で構成されるＲ２を含有する、使用準備済みの液体２試薬キットを用いて、トピラメートに関するＱＭＳ（登録商標）アッセイを行う。
【０１６５】
［０１７０］さらに、血清及び血漿から適切な標本を調製してもよい。標準的静脈穿刺技術により血清を収集してゲルバリアを含むか又は含まないガラス又はプラスチック試験管に入れる。遠心分離前に完全な血塊形成が起こっていることを確実にするため、ある標本、特に抗凝血剤又は血栓溶解剤療法を受けている患者由来の標本は、凝固時間が増したことを示しうる。血塊形成が完全になる前に標本を遠心分離した場合、フィブリンの存在により結果が誤ったものになる。したがって、収集後、出来るだけ速やかに赤血球から血清を分離してもよい。ヘパリンリチウム、ヘパリンナトリウム、ＥＤＴＡカリウム及びヘパリンゲル血漿分離剤等の許容しうる抗凝血剤とともに血漿を用いてもよい。標準的静脈穿刺技術によって血漿を収集してガラス又はプラスチック試験管に入れてもよい。また、遠心分離を用いて血小板の適切な除去を確実にする。収集後、出来るだけ速やかに赤血球から血漿を分離してもよい。粒子状物質又は赤血球を含有する標本の結果は一貫性が場合もあるが、試験前に、推奨される８，０００〜１０，０００ＲＣＦで１０分間遠心分離すると、適切な標本を得ることができる。
【０１６６】
［０１７１］トピラメートを含む標本を用いると、結果が最高標準物質値を超えることもありうるため、標本を希釈してアッセイ法を始める。すなわち、標本を手動又は自動化内蔵（ｏｎｂｏａｒｄ）希釈プロトコルを用いて希釈してもよい。アッセイは、試料中の薬剤と微粒子上にコーティングされた薬剤との間で、トピラメート特異的抗体結合部位に関する競合に基づく。トピラメートがコーティングされた微粒子試薬は、抗トピラメート抗体試薬があるが試料中に競合薬剤がなければ迅速に凝集する。吸光度変化速度は測光で測定し、そして、粒子の凝集速度に正比例する。ラモトリジンを含有する試料を添加すると、凝集反応が部分的に阻害され、吸光度変化速度が低下する。濃度依存性の古典的凝集阻害曲線を得ることもでき、この場合は、最低トピラメート濃度（ゼロμｇ／ｍｌ）の場合に凝集速度が最大となり、最高トピラメート濃度（３２μｇ／ｍｌ）の場合に凝集速度が最低となる。
【０１６７】
［０１７２］完全較正（６点）法を用いて較正した後、ＱＭＳ（登録商標）トピラメートアッセイを始める。当該技術分野の平均的な技術で、操作マニュアルの指示に従ってＱＭＳ（登録商標）を行う。結果を表７に示す。
【０１６８】
表７
【０１６９】
【表７】
【０１７０】
［０１７３］表７に示す結果から、トピラメート抗原（１９）をコーティングしたラテックス粒子が抗トピラメート抗体に関して、トピラメートと有効に競合できることが示される。すなわち、特にラテックス粒子とカップリングした場合、トピラメート抗原（１８）を免疫比濁アッセイで用いることができる。
【実施例２８】
【０１７１】
［０１７４］試験試料中の分析物の濃度に正比例する結果を提供する能力を例示するため、直線性を測定してもよい。すなわち、直線性は、典型的には、全体の系の応答を示し、公式化により公知か又は互いに比較して公知の分析物のレベルを試験して系の直線性を測定してもよい。系の結果をこれらの値に対してプロットする場合、プロットした曲線が直線に一致する程度が系の直線性の測定値である。
【０１７２】
［０１７５］定量的測定法の直線範囲を示すプロトコルは当該技術分野で周知である。簡潔には、本プロトコルを用いて直線性を評価して標本に適した基盤（ｍａｔｒｉｘ）の試料を分析する。以下の試料を調製する：ＣａｌＢ（２．０μｇ／ｍｌ）をＣａｌＡ（０μｇ／ｍｌ）で希釈して１μｇ／ｍｌのトピラメート試料を調製し；ＣａｌＣ（４．０μｇ／ｍｌ）をＣａｌＢ（２．０μｇ／ｍｌ）で希釈して３μｇ／ｍｌのトピラメート試料を調製し；ＣａｌＤ（８．０μｇ／ｍｌ）をＣａｌＣ（４．０μｇ／ｍｌ）で希釈して６μｇ／ｍｌのトピラメート試料を調製し；ＣａｌＥ（１５．９．０μｇ／ｍｌ）をＣａｌＣ（８．０μｇ／ｍｌ）で希釈し、１１．９μｇ／ｍｌのトピラメート試料を調製し；及びＣａｌＦ（３１．７μｇ／ｍｌ）をＣａｌＥ（１５．９μｇ／ｍｌ）で希釈して２３．５μｇ／ｍｌのトピラメート試料を調製する。
【０１７３】
［０１７６］試料又は品質管理物質をアッセイした後、データを収集して回収という平均試験結果として報告する。以下の等式に基づいて、回収パーセントを計算する：
回収％＝平均回収濃度ｘ１００％
予測濃度
［０１７７］１回の実験中に試料を無作為にアッセイして回収比率を表８に提供する。
【０１７４】
表８
【０１７５】
【表８】
【０１７６】
［０１７８］回収比率は１１５％〜８５％の範囲内である。データは商業的免疫診断アッセイに必要な感度及び精度の性能を裏付ける。結果の直線性を図２０にグラフで示す。
【０１７７】
［０１７９］本発明の精神又は本質的な特性から逸脱することなく、他の特定の形式で、本発明を具現することもできる。記載する態様は、全ての観点で単に例示的であり、限定的とはみなされない。したがって、本発明の範囲は上記説明ではなく、請求項に示される。請求項の意味及び等価の範囲内に属するすべての変化が、その範囲内に含まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１７８】
【図１】［０２９］図１は、抗トピラメート抗体を調製する方法の態様を例示する流れ図である。
【図２】［０３０］図２は、トピラメートに関する免疫診断アッセイを行う方法の態様を例示する流れ図である。
【図３】［０３１］図３は、蛍光偏光に基づく競合的結合試験の態様を例示する概略図である。
【図４】［０３２］図４は、トピラメートの較正曲線の態様を例示するグラフである。
【図５】［０３３］図５は、凝集に基づく競合的結合試験の態様を例示する流れ図である。
【図６】［０３４］図６は、凝集に基づく競合的結合試験の態様を例示する流れ図である。
【図７】［０３５］図７は、酵素活性に基づく競合的結合試験の態様を例示する流れ図である。
【図８】［０３６］図８は、化学発光に基づく競合的結合試験の態様を例示する流れ図である。
【図９】［０３７］図９は、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１０Ａ】［０３８］図１０Ａ及び１０Ｂは、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１０Ｂ】［０３８］図１０Ａ及び１０Ｂは、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１１】［０３９］図１１は、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１２】［０４０］図１２は、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１３】［０４１］図１３は、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１４】［０４２］図１４は、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１５】［０４３］図１５は、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１６】［０４４］図１６は、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１７】［０４５］図１７は、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１８】［０４６］図１８は、トピラメート類似体を合成するための合成プロトコルの態様を例示する概略図である。
【図１９】［０４７］図１９は、トピラメート代謝産物を例示する概略図である。
【図２０】［０４８］図２０は、凝集免疫アッセイの態様からのトピラメート回収を例示するグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料中のトピラメートの存在を検出するための免疫診断アッセイにおいて使用するための系であって：
抗トピラメート抗体；及び
式１又は式２；
【化１】
式中、Ｌは、ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ、ＮＨＣＯ、ＮＨＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２、ＣＯＯ、又はＯ基の１つであり；
Ｘは、Ｌ及びＹ間の結合、芳香族基、又は脂肪族基の少なくとも１つであり；そして
Ｙは、脂肪族、アルコール、アミン、アミド、カルボン酸、アルデヒド、エステル、活性化エステル、脂肪族エステル、イミドエステル、イソシアネート、イソチオシアネート、無水物、チオール、チオラクトン、ジアゾニウム、マレイミド、ＮＨＳ、Ｏ−ＮＨＳ、及び作用基とカップリングした、これらに由来するリンカーからなる群より選択される；
の１つの化学構造を有する、トピラメート類似体；
を含む、前記系。
【請求項２】
Ｘは、Ｌ及びＹ間の結合、１〜２の環を有する置換又は非置換の芳香族又は脂肪族基、あるいは１〜２０の炭素及び／又はヘテロ鎖原子を有する、飽和又は不飽和、置換又は非置換、及び直鎖又は分枝鎖の少なくとも１つである、請求項１記載の系。
【請求項３】
類似体が、以下の少なくとも１つ：
Ｘは、ＣＨ２、（ＣＨ２）２、（ＣＨ２）３、（ＣＨ２）４、（ＣＨ２）５、（ＣＨ２）６、ＣＨ２ＣＯ、（ＣＨ２）２ＣＯ、（ＣＨ２）３ＣＯ、（ＣＨ２）４ＣＯ、（ＣＨ２）５ＣＯ、（ＣＨ２）６ＣＯ、ＣＨ２ＣＯＯ、（ＣＨ２）２ＣＯＯ、（ＣＨ２）３ＣＯＯ、（ＣＨ２）４ＣＯＯ、（ＣＨ２）５ＣＯＯ、（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＣＯ、ＣＯＯ、ＣＯＣＨ２、ＣＯ（ＣＨ２）２、ＣＯ（ＣＨ２）３、ＣＯ（ＣＨ２）４、ＣＯ（ＣＨ２）５、ＣＯ（ＣＨ２）６、ＣＯＣＨ２ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）４ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）５ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＣＯＣＨ２ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）４ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）５ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨＣＨ２、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２、Ｐｈ、ＣＯＮＨＣＨ２Ｐｈ、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＮＨＣＨ２、ＮＨ（ＣＨ２）２、ＮＨ（ＣＨ２）３、ＮＨ（ＣＨ２）４、ＮＨ（ＣＨ２）５、ＮＨ（ＣＨ２）６、ＮＨＣＨ２ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）５ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＮＨＣＨ２ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）５ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ、又はＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯであるか；又は
Ｙは、ＮＨＳ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−ＮＨＳ、ＣＯＯ−ｔｅｒｔブチル、ｔｅｒｔブチル、ＯＨ、Ｏ−ＮＨＳ、ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＯＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＯＣＨ３、又はＮＨ２基の少なくとも１つである；
によって特徴付けられる、請求項１記載の系。
【請求項４】
ＹはＹ１−Ｚであり、Ｙ１は、ＣＯＯ、ＣＯ、Ｏ、ＣＯＮＨ、又はＮＨの少なくとも１つからなる群より選択され、そしてＺは作用基である、請求項１記載の系。
【請求項５】
Ｚは、タンパク質、リポタンパク質、糖タンパク質、ポリペプチド、多糖、核酸、ポリヌクレオチド、テイコ酸、放射性同位体、酵素、酵素断片、酵素供与体断片、酵素受容体断片、酵素基質、酵素阻害剤、補酵素、蛍光部分、リン光部分、抗ストークス（ａｎｔｉ−ｓｔｏｋｅｓ）上方制御部分、化学発光部分、発光部分、色素、増感剤、粒子、微粒子、磁気粒子、固体支持体、リポソーム、リガンド、受容体、ハプテン放射性同位体、及びこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項４記載の系。
【請求項６】
抗体がポリクローナル抗体である、請求項５記載の系。
【請求項７】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項５記載の系。
【請求項８】
以下の少なくとも１つ：
トピラメートのストック組成物；
濃度勾配を形成する、異なる濃度のトピラメートを含有する一連の組成物；
トレーサー部分を有するトピラメート類似体；
微粒子を有するトピラメート類似体；
微粒子にカップリングした抗体；
酵素供与体を有するトピラメート類似体、及び対応する酵素受容体；
酵素受容体を有するトピラメート類似体、及び対応する酵素供与体；又は
ろ過又は沈降による分離に適した粒子上に装填された抗体；又は
少なくとも１：５，０００の力価の抗体；
をさらに含む、請求項５記載の系。
【請求項９】
以前トピラメートを投与された被験体から得た試料中のトピラメートの存在を検出するための免疫診断アッセイを行うための方法であって：
抗トピラメート抗体及びトピラメート類似体を試料と合わせて、第一の組成物を形成し、ここで、前記抗体はトピラメート及びトピラメート類似体と結合し、抗体又はトピラメート類似体の少なくとも一方が粒子又は微粒子にカップリングしている；
試料由来のいかなる遊離（ｆｒｅｅ）トピラメート及びトピラメート類似体も、抗体との結合に関して競合することができ；そして
トピラメート類似体及び抗体間の結合を検出する；
工程を含む、前記方法。
【請求項１０】
粒子が、ろ過又は沈降による分離に適した微粒子又は粒子の少なくとも１つである、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
トピラメート類似体が、式１又は式２；
【化２】
式中、Ｌは、ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ、ＮＨＣＯ、ＮＨＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２、ＣＯＯ、又はＯ基の１つであり；
Ｘは、Ｌ及びＹ間の結合、芳香族基、又は脂肪族基の少なくとも１つであり；そして
Ｙは、脂肪族、アルコール、アミン、アミド、カルボン酸、アルデヒド、エステル、活性化エステル、脂肪族エステル、イミドエステル、イソシアネート、イソチオシアネート、無水物、チオール、チオラクトン、ジアゾニウム、マレイミド、ＮＨＳ、Ｏ−ＮＨＳ、及び作用基とカップリングした、これらに由来するリンカーからなる群より選択される；
の１つの化学構造を有する、請求項９記載の方法。
【請求項１２】
Ｘは、Ｌ及びＹ間の結合、１〜２の環を有する置換又は非置換の芳香族又は脂肪族基、あるいは１〜２０の炭素及び／又はヘテロ鎖原子を有する、飽和又は不飽和、置換又は非置換、及び直鎖又は分枝鎖の少なくとも１つである、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
類似体が、以下の少なくとも１つ：
Ｘは、ＣＨ２、（ＣＨ２）２、（ＣＨ２）３、（ＣＨ２）４、（ＣＨ２）５、（ＣＨ２）６、ＣＨ２ＣＯ、（ＣＨ２）２ＣＯ、（ＣＨ２）３ＣＯ、（ＣＨ２）４ＣＯ、（ＣＨ２）５ＣＯ、（ＣＨ２）６ＣＯ、ＣＨ２ＣＯＯ、（ＣＨ２）２ＣＯＯ、（ＣＨ２）３ＣＯＯ、（ＣＨ２）４ＣＯＯ、（ＣＨ２）５ＣＯＯ、（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＣＯ、ＣＯＯ、ＣＯＣＨ２、ＣＯ（ＣＨ２）２、ＣＯ（ＣＨ２）３、ＣＯ（ＣＨ２）４、ＣＯ（ＣＨ２）５、ＣＯ（ＣＨ２）６、ＣＯＣＨ２ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）４ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）５ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＣＯＣＨ２ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）４ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）５ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨＣＨ２、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２、Ｐｈ、ＣＯＮＨＣＨ２Ｐｈ、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＮＨＣＨ２、ＮＨ（ＣＨ２）２、ＮＨ（ＣＨ２）３、ＮＨ（ＣＨ２）４、ＮＨ（ＣＨ２）５、ＮＨ（ＣＨ２）６、ＮＨＣＨ２ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）５ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＮＨＣＨ２ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）５ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ、又はＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯであるか；又は
Ｙは、ＮＨＳ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−ＮＨＳ、ＣＯＯ−ｔｅｒｔブチル、ｔｅｒｔブチル、ＯＨ、Ｏ−ＮＨＳ、ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＯＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＯＣＨ３、又はＮＨ２基の少なくとも１つである；
によって特徴付けられる、請求項１１記載の方法。
【請求項１４】
ＹはＹ１−Ｚであり、Ｙ１は、ＣＯＯ、ＣＯ、Ｏ、ＣＯＮＨ、又はＮＨの少なくとも１つからなる群より選択され、そしてＺは作用基である、請求項１１記載の方法。
【請求項１５】
Ｚは、タンパク質、リポタンパク質、糖タンパク質、ポリペプチド、多糖、核酸、ポリヌクレオチド、テイコ酸、放射性同位体、酵素、酵素断片、酵素供与体断片、酵素受容体断片、酵素基質、酵素阻害剤、補酵素、蛍光部分、リン光部分、抗ストークス上方制御部分、化学発光部分、発光部分、色素、増感剤、粒子、微粒子、磁気粒子、固体支持体、リポソーム、リガンド、受容体、ハプテン放射性同位体、及びこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
トピラメート類似体及び抗体を得て、ここでトピラメート類似体及び抗体の一方は微粒子とカップリングしている；
第一の組成物に入射光線を照射し；そして
第一の組成物由来の透過光の第一の強度を検出する；
工程をさらに含む、請求項９記載の方法。
【請求項１７】
トピラメート類似体及び抗体を有し、そして遊離トピラメートを持たない、対照結合組成物由来の透過光の最低強度を同定し；
透過光の第一の強度と透過光の最低強度を比較し；そして
トピラメートが試料中に存在するかどうかを決定する、ここで最低強度が第一の強度と異なるならば、試料中にトピラメートが存在する指標となる；
工程をさらに含む、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
既知の量のトピラメートと、トピラメート類似体及び抗体を合わせて、対照結合組成物を形成し；
対照結合組成物に入射光線を照射し；
対照結合組成物由来の透過光の第二の強度を検出し；そして
試料中に存在するトピラメート量を決定する、ここで第一の強度及び第二の強度間の比較は、試料中に存在するトピラメート量の指標となる；
工程をさらに含む、請求項１６記載の方法。
【請求項１９】
トレーサー部分を有するトピラメート類似体を得て；
第一の組成物から抗体を分離し；
抗体から未結合のトピラメート類似体を分離し；そして
抗体と結合しているトレーサー部分を検出する；
工程をさらに含む、請求項９記載の方法。
【請求項２０】
既知の量のトピラメートと、トピラメート類似体及び抗体を合わせて、対照結合組成物を形成し；
対照結合組成物から抗体を分離し；
第一の組成物から、抗体と結合しているトレーサー部分の第一の量を検出し；
対照結合組成物から、抗体と結合しているトレーサー部分の第二の量を検出し；そして
試料中に存在するトピラメート量を決定する、ここでトレーサー部分の第一の量及びトレーサー部分の第二の量の間の比較は、試料中に存在するトピラメート量の指標となる；
工程をさらに含む、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
抗体が粒子にカップリングしている、請求項１９記載の方法。
【請求項２２】
粒子が磁気粒子である、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
以前トピラメートを投与された被験体から得た試料中のトピラメートの存在を検出するための免疫診断アッセイを行うための方法であって：
抗トピラメート抗体及びトピラメート類似体を試料と合わせて、第一の組成物を形成し、ここで該抗体はトピラメート及びトピラメート類似体と結合し、トピラメート類似体は、酵素供与体又は酵素受容体の一方を有する；
試料由来のいかなる遊離トピラメート及びトピラメート類似体も、抗体との結合に関して競合することができ；そして
トピラメート類似体及び抗体間の結合を検出する；
工程を含む、前記方法。
【請求項２４】
トピラメート類似体が、式１又は式２；
【化３】
式中、Ｌは、ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ、ＮＨＣＯ、ＮＨＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２、ＣＯＯ、又はＯ基の１つであり；
Ｘは、Ｌ及びＹ間の結合、芳香族基、又は脂肪族基の少なくとも１つであり；
Ｙは、脂肪族、アルコール、アミン、アミド、カルボン酸、アルデヒド、エステル、活性化エステル、脂肪族エステル、イミドエステル、イソシアネート、イソチオシアネート、無水物、チオール、チオラクトン、ジアゾニウム、ＮＨＳ、Ｏ−ＮＨＳ、及びマレイミド基からなる群より選択される官能基由来のリンカーであり；そして
Ｚは、酵素供与体又は酵素受容体である；
の１つの化学構造を有する、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
Ｘは、Ｌ及びＹ間の結合、１〜２の環を有する置換又は非置換の芳香族又は脂肪族基、あるいは１〜２０の炭素及び／又はヘテロ鎖原子を有する、飽和又は不飽和、置換又は非置換、及び直鎖又は分枝鎖の少なくとも１つである、請求項１記載の方法。
【請求項２６】
類似体が、以下の少なくとも１つ：
Ｘは、ＣＨ２、（ＣＨ２）２、（ＣＨ２）３、（ＣＨ２）４、（ＣＨ２）５、（ＣＨ２）６、ＣＨ２ＣＯ、（ＣＨ２）２ＣＯ、（ＣＨ２）３ＣＯ、（ＣＨ２）４ＣＯ、（ＣＨ２）５ＣＯ、（ＣＨ２）６ＣＯ、ＣＨ２ＣＯＯ、（ＣＨ２）２ＣＯＯ、（ＣＨ２）３ＣＯＯ、（ＣＨ２）４ＣＯＯ、（ＣＨ２）５ＣＯＯ、（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＣＯ、ＣＯＯ、ＣＯＣＨ２、ＣＯ（ＣＨ２）２、ＣＯ（ＣＨ２）３、ＣＯ（ＣＨ２）４、ＣＯ（ＣＨ２）５、ＣＯ（ＣＨ２）６、ＣＯＣＨ２ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）４ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）５ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＣＯＣＨ２ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）４ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）５ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨＣＨ２、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２、Ｐｈ、ＣＯＮＨＣＨ２Ｐｈ、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＮＨＣＨ２、ＮＨ（ＣＨ２）２、ＮＨ（ＣＨ２）３、ＮＨ（ＣＨ２）４、ＮＨ（ＣＨ２）５、ＮＨ（ＣＨ２）６、ＮＨＣＨ２ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）５ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＮＨＣＨ２ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）５ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ、又はＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯであるか；又は
Ｙは、ＮＨＳ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−ＮＨＳ、ＣＯＯ−ｔｅｒｔブチル、ｔｅｒｔブチル、ＯＨ、Ｏ−ＮＨＳ、ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＯＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＯＣＨ３、又はＮＨ２基の少なくとも１つである；
によって特徴付けられる、請求項２４記載の方法。
【請求項２７】
酵素供与体を有するトピラメート類似体を得て；
第一の組成物と酵素受容体を合わせ；
第一の組成物と基質を合わせ、ここで基質は、酵素供与体及び酵素受容体との相互作用によって切断できる；そして
酵素活性を検出する；
工程をさらに含む、請求項２３記載の方法。
【請求項２８】
既知の量のトピラメートと、トピラメート類似体及び抗体を合わせて、対照結合組成物を形成し；
酵素受容体と対照結合組成物を合わせ；
対照結合組成物と基質を合わせ、ここで基質は、酵素供与体及び酵素受容体との相互作用によって切断できる；
対照酵素活性を検出し；そして
試料中に存在するトピラメート量を決定する、ここで酵素活性及び対照酵素活性間の比較は、試料中に存在するトピラメート量の指標となる；
工程をさらに含む、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
酵素受容体を有するトピラメート類似体を得て；
第一の組成物と酵素供与体を合わせ；
第一の組成物と基質を合わせ、ここで基質は、酵素供与体及び酵素受容体との相互作用によって切断できる；そして
酵素活性を検出する；
工程をさらに含む、請求項２３記載の方法。
【請求項３０】
既知の量のトピラメートと、トピラメート類似体及び抗体を合わせて、対照結合組成物を形成し；
酵素供与体と対照結合組成物を合わせ；
対照結合組成物と基質を合わせ、ここで基質は、酵素供与体及び酵素受容体との相互作用によって切断できる；
対照酵素活性を検出し；そして
試料中に存在するトピラメート量を決定する、ここで酵素活性及び対照酵素活性間の比較は、試料中に存在するトピラメート量の指標となる；
工程をさらに含む、請求項２９記載の方法。
【請求項１】
試料中のトピラメートの存在を検出するための免疫診断アッセイにおいて使用するための系であって：
抗トピラメート抗体；及び
式１又は式２；
【化１】
式中、Ｌは、ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ、ＮＨＣＯ、ＮＨＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２、ＣＯＯ、又はＯ基の１つであり；
Ｘは、Ｌ及びＹ間の結合、芳香族基、又は脂肪族基の少なくとも１つであり；そして
Ｙは、脂肪族、アルコール、アミン、アミド、カルボン酸、アルデヒド、エステル、活性化エステル、脂肪族エステル、イミドエステル、イソシアネート、イソチオシアネート、無水物、チオール、チオラクトン、ジアゾニウム、マレイミド、ＮＨＳ、Ｏ−ＮＨＳ、及び作用基とカップリングした、これらに由来するリンカーからなる群より選択される；
の１つの化学構造を有する、トピラメート類似体；
を含む、前記系。
【請求項２】
Ｘは、Ｌ及びＹ間の結合、１〜２の環を有する置換又は非置換の芳香族又は脂肪族基、あるいは１〜２０の炭素及び／又はヘテロ鎖原子を有する、飽和又は不飽和、置換又は非置換、及び直鎖又は分枝鎖の少なくとも１つである、請求項１記載の系。
【請求項３】
類似体が、以下の少なくとも１つ：
Ｘは、ＣＨ２、（ＣＨ２）２、（ＣＨ２）３、（ＣＨ２）４、（ＣＨ２）５、（ＣＨ２）６、ＣＨ２ＣＯ、（ＣＨ２）２ＣＯ、（ＣＨ２）３ＣＯ、（ＣＨ２）４ＣＯ、（ＣＨ２）５ＣＯ、（ＣＨ２）６ＣＯ、ＣＨ２ＣＯＯ、（ＣＨ２）２ＣＯＯ、（ＣＨ２）３ＣＯＯ、（ＣＨ２）４ＣＯＯ、（ＣＨ２）５ＣＯＯ、（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＣＯ、ＣＯＯ、ＣＯＣＨ２、ＣＯ（ＣＨ２）２、ＣＯ（ＣＨ２）３、ＣＯ（ＣＨ２）４、ＣＯ（ＣＨ２）５、ＣＯ（ＣＨ２）６、ＣＯＣＨ２ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）４ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）５ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＣＯＣＨ２ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）４ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）５ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨＣＨ２、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２、Ｐｈ、ＣＯＮＨＣＨ２Ｐｈ、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＮＨＣＨ２、ＮＨ（ＣＨ２）２、ＮＨ（ＣＨ２）３、ＮＨ（ＣＨ２）４、ＮＨ（ＣＨ２）５、ＮＨ（ＣＨ２）６、ＮＨＣＨ２ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）５ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＮＨＣＨ２ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）５ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ、又はＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯであるか；又は
Ｙは、ＮＨＳ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−ＮＨＳ、ＣＯＯ−ｔｅｒｔブチル、ｔｅｒｔブチル、ＯＨ、Ｏ−ＮＨＳ、ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＯＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＯＣＨ３、又はＮＨ２基の少なくとも１つである；
によって特徴付けられる、請求項１記載の系。
【請求項４】
ＹはＹ１−Ｚであり、Ｙ１は、ＣＯＯ、ＣＯ、Ｏ、ＣＯＮＨ、又はＮＨの少なくとも１つからなる群より選択され、そしてＺは作用基である、請求項１記載の系。
【請求項５】
Ｚは、タンパク質、リポタンパク質、糖タンパク質、ポリペプチド、多糖、核酸、ポリヌクレオチド、テイコ酸、放射性同位体、酵素、酵素断片、酵素供与体断片、酵素受容体断片、酵素基質、酵素阻害剤、補酵素、蛍光部分、リン光部分、抗ストークス（ａｎｔｉ−ｓｔｏｋｅｓ）上方制御部分、化学発光部分、発光部分、色素、増感剤、粒子、微粒子、磁気粒子、固体支持体、リポソーム、リガンド、受容体、ハプテン放射性同位体、及びこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項４記載の系。
【請求項６】
抗体がポリクローナル抗体である、請求項５記載の系。
【請求項７】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項５記載の系。
【請求項８】
以下の少なくとも１つ：
トピラメートのストック組成物；
濃度勾配を形成する、異なる濃度のトピラメートを含有する一連の組成物；
トレーサー部分を有するトピラメート類似体；
微粒子を有するトピラメート類似体；
微粒子にカップリングした抗体；
酵素供与体を有するトピラメート類似体、及び対応する酵素受容体；
酵素受容体を有するトピラメート類似体、及び対応する酵素供与体；又は
ろ過又は沈降による分離に適した粒子上に装填された抗体；又は
少なくとも１：５，０００の力価の抗体；
をさらに含む、請求項５記載の系。
【請求項９】
以前トピラメートを投与された被験体から得た試料中のトピラメートの存在を検出するための免疫診断アッセイを行うための方法であって：
抗トピラメート抗体及びトピラメート類似体を試料と合わせて、第一の組成物を形成し、ここで、前記抗体はトピラメート及びトピラメート類似体と結合し、抗体又はトピラメート類似体の少なくとも一方が粒子又は微粒子にカップリングしている；
試料由来のいかなる遊離（ｆｒｅｅ）トピラメート及びトピラメート類似体も、抗体との結合に関して競合することができ；そして
トピラメート類似体及び抗体間の結合を検出する；
工程を含む、前記方法。
【請求項１０】
粒子が、ろ過又は沈降による分離に適した微粒子又は粒子の少なくとも１つである、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
トピラメート類似体が、式１又は式２；
【化２】
式中、Ｌは、ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ、ＮＨＣＯ、ＮＨＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２、ＣＯＯ、又はＯ基の１つであり；
Ｘは、Ｌ及びＹ間の結合、芳香族基、又は脂肪族基の少なくとも１つであり；そして
Ｙは、脂肪族、アルコール、アミン、アミド、カルボン酸、アルデヒド、エステル、活性化エステル、脂肪族エステル、イミドエステル、イソシアネート、イソチオシアネート、無水物、チオール、チオラクトン、ジアゾニウム、マレイミド、ＮＨＳ、Ｏ−ＮＨＳ、及び作用基とカップリングした、これらに由来するリンカーからなる群より選択される；
の１つの化学構造を有する、請求項９記載の方法。
【請求項１２】
Ｘは、Ｌ及びＹ間の結合、１〜２の環を有する置換又は非置換の芳香族又は脂肪族基、あるいは１〜２０の炭素及び／又はヘテロ鎖原子を有する、飽和又は不飽和、置換又は非置換、及び直鎖又は分枝鎖の少なくとも１つである、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
類似体が、以下の少なくとも１つ：
Ｘは、ＣＨ２、（ＣＨ２）２、（ＣＨ２）３、（ＣＨ２）４、（ＣＨ２）５、（ＣＨ２）６、ＣＨ２ＣＯ、（ＣＨ２）２ＣＯ、（ＣＨ２）３ＣＯ、（ＣＨ２）４ＣＯ、（ＣＨ２）５ＣＯ、（ＣＨ２）６ＣＯ、ＣＨ２ＣＯＯ、（ＣＨ２）２ＣＯＯ、（ＣＨ２）３ＣＯＯ、（ＣＨ２）４ＣＯＯ、（ＣＨ２）５ＣＯＯ、（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＣＯ、ＣＯＯ、ＣＯＣＨ２、ＣＯ（ＣＨ２）２、ＣＯ（ＣＨ２）３、ＣＯ（ＣＨ２）４、ＣＯ（ＣＨ２）５、ＣＯ（ＣＨ２）６、ＣＯＣＨ２ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）４ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）５ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＣＯＣＨ２ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）４ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）５ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨＣＨ２、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２、Ｐｈ、ＣＯＮＨＣＨ２Ｐｈ、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＮＨＣＨ２、ＮＨ（ＣＨ２）２、ＮＨ（ＣＨ２）３、ＮＨ（ＣＨ２）４、ＮＨ（ＣＨ２）５、ＮＨ（ＣＨ２）６、ＮＨＣＨ２ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）５ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＮＨＣＨ２ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）５ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ、又はＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯであるか；又は
Ｙは、ＮＨＳ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−ＮＨＳ、ＣＯＯ−ｔｅｒｔブチル、ｔｅｒｔブチル、ＯＨ、Ｏ−ＮＨＳ、ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＯＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＯＣＨ３、又はＮＨ２基の少なくとも１つである；
によって特徴付けられる、請求項１１記載の方法。
【請求項１４】
ＹはＹ１−Ｚであり、Ｙ１は、ＣＯＯ、ＣＯ、Ｏ、ＣＯＮＨ、又はＮＨの少なくとも１つからなる群より選択され、そしてＺは作用基である、請求項１１記載の方法。
【請求項１５】
Ｚは、タンパク質、リポタンパク質、糖タンパク質、ポリペプチド、多糖、核酸、ポリヌクレオチド、テイコ酸、放射性同位体、酵素、酵素断片、酵素供与体断片、酵素受容体断片、酵素基質、酵素阻害剤、補酵素、蛍光部分、リン光部分、抗ストークス上方制御部分、化学発光部分、発光部分、色素、増感剤、粒子、微粒子、磁気粒子、固体支持体、リポソーム、リガンド、受容体、ハプテン放射性同位体、及びこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
トピラメート類似体及び抗体を得て、ここでトピラメート類似体及び抗体の一方は微粒子とカップリングしている；
第一の組成物に入射光線を照射し；そして
第一の組成物由来の透過光の第一の強度を検出する；
工程をさらに含む、請求項９記載の方法。
【請求項１７】
トピラメート類似体及び抗体を有し、そして遊離トピラメートを持たない、対照結合組成物由来の透過光の最低強度を同定し；
透過光の第一の強度と透過光の最低強度を比較し；そして
トピラメートが試料中に存在するかどうかを決定する、ここで最低強度が第一の強度と異なるならば、試料中にトピラメートが存在する指標となる；
工程をさらに含む、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
既知の量のトピラメートと、トピラメート類似体及び抗体を合わせて、対照結合組成物を形成し；
対照結合組成物に入射光線を照射し；
対照結合組成物由来の透過光の第二の強度を検出し；そして
試料中に存在するトピラメート量を決定する、ここで第一の強度及び第二の強度間の比較は、試料中に存在するトピラメート量の指標となる；
工程をさらに含む、請求項１６記載の方法。
【請求項１９】
トレーサー部分を有するトピラメート類似体を得て；
第一の組成物から抗体を分離し；
抗体から未結合のトピラメート類似体を分離し；そして
抗体と結合しているトレーサー部分を検出する；
工程をさらに含む、請求項９記載の方法。
【請求項２０】
既知の量のトピラメートと、トピラメート類似体及び抗体を合わせて、対照結合組成物を形成し；
対照結合組成物から抗体を分離し；
第一の組成物から、抗体と結合しているトレーサー部分の第一の量を検出し；
対照結合組成物から、抗体と結合しているトレーサー部分の第二の量を検出し；そして
試料中に存在するトピラメート量を決定する、ここでトレーサー部分の第一の量及びトレーサー部分の第二の量の間の比較は、試料中に存在するトピラメート量の指標となる；
工程をさらに含む、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
抗体が粒子にカップリングしている、請求項１９記載の方法。
【請求項２２】
粒子が磁気粒子である、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
以前トピラメートを投与された被験体から得た試料中のトピラメートの存在を検出するための免疫診断アッセイを行うための方法であって：
抗トピラメート抗体及びトピラメート類似体を試料と合わせて、第一の組成物を形成し、ここで該抗体はトピラメート及びトピラメート類似体と結合し、トピラメート類似体は、酵素供与体又は酵素受容体の一方を有する；
試料由来のいかなる遊離トピラメート及びトピラメート類似体も、抗体との結合に関して競合することができ；そして
トピラメート類似体及び抗体間の結合を検出する；
工程を含む、前記方法。
【請求項２４】
トピラメート類似体が、式１又は式２；
【化３】
式中、Ｌは、ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨ、ＮＨＣＯ、ＮＨＣＨ２Ｐｈ、ＳＯ２、ＣＯＯ、又はＯ基の１つであり；
Ｘは、Ｌ及びＹ間の結合、芳香族基、又は脂肪族基の少なくとも１つであり；
Ｙは、脂肪族、アルコール、アミン、アミド、カルボン酸、アルデヒド、エステル、活性化エステル、脂肪族エステル、イミドエステル、イソシアネート、イソチオシアネート、無水物、チオール、チオラクトン、ジアゾニウム、ＮＨＳ、Ｏ−ＮＨＳ、及びマレイミド基からなる群より選択される官能基由来のリンカーであり；そして
Ｚは、酵素供与体又は酵素受容体である；
の１つの化学構造を有する、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
Ｘは、Ｌ及びＹ間の結合、１〜２の環を有する置換又は非置換の芳香族又は脂肪族基、あるいは１〜２０の炭素及び／又はヘテロ鎖原子を有する、飽和又は不飽和、置換又は非置換、及び直鎖又は分枝鎖の少なくとも１つである、請求項１記載の方法。
【請求項２６】
類似体が、以下の少なくとも１つ：
Ｘは、ＣＨ２、（ＣＨ２）２、（ＣＨ２）３、（ＣＨ２）４、（ＣＨ２）５、（ＣＨ２）６、ＣＨ２ＣＯ、（ＣＨ２）２ＣＯ、（ＣＨ２）３ＣＯ、（ＣＨ２）４ＣＯ、（ＣＨ２）５ＣＯ、（ＣＨ２）６ＣＯ、ＣＨ２ＣＯＯ、（ＣＨ２）２ＣＯＯ、（ＣＨ２）３ＣＯＯ、（ＣＨ２）４ＣＯＯ、（ＣＨ２）５ＣＯＯ、（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＣＯ、ＣＯＯ、ＣＯＣＨ２、ＣＯ（ＣＨ２）２、ＣＯ（ＣＨ２）３、ＣＯ（ＣＨ２）４、ＣＯ（ＣＨ２）５、ＣＯ（ＣＨ２）６、ＣＯＣＨ２ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）４ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）５ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＣＯＣＨ２ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）４ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）５ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨＣＨ２、ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ（ＣＨ２）２、Ｐｈ、ＣＯＮＨＣＨ２Ｐｈ、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＮＨＣＨ２、ＮＨ（ＣＨ２）２、ＮＨ（ＣＨ２）３、ＮＨ（ＣＨ２）４、ＮＨ（ＣＨ２）５、ＮＨ（ＣＨ２）６、ＮＨＣＨ２ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）５ＣＯ、ＮＨ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＮＨＣＨ２ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）２ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）３ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）４ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）５ＣＯＯ、ＮＨ（ＣＨ２）６ＣＯＯ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯ、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＯ、又はＮＨＣＯ（ＣＨ２）６ＣＯＯであるか；又は
Ｙは、ＮＨＳ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−ＮＨＳ、ＣＯＯ−ｔｅｒｔブチル、ｔｅｒｔブチル、ＯＨ、Ｏ−ＮＨＳ、ＣＯＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＯＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＯＣＨ３、又はＮＨ２基の少なくとも１つである；
によって特徴付けられる、請求項２４記載の方法。
【請求項２７】
酵素供与体を有するトピラメート類似体を得て；
第一の組成物と酵素受容体を合わせ；
第一の組成物と基質を合わせ、ここで基質は、酵素供与体及び酵素受容体との相互作用によって切断できる；そして
酵素活性を検出する；
工程をさらに含む、請求項２３記載の方法。
【請求項２８】
既知の量のトピラメートと、トピラメート類似体及び抗体を合わせて、対照結合組成物を形成し；
酵素受容体と対照結合組成物を合わせ；
対照結合組成物と基質を合わせ、ここで基質は、酵素供与体及び酵素受容体との相互作用によって切断できる；
対照酵素活性を検出し；そして
試料中に存在するトピラメート量を決定する、ここで酵素活性及び対照酵素活性間の比較は、試料中に存在するトピラメート量の指標となる；
工程をさらに含む、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
酵素受容体を有するトピラメート類似体を得て；
第一の組成物と酵素供与体を合わせ；
第一の組成物と基質を合わせ、ここで基質は、酵素供与体及び酵素受容体との相互作用によって切断できる；そして
酵素活性を検出する；
工程をさらに含む、請求項２３記載の方法。
【請求項３０】
既知の量のトピラメートと、トピラメート類似体及び抗体を合わせて、対照結合組成物を形成し；
酵素供与体と対照結合組成物を合わせ；
対照結合組成物と基質を合わせ、ここで基質は、酵素供与体及び酵素受容体との相互作用によって切断できる；
対照酵素活性を検出し；そして
試料中に存在するトピラメート量を決定する、ここで酵素活性及び対照酵素活性間の比較は、試料中に存在するトピラメート量の指標となる；
工程をさらに含む、請求項２９記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【公表番号】特表２００８−５１８２３３（Ｐ２００８−５１８２３３Ａ）
【公表日】平成２０年５月２９日（２００８．５．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５３９０２８（Ｐ２００７−５３９０２８）
【出願日】平成１７年１０月２１日（２００５．１０．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０３８２５７
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０４７４５０
【国際公開日】平成１８年５月４日（２００６．５．４）
【出願人】（５０７１３７０１４）セラダイン，インコーポレーテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年５月２９日（２００８．５．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１０月２１日（２００５．１０．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０３８２５７
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０４７４５０
【国際公開日】平成１８年５月４日（２００６．５．４）
【出願人】（５０７１３７０１４）セラダイン，インコーポレーテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
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