ハニーブッシュの抗糖尿病性抽出物
糖尿病を治療するための、ハニーブッシュ由来の新規かつ有用な組成物が提供される。本発明は、詳細には２型糖尿病の治療に関する。本発明の植物抽出物は、約１mg/kg体重から約５mg/kg体重までの量、好ましくは約２．５mg/kg体重までの量で投与すると
優れた抗糖尿病効果を示す。
優れた抗糖尿病効果を示す。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然物の分野に関し、より詳細には糖尿病の治療に有用な植物抽出物（植物エキス）および化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
非感染性疾患である糖尿病は、２つの主要な型、即ち１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）および２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）に分別することができる。Ｔ１Ｄは、β細胞の自己免疫性を特徴とする。Ｔ２Ｄでは、膵臓β細胞がインスリンを不十分にしか産生せず、末梢組織（肝臓、筋肉および脂肪組織）がインスリンの作用に対して「抵抗性」になる、即ちグルコースの取込みがこれらの標的組織において非効率になる。β細胞はＴ２Ｄの後期段階に破壊されることも多く、患者はインスリン治療に依存するようになる。糖尿病患者のうち、約５〜１０％は１型糖尿病であり、９０〜９５％は２型糖尿病である。主な糖尿病合併症としては、網膜症、脳血管疾患、冠動脈心疾患、ニューロパシー、末梢血管疾患、潰瘍および手足等の切断が挙げられる。こうして糖尿病は、身体全体の複数の器官および組織に影響を及ぼす。糖尿病の発症に寄与する因子としては、民族性（特に、移民の場合、特定の集団でＴ２Ｄ発生率が高い）、肥満、高脂肪食、子宮内環境、インスリン抵抗性および特定の候補遺伝子が挙げられる。
【０００３】
２型糖尿病の発生率は、世界的に増加している。遺伝的要因もその役割を担う可能性があるが、生活習慣の変化、例えば高脂肪の西洋食を取り入れたことで肥満となり、それがこの疾患が増加する要因にもなり得る。生活習慣の要因、例えば脂肪摂取量の増加および運動量の減少が、肥満およびインスリン抵抗性に関連することが示されている（非特許文献１および２参照）。ラットでは、高脂肪食はインスリン刺激による解糖およびグリコーゲン合成の低下に関連したインスリン抵抗性の状態を誘発する（非特許文献３参照）。この疾患は、末梢インスリン応答組織、例えば筋肉および脂肪組織がインスリン応答性を著しく低下させ、血中のグルコースおよび脂肪酸の循環が増加した結果である。インスリンへの応答性が低いと解糖が減少し、その一方で、健常な状態ならインスリンによりスイッチが切られている肝臓での糖新生およびグリコーゲン分解が開始する。膵臓β細胞は、過剰なインスリンを産生し、分泌されるインスリン量を増加させることにより、初期インスリン抵抗期を切り抜けることができる（非特許文献４参照）。正常血糖を維持するために結果的に高インスリン血症となり、最終的に細胞の機能不全となり（非特許文献５参照）、顕性糖尿病となる。２型糖尿病が末梢および細胞レベルの両方で生じる傷害に依存することは明白である（非特許文献６参照）。
【０００４】
インスリン抵抗性とそれに続くβ細胞の不全が、正常な耐糖能から耐糖能障害を介したＴ２Ｄへの進行に影響を及ぼす主因であることは確定されている。田舎から都会への移住に伴う生活習慣の変化が、都会の黒人南アフリカ人の肥満を増加させ、これがインスリン抵抗性につながるが、これはＴ２Ｄのもう一つの特徴である。インスリン抵抗状態を補うために、β細胞はより多くのインスリンを産生し、このため既にオーバーワークとなったβ細胞への要求が高まり、β細胞が疲弊して最終的にはβ細胞不全となる。
【０００５】
１９８５年には世界の推定３０００万人が糖尿病であった。１９９５年までにその数は１億３５００万人に増加した。近年の世界保健機関（ＷＨＯ）の推定では、２０２５年には１２２％増加して、３億人が糖尿病となるようである。これは、２０２５年に３億３３００万人が糖尿病になり（罹患率６．３％）、４億７２００万人が耐糖能障害と診断される（ＩＧＴ；罹患率９％）という国際糖尿病連合（ＩＤＦ）の推定と一致する。先進国では５１００万人から７２００万人に４２％増加し（過体重および肥満の人が増加して、糖
尿病になるリスクが上昇）、発展途上国では８４００万人から２億２８００万人に１７０％増加する（食事の変化、身体活動の増加および急速な都市化など多数の因子により）と推定される。こうして糖尿病はこれまでは先進国の人々に影響を及ぼす西洋型の生活習慣病の疾患とみなされていたが、現在の傾向から２０２５年までに糖尿病の全人口の７５％が発展途上地域の人になることが示唆されている。発展途上地域の糖尿病発生率を高める別の因子は、発達プログラミングである。発展途上地域の多くの区分では、人々は子宮内で食糧不足（栄養不足）にさらされ、続いて生後に栄養過剰となることが多く、それがヒトにＴ２Ｄの素因を与えることが示された。更に現在では総数１１億人が過体重であり、３億２０００万人が肥満である（ＩＤＦ）。これが、肥満の多大な世界的経済負担を高めているが、肥満は糖尿病発生の主な危険因子であるため、これはすでに多大となっている糖尿病関連の経済負担を更に悪化させる可能性がある。
【０００６】
最小データに基づく南アフリカの控えめな推定値によれば、２０００年の５６０万人から２０１０年には８００万人増加すると予測されている。この最大の増加は、都市化を原因とする可能性が高く、それは黒人人口での生活習慣と、低脂肪食から高脂肪食への食事変化を伴うためである。１９９８年の数字は、都市の黒人南アフリカ人でＴ２Ｄ発生率が上昇し、その年齢別罹患率が８％近くにのぼり（非特許文献７参照）、１９７４年に発表された数字４．２％（非特許文献８参照）のほぼ２倍であることを示す。１９９６年の南アフリカでの死因上位２０位のデータ（非特許文献９参照）から、糖尿病が男性の１０位、女性の７位であることが明らかとなった。しかし糖尿病の合併症、例えば虚血性心疾患ならびに他の心臓血管および腎臓合併症が、死亡数に著しく寄与しており、調整した数字では、糖尿病が南アフリカでの死因の上位３または４位となる可能性がある。Ｔ２Ｄの発生率は、南アフリカのＨＩＶよりも大きく、つまりＴ２Ｄが国家的な注意事項であることは確かである。
【０００７】
糖尿病は高くつく疾患であり、南アフリカでの糖尿病治療にかかる経費の情報は入手できないが、間接的な経費が多く存在する。これらには、生活の質の低下、コミュニティーおよび全労働人口に寄与する能力ならびに経済へのその影響が挙げられる。これは、医療支援計画（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｉｄ Ｓｃｈｅｍｅｓ）への経費増加により悪化して、医療支援保険料（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｉｄ ｐｒｅｍｉｕｍｓ）を上昇させる。糖尿病は、経済にも直接、影響を及ぼす。南アフリカでの糖尿病関連の会計データはないが、英国で発表されたデータから、現在、糖尿病およびその合併症と診断されている英国の１５０万人を超える成人では、ナショナル・ヘルス・サービス（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｈｅａｌｔｈ
Ｓｅｒｖｉｃｅ）（ＮＨＳ）の総経費が１年あたり５２億ポンドであり、それがＮＨＳの総運営費の９％であることが示された。米国では、推定される直接費用は４４０億米国ドルであり、生産性の損失を加えるとこの数字は９８０億米国ドルに上昇する。同様の数字を、他の多くの国々についても得られる。
【０００８】
Ｔ２Ｄは、血漿グルコースレベルの上昇により診断される。しかし我々の過去の研究から、血糖値が上昇する時点までに、心臓血管系および膵臓に既に重篤な障害が生じていることが示された。血糖値上昇により糖尿病と診断された後に、例えば食事および運動ならびに／または利用可能な医薬処理などの治療によって血漿グルコースレベルを一時的に改善させることはできるが、疾患の進行を止めることはできない。これらの治療が不能となる割合は、β細胞が低下し続ける割合に関係する。現在の治療は、インスリン注射もしくはインスリン放出の刺激および／または医薬の作用を伴う。
【０００９】
膵臓によるインスリン産生の損傷から糖尿病状態に至るまでを説明する理論は多く存在する。２つの論文を参照する（非特許文献１０および１１参照）。これらの論文は、膵島の炎症がインスリン産生を妨害することを示している。具体的には膵島でインスリンを産生するβ細胞が、免疫攻撃により破壊される。そのようなβ細胞の破壊は、ＮＫ（ナチュ
ラルキラー）細胞およびダブルネガティブＴリンパ球など複数の型の免疫細胞から攻撃を受けるためと認識されている。
【００１０】
糖尿病は、治癒方法が知られておらず、潜行性であると考えられている。しかし、様々な治療を用いて、糖尿病が改善されてきた。例えば糖尿病の測定値を用いて、患者のタンパク質、脂肪、および炭水化物の相対量の均衡が保たれてきた。糖尿病の教育および認識プログラムも、いくつかの国で実行されてきた。加えて中等度または重度の糖尿病状態は、インスリン投与により治療されている。同じく「グルコシド」などの処方薬を用いて、成人発症の糖尿病で損傷されたインスリン産生を活性化させている。他の薬物を用いて、インスリンの有効性を調節している。いずれの場合でも、若年または成人のいずれかで発症した糖尿病の治療は、部分的にしか成功に至っていない。これは、ほとんどの薬物がβ細胞機能改善またはインスリン抵抗性の低下のいずれかを目的としており、疾患が徐々に増悪すると効果が減少するためである。このため患者は、疾患を抑制する薬物の併用（多くの場合、連日）を必要とする。
【００１１】
メトホルミンなどのビグアニドは、１９５０年代後期に２型糖尿病の治療に使用できるようになり、それ以来、効果的な血糖降下剤となった（非特許文献１２）。これらの薬剤の厳密な分子メカニズムは、ほとんど知られていない。メトホルミンは、インスリン抵抗改善薬として主に肝臓で作用し、そこでそれはグルコースの放出を抑制する（非特許文献１３）。メトホルミンは、呼吸鎖の複合体Ｉの酵素活性を阻害することが示されたが、それによりミトコンドリア機能および細胞呼吸の両方を減じ、それを行うことでＡＴＰ／ＡＤＰ比が低下してＡＭＰにより活性化されたプロテインキナーゼが活性化されると、短期的には触媒反応を起こし、長期的にはインスリン抵抗性改善を起こす（非特許文献１４および１５参照）。この薬物は、単独療法およびスルホニル尿素またはインスリンとの併用の両方に効果的であることが立証された（非特許文献１６参照）。若年性糖尿病は、発生率が増加しつつある世界的現象である。β細胞の発生、分化および機能にとって重要となる幾つかの主要な転写因子が、若年性糖尿病に関与する。これらの幾つかは、現在用いられる治療薬の直接の標的である。現在用いられる糖尿病薬の経費は非常に高く、より安価な代替治療の開発が有利となろう。Ｔ２Ｄの世界的負担は多大である。利用可能な糖尿病治療に持ちこたえて、罹患した患者の生活の質を改善する戦略的行動が必要である。これは、発展途上地域では特に当てはまる。このため、科学者たちは自国の生来の植物抽出物の有効性を研究している。
【００１２】
ハニーブッシュ（シクロピア（Ｃｙｃｌｏｐｉａ）種）は、南アフリカ共和国のウエスタン・ケープ州およびイースタン・ケープ州原産であり、蜂蜜のように、快く穏やかに甘い味と芳香を有するハーブティーを製造するために使用される。１９９０年代に、ハーブティーとしての、および通常の茶（カメリア・シネンシス（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）の代替物としてのハニーブッシュに対する関心が、現地市場および国際市場の両方で復活した。生産された大部分の茶は、現在国際的に市販されている。
【００１３】
ハニーブッシュへの国際的関心は、オランダ人および英国人の茶貿易まで遡る。後にケープタウンとなった入植地が、インドのお茶および東南アジアの香辛料を取引していたオランダの東インド会社の供給拠点として１６５２年に確立された。植物学者は、その後すぐに岬の豊富な植物相のカタログを作成し始め、ハニーブッシュという植物は１７０５年までに植物学の文献に記された。ハニーブッシュは入植者により、恐らく観察による原産地の慣習に基づいて、通常の茶の適切な代替物とすぐに認められた。１８１４年には、ケープ植民地が英国の支配下に入り、数年後には英語が公用語となったが、これは南アフリカの知識を英国と米国を広げるのを促進した。１８７１年（非特許文献１７）には、ランゲバーグ（Ｌａｎｇｅｂｅｒｇ）山とシュバルツバーグ（Ｓｗａｒｔｂｅｒｇ）山に野生で生息する茶（「バーグ茶」（ｂｅｒｇｔｅｅ）と呼ばれる）は、それらの地域で飲料と
して広範囲に使用されていたことに留意する。１８９８年版のアメリカ薬品解説書（Ｋｉｎｇ‘ｓ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｅｓｐｅｎｓａｔｏｒｙ）には、茶の見出しの下、南アフリカのケープ植民地の茶としてのハニーブッシュの使用を示す１８８１年からの報告書を参照して、ハニーブッシュは代替物として既に列挙されている。初期の入植者は、ハニーブッシュの煎じ汁を慢性カタルおよび肺結核の去痰薬としても使用していた（非特許文献１８）。また、ハニーブッシュの煎じ汁は強壮薬としても使用されていた。非特許文献１９によれば、ハニーブッシュは健胃薬（消化の援助薬）として評価されていた。
【００１４】
ハニーブッシュという植物は、フィンボス（ｆｙｎｂｏｓ）の植物帯（バイオーム）で生育するマメ科（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ）の潅木である。バイオームは山脈によって境界を分けられた海岸沿いの狭い地域である。フィンボスは、主として小さな革のような葉を有する木のような植物により特徴付けられた植物の種類である（フィンボスは、細かい葉の植物を意味するオランダ語に由来する）。
【００１５】
ハニーブッシュ植物は、三出葉、単生花を咲かせる花序、および甘く香る鮮黄色の花により容易に識別される。花は、花弁に目立つ溝があり、がくの基部が割り込んでおり（侵入している）、小花柄の周囲の基部で融合した２つの包葉を有している。シクロピアの属名は、がくの侵入する基部をほのめかすものであり、これは花の独特な外観に寄与している。 ハニーブッシュ植物は木のような茎と、茎に対して比較的低い葉の比と、殻の硬い種子を有する。茶のための最も望ましい構成要素は葉と花であるが、比較的無味の茎も製品に含まれている。
【００１６】
大部分のハニーブッシュティーは、いまだ野生集団から収集されているが、産業の急速な成長に伴い栽培が必要になっている。南アフリカのこの狭い地域で識別されているシクロピアは約２ダースの種があるが、ハニーブッシュの商用供給源はシクロピア インターメディア（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）とシクロピア サブターナタ（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｓｕｂｔｅｒｎａｔａ）から主に得られる。ほとんどの種は分布範囲が非常に限られており、固有の生息地選好を有している。いくつかの種は、山頂、恒常河川、湿地領域、頁岩地帯または湿地の南斜面に限られている。シクロピア マキュレータ（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｍａｃｕｌａｔａ）、シクロピア ゲニストイデス（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｇｅｎｉｓｔｏｉｄｅｓ）およびシクロピア セシリフローラ（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｓｅｓｓｉｌｉｆｌｏｒａ）等のいくつかの種が、家庭での消費用に使用されている。すべてのシクロピア種がお茶を作るのに適しているようであるが、味の品質は変わる場合があり、また、いくつかの種は非常に少量しか存在しない。
【００１７】
葉形および葉のサイズは種間で異なるが、大部分は、薄い針のような細長い葉である。すべての種は、それらが特有の甘い蜂蜜の匂いのする特殊な濃黄色の花で覆われているため、開花期に野原で容易に識別される。伝統的に、茶は開花中に、種の開花期間に依存して、初秋または晩春のいずれかに収穫される。しかしながら、製品に対するより大きな需要があるため、今は収穫が夏に起こっている。
【００１８】
南アフリカにおけるハニーブッシュの生産は、近年著しく成長している。１９９９年には、約５０トンの植物が輸出され、２００５年までに３００トンまで成長しており、主な市場はドイツである。ほとんどの茶は輸出されるが、国内消費にも実質的な成長があった。茶は、従来の「発酵」（酸化）製品として主として売られており、緑（「無発酵」）のハニーブッシュは少量であり、最初の商用生産は２００１年では地域市場と国際市場の両方で売られている。
【００１９】
ハニーブッシュティーは単純なハーブの煎じ汁として作られる。茶代替品としてその初期に認識された利点の１つは、カフェインがないことであり、これは夜間に消費したり、
また、神経過敏に係っていて通常の茶を避けたい人に特に適している。その結果、ハニーブッシュティーは、特定の鎮静特性は有しないかもしれないが、気分を鎮める飲料としての評判を有していた。また、ブッシュ茶は通常の茶よりタンニン酸含量が低いため、いくつかの等級の紅茶または緑茶に関する問題であったり通常の茶が長く浸されすぎた場合の問題であったりする、非常に渋みのある茶にはならない。
【００２０】
咳を治療するための茶の従来の使用は、一部分では、イノシトールに類似した修飾した糖であるピニトールの含量（グルコースの１つの位置の水素とメチル基が置き換わっている）によって説明され得る。ピニトールは、その主な供給源である松の木（パインツリー）から共鳴したものであるが、いくつかのマメ科植物の葉に見出され、去痰薬である。ピニトールは、実験室の動物試験で実証されているように血糖値低下作用を有するらしい（インスリンの作用を増加させ得る）ことに関心が向けられており、糖尿病薬と見なされている。ハニーブッシュは、キサントン、フラバノン、フラボン、イソフラボン、クメスタンおよび４−ヒドロキシ桂皮酸を含み、シクロピア種間にはフェノール化合物の質および量に差がある。マンギフェリンとヘスペリジンはシクロピア種における主要なモノマーのポリフェノールである。ポリフェノールは酸化防止剤として役立ち、血中脂質を保護するのを支援し得る。イソフラボンとクメスタンは、フィトエストロゲンとして分類され、ハニーブッシュが最近評価された応用例として、更年期症状の治療に使用されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】Ｌｉｐｍａｎ他，１９７２年
【非特許文献２】ＬｏｖｅｊｏｙおよびＤｉＧｉｒｏｌａｍｏ，１９９２年
【非特許文献３】Ｋｉｍ他，２０００年
【非特許文献４】Ｐｉｒｏｌ他，２００４年
【非特許文献５】Ｋｈａｎ、２００３年
【非特許文献６】Ｋｈａｎ他，２０００年
【非特許文献７】Ｌｅｖｉｔｔ他，１９９３年
【非特許文献８】ＪｏｆｆｅおよびＳｅｆｔｅｌ
【非特許文献９】Ｂｒａｄｓｈａｗ他，１９９６年
【非特許文献１０】Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅに発表されたＮｅｒｕｐ Ｊ， Ｍａｎｄｒｕｐ−Ｐｏｕｌｓｅｎ Ｔ， Ｍｏｌｖｉｇ Ｊ， Ｈｅｌｑｖｉｓｔ Ｓ， Ｗｏｇｅｎｓｅｎ Ｌ， Ｅｇｅｂｅｒｇ Ｊ．、「Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｂｅｔａ−ｃｅｌｌ ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｙｐｅ Ｉ ｄｉａｂｅｔｅｓ」１９８８年；１１ 補足１：ｐ１６〜２３
【非特許文献１１】「Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｉｍｂａｌａｎｃｅ ａｎｄ Ｄｏｕｂｌｅ Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｔ Ｃｅｌｌｌｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ， Ｐｒｏｎｅ ａｎｄ Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ａｎｉｍａｌｓ」Ｈｏｓｓｚｕｆａｌｕｓｉ， Ｎ．， Ｃｈａｎ， Ｅ．，Ｇｒａｎｇｅｒ．，およびＣｈａｒｌｅｓ， Ｍ．；Ｊ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ， ５巻、ｐ３０５〜１８（１９９２年）
【非特許文献１２】ＶｉｇｎｅｒｉおよびＧｏｌｄｆｉｎｅ，１９８７年
【非特許文献１３】Ｇｏｌｄｆｉｎｅ，２００１年
【非特許文献１４】Ｂｒｕｎｍａｉｒ他，２００４年
【非特許文献１５】Ｔｉｉｋｋａｉｎｅｎ他，２００４年
【非特許文献１６】ＤａｖｉｄｓｏｎおよびＰｅｔｅｒｓ，１９９７年
【非特許文献１７】Ｓｍｉｔｈ，１９６６
【非特許文献１８】Ｗａｔｔ＆Ｂｒｅｙｅｒ−Ｂｒａｎｄｗｉｊｋ，１９３２年
【非特許文献１９】Ｍａｒｌｏｔｈ，１９２５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
インスリンはその脂肪生成的効果のため、２型糖尿病患者の肥満を促進するという望ましからぬ影響を有する（Ｍｏｌｌｅｒ， Ｄ． Ｅ．（２００１年） Ｎａｔｕｒｅ ４１４巻：ｐ８２１〜８２７参照）。不幸にも２型糖尿病患者のグルコース輸送を刺激するために現在用いられている他の抗糖尿病薬、例えばメトホルミンも、脂肪生成活性を有する。つまり現行の薬物療法は、血糖値の低下をもたらし得るが、多くの場合、肥満を促進する。したがって高血糖を治療する新しい組成物および治療方法が、望ましい。脂肪生成の副作用を伴わずにグルコース取込みを刺激する組成物が、特に望ましい。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本発明によれば、糖尿病を治療するための、ハニーブッシュ由来の新規かつ有用な組成物が提供される。
意外にも、本発明の植物抽出物を体重kgあたり約１mg〜約５mg、好ましくは約２．５mgの量で投与すると、優れた抗糖尿病効果を示すことが見出された。
【００２４】
従って、１〜２．５mg/kg体重の投与量で投与される、シクロピア属植物の水性抽出物
を含む抗糖尿病組成物を提供する。
本発明の治療は、本発明者がハニーブッシュ（シクロピア種、フィンボス）の水性抽出物が血糖値の抑制に効果的であることを見出したことから発見された。本発明による医療用途では、植物を回収し、乾燥させて、水および／またはアルコール、好ましくはエタノールなどの溶媒と混合する。
【００２５】
したがって第１の態様において、本発明は、シクロピア属植物の水性抽出物を含む抗糖尿病組成物に関し、シクロピア属は、好ましくはシクロピア ゲニストイデス（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｇｅｎｉｓｔｏｉｄｅｓ）、シクロピア サブターナタ（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｓｕｂｔｅｒｎａｔａ）、シクロピア インターメディア（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）、シクロピア セシリフローラ（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｓｅｓｓｉｌｉｆｌｏｒａ）、
シクロピア マキュレータ（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｍａｃｕｌａｔａ）、シクロピア ロンギフォリア（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｌｏｎｇｉｆｏｌｉａ）、シクロピア ピリカータ（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｐｌｉｃａｔａ）、シクロピア パベセンス（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ）、シクロピア ボーキシフロリア（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｂａｕｘｉｆｌｏｌｉａ）、シクロピア マイヤリアナ（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｍｅｙｅｒｉａｎａ）、および／またはそれらの組み合わせである。
【００２６】
本発明の別の態様において、
（ａ）シクロピア植物またはその一部を提供するステップ、
（ｂ）前記植物またはその一部を、前記植物抽出物の可溶化に適した水および／またはアルコール、好ましくはエタノールなどの非毒性溶媒と併用するステップ、
（ｃ）前記植物抽出物を回収するステップ、および
（ｄ）任意選択で乾燥させるステップ、
を含む抗糖尿病効果を有する植物シクロピアの治療抽出物を単離する方法が提供される。
【００２７】
本発明者は、植物シクロピア属の抽出物を投与すると、特に糖尿病前状態とも呼ばれる糖尿病の初期段階で糖尿病の治療が可能になることを見出した。
つまり本発明は、植物シクロピア属由来の組成物、ならびに高血糖患者、特に２型糖尿病患者および過体重の糖尿病患者を治療する方法に関する。好ましい実施形態において、本発明は、高血糖の患者を治療するためのシクロピア植物抽出物を提供する。
【００２８】
本発明は、高血糖の患者の血糖値を低下させる方法も提供する。その方法は、シクロピ
ア植物抽出物を高血糖患者に投与することを含む。その抽出物を注射により患者に投与することはできるが、好ましい投与方法は、経口投与を含む。その方法は、高血糖の患者および糖尿病患者を治療するのに有用である。その方法は、２型糖尿病に罹患していて特にその初期段階にある過体重の患者を治療するのに特に有用である。
【００２９】
本発明者は、本発明の抽出物がＧｌｕｔ４およびＧｌｕｔ２の活性を独立した手法で上昇させるため、幾つかの例ではこれらのグルコーストランスポータが両者ともより活性化されるが、他の例ではそれらの一方のみが活性となることも見出した。したがって本発明は、シクロピアの抽出物をＧｌｕｔ４および／またはＧｌｕｔ２の活性を上昇させる量で、ほ乳類に投与するステップを含む、ほ乳類の糖尿病を抑制する方法も提供する。
【００３０】
その結果、本発明は、その抽出物の活性成分をスクリーニングするのにも有用である。つまり本発明は更に、Ｇｌｕｔ４および／またはＧｌｕｔ２の活性を上昇させる化合物を決定するステップを含む、抽出物の特定の化合物をほ乳類における抗糖尿病活性についてスクリーニングする方法を提供する。
【００３１】
シクロピアの水蒸気または水性抽出物が血糖の抑制に効果的であることを本発明者が見出したことから、本発明の治療が発見された。使用する場合、その植物を回収して乾燥させ、沸騰水と混合する。その後、抽出物を患者に一定周期で経口摂取させる。シクロピアは、フラボノイドおよび他の第２の植物産物が豊富であることが公知である。
【００３２】
シクロピアから特異的なフラボノイドを抽出および分画し、それを糖尿病ラットに投与したところ、抽出物によるものと同様の結果が得られた。具体的に用いられたフラボノイドは、マンギフェリンおよびヘスペリジンであった。その後、これらのフラボノイドを併用すると最も効果的となることが発見された。実に意外なことに、特にマンギフェリンは、血糖の低下に効果的であり、Ｔ１ＤおよびＴ２Ｄラット両方の糖尿病症状を概ね改善するのに効果的であることが見出された。従来の知識はこの２種の糖尿病形態が基本的に異なる原因（それぞれβ細胞破壊および筋肉内でのインスリン抵抗性）を有すると教示しているため、この結果は予期せぬものであった。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】ＧＭＰ ＡＲＣ１３７の製造に用いられる、シクロピア植物材料の水性抽出物のＨＰＬＣフィンガープリントを示す（Ａ＝２８８nmでのクロマトグラム；Ｂ＝３２０nmでのクロマトグラム）。
【図２】ＧＭＰ ＡＲＣ１３７のＨＰＬＣフィンガープリントを示す（Ａ＝２８８nmでのクロマトグラム；Ｂ＝３２０nmでのクロマトグラム）。
【図３】６時間のモニタリング期間でプロットされた、対照サル２匹の１時間あたりの血糖値を示す。ベースライン値（０時間）は、サルが維持食ボーラスを摂取する前の絶食時血糖値を表す。
【図４】対照群のベースライン血糖値から計算された平均血糖値低下率または上昇率を示す。血糖値はベースライン値前後を保持し、サルが維持食を７０ｇ摂取した後３、４および５時間目に、わずかに低い値が認められた。
【図５】６時間のモニタリング期間でプロットされた、１mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を摂取した実験群のサル３匹の血糖値を示す。ベースライン値（０時間）は、サルが１mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含む維持食ボーラスを摂取する前の絶食時血糖値を表す。
【図６】ベースライン血糖値から計算された平均血糖値低下率または上昇率を示す。血糖の最大低下率は、１mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７摂取後２時間目に生じた。顕著に低い血糖値が、３および４時間目に依然として保持された。
【図７】６時間のモニタリング期間でプロットされた、２．５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を摂取した実験群のサル３匹の血糖値を示す。ベースライン値（０時間）は、サルが２．５mg/kgをＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含む維持食ボーラスを摂取する前の絶食時血糖値を表す。
【図８】ベースライン血糖値から計算された平均血糖値低下率または上昇率を示す。血糖の最大低下率は、１mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７摂取後２時間目に生じた。著しい血糖値低下が、その後、この低下したレベルはモニタリング期間の全６時間にわたり保持された。
【図９】６時間のモニタリング期間でプロットされた、５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を摂取した実験群のサル３匹の血糖値を示す。ベースライン値（０時間）は、サルが５．０mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含む維持食ボーラスを摂取する前の絶食時血糖値を表す。
【図１０】ベースライン血糖値から計算された平均血糖値低下率または上昇率を示す。ＧＭＰを受けて２時間目に、わずかな減少ではあるが平均血糖値の割合がベースラインより低い値まで低下し、残りの４時間のモニタリング期間、このレベルが保持された。
【図１１】６時間のモニタリング期間でプロットされた、２５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を摂取した実験群のサル３匹の血糖値を示す。ベースライン値（０時間）は、サルが２．５mg/kgＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含む維持食ボーラスを摂取する前の絶食時血糖値を表す。
【図１２】ベースライン血糖値から計算された平均血糖値低下率または上昇率を示す。２５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を摂取した後の血糖値の割合は、モニタリング期間の１時間ごとのすべての時点でベースライン値よりもわずかに低く、血糖値最大低下率は３時間目に生じた。
【図１３】単回の２５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７経口投与の後、３時間実施されたＯＧＴＴ（１g/kgグルコース）の結果を示す。得られたＳＴＺラットの血漿グルコースレベルは、摂取された時間全ての対照グルコース値と比較して低かった。
【図１４】単回の１mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７経口投与の後、３時間実施されたＯＧＴＴ（１．７５g/kgグルコース）の結果を示す。得られたサルＮｏ．７８の血漿グルコースレベルは、未処理サルグルコース値と比較すると、最初の９０分間低かった。
【図１５】７日間、ベルベットモンキーに異なる投与量の抽出物（ＡＲＣ１３７）で処理した後の６時間にわたる血漿グルコースの低下率を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
以下の記載を、当業者が本発明を製造および使用できるようにし、本発明者が予期する本発明実施の最良の形態を説明するために提供する。しかし、フラボノイドの投与を介して、特に本発明による植物抽出物の投与を介して、インスリン依存性およびインスリン非依存性の両方の糖尿病の治療を提供するために、本発明の一般原理を本明細書に具体的に定義しているため、当業者には容易に様々な改良が明白であろう。
定義
用語「糖尿病」は、一般にグルコースの産生および使用における代謝欠損により、体内で適切な血糖値を保持することができなくなることを特徴とする疾患または状態を意味する。これらの欠損の結果が、高血糖と呼ばれる血糖値の上昇である。２種の主な糖尿病形態が、１型糖尿病および２型糖尿病である。先に記載されたとおり１型糖尿病は、一般にインスリン、つまりグルコース利用を調節するホルモンの絶対的な欠乏の結果である。２型糖尿病は、多くの場合、正常または高いインスリン値であるにもかかわらず起こり、組織がインスリンに適宜応答することができないために生じる可能性がある。ほとんどの２型糖尿病患者は、インスリン抵抗性であり、インスリンの相対的な欠乏を有し、その場合、インスリン分泌物によって末梢組織によるインスリン応答への抵抗を補うことができない。加えて、多くの２型糖尿病は、肥満でもある。他の型のグルコース恒常性障害には耐糖能障害があり、これは正常なグルコース恒常性と糖尿病の間の中間的な代謝状態である。２型糖尿病および耐糖能障害の診断のガイドラインは、米国糖尿病学会（Ａｍｅｒｉｃ
ａｎ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）により要約されている（例えば、Ｔｈｅ Ｅｘｐｅｒｔ Ｃｏｍｍｕｎｉｔｔｅｅ ｏｎ ｔｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｍｅｌｌｉｔｕｓ， Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ，（１９９２年）２巻（補足１）：Ｓ５〜１９）。
【００３５】
用語糖尿病の「症状」としては、非限定的に、多尿症、多飲症、多食症、高インスリン血症、および本明細書で用いられる高血糖が挙げられ、その一般的な用法を含む。例えば「多尿症」は所定の期間に多量の尿が通過することを意味し；「多飲症」は慢性の口渇を意味し；「多食症」は過食を意味し、高インスリン血症は高レベルの血中インスリンを意味する。糖尿病の他の症状としては、例えば特定の感染の感受性上昇（特に真菌およびブドウ球菌感染）、吐気、およびケトアシドーシス（血中ケトン体の産生増加）が挙げられる。
投与量
ハニーブッシュ（シクロピア種）植物抽出物を、治療上有効な量、患者に投与する。本明細書で用いられる用語「治療上有効な量」は、有意義な効果、即ち患者の血糖値の低下を示すのに十分な総量を意味する。有意義な結果を得るのに必要な植物抽出物の投与量は、当業者がこの開示を参照すれば、適切な制御を行いながら日常的試験を実施することにより決定することができる。適切な処理群を対照と比較すれば、特定の投与量が患者の血糖値低下に効果的かどうかが示されよう。経口投与の場合、抽出物は、少なくとも０．１mg/kg体重、好ましくは少なくとも１mg/kg体重、より好ましくは少なくとも２．５mg/kg
体重、より好ましくは少なくとも５mg/kg体重、最も好ましくは少なくとも２５mg/kg体重、例えば少なくとも５０mg/kg体重、少なくとも７５mg/kg体重、少なくとも１００mg/kg
体重、少なくとも２５０mg/kg体重、および少なくとも５００mg/kg体重の用量でなければならない。
【００３６】
必要な植物抽出物の量は、治療される状態の性質および重症度、ならびに患者が受けた以前の治療の性質に依存する。最終的に投与量は、臨床試験を用いて決定される。最初、医師は動物試験から得られた用量を投与する。有効量は、１回の組成物投与により実現することができる。あるいは有効量は、患者に組成物を多回投与することにより実現される。インビトロでは、生物学的に有効量、即ちグルコース取込みを誘導するのに十分な量を２倍増量で投与して、活性範囲全体を決定する。経口、皮下および静脈内投与の有効性は、臨床試験で決定される。抽出物の単回投与が有利となる場合があるが、多回投与が好ましいと予測される。
送達
ハニーブッシュ植物抽出物の投与は、好ましくは経口投与による。それほど好ましくはないが、抽出物を注射により投与してもよい。経口投与に適した本発明の製剤は、分別単位、例えばそれぞれが所定量の活性化合物を含むカプセル、カシェ、錠剤、ボーラスまたはロゼンジとして；粉末または顆粒として；液体形態として、例えば水溶液、懸濁液、シロップ、エリキシル、エマルション、分散体などとして与えられてもよい。抽出物は、ピルの形態（カプセル中の粉末または濃縮液）、または（紅茶またはコーヒーを飲むのと同様に）水に入れた後で摂取され得ることができる粉末形態（例えば粒子状に圧縮された乾燥粉末）で投与してもよい。
【００３７】
非経口投与に適した製剤は、簡便には、例えば好ましくはレシピエントの血液と等張の注射、生理食塩水、ポリエチレングリコール溶液などに、活性化合物の滅菌製剤を含む。有用な製剤は、適切な溶媒で希釈すると、非経口投与に適した溶液が得られる、ハニーブッシュ植物抽出物含有濃縮溶液または固体も含む。
【００３８】
本発明の製剤は、前述の成分に加えて、医薬製剤の技術分野で用いられる任意の補助成分、例えば希釈剤、緩衝液、着香剤、着色剤、結合剤、界面活性剤、増粘剤、滑剤、懸濁
剤、防腐剤（酸化防止剤など）などの１種以上を更に含んでいてもよい。
【００３９】
適応症に効果的となるのに必要なハニーブッシュ植物の量は、もちろん治療される各ほ乳類により変動し、最終的には医療または獣医の実施担当者の判断にゆだねられる。判断される因子としては、治療される状態、投与経路、製剤の性質、ほ乳類の体重、表面積、年齢および一般状態、ならびに投与される個々の抽出物が挙げられる。日用量の総量を単回投与、多回投与、例えば１日２〜６回、または選択された期間の静脈内注入により投与してもよい。先に引用された範囲を超える投与量またはそれ未満の投与量は、本発明の範囲に含まれ、所望の場合および必要な場合には、それを各患者に投与してもよい。
【００４０】
組成物は、生物学的に有効量のハニーブッシュ植物抽出物と、任意選択で相対的に不活性な担体とを含む。そのような担体の多くは、日常的に用いられ、医薬の教科書を参照すれば同定することができる。許容される担体は、生理学的に許容される希釈剤または佐剤である。用語「生理学的に許容される」は、類似物の効果を妨害しない非毒性材料を意味する。担体の特性は、投与経路および組成物中の各化合物または化合物の組み合わせに依存する。そのような製剤の調製は、当該技術分野のレベルに含まれる。組成物は、類似物の活性を高めるか、またはその活性を補う他の薬剤を更に含んでいてもよい。組成物は、充填剤、塩、緩衝物質、安定化剤、可溶化剤、および当業者に周知の他の材料を更に含んでいてもよい。
【００４１】
本発明によるキサントンおよびフラボノイドに関しては、以下のことが挙げられる。
マンギフェリンは、ハニーブッシュ中に見出される天然分子である。その分子は、キサントンとして分類される。
【００４２】
マンギフェリンは以下の化学構造を有する。
【００４３】
【化１】
式中、Ｒ1＝Ｒ3＝Ｒ6＝Ｒ7＝ＯＨおよびＲ4＝Ｒ5＝Ｒ8＝Ｈである。
【００４４】
イソマンギフェリンも、天然分子に存在し、以下の構造を有する。
【００４５】
【化２】
式中、Ｒ1＝Ｒ3＝Ｒ6＝Ｒ7＝ＯＨおよびＲ2＝Ｒ5＝Ｒ8＝Ｈである。
【００４６】
その天然源の誘導体はＲ1、Ｒ3、Ｒ6またはＲ7の位置にＯ−メチル基（−ＯＣＨ3）
またはグリコシル基（−Ｃ6Ｈ11Ｏ6）を有し得る。
マンギフェリンにより形成されるすべての化合物、その異性体、およびその誘導体は、以下の一般式Ｉに対応する。
【００４７】
【化３】
式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8は−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＣＨ3およびグ
リコシルラジカルから選択される。
【００４８】
式Ｉの化合物は、本発明の直物材料（ハニーブッシュ）からの抽出を含め、種々の手段より入手することが可能である。
代わりに、式Ｉの化合物は、任意の抽出または精製プロセス（例えば水、アルカノール、またはこれらの溶媒の混合物等の極性溶媒による抽出と、それに続く結晶による精製または当業者に周知の他のプロセスによる精製）を使用して、そのような化合物を含むことが分かっている植物の全部または一部の精製より得られ得る。これらの方法のいくつかが例えばフランス国特許出願公開公報ＦＲ−Ａ−２ ４８６ ９４１号で公表されている。化合物は、化学的にまたは酵素的に得られてもよい。これに関し、方法が特に以下の２つの論文に記載されている：Bhatia-V-K et al., Tetrahedron Lett. (14), p. 1741 -2 およびNott-P-E, Phytochemistry, Vol. 6(1 1 ), p. 1597-9。
【００４９】
ヘスペリジンもまた、ハニーブッシュに見出される天然分子である。ヘスペリジン （７−［６−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル）−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ］−２，３−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−２−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）−４Ｈ−１―ベンゾピラン−４−オン）と、そのアグリコンであるヘスペレチンが本発明者らにより想定される。本発明者らは、式ＩＩの等価なフラボン／フラバノン誘導体もまた想定する。
【００５０】
【化４】
式中、互いに独立して、Ｒ1はＨ、ＯＨ、または−Ｏ−Ｇｌｙであり、
Ｒ2、Ｒ6、Ｒ9およびＲ10は同じであっても異なっていてもよく、Ｈ、ＯＨ、アルコキ
シ、ヒドロキシアルコキシまたはＣ3−Ｃ7−シクロアルコキシであり、
Ｒ3はＨ、Ｃ1−Ｃ4アルキルまたはＣ3−Ｃ7−シクロアルコキシであり、
Ｒ4はＨ、ＯＨ、−Ｏ−Ｇｌｙ、アルコキシ、ヒドロキシアルコキシまたはＣ3−Ｃ7−
シクロアルコキシであり、
Ｒ5はＨ、Ｃ1−Ｃ４アルキル、ＯＨ、アルコキシ、ヒドロキシアルコキシまたはＣ3−
Ｃ7−シクロアルコキシであり、
Ｒ7とＲ8は同じであっても異なっていてもよく、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、ヒドロキシアルコキシ、Ｃ3−Ｃ7−シクロアルキル、チオ（Ｃ1−Ｃ4）アルキル、または―ＮＲ11Ｒ12であり、
Ｒ11およびＲ12は同じであっても異なっていてもよく、ＨまたはＣ1−Ｃ4アルキルを意味してよく、アルコキシおよびヒドロキシアルコキシは１−１８個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖のアルキル基を含んでよく、
Ｇｌｙは存在してもしなくてもよく、モノまたはオリゴグリシン残基を指す。
【００５１】
一般式ＩＩの好ましいフラボン／フラバノン誘導体は、例えば：
１．ヘスペリジン、（ルトシド；ケルセチン−３−ルチノシド、３−［６−Ｏ−（６−デオキシ―α−Ｌ−マンノピラノシル）−β−Ｄ−グリコピラノシル］オキシ］−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン；およびそのアグリコン；
２．Ｏ−β−ヒドロキシエチルルトシド、ヘスペリジンのモノ、ジ、トリ、およびテトラヒドロキシエチル誘導体の混合物；またはそのアグリコン；およびＯ−ヒドロキシエチルルトシドの主成分；すなわち
３．トロキセヘスペリジン−（２［３，４−ビス（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル］−３−［６−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル）−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ］−５−ヒドロキシ−７−（２−ヒドロキシエトキシ）−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン）；およびそのアグリコン；
４．モノオキセヘスペリジン−（２−［３，４−ビスヒドロキシフェニル］−３−［６−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル）−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ］−５−ヒドロキシ−７−（２−ヒドロキシエトキシ）−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン）；およびそのアグリコン；
５．α−グルコシルヘスペリジン；
６．ナリンギン ７−［２−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル）−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ］−２，３−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン；およびそのアグリコン；
７．ヘスペリジン（７−［６−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル）−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ］−２，３−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−２−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン；およびそのアグリコンであるヘスペレチン；
８．ジオスミン（３’５，７−トリヒドロキシ−４メトキシフラボン−７−ラムノグルコシド；およびそのアグリコンであるヘスペレチン；
９．ジヒドロロビネチン（３，３’，４’，５’，７−ペンタヒドロキシフラバノン）；１０．タキシフォリン（３，３’，４’，５，７−ペンタヒドロキシフラバノン）；
１１．エリオディクチン（３’，４’，５，７−テトラヒドロキシフラバノン−７−ラムノシド）；およびそのアグリコンであるエリオジクチオール；
１２．フラバノマレイン（３’，４’，７，８−テトラヒドロキシフラバノン−７−グルコシド）；およびそのアグリコン；
１３．イソケルセチン（３，３’，４’，５，７−ペンタヒドロキシフラバノン−３−（β−Ｄ−ピラノシド）；およびそのアグリコン；
１４．ロイコシアニジン（（３，３’，４，４’，５，７−ヘキサヒドロキシフラバン）；
１５．キルトミネチン（６−８−ジメチル−３’，４’，５，７−テトラヒドロキシフラバノン）；
１６．６，８−ジメチル−５，７−ジヒドロキシ−４’−チオメチルフラバノン；
１７．６，８−ジメチル−４’，５，７−トリヒドロキシ−３’−メトキシフラバノン；１８．６，８−ジメチル−５，７−（ジヒドロキシ−４’−ジメチルアミノ）フラバノン。
【００５２】
さらに、エリオシトリン、ナリヘスペリジン、およびスコリモサイドが適用可能である（Ferreira et al., 1998, Kamara et al., 2003; Kamara et al., 2004も参照のこと）。
【００５３】
異なる種類のハニーブッシュは、異なる性質であるにも関わらず、これらまたは類似のフラボノイドを含む。糖尿病試験動物（ラット）を用いた実験が実施された。本発明のハニーブッシュ抽出物は、これらのモデル系の血糖抑制に効果的であった。更にフラボノイドの合成タイプの投与も、グルコースレベルの低下に効果的であった。しかし、マンギフェリンと他のフラボノイド、特にヘスペリジンとを組み合わせることで、全体的フラボノイド用量をより低くして血糖を最大限に低下させ得るという高い（相乗）効果をもたらすことが、本発明者により見出された。マンギフェリンのモル濃度が、ヘスペリジンのそれの少なくとも２倍である場合に、その効果は最も高められる。
【００５４】
本発明により、そして本明細書の以前および以後に記載されるとおり、「糖尿病」は、好ましくは非インスリン依存性糖尿病（２型）を指し；「抗糖尿病」は、糖尿病の発症の予防、および／または発症した糖尿病の治療など、「糖尿病」の「治療」に有用な活性を意味し；糖尿病の原因の予防、ならびに／またはその症状および／もしくは結果の低減もしくは消失も含む。
【００５５】
特に、本発明の化合物は、少なくとも以下の二重治療効果を有することが見出された：ｉ）本発明の化合物が耐糖能障害を治療し得る故の、糖尿病の予防；および
ii）本発明の化合物が血糖値を低下し得る故の、発症した糖尿病の実際の治療。
【００５６】
好ましくは本発明の抽出物は、マンギフェリンおよび／または医薬として許容されるその塩もしくはプロドラッグの主な特徴を有する化合物を活性成分として含む。より好ましくはその抽出物は、ヘスペリジンの主な特徴を有する化合物も活性成分として含む。最も好ましくはマンギフェリンの分子濃度は、ヘスペリジンのそれの少なくとも２倍である。
【００５７】
更なる態様によれば、本発明は、抗糖尿病を有する医薬として用いられる前記抽出物にも関する。
本発明は、有効量の抽出物を含む抗糖尿病活性を有する医薬組成物、ならびに抗糖尿病活性を有するマンギフェリンおよびヘスペリジンに及ぶ。
【００５８】
効果的投与量の前記抽出物または前記組成物をヒトまたは動物に投与することにより糖尿病を治療する方法も提供する。
更なる態様によれば、本発明は、摂取すると抗糖尿病活性を有する食品または飲料の製造における前記抽出物の使用にも関する。
【００５９】
摂取すると抗糖尿病効果を有する前記抽出物を有効量含む前記食品または飲料も、本発明の一部である。
好ましくは前記抽出物は、活性成分としてマンギフェリンおよび／またはその医薬として許容される塩もしくはプロドラッグを含む。
【００６０】
更なる態様によれば、本発明は、抗糖尿病活性を有する医薬として用いられる前記抽出物にも関する。
本発明は、前記抽出物を有効量含む抗糖尿病活性を有する医薬組成物、および抗糖尿病活性を有するマンギフェリンにも及ぶ。
【００６１】
活性成分は、シクロピア属の植物からの抽出物、または以下の構造：
【００６２】
【化５】
（式中、Ｒ1＝Ｒ3＝Ｒ6＝Ｒ7＝ＯＨおよびＲ4＝Ｒ5＝Ｒ8＝Ｈである）
を有する化合物（マンギフェリン）であるか、もしくは代わりに以下の構造：
【００６３】
【化６】
（式中、Ｒ1＝Ｒ3＝Ｒ6＝Ｒ7＝ＯＨおよびＲ2＝Ｒ5＝Ｒ8＝Ｈである）
を有する化合物であってよい。
【００６４】
その天然源の誘導体はＲ1、Ｒ3、Ｒ6またはＲ7の位置にＯ−メチル基（−ＯＣＨ3）ま
たはグリコシル基（−Ｃ6Ｈ11Ｏ6）を有し得る。
マンギフェリンにより形成されるすべての化合物、その異性体、およびその誘導体は、以下の一般式Ｉに対応する。
【００６５】
【化７】
式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8は−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＣＨ3およびグ
リコシルラジカルから選択される。
【００６６】
上記化合物はシクロピア属の植物から抽出されてもよいし、もしくは合成で調製してもよく、またはその誘導体であってもよい。
植物は、シクロピア サブターナタ種のものであってもよい。
【００６７】
好ましくは、本発明の化合物は、医薬として許容される投与形態で製造される。抗糖尿病組成物または製剤は、医薬賦形剤、希釈剤または担体と混和された抗糖尿病薬からなっていてもよい。所望なら安定化剤およびそのような他の成分をはじめとする他の適切な添加剤を添加してもよい。
【００６８】
その組成物を、単位投与形態で製造してもよい。
抗糖尿病薬として、マンギフェリンまたはヘスペリジンと併用したマンギフェリンを、有利には約０．０５mg/kg/日〜約２mg/kg/日の投与量でヒトに投与する。好ましい投与量範囲は、約０．１mg/kg/日〜約１．５mg/kg/日である。本発明の抽出物の噴霧乾燥粉末形態を用いる場合、好ましい投与範囲は約０．２mg/kg/日〜約１mg/kg/日であり、特に好ましくは約０．２５mg/kg/日〜約０／７５mg/kg/日である。マンギフェリンおよびヘスペリジンは、好ましくは１：１〜２：１のモル比である。
【００６９】
更なる態様によれば、本発明は、
ｉ）有効量の上述の抽出物またはマンギフェリンもしくはヘスペリジンと併用したマンギフェリンを、
ii）糖尿病を治療する代表的薬剤から選択される他の薬剤、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤、ソルビトールデヒドロゲナーゼ阻害剤、グルコシダーゼ阻害剤、アルドースリダクターゼ阻害剤から選択される他の薬剤１種以上、
と共に含む医薬組成物にも関する。
【００７０】
糖尿病の治療に用いられ得る代表的薬剤としては、インスリンおよびインスリン類似体：（例えば、ＬｙｓＰｒｏインスリン、インスリンを含む吸入製剤）；ＧＬＰ−１（７−３７）（インスリノトロピン）およびＧＬＰ−１（７−３６）−ＮＨ２；スルホニル尿素および類似体；クロルプロパミド、グリベンクラミド、トルブタミド、トラザミド、アセトヘキサミド、グリピジド、グリメピリド、レパグリニド、メグリチニド；ビグアニド：メトホルミン、フェンホルミン、ブホルミン；α２−アンタゴニストおよびイミダゾリン：ミダグリゾール、イサグリドール、デリグリドール、イダゾキサン、エファロキサン、フルパロキサン；他のインスリン分泌促進薬：リノグリリド、インスリノトロピン、エキセンジン−４、ＢＴＳ−６７５８２，Ａ−４１６６；グリタゾン：シグリタゾン、ピオグリタゾン、エングリタゾン、トログリタゾン、ダルグリタゾン、ロシグリタゾン；ＰＰＡＲ−γアゴニスト；ＲＸＲアゴニスト：ＪＴＴ−５０１，ＭＣＣ−５５５、ＭＸ−６０５４、ＤＲＦ２５９３，ＧＩ−２６２５７０、ＫＲＰ−２９７、ＬＧ１００２６８；脂肪酸酸化阻害剤：クロモキシル、エトモキシル、α−グルコシダーゼ阻害剤：プレコース、アカルボース、ミグリトール、エミグリテート、ボグリボース、ＭＤＬ−２５，６３７，カミグリボース、ＭＤＬ−７３，９４５；β−アゴニスト：ＢＲＬ３５１３５、ＢＲＬ３７３４４、Ｒｏ１６８７１４、ＩＣＩＤ７１１４、ＣＬ−３１６，２４３，ＴＡＫ−６６７、ＡＺ４０１４０；ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの両方の型のホスホジエステラーゼ阻害剤：シルデナフィル、Ｌ６８６３９８：Ｌ−３８６，３９８；脂質低下剤：ベンフルオレクス、アトルバスタチン；抗肥満薬：フェンフルラミン、オルリスタット、シブトラミン；バナデートおよびバナジウム錯体（例えばナグリバン（Ｎａｇｌｉｖａｎ）（登録商標））およびペルオキソバナジウム錯体；アミリンアンタゴニスト：プラムリンチド、ＡＣ−１３７；リポキシゲナーゼ阻害剤：マソプロカル（ｍａｓｏｐｒｏｃａｌ）；ソマトスタチン類似体：ＢＭ−２３０１４、セグリチド、オクトレオチド；グルカゴンアンタゴニスト：ＢＡＹ２７６−９９５５；インスリンシグナリングアゴニスト、インスリン模倣体、Ｐ
ＴＰ１Ｂ阻害剤：Ｌ−７８３２８１、ＴＥＲ１７４１１、ＴＥＲ１７５２９；グルコネオゲネシス阻害剤：ＧＰ３０３４；ソマトスタチン類似体およびアンタゴニスト；抗脂肪分解剤：ニコチン酸、アシピモクス、ＷＡＧ９９４；グルコース輸送刺激剤：ＢＭ−１３０７９５；グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤：グルコースシンターゼキナーゼ阻害剤：塩化リチウム、ＣＴ９８０１４、ＣＴ９８０２３；ガラニン受容体アゴニスト；ＭＴＰ阻害剤、例えば米国仮特許出願第６０／１６４，８０３に開示されたもの；成長ホルモン分泌促進薬、例えばＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２４３６９およびＷＯ９８／５８９４７に開示されたもの；ＮＰＹアンタゴニスト：ＰＤ−１６０１７０、ＢＷ−３８３，ＢＷ１２２９、ＣＧＰ−７１６８３Ａ、ＮＧＤ９５−１、Ｌ−１５２８０４；５−ＨＴおよび５−ＨＴ２Ｃ受容体アンタゴニストおよび／またはその模倣体などの食欲低下剤：デクスフェンフルラミン、プロザック（Ｐｒｏｚａｃ）（登録商標）、ゾロフト（Ｚｏｌｏｆｔ）（登録商標）；ＣＣＫ受容体アゴニスト：ＳＲ−２７８９７Ｂ；ガラニン受容体アンタゴニスト；ＭＣＲ−４アンタゴニスト：ＨＰ−２２８；レプチンまたは模倣体：レプチン；１１−β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼＩ型阻害剤；ウロコルチン模倣体、ＣＲＦアンタゴニスト、およびＣＲＦ結合タンパク質：ＲＵ−４８６、ウロコルチンが挙げられる。用いられ得る他の抗糖尿病薬としては、エルゴセットおよびＤ−キロイノシトールが挙げられる。他の抗糖尿病薬は、当業者に公知である。
【００７１】
いずれのグリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤を、本発明の第２の化合物として用いてもよい。用語「グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤」は、グリコーゲンホスホリラーゼの酵素作用を低下、縮小または削減するいずれかの物質もしくは薬剤または物質および／もしくは薬剤の組み合わせを指す。グリコーゲンホスホリラーゼの現在知られる酵素作用は、グリコーゲン巨大分子と無機リン酸との可逆的反応の触媒作用によりグリコーゲンをグルコース−１−リン酸と、一方のグリコシル残基が本来のグリコーゲン巨大分子よりも短いグリコーゲン巨大分子と、に分解すること（グリコーゲン分解の前方方向へ）である。そのような作用は、標準のアッセイに従い（すなわち本明細書の以後に記載されるとおり）当業者により容易に決定される。これらの様々な化合物は、以下の発行されたＰＣＴ特許出願：ＰＣＴ出願国際公開ＷＯ９６／３９３８４およびＷＯ９６／３９３８５に含まれる。しかし他のグリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤も、当業者に公知である。
【００７２】
ソルビトールデヒドロゲナーゼ阻害剤を、本発明の第２の化合物として用いてもよい。ソルビトールデヒドロゲナーゼ阻害剤は、フルクトースレベルを低下させ、ニューロパシー、網膜症、腎症、心筋症、微小血管障害、および大血管障害などの糖尿病合併症を治療または予防するのに用いられてきた。米国特許第５，７２８，７０４号および同第５，８６６，５７８号には、酵素ソルビトールデヒドロゲナーゼを阻害することにより糖尿病合併症を治療または予防する化合物および方法が開示されている。
【００７３】
グルコシダーゼ阻害剤は、グリコシドヒドロラーゼ、例えばアミラーゼまたはマルターゼによる、複雑な炭水化物から生体利用性のある単純な糖、例えばグルコースへの酵素的加水分解を阻害する。特に高レベルの炭水化物を取込んだ後は、グルコシダーゼの急速な代謝作用の結果、食事性高血糖の状態になり、脂肪症および糖尿病の患者では、インスリンの分泌が高まり、脂肪合成が増加して、脂肪分解が減少する。多くの場合そのような高血糖の後に多量のインスリンが存在することにより、低血糖が起こる。加えて、低血糖および胃に残留する糜汁（びじゅう）の両方が胃液の産生を促進して、胃潰瘍または十二指腸潰瘍が発生し始めるか、または発生し易くなることが知られている。したがってグルコシダーゼ阻害剤は、胃をとおした炭水化物の通過促進および腸からのグルコース吸収の阻害において有用性を有することが公知である。更に、炭水化物から脂肪組織の脂質への変換と、続く食事性脂肪の脂肪組織沈着物への取込みが、それにしたがって減少するか、または遅延し、その結果、有害な異常を低減または予防するという効果を伴う。
【００７４】
いずれのグルコシダーゼ阻害剤を、本発明の抽出物、ＡまたはＥと併用したＡ、その立体異性体およびプロドラッグ、ならびに本発明の化合物、立体異性体およびプロドラッグの医薬として許容される塩と一緒に用いてもよいが、一般に好ましいグルコシダーゼ阻害剤は、アミラーゼ阻害剤を含む。アミラーゼ阻害剤は、デンプンまたはグリコーゲンからマルトースへの酵素分解を阻害するグルコシダーゼ阻害剤である。そのような酵素分解の阻害剤は、グルコースおよびマルトースなどの生体利用性の糖の量、およびその結果生じる悪性状態を低減することにおいて有利である。
【００７５】
様々なグルコシダーゼ阻害剤が、当業者に公知である。しかし本発明の医薬組成物、混合物、方法およびキットの実施において、一般に好ましいグルコシダーゼ阻害剤は、アカルボース、アジポシン、ボグリボース、ミグリトール、エミグリテート、ＭＤＬ−２５６３７、カミグリボース、テンダミステート、ＡＩ−３６８８、トレスタチン、プラジミシンＱ、およびサルボスタチンからなる群から選択されるそれらの阻害剤である。
【００７６】
グルコシダーゼ阻害剤カルボース、Ｏ−４，６−ジデオキシ−４−［［（１Ｓ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−４，５，６−トリヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）−２−シクロヘキセン−１−イル]−アミノ]−α−グルコピラノシル−（１→４）−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−Ｄ−グルコース、それに関係する様々なアミノ糖誘導体、ならびにアクチノプラネス株（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ ｓｔｒａｉｎｓ） ＳＥ５０（ＣＢＳ９６１．７０）、ＳＢ１８（ＣＢＳ９５７．７０）、ＳＥ８２（ＣＢＳ６１５．７１）、ＳＥ５０／１３（６１４．７１）およびＳＥ５０／１１０（６７４．７３）が、それぞれ米国特許第４，０６２，９５０号および同第４，１７４，４３９号に開示されている。
【００７７】
アジポシン形態１および２からなるグルコシダーゼ阻害剤アジポシンは、米国特許第４，２５４，２５６号に開示されている。加えて、アジポシンの製造および精製の方法は、Ｎａｍｉｋｉ他、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３５，１２３４〜１２３６（１９８２年）に開示されている。グルコシダーゼ阻害剤ボグリボース、３，４−ジデオキシ−４−［［２−ヒドロキシ−１−（ヒドロキシメチル）エチル］アミノ］−２−Ｃ−（ヒドロキシメチル）−Ｄ−エピ−イノシトール、およびそれに関係する様々なＮ−置換擬似アミノ糖が、米国特許第４，７０１，５５９号に開示されている。
【００７８】
グルコシダーゼ阻害剤ミグリトール、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−１−（２−ヒドロキシエチル）−２−（ヒドロキシメチル）−３，４，５−ピペリジネルトール（ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅｒｔｏｌ）、およびそれに関係する様々な３，４，５−トリヒドロキシピペリジンが、米国特許第４，６３９，４３６号に開示されている。
【００７９】
グルコシダーゼ阻害剤エミグリテート、ｐ−［２−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−３，４，５−トリヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）ピペリジノ］エトキシ］安息香酸エチル、それに関係する様々な誘導体およびその医薬として許容される酸付加塩が、米国特許第５，１９２，７７２号に開示されている。
【００８０】
グルコシダーゼ阻害剤ＭＤＬ−２５６３７、２，６−ジデオキシ−７−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２，６−イミノ−Ｄ−グリセロ−Ｌ−グルコヘプチトール、それに関係する様々なホモジサッカライドおよびその医薬として許容される酸付加塩が、米国特許第４，６３４，７６５号に開示されている。
【００８１】
グルコシダーゼ阻害剤カミグリボース、メチル６−デオキシ−６−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−３，４，５−トリヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）ピペリジノ］−β−Ｄ−グルコピラノシドセスキヒドラート、それに関係するデオキシノジリマイシン、様
々な医薬として許容されるその塩、および製造のためのその合成方法が、米国特許第５，１５７，１１６号および同第５，５０４，０７８号に開示されている。
【００８２】
グルコシダーゼ阻害剤プラジミシンＱおよびアクチノマジュラ・ベルコスポラ株（Ａｃｔｉｎｏｍａａｕｒａ ｖｅｒｒｕｃｏｓｐｏｒａ ｓｔｒａｉｎｓ）Ｒ１０３−３またはＡ１０１０２の細菌培養によるその製造方法が、それぞれ米国特許第５，０９１，４１８号および同第５，２１７，８７７号に開示されている。
【００８３】
グリコシダーゼ阻害剤サルボスタチン、それに関係する様々な擬似サッカライド、様々な医薬として許容されるその塩およびストレプトマイセス・アルブス株（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｕｓ ｓｔｒａｉｎ）ＡＴＣＣ２１８３８の細菌培養によるその製造方法は、米国特許第５，０９１，５２４号に開示されている。
【００８４】
いずれのアルドースリダクターゼ阻害剤を、本発明の医薬組成物、方法およびキットに用いてもよい。用語アルドースリダクターゼ阻害剤は、酵素アルドースリダクターゼにより触媒されるグルコースからソルビトールへの生物転換を阻害する化合物を指す。そのような阻害は、標準的アッセイにしたがって当業者により容易に決定される（Ｊ． Ｍａｌｏｎｅ， Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ２９巻：ｐ８６１−８６４、１９８０年、「Ｒｅｄ Ｃｅｌｌ Ｓｏｒｂｉｔｏｌ， ａｎ Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ｏｆ Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｃｏｎｔｒｏｌ」）。以下の特許および特許出願は、それぞれの全体が本明細書に参考として援用され、本発明の組成物、方法およびキットに用いられ得るアルドースリダクターゼ阻害剤を例示しており、それらのアルドースリダクターゼ阻害剤を製造する方法が参照される：米国特許第４，２５１，５２８号；同第４，６００，７２４号；同第４，４６４，３８２号；同第４，７９１，１２６号；同第４，８３１，０４５号；同第４，７３４，４１９号；同第４，８８３，８００号；同第４，８８３，４１０号；同第４，８８３，４１０号；同第４，７７１，０５０号；同第５，２５２，５７２号；同第５，２７０，３４２号；同第５，４３０，０６０号；同第４，１３０，７１４号；同第４，５４０，７０４号；同第４，４３８，２７２号；同第４，４３６，７４５号；同第４，４３８，２７２号；同第４，４３６，７４５号；同第４，４３８，２７２号；同第４，４３６，７４５号；同第４，４３８，２７２号；同第４，９８０，３５７号；同第５，０６６，６５９号；同第５，４４７，９４６号；同第５，０３７，８３１号。
【００８５】
様々なアルドースリダクターゼ阻害剤が、以下に具体的に記載および参照されるが、他のアルドースリダクターゼ阻害剤も、当業者には公知であろう。同じく一般の化学的ＵＳＡＮ名または他の名称が、適宜、化合物を開示する適切な特許文献の参照と共にカッコ内に記載される。
【００８６】
したがって本発明の組成物、方法およびキットに有用なアルドースリダクターゼ阻害剤の例としては、
１． ３−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−３，４−ジヒドロ−４−オキソ−１−フタラジン酢酸（ポナルレスタット、米国特許第４，２５１，５２８号）；
２． Ｎ［［（５−トリフルオロメチル）−６−メトキシ−１−ナフタレニル］チオキソメチル］−Ｎ−メチルグリシン（トルレスタット、米国特許第４，６００，７２４号）；３． ５−［（Ｚ，Ｅ）−β−メチルシンナミリデン］−４−オキソ−２−チオキソ−３−チアゾリジン酢酸（エパルレスタット、米国特許第４，４６４，３８２号、米国特許第４，７９１，１２６号、米国特許第４，８３１，０４５号）；
４． ３−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−７−クロロ−３，４−ジヒドロ−２，４−ジオキソ−１（２Ｈ）−キナゾリン酢酸（ゼナレスタット、米国特許第４，７３４，４１９号および米国特許第４，８８３，８００号）；
５． ２Ｒ，４Ｒ−６，７−ジクロロ−４−ヒドロキシ−２−メチルクロマン−４−酢酸
（米国特許第４，８８３，４１０号）；
６． ２Ｒ，４Ｒ−６，７−ジクロロ−６−フルオロ−４−ヒドロキシ−２−メチルクロマン−４−酢酸（米国特許第４，８８３，４１０号）；
７． ３，４−ジヒドロ−２，８−ジイソプロピル−３−オキソ−２Ｈ−１，４−ベンゾキサジン−４−酢酸（米国特許第４，７７１，０５０号）；
８． ３，４−ジヒドロ−３−オキソ−４−［（４，５，７−トリフルオロ−２−ベンゾチアゾリル）メチル］−２Ｈ−１，４−ベンゾチアジン二酢酸（ＳＰＲ−２１０、米国特許第５，２５２，５７２号）；
９． Ｎ−［３，５−ジメチル−４−［（ニトロメチル）スルホニル］フェニル］−２−メチルベンゼンアセトアミド（ＺＤ５５２２、米国特許第５，２７０，３４２号および米国特許第５，４３０，０６０号）；
１０． （Ｓ）−６−フルオロスピロ［クロマン−４，４’−イミダゾリジン］−２，５’−ジオン（ソルビニル、米国特許第４，１３０，７１４号）；
１１． ｄ−２−メチル−６−フルオロスピロ（クロマン−４’，４’−イミダゾリジン）−２’，５’−ジオン（米国特許第４，５４０，７０４号）；
１２． ２−フルオロスピロ（９Ｈ−フルオレン−９，４’−イミダゾリジン）−２’，５’−ジオン（米国特許第４，４３８，２７２号）；
１３． ２，７−ジ−フルオロスピロ（９Ｈ−フルオレン−９，４’−イミダゾリジン）−２’，５’−ジオン（米国特許第４，４３６，７４５号および米国特許第４，４３８，２７２号）；
１４． ２，７−ジ−フルオロ−５−メトキシスピロ（９Ｈ−フルオレン−９’，４’−イミダゾリジン）−２’，５’−ジオン（米国特許第４，４３６，７４５号、米国特許第４，４３８，２７２号）；
１５． ７−フルオロスピロ（５Ｈ−インデノール［１，２−ｂ］ピリジン−５’，３’−ピロリジン）−２’，５’−ジオン（米国特許第４，４３６，７４５号；米国特許第４，４３８，２７２号）；
１６． ｄ−シス−６’−クロロ−２’，３’−ジヒドロ−２’−メチル−スピロ（イミダゾリジン−４，４’−４’Ｈ−ピラノ（２，３−ｂ）ピラジン）−２’，５’−ジオン（米国特許第４，９８０，３５７号）；
１７． スピロ［イミダゾリジン−４，５’（６Ｈ）−キノリン］−２，５−ジオン−３’−クロロ−７’，８’−ジヒドロ−７’，８’−ジヒドロ−７’−メチル−（５’−シス）（米国特許第５，０６６，６５９号）；
１８． （２Ｓ，４Ｓ）−６−フルオロ−２’，５’−ジオキソスピロ（クロマン−４，４’−イミダゾリジン）−２−カルボキシアミド（フィダレスタット、米国特許第５，４４７，９４６号）；および
１９． ２−［（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）メチル］−６−フルオロスピロ［イソキノリン−４（１Ｈ），３’−ピロリジン］−１，２’，３，５’（２Ｈ）−テトロン（ミナルレスタット、米国特許第５，０３７，８３１号）、
が挙げられる。
【００８７】
本発明は、
・抗糖尿病活性を有する医薬の製造における上述の成分ｉ）およびii）の前記組み合わせの使用；
・前記組み合わせの有効な投与量をヒトまたは動物に投与することを含む、糖尿病を治療または予防する方法；ならびに
・糖尿病の治療または予防に有用な上述の活性成分（ｉ）および（ii）を組み合わせたキットまたは単回包装、
にも及ぶ。
【００８８】
組み合わせの成分ｉ）およびii）を、同時、別個、またはいずれかの順序で連続して投
与することができる。
好ましくは本発明は、抽出物、または上記化合物、または同化合物含む組成物の有効な投与量をヒトまたは動物に投与することにより血糖値を低下または保持する方法に及ぶ。
【００８９】
好ましくは本発明は、抽出物、または上記化合物を含む食品または飲料を摂取することにより血糖値を低下または保持する方法に及ぶ。より好ましくは本発明は、耐糖能障害の治療にも及ぶ。より好ましくは本発明は、上記の抽出物、化合物、組成物および／または食品もしくは飲料の投与を停止した後に、血糖値が実質的に上昇し得ないという保護効果を提供する。
【００９０】
本発明は、活性成分をシクロピア サブターナタから抽出する方法も提供する。
本発明による抗糖尿病活性を有する抽出物を、以下の工程により製造してもよい。抗糖尿病薬を含むシクロピア属の植物の抽出物を製造する方法は、回収された植物材料を溶媒で処理して抗糖尿病活性を有する分画を抽出するステップ、植物材料の残留物から抽出溶液を分離するステップ、抽出溶液から溶媒を除去するステップ、および抽出物を回収するステップを含む。そのように回収された抽出物を、例えば適切な抽出手順によって更に精製してもよい。
【００９１】
抽出物を、シクロピア属の植物材料、例えば前記植物の葉、茎および根から製造してもよい。本発明の一適用例において、抗糖尿病性抽出物は、シクロピア サブターナタ種から得られる。
【００９２】
植物材料を、ワーリング（Ｗａｒｉｎｇ）ブレンダなどの装置を用いて、適切な溶媒、例えばメタノール／塩化メチレン溶媒の存在下でホモジネートしてもよい。その後、適切な分離手順、例えばろ過または遠心分離により、抽出溶液を残留する植物抽出物から分離してもよい。溶媒を、好ましくは６０℃の温度の水浴中で、ロータリーエバポレータにより除去してもよい。
【００９３】
その後、分離された粗抽出物を塩化メチレンおよび水で更に抽出した後、塩化メチレン抽出物と水抽出物とに分離してもよい。塩化メチレン抽出物は、好ましくはロータリーエバポレータでの蒸発により除去された溶媒を有していてもよく、得られた抽出物を、メタノール／ヘキサン抽出物により更に精製してもよい。その後、メタノール／ヘキサン抽出生成物を分離して、メタノール抽出物およびヘキサン抽出物を得てもよい。部分的に精製された活性抽出物を得るために、メタノール抽出物を蒸発させて溶媒を除去してもよい。
【００９４】
部分的に精製された活性抽出物をメタノールに溶解してもよく、シリカゲルを吸収媒体として用い、クロロホルム／３０％メタノール混合物を溶離剤として用いたカラムクロマトグラフィーにより更に分別してもよい。複数の異なる分画を得てもよく、それぞれを適切なバイオアッセイ手順により評価して、抗糖尿病活性を測定してもよい。
【００９５】
抗糖尿病活性を有する分画を、好ましくは吸収媒体としてのシリカゲルおよび９：１ クロロホルム：メタノール溶媒を用いたカラムクロマトグラフィーなどにより更に分別してもよく、得られた亜分画を抗糖尿病活性についてバイオアッセイしてもよい。所望なら、従来どおり吸収媒体としてのシリカゲルおよび９：１ クロロホルム：メタノール溶媒でのカラムクロマトグラフィー手順を用いて、抗糖尿病活性を示す亜分画を更に分別および精製してもよい。得られた精製分画を、抗糖尿病活性のための適切なバイオアッセイ手順により再度、評価してもよい。
【００９６】
本発明者は、少なくとも一つのそのような精製分画が良好な抗糖尿病活性を有することを見出し、その分画の活性成分が核磁気共鳴をはじめとする従来の化学技術による同定で
、マンギフェリンであることを見出した。この分画をヘスペリジンを含む分画と組み合わせると、糖尿病に対する相乗効果が達成され、さらにはマンギフェリン対ヘスペリジンのモル比が１：１から２：１までの場合に裁量の効果が得られる。
【００９７】
抽出物を乾燥させて、例えば噴霧乾燥、凍結乾燥または真空乾燥により、水分を除去して、自由流動性粉末を形成させてもよい。
本発明およびその有効性を更に記載するが、本発明の範囲は以下の実施例および図面により限定されない。
実験
実験１
植物抽出物（実験室規模）
緑色植物材料とは、植物性ポリフェノール、特にキサントンおよびフラボノイドの酵素的／化学的酸化を予防するような手法で乾燥される植物材料を指す。異なる乾燥手順を用いることができる。
【００９８】
酸化された植物材料とは、葉および幹の切断後、数時間で酸化される植物材料を指す。後者の工程で、ポリフェノールの酵素的および化学的酸化が開始する。水／酵素混合物を添加すれば、加工の酸化ステップの間に起こる酵素的／化学的変化を補助することができる。
【００９９】
以下の実施例において、用いられる植物抽出物を、以下の手順により得た。
使用した調製手順は、破砕した緑色のシクロピア インターメディアの葉および茎１０ｋｇを、１００ｋｇの水で連続撹拌しながら９５〜９８℃で３０分抽出し（抽出後の採収抽出温度の実測値７０℃）、その後連続して遠心分離し、抽出物と不溶性植物材料を分離した。抽出物を熱交換器で室温まで冷却し、その後アリコートをＰＥＴボトルに入れて凍結し、使用するまで−２０℃にて保管した。また、少量を、インビトロ試験のために実験室の凍結乾燥機で凍結乾燥した。
１．組織細胞：抗糖尿病スクリーニングのためのインビトロアッセイモデル（細胞系）
糖尿病は、多くの器官に異なる影響を及ぼす多因子疾患である。それゆえ、それぞれが糖尿病により影響を受ける異なる器官を表す３種の細胞系の組み合わせと、独特で簡便な非放射線的方法とを用いて、グルコース輸送の代わりにグルコース利用を測定する。
方法
その方法は、３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞、Ｃｈａｎｇ肝細胞およびＣ２Ｃ１２筋細胞によるグルコースの利用を、９６穴プレートで細胞系に応じて１〜３時間測定する。これは、細胞を飢餓状態にしてグルコースを添加し、その後、試験試料の存在下または非存在下でインキュベーション培地からのグルコース消失をモニタリングすることにより実施する。グルコース利用の測定前に脂肪細胞および肝細胞を試験試料に４８時間、予備暴露して、慢性効果が考慮されるかも確認した。抽出物に４８時間暴露された細胞の生存性を対照細胞のそれと比較すれば、潜在的毒性試料を同定することができる。インキュベーション時間をより長くしてグルコース利用または代謝を測定すれば、グルコース輸送だけでなくグルコース代謝に含まれるいずれの経路でも変化が検出される。表１は、細胞系３種で測定された応答を要約している。この組み合わせでは、腸のグルコース吸収を低下させるもの以外の２型糖尿病治療に現在用いられている全種の血糖降下薬の作用機序が網羅される。
【０１００】
【表１】
本発明に従って得られた抽出物は、３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞でのグルコース取込み増加に効果的であり、チアゾリジンに類似した活性を示すことが見出された。抽出物は、ＣＨＡＮＧ肝細胞において効果的であり、ビグアニジンと類似した活性を示した。
２．ストレプトゾトシンモデル（Ｔ１Ｄ）または後期Ｔ２Ｄ
成体雄ウィスター（Ｗｉｓｔｅｒ）ラット（２００〜２５０ｇ）を、試験全体で用いた。成体雄ウィスターラットにストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を３６mg/kgの用量で筋肉注
射し、インスリン産生細胞数を低下または枯渇させ、典型的レベルの１型糖尿病または後期Ｔ２Ｄの高血糖を誘発した。ラットは３時間絶食したが、飲水は自由に与えた。ＳＴＺ注射の７２時間後に、血液試料を尾静脈から採取した。グルコースオキシダーゼ法を利用し、グルコメータ（プレシジョンＱ．Ｉ．Ｄ；アボット・ラボラトリーズ（Ａｂｂｏｔｔ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ））を用いることにより血漿グルコース濃度を測定した。血中グルコースレベルが絶食レベルの３００％を超えるラットを糖尿病と判断し、試験用に選択した。
ＳＴＺラットの血漿グルコースに対する抽出物の急性効果
糖尿病ラットにペントバルビタールナトリウム２０mg/kgを腹腔内注射して、軽度の麻
酔状態を誘導した。約１０〜１５分後にはラットが十分に沈静になり、容易でストレスのない取扱いが可能になったが、嚥下反射には影響がなかった。テフロン（登録商標）（Ｔｅｆｌｏｎ）胃管カテーテルを口および食道から胃に入れて、必要な抽出物を含む水１mlを胃に直接注入した。その後、水を更に約２００μl注入して、胃管カテーテルの残留抽
出物を洗浄した。その後、カテーテルを即座に除去して、ラットを回復用のケージに入れた。Ａ群には通常の生理食塩水を与え、Ｂ群には植物抽出物５mg/kgを与え、Ｃ群には植
物抽出物２５mg/kgを与え、Ｄ群には植物抽出物５０mg/kgを与えた。血漿グルコース（mmol/l）を１、２、３、４、５、６時間の間隔で測定した。 ストレプトゾトシンを注入されてＢ細胞が低下または枯渇された成体雄ウィスターラットでは、抽出物の急性経口投与により血漿グルコースが６時間、漸進的に低下した。
経口耐糖能試験（ＯＧＴＴ）
１６時間絶食した糖尿病ＳＴＺラットに、軽度麻酔（フローセン）の下で植物抽出物２５mg/kgを胃管栄養法で与えた。３時間後に動物に経口グルコースボーラスを１g/kg与え
た。血漿グルコースレベルをmmol/lで、０、１、５、１０、１５、２０、３０、６０および１２０分に測定した。植物抽出物を２５mg/kg単回経口投与した後に３時間実施された
ＯＧＴＴの結果から、ＳＴＺラットの血漿グルコースレベルが、全ての測定時点で、対照グルコース値に比較して低いことが示された（図１３）。
３．肥満／インスリン抵抗性ラットモデル（Ｔ２Ｄ）
離乳後（３週齢）、雄ウィスターラットに、初期段階のＴ２Ｄに典型的な徴候を引き起こすべく、１２週間の間、自由接触で肥満誘導食を給餌した。１２週後、ベースライン測定のために血液を採集した。
抽出物の投与
抽出物を解凍し、０．５４％（Ｃ１）、１．０８％（Ｃ２）、１．７９％（Ｃ３）、２．１５％（Ｃ４）および２．６７％（Ｃ５｝の抽出物を含むよう脱イオン化水でそれぞれ希釈した。
メトホルミンの投与
塩酸メトホルミン（８５０ｍｇ、Ｒｏｌａｂ社、Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ所在）を、８５ｍｌの蒸留水に溶解させた。溶解させたメトホルミンを、３０ｍｌの水に入れて毎日与えた。投与量は蒸留水中１０ｍｇ／ｍｌで計算し、ラットには２０ｍｇ／ｋｇ体重に等しい１ｇ体重当たり２ｇを与えた。
ロシグリタゾンの投与
アバンディア（商標）マレイン酸ロシグリタゾン（４ｍｇ、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ社、南アフリカ共和国Ｂｒｙａｎｓｔｏｎ所在）を、１ｍｌ酸性リン酸緩衝液（ｐＨ２．３）に溶解させた。溶解させた錠剤を、４ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で３０ｍｌの水に入れて与えた。
抽出物、メトホルミン、ロシグリタゾンおよび摂取液量のモニタリング
消費した液体の量は、すべての群で処理期間中ずっとモニタした。同時に、毎朝、液体を動物に与える前に測定した。液体を平日は２日ごとに測定し、週末は３日後に測定した。 平均摂取量を、一週間当たりに接種した液体の平均値として計算した。摂取量は与えた量と残った量の間の差として記録した。
絶食時の血漿グルコース
動物を３時間絶食させた。尾の先端を一対のはさみを用いて切断し、一滴の血液を用いてグルコメータ（プレシジョンＱ．Ｉ．Ｄ；アボット・ラボラトリーズ（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ））を用いてグルコースレベルを測定した。
採血
動物を９８％酸素と２％フローセン（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）の吸入により麻酔した。尾部の先端を切断し、血液をエッペンドルフチューブに採取し、氷上に保存した。その後、それを２５００ｒｐｍで１５分間遠心した。マイクロピペットを使用して、５０μｌアリコートをＮｕｎｃチューブに入れ、使用するまで−８０℃で保管した。
インスリン測定用血清
４℃で遠心分離した後、血漿サンプルはインスリン測定まで−２０℃で保管しておく。インスリンは125Ｉ標識したヒトインスリンをトレーサとして使用してＲＩＡにより測定
し、ラットインスリンを標準試料（Ｌｉｎｃｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ社、米国合衆国未じゅー利州Ｓｔ．Ｃｈａｒｌｅｓ所在）。
【０１０１】
静脈グルコース耐性試験（ＩＶＧＴＴ）
動物を９８％酸素と２％フローセン（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）の吸入により麻酔した。尾部の先端を切断し、ベースライングルコースを測定し、記録した。０．５ｍｇ／ｋｇ用量の５０％グルコースの静脈注射を２０秒間にわたって行なった。血糖値測定は１、２、３、５、１０、２０、３０、４０、５０および６０分目に行った。その後、ラットは安楽死させた。
組織の処理
３ヶ月間抽出物で処理した後、各群の５匹の動物から膵臓を採取した。膵臓全体を除去し、４％緩衝液ホルマリン中で一晩固定し、パラフィン埋設した。４μｍ厚の連続切片を免疫細胞化学および画像分析用に切断した。
二重免疫細胞化学
連続切片をキシレンで脱ろうし、等級が低下するエタノールで水和した。スライド上の
切片を染色びん中で、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ＴＢＳ）（ｐＨ ７．４）に写し、アビジンＤ−ビオチン化ワサビペルオキシダーゼ（Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ社）およびストレプトアビジンビオチン複合体／アルカリホスファターゼ（Ｄａｋｏ社）を使用してインスリン（Ｓｉｇｍａ社）およびグルカゴン（Ｄａｋｏ社）について二重染色した。β細胞はインスリン陽性細胞として定義し、α細胞はグルカゴン陽性細胞として定義した。β細胞はＦｕｃｈｉｎレッド（赤色の沈積物）（Ｄａｋｏ社）で視覚化し、α細胞はＤＡＢ（褐色の沈積物）（Ｄａｋｏ社）で視覚化した。方法の対照は、一次抗血清、二次層の抗体またンはアビジンＤ−ビオチン化ワサビペルオキシダーゼ複合体／ストレプトアビジンビオチン複合体／アルカリホスファターゼをそれぞれ省略したものが関与した。
画像分析
β細胞およびα細胞を同じ切片に対して測定した。コンピュータ支援測定を、ビデオカメラと接続した標準的なＺｅｉｓｓ光学顕微鏡を用いて行った。インスリン陽性細胞とグルカゴン陽性細胞の面積を、全切片に対して測定した。測定した膵臓領域全体に対するインスリン陽性面積およびα陽性面積の比として、各切片において膵臓中のβ細胞とα細胞の体積を計算した。β細胞とα細胞のサイズは、測定した面積全体を、数えた核の数によって除算することにより計算した。膵島サイズの分布は以下のように分類した：（＜２５００μｍ）、（２５００μｍ＜７５００μｍ）、（７５００μｍ＜１２５００μｍ）、（１２５００μｍ＜２００００μｍ）、および（＞２００００μｍ）。膵島密度は、組織の合計面積を数えた膵島の数で除算することにより決定した。
統計分析
結果の有意差を試験するために両側（two-tailed）unpaired Student’s t-testを用いた。
全体的結果
本発明の抽出物で処理した肥満／インスリン抵抗性ラットでは、絶食時グルコースレベルが有意に低下した。いくつかの場合では、その低下がメトホルミンまたはロシグリタゾンよりも抽出物で大きかった。
結論
グルコース取込み増加において、チアゾリジン＋インスリン（脂肪細胞試験）、およびビグアニド（ＣＨＡＮＧ肝細胞）と同様の有効性が、植物抽出物により示された。
【０１０２】
抽出物での処理は、いくつかの場合では、ストレプトゾトシン処理（後期Ｔ２Ｄ）における血漿グルコースレベルの低下に、メトホルミンおよびロシグリタゾンより効果的であった。
【０１０３】
上記抽出物が、悪化したグルコースレベルの正常化に有効であることが期待される。
実施例II
この実験により、血漿グルコースレベルを低下させるための、本発明の植物抽出物の最適用量を得る。この実験では、可能な限りヒトの状況に近づけるためにサルを用いた。
使用についての正当性および有用性評価
ベルベット（Ｖｅｒｖｅｔ）モンキー（クロロセブス・アエチオプス（Ｃｈｌｏｒｏｃｅｂｕｓ ａｅｔｈｉｏｐｓ））は、２種のアフリカ産非ヒト霊長類のうちの１種であり、生物医学の研究に最も一般的に用いられる南アフリカの固有種である。いくつかの例外があるが、非ヒト霊長類の使用は、国際的には生物学的考慮よりもむしろ地政学およびロジスティックスによる影響を受けてきた。ベルベットモンキーは、同じ亜科に属することから、マカク（即ちアカゲザル）に分類学的に密接に関連する（Ｆａｉｒｂａｎｋｓ ２００２年）。
【０１０４】
ベルベットモンキーは、ウイルス学、細菌学、寄生虫学、神経学、毒性学、生殖学および細胞生物学をはじめとする多くの分野で用いられているが、それらは心臓血管疾患および代謝疾患の分野で特に有用であることが立証されている。その結果として、情報および
データを含む文献が豊富になり、この確立されたモデルの有用性が評価された（ｄｅ Ｖｒｉｅｓ他 ２００７年、Ｆａｉｒｂａｎｋｓ ２００２年、Ｆｉｎｃｈａｍ他 １９９８年、Ｋａｖａｎａｇｈ他 ２００７年、Ｌｏｕｗ他 １９９７年、Ｍａｒｔｉｎ他 １９９０年、Ｒｕｄｅｌ他 １９８１年、Ｓｍｕｔｓ他 １９９２年、ＳｕｃｋｌｉｎｇおよびＪａｃｋｓｏｎ １９９３年、Ｗａｌｌａｃｅ他 ２００５年、Ｗｅｉｇｈｔ他 １９９８年）。
【０１０５】
ベルベットモンキーが一時的な肥満、インスリン抵抗性および２型糖尿病を発症することを強調することが重要である（Ｆａｉｒｂａｎｋｓ ２００２年、Ｆｒａｎｃｉｓ他 １９９９年、Ｋａｖａｎａｇｈ他 ２００７年、Ｔｉｇｎｏ他 ２００５年）。特定のコロニーでは雌の２５％および雄の１６％もの多くが、肥満であることが報告されている（Ｋａｖａｎａｇｈ他 ２００７年）。非ヒトの霊長類は、ヒトと同様に、腎臓、血管および神経学をはじめとする関連の合併症の全てを発症する（Ｔｉｇｎｏ他 ２００５年）。ベルベットモンキーの幾つかの母集団では、４％もの高い割合が、異常に高い血漿グルコース濃度を有する可能性があり（Ｆａｉｒｂａｎｋｓ ２００２年、Ｋａｖａｎａｇｈ他
２００７年）、腹囲と血漿インスリンと血漿トリグリセリド濃度の間には強い正の関連性がある（Ｋａｖａｎａｇｈ他 ２００７年）。肥満および関連の血漿脂質および他の危険因子が、この種で遺伝し得ることも確証された（Ｋａｖａｎａｇｈ他 ２００７年）。
【０１０６】
ベルベットモンキーが一時的な動脈硬化を発症し、実験的栄養操作に十分に応答して脂質異常症を発症し、最終的に粥状動脈硬化を発症することに留意することも重要である（Ｆａｉｒｂａｎｋｓ ２００２年、Ｒｕｄｅｌ他 １９８１年、Ｆｉｎｃｈａｍ他 １９９８年、ＳｕｃｋｌｉｎｇおよびＪａｃｋｓｏｎ １９９３年）。関連する潜在的機序および病巣は、ヒトの状態を模倣しており（Ｆｉｎｃｈａｍ他 １９９６年、Ｆｉｎｃｈａｍ他 １９９８年、Ｒｕｄｅｌ他 １９８１年）、ベルベットモンキーは、詳細に記録されたものより古い、そしてより新しい薬理学的介入法に応答する（Ｆｉｎｃｈａｍ他 １９９６年、Ｓｔ．Ｃｌａｉｒ他 １９８１年、Ｗａｌｌａｃｅ他 ２００５年）。
霊長類の管理
この試験での霊長類の管理および世話は、研究および訓練における動物の使用（ＭＲＣ
Ｇｕｉｄｌｉｎｅｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌｓ ｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｒａｉｎｉｎｇ）に関する文書化された標準業務手順（Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ）（Ｍｄｈｌｕｌｉ ２００５年）およびＭＲＣガイドライン（ＭＲＣ Ｇｕｉｄｌｉｎｅｓ） 、南アフリカでの薬物および関連物質の研究、教育、診断および試験における動物使用のための国家規約（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｄｅ ｆｏｒ Ａｎｉｍａｌ Ｕｓｅ ｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ， Ｄｉａｆｎｏｓｉｓ ａｎｄＴｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ａｎｄ Ｒｅｌｅｔｅｄ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ｉｎ Ｓｏｕｔｈ Ａｆｒｉｃａ）、ならびに１９９７年 獣医およびパラ獣医職の法令：実験動物技術者のパラ獣医職の実施に関する規約（Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ ａｎｄ Ｐａｒａ−Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎｓ Ａｃｔ ｏｆ １９９７： Ｒｕｌｅｓ ｒｅｌａｔｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｐｒａｃｔｉｃｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｒａ−Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｓｔ）に従った。
サルの選択および永久識別
この試験で選択された個体は全て、健常な成体雄および雌の第２世代飼育繁殖個体で、平均体重はそれぞれ５．５６kg（±０．７２４）および３．１６ｋｇ（±０．２６６）であった。平均年齢が雄では１２歳、雌では７歳であった。雌ベルベットモンキーは約２．５〜３歳で、雄では約３．０〜４．０歳で飼育下で性的に成熟する（Ｅｌｅｙ １９９２年）。
【０１０７】
個体は全て、身体検査および過去の臨床記録による判定で明白な病巣を有さず、年齢に応じた正常な体重であり、永久番号をインク刺青で識別された。加えて、個体番号、群の名称、および実験番号をケージに印字した。
環境条件
この試験で使用されたベルベットモンキーは全て、同一の飼育条件下でＭＲＣの技術およびイノベーション理事会（Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｄｉｒｅｃｔｏｒａｔｅ）の霊長類施設（Ｐｒｉｍａｔｅ Ｕｎｉｔ）で飼育された。施設は、密閉された室内環境で２４〜２６℃、湿度約４５％で、１時間内に約１５〜２０分間換気され、１２時間の光照射が保持された、完全に空調管理された１４の動物室で構成されている。部屋は全て陽圧に保持され、別々の給気を有している。
飼育
飼育は試験期間中は単独で行われ、９０×７０×１２０cmの吊り下げ式のめっきスチールケージで構成され、１室に２４匹のサルが飼育された。動物室を１日１回清掃した。ケージの寸法は、単独動物のための南アフリカ国家規約（Ｓｏｕｔｈ Ａｆｒｉｃａ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｄｅ）の要件と一致している。
飼料および水
水は自動給水装置によって自由に利用できた。トウモロコシ粉を基にした維持食は、霊長類施設で生産されたもので、３世代での良好な成長および生殖を支えた（Ｓｅｉｅｒ １９８６年）。添加された微量および多量栄養素を含む乾燥トウモロコシ粉７０ｇを水と硬練りに混合して、サルに午前７：００、午前１１：００に、そして栄養を添加していない別の７０ｇを午後３：００に給餌した。これにより、サルごとに１日あたり２４１２キロジュールが供給され、タンパク質からは１２％、脂肪から２０％および炭水化物から６８％のエネルギーが供給される。加えてりんごまたはオレンジが、正午に７０ｇ／匹／日
給餌される。飼料の詳細な組成は、過去に記載された（Ｆｉｎｃｈａｍ他 １９８７年、Ｖｅｎｔｅｒ他 １９９３年）。
補助施設
霊長類施設の活動は全て、ケージ清掃、食餌調製および保存、検査化合物の保存および配合、手順（即ち採血）、操作（観察（ｔｈｅａｔｒｅ））および検死のための専用区域および部屋と物理的に完全に分離されている。
飼育環境の強化（ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ）
一つのケージには、床上８０cmにある休息用のねぐら、採餌皿ならびに同種とのグルーミングおよび物理的接触が可能なコミュニケーションパネルが取り付けられている。９０×７０×２００cmの区域の運動ケージは、各サルが週に３回利用でき、居住ケージを離れて居住ケージではできない特定の活動で用いることができる（Ｓｅｉｅｒおよびｄｅ Ｌａｎｇｅ １９９６年）。そのケージは、同室および隣室の別の動物全てと３６０°コミュニケーションをとることができる（ガラスパネルを通して）。静かな音楽と鳥の鳴き声が各動物室に放送されて、聴覚的な退屈さが緩和される。他の強化方法は、過去に記載された（Ｓｅｉｅｒ他 ２００４年）。
健康および疾患の制御
動物は全て、年に４回、上瞼の皮膚内にＰＰＤを３０００単位注入されることにより、ＴＢに関して試験された。ＭＲＣの職員および学生、ならびにサービス業者を、年に２回の気管支分泌物のミコバクテリア培養により、ＴＢについて試験した。霊長類施設の標準操作手順に従って、更なる細菌学および血清学的試験をベルベットモンキーで時々実施し、許容される規準と一致させた（ＦＥＬＡＳＡ １９９８年）。これは、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、サルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、カンピロバクター菌（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）およびエルジニア菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）に関する試験を含んでいた。
ベルベットモンキーの取扱い、物質の投与、および試料の採取
ベルベットモンキーの手順および取扱いは、霊長類施設の標準業務手順、および前文に挙げられた他の全てのガイドラインに従った。それらは、実験動物技術の南アフリカ獣医
師評議会（ＳＡ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｃｏｕｎｃｉｌ）に登録されている完全に認定された熟練の実験動物技術者により実施および／または監督されている。
観察
動物は全て、１日３回観察して、処理による潜在的な身体副作用を測定した。以下の基準を用いた：姿勢、協応、移動、活発さ、挙動（警戒、恐怖、攻撃、うろたえ、抑うつ、発声）、体腔からの排泄、食欲、糞および尿の状態。
ＧＭＰ ＡＲＣ１３７の調製
霊長類モデルの生物活性を試験するために、本発明による植物抽出物を調製した。生物活性について予め試験された有機認証された緑色のシクロピア サブターナタの葉および茎を、ｃＧＭＰ施設で加工した。
製造の詳細
両方の生成物の製造過程は、以下の施設操作を含んでいた：植物材料の抽出、抽出物と小粒子物質との分離、蒸発、濃縮物のＨＴＳＴ滅菌、濃縮物の真空乾燥および微小生成物粉末のふるい。
抽出物の調製
植物材料を、パーコレータあたり２００kgの２つの部分に抽出した。予め９３℃に加熱された精製水（２０００kg）を、１：１０の割合でパーコレータの上部から加え、得られた抽出物を３５分間循環させた。抽出が終了したら、部分１を排水して、更なる２００ｋｇの精製水で洗浄し、乾燥残渣を３．０％含む総重量１８８９kgの水性抽出物を得た（乾燥抽出物の収率−２８．６％）。部分２を同様の手法で抽出したが、乾燥残渣を２．９２％含む水性抽出物１８８９kgを得た（乾燥抽出物の収率−２７．６％）。
【０１０８】
沈降物を３０分毎に排水循環しながら、抽出物を１０００l/hの流速で高温遠心分離し
た。遠心分離後に回収した最終抽出物は３７５３kgであり、乾燥残渣の収率は２．９８％であった。
【０１０９】
遠心分離後に、入口温度７８℃未満の水性抽出物を、真空下、５５℃未満の平板型エバポレータで４７２kgおよび乾燥残渣２３．９８％に濃縮した。
濃縮物を流速３８５〜４４５l/h、１２１〜１２３℃（約６８秒）でＨＴＳＴ滅菌した
。滅菌後に濃縮物を２５℃未満に冷却した。精製水を用いて、植物を洗浄し、最終的な滅菌濃縮物４８５kgを乾燥残渣２２．９３％で得た。
【０１１０】
滅菌濃縮物を真空乾燥機（モデル２０００（Ｍｏｄｅｌ ２０００））で生成物温度４６℃未満で２４時間、乾燥させた。乾燥させた後、粉末を２種のふるい（２mm、その後０．５mm）でふるいにかけて、真空乾燥機の羽の回転時に形成された塊を除去した。
【０１１１】
ふるいにかけた粉末を２つのＰＥバッグ（３４．４５ｋｇ、４６．３５ｋｇ）に入れ、その後、別々にアルミニウムコートされたファイバードラムに密閉した。
植物材料
植物材料のＨＰＬＣフィンガープリントを、本発明の水性抽出物で測定した。植物材料を水浴中、脱イオン精製水（１：１０の比）で９０〜９３℃で３０分間抽出し、高温でワットマン４番ろ紙でろ過して凍結し、その後凍結乾燥することにより、抽出物を調製した。ＨＰＬＣ分析では、凍結乾燥抽出物を精製水で再構成した。
【０１１２】
最終生成物（ＧＭＰ ＡＲＣ１３７）のＨＰＬＣフィンガープリントを、精製水で再生された抽出物で測定した。
結果
図１は、２８８ｎｍおよび３５０ｎｍの関連検出波長における植物材料の実験室規模水性抽出物のＨＰＬＣフィンガープリントを示す。図２は、同じ関連検出波長における、本発明の採収ＧＭＰ乾燥抽出物のＨＰＬＣフィンガープリントを示す。
ベルベットモンキーの用量最適化試験
対照
サル３匹を対照群に無作為化した。対照群のサルは、乾燥抽出物を含まない維持食（ボール形に成形）を配給量７０ｇで１日３回、７日間摂取した。７日目にサルを一晩（１３時間）絶食して、ベースライン血液試料を採取した後、サルはボール形維持食ボーラスを摂取した。その後、ケタミン麻酔（１０mg/kg体重 筋肉注射）の下、１時間ごとに６時
間、大腿静脈穿刺で血液試料を採取した。
対照群の結果の考察
８８番のサルは、モニタリング期間の最初の２時間の間安定した４．５mMol/lの絶食時ベースライン血糖値を示し、その後、血糖値は第３時間目までに、血糖の３５．５６％の低下率に相当する２．９mMol/lまで顕著に低下し、その後、４時間後に３．６まで、５および６時間後に３．９mMol/lまでわずかに増大した。１０８２番のサルは、５．２mMol/lというわずかに高い絶食時ベースライン血糖値を示していたが、最初の２時間で１時間目および２時間目にそれぞれ５．３mMol/lおよび５．６mMol/lまでさらに血糖値が増大し、その後３時間目に４．４mMol/lに減少した。血糖値は４時間目および５時間目に４．１ mMol/lおよび３．５mMol/lに低下し続け、その後６時間目に４．７mMol/lにわずかに増大した。５時間目に３２．６９％という最も高い血糖低下率が観察された。３３３番のサルは、６時間のモニタリング期間の一時間ごとの時点で４．６mMol/lのベースライン血糖値を超える増加した血糖レベルを示した。６時間目に、サルは、ベースライン血糖値から計算された血糖増加率４４．２３％に相当する７．５mMol/lの血糖値を有し高血糖となった。この血糖の増加は、長期間の絶食に対する糖尿病動物の典型的な反応である糖新生により引き起こされたものである。
実験群
１mg/kg、２．５mg/kg、５mg/kgおよび２５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７（先に記載されたシクロピア サブターナタの葉および茎の抽出物）を１日３回受ける４つの実験群に、サル９匹を無作為化した。各実験群のサルは全て、ボーラスとして維持食のボール７０ｇに成形されたＧＭＰ ＡＲＣ１３７の予め計量された一部を１日３回、７日間摂取した。７日目にサルを一晩（１３時間）絶食して、ベースライン血液試料を採取した後、サルは各量の乾燥抽出物を含む維持食ボーラスを摂取した。その後、ケタミン麻酔（１０mg/kg体重 筋肉注射）の下、１時間ごとに６時間、大腿静脈穿刺で血液試料を採取した。
【０１１３】
ＧＭＰ ＡＲＣ１３７ １．０mg/kg実験群結果の考察
１０８４番のサルは、５．７mMol/lの高い絶食時ベースライン血糖値を示した。１．０mg/kgのＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含むボーラスを受けた後、１時間目の血糖値レベルが５．
３mMol/lへまずわずかに低下した後、２時間で血糖レベルは血糖パーセンテージで５０．８８％の低下に相当する２．８mMol/lに急激に減少し、その後、３時間目に３．９mMol/lに回復した。その後、血糖レベルは４および５時間目にそれぞれ４．２mMol/lおよび４．５mMol/lで安定し、６時間で５．３mMol/lに増加した。
【０１１４】
１０８１番のサルは、７．５mMol/lという高血糖症の絶食時ベースライン血糖値を示した。１．０mg/kgのＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含むボーラスを受け取った後、１時間目に血
糖パーセンテージの４０％の低下に相当する１．４mMol/lだけ血糖値が減少し、２時間目にはさらに１．６mMol/lだけ４．５mMol/lまで低下し続けた。次の２時間は血糖レベルが４．６mMol/lに維持され、５時間で５．２mMol/lにわずかに増加した。６時間で、血糖値は、ベースライン値より４１．３３％（３．１mMol/l）低い４．４mMol/lに減少した。
【０１１５】
２６６番のサルは、５．３mMol/lの適度に高いベースライン血糖を示した。１．０mg/kgのＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含むボーラスを受けた後、１および２時間目に、血糖値は、
５．０および５．１mMol/lに留まり、その後３および４時間目に５．７mMol/lおよび５．８mMol/lにそれぞれ増加した。５時間で血糖値は７．３mMol/lに急激に増大し、その後６
時間で５．５mMol/lまで減少したが、これは依然として５．３mMol/lベースライン値より高かった。他の２匹のサルとは鋭く対照的に、２６６番のサルは、１mg/kgの投与量では
ＧＭＰ ＡＲＣ１３７に応答しなかった。１および２時間目に血糖パーセンテージの非常に少量最初に低下した後、グルコースレベルは、５時間で４０．３８％のピークに増加し、６時間では５．７７％に低下した。
【０１１６】
２．５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７実験群結果の考察
７８番のサルは、４．６mMol/の絶食時ベースライン血糖値を有し、２．５mg/kg ＧＭＰ
１３７抽出物を含むボーラスを受けた１時間後に、血糖値の１mMol/l（２１．７４％）の低下を示した。ベースライン値に対して計算した血糖値の１５．２２％と２８．２５％の間の範囲のベースラインレベルよりも低い値が、６時間のモニタリング期間の残りの間の維持された。
【０１１７】
１０８３番のサルは、２．５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含むボーラスを受けた後
１時間後に、４．４mMol/lのベースライン血糖値と比較して、５．０mMol/lに血糖値の増加を示した。２時間で、血糖レベルは、３．２mMol/lへと１．８mMol/lだけ著しく減少し、次に、３時間で２．８mMol/lにさらに低下した。その後、血糖レベルは、残るモニタリング期間の間約３．０mMol/lに維持された。
【０１１８】
１０８４番のサルは、５．７mMol/lという高い空腹時血糖ベースラインを示した。２．５mg/kg ＧＭＰ抽出物を含むボーラスを受けた後、１時間で血糖値は５．３mMol/lに上
昇したままだったが、２時間で、血糖パーセンテージの４３．６％低下に相当する３．２mMol/lに大幅に減少し、その後、血糖値は、３．７mMol/l（ベースライン血糖値よりも３５．７％低いレベル）で安定していた。
【０１１９】
５．０mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７実験群結果の考察
１０７９番目のサルは、５mg/kgのＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含むボーラスを受けた後、１
および２時間目に３．７mMol/lのベースライン値から４．５mMol/lおよび４．６mMol/lへの血糖レベルの増加をそれぞれ示した。３時間で、血糖値は３．３mMol/lに減少し、４時間で４．３mMol/lに増加し、次に５および６時間で３．６mMol/lおよび３．８mMol/lというベースライン値の付近でそれぞれ安定した。
【０１２０】
１０８１番のサルは、７．５mMol/lの高血糖症の絶食時ベースライン血糖値を示した。
５．０mg/kgのＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含むボーラスを受けた１時間後、血糖値は、７
．２mMol/lとまだ高かった。２時間後に、血糖は４．６mMol/lに急激に減少し、モニタリング期間の最後の４時間の間、血糖値は５mMol/lと６mMol/lの間で安定化した。
【０１２１】
２５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７実験群結果の考察
１１９番のサルは、５．５mMol/lという適度に高い絶食時ベースライン血糖値を示した。２５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含むボーラスを受けた１時間後、血糖値は４．８mMol/lに減少した。４．９mMol/lの血糖値がさらに２時間維持され、その後４時間で５．４mMol/lにわずかに増加した。その後、血糖レベルは、５時間で４．３mM ol/lにわずかに減少し、６時間で４．９mMol/lに増加した。
【０１２２】
２５８番目のサルは、２１．２mMol/lという極端に高血糖の血糖ベースライン値を示した。これは、後期２型または１型糖尿病患者が要求するインシュリン支援に臨床的に一致している。２５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含むボーラスを受けた１時間後、血糖レ
ベルは４mMol/lだけ減少して１７．２mMol/lとなり、その後、２時間で１８．２mMol/lに安定化した。３時間で、血糖はさらに４mMol/l低下して１４．２mMol/lとなり、これはベースライン血糖値に対して計算した血糖パーセンテージの３３．２％の低下を表わしてい
る。４時間で、血糖値は、１６．８mMol/lにわずかに増大したが、これはベースライン値よりもまだ２０．７５％低く、その後５および６時間で１４．３および１３．３mMol/lにさらに減少した。
【０１２３】
２６６番のサルは、５．２mMol/lという適度に高い絶食時ベースライン血糖値を示した。 この値は、２５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含むボーラスを受け取った１時間後
には５．８mMol/lにさらに増加した。しかしながら、血糖値は、２および３時間で、４．２mMol/lおよび４．５mMol/lにそれぞれ低下した。その後、モニタリング期間の残りの間血糖レベルは維持されず、４、５および６時間で、６．０、７．０および６．１mMol/lにそれぞれ増加した。５および６時間目の値の増加は、長期間の絶食により糖尿病動物に糖新生が引き起こされたことを強く示唆している。
結果の概要
対照群
対照群では、試験されたサル３匹のうちいずれも、成形維持食の一部を摂取した後、最初の２時間は、ベースライン値からの低下を示さなかった。その後、サル３匹のうち２匹で、ベースライン値に比較してグルコース値の低下が観察された。
１．０mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７処理群の血糖値
１mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７群の結果は、全６時間のモニタリング期間に、サルの
うちの２匹のベースライン血糖値に比較して、血糖値の著しい低下を示した。
２．５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７処理群の血糖値
２．５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を摂取したサル３匹の血糖値は、最初の２時間で
血糖値の著しい低下を示し、その後の残りのモニタリング期間では、低い血糖値が維持された。
５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７処理群の血糖値
５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７処理群の２６３番のサルは、処理ボーラス摂食の開始
後、摂取した後、血糖値決定の朝に処理を拒んだため、研究から除外しなければならなかった。高い絶食ベースライン血糖値（高血糖症）を有する１０８１番のサルは、５mg/kg
ＧＭＰ ＡＲＣ１３７処理の２時間後に血糖値の著しい低下を示した。モニタリング期間の間、これらのレベルが維持された。１０７９番のサルはモニタリング期間中維持される正常血糖開始血糖レベルを有した。
２５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７処理群の血糖値
２５８番のサルは、２１．２mMol/lという絶食時ベースライン値を有する重度の高血糖症を示した。血糖値はモニタした核時点で減少しているが、６時間目の血糖レベルは依然として１３．３mMol/lであった。このサルは研究から除外した。残りの２つのサルは所与の投与量での処理に応答しなかった。
【０１２４】
種々の投与量のＧＭＰ ＡＲＣ１３７を受けたサルにおける結果の比較
２６６番のサルは１mg/kgおよび２５mg/kgのＧＭＰ ＡＲＣ１３７処理に応答しなかた。１０８１番のサルは、１mg/kgおよび５mg/kgのＧＭＰ ＡＲＣ１３７を受け、モニタした６時間にわたって顕著な血糖レベルの低下を示した。これに対し、１mg/kgでのＧＭＰ
ＡＲＣ１３７処理は低下がもっとも大きく、６時間のモニタリング機関の間もっとも低い血糖レベルを維持した。
【０１２５】
図１５は、ベルベットモンキーを異なる投与量の抽出物（ＡＲＣ１３７）で７日間処理した後の６時間の血漿グルコースの低下率を示す（平均データ）。
結論
小規模予備試験では、１〜２．５mg/kgの用量範囲のＧＭＰ ＡＲＣ１３７が、非ヒト
霊長類（クロロセブス・アエチオプス）の血糖値降下に最も効果的であった。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然物の分野に関し、より詳細には糖尿病の治療に有用な植物抽出物（植物エキス）および化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
非感染性疾患である糖尿病は、２つの主要な型、即ち１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）および２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）に分別することができる。Ｔ１Ｄは、β細胞の自己免疫性を特徴とする。Ｔ２Ｄでは、膵臓β細胞がインスリンを不十分にしか産生せず、末梢組織（肝臓、筋肉および脂肪組織）がインスリンの作用に対して「抵抗性」になる、即ちグルコースの取込みがこれらの標的組織において非効率になる。β細胞はＴ２Ｄの後期段階に破壊されることも多く、患者はインスリン治療に依存するようになる。糖尿病患者のうち、約５〜１０％は１型糖尿病であり、９０〜９５％は２型糖尿病である。主な糖尿病合併症としては、網膜症、脳血管疾患、冠動脈心疾患、ニューロパシー、末梢血管疾患、潰瘍および手足等の切断が挙げられる。こうして糖尿病は、身体全体の複数の器官および組織に影響を及ぼす。糖尿病の発症に寄与する因子としては、民族性（特に、移民の場合、特定の集団でＴ２Ｄ発生率が高い）、肥満、高脂肪食、子宮内環境、インスリン抵抗性および特定の候補遺伝子が挙げられる。
【０００３】
２型糖尿病の発生率は、世界的に増加している。遺伝的要因もその役割を担う可能性があるが、生活習慣の変化、例えば高脂肪の西洋食を取り入れたことで肥満となり、それがこの疾患が増加する要因にもなり得る。生活習慣の要因、例えば脂肪摂取量の増加および運動量の減少が、肥満およびインスリン抵抗性に関連することが示されている（非特許文献１および２参照）。ラットでは、高脂肪食はインスリン刺激による解糖およびグリコーゲン合成の低下に関連したインスリン抵抗性の状態を誘発する（非特許文献３参照）。この疾患は、末梢インスリン応答組織、例えば筋肉および脂肪組織がインスリン応答性を著しく低下させ、血中のグルコースおよび脂肪酸の循環が増加した結果である。インスリンへの応答性が低いと解糖が減少し、その一方で、健常な状態ならインスリンによりスイッチが切られている肝臓での糖新生およびグリコーゲン分解が開始する。膵臓β細胞は、過剰なインスリンを産生し、分泌されるインスリン量を増加させることにより、初期インスリン抵抗期を切り抜けることができる（非特許文献４参照）。正常血糖を維持するために結果的に高インスリン血症となり、最終的に細胞の機能不全となり（非特許文献５参照）、顕性糖尿病となる。２型糖尿病が末梢および細胞レベルの両方で生じる傷害に依存することは明白である（非特許文献６参照）。
【０００４】
インスリン抵抗性とそれに続くβ細胞の不全が、正常な耐糖能から耐糖能障害を介したＴ２Ｄへの進行に影響を及ぼす主因であることは確定されている。田舎から都会への移住に伴う生活習慣の変化が、都会の黒人南アフリカ人の肥満を増加させ、これがインスリン抵抗性につながるが、これはＴ２Ｄのもう一つの特徴である。インスリン抵抗状態を補うために、β細胞はより多くのインスリンを産生し、このため既にオーバーワークとなったβ細胞への要求が高まり、β細胞が疲弊して最終的にはβ細胞不全となる。
【０００５】
１９８５年には世界の推定３０００万人が糖尿病であった。１９９５年までにその数は１億３５００万人に増加した。近年の世界保健機関（ＷＨＯ）の推定では、２０２５年には１２２％増加して、３億人が糖尿病となるようである。これは、２０２５年に３億３３００万人が糖尿病になり（罹患率６．３％）、４億７２００万人が耐糖能障害と診断される（ＩＧＴ；罹患率９％）という国際糖尿病連合（ＩＤＦ）の推定と一致する。先進国では５１００万人から７２００万人に４２％増加し（過体重および肥満の人が増加して、糖
尿病になるリスクが上昇）、発展途上国では８４００万人から２億２８００万人に１７０％増加する（食事の変化、身体活動の増加および急速な都市化など多数の因子により）と推定される。こうして糖尿病はこれまでは先進国の人々に影響を及ぼす西洋型の生活習慣病の疾患とみなされていたが、現在の傾向から２０２５年までに糖尿病の全人口の７５％が発展途上地域の人になることが示唆されている。発展途上地域の糖尿病発生率を高める別の因子は、発達プログラミングである。発展途上地域の多くの区分では、人々は子宮内で食糧不足（栄養不足）にさらされ、続いて生後に栄養過剰となることが多く、それがヒトにＴ２Ｄの素因を与えることが示された。更に現在では総数１１億人が過体重であり、３億２０００万人が肥満である（ＩＤＦ）。これが、肥満の多大な世界的経済負担を高めているが、肥満は糖尿病発生の主な危険因子であるため、これはすでに多大となっている糖尿病関連の経済負担を更に悪化させる可能性がある。
【０００６】
最小データに基づく南アフリカの控えめな推定値によれば、２０００年の５６０万人から２０１０年には８００万人増加すると予測されている。この最大の増加は、都市化を原因とする可能性が高く、それは黒人人口での生活習慣と、低脂肪食から高脂肪食への食事変化を伴うためである。１９９８年の数字は、都市の黒人南アフリカ人でＴ２Ｄ発生率が上昇し、その年齢別罹患率が８％近くにのぼり（非特許文献７参照）、１９７４年に発表された数字４．２％（非特許文献８参照）のほぼ２倍であることを示す。１９９６年の南アフリカでの死因上位２０位のデータ（非特許文献９参照）から、糖尿病が男性の１０位、女性の７位であることが明らかとなった。しかし糖尿病の合併症、例えば虚血性心疾患ならびに他の心臓血管および腎臓合併症が、死亡数に著しく寄与しており、調整した数字では、糖尿病が南アフリカでの死因の上位３または４位となる可能性がある。Ｔ２Ｄの発生率は、南アフリカのＨＩＶよりも大きく、つまりＴ２Ｄが国家的な注意事項であることは確かである。
【０００７】
糖尿病は高くつく疾患であり、南アフリカでの糖尿病治療にかかる経費の情報は入手できないが、間接的な経費が多く存在する。これらには、生活の質の低下、コミュニティーおよび全労働人口に寄与する能力ならびに経済へのその影響が挙げられる。これは、医療支援計画（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｉｄ Ｓｃｈｅｍｅｓ）への経費増加により悪化して、医療支援保険料（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｉｄ ｐｒｅｍｉｕｍｓ）を上昇させる。糖尿病は、経済にも直接、影響を及ぼす。南アフリカでの糖尿病関連の会計データはないが、英国で発表されたデータから、現在、糖尿病およびその合併症と診断されている英国の１５０万人を超える成人では、ナショナル・ヘルス・サービス（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｈｅａｌｔｈ
Ｓｅｒｖｉｃｅ）（ＮＨＳ）の総経費が１年あたり５２億ポンドであり、それがＮＨＳの総運営費の９％であることが示された。米国では、推定される直接費用は４４０億米国ドルであり、生産性の損失を加えるとこの数字は９８０億米国ドルに上昇する。同様の数字を、他の多くの国々についても得られる。
【０００８】
Ｔ２Ｄは、血漿グルコースレベルの上昇により診断される。しかし我々の過去の研究から、血糖値が上昇する時点までに、心臓血管系および膵臓に既に重篤な障害が生じていることが示された。血糖値上昇により糖尿病と診断された後に、例えば食事および運動ならびに／または利用可能な医薬処理などの治療によって血漿グルコースレベルを一時的に改善させることはできるが、疾患の進行を止めることはできない。これらの治療が不能となる割合は、β細胞が低下し続ける割合に関係する。現在の治療は、インスリン注射もしくはインスリン放出の刺激および／または医薬の作用を伴う。
【０００９】
膵臓によるインスリン産生の損傷から糖尿病状態に至るまでを説明する理論は多く存在する。２つの論文を参照する（非特許文献１０および１１参照）。これらの論文は、膵島の炎症がインスリン産生を妨害することを示している。具体的には膵島でインスリンを産生するβ細胞が、免疫攻撃により破壊される。そのようなβ細胞の破壊は、ＮＫ（ナチュ
ラルキラー）細胞およびダブルネガティブＴリンパ球など複数の型の免疫細胞から攻撃を受けるためと認識されている。
【００１０】
糖尿病は、治癒方法が知られておらず、潜行性であると考えられている。しかし、様々な治療を用いて、糖尿病が改善されてきた。例えば糖尿病の測定値を用いて、患者のタンパク質、脂肪、および炭水化物の相対量の均衡が保たれてきた。糖尿病の教育および認識プログラムも、いくつかの国で実行されてきた。加えて中等度または重度の糖尿病状態は、インスリン投与により治療されている。同じく「グルコシド」などの処方薬を用いて、成人発症の糖尿病で損傷されたインスリン産生を活性化させている。他の薬物を用いて、インスリンの有効性を調節している。いずれの場合でも、若年または成人のいずれかで発症した糖尿病の治療は、部分的にしか成功に至っていない。これは、ほとんどの薬物がβ細胞機能改善またはインスリン抵抗性の低下のいずれかを目的としており、疾患が徐々に増悪すると効果が減少するためである。このため患者は、疾患を抑制する薬物の併用（多くの場合、連日）を必要とする。
【００１１】
メトホルミンなどのビグアニドは、１９５０年代後期に２型糖尿病の治療に使用できるようになり、それ以来、効果的な血糖降下剤となった（非特許文献１２）。これらの薬剤の厳密な分子メカニズムは、ほとんど知られていない。メトホルミンは、インスリン抵抗改善薬として主に肝臓で作用し、そこでそれはグルコースの放出を抑制する（非特許文献１３）。メトホルミンは、呼吸鎖の複合体Ｉの酵素活性を阻害することが示されたが、それによりミトコンドリア機能および細胞呼吸の両方を減じ、それを行うことでＡＴＰ／ＡＤＰ比が低下してＡＭＰにより活性化されたプロテインキナーゼが活性化されると、短期的には触媒反応を起こし、長期的にはインスリン抵抗性改善を起こす（非特許文献１４および１５参照）。この薬物は、単独療法およびスルホニル尿素またはインスリンとの併用の両方に効果的であることが立証された（非特許文献１６参照）。若年性糖尿病は、発生率が増加しつつある世界的現象である。β細胞の発生、分化および機能にとって重要となる幾つかの主要な転写因子が、若年性糖尿病に関与する。これらの幾つかは、現在用いられる治療薬の直接の標的である。現在用いられる糖尿病薬の経費は非常に高く、より安価な代替治療の開発が有利となろう。Ｔ２Ｄの世界的負担は多大である。利用可能な糖尿病治療に持ちこたえて、罹患した患者の生活の質を改善する戦略的行動が必要である。これは、発展途上地域では特に当てはまる。このため、科学者たちは自国の生来の植物抽出物の有効性を研究している。
【００１２】
ハニーブッシュ（シクロピア（Ｃｙｃｌｏｐｉａ）種）は、南アフリカ共和国のウエスタン・ケープ州およびイースタン・ケープ州原産であり、蜂蜜のように、快く穏やかに甘い味と芳香を有するハーブティーを製造するために使用される。１９９０年代に、ハーブティーとしての、および通常の茶（カメリア・シネンシス（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）の代替物としてのハニーブッシュに対する関心が、現地市場および国際市場の両方で復活した。生産された大部分の茶は、現在国際的に市販されている。
【００１３】
ハニーブッシュへの国際的関心は、オランダ人および英国人の茶貿易まで遡る。後にケープタウンとなった入植地が、インドのお茶および東南アジアの香辛料を取引していたオランダの東インド会社の供給拠点として１６５２年に確立された。植物学者は、その後すぐに岬の豊富な植物相のカタログを作成し始め、ハニーブッシュという植物は１７０５年までに植物学の文献に記された。ハニーブッシュは入植者により、恐らく観察による原産地の慣習に基づいて、通常の茶の適切な代替物とすぐに認められた。１８１４年には、ケープ植民地が英国の支配下に入り、数年後には英語が公用語となったが、これは南アフリカの知識を英国と米国を広げるのを促進した。１８７１年（非特許文献１７）には、ランゲバーグ（Ｌａｎｇｅｂｅｒｇ）山とシュバルツバーグ（Ｓｗａｒｔｂｅｒｇ）山に野生で生息する茶（「バーグ茶」（ｂｅｒｇｔｅｅ）と呼ばれる）は、それらの地域で飲料と
して広範囲に使用されていたことに留意する。１８９８年版のアメリカ薬品解説書（Ｋｉｎｇ‘ｓ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｅｓｐｅｎｓａｔｏｒｙ）には、茶の見出しの下、南アフリカのケープ植民地の茶としてのハニーブッシュの使用を示す１８８１年からの報告書を参照して、ハニーブッシュは代替物として既に列挙されている。初期の入植者は、ハニーブッシュの煎じ汁を慢性カタルおよび肺結核の去痰薬としても使用していた（非特許文献１８）。また、ハニーブッシュの煎じ汁は強壮薬としても使用されていた。非特許文献１９によれば、ハニーブッシュは健胃薬（消化の援助薬）として評価されていた。
【００１４】
ハニーブッシュという植物は、フィンボス（ｆｙｎｂｏｓ）の植物帯（バイオーム）で生育するマメ科（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ）の潅木である。バイオームは山脈によって境界を分けられた海岸沿いの狭い地域である。フィンボスは、主として小さな革のような葉を有する木のような植物により特徴付けられた植物の種類である（フィンボスは、細かい葉の植物を意味するオランダ語に由来する）。
【００１５】
ハニーブッシュ植物は、三出葉、単生花を咲かせる花序、および甘く香る鮮黄色の花により容易に識別される。花は、花弁に目立つ溝があり、がくの基部が割り込んでおり（侵入している）、小花柄の周囲の基部で融合した２つの包葉を有している。シクロピアの属名は、がくの侵入する基部をほのめかすものであり、これは花の独特な外観に寄与している。 ハニーブッシュ植物は木のような茎と、茎に対して比較的低い葉の比と、殻の硬い種子を有する。茶のための最も望ましい構成要素は葉と花であるが、比較的無味の茎も製品に含まれている。
【００１６】
大部分のハニーブッシュティーは、いまだ野生集団から収集されているが、産業の急速な成長に伴い栽培が必要になっている。南アフリカのこの狭い地域で識別されているシクロピアは約２ダースの種があるが、ハニーブッシュの商用供給源はシクロピア インターメディア（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）とシクロピア サブターナタ（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｓｕｂｔｅｒｎａｔａ）から主に得られる。ほとんどの種は分布範囲が非常に限られており、固有の生息地選好を有している。いくつかの種は、山頂、恒常河川、湿地領域、頁岩地帯または湿地の南斜面に限られている。シクロピア マキュレータ（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｍａｃｕｌａｔａ）、シクロピア ゲニストイデス（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｇｅｎｉｓｔｏｉｄｅｓ）およびシクロピア セシリフローラ（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｓｅｓｓｉｌｉｆｌｏｒａ）等のいくつかの種が、家庭での消費用に使用されている。すべてのシクロピア種がお茶を作るのに適しているようであるが、味の品質は変わる場合があり、また、いくつかの種は非常に少量しか存在しない。
【００１７】
葉形および葉のサイズは種間で異なるが、大部分は、薄い針のような細長い葉である。すべての種は、それらが特有の甘い蜂蜜の匂いのする特殊な濃黄色の花で覆われているため、開花期に野原で容易に識別される。伝統的に、茶は開花中に、種の開花期間に依存して、初秋または晩春のいずれかに収穫される。しかしながら、製品に対するより大きな需要があるため、今は収穫が夏に起こっている。
【００１８】
南アフリカにおけるハニーブッシュの生産は、近年著しく成長している。１９９９年には、約５０トンの植物が輸出され、２００５年までに３００トンまで成長しており、主な市場はドイツである。ほとんどの茶は輸出されるが、国内消費にも実質的な成長があった。茶は、従来の「発酵」（酸化）製品として主として売られており、緑（「無発酵」）のハニーブッシュは少量であり、最初の商用生産は２００１年では地域市場と国際市場の両方で売られている。
【００１９】
ハニーブッシュティーは単純なハーブの煎じ汁として作られる。茶代替品としてその初期に認識された利点の１つは、カフェインがないことであり、これは夜間に消費したり、
また、神経過敏に係っていて通常の茶を避けたい人に特に適している。その結果、ハニーブッシュティーは、特定の鎮静特性は有しないかもしれないが、気分を鎮める飲料としての評判を有していた。また、ブッシュ茶は通常の茶よりタンニン酸含量が低いため、いくつかの等級の紅茶または緑茶に関する問題であったり通常の茶が長く浸されすぎた場合の問題であったりする、非常に渋みのある茶にはならない。
【００２０】
咳を治療するための茶の従来の使用は、一部分では、イノシトールに類似した修飾した糖であるピニトールの含量（グルコースの１つの位置の水素とメチル基が置き換わっている）によって説明され得る。ピニトールは、その主な供給源である松の木（パインツリー）から共鳴したものであるが、いくつかのマメ科植物の葉に見出され、去痰薬である。ピニトールは、実験室の動物試験で実証されているように血糖値低下作用を有するらしい（インスリンの作用を増加させ得る）ことに関心が向けられており、糖尿病薬と見なされている。ハニーブッシュは、キサントン、フラバノン、フラボン、イソフラボン、クメスタンおよび４−ヒドロキシ桂皮酸を含み、シクロピア種間にはフェノール化合物の質および量に差がある。マンギフェリンとヘスペリジンはシクロピア種における主要なモノマーのポリフェノールである。ポリフェノールは酸化防止剤として役立ち、血中脂質を保護するのを支援し得る。イソフラボンとクメスタンは、フィトエストロゲンとして分類され、ハニーブッシュが最近評価された応用例として、更年期症状の治療に使用されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】Ｌｉｐｍａｎ他，１９７２年
【非特許文献２】ＬｏｖｅｊｏｙおよびＤｉＧｉｒｏｌａｍｏ，１９９２年
【非特許文献３】Ｋｉｍ他，２０００年
【非特許文献４】Ｐｉｒｏｌ他，２００４年
【非特許文献５】Ｋｈａｎ、２００３年
【非特許文献６】Ｋｈａｎ他，２０００年
【非特許文献７】Ｌｅｖｉｔｔ他，１９９３年
【非特許文献８】ＪｏｆｆｅおよびＳｅｆｔｅｌ
【非特許文献９】Ｂｒａｄｓｈａｗ他，１９９６年
【非特許文献１０】Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅに発表されたＮｅｒｕｐ Ｊ， Ｍａｎｄｒｕｐ−Ｐｏｕｌｓｅｎ Ｔ， Ｍｏｌｖｉｇ Ｊ， Ｈｅｌｑｖｉｓｔ Ｓ， Ｗｏｇｅｎｓｅｎ Ｌ， Ｅｇｅｂｅｒｇ Ｊ．、「Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｂｅｔａ−ｃｅｌｌ ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｙｐｅ Ｉ ｄｉａｂｅｔｅｓ」１９８８年；１１ 補足１：ｐ１６〜２３
【非特許文献１１】「Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｉｍｂａｌａｎｃｅ ａｎｄ Ｄｏｕｂｌｅ Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｔ Ｃｅｌｌｌｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ， Ｐｒｏｎｅ ａｎｄ Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ａｎｉｍａｌｓ」Ｈｏｓｓｚｕｆａｌｕｓｉ， Ｎ．， Ｃｈａｎ， Ｅ．，Ｇｒａｎｇｅｒ．，およびＣｈａｒｌｅｓ， Ｍ．；Ｊ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ， ５巻、ｐ３０５〜１８（１９９２年）
【非特許文献１２】ＶｉｇｎｅｒｉおよびＧｏｌｄｆｉｎｅ，１９８７年
【非特許文献１３】Ｇｏｌｄｆｉｎｅ，２００１年
【非特許文献１４】Ｂｒｕｎｍａｉｒ他，２００４年
【非特許文献１５】Ｔｉｉｋｋａｉｎｅｎ他，２００４年
【非特許文献１６】ＤａｖｉｄｓｏｎおよびＰｅｔｅｒｓ，１９９７年
【非特許文献１７】Ｓｍｉｔｈ，１９６６
【非特許文献１８】Ｗａｔｔ＆Ｂｒｅｙｅｒ−Ｂｒａｎｄｗｉｊｋ，１９３２年
【非特許文献１９】Ｍａｒｌｏｔｈ，１９２５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
インスリンはその脂肪生成的効果のため、２型糖尿病患者の肥満を促進するという望ましからぬ影響を有する（Ｍｏｌｌｅｒ， Ｄ． Ｅ．（２００１年） Ｎａｔｕｒｅ ４１４巻：ｐ８２１〜８２７参照）。不幸にも２型糖尿病患者のグルコース輸送を刺激するために現在用いられている他の抗糖尿病薬、例えばメトホルミンも、脂肪生成活性を有する。つまり現行の薬物療法は、血糖値の低下をもたらし得るが、多くの場合、肥満を促進する。したがって高血糖を治療する新しい組成物および治療方法が、望ましい。脂肪生成の副作用を伴わずにグルコース取込みを刺激する組成物が、特に望ましい。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本発明によれば、糖尿病を治療するための、ハニーブッシュ由来の新規かつ有用な組成物が提供される。
意外にも、本発明の植物抽出物を体重kgあたり約１mg〜約５mg、好ましくは約２．５mgの量で投与すると、優れた抗糖尿病効果を示すことが見出された。
【００２４】
従って、１〜２．５mg/kg体重の投与量で投与される、シクロピア属植物の水性抽出物
を含む抗糖尿病組成物を提供する。
本発明の治療は、本発明者がハニーブッシュ（シクロピア種、フィンボス）の水性抽出物が血糖値の抑制に効果的であることを見出したことから発見された。本発明による医療用途では、植物を回収し、乾燥させて、水および／またはアルコール、好ましくはエタノールなどの溶媒と混合する。
【００２５】
したがって第１の態様において、本発明は、シクロピア属植物の水性抽出物を含む抗糖尿病組成物に関し、シクロピア属は、好ましくはシクロピア ゲニストイデス（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｇｅｎｉｓｔｏｉｄｅｓ）、シクロピア サブターナタ（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｓｕｂｔｅｒｎａｔａ）、シクロピア インターメディア（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）、シクロピア セシリフローラ（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｓｅｓｓｉｌｉｆｌｏｒａ）、
シクロピア マキュレータ（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｍａｃｕｌａｔａ）、シクロピア ロンギフォリア（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｌｏｎｇｉｆｏｌｉａ）、シクロピア ピリカータ（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｐｌｉｃａｔａ）、シクロピア パベセンス（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ）、シクロピア ボーキシフロリア（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｂａｕｘｉｆｌｏｌｉａ）、シクロピア マイヤリアナ（Ｃｙｃｌｏｐｉａ ｍｅｙｅｒｉａｎａ）、および／またはそれらの組み合わせである。
【００２６】
本発明の別の態様において、
（ａ）シクロピア植物またはその一部を提供するステップ、
（ｂ）前記植物またはその一部を、前記植物抽出物の可溶化に適した水および／またはアルコール、好ましくはエタノールなどの非毒性溶媒と併用するステップ、
（ｃ）前記植物抽出物を回収するステップ、および
（ｄ）任意選択で乾燥させるステップ、
を含む抗糖尿病効果を有する植物シクロピアの治療抽出物を単離する方法が提供される。
【００２７】
本発明者は、植物シクロピア属の抽出物を投与すると、特に糖尿病前状態とも呼ばれる糖尿病の初期段階で糖尿病の治療が可能になることを見出した。
つまり本発明は、植物シクロピア属由来の組成物、ならびに高血糖患者、特に２型糖尿病患者および過体重の糖尿病患者を治療する方法に関する。好ましい実施形態において、本発明は、高血糖の患者を治療するためのシクロピア植物抽出物を提供する。
【００２８】
本発明は、高血糖の患者の血糖値を低下させる方法も提供する。その方法は、シクロピ
ア植物抽出物を高血糖患者に投与することを含む。その抽出物を注射により患者に投与することはできるが、好ましい投与方法は、経口投与を含む。その方法は、高血糖の患者および糖尿病患者を治療するのに有用である。その方法は、２型糖尿病に罹患していて特にその初期段階にある過体重の患者を治療するのに特に有用である。
【００２９】
本発明者は、本発明の抽出物がＧｌｕｔ４およびＧｌｕｔ２の活性を独立した手法で上昇させるため、幾つかの例ではこれらのグルコーストランスポータが両者ともより活性化されるが、他の例ではそれらの一方のみが活性となることも見出した。したがって本発明は、シクロピアの抽出物をＧｌｕｔ４および／またはＧｌｕｔ２の活性を上昇させる量で、ほ乳類に投与するステップを含む、ほ乳類の糖尿病を抑制する方法も提供する。
【００３０】
その結果、本発明は、その抽出物の活性成分をスクリーニングするのにも有用である。つまり本発明は更に、Ｇｌｕｔ４および／またはＧｌｕｔ２の活性を上昇させる化合物を決定するステップを含む、抽出物の特定の化合物をほ乳類における抗糖尿病活性についてスクリーニングする方法を提供する。
【００３１】
シクロピアの水蒸気または水性抽出物が血糖の抑制に効果的であることを本発明者が見出したことから、本発明の治療が発見された。使用する場合、その植物を回収して乾燥させ、沸騰水と混合する。その後、抽出物を患者に一定周期で経口摂取させる。シクロピアは、フラボノイドおよび他の第２の植物産物が豊富であることが公知である。
【００３２】
シクロピアから特異的なフラボノイドを抽出および分画し、それを糖尿病ラットに投与したところ、抽出物によるものと同様の結果が得られた。具体的に用いられたフラボノイドは、マンギフェリンおよびヘスペリジンであった。その後、これらのフラボノイドを併用すると最も効果的となることが発見された。実に意外なことに、特にマンギフェリンは、血糖の低下に効果的であり、Ｔ１ＤおよびＴ２Ｄラット両方の糖尿病症状を概ね改善するのに効果的であることが見出された。従来の知識はこの２種の糖尿病形態が基本的に異なる原因（それぞれβ細胞破壊および筋肉内でのインスリン抵抗性）を有すると教示しているため、この結果は予期せぬものであった。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】ＧＭＰ ＡＲＣ１３７の製造に用いられる、シクロピア植物材料の水性抽出物のＨＰＬＣフィンガープリントを示す（Ａ＝２８８nmでのクロマトグラム；Ｂ＝３２０nmでのクロマトグラム）。
【図２】ＧＭＰ ＡＲＣ１３７のＨＰＬＣフィンガープリントを示す（Ａ＝２８８nmでのクロマトグラム；Ｂ＝３２０nmでのクロマトグラム）。
【図３】６時間のモニタリング期間でプロットされた、対照サル２匹の１時間あたりの血糖値を示す。ベースライン値（０時間）は、サルが維持食ボーラスを摂取する前の絶食時血糖値を表す。
【図４】対照群のベースライン血糖値から計算された平均血糖値低下率または上昇率を示す。血糖値はベースライン値前後を保持し、サルが維持食を７０ｇ摂取した後３、４および５時間目に、わずかに低い値が認められた。
【図５】６時間のモニタリング期間でプロットされた、１mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を摂取した実験群のサル３匹の血糖値を示す。ベースライン値（０時間）は、サルが１mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含む維持食ボーラスを摂取する前の絶食時血糖値を表す。
【図６】ベースライン血糖値から計算された平均血糖値低下率または上昇率を示す。血糖の最大低下率は、１mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７摂取後２時間目に生じた。顕著に低い血糖値が、３および４時間目に依然として保持された。
【図７】６時間のモニタリング期間でプロットされた、２．５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を摂取した実験群のサル３匹の血糖値を示す。ベースライン値（０時間）は、サルが２．５mg/kgをＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含む維持食ボーラスを摂取する前の絶食時血糖値を表す。
【図８】ベースライン血糖値から計算された平均血糖値低下率または上昇率を示す。血糖の最大低下率は、１mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７摂取後２時間目に生じた。著しい血糖値低下が、その後、この低下したレベルはモニタリング期間の全６時間にわたり保持された。
【図９】６時間のモニタリング期間でプロットされた、５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を摂取した実験群のサル３匹の血糖値を示す。ベースライン値（０時間）は、サルが５．０mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含む維持食ボーラスを摂取する前の絶食時血糖値を表す。
【図１０】ベースライン血糖値から計算された平均血糖値低下率または上昇率を示す。ＧＭＰを受けて２時間目に、わずかな減少ではあるが平均血糖値の割合がベースラインより低い値まで低下し、残りの４時間のモニタリング期間、このレベルが保持された。
【図１１】６時間のモニタリング期間でプロットされた、２５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を摂取した実験群のサル３匹の血糖値を示す。ベースライン値（０時間）は、サルが２．５mg/kgＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含む維持食ボーラスを摂取する前の絶食時血糖値を表す。
【図１２】ベースライン血糖値から計算された平均血糖値低下率または上昇率を示す。２５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を摂取した後の血糖値の割合は、モニタリング期間の１時間ごとのすべての時点でベースライン値よりもわずかに低く、血糖値最大低下率は３時間目に生じた。
【図１３】単回の２５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７経口投与の後、３時間実施されたＯＧＴＴ（１g/kgグルコース）の結果を示す。得られたＳＴＺラットの血漿グルコースレベルは、摂取された時間全ての対照グルコース値と比較して低かった。
【図１４】単回の１mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７経口投与の後、３時間実施されたＯＧＴＴ（１．７５g/kgグルコース）の結果を示す。得られたサルＮｏ．７８の血漿グルコースレベルは、未処理サルグルコース値と比較すると、最初の９０分間低かった。
【図１５】７日間、ベルベットモンキーに異なる投与量の抽出物（ＡＲＣ１３７）で処理した後の６時間にわたる血漿グルコースの低下率を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
以下の記載を、当業者が本発明を製造および使用できるようにし、本発明者が予期する本発明実施の最良の形態を説明するために提供する。しかし、フラボノイドの投与を介して、特に本発明による植物抽出物の投与を介して、インスリン依存性およびインスリン非依存性の両方の糖尿病の治療を提供するために、本発明の一般原理を本明細書に具体的に定義しているため、当業者には容易に様々な改良が明白であろう。
定義
用語「糖尿病」は、一般にグルコースの産生および使用における代謝欠損により、体内で適切な血糖値を保持することができなくなることを特徴とする疾患または状態を意味する。これらの欠損の結果が、高血糖と呼ばれる血糖値の上昇である。２種の主な糖尿病形態が、１型糖尿病および２型糖尿病である。先に記載されたとおり１型糖尿病は、一般にインスリン、つまりグルコース利用を調節するホルモンの絶対的な欠乏の結果である。２型糖尿病は、多くの場合、正常または高いインスリン値であるにもかかわらず起こり、組織がインスリンに適宜応答することができないために生じる可能性がある。ほとんどの２型糖尿病患者は、インスリン抵抗性であり、インスリンの相対的な欠乏を有し、その場合、インスリン分泌物によって末梢組織によるインスリン応答への抵抗を補うことができない。加えて、多くの２型糖尿病は、肥満でもある。他の型のグルコース恒常性障害には耐糖能障害があり、これは正常なグルコース恒常性と糖尿病の間の中間的な代謝状態である。２型糖尿病および耐糖能障害の診断のガイドラインは、米国糖尿病学会（Ａｍｅｒｉｃ
ａｎ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）により要約されている（例えば、Ｔｈｅ Ｅｘｐｅｒｔ Ｃｏｍｍｕｎｉｔｔｅｅ ｏｎ ｔｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｍｅｌｌｉｔｕｓ， Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ，（１９９２年）２巻（補足１）：Ｓ５〜１９）。
【００３５】
用語糖尿病の「症状」としては、非限定的に、多尿症、多飲症、多食症、高インスリン血症、および本明細書で用いられる高血糖が挙げられ、その一般的な用法を含む。例えば「多尿症」は所定の期間に多量の尿が通過することを意味し；「多飲症」は慢性の口渇を意味し；「多食症」は過食を意味し、高インスリン血症は高レベルの血中インスリンを意味する。糖尿病の他の症状としては、例えば特定の感染の感受性上昇（特に真菌およびブドウ球菌感染）、吐気、およびケトアシドーシス（血中ケトン体の産生増加）が挙げられる。
投与量
ハニーブッシュ（シクロピア種）植物抽出物を、治療上有効な量、患者に投与する。本明細書で用いられる用語「治療上有効な量」は、有意義な効果、即ち患者の血糖値の低下を示すのに十分な総量を意味する。有意義な結果を得るのに必要な植物抽出物の投与量は、当業者がこの開示を参照すれば、適切な制御を行いながら日常的試験を実施することにより決定することができる。適切な処理群を対照と比較すれば、特定の投与量が患者の血糖値低下に効果的かどうかが示されよう。経口投与の場合、抽出物は、少なくとも０．１mg/kg体重、好ましくは少なくとも１mg/kg体重、より好ましくは少なくとも２．５mg/kg
体重、より好ましくは少なくとも５mg/kg体重、最も好ましくは少なくとも２５mg/kg体重、例えば少なくとも５０mg/kg体重、少なくとも７５mg/kg体重、少なくとも１００mg/kg
体重、少なくとも２５０mg/kg体重、および少なくとも５００mg/kg体重の用量でなければならない。
【００３６】
必要な植物抽出物の量は、治療される状態の性質および重症度、ならびに患者が受けた以前の治療の性質に依存する。最終的に投与量は、臨床試験を用いて決定される。最初、医師は動物試験から得られた用量を投与する。有効量は、１回の組成物投与により実現することができる。あるいは有効量は、患者に組成物を多回投与することにより実現される。インビトロでは、生物学的に有効量、即ちグルコース取込みを誘導するのに十分な量を２倍増量で投与して、活性範囲全体を決定する。経口、皮下および静脈内投与の有効性は、臨床試験で決定される。抽出物の単回投与が有利となる場合があるが、多回投与が好ましいと予測される。
送達
ハニーブッシュ植物抽出物の投与は、好ましくは経口投与による。それほど好ましくはないが、抽出物を注射により投与してもよい。経口投与に適した本発明の製剤は、分別単位、例えばそれぞれが所定量の活性化合物を含むカプセル、カシェ、錠剤、ボーラスまたはロゼンジとして；粉末または顆粒として；液体形態として、例えば水溶液、懸濁液、シロップ、エリキシル、エマルション、分散体などとして与えられてもよい。抽出物は、ピルの形態（カプセル中の粉末または濃縮液）、または（紅茶またはコーヒーを飲むのと同様に）水に入れた後で摂取され得ることができる粉末形態（例えば粒子状に圧縮された乾燥粉末）で投与してもよい。
【００３７】
非経口投与に適した製剤は、簡便には、例えば好ましくはレシピエントの血液と等張の注射、生理食塩水、ポリエチレングリコール溶液などに、活性化合物の滅菌製剤を含む。有用な製剤は、適切な溶媒で希釈すると、非経口投与に適した溶液が得られる、ハニーブッシュ植物抽出物含有濃縮溶液または固体も含む。
【００３８】
本発明の製剤は、前述の成分に加えて、医薬製剤の技術分野で用いられる任意の補助成分、例えば希釈剤、緩衝液、着香剤、着色剤、結合剤、界面活性剤、増粘剤、滑剤、懸濁
剤、防腐剤（酸化防止剤など）などの１種以上を更に含んでいてもよい。
【００３９】
適応症に効果的となるのに必要なハニーブッシュ植物の量は、もちろん治療される各ほ乳類により変動し、最終的には医療または獣医の実施担当者の判断にゆだねられる。判断される因子としては、治療される状態、投与経路、製剤の性質、ほ乳類の体重、表面積、年齢および一般状態、ならびに投与される個々の抽出物が挙げられる。日用量の総量を単回投与、多回投与、例えば１日２〜６回、または選択された期間の静脈内注入により投与してもよい。先に引用された範囲を超える投与量またはそれ未満の投与量は、本発明の範囲に含まれ、所望の場合および必要な場合には、それを各患者に投与してもよい。
【００４０】
組成物は、生物学的に有効量のハニーブッシュ植物抽出物と、任意選択で相対的に不活性な担体とを含む。そのような担体の多くは、日常的に用いられ、医薬の教科書を参照すれば同定することができる。許容される担体は、生理学的に許容される希釈剤または佐剤である。用語「生理学的に許容される」は、類似物の効果を妨害しない非毒性材料を意味する。担体の特性は、投与経路および組成物中の各化合物または化合物の組み合わせに依存する。そのような製剤の調製は、当該技術分野のレベルに含まれる。組成物は、類似物の活性を高めるか、またはその活性を補う他の薬剤を更に含んでいてもよい。組成物は、充填剤、塩、緩衝物質、安定化剤、可溶化剤、および当業者に周知の他の材料を更に含んでいてもよい。
【００４１】
本発明によるキサントンおよびフラボノイドに関しては、以下のことが挙げられる。
マンギフェリンは、ハニーブッシュ中に見出される天然分子である。その分子は、キサントンとして分類される。
【００４２】
マンギフェリンは以下の化学構造を有する。
【００４３】
【化１】
式中、Ｒ1＝Ｒ3＝Ｒ6＝Ｒ7＝ＯＨおよびＲ4＝Ｒ5＝Ｒ8＝Ｈである。
【００４４】
イソマンギフェリンも、天然分子に存在し、以下の構造を有する。
【００４５】
【化２】
式中、Ｒ1＝Ｒ3＝Ｒ6＝Ｒ7＝ＯＨおよびＲ2＝Ｒ5＝Ｒ8＝Ｈである。
【００４６】
その天然源の誘導体はＲ1、Ｒ3、Ｒ6またはＲ7の位置にＯ−メチル基（−ＯＣＨ3）
またはグリコシル基（−Ｃ6Ｈ11Ｏ6）を有し得る。
マンギフェリンにより形成されるすべての化合物、その異性体、およびその誘導体は、以下の一般式Ｉに対応する。
【００４７】
【化３】
式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8は−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＣＨ3およびグ
リコシルラジカルから選択される。
【００４８】
式Ｉの化合物は、本発明の直物材料（ハニーブッシュ）からの抽出を含め、種々の手段より入手することが可能である。
代わりに、式Ｉの化合物は、任意の抽出または精製プロセス（例えば水、アルカノール、またはこれらの溶媒の混合物等の極性溶媒による抽出と、それに続く結晶による精製または当業者に周知の他のプロセスによる精製）を使用して、そのような化合物を含むことが分かっている植物の全部または一部の精製より得られ得る。これらの方法のいくつかが例えばフランス国特許出願公開公報ＦＲ−Ａ−２ ４８６ ９４１号で公表されている。化合物は、化学的にまたは酵素的に得られてもよい。これに関し、方法が特に以下の２つの論文に記載されている：Bhatia-V-K et al., Tetrahedron Lett. (14), p. 1741 -2 およびNott-P-E, Phytochemistry, Vol. 6(1 1 ), p. 1597-9。
【００４９】
ヘスペリジンもまた、ハニーブッシュに見出される天然分子である。ヘスペリジン （７−［６−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル）−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ］−２，３−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−２−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）−４Ｈ−１―ベンゾピラン−４−オン）と、そのアグリコンであるヘスペレチンが本発明者らにより想定される。本発明者らは、式ＩＩの等価なフラボン／フラバノン誘導体もまた想定する。
【００５０】
【化４】
式中、互いに独立して、Ｒ1はＨ、ＯＨ、または−Ｏ−Ｇｌｙであり、
Ｒ2、Ｒ6、Ｒ9およびＲ10は同じであっても異なっていてもよく、Ｈ、ＯＨ、アルコキ
シ、ヒドロキシアルコキシまたはＣ3−Ｃ7−シクロアルコキシであり、
Ｒ3はＨ、Ｃ1−Ｃ4アルキルまたはＣ3−Ｃ7−シクロアルコキシであり、
Ｒ4はＨ、ＯＨ、−Ｏ−Ｇｌｙ、アルコキシ、ヒドロキシアルコキシまたはＣ3−Ｃ7−
シクロアルコキシであり、
Ｒ5はＨ、Ｃ1−Ｃ４アルキル、ＯＨ、アルコキシ、ヒドロキシアルコキシまたはＣ3−
Ｃ7−シクロアルコキシであり、
Ｒ7とＲ8は同じであっても異なっていてもよく、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、ヒドロキシアルコキシ、Ｃ3−Ｃ7−シクロアルキル、チオ（Ｃ1−Ｃ4）アルキル、または―ＮＲ11Ｒ12であり、
Ｒ11およびＲ12は同じであっても異なっていてもよく、ＨまたはＣ1−Ｃ4アルキルを意味してよく、アルコキシおよびヒドロキシアルコキシは１−１８個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖のアルキル基を含んでよく、
Ｇｌｙは存在してもしなくてもよく、モノまたはオリゴグリシン残基を指す。
【００５１】
一般式ＩＩの好ましいフラボン／フラバノン誘導体は、例えば：
１．ヘスペリジン、（ルトシド；ケルセチン−３−ルチノシド、３−［６−Ｏ−（６−デオキシ―α−Ｌ−マンノピラノシル）−β−Ｄ−グリコピラノシル］オキシ］−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン；およびそのアグリコン；
２．Ｏ−β−ヒドロキシエチルルトシド、ヘスペリジンのモノ、ジ、トリ、およびテトラヒドロキシエチル誘導体の混合物；またはそのアグリコン；およびＯ−ヒドロキシエチルルトシドの主成分；すなわち
３．トロキセヘスペリジン−（２［３，４−ビス（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル］−３−［６−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル）−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ］−５−ヒドロキシ−７−（２−ヒドロキシエトキシ）−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン）；およびそのアグリコン；
４．モノオキセヘスペリジン−（２−［３，４−ビスヒドロキシフェニル］−３−［６−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル）−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ］−５−ヒドロキシ−７−（２−ヒドロキシエトキシ）−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン）；およびそのアグリコン；
５．α−グルコシルヘスペリジン；
６．ナリンギン ７−［２−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル）−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ］−２，３−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン；およびそのアグリコン；
７．ヘスペリジン（７−［６−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル）−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ］−２，３−ジヒドロ−５−ヒドロキシ−２−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン；およびそのアグリコンであるヘスペレチン；
８．ジオスミン（３’５，７−トリヒドロキシ−４メトキシフラボン−７−ラムノグルコシド；およびそのアグリコンであるヘスペレチン；
９．ジヒドロロビネチン（３，３’，４’，５’，７−ペンタヒドロキシフラバノン）；１０．タキシフォリン（３，３’，４’，５，７−ペンタヒドロキシフラバノン）；
１１．エリオディクチン（３’，４’，５，７−テトラヒドロキシフラバノン−７−ラムノシド）；およびそのアグリコンであるエリオジクチオール；
１２．フラバノマレイン（３’，４’，７，８−テトラヒドロキシフラバノン−７−グルコシド）；およびそのアグリコン；
１３．イソケルセチン（３，３’，４’，５，７−ペンタヒドロキシフラバノン−３−（β−Ｄ−ピラノシド）；およびそのアグリコン；
１４．ロイコシアニジン（（３，３’，４，４’，５，７−ヘキサヒドロキシフラバン）；
１５．キルトミネチン（６−８−ジメチル−３’，４’，５，７−テトラヒドロキシフラバノン）；
１６．６，８−ジメチル−５，７−ジヒドロキシ−４’−チオメチルフラバノン；
１７．６，８−ジメチル−４’，５，７−トリヒドロキシ−３’−メトキシフラバノン；１８．６，８−ジメチル−５，７−（ジヒドロキシ−４’−ジメチルアミノ）フラバノン。
【００５２】
さらに、エリオシトリン、ナリヘスペリジン、およびスコリモサイドが適用可能である（Ferreira et al., 1998, Kamara et al., 2003; Kamara et al., 2004も参照のこと）。
【００５３】
異なる種類のハニーブッシュは、異なる性質であるにも関わらず、これらまたは類似のフラボノイドを含む。糖尿病試験動物（ラット）を用いた実験が実施された。本発明のハニーブッシュ抽出物は、これらのモデル系の血糖抑制に効果的であった。更にフラボノイドの合成タイプの投与も、グルコースレベルの低下に効果的であった。しかし、マンギフェリンと他のフラボノイド、特にヘスペリジンとを組み合わせることで、全体的フラボノイド用量をより低くして血糖を最大限に低下させ得るという高い（相乗）効果をもたらすことが、本発明者により見出された。マンギフェリンのモル濃度が、ヘスペリジンのそれの少なくとも２倍である場合に、その効果は最も高められる。
【００５４】
本発明により、そして本明細書の以前および以後に記載されるとおり、「糖尿病」は、好ましくは非インスリン依存性糖尿病（２型）を指し；「抗糖尿病」は、糖尿病の発症の予防、および／または発症した糖尿病の治療など、「糖尿病」の「治療」に有用な活性を意味し；糖尿病の原因の予防、ならびに／またはその症状および／もしくは結果の低減もしくは消失も含む。
【００５５】
特に、本発明の化合物は、少なくとも以下の二重治療効果を有することが見出された：ｉ）本発明の化合物が耐糖能障害を治療し得る故の、糖尿病の予防；および
ii）本発明の化合物が血糖値を低下し得る故の、発症した糖尿病の実際の治療。
【００５６】
好ましくは本発明の抽出物は、マンギフェリンおよび／または医薬として許容されるその塩もしくはプロドラッグの主な特徴を有する化合物を活性成分として含む。より好ましくはその抽出物は、ヘスペリジンの主な特徴を有する化合物も活性成分として含む。最も好ましくはマンギフェリンの分子濃度は、ヘスペリジンのそれの少なくとも２倍である。
【００５７】
更なる態様によれば、本発明は、抗糖尿病を有する医薬として用いられる前記抽出物にも関する。
本発明は、有効量の抽出物を含む抗糖尿病活性を有する医薬組成物、ならびに抗糖尿病活性を有するマンギフェリンおよびヘスペリジンに及ぶ。
【００５８】
効果的投与量の前記抽出物または前記組成物をヒトまたは動物に投与することにより糖尿病を治療する方法も提供する。
更なる態様によれば、本発明は、摂取すると抗糖尿病活性を有する食品または飲料の製造における前記抽出物の使用にも関する。
【００５９】
摂取すると抗糖尿病効果を有する前記抽出物を有効量含む前記食品または飲料も、本発明の一部である。
好ましくは前記抽出物は、活性成分としてマンギフェリンおよび／またはその医薬として許容される塩もしくはプロドラッグを含む。
【００６０】
更なる態様によれば、本発明は、抗糖尿病活性を有する医薬として用いられる前記抽出物にも関する。
本発明は、前記抽出物を有効量含む抗糖尿病活性を有する医薬組成物、および抗糖尿病活性を有するマンギフェリンにも及ぶ。
【００６１】
活性成分は、シクロピア属の植物からの抽出物、または以下の構造：
【００６２】
【化５】
（式中、Ｒ1＝Ｒ3＝Ｒ6＝Ｒ7＝ＯＨおよびＲ4＝Ｒ5＝Ｒ8＝Ｈである）
を有する化合物（マンギフェリン）であるか、もしくは代わりに以下の構造：
【００６３】
【化６】
（式中、Ｒ1＝Ｒ3＝Ｒ6＝Ｒ7＝ＯＨおよびＲ2＝Ｒ5＝Ｒ8＝Ｈである）
を有する化合物であってよい。
【００６４】
その天然源の誘導体はＲ1、Ｒ3、Ｒ6またはＲ7の位置にＯ−メチル基（−ＯＣＨ3）ま
たはグリコシル基（−Ｃ6Ｈ11Ｏ6）を有し得る。
マンギフェリンにより形成されるすべての化合物、その異性体、およびその誘導体は、以下の一般式Ｉに対応する。
【００６５】
【化７】
式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8は−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＣＨ3およびグ
リコシルラジカルから選択される。
【００６６】
上記化合物はシクロピア属の植物から抽出されてもよいし、もしくは合成で調製してもよく、またはその誘導体であってもよい。
植物は、シクロピア サブターナタ種のものであってもよい。
【００６７】
好ましくは、本発明の化合物は、医薬として許容される投与形態で製造される。抗糖尿病組成物または製剤は、医薬賦形剤、希釈剤または担体と混和された抗糖尿病薬からなっていてもよい。所望なら安定化剤およびそのような他の成分をはじめとする他の適切な添加剤を添加してもよい。
【００６８】
その組成物を、単位投与形態で製造してもよい。
抗糖尿病薬として、マンギフェリンまたはヘスペリジンと併用したマンギフェリンを、有利には約０．０５mg/kg/日〜約２mg/kg/日の投与量でヒトに投与する。好ましい投与量範囲は、約０．１mg/kg/日〜約１．５mg/kg/日である。本発明の抽出物の噴霧乾燥粉末形態を用いる場合、好ましい投与範囲は約０．２mg/kg/日〜約１mg/kg/日であり、特に好ましくは約０．２５mg/kg/日〜約０／７５mg/kg/日である。マンギフェリンおよびヘスペリジンは、好ましくは１：１〜２：１のモル比である。
【００６９】
更なる態様によれば、本発明は、
ｉ）有効量の上述の抽出物またはマンギフェリンもしくはヘスペリジンと併用したマンギフェリンを、
ii）糖尿病を治療する代表的薬剤から選択される他の薬剤、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤、ソルビトールデヒドロゲナーゼ阻害剤、グルコシダーゼ阻害剤、アルドースリダクターゼ阻害剤から選択される他の薬剤１種以上、
と共に含む医薬組成物にも関する。
【００７０】
糖尿病の治療に用いられ得る代表的薬剤としては、インスリンおよびインスリン類似体：（例えば、ＬｙｓＰｒｏインスリン、インスリンを含む吸入製剤）；ＧＬＰ−１（７−３７）（インスリノトロピン）およびＧＬＰ−１（７−３６）−ＮＨ２；スルホニル尿素および類似体；クロルプロパミド、グリベンクラミド、トルブタミド、トラザミド、アセトヘキサミド、グリピジド、グリメピリド、レパグリニド、メグリチニド；ビグアニド：メトホルミン、フェンホルミン、ブホルミン；α２−アンタゴニストおよびイミダゾリン：ミダグリゾール、イサグリドール、デリグリドール、イダゾキサン、エファロキサン、フルパロキサン；他のインスリン分泌促進薬：リノグリリド、インスリノトロピン、エキセンジン−４、ＢＴＳ−６７５８２，Ａ−４１６６；グリタゾン：シグリタゾン、ピオグリタゾン、エングリタゾン、トログリタゾン、ダルグリタゾン、ロシグリタゾン；ＰＰＡＲ−γアゴニスト；ＲＸＲアゴニスト：ＪＴＴ−５０１，ＭＣＣ−５５５、ＭＸ−６０５４、ＤＲＦ２５９３，ＧＩ−２６２５７０、ＫＲＰ−２９７、ＬＧ１００２６８；脂肪酸酸化阻害剤：クロモキシル、エトモキシル、α−グルコシダーゼ阻害剤：プレコース、アカルボース、ミグリトール、エミグリテート、ボグリボース、ＭＤＬ−２５，６３７，カミグリボース、ＭＤＬ−７３，９４５；β−アゴニスト：ＢＲＬ３５１３５、ＢＲＬ３７３４４、Ｒｏ１６８７１４、ＩＣＩＤ７１１４、ＣＬ−３１６，２４３，ＴＡＫ−６６７、ＡＺ４０１４０；ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの両方の型のホスホジエステラーゼ阻害剤：シルデナフィル、Ｌ６８６３９８：Ｌ−３８６，３９８；脂質低下剤：ベンフルオレクス、アトルバスタチン；抗肥満薬：フェンフルラミン、オルリスタット、シブトラミン；バナデートおよびバナジウム錯体（例えばナグリバン（Ｎａｇｌｉｖａｎ）（登録商標））およびペルオキソバナジウム錯体；アミリンアンタゴニスト：プラムリンチド、ＡＣ−１３７；リポキシゲナーゼ阻害剤：マソプロカル（ｍａｓｏｐｒｏｃａｌ）；ソマトスタチン類似体：ＢＭ−２３０１４、セグリチド、オクトレオチド；グルカゴンアンタゴニスト：ＢＡＹ２７６−９９５５；インスリンシグナリングアゴニスト、インスリン模倣体、Ｐ
ＴＰ１Ｂ阻害剤：Ｌ−７８３２８１、ＴＥＲ１７４１１、ＴＥＲ１７５２９；グルコネオゲネシス阻害剤：ＧＰ３０３４；ソマトスタチン類似体およびアンタゴニスト；抗脂肪分解剤：ニコチン酸、アシピモクス、ＷＡＧ９９４；グルコース輸送刺激剤：ＢＭ−１３０７９５；グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤：グルコースシンターゼキナーゼ阻害剤：塩化リチウム、ＣＴ９８０１４、ＣＴ９８０２３；ガラニン受容体アゴニスト；ＭＴＰ阻害剤、例えば米国仮特許出願第６０／１６４，８０３に開示されたもの；成長ホルモン分泌促進薬、例えばＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／２４３６９およびＷＯ９８／５８９４７に開示されたもの；ＮＰＹアンタゴニスト：ＰＤ−１６０１７０、ＢＷ−３８３，ＢＷ１２２９、ＣＧＰ−７１６８３Ａ、ＮＧＤ９５−１、Ｌ−１５２８０４；５−ＨＴおよび５−ＨＴ２Ｃ受容体アンタゴニストおよび／またはその模倣体などの食欲低下剤：デクスフェンフルラミン、プロザック（Ｐｒｏｚａｃ）（登録商標）、ゾロフト（Ｚｏｌｏｆｔ）（登録商標）；ＣＣＫ受容体アゴニスト：ＳＲ−２７８９７Ｂ；ガラニン受容体アンタゴニスト；ＭＣＲ−４アンタゴニスト：ＨＰ−２２８；レプチンまたは模倣体：レプチン；１１−β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼＩ型阻害剤；ウロコルチン模倣体、ＣＲＦアンタゴニスト、およびＣＲＦ結合タンパク質：ＲＵ−４８６、ウロコルチンが挙げられる。用いられ得る他の抗糖尿病薬としては、エルゴセットおよびＤ−キロイノシトールが挙げられる。他の抗糖尿病薬は、当業者に公知である。
【００７１】
いずれのグリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤を、本発明の第２の化合物として用いてもよい。用語「グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤」は、グリコーゲンホスホリラーゼの酵素作用を低下、縮小または削減するいずれかの物質もしくは薬剤または物質および／もしくは薬剤の組み合わせを指す。グリコーゲンホスホリラーゼの現在知られる酵素作用は、グリコーゲン巨大分子と無機リン酸との可逆的反応の触媒作用によりグリコーゲンをグルコース−１−リン酸と、一方のグリコシル残基が本来のグリコーゲン巨大分子よりも短いグリコーゲン巨大分子と、に分解すること（グリコーゲン分解の前方方向へ）である。そのような作用は、標準のアッセイに従い（すなわち本明細書の以後に記載されるとおり）当業者により容易に決定される。これらの様々な化合物は、以下の発行されたＰＣＴ特許出願：ＰＣＴ出願国際公開ＷＯ９６／３９３８４およびＷＯ９６／３９３８５に含まれる。しかし他のグリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤も、当業者に公知である。
【００７２】
ソルビトールデヒドロゲナーゼ阻害剤を、本発明の第２の化合物として用いてもよい。ソルビトールデヒドロゲナーゼ阻害剤は、フルクトースレベルを低下させ、ニューロパシー、網膜症、腎症、心筋症、微小血管障害、および大血管障害などの糖尿病合併症を治療または予防するのに用いられてきた。米国特許第５，７２８，７０４号および同第５，８６６，５７８号には、酵素ソルビトールデヒドロゲナーゼを阻害することにより糖尿病合併症を治療または予防する化合物および方法が開示されている。
【００７３】
グルコシダーゼ阻害剤は、グリコシドヒドロラーゼ、例えばアミラーゼまたはマルターゼによる、複雑な炭水化物から生体利用性のある単純な糖、例えばグルコースへの酵素的加水分解を阻害する。特に高レベルの炭水化物を取込んだ後は、グルコシダーゼの急速な代謝作用の結果、食事性高血糖の状態になり、脂肪症および糖尿病の患者では、インスリンの分泌が高まり、脂肪合成が増加して、脂肪分解が減少する。多くの場合そのような高血糖の後に多量のインスリンが存在することにより、低血糖が起こる。加えて、低血糖および胃に残留する糜汁（びじゅう）の両方が胃液の産生を促進して、胃潰瘍または十二指腸潰瘍が発生し始めるか、または発生し易くなることが知られている。したがってグルコシダーゼ阻害剤は、胃をとおした炭水化物の通過促進および腸からのグルコース吸収の阻害において有用性を有することが公知である。更に、炭水化物から脂肪組織の脂質への変換と、続く食事性脂肪の脂肪組織沈着物への取込みが、それにしたがって減少するか、または遅延し、その結果、有害な異常を低減または予防するという効果を伴う。
【００７４】
いずれのグルコシダーゼ阻害剤を、本発明の抽出物、ＡまたはＥと併用したＡ、その立体異性体およびプロドラッグ、ならびに本発明の化合物、立体異性体およびプロドラッグの医薬として許容される塩と一緒に用いてもよいが、一般に好ましいグルコシダーゼ阻害剤は、アミラーゼ阻害剤を含む。アミラーゼ阻害剤は、デンプンまたはグリコーゲンからマルトースへの酵素分解を阻害するグルコシダーゼ阻害剤である。そのような酵素分解の阻害剤は、グルコースおよびマルトースなどの生体利用性の糖の量、およびその結果生じる悪性状態を低減することにおいて有利である。
【００７５】
様々なグルコシダーゼ阻害剤が、当業者に公知である。しかし本発明の医薬組成物、混合物、方法およびキットの実施において、一般に好ましいグルコシダーゼ阻害剤は、アカルボース、アジポシン、ボグリボース、ミグリトール、エミグリテート、ＭＤＬ−２５６３７、カミグリボース、テンダミステート、ＡＩ−３６８８、トレスタチン、プラジミシンＱ、およびサルボスタチンからなる群から選択されるそれらの阻害剤である。
【００７６】
グルコシダーゼ阻害剤カルボース、Ｏ−４，６−ジデオキシ−４−［［（１Ｓ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−４，５，６−トリヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）−２−シクロヘキセン−１−イル]−アミノ]−α−グルコピラノシル−（１→４）−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−Ｄ−グルコース、それに関係する様々なアミノ糖誘導体、ならびにアクチノプラネス株（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ ｓｔｒａｉｎｓ） ＳＥ５０（ＣＢＳ９６１．７０）、ＳＢ１８（ＣＢＳ９５７．７０）、ＳＥ８２（ＣＢＳ６１５．７１）、ＳＥ５０／１３（６１４．７１）およびＳＥ５０／１１０（６７４．７３）が、それぞれ米国特許第４，０６２，９５０号および同第４，１７４，４３９号に開示されている。
【００７７】
アジポシン形態１および２からなるグルコシダーゼ阻害剤アジポシンは、米国特許第４，２５４，２５６号に開示されている。加えて、アジポシンの製造および精製の方法は、Ｎａｍｉｋｉ他、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３５，１２３４〜１２３６（１９８２年）に開示されている。グルコシダーゼ阻害剤ボグリボース、３，４−ジデオキシ−４−［［２−ヒドロキシ−１−（ヒドロキシメチル）エチル］アミノ］−２−Ｃ−（ヒドロキシメチル）−Ｄ−エピ−イノシトール、およびそれに関係する様々なＮ−置換擬似アミノ糖が、米国特許第４，７０１，５５９号に開示されている。
【００７８】
グルコシダーゼ阻害剤ミグリトール、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−１−（２−ヒドロキシエチル）−２−（ヒドロキシメチル）−３，４，５−ピペリジネルトール（ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅｒｔｏｌ）、およびそれに関係する様々な３，４，５−トリヒドロキシピペリジンが、米国特許第４，６３９，４３６号に開示されている。
【００７９】
グルコシダーゼ阻害剤エミグリテート、ｐ−［２−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−３，４，５−トリヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）ピペリジノ］エトキシ］安息香酸エチル、それに関係する様々な誘導体およびその医薬として許容される酸付加塩が、米国特許第５，１９２，７７２号に開示されている。
【００８０】
グルコシダーゼ阻害剤ＭＤＬ−２５６３７、２，６−ジデオキシ−７−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２，６−イミノ−Ｄ−グリセロ−Ｌ−グルコヘプチトール、それに関係する様々なホモジサッカライドおよびその医薬として許容される酸付加塩が、米国特許第４，６３４，７６５号に開示されている。
【００８１】
グルコシダーゼ阻害剤カミグリボース、メチル６−デオキシ−６−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−３，４，５−トリヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）ピペリジノ］−β−Ｄ−グルコピラノシドセスキヒドラート、それに関係するデオキシノジリマイシン、様
々な医薬として許容されるその塩、および製造のためのその合成方法が、米国特許第５，１５７，１１６号および同第５，５０４，０７８号に開示されている。
【００８２】
グルコシダーゼ阻害剤プラジミシンＱおよびアクチノマジュラ・ベルコスポラ株（Ａｃｔｉｎｏｍａａｕｒａ ｖｅｒｒｕｃｏｓｐｏｒａ ｓｔｒａｉｎｓ）Ｒ１０３−３またはＡ１０１０２の細菌培養によるその製造方法が、それぞれ米国特許第５，０９１，４１８号および同第５，２１７，８７７号に開示されている。
【００８３】
グリコシダーゼ阻害剤サルボスタチン、それに関係する様々な擬似サッカライド、様々な医薬として許容されるその塩およびストレプトマイセス・アルブス株（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｕｓ ｓｔｒａｉｎ）ＡＴＣＣ２１８３８の細菌培養によるその製造方法は、米国特許第５，０９１，５２４号に開示されている。
【００８４】
いずれのアルドースリダクターゼ阻害剤を、本発明の医薬組成物、方法およびキットに用いてもよい。用語アルドースリダクターゼ阻害剤は、酵素アルドースリダクターゼにより触媒されるグルコースからソルビトールへの生物転換を阻害する化合物を指す。そのような阻害は、標準的アッセイにしたがって当業者により容易に決定される（Ｊ． Ｍａｌｏｎｅ， Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ２９巻：ｐ８６１−８６４、１９８０年、「Ｒｅｄ Ｃｅｌｌ Ｓｏｒｂｉｔｏｌ， ａｎ Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ｏｆ Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｃｏｎｔｒｏｌ」）。以下の特許および特許出願は、それぞれの全体が本明細書に参考として援用され、本発明の組成物、方法およびキットに用いられ得るアルドースリダクターゼ阻害剤を例示しており、それらのアルドースリダクターゼ阻害剤を製造する方法が参照される：米国特許第４，２５１，５２８号；同第４，６００，７２４号；同第４，４６４，３８２号；同第４，７９１，１２６号；同第４，８３１，０４５号；同第４，７３４，４１９号；同第４，８８３，８００号；同第４，８８３，４１０号；同第４，８８３，４１０号；同第４，７７１，０５０号；同第５，２５２，５７２号；同第５，２７０，３４２号；同第５，４３０，０６０号；同第４，１３０，７１４号；同第４，５４０，７０４号；同第４，４３８，２７２号；同第４，４３６，７４５号；同第４，４３８，２７２号；同第４，４３６，７４５号；同第４，４３８，２７２号；同第４，４３６，７４５号；同第４，４３８，２７２号；同第４，９８０，３５７号；同第５，０６６，６５９号；同第５，４４７，９４６号；同第５，０３７，８３１号。
【００８５】
様々なアルドースリダクターゼ阻害剤が、以下に具体的に記載および参照されるが、他のアルドースリダクターゼ阻害剤も、当業者には公知であろう。同じく一般の化学的ＵＳＡＮ名または他の名称が、適宜、化合物を開示する適切な特許文献の参照と共にカッコ内に記載される。
【００８６】
したがって本発明の組成物、方法およびキットに有用なアルドースリダクターゼ阻害剤の例としては、
１． ３−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−３，４−ジヒドロ−４−オキソ−１−フタラジン酢酸（ポナルレスタット、米国特許第４，２５１，５２８号）；
２． Ｎ［［（５−トリフルオロメチル）−６−メトキシ−１−ナフタレニル］チオキソメチル］−Ｎ−メチルグリシン（トルレスタット、米国特許第４，６００，７２４号）；３． ５−［（Ｚ，Ｅ）−β−メチルシンナミリデン］−４−オキソ−２−チオキソ−３−チアゾリジン酢酸（エパルレスタット、米国特許第４，４６４，３８２号、米国特許第４，７９１，１２６号、米国特許第４，８３１，０４５号）；
４． ３−（４−ブロモ−２−フルオロベンジル）−７−クロロ−３，４−ジヒドロ−２，４−ジオキソ−１（２Ｈ）−キナゾリン酢酸（ゼナレスタット、米国特許第４，７３４，４１９号および米国特許第４，８８３，８００号）；
５． ２Ｒ，４Ｒ−６，７−ジクロロ−４−ヒドロキシ−２−メチルクロマン−４−酢酸
（米国特許第４，８８３，４１０号）；
６． ２Ｒ，４Ｒ−６，７−ジクロロ−６−フルオロ−４−ヒドロキシ−２−メチルクロマン−４−酢酸（米国特許第４，８８３，４１０号）；
７． ３，４−ジヒドロ−２，８−ジイソプロピル−３−オキソ−２Ｈ−１，４−ベンゾキサジン−４−酢酸（米国特許第４，７７１，０５０号）；
８． ３，４−ジヒドロ−３−オキソ−４−［（４，５，７−トリフルオロ−２−ベンゾチアゾリル）メチル］−２Ｈ−１，４−ベンゾチアジン二酢酸（ＳＰＲ−２１０、米国特許第５，２５２，５７２号）；
９． Ｎ−［３，５−ジメチル−４−［（ニトロメチル）スルホニル］フェニル］−２−メチルベンゼンアセトアミド（ＺＤ５５２２、米国特許第５，２７０，３４２号および米国特許第５，４３０，０６０号）；
１０． （Ｓ）−６−フルオロスピロ［クロマン−４，４’−イミダゾリジン］−２，５’−ジオン（ソルビニル、米国特許第４，１３０，７１４号）；
１１． ｄ−２−メチル−６−フルオロスピロ（クロマン−４’，４’−イミダゾリジン）−２’，５’−ジオン（米国特許第４，５４０，７０４号）；
１２． ２−フルオロスピロ（９Ｈ−フルオレン−９，４’−イミダゾリジン）−２’，５’−ジオン（米国特許第４，４３８，２７２号）；
１３． ２，７−ジ−フルオロスピロ（９Ｈ−フルオレン−９，４’−イミダゾリジン）−２’，５’−ジオン（米国特許第４，４３６，７４５号および米国特許第４，４３８，２７２号）；
１４． ２，７−ジ−フルオロ−５−メトキシスピロ（９Ｈ−フルオレン−９’，４’−イミダゾリジン）−２’，５’−ジオン（米国特許第４，４３６，７４５号、米国特許第４，４３８，２７２号）；
１５． ７−フルオロスピロ（５Ｈ−インデノール［１，２−ｂ］ピリジン−５’，３’−ピロリジン）−２’，５’−ジオン（米国特許第４，４３６，７４５号；米国特許第４，４３８，２７２号）；
１６． ｄ−シス−６’−クロロ−２’，３’−ジヒドロ−２’−メチル−スピロ（イミダゾリジン−４，４’−４’Ｈ−ピラノ（２，３−ｂ）ピラジン）−２’，５’−ジオン（米国特許第４，９８０，３５７号）；
１７． スピロ［イミダゾリジン−４，５’（６Ｈ）−キノリン］−２，５−ジオン−３’−クロロ−７’，８’−ジヒドロ−７’，８’−ジヒドロ−７’−メチル−（５’−シス）（米国特許第５，０６６，６５９号）；
１８． （２Ｓ，４Ｓ）−６−フルオロ−２’，５’−ジオキソスピロ（クロマン−４，４’−イミダゾリジン）−２−カルボキシアミド（フィダレスタット、米国特許第５，４４７，９４６号）；および
１９． ２−［（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）メチル］−６−フルオロスピロ［イソキノリン−４（１Ｈ），３’−ピロリジン］−１，２’，３，５’（２Ｈ）−テトロン（ミナルレスタット、米国特許第５，０３７，８３１号）、
が挙げられる。
【００８７】
本発明は、
・抗糖尿病活性を有する医薬の製造における上述の成分ｉ）およびii）の前記組み合わせの使用；
・前記組み合わせの有効な投与量をヒトまたは動物に投与することを含む、糖尿病を治療または予防する方法；ならびに
・糖尿病の治療または予防に有用な上述の活性成分（ｉ）および（ii）を組み合わせたキットまたは単回包装、
にも及ぶ。
【００８８】
組み合わせの成分ｉ）およびii）を、同時、別個、またはいずれかの順序で連続して投
与することができる。
好ましくは本発明は、抽出物、または上記化合物、または同化合物含む組成物の有効な投与量をヒトまたは動物に投与することにより血糖値を低下または保持する方法に及ぶ。
【００８９】
好ましくは本発明は、抽出物、または上記化合物を含む食品または飲料を摂取することにより血糖値を低下または保持する方法に及ぶ。より好ましくは本発明は、耐糖能障害の治療にも及ぶ。より好ましくは本発明は、上記の抽出物、化合物、組成物および／または食品もしくは飲料の投与を停止した後に、血糖値が実質的に上昇し得ないという保護効果を提供する。
【００９０】
本発明は、活性成分をシクロピア サブターナタから抽出する方法も提供する。
本発明による抗糖尿病活性を有する抽出物を、以下の工程により製造してもよい。抗糖尿病薬を含むシクロピア属の植物の抽出物を製造する方法は、回収された植物材料を溶媒で処理して抗糖尿病活性を有する分画を抽出するステップ、植物材料の残留物から抽出溶液を分離するステップ、抽出溶液から溶媒を除去するステップ、および抽出物を回収するステップを含む。そのように回収された抽出物を、例えば適切な抽出手順によって更に精製してもよい。
【００９１】
抽出物を、シクロピア属の植物材料、例えば前記植物の葉、茎および根から製造してもよい。本発明の一適用例において、抗糖尿病性抽出物は、シクロピア サブターナタ種から得られる。
【００９２】
植物材料を、ワーリング（Ｗａｒｉｎｇ）ブレンダなどの装置を用いて、適切な溶媒、例えばメタノール／塩化メチレン溶媒の存在下でホモジネートしてもよい。その後、適切な分離手順、例えばろ過または遠心分離により、抽出溶液を残留する植物抽出物から分離してもよい。溶媒を、好ましくは６０℃の温度の水浴中で、ロータリーエバポレータにより除去してもよい。
【００９３】
その後、分離された粗抽出物を塩化メチレンおよび水で更に抽出した後、塩化メチレン抽出物と水抽出物とに分離してもよい。塩化メチレン抽出物は、好ましくはロータリーエバポレータでの蒸発により除去された溶媒を有していてもよく、得られた抽出物を、メタノール／ヘキサン抽出物により更に精製してもよい。その後、メタノール／ヘキサン抽出生成物を分離して、メタノール抽出物およびヘキサン抽出物を得てもよい。部分的に精製された活性抽出物を得るために、メタノール抽出物を蒸発させて溶媒を除去してもよい。
【００９４】
部分的に精製された活性抽出物をメタノールに溶解してもよく、シリカゲルを吸収媒体として用い、クロロホルム／３０％メタノール混合物を溶離剤として用いたカラムクロマトグラフィーにより更に分別してもよい。複数の異なる分画を得てもよく、それぞれを適切なバイオアッセイ手順により評価して、抗糖尿病活性を測定してもよい。
【００９５】
抗糖尿病活性を有する分画を、好ましくは吸収媒体としてのシリカゲルおよび９：１ クロロホルム：メタノール溶媒を用いたカラムクロマトグラフィーなどにより更に分別してもよく、得られた亜分画を抗糖尿病活性についてバイオアッセイしてもよい。所望なら、従来どおり吸収媒体としてのシリカゲルおよび９：１ クロロホルム：メタノール溶媒でのカラムクロマトグラフィー手順を用いて、抗糖尿病活性を示す亜分画を更に分別および精製してもよい。得られた精製分画を、抗糖尿病活性のための適切なバイオアッセイ手順により再度、評価してもよい。
【００９６】
本発明者は、少なくとも一つのそのような精製分画が良好な抗糖尿病活性を有することを見出し、その分画の活性成分が核磁気共鳴をはじめとする従来の化学技術による同定で
、マンギフェリンであることを見出した。この分画をヘスペリジンを含む分画と組み合わせると、糖尿病に対する相乗効果が達成され、さらにはマンギフェリン対ヘスペリジンのモル比が１：１から２：１までの場合に裁量の効果が得られる。
【００９７】
抽出物を乾燥させて、例えば噴霧乾燥、凍結乾燥または真空乾燥により、水分を除去して、自由流動性粉末を形成させてもよい。
本発明およびその有効性を更に記載するが、本発明の範囲は以下の実施例および図面により限定されない。
実験
実験１
植物抽出物（実験室規模）
緑色植物材料とは、植物性ポリフェノール、特にキサントンおよびフラボノイドの酵素的／化学的酸化を予防するような手法で乾燥される植物材料を指す。異なる乾燥手順を用いることができる。
【００９８】
酸化された植物材料とは、葉および幹の切断後、数時間で酸化される植物材料を指す。後者の工程で、ポリフェノールの酵素的および化学的酸化が開始する。水／酵素混合物を添加すれば、加工の酸化ステップの間に起こる酵素的／化学的変化を補助することができる。
【００９９】
以下の実施例において、用いられる植物抽出物を、以下の手順により得た。
使用した調製手順は、破砕した緑色のシクロピア インターメディアの葉および茎１０ｋｇを、１００ｋｇの水で連続撹拌しながら９５〜９８℃で３０分抽出し（抽出後の採収抽出温度の実測値７０℃）、その後連続して遠心分離し、抽出物と不溶性植物材料を分離した。抽出物を熱交換器で室温まで冷却し、その後アリコートをＰＥＴボトルに入れて凍結し、使用するまで−２０℃にて保管した。また、少量を、インビトロ試験のために実験室の凍結乾燥機で凍結乾燥した。
１．組織細胞：抗糖尿病スクリーニングのためのインビトロアッセイモデル（細胞系）
糖尿病は、多くの器官に異なる影響を及ぼす多因子疾患である。それゆえ、それぞれが糖尿病により影響を受ける異なる器官を表す３種の細胞系の組み合わせと、独特で簡便な非放射線的方法とを用いて、グルコース輸送の代わりにグルコース利用を測定する。
方法
その方法は、３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞、Ｃｈａｎｇ肝細胞およびＣ２Ｃ１２筋細胞によるグルコースの利用を、９６穴プレートで細胞系に応じて１〜３時間測定する。これは、細胞を飢餓状態にしてグルコースを添加し、その後、試験試料の存在下または非存在下でインキュベーション培地からのグルコース消失をモニタリングすることにより実施する。グルコース利用の測定前に脂肪細胞および肝細胞を試験試料に４８時間、予備暴露して、慢性効果が考慮されるかも確認した。抽出物に４８時間暴露された細胞の生存性を対照細胞のそれと比較すれば、潜在的毒性試料を同定することができる。インキュベーション時間をより長くしてグルコース利用または代謝を測定すれば、グルコース輸送だけでなくグルコース代謝に含まれるいずれの経路でも変化が検出される。表１は、細胞系３種で測定された応答を要約している。この組み合わせでは、腸のグルコース吸収を低下させるもの以外の２型糖尿病治療に現在用いられている全種の血糖降下薬の作用機序が網羅される。
【０１００】
【表１】
本発明に従って得られた抽出物は、３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞でのグルコース取込み増加に効果的であり、チアゾリジンに類似した活性を示すことが見出された。抽出物は、ＣＨＡＮＧ肝細胞において効果的であり、ビグアニジンと類似した活性を示した。
２．ストレプトゾトシンモデル（Ｔ１Ｄ）または後期Ｔ２Ｄ
成体雄ウィスター（Ｗｉｓｔｅｒ）ラット（２００〜２５０ｇ）を、試験全体で用いた。成体雄ウィスターラットにストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を３６mg/kgの用量で筋肉注
射し、インスリン産生細胞数を低下または枯渇させ、典型的レベルの１型糖尿病または後期Ｔ２Ｄの高血糖を誘発した。ラットは３時間絶食したが、飲水は自由に与えた。ＳＴＺ注射の７２時間後に、血液試料を尾静脈から採取した。グルコースオキシダーゼ法を利用し、グルコメータ（プレシジョンＱ．Ｉ．Ｄ；アボット・ラボラトリーズ（Ａｂｂｏｔｔ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ））を用いることにより血漿グルコース濃度を測定した。血中グルコースレベルが絶食レベルの３００％を超えるラットを糖尿病と判断し、試験用に選択した。
ＳＴＺラットの血漿グルコースに対する抽出物の急性効果
糖尿病ラットにペントバルビタールナトリウム２０mg/kgを腹腔内注射して、軽度の麻
酔状態を誘導した。約１０〜１５分後にはラットが十分に沈静になり、容易でストレスのない取扱いが可能になったが、嚥下反射には影響がなかった。テフロン（登録商標）（Ｔｅｆｌｏｎ）胃管カテーテルを口および食道から胃に入れて、必要な抽出物を含む水１mlを胃に直接注入した。その後、水を更に約２００μl注入して、胃管カテーテルの残留抽
出物を洗浄した。その後、カテーテルを即座に除去して、ラットを回復用のケージに入れた。Ａ群には通常の生理食塩水を与え、Ｂ群には植物抽出物５mg/kgを与え、Ｃ群には植
物抽出物２５mg/kgを与え、Ｄ群には植物抽出物５０mg/kgを与えた。血漿グルコース（mmol/l）を１、２、３、４、５、６時間の間隔で測定した。 ストレプトゾトシンを注入されてＢ細胞が低下または枯渇された成体雄ウィスターラットでは、抽出物の急性経口投与により血漿グルコースが６時間、漸進的に低下した。
経口耐糖能試験（ＯＧＴＴ）
１６時間絶食した糖尿病ＳＴＺラットに、軽度麻酔（フローセン）の下で植物抽出物２５mg/kgを胃管栄養法で与えた。３時間後に動物に経口グルコースボーラスを１g/kg与え
た。血漿グルコースレベルをmmol/lで、０、１、５、１０、１５、２０、３０、６０および１２０分に測定した。植物抽出物を２５mg/kg単回経口投与した後に３時間実施された
ＯＧＴＴの結果から、ＳＴＺラットの血漿グルコースレベルが、全ての測定時点で、対照グルコース値に比較して低いことが示された（図１３）。
３．肥満／インスリン抵抗性ラットモデル（Ｔ２Ｄ）
離乳後（３週齢）、雄ウィスターラットに、初期段階のＴ２Ｄに典型的な徴候を引き起こすべく、１２週間の間、自由接触で肥満誘導食を給餌した。１２週後、ベースライン測定のために血液を採集した。
抽出物の投与
抽出物を解凍し、０．５４％（Ｃ１）、１．０８％（Ｃ２）、１．７９％（Ｃ３）、２．１５％（Ｃ４）および２．６７％（Ｃ５｝の抽出物を含むよう脱イオン化水でそれぞれ希釈した。
メトホルミンの投与
塩酸メトホルミン（８５０ｍｇ、Ｒｏｌａｂ社、Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ所在）を、８５ｍｌの蒸留水に溶解させた。溶解させたメトホルミンを、３０ｍｌの水に入れて毎日与えた。投与量は蒸留水中１０ｍｇ／ｍｌで計算し、ラットには２０ｍｇ／ｋｇ体重に等しい１ｇ体重当たり２ｇを与えた。
ロシグリタゾンの投与
アバンディア（商標）マレイン酸ロシグリタゾン（４ｍｇ、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ社、南アフリカ共和国Ｂｒｙａｎｓｔｏｎ所在）を、１ｍｌ酸性リン酸緩衝液（ｐＨ２．３）に溶解させた。溶解させた錠剤を、４ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で３０ｍｌの水に入れて与えた。
抽出物、メトホルミン、ロシグリタゾンおよび摂取液量のモニタリング
消費した液体の量は、すべての群で処理期間中ずっとモニタした。同時に、毎朝、液体を動物に与える前に測定した。液体を平日は２日ごとに測定し、週末は３日後に測定した。 平均摂取量を、一週間当たりに接種した液体の平均値として計算した。摂取量は与えた量と残った量の間の差として記録した。
絶食時の血漿グルコース
動物を３時間絶食させた。尾の先端を一対のはさみを用いて切断し、一滴の血液を用いてグルコメータ（プレシジョンＱ．Ｉ．Ｄ；アボット・ラボラトリーズ（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ））を用いてグルコースレベルを測定した。
採血
動物を９８％酸素と２％フローセン（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）の吸入により麻酔した。尾部の先端を切断し、血液をエッペンドルフチューブに採取し、氷上に保存した。その後、それを２５００ｒｐｍで１５分間遠心した。マイクロピペットを使用して、５０μｌアリコートをＮｕｎｃチューブに入れ、使用するまで−８０℃で保管した。
インスリン測定用血清
４℃で遠心分離した後、血漿サンプルはインスリン測定まで−２０℃で保管しておく。インスリンは125Ｉ標識したヒトインスリンをトレーサとして使用してＲＩＡにより測定
し、ラットインスリンを標準試料（Ｌｉｎｃｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ社、米国合衆国未じゅー利州Ｓｔ．Ｃｈａｒｌｅｓ所在）。
【０１０１】
静脈グルコース耐性試験（ＩＶＧＴＴ）
動物を９８％酸素と２％フローセン（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）の吸入により麻酔した。尾部の先端を切断し、ベースライングルコースを測定し、記録した。０．５ｍｇ／ｋｇ用量の５０％グルコースの静脈注射を２０秒間にわたって行なった。血糖値測定は１、２、３、５、１０、２０、３０、４０、５０および６０分目に行った。その後、ラットは安楽死させた。
組織の処理
３ヶ月間抽出物で処理した後、各群の５匹の動物から膵臓を採取した。膵臓全体を除去し、４％緩衝液ホルマリン中で一晩固定し、パラフィン埋設した。４μｍ厚の連続切片を免疫細胞化学および画像分析用に切断した。
二重免疫細胞化学
連続切片をキシレンで脱ろうし、等級が低下するエタノールで水和した。スライド上の
切片を染色びん中で、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ＴＢＳ）（ｐＨ ７．４）に写し、アビジンＤ−ビオチン化ワサビペルオキシダーゼ（Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ社）およびストレプトアビジンビオチン複合体／アルカリホスファターゼ（Ｄａｋｏ社）を使用してインスリン（Ｓｉｇｍａ社）およびグルカゴン（Ｄａｋｏ社）について二重染色した。β細胞はインスリン陽性細胞として定義し、α細胞はグルカゴン陽性細胞として定義した。β細胞はＦｕｃｈｉｎレッド（赤色の沈積物）（Ｄａｋｏ社）で視覚化し、α細胞はＤＡＢ（褐色の沈積物）（Ｄａｋｏ社）で視覚化した。方法の対照は、一次抗血清、二次層の抗体またンはアビジンＤ−ビオチン化ワサビペルオキシダーゼ複合体／ストレプトアビジンビオチン複合体／アルカリホスファターゼをそれぞれ省略したものが関与した。
画像分析
β細胞およびα細胞を同じ切片に対して測定した。コンピュータ支援測定を、ビデオカメラと接続した標準的なＺｅｉｓｓ光学顕微鏡を用いて行った。インスリン陽性細胞とグルカゴン陽性細胞の面積を、全切片に対して測定した。測定した膵臓領域全体に対するインスリン陽性面積およびα陽性面積の比として、各切片において膵臓中のβ細胞とα細胞の体積を計算した。β細胞とα細胞のサイズは、測定した面積全体を、数えた核の数によって除算することにより計算した。膵島サイズの分布は以下のように分類した：（＜２５００μｍ）、（２５００μｍ＜７５００μｍ）、（７５００μｍ＜１２５００μｍ）、（１２５００μｍ＜２００００μｍ）、および（＞２００００μｍ）。膵島密度は、組織の合計面積を数えた膵島の数で除算することにより決定した。
統計分析
結果の有意差を試験するために両側（two-tailed）unpaired Student’s t-testを用いた。
全体的結果
本発明の抽出物で処理した肥満／インスリン抵抗性ラットでは、絶食時グルコースレベルが有意に低下した。いくつかの場合では、その低下がメトホルミンまたはロシグリタゾンよりも抽出物で大きかった。
結論
グルコース取込み増加において、チアゾリジン＋インスリン（脂肪細胞試験）、およびビグアニド（ＣＨＡＮＧ肝細胞）と同様の有効性が、植物抽出物により示された。
【０１０２】
抽出物での処理は、いくつかの場合では、ストレプトゾトシン処理（後期Ｔ２Ｄ）における血漿グルコースレベルの低下に、メトホルミンおよびロシグリタゾンより効果的であった。
【０１０３】
上記抽出物が、悪化したグルコースレベルの正常化に有効であることが期待される。
実施例II
この実験により、血漿グルコースレベルを低下させるための、本発明の植物抽出物の最適用量を得る。この実験では、可能な限りヒトの状況に近づけるためにサルを用いた。
使用についての正当性および有用性評価
ベルベット（Ｖｅｒｖｅｔ）モンキー（クロロセブス・アエチオプス（Ｃｈｌｏｒｏｃｅｂｕｓ ａｅｔｈｉｏｐｓ））は、２種のアフリカ産非ヒト霊長類のうちの１種であり、生物医学の研究に最も一般的に用いられる南アフリカの固有種である。いくつかの例外があるが、非ヒト霊長類の使用は、国際的には生物学的考慮よりもむしろ地政学およびロジスティックスによる影響を受けてきた。ベルベットモンキーは、同じ亜科に属することから、マカク（即ちアカゲザル）に分類学的に密接に関連する（Ｆａｉｒｂａｎｋｓ ２００２年）。
【０１０４】
ベルベットモンキーは、ウイルス学、細菌学、寄生虫学、神経学、毒性学、生殖学および細胞生物学をはじめとする多くの分野で用いられているが、それらは心臓血管疾患および代謝疾患の分野で特に有用であることが立証されている。その結果として、情報および
データを含む文献が豊富になり、この確立されたモデルの有用性が評価された（ｄｅ Ｖｒｉｅｓ他 ２００７年、Ｆａｉｒｂａｎｋｓ ２００２年、Ｆｉｎｃｈａｍ他 １９９８年、Ｋａｖａｎａｇｈ他 ２００７年、Ｌｏｕｗ他 １９９７年、Ｍａｒｔｉｎ他 １９９０年、Ｒｕｄｅｌ他 １９８１年、Ｓｍｕｔｓ他 １９９２年、ＳｕｃｋｌｉｎｇおよびＪａｃｋｓｏｎ １９９３年、Ｗａｌｌａｃｅ他 ２００５年、Ｗｅｉｇｈｔ他 １９９８年）。
【０１０５】
ベルベットモンキーが一時的な肥満、インスリン抵抗性および２型糖尿病を発症することを強調することが重要である（Ｆａｉｒｂａｎｋｓ ２００２年、Ｆｒａｎｃｉｓ他 １９９９年、Ｋａｖａｎａｇｈ他 ２００７年、Ｔｉｇｎｏ他 ２００５年）。特定のコロニーでは雌の２５％および雄の１６％もの多くが、肥満であることが報告されている（Ｋａｖａｎａｇｈ他 ２００７年）。非ヒトの霊長類は、ヒトと同様に、腎臓、血管および神経学をはじめとする関連の合併症の全てを発症する（Ｔｉｇｎｏ他 ２００５年）。ベルベットモンキーの幾つかの母集団では、４％もの高い割合が、異常に高い血漿グルコース濃度を有する可能性があり（Ｆａｉｒｂａｎｋｓ ２００２年、Ｋａｖａｎａｇｈ他
２００７年）、腹囲と血漿インスリンと血漿トリグリセリド濃度の間には強い正の関連性がある（Ｋａｖａｎａｇｈ他 ２００７年）。肥満および関連の血漿脂質および他の危険因子が、この種で遺伝し得ることも確証された（Ｋａｖａｎａｇｈ他 ２００７年）。
【０１０６】
ベルベットモンキーが一時的な動脈硬化を発症し、実験的栄養操作に十分に応答して脂質異常症を発症し、最終的に粥状動脈硬化を発症することに留意することも重要である（Ｆａｉｒｂａｎｋｓ ２００２年、Ｒｕｄｅｌ他 １９８１年、Ｆｉｎｃｈａｍ他 １９９８年、ＳｕｃｋｌｉｎｇおよびＪａｃｋｓｏｎ １９９３年）。関連する潜在的機序および病巣は、ヒトの状態を模倣しており（Ｆｉｎｃｈａｍ他 １９９６年、Ｆｉｎｃｈａｍ他 １９９８年、Ｒｕｄｅｌ他 １９８１年）、ベルベットモンキーは、詳細に記録されたものより古い、そしてより新しい薬理学的介入法に応答する（Ｆｉｎｃｈａｍ他 １９９６年、Ｓｔ．Ｃｌａｉｒ他 １９８１年、Ｗａｌｌａｃｅ他 ２００５年）。
霊長類の管理
この試験での霊長類の管理および世話は、研究および訓練における動物の使用（ＭＲＣ
Ｇｕｉｄｌｉｎｅｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌｓ ｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｒａｉｎｉｎｇ）に関する文書化された標準業務手順（Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ）（Ｍｄｈｌｕｌｉ ２００５年）およびＭＲＣガイドライン（ＭＲＣ Ｇｕｉｄｌｉｎｅｓ） 、南アフリカでの薬物および関連物質の研究、教育、診断および試験における動物使用のための国家規約（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｄｅ ｆｏｒ Ａｎｉｍａｌ Ｕｓｅ ｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ， Ｄｉａｆｎｏｓｉｓ ａｎｄＴｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ａｎｄ Ｒｅｌｅｔｅｄ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ｉｎ Ｓｏｕｔｈ Ａｆｒｉｃａ）、ならびに１９９７年 獣医およびパラ獣医職の法令：実験動物技術者のパラ獣医職の実施に関する規約（Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ ａｎｄ Ｐａｒａ−Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎｓ Ａｃｔ ｏｆ １９９７： Ｒｕｌｅｓ ｒｅｌａｔｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｐｒａｃｔｉｃｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｒａ−Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｓｔ）に従った。
サルの選択および永久識別
この試験で選択された個体は全て、健常な成体雄および雌の第２世代飼育繁殖個体で、平均体重はそれぞれ５．５６kg（±０．７２４）および３．１６ｋｇ（±０．２６６）であった。平均年齢が雄では１２歳、雌では７歳であった。雌ベルベットモンキーは約２．５〜３歳で、雄では約３．０〜４．０歳で飼育下で性的に成熟する（Ｅｌｅｙ １９９２年）。
【０１０７】
個体は全て、身体検査および過去の臨床記録による判定で明白な病巣を有さず、年齢に応じた正常な体重であり、永久番号をインク刺青で識別された。加えて、個体番号、群の名称、および実験番号をケージに印字した。
環境条件
この試験で使用されたベルベットモンキーは全て、同一の飼育条件下でＭＲＣの技術およびイノベーション理事会（Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｄｉｒｅｃｔｏｒａｔｅ）の霊長類施設（Ｐｒｉｍａｔｅ Ｕｎｉｔ）で飼育された。施設は、密閉された室内環境で２４〜２６℃、湿度約４５％で、１時間内に約１５〜２０分間換気され、１２時間の光照射が保持された、完全に空調管理された１４の動物室で構成されている。部屋は全て陽圧に保持され、別々の給気を有している。
飼育
飼育は試験期間中は単独で行われ、９０×７０×１２０cmの吊り下げ式のめっきスチールケージで構成され、１室に２４匹のサルが飼育された。動物室を１日１回清掃した。ケージの寸法は、単独動物のための南アフリカ国家規約（Ｓｏｕｔｈ Ａｆｒｉｃａ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｄｅ）の要件と一致している。
飼料および水
水は自動給水装置によって自由に利用できた。トウモロコシ粉を基にした維持食は、霊長類施設で生産されたもので、３世代での良好な成長および生殖を支えた（Ｓｅｉｅｒ １９８６年）。添加された微量および多量栄養素を含む乾燥トウモロコシ粉７０ｇを水と硬練りに混合して、サルに午前７：００、午前１１：００に、そして栄養を添加していない別の７０ｇを午後３：００に給餌した。これにより、サルごとに１日あたり２４１２キロジュールが供給され、タンパク質からは１２％、脂肪から２０％および炭水化物から６８％のエネルギーが供給される。加えてりんごまたはオレンジが、正午に７０ｇ／匹／日
給餌される。飼料の詳細な組成は、過去に記載された（Ｆｉｎｃｈａｍ他 １９８７年、Ｖｅｎｔｅｒ他 １９９３年）。
補助施設
霊長類施設の活動は全て、ケージ清掃、食餌調製および保存、検査化合物の保存および配合、手順（即ち採血）、操作（観察（ｔｈｅａｔｒｅ））および検死のための専用区域および部屋と物理的に完全に分離されている。
飼育環境の強化（ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ）
一つのケージには、床上８０cmにある休息用のねぐら、採餌皿ならびに同種とのグルーミングおよび物理的接触が可能なコミュニケーションパネルが取り付けられている。９０×７０×２００cmの区域の運動ケージは、各サルが週に３回利用でき、居住ケージを離れて居住ケージではできない特定の活動で用いることができる（Ｓｅｉｅｒおよびｄｅ Ｌａｎｇｅ １９９６年）。そのケージは、同室および隣室の別の動物全てと３６０°コミュニケーションをとることができる（ガラスパネルを通して）。静かな音楽と鳥の鳴き声が各動物室に放送されて、聴覚的な退屈さが緩和される。他の強化方法は、過去に記載された（Ｓｅｉｅｒ他 ２００４年）。
健康および疾患の制御
動物は全て、年に４回、上瞼の皮膚内にＰＰＤを３０００単位注入されることにより、ＴＢに関して試験された。ＭＲＣの職員および学生、ならびにサービス業者を、年に２回の気管支分泌物のミコバクテリア培養により、ＴＢについて試験した。霊長類施設の標準操作手順に従って、更なる細菌学および血清学的試験をベルベットモンキーで時々実施し、許容される規準と一致させた（ＦＥＬＡＳＡ １９９８年）。これは、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、サルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、カンピロバクター菌（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）およびエルジニア菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）に関する試験を含んでいた。
ベルベットモンキーの取扱い、物質の投与、および試料の採取
ベルベットモンキーの手順および取扱いは、霊長類施設の標準業務手順、および前文に挙げられた他の全てのガイドラインに従った。それらは、実験動物技術の南アフリカ獣医
師評議会（ＳＡ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｃｏｕｎｃｉｌ）に登録されている完全に認定された熟練の実験動物技術者により実施および／または監督されている。
観察
動物は全て、１日３回観察して、処理による潜在的な身体副作用を測定した。以下の基準を用いた：姿勢、協応、移動、活発さ、挙動（警戒、恐怖、攻撃、うろたえ、抑うつ、発声）、体腔からの排泄、食欲、糞および尿の状態。
ＧＭＰ ＡＲＣ１３７の調製
霊長類モデルの生物活性を試験するために、本発明による植物抽出物を調製した。生物活性について予め試験された有機認証された緑色のシクロピア サブターナタの葉および茎を、ｃＧＭＰ施設で加工した。
製造の詳細
両方の生成物の製造過程は、以下の施設操作を含んでいた：植物材料の抽出、抽出物と小粒子物質との分離、蒸発、濃縮物のＨＴＳＴ滅菌、濃縮物の真空乾燥および微小生成物粉末のふるい。
抽出物の調製
植物材料を、パーコレータあたり２００kgの２つの部分に抽出した。予め９３℃に加熱された精製水（２０００kg）を、１：１０の割合でパーコレータの上部から加え、得られた抽出物を３５分間循環させた。抽出が終了したら、部分１を排水して、更なる２００ｋｇの精製水で洗浄し、乾燥残渣を３．０％含む総重量１８８９kgの水性抽出物を得た（乾燥抽出物の収率−２８．６％）。部分２を同様の手法で抽出したが、乾燥残渣を２．９２％含む水性抽出物１８８９kgを得た（乾燥抽出物の収率−２７．６％）。
【０１０８】
沈降物を３０分毎に排水循環しながら、抽出物を１０００l/hの流速で高温遠心分離し
た。遠心分離後に回収した最終抽出物は３７５３kgであり、乾燥残渣の収率は２．９８％であった。
【０１０９】
遠心分離後に、入口温度７８℃未満の水性抽出物を、真空下、５５℃未満の平板型エバポレータで４７２kgおよび乾燥残渣２３．９８％に濃縮した。
濃縮物を流速３８５〜４４５l/h、１２１〜１２３℃（約６８秒）でＨＴＳＴ滅菌した
。滅菌後に濃縮物を２５℃未満に冷却した。精製水を用いて、植物を洗浄し、最終的な滅菌濃縮物４８５kgを乾燥残渣２２．９３％で得た。
【０１１０】
滅菌濃縮物を真空乾燥機（モデル２０００（Ｍｏｄｅｌ ２０００））で生成物温度４６℃未満で２４時間、乾燥させた。乾燥させた後、粉末を２種のふるい（２mm、その後０．５mm）でふるいにかけて、真空乾燥機の羽の回転時に形成された塊を除去した。
【０１１１】
ふるいにかけた粉末を２つのＰＥバッグ（３４．４５ｋｇ、４６．３５ｋｇ）に入れ、その後、別々にアルミニウムコートされたファイバードラムに密閉した。
植物材料
植物材料のＨＰＬＣフィンガープリントを、本発明の水性抽出物で測定した。植物材料を水浴中、脱イオン精製水（１：１０の比）で９０〜９３℃で３０分間抽出し、高温でワットマン４番ろ紙でろ過して凍結し、その後凍結乾燥することにより、抽出物を調製した。ＨＰＬＣ分析では、凍結乾燥抽出物を精製水で再構成した。
【０１１２】
最終生成物（ＧＭＰ ＡＲＣ１３７）のＨＰＬＣフィンガープリントを、精製水で再生された抽出物で測定した。
結果
図１は、２８８ｎｍおよび３５０ｎｍの関連検出波長における植物材料の実験室規模水性抽出物のＨＰＬＣフィンガープリントを示す。図２は、同じ関連検出波長における、本発明の採収ＧＭＰ乾燥抽出物のＨＰＬＣフィンガープリントを示す。
ベルベットモンキーの用量最適化試験
対照
サル３匹を対照群に無作為化した。対照群のサルは、乾燥抽出物を含まない維持食（ボール形に成形）を配給量７０ｇで１日３回、７日間摂取した。７日目にサルを一晩（１３時間）絶食して、ベースライン血液試料を採取した後、サルはボール形維持食ボーラスを摂取した。その後、ケタミン麻酔（１０mg/kg体重 筋肉注射）の下、１時間ごとに６時
間、大腿静脈穿刺で血液試料を採取した。
対照群の結果の考察
８８番のサルは、モニタリング期間の最初の２時間の間安定した４．５mMol/lの絶食時ベースライン血糖値を示し、その後、血糖値は第３時間目までに、血糖の３５．５６％の低下率に相当する２．９mMol/lまで顕著に低下し、その後、４時間後に３．６まで、５および６時間後に３．９mMol/lまでわずかに増大した。１０８２番のサルは、５．２mMol/lというわずかに高い絶食時ベースライン血糖値を示していたが、最初の２時間で１時間目および２時間目にそれぞれ５．３mMol/lおよび５．６mMol/lまでさらに血糖値が増大し、その後３時間目に４．４mMol/lに減少した。血糖値は４時間目および５時間目に４．１ mMol/lおよび３．５mMol/lに低下し続け、その後６時間目に４．７mMol/lにわずかに増大した。５時間目に３２．６９％という最も高い血糖低下率が観察された。３３３番のサルは、６時間のモニタリング期間の一時間ごとの時点で４．６mMol/lのベースライン血糖値を超える増加した血糖レベルを示した。６時間目に、サルは、ベースライン血糖値から計算された血糖増加率４４．２３％に相当する７．５mMol/lの血糖値を有し高血糖となった。この血糖の増加は、長期間の絶食に対する糖尿病動物の典型的な反応である糖新生により引き起こされたものである。
実験群
１mg/kg、２．５mg/kg、５mg/kgおよび２５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７（先に記載されたシクロピア サブターナタの葉および茎の抽出物）を１日３回受ける４つの実験群に、サル９匹を無作為化した。各実験群のサルは全て、ボーラスとして維持食のボール７０ｇに成形されたＧＭＰ ＡＲＣ１３７の予め計量された一部を１日３回、７日間摂取した。７日目にサルを一晩（１３時間）絶食して、ベースライン血液試料を採取した後、サルは各量の乾燥抽出物を含む維持食ボーラスを摂取した。その後、ケタミン麻酔（１０mg/kg体重 筋肉注射）の下、１時間ごとに６時間、大腿静脈穿刺で血液試料を採取した。
【０１１３】
ＧＭＰ ＡＲＣ１３７ １．０mg/kg実験群結果の考察
１０８４番のサルは、５．７mMol/lの高い絶食時ベースライン血糖値を示した。１．０mg/kgのＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含むボーラスを受けた後、１時間目の血糖値レベルが５．
３mMol/lへまずわずかに低下した後、２時間で血糖レベルは血糖パーセンテージで５０．８８％の低下に相当する２．８mMol/lに急激に減少し、その後、３時間目に３．９mMol/lに回復した。その後、血糖レベルは４および５時間目にそれぞれ４．２mMol/lおよび４．５mMol/lで安定し、６時間で５．３mMol/lに増加した。
【０１１４】
１０８１番のサルは、７．５mMol/lという高血糖症の絶食時ベースライン血糖値を示した。１．０mg/kgのＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含むボーラスを受け取った後、１時間目に血
糖パーセンテージの４０％の低下に相当する１．４mMol/lだけ血糖値が減少し、２時間目にはさらに１．６mMol/lだけ４．５mMol/lまで低下し続けた。次の２時間は血糖レベルが４．６mMol/lに維持され、５時間で５．２mMol/lにわずかに増加した。６時間で、血糖値は、ベースライン値より４１．３３％（３．１mMol/l）低い４．４mMol/lに減少した。
【０１１５】
２６６番のサルは、５．３mMol/lの適度に高いベースライン血糖を示した。１．０mg/kgのＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含むボーラスを受けた後、１および２時間目に、血糖値は、
５．０および５．１mMol/lに留まり、その後３および４時間目に５．７mMol/lおよび５．８mMol/lにそれぞれ増加した。５時間で血糖値は７．３mMol/lに急激に増大し、その後６
時間で５．５mMol/lまで減少したが、これは依然として５．３mMol/lベースライン値より高かった。他の２匹のサルとは鋭く対照的に、２６６番のサルは、１mg/kgの投与量では
ＧＭＰ ＡＲＣ１３７に応答しなかった。１および２時間目に血糖パーセンテージの非常に少量最初に低下した後、グルコースレベルは、５時間で４０．３８％のピークに増加し、６時間では５．７７％に低下した。
【０１１６】
２．５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７実験群結果の考察
７８番のサルは、４．６mMol/の絶食時ベースライン血糖値を有し、２．５mg/kg ＧＭＰ
１３７抽出物を含むボーラスを受けた１時間後に、血糖値の１mMol/l（２１．７４％）の低下を示した。ベースライン値に対して計算した血糖値の１５．２２％と２８．２５％の間の範囲のベースラインレベルよりも低い値が、６時間のモニタリング期間の残りの間の維持された。
【０１１７】
１０８３番のサルは、２．５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含むボーラスを受けた後
１時間後に、４．４mMol/lのベースライン血糖値と比較して、５．０mMol/lに血糖値の増加を示した。２時間で、血糖レベルは、３．２mMol/lへと１．８mMol/lだけ著しく減少し、次に、３時間で２．８mMol/lにさらに低下した。その後、血糖レベルは、残るモニタリング期間の間約３．０mMol/lに維持された。
【０１１８】
１０８４番のサルは、５．７mMol/lという高い空腹時血糖ベースラインを示した。２．５mg/kg ＧＭＰ抽出物を含むボーラスを受けた後、１時間で血糖値は５．３mMol/lに上
昇したままだったが、２時間で、血糖パーセンテージの４３．６％低下に相当する３．２mMol/lに大幅に減少し、その後、血糖値は、３．７mMol/l（ベースライン血糖値よりも３５．７％低いレベル）で安定していた。
【０１１９】
５．０mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７実験群結果の考察
１０７９番目のサルは、５mg/kgのＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含むボーラスを受けた後、１
および２時間目に３．７mMol/lのベースライン値から４．５mMol/lおよび４．６mMol/lへの血糖レベルの増加をそれぞれ示した。３時間で、血糖値は３．３mMol/lに減少し、４時間で４．３mMol/lに増加し、次に５および６時間で３．６mMol/lおよび３．８mMol/lというベースライン値の付近でそれぞれ安定した。
【０１２０】
１０８１番のサルは、７．５mMol/lの高血糖症の絶食時ベースライン血糖値を示した。
５．０mg/kgのＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含むボーラスを受けた１時間後、血糖値は、７
．２mMol/lとまだ高かった。２時間後に、血糖は４．６mMol/lに急激に減少し、モニタリング期間の最後の４時間の間、血糖値は５mMol/lと６mMol/lの間で安定化した。
【０１２１】
２５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７実験群結果の考察
１１９番のサルは、５．５mMol/lという適度に高い絶食時ベースライン血糖値を示した。２５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含むボーラスを受けた１時間後、血糖値は４．８mMol/lに減少した。４．９mMol/lの血糖値がさらに２時間維持され、その後４時間で５．４mMol/lにわずかに増加した。その後、血糖レベルは、５時間で４．３mM ol/lにわずかに減少し、６時間で４．９mMol/lに増加した。
【０１２２】
２５８番目のサルは、２１．２mMol/lという極端に高血糖の血糖ベースライン値を示した。これは、後期２型または１型糖尿病患者が要求するインシュリン支援に臨床的に一致している。２５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含むボーラスを受けた１時間後、血糖レ
ベルは４mMol/lだけ減少して１７．２mMol/lとなり、その後、２時間で１８．２mMol/lに安定化した。３時間で、血糖はさらに４mMol/l低下して１４．２mMol/lとなり、これはベースライン血糖値に対して計算した血糖パーセンテージの３３．２％の低下を表わしてい
る。４時間で、血糖値は、１６．８mMol/lにわずかに増大したが、これはベースライン値よりもまだ２０．７５％低く、その後５および６時間で１４．３および１３．３mMol/lにさらに減少した。
【０１２３】
２６６番のサルは、５．２mMol/lという適度に高い絶食時ベースライン血糖値を示した。 この値は、２５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を含むボーラスを受け取った１時間後
には５．８mMol/lにさらに増加した。しかしながら、血糖値は、２および３時間で、４．２mMol/lおよび４．５mMol/lにそれぞれ低下した。その後、モニタリング期間の残りの間血糖レベルは維持されず、４、５および６時間で、６．０、７．０および６．１mMol/lにそれぞれ増加した。５および６時間目の値の増加は、長期間の絶食により糖尿病動物に糖新生が引き起こされたことを強く示唆している。
結果の概要
対照群
対照群では、試験されたサル３匹のうちいずれも、成形維持食の一部を摂取した後、最初の２時間は、ベースライン値からの低下を示さなかった。その後、サル３匹のうち２匹で、ベースライン値に比較してグルコース値の低下が観察された。
１．０mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７処理群の血糖値
１mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７群の結果は、全６時間のモニタリング期間に、サルの
うちの２匹のベースライン血糖値に比較して、血糖値の著しい低下を示した。
２．５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７処理群の血糖値
２．５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７を摂取したサル３匹の血糖値は、最初の２時間で
血糖値の著しい低下を示し、その後の残りのモニタリング期間では、低い血糖値が維持された。
５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７処理群の血糖値
５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７処理群の２６３番のサルは、処理ボーラス摂食の開始
後、摂取した後、血糖値決定の朝に処理を拒んだため、研究から除外しなければならなかった。高い絶食ベースライン血糖値（高血糖症）を有する１０８１番のサルは、５mg/kg
ＧＭＰ ＡＲＣ１３７処理の２時間後に血糖値の著しい低下を示した。モニタリング期間の間、これらのレベルが維持された。１０７９番のサルはモニタリング期間中維持される正常血糖開始血糖レベルを有した。
２５mg/kg ＧＭＰ ＡＲＣ１３７処理群の血糖値
２５８番のサルは、２１．２mMol/lという絶食時ベースライン値を有する重度の高血糖症を示した。血糖値はモニタした核時点で減少しているが、６時間目の血糖レベルは依然として１３．３mMol/lであった。このサルは研究から除外した。残りの２つのサルは所与の投与量での処理に応答しなかった。
【０１２４】
種々の投与量のＧＭＰ ＡＲＣ１３７を受けたサルにおける結果の比較
２６６番のサルは１mg/kgおよび２５mg/kgのＧＭＰ ＡＲＣ１３７処理に応答しなかた。１０８１番のサルは、１mg/kgおよび５mg/kgのＧＭＰ ＡＲＣ１３７を受け、モニタした６時間にわたって顕著な血糖レベルの低下を示した。これに対し、１mg/kgでのＧＭＰ
ＡＲＣ１３７処理は低下がもっとも大きく、６時間のモニタリング機関の間もっとも低い血糖レベルを維持した。
【０１２５】
図１５は、ベルベットモンキーを異なる投与量の抽出物（ＡＲＣ１３７）で７日間処理した後の６時間の血漿グルコースの低下率を示す（平均データ）。
結論
小規模予備試験では、１〜２．５mg/kgの用量範囲のＧＭＰ ＡＲＣ１３７が、非ヒト
霊長類（クロロセブス・アエチオプス）の血糖値降下に最も効果的であった。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療用植物抽出物を単離する方法であって、
（ａ）シクロピア植物またはその一部を提供するステップ、
（ｂ）前記植物またはその一部を、前記植物抽出物の可溶化に適した非毒性溶媒と組み合わせて、前記溶媒を６０℃〜９５℃、好ましくは９０℃〜９５℃の温度に加熱するステップ、
（ｃ）前記植物抽出物を回収するステップ、および
（ｄ）任意選択で乾燥させるステップ、
からなる方法。
【請求項２】
前記植物がシクロピア サブターナタである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記植物またはその一部が乾燥粉末形態である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記植物またはその一部が乾燥粉末形態である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記一部が葉、茎、花、根および結節から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
可溶化された植物抽出物を粉末形態に乾燥させるステップを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記非毒性溶媒が水およびエタノールの少なくともいずれか一方である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法により製造される植物抽出物。
【請求項９】
請求項８に記載の植物抽出物を含む医薬組成物。
【請求項１０】
投与単位あたりに治療上有効量の請求項８に記載の植物抽出物を含む、治療効果を得るための投与に適合した投与単位形態の医薬製剤。
【請求項１１】
前記治療上有効量が、kg体重あたり約１mg〜約２．５mgである、請求項１０に記載の医薬製剤。
【請求項１２】
粗植物粉末の製造方法であって、
（ａ）シクロピア植物またはその一部を提供するステップ、
（ｂ）直射日光の非存在下で前記植物またはその一部を乾燥させるステップ、および
（ｃ）前記乾燥させた植物またはその一部を粉砕して、植物粉末を形成させるステップ、からなる方法。
【請求項１３】
前記植物がシクロピア サブターナタである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記一部が葉、茎、花、根および結節から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の方法により製造される粗植物粉末。
【請求項１６】
請求項１５に記載の粗植物粉末を含む医薬組成物。
【請求項１７】
投与単位あたりに治療上有効量の請求項１５に記載の粗植物抽出物を含む、治療効果を得るための投与に適合した投与単位形態の医薬製剤。
【請求項１８】
前記治療上有効量が、kg体重あたり約１mg〜約２．５mgである、請求項１７に記載の医薬製剤。
【請求項１９】
１〜２．５mg/kg体重の用量範囲が投与される、糖尿病の治療のための請求項８に記載の
植物抽出物の第１の医薬使用方法。
【請求項２０】
糖尿病の治療のための請求項１５に記載の粗植物粉末の第１の医薬使用方法。
【請求項２１】
前記組成物が、１〜２．５mg/kg体重の用量範囲で投与される、シクロピア属の植物の水
性抽出物を含む抗糖尿病組成物。
【請求項２２】
前記抽出物がシクロピア サブターナタ由来のものである、請求項２１に記載の抗糖尿病組成物。
【請求項２３】
シクロピア属の植物の水性抽出物を１〜２．５mg/kg体重の用量範囲で投与して、血糖値
を低下させるステップを含む、糖尿病の治療方法。
【請求項２４】
前記抽出物がシクロピア サブターナタ由来のものである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
シクロピア サブターナタの抽出物を、１〜２．５mg/kg体重の用量範囲でほ乳類に投与
して、Ｇｌｕｔ４およびＧｌｕｔ２の少なくともいずれか一方の活性を上昇させるステップを含む、ほ乳類の糖尿病を抑制する方法。
【請求項２６】
Ｇｌｕｔ４およびＧｌｕｔ２の少なくともいずれか一方の活性を上昇させる化合物を測定するステップを含む、請求項２１または２２の抽出物の特異的化合物を抗糖尿病活性についてスクリーニングする方法。
【請求項２７】
前記抽出物を１〜２．５mg/kg体重の用量範囲で投与されることを特徴とする、１または
２型糖尿病を治療する医薬を製造するための、請求項２１または２２に記載の抽出物の使用方法。
【請求項２８】
シクロピア属の植物材料を含む抗糖尿病組成物。
【請求項２９】
シクロピア属の植物の水性抽出物を含む抗糖尿病組成物。
【請求項３０】
前記抽出物がシクロピア サブターナタ由来のものである、請求項２８に記載の抗糖尿病組成物。
【請求項３１】
マンギフェリンまたはヘスペリジンおよびそれらの混合物からなる群から選択されるフラボノイドからなる請求項２８に記載の抗糖尿病組成物。
【請求項３２】
マンギフェリンのモル濃度がヘスペリジンのそれの少なくとも２倍である、請求項３１に記載の抗糖尿病組成物。
【請求項３３】
シクロピア属の植物の水性抽出物を一定量投与して、血糖値を低下させるステップを含む、糖尿病の治療方法。
【請求項３４】
前記抽出物がシクロピア サブターナタ由来のものである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
マンギフェリンまたはヘスペリジンおよびそれらの混合物からなる群から選択されるフラボノイドを一定量投与して、血糖値を低下させるステップを含む、糖尿病の治療方法。
【請求項３６】
マンギフェリンのモル濃度がヘスペリジンのそれの少なくとも２倍である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
化合物の群の構成要素がＧｌｕｔ４およびＧｌｕｔ２の少なくともいずれか一方の活性を上昇させることを決定するステップを含む、前記化合物の群をほ乳類の抗糖尿病活性についてスクリーニングする方法。
【請求項３８】
１または２型糖尿病を治療する医薬を製造するためのマンギフェリンの使用方法。
【請求項３９】
１または２型糖尿病を治療する医薬を製造するための、ヘスペリジンと組み合わせたマンギフェリンの使用方法。
【請求項４０】
１または２型糖尿病を治療する天然医薬を製造するための、シクロピア属の使用方法。
【請求項４１】
２型糖尿病を治療する方法であって、シクロピア属の植物の抽出物がマンギフェリンまたは化学的にそれに関係する化合物を含む、該治療を必要とするヒトまたは他のほ乳類に前記抽出物の有効な投与量を投与することによる方法。
【請求項４２】
前記植物がシクロピア サブターナタである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記抽出物が、回収された植物材料を溶媒で処理して抗糖尿病活性を有する抽出物の溶液を単離するステップ、抽出物の溶液を植物材料の残留物から分離するステップ、前記溶液から溶媒を除去するステップ、および前記抽出物を回収するステップを含むことにより得られる、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
前記工程が前記抽出物の抗糖尿病活性を溶媒での更なる抽出により濃縮するステップを更に含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記溶媒処理抽出ステップの前記溶媒が塩化メチレン、水、メタノール、ヘキサン、酢酸エチルまたはそれらの混合物のうちの１種以上である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記工程が前記抽出物の抗糖尿病活性をクロマトグラフィー分離により濃縮するステップを更に含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記クロマトグラフィー分離がクロロホルム、メタノール、酢酸エチル、ヘキサンまたはそれらの混合物のうちの１種以上を溶離剤として用いる、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記工程がカラムによるクロマトグラフィー分離を実行すること、分画中の溶離剤をカラムから回収すること、前記分画を評価して抗糖尿病活性を測定すること、および抗糖尿病活性を含む分画を少なくとも１つ選択すること、を含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項１】
治療用植物抽出物を単離する方法であって、
（ａ）シクロピア植物またはその一部を提供するステップ、
（ｂ）前記植物またはその一部を、前記植物抽出物の可溶化に適した非毒性溶媒と組み合わせて、前記溶媒を６０℃〜９５℃、好ましくは９０℃〜９５℃の温度に加熱するステップ、
（ｃ）前記植物抽出物を回収するステップ、および
（ｄ）任意選択で乾燥させるステップ、
からなる方法。
【請求項２】
前記植物がシクロピア サブターナタである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記植物またはその一部が乾燥粉末形態である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記植物またはその一部が乾燥粉末形態である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記一部が葉、茎、花、根および結節から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
可溶化された植物抽出物を粉末形態に乾燥させるステップを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記非毒性溶媒が水およびエタノールの少なくともいずれか一方である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法により製造される植物抽出物。
【請求項９】
請求項８に記載の植物抽出物を含む医薬組成物。
【請求項１０】
投与単位あたりに治療上有効量の請求項８に記載の植物抽出物を含む、治療効果を得るための投与に適合した投与単位形態の医薬製剤。
【請求項１１】
前記治療上有効量が、kg体重あたり約１mg〜約２．５mgである、請求項１０に記載の医薬製剤。
【請求項１２】
粗植物粉末の製造方法であって、
（ａ）シクロピア植物またはその一部を提供するステップ、
（ｂ）直射日光の非存在下で前記植物またはその一部を乾燥させるステップ、および
（ｃ）前記乾燥させた植物またはその一部を粉砕して、植物粉末を形成させるステップ、からなる方法。
【請求項１３】
前記植物がシクロピア サブターナタである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記一部が葉、茎、花、根および結節から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の方法により製造される粗植物粉末。
【請求項１６】
請求項１５に記載の粗植物粉末を含む医薬組成物。
【請求項１７】
投与単位あたりに治療上有効量の請求項１５に記載の粗植物抽出物を含む、治療効果を得るための投与に適合した投与単位形態の医薬製剤。
【請求項１８】
前記治療上有効量が、kg体重あたり約１mg〜約２．５mgである、請求項１７に記載の医薬製剤。
【請求項１９】
１〜２．５mg/kg体重の用量範囲が投与される、糖尿病の治療のための請求項８に記載の
植物抽出物の第１の医薬使用方法。
【請求項２０】
糖尿病の治療のための請求項１５に記載の粗植物粉末の第１の医薬使用方法。
【請求項２１】
前記組成物が、１〜２．５mg/kg体重の用量範囲で投与される、シクロピア属の植物の水
性抽出物を含む抗糖尿病組成物。
【請求項２２】
前記抽出物がシクロピア サブターナタ由来のものである、請求項２１に記載の抗糖尿病組成物。
【請求項２３】
シクロピア属の植物の水性抽出物を１〜２．５mg/kg体重の用量範囲で投与して、血糖値
を低下させるステップを含む、糖尿病の治療方法。
【請求項２４】
前記抽出物がシクロピア サブターナタ由来のものである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
シクロピア サブターナタの抽出物を、１〜２．５mg/kg体重の用量範囲でほ乳類に投与
して、Ｇｌｕｔ４およびＧｌｕｔ２の少なくともいずれか一方の活性を上昇させるステップを含む、ほ乳類の糖尿病を抑制する方法。
【請求項２６】
Ｇｌｕｔ４およびＧｌｕｔ２の少なくともいずれか一方の活性を上昇させる化合物を測定するステップを含む、請求項２１または２２の抽出物の特異的化合物を抗糖尿病活性についてスクリーニングする方法。
【請求項２７】
前記抽出物を１〜２．５mg/kg体重の用量範囲で投与されることを特徴とする、１または
２型糖尿病を治療する医薬を製造するための、請求項２１または２２に記載の抽出物の使用方法。
【請求項２８】
シクロピア属の植物材料を含む抗糖尿病組成物。
【請求項２９】
シクロピア属の植物の水性抽出物を含む抗糖尿病組成物。
【請求項３０】
前記抽出物がシクロピア サブターナタ由来のものである、請求項２８に記載の抗糖尿病組成物。
【請求項３１】
マンギフェリンまたはヘスペリジンおよびそれらの混合物からなる群から選択されるフラボノイドからなる請求項２８に記載の抗糖尿病組成物。
【請求項３２】
マンギフェリンのモル濃度がヘスペリジンのそれの少なくとも２倍である、請求項３１に記載の抗糖尿病組成物。
【請求項３３】
シクロピア属の植物の水性抽出物を一定量投与して、血糖値を低下させるステップを含む、糖尿病の治療方法。
【請求項３４】
前記抽出物がシクロピア サブターナタ由来のものである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
マンギフェリンまたはヘスペリジンおよびそれらの混合物からなる群から選択されるフラボノイドを一定量投与して、血糖値を低下させるステップを含む、糖尿病の治療方法。
【請求項３６】
マンギフェリンのモル濃度がヘスペリジンのそれの少なくとも２倍である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
化合物の群の構成要素がＧｌｕｔ４およびＧｌｕｔ２の少なくともいずれか一方の活性を上昇させることを決定するステップを含む、前記化合物の群をほ乳類の抗糖尿病活性についてスクリーニングする方法。
【請求項３８】
１または２型糖尿病を治療する医薬を製造するためのマンギフェリンの使用方法。
【請求項３９】
１または２型糖尿病を治療する医薬を製造するための、ヘスペリジンと組み合わせたマンギフェリンの使用方法。
【請求項４０】
１または２型糖尿病を治療する天然医薬を製造するための、シクロピア属の使用方法。
【請求項４１】
２型糖尿病を治療する方法であって、シクロピア属の植物の抽出物がマンギフェリンまたは化学的にそれに関係する化合物を含む、該治療を必要とするヒトまたは他のほ乳類に前記抽出物の有効な投与量を投与することによる方法。
【請求項４２】
前記植物がシクロピア サブターナタである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記抽出物が、回収された植物材料を溶媒で処理して抗糖尿病活性を有する抽出物の溶液を単離するステップ、抽出物の溶液を植物材料の残留物から分離するステップ、前記溶液から溶媒を除去するステップ、および前記抽出物を回収するステップを含むことにより得られる、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
前記工程が前記抽出物の抗糖尿病活性を溶媒での更なる抽出により濃縮するステップを更に含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記溶媒処理抽出ステップの前記溶媒が塩化メチレン、水、メタノール、ヘキサン、酢酸エチルまたはそれらの混合物のうちの１種以上である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記工程が前記抽出物の抗糖尿病活性をクロマトグラフィー分離により濃縮するステップを更に含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記クロマトグラフィー分離がクロロホルム、メタノール、酢酸エチル、ヘキサンまたはそれらの混合物のうちの１種以上を溶離剤として用いる、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記工程がカラムによるクロマトグラフィー分離を実行すること、分画中の溶離剤をカラムから回収すること、前記分画を評価して抗糖尿病活性を測定すること、および抗糖尿病活性を含む分画を少なくとも１つ選択すること、を含む、請求項４６に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【公表番号】特表２０１０−５２０９１４（Ｐ２０１０−５２０９１４Ａ）
【公表日】平成２２年６月１７日（２０１０．６．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５５３１２６（Ｐ２００９−５５３１２６）
【出願日】平成２０年３月１１日（２００８．３．１１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０５２８６３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１１０５５２
【国際公開日】平成２０年９月１８日（２００８．９．１８）
【出願人】（５０９２５７５５８）
【氏名又は名称原語表記】ＺＡＤＥＣ ＡＰＳ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年６月１７日（２０１０．６．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年３月１１日（２００８．３．１１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０５２８６３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１１０５５２
【国際公開日】平成２０年９月１８日（２００８．９．１８）
【出願人】（５０９２５７５５８）
【氏名又は名称原語表記】ＺＡＤＥＣ ＡＰＳ
【Ｆターム（参考）】
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