ビフィズス菌および乳酸菌の増殖促進剤
【課題】ビフィズス菌および乳酸菌の増殖を促進して菌濃度を高め、発酵時間を短縮でき、調製または入手が容易で安価な増殖促進剤を提供すること。
【解決手段】ビフィズス菌および乳酸菌の増殖促進剤の有効成分としてさつまいも焼酎粕を用い、該増殖促進剤を飲食品や培地に含有させる。
【解決手段】ビフィズス菌および乳酸菌の増殖促進剤の有効成分としてさつまいも焼酎粕を用い、該増殖促進剤を飲食品や培地に含有させる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビフィズス菌および乳酸菌の増殖促進剤、ならびにそれを含有する飲食品および培地に関する。
【背景技術】
【０００２】
ビフィズス菌は主としてヒトや動物の腸管に生息しており、ヒトでは腸内菌叢の中の優勢菌の一つである。ビフィズス菌を含む食品を摂取することにより、有害菌が抑制され腸内細菌叢が改善され、有害菌によって生成する腸内腐敗産物が減少し、整腸効果や感染防御の効果を示す。さらに重要な作用としては免疫調節作用がある。これはビフィズス菌が人体最大の免疫器官である腸管を刺激し、免疫力を高めるためであり、感染防御、発ガン抑制、アレルギー症状の改善（花粉症など）など様々な効果に通じる。
【０００３】
このようなビフィズス菌の保健機能は、腸内細菌叢の改善を介して発揮されると考えられている。そのため、食生活を含む生活スタイルの変化が原因とされる生活習慣病の増加が危惧されている現在、良好な腸内細菌叢を保つことが重要である。そこで、ビフィズス菌や乳酸菌を含む食品を積極的に摂取することの重要性が叫ばれている。腸内のビフィズス菌は便と共に排出されてしまうことに加え、加齢と共に減少していき、日常のストレスによっても少なくなるので、毎日ヨーグルトやビフィズス菌入りの食品で補うことが必要である。さらに食品による腸内細菌叢の改善を期待する場合、その中の生きたビフィズス菌および乳酸菌の菌濃度を高めることが考えられる。しかしながら、ビフィズス菌は乳酸菌と異なり、増殖促進物質を添加しない牛乳培地中では増殖しにくく、また、酸素の存在が生残率に影響を与えることもあって、乳製品へ応用を行うには技術的な工夫が必要である。したがって、ビフィズス菌を用いて原料を発酵させる際、ビフィズス菌の増殖を促進して菌濃度を高め発酵時間を短縮することは重要な課題である。
【０００４】
ビフィズス菌に対して増殖促進効果を有する物質としては、Ｎ−アセチルグルコサミン含有糖類、酵母エキス、カゼイン分解物等が知られている。しかしながら、これらのビフィズス菌増殖促進剤は調製に酵素処理などを必要とするため高価である。そこで、調製または入手が容易で増殖促進の効果が大きい増殖促進剤が望まれている。
【０００５】
また乳酸菌についても、安価で容易に入手できる材料を用いた増殖促進剤が望まれている。
【０００６】
ビフィズス菌および／または乳酸菌の増殖促進物質に関する発明がいくつか開示されている。例えば、酒粕から調製された乳酸菌およびビフィズス菌増殖促進剤（特許文献１）、大麦焼酎蒸留残液から乳酸菌等の微生物の増殖促進物質を製造する方法（特許文献２）、酒粕からアルコールで抽出されたビフィズス菌活性化物質（特許文献３）、大麦焼酎残留残液から得られた乾燥物を含有する乳酸菌およびビフィズス菌用培地（特許文献４）、酒粕から成る乳酸菌生育促進剤（特許文献５）などがある。これらの発明はいずれも、米または大麦の発酵物に由来する材料から増殖促進物質を得ている。
【０００７】
【特許文献１】特開平５−１５３６６号
【特許文献２】特開平１０−３２７８５２号
【特許文献３】特開平１１−２２８４２４号
【特許文献４】特開２０００−３４２２４７号
【特許文献５】特開２００５−１５１９２７号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、ビフィズス菌および乳酸菌の増殖を促進して菌濃度を高め、発酵時間を短縮でき、調製または入手が容易で安価な増殖促進剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決すべく、ビフィズス菌および乳酸菌の増殖促進物質の探索を行ったところ、さつまいも焼酎粕がビフィズス菌および乳酸菌に対して増殖促進効果を有することを見いだし、発酵乳製造の際、さつまいも焼酎粕を使用することによりビフィズス菌の菌数が約２〜５００倍に増加することを確認し、本発明を完成した。
【００１０】
本発明の特徴は、要約すると以下の通りである。
（１）さつまいも焼酎粕を有効成分として含有するビフィズス菌および乳酸菌の増殖促進剤。
（２）（１）に記載の増殖促進剤を含有する飲食品。
（３）発酵乳である（２）に記載の飲食品。
（４）（１）に記載の増殖促進剤を含有する培地。
【００１１】
本明細書において「さつまいも焼酎粕」とは、サツマイモを主原料にして作られるいも焼酎の蒸留粕をいい、米麹または麦麹で仕込んだいも焼酎の焼酎粕、サツマイモのみを用いた芋麹で仕込んだいも焼酎の焼酎粕も、さつまいも焼酎粕に包含される。
【００１２】
また「発酵乳」とは、主成分として乳を含む発酵原料からビフィズス菌および／または乳酸菌による発酵で得られたものであればすべて含むことを意味し、食品衛生法や厚生省令で定められている「発酵乳」（無脂乳固形分８％以上、乳酸菌または酵母の生菌数が１ｍｌあたり１０００万個以上）だけでなく、「乳製品乳酸菌飲料」（無脂乳固形分３％以上８％未満、乳酸菌または酵母の生菌数が１ｍｌあたり１０００万個以上）、「乳酸菌飲料」（無脂乳固形分３％未満、乳酸菌または酵母の生菌数が１ｍｌあたり１００万個以上）、ビフィズス菌のみによる発酵乳も包含される。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の増殖促進剤は、ビフィズス菌および乳酸菌の増殖を促進してこれらの菌濃度を高め、発酵時間を短縮することができる。また、腸内細菌叢改善効果を有する発酵乳などの飲食品に適用できる。さらにビフィズス菌および／または乳酸菌の培地にも適用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明の第１の態様のビフィズス菌および乳酸菌の増殖促進剤は、さつまいも焼酎粕を有効成分として含有する。さつまいも焼酎粕はクエン酸を含み、ｐＨ約３〜４と低いので、ビフィズス菌株、乳酸菌株の増殖至適ｐＨに応じて増殖促進剤のｐＨを調整することが好ましい。例えば水酸化ナトリウムや水酸化カリウムなどで好ましくはｐＨ約６．０〜７．５、より好ましくはｐＨ約６．５〜７．０に調整する。また、さつまいも焼酎粕について遠心分離、ろ過などを行い、固形分を除去し、上清を殺菌して増殖促進剤として用いることが好ましい。
【００１５】
ビフィズス菌は、例えばビフィドバクテリウム・ラクティス（Bifidobacterium lactis）、ビフィドバクテリウム・ロングム（Bifidobacterium longum）、ビフィドバクテリウム・インファンチス(Bifidobacterium infantis)、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Bifidobacterium adolesentis）、ビフィドバクテリウム・ブレーヴェ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）、ビフィドバクテリウム・アニマリス（Bifidobacterium animalis）などが挙げられる。乳酸菌は、例えばラクトコッカス・ラクチス・サブスピシズ・ラクティス（Lactococcus lactis subsp. lactis）、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピシズ・クレモリス（Lactococcus lactis subsp. cremoris）、ストレプトコッカス・サリバリウス・サブスピシズ・サーモフィラス（Streptococcus salivarius subsp. thermophilus）、ロイコノストック・メセントリズ・サブスピシズ・クレモリス（Leuconostoc mesenterides subsp. cremoris）、ラクトバチルス・アシドフィラス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバチルス・カゼイ（Lactobacillus casei）、ラクトバチルス・デルブルギ・サブスピシズ・ブルガリカス（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus）、ラクトバチルス・デルブルギ・サブスピシズ・ラクティス（Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis）、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）、ラクトバチルス・プランタム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）、テトラジェノコッカス・ハロフィルス（Tetragenococcus halophilus）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Pediococcus pentosaseus）などが挙げられる。本発明の増殖促進剤を添加すると、無添加の場合よりも短時間でビフィズス菌および乳酸菌の培養、発酵を行うことができる。
【００１６】
いも焼酎およびさつまいも焼酎粕（さつまいも蒸留粕残液ともいう）は、例えば次の工程に従って製造することができる。
【００１７】
１次仕込みに米麹を用いる場合、米を浸漬し吸水させた後、蒸しを行い、冷却後、原料の１０００分の１量の種麹を接種し、十分に攪拌混合し、３５〜４０℃の範囲で送風、攪拌、静置を繰り返して麹を得る（製麹）。麹菌としては、白麹菌、黒麹菌、黄麹菌のいずれでもよく、具体的には、アスペルギルス・カワチ（Aspergillus kawachii）、アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus awamori）、アスペルギルス・サティバ（Aspergillus sativa）などが用いられる。次に、製麹した米麹に米原料重量の１２０％量の水及び焼酎酵母を加える（１次仕込み）。焼酎酵母としては、例えばサッカロマイセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）、キャンディダ・ロブスタ（Candida robusta）などが挙げられる。５日間の発酵を行い、１次醪を得る。次いで、米麹原料の米重量に対して５倍量のサツマイモを使用し、蒸しを行い、冷却後、粉砕機により粉砕したものを、上記１次仕込みにより得られた１次醪に、サツマイモ重量の５４％の水を加えた後、粉砕したサツマイモを加える（２次仕込み）。８日間の発酵を行い、２次醪を得る。上記２段の発酵を終えた２次醪を常法により単式蒸留（常圧または減圧蒸留）に付し、いも焼酎とさつまいも蒸留粕残液（さつまいも焼酎粕）を得る。
【００１８】
本発明の増殖促進剤は、液状のままでもよいし、濃縮してもよく、さらに乾燥処理等を行って固体状、顆粒状または粉末状にしてもよい。
【００１９】
本発明の第２の態様である飲食品は、上記増殖促進剤を含有する。増殖促進剤は、上述のように液状のまま、または濃縮してから、あるいは固体状、顆粒状または粉末状に加工してから食品に含有させてもよい。飲食品中に直接混合してもよいし、飲食品中に埋め込んでもよい。また増殖促進剤を、食品に塗布、被覆、浸透又は吹き付けてもよい。増殖促進剤は、飲食品中に均一に分布していてもよいし、不均一に分布していてもよい。あるいは増殖促進剤は、食品中の特定部位に偏在していてもよい。増殖促進剤を、例えばドリンク剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、散剤等の経口投与可能な形態の製品、例えばサプリメントにしてもよいし、ヨーグルト、乳酸菌飲料、菓子、スナック類、調味類等の各種食品、飲料の形態にしてもよく、特に限定されない。
【００２０】
例えばサプリメントなどの経口投与可能な製品の場合、本発明の増殖促進剤の配合量は、製品の種類、目的、本発明の増殖促進剤が液状、固体状、顆粒状、粉末状等によって調整することができ、製品の全量に対して、例えば１００重量％、９９重量％、９８重量％、９５重量％、９０重量％、８０重量％、７０重量％、６０重量％、５０重量％、４０重量％、３０重量％、２０重量％、１０重量％であるが、これらに限定されない。また、製品に例えば賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、緩衝剤、安定化剤等の添加剤を加えてもよい。そのような添加剤としては、当該分野で一般的に使用されるものを用いればよく、例えば、賦形剤としては乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、硅酸等、結合剤としては水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等、崩壊剤としては乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等、滑沢剤としては精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等、着色剤としてはカラメル色素、パプリカ色素、コチニール色素、インジゴカルミン等、矯味剤としては白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム等、安定化剤としてはトラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。
【００２１】
ヨーグルト、乳酸菌飲料などの場合は、発酵原料として、牛乳、山羊乳、羊乳などの獣乳、それらの部分脱脂乳、脱脂乳、還元乳（濃縮乳、全脂粉乳、脱脂粉乳などに水を添加して戻したもの）などを用いることができる。発酵原料を、保持式により６３℃で３０分加熱殺菌するか、これと同等以上の殺菌効果を有する方法で殺菌する。発酵原料に対してさつまいも焼酎粕を（濃縮処理、乾燥処理をしていない場合）好ましくは３０〜９５重量％、より好ましくは４５〜９０重量％、さらに好ましくは７０〜９０重量％になるように添加する。なお、発酵原料に、副原料として甘味料、寒天、ゼラチン、油脂、生クリーム、果実、フルーツジュース、香料、着色料、安定剤などを添加してもよいし、発酵後にこれらを添加してもよい。
【００２２】
ビフィズス菌および／または乳酸菌のスターター（前培養液）を調製する。スターターを調製するための培地は、例えば上記獣乳、部分脱脂乳、脱脂乳、還元乳などであって、ｐＨ約６．０〜７．５、好ましくはｐＨ約６．５〜７．０のものである。
【００２３】
上記培地を殺菌し、ビフィズス菌および／または乳酸菌を接種し、例えば約３５〜４５℃で好ましくは約４時間〜４８時間、より好ましくは約６時間〜１０時間、培養する。スターターが、好ましくはｐＨ４．０〜５．０、より好ましくはｐＨ４．０〜４．５になるまで培養する。
【００２４】
調製したスターターを、上記さつまいも焼酎粕を添加した発酵原料に対して、乳酸菌スターターならば好ましくは０．５〜１０重量％、より好ましくは１．０〜３．０重量％、ビフィズス菌スターターならば好ましくは１〜３０重量％、より好ましくは５〜１５重量％になるように添加する。例えばヨーグルトならば、約３５〜４５℃で好ましくは約４時間〜１６時間、より好ましくは約４時間〜８時間、培養・発酵を行う。
【００２５】
本発明の第３の態様である培地は、上記増殖促進剤を含有する。該培地は、ビフィズス菌および／または乳酸菌を効率よく増殖することができる。
【００２６】
培地は、例えばＧＡＭブイヨン（ペプトン１．０重量％、ダイズペプトン０．３重量％、プロテオーゼペプトン１．０重量％、消化血清末１．３５重量％、酵母エキス０．５重量％、肉エキス０．２２重量％、カンゾウエキス０．１２重量％、ブドウ糖０．３重量％、リン酸二水素カリウム０．２５重量％、塩化ナトリウム０．３重量％、溶性デンプン０．５重量％、Ｌ−システイン塩酸塩０．０３重量％、チオグリコール酸ナトリウム０．０３重量％を含有する）、ＧＡＭ寒天培地、ビフィズス菌用培地（例えばグルコース１．０重量％、酵母エキス０．５重量％、ビーフエキス０．５重量％、カゼイン・トリプシン加水分解物１．０重量％、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム１．０重量％、Ｌ−システイン０．０５重量％、リン酸水素二カリウム０．３重量％、Ｔｗｅｅｎ ８０ １ｍｌ／Ｌを含有する）、乳酸菌用培地（例えばグルコース１．０重量％、ポリペプトン０．５重量％、酵母エキス０．５重量％、ＮａＣｌ ０．５重量％を含有する）、乳成分主体の培地（例えば１０％還元脱脂乳培地であり、これにペプトン、酵母エキス等を含めてもよい）に、上記増殖促進剤が含有されている。増殖促進剤の含有量は、培地に対して、さつまいも焼酎粕が（濃縮処理、乾燥処理をしていない場合）好ましくは３０〜９５重量％、より好ましくは４５〜９０重量％、さらに好ましくは７０〜９０重量％である。培養するビフィズス菌株、乳酸菌株に合わせて、好ましくはｐＨ約６．０〜７．５、より好ましくはｐＨ約６．５〜７．０に調整する。培養条件は、ビフィズス菌株、乳酸菌株に依存するが、例えば嫌気条件下で３５〜４５℃で培養することが好ましい。
【００２７】
以下、本発明を実施例によって具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
【実施例】
【００２８】
＜材料＞
さつまいも焼酎粕は薩摩酒造株式会社より入手した。さつまいも焼酎粕を３０００ｒｐｍ、４℃で１０分間遠心を行い、上清を水酸化カリウムでｐＨ６．７に調整し、以下の実験に使用した。
【００２９】
乳酸菌スターターのＭＹ８００（Streptococcus thermophilus、Lactobacilus delbrueckii ssp. bulgaricus、およびLactobacillus delbrueckii ssp. lactis）、およびビフィズス菌スターターのＢＢ１２株（Bifidobacterium lactis）とＢ６６株（Bifidobacterium longum）は、クリスチャンハンセン社より購入した。その他のビフィズス菌株（Bifidobacterium longum JCM 1217、Bifidobacterium longum JCM 1222、Bifidobacterium breve JCM 1192、Bifidobacterium breve JCM 7016、Bifidobacterium bifidum JCM 1255、Bifidobacterium infantis JCM 1210、Bifidobacterium animalis JCM 1190、Bifidobacterium adolesentis JCM 1275）は理化学研究所より購入した。
【００３０】
＜乳酸菌（ＭＹ８００）前培養液の調製＞
１０％還元脱脂乳（脱脂粉乳を１０重量％濃度で水に溶解させたもの）を９０℃で５分間加熱殺菌した。小スパーテル１杯の上記ＭＹ８００粉末ダイレクトスターターを添加し、３７℃で８時間培養し、ＭＹ８００前培養液を調製した。
【００３１】
＜ビフィズス菌Ｂ６６株前培養液の調製＞
１重量％Ｐｅｐｔｏｎｅ（Ｂａｃｔｏ社）、１重量％Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ（Ｂａｃｔｏ社）を含む１０％還元脱脂乳培地を調製し、９０℃で５分間加熱殺菌した。ＧＡＭブイヨン培地（日水製薬株式会社）で前培養しておいたＢ６６株を１０重量％となるように添加し、３７℃で８時間培養し、Ｂ６６株前培養液を調製した。
【００３２】
＜ビフィズス菌ＢＢ１２株前培養液の調製＞
１重量％Ｐｅｐｔｏｎｅ（Ｂａｃｔｏ社）、１重量％Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ（Ｂａｃｔｏ社）を含む１０％還元脱脂乳培地を調製し、９０℃で５分間加熱殺菌した。小スパーテル１杯のＢＢ１２粉末ダイレクトスターターを添加し、３７℃で８時間培養し、ＢＢ１２株前培養液を調製した。
【００３３】
〔実施例１〕乳酸菌の生育に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響
さつまいも焼酎粕を４５重量％、９０重量％含む１０％還元脱脂乳、およびさつまいも焼酎粕を含まない１０％還元脱脂乳を調製し、９０℃、５分で殺菌してサンプルとした。上記乳酸菌前培養液をサンプルに３重量％となるように添加し、３７℃で０〜２４時間培養した。ｐＨ、乳酸酸度、乳酸菌数を測定した。ｐＨはＰＨメーター、乳酸酸度は０．１Ｎ ＮａＯＨによる滴定で測定した。乳酸菌数は、ＢＣＰ加プレートカウントアガール培地（日水製薬株式会社）を用い、サンプルを３７℃で７２時間混釈培養し、黄変したコロニーをカウントした。
【００３４】
（結果）
図１に示すように、さつまいも焼酎粕を添加した場合、さつまいも焼酎粕無添加に比べ乳酸菌により生成される乳酸が増加した。さつまいも焼酎粕は乳酸菌による発酵性を高めることが示唆された。また、さつまいも焼酎粕の添加により乳酸発酵によるｐＨの低下が抑制された（図２）。これは、さつまいも焼酎粕には０．７５重量％のクエン酸が含まれており、そのクエン酸の緩衝作用によるものと考えられる。乳酸菌数はさつまいも焼酎粕の添加により高くなる傾向が見られたものの（図３）、有意な差はなかった（図４）。
【００３５】
〔実施例２〕ビフィズス菌の生育に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響
前述のとおり、さつまいも焼酎粕には０．７５重量％のクエン酸が含まれている。クエン酸は乳酸菌およびビフィズス菌の増殖を促進することも報告されているので、９０重量％さつまいも焼酎粕と同等のクエン酸を含むように添加したサンプルについても同時に調べた。
【００３６】
さつまいも焼酎粕を４５重量％、９０重量％含む１０％還元脱脂乳、さつまいも焼酎粕を含まない１０％還元脱脂乳、およびクエン酸３ナトリウムを０．７５重量％含む１０％還元脱脂乳（ｐＨ６．７に調整）を調製し、９０℃、５分で殺菌してサンプルとした。ＢＢ１２株前培養液をサンプルに１０重量％となるように添加し、３７℃で８時間培養した。培養後、ビフィズス菌数を測定した。ビフィズス菌数の測定はＴＯＳプロピオン酸寒天培地（栄研化学株式会社）を用い、サンプルを嫌気条件下、３７℃で７２時間混釈培養し、コロニーをカウントした。
【００３７】
また、サンプルを限外ろ過（分画分子量１００００Ｄａおよび１０００Ｄａ）して、上記と同様にして培養し、ビフィズス菌数を測定した。
【００３８】
（結果）
添加したさつまいも焼酎粕の濃度に依存してビフィズス菌数が有意に増加した（図５）。９０重量％さつまいも焼酎粕を添加した場合、無添加のものに比べ１０倍の増殖効果を示した。しかし、９０重量％さつまいも焼酎粕と同等のクエン酸を添加してもビフィズス菌数に変化はなかったことから、さつまいも焼酎粕のビフィズス菌増殖効果はクエン酸以外の物質である。また、さつまいも焼酎粕を限外ろ過（分画分子量１０００Ｄａ）してもろ液に活性が維持されていることから、さつまいも焼酎粕に含まれるビフィズス菌増殖因子は分子量１０００Ｄａ以下の低分子物質であると考えられる（図６）。
【００３９】
〔実施例３〕ビフィズス菌、乳酸菌の共培養に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響
さつまいも焼酎粕を４５重量％、９０重量％を含む１０％還元脱脂乳、さつまいも焼酎粕を含まない１０％還元脱脂乳、クエン酸３ナトリウムを０．７５重量％含む１０％還元脱脂乳（ｐＨ６．７に調整）を調製し、９０℃、５分で殺菌してサンプルとした。ＢＢ１２株前培養液およびＭＹ８００前培養液を、サンプルにそれぞれ１０重量％および３重量％となるように添加し、３７℃で０〜２４時間培養した。実施例１及び２と同様の方法で、ｐＨ、乳酸酸度、乳酸菌数、ビフィズス菌数を測定した。
【００４０】
また、ＢＢ１２株前培養液をＢ６６株前培養液にした以外は、上記と同様にして培養し、ｐＨ、乳酸酸度、乳酸菌数、ビフィズス菌数を測定した。
【００４１】
（結果）
ＢＢ１２株共存下での乳酸酸度増加量、ｐＨの変化は、乳酸菌のみで発酵させた場合と同じ挙動を示した（図７および図８）。培養８時間後の乳酸菌数はさつまいも焼酎粕を添加しても変化は見られず（図９）、８時間以降も同様であった（図１０）。一方、乳酸菌共存下でのビフィズス菌数（ＢＢ１２株）は添加したさつまいも焼酎粕の濃度に依存して有意に増加した（図１１、図１２）。９０重量％さつまいも焼酎粕を添加し、８時間培養した場合、無添加のものに比べ４倍の増殖効果を示した。
【００４２】
Ｂ６６株共存下での乳酸酸度増加量、ｐＨの変化は、上記ＢＢ１２株共存下の場合と同様であった（図１３および図１４）。また乳酸菌数も大きくかわることはなかった（図１５）。乳酸菌共存下でのＢ６６株のビフィズス菌数は添加したさつまいも焼酎粕の濃度に依存して有意に増加した（図１６）。
【００４３】
〔実施例４〕さつまいも焼酎粕のビフィズス菌増殖効果の選択性
さつまいも焼酎粕を９０重量％含む１０％還元脱脂乳、およびさつまいも焼酎粕を含まない１０％還元脱脂乳を調製し、９０℃、５分で殺菌してサンプルとした。あらかじめ表１に示すビフィズス菌（Bifidobacterium 属）１０株を別々に調製した前培養液（ＢＢ１２株以外の菌株は、すべて上記Ｂ６６株前培養液の調製方法で調製）を、サンプルに１０重量％となるように添加した。３７℃で８時間培養し、実施例２と同様にしてビフィズス菌数を測定した。
【００４４】
（結果）
Bifidobacterium breve、Bifidobacterium bifidum、Bifidobacterium animalisは乳中で増殖が悪く、さつまいも焼酎粕の増殖効果を調べることはできなかった。Bifidobacterium lactis、Bifidobacterium longum、Bifidobacterium infantis、Bifidobacterium adolesentisの６株で増殖促進効果が確認できた。特にBifidobacterium lactisＢＢ１２株では１０倍以上、Bifidobacterium longum Ｂ６６株では２５０倍以上、Bifidobacterium infantis JCM 1210では４５０倍以上、Bifidobacterium adlesentis JCM 1275では１４５倍以上の増殖効果を示した（表１、図１７）。特にBifidobacterium longumおよびBifidobacterium infantisはヒトの腸内で優勢なビフィズス菌である。また、Bifidobacterium lactis およびBifidobacterium longumはビフィズス菌入り発酵乳の製造に幅広く利用されている菌である。
【００４５】
【表１】
【産業上の利用可能性】
【００４６】
さつまいも焼酎粕はビフィズス菌および／または乳酸菌の増殖促進剤として利用でき、腸内細菌叢改善効果を有する発酵乳や飲食品の開発に適用でき、さらにはビフィズス菌および／または乳酸菌の培地にも適用できる。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】乳酸酸度に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図２】乳酸発酵（ｐＨ）に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図３】乳酸菌数に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響（発酵８時間）を示す。
【図４】乳酸菌数に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図５】ビフィズス菌（ＢＢ１２株）の生育に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響（発酵８時間）を示す。
【図６】さつまいも焼酎粕の各限外濾過分画で培養したビフィズス菌数（発酵８時間）を示す。
【図７】ＢＢ１２株共存下での乳酸酸度に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図８】ＢＢ１２株共存下での乳酸発酵（ｐＨ）に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図９】ＢＢ１２株共存下での乳酸菌の生育に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響（発酵８時間）を示す。
【図１０】ＢＢ１２株共存下での乳酸菌数に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図１１】乳酸菌共存下でのビフィズス菌（ＢＢ１２株）の生育に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響（発酵８時間）を示す。
【図１２】乳酸菌共存下でのビフィズス菌（ＢＢ１２株）数に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図１３】Ｂ６６株共存下での乳酸酸度に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図１４】Ｂ６６株共存下での乳酸発酵（ｐＨ）に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図１５】Ｂ６６株共存下での乳酸菌数に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図１６】乳酸菌共存下でのビフィズス菌（Ｂ６６株）数に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図１７】さつまいも焼酎粕のビフィズス菌増殖効果の選択性を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビフィズス菌および乳酸菌の増殖促進剤、ならびにそれを含有する飲食品および培地に関する。
【背景技術】
【０００２】
ビフィズス菌は主としてヒトや動物の腸管に生息しており、ヒトでは腸内菌叢の中の優勢菌の一つである。ビフィズス菌を含む食品を摂取することにより、有害菌が抑制され腸内細菌叢が改善され、有害菌によって生成する腸内腐敗産物が減少し、整腸効果や感染防御の効果を示す。さらに重要な作用としては免疫調節作用がある。これはビフィズス菌が人体最大の免疫器官である腸管を刺激し、免疫力を高めるためであり、感染防御、発ガン抑制、アレルギー症状の改善（花粉症など）など様々な効果に通じる。
【０００３】
このようなビフィズス菌の保健機能は、腸内細菌叢の改善を介して発揮されると考えられている。そのため、食生活を含む生活スタイルの変化が原因とされる生活習慣病の増加が危惧されている現在、良好な腸内細菌叢を保つことが重要である。そこで、ビフィズス菌や乳酸菌を含む食品を積極的に摂取することの重要性が叫ばれている。腸内のビフィズス菌は便と共に排出されてしまうことに加え、加齢と共に減少していき、日常のストレスによっても少なくなるので、毎日ヨーグルトやビフィズス菌入りの食品で補うことが必要である。さらに食品による腸内細菌叢の改善を期待する場合、その中の生きたビフィズス菌および乳酸菌の菌濃度を高めることが考えられる。しかしながら、ビフィズス菌は乳酸菌と異なり、増殖促進物質を添加しない牛乳培地中では増殖しにくく、また、酸素の存在が生残率に影響を与えることもあって、乳製品へ応用を行うには技術的な工夫が必要である。したがって、ビフィズス菌を用いて原料を発酵させる際、ビフィズス菌の増殖を促進して菌濃度を高め発酵時間を短縮することは重要な課題である。
【０００４】
ビフィズス菌に対して増殖促進効果を有する物質としては、Ｎ−アセチルグルコサミン含有糖類、酵母エキス、カゼイン分解物等が知られている。しかしながら、これらのビフィズス菌増殖促進剤は調製に酵素処理などを必要とするため高価である。そこで、調製または入手が容易で増殖促進の効果が大きい増殖促進剤が望まれている。
【０００５】
また乳酸菌についても、安価で容易に入手できる材料を用いた増殖促進剤が望まれている。
【０００６】
ビフィズス菌および／または乳酸菌の増殖促進物質に関する発明がいくつか開示されている。例えば、酒粕から調製された乳酸菌およびビフィズス菌増殖促進剤（特許文献１）、大麦焼酎蒸留残液から乳酸菌等の微生物の増殖促進物質を製造する方法（特許文献２）、酒粕からアルコールで抽出されたビフィズス菌活性化物質（特許文献３）、大麦焼酎残留残液から得られた乾燥物を含有する乳酸菌およびビフィズス菌用培地（特許文献４）、酒粕から成る乳酸菌生育促進剤（特許文献５）などがある。これらの発明はいずれも、米または大麦の発酵物に由来する材料から増殖促進物質を得ている。
【０００７】
【特許文献１】特開平５−１５３６６号
【特許文献２】特開平１０−３２７８５２号
【特許文献３】特開平１１−２２８４２４号
【特許文献４】特開２０００−３４２２４７号
【特許文献５】特開２００５−１５１９２７号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、ビフィズス菌および乳酸菌の増殖を促進して菌濃度を高め、発酵時間を短縮でき、調製または入手が容易で安価な増殖促進剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決すべく、ビフィズス菌および乳酸菌の増殖促進物質の探索を行ったところ、さつまいも焼酎粕がビフィズス菌および乳酸菌に対して増殖促進効果を有することを見いだし、発酵乳製造の際、さつまいも焼酎粕を使用することによりビフィズス菌の菌数が約２〜５００倍に増加することを確認し、本発明を完成した。
【００１０】
本発明の特徴は、要約すると以下の通りである。
（１）さつまいも焼酎粕を有効成分として含有するビフィズス菌および乳酸菌の増殖促進剤。
（２）（１）に記載の増殖促進剤を含有する飲食品。
（３）発酵乳である（２）に記載の飲食品。
（４）（１）に記載の増殖促進剤を含有する培地。
【００１１】
本明細書において「さつまいも焼酎粕」とは、サツマイモを主原料にして作られるいも焼酎の蒸留粕をいい、米麹または麦麹で仕込んだいも焼酎の焼酎粕、サツマイモのみを用いた芋麹で仕込んだいも焼酎の焼酎粕も、さつまいも焼酎粕に包含される。
【００１２】
また「発酵乳」とは、主成分として乳を含む発酵原料からビフィズス菌および／または乳酸菌による発酵で得られたものであればすべて含むことを意味し、食品衛生法や厚生省令で定められている「発酵乳」（無脂乳固形分８％以上、乳酸菌または酵母の生菌数が１ｍｌあたり１０００万個以上）だけでなく、「乳製品乳酸菌飲料」（無脂乳固形分３％以上８％未満、乳酸菌または酵母の生菌数が１ｍｌあたり１０００万個以上）、「乳酸菌飲料」（無脂乳固形分３％未満、乳酸菌または酵母の生菌数が１ｍｌあたり１００万個以上）、ビフィズス菌のみによる発酵乳も包含される。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の増殖促進剤は、ビフィズス菌および乳酸菌の増殖を促進してこれらの菌濃度を高め、発酵時間を短縮することができる。また、腸内細菌叢改善効果を有する発酵乳などの飲食品に適用できる。さらにビフィズス菌および／または乳酸菌の培地にも適用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明の第１の態様のビフィズス菌および乳酸菌の増殖促進剤は、さつまいも焼酎粕を有効成分として含有する。さつまいも焼酎粕はクエン酸を含み、ｐＨ約３〜４と低いので、ビフィズス菌株、乳酸菌株の増殖至適ｐＨに応じて増殖促進剤のｐＨを調整することが好ましい。例えば水酸化ナトリウムや水酸化カリウムなどで好ましくはｐＨ約６．０〜７．５、より好ましくはｐＨ約６．５〜７．０に調整する。また、さつまいも焼酎粕について遠心分離、ろ過などを行い、固形分を除去し、上清を殺菌して増殖促進剤として用いることが好ましい。
【００１５】
ビフィズス菌は、例えばビフィドバクテリウム・ラクティス（Bifidobacterium lactis）、ビフィドバクテリウム・ロングム（Bifidobacterium longum）、ビフィドバクテリウム・インファンチス(Bifidobacterium infantis)、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Bifidobacterium adolesentis）、ビフィドバクテリウム・ブレーヴェ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）、ビフィドバクテリウム・アニマリス（Bifidobacterium animalis）などが挙げられる。乳酸菌は、例えばラクトコッカス・ラクチス・サブスピシズ・ラクティス（Lactococcus lactis subsp. lactis）、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピシズ・クレモリス（Lactococcus lactis subsp. cremoris）、ストレプトコッカス・サリバリウス・サブスピシズ・サーモフィラス（Streptococcus salivarius subsp. thermophilus）、ロイコノストック・メセントリズ・サブスピシズ・クレモリス（Leuconostoc mesenterides subsp. cremoris）、ラクトバチルス・アシドフィラス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバチルス・カゼイ（Lactobacillus casei）、ラクトバチルス・デルブルギ・サブスピシズ・ブルガリカス（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus）、ラクトバチルス・デルブルギ・サブスピシズ・ラクティス（Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis）、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）、ラクトバチルス・プランタム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）、テトラジェノコッカス・ハロフィルス（Tetragenococcus halophilus）、ペディオコッカス・ペントサセウス（Pediococcus pentosaseus）などが挙げられる。本発明の増殖促進剤を添加すると、無添加の場合よりも短時間でビフィズス菌および乳酸菌の培養、発酵を行うことができる。
【００１６】
いも焼酎およびさつまいも焼酎粕（さつまいも蒸留粕残液ともいう）は、例えば次の工程に従って製造することができる。
【００１７】
１次仕込みに米麹を用いる場合、米を浸漬し吸水させた後、蒸しを行い、冷却後、原料の１０００分の１量の種麹を接種し、十分に攪拌混合し、３５〜４０℃の範囲で送風、攪拌、静置を繰り返して麹を得る（製麹）。麹菌としては、白麹菌、黒麹菌、黄麹菌のいずれでもよく、具体的には、アスペルギルス・カワチ（Aspergillus kawachii）、アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus awamori）、アスペルギルス・サティバ（Aspergillus sativa）などが用いられる。次に、製麹した米麹に米原料重量の１２０％量の水及び焼酎酵母を加える（１次仕込み）。焼酎酵母としては、例えばサッカロマイセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）、キャンディダ・ロブスタ（Candida robusta）などが挙げられる。５日間の発酵を行い、１次醪を得る。次いで、米麹原料の米重量に対して５倍量のサツマイモを使用し、蒸しを行い、冷却後、粉砕機により粉砕したものを、上記１次仕込みにより得られた１次醪に、サツマイモ重量の５４％の水を加えた後、粉砕したサツマイモを加える（２次仕込み）。８日間の発酵を行い、２次醪を得る。上記２段の発酵を終えた２次醪を常法により単式蒸留（常圧または減圧蒸留）に付し、いも焼酎とさつまいも蒸留粕残液（さつまいも焼酎粕）を得る。
【００１８】
本発明の増殖促進剤は、液状のままでもよいし、濃縮してもよく、さらに乾燥処理等を行って固体状、顆粒状または粉末状にしてもよい。
【００１９】
本発明の第２の態様である飲食品は、上記増殖促進剤を含有する。増殖促進剤は、上述のように液状のまま、または濃縮してから、あるいは固体状、顆粒状または粉末状に加工してから食品に含有させてもよい。飲食品中に直接混合してもよいし、飲食品中に埋め込んでもよい。また増殖促進剤を、食品に塗布、被覆、浸透又は吹き付けてもよい。増殖促進剤は、飲食品中に均一に分布していてもよいし、不均一に分布していてもよい。あるいは増殖促進剤は、食品中の特定部位に偏在していてもよい。増殖促進剤を、例えばドリンク剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、散剤等の経口投与可能な形態の製品、例えばサプリメントにしてもよいし、ヨーグルト、乳酸菌飲料、菓子、スナック類、調味類等の各種食品、飲料の形態にしてもよく、特に限定されない。
【００２０】
例えばサプリメントなどの経口投与可能な製品の場合、本発明の増殖促進剤の配合量は、製品の種類、目的、本発明の増殖促進剤が液状、固体状、顆粒状、粉末状等によって調整することができ、製品の全量に対して、例えば１００重量％、９９重量％、９８重量％、９５重量％、９０重量％、８０重量％、７０重量％、６０重量％、５０重量％、４０重量％、３０重量％、２０重量％、１０重量％であるが、これらに限定されない。また、製品に例えば賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、緩衝剤、安定化剤等の添加剤を加えてもよい。そのような添加剤としては、当該分野で一般的に使用されるものを用いればよく、例えば、賦形剤としては乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、硅酸等、結合剤としては水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等、崩壊剤としては乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等、滑沢剤としては精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等、着色剤としてはカラメル色素、パプリカ色素、コチニール色素、インジゴカルミン等、矯味剤としては白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム等、安定化剤としてはトラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。
【００２１】
ヨーグルト、乳酸菌飲料などの場合は、発酵原料として、牛乳、山羊乳、羊乳などの獣乳、それらの部分脱脂乳、脱脂乳、還元乳（濃縮乳、全脂粉乳、脱脂粉乳などに水を添加して戻したもの）などを用いることができる。発酵原料を、保持式により６３℃で３０分加熱殺菌するか、これと同等以上の殺菌効果を有する方法で殺菌する。発酵原料に対してさつまいも焼酎粕を（濃縮処理、乾燥処理をしていない場合）好ましくは３０〜９５重量％、より好ましくは４５〜９０重量％、さらに好ましくは７０〜９０重量％になるように添加する。なお、発酵原料に、副原料として甘味料、寒天、ゼラチン、油脂、生クリーム、果実、フルーツジュース、香料、着色料、安定剤などを添加してもよいし、発酵後にこれらを添加してもよい。
【００２２】
ビフィズス菌および／または乳酸菌のスターター（前培養液）を調製する。スターターを調製するための培地は、例えば上記獣乳、部分脱脂乳、脱脂乳、還元乳などであって、ｐＨ約６．０〜７．５、好ましくはｐＨ約６．５〜７．０のものである。
【００２３】
上記培地を殺菌し、ビフィズス菌および／または乳酸菌を接種し、例えば約３５〜４５℃で好ましくは約４時間〜４８時間、より好ましくは約６時間〜１０時間、培養する。スターターが、好ましくはｐＨ４．０〜５．０、より好ましくはｐＨ４．０〜４．５になるまで培養する。
【００２４】
調製したスターターを、上記さつまいも焼酎粕を添加した発酵原料に対して、乳酸菌スターターならば好ましくは０．５〜１０重量％、より好ましくは１．０〜３．０重量％、ビフィズス菌スターターならば好ましくは１〜３０重量％、より好ましくは５〜１５重量％になるように添加する。例えばヨーグルトならば、約３５〜４５℃で好ましくは約４時間〜１６時間、より好ましくは約４時間〜８時間、培養・発酵を行う。
【００２５】
本発明の第３の態様である培地は、上記増殖促進剤を含有する。該培地は、ビフィズス菌および／または乳酸菌を効率よく増殖することができる。
【００２６】
培地は、例えばＧＡＭブイヨン（ペプトン１．０重量％、ダイズペプトン０．３重量％、プロテオーゼペプトン１．０重量％、消化血清末１．３５重量％、酵母エキス０．５重量％、肉エキス０．２２重量％、カンゾウエキス０．１２重量％、ブドウ糖０．３重量％、リン酸二水素カリウム０．２５重量％、塩化ナトリウム０．３重量％、溶性デンプン０．５重量％、Ｌ−システイン塩酸塩０．０３重量％、チオグリコール酸ナトリウム０．０３重量％を含有する）、ＧＡＭ寒天培地、ビフィズス菌用培地（例えばグルコース１．０重量％、酵母エキス０．５重量％、ビーフエキス０．５重量％、カゼイン・トリプシン加水分解物１．０重量％、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム１．０重量％、Ｌ−システイン０．０５重量％、リン酸水素二カリウム０．３重量％、Ｔｗｅｅｎ ８０ １ｍｌ／Ｌを含有する）、乳酸菌用培地（例えばグルコース１．０重量％、ポリペプトン０．５重量％、酵母エキス０．５重量％、ＮａＣｌ ０．５重量％を含有する）、乳成分主体の培地（例えば１０％還元脱脂乳培地であり、これにペプトン、酵母エキス等を含めてもよい）に、上記増殖促進剤が含有されている。増殖促進剤の含有量は、培地に対して、さつまいも焼酎粕が（濃縮処理、乾燥処理をしていない場合）好ましくは３０〜９５重量％、より好ましくは４５〜９０重量％、さらに好ましくは７０〜９０重量％である。培養するビフィズス菌株、乳酸菌株に合わせて、好ましくはｐＨ約６．０〜７．５、より好ましくはｐＨ約６．５〜７．０に調整する。培養条件は、ビフィズス菌株、乳酸菌株に依存するが、例えば嫌気条件下で３５〜４５℃で培養することが好ましい。
【００２７】
以下、本発明を実施例によって具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
【実施例】
【００２８】
＜材料＞
さつまいも焼酎粕は薩摩酒造株式会社より入手した。さつまいも焼酎粕を３０００ｒｐｍ、４℃で１０分間遠心を行い、上清を水酸化カリウムでｐＨ６．７に調整し、以下の実験に使用した。
【００２９】
乳酸菌スターターのＭＹ８００（Streptococcus thermophilus、Lactobacilus delbrueckii ssp. bulgaricus、およびLactobacillus delbrueckii ssp. lactis）、およびビフィズス菌スターターのＢＢ１２株（Bifidobacterium lactis）とＢ６６株（Bifidobacterium longum）は、クリスチャンハンセン社より購入した。その他のビフィズス菌株（Bifidobacterium longum JCM 1217、Bifidobacterium longum JCM 1222、Bifidobacterium breve JCM 1192、Bifidobacterium breve JCM 7016、Bifidobacterium bifidum JCM 1255、Bifidobacterium infantis JCM 1210、Bifidobacterium animalis JCM 1190、Bifidobacterium adolesentis JCM 1275）は理化学研究所より購入した。
【００３０】
＜乳酸菌（ＭＹ８００）前培養液の調製＞
１０％還元脱脂乳（脱脂粉乳を１０重量％濃度で水に溶解させたもの）を９０℃で５分間加熱殺菌した。小スパーテル１杯の上記ＭＹ８００粉末ダイレクトスターターを添加し、３７℃で８時間培養し、ＭＹ８００前培養液を調製した。
【００３１】
＜ビフィズス菌Ｂ６６株前培養液の調製＞
１重量％Ｐｅｐｔｏｎｅ（Ｂａｃｔｏ社）、１重量％Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ（Ｂａｃｔｏ社）を含む１０％還元脱脂乳培地を調製し、９０℃で５分間加熱殺菌した。ＧＡＭブイヨン培地（日水製薬株式会社）で前培養しておいたＢ６６株を１０重量％となるように添加し、３７℃で８時間培養し、Ｂ６６株前培養液を調製した。
【００３２】
＜ビフィズス菌ＢＢ１２株前培養液の調製＞
１重量％Ｐｅｐｔｏｎｅ（Ｂａｃｔｏ社）、１重量％Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ（Ｂａｃｔｏ社）を含む１０％還元脱脂乳培地を調製し、９０℃で５分間加熱殺菌した。小スパーテル１杯のＢＢ１２粉末ダイレクトスターターを添加し、３７℃で８時間培養し、ＢＢ１２株前培養液を調製した。
【００３３】
〔実施例１〕乳酸菌の生育に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響
さつまいも焼酎粕を４５重量％、９０重量％含む１０％還元脱脂乳、およびさつまいも焼酎粕を含まない１０％還元脱脂乳を調製し、９０℃、５分で殺菌してサンプルとした。上記乳酸菌前培養液をサンプルに３重量％となるように添加し、３７℃で０〜２４時間培養した。ｐＨ、乳酸酸度、乳酸菌数を測定した。ｐＨはＰＨメーター、乳酸酸度は０．１Ｎ ＮａＯＨによる滴定で測定した。乳酸菌数は、ＢＣＰ加プレートカウントアガール培地（日水製薬株式会社）を用い、サンプルを３７℃で７２時間混釈培養し、黄変したコロニーをカウントした。
【００３４】
（結果）
図１に示すように、さつまいも焼酎粕を添加した場合、さつまいも焼酎粕無添加に比べ乳酸菌により生成される乳酸が増加した。さつまいも焼酎粕は乳酸菌による発酵性を高めることが示唆された。また、さつまいも焼酎粕の添加により乳酸発酵によるｐＨの低下が抑制された（図２）。これは、さつまいも焼酎粕には０．７５重量％のクエン酸が含まれており、そのクエン酸の緩衝作用によるものと考えられる。乳酸菌数はさつまいも焼酎粕の添加により高くなる傾向が見られたものの（図３）、有意な差はなかった（図４）。
【００３５】
〔実施例２〕ビフィズス菌の生育に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響
前述のとおり、さつまいも焼酎粕には０．７５重量％のクエン酸が含まれている。クエン酸は乳酸菌およびビフィズス菌の増殖を促進することも報告されているので、９０重量％さつまいも焼酎粕と同等のクエン酸を含むように添加したサンプルについても同時に調べた。
【００３６】
さつまいも焼酎粕を４５重量％、９０重量％含む１０％還元脱脂乳、さつまいも焼酎粕を含まない１０％還元脱脂乳、およびクエン酸３ナトリウムを０．７５重量％含む１０％還元脱脂乳（ｐＨ６．７に調整）を調製し、９０℃、５分で殺菌してサンプルとした。ＢＢ１２株前培養液をサンプルに１０重量％となるように添加し、３７℃で８時間培養した。培養後、ビフィズス菌数を測定した。ビフィズス菌数の測定はＴＯＳプロピオン酸寒天培地（栄研化学株式会社）を用い、サンプルを嫌気条件下、３７℃で７２時間混釈培養し、コロニーをカウントした。
【００３７】
また、サンプルを限外ろ過（分画分子量１００００Ｄａおよび１０００Ｄａ）して、上記と同様にして培養し、ビフィズス菌数を測定した。
【００３８】
（結果）
添加したさつまいも焼酎粕の濃度に依存してビフィズス菌数が有意に増加した（図５）。９０重量％さつまいも焼酎粕を添加した場合、無添加のものに比べ１０倍の増殖効果を示した。しかし、９０重量％さつまいも焼酎粕と同等のクエン酸を添加してもビフィズス菌数に変化はなかったことから、さつまいも焼酎粕のビフィズス菌増殖効果はクエン酸以外の物質である。また、さつまいも焼酎粕を限外ろ過（分画分子量１０００Ｄａ）してもろ液に活性が維持されていることから、さつまいも焼酎粕に含まれるビフィズス菌増殖因子は分子量１０００Ｄａ以下の低分子物質であると考えられる（図６）。
【００３９】
〔実施例３〕ビフィズス菌、乳酸菌の共培養に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響
さつまいも焼酎粕を４５重量％、９０重量％を含む１０％還元脱脂乳、さつまいも焼酎粕を含まない１０％還元脱脂乳、クエン酸３ナトリウムを０．７５重量％含む１０％還元脱脂乳（ｐＨ６．７に調整）を調製し、９０℃、５分で殺菌してサンプルとした。ＢＢ１２株前培養液およびＭＹ８００前培養液を、サンプルにそれぞれ１０重量％および３重量％となるように添加し、３７℃で０〜２４時間培養した。実施例１及び２と同様の方法で、ｐＨ、乳酸酸度、乳酸菌数、ビフィズス菌数を測定した。
【００４０】
また、ＢＢ１２株前培養液をＢ６６株前培養液にした以外は、上記と同様にして培養し、ｐＨ、乳酸酸度、乳酸菌数、ビフィズス菌数を測定した。
【００４１】
（結果）
ＢＢ１２株共存下での乳酸酸度増加量、ｐＨの変化は、乳酸菌のみで発酵させた場合と同じ挙動を示した（図７および図８）。培養８時間後の乳酸菌数はさつまいも焼酎粕を添加しても変化は見られず（図９）、８時間以降も同様であった（図１０）。一方、乳酸菌共存下でのビフィズス菌数（ＢＢ１２株）は添加したさつまいも焼酎粕の濃度に依存して有意に増加した（図１１、図１２）。９０重量％さつまいも焼酎粕を添加し、８時間培養した場合、無添加のものに比べ４倍の増殖効果を示した。
【００４２】
Ｂ６６株共存下での乳酸酸度増加量、ｐＨの変化は、上記ＢＢ１２株共存下の場合と同様であった（図１３および図１４）。また乳酸菌数も大きくかわることはなかった（図１５）。乳酸菌共存下でのＢ６６株のビフィズス菌数は添加したさつまいも焼酎粕の濃度に依存して有意に増加した（図１６）。
【００４３】
〔実施例４〕さつまいも焼酎粕のビフィズス菌増殖効果の選択性
さつまいも焼酎粕を９０重量％含む１０％還元脱脂乳、およびさつまいも焼酎粕を含まない１０％還元脱脂乳を調製し、９０℃、５分で殺菌してサンプルとした。あらかじめ表１に示すビフィズス菌（Bifidobacterium 属）１０株を別々に調製した前培養液（ＢＢ１２株以外の菌株は、すべて上記Ｂ６６株前培養液の調製方法で調製）を、サンプルに１０重量％となるように添加した。３７℃で８時間培養し、実施例２と同様にしてビフィズス菌数を測定した。
【００４４】
（結果）
Bifidobacterium breve、Bifidobacterium bifidum、Bifidobacterium animalisは乳中で増殖が悪く、さつまいも焼酎粕の増殖効果を調べることはできなかった。Bifidobacterium lactis、Bifidobacterium longum、Bifidobacterium infantis、Bifidobacterium adolesentisの６株で増殖促進効果が確認できた。特にBifidobacterium lactisＢＢ１２株では１０倍以上、Bifidobacterium longum Ｂ６６株では２５０倍以上、Bifidobacterium infantis JCM 1210では４５０倍以上、Bifidobacterium adlesentis JCM 1275では１４５倍以上の増殖効果を示した（表１、図１７）。特にBifidobacterium longumおよびBifidobacterium infantisはヒトの腸内で優勢なビフィズス菌である。また、Bifidobacterium lactis およびBifidobacterium longumはビフィズス菌入り発酵乳の製造に幅広く利用されている菌である。
【００４５】
【表１】
【産業上の利用可能性】
【００４６】
さつまいも焼酎粕はビフィズス菌および／または乳酸菌の増殖促進剤として利用でき、腸内細菌叢改善効果を有する発酵乳や飲食品の開発に適用でき、さらにはビフィズス菌および／または乳酸菌の培地にも適用できる。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】乳酸酸度に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図２】乳酸発酵（ｐＨ）に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図３】乳酸菌数に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響（発酵８時間）を示す。
【図４】乳酸菌数に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図５】ビフィズス菌（ＢＢ１２株）の生育に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響（発酵８時間）を示す。
【図６】さつまいも焼酎粕の各限外濾過分画で培養したビフィズス菌数（発酵８時間）を示す。
【図７】ＢＢ１２株共存下での乳酸酸度に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図８】ＢＢ１２株共存下での乳酸発酵（ｐＨ）に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図９】ＢＢ１２株共存下での乳酸菌の生育に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響（発酵８時間）を示す。
【図１０】ＢＢ１２株共存下での乳酸菌数に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図１１】乳酸菌共存下でのビフィズス菌（ＢＢ１２株）の生育に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響（発酵８時間）を示す。
【図１２】乳酸菌共存下でのビフィズス菌（ＢＢ１２株）数に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図１３】Ｂ６６株共存下での乳酸酸度に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図１４】Ｂ６６株共存下での乳酸発酵（ｐＨ）に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図１５】Ｂ６６株共存下での乳酸菌数に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図１６】乳酸菌共存下でのビフィズス菌（Ｂ６６株）数に及ぼすさつまいも焼酎粕の影響を示す。
【図１７】さつまいも焼酎粕のビフィズス菌増殖効果の選択性を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
さつまいも焼酎粕を有効成分として含有するビフィズス菌および乳酸菌の増殖促進剤。
【請求項２】
請求項１に記載の増殖促進剤を含有する飲食品。
【請求項３】
発酵乳である、請求項２に記載の飲食品。
【請求項４】
請求項１に記載の増殖促進剤を含有する培地。
【請求項１】
さつまいも焼酎粕を有効成分として含有するビフィズス菌および乳酸菌の増殖促進剤。
【請求項２】
請求項１に記載の増殖促進剤を含有する飲食品。
【請求項３】
発酵乳である、請求項２に記載の飲食品。
【請求項４】
請求項１に記載の増殖促進剤を含有する培地。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【公開番号】特開２００９−１２５０５５（Ｐ２００９−１２５０５５Ａ）
【公開日】平成２１年６月１１日（２００９．６．１１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−３０６９０９（Ｐ２００７−３０６９０９）
【出願日】平成１９年１１月２８日（２００７．１１．２８）
【出願人】（５０４２５８５２７）国立大学法人 鹿児島大学 (284)
【出願人】（５９３０５０１１６）南日本酪農協同株式会社 (5)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年６月１１日（２００９．６．１１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１１月２８日（２００７．１１．２８）
【出願人】（５０４２５８５２７）国立大学法人 鹿児島大学 (284)
【出願人】（５９３０５０１１６）南日本酪農協同株式会社 (5)
【Ｆターム（参考）】
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