抗体を単離および精製するための方法が本明細書で開示され、アフィニティークロマトグラフィーステップの使用により、医薬的使用のために十分に純粋な抗体組成物がもたらされる。本明細書に記載の方法は、ｐＨのウイルス減少／不活性化、限界濾過／透析濾過、アフィニティークロマトグラフィー、好ましくはプロテインＡアフィニティーイオン交換クロマトグラフィーおよび疎水性クロマトグラフィーを含む。さらに本発明は、１つまたは複数の本発明の抗体を含む医薬組成物に関する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）試料マトリックスをｐＨ低下させ、これによって一次回収試料を形成するステップであり、前記ｐＨの低下が約３から約４であるステップ、
（ｂ）前記一次回収試料を約６．０から約８のｐＨに調整し、続いて前記一次回収試料をアフィニティークロマトグラフィー樹脂に接触させ、アフィニティークロマトグラフィー試料を収集するステップ、
（ｃ）前記アフィニティークロマトグラフィー試料をイオン交換樹脂に接触させ、イオン交換試料を収集するステップ、
（ｄ）前記イオン交換試料を疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）樹脂に接触させ、ＨＩＣ試料を収集するステップであり、前記ＨＩＣ試料が宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）減少型抗体調製物を含むステップと
を含む、抗体および少なくとも１つのＨＣＰを含む試料混合物から前記ＨＣＰ減少型抗体調製物を生成する方法。
【請求項２】
前記ｐＨの低下が、適した酸と前記試料混合物とを混合することによって達成され、前記適した酸が、クエン酸、酢酸、カプリル酸などから成る群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記アフィニティークロマトグラフィー樹脂が、プロテインＡ樹脂である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記プロテインＡ樹脂が、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ（商標）樹脂である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記イオン交換樹脂が、陰イオン交換樹脂または陽イオン交換樹脂のいずれかである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記イオン交換樹脂が陽イオン交換樹脂である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記陽イオン交換樹脂が、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ、カルボキシメチル（ＣＭ）、スルホエチル（ＳＥ）、スルホプロピル（ＳＰ）、リン酸（Ｐ）およびスルホン酸（Ｓ）から成る群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記陽イオン交換樹脂がＦｒａｃｔｏｇｅｌ（商標）ＳＯ_３⁻である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記イオン交換樹脂が陰イオン交換樹脂である、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
前記陰イオン交換樹脂が、Ｑセファロース、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）、４級アミノエチル（ＱＡＥ）および４級アミン（Ｑ）基から成る群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記陰イオン交換樹脂がＱセファロースである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１２】
前記イオン交換ステップが、第１のイオン交換ステップおよび第２のイオン交換ステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＨＩＣが、１つまたは複数の疎水基を含むカラムを用いて達成される、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記１つまたは複数の疎水基が、アルキル基、アリル基およびこれらの組合せから成る群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記カラムが、フェニルセファロース（Ｐｈｅｎｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）６ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗカラム、Ｐｈｅｎｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅカラムなど）、Ｏｃｔｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅカラム、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ（商標）ＥＭＤ Ｐｒｏｐｙｌ、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ（商標）ＥＭＤ Ｐｈｅｎｙｌカラム、Ｍａｃｒｏ−Ｐｒｅｐ（商標）Ｍｅｔｈｙｌ、Ｍａｃｒｏ−Ｐｒｅｐ（商標）ｔ−Ｂｕｔｙｌ Ｓｕｐｐｏｒｔｓ、ＷＰ ＨＩ−Ｐｒｏｐｙｌ（Ｃ_３）（商標）カラムおよびＴｏｙｏｐｅａｒｌ（商標）エーテル、フェニルまたはブチルカラムから成る群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記カラムがフェニルセファロースを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＨＩＣ試料を濾過に供してウイルス粒子を除去し、バッファー交換を促進させる、濾過ステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＨＣＰ減少型抗体調製物が、抗ＩＬ−１２抗体もしくはこの抗原結合部分または抗ＴＮＦα抗体もしくはこの抗原結合部分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＨＣＰ減少型抗体調製物が、抗ＩＬ−１２抗体またはこの抗原結合部分である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＨＣＰ減少型抗体調製物が、抗ＴＮＦα抗体またはこの抗原結合部分である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗ＩＬ−１２抗体またはこの抗原結合部分が、ヒト化抗体、キメラ抗体または多価抗体である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗ＴＮＦα抗体またはこの抗原結合部分が、ヒト化抗体、キメラ抗体または多価抗体である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗ＩＬ−１２抗体またはこの抗原結合部分がヒト化抗体である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗ＴＮＦα抗体またはこの抗原結合部分がヒト化抗体である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記調製物がＨＣＰを実質的に含まない、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
深層濾過をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
請求項１に記載の方法によって生成されるＨＣＰ減少型抗体調製物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項２８】
前記抗体が、抗ＩＬ−１２抗体もしくはこの抗原結合部分または抗ＴＮＦα抗体もしくはこの抗原結合部分である、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記組成物がＨＣＰを実質的に含まない、請求項２７に記載の医薬組成物。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【公表番号】特表２０１２−５０６３８３（Ｐ２０１２−５０６３８３Ａ）
【公表日】平成２４年３月１５日（２０１２．３．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５３２３３２（Ｐ２０１１−５３２３３２）
【出願日】平成２１年１０月２０日（２００９．１０．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０６１３２９
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１４１０３９
【国際公開日】平成２２年１２月９日（２０１０．１２．９）
【出願人】（３９１００８７８８）アボット・ラボラトリーズ (650)
【氏名又は名称原語表記】ＡＢＢＯＴＴ　ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ
【Ｆターム（参考）】