ホウ素含有化合物およびこれを用いたリポソーム
【課題】安定した小胞体を形成し、血中滞留性および生体安全性に優れ、リポソーム膜層に高濃度に取り込まれるホウ素含有化合物ならびにこれを用いたリポソームを提供する。
【解決手段】下記式（１）：
（式中、Ｒ１およびＲ２は同一または異なって、炭素数６〜２４のアルキル基またはアルケニル基を有するカルボニル基を示す。）
で表わされる構造を有する化合物またはその塩。
【解決手段】下記式（１）：
（式中、Ｒ１およびＲ２は同一または異なって、炭素数６〜２４のアルキル基またはアルケニル基を有するカルボニル基を示す。）
で表わされる構造を有する化合物またはその塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌などの標的細胞・組織を認識しホウ素化合物を選択的に集積させることができ、ドラッグキャリアーとして有用なホウ素含有化合物およびこれを用いたリポソームに関する。
【背景技術】
【０００２】
癌の中性子捕捉療法（ＢＮＣＴ）は、ホウ素（ボロン）化合物をがん細胞に集積させ、そこに熱中性子を照射して局所的にがん細胞を破壊する治療法で、その多くはボロカプテイト（ＢＳＨ：ｂｏｒｏｃａｐｔａｔｅ ｓｏｄｉｕｍ）やパラボロノフェニルアラニン（ＢＰＡ：ｐ−ｂｏｒｏｎｏｐｈｅｎｙｌａｌａｉｎｅ）等のボロン化合物をリポソームに内封して行われている。しかし、これらの方法では、ボロン化合物をリポソームに高濃度に内封するという操作が必要であり、効率やコスト面から問題が多いのが実状である。
【０００３】
また、リポソームにボロンを内封するよりもリポソームの脂質二重膜内にボロンを取り込むことにより、腫瘍細胞組織へボロンを選択的に集積させることができ、癌の中性子捕捉療法にとって有効であることが知られている（たとえば、非特許文献１、２参照）。
【０００４】
先に、下記一般式（Ａ）で表されるボロン化合物が小胞体を作り、また膜構成成分の一部として、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）とリポソーム膜を形成することが知られている（たとえば、非特許文献３〜８参照）。しかしながら、小胞の安定性やリポソーム膜層のボロン濃度が十分ではなかった。
【０００５】
【化１】
【０００６】
さらに、リポソームの二分子膜へニドカルボランをホウ素源として導入したホウ素イオンクラスター型脂質が提案されている（たとえば、特許文献１参照）。しかしながら、上記ニドカルボランを用いた場合、人体等の細胞への毒性が問題となりうることが判明した。
【０００７】
【非特許文献１】Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９５，９２，１３６７−１３７０
【非特許文献２】Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９８，９５，２５３１−２５３４
【非特許文献３】Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．１９９３，３２，９５０−９８４
【非特許文献４】Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９８，９８，１５１５−１５６２
【非特許文献５】Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９９，９６，２３８−２４１
【非特許文献６】Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９７，４０，２８２５−２８３０
【非特許文献７】Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．２０００，７３，２３１−２３５
【非特許文献８】Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２０００，４８，１０３４−１０３８
【特許文献１】特開２００５−３４３８５８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
そこで、本発明の目的は、安定した小胞体を形成し、血中滞留性および生体安全性に優れ、リポソーム膜層に高濃度に取り込まれるホウ素含有化合物ならびにこれを用いたリポソームを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記目的を達成すべく、脂質誘導体に着目して鋭意研究を重ねた結果、以下に示すホウ素含有化合物を用いることにより上記目的を達成できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
すなわち、本発明の化合物またはその塩は、下記式（１）：
【化２】
（式中、Ｒ１およびＲ２は同一または異なって、炭素数６〜２４のアルキル基またはアルケニル基を有するカルボニル基を示す。）
で表わされる構造を有することを特徴とする。
【００１１】
また、本発明のリポソームは、上記式（１）で表されるホウ素含有化合物またはその塩を膜構成成分として含有することを特徴とする。
【００１２】
本発明によると、実施例の結果に示すように、上述の特定の含ホウ素化合物（含ホウ素脂質）またはその塩を膜構成成分として用いたリポソームは、そのリポソームの脂質二重膜内に高濃度のボロンが取り込まれ、膜安定性、血中滞留性および生体安全性に優れたものとなる。さらに、上記リポソームは、腫瘍細胞組織へボロンを選択的に集積させることができることから、癌中性子捕捉療法剤として特に有用である。
【００１３】
また、上記膜構成成分には上記化合物または塩とは異なる他の脂質類を含んでいてもよい。また、他の脂質類を含む場合、上記化合物またはその塩と、前記脂質類との含有量の比率が、１：９９〜９９：１であることが好ましい。
【００１４】
さらに、前記膜構成成分がポリアルキレングリコール修飾されていることが好ましい。かかるリポソームを用いることにより、血中滞留性をより確実に向上させることができる。
【００１５】
また、本発明のリポソームにおいては、上記リポソームのホウ素濃度が１〜１００００ｐｐｍとすることができる。
【００１６】
さらに、上記リポソームには薬物等の化合物を適宜内包することができる。特に、このリポソームには抗癌剤や遺伝子類等を内封することもでき、ドラッグキャリアーとしても有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。
【００１８】
本発明の化合物またはその塩は、下記式（１）：
【化３】
（式中、Ｒ１およびＲ２は同一または異なって、炭素数６〜２４のアルキル基またはアルケニル基を有するカルボニル基を示す。）
で表わされる構造を有することを特徴とする。
【００１９】
上記式（１）中、Ｒ１およびＲ２は同一または異なった炭素数６〜２４のアルキル基またはアルケニル基を有するカルボニル基を示すが、炭素数８〜２２のアルキル基またはアルケニル基を有することが好ましく、炭素数１０〜２０のアルキル基またはアルケニル基を有することがより好ましい。また、これらのアルキル基およびアルケニル基は分岐していてもよい。
【００２０】
上記アルキル基またはアルケニル基としては、たとえば、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デシル基、ｎ−ドデシル基、ｎ−テトラデシル基、ｎ−ヘキサデシル基、ｎ−ヘプタデシル基、ｎ−オクタデシル基、オレイル基等があげられる。
【００２１】
また、上記化合物（１）の塩としては、たとえば、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等があげられる。また、これらの塩におけるカチオン種は１種であってもよく、また２種以上を混合して含むものであってもよい。
【００２２】
上記化合物（１）の製造は、公知の合成方法により行なうことができ、特に限定されるものではないが、たとえば下記反応式：
【化４】
（ｉ）Ｂｒｏｍｏａｃｅｔｙｌ ｂｒｏｍｉｄｅ、ｐｙｒｉｄｉｎｅ、ＴＨＦ、ｒｔ、４ｈ、９９．５％；
（ｉｉ）ｃａｔ．ＴｓＯＨ、ＭｅＯＨ、ｒｔ、３０ｍｉｎ、３８％；
（ｉｉｉ）ＲＣＯＯＨ、ｃａｔ．ＤＭＡＰ、ＤＣＣ、ＣＨ２Ｃｌ２、ｒｔ、１６ｈ、６１−７５％
【化５】
（ｉｖ）ＣＨ３ＣＮ、７０−８０ｏＣ、４８ｈ、８５−８７％；
（ｖ）Ｍｅ４ＮＯＨ、ａｃｅｔｏｎｅ、ｒｔ、３０ｍｉｎ、７６−９１％
で示す方法でまず化合物（５）を合成し、次いで化合物（１）を合成する手法などがあげられる。以下、上記合成法における各工程についてより具体的に説明する。
【００２３】
ブロモエステル（３）は、キラルアルコール（２）の水酸基部位をブロモアセチルブロミドと処理して得られる。上記ブロモエステル化は、たとえば、キラルアルコール（２）をＴＨＦ（テトラヒドロフラン）、塩化メチレン、ジエチルエーテル、ＤＭＦ（ジメチルフォルムアミド）、ＤＭＳＯ（ジメチルスルフォキシド）、ジクロロエタンなどの溶媒に溶解し、ピリジン、トリアチルアミン、炭酸セシウム、ジメチルアミノピリジン、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム等の塩基存在下でブロモアセチルブロミドと０〜８０℃で１〜７２時間反応させることにより行うことができる。
【００２４】
ジオール（４）は、ブロモエステル（３）のアセトニドを脱保護して得られる。上記脱保護反応は、たとえば、キラルアルコール（２）をメタノール、エタノール、ＩＰＡ（イソプロパノール）、水、含水ＴＨＦなどの溶媒に溶解し、パラトルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、塩酸、硫酸、酢酸等の酸触媒存在下で０〜８０℃で５分〜７２時間反応させることにより行うことができる。
【００２５】
化合物（５）は、様々な脂肪酸とエステル化反応して得られる。上記エステル化反応は、たとえば、ジオール（４）と脂肪酸を塩化メチレン、ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）、ジエチルエーテル、ＤＭＦ（ジメチルフォルムアミド）、ＤＭＳＯ（ジメチルスルフォキシド）、ジクロロエタンなどの溶媒に溶解し、ＤＭＡＰ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン）、ＤＣＣ（Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド）等の触媒存在下で０〜８０℃で１〜７２時間反応させることにより行うことができる。
【００２６】
上記脂肪酸としては、炭素数６〜２４のアルキル基またはアルケニル基を有するカルボン酸が用いられるが、炭素数８〜２２のアルキル基またはアルケニル基を有するカルボン酸であることが好ましく、炭素数１０〜２０のアルキル基またはアルケニル基を有するカルボン酸であることがより好ましい。また、これらのアルキル基およびアルケニル基は分岐していてもよい。
【００２７】
上記アルキル基またはアルケニル基としては、たとえば、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デシル基、ｎ−ドデシル基、ｎ−テトラデシル基、ｎ−ヘキサデシル基、ｎ−ヘプタデシル基、ｎ−オクタデシル基、オレイル基等があげられる。
【００２８】
上記脂肪酸としては、具体的には、たとえば、ｎ−ヘキサン酸、ｎ−ヘプタン酸、ｎ−オクタン酸（カプリル酸）、ｎ−ノナン酸（ペラルゴン酸）、ｎ−デカン酸（カプリン酸）、ｎ−ドデカン酸（ラウリン酸）、ｎ−テトラデカン酸（ミリスチン酸）、ｎ−ペンタデカン酸（ペンタデシル酸）、ｎ−ヘキサデカン酸（パルミチン酸）、ｎ−ヘプタデカン酸（マルガリン酸）、ｎ−オクタデカン酸（ステアリン酸）、ｎ−ノナデカン酸（ツベルクロステリン酸）、ｎ−イコサン酸（アラキジン酸）、ｎ−ドコサン酸（ベヘン酸）、ｎ−テトラコサン酸（リグノセリン酸）、ｎ−ヘキサコサン酸（セロチン酸）、パルミトレイン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸などがあげられる。これらは単独で使用してもよく、また２種以上を混合して使用してもよい。
【００２９】
化合物（７）は、化合物（５）とＢＳＨ化合物（６）とをカップリング反応して得られる。活性型のＢＳＨ化合物（６）は文献既知の方法（たとえば、Ｇａｂｅｌ，Ｄ．；Ｍｏｌｌｅｒ，Ｄ．；Ｈａｒｆｓｔ，Ｓ．；Ｒｏｓｌｅｒ，Ｊ．；Ｋｅｔｚ，Ｈ．Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９３，３２，２２７６−２２７８．）にしたがい合成できる。また、ホウ素１０エンリッチのＢＳＨ化合物も同様の方法で合成できる。上記カップリング反応は、たとえば、化合物（５）とＢＳＨ化合物（６）をアセトニトリル、ＴＨＦ、プロピオニトリルなどの溶媒に溶解し、室温〜８０℃で還流させ１〜７２時間反応させることにより行うことができる。
【００３０】
本発明のホウ素含有化合物またはその塩（１）は、化合物（７）をテトラメチルアンモニウムヒドロキシドなどと処理してＢＳＨ修飾型ホウ素イオンクラスター脂質である化合物（８）として得られる。上記反応は、たとえば、化合物（７）とテトラメチルアンモニウムヒドロキシドをアセトン、アセトニトリル、プロピオニトリルなどの溶媒に溶解し、０〜５０℃で５分〜２時間反応させることにより行うことができる。
【００３１】
上記各工程における各生成物の単離精製手段は、洗浄、抽出、再結晶法、各種クロマトグラフィー等を適宜組み合せて行なうことができる。
【００３２】
上記各工程におけるより詳細な合成方法は、実施例に記載している。なお、上記反応式において、化合物（２）、ＢＳＨ等の原料化合物はいずれも入手が容易な化合物である。
【００３３】
また、上記メルカプトウンデカハイドロドデカボレート（ＢＳＨ）は、ホウ素、水素およびイオウ原子から成る２０面体のホウ素クラスター構造をとる。ＢＳＨは無機低分子化合物であるにもかかわらず、体積はベンゼン環より大きく、３つのホウ素原子が２つの電子を共有するいわゆるスリーセンターボンド構造をとり、電子が局在化した特異な構造をしている。本発明において、ＢＳＨは下記式（９）、
【化６】
または下記式（１０）
【化７】
で表される。
【００３４】
本発明の化合物（１）またはその塩は、単独で小胞体を形成するが、通常のリポソーム形成性脂質類に加え、リポソームの膜構成成分の一部として用いることもできる。
【００３５】
リポソームの膜構成成分として他の脂質類を含む場合、上記化合物またはその塩と、前記脂質類との含有量の比率が、１：９９〜９９：１であることが好ましく、５：９５〜７５：２５であることがより好ましく、１０：９０〜５０：５０であることがさらに好ましい。
【００３６】
ここで、化合物（１）の他に、リポソームの膜構成成分として用いられる脂質類としては、たとえば、リン脂質、グリセロ糖脂質およびスフィンゴ糖脂質の他、これらの脂質に、１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基または第４級アンモニウム基が導入されたカチオン性脂質、これらの脂質にポリアルキレングリコールが導入された脂質、さらに各種細胞、組織等に対するリガンドが結合した脂質類があげられる。これらの脂質類は単独で使用してもよく、また２種以上を混合して使用してもよい。
【００３７】
リン脂質としては、たとえば、ホスファチジルコリン（大豆ホスファチジルコリン、卵黄ホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン等）、ホスファチジルエタノールアミン（ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン等）、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、卵黄レシチン、大豆レシチン、水素添加リン脂質等の天然または合成のリン脂質等があげられる。
【００３８】
グリセロ糖脂質としては、たとえば、スルホキシリボシルグリセリド、ジグリコシルジグリセリド、ジガラクトシルジグリセリド、ガラクトシルジグリセリド、グリコシルジグリセリド等があげられる。
【００３９】
スフィンゴ糖脂質としては、たとえばガラクトシルセレブロシド、ラクトシルセレブロシド、ガングリオシド等があげられる。
【００４０】
カチオン性脂質としては、たとえば、上記リン脂質、グリセロ糖脂質またはスフィンゴ糖脂質に、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、トリアルキルアンモニウム基、モノアシルオキシアルキル−ジアルキルアンモニウム基、ジアシルオキシアルキル−モノアルキルアンモニウム基等の第４級アンモニウム基が導入された脂質があげられる。
【００４１】
さらに、前記膜構成成分がポリアルキレングリコール修飾されていることが好ましい。かかるリポソームを用いることにより、血中滞留性をより確実に向上させることができる。
【００４２】
また、ポリアルキレングリコール修飾脂質としては、たとえば、上記リン脂質、グリセロ糖脂質、スフィンゴ糖脂質に、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール等が修飾した脂質、たとえばジ−Ｃ１２−２４アシル−グリセロール−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−ＰＥＧ等があげられる。
【００４３】
さらに、必要に応じて、膜安定化剤として、たとえば、コレステロール類、抗酸化剤としてトコフェロール類、ステアリルアミン、ジセチルホスフェート、ガレグリオシドを用いてもよい。
【００４４】
リポソームの製造には、公知のリポソームの調製方法を適用することができる。リポソームの調整方法としては、たとえば、バンガム（Ｂａｎｇｈａｍ）らのリポソーム調製法［ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．），１３，２３８（１９６５）］、エタノール注入法［ジャーナル・オブ・セル・バイオロジー（Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．），６６，６２１（１９７５）］、フレンチプレス法［フェブス・レター（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．），９９，２１０（１９７９）］、凍結融解法［アーカイブス・オブ・バイオケミストリー・アンド・バイオフィジックス（Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．），２１２，１８６（１９８１）］、逆相蒸発法［プロシーディング・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・ユー・エス・エー（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ），７５，４１９４（１９７８）］等があげられる。
【００４５】
また、本発明のリポソームにおいては、上記リポソームのホウ素濃度が１〜１００００ｐｐｍとすることができるが、５０〜５００ｐｐｍとすることが好ましい。
【００４６】
また、標的細胞、標的組織、標的病巣に対するリガンドとしては、トランスフェリン、葉酸、ヒアルロン酸、ガラクトース、マンノースなどの癌細胞に対するリガンド等があげられる。また、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体もリガンドとして使用できる。
【００４７】
本発明のリポソームは、安定で、整体安全性に優れ、かつリポソーム膜上高濃度にボランを含有しているので、癌中性子捕捉療法剤として使用できる。また、本発明のリポソームの内部には、抗癌剤や遺伝子類等の薬物を含有させることもできる。これらの薬物を含有するリポソームは、化学療法剤としても、また癌中性子捕捉療法剤としても適宜使用できる。
【実施例】
【００４８】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明する。当業者は本明細書の記載に基づいて容易に本発明に修飾、変更を加えることができ、それらは本発明の技術的範囲に含まれる。
【００４９】
下記実施例において、化合物の分析および分離精製には以下の機種を用いて行った。
・ＮＭＲスペクトル：ＶＡＲＩＡＮ社製、ＵＮＩＴＹ−ＩＮＯＶＡ４００、４００ＭＨｚ。特に明記しない限り、内部標準としてＴＭＳを用いた。また、下記ケミカルシフトはδ値で示した。
・カラムクロマトグラフィー：Ｍｅｒｃｋ社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ７０−２３０ｍｅｓｈ。
・マススペクトル：エレクトロンスプレーイオン化（ＥＳＩ）法により測定した。島津製作所社製、ＬＣＭＳ−２０１０ＥＶ。
・ＩＲスペクトル：島津製作所社製、ＦＴＩＲ−８２００Ａ。
・ホウ素濃度測定：ＩＣＰ−ＡＥＳ（誘導結合プラズマ発光分光分析）により測定した。堀場製作所社製、ＵＬＴＩＭＡ２。
【００５０】
〔実施例１〕
（化合物（３）の合成）
（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール（０．１２ｍＬ、１０．０ｍｍｏｌ）とピリジン（０．９７ｍＬ、１．２ｅｑｉｖ）をＴＨＦ５０ｍＬに加えて撹拌した溶液に、ブロモアセチルブロミド（１．０４ｍＬ、１．２ｅｑｉｖ）を０ｏＣかで加えた。３０分間反応温度を０℃に保ち、次いで反応混合物を室温までゆっくり暖めた。その後さらに４時間撹拌した後、セライトによるろ過で固体を除去し、ろ液を減圧下で濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）で生成物である化合物（３）を精製した。生成物は無色の液状で、収率は９９．５％であった。
・ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．８３（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）。
・１Ｈ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：１．３８（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、１．４５（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．７８（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝８．４Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．０Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、３．８９（ｓ、２Ｈ、ＣＨ２Ｂｒ）、４．１０（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝８．４Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．４Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、４．１９（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．４Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．４Ｈｚ、ＣＨＣＨ２ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ）、４．２６（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．４Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．８Ｈｚ、ＣＨＣＨ２ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ）、４．３３−４．３８（ｍ、１Ｈ、ＣＨ）。
・１３Ｃ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：２５．３、２６．６、３２．２、６６．０、７３．２、９９．９、１６７．０。
【００５１】
〔実施例２〕
（化合物（４）の合成）
化合物（３）（２．５３ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）をメタノール２０ｍｌに溶かし、得られたメタノール溶液に触媒量のｐ−トルエンスルホン酸（０．１７ｇ、０．１ｅｑｕｉｖ）を添加した。この反応混合物を室温下で３０分間撹拌した。得られた溶液を乾燥するまで濃縮し、残渣を塩化メチレンに溶解した。無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、セライトでろ過した後、ろ液を減圧下で濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝２：１）で生成物である化合物（４）を精製した。生成物は無色の液状で、収率は３８％であった。
・ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．４７（酢酸エチル：ヘキサン＝２：１）。
・１Ｈ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：３．６５（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．２Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．０Ｈｚ、ＨＯＣＨ２ＣＨ）、３．７５（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．２Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．０Ｈｚ、ＨＯＣＨ２ＣＨ）、３．８８（ｓ、２Ｈ、ＣＨ２Ｂｒ）、３．９７−４．０３（ｍ、１Ｈ、ＣＨ）、４．２５（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．４Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．４Ｈｚ、ＣＨＣＨ２ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ）、４．３１（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．４Ｈｚ、ＣＨＣＨ２ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ）。
・１３Ｃ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：２５．８、６３．１、６６．６、６９．７、１６７．７。
【００５２】
〔実施例３〕
（化合物（５）の合成）
化合物（４）である３−Ｏ−ブロモアセチル−ｓｎ−グリセロール（０．６４ｇ、３．０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．０７ｇ、０．２ｅｑｕｉｖ）を乾燥した塩化メチレン５０ｍｌに添加し、その溶液を０℃下で撹拌した。次いでその溶液にＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（１．３６ｇ、２．２ｅｑｕｉｖ）とカルボン酸（２．２ｅｑｕｉｖ）を加え、得られた懸濁液を室温下で１２時間撹拌した。セライトによるろ過で固体を除去し、ろ液を減圧下で濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（展開溶液は各条件にて）で生成物である化合物（５）を精製した。
【００５３】
（化合物（５ａ）：３−Ｏ−ブロモアセチル−１，２−Ｏ−ジミリストリル−ｓｎ−３−グリセロールの合成）
化合物（５ａ）はカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２０）により精製した。化合物（５ａ）は白色粉体で、収率は６１％であった。
・ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１５（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２０）。
・１Ｈ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：０．８８（ｔ、６Ｈ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．４Ｈｚ、ＣＨ３）、１．２６（ｓ、４０Ｈ、ＣＨ２）、１．５９−１．６３（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、２．３２（ｔｄ、４Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝８．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．０Ｈｚ、ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、３．８４（ｓ、２Ｈ、ＣＨ２Ｂｒ）、４．１７（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．８Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．０Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、４．２６（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．０Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、４．３１（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．４Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、４．４１（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．８Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．４Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、５．２７−５．３４（ｍ、１Ｈ、ＣＨ）。
・１３Ｃ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：１４．１、２２．７、２４．８、２５．２、２９．０、２９．１、２９．２、２９．４、２９．５、２９．６、２９．７、３１．９、３３．９、３４．０、６１．８、６３．９、７１．２、１６６．８、１７２．９、１７３．２。
【００５４】
（化合物（５ｂ）：３−Ｏ−ブロモアセチル−１，２−Ｏ−ジパルミトイル−ｓｎ−３−グリセロールの合成）
化合物（５ｂ）はカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２０）により精製した。化合物（５ｂ）は白色粉体で、収率は７３％であった。
・ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１５（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２０）。
・１Ｈ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：０．８８（ｔ、６Ｈ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．８Ｈｚ、ＣＨ３）、１．２６（ｓ、４８Ｈ、ＣＨ２）、１．６１−１．６３（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、２．３２（ｔｄ、４Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝７．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．０Ｈｚ、ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、３．８４（ｓ、２Ｈ、ＣＨ２Ｂｒ）、４．１７（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．０Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、４．２６（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．０Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、４．３１（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｈ＝４．４Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、４．４１（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．８Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．４Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、５．２７−５．３２（ｍ、１Ｈ、ＣＨ）。
・１３Ｃ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：１４．１、２２．７、２４．８、２５．２、２９．０、２９．１、２９．２、２９．４、２９．５、２９．６、２９．７、３１．９、３３．９、３４．０、３４．１、６１．８、６３．９、７１．２、１６６．８、１７２．９、１７３．２。
【００５５】
（化合物（５ｃ）：３−Ｏ−ブロモアセチル−１，２−Ｏ−ジステアロイル−ｓｎ−３−グリセロールの合成）
化合物（５ｃ）はカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２０）により精製した。化合物（５ｃ）は白色粉体で、収率は７５％であった。
・ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１５（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２０）。
・１Ｈ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：０．８８（ｔ、６Ｈ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．８Ｈｚ、ＣＨ３）、１．２６（ｓ、５６Ｈ、ＣＨ２）、１．５８−１．６５（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、２．３２（ｔｄ、４Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝７．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｈ＝４．０Ｈｚ、ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、３．８４（ｓ、２Ｈ、ＣＨ２Ｂｒ）、４．１７（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．８Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．０Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、４．２６（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．０Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、４．３１（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．４Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、４．４１（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．０Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、５．２７−５．３２（ｍ、１Ｈ、ＣＨ）。
・１３Ｃ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：１４．１、２２．７、２４．８、２５．２、２９．０、２９．１、２９．２、２９．３、２９．４、２９．５、２９．６、２９．７、３１．９、３３．９、３４．０、３４．１、６１．８、６３．９、６８．５、１６６．８、１７２．８、１７３．２。
【００５６】
〔実施例４〕
（化合物（７）の合成）
ホウ素１０エンリッチのＢ１２Ｈ１１ＳＣＨ２ＣＨ２ＣＮ・２ＴＭＡ（２−シアノエチルチオウンデカヒドロドデカボレート・ジテトラメチルアンモニウム）（６）（３００ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）を乾燥したアセトニトリル７０ｍｌに加えて得た溶液を室温下で撹拌し、上記溶液に粉末状の３−Ｏ−ブロモアセチル−１，２−Ｏ−ジアシル−ｓｎ−３−グリセロール（５）（１．２ｅｑｕｉｖ）を加えた。次いで得られた懸濁液を７０℃で１日撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（展開溶液は各条件にて）で生成物である化合物（７）を精製した。
【００５７】
（化合物（７ａ）：３−Ｏ−１０Ｂ１２Ｈ１１Ｓ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＮ）−アセチル−１，２−Ｏ−ジミリストリル−ｓｎ−３−グリセロール・テトラエチルアンモニウム塩の合成）
化合物（７ａ）はカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝５：１）により精製した。化合物（７ａ）は白色粉体で、収率は７５％であった。
・ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．６５（酢酸エチル：ヘキサン＝５：１）。
【００５８】
（化合物（７ｂ）：３−Ｏ−１０Ｂ１２Ｈ１１Ｓ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＮ）−アセチル−１，２−Ｏ−ジパルミトリル−ｓｎ−３−グリセロール・テトラエチルアンモニウム塩の合成）
化合物（７ｂ）はカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝５：１）により精製した。化合物（７ｂ）は白色粉体で、収率は７８％であった。
・ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．６７（酢酸エチル：ヘキサン＝５：１）。
【００５９】
（化合物（７ｃ）：３−Ｏ−１０Ｂ１２Ｈ１１Ｓ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＮ）−アセチル−１，２−Ｏ−ジステアロイル−ｓｎ−３−グリセロール・テトラエチルアンモニウム塩の合成）
化合物（７ｃ）はカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝５：１）により精製した。化合物（７ｃ）は白色粉体で、収率は８５％であった。
・ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．６８（酢酸エチル：ヘキサン＝５：１）。
【００６０】
〔実施例５〕
（化合物（８）の合成）
化合物（７）を室温下で最小量のアセトンに溶解した。次いでテトラメチルアンモニウムヒドロキシドのメタノール溶液（２５重量％）を当量になるように加えた。化合物（８）を再沈殿させ、ろ別し、乾燥したアセトンで数回洗浄し、減圧下で乾燥した。
【００６１】
（化合物（８ａ）：３−Ｏ−１０Ｂ１２Ｈ１１Ｓ−アセチル−１，２−Ｏ−ジミリストリル−ｓｎ−３−グリセロール・２テトラエチルアンモニウム塩の合成）
化合物（８ａ）は白色粉体で、収率は７６％であった。
・ＭＳ（ＥＳＩ、ｎｅｇａｔｉｖｅ）：（Ｍ−／２＝３５８．５）。
・Ｍｐ：２２８−２３０℃。
・ＩＲ（ＫＢｒ ｐｅｌｌｅｔ、ｃｍ−１）：ν（Ｃ＝Ｏ）１７３４、ν（Ｂ−Ｈ）２４９６、ν（Ｃ−Ｈ）２８５３、２９２２、２９５７。
・１Ｈ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤ３ＣＮ）δ：０．８８（ｔ、６Ｈ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．８Ｈｚ、ＣＨ３）、１．２７（ｓ、４０Ｈ、ＣＨ２）、１．５２−１．６２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、１．９４（ｔｄ、４Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝３．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝２．４Ｈｚ、ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、２．２７（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝６．４Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝２．８Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、２．３１（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝７．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝２．８Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、３．０９（ｓ、２４Ｈ、ＮＣＨ３）、３．１６（ｓ、２Ｈ、ＣＨ２Ｂｒ）、４．１３（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１０．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．４Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、４．２９（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝３．６Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、５．１８−５．２２（ｍ、１Ｈ、ＣＨ）。
・１３Ｃ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤ３ＣＮ）δ：１４．１、２３．１、２５．４、２９．５、２９．７、２９．８、３０．０、３０．１、３２．４、３４．４、３５．４、５５．９、５６．０、５６．１、６２．６、６２．８、６９．７、１７３．４、１７３．５、１７３．７。
【００６２】
（化合物（８ｂ）：３−Ｏ−１０Ｂ１２Ｈ１１Ｓ−アセチル−１，２−Ｏ−ジパルミトイル−ｓｎ−３−グリセロール・２テトラエチルアンモニウム塩の合成）
化合物（８ｂ）は白色粉体で、収率は８１％であった。
・ＭＳ（ＥＳＩ、ｎｅｇａｔｉｖｅ）：（Ｍ−／２＝３８６．４）。
・Ｍｐ：２１９−２２１℃。
・ＩＲ（ＫＢｒ ｐｅｌｌｅｔ、ｃｍ−１）：ν（Ｃ＝Ｏ）１７３６、ν（Ｂ−Ｈ）２４９４、ν（Ｃ−Ｈ）２８５１、２９２０、２９５７。
・１Ｈ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤ３ＣＮ）δ：０．８８（ｔ、６Ｈ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．８Ｈｚ、ＣＨ３）、１．２７（ｓ、４８Ｈ、ＣＨ２）、１．４９−１．６１（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、１．９４（ｔｄ、４Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝３．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝２．４Ｈｚ、ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、２．２７（ｄｄ、４Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝７．４Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝２．８Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、２．３０（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝７．４Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝２．８Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、３．１０（ｓ、２４Ｈ、ＮＣＨ３）、３．１７（ｓ、２Ｈ、ＣＨ２Ｂｒ）、４．１３（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．８Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、４．２９（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．２Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝３．６Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、５．１７−５．２２（ｍ、１Ｈ、ＣＨ）。
・１３Ｃ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤ３ＣＮ）δ：１４．１、２３．１、２５．４、２９．４、２９．５、２９．７、２９．８、３０．０、３０．１、３２．４、３４．５、３５．４、５５．９、５６．０、５６．１、６２．６、６２．８、６９．７、１７３．４、１７３．５、１７３．７。
【００６３】
（化合物（８ｃ）：３−Ｏ−１０Ｂ１２Ｈ１１Ｓ−アセチル−１，２−Ｏ−ジステアロイル−ｓｎ−３−グリセロール・２テトラエチルアンモニウム塩の合成）
化合物（８ｃ）は白色粉体で、収率は９１％であった。
・ＭＳ（ＥＳＩ、ｎｅｇａｔｉｖｅ）：（Ｍ−／２＝４１４．６）。
・Ｍｐ：２１５−２１７℃。
・ＩＲ（ＫＢｒ ｐｅｌｌｅｔ、ｃｍ−１）：ν（Ｃ＝Ｏ）１７３６、ν（Ｂ−Ｈ）２４９４、ν（Ｃ−Ｈ）２８５１、２９２０、２９５７。
・１Ｈ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤ３ＣＮ）δ：０．８８（ｔ、６Ｈ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．８Ｈｚ、ＣＨ３）、１．２７（ｓ、５６Ｈ、ＣＨ２）、１．５２−１．６１（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、１．９４（ｔｄ、４Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝３．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝２．４Ｈｚ、ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、２．２７（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝５．２Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝２．４Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、２．３１（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝７．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝２．８Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、３．０９（ｓ、２４Ｈ、ＮＣＨ３）、３．１６（ｓ、２Ｈ、ＣＨ２Ｂｒ）、４．１３（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．４Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、４．２９（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．２Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝３．６Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、５．１６−５．２４（ｍ、１Ｈ、ＣＨ）。
・１３Ｃ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤ３ＣＮ）δ：１３．２、２２．２、２８．６、２８．７、２８．８、２８．９、２９．０、３１．５、３３．５、３３．６、５５．０、５５．１、５５．２、６１．６、６１．７、６１．９、６８．８、１７２．５、１７２．６、１７２．９。
【００６４】
〔実施例６〕
（ＢＳＨ修飾型ホウ素イオンクラスターリポソームの合成）
ＤＳＰＣ（ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｒｉｎｅ；ＣＯＡＴＳＯＭＥ ＭＣ−８０８０）、コレステロール、合成したＢＳＨ修飾型ホウ素イオンクラスター脂質（８ａ）を１：１−Ｘ：Ｘ（Ｘ＝０、０．２５、０．５、０．７５、１）の比率で調整し、これら脂質を、クロロホルムとジイソプロピルエーテルの１：１溶液２ｍＬに溶かした。カルセインを加え、得られたエマルジョンを１分間超音波に通した後、減圧下有機溶媒を溜去した。
【００６５】
得られた脂質ゲルをエクストルーダーを用いて１００ｎｍのポリカーボネート膜を通してサイズを整え、超遠心（２００，０００ｘｇ）２０分で精製し、ＰＢＳ ｂｕｆｆｅｒに加え懸濁溶液とした。エクストルーダーによるサイジング前とサイジング後の粒形分布図を示す（図１〜図２）。
【００６６】
粒形分布図（図１〜２）から分かるように、Ｘ＝０．２５、０．５ではサイジング前で２００〜５００ｎｍでリポソームが形成されており、Ｘ＝０．７５では１００ｎｍと５００ｎｍ、Ｘ＝１では１００ｎｍと８００ｎｍに粒子系の極大分布が見られた。サイジング後にはすべてにおいて１００ｎｍに粒子形が整っていることが分かる。なお、ピークトップの値は、Ｘ＝０．２５の場合は１１５ｎｍ、Ｘ＝０．５の場合は１１４ｎｍ、Ｘ＝０．７５の場合は１１４ｎｍ、Ｘ＝１の場合は１１９ｎｍであった。また、ピークの幅（分布幅）は、Ｘ＝０．２５の場合は４２．１ｎｍ、Ｘ＝０．５の場合は３２．１ｎｍ、Ｘ＝０．７５の場合は４０．５ｎｍ、Ｘ＝１の場合は３７．８ｎｍであった。
【００６７】
〔実施例７〕
（ＢＳＨ修飾型ホウ素イオンクラスターリポソームの安定性試験）
上記実施例で合成したカルセイン封入ホウ素クラスターリポソームの安定性を調べた。血液中での安定性を調べるためのモデル実験として、血清中における封入されたカルセインの蛍光強度の変化を観測した。血清中に上で得られたカルセイン封入ホウ素クラスターリポソーム溶液を体積比で血清／ベシクル溶液＝９／１になるように加え、３７℃でマグネチックスターラーを用いて攪拌し、０〜２４時間で各時間における蛍光強度（日本分光社製、Ｖ−５５０、測定条件；励起波長＝４９０ｎｍ、蛍光測定波長＝５１３ｎｍ）を測定した（図３〜４、◆プロット）。また、各時間におけるベシクル溶液の蛍光強度を測定後、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００でベシクルを破壊し、ベシクルからリリースされたカルセインの蛍光強度を同時に測定した（図３〜４、■プロット）。
【００６８】
これらの結果から、ＢＳＨ修飾型ホウ素イオンクラスター（８ａ）から調整したリポソームはすべての組成比（Ｘ＝０〜１）においてリポソームは血清中で安定であることが分かった。また、各組成比のリポソームにおけるカルセインの封入量に関して比較すると、図５に示すようにＢＳＨ修飾型ホウ素イオンクラスター（８ａ）が２５％（Ｘ＝０．２５）、５０％（Ｘ＝０．５）含むもので高い封入率が得られることが分かった。
【００６９】
〔実施例７〕
（ＰＥＧ修飾型ホウ素イオンクラスターリポソームの合成）
マクロファージからの貪食から逃れ高い血中滞留性を維持することは、ＥＰＲ効果をあげる上で、リポソームを用いたドラッグデリバリーには重要である。この目的のため、ＰＥＧ修飾型リポソームを合成し、その細胞成長阻害について調べた。
【００７０】
ＤＭＰＣ（ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｒｉｎｅ）、コレステロール、合成したＢＳＨ修飾型ホウ素イオンクラスター（８ｂ）、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＯＭｅ（ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ−ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ−ＯＭｅ；ＤＳＰＥ−０２０Ｃ）、を１：１−Ｘ：Ｘ：０．１１（Ｘ＝０、０．２５、０．５）の比率で調整し、エクストルーダーでサイジング後、得られたホウ素クラスターリポソームをＰＢＳ ｂｕｆｆｅｒに懸濁した。得られたリポソーム溶液をＩＣＰ−ＡＥＳでそのホウ素濃度を測定したところ、それぞれ２００ｐｐｍ（Ｘ＝０．２５；理論値４１０ｐｐｍ）、３００ｐｐｍ（Ｘ＝０．５；理論値７８０ｐｐｍ）であった。
【００７１】
このリポソーム溶液が最高１０％になるように細胞培地を調整した後、順次希釈し９６ウェルディッシュにｃｏｌｏｎ２６細胞に７２時間接触させ、細胞増殖阻害を検討した。その結果を図６に示す。なお、図６にはｎ＝４の結果（ＢＬ２５％：ＢＬ２５−１〜４）と対照（ｃｏｎｔｒｏｌ：ＢＬ０％（Ｘ＝０）のリポソーム）の結果を記載している。ホウ素クラスターリポソーム（Ｘ＝０．２５）は、ホウ素濃度２０ｐｐｍの濃度で、ほとんど細胞毒性を示さなかった。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】本発明のリポソームの粒径分布図。
【図２】本発明のリポソームの粒径分布図。
【図３】本発明のリポソームを用いたベシクル溶液の蛍光強度のグラフ。
【図４】本発明のリポソームを用いたベシクル溶液の蛍光強度のグラフ。
【図５】本発明のリポソームを用いたベシクル溶液の蛍光強度のグラフ。
【図６】本発明のリポソームを用いた細胞増殖阻害に関するグラフ。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌などの標的細胞・組織を認識しホウ素化合物を選択的に集積させることができ、ドラッグキャリアーとして有用なホウ素含有化合物およびこれを用いたリポソームに関する。
【背景技術】
【０００２】
癌の中性子捕捉療法（ＢＮＣＴ）は、ホウ素（ボロン）化合物をがん細胞に集積させ、そこに熱中性子を照射して局所的にがん細胞を破壊する治療法で、その多くはボロカプテイト（ＢＳＨ：ｂｏｒｏｃａｐｔａｔｅ ｓｏｄｉｕｍ）やパラボロノフェニルアラニン（ＢＰＡ：ｐ−ｂｏｒｏｎｏｐｈｅｎｙｌａｌａｉｎｅ）等のボロン化合物をリポソームに内封して行われている。しかし、これらの方法では、ボロン化合物をリポソームに高濃度に内封するという操作が必要であり、効率やコスト面から問題が多いのが実状である。
【０００３】
また、リポソームにボロンを内封するよりもリポソームの脂質二重膜内にボロンを取り込むことにより、腫瘍細胞組織へボロンを選択的に集積させることができ、癌の中性子捕捉療法にとって有効であることが知られている（たとえば、非特許文献１、２参照）。
【０００４】
先に、下記一般式（Ａ）で表されるボロン化合物が小胞体を作り、また膜構成成分の一部として、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）とリポソーム膜を形成することが知られている（たとえば、非特許文献３〜８参照）。しかしながら、小胞の安定性やリポソーム膜層のボロン濃度が十分ではなかった。
【０００５】
【化１】
【０００６】
さらに、リポソームの二分子膜へニドカルボランをホウ素源として導入したホウ素イオンクラスター型脂質が提案されている（たとえば、特許文献１参照）。しかしながら、上記ニドカルボランを用いた場合、人体等の細胞への毒性が問題となりうることが判明した。
【０００７】
【非特許文献１】Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９５，９２，１３６７−１３７０
【非特許文献２】Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９８，９５，２５３１−２５３４
【非特許文献３】Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．１９９３，３２，９５０−９８４
【非特許文献４】Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９８，９８，１５１５−１５６２
【非特許文献５】Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９９，９６，２３８−２４１
【非特許文献６】Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９７，４０，２８２５−２８３０
【非特許文献７】Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．２０００，７３，２３１−２３５
【非特許文献８】Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２０００，４８，１０３４−１０３８
【特許文献１】特開２００５−３４３８５８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
そこで、本発明の目的は、安定した小胞体を形成し、血中滞留性および生体安全性に優れ、リポソーム膜層に高濃度に取り込まれるホウ素含有化合物ならびにこれを用いたリポソームを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記目的を達成すべく、脂質誘導体に着目して鋭意研究を重ねた結果、以下に示すホウ素含有化合物を用いることにより上記目的を達成できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
すなわち、本発明の化合物またはその塩は、下記式（１）：
【化２】
（式中、Ｒ１およびＲ２は同一または異なって、炭素数６〜２４のアルキル基またはアルケニル基を有するカルボニル基を示す。）
で表わされる構造を有することを特徴とする。
【００１１】
また、本発明のリポソームは、上記式（１）で表されるホウ素含有化合物またはその塩を膜構成成分として含有することを特徴とする。
【００１２】
本発明によると、実施例の結果に示すように、上述の特定の含ホウ素化合物（含ホウ素脂質）またはその塩を膜構成成分として用いたリポソームは、そのリポソームの脂質二重膜内に高濃度のボロンが取り込まれ、膜安定性、血中滞留性および生体安全性に優れたものとなる。さらに、上記リポソームは、腫瘍細胞組織へボロンを選択的に集積させることができることから、癌中性子捕捉療法剤として特に有用である。
【００１３】
また、上記膜構成成分には上記化合物または塩とは異なる他の脂質類を含んでいてもよい。また、他の脂質類を含む場合、上記化合物またはその塩と、前記脂質類との含有量の比率が、１：９９〜９９：１であることが好ましい。
【００１４】
さらに、前記膜構成成分がポリアルキレングリコール修飾されていることが好ましい。かかるリポソームを用いることにより、血中滞留性をより確実に向上させることができる。
【００１５】
また、本発明のリポソームにおいては、上記リポソームのホウ素濃度が１〜１００００ｐｐｍとすることができる。
【００１６】
さらに、上記リポソームには薬物等の化合物を適宜内包することができる。特に、このリポソームには抗癌剤や遺伝子類等を内封することもでき、ドラッグキャリアーとしても有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。
【００１８】
本発明の化合物またはその塩は、下記式（１）：
【化３】
（式中、Ｒ１およびＲ２は同一または異なって、炭素数６〜２４のアルキル基またはアルケニル基を有するカルボニル基を示す。）
で表わされる構造を有することを特徴とする。
【００１９】
上記式（１）中、Ｒ１およびＲ２は同一または異なった炭素数６〜２４のアルキル基またはアルケニル基を有するカルボニル基を示すが、炭素数８〜２２のアルキル基またはアルケニル基を有することが好ましく、炭素数１０〜２０のアルキル基またはアルケニル基を有することがより好ましい。また、これらのアルキル基およびアルケニル基は分岐していてもよい。
【００２０】
上記アルキル基またはアルケニル基としては、たとえば、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デシル基、ｎ−ドデシル基、ｎ−テトラデシル基、ｎ−ヘキサデシル基、ｎ−ヘプタデシル基、ｎ−オクタデシル基、オレイル基等があげられる。
【００２１】
また、上記化合物（１）の塩としては、たとえば、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等があげられる。また、これらの塩におけるカチオン種は１種であってもよく、また２種以上を混合して含むものであってもよい。
【００２２】
上記化合物（１）の製造は、公知の合成方法により行なうことができ、特に限定されるものではないが、たとえば下記反応式：
【化４】
（ｉ）Ｂｒｏｍｏａｃｅｔｙｌ ｂｒｏｍｉｄｅ、ｐｙｒｉｄｉｎｅ、ＴＨＦ、ｒｔ、４ｈ、９９．５％；
（ｉｉ）ｃａｔ．ＴｓＯＨ、ＭｅＯＨ、ｒｔ、３０ｍｉｎ、３８％；
（ｉｉｉ）ＲＣＯＯＨ、ｃａｔ．ＤＭＡＰ、ＤＣＣ、ＣＨ２Ｃｌ２、ｒｔ、１６ｈ、６１−７５％
【化５】
（ｉｖ）ＣＨ３ＣＮ、７０−８０ｏＣ、４８ｈ、８５−８７％；
（ｖ）Ｍｅ４ＮＯＨ、ａｃｅｔｏｎｅ、ｒｔ、３０ｍｉｎ、７６−９１％
で示す方法でまず化合物（５）を合成し、次いで化合物（１）を合成する手法などがあげられる。以下、上記合成法における各工程についてより具体的に説明する。
【００２３】
ブロモエステル（３）は、キラルアルコール（２）の水酸基部位をブロモアセチルブロミドと処理して得られる。上記ブロモエステル化は、たとえば、キラルアルコール（２）をＴＨＦ（テトラヒドロフラン）、塩化メチレン、ジエチルエーテル、ＤＭＦ（ジメチルフォルムアミド）、ＤＭＳＯ（ジメチルスルフォキシド）、ジクロロエタンなどの溶媒に溶解し、ピリジン、トリアチルアミン、炭酸セシウム、ジメチルアミノピリジン、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム等の塩基存在下でブロモアセチルブロミドと０〜８０℃で１〜７２時間反応させることにより行うことができる。
【００２４】
ジオール（４）は、ブロモエステル（３）のアセトニドを脱保護して得られる。上記脱保護反応は、たとえば、キラルアルコール（２）をメタノール、エタノール、ＩＰＡ（イソプロパノール）、水、含水ＴＨＦなどの溶媒に溶解し、パラトルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、塩酸、硫酸、酢酸等の酸触媒存在下で０〜８０℃で５分〜７２時間反応させることにより行うことができる。
【００２５】
化合物（５）は、様々な脂肪酸とエステル化反応して得られる。上記エステル化反応は、たとえば、ジオール（４）と脂肪酸を塩化メチレン、ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）、ジエチルエーテル、ＤＭＦ（ジメチルフォルムアミド）、ＤＭＳＯ（ジメチルスルフォキシド）、ジクロロエタンなどの溶媒に溶解し、ＤＭＡＰ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン）、ＤＣＣ（Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド）等の触媒存在下で０〜８０℃で１〜７２時間反応させることにより行うことができる。
【００２６】
上記脂肪酸としては、炭素数６〜２４のアルキル基またはアルケニル基を有するカルボン酸が用いられるが、炭素数８〜２２のアルキル基またはアルケニル基を有するカルボン酸であることが好ましく、炭素数１０〜２０のアルキル基またはアルケニル基を有するカルボン酸であることがより好ましい。また、これらのアルキル基およびアルケニル基は分岐していてもよい。
【００２７】
上記アルキル基またはアルケニル基としては、たとえば、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デシル基、ｎ−ドデシル基、ｎ−テトラデシル基、ｎ−ヘキサデシル基、ｎ−ヘプタデシル基、ｎ−オクタデシル基、オレイル基等があげられる。
【００２８】
上記脂肪酸としては、具体的には、たとえば、ｎ−ヘキサン酸、ｎ−ヘプタン酸、ｎ−オクタン酸（カプリル酸）、ｎ−ノナン酸（ペラルゴン酸）、ｎ−デカン酸（カプリン酸）、ｎ−ドデカン酸（ラウリン酸）、ｎ−テトラデカン酸（ミリスチン酸）、ｎ−ペンタデカン酸（ペンタデシル酸）、ｎ−ヘキサデカン酸（パルミチン酸）、ｎ−ヘプタデカン酸（マルガリン酸）、ｎ−オクタデカン酸（ステアリン酸）、ｎ−ノナデカン酸（ツベルクロステリン酸）、ｎ−イコサン酸（アラキジン酸）、ｎ−ドコサン酸（ベヘン酸）、ｎ−テトラコサン酸（リグノセリン酸）、ｎ−ヘキサコサン酸（セロチン酸）、パルミトレイン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸などがあげられる。これらは単独で使用してもよく、また２種以上を混合して使用してもよい。
【００２９】
化合物（７）は、化合物（５）とＢＳＨ化合物（６）とをカップリング反応して得られる。活性型のＢＳＨ化合物（６）は文献既知の方法（たとえば、Ｇａｂｅｌ，Ｄ．；Ｍｏｌｌｅｒ，Ｄ．；Ｈａｒｆｓｔ，Ｓ．；Ｒｏｓｌｅｒ，Ｊ．；Ｋｅｔｚ，Ｈ．Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９３，３２，２２７６−２２７８．）にしたがい合成できる。また、ホウ素１０エンリッチのＢＳＨ化合物も同様の方法で合成できる。上記カップリング反応は、たとえば、化合物（５）とＢＳＨ化合物（６）をアセトニトリル、ＴＨＦ、プロピオニトリルなどの溶媒に溶解し、室温〜８０℃で還流させ１〜７２時間反応させることにより行うことができる。
【００３０】
本発明のホウ素含有化合物またはその塩（１）は、化合物（７）をテトラメチルアンモニウムヒドロキシドなどと処理してＢＳＨ修飾型ホウ素イオンクラスター脂質である化合物（８）として得られる。上記反応は、たとえば、化合物（７）とテトラメチルアンモニウムヒドロキシドをアセトン、アセトニトリル、プロピオニトリルなどの溶媒に溶解し、０〜５０℃で５分〜２時間反応させることにより行うことができる。
【００３１】
上記各工程における各生成物の単離精製手段は、洗浄、抽出、再結晶法、各種クロマトグラフィー等を適宜組み合せて行なうことができる。
【００３２】
上記各工程におけるより詳細な合成方法は、実施例に記載している。なお、上記反応式において、化合物（２）、ＢＳＨ等の原料化合物はいずれも入手が容易な化合物である。
【００３３】
また、上記メルカプトウンデカハイドロドデカボレート（ＢＳＨ）は、ホウ素、水素およびイオウ原子から成る２０面体のホウ素クラスター構造をとる。ＢＳＨは無機低分子化合物であるにもかかわらず、体積はベンゼン環より大きく、３つのホウ素原子が２つの電子を共有するいわゆるスリーセンターボンド構造をとり、電子が局在化した特異な構造をしている。本発明において、ＢＳＨは下記式（９）、
【化６】
または下記式（１０）
【化７】
で表される。
【００３４】
本発明の化合物（１）またはその塩は、単独で小胞体を形成するが、通常のリポソーム形成性脂質類に加え、リポソームの膜構成成分の一部として用いることもできる。
【００３５】
リポソームの膜構成成分として他の脂質類を含む場合、上記化合物またはその塩と、前記脂質類との含有量の比率が、１：９９〜９９：１であることが好ましく、５：９５〜７５：２５であることがより好ましく、１０：９０〜５０：５０であることがさらに好ましい。
【００３６】
ここで、化合物（１）の他に、リポソームの膜構成成分として用いられる脂質類としては、たとえば、リン脂質、グリセロ糖脂質およびスフィンゴ糖脂質の他、これらの脂質に、１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基または第４級アンモニウム基が導入されたカチオン性脂質、これらの脂質にポリアルキレングリコールが導入された脂質、さらに各種細胞、組織等に対するリガンドが結合した脂質類があげられる。これらの脂質類は単独で使用してもよく、また２種以上を混合して使用してもよい。
【００３７】
リン脂質としては、たとえば、ホスファチジルコリン（大豆ホスファチジルコリン、卵黄ホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン等）、ホスファチジルエタノールアミン（ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン等）、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、卵黄レシチン、大豆レシチン、水素添加リン脂質等の天然または合成のリン脂質等があげられる。
【００３８】
グリセロ糖脂質としては、たとえば、スルホキシリボシルグリセリド、ジグリコシルジグリセリド、ジガラクトシルジグリセリド、ガラクトシルジグリセリド、グリコシルジグリセリド等があげられる。
【００３９】
スフィンゴ糖脂質としては、たとえばガラクトシルセレブロシド、ラクトシルセレブロシド、ガングリオシド等があげられる。
【００４０】
カチオン性脂質としては、たとえば、上記リン脂質、グリセロ糖脂質またはスフィンゴ糖脂質に、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、トリアルキルアンモニウム基、モノアシルオキシアルキル−ジアルキルアンモニウム基、ジアシルオキシアルキル−モノアルキルアンモニウム基等の第４級アンモニウム基が導入された脂質があげられる。
【００４１】
さらに、前記膜構成成分がポリアルキレングリコール修飾されていることが好ましい。かかるリポソームを用いることにより、血中滞留性をより確実に向上させることができる。
【００４２】
また、ポリアルキレングリコール修飾脂質としては、たとえば、上記リン脂質、グリセロ糖脂質、スフィンゴ糖脂質に、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール等が修飾した脂質、たとえばジ−Ｃ１２−２４アシル−グリセロール−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−ＰＥＧ等があげられる。
【００４３】
さらに、必要に応じて、膜安定化剤として、たとえば、コレステロール類、抗酸化剤としてトコフェロール類、ステアリルアミン、ジセチルホスフェート、ガレグリオシドを用いてもよい。
【００４４】
リポソームの製造には、公知のリポソームの調製方法を適用することができる。リポソームの調整方法としては、たとえば、バンガム（Ｂａｎｇｈａｍ）らのリポソーム調製法［ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．），１３，２３８（１９６５）］、エタノール注入法［ジャーナル・オブ・セル・バイオロジー（Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．），６６，６２１（１９７５）］、フレンチプレス法［フェブス・レター（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．），９９，２１０（１９７９）］、凍結融解法［アーカイブス・オブ・バイオケミストリー・アンド・バイオフィジックス（Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．），２１２，１８６（１９８１）］、逆相蒸発法［プロシーディング・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・ユー・エス・エー（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ），７５，４１９４（１９７８）］等があげられる。
【００４５】
また、本発明のリポソームにおいては、上記リポソームのホウ素濃度が１〜１００００ｐｐｍとすることができるが、５０〜５００ｐｐｍとすることが好ましい。
【００４６】
また、標的細胞、標的組織、標的病巣に対するリガンドとしては、トランスフェリン、葉酸、ヒアルロン酸、ガラクトース、マンノースなどの癌細胞に対するリガンド等があげられる。また、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体もリガンドとして使用できる。
【００４７】
本発明のリポソームは、安定で、整体安全性に優れ、かつリポソーム膜上高濃度にボランを含有しているので、癌中性子捕捉療法剤として使用できる。また、本発明のリポソームの内部には、抗癌剤や遺伝子類等の薬物を含有させることもできる。これらの薬物を含有するリポソームは、化学療法剤としても、また癌中性子捕捉療法剤としても適宜使用できる。
【実施例】
【００４８】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明する。当業者は本明細書の記載に基づいて容易に本発明に修飾、変更を加えることができ、それらは本発明の技術的範囲に含まれる。
【００４９】
下記実施例において、化合物の分析および分離精製には以下の機種を用いて行った。
・ＮＭＲスペクトル：ＶＡＲＩＡＮ社製、ＵＮＩＴＹ−ＩＮＯＶＡ４００、４００ＭＨｚ。特に明記しない限り、内部標準としてＴＭＳを用いた。また、下記ケミカルシフトはδ値で示した。
・カラムクロマトグラフィー：Ｍｅｒｃｋ社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ７０−２３０ｍｅｓｈ。
・マススペクトル：エレクトロンスプレーイオン化（ＥＳＩ）法により測定した。島津製作所社製、ＬＣＭＳ−２０１０ＥＶ。
・ＩＲスペクトル：島津製作所社製、ＦＴＩＲ−８２００Ａ。
・ホウ素濃度測定：ＩＣＰ−ＡＥＳ（誘導結合プラズマ発光分光分析）により測定した。堀場製作所社製、ＵＬＴＩＭＡ２。
【００５０】
〔実施例１〕
（化合物（３）の合成）
（Ｒ）−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール（０．１２ｍＬ、１０．０ｍｍｏｌ）とピリジン（０．９７ｍＬ、１．２ｅｑｉｖ）をＴＨＦ５０ｍＬに加えて撹拌した溶液に、ブロモアセチルブロミド（１．０４ｍＬ、１．２ｅｑｉｖ）を０ｏＣかで加えた。３０分間反応温度を０℃に保ち、次いで反応混合物を室温までゆっくり暖めた。その後さらに４時間撹拌した後、セライトによるろ過で固体を除去し、ろ液を減圧下で濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）で生成物である化合物（３）を精製した。生成物は無色の液状で、収率は９９．５％であった。
・ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．８３（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）。
・１Ｈ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：１．３８（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、１．４５（ｓ、３Ｈ、ＣＨ３）、３．７８（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝８．４Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．０Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、３．８９（ｓ、２Ｈ、ＣＨ２Ｂｒ）、４．１０（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝８．４Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．４Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、４．１９（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．４Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．４Ｈｚ、ＣＨＣＨ２ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ）、４．２６（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．４Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．８Ｈｚ、ＣＨＣＨ２ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ）、４．３３−４．３８（ｍ、１Ｈ、ＣＨ）。
・１３Ｃ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：２５．３、２６．６、３２．２、６６．０、７３．２、９９．９、１６７．０。
【００５１】
〔実施例２〕
（化合物（４）の合成）
化合物（３）（２．５３ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）をメタノール２０ｍｌに溶かし、得られたメタノール溶液に触媒量のｐ−トルエンスルホン酸（０．１７ｇ、０．１ｅｑｕｉｖ）を添加した。この反応混合物を室温下で３０分間撹拌した。得られた溶液を乾燥するまで濃縮し、残渣を塩化メチレンに溶解した。無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、セライトでろ過した後、ろ液を減圧下で濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝２：１）で生成物である化合物（４）を精製した。生成物は無色の液状で、収率は３８％であった。
・ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．４７（酢酸エチル：ヘキサン＝２：１）。
・１Ｈ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：３．６５（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．２Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．０Ｈｚ、ＨＯＣＨ２ＣＨ）、３．７５（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．２Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．０Ｈｚ、ＨＯＣＨ２ＣＨ）、３．８８（ｓ、２Ｈ、ＣＨ２Ｂｒ）、３．９７−４．０３（ｍ、１Ｈ、ＣＨ）、４．２５（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．４Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．４Ｈｚ、ＣＨＣＨ２ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ）、４．３１（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．４Ｈｚ、ＣＨＣＨ２ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｂｒ）。
・１３Ｃ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：２５．８、６３．１、６６．６、６９．７、１６７．７。
【００５２】
〔実施例３〕
（化合物（５）の合成）
化合物（４）である３−Ｏ−ブロモアセチル−ｓｎ−グリセロール（０．６４ｇ、３．０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．０７ｇ、０．２ｅｑｕｉｖ）を乾燥した塩化メチレン５０ｍｌに添加し、その溶液を０℃下で撹拌した。次いでその溶液にＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（１．３６ｇ、２．２ｅｑｕｉｖ）とカルボン酸（２．２ｅｑｕｉｖ）を加え、得られた懸濁液を室温下で１２時間撹拌した。セライトによるろ過で固体を除去し、ろ液を減圧下で濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（展開溶液は各条件にて）で生成物である化合物（５）を精製した。
【００５３】
（化合物（５ａ）：３−Ｏ−ブロモアセチル−１，２−Ｏ−ジミリストリル−ｓｎ−３−グリセロールの合成）
化合物（５ａ）はカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２０）により精製した。化合物（５ａ）は白色粉体で、収率は６１％であった。
・ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１５（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２０）。
・１Ｈ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：０．８８（ｔ、６Ｈ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．４Ｈｚ、ＣＨ３）、１．２６（ｓ、４０Ｈ、ＣＨ２）、１．５９−１．６３（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、２．３２（ｔｄ、４Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝８．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．０Ｈｚ、ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、３．８４（ｓ、２Ｈ、ＣＨ２Ｂｒ）、４．１７（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．８Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．０Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、４．２６（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．０Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、４．３１（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．４Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、４．４１（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．８Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．４Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、５．２７−５．３４（ｍ、１Ｈ、ＣＨ）。
・１３Ｃ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：１４．１、２２．７、２４．８、２５．２、２９．０、２９．１、２９．２、２９．４、２９．５、２９．６、２９．７、３１．９、３３．９、３４．０、６１．８、６３．９、７１．２、１６６．８、１７２．９、１７３．２。
【００５４】
（化合物（５ｂ）：３−Ｏ−ブロモアセチル−１，２−Ｏ−ジパルミトイル−ｓｎ−３−グリセロールの合成）
化合物（５ｂ）はカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２０）により精製した。化合物（５ｂ）は白色粉体で、収率は７３％であった。
・ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１５（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２０）。
・１Ｈ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：０．８８（ｔ、６Ｈ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．８Ｈｚ、ＣＨ３）、１．２６（ｓ、４８Ｈ、ＣＨ２）、１．６１−１．６３（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、２．３２（ｔｄ、４Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝７．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．０Ｈｚ、ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、３．８４（ｓ、２Ｈ、ＣＨ２Ｂｒ）、４．１７（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．０Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、４．２６（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．０Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、４．３１（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｈ＝４．４Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、４．４１（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．８Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．４Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、５．２７−５．３２（ｍ、１Ｈ、ＣＨ）。
・１３Ｃ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：１４．１、２２．７、２４．８、２５．２、２９．０、２９．１、２９．２、２９．４、２９．５、２９．６、２９．７、３１．９、３３．９、３４．０、３４．１、６１．８、６３．９、７１．２、１６６．８、１７２．９、１７３．２。
【００５５】
（化合物（５ｃ）：３−Ｏ−ブロモアセチル−１，２−Ｏ−ジステアロイル−ｓｎ−３−グリセロールの合成）
化合物（５ｃ）はカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２０）により精製した。化合物（５ｃ）は白色粉体で、収率は７５％であった。
・ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１５（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２０）。
・１Ｈ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：０．８８（ｔ、６Ｈ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．８Ｈｚ、ＣＨ３）、１．２６（ｓ、５６Ｈ、ＣＨ２）、１．５８−１．６５（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、２．３２（ｔｄ、４Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝７．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｈ＝４．０Ｈｚ、ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、３．８４（ｓ、２Ｈ、ＣＨ２Ｂｒ）、４．１７（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．８Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．０Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、４．２６（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．０Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、４．３１（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．４Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、４．４１（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝４．０Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、５．２７−５．３２（ｍ、１Ｈ、ＣＨ）。
・１３Ｃ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）δ：１４．１、２２．７、２４．８、２５．２、２９．０、２９．１、２９．２、２９．３、２９．４、２９．５、２９．６、２９．７、３１．９、３３．９、３４．０、３４．１、６１．８、６３．９、６８．５、１６６．８、１７２．８、１７３．２。
【００５６】
〔実施例４〕
（化合物（７）の合成）
ホウ素１０エンリッチのＢ１２Ｈ１１ＳＣＨ２ＣＨ２ＣＮ・２ＴＭＡ（２−シアノエチルチオウンデカヒドロドデカボレート・ジテトラメチルアンモニウム）（６）（３００ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）を乾燥したアセトニトリル７０ｍｌに加えて得た溶液を室温下で撹拌し、上記溶液に粉末状の３−Ｏ−ブロモアセチル−１，２−Ｏ−ジアシル−ｓｎ−３−グリセロール（５）（１．２ｅｑｕｉｖ）を加えた。次いで得られた懸濁液を７０℃で１日撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（展開溶液は各条件にて）で生成物である化合物（７）を精製した。
【００５７】
（化合物（７ａ）：３−Ｏ−１０Ｂ１２Ｈ１１Ｓ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＮ）−アセチル−１，２−Ｏ−ジミリストリル−ｓｎ−３−グリセロール・テトラエチルアンモニウム塩の合成）
化合物（７ａ）はカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝５：１）により精製した。化合物（７ａ）は白色粉体で、収率は７５％であった。
・ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．６５（酢酸エチル：ヘキサン＝５：１）。
【００５８】
（化合物（７ｂ）：３−Ｏ−１０Ｂ１２Ｈ１１Ｓ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＮ）−アセチル−１，２−Ｏ−ジパルミトリル−ｓｎ−３−グリセロール・テトラエチルアンモニウム塩の合成）
化合物（７ｂ）はカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝５：１）により精製した。化合物（７ｂ）は白色粉体で、収率は７８％であった。
・ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．６７（酢酸エチル：ヘキサン＝５：１）。
【００５９】
（化合物（７ｃ）：３−Ｏ−１０Ｂ１２Ｈ１１Ｓ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＮ）−アセチル−１，２−Ｏ−ジステアロイル−ｓｎ−３−グリセロール・テトラエチルアンモニウム塩の合成）
化合物（７ｃ）はカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝５：１）により精製した。化合物（７ｃ）は白色粉体で、収率は８５％であった。
・ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．６８（酢酸エチル：ヘキサン＝５：１）。
【００６０】
〔実施例５〕
（化合物（８）の合成）
化合物（７）を室温下で最小量のアセトンに溶解した。次いでテトラメチルアンモニウムヒドロキシドのメタノール溶液（２５重量％）を当量になるように加えた。化合物（８）を再沈殿させ、ろ別し、乾燥したアセトンで数回洗浄し、減圧下で乾燥した。
【００６１】
（化合物（８ａ）：３−Ｏ−１０Ｂ１２Ｈ１１Ｓ−アセチル−１，２−Ｏ−ジミリストリル−ｓｎ−３−グリセロール・２テトラエチルアンモニウム塩の合成）
化合物（８ａ）は白色粉体で、収率は７６％であった。
・ＭＳ（ＥＳＩ、ｎｅｇａｔｉｖｅ）：（Ｍ−／２＝３５８．５）。
・Ｍｐ：２２８−２３０℃。
・ＩＲ（ＫＢｒ ｐｅｌｌｅｔ、ｃｍ−１）：ν（Ｃ＝Ｏ）１７３４、ν（Ｂ−Ｈ）２４９６、ν（Ｃ−Ｈ）２８５３、２９２２、２９５７。
・１Ｈ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤ３ＣＮ）δ：０．８８（ｔ、６Ｈ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．８Ｈｚ、ＣＨ３）、１．２７（ｓ、４０Ｈ、ＣＨ２）、１．５２−１．６２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、１．９４（ｔｄ、４Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝３．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝２．４Ｈｚ、ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、２．２７（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝６．４Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝２．８Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、２．３１（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝７．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝２．８Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、３．０９（ｓ、２４Ｈ、ＮＣＨ３）、３．１６（ｓ、２Ｈ、ＣＨ２Ｂｒ）、４．１３（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１０．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．４Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、４．２９（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．０Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝３．６Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、５．１８−５．２２（ｍ、１Ｈ、ＣＨ）。
・１３Ｃ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤ３ＣＮ）δ：１４．１、２３．１、２５．４、２９．５、２９．７、２９．８、３０．０、３０．１、３２．４、３４．４、３５．４、５５．９、５６．０、５６．１、６２．６、６２．８、６９．７、１７３．４、１７３．５、１７３．７。
【００６２】
（化合物（８ｂ）：３−Ｏ−１０Ｂ１２Ｈ１１Ｓ−アセチル−１，２−Ｏ−ジパルミトイル−ｓｎ−３−グリセロール・２テトラエチルアンモニウム塩の合成）
化合物（８ｂ）は白色粉体で、収率は８１％であった。
・ＭＳ（ＥＳＩ、ｎｅｇａｔｉｖｅ）：（Ｍ−／２＝３８６．４）。
・Ｍｐ：２１９−２２１℃。
・ＩＲ（ＫＢｒ ｐｅｌｌｅｔ、ｃｍ−１）：ν（Ｃ＝Ｏ）１７３６、ν（Ｂ−Ｈ）２４９４、ν（Ｃ−Ｈ）２８５１、２９２０、２９５７。
・１Ｈ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤ３ＣＮ）δ：０．８８（ｔ、６Ｈ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．８Ｈｚ、ＣＨ３）、１．２７（ｓ、４８Ｈ、ＣＨ２）、１．４９−１．６１（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、１．９４（ｔｄ、４Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝３．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝２．４Ｈｚ、ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、２．２７（ｄｄ、４Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝７．４Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝２．８Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、２．３０（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝７．４Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝２．８Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、３．１０（ｓ、２４Ｈ、ＮＣＨ３）、３．１７（ｓ、２Ｈ、ＣＨ２Ｂｒ）、４．１３（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．８Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、４．２９（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．２Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝３．６Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、５．１７−５．２２（ｍ、１Ｈ、ＣＨ）。
・１３Ｃ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤ３ＣＮ）δ：１４．１、２３．１、２５．４、２９．４、２９．５、２９．７、２９．８、３０．０、３０．１、３２．４、３４．５、３５．４、５５．９、５６．０、５６．１、６２．６、６２．８、６９．７、１７３．４、１７３．５、１７３．７。
【００６３】
（化合物（８ｃ）：３−Ｏ−１０Ｂ１２Ｈ１１Ｓ−アセチル−１，２−Ｏ−ジステアロイル−ｓｎ−３−グリセロール・２テトラエチルアンモニウム塩の合成）
化合物（８ｃ）は白色粉体で、収率は９１％であった。
・ＭＳ（ＥＳＩ、ｎｅｇａｔｉｖｅ）：（Ｍ−／２＝４１４．６）。
・Ｍｐ：２１５−２１７℃。
・ＩＲ（ＫＢｒ ｐｅｌｌｅｔ、ｃｍ−１）：ν（Ｃ＝Ｏ）１７３６、ν（Ｂ−Ｈ）２４９４、ν（Ｃ−Ｈ）２８５１、２９２０、２９５７。
・１Ｈ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤ３ＣＮ）δ：０．８８（ｔ、６Ｈ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．８Ｈｚ、ＣＨ３）、１．２７（ｓ、５６Ｈ、ＣＨ２）、１．５２−１．６１（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、１．９４（ｔｄ、４Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝３．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝２．４Ｈｚ、ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ））、２．２７（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝５．２Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝２．４Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、２．３１（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝７．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝２．８Ｈｚ、ＯＣＨ２ＣＨ）、３．０９（ｓ、２４Ｈ、ＮＣＨ３）、３．１６（ｓ、２Ｈ、ＣＨ２Ｂｒ）、４．１３（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１１．６Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝６．４Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、４．２９（ｄｄ、２Ｈ、２ＪＣ−Ｈ＝１２．２Ｈｚ、３ＪＣ−Ｃ−Ｈ＝３．６Ｈｚ、ＢｒＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ）、５．１６−５．２４（ｍ、１Ｈ、ＣＨ）。
・１３Ｃ ＮＭＲ（ｐｐｍ、ＣＤ３ＣＮ）δ：１３．２、２２．２、２８．６、２８．７、２８．８、２８．９、２９．０、３１．５、３３．５、３３．６、５５．０、５５．１、５５．２、６１．６、６１．７、６１．９、６８．８、１７２．５、１７２．６、１７２．９。
【００６４】
〔実施例６〕
（ＢＳＨ修飾型ホウ素イオンクラスターリポソームの合成）
ＤＳＰＣ（ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｒｉｎｅ；ＣＯＡＴＳＯＭＥ ＭＣ−８０８０）、コレステロール、合成したＢＳＨ修飾型ホウ素イオンクラスター脂質（８ａ）を１：１−Ｘ：Ｘ（Ｘ＝０、０．２５、０．５、０．７５、１）の比率で調整し、これら脂質を、クロロホルムとジイソプロピルエーテルの１：１溶液２ｍＬに溶かした。カルセインを加え、得られたエマルジョンを１分間超音波に通した後、減圧下有機溶媒を溜去した。
【００６５】
得られた脂質ゲルをエクストルーダーを用いて１００ｎｍのポリカーボネート膜を通してサイズを整え、超遠心（２００，０００ｘｇ）２０分で精製し、ＰＢＳ ｂｕｆｆｅｒに加え懸濁溶液とした。エクストルーダーによるサイジング前とサイジング後の粒形分布図を示す（図１〜図２）。
【００６６】
粒形分布図（図１〜２）から分かるように、Ｘ＝０．２５、０．５ではサイジング前で２００〜５００ｎｍでリポソームが形成されており、Ｘ＝０．７５では１００ｎｍと５００ｎｍ、Ｘ＝１では１００ｎｍと８００ｎｍに粒子系の極大分布が見られた。サイジング後にはすべてにおいて１００ｎｍに粒子形が整っていることが分かる。なお、ピークトップの値は、Ｘ＝０．２５の場合は１１５ｎｍ、Ｘ＝０．５の場合は１１４ｎｍ、Ｘ＝０．７５の場合は１１４ｎｍ、Ｘ＝１の場合は１１９ｎｍであった。また、ピークの幅（分布幅）は、Ｘ＝０．２５の場合は４２．１ｎｍ、Ｘ＝０．５の場合は３２．１ｎｍ、Ｘ＝０．７５の場合は４０．５ｎｍ、Ｘ＝１の場合は３７．８ｎｍであった。
【００６７】
〔実施例７〕
（ＢＳＨ修飾型ホウ素イオンクラスターリポソームの安定性試験）
上記実施例で合成したカルセイン封入ホウ素クラスターリポソームの安定性を調べた。血液中での安定性を調べるためのモデル実験として、血清中における封入されたカルセインの蛍光強度の変化を観測した。血清中に上で得られたカルセイン封入ホウ素クラスターリポソーム溶液を体積比で血清／ベシクル溶液＝９／１になるように加え、３７℃でマグネチックスターラーを用いて攪拌し、０〜２４時間で各時間における蛍光強度（日本分光社製、Ｖ−５５０、測定条件；励起波長＝４９０ｎｍ、蛍光測定波長＝５１３ｎｍ）を測定した（図３〜４、◆プロット）。また、各時間におけるベシクル溶液の蛍光強度を測定後、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００でベシクルを破壊し、ベシクルからリリースされたカルセインの蛍光強度を同時に測定した（図３〜４、■プロット）。
【００６８】
これらの結果から、ＢＳＨ修飾型ホウ素イオンクラスター（８ａ）から調整したリポソームはすべての組成比（Ｘ＝０〜１）においてリポソームは血清中で安定であることが分かった。また、各組成比のリポソームにおけるカルセインの封入量に関して比較すると、図５に示すようにＢＳＨ修飾型ホウ素イオンクラスター（８ａ）が２５％（Ｘ＝０．２５）、５０％（Ｘ＝０．５）含むもので高い封入率が得られることが分かった。
【００６９】
〔実施例７〕
（ＰＥＧ修飾型ホウ素イオンクラスターリポソームの合成）
マクロファージからの貪食から逃れ高い血中滞留性を維持することは、ＥＰＲ効果をあげる上で、リポソームを用いたドラッグデリバリーには重要である。この目的のため、ＰＥＧ修飾型リポソームを合成し、その細胞成長阻害について調べた。
【００７０】
ＤＭＰＣ（ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｒｉｎｅ）、コレステロール、合成したＢＳＨ修飾型ホウ素イオンクラスター（８ｂ）、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＯＭｅ（ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ−ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ−ＯＭｅ；ＤＳＰＥ−０２０Ｃ）、を１：１−Ｘ：Ｘ：０．１１（Ｘ＝０、０．２５、０．５）の比率で調整し、エクストルーダーでサイジング後、得られたホウ素クラスターリポソームをＰＢＳ ｂｕｆｆｅｒに懸濁した。得られたリポソーム溶液をＩＣＰ−ＡＥＳでそのホウ素濃度を測定したところ、それぞれ２００ｐｐｍ（Ｘ＝０．２５；理論値４１０ｐｐｍ）、３００ｐｐｍ（Ｘ＝０．５；理論値７８０ｐｐｍ）であった。
【００７１】
このリポソーム溶液が最高１０％になるように細胞培地を調整した後、順次希釈し９６ウェルディッシュにｃｏｌｏｎ２６細胞に７２時間接触させ、細胞増殖阻害を検討した。その結果を図６に示す。なお、図６にはｎ＝４の結果（ＢＬ２５％：ＢＬ２５−１〜４）と対照（ｃｏｎｔｒｏｌ：ＢＬ０％（Ｘ＝０）のリポソーム）の結果を記載している。ホウ素クラスターリポソーム（Ｘ＝０．２５）は、ホウ素濃度２０ｐｐｍの濃度で、ほとんど細胞毒性を示さなかった。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】本発明のリポソームの粒径分布図。
【図２】本発明のリポソームの粒径分布図。
【図３】本発明のリポソームを用いたベシクル溶液の蛍光強度のグラフ。
【図４】本発明のリポソームを用いたベシクル溶液の蛍光強度のグラフ。
【図５】本発明のリポソームを用いたベシクル溶液の蛍光強度のグラフ。
【図６】本発明のリポソームを用いた細胞増殖阻害に関するグラフ。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）：
【化１】
（式中、Ｒ１およびＲ２は同一または異なって、炭素数６〜２４のアルキル基またはアルケニル基を有するカルボニル基を示す。）
で表わされる構造を有する化合物またはその塩。
【請求項２】
請求項１記載の化合物またはその塩を膜構成成分として含有するリポソーム。
【請求項３】
さらに脂質類を膜構成成分として含有する請求項２に記載のリポソーム。
【請求項４】
請求項１記載の化合物またはその塩と、前記脂質類との含有量の比率が、１：９９〜９９：１である請求項３に記載のリポソーム。
【請求項５】
前記膜構成成分がポリアルキレングリコール修飾されている請求項２〜４のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項６】
ホウ素濃度が１〜１００００ｐｐｍである請求項２〜５のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項７】
薬物が内封されている請求項２〜６のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項１】
下記式（１）：
【化１】
（式中、Ｒ１およびＲ２は同一または異なって、炭素数６〜２４のアルキル基またはアルケニル基を有するカルボニル基を示す。）
で表わされる構造を有する化合物またはその塩。
【請求項２】
請求項１記載の化合物またはその塩を膜構成成分として含有するリポソーム。
【請求項３】
さらに脂質類を膜構成成分として含有する請求項２に記載のリポソーム。
【請求項４】
請求項１記載の化合物またはその塩と、前記脂質類との含有量の比率が、１：９９〜９９：１である請求項３に記載のリポソーム。
【請求項５】
前記膜構成成分がポリアルキレングリコール修飾されている請求項２〜４のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項６】
ホウ素濃度が１〜１００００ｐｐｍである請求項２〜５のいずれかに記載のリポソーム。
【請求項７】
薬物が内封されている請求項２〜６のいずれかに記載のリポソーム。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公開番号】特開２００８−１３４９８（Ｐ２００８−１３４９８Ａ）
【公開日】平成２０年１月２４日（２００８．１．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−１８６９０７（Ｐ２００６−１８６９０７）
【出願日】平成１８年７月６日（２００６．７．６）
【出願人】（０００１６２８４７）ステラケミファ株式会社 (81)
【出願人】（５０７２０６８４８）
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年１月２４日（２００８．１．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年７月６日（２００６．７．６）
【出願人】（０００１６２８４７）ステラケミファ株式会社 (81)
【出願人】（５０７２０６８４８）
【Ｆターム（参考）】
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