本発明は、単一細胞における複数のタンパク質の活性化状態の同時定量のためのアプローチを提供する。本アプローチは、活性化状態に基づいて、複合体細胞集団における異種性の迅速検出を可能にし、細胞集団の活性化における関連した変化を示す細胞のサブセットを同定する。そのうえ、本アプローチは、細胞の活性または特性を相関することができる。加えて、細胞の活性化の増強剤の使用により、このような経路および細胞集団の特徴付けができる。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
a）第一および第二の活性化可能なタンパク質を含む細胞集団を提供する工程；
b）i）該第一の活性化可能なタンパク質の第一のアイソフォームと結合する第一の活性化状態特異的結合エレメント、および、
ii）該第二の活性化可能なタンパク質の第一のアイソフォームと結合する第二の活性化状態特異的結合エレメント
を含む複数の活性化状態特異的結合エレメントと該細胞集団を接触させる工程；ならびに
c）フローサイトメトリーを使用して、該第一および第二の結合エレメントの結合の有無を検出し、該第一および第二の活性化可能なタンパク質の活性化状態を決定する工程
を含む、単一細胞内の少なくとも該第一と該第二の活性化可能なタンパク質の活性化状態を検出する方法。
【請求項２】
第一の結合エレメントが第一の標識で標識されており、第二の結合エレメントが第二の標識で標識されており、かつ該第一および第二の標識が異なっている、請求項1記載の方法。
【請求項３】
細胞集団が初代細胞である、請求項1記載の方法。
【請求項４】
第一および第二の活性化可能なタンパク質の活性化状態情報を使用して、少なくとも1つの細胞の細胞状態を決定する工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項５】
細胞の状態が薬物感受性である、請求項4記載の方法。
【請求項６】
結合エレメントと接触させる前に、前記集団を候補薬剤と接触させる工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項７】
候補薬剤が増強剤である、請求項6記載の方法。
【請求項８】
増強剤がサイトカインである、請求項7記載の方法。
【請求項９】
増強剤が成長因子である、請求項7記載の方法。
【請求項１０】
活性化状態がリン酸化状態である、請求項1記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも1つの活性化可能なタンパク質がキナーゼである、請求項1記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも1つの活性化可能なタンパク質がカスパーゼである、請求項1記載の方法。
【請求項１３】
a）少なくとも第一の活性化可能なタンパク質を含む細胞集団を提供する工程；
b）該細胞集団を、該細胞集団内の該第一の活性化可能なタンパク質によって修飾される少なくとも1つの第一の基質を含む複数の基質と接触させる工程；および
c）フローサイトメトリーを使用して、該活性化可能なタンパク質の活性化状態を検出する工程
を含む、単一細胞内の少なくとも第一の活性化可能なタンパク質の活性化状態を検出する方法。

【図５】

【図６Ａ】

【図６Ｂ】

【図６Ｃ】

【図６Ｄ】

【図６Ｅ】

【図６Ｆ】

【図７Ａ】

【図７Ｂ】

【図８Ａ】

【図８Ａ−１】

【図８Ａ−２】

【図８Ｂ】

【図８Ｃ】

【図９】

【図１０Ａ】

【図１０Ｂ】

【図１０Ｃ】

【図１０Ｄ】

【図１０Ｅ】

【図１１】

【図１２】

【図１３Ａ】

【図１３Ｂ】

【図１３Ｃ】

【図１３Ｄ】

【図１４Ａ】

【図１４Ｂ】

【図１４Ｃ】

【図１５Ａ】

【図１５Ｂ】

【図１５Ｃ】

【図１５Ｄ】

【図１５Ｅ】

【図１５Ｆ】

【図１６Ａ】

【図１６Ｂ】

【図１６Ｃ】

【図１７Ａ】

【図１７Ｂ】

【図１８Ａ】

【図１８Ｂ】

【図１９Ａ】

【図１９Ｂ】

【図１９Ｃ】

【図１９Ｄ】

【図１９Ｅ】

【図２０Ａ】

【図２０Ｂ】

【図２０Ｃ】

【図２１Ａ】

【図２１Ｂ】

【図２１Ｃ】

【図２２Ａ】

【図２２Ｂ】

【図２２Ｃ】

【図２２Ｄ】

【図２２Ｅ】

【図２２Ｆ】

【図２３Ａ】

【図２３Ｂ】

【図２３Ｃ】

【図２３Ｄ】

【図２３Ｅ】

【図２３Ｆ】

【図２４Ａ】

【図２４Ｂ】

【図２４Ｃ】

【図２４Ｄ】

【図２４Ｅ】

【図２５Ａ】

【図２５Ｂ】

【図２５Ｃ】

【図２５Ｄ】

【図２５Ｅ】

【図２５Ｆ】

【図２６Ａ】

【図２６Ｂ】

【図２７Ａ】

【図２７Ｂ】

【図２７Ｃ】

【図２７Ｄ】

【図２７Ｅ】

【図２８Ａ】

【図２８Ｂ】

【図２８Ｃ】

【図２９Ａ】

【図２９Ｂ】

【図３０Ａ】

【図３０Ｂ】

【図３０Ｃ】

【図３０Ｄ】

【図３１Ａ】

【図３１Ｂ】

【図３１Ｃ】

【図３１Ｄ】

【図３１Ｅ】

【図３１Ｆ】

【図３２Ａ】

【図３２Ｂ】

【図３２Ｃ】

【図３３Ａ】

【図３３Ｂ】

【図３３Ｃ】

【図３３Ｄ】

【図３３Ｅ】

【図３３Ｆ】

【図３３Ｇ】

【図３３Ｈ】

【図３４Ａ】

【図３４Ｂ】

【図３４Ｃ】

【図３４Ｄ】

【図３４Ｅ】

【図３４Ｆ】

【図３４Ｇ】

【図３４Ｈ】

【図３４Ｉ】

【図３５Ａ】

【図３５Ｂ】

【図３５Ｃ】

【図３５Ｄ】

【図３５Ｅ】

【図３６】

【図３７】

【図３８Ａ】

【図３８Ａ−１】

【図３８Ａ−２】

【図３８Ａ−３】

【図３８Ａ−４】

【図３８Ｂ】

【図３８Ｃ】

【図３９】

【図４０Ａ】

【図４０Ｂ】

【図４１Ａ】

【図４１Ｂ】

【図４１Ｃ】

【図４２】

【図４３】

【図４４】

【図４５Ａ】

【図４５Ｂ−１】

【図４５Ｂ−２】

【図４６Ａ】

【図４６Ｂ】

【図４６Ｃ】

【公表番号】特表２００８−５０７２８６（Ｐ２００８−５０７２８６Ａ）
【公表日】平成２０年３月１３日（２００８．３．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５２２７９９（Ｐ２００７−５２２７９９）
【出願日】平成１７年７月２１日（２００５．７．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２６０２６
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０１２５０７
【国際公開日】平成１８年２月２日（２００６．２．２）
【出願人】（５０５１９０２０８）ザ　ボード　オブ　トラスティーズ　オブ　ザ　リランド　スタンフォード　ジュニア　ユニバーシティー (4)
【Ｆターム（参考）】