修飾されているヒトレプチンポリペプチドおよびそれらの使用が提供される。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
天然にコードされていないアミノ酸を１つ以上含んでいる、レプチンポリペプチド。
【請求項２】
１つ以上の翻訳後修飾を含んでいる、請求項１に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項３】
リンカー、ポリマーまたは生物学的に活性な分子と連結されている、請求項１に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項４】
水溶性ポリマーと連結されている、請求項１に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項５】
二官能性ポリマー、二官能性リンカー、または少なくとも１つの追加の４ＨＢポリペプチドと連結されている、請求項１に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項６】
上記二官能性リンカーまたは二官能性ポリマーが、第２のポリペプチドと連結されている、請求項５に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項７】
上記第２のポリペプチドがレプチンポリペプチドである、請求項６に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項８】
上記水溶性ポリマーがポリ（エチレングリコール）部分を含んでいる、請求項４に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項９】
請求項４に記載のレプチンポリペプチドであって、上記水溶性ポリマーが、当該レプチンポリペプチドに存在している天然にコードされていないアミノ酸と連結されている、レプチンポリペプチド。
【請求項１０】
請求項１に記載のレプチンポリペプチドであって、レプチン受容体に対する当該レプチンポリペプチドの親和性を調節するアミノ酸置換、アミノ酸付加またはアミノ酸欠失を１つ以上有している、レプチンポリペプチド。
【請求項１１】
請求項１に記載のレプチンポリペプチドであって、当該レプチンポリペプチドの安定性または可溶性を高めるアミノ酸置換、アミノ酸付加またはアミノ酸欠失を１つ以上有している、レプチンポリペプチド。
【請求項１２】
請求項１に記載のレプチンポリペプチドであって、当該レプチンポリペプチドの組換え宿主細胞における発現またはインビトロにおける合成を向上させるアミノ酸置換、アミノ酸付加またはアミノ酸欠失を１つ以上有している、レプチンポリペプチド。
【請求項１３】
請求項１に記載のレプチンポリペプチドであって、当該レプチンポリペプチドのプロテアーゼ耐性を向上させるアミノ酸置換、アミノ酸付加またはアミノ酸欠失を１つ以上有している、レプチンポリペプチド。
【請求項１４】
上記天然にコードされていないアミノ酸がリンカー、ポリマーまたは生物学的に活性な分子に対して反応性であり、当該リンカー、ポリマー、または生物学的に活性な分子がレプチンポリペプチドにおける一般的な２０個のアミノ酸のいずれに対しても非反応性である、請求項１に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項１５】
上記天然にコードされていないアミノ酸が、カルボニル基、アミノオキシ基、ヒドラジン基、ヒドラジド基、セミカルバジド基、アジド基、またはアルキン基を含んでいる、請求項１に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項１６】
上記天然にコードされていないアミノ酸がカルボニル基を含んでいる、請求項１５に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項１７】
上記天然にコードされていないアミノ酸が、以下の構造：
【化１】

を有しており、
ここで、ｎが０〜１０であり；Ｒ_１は、アルキル、アリール、置換アルキルまたは置換アリールであり；Ｒ_２が、Ｈ、アルキル、アリール、置換アルキルまたは置換アリールであり；Ｒ_３が、Ｈ、アミノ酸、ポリペプチドまたはアミノ末端修飾基であり；Ｒ_４が、Ｈ、アミノ酸、ポリペプチドまたはカルボキシ末端修飾基である、
請求項１６に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項１８】
上記天然にコードされていないアミノ酸がアミノオキシ基を含んでいる、請求項１５に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項１９】
上記天然にコードされていないアミノ酸がヒドラジド基を含んでいる、請求項１５に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項２０】
上記天然にコードされていないアミノ酸がヒドラジン基を含んでいる、請求項１５に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項２１】
上記天然にコードされていないアミノ酸残基がセミカルバジド基を含んでいる、請求項１５に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項２２】
上記天然にコードされていないアミノ酸残基がアジド基を含んでいる、請求項１５に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項２３】
上記天然にコードされていないアミノ酸が、以下の構造：
【化２】

を有しており、
ここで、ｎが１〜１０であり；Ｒ_１が、アルキル、アリール、置換アルキルもしくは置換アリールであるか、または存在せず；Ｘが、Ｏ、ＮもしくはＳであるか、または存在せず；ｍが０〜１０であり；Ｒ_２が、Ｈ、アミノ酸、ポリペプチドまたはアミノ末端修飾基であり；Ｒ_３が、Ｈ、アミノ酸、ポリペプチドまたはカルボキシ末端修飾基である、
請求項２２に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項２４】
上記天然にコードされていないアミノ酸がアルキン基を含んでいる、請求項１５に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項２５】
上記天然にコードされていないアミノ酸が、以下の構造：
【化３】

を有しており、
ここで、ｎが０〜１０であり；Ｒ_１が、アルキル、アリール、置換アルキルまたは置換アリールであり；Ｘが、Ｏ、ＮもしくはＳであるか、または存在せず；ｍが０〜１０であり；Ｒ_２が、Ｈ、アミノ酸、ポリペプチドまたはアミノ末端修飾基であり；Ｒ_３が、Ｈ、アミノ酸、ポリペプチドまたはカルボキシ末端修飾基である、
請求項２４に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項２６】
上記水溶性ポリマーが約０．１ｋＤａから約１００ｋＤａの分子量を有している、請求項４に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項２７】
上記水溶性ポリマーが約０．１ｋＤａから約５０ｋＤａの分子量を有している、請求項２６に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項２８】
カルボニル含有アミノ酸を含んでいる４ＨＢポリペプチドを、アミノオキシ基、ヒドラジン基、ヒドラジド基またはセミカルバジド基を含んでいる水溶性ポリマーと反応させることによって製造されている、請求項４に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項２９】
上記アミノオキシ基、ヒドラジン基、ヒドラジド基またはセミカルバジド基が、アミド結合を介して上記水溶性ポリマーと連結されている、請求項２８に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項３０】
カルボニル基を含んでいる水溶性ポリマーを、天然にコードされていないアミノ酸を含んでいるポリペプチドと反応させることによって製造されており、当該天然にコードされていないアミノ酸が、アミノオキシ基、ヒドラジン基、ヒドラジド基またはセミカルバジド基を含んでいる、請求項４に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項３１】
アルキン含有アミノ酸を含んでいるレプチンポリペプチドを、アジド部分を含んでいる水溶性ポリマーと反応させることによって製造されている、請求項４に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項３２】
アジド含有アミノ酸を含んでいるレプチンポリペプチドを、アルキン部分を含んでいる水溶性ポリマーと反応させることによって製造されている、請求項４に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項３３】
上記アジド基またはアルキン基がアミド結合を介して水溶性ポリマーと連結されている、請求項１５に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項３４】
上記水溶性ポリマーが分枝状ポリマーまたはマルチアームポリマーである、請求項４に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項３５】
上記水溶性ポリマーの分枝鎖のそれぞれが約１ｋＤａから約１００ｋＤａの分子量を有している、請求項３４に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項３６】
４ＨＢアンタゴニストである、請求項１に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項３７】
１つ以上の翻訳後修飾、リンカー、ポリマーまたは生物学的に活性な分子を含んでいる、請求項３６に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項３８】
上記ポリマーが、水溶性ポリマーおよびポリ（エチレングリコール）からなる群から選択される部分を含んでいる、請求項３７に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項３９】
上記天然にコードされていないアミノ酸が、４ＨＢポリペプチドのサイトＩＩ領域内に存在している、請求項３６に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項４０】
４ＨＢ受容体の二量体化を抑制する、請求項３６に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項４１】
上記天然にコードされていないアミノ酸が糖部分を含んでいる、請求項１に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項４２】
請求項３に記載のレプチンポリペプチドであって、上記リンカー、ポリマーまたは生物学的に活性な分子が、糖部分を介して当該レプチンポリペプチドと連結されている、レプチンポリペプチド。
【請求項４３】
レプチンポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドを含んでおり、当該ポリヌクレオチドが少なくとも１つのセレクターコドンを含んでいる、単離された核酸。
【請求項４４】
上記セレクターコドンが、アンバーコドン、オーカーコドン、オパールコドン、ユニークコドン、レアコドンおよび４塩基コドンからなる群から選択される、請求項４３に記載の単離された核酸。
【請求項４５】
天然にコードされていないアミノ酸を含んでいる単離されたレプチンポリペプチドを、当該天然にコードされていないアミノ酸と反応する部分を含んでいるリンカー、ポリマーまたは生物学的に活性な分子と接触させることを包含している、請求項３に記載のレプチンポリペプチドを製造する、方法。
【請求項４６】
上記ポリマーが、水溶性ポリマーおよびポリ（エチレングリコール）からなる群から選択される部分を含んでいる、請求項４６に記載の方法。
【請求項４７】
上記天然にコードされていないアミノ酸が、カルボニル基、アミノオキシ基、ヒドラジド基、ヒドラジン基、セミカルバジド基、アジド基またはアルキン基を含んでいる、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
上記天然にコードされていないアミノ酸がカルボニル部分を含んでおり、上記リンカー、ポリマーまたは生物学的に活性な分子が、アミノオキシ部分、ヒドラジン部分、ヒドラジド部分またはセミカルバジド部分を含んでいる、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
上記アミノオキシ部分、ヒドラジン部分、ヒドラジド部分またはセミカルバジド部分が、アミド結合を介して上記リンカー、ポリマーまたは生物学的に活性な分子と連結されている、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
上記天然にコードされていないアミノ酸残基がアルキン部分を含んでおり、上記リンカー、ポリマーまたは生物学的に活性な分子がアジド部分を含んでいる、請求項４５に記載の方法。
【請求項５１】
上記天然にコードされていないアミノ酸残基がアジド部分を含んでおり、上記リンカー、ポリマーまたは生物学的に活性な分子がアルキン部分を含んでいる、請求項４６に記載の方法。
【請求項５２】
上記アジド部分またはアルキン部分が、アミド結合を介して上記リンカー、ポリマーまたは生物学的に活性な分子と連結されている、請求項４８に記載の方法。
【請求項５３】
上記ポリ（エチレングリコール）部分が約０．１ｋＤａから約１００ｋＤａの平均分子量を有している、請求項４６に記載の方法。
【請求項５４】
上記ポリ（エチレングリコール）部分が分枝状ポリマーまたはマルチアームポリマーである、請求項４６に記載の方法。
【請求項５５】
請求項１に記載のレプチンポリペプチド、および薬学的に受容可能な担体を含んでいる、組成物。
【請求項５６】
上記天然にコードされていないアミノ酸が水溶性ポリマーと連結されている、請求項５５に記載の組成物。
【請求項５７】
レプチンによって調節される疾患にかかっている患者を処置する方法であって、治療有効量の請求項５５に記載の組成物を当該患者に投与することを包含している、方法。
【請求項５８】
請求項４３に記載の核酸を含んでいる、細胞。
【請求項５９】
直交性のｔＲＮＡ合成酵素または直交性のｔＲＮＡを含んでいる、請求項５８に記載の細胞。
【請求項６０】
レプチンポリペプチドをコードしており、セレクターコドンを含んでいる単一または複数のポリヌクレオチドと、直交性のＲＮＡ合成酵素と、直交性のｔＲＮＡとを含んでいる細胞を、天然にコードされていないアミノ酸を含んでいる当該レプチンポリペプチドの発現を可能にする条件下において培養すること；ならびに当該レプチンポリペプチドを精製することを包含している、天然にコードされていないアミノ酸を含んでいるレプチンポリペプチドを製造する方法。
【請求項６１】
レプチンポリペプチドにおける天然に存在する任意のアミノ酸の１つ以上を、天然にコードされていないアミノ酸の１つ以上に置換することを包含している、レプチンポリペプチドの血清半減期または循環時間を増大させる方法。
【請求項６２】
ポリヌクレオチドによってコードされるレプチンポリペプチドであって、当該ポリヌクレオチドがセレクターコドンを含んでおり、当該レプチンポリペプチドが天然にコードされていないアミノ酸を少なくとも１つ含んでいる、レプチンポリペプチド。
【請求項６３】
上記天然にコードされていないアミノ酸が、リンカー、ポリマー、水溶性ポリマーまたは生物学的に活性な分子と連結されている、請求項６２に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項６４】
上記水溶性ポリマーがポリ（エチレングリコール）部分を含んでいる、請求項６３に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項６５】
上記天然にコードされていないアミノ酸が、カルボニル基、アミノオキシ基、ヒドラジド基、ヒドラジン基、セミカルバジド基、アジド基またはアルキン基を含んでいる、請求項６４に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項６６】
上記ポリ（エチレングリコール）部分が、約０．１ｋＤａから約１００ｋＤａの分子量を有している、請求項６４に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項６７】
上記ポリ（エチレングリコール）部分が分枝状ポリマーまたはマルチアームポリマーである、請求項６４に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項６８】
上記ポリ（エチレングリコール）部分が、約１ｋＤａから約１００ｋＤａの分子量を有している、請求項６７に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項６９】
請求項６３に記載のレプチンポリペプチド、および薬学的に受容可能な担体を含んでいる、組成物。
【請求項７０】
組換え宿主細胞におけるレプチンポリペプチドの発現を向上させるアミノ酸置換、アミノ酸付加またはアミノ酸欠失を１つ以上有している、レプチンポリペプチド。
【請求項７１】
水溶性ポリマーを含んでいるレプチンポリペプチドであって、当該水溶性ポリマーが、単一のアミノ酸において当該レプチンポリペプチドと共有結合によって連結されている、レプチンポリペプチド。
【請求項７２】
上記水溶性ポリマーがポリ（エチレングリコール）部分を含んでいる、請求項７２に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項７３】
上記水溶性ポリマーと共有結合によって連結されている上記アミノ酸が、天然にコードされていないアミノ酸である、請求項７２に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項７４】
上記天然にコードされていないアミノ酸がポリ（エチレングリコール）分子と連結されている、請求項１０に記載のレプチンポリペプチド。
【請求項７５】
少なくとも１つのリンカー、ポリマーまたは生物学的に活性な分子を含んでいるレプチンポリペプチドであって、当該リンカー、ポリマーまたは生物学的に活性な分子が、当該レプチンポリペプチド内にリボソームによって組み込まれている天然にコードされていないアミノ酸の官能基を介して、当該レプチンポリペプチドと結合されている、レプチンポリペプチド。
【請求項７６】
単一のＰＥＧが付加されている、請求項７５に記載のポリペプチド。
【請求項７７】
レプチンポリペプチドである、請求項７５に記載のポリペプチド。
【請求項７８】
天然にコードされていないアミノ酸に結合されているリンカー、ポリマーまたは生物学的に活性な分子を含んでいるポリペプチドであって、当該天然にコードされていないアミノ酸が、あらかじめ選択された部位において当該ポリペプチド内にリボソームによって組み込まれている、ポリペプチド。
【請求項７９】
レプチンポリペプチドである、請求項７８に記載のポリペプチド。
【請求項８０】
請求項１に記載のレプチンポリペプチドであって、当該レプチンポリペプチドの免疫原性を調節するアミノ酸置換、アミノ酸付加またはアミノ酸欠失を１つ以上有している、レプチンポリペプチド。
【請求項８１】
請求項１に記載のレプチンポリペプチドであって、当該レプチンポリペプチドの血清半減期または循環時間を調節するアミノ酸置換、アミノ酸付加またはアミノ酸欠失を１つ以上有している、レプチンポリペプチド。
【請求項８２】
レプチンポリペプチドの免疫原性を調節する方法であって、当該レプチンポリペプチドにおける天然に存在する任意のアミノ酸の１つ以上を、天然にコードされていないアミノ酸の１つ以上に置換することを包含している、方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８Ａ】

【図１８Ｂ】

【図１８Ｃ】

【図１８Ｄ】

【図１８Ｅ】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７Ａ】

【図２７Ｂ】

【図２８】

【図２９Ａ】

【図２９Ｂ】

【図３０Ａ】

【図３０Ｂ】

【図３１】

【図３２Ａ】

【図３２Ｂ】

【公表番号】特表２０１１−５２６７８０（Ｐ２０１１−５２６７８０Ａ）
【公表日】平成２３年１０月２０日（２０１１．１０．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５４６００８（Ｐ２０１０−５４６００８）
【出願日】平成２１年２月５日（２００９．２．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０３３２７７
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１００２５５
【国際公開日】平成２１年８月１３日（２００９．８．１３）
【出願人】（５０８０４８４８１）アンブルックス，インコーポレイテッド (22)
【氏名又は名称原語表記】Ａｍｂｒｘ，Ｉｎｃ．
【住所又は居所原語表記】１０９７５　Ｎｏｒｔｈ　Ｔｏｒｒｅｙ　Ｐｉｎｅｓ　Ｒｏａｄ，Ｓｕｉｔｅ　１００，Ｌａ　Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ　９２０３７，Ｕｎｉｔｅｄ　Ｓｔａｔｅｓ　ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａ
【Ｆターム（参考）】