免疫賦活用合剤および方法
本発明は、免疫賦活用合剤、ならびにＴＬＲ８介在性生物活性を増強する方法を提供する。一般に、免疫賦活用合剤は、ＴＬＲ８アゴニストと、ＴＬＲ８介在性生物活性を増強するのに有効な量の免疫賦活性オリゴヌクレオチドとを含む。本発明はまた、免疫細胞においてＴＬＲ８介在性生物活性を誘導する方法を提供する。一般に、この方法は、ＴＬＲ８アゴニストと、ＴＬＲ８介在性生物活性を増強するのに有効な量の免疫賦活性オリゴヌクレオチドとを含む免疫賦活用合剤と、免疫細胞を接触させることを含む。場合によっては、免疫賦活用合剤は、ＴＬＲ８介在性生物活性の相乗作用的な増大を提供する。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
免疫系の特定の鍵となる側面を刺激することによって、また、特定の他の側面を抑制することによって作用する、新規の薬剤化合物を発見することは、近年、主要な取り組みであり、著しく成功してきている（例えば、米国特許第６，０３９，９６９号および同第６，２００，５９２号を参照のこと）。これらの化合物（本明細書では免疫反応調整剤（ＩＲＭ）と称する）は、選択されたサイトカイン生合成、共刺激性の分子の誘導、および抗原提示能力の増大を誘導するＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）として知られている基本的な免疫系メカニズムを介して作用すると考えられる。これらは、非常に様々な病気および状態を治療するために有用である可能性がある。例えば、特定のＩＲＭは、ウイルス性の病気（例えばヒトパピローマウイルス、肝炎、ヘルペス）、新生物（例えば基底細胞癌、扁平上皮癌、光線性角化症、黒色腫）、およびＴH２介在性の病気（例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎）、自己免疫性の病気（例えば多発性硬化症）を治療するために有用である可能性があり、また、ワクチンの補助剤としても有用である。
【０００２】
ＩＲＭ化合物の多くは、有機小分子であるイミダゾキノリンアミン誘導体である（例えば、米国特許第４，６８９，３３８号を参照のこと）が、多くの他の化合物クラスも知られており（例えば、米国特許第５，４４６，１５３号；同第６，１９４，４２５号；および同第６，１１０，９２９号；ならびに国際公開第ＷＯ２００５／０７９１９５号を参照のこと）、今でもより多くのものが発見されている。
【０００３】
特定の小分子ＩＲＭ（ｓｍＩＲＭ）は、強力な免疫調節活性（例えば抗ウイルスおよび抗腫瘍活性）を持っている。特定のｓｍＩＲＭは、サイトカインの産生および分泌を調節する。例えば、特定のｓｍＩＲＭ化合物は、サイトカイン（例えば、Ｉ型インターフェロン、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＭＩＰ−１、および／またはＭＣＰ−１など）の産生および分泌を誘導する。別の例として、特定のｓｍＩＲＭ化合物は、特定のＴH２サイトカイン（ＩＬ−４およびＩＬ−５など）の産生および分泌を妨げる可能性がある。さらに、特定のｓｍＩＲＭ化合物は、ＩＬ−１およびＴＮＦを抑えると言われている（米国特許第６，５１８，２６５号）。
【０００４】
例えばＣｐＧオリゴジヌクレオチド（ＯＤＮ、例えば、米国特許第６，１９４，３８８号を参照のこと）を含めたオリゴヌクレオチドなどの他のＩＲＭは、より大きな分子量を有する。構造的に異なる少なくとも３つのクラスの合成ＣｐＧ ＯＤＮが記載されている。ＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮ（Ｋ型ＣｐＧ ＯＤＮとも呼ばれる）は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の分化およびＢ細胞の増殖を誘導する可能性がある。ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮ（Ｄ型ＣｐＧ ＯＤＮとも呼ばれる）は、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）からのインターフェロン−α（ＩＦＮ−α）の分泌を直接的に誘導する可能性があり、ＡＰＣのその後の成熟を間接的に助ける。ＣｐＧ−Ｃ ＯＤＮは、Ｂ細胞がインターロイキン６（ＩＬ−６）を分泌するのを刺激する、また、ｐＤＣがＩＦＮ−αを産生するのを刺激する可能性があり、したがって、ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮとＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮのいくつかの刺激性の特性が組み合わされている。
【０００５】
ＩＲＭについての大いなる治療的可能性を考慮すると、既に行われた重要な研究にもかかわらず、その使用および治療的利益を拡大することが、実質的に必要であり続けている。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
特定のオリゴヌクレオチド配列が、特定のＩＲＭ化合物の特定の免疫賦活活性を増強する可能性があることが判明した。
【０００７】
したがって、本発明は、ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドとを一般に含む免疫賦活用合剤を提供する。
【０００８】
別の態様では、本発明はまた、免疫細胞においてＴＬＲ８介在性生物活性を誘導する方法を提供する。概して、この方法は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずにＴＬＲ８アゴニストと免疫細胞を接触させた場合よりも大きな程度に細胞のＴＬＲ８介在性生物活性を増大させるのに有効な量の免疫賦活性オリゴヌクレオチドとＴＬＲ８アゴニストとを含む免疫賦活用合剤と、免疫細胞を接触させることを含む。
【０００９】
本発明の他の様々な特徴および効果は、以下の詳細な説明、実施例、請求の範囲、および添付の図面を参照して容易に明白になるはずである。明細書全体を通して、いくつかの箇所では、実施例の列挙を通して指針が提供される。それぞれの例では、列挙されたリストは、代表的な群としてのみ用いられ、排他的なリストと解釈するべきでない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明は、特定のオリゴヌクレオチド配列が、用量に依存する方式で、特定のＴＬＲ８介在性生物活性の誘導を増強する可能性があるという知見を利用する。
【００１１】
一態様では、本発明は、ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドとを含む免疫賦活用合剤を提供する。それぞれの成分は、それ自体で、特定の免疫賦活活性を持つ可能性がある。多くの場合、ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドとの合剤は、いずれかの成分が単独で提供するよりも大きな免疫賦活活性を提供することができる。場合によっては、ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドとの合剤は、例えば、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずに投与されるＴＬＲ８アゴニストによって誘導される場合と比較して、少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性の２倍の、３倍の、５倍の、あるいは、さらに大きな増加を提供することができる。特定の場合では、成分の合剤は、相乗作用的な免疫賦活活性を提供することができる。
【００１２】
別の態様では、本発明は、免疫細胞のＴＬＲ８介在性生物活性の誘導を増強する方法を提供する。実際には、この方法は、例えば、ＴＬＲ８介在性生物活性に関与する、特定の免疫学的処理の有効性を向上させるために使用される可能性がある。こうした処置としては、例えば、治療用または予防用ワクチンが含まれる可能性がある。したがって、例えば、本発明は、ワクチンの有効性を向上させるのに十分に−さらには、以前に効果がないと考えられていたワクチンを有効であると考えられようにする程度まで−ワクチンによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性を増強することができる。
【００１３】
あるいは、本発明は、より少量の免疫学的組成物の成分（例えば抗原またはワクチンのアジュバント）を使用する、状態の有効な治療を可能にすることができる。これは、特定の成分が、所望の免疫応答を産生するのに有用である一方、高価である、得るのが困難である、あるいは望ましくない副作用を生じる場合に望ましい可能性がある。したがって、本発明は、以前には、例えば、（ａ）治療の成分の費用、（ｂ）すべての成分の入手可能性、および／または（ｃ）有効な免疫反応を生じるのに必要であると以前に考えられており、その上望ましくないレベルの副作用を生じていた成分（例えば抗原）の量、が原因で臨床的および／または商業上望ましくないと考えられていた特定の免疫学的治療を、臨床的および／または商業的に現実性があるものにすることができる。
【００１４】
この発明の目的では、以下の用語は、以下の通りに記載される意味をもつものとする。
【００１５】
「アゴニスト」は、生物活性を誘導するために受容体（例えばＴＬＲ）と組み合わせることができる化合物を指す。アゴニストは、受容体に直接的に結合するリガンドである可能性がある。あるいは、アゴニストは、例えば、（ａ）受容体に直接的に結合する別の分子と共に複合体を形成すること、または（ｂ）別の化合物の改変をもたらし、その結果、他の化合物が、受容体に直接的に結合すること（例えば細胞のシグナル伝達）によって間接的に受容体と組み合わされる可能性もある。アゴニストは、特定のＴＬＲのアゴニスト（例えばＴＬＲ８アゴニスト）、あるいはＴＬＲの特定の組み合わせ（例えば、ＴＬＲ７／８アゴニスト−ＴＬＲ７とＴＬＲ８両方のアゴニスト）と称される可能性がある。
【００１６】
「アゴニスト−受容体相互作用」は、例えば、結合、複合体を形成すること、または細胞活性を誘導する生化学的改変などの、任意の直接的または間接的な相互作用を指す。
【００１７】
「免疫細胞」は、免疫系の細胞、すなわち、免疫性の反応が、生得的であるか獲得されたものか、体液性であるか細胞介在性であるかどうかに関わらず、免疫反応の産生または維持に直接的または間接的に関与する細胞を指す。
【００１８】
「免疫賦活性オリゴヌクレオチド」は、ＴＬＲ８介在性生物活性を測定可能に増強することが可能であるオリゴヌクレオチド配列を指す。
【００１９】
「誘導する」、およびその変化形は、生物活性の任意の測定可能な増大を指す。例えば、特定のサイトカインの誘導は、サイトカインの産生の増大を指す。
【００２０】
「抑制する」、およびその変化形は、生物活性の任意の測定可能な低下を指す。例えば、特定のサイトカインの抑制は、サイトカインの産生の低下を指す。抑制の程度は、通常レベルの活性に対する割合として特徴づけることができる。
【００２１】
「ＩＲＭ化合物」は一般に、ＩＲＭ反応性の細胞に与えられたときに、１種または複数の免疫調節性分子、例えば、サイトカインまたは共刺激性のマーカーのレベルを変化させる化合物を指す。代表的なＩＲＭ化合物としては、以下で述べられる有機小分子、プリン誘導体、小さな複素環化合物、アミド誘導体、およびオリゴヌクレオチド配列が挙げられる。
【００２２】
「選択的」、およびその変化形は、任意の程度までの、生物活性に対する差別的な影響を有することを指す。特定のＴＬＲを介して選択的に生物活性を調節するアゴニストは、ＴＬＲ選択的アゴニストである可能性がある。ＴＬＲ選択性は、特定のＴＬＲに関して（例えば、ＴＬＲ８選択的）、あるいはＴＬＲの特定の組み合わせに関して（例えばＴＬＲ７／９選択的）記載されている可能性がある。ＴＬＲ選択的（例えば、ＴＬＲ８選択的）化合物は、示されたＴＬＲによって仲介される生物活性を独占的に誘導する（すなわち、ＴＬＲ特異的である）可能性がある、あるいは、示されたＴＬＲを介して仲介される活性を誘導するだけでなく、複数のＴＬＲを介して仲介される生物活性を、他の任意のＴＬＲよりも大きな程度に誘導する可能性がある（すなわち、ＴＬＲ優勢、例えばＴＬＲ８優勢など）。
【００２３】
「ｓｍＩＲＭ」は一般に、小分子ＩＲＭ化合物、すなわち約１キロダルトン（ｋＤａ）以下の分子量を有するＩＲＭ化合物を指す。
【００２４】
「相乗作用的」、およびその変化形は、組み合わされた免疫学的作用が、そのそれぞれの作用の合計を超えるような、ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドとの相互作用を指す。
【００２５】
「ＴＬＲ介在性」は、ＴＬＲ機能に直接的または間接的に起因する生物活性（例えばサイトカイン産生）を指す。特定の生物活性は、特定のＴＬＲによって仲介されるもの（例えば、「ＴＬＲ８介在性」）を指す可能性がある。
【００２６】
また、本明細書では、終点による数値の範囲の説明は、その範囲内に包含されるすべての数を含む（例えば、１〜５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、５、などを含む）。
【００２７】
特定の化合物のＴＬＲアゴニズムは、任意の適切な方式で評価することができる。例えば、試験化合物のＴＬＲアゴニズムを検出するのに適したアッセイおよび組換え細胞系は、例えば、米国特許出願公開第２００４／００１４７７９号、同第２００４／０１３２０７９号、同第２００４／０１６２３０９号、同第２００４／０１７１０８６号、同第２００４／０１９１８３３号、および同第２００４／０１９７８６５号に記載されている。
【００２８】
用いられる特定のアッセイにかかわらず、化合物を用いるアッセイを実施することによって、特定のＴＬＲによって仲介される、特定の生物活性の閾値増加が少なくとももたらされる場合、化合物は、特定のＴＬＲのアゴニストと特定することができる。逆に、特定のＴＬＲによって仲介される生物活性を検出するために設計されたアッセイを実施するために使用されるとき、化合物が、生物活性の閾値増加を誘導できない場合、その化合物は、特定のＴＬＲのアゴニストとして作用しないと特定される可能性がある。別段の指示がない限り、生物活性の増大は、適切な対照において観察されたものと同じ生物活性の増大を指す。アッセイは、適切な対照と同時に実施してもよいし、しなくてもよい。実験を伴って、当業者は、特定のアッセイ（例えば、特定のアッセイ条件下で、適切な対照において観察される値の範囲）を熟知することが可能であり、対照実験を実施することは、特定のアッセイにおいて化合物のＴＬＲアゴニズムを決定するのに必ずしも必要である可能性はない。
【００２９】
特定の化合物が所与のアッセイにおいて特定のＴＬＲのアゴニストであるかないかを決定するためのＴＬＲ介在性生物活性の厳密な閾値の増大は、これらに限定されないが、アッセイの終点として観察される生物活性、アッセイの終点を測定または検出するために使用される方法、アッセイの信号対雑音比、アッセイの精度、および複数のＴＬＲに対する化合物のアゴニズムを決定するために同じアッセイが使用されるかどうかを含めて、当技術分野で知られた因子に応じて変動する可能性がある。したがって、化合物を、可能性のあるすべてのアッセイのための特定のＴＬＲのアゴニストまたは非アゴニストと特定するために必要とされるＴＬＲ介在性生物活性の閾値増加を広く記載することは、実際的ではない。しかし、当業者は、こうした因子を十分に考慮することによって、適切な閾値を容易に決定することができる。
【００３０】
細胞に形質移入されるＴＬＲのアゴニストとして化合物を特定するために、化合物が、例えば約１μＭから約１０μＭの濃度で提供されるときは、発現可能なＴＬＲ構造遺伝子で形質移入されたＨＥＫ２９３細胞を用いるアッセイは、例えば、ＴＬＲ介在性生物活性（例えばＮＦ−κＢ活性）の少なくとも３倍の増加という閾値を使用する可能性がある。しかし、異なる閾値および／または異なる濃度範囲も、特定の状況では適切である可能性がある。また、異なる閾値が、異なるアッセイのために適切である可能性がある。
【００３１】
一態様では、本発明は、免疫細胞のＴＬＲ８介在性生物活性を増強する方法を提供する。場合によっては、例えば、ＴＬＲ８アゴニストは、少なくとも１種のさらなるＴＬＲのアゴニスト（例えばＴＬＲ７、いわゆるＴＬＲ７／８アゴニスト）である可能性があり、したがって、通常、ＴＬＲ８介在性生物活性と、１つまたは複数のさらなるＴＬＲによって介在される生物活性（例えばＴＬＲ７介在性生物活性）とを誘導する可能性がある。本発明の実施は、ＴＬＲ８介在性生物活性を増強する、場合によっては、別の（例えばＴＬＲ８でない）ＴＬＲによって仲介される、化合物によって誘導される生物活性を、制限する−さらには排除する−ために使用される可能性がある。
【００３２】
したがって、この方法は、混合型のＴＬＲアゴニズムを持つ化合物が、よりＴＬＲ選択的化合物らしく作用するように、ＴＬＲ８介在性生物活性を増強するために使用することができる。場合によっては、この化合物は、本質的にＴＬＲ８優勢な化合物として作用する可能性がある。特定の場合では、この方法は、該化合物が、本質的にＴＬＲ８特異的な化合物として作用するように、この化合物が別のＴＬＲによって仲介される生物活性を誘導する程度をさらに低下させる可能性がある。例えば、ＴＬＲ７／８アゴニストのＴＬＲ７介在性生物活性を低下させる−さらには排除する−ことによって、該化合物を、本質的にＴＬＲ８選択的アゴニストとして（例えば、ＴＬＲ８優勢なアゴニストまたはＴＬＲ８特異的アゴニストとして）作用するようにすることができる。
【００３３】
一例として、あるＴＬＲ８介在性生物活性は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の産生を含む可能性があり、これは、特定の状態（例えば特定のガン（例えば黒色腫））を治療するために有益である可能性がある。一方、ＴＬＲ７介在性生物活性は、インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）の産生を含む可能性があり、これは、特定の状態（例えば紅斑性狼瘡）を悪化させる可能性がある。おそらく、該化合物によって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の有効性および／または程度のため、それだけでなく、おそらく、他の望ましい特性（例えば、低い毒性、調製および送達が容易であること（調剤性（ｆｏｒｍｕｌａｂｉｌｉｔｙ））、費用、安定性（例えば保存寿命）、生体利用効率、代謝半減期など）のため、特定のＴＬＲ７／８アゴニストは、特定のガン（例えば黒色腫）を治療するのに適切であるものと特定される可能性がある。しかし、紅斑性狼瘡を煩う対象に投与される場合、該化合物によって誘導されるＴＬＲ７介在性生物活性（ＩＦＮ−α産生）は、紅斑性狼瘡と診断された患者におけるガンの治療としてＴＬＲ７／８化合物を考慮するのを妨げる可能性がある程度まで、紅斑性狼瘡を悪化させる可能性がある。
【００３４】
本発明を実施することで、対象が、ＴＬＲ７／８化合物を用いて、第２の状態（例えば紅斑性狼瘡）を耐えられない程度まで悪化させることなく、ある状態（例えばガン）を治療するという利益を享受することが可能になる。ＴＬＲ７／８アゴニストと共に、十分な量の免疫賦活性オリゴヌクレオチドを投与することによって、ガンの治療を提供するためのＴＬＲ７／８化合物によって、十分なＴＬＲ８介在性生物活性が誘導される可能性があるのに対して、ＴＬＲ７／８化合物によって誘導されるＴＬＲ７介在性生物活性は、許容されるレベルまで低下させられる−場合によっては、ＴＬＲ７介在性生物活性が完全に排除される−可能性がある。したがって、上の例では、ＴＬＲ７／８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドの合剤を投与することによって、ガンを治療するのに十分なＴＮＦを誘導することができ、かつＴＬＲ７／８アゴニストによって誘導されるＩＦＮ−αの量を十分に低下させることができ、その結果、ガンの治療は進展する可能性があり、一方で、ＴＬＲ７／８アゴニストを投与することから生じるであろう紅斑性狼瘡の悪化が制限される−さらには排除される−可能性がある。
【００３５】
別の態様では、本発明は、ＴＬＲ８介在性生物活性を増強するのに有効である免疫賦活用合剤を提供する。場合によっては、この合剤は、ＴＬＲ８アゴニストと、ＴＬＲ８アゴニストが、少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を誘導する程度を増大させるのに有効な量の免疫賦活性オリゴヌクレオチドとを含むことができる。ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、単一の調合物中に存在してもよいし、２つの成分が、別々の調合物中に存在してもよい。本発明を実施するのに使用するのに適した調合物を、以下に詳細に記載する。
【００３６】
本発明の実施の際に調節され得る例示的なＴＬＲ８介在性生物活性としては、例えば、共刺激性マーカー（例えばＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、など）の発現の誘導、表面マーカー（例えばＣＣＲ７）の発現の誘導、ＮＦ−κＢの活性化、細胞接着分子（ＩＣＡＭ（例えばＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、Ｉ−ＣＡＭ−３、など））の誘導、抗原提示能力の増大、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）の成熟、Ｂリンパ球の増殖、および特定のサイトカインの誘導が挙げられる。ＴＬＲ８介在性生物活性によって誘導されるサイトカインとしては、例えば、ＴＮＦ−α、Ｉ型インターフェロン（例えば、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−ω、など）、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＭＩＰ−１、ＭＣＰ−１、またはこれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【００３７】
ＴＬＲ８アゴニストは、免疫賦活性オリゴヌクレオチドと組み合わせて投与される場合に、少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を誘導することが可能である、あるいは潜在的に可能である任意の化合物である。場合によっては、ＴＬＲ８アゴニストは、ＩＲＭ化合物である可能性がある。適切なＩＲＭ化合物は、以下に詳細に記載する。
【００３８】
免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、任意の適切なオリゴヌクレオチド配列−すなわち、ＴＬＲ８アゴニストによって誘導される少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を増強することが可能なオリゴヌクレオチド配列である可能性がある。ある実施形態では、適切な免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、例えば、ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮ、ＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮ、またはＣｐＧ−Ｃ ＯＤＮ配列（図１〜６）などの、ＣｐＧ ＯＤＮ配列を含有する可能性がある。しかし、他のオリゴヌクレオチド配列も適切である可能性がある。例えば、ポリ（Ａ）、ポリ（Ｃ）、およびポリ（Ｔ）オリゴヌクレオチドは、ＴＬＲ８介在性生物活性を増強することが可能であるものと特定されている（図７〜９）。
【００３９】
ある実施形態では、免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、特定の化合物（例えば特定のＩＲＭ化合物）が、オリゴヌクレオチド配列に挿入するのを可能にする、積み重ね型（ｓｔａｃｋｅｄ）二次構造を有する可能性がある。オリゴヌクレオチドへの化合物の挿入によって、ＴＬＲ８と優先的に相互作用する複合体の形成がもたらされる可能性がある。したがって、測定可能なＴＬＲ８アゴニズムを通常を持たないであろう特定の化合物が、免疫賦活性オリゴヌクレオチドと複合体形成された場合、ＴＬＲ８アゴニストとして作用する可能性がある。また、混合型のＴＬＲを通常持つであろう化合物が、免疫賦活性オリゴヌクレオチドと複合体形成された場合、よりＴＬＲ８選択的アゴニスト様に作用する。
【００４０】
特定のＩＲＭは、例えば、以下に開示されているものなどの有機小分子（例えば、タンパク質、ペプチドなどの大きな生体分子とは対照的に、分子量が約１０００ダルトン未満、場合によっては約５００ダルトン未満のｓｍＩＲＭ）である：米国特許第４，６８９，３３８号；同第４，９２９，６２４号；同第５，２６６，５７５号；同第５，２６８，３７６号；同第５，３４６，９０５号；同第５，３５２，７８４号；同第５，３８９，６４０号；同第５，４４６，１５３号；同第５，４８２，９３６号；同第５，７５６，７４７号；同第６，１１０，９２９号；同第６，１９４，４２５号；同第６，３３１，５３９号；同第６，３７６，６６９号；同第６，４５１，８１０号；同第６，５２５，０６４号；同第６，５４１，４８５号；同第６，５４５，０１６号；同第６，５４５，０１７号；同第６，５７３，２７３号；同第６，６５６，９３８号；同第６，６６０，７３５号；同第６，６６０，７４７号；同第６，６６４，２６０号；同第６，６６４，２６４号；同第６，６６４，２６５号；同第６，６６７，３１２号；同第６，６７０，３７２号；同第６，６７７，３４７号；同第６，６７７，３４８号；同第６，６７７，３４９号；同第６，６８３，０８８号；同第６，７５６，３８２号；同第６，７９７，７１８号；および同第６，８１８，６５０号；米国特許出願公開第２００４／００９１４９１号；同第２００４／０１４７５４３号；および同第２００４／０１７６３６７号；および国際公開第ＷＯ２００５／１８５５１号、同第ＷＯ２００５／１８５５６号、同第ＷＯ２００５／２０９９９号、同第ＷＯ２００５／０３２４８４号、同第ＷＯ２００５／０４８９３３号、同第ＷＯ２００５／０４８９４５号、同第ＷＯ２００５／０５１３１７号、同第ＷＯ２００５／０５１３２４号、同第ＷＯ２００５／０６６１６９号、同第ＷＯ２００５／０６６１７０号、同第ＷＯ２００５／０６６１７２号、同第ＷＯ２００５／０７６７８３号、および同第ＷＯ２００５／０７９１９５号。
【００４１】
小分子ＩＲＭのさらなる例としては、特定のプリン誘導体（米国特許第６，３７６，５０１号および同第６，０２８，０７６号に記載されているものなど）、特定のイミダゾキノリンアミド誘導体（米国特許第６，０６９，１４９号に記載されているものなど）、特定のイミダゾピリジン誘導体（米国特許第６，５１８，２６５号に記載されているものなど）、特定のベンズイミダゾール誘導体（米国特許第６，３８７，９３８号に記載されているものなど）、５員の窒素含有複素環と縮合した４−アミノピリミジンの特定の誘導体（米国特許第６，３７６，５０１号；同第６，０２８，０７６号、および同第６，３２９，３８１号に；また国際公開第ＷＯ０２／０８９０５号に記載されているアデニン誘導体など）、ならびに特定の３−β−Ｄ−リボフラノシルチアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン誘導体（米国特許出願公開第２００３／０１９９４６１号に記載されているものなど）が挙げられる。
【００４２】
他のＩＲＭとしては、オリゴヌクレオチド配列などの大きな生体分子が挙げられる。特定のＩＲＭオリゴヌクレオチド配列は、シトシン−グアニンジヌクレオチド（ＣｐＧ）を含有し、これは、例えば、米国特許第６，１９４，３８８号；同第６，２０７，６４６号；同第６，２３９，１１６号；同第６，３３９，０６８号；および同第６，４０６，７０５号に記載されている。特定のＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、例えば、米国特許第６，４２６，３３４号および同第６，４７６，０００号に記載されているものなどの、合成の免疫賦活構造モチーフを含む可能性がある。他のＩＲＭヌクレオチド配列はＣｐＧ配列を欠いており、これは、例えば国際公開第ＷＯ００／７５３０４号に記載されている。
【００４３】
他のＩＲＭとしては、リン酸アミノアルキルグルコサミニド（ＡＧＰ）などの生体分子が挙げられ、これは、例えば、米国特許第６，１１３，９１８号；同第６，３０３，３４７号；同第６，５２５，０２８号；および同第６，６４９，１７２号に記載されている。
【００４４】
別段の指示がない限り、化合物に対する言及には、任意の異性体（例えばジアステレオマーまたはエナンチオマー）、塩、溶媒和化合物、多形体、などを含めて、任意の薬学的に許容される形の化合物が含まれ得る。特に、化合物が光学活性である場合、化合物に対する言及には、化合物の各々のエナンチオマーならびにエナンチオマーのラセミ混合物が含まれ得る。
【００４５】
本発明のある実施形態では、ＩＲＭ化合物としては、５員の窒素含有複素環と縮合した２−アミノピリジン、または５員の窒素含有複素環と縮合した４−アミノピリミジンを挙げることができる。
【００４６】
本発明で使用するのに適したＩＲＭ化合物としては、５員の窒素含有複素環と縮合した２−アミノピリジンを有する化合物が含まれる。こうした化合物としては、例えば、これらに限定されないが、例えばアミド置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換イミダゾキノリンアミン、複素環エーテル置換イミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換イミダゾキノリンアミン、ヒドロキシルアミン置換イミダゾキノリンアミン、オキシム置換イミダゾキノリンアミン、６−、７−、８−、または９−アリール、ヘテロアリール、アリールオキシまたはアリールアルキレンオキシ置換イミダゾキノリンアミン、およびイミダゾキノリンジアミンなどの置換されたイミダゾキノリンアミンを含めたイミダゾキノリンアミン；これらに限定されないが、アミド置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、尿素置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、複素環エーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、尿素置換テトラヒドロイミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、ヒドロキシルアミン置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、オキシム置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、およびテトラヒドロイミダゾキノリンジアミンを含めたテトラヒドロイミダゾキノリンアミン；これらに限定されないが、アミド置換イミダゾピリジンアミン、スルホンアミド置換イミダゾピリジンアミン、尿素置換イミダゾピリジンアミン、アリールエーテル置換イミダゾピリジンアミン、複素環エーテル置換イミダゾピリジンアミン、アミドエーテル置換イミダゾピリジンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾピリジンアミン、尿素置換イミダゾピリジンエーテル、およびチオエーテル置換イミダゾピリジンアミンを含めたイミダゾピリジンアミン；１，２−架橋イミダゾキノリンアミン；６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン；イミダゾナフチリジンアミン；テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン；オキサゾロキノリンアミン；チアゾロキノリンアミン；オキサゾロピリジンアミン；チアゾロピリジンアミン；オキサゾロナフチリジンアミン；チアゾロナフチリジンアミン；ピラゾロピリジンアミン；ピラゾロキノリンアミン；テトラヒドロピラゾロキノリンアミン；ピラゾロナフチリジンアミン；テトラヒドロピラゾロナフチリジンアミン；ならびにピリジンアミン、キノリンアミン、テトラヒドロキノリンアミン、ナフチリジンアミン、またはテトラヒドロナフチリジンアミンと縮合した１Ｈ−イミダゾ二量体が挙げられる。
【００４７】
特定の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、またはチアゾロナフチリジンアミンであり得る。
【００４８】
特定の他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、置換されたイミダゾキノリンアミン、テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、チアゾロナフチリジンアミン、ピラゾロピリジンアミン、ピラゾロキノリンアミン、テトラヒドロピラゾロキノリンアミン、ピラゾロナフチリジンアミン、またはテトラヒドロピラゾロナフチリジンアミンであり得る。
【００４９】
本明細書では、置換されたイミダゾキノリンアミンは、アミド置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換イミダゾキノリンアミン、複素環エーテル置換イミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換イミダゾキノリンアミン、ヒドロキシルアミン置換イミダゾキノリンアミン、オキシム置換イミダゾキノリンアミン、６−、７−、８−、または９−アリール、ヘテロアリール、アリールオキシ、またはアリールアルキレンオキシ置換イミダゾキノリンアミン、あるいはイミダゾキノリンジアミンを指す。本明細書では、置換されたイミダゾキノリンアミンは、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンおよび４−アミノ−α，α−ジメチル−２−エトキシメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノールを、特別かつ明確に除外する。
【００５０】
特定の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えば２−プロピルチアゾロ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンまたはＮ−［３−（４−アミノ−２−プロピルチアゾロ［４，５−ｃ］キノリン−７−イル）フェニル］メタンスルホンアミドなどのチアゾロキノリンアミンであり得る。
【００５１】
適切なＩＲＭ化合物としてはまた、プリン誘導体、イミダゾキノリンアミド誘導体、ベンズイミダゾール誘導体、アデニン誘導体、リン酸アミノアルキルグルコサミニド、および上述のオリゴヌクレオチド配列を挙げることができる。
【００５２】
免疫賦活用合剤は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを含む、単一の調合物で提供される可能性がある。他の場合には、免疫賦活用合剤は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドとＩＲＭ化合物とを含む可能性がある。あるいは、免疫賦活用合剤は、複数の調合物を含む可能性があり、その場合、ＩＲＭ化合物と免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、同じ調合物中に、あるいは異なる調合物中に提供される可能性がある。本発明の治療用合剤と共に使用するのに適した調合物は、以下に詳細に記載する。
【００５３】
免疫賦活用合剤は、任意の調合物、または対象への投与に適した調合物の組み合わせ中に提供される可能性がある。適切なタイプの調合物は、例えば、米国特許第５，７３６，５５３号；米国特許第５，２３８，９４４号；米国特許第５，９３９，０９０号；米国特許第６，３６５，１６６号；米国特許第６，２４５，７７６号；米国特許第６，４８６，１８６号；欧州特許ＥＰ ０ ３９４ ０２６号；および国際公開第ＷＯ０３／０４５３９１号に記載されている。調合物は、これらに限定されないが、溶液、懸濁液、エマルジョン、または任意の形の混合物を含めて任意の適切な形で提供される可能性がある。調合物は、薬学的に許容される任意の添加剤、担体、または賦形剤を含む可能性がある。例えば、調合物は、例えばクリーム、軟膏、エアロゾル調合物、フロンガスを使用しない（ｎｏｎ−ａｅｒｏｓｏｌ）スプレー、ジェル、ローション、錠剤、エリキシルなどの従来の投薬形態で送達される可能性がある。調合物は、これらに限定されないが、アジュバント、皮膚浸透促進剤、着色料、矯味剤、香料、保湿剤、増粘剤などを含めて、１種または複数の添加物をさらに含む可能性がある。
【００５４】
調合物は、任意の適切な方式で、例えば、経口的または非経口的に投与される可能性がある。本明細書では、「経口的に」は、経口摂取を含めて、消化管を介する投与を指す。「非経口的に」は、例えば、静脈内、筋肉内、経皮、皮下、経粘膜（例えば、吸入によって）、あるいは局所的などの、消化管を介する以外の投与を指す。
【００５５】
本発明を実施するのに適した調合物の組成は、これらに限定されないが、免疫賦活性オリゴヌクレオチドの物理的および化学的性質、担体の性質、意図される投薬レジメン、対象の免疫系の状態（例えば、抑制される、損なわれる、刺激される）、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを投与する方法、免疫賦活性オリゴヌクレオチド（もしあれば）と共に投与される任意のＴＬＲ８アゴニストの性質および効力、および調合物が投与される種を含めて、当技術分野で知られた因子に応じて変動する可能性がある。したがって、可能性のあるすべての用途に有効な調合物の組成を広く記載することは、実際的ではない。しかし、当業者は、こうした因子を十分に考慮することによって、適切な調合物を容易に決定することができる。
【００５６】
ある実施形態では、例えば、適切な調合物は、約０．０００１％から約１０％の免疫調節性オリゴヌクレオチドを含む可能性があるが、ある実施形態では、調合物は、この範囲外の濃度の免疫調節性オリゴヌクレオチドを含む可能性がある。例えば、調合物は、約０．０１％から約１％の免疫調節性オリゴヌクレオチドを含む可能性がある。
【００５７】
ある実施形態では、本発明の方法は、例えば、対象に対して約０．０００１％から約１０％の調合物で、ＩＲＭを対象に投与することを含む可能性があるが、ある実施形態では、ＩＲＭ化合物は、この範囲外の濃度のＩＲＭ化合物を提供する調合物を使用して投与される可能性がある。特定の実施形態では、該方法は、約０．０１％から約５％のＩＲＭ化合物を含む調合物、例えば、約０．１％から約０．５％のＩＲＭ化合物を含む調合物を対象に投与することを含む。
【００５８】
免疫細胞のＴＬＲ８介在性生物活性を増強するのに有効な免疫賦活性オリゴヌクレオチドの量は、少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を増大するのに十分な量である。有効となるために必要とされる免疫賦活性オリゴヌクレオチドの厳密な量は、例えば免疫賦活性オリゴヌクレオチドの物理的および化学的性質、担体の性質、意図される投薬レジメン、対象の免疫系の状態（例えば、抑制される、損なわれる、刺激される）、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを投与する方法、免疫賦活性オリゴヌクレオチドと共に投与されるＴＬＲ８アゴニストの効力、および調合物が投与される種などの、当技術分野で知られた因子に応じて変動する可能性がある。したがって、可能性のあるすべての用途に有効な量の免疫賦活性オリゴヌクレオチドを構成する量を広く記載することは、実際的ではない。しかし、当業者は、こうした因子を十分に考慮することによって、適切な量を容易に決定することができる。
【００５９】
ある実施形態では、本発明の方法は、例えば約１００ｎｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇの量を対象に提供するのに十分な免疫賦活性オリゴヌクレオチドを投与することを含むが、ある実施形態では、この方法は、この範囲外の用量の免疫賦活性オリゴヌクレオチドを投与することによって実施される可能性がある。これらの実施形態のうちのいくつかでは、この方法は、約１０μｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇの量、例えば約１００μｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇの量を対象に提供するのに十分な免疫賦活性オリゴヌクレオチドを投与することを含む。
【００６０】
本発明を実施するのに有効であるＴＬＲ８アゴニストの量は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドと組み合わせて、少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を誘導することが可能である量である。したがって、場合によっては、ＴＬＲ８アゴニストは、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずに投与される場合には通常、ＴＬＲ８介在性生物活性を誘導する可能性はないが、免疫賦活性オリゴヌクレオチドと共に提供される場合には、ＴＬＲ８介在性生物活性を誘導することが可能である量で提供される可能性がある。
【００６１】
ある実施形態では、本発明の方法は、例えば、約１００ｎｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇの量を対象に提供するのに十分なＴＬＲ８アゴニストを投与することを含むが、ある実施形態では、この方法は、この範囲外の用量のＴＬＲ８アゴニストを投与することによって実施される可能性がある。これらの実施形態のうちのいくつかでは、この方法は、約１０μｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇの量、例えば約１００μｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇの量を対象に提供するのに十分なＴＬＲ８アゴニストを投与することを含む。
【００６２】
投薬レジメンは、これらに限定されないが、免疫賦活性オリゴヌクレオチドの物理的および化学的性質、担体の性質、投与される免疫賦活性オリゴヌクレオチドの量、対象の免疫系の状態（例えば、抑制される、損なわれる、刺激される）、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを投与する方法、所望される結果、免疫賦活性オリゴヌクレオチドと共に投与されるＴＬＲ８アゴニストの効力、および調合物が投与さる種を含めた、当技術分野で知られた多くの因子に、少なくともある程度は依存する可能性がある。したがって、可能性のあるすべての用途に有効な投薬レジメンを広く記載することは、実際的ではない。しかし、当業者は、こうした因子を十分に考慮することによって、適切な投薬レジメンを容易に決定することができる。
【００６３】
ある実施形態では、免疫賦活用合剤は、「必要に応じた」根拠で、すなわち、合剤の投与が所望される症状または状態が生じるときはいつでも投与される可能性がある。場合によっては、免疫賦活用合剤は、一度だけ投与される可能性がある。他の実施形態では、免疫賦活用合剤は、例えば、１日に１回ないし１ヶ月に１回の頻度で投与される可能性があるが、ある実施形態では、この方法は、この範囲外の頻度で免疫賦活用合剤を投与することによって実施される可能性がある。
【００６４】
本発明を実施することによって治療される可能性がある状態としては、これらに限定されないが、以下が挙げられる：
（ａ）例えばアデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えばＨＳＶ−Ｉ、ＨＳＶ−ＩＩ、ＣＭＶ、またはＶＺＶ）、ポックスウイルス（例えば、天然痘または牛痘などのオルソポックスウイルス、あるいは伝染性軟属腫）、ピコルナウイルス（例えばライノウイルスまたはエンテロウイルス）、オルソミクソウイルス（例えばインフルエンザウイルス）、パラミクソウイルス（例えばパラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、および呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ））、コロナウイルス（例えばＳＡＲＳ）、パポバウイルス（例えば、生殖器疣贅、尋常性疣贅、または足底疣贅を引き起こすものなどの乳頭腫ウイルス）、ヘパドナウイルス（例えばＢ型肝炎ウイルス）、フラビウイルス（例えばＣ型肝炎ウイルスまたはデング熱ウイルス）、あるいはレトロウイルス（例えば、ＨＩＶなどのレンチウイルス）による感染に起因する病気などのウイルス性の病気；
（ｂ）例えば、例えばエシェリキア属、エンテロバクター属、サルモネラ属、ブドウ球菌、赤痢菌、リステリア属、アエロバクター属、ヘリコバクター属、クレブシエラ属、プロテウス属、シュードモナス属、連鎖球菌、クラミジア属、マイコプラスマ属、肺炎球菌、ナイセリア属、クロストリジウム属、バチルス属、コリネバクテリウム属、マイコバクテリウム属、カンピロバクター属、ビブリオ属、セラチア属、プロビデンシア属、クロモバクテリウム属、ブルセラ属、エルシニア属、ヘモフィルス属、またはボルデテラ属などの細菌による感染に起因する病気などの細菌性の病気；
（ｃ）これらに限定されないが、クラミジア；カンジダ症、アスペルギルス症、ヒストプラスマ症、クリプトコックス髄膜炎を含めて菌類による病気；これらに限定されないが、マラリア、カリニ肺炎、リーシュマニア症、クリプトスポリジウム症、トキソプラズマ症、およびトリパノソーマ感染症を含めて、寄生虫による病気などの他の伝染病；ならびに
（ｄ）上皮内新生物、頸部異形成、光線性角化症、基底細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、黒色腫、腎細胞癌；これらに限定されないが、骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、および毛様細胞白血病を含めた白血病；ならびに他のガンなどの腫瘍疾患；
（ｅ）ＴH２介在性の、アトピー性皮膚炎または湿疹などのアトピー性疾患、好酸球増加症、喘息、アレルギー、アレルギー性鼻炎、およびオーメン症候群；
（ｆ）全身エリテマトーデス、本態性血小板血症、多発性硬化症、円板状狼瘡、円形脱毛症などの、特定の自己免疫性疾患；ならびに
（ｇ）例えば、ケロイド形成および他のタイプの瘢痕化の抑制（例えば、慢性的な損傷を含めた創傷治癒の増強）などの、損傷修復に関連する疾患。
【００６５】
さらに、免疫賦活用合剤は、ＢＣＧ、コレラ、ペスト、腸チフス、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザＡ型、インフルエンザＢ型、パラインフルエンザ、ポリオ、狂犬病、麻疹、流行性耳下腺炎、風疹、黄熱、破傷風、ジフテリア、ヘモフィルスインフルエンザｂ型、結核、髄膜炎菌および肺炎球菌ワクチン、アデノウイルス、ＨＩＶ、水痘、サイトメガロウイルス、デング熱、ネコ白血病、鶏ペスト、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２、豚コレラ、日本脳炎、呼吸器合胞体ウイルス、ロタウイルス、パピローマウイルス、黄熱病、およびアルツハイマー病と併用して使用するための、例えば、生存しているウイルス、細菌、または寄生虫による免疫原；不活性化されたウイルスによる、腫瘍から得られる、原生動物による、微生物から得られる、菌類の、あるいは、細菌性の免疫原、トキソイド、毒素；自己抗原；多糖；タンパク質；糖タンパク質；ペプチド；細胞ワクチン；ＤＮＡワクチン；自家ワクチン；組換え型タンパク質；糖タンパク質；ペプチドなどの、体液性および／または細胞介在性の免疫反応を上昇させる任意の材料と併用して使用するための、ワクチンのアジュバントとして有用である可能性がある。
【００６６】
本発明の方法は、任意の適切な対象に対して実施される可能性がある。適切な対象としては、限定的ではないが、ヒト、ヒト以外の霊長類、げっ歯類、イヌ、ネコ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、またはウシなどの動物が挙げられるが、これらに限定されない。
【実施例】
【００６７】
以下の実施例は、ただ単に、本発明の特徴、利点、および他の詳細をさらに説明するために選択されているに過ぎない。しかし、これらの例が、この目的を満たす一方、特定の材料および使用される量、ならびに他の条件および詳細が、この発明の範囲を過度に制限するであろう様式で解釈されるべきではないことを特に理解されたい。
【００６８】
これらの例で使用されるＩＲＭ化合物を、表１に示す。これらの例で使用される免疫賦活性オリゴヌクレオチドを、表２に示す。
【００６９】
【表１】
【００７０】
【表２】
【００７１】
配列番号１は、ギュルセル（Ｇｕｅｒｓｅｌ）ら、「Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．」（２００２年）第７１巻、８１３〜８２０ページに報告されている。配列番号２、配列番号４、および配列番号５は、ハートマン（Ｈａｒｔｍａｎｎ）ら、「Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」（２００３年）第３３巻、１６３３〜１６４１ページに報告されている。配列番号３は、ツー（Ｚｈｕ）ら、「Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．」（２００２年）第７２巻、１１５４〜１１６３ページに報告されている。配列番号６および配列番号７は、フォルマー（Ｖｏｌｌｍｅｒ）ら、「Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．」（２００２年）第１２巻、１６５〜１７５ページに報告されている。
【００７２】
実施例１
ヒトＴＬＲ８およびＮＦ−κβを、国際公開第２００４／０７１４５９号パンフレットに記載される通りに、ヒト腎臓上皮（ｈｕｍａｎ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｋｉｄｎｅｙ）２９３（ＨＥＫ２９３、アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）、マナサス、ヴァージニア州（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５７３）細胞に形質移入させた。選択された形質移入された細胞を計数し、培地中に１ｍＬあたり５×１０5細胞の濃度に再懸濁させた。
【００７３】
フェノールレッドを含まないＤＭＥＭ完全培地（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．）、カマリロ、カリフォルニア州（Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ））から、培養培地を調製した。ウシ胎児血清（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．））を加えて、最終濃度を１０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）にし、ピルビン酸ナトリウム（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．））を加えて１ｍＭにし；Ｌ−グルタミン（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．））を加えて２ｍＭにし；ペニシリン（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．））を加えて１００Ｕ／ｍＬにし；ストレプトマイシン（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．））を加えて１００μｇ／ｍＬにした。
【００７４】
細胞の１００μＬ部分を、壁が白色で底も白色の９６−ウェルプレート（コーニングインコーポレイティッド（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｉｎｃ．）、コーニング、ニューヨーク州（Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ））のウェルに入れた。ＣｐＧ ＯＤＮ Ｋ２３（配列番号１）、ＣｐＧ ＯＤＮ ５１９２（配列番号６）、またはＣＰＧ ＯＤＮ ２０５９（配列番号７）（インビトロジェンコーポレーション（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．）、カールスバッド、カリフォルニア州（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））を、０．１μＭ、０．５μＭ、１．０μＭ、５．０μＭ、１０μＭ、または５０μＭの濃度で、３μＭのＩＲＭ１を含むあるいは含まない培地に加えることによって、細胞の一定分量を処理した。さらなる対照として、細胞のある一定分量を、３μＭのＩＲＭ１単独と共に保温したのに対して、細胞の別の一定分量は、作用薬を加えずに保温した（培地対照）。すべての例において、細胞は、５％ ＣＯ2および９８％湿度で、３７℃で終夜保温された。
【００７５】
細胞を終夜保温した後、１００μＬの体積の、還元したＬｕｃＬｉｇｈｔ Ｐｌｕｓ（パッカードインストゥルメンツ（Ｐａｃｋａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）、メリデン、コネチカット州（Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ））を、細胞のそれぞれの一定分量に加えた。プレートのそれぞれのウェルを、Ｌ−ｍａｘ照度計（モレキュラーデバイス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）、サニーヴェール、カリフォルニア州（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ））で読み取った。データは、示された作用薬と共に保温された細胞の一定分量中のルシフェラーゼ誘導の、陰性対照と比較した場合の増加の倍数として示される。結果を、図１に示す。
【００７６】
実施例２
ヒトＴＬＲ８を発現するＨＥＫ ２９３細胞を、実施例１に述べた通りに調製した。細胞の一定分量を、１．０μＭ、３．０μＭ、１０μＭ、または３０μＭの濃度で、ＣｐＧ ＯＤＮ Ｍ３５２（配列番号５）（インビトロジェンコーポレーション（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．）、カールスバッド、カリフォルニア州（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））を、３μＭのＩＲＭ１を含むあるいは含まない培養物に加えることによって処理した。対照として、細胞のある一定分量を、３μＭのＩＲＭ１と共に保温し、細胞の別の一定分量は、作用薬を加えずに保温した（培地対照）。すべての例において、細胞は、５％ ＣＯ2および９８％湿度で、３７℃で終夜保温された。
【００７７】
細胞を終夜保温した後、１００μＬの体積の、還元したＬｕｃＬｉｇｈｔ Ｐｌｕｓ（パッカードインストゥルメンツ（Ｐａｃｋａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）、メリデン、コネチカット州（Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ））を、細胞のそれぞれの一定分量に加えた。プレートのそれぞれのウェルを、Ｌ−ｍａｘ照度計（モレキュラーデバイス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）、サニーヴェール、カリフォルニア州（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ））で読み取った。データは、示された作用薬と共に保温された細胞の一定分量中のルシフェラーゼ誘導の、陰性対照と比較した場合の増加の倍数として示される。結果を、図２に示す。
【００７８】
実施例３
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ヒストパック−１０７７（ＨＩＳＴＯＰＡＱＵＥ−１０７７）（シグマアルドリッチ社（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．）、セントルイス、ミズーリ州（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））密度勾配遠心分離によって、ヒト末梢血から濃縮した。ＰＢＭＣを計数し、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．）培地と共に、完全ＲＰＭＩ １６４０に再懸濁させた。ウシ胎児血清（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．））を加えて、最終濃度を１０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）にし、Ｌ−グルタミン（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．））を加えて２ｍＭにし；ペニシリン（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．））を加えて１００Ｕ／ｍＬにし；ストレプトマイシン（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．））を加えて１００μｇ／ｍＬにした。
【００７９】
２００μＬのウェルあたり５×１０5細胞を、平底９６−ウェルプレート（ベクトンディッキンソンラブウェア（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ Ｌａｂｗａｒｅ）、フランクリンレイクス、ニュージャージー州（Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ））に入れた。細胞の一定分量を、ＩＲＭ２単独（対照）を１０μＭ加えることによって、あるいは、０．０３μＭ、０．１μＭ、０．３μＭ、１．０μＭ、または３．０μＭの濃度のＣｐＧ ＯＤＮ Ｋ２３（配列番号１）、ＣｐＧ ＯＤＮ ２００６（配列番号４）、またはＣｐＧ ＯＤＮ ２２１６（配列番号２）（インビトロジェンコーポレーション（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．））を用いて処理した。すべての例において、細胞は、５％ ＣＯ2および９８％湿度で、３７℃で終夜保温された。
【００８０】
培養上清を、ヒト特異的ＩＬ−１２およびＴＮＦ ＢＶ（登録商標）イムノアッセイ（バイオベリスコーポレーション（ＢｉｏＶｅｒｉｓ Ｃｏｒｐ．）、ゲイザースバーグ、メリーランド州（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ））を使用して、ＩＬ−１２（ｐｇ／ｍＬ）またはＴＮＦ（ｐｇ／ｍＬ）産生について分析した。結果を、図３および図４に示す。
【００８１】
実施例４
ヒト単球由来樹状細胞（ｍＤＣ）を、国際公開第２００４／０７１４５９号パンフレットに記載される通りに産生した。
【００８２】
２００μＬのウェルあたり１×１０5細胞を、平底９６−ウェルプレート（ベクトンディッキンソンラブウェア（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ Ｌａｂｗａｒｅ）、フランクリンレイクス、ニュージャージー州（Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ））に入れた。細胞の一定分量を、３μＭのＩＲＭ１を単独で加えることによって（対照）、あるいは、０．０３μＭ、０．１μＭ、０．３μＭ、１．０μＭ、または３．０μＭの濃度のＣｐＧ ＯＤＮ Ｋ２３（配列番号１）、ＣｐＧ ＯＤＮ ２００６（配列番号４）、ＣｐＧ ＯＤＮ Ｍ３５２（配列番号５）、またはＣｐＧ ＯＤＮ ２２１６（配列番号２）（インビトロジェンコーポレーション（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．））を用いて処理した。すべての例において、細胞は、５％ ＣＯ2および９８％湿度で、３７℃で終夜保温された。
【００８３】
培養上清を、ヒト特異的ＩＬ−１２およびＴＮＦ ＢＶ（登録商標）イムノアッセイ（バイオベリスコーポレーション（ＢｉｏＶｅｒｉｓ Ｃｏｒｐ．）、ゲイザースバーグ、メリーランド州（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ））を使用して、ＩＬ−１２（ｐｇ／ｍＬ）またはＴＮＦ（ｐｇ／ｍＬ）産生について分析した。結果を、図５および図６に示す。
【００８４】
実施例５
ヒトＴＬＲ８を発現するＨＥＫ２９３細胞を、実施例１に述べた通りに調製した。細胞の一定分量は、１μＭのＩＲＭ１単独（対照）を用いて、あるいは、０．０３μＭ、０．１２μＭ、０．３μＭ、１．１μＭ、３．３μＭ、１０μＭ、３０μＭ、または１００μＭの濃度の５−ｍｅｒ（配列番号８）、１１−ｍｅｒ（配列番号９）、１３−ｍｅｒ（配列番号１０）、または１７−ｍｅｒ（配列番号１１）ポリ（Ａ）オリゴヌクレオチド配列（インビトロジェンコーポレーション（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．））を用いて処理した。陰性対照として、細胞のある一定分量を、作用薬を加えずに保温した（培地対照）。
【００８５】
細胞を終夜保温した後、この細胞を、実施例３に述べた通りにＴＮＦ産生について分析した。データは、示された作用薬と共に保温された細胞の一定分量中のルシフェラーゼ誘導の、陰性対照と比較した場合の増加の倍数として示される。結果を、図７中に示す。
【００８６】
実施例６
ＰＢＭＣを、実施例３に述べた通りに調製した。細胞の一定分量は、３μＭのＩＲＭ１単独（対照）を用いて、あるいは、０．０３μＭ、０．１２μＭ、０．３μＭ、１．１μＭ、３．３μＭ、１０μＭ、または３０μＭの濃度の、ポリ（Ｃ）オリゴヌクレオチド（５−ｍｅｒ、配列番号１２；１０−ｍｅｒ、配列番号１３；１５−ｍｅｒ、配列番号１４；または２５−ｍｅｒ、配列番号１５）、あるいはポリ（Ｔ）オリゴヌクレオチド（５−ｍｅｒ、配列番号１６；８−ｍｅｒ、配列番号１７；１１−ｍｅｒ、配列番号１８；または１４−ｍｅｒ、配列番号１９）（インビトロジェンコーポレーション（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．））を用いて処理した。
【００８７】
培養上清を、ヒト特異的ＩＬ−１２およびＴＮＦ ＢＶ（登録商標）イムノアッセイ（バイオベリスコーポレーション（ＢｉｏＶｅｒｉｓ Ｃｏｒｐ．））、ゲイザースバーグ、メリーランド州（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ））を使用して、ＴＮＦ（ｐｇ／ｍＬ）産生について分析した。結果を、図８および図９に示す。
【００８８】
本明細書に引用される特許、特許文献、および刊行物の完全な開示は、それぞれが個々に組み込まれるかのごとく、その内容全体が参照として組み込まれるものとする。論争の場合には、本明細書は、定義を含めて検討するべきである。
【００８９】
この発明に対する、この発明の範囲および趣旨から逸脱することのない様々な改変および変更は、当業者は明らかとなるであろう。例示的な実施形態および実施例は、例として提供されるに過ぎず、本発明の範囲を制限することを意図するものではない。本発明の範囲は、以下の通りに記述される特許請求の範囲によってのみ制限される。
【図面の簡単な説明】
【００９０】
【図１】形質移入された細胞系における、ＣｐＧ ＯＤＮ免疫賦活性オリゴヌクレオチドによる、ＩＲＭによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の増大を示す。
【図２】形質移入された細胞系における、ＣｐＧ ＯＤＮ免疫賦活性オリゴヌクレオチドによる、ＩＲＭによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の増大を示す。
【図３】末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）における、ＣｐＧ ＯＤＮ免疫賦活性オリゴヌクレオチドによる、ＩＲＭによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の増大を示す。
【図４】末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）における、ＣｐＧ ＯＤＮ免疫賦活性オリゴヌクレオチドによる、ＩＲＭによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の増大を示す。
【図５】単球由来樹状細胞における、ＣｐＧ ＯＤＮ免疫賦活性オリゴヌクレオチドによる、ＩＲＭによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の増大を示す。
【図６】単球由来樹状細胞における、ＣｐＧ ＯＤＮ免疫賦活性オリゴヌクレオチドによる、ＩＲＭによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の増大を示す。
【図７】形質移入された細胞系における、様々な長さのポリ（Ａ）免疫賦活性オリゴヌクレオチドによる、ＩＲＭによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の増大を示す。
【図８】ＰＢＭＣにおける、様々な長さのポリ（Ｃ）免疫賦活性オリゴヌクレオチドによる、ＩＲＭによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の増大を示す。
【図９】ＰＢＭＣにおける、様々な長さのポリ（Ｔ）免疫賦活性オリゴヌクレオチドによる、ＩＲＭによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の増大を示す。
【背景技術】
【０００１】
免疫系の特定の鍵となる側面を刺激することによって、また、特定の他の側面を抑制することによって作用する、新規の薬剤化合物を発見することは、近年、主要な取り組みであり、著しく成功してきている（例えば、米国特許第６，０３９，９６９号および同第６，２００，５９２号を参照のこと）。これらの化合物（本明細書では免疫反応調整剤（ＩＲＭ）と称する）は、選択されたサイトカイン生合成、共刺激性の分子の誘導、および抗原提示能力の増大を誘導するＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）として知られている基本的な免疫系メカニズムを介して作用すると考えられる。これらは、非常に様々な病気および状態を治療するために有用である可能性がある。例えば、特定のＩＲＭは、ウイルス性の病気（例えばヒトパピローマウイルス、肝炎、ヘルペス）、新生物（例えば基底細胞癌、扁平上皮癌、光線性角化症、黒色腫）、およびＴH２介在性の病気（例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎）、自己免疫性の病気（例えば多発性硬化症）を治療するために有用である可能性があり、また、ワクチンの補助剤としても有用である。
【０００２】
ＩＲＭ化合物の多くは、有機小分子であるイミダゾキノリンアミン誘導体である（例えば、米国特許第４，６８９，３３８号を参照のこと）が、多くの他の化合物クラスも知られており（例えば、米国特許第５，４４６，１５３号；同第６，１９４，４２５号；および同第６，１１０，９２９号；ならびに国際公開第ＷＯ２００５／０７９１９５号を参照のこと）、今でもより多くのものが発見されている。
【０００３】
特定の小分子ＩＲＭ（ｓｍＩＲＭ）は、強力な免疫調節活性（例えば抗ウイルスおよび抗腫瘍活性）を持っている。特定のｓｍＩＲＭは、サイトカインの産生および分泌を調節する。例えば、特定のｓｍＩＲＭ化合物は、サイトカイン（例えば、Ｉ型インターフェロン、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＭＩＰ−１、および／またはＭＣＰ−１など）の産生および分泌を誘導する。別の例として、特定のｓｍＩＲＭ化合物は、特定のＴH２サイトカイン（ＩＬ−４およびＩＬ−５など）の産生および分泌を妨げる可能性がある。さらに、特定のｓｍＩＲＭ化合物は、ＩＬ−１およびＴＮＦを抑えると言われている（米国特許第６，５１８，２６５号）。
【０００４】
例えばＣｐＧオリゴジヌクレオチド（ＯＤＮ、例えば、米国特許第６，１９４，３８８号を参照のこと）を含めたオリゴヌクレオチドなどの他のＩＲＭは、より大きな分子量を有する。構造的に異なる少なくとも３つのクラスの合成ＣｐＧ ＯＤＮが記載されている。ＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮ（Ｋ型ＣｐＧ ＯＤＮとも呼ばれる）は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の分化およびＢ細胞の増殖を誘導する可能性がある。ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮ（Ｄ型ＣｐＧ ＯＤＮとも呼ばれる）は、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）からのインターフェロン−α（ＩＦＮ−α）の分泌を直接的に誘導する可能性があり、ＡＰＣのその後の成熟を間接的に助ける。ＣｐＧ−Ｃ ＯＤＮは、Ｂ細胞がインターロイキン６（ＩＬ−６）を分泌するのを刺激する、また、ｐＤＣがＩＦＮ−αを産生するのを刺激する可能性があり、したがって、ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮとＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮのいくつかの刺激性の特性が組み合わされている。
【０００５】
ＩＲＭについての大いなる治療的可能性を考慮すると、既に行われた重要な研究にもかかわらず、その使用および治療的利益を拡大することが、実質的に必要であり続けている。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
特定のオリゴヌクレオチド配列が、特定のＩＲＭ化合物の特定の免疫賦活活性を増強する可能性があることが判明した。
【０００７】
したがって、本発明は、ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドとを一般に含む免疫賦活用合剤を提供する。
【０００８】
別の態様では、本発明はまた、免疫細胞においてＴＬＲ８介在性生物活性を誘導する方法を提供する。概して、この方法は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずにＴＬＲ８アゴニストと免疫細胞を接触させた場合よりも大きな程度に細胞のＴＬＲ８介在性生物活性を増大させるのに有効な量の免疫賦活性オリゴヌクレオチドとＴＬＲ８アゴニストとを含む免疫賦活用合剤と、免疫細胞を接触させることを含む。
【０００９】
本発明の他の様々な特徴および効果は、以下の詳細な説明、実施例、請求の範囲、および添付の図面を参照して容易に明白になるはずである。明細書全体を通して、いくつかの箇所では、実施例の列挙を通して指針が提供される。それぞれの例では、列挙されたリストは、代表的な群としてのみ用いられ、排他的なリストと解釈するべきでない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明は、特定のオリゴヌクレオチド配列が、用量に依存する方式で、特定のＴＬＲ８介在性生物活性の誘導を増強する可能性があるという知見を利用する。
【００１１】
一態様では、本発明は、ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドとを含む免疫賦活用合剤を提供する。それぞれの成分は、それ自体で、特定の免疫賦活活性を持つ可能性がある。多くの場合、ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドとの合剤は、いずれかの成分が単独で提供するよりも大きな免疫賦活活性を提供することができる。場合によっては、ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドとの合剤は、例えば、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずに投与されるＴＬＲ８アゴニストによって誘導される場合と比較して、少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性の２倍の、３倍の、５倍の、あるいは、さらに大きな増加を提供することができる。特定の場合では、成分の合剤は、相乗作用的な免疫賦活活性を提供することができる。
【００１２】
別の態様では、本発明は、免疫細胞のＴＬＲ８介在性生物活性の誘導を増強する方法を提供する。実際には、この方法は、例えば、ＴＬＲ８介在性生物活性に関与する、特定の免疫学的処理の有効性を向上させるために使用される可能性がある。こうした処置としては、例えば、治療用または予防用ワクチンが含まれる可能性がある。したがって、例えば、本発明は、ワクチンの有効性を向上させるのに十分に−さらには、以前に効果がないと考えられていたワクチンを有効であると考えられようにする程度まで−ワクチンによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性を増強することができる。
【００１３】
あるいは、本発明は、より少量の免疫学的組成物の成分（例えば抗原またはワクチンのアジュバント）を使用する、状態の有効な治療を可能にすることができる。これは、特定の成分が、所望の免疫応答を産生するのに有用である一方、高価である、得るのが困難である、あるいは望ましくない副作用を生じる場合に望ましい可能性がある。したがって、本発明は、以前には、例えば、（ａ）治療の成分の費用、（ｂ）すべての成分の入手可能性、および／または（ｃ）有効な免疫反応を生じるのに必要であると以前に考えられており、その上望ましくないレベルの副作用を生じていた成分（例えば抗原）の量、が原因で臨床的および／または商業上望ましくないと考えられていた特定の免疫学的治療を、臨床的および／または商業的に現実性があるものにすることができる。
【００１４】
この発明の目的では、以下の用語は、以下の通りに記載される意味をもつものとする。
【００１５】
「アゴニスト」は、生物活性を誘導するために受容体（例えばＴＬＲ）と組み合わせることができる化合物を指す。アゴニストは、受容体に直接的に結合するリガンドである可能性がある。あるいは、アゴニストは、例えば、（ａ）受容体に直接的に結合する別の分子と共に複合体を形成すること、または（ｂ）別の化合物の改変をもたらし、その結果、他の化合物が、受容体に直接的に結合すること（例えば細胞のシグナル伝達）によって間接的に受容体と組み合わされる可能性もある。アゴニストは、特定のＴＬＲのアゴニスト（例えばＴＬＲ８アゴニスト）、あるいはＴＬＲの特定の組み合わせ（例えば、ＴＬＲ７／８アゴニスト−ＴＬＲ７とＴＬＲ８両方のアゴニスト）と称される可能性がある。
【００１６】
「アゴニスト−受容体相互作用」は、例えば、結合、複合体を形成すること、または細胞活性を誘導する生化学的改変などの、任意の直接的または間接的な相互作用を指す。
【００１７】
「免疫細胞」は、免疫系の細胞、すなわち、免疫性の反応が、生得的であるか獲得されたものか、体液性であるか細胞介在性であるかどうかに関わらず、免疫反応の産生または維持に直接的または間接的に関与する細胞を指す。
【００１８】
「免疫賦活性オリゴヌクレオチド」は、ＴＬＲ８介在性生物活性を測定可能に増強することが可能であるオリゴヌクレオチド配列を指す。
【００１９】
「誘導する」、およびその変化形は、生物活性の任意の測定可能な増大を指す。例えば、特定のサイトカインの誘導は、サイトカインの産生の増大を指す。
【００２０】
「抑制する」、およびその変化形は、生物活性の任意の測定可能な低下を指す。例えば、特定のサイトカインの抑制は、サイトカインの産生の低下を指す。抑制の程度は、通常レベルの活性に対する割合として特徴づけることができる。
【００２１】
「ＩＲＭ化合物」は一般に、ＩＲＭ反応性の細胞に与えられたときに、１種または複数の免疫調節性分子、例えば、サイトカインまたは共刺激性のマーカーのレベルを変化させる化合物を指す。代表的なＩＲＭ化合物としては、以下で述べられる有機小分子、プリン誘導体、小さな複素環化合物、アミド誘導体、およびオリゴヌクレオチド配列が挙げられる。
【００２２】
「選択的」、およびその変化形は、任意の程度までの、生物活性に対する差別的な影響を有することを指す。特定のＴＬＲを介して選択的に生物活性を調節するアゴニストは、ＴＬＲ選択的アゴニストである可能性がある。ＴＬＲ選択性は、特定のＴＬＲに関して（例えば、ＴＬＲ８選択的）、あるいはＴＬＲの特定の組み合わせに関して（例えばＴＬＲ７／９選択的）記載されている可能性がある。ＴＬＲ選択的（例えば、ＴＬＲ８選択的）化合物は、示されたＴＬＲによって仲介される生物活性を独占的に誘導する（すなわち、ＴＬＲ特異的である）可能性がある、あるいは、示されたＴＬＲを介して仲介される活性を誘導するだけでなく、複数のＴＬＲを介して仲介される生物活性を、他の任意のＴＬＲよりも大きな程度に誘導する可能性がある（すなわち、ＴＬＲ優勢、例えばＴＬＲ８優勢など）。
【００２３】
「ｓｍＩＲＭ」は一般に、小分子ＩＲＭ化合物、すなわち約１キロダルトン（ｋＤａ）以下の分子量を有するＩＲＭ化合物を指す。
【００２４】
「相乗作用的」、およびその変化形は、組み合わされた免疫学的作用が、そのそれぞれの作用の合計を超えるような、ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドとの相互作用を指す。
【００２５】
「ＴＬＲ介在性」は、ＴＬＲ機能に直接的または間接的に起因する生物活性（例えばサイトカイン産生）を指す。特定の生物活性は、特定のＴＬＲによって仲介されるもの（例えば、「ＴＬＲ８介在性」）を指す可能性がある。
【００２６】
また、本明細書では、終点による数値の範囲の説明は、その範囲内に包含されるすべての数を含む（例えば、１〜５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、５、などを含む）。
【００２７】
特定の化合物のＴＬＲアゴニズムは、任意の適切な方式で評価することができる。例えば、試験化合物のＴＬＲアゴニズムを検出するのに適したアッセイおよび組換え細胞系は、例えば、米国特許出願公開第２００４／００１４７７９号、同第２００４／０１３２０７９号、同第２００４／０１６２３０９号、同第２００４／０１７１０８６号、同第２００４／０１９１８３３号、および同第２００４／０１９７８６５号に記載されている。
【００２８】
用いられる特定のアッセイにかかわらず、化合物を用いるアッセイを実施することによって、特定のＴＬＲによって仲介される、特定の生物活性の閾値増加が少なくとももたらされる場合、化合物は、特定のＴＬＲのアゴニストと特定することができる。逆に、特定のＴＬＲによって仲介される生物活性を検出するために設計されたアッセイを実施するために使用されるとき、化合物が、生物活性の閾値増加を誘導できない場合、その化合物は、特定のＴＬＲのアゴニストとして作用しないと特定される可能性がある。別段の指示がない限り、生物活性の増大は、適切な対照において観察されたものと同じ生物活性の増大を指す。アッセイは、適切な対照と同時に実施してもよいし、しなくてもよい。実験を伴って、当業者は、特定のアッセイ（例えば、特定のアッセイ条件下で、適切な対照において観察される値の範囲）を熟知することが可能であり、対照実験を実施することは、特定のアッセイにおいて化合物のＴＬＲアゴニズムを決定するのに必ずしも必要である可能性はない。
【００２９】
特定の化合物が所与のアッセイにおいて特定のＴＬＲのアゴニストであるかないかを決定するためのＴＬＲ介在性生物活性の厳密な閾値の増大は、これらに限定されないが、アッセイの終点として観察される生物活性、アッセイの終点を測定または検出するために使用される方法、アッセイの信号対雑音比、アッセイの精度、および複数のＴＬＲに対する化合物のアゴニズムを決定するために同じアッセイが使用されるかどうかを含めて、当技術分野で知られた因子に応じて変動する可能性がある。したがって、化合物を、可能性のあるすべてのアッセイのための特定のＴＬＲのアゴニストまたは非アゴニストと特定するために必要とされるＴＬＲ介在性生物活性の閾値増加を広く記載することは、実際的ではない。しかし、当業者は、こうした因子を十分に考慮することによって、適切な閾値を容易に決定することができる。
【００３０】
細胞に形質移入されるＴＬＲのアゴニストとして化合物を特定するために、化合物が、例えば約１μＭから約１０μＭの濃度で提供されるときは、発現可能なＴＬＲ構造遺伝子で形質移入されたＨＥＫ２９３細胞を用いるアッセイは、例えば、ＴＬＲ介在性生物活性（例えばＮＦ−κＢ活性）の少なくとも３倍の増加という閾値を使用する可能性がある。しかし、異なる閾値および／または異なる濃度範囲も、特定の状況では適切である可能性がある。また、異なる閾値が、異なるアッセイのために適切である可能性がある。
【００３１】
一態様では、本発明は、免疫細胞のＴＬＲ８介在性生物活性を増強する方法を提供する。場合によっては、例えば、ＴＬＲ８アゴニストは、少なくとも１種のさらなるＴＬＲのアゴニスト（例えばＴＬＲ７、いわゆるＴＬＲ７／８アゴニスト）である可能性があり、したがって、通常、ＴＬＲ８介在性生物活性と、１つまたは複数のさらなるＴＬＲによって介在される生物活性（例えばＴＬＲ７介在性生物活性）とを誘導する可能性がある。本発明の実施は、ＴＬＲ８介在性生物活性を増強する、場合によっては、別の（例えばＴＬＲ８でない）ＴＬＲによって仲介される、化合物によって誘導される生物活性を、制限する−さらには排除する−ために使用される可能性がある。
【００３２】
したがって、この方法は、混合型のＴＬＲアゴニズムを持つ化合物が、よりＴＬＲ選択的化合物らしく作用するように、ＴＬＲ８介在性生物活性を増強するために使用することができる。場合によっては、この化合物は、本質的にＴＬＲ８優勢な化合物として作用する可能性がある。特定の場合では、この方法は、該化合物が、本質的にＴＬＲ８特異的な化合物として作用するように、この化合物が別のＴＬＲによって仲介される生物活性を誘導する程度をさらに低下させる可能性がある。例えば、ＴＬＲ７／８アゴニストのＴＬＲ７介在性生物活性を低下させる−さらには排除する−ことによって、該化合物を、本質的にＴＬＲ８選択的アゴニストとして（例えば、ＴＬＲ８優勢なアゴニストまたはＴＬＲ８特異的アゴニストとして）作用するようにすることができる。
【００３３】
一例として、あるＴＬＲ８介在性生物活性は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の産生を含む可能性があり、これは、特定の状態（例えば特定のガン（例えば黒色腫））を治療するために有益である可能性がある。一方、ＴＬＲ７介在性生物活性は、インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）の産生を含む可能性があり、これは、特定の状態（例えば紅斑性狼瘡）を悪化させる可能性がある。おそらく、該化合物によって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の有効性および／または程度のため、それだけでなく、おそらく、他の望ましい特性（例えば、低い毒性、調製および送達が容易であること（調剤性（ｆｏｒｍｕｌａｂｉｌｉｔｙ））、費用、安定性（例えば保存寿命）、生体利用効率、代謝半減期など）のため、特定のＴＬＲ７／８アゴニストは、特定のガン（例えば黒色腫）を治療するのに適切であるものと特定される可能性がある。しかし、紅斑性狼瘡を煩う対象に投与される場合、該化合物によって誘導されるＴＬＲ７介在性生物活性（ＩＦＮ−α産生）は、紅斑性狼瘡と診断された患者におけるガンの治療としてＴＬＲ７／８化合物を考慮するのを妨げる可能性がある程度まで、紅斑性狼瘡を悪化させる可能性がある。
【００３４】
本発明を実施することで、対象が、ＴＬＲ７／８化合物を用いて、第２の状態（例えば紅斑性狼瘡）を耐えられない程度まで悪化させることなく、ある状態（例えばガン）を治療するという利益を享受することが可能になる。ＴＬＲ７／８アゴニストと共に、十分な量の免疫賦活性オリゴヌクレオチドを投与することによって、ガンの治療を提供するためのＴＬＲ７／８化合物によって、十分なＴＬＲ８介在性生物活性が誘導される可能性があるのに対して、ＴＬＲ７／８化合物によって誘導されるＴＬＲ７介在性生物活性は、許容されるレベルまで低下させられる−場合によっては、ＴＬＲ７介在性生物活性が完全に排除される−可能性がある。したがって、上の例では、ＴＬＲ７／８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドの合剤を投与することによって、ガンを治療するのに十分なＴＮＦを誘導することができ、かつＴＬＲ７／８アゴニストによって誘導されるＩＦＮ−αの量を十分に低下させることができ、その結果、ガンの治療は進展する可能性があり、一方で、ＴＬＲ７／８アゴニストを投与することから生じるであろう紅斑性狼瘡の悪化が制限される−さらには排除される−可能性がある。
【００３５】
別の態様では、本発明は、ＴＬＲ８介在性生物活性を増強するのに有効である免疫賦活用合剤を提供する。場合によっては、この合剤は、ＴＬＲ８アゴニストと、ＴＬＲ８アゴニストが、少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を誘導する程度を増大させるのに有効な量の免疫賦活性オリゴヌクレオチドとを含むことができる。ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、単一の調合物中に存在してもよいし、２つの成分が、別々の調合物中に存在してもよい。本発明を実施するのに使用するのに適した調合物を、以下に詳細に記載する。
【００３６】
本発明の実施の際に調節され得る例示的なＴＬＲ８介在性生物活性としては、例えば、共刺激性マーカー（例えばＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、など）の発現の誘導、表面マーカー（例えばＣＣＲ７）の発現の誘導、ＮＦ−κＢの活性化、細胞接着分子（ＩＣＡＭ（例えばＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、Ｉ−ＣＡＭ−３、など））の誘導、抗原提示能力の増大、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）の成熟、Ｂリンパ球の増殖、および特定のサイトカインの誘導が挙げられる。ＴＬＲ８介在性生物活性によって誘導されるサイトカインとしては、例えば、ＴＮＦ−α、Ｉ型インターフェロン（例えば、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−ω、など）、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＭＩＰ−１、ＭＣＰ−１、またはこれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【００３７】
ＴＬＲ８アゴニストは、免疫賦活性オリゴヌクレオチドと組み合わせて投与される場合に、少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を誘導することが可能である、あるいは潜在的に可能である任意の化合物である。場合によっては、ＴＬＲ８アゴニストは、ＩＲＭ化合物である可能性がある。適切なＩＲＭ化合物は、以下に詳細に記載する。
【００３８】
免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、任意の適切なオリゴヌクレオチド配列−すなわち、ＴＬＲ８アゴニストによって誘導される少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を増強することが可能なオリゴヌクレオチド配列である可能性がある。ある実施形態では、適切な免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、例えば、ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮ、ＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮ、またはＣｐＧ−Ｃ ＯＤＮ配列（図１〜６）などの、ＣｐＧ ＯＤＮ配列を含有する可能性がある。しかし、他のオリゴヌクレオチド配列も適切である可能性がある。例えば、ポリ（Ａ）、ポリ（Ｃ）、およびポリ（Ｔ）オリゴヌクレオチドは、ＴＬＲ８介在性生物活性を増強することが可能であるものと特定されている（図７〜９）。
【００３９】
ある実施形態では、免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、特定の化合物（例えば特定のＩＲＭ化合物）が、オリゴヌクレオチド配列に挿入するのを可能にする、積み重ね型（ｓｔａｃｋｅｄ）二次構造を有する可能性がある。オリゴヌクレオチドへの化合物の挿入によって、ＴＬＲ８と優先的に相互作用する複合体の形成がもたらされる可能性がある。したがって、測定可能なＴＬＲ８アゴニズムを通常を持たないであろう特定の化合物が、免疫賦活性オリゴヌクレオチドと複合体形成された場合、ＴＬＲ８アゴニストとして作用する可能性がある。また、混合型のＴＬＲを通常持つであろう化合物が、免疫賦活性オリゴヌクレオチドと複合体形成された場合、よりＴＬＲ８選択的アゴニスト様に作用する。
【００４０】
特定のＩＲＭは、例えば、以下に開示されているものなどの有機小分子（例えば、タンパク質、ペプチドなどの大きな生体分子とは対照的に、分子量が約１０００ダルトン未満、場合によっては約５００ダルトン未満のｓｍＩＲＭ）である：米国特許第４，６８９，３３８号；同第４，９２９，６２４号；同第５，２６６，５７５号；同第５，２６８，３７６号；同第５，３４６，９０５号；同第５，３５２，７８４号；同第５，３８９，６４０号；同第５，４４６，１５３号；同第５，４８２，９３６号；同第５，７５６，７４７号；同第６，１１０，９２９号；同第６，１９４，４２５号；同第６，３３１，５３９号；同第６，３７６，６６９号；同第６，４５１，８１０号；同第６，５２５，０６４号；同第６，５４１，４８５号；同第６，５４５，０１６号；同第６，５４５，０１７号；同第６，５７３，２７３号；同第６，６５６，９３８号；同第６，６６０，７３５号；同第６，６６０，７４７号；同第６，６６４，２６０号；同第６，６６４，２６４号；同第６，６６４，２６５号；同第６，６６７，３１２号；同第６，６７０，３７２号；同第６，６７７，３４７号；同第６，６７７，３４８号；同第６，６７７，３４９号；同第６，６８３，０８８号；同第６，７５６，３８２号；同第６，７９７，７１８号；および同第６，８１８，６５０号；米国特許出願公開第２００４／００９１４９１号；同第２００４／０１４７５４３号；および同第２００４／０１７６３６７号；および国際公開第ＷＯ２００５／１８５５１号、同第ＷＯ２００５／１８５５６号、同第ＷＯ２００５／２０９９９号、同第ＷＯ２００５／０３２４８４号、同第ＷＯ２００５／０４８９３３号、同第ＷＯ２００５／０４８９４５号、同第ＷＯ２００５／０５１３１７号、同第ＷＯ２００５／０５１３２４号、同第ＷＯ２００５／０６６１６９号、同第ＷＯ２００５／０６６１７０号、同第ＷＯ２００５／０６６１７２号、同第ＷＯ２００５／０７６７８３号、および同第ＷＯ２００５／０７９１９５号。
【００４１】
小分子ＩＲＭのさらなる例としては、特定のプリン誘導体（米国特許第６，３７６，５０１号および同第６，０２８，０７６号に記載されているものなど）、特定のイミダゾキノリンアミド誘導体（米国特許第６，０６９，１４９号に記載されているものなど）、特定のイミダゾピリジン誘導体（米国特許第６，５１８，２６５号に記載されているものなど）、特定のベンズイミダゾール誘導体（米国特許第６，３８７，９３８号に記載されているものなど）、５員の窒素含有複素環と縮合した４−アミノピリミジンの特定の誘導体（米国特許第６，３７６，５０１号；同第６，０２８，０７６号、および同第６，３２９，３８１号に；また国際公開第ＷＯ０２／０８９０５号に記載されているアデニン誘導体など）、ならびに特定の３−β−Ｄ−リボフラノシルチアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン誘導体（米国特許出願公開第２００３／０１９９４６１号に記載されているものなど）が挙げられる。
【００４２】
他のＩＲＭとしては、オリゴヌクレオチド配列などの大きな生体分子が挙げられる。特定のＩＲＭオリゴヌクレオチド配列は、シトシン−グアニンジヌクレオチド（ＣｐＧ）を含有し、これは、例えば、米国特許第６，１９４，３８８号；同第６，２０７，６４６号；同第６，２３９，１１６号；同第６，３３９，０６８号；および同第６，４０６，７０５号に記載されている。特定のＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、例えば、米国特許第６，４２６，３３４号および同第６，４７６，０００号に記載されているものなどの、合成の免疫賦活構造モチーフを含む可能性がある。他のＩＲＭヌクレオチド配列はＣｐＧ配列を欠いており、これは、例えば国際公開第ＷＯ００／７５３０４号に記載されている。
【００４３】
他のＩＲＭとしては、リン酸アミノアルキルグルコサミニド（ＡＧＰ）などの生体分子が挙げられ、これは、例えば、米国特許第６，１１３，９１８号；同第６，３０３，３４７号；同第６，５２５，０２８号；および同第６，６４９，１７２号に記載されている。
【００４４】
別段の指示がない限り、化合物に対する言及には、任意の異性体（例えばジアステレオマーまたはエナンチオマー）、塩、溶媒和化合物、多形体、などを含めて、任意の薬学的に許容される形の化合物が含まれ得る。特に、化合物が光学活性である場合、化合物に対する言及には、化合物の各々のエナンチオマーならびにエナンチオマーのラセミ混合物が含まれ得る。
【００４５】
本発明のある実施形態では、ＩＲＭ化合物としては、５員の窒素含有複素環と縮合した２−アミノピリジン、または５員の窒素含有複素環と縮合した４−アミノピリミジンを挙げることができる。
【００４６】
本発明で使用するのに適したＩＲＭ化合物としては、５員の窒素含有複素環と縮合した２−アミノピリジンを有する化合物が含まれる。こうした化合物としては、例えば、これらに限定されないが、例えばアミド置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換イミダゾキノリンアミン、複素環エーテル置換イミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換イミダゾキノリンアミン、ヒドロキシルアミン置換イミダゾキノリンアミン、オキシム置換イミダゾキノリンアミン、６−、７−、８−、または９−アリール、ヘテロアリール、アリールオキシまたはアリールアルキレンオキシ置換イミダゾキノリンアミン、およびイミダゾキノリンジアミンなどの置換されたイミダゾキノリンアミンを含めたイミダゾキノリンアミン；これらに限定されないが、アミド置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、尿素置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、複素環エーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、尿素置換テトラヒドロイミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、ヒドロキシルアミン置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、オキシム置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、およびテトラヒドロイミダゾキノリンジアミンを含めたテトラヒドロイミダゾキノリンアミン；これらに限定されないが、アミド置換イミダゾピリジンアミン、スルホンアミド置換イミダゾピリジンアミン、尿素置換イミダゾピリジンアミン、アリールエーテル置換イミダゾピリジンアミン、複素環エーテル置換イミダゾピリジンアミン、アミドエーテル置換イミダゾピリジンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾピリジンアミン、尿素置換イミダゾピリジンエーテル、およびチオエーテル置換イミダゾピリジンアミンを含めたイミダゾピリジンアミン；１，２−架橋イミダゾキノリンアミン；６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン；イミダゾナフチリジンアミン；テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン；オキサゾロキノリンアミン；チアゾロキノリンアミン；オキサゾロピリジンアミン；チアゾロピリジンアミン；オキサゾロナフチリジンアミン；チアゾロナフチリジンアミン；ピラゾロピリジンアミン；ピラゾロキノリンアミン；テトラヒドロピラゾロキノリンアミン；ピラゾロナフチリジンアミン；テトラヒドロピラゾロナフチリジンアミン；ならびにピリジンアミン、キノリンアミン、テトラヒドロキノリンアミン、ナフチリジンアミン、またはテトラヒドロナフチリジンアミンと縮合した１Ｈ−イミダゾ二量体が挙げられる。
【００４７】
特定の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、またはチアゾロナフチリジンアミンであり得る。
【００４８】
特定の他の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、置換されたイミダゾキノリンアミン、テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、チアゾロナフチリジンアミン、ピラゾロピリジンアミン、ピラゾロキノリンアミン、テトラヒドロピラゾロキノリンアミン、ピラゾロナフチリジンアミン、またはテトラヒドロピラゾロナフチリジンアミンであり得る。
【００４９】
本明細書では、置換されたイミダゾキノリンアミンは、アミド置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換イミダゾキノリンアミン、複素環エーテル置換イミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換イミダゾキノリンアミン、ヒドロキシルアミン置換イミダゾキノリンアミン、オキシム置換イミダゾキノリンアミン、６−、７−、８−、または９−アリール、ヘテロアリール、アリールオキシ、またはアリールアルキレンオキシ置換イミダゾキノリンアミン、あるいはイミダゾキノリンジアミンを指す。本明細書では、置換されたイミダゾキノリンアミンは、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンおよび４−アミノ−α，α−ジメチル−２−エトキシメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノールを、特別かつ明確に除外する。
【００５０】
特定の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、例えば２−プロピルチアゾロ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンまたはＮ−［３−（４−アミノ−２−プロピルチアゾロ［４，５−ｃ］キノリン−７−イル）フェニル］メタンスルホンアミドなどのチアゾロキノリンアミンであり得る。
【００５１】
適切なＩＲＭ化合物としてはまた、プリン誘導体、イミダゾキノリンアミド誘導体、ベンズイミダゾール誘導体、アデニン誘導体、リン酸アミノアルキルグルコサミニド、および上述のオリゴヌクレオチド配列を挙げることができる。
【００５２】
免疫賦活用合剤は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを含む、単一の調合物で提供される可能性がある。他の場合には、免疫賦活用合剤は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドとＩＲＭ化合物とを含む可能性がある。あるいは、免疫賦活用合剤は、複数の調合物を含む可能性があり、その場合、ＩＲＭ化合物と免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、同じ調合物中に、あるいは異なる調合物中に提供される可能性がある。本発明の治療用合剤と共に使用するのに適した調合物は、以下に詳細に記載する。
【００５３】
免疫賦活用合剤は、任意の調合物、または対象への投与に適した調合物の組み合わせ中に提供される可能性がある。適切なタイプの調合物は、例えば、米国特許第５，７３６，５５３号；米国特許第５，２３８，９４４号；米国特許第５，９３９，０９０号；米国特許第６，３６５，１６６号；米国特許第６，２４５，７７６号；米国特許第６，４８６，１８６号；欧州特許ＥＰ ０ ３９４ ０２６号；および国際公開第ＷＯ０３／０４５３９１号に記載されている。調合物は、これらに限定されないが、溶液、懸濁液、エマルジョン、または任意の形の混合物を含めて任意の適切な形で提供される可能性がある。調合物は、薬学的に許容される任意の添加剤、担体、または賦形剤を含む可能性がある。例えば、調合物は、例えばクリーム、軟膏、エアロゾル調合物、フロンガスを使用しない（ｎｏｎ−ａｅｒｏｓｏｌ）スプレー、ジェル、ローション、錠剤、エリキシルなどの従来の投薬形態で送達される可能性がある。調合物は、これらに限定されないが、アジュバント、皮膚浸透促進剤、着色料、矯味剤、香料、保湿剤、増粘剤などを含めて、１種または複数の添加物をさらに含む可能性がある。
【００５４】
調合物は、任意の適切な方式で、例えば、経口的または非経口的に投与される可能性がある。本明細書では、「経口的に」は、経口摂取を含めて、消化管を介する投与を指す。「非経口的に」は、例えば、静脈内、筋肉内、経皮、皮下、経粘膜（例えば、吸入によって）、あるいは局所的などの、消化管を介する以外の投与を指す。
【００５５】
本発明を実施するのに適した調合物の組成は、これらに限定されないが、免疫賦活性オリゴヌクレオチドの物理的および化学的性質、担体の性質、意図される投薬レジメン、対象の免疫系の状態（例えば、抑制される、損なわれる、刺激される）、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを投与する方法、免疫賦活性オリゴヌクレオチド（もしあれば）と共に投与される任意のＴＬＲ８アゴニストの性質および効力、および調合物が投与される種を含めて、当技術分野で知られた因子に応じて変動する可能性がある。したがって、可能性のあるすべての用途に有効な調合物の組成を広く記載することは、実際的ではない。しかし、当業者は、こうした因子を十分に考慮することによって、適切な調合物を容易に決定することができる。
【００５６】
ある実施形態では、例えば、適切な調合物は、約０．０００１％から約１０％の免疫調節性オリゴヌクレオチドを含む可能性があるが、ある実施形態では、調合物は、この範囲外の濃度の免疫調節性オリゴヌクレオチドを含む可能性がある。例えば、調合物は、約０．０１％から約１％の免疫調節性オリゴヌクレオチドを含む可能性がある。
【００５７】
ある実施形態では、本発明の方法は、例えば、対象に対して約０．０００１％から約１０％の調合物で、ＩＲＭを対象に投与することを含む可能性があるが、ある実施形態では、ＩＲＭ化合物は、この範囲外の濃度のＩＲＭ化合物を提供する調合物を使用して投与される可能性がある。特定の実施形態では、該方法は、約０．０１％から約５％のＩＲＭ化合物を含む調合物、例えば、約０．１％から約０．５％のＩＲＭ化合物を含む調合物を対象に投与することを含む。
【００５８】
免疫細胞のＴＬＲ８介在性生物活性を増強するのに有効な免疫賦活性オリゴヌクレオチドの量は、少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を増大するのに十分な量である。有効となるために必要とされる免疫賦活性オリゴヌクレオチドの厳密な量は、例えば免疫賦活性オリゴヌクレオチドの物理的および化学的性質、担体の性質、意図される投薬レジメン、対象の免疫系の状態（例えば、抑制される、損なわれる、刺激される）、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを投与する方法、免疫賦活性オリゴヌクレオチドと共に投与されるＴＬＲ８アゴニストの効力、および調合物が投与される種などの、当技術分野で知られた因子に応じて変動する可能性がある。したがって、可能性のあるすべての用途に有効な量の免疫賦活性オリゴヌクレオチドを構成する量を広く記載することは、実際的ではない。しかし、当業者は、こうした因子を十分に考慮することによって、適切な量を容易に決定することができる。
【００５９】
ある実施形態では、本発明の方法は、例えば約１００ｎｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇの量を対象に提供するのに十分な免疫賦活性オリゴヌクレオチドを投与することを含むが、ある実施形態では、この方法は、この範囲外の用量の免疫賦活性オリゴヌクレオチドを投与することによって実施される可能性がある。これらの実施形態のうちのいくつかでは、この方法は、約１０μｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇの量、例えば約１００μｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇの量を対象に提供するのに十分な免疫賦活性オリゴヌクレオチドを投与することを含む。
【００６０】
本発明を実施するのに有効であるＴＬＲ８アゴニストの量は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドと組み合わせて、少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を誘導することが可能である量である。したがって、場合によっては、ＴＬＲ８アゴニストは、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずに投与される場合には通常、ＴＬＲ８介在性生物活性を誘導する可能性はないが、免疫賦活性オリゴヌクレオチドと共に提供される場合には、ＴＬＲ８介在性生物活性を誘導することが可能である量で提供される可能性がある。
【００６１】
ある実施形態では、本発明の方法は、例えば、約１００ｎｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇの量を対象に提供するのに十分なＴＬＲ８アゴニストを投与することを含むが、ある実施形態では、この方法は、この範囲外の用量のＴＬＲ８アゴニストを投与することによって実施される可能性がある。これらの実施形態のうちのいくつかでは、この方法は、約１０μｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇの量、例えば約１００μｇ／ｋｇから約１ｍｇ／ｋｇの量を対象に提供するのに十分なＴＬＲ８アゴニストを投与することを含む。
【００６２】
投薬レジメンは、これらに限定されないが、免疫賦活性オリゴヌクレオチドの物理的および化学的性質、担体の性質、投与される免疫賦活性オリゴヌクレオチドの量、対象の免疫系の状態（例えば、抑制される、損なわれる、刺激される）、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを投与する方法、所望される結果、免疫賦活性オリゴヌクレオチドと共に投与されるＴＬＲ８アゴニストの効力、および調合物が投与さる種を含めた、当技術分野で知られた多くの因子に、少なくともある程度は依存する可能性がある。したがって、可能性のあるすべての用途に有効な投薬レジメンを広く記載することは、実際的ではない。しかし、当業者は、こうした因子を十分に考慮することによって、適切な投薬レジメンを容易に決定することができる。
【００６３】
ある実施形態では、免疫賦活用合剤は、「必要に応じた」根拠で、すなわち、合剤の投与が所望される症状または状態が生じるときはいつでも投与される可能性がある。場合によっては、免疫賦活用合剤は、一度だけ投与される可能性がある。他の実施形態では、免疫賦活用合剤は、例えば、１日に１回ないし１ヶ月に１回の頻度で投与される可能性があるが、ある実施形態では、この方法は、この範囲外の頻度で免疫賦活用合剤を投与することによって実施される可能性がある。
【００６４】
本発明を実施することによって治療される可能性がある状態としては、これらに限定されないが、以下が挙げられる：
（ａ）例えばアデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えばＨＳＶ−Ｉ、ＨＳＶ−ＩＩ、ＣＭＶ、またはＶＺＶ）、ポックスウイルス（例えば、天然痘または牛痘などのオルソポックスウイルス、あるいは伝染性軟属腫）、ピコルナウイルス（例えばライノウイルスまたはエンテロウイルス）、オルソミクソウイルス（例えばインフルエンザウイルス）、パラミクソウイルス（例えばパラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、および呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ））、コロナウイルス（例えばＳＡＲＳ）、パポバウイルス（例えば、生殖器疣贅、尋常性疣贅、または足底疣贅を引き起こすものなどの乳頭腫ウイルス）、ヘパドナウイルス（例えばＢ型肝炎ウイルス）、フラビウイルス（例えばＣ型肝炎ウイルスまたはデング熱ウイルス）、あるいはレトロウイルス（例えば、ＨＩＶなどのレンチウイルス）による感染に起因する病気などのウイルス性の病気；
（ｂ）例えば、例えばエシェリキア属、エンテロバクター属、サルモネラ属、ブドウ球菌、赤痢菌、リステリア属、アエロバクター属、ヘリコバクター属、クレブシエラ属、プロテウス属、シュードモナス属、連鎖球菌、クラミジア属、マイコプラスマ属、肺炎球菌、ナイセリア属、クロストリジウム属、バチルス属、コリネバクテリウム属、マイコバクテリウム属、カンピロバクター属、ビブリオ属、セラチア属、プロビデンシア属、クロモバクテリウム属、ブルセラ属、エルシニア属、ヘモフィルス属、またはボルデテラ属などの細菌による感染に起因する病気などの細菌性の病気；
（ｃ）これらに限定されないが、クラミジア；カンジダ症、アスペルギルス症、ヒストプラスマ症、クリプトコックス髄膜炎を含めて菌類による病気；これらに限定されないが、マラリア、カリニ肺炎、リーシュマニア症、クリプトスポリジウム症、トキソプラズマ症、およびトリパノソーマ感染症を含めて、寄生虫による病気などの他の伝染病；ならびに
（ｄ）上皮内新生物、頸部異形成、光線性角化症、基底細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、黒色腫、腎細胞癌；これらに限定されないが、骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、および毛様細胞白血病を含めた白血病；ならびに他のガンなどの腫瘍疾患；
（ｅ）ＴH２介在性の、アトピー性皮膚炎または湿疹などのアトピー性疾患、好酸球増加症、喘息、アレルギー、アレルギー性鼻炎、およびオーメン症候群；
（ｆ）全身エリテマトーデス、本態性血小板血症、多発性硬化症、円板状狼瘡、円形脱毛症などの、特定の自己免疫性疾患；ならびに
（ｇ）例えば、ケロイド形成および他のタイプの瘢痕化の抑制（例えば、慢性的な損傷を含めた創傷治癒の増強）などの、損傷修復に関連する疾患。
【００６５】
さらに、免疫賦活用合剤は、ＢＣＧ、コレラ、ペスト、腸チフス、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザＡ型、インフルエンザＢ型、パラインフルエンザ、ポリオ、狂犬病、麻疹、流行性耳下腺炎、風疹、黄熱、破傷風、ジフテリア、ヘモフィルスインフルエンザｂ型、結核、髄膜炎菌および肺炎球菌ワクチン、アデノウイルス、ＨＩＶ、水痘、サイトメガロウイルス、デング熱、ネコ白血病、鶏ペスト、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２、豚コレラ、日本脳炎、呼吸器合胞体ウイルス、ロタウイルス、パピローマウイルス、黄熱病、およびアルツハイマー病と併用して使用するための、例えば、生存しているウイルス、細菌、または寄生虫による免疫原；不活性化されたウイルスによる、腫瘍から得られる、原生動物による、微生物から得られる、菌類の、あるいは、細菌性の免疫原、トキソイド、毒素；自己抗原；多糖；タンパク質；糖タンパク質；ペプチド；細胞ワクチン；ＤＮＡワクチン；自家ワクチン；組換え型タンパク質；糖タンパク質；ペプチドなどの、体液性および／または細胞介在性の免疫反応を上昇させる任意の材料と併用して使用するための、ワクチンのアジュバントとして有用である可能性がある。
【００６６】
本発明の方法は、任意の適切な対象に対して実施される可能性がある。適切な対象としては、限定的ではないが、ヒト、ヒト以外の霊長類、げっ歯類、イヌ、ネコ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、またはウシなどの動物が挙げられるが、これらに限定されない。
【実施例】
【００６７】
以下の実施例は、ただ単に、本発明の特徴、利点、および他の詳細をさらに説明するために選択されているに過ぎない。しかし、これらの例が、この目的を満たす一方、特定の材料および使用される量、ならびに他の条件および詳細が、この発明の範囲を過度に制限するであろう様式で解釈されるべきではないことを特に理解されたい。
【００６８】
これらの例で使用されるＩＲＭ化合物を、表１に示す。これらの例で使用される免疫賦活性オリゴヌクレオチドを、表２に示す。
【００６９】
【表１】
【００７０】
【表２】
【００７１】
配列番号１は、ギュルセル（Ｇｕｅｒｓｅｌ）ら、「Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．」（２００２年）第７１巻、８１３〜８２０ページに報告されている。配列番号２、配列番号４、および配列番号５は、ハートマン（Ｈａｒｔｍａｎｎ）ら、「Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」（２００３年）第３３巻、１６３３〜１６４１ページに報告されている。配列番号３は、ツー（Ｚｈｕ）ら、「Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．」（２００２年）第７２巻、１１５４〜１１６３ページに報告されている。配列番号６および配列番号７は、フォルマー（Ｖｏｌｌｍｅｒ）ら、「Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．」（２００２年）第１２巻、１６５〜１７５ページに報告されている。
【００７２】
実施例１
ヒトＴＬＲ８およびＮＦ−κβを、国際公開第２００４／０７１４５９号パンフレットに記載される通りに、ヒト腎臓上皮（ｈｕｍａｎ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｋｉｄｎｅｙ）２９３（ＨＥＫ２９３、アメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）、マナサス、ヴァージニア州（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５７３）細胞に形質移入させた。選択された形質移入された細胞を計数し、培地中に１ｍＬあたり５×１０5細胞の濃度に再懸濁させた。
【００７３】
フェノールレッドを含まないＤＭＥＭ完全培地（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．）、カマリロ、カリフォルニア州（Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ））から、培養培地を調製した。ウシ胎児血清（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．））を加えて、最終濃度を１０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）にし、ピルビン酸ナトリウム（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．））を加えて１ｍＭにし；Ｌ−グルタミン（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．））を加えて２ｍＭにし；ペニシリン（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．））を加えて１００Ｕ／ｍＬにし；ストレプトマイシン（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．））を加えて１００μｇ／ｍＬにした。
【００７４】
細胞の１００μＬ部分を、壁が白色で底も白色の９６−ウェルプレート（コーニングインコーポレイティッド（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｉｎｃ．）、コーニング、ニューヨーク州（Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ））のウェルに入れた。ＣｐＧ ＯＤＮ Ｋ２３（配列番号１）、ＣｐＧ ＯＤＮ ５１９２（配列番号６）、またはＣＰＧ ＯＤＮ ２０５９（配列番号７）（インビトロジェンコーポレーション（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．）、カールスバッド、カリフォルニア州（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））を、０．１μＭ、０．５μＭ、１．０μＭ、５．０μＭ、１０μＭ、または５０μＭの濃度で、３μＭのＩＲＭ１を含むあるいは含まない培地に加えることによって、細胞の一定分量を処理した。さらなる対照として、細胞のある一定分量を、３μＭのＩＲＭ１単独と共に保温したのに対して、細胞の別の一定分量は、作用薬を加えずに保温した（培地対照）。すべての例において、細胞は、５％ ＣＯ2および９８％湿度で、３７℃で終夜保温された。
【００７５】
細胞を終夜保温した後、１００μＬの体積の、還元したＬｕｃＬｉｇｈｔ Ｐｌｕｓ（パッカードインストゥルメンツ（Ｐａｃｋａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）、メリデン、コネチカット州（Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ））を、細胞のそれぞれの一定分量に加えた。プレートのそれぞれのウェルを、Ｌ−ｍａｘ照度計（モレキュラーデバイス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）、サニーヴェール、カリフォルニア州（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ））で読み取った。データは、示された作用薬と共に保温された細胞の一定分量中のルシフェラーゼ誘導の、陰性対照と比較した場合の増加の倍数として示される。結果を、図１に示す。
【００７６】
実施例２
ヒトＴＬＲ８を発現するＨＥＫ ２９３細胞を、実施例１に述べた通りに調製した。細胞の一定分量を、１．０μＭ、３．０μＭ、１０μＭ、または３０μＭの濃度で、ＣｐＧ ＯＤＮ Ｍ３５２（配列番号５）（インビトロジェンコーポレーション（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．）、カールスバッド、カリフォルニア州（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））を、３μＭのＩＲＭ１を含むあるいは含まない培養物に加えることによって処理した。対照として、細胞のある一定分量を、３μＭのＩＲＭ１と共に保温し、細胞の別の一定分量は、作用薬を加えずに保温した（培地対照）。すべての例において、細胞は、５％ ＣＯ2および９８％湿度で、３７℃で終夜保温された。
【００７７】
細胞を終夜保温した後、１００μＬの体積の、還元したＬｕｃＬｉｇｈｔ Ｐｌｕｓ（パッカードインストゥルメンツ（Ｐａｃｋａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）、メリデン、コネチカット州（Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ））を、細胞のそれぞれの一定分量に加えた。プレートのそれぞれのウェルを、Ｌ−ｍａｘ照度計（モレキュラーデバイス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）、サニーヴェール、カリフォルニア州（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ））で読み取った。データは、示された作用薬と共に保温された細胞の一定分量中のルシフェラーゼ誘導の、陰性対照と比較した場合の増加の倍数として示される。結果を、図２に示す。
【００７８】
実施例３
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ヒストパック−１０７７（ＨＩＳＴＯＰＡＱＵＥ−１０７７）（シグマアルドリッチ社（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．）、セントルイス、ミズーリ州（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））密度勾配遠心分離によって、ヒト末梢血から濃縮した。ＰＢＭＣを計数し、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．）培地と共に、完全ＲＰＭＩ １６４０に再懸濁させた。ウシ胎児血清（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．））を加えて、最終濃度を１０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）にし、Ｌ−グルタミン（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．））を加えて２ｍＭにし；ペニシリン（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．））を加えて１００Ｕ／ｍＬにし；ストレプトマイシン（バイオソースインターナショナルインコーポレイティッド（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．））を加えて１００μｇ／ｍＬにした。
【００７９】
２００μＬのウェルあたり５×１０5細胞を、平底９６−ウェルプレート（ベクトンディッキンソンラブウェア（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ Ｌａｂｗａｒｅ）、フランクリンレイクス、ニュージャージー州（Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ））に入れた。細胞の一定分量を、ＩＲＭ２単独（対照）を１０μＭ加えることによって、あるいは、０．０３μＭ、０．１μＭ、０．３μＭ、１．０μＭ、または３．０μＭの濃度のＣｐＧ ＯＤＮ Ｋ２３（配列番号１）、ＣｐＧ ＯＤＮ ２００６（配列番号４）、またはＣｐＧ ＯＤＮ ２２１６（配列番号２）（インビトロジェンコーポレーション（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．））を用いて処理した。すべての例において、細胞は、５％ ＣＯ2および９８％湿度で、３７℃で終夜保温された。
【００８０】
培養上清を、ヒト特異的ＩＬ−１２およびＴＮＦ ＢＶ（登録商標）イムノアッセイ（バイオベリスコーポレーション（ＢｉｏＶｅｒｉｓ Ｃｏｒｐ．）、ゲイザースバーグ、メリーランド州（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ））を使用して、ＩＬ−１２（ｐｇ／ｍＬ）またはＴＮＦ（ｐｇ／ｍＬ）産生について分析した。結果を、図３および図４に示す。
【００８１】
実施例４
ヒト単球由来樹状細胞（ｍＤＣ）を、国際公開第２００４／０７１４５９号パンフレットに記載される通りに産生した。
【００８２】
２００μＬのウェルあたり１×１０5細胞を、平底９６−ウェルプレート（ベクトンディッキンソンラブウェア（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ Ｌａｂｗａｒｅ）、フランクリンレイクス、ニュージャージー州（Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ））に入れた。細胞の一定分量を、３μＭのＩＲＭ１を単独で加えることによって（対照）、あるいは、０．０３μＭ、０．１μＭ、０．３μＭ、１．０μＭ、または３．０μＭの濃度のＣｐＧ ＯＤＮ Ｋ２３（配列番号１）、ＣｐＧ ＯＤＮ ２００６（配列番号４）、ＣｐＧ ＯＤＮ Ｍ３５２（配列番号５）、またはＣｐＧ ＯＤＮ ２２１６（配列番号２）（インビトロジェンコーポレーション（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．））を用いて処理した。すべての例において、細胞は、５％ ＣＯ2および９８％湿度で、３７℃で終夜保温された。
【００８３】
培養上清を、ヒト特異的ＩＬ−１２およびＴＮＦ ＢＶ（登録商標）イムノアッセイ（バイオベリスコーポレーション（ＢｉｏＶｅｒｉｓ Ｃｏｒｐ．）、ゲイザースバーグ、メリーランド州（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ））を使用して、ＩＬ−１２（ｐｇ／ｍＬ）またはＴＮＦ（ｐｇ／ｍＬ）産生について分析した。結果を、図５および図６に示す。
【００８４】
実施例５
ヒトＴＬＲ８を発現するＨＥＫ２９３細胞を、実施例１に述べた通りに調製した。細胞の一定分量は、１μＭのＩＲＭ１単独（対照）を用いて、あるいは、０．０３μＭ、０．１２μＭ、０．３μＭ、１．１μＭ、３．３μＭ、１０μＭ、３０μＭ、または１００μＭの濃度の５−ｍｅｒ（配列番号８）、１１−ｍｅｒ（配列番号９）、１３−ｍｅｒ（配列番号１０）、または１７−ｍｅｒ（配列番号１１）ポリ（Ａ）オリゴヌクレオチド配列（インビトロジェンコーポレーション（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．））を用いて処理した。陰性対照として、細胞のある一定分量を、作用薬を加えずに保温した（培地対照）。
【００８５】
細胞を終夜保温した後、この細胞を、実施例３に述べた通りにＴＮＦ産生について分析した。データは、示された作用薬と共に保温された細胞の一定分量中のルシフェラーゼ誘導の、陰性対照と比較した場合の増加の倍数として示される。結果を、図７中に示す。
【００８６】
実施例６
ＰＢＭＣを、実施例３に述べた通りに調製した。細胞の一定分量は、３μＭのＩＲＭ１単独（対照）を用いて、あるいは、０．０３μＭ、０．１２μＭ、０．３μＭ、１．１μＭ、３．３μＭ、１０μＭ、または３０μＭの濃度の、ポリ（Ｃ）オリゴヌクレオチド（５−ｍｅｒ、配列番号１２；１０−ｍｅｒ、配列番号１３；１５−ｍｅｒ、配列番号１４；または２５−ｍｅｒ、配列番号１５）、あるいはポリ（Ｔ）オリゴヌクレオチド（５−ｍｅｒ、配列番号１６；８−ｍｅｒ、配列番号１７；１１−ｍｅｒ、配列番号１８；または１４−ｍｅｒ、配列番号１９）（インビトロジェンコーポレーション（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．））を用いて処理した。
【００８７】
培養上清を、ヒト特異的ＩＬ−１２およびＴＮＦ ＢＶ（登録商標）イムノアッセイ（バイオベリスコーポレーション（ＢｉｏＶｅｒｉｓ Ｃｏｒｐ．））、ゲイザースバーグ、メリーランド州（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ））を使用して、ＴＮＦ（ｐｇ／ｍＬ）産生について分析した。結果を、図８および図９に示す。
【００８８】
本明細書に引用される特許、特許文献、および刊行物の完全な開示は、それぞれが個々に組み込まれるかのごとく、その内容全体が参照として組み込まれるものとする。論争の場合には、本明細書は、定義を含めて検討するべきである。
【００８９】
この発明に対する、この発明の範囲および趣旨から逸脱することのない様々な改変および変更は、当業者は明らかとなるであろう。例示的な実施形態および実施例は、例として提供されるに過ぎず、本発明の範囲を制限することを意図するものではない。本発明の範囲は、以下の通りに記述される特許請求の範囲によってのみ制限される。
【図面の簡単な説明】
【００９０】
【図１】形質移入された細胞系における、ＣｐＧ ＯＤＮ免疫賦活性オリゴヌクレオチドによる、ＩＲＭによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の増大を示す。
【図２】形質移入された細胞系における、ＣｐＧ ＯＤＮ免疫賦活性オリゴヌクレオチドによる、ＩＲＭによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の増大を示す。
【図３】末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）における、ＣｐＧ ＯＤＮ免疫賦活性オリゴヌクレオチドによる、ＩＲＭによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の増大を示す。
【図４】末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）における、ＣｐＧ ＯＤＮ免疫賦活性オリゴヌクレオチドによる、ＩＲＭによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の増大を示す。
【図５】単球由来樹状細胞における、ＣｐＧ ＯＤＮ免疫賦活性オリゴヌクレオチドによる、ＩＲＭによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の増大を示す。
【図６】単球由来樹状細胞における、ＣｐＧ ＯＤＮ免疫賦活性オリゴヌクレオチドによる、ＩＲＭによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の増大を示す。
【図７】形質移入された細胞系における、様々な長さのポリ（Ａ）免疫賦活性オリゴヌクレオチドによる、ＩＲＭによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の増大を示す。
【図８】ＰＢＭＣにおける、様々な長さのポリ（Ｃ）免疫賦活性オリゴヌクレオチドによる、ＩＲＭによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の増大を示す。
【図９】ＰＢＭＣにおける、様々な長さのポリ（Ｔ）免疫賦活性オリゴヌクレオチドによる、ＩＲＭによって誘導されるＴＬＲ８介在性生物活性の増大を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫賦活性オリゴヌクレオチドと組み合わせて、少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を誘導することが可能である量のＴＬＲ８アゴニスト；および
ＴＬＲ８アゴニストが少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を誘導する程度を増大させるのに有効な量の免疫賦活性オリゴヌクレオチド
を含む免疫賦活用合剤であって、
ＴＬＲ８アゴニストが、置換されたイミダゾキノリンアミン、テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、チアゾロナフチリジンアミン、ピラゾロピリジンアミン、ピラゾロキノリンアミン、テトラヒドロピラゾロキノリンアミン、ピラゾロナフチリジンアミン、またはテトラヒドロピラゾロナフチリジンアミンを含む、前記免疫賦活用合剤。
【請求項２】
免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、ＣｐＧオリゴジヌクレオチドを含む、請求項１に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項３】
ＣｐＧオリゴジヌクレオチドが、ＣｐＧ−Ａオリゴジヌクレオチドを含む、請求項２に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項４】
ＣｐＧオリゴジヌクレオチドが、ＣｐＧ−Ｂオリゴジヌクレオチドを含む、請求項２に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項５】
ＣｐＧオリゴジヌクレオチドが、ＣｐＧ−Ｃオリゴジヌクレオチドを含む、請求項２に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項６】
免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、ポリ（Ｔ）オリゴヌクレオチド、ポリ（Ａ）オリゴヌクレオチド、またはポリ（Ｃ）オリゴヌクレオチドを含む、請求項１に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項７】
ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、単一の調合物中に提供される、請求項１に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項８】
免疫賦活性オリゴヌクレオチドと組み合わせて、少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を誘導することが可能である量のＴＬＲ８アゴニスト；および
ＴＬＲ８アゴニストが少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を誘導する程度を増大させるのに有効な量の免疫賦活性オリゴヌクレオチド
を含む免疫賦活用合剤であって、
免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、ＣｐＧオリゴヌクレオチド以外のオリゴヌクレオチドを含む、前記免疫賦活用合剤。
【請求項９】
ＴＬＲ８アゴニストが、イミダゾキノリンアミン、テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、チアゾロナフチリジンアミン、ピラゾロピリジンアミン、ピラゾロキノリンアミン、テトラヒドロピラゾロキノリンアミン、ピラゾロナフチリジンアミン、またはテトラヒドロピラゾロナフチリジンアミンを含む、請求項８に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項１０】
ＴＬＲ８アゴニストが、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、またはチアゾロナフチリジンアミンを含む、請求項９に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項１１】
ＴＬＲ８アゴニストが、チアゾロキノリンアミンを含む、請求項９に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項１２】
ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、単一の調合物中に提供される、請求項８に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項１３】
免疫賦活性オリゴヌクレオチドと組み合わせて、少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を誘導することが可能である量のＴＬＲ８アゴニスト；および
ＴＬＲ８アゴニストによって誘導される少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性の相乗作用的な増大を提供するのに有効な量の免疫賦活性オリゴヌクレオチド
を含む、前記免疫賦活用合剤。
【請求項１４】
ＴＬＲ８介在性生物活性の前記相乗作用的な増大は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずにＴＬＲ８アゴニストによって誘導される生物活性を少なくとも２倍上回るものである、請求項１３に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項１５】
ＴＬＲ８介在性生物活性の前記相乗作用的な増大は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずにＴＬＲ８アゴニストによって誘導される生物活性を少なくとも３倍上回るものである、請求項１３に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項１６】
ＴＬＲ８介在性生物活性の前記相乗作用的な増大は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずにＴＬＲ８アゴニストによって誘導される生物活性を少なくとも５倍上回るものである、請求項１３に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項１７】
免疫細胞においてＴＬＲ８介在性生物活性を誘導する方法であって、
ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドとを含む免疫賦活用合剤と、免疫細胞を接触させることを含み、その際、免疫賦活性オリゴヌクレオチドの量は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずにＴＬＲ８アゴニストと免疫細胞を接触させた場合よりも大きな程度に細胞のＴＬＲ８介在性生物活性を増大させるのに有効な量であり、
ＴＬＲ８アゴニストが、置換されたイミダゾキノリンアミン、テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、またはチアゾロナフチリジンアミンを含むＩＲＭ化合物を含む、前記方法。
【請求項１８】
免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、ＣｐＧオリゴジヌクレオチドを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ＣｐＧオリゴジヌクレオチドが、ＣｐＧ−Ａを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ＣｐＧオリゴジヌクレオチドが、ＣｐＧ−Ｂオリゴジヌクレオチドを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
ＣｐＧオリゴジヌクレオチドが、ＣｐＧ−Ｃオリゴジヌクレオチドを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
免疫細胞が、ＰＢＭＣまたは単球由来樹状細胞を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
ＴＬＲ８介在性生物活性が、サイトカインの合成、ケモカインの合成、共刺激性マーカーの合成、抗原提示細胞の成熟、またはＢリンパ球の増殖を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
サイトカインが、ＴＮＦまたはＩＬ−１２を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
免疫細胞を免疫賦活用合剤と接触させることが、ｉｎ ｖｉｔｒｏで単離された免疫細胞に免疫賦活用合剤を加えることを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２６】
免疫細胞を免疫賦活用合剤と接触させることが、免疫賦活用合剤がｉｎ ｖｉｖｏで対象の免疫細胞と接触するのを可能にする方式で、対象に免疫賦活用合剤を投与することを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２７】
免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、ポリ（Ｔ）オリゴヌクレオチド、ポリ（Ａ）オリゴヌクレオチド、またはポリ（Ｃ）オリゴヌクレオチドを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２８】
ＩＲＭ化合物と免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、ＩＲＭ−免疫賦活性オリゴヌクレオチド複合体を形成する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２９】
ＩＲＭ−免疫賦活性オリゴヌクレオチド複合体が、免疫賦活性オリゴヌクレオチドへのＩＲＭ化合物の挿入を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
免疫細胞においてＴＬＲ８介在性生物活性を誘導する方法であって、
ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドとを含む免疫賦活用合剤と、免疫細胞を接触させることを含み、その際、免疫賦活性オリゴヌクレオチドの量は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずにＴＬＲ８アゴニストと免疫細胞を接触させた場合よりも大きな程度に細胞のＴＬＲ８介在性生物活性を増大させるのに有効な量であり、
免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、ＣｐＧオリゴヌクレオチド以外のオリゴヌクレオチドを含む、前記方法。
【請求項３１】
ＴＬＲ８アゴニストが、イミダゾキノリンアミン、テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、チアゾロナフチリジンアミン、ピラゾロピリジンアミン、ピラゾロキノリンアミン、テトラヒドロピラゾロキノリンアミン、ピラゾロナフチリジンアミン、またはテトラヒドロピラゾロナフチリジンアミンを含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
ＴＬＲ８アゴニストが、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、またはチアゾロナフチリジンアミンを含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
ＴＬＲ８アゴニストがチアゾロキノリンアミンを含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドが複合体を形成し、該複合体において、ＴＬＲ８アゴニストは免疫賦活性オリゴヌクレオチドに挿入される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
免疫細胞においてＴＬＲ８介在性生物活性を誘導する方法であって、
ＴＬＲ８アゴニストと、ＴＬＲ８アゴニストによって誘導される少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性の相乗作用的な増大を提供するのに有効な量の免疫賦活性オリゴヌクレオチドとを含む免疫賦活用合剤と、免疫細胞を接触させることを含む、前記方法。
【請求項３６】
ＴＬＲ８介在性生物活性の前記相乗作用的な増大は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずにＴＬＲ８アゴニストによって誘導される生物活性を少なくとも２倍上回るものである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
ＴＬＲ８介在性生物活性の前記相乗作用的な増大は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずにＴＬＲ８アゴニストによって誘導される生物活性を少なくとも３倍上回るものである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
ＴＬＲ８介在性生物活性の前記相乗作用的な増大は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずにＴＬＲ８アゴニストによって誘導される生物活性を少なくとも５倍上回るものである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドが複合体を形成し、該複合体において、ＴＬＲ８アゴニストは免疫賦活性オリゴヌクレオチドに挿入される、請求項３６に記載の方法。
【請求項１】
免疫賦活性オリゴヌクレオチドと組み合わせて、少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を誘導することが可能である量のＴＬＲ８アゴニスト；および
ＴＬＲ８アゴニストが少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を誘導する程度を増大させるのに有効な量の免疫賦活性オリゴヌクレオチド
を含む免疫賦活用合剤であって、
ＴＬＲ８アゴニストが、置換されたイミダゾキノリンアミン、テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、チアゾロナフチリジンアミン、ピラゾロピリジンアミン、ピラゾロキノリンアミン、テトラヒドロピラゾロキノリンアミン、ピラゾロナフチリジンアミン、またはテトラヒドロピラゾロナフチリジンアミンを含む、前記免疫賦活用合剤。
【請求項２】
免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、ＣｐＧオリゴジヌクレオチドを含む、請求項１に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項３】
ＣｐＧオリゴジヌクレオチドが、ＣｐＧ−Ａオリゴジヌクレオチドを含む、請求項２に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項４】
ＣｐＧオリゴジヌクレオチドが、ＣｐＧ−Ｂオリゴジヌクレオチドを含む、請求項２に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項５】
ＣｐＧオリゴジヌクレオチドが、ＣｐＧ−Ｃオリゴジヌクレオチドを含む、請求項２に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項６】
免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、ポリ（Ｔ）オリゴヌクレオチド、ポリ（Ａ）オリゴヌクレオチド、またはポリ（Ｃ）オリゴヌクレオチドを含む、請求項１に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項７】
ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、単一の調合物中に提供される、請求項１に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項８】
免疫賦活性オリゴヌクレオチドと組み合わせて、少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を誘導することが可能である量のＴＬＲ８アゴニスト；および
ＴＬＲ８アゴニストが少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を誘導する程度を増大させるのに有効な量の免疫賦活性オリゴヌクレオチド
を含む免疫賦活用合剤であって、
免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、ＣｐＧオリゴヌクレオチド以外のオリゴヌクレオチドを含む、前記免疫賦活用合剤。
【請求項９】
ＴＬＲ８アゴニストが、イミダゾキノリンアミン、テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、チアゾロナフチリジンアミン、ピラゾロピリジンアミン、ピラゾロキノリンアミン、テトラヒドロピラゾロキノリンアミン、ピラゾロナフチリジンアミン、またはテトラヒドロピラゾロナフチリジンアミンを含む、請求項８に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項１０】
ＴＬＲ８アゴニストが、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、またはチアゾロナフチリジンアミンを含む、請求項９に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項１１】
ＴＬＲ８アゴニストが、チアゾロキノリンアミンを含む、請求項９に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項１２】
ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、単一の調合物中に提供される、請求項８に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項１３】
免疫賦活性オリゴヌクレオチドと組み合わせて、少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性を誘導することが可能である量のＴＬＲ８アゴニスト；および
ＴＬＲ８アゴニストによって誘導される少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性の相乗作用的な増大を提供するのに有効な量の免疫賦活性オリゴヌクレオチド
を含む、前記免疫賦活用合剤。
【請求項１４】
ＴＬＲ８介在性生物活性の前記相乗作用的な増大は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずにＴＬＲ８アゴニストによって誘導される生物活性を少なくとも２倍上回るものである、請求項１３に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項１５】
ＴＬＲ８介在性生物活性の前記相乗作用的な増大は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずにＴＬＲ８アゴニストによって誘導される生物活性を少なくとも３倍上回るものである、請求項１３に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項１６】
ＴＬＲ８介在性生物活性の前記相乗作用的な増大は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずにＴＬＲ８アゴニストによって誘導される生物活性を少なくとも５倍上回るものである、請求項１３に記載の免疫賦活用合剤。
【請求項１７】
免疫細胞においてＴＬＲ８介在性生物活性を誘導する方法であって、
ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドとを含む免疫賦活用合剤と、免疫細胞を接触させることを含み、その際、免疫賦活性オリゴヌクレオチドの量は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずにＴＬＲ８アゴニストと免疫細胞を接触させた場合よりも大きな程度に細胞のＴＬＲ８介在性生物活性を増大させるのに有効な量であり、
ＴＬＲ８アゴニストが、置換されたイミダゾキノリンアミン、テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、またはチアゾロナフチリジンアミンを含むＩＲＭ化合物を含む、前記方法。
【請求項１８】
免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、ＣｐＧオリゴジヌクレオチドを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ＣｐＧオリゴジヌクレオチドが、ＣｐＧ−Ａを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ＣｐＧオリゴジヌクレオチドが、ＣｐＧ−Ｂオリゴジヌクレオチドを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
ＣｐＧオリゴジヌクレオチドが、ＣｐＧ−Ｃオリゴジヌクレオチドを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
免疫細胞が、ＰＢＭＣまたは単球由来樹状細胞を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
ＴＬＲ８介在性生物活性が、サイトカインの合成、ケモカインの合成、共刺激性マーカーの合成、抗原提示細胞の成熟、またはＢリンパ球の増殖を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
サイトカインが、ＴＮＦまたはＩＬ−１２を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
免疫細胞を免疫賦活用合剤と接触させることが、ｉｎ ｖｉｔｒｏで単離された免疫細胞に免疫賦活用合剤を加えることを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２６】
免疫細胞を免疫賦活用合剤と接触させることが、免疫賦活用合剤がｉｎ ｖｉｖｏで対象の免疫細胞と接触するのを可能にする方式で、対象に免疫賦活用合剤を投与することを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２７】
免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、ポリ（Ｔ）オリゴヌクレオチド、ポリ（Ａ）オリゴヌクレオチド、またはポリ（Ｃ）オリゴヌクレオチドを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２８】
ＩＲＭ化合物と免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、ＩＲＭ−免疫賦活性オリゴヌクレオチド複合体を形成する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２９】
ＩＲＭ−免疫賦活性オリゴヌクレオチド複合体が、免疫賦活性オリゴヌクレオチドへのＩＲＭ化合物の挿入を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
免疫細胞においてＴＬＲ８介在性生物活性を誘導する方法であって、
ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドとを含む免疫賦活用合剤と、免疫細胞を接触させることを含み、その際、免疫賦活性オリゴヌクレオチドの量は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずにＴＬＲ８アゴニストと免疫細胞を接触させた場合よりも大きな程度に細胞のＴＬＲ８介在性生物活性を増大させるのに有効な量であり、
免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、ＣｐＧオリゴヌクレオチド以外のオリゴヌクレオチドを含む、前記方法。
【請求項３１】
ＴＬＲ８アゴニストが、イミダゾキノリンアミン、テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、チアゾロナフチリジンアミン、ピラゾロピリジンアミン、ピラゾロキノリンアミン、テトラヒドロピラゾロキノリンアミン、ピラゾロナフチリジンアミン、またはテトラヒドロピラゾロナフチリジンアミンを含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
ＴＬＲ８アゴニストが、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、またはチアゾロナフチリジンアミンを含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
ＴＬＲ８アゴニストがチアゾロキノリンアミンを含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドが複合体を形成し、該複合体において、ＴＬＲ８アゴニストは免疫賦活性オリゴヌクレオチドに挿入される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
免疫細胞においてＴＬＲ８介在性生物活性を誘導する方法であって、
ＴＬＲ８アゴニストと、ＴＬＲ８アゴニストによって誘導される少なくとも１種のＴＬＲ８介在性生物活性の相乗作用的な増大を提供するのに有効な量の免疫賦活性オリゴヌクレオチドとを含む免疫賦活用合剤と、免疫細胞を接触させることを含む、前記方法。
【請求項３６】
ＴＬＲ８介在性生物活性の前記相乗作用的な増大は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずにＴＬＲ８アゴニストによって誘導される生物活性を少なくとも２倍上回るものである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
ＴＬＲ８介在性生物活性の前記相乗作用的な増大は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずにＴＬＲ８アゴニストによって誘導される生物活性を少なくとも３倍上回るものである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
ＴＬＲ８介在性生物活性の前記相乗作用的な増大は、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを伴わずにＴＬＲ８アゴニストによって誘導される生物活性を少なくとも５倍上回るものである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
ＴＬＲ８アゴニストと免疫賦活性オリゴヌクレオチドが複合体を形成し、該複合体において、ＴＬＲ８アゴニストは免疫賦活性オリゴヌクレオチドに挿入される、請求項３６に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【公表番号】特表２００８−５２３０８４（Ｐ２００８−５２３０８４Ａ）
【公表日】平成２０年７月３日（２００８．７．３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５４５６２９（Ｐ２００７−５４５６２９）
【出願日】平成１７年１２月８日（２００５．１２．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０４４４４８
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０６３１５２
【国際公開日】平成１８年６月１５日（２００６．６．１５）
【出願人】（５９９０５６４３７）スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー (1,802)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年７月３日（２００８．７．３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１２月８日（２００５．１２．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０４４４４８
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０６３１５２
【国際公開日】平成１８年６月１５日（２００６．６．１５）
【出願人】（５９９０５６４３７）スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー (1,802)
【Ｆターム（参考）】
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