動物投与用ポリマー組成物
生物分子（あるいは、通常、両性イオン基（通常はホスホリルコリン基）を表出している血球）との相互作用に有効な表面に表出しているマトリクスポリマーを含有する粒子状塞栓療法用組成物について記載する。この粒子は、カテーテル又は皮下針を用いた投与による塞栓療法において使用するために、例えば水含量を調節することによって調節される好適なサイズ及び圧縮性を有する。マトリクスポリマーはクロスリンクしていてもよい。この粒子は球状であることが好ましい。具体例は、非イオン性かつクロスリンク可能なコモノマーとの２−メタクリロイルオキシエチル−２’−トリメチルアンモニウムエチルリン酸内部塩で形成されたクロスリンク可能なコポリマーでコーティングされた、クロスリンクポリビニルアルコールマトリクスである。このコーティングは、有機溶媒の溶液でコーティングした後にクロスリンクさせることによって安定化する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、動物（通常はヒト）に投与するポリマー組成物に関する。このポリマーは、特に、投与の間、水分を吸水する形態を有し、体内経路を閉塞させるように使用することが好ましい。この方法は、治療に用いられることが好ましいが、診断に用いられてもよい。
【背景技術】
【０００２】
塞栓療法（embolotherapy）は、特定の血管を閉塞させるために、ある因子が放出する所望の位置に経動脈的なカテーテル手法を常時依拠する、インターベンション医療（interventional medicine）の発達しつつある分野である。この治療は、例えば、肝細胞癌などのある種の血管分布が過多した腫瘍へ血液供給を遮断するために用いられ、最近では、子宮筋腫における一般的な治療選択となっている。これは、動静脈奇形（ＡＶＭ）として知られている動脈と静脈との間の異常なシャントを治療するため、静脈奇形を治療するため、術後の出血などを予防するためなどにも用いられる。
【０００３】
押込み可能なコイル、取り外し可能なコイル、及び電気的に取り外し可能なコイルを含む多数の承認された塞栓形成装置がある。取り外し可能なバルーン製品系もある。塞栓形成部位への経カテーテル送達を必要とする寒栓性材料の使用範囲もあり、この部位で寒栓性材料が血流に放出してこの血流を遮断する。これは、小さな粒子又は球状体を用いた血管の物理的な（一般的に、血栓形成による）遮断によって達成されるか、あるいは、液状の塞栓剤の場合では、ある種の相変化又は反応が流動性材料を設置して血管のキャストを形成することを必要とする。
【０００４】
最も一般的な粒状の塞栓剤は、１９７０年代前半から使用されているポリビニルアルコール（ＰＶＡ）発泡粒子である。この材料は不規則な形状をし、塞栓形成に共通して用いられているマイクロカテーテルにおいて、凝集して閉塞を形成することができる。さらに、いくつかの場合において、ＰＶＡ粒子は、その大きさに基づいて予想されるほど遠位まで塞栓形成しないことも知られている。このＰＶＡ粒子は、血管内の使用において長年許容されているが、ＰＶＡは、十分に生体適合性を有する材料ではない。ＰＶＡは、血小板に対して反応性を有し、ＰＶＡをヘパリンで修飾してこの効果を低減させることを扱った者もいる（例えば、非特許文献１参照。）。実は、塞栓形成された血管の大部分はしばしば血栓で満たされ、血栓の形成がＰＶＡ粒子の塞栓の可能性の一因となっている。これは、凝固障害を有し得る患者が、ＰＶＡを用いた場合に容易に血栓形成することができないという不利な点を有している。さらに、長期にわたる血栓の自己溶解により、標的血管が不要にも再疎通してしまう。ＰＶＡを分解するのには数ヶ月かかるので、中等度の炎症が引き起こされる。これは、長期の疼痛及び合併症の潜在的な原因となり得る。動物研究におけるいくつかの場合において、炎症を引き起こす塞栓剤は、皮膚から細片を取り除く方法とほとんど同じ方法で、血管から「排出される」ことが分かっている（例えば、非特許文献２参照。）。この場合も、数日から数ヶ月までの間において、望ましくない再疎通が生じ得る。
【０００５】
ホスホリルコリン（ＰＣ）ベースのポリマーは、当該技術分野において周知である。塞栓療法におけるホスホリルコリン（ＰＣ）ベースのポリマーの使用についての唯一の記載は、特許文献１及び特許文献２における多イオン複合体ゲルの形態である。
【０００６】
ＰＣポリマーの粒子形態が記載されている。Ishiharaは、血流を通る薬物担体として、ＰＣポリマー凝集物の使用について記載している（例えば、非特許文献３及び特許文献３参照。）。しかしながら、これらの凝集物は、設計によってナノにサイズ化され、最もよい血液適合性を有し、塞栓を形成することもない。
【０００７】
粒子含有カラムは、材料の血栓形成性を決定するのに用いられる。この目的のため、過去に、ＰＣポリマーは溶媒蒸発技術によりクロスリンクポリ（メタクリル酸メチル）ビーズ上にコーティングされている（例えば、非特許文献４参照。）。ポリ（メタクリル酸メチル）は、水吸収性ではない。
【０００８】
さらに、Sugiyamaは、ＭＰＣが成長粒子を安定化させ、かつ、球状体中に取り込ませた表面に表出させる、乳化剤を用いない乳化重合によって一般的に作製されるホスホリルコリンを含有するミクロスフィアの調製について、広範にわたって報告している。例えば０．１〜１０mol％のＭＰＣ含量を有するスチレン、メタクリル酸メチル、メタクリル酸ｎ−ブチル、メタクリル酸ヘキシル、及びスチレンから作製されるポリマーの球状粒子が記載されている（例えば、非特許文献５、非特許文献６、及び非特許文献７参照。）。これらのアクリル／スチレン性材料は比較的硬い。それらは水中油型乳化重合プロセスにより合成され、従ってこのポリマーは、有意な水膨潤性ではないと考えられる。生成物の粒子サイズは５００nm未満であった。
【０００９】
非特許文献８には、全モノマーをベースとして５〜７０重量％のＳＰＰ濃度範囲のＮ−（３−スルホプロピル）−Ｎ−メタクリルオミジルプロピル（Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムベタイン）（ＳＰＰ）の存在下において、ペルオキソ二硫酸カリウムを用いたポリスチレンの水中油型乳化重合が記載されている。ラテックス生成物の粒子サイズは、開始剤及びベタインコモノマーレベルに依存していた。再度、重合開始前にすべてのモノマーは、水性連続相に分散した。ラテックス生成物の固体濃度は、約１０重量％であった。
【００１０】
特許文献４において、Hwaらは、水性連続相中における、メタクリル酸エチル及びアクリルアミドを用いたＮ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−メタクリロイルオキシエチル）−Ｎ−（３−スルホプロピルアンモニウム内部塩）（ＳＰＥ）の共重合を記載している。Hwaは、準安定性の水中油型生成物を生成している。彼は、ラテックスの粒子サイズを記載していない。
【００１１】
特許文献５において、本発明者らは、疎水性コモノマー、イオン性コモノマー、又は反応性コモノマーなどのコモノマーを用いた両性イオンモノマーのコポリマーの範囲を記載している。このコポリマーは、モノマー及びポリマーが可溶な溶媒中にすべてのモノマーを一緒に溶解することによって形成され、沈殿技術によって回収される。生成物はマイクロエマルジョンであってもよいことが示唆されているが、乳化重合の例は示されていない。
【特許文献１】ＷＯ−Ａ−００２９４８１
【特許文献２】ＷＯ−Ａ−００２８９２０
【特許文献３】ＪＰ−Ａ−１１−３２２９４８
【特許文献４】ＵＳ−Ａ−３４９７４８２
【特許文献５】ＷＯ−Ａ−９３／０１２２１
【非特許文献１】Sefton, M.V. et al, Biomaterials, 1992; 13(7): 421-4
【非特許文献２】T.W.Clark, oral presentation: "Embolotherapy, materials, techniques and clinical applications", June 21-22, 2002, Pasadena, CA.
【非特許文献３】Proc. Int. Symp. Controlled. Rel. Bioactive Mater., 1997,24th, 465-466
【非特許文献４】J. Biomed. Mater. Res., 24, 1069-1077, 1990
【非特許文献５】Polymer Journal (Tokyo, Japan), 1994, 26(5), 561-569
【非特許文献６】Polymer J. 1993, 25 (5), 521-527
【非特許文献７】J. Polymer Sci A: Polym. Chem. 1997, 35, 3349-3357
【非特許文献８】Zimehl et al, in Colloid Polym. Sci. (1990) 268,924-933
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、水性液体を吸収するポリマーマトリクスの粒子を含有し、この粒子は４０〜４０００μｍの範囲の直径を有し、この粒子表面は両性イオン基を表出することを特徴とする、新規な治療用組成物又は新規な診断用組成物を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
この組成物は塞栓療法に用いられ得る。塞栓療法は、子宮筋腫塞栓形成、腫瘍周囲もしくは腫瘍切除部位周囲における血管の塞栓形成、拡張蛇行静脈もしくは精索静脈瘤の塞栓形成、動静脈奇形もしくは静脈奇形の塞栓形成、胃腸管出血の止血、ならびに切除前及び切除後の塞栓形成に対するものであり得る。あるいは、この治療は、動脈瘤の充填、組織の填塞、創傷の癒合、瘻孔の閉鎖、又は括約筋填塞の適応などの他の医療用途もしくは化粧品用途において用いられ得る。この組成物の診断的な用途には、循環をモニタリングする工程を含み得る。
【００１４】
ポリマーマトリクスは、例えば以下の投与条件下において、生分解性であってもよい。生分解性組成物は、塞栓形成が一時的に必要とされる場合において有用であり得る。しかしながら、このポリマーマトリクスは、投与後の条件下において、実質的に非生分解性であることが好ましい。組成物が実質的に非生分解性である場合、この組成物は、例えば、長期塞栓療法又は組織のバルク化に使用され得る。このポリマーは、in vivo条件下又は擬似性条件下において、少なくとも２年間は分解されないことが好ましい。好適な試験方法を考案することもできる。生分解は、このポリマーの性質及び任意のクロスリンク又は他の誘導化の程度により影響されることが知られている。これらは、以下の記載に基づき、当業者が選択することができる。
【００１５】
本発明の組成物は、粒子中に吸水させる成分として水性液体のみを含有し得るが、この組成物は、粒子を懸濁するのに十分な量の連続水性媒体をさらに含有することが好ましい。水性液体は、必要に応じて生理学的なｐＨに緩衝化させた生理食塩水であることが好ましい。この組成物は、さらに調製しないで体内へ導入するのに適していることが好ましく、従って無菌であることが好ましい。この組成物は、例えばカテーテル又は皮下針を介した注射によって、体内へ直接投与することができる容器に提供され得る。
【００１６】
両性イオン基は、リン酸アンモニウム、リン酸ホスホニウム、もしくは、リン酸スルホニウム、又はリン酸エステル両性イオン基であることが好ましく、より好ましくは下記一般式ＩＩの基であり、
【化１】
式中、部分Ａ３及びＡ４は、同じであるか異なり、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、又は原子価結合、好ましくは−Ｏ−であり、Ｗ＋は、アンモニウム、ホスホニウム、又はスルホニウムカチオン基を含有する基、及び好ましくはＣ１〜１２−アルカンジイル基であるアニオン及びカチオン部分を結合している基であり、Ｗ＋は、式−Ｗ１−Ｎ＋Ｒ３３、−Ｗ１−Ｐ＋Ｒ４３、−Ｗ１−Ｓ＋Ｒ４２、又は−Ｗ１−Ｈｅｔ＋の基であることが好ましく、Ｗ１は、１つ以上のエチレン性不飽和二重もしくは三重結合、二置換アリール（アリーレン）、アルキレンアリーレン、アリーレンアルキレン、もしくはアルキレンアリールアルキレン、シクロアルカンジイル、アルキレンシクロアルキル、シクロアルキルアルキレン、又はアルキレンシクロアルキルアルキレンを任意選択により含有する１つ以上、好ましくは２〜６個の炭素原子のアルカンジイルであり、基Ｗ１は、１つ以上のフッ素置換基及び／又は１つ以上の官能基を任意選択により含有し、基Ｒ３は、同じであるか異なり、各々は、水素又は１〜４個の炭素原子のアルキル、好ましくはメチル又はフェニルなどのアリールであり、あるいは基Ｒ３の２つは、それらが結合している窒素原子と一緒に、５〜７個の原子を含有する脂肪族複素環式環を形成し、あるいは３つの基Ｒ３は、それらが結合している窒素原子と一緒に、５〜７個の原子を有する複素芳香族環を形成し、それらの複素芳香族環のいずれかの環は、各環中に５〜７個の原子を含有する別の飽和環又は不飽和環と縮合して縮合環構造を形成することができ、任意選択により基Ｒ３の１つ以上は、親水性官能基により置換され、基Ｒ４は、同じであるか異なり、各々は、Ｒ３又は基ＯＲ３であり、Ｒ３は、先に定義された通りであり、Ｈｅｔは、芳香族窒素、芳香族リン、又は芳香族硫黄、好ましくは窒素を含有する環、例えば、ピリジンである。
【００１７】
一般的には、式IIの基は、好ましくは下記一般式ＩＩＩを有し、
【化２】
式中、基Ｒ５は同じであるか異なり、各々は水素又はＣ１〜４アルキルであり、ｍは１〜４であり、基Ｒ５は好ましくは同じであり、好ましくはメチルである。
【００１８】
ホスホベタインをベースとする基において、Ｘは、下記一般式ＩＶを有することができ、
【化３】
式中、Ａ５は、原子価結合、−Ｏ−、−Ｓ−、又は−ＮＨ−、好ましくは−Ｏ−であり、Ｒ６は、原子価結合（Ａ５と一緒に）、又はアルカンジイル、−Ｃ（Ｏ）アルキレン−、もしくはＣ（Ｏ）ＮＨアルキレン、好ましくアルカンジイルであり、該アルカンジイル鎖中に１〜６個の炭素原子を含有することが好ましく、Ｗ２は、Ｓ、ＰＲ７、又はＮＲ７であり、基Ｒ７又は基Ｒ７は各々、水素又は１〜４個の炭素原子のアルキルであり、あるいは２つの基Ｒ７はそれらが結合しているヘテロ原子と一緒に５〜７個の原子の複素環式環を形成し、Ｒ８は、１〜２０個、好ましくは１〜１０個、より好ましくは１〜６個の炭素原子のアルカンジイルであり、Ａ６は、結合、ＮＨ、Ｓ、又はＯ、好ましくはＯであり、Ｒ９は、ヒドロキシル、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ１〜１２アルコキシ、Ｃ７〜１８アラルキル、Ｃ７〜１８−アラルコキシ、Ｃ６〜１８アリール、又はＣ６〜１８アリールオキシ基である。
【００１９】
一般式ＩＶの基を含有する化合物において、Ａ５は、結合であり、Ｒ６は、Ｃ２〜６アルカンジイルであり、Ｗ２は、ＮＲ７であり、各々のＲ７は、Ｃ１〜４アルキルであり、Ｒ８は、Ｃ２〜６アルカンジイルであり、Ａ６は、Ｏであり、Ｒ９は、Ｃ１〜４アルコキシであることが好ましい。
【００２０】
あるいは、Ｘは、アニオンがスルフェート基、スルホネート基、又はカルボキシレート基を含有する両性イオンであり得る。
【００２１】
このような基の一例は、下記一般式ＸＩのスルホベタイン基であり、
【化４】
式中、基Ｒ３６は同じであるか異なり、各々は水素又はＣ１〜４アルキルであり、ｓは２〜４である。
【００２２】
基Ｒ３６は、同じであることが好ましい。基Ｒ３６の少なくとも１つはメチルであることもまた好ましく、基Ｒ３６は両方ともメチルであることがより好ましい。
【００２３】
ｓは、２又は３であることが好ましく、３であることがより好ましい。
【００２４】
カルボキシレート基を有する両性イオン基の別の例は、（アミン基及びカルボン酸基が結合している）アルファ炭素原子が生体適合性ポリマーの骨格にリンカー基を介して結合しているアミノ酸部分である。このような基は、下記一般式ＸＩＩによって表すことができ、
【化５】
式中、Ａ７は、原子価結合、−Ｏ−、−Ｓ−、又は−ＮＨ−、好ましくは−Ｏ−であり、Ｒ３７は、原子価結合（任意選択によりＡ７と一緒に）、又は１〜６個の炭素原子を含有することが好ましいアルカンジイル、−Ｃ（Ｏ）アルキレン−、もしくはＣ（Ｏ）ＮＨアルキレン、好ましくはアルカンジイルであり、基Ｒ３８は同じであるか異なり、各々は水素又は１〜４個の炭素原子のアルキル、好ましくはメチルであり、あるいは基Ｒ３８の２つ又は３つは、それらが結合している窒素と一緒に、５〜７個の原子の複素環を形成するか、あるいは３つの基Ｒ３８は、それらが結合している窒素原子と一緒に、各環中に５〜７個の原子を含有する縮合環複素環式構造を形成する。
【００２５】
カルボキシレート基を有する両性イオンの別の例は、カルボキシベタイン−Ｎ＋（Ｒ３９）２（ＣＨ２）ｒＣＯＯ−であり、式中、Ｒ３９基は同じであるか異なり、各々は水素又はＲ１〜４アルキルであり、ｒは、２〜６、好ましくは２又は３である。
【００２６】
両性イオン基は、コーティング材料の成分であり得るか、又はポリマーが非両性イオン含有ポリマーで形成されるポリマーマトリクスの表面に結合し得る。例えば、コーティングは、マトリクスポリマーの表面上へ吸収されるポリマーを含有し得る。このようなコーティングは、例えば、表面に共有結合することにより、あるいはコーティングがポリマーを含有する場合には表面でクロスリンクすることにより、使用条件下で安定でなければならない。あるいは、このポリマーはマトリクスポリマーと静電結合することができる。両性イオン基は、マトリクスポリマー上の基であり得るか、あるいはマトリクスポリマーの１つであり得る。例えば、このマトリクスポリマーは、両性イオン基を含有するポリマー及び両性イオン基を含有するポリマーとは異なる第２のポリマーのブレンドであり得る。
【００２７】
一般的に、この両性イオン基は、下記一般式Ｉのモノマーを含むエチレン性不飽和モノマーから形成されるマトリクスポリマー又はコーティングポリマーのいずれかのポリマー上のペンダント基であり、
ＹＢＸ Ｉ
式中、Ｙは、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＯ−Ａ−、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−Ｃ６Ｈ４−Ａ１−、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＨ２Ａ２、Ｒ２Ｏ−ＣＯ−ＣＲ＝ＣＲ−ＣＯ−Ｏ、ＲＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−Ｏ−、ＲＣＨ＝Ｃ（ＣＯＯＲ２）ＣＨ２ＣＯ−Ｏ、
【化６】
から選択されるエチレン性不飽和基であり、Ａは、−Ｏ−又はＮＲ１であり、Ａ１は、結合、（ＣＨ２）ＩＡ２、及び（ＣＨ２）ＩＳＯ３−から選択され、Ｉは、１〜１２であり、Ａ２は、結合、−Ｏ−、Ｏ−ＣＯ−、ＣＯ−Ｏ、ＣＯ−ＮＲ１−、−ＮＲ１−ＣＯ、Ｏ−ＣＯ−ＮＲ１−、ＮＲ１−ＣＯ−Ｏ−から選択され、Ｒは、水素又はＣ１〜４アルキルであり、Ｒ１は、水素、Ｃ１〜４アルキル、又はＢＸであり、Ｒ２は、水素又はＣ１〜４アルキルであり、Ｂは、結合、又は１つ以上のフッ素置換基を任意選択により含有する直鎖分子状アルカンジイル、アルキレンオキサアルキレン、又はアルキレン（オリゴオキサルキレン）基であり、Ｘは、両性イオン基である。
【００２８】
一般式Ｉの両性イオンモノマーにおいて、エチレン性不飽和基Ｙは、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＯ−Ａ−であることが好ましいこのようなアクリル部分は、メタクリルであることが好ましく、すなわち、式中、Ｒがメチルであるか又はアクリルであり、すなわち、式中、Ｒは水素であることが好ましい。化合物は、（メタ）アクリルアミド化合物（式中、ＡはＮＲ１である）であり、この場合、Ｒ１は水素であることが好ましく、メチルはあまり好ましくなく、化合物がエステル、すなわち、式中、ＡがＯであることがで最も好ましい。
【００２９】
一般式Ｉのモノマーにおいて、Ｙが好ましい（アルク）アクリル基である場合は特に、Ｂがアルカンジイル基であることが最も好ましい。このような基の水素原子のいくつかをフッ素原子で置換することができる場合、Ｂは無置換アルカンジイル基であることが好ましく、２〜６個の炭素原子を有する直鎖基であることが最も好ましい。
【００３０】
式中のＸが一般式ＩＩ（ただし、式中、Ｗ＋は、Ｗ１Ｎ＋Ｒ３３である）で表されるモノマーは、本発明者らの先の明細書ＷＯ−Ａ−９３０１２２１に記載の通りにして製造することができる。ホスホニウム及びスルホニウムアナログは、ＷＯ−Ａ−９５２０４０７及びＷＯ−Ａ−９４１６７４９に記載されている。
【００３１】
一般式ＩＶ基を含有するモノマーは、アミノ置換モノマーとホスホランとを反応させるＪＰ−Ｂ−０３−０３１７１８に記載の方法によって製造することができる。
【００３２】
特に好ましい両性イオンモノマーは、２−メタクリロイルオキシエチル−２’−トリメチルアンモニウムエチルリン酸内部塩である。
【００３３】
エチレン性不飽和モノマーはコモノマー、例えば、下記一般式Ｖの化合物をさらに含有することができ、
【化７】
式中、Ｒ１０は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキル、及び基ＣＯＯＲ１４から選択され、Ｒ１４は、水素及びＣ１〜４アルキルから選択され、Ｒ１１は、水素、ハロゲン、及びＣ１〜４アルキルから選択され、Ｒ１２は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキル、及び基ＣＯＯＲ１４から選択されるが、但し、Ｒ１０及びＲ１２は両方ともＣＯＯＲ１４ではなく、Ｒ１３は、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ１〜２０アルコキシカルボニル、モノ−もしくはジ−（Ｃ１〜２０アルキル）アミノカルボニル、Ｃ６〜２０アリール（アルカリールを含む）、Ｃ７〜２０アラルキル、Ｃ６〜２０アリールオキシカルボニル、Ｃ１〜２０−アラルキルオキシカルボニル、Ｃ６〜２０アリールアミノカルボニル、Ｃ７〜２０アラルキル−アミノ、ヒドロキシル、又はＣ２〜１０アシルオキシ基であり、それらはいずれも、ハロゲン原子、アルコキシ、オリゴ−アルコキシ、アリールオキシ、アシルオキシ、アシルアミノ、アミン（モノアルキルアミノ及びジアルキルアミノならびにトリアルキルアンモニウムを含む、ただし、アルキル基は置換されていてもよい）、カルボキシル、スルホニル、ホスホリル、ホスフィノ、（モノアルキルホスフィン及びジアルキルホスフィンならびにトリアルキルホスホニウムを含む）、両性イオン、ヒドロキシル基、ビニルオキシカルボニル及びその他のビニル置換基又はアリル置換基、ならびにトリアルコキシシリル基などの反応性シリル又はシリルオキシ基から選択される１つ以上の置換基を有していてもよく、あるいはＲ１３及びＲ１２又はＲ１３及びＲ１１は一緒に、−ＣＯＮＲ１５ＣＯを形成し、Ｒ１５は、Ｃ１〜２０アルキル基である。
【００３４】
基Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３の少なくとも２つはハロゲンであることが好ましく、又は水素原子であることがより好ましい。Ｒ１０及びＲ１１は両方とも水素原子であることが好ましい。一般式Ｖの化合物は、スチレンをベースとする化合物又はアクリルをベースとする化合物であることが特に好ましい。スチレンをベースとする化合物において、Ｒ１３は、アリール基を表し、特に置換基がアミノアルキル基、カルボキシレート基、又はスルホネート基である置換アリール基を表す。コモノマーがアクリルタイプの化合物である場合、Ｒ１３はアルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、又はアリールオキシカルボニル基である。このような化合物において、Ｒ１３は、ヒドロキシ置換基を任意選択により有するＣ１〜２０−アルコキシカルボニル基であることが最も好ましい。アクリル化合物は、一般に、式中のＲ１２がメチルであるメタクリルである。
【００３５】
コモノマーは、例えば、Ｃ１〜２４アルキル（アルク）−アクリレートもしくはアクリルアミド、モノヒドロキシ−Ｃ１〜６−アルキル（アルク）−アクリレートもしくはジヒドロキシ−Ｃ１〜６−アルキル（アルク）−アクリレート、又はアクリルアミド、オリゴ（Ｃ２〜３アルコキシ）Ｃ２〜１８−アルキル（アルク）−アクリレート、又はアクリルアミド、アクリルアミドスチレン、酢酸ビニル、又はＮ−ビニルラクタムなどの非イオン性コモノマーであることが好ましい。
【００３６】
両性イオン基がマトリクスポリマー上のコーティングの形態である場合、例えば本発明者らの先の出願ＷＯ９３／０５０８１号に記載されるグラフト重合プロセスのようにして、マトリクスポリマーの存在下でエチレン性不飽和モノマーの重合を行うことができる。あるいは、両性イオンモノマーを含有するモノマーを予めポリマーに形成し、次いで、一般的には予め形成されたマトリクスポリマーの表面上にコーティングすることによってマトリクスポリマーと一体化することができる。コーティングポリマーとしての使用に好適であり、かつ、両性イオン基を含有する安定な結合ポリマーは、本発明者らの先の出願ＷＯ９３／０１２２１に記載されている。
【００３７】
両性イオン基がマトリクスポリマー上にある場合、マトリクスポリマーは、両性イオン基を含有するポリマーのみからなることができるか、あるいは両性イオン基を含有するポリマーと第２の異なるポリマーとの混合物を含有することができる。この第２のポリマー及び両性イオン基を含有するポリマーは、重合後混合することができるか、あるいは互いにクロスリンクさせてもさせなくてもよい。ポリマーの一方は、他方の予め形成されたポリマーの存在下で重合することによって形成することができる。両性イオン基を含有するポリマーとその他のポリマーとのブレンドの例は、ＷＯ−Ａ−９４１４８９７に示され、適切な水吸収性、水不溶性、及び圧縮性を有するブレンドは、その文書に記載されるブレンドから選択され、粒子へと形成することができる。多イオン複合体は、ブレンドとみなすことができる。
【００３８】
マトリクスポリマーは、実質的にクロスリンクされていなくてもよい。例えば、ある割合の疎水性部分を有するポリマーは、このような部分の存在によって水不溶性となることができるが、それにも関わらず、水性液体を吸収することができ、本発明において有用となる。このようなマトリクスポリマーは、例えば、アルキル（アルク）−アクリレートもしくはアクリルアミド、又はあまり好ましくはないがスチレンなどの疎水性モノマーを含むエチレン性不飽和モノマーで形成することができる。しかしながら、マトリクスポリマーはクロスリンクしていることが好ましい。これによって、十分な機械的安定性、水膨潤性、及び粘着性を有する粒子の形成が可能になり、本発明において有用となる。クロスリンクは静電的であってもよい。例えば、一方の極性の電荷をいくつか有するポリマーは、対イオンによって荷電された２価以上のクロスリンク剤、一般的には、極性が反対のペンダント電荷を有するポリマーを用いてクロスリンクしていてもよい。対イオンによって荷電されたポリマーのブレンドを多イオン複合体と称することができる。
【００３９】
静電的にクロスリンクしたポリマーマトリクスの特定の一実施態様は、ペンダント両性イオン基及びペンダントアニオン基又はカチオン基を有する第１のポリマー、ならびに、場合に応じて全体のカチオン電荷：アニオン電荷の比が２：１〜１：２の範囲となるような量でブレンドされたペンダントカチオン基又はアニオン基を有する第２のポリマーで形成された多イオン複合体である。アニオン電荷及びカチオン電荷のレベルは、ポリマーの反復単位をベースとして５〜１００％の範囲であることが好ましい。溶媒の存在下で２つのポリマーを合わせてブレンドを形成し、次いで溶媒を除去することにより、このような多イオン複合体を形成することができる。水膨潤性かつ水不溶性のブレンドの形成に適切である好適なプロセスは、本発明者らの先の出願番号ＷＯ００／２９４８１に記載されている。
【００４０】
マトリクスポリマーは共有結合によりクロスリンクしていることが好ましいが、この理由は、このような粒子はより高い機械的な安定性を有しているためである。マトリクスポリマーがエチレン性不飽和モノマーから形成される場合、クロスリンクは、重合プロセス中にクロスリンクを形成するジエチレン性不飽和モノマー又は多エチレン性不飽和モノマーをエチレン性不飽和モノマー中に含有させることによってでもよい。多価クロスリンク剤は、末端を有するポリマー、好ましくはペンダントエチレン性不飽和基を有するポリマーであるマクロマーであってもよい。クロスリンクモノマーを有する両性イオンモノマー及び非イオン性コモノマーを重合することによって形成され、かつ、本発明において使用される粒子を形成するのに好適であるクロスリンクしたポリマーは、ＷＯ−Ａ−９２に記載されている。あるいは、エチレン性不飽和モノマーは、重合工程中、より好ましくは重合工程に続いて、分子間クロスリンクを形成することが可能なペンダント官能基を有する１つ以上のモノマーを含有してもよい。このような官能性モノマーは、本発明者らの先の国際公開公報ＷＯ９３／０１２２１又はＷＯ９８／３０６１５において、基底を成す表面と共有結合を形成することができるもの又は分子間クロスリンクを形成することができるものである定義されるもであれば任意のものでよい。
【００４１】
上述した通り、市販の粒子状塞栓療法用組成物は、クロスリンクしたポリビニルアルコール粒子を含有する。ドリバロン（Drivalon）の商用名で市販されている製品は、水性液体の存在下で膨潤する球状粒子を含有すると言われ、このマトリクスポリマーはアルデヒドによってクロスリンクしたポリビニルアルコールである。別のタイプの製品は、不規則な外部形状を有し、かつ、大きさが乾燥状態と吸水状態との間でほとんど変化することない発泡ポリビニルアルコールを含有する。この場合においても、ポリビニルアルコールは、例えば、グルタルアルデヒドなどのアルデヒドでクロスリンクしていると考えられている。別のポリビニルアルコールをベースとする粒子状組成物は、ＷＯ０１／６８７２０に記載されている。この粒子は、エチレン性不飽和ペンダント基の結合によって修飾された予め重合されたポリビニルアルコールをクロスリンクすることによって形成される。ペンダント基を形成するための反応は、先の米国出願公開第５５０８３１７号及び共通の優先権によるこれに関連する公表物に記載されている。エチレン性不飽和ペンダント基がラジカル開始反応によってクロスリンクして、この反応により、付加反応が分子間のエチレン性不飽和基の間で行われ、ポリビニルアルコールが水不溶性となるが水膨潤性にもなる。バルク固体としてクロスリンク生成物を粉砕することによるか、あるいは誘導体化ポリビニルアルコールを非溶媒中に分散してクロスリンクが開始される分散相を形成することによって粒子前駆体を形成するかのいずれかにより、粒子を形成することができる。この粒子は、非溶媒、例えば非極性有機溶媒から回収することができる。Thanoo et al, J. App. Biomat. (1991), 2, 67〜72に記載される方法により、分散相中でポリビニルアルコールのアルデヒドベースのクロスリンクを用いて粒子状材料を形成することもできる。
【００４２】
共有結合によりクロスリンクしたポリビニルアルコールは、予め形成した粒子を両性イオンを含有するコーティングポリマーでコーティングして安定なコーティングを形成することにより、両性イオン表面を備えることができる。コーティングプロセス及び好適なポリマーは、例えば、本発明者らの先の国際公開ＷＯ９３／０１２２１及びＷＯ９８／３０６１５に記載されている。このコーティングは、吸水形態又は乾燥形態において予め形成されたクロスリンクポリビニルアルコール粒子を用いて実施してもよい。このコーティングは、粒子状形態における粒子（すなわち、粒子が懸濁されている連続液体媒体なし）を用いて実施してもよいし、あるいは、好ましくはコーティングポリマーを含有する液体懸濁媒体中で実施してもよい。好適な例を以下に記載する。
【００４３】
粒子状塞栓療法用組成物を形成するのに用いられている他のクロスリンクしたポリマーは、クロスリンクしたヒアルロン酸及び他の多糖類である。これらのポリマーはマトリクスポリマーとしても好適である。
【００４４】
本発明において、両性イオン基は表面に表出されていなければならず、そのことは、使用中に生物学的液体に暴露される表面が両性イオン基を保有していなければならないことを意味する。この両性イオン基の効果は、表面を非血栓形成性とすることである。従って、この表面は、一般的には、血栓形成性をもたらす成分に、具体的には両性イオン基を保有している血球自体に接触可能な表面である。ポリマーマトリクスが実質的に非多孔質である場合、すなわち、血液細胞又はましてや大きな生物分子によるアクセスができるほど十分に大きな孔を有していない場合、粒子は表面周辺上のみに両性イオン基を有してもよい。しかしながら、マトリクスが多孔質である場合、例えば、ポリビニルアルコールのスポンジタイプ材料である場合、さらに孔の表面も両性イオン基を備えている。従って、多孔質材料用のコーティングプロセスでは、コーティングが孔の表面上に沈着されるように、両性イオン基を含有するコーティング材料が孔の表面と接触することが可能にならなければならない。好適なプロセスを以下に例示する。
【００４５】
本発明において、両性イオン基がないこと以外は同様である表面と比較して、表面の血栓形成性を低減するように両性イオン基を備えた粒子によって塞栓を形成することができる組成物が製造されることは驚くべきことである。上述の通り、粒子状塞栓療法用組成物は、一つには粒子が循環中で留まる血栓を引き起こすゆえに、効果的であることが従来技術により示唆されている。通常の事象の過程において血栓が破壊される場合には、再疎通が起こるであろう。本発明によって、血栓溶解（自己分解）の際の早期の再疎通の影響を受けにくいより長く持続する塞栓を生成することが可能になる。
【００４６】
本発明の組成物のさらなる利点は、塞栓部位で任意の炎症性反応を最小にすることが期待されることである。これは、体の炎症性反応によって塞栓部位からそれらの面前に排出される従来技術の組成物で経験している問題を回避するはずである。これは、このような機構に起因する再疎通率を減少すると考えられている。
【００４７】
粒子は、例えば、マトリクスポリマー材料のバルク固体又はゲルを粉砕することによってあるいはマトリクスポリマーの小さな粒子を塊状又は顆粒状にすることによって形成された不規則な形状を有することができるが、粒子は実質的に球状の形状であることが好ましい。球状粒子では、移植部位での組織による炎症性反応又は他の副作用がより少ないと考えられている。
【００４８】
組成物中の粒子サイズは、意図する用途及び送達手段に基づいて選択される。例えば、組成物が塞栓療法に用いられる場合、塞栓形成される血管の直径に応じて粒子サイズを選択することができる。現在入手できる粒子状塞栓療法用組成物で知られている通り、施術者による使用のために組成物の範囲が与えられることが好都合であり、その各々は異なるサイズの範囲内の粒子を含有する。異なるメンバーの生成物におけるサイズは重複していてもよいのに対し、生成物内の粒子が単一プロセスで製造され、かつ、製造後にサイズに基づいて分離されることで、粒子サイズ間ではほとんど重複していないことが一般的には好都合である。
【００４９】
粒子の直径は、マルバーン・マルチサイザー（Malvern Multisizer）、デジタル画像分析、光学顕微鏡の使用を含む技術により、及び較正目盛り付レンズ（calibrated graticules）の使用により又は篩分けにより測定することができる。本発明の粒子は、例えば、吸収される生理食塩水を平衡状態にしたときに約４０μｍを上回るサイズを有する。すべての粒子は、十分に水を吸水させたときに１００μｍを上回る直径を有することが好ましく、例えば１５０μｍを上回る直径を有する。粒子の最大サイズは最高で４０００μｍであることができ、実質的にすべての粒子は３０００μｍ未満であることが好ましく、例えば最高で２０００μｍのサイズである。生成物の範囲が異なる粒子サイズを有する集団を含有する場合、好適なサイズの範囲は４０〜１００μｍ、１００〜３００μｍ、３００〜５００μｍ、５００〜７００μｍ、７００〜９００μｍ、９００〜１２００μｍ、１２００〜１５００μｍ、１５００〜２０００μｍ、及び２０００〜２８００μｍである。
【００５０】
本発明は、治療又は診断のための動物投与用の組成物の製造において、本発明の第１の態様に関して上記に定義した粒子の使用をさらに提供する。
【００５１】
本発明のこの態様において、塞栓形成、例えば、子宮筋腫塞栓形成、腫瘍もしくは腫瘍切除部位周囲での血管の塞栓形成、拡張蛇行静脈もしくは精索静脈瘤の塞栓形成、動静脈奇形もしくは静脈奇形の塞栓形成、胃腸管出血の止血、瘻の塞栓形成、ならびに避妊目的でのファローピウス管及び精細管の塞栓形成方法において、この組成物を投与し得る。
【００５２】
好ましくはヒトである動物に投与される組成物は、連続液相のない膨潤したゲル粒子の形態であり得る。しかしながら、この組成物は、粒子を懸濁する連続水性液体を含有していることが好ましい。粒子は、例えば、膨潤した粒子と同じ密度（同種浮遊物）の連続水性相の使用によるか、連続相を粘稠にすることによるか、あるいは、例えば粒子をコーティングする安定剤の使用により、沈降に対して安定化することができる。動物への投与直前に、連続水性液体を乾燥又は一部吸水させた形態で供給された粒子に添加することができる。しかしながら、組成物は、使用可能な状態で提供されることが好ましく、従って一般的には無菌であり、この組成物を容器からカテーテル又は皮下針などによって直接投与することができる容器中に提供してもよい。
【００５３】
ポリマー組成物自体のいくつかは新規であってもよい。それらは、直接導入用以外の使用又は動物への投与に好適な組成物を構成するための使用を有していてもよい。本発明のさらなる態様によれば、水不溶性かつ水吸収性のポリマーのマトリクスであるコアを含有し、平衡状態で室温において生理食塩水を吸水させたときに４０〜４０００μｍの範囲の直径を有し、かつ、その外部表面上に両性イオンを表出していることにより特徴づけられる新規なミクロスフィアを提供する。
【００５４】
いくつかの実施態様の新規な組成物の製造方法は、本発明の一部でもあり、特許請求の範囲の請求項３０〜３３に記載されている。
【００５５】
本発明のこの態様において、ミクロスフィアのサイズの分布は、最も小さい粒子の直径と最も大きい粒子の直径との間の相違が５０μｍと１０００μｍとの間であり、好ましくは１００〜５００の間であり、より好ましくは１５０〜３００μｍの間となるものである。異なるサイズ範囲を有する一連の集団はキットにおいて提供されてもよい。このようなキットにおける集団のサイズの範囲は、重複していても重複していなくてもよい。
【００５６】
このミクロスフィアは、治療又は診断による動物の治療方法における使用であることが好ましい。
【００５７】
動物に投与される組成物は、本発明の態様のいずれにおいても、用途に応じて選択される追加成分を含有してもよい。この組成物は、投与後の組成物位置のモニタリングを可能とする造影剤、例えば、放射線不透過剤又は核磁気共鳴造影剤を含有してもよい。この造影剤は粒子中で結合してもよいし、連続水性懸濁液に懸濁してもよい。例えば、動物被検体へ投与する前に、ビシペイク（Visipaque）、オムニペイク（Omnipaque）、リピオドール（Lipiodol）、又は他の市販の材料などの既知の放射線不透過造影剤を本発明の組成物と混合してもよい。この造影剤は非イオン性材料であることが好ましい。あるいは、この造影剤は、Benzina, A. et al., Biomat. (1994) 15(14) 1122-1128及びJ. Biomed. Mater. Res. (1996) 32(3), 459-466によって記載される通り、例えば、２−（２’−ヨードベンゾイル）メタクリル酸エチル又は２−（２’，３’，５’−トリヨードベンゾイル）メタクリル酸エチルなどのヨウ化モノマーを他のエチレン性不飽和モノマーと共重合することにより、マトリクスポリマー材料又はコーティングポリマーと共有結合させてもよい。あるいは、この造影剤は、例えば生成中に粒子が形成される成分によって分散させることにより、ポリマーマトリクスに共有結合せずに、ポリマーマトリクスを介して単に分散させてもよい。
【００５８】
さらに又はあるいは、この組成物は、この組成物中に薬物を存在させることができる。この薬物は、粒子を取り囲む水性連続相に懸濁してもよいし、及び／又はマトリクスポリマーと共有結合させることによるか、外部表面に共有結合又は静電結合させることによるか、あるいは疎水性ドメイン中に分配することにより、溶液中又は吸水させる水性液体中のいずれかの粒子内にあってもよい。薬物が粒子内にある場合、動物被検体への投与後により長い期間にわたってこの薬物を放出することができる。粒子状塞栓療法用材料を含有する薬物送達系は既知である。薬物をこのタイプの粒子状薬物送達系に組み入れる方法に関する汎用の一般知識及びこの薬物送達系からの放出を調節するための汎用の一般知識に基づき、当業者は本発明のこの実施態様を実施することができる。適切な薬物としては、例えば、抗生物質、血栓を形成することが望ましい場合には血栓形成剤、及び／又は例えば腫瘍の化学塞栓療法（chemoembolisation）用の細胞傷害薬又は細胞増殖抑止薬が挙げられる。薬物は、抗血管形成薬であってもよい。抗血管形成薬の送達に関するミクロスフィア送達系は、ＷＯ９５／０３０３６に記載されている。その明細書に記載される薬物のいずれも、本発明において特に腫瘍又は腫瘍切除部位の治療に用いることができる。
【００５９】
この組成物は、粒子塞栓療法の送達に現在使用されている器具を用いて投与される。この器具は、カテーテル又はシリンジに取り付けられた皮下針を含み得る。この器具は、送達される組成物の粒子サイズ及び粒子のエラストマー特性に応じて選択することができる。従って、送達中に組成物が流れる導管は、粒子が遮断されることなく通過できるサイズでなければならない。
【００６０】
水が吸収された形態の粒子は、投与されたときにある程度の弾性を有する。従って、この粒子に圧縮力が供される送達中に、この粒子は器具の導管内で変形することができる。粒子が規則的な形状を有している場合、特に実質的に球状である場合、このような任意の変形後にも粒子は回復しければならない。器具を介した送達の間、環境をシミュレートしようとする速度で膨潤形態の粒子に所定の圧力を施しながら圧縮の程度を測定する方法によって、弾性特性を調べることができる。この試験は弾性限界まで行うことができ、及び／又は圧力を取り除いて回復を測定することによって逆にすることができる。本発明者らは、粒子が、十分に水を吸水した場合、すなわち、生理食塩水で平衡化させた場合に、少なくとも３０重量％、好ましくは少なくとも５０重量％の水含量を有し、良好な弾性特性を有することを見出した。
【実施例】
【００６１】
付随の実施例において本発明をさらに例示する。
【００６２】
＝＝＝参照実施例１：ＰＣ材料を用いた炎症の低減＝＝＝
ヒト血液から得られる単核細胞の接着性を見るin vitro方法を用いて、ＰＣをベースとする材料に対する潜在的な免疫応答を評価した。
【００６３】
３６歳の健康な男性ボランティア（ドナーの格差に関連する問題を排除するために１人のドナー）から得られた２４ｍＬのヒト静脈血を、５００μＬの滅菌脱イオン水に溶解している１２μｇのヘパリン（シグマ・アルドリッチ社（Sigma Aldrich）、プール、ドーセット州、英国）を含有する３０ｍＬのユニバーサル管（ビビー・スターリン社（Bibby Sterilin）、スタフォードシャー州、英国）中に回収した。次いで、ヒストペイク（Ｈistopaque）１０７７（シグマ社、プール、ドーセット州、英国）を用い、製造者の方法論に従って血液分離を行った。ヘパリン化した血液を２つに分け、２つ清浄な一般的な遠心管中で、１２．５ｍＬのヒストペイク１０７７（シグマ・アルドリッチ社、プール、ドーセット州、英国）上に注意深く層状にした。次いで、これらの管を室温（１８〜２６℃）において７００ｇで３０分間遠心した（デンレイ社（Denley）、ＢＳ４００）。遠心分離後、単核細胞を含有する各管中の区別できる不透明／グレーの層を回収し、清浄な遠心管に移した。次いで、滅菌したＰＢＳ１０ｍＬを添加し、続いて室温において２００ｇで１０分間遠心分離することにより、細胞を洗浄した。遠心分離後、上清を取り除き、ペレット化した細胞をＰＢＳに再懸濁し、次いで洗浄手順を２回繰り返した。洗浄後、最後に、１０％ヒト血清、１％ペニシリン、及びストレプトマイシン（シグマ・アルドリッチ社、プール、ドーセット州、英国）、ならびに１％Ｌ−グルタミン（シグマ・アルドリッチ社、プール、ドーセット州、英国）を補足したＲＰＭＩ１６４０培地（インビトロゲン社（Invitrogen）、ペイズリー（Paisley）、英国）１０ｍＬに細胞を再懸濁した。次いで、血球計数器（haemacytometer）を用いてこの細胞を計数した。
【００６４】
ポリ（エチレンテレフタラート）フィルムを、ＷＯ−Ａ−９８３０６１５に記載の通りにして合成したモルで２３：４７：２５：５の２−メタクリロイルオキシエチル−２’−トリメチルアンモニウムエチルリン酸内部塩（ＭＰＣ）：ｎ−ドデシルメタクリレート：ヒドロキシプロピルメタクリレート トリメトキシシリルプロピルメタクリレートの４つのポリマーの５ｇ／ｌのエタノール溶液でコーティングした。次いで、コーティングを乾燥し、加熱して、ポリマーを７０℃の温度で一晩クロスリンクさせた。
【００６５】
次いで、総体積４００μＬの補足培地中で試験材料（ポリ（エチレンテレフタラート）（ＰＥＴ）及びＰＣポリマーをコーティングしたＰＥＴを切断して１ｃｍ２の試料としたもの）上に、１試料あたり２．５×１０５個の細胞で、細胞を直接に植えつけた。濃度は、細胞接着を良好な可視化が可能になるように十分に低く選択したが、細胞間の相互作用を最小にし、細胞凝集の形成が妨げられるように十分に希釈した。次いで、プレートを湿度インキュベーター（サンヨー（Sanyo)、ジェンコンス（Jencons）ＰＬＳ、英国）中で３７℃及び５％ＣＯ２において一晩インキュベーションした。インキュベーション後、試料を滅菌ＰＢＳのアリコート０．５ｍＬで３回洗浄した。次いで、接着した細胞を、室温において２０分間、脱イオン水中で調製した４％（ｗ／ｖ）パラホルムアルデヒド（シグマ・アルドリッチ社、プール、ドーセット州、英国）０．５ｍＬを添加することによって固定した。次いで、試料を滅菌ＰＢＳのアリコート０．５ｍＬ中で再度３回洗浄した後、滅菌ＰＢＳ中で調製した４％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ（シグマ・アルドリッチ社、プール、ドーセット州、英国）０．５ｍＬとともに室温において３０分間インキュベーションした。次いで、試料を滅菌ＰＢＳ０．５ｍＬで３回洗浄した。
次いで、細胞をＰＢＳ中で調製した０．２％（ｖ/ｖ）Triton Ｘ-１００（シグマ・アルドリッチ社、プール、ドーセット州、英国）０．５ｍｌを添加することによって透過化処理し、室温において８分間インキュベーションした。次いで、試料を上記の通りに滅菌ＰＢＳ中で洗浄した。脱イオン水中で調製した９％（ｖ／ｖ）過酸化水素（シグマ・アルドリッチ社、プール、ドーセット州、英国）０．５ｍＬを各試料に添加し、４℃において一晩インキュベーションした。過酸化水素とともにインキュベーションした後、試料を滅菌ＰＢＳ中で洗浄した。次いで、湿度チャンバー（滅菌ＰＢＳ中に浸漬された濾紙（ＢＤＨラボラトリー・サプライズ社、プール、ドーセット州、英国）が並べられたペトリ皿（インビトロゲン社、ペイズリー、英国））中のパラフィルム片（ＢＤＨラボラトリー・サプライズ社（BDH Laboratory Supplies）、プール、ドーセット州、英国）の上に試料を置いた。
ＰＢＳ中で１％ＦＣＳ（インビトロゲン社、ペイズリー、英国）によって１：２０希釈したＣＤ６８（マクロファージ特異的細胞表面受容体）一次抗体（ダコー社（DAKO）、ケンブリッジシャー州（Cambridgeshire）、英国）５０μＬを各試料に添加し、１時間室温でインキュベーションして、非特異的結合を阻害した。インキュベーション後、この試料をＰＢＳ４０ｍＬ中に１０回浸漬し、この浸漬プロセスをフレッシュなＰＢＳ中で２回繰り返した。次いで、高速染色キット（シグマ・アルドリッチ社、プール、ドーセット州、英国）をキットに同梱されている指示書に従って試料に適用し、ビオチン化二次抗体（緩衝生理食塩水中のヤギ抗マウス免疫グロブリン及び０．１％ナトリウムアジド）一滴（〜５０μＬ）を各試料に添加し、室温において５分間インキュベーションした。次いで、試料を上記の通りにＰＢＳ中で洗浄した。
次いで、ペルオキシダーゼ試薬（緩衝生理食塩水中で共役されている）一滴（〜５０μＬ）を各試料に添加し、室温において５分間インキュベーションした。試料を上記の通りにＰＢＳ中で洗浄し、基質試薬５０μＬ（脱イオン水４ｍＬ、酢酸緩衝液（２．５Ｍ、ｐＨ５．０）２滴（〜１００μＬ）、ＡＥＣクロモゲン（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の３−アミノ−９−エチルカルバゾール）２滴（〜１００μＬ）、及び３％過酸化水素（脱イオン水中）１滴（〜５０μＬ））を各々試料に添加した。次いで、試料をＰＢＳ中で再度洗浄し、最後に脱イオン水中で洗浄した後、ベクタシールド試料装着用物質（Vectasheild mountant）（ベクターラボ社（Vectorlabs）、ピーターバラ州（Peterborough）、英国）約２０μＬを用いて顕微鏡スライド上に備え付けた。接着性のマクロファージ及び単球細胞の数を光学顕微鏡（ラボールラックス（Laborlux）１２、ライツ（Leitz）、ドイツ）を用いて倍率４００倍の下で１視野あたりの計数を行った。１視野あたりの細胞の平均数は、１複製試料あたり３０のランダムな視野から計数した。図１の結果は、倍率４００倍の下で観察された１視野あたりの細胞の平均数（３０の視野から得られたもの）及び１８の複製試料から得られた標準誤差を示す。
【００６６】
ＰＣ１０３６と比較して有意により多くの数の単核細胞がＰＥＴに接着することが見い出された（スチューデントのｔ検定ｐ＜０．０５、ｎ＝１８）。
【００６７】
＝＝＝参照実施例２：ＰＣ材料を用いた線維性被膜(fibrous capsule)の減少＝＝＝
上記の参照実施例１で用いたクロスリンク可能なＰＣポリマーでコーティングしたステンレス鋼ロッドをウサギの筋肉内で移植し、線維性被膜形成をＰＥネガティブコントロール移植片から得られるものと比較した。１３週目における移植片周囲での線維性被膜形成の統計分析によって、ＰＣでコーティングした移植片ではカプセルが少なく、試料はしばしば成熟した脂肪組織によって取り囲まれていることが明らかになったが、このことはこの移植片が十分に寛容され、動物に許容されていることを示している（図２ａ及び図２ｂ）。
【００６８】
カプセル形成のレベルを定義する従来のスコアリング方法を用いて、移植片を１３週目で比較し（各々についてｎ＝２０）、ＰＣコーティング試料及び対照試料ではそれぞれ０．２５及び０．７５のスコアを生じた（ｐ＝０．０１１）。ＰＣコーティング試料では、１３週目において存在するカプセルは有意に少なかった。
【００６９】
ＰＣを用いて塞栓形成剤を修飾することにより、血栓形成の予防だけではなく（ＰＣ材料に対しては周知であり、広範に報告されている）、作用物質に対するより長期の炎症応答の減少も助けられるので、参照実施例１及び２で行った観察は本発明の特許請求の範囲の記載を裏付けている。
【００７０】
＝＝＝実施例１：クロスリンクしたＰＣポリマーヒドロゲル塞栓形成粒子の調製＝＝＝
参照実施例１で用いたポリマーとしての成分を有するクロスリンク可能なＰＣポリマーをＷＯ−Ａ−９８３０６１５で概説した通りに調製して単離し、アセトン中に沈殿させて回収した。回収した材料をオーブン中で７０℃において４時間乾燥させクロスリンクさせた。一連の篩（クリスティソン社（Christison）、ゲーツヘッド（Gateshead）、英国、６３〜８３０μｍ、ステンレス鋼、直径２００ｍｍ）を用いて、粒子状材料をサイズ範囲に分けた。粒子が室温において水中で水和して平衡した場合、この粒子は５０〜５５％の範囲の水含量に達した。
【００７１】
図３の顕微鏡写真は、１８０〜３５５μｍの範囲の篩分けされたサイズ（乾式篩分け）を有する乾燥試料及び水和した粒子の試料を示している。水和した粒子の水含量は、それらを生理食塩水中で室温において２４時間水和することにより決定した。水和した粒子の試料をブロッティングし、乾燥し、次いで重量測定した。次いで、粒子をオーブン中で１００℃において１時間乾燥し、再び重量測定した。重量の違いは、報告した平衡水含量である。本実施例の粒子は、５０〜５５％の平衡水含量を有していた。
【００７２】
＝＝＝実施例２：クロスリンクしたＰＣポリマーヒドロゲル塞栓形成粒子の調製＝＝＝
ＷＯ９２／０７８８５に一般的に記載されている通り、ＭＰＣが約７モル％で存在し、クロスリンク剤は約０．５モル％の量で存在する、エチレングリコールジメタクリレートとクロスリンクした２−ヒドロキシ−エチルメタクリレート中のＭＰＣの溶液のバルク共重合により、代替のクロスリンクしたＰＣポリマーを調製した。バルクキセロゲル材料を粉砕して粒子とし、実施例１で記載した篩分け技術を用いてサイズ分けした。図４は、特定の開口の篩上で保持されているキセロゲル粒子（すなわち、水中で平衡化する前）の顕微鏡写真を示している。粒子は水和したときに急速に膨潤し、約６０％の水含量に達した。
【００７３】
＝＝＝実施例３：塞栓療法用のＰＣをベースとするミクロスフィアの調製＝＝＝
エチルセルロース（エトキシ含量４８％、アルドリッチ社）０．２５ｇを５００ｍｌの攪拌反応容器中のジクロロメタン１００ｇ及びヘキサン５０ｇの溶液に添加した。溶液を窒素で脱酸素化し、攪拌速度を２５０ｒｐｍに調整した。
【００７４】
別の容器中では、ジメチルアクリルアミド（アルドリッチ社）１７．５ｇ、メチレンビスアクリルアミド（アルドリッチ社）０．１２５ｇ、及び蒸留水４５．０ｇで溶液を構成した。この溶液にＭＰＣ７．５ｇ及び過硫酸アンモニウム（アルドリッチ社）０．１２５ｇを添加した。次いで、この透明な水溶液を攪拌反応容器に添加した。
【００７５】
テトラメチルエチレンジアミン（アルドリッチ社）０．２５ｇの添加前に、全ての内容物をさらに１０分間脱酸素化した。重合が完了した後（約１０℃の発熱）、反応容器の内容物を約２ｍｍの篩を通して注ぎ、濾過によって球状粒子を溶媒から除いた。この粒子をアセトン及び蒸留水でさらに数回洗浄し、蒸留水中で保存した。３７０μｍ〜８１０μｍの範囲で次第に減少していく開口を有する一連の篩を用いた湿式篩分け法を用いて、粒子をサイズ範囲に分けた。図５ａ〜図５ｃは、この方法により生じたいくつかの代表的な球状体を示し、図に示したマイクロメートルのサイズは粒子が保持されている篩の開口である。これらの顕微鏡写真においてそれらをより効果的に可視化するため、球状体をエオシンＹ又はリアクティブ・ブルー（Reactive Blue）などの種々の染料で染色した。水溶液中の水溶性の染料をポリマーで好適な期間コーティングし、次いで必要な場合には染料上の反応性基及びポリマーに適合する条件を施すことによって固定する。
【００７６】
＝＝＝実施例４：ＵＶクロスリンク法によるＰＣをベースとするミクロスフィアの調製＝＝＝
１ｗｔ％アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）を開始剤として用いて、エタノール中の３０ｗｔ％ＭＰＣ、５０ｗｔ％ラウリルメタクリレート、１０ｗｔ％ヒドロキシプロピルメタクリレート、及び１０ｗｔ％アリルメタクリレートを含有するモノマー枯渇フリーラジカル重合技術により、ポリマーを合成した。この溶液をアセトン中に沈殿させると８５％の白色ポリマーを生じ、これを真空中において一晩室温で乾燥させた。
【００７７】
ポリマー７．５ｇ及びダロキュア（Darocure）ＵＶ開始剤０．１ｇを激しく攪拌しながらクロロホルム１００ｇに溶解させた。２５０ｍｌの丸底容器をオーバーヘッド攪拌器に備え付け、脱イオン水２３０ｍｌを満たして過剰な渦が形成されることを回避した。攪拌水（１５０ｒｐｍ）にポリマー溶液５ｇを添加すると、この溶液は直ぐに乳化して液滴を形成した。ポリマー溶液の粘性は、形成される球状の液滴のサイズ及び質の決定に非常に重要である。すべてのポリマー溶液を完全に添加したときに、ＵＶランプのスイッチを入れ、容器を１０分間照射した。得られた液滴は、アリルペンダント基をラジカル重合して、クロスリンクＰＣポリマー球状体（spheroids）にすることによるラジカル重合によって重合し、該球状体を篩分けして３００〜９００μｍの範囲のサイズの試料を回収した。６００μｍの開口篩上で収集した球状体を図に示す。
【００７８】
＝＝＝実施例５：ＰＣをベースとする多イオン複合体塞栓形成粒子の調製＝＝＝
ポリマーをＷＯ−Ａ−００２９４８１で概説した方法に従って調製した。以下の式のアニオンポリマー及びカチオンポリマーを調製し、純水に溶解して、各々１７．５ｗｔ％溶液を生成し、続いてこの溶液を１：１の体積で十分に混合し、同じｗｔ％組成物のＰＣ多イオン複合体（ＰＩＣ）ゲルを得た：ＬＭＡは、ラウリルメタクリレート（ｎ−ドデシル）メタクリレートであり、ＤＭＡは、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミドである。カチオノマー：ＭＰＣ２５ＬＭＡ１５ＴＥＭ６０（ＴＥＭ＝コリンメタクリレートクロライド、Ｍｗ２０７）、アニオマー：ＭＰＣ３０ＤＭＡ１０ＳＳＳ６０（ＳＳＳ＝スチレンスルホン酸ナトリウム、Ｍｗ２０７）。
【００７９】
ゲルを１２０℃で一晩脱水し、得られたキセロゲルをある範囲の粒子サイズに粉砕した。実施例１で先に記載した通りに、粒子を篩分けによってサイズ範囲に分けた。図７は、分離後のキセロゲル粒子の顕微鏡写真を示し、この粒子は特定の開口サイズの篩上で保持されているものである。
【００８０】
粒子は水に暴露したときに急速に膨潤する。数時間後、粒子は一部合着して約７０％の水含量を有するゲルとなるのが見て取れる。図８は、合着したゲル及び各キセロゲルの顕微鏡写真を示している。このタイプのヒドロゲルでは、穏やかに攪拌したときにデアグロメレーションが起こらないよう、キセロゲルを使用直前に水和し、かつ、ゲルが合着する前に組成物を送達することが必要である。
【００８１】
＝＝＝実施例６：塞栓形成用のＰＣコーティングＰＶＡ発泡粒子＝＝＝
参照実施例１に記載されたクロスリンク可能なポリマーの２０ｗｔ％クロロホルム溶液中に、平均サイズ１０００ミクロンのポリビニルアルコール（ＰＶＡ）発泡粒子（コック社（Cook Inc．）、米国）を置いた。数分後、この溶液をデカントし、粒子を空気乾燥して溶媒を除去した。この粒子を７０℃のオーブン中に置いてコーティングの硬化を行った。図９は、コーティング塗布前後の粒子の目視比較を示している。粒子のサイズ及び形状は実質的に変わっていないが、コーティングは幾分目に光る表面を読み取れる。
【００８２】
図１０は、コーティングしていないＰＶＡ発泡粒のＦＴ−ＩＲスペクトルをＰＣ−コーティングしたＰＶＡ発泡粒子のものと比較している。１７２９ｃｍ−１での追加の強度のピークは、メタクリレートＰＣポリマー中のエステル結合のカルボニルに特徴的なものであり、９６７ｃｍ−１及び７８９ｃｍ−１での他のシグナチャーピークは、ポリマーに特徴的なものであり、ＰＶＡに固有のものではないことに留意しなければならない。このことによって、ＰＣポリマーによるＰＶＡ粒子のコーティングが実に上手くいったことが実証された。
【００８３】
＝＝＝実施例７：塞栓形成用のＰＣコーティングＰＶＡゲル球状体＝＝＝
吸取り紙上に詰め物をして乾燥したが脱水されていないＰＶＡゲル球状体（バイオキュア社（Biocure Inc）がＷＯ−Ａ−０１６８７２０の実施例２に従って製造したがアニオンコモノマーを含んでおり、膨潤したミクロスフィアを懸濁する連続水性液体を伴った水性組成物として供給される）を用いて、実施例６と同じ手順を繰り返した。コーティングを上記の通りにクロスリンクさせると、ゲル球状体の水和サイズが硬化工程中に約１０分の１に縮小するのが観察された。脱水された球状体のＦＴ−ＩＲは、塗布されたＰＣコーティングに特徴的なカルボニル伸縮の存在を示している（図１１）。コーティングした球状体は、水和したときにその元の寸法及び形状を回復していることが認められた。
【００８４】
＝＝＝実施例８：ヒツジ肺モデルにおけるＰＣをベースとするミクロスフィアを用いた塞栓形成の評価＝＝＝
実施例３に記載の通りに合成したＰＣをベースとするミクロスフィアを、短期ヒツジ肺塞栓形成モデルにおいてＰＶＡ粒子（コック社）と比較して評価した。
【００８５】
＝＝＝＝材料及び設備＝＝＝＝
(i)動物：３匹の妊娠していない成体Pre−Alpesヒツジ
ｉ． 体重範囲４０〜６０ｋｇ
(ii)ＰＣ球状体（実施例３に記載の通り）
(iii)ＰＶＡ粒子（コック社）
(iv)クオシナ（Qosina）又はＢＤＨポリプロピレンシリンジ及び三方向連結具
(v) ビシペイク（Visipaque）３２０造影剤
(vi)テルモ社レッジエーロ（Terumo Leggiero）診断用カテーテル
【００８６】
ＰＣ球状体を青色に染色し、５ｍｌのシリンジ中でＰＢＳ（インバークライド社（Inverclyde））に懸濁し、蒸気滅菌によってインハウスで滅菌した。ＰＶＡ粒子は滅菌して供給した。各注入前に混合物を攪拌して均一な粒子懸濁液を維持した。混合物を合わせて、最大の直径３‐Ｆのマイクロカテーテルに注入した。テルモ社レッジエーロマイクロカテーテルは、比較的大きな内腔直径であるため好ましい。
【００８７】
＝＝＝＝方法及び手順＝＝＝＝
（ｉ）麻酔
ヒツジには手順を行う前２４時間は食事を与えなかった。体重１ｋｇあたり１５ｍｇのチオペンタールナトリウム（ネスドナル社（Nesdonal）；スペシア・ローヌ−プーランク（Specia Rhone−Poulenc）、パリ、フランス）の筋内注入によって麻酔を行った。各動物を背臥位に配置し、挿管し、１．５％ハロタン（トルフィールス社（Trofiels）ツーク、スイス）及び９８．５％酸素（CFPO社、パリ、フランス）の混合物で麻酔し、ユニット（ロジック０．５；オーメダ社（Ohmeda）、スティートン（Steeton）、イングランド）で酸素供給した。呼気終末（End−tidal）ＣＯ２レベルを連続的に測定し、モニター（Ｎ１０００；ネルコール社（Nellcor）、プレザントン、カリフォルニア州）により２６ｍｍＨｇと３６ｍｍＨｇとの間で維持した。９５％より高いレベルで維持された末梢動脈酸素飽和を耳に付けられた探針によりモニタリングした。本手順の間、心電図を用いて各動物を連続的にモニタリングした。
【００８８】
（ii）塞栓形成手順
静脈大腿手法（venous femoral approach）を用いて、塞栓形成を行った。４‐Ｆ又は５‐Ｆの誘導針（introducer）のシースを大静脈中に置いた。心臓の右の腔へ大静脈の逆行性カテーテル挿入を行い、肺動脈の近位のカテーテル挿入を行った。５‐Ｆの誘導カテーテルを導入し、肺動脈分枝の非常に選択的なカテーテル挿入を行った。対照の血管造影図をとり、続いて粒子のフリーフロー中で塞栓形成する（造影剤と混合する）。繰り返し選択的な対照の血管造影図をとり、続いて非常に選択的に塞栓形成する。球状体／粒子を各々注入した後、カテーテルを食塩水２．５ｍｌでパージした。血管造影図による評価で近位の動脈流が減少したとき、塞栓形成を停止した。各試料に対して、同じ終点の塞栓形成を用いた。
【００８９】
＝＝＝＝即時評価＝＝＝＝
以下の評価を直ぐに行った：
適用及び操作の容易性、塞栓形成の有効性（血管造影図による評価：閉塞レベル、動脈閉塞の程度）、終点、注入された球状体／粒子の体積、血管の塞栓形成時間、塞栓形成時の還流又は副作用、動物の体重（含入時にすべての動物に対して体重測定する）。
【００９０】
＝＝＝＝結果＝＝＝＝
ＰＣミクロスフィア及びＰＶＡ粒子は両方とも、血管において効果的に塞栓を形成した。ＰＶＡは血管内で凝集してより近位での閉塞を生成する傾向があったのに対し、ＰＣミクロスフィアはより遠くまで移動した。ＰＶＡ粒子はカテーテル内で集塊及び凝集する傾向を有していたのに対し、圧縮性ＰＣミクロスフィアは送達に関する問題はなかった。両方とも塞栓形成剤に対して許容できる形式で扱った。観察するのが容易である造影剤を用いて、同種浮遊混合物を保持する青色のＰＣミクロスフィアがシリンジ中に容易に見られた。ＰＣ球及びＰＶＡ粒子の両方とも、塞栓形成に対して許容し得る終点を生じた。
【００９１】
＝＝＝＝組織病理学＝＝＝＝
７日後に動物を屠殺し、塞栓形成された肺組織の断面図に対して病理学的な評価及び組織学的な評価を行った。直接１０％中性緩衝化ホルマリンを気管内注入し浸漬し、２週間ホルマリンで染色することによって肺を固定した。種々の肺領域において肉眼による検査を行った。試料を一連のアルコール中で脱水し、キシレン中に設置し、パラフィン中に包埋し、３〜４μｍの切片にした。各切片を顕微鏡スライド上に備え付け、ヘマトキシリン−エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色によって染色し、光学顕微鏡下で調べた。ＰＣ球状体とＰＶＡ粒子との比較によって、ＰＣミクロスフィアでは変わった組織反応がないことが示された。図１２は、ＰＣ微小球状体及びＰＶＡ粒子を含有する塞栓形成血管由来の断面図を示している。
【００９２】
図１２における断面図は、ＰＣ微小球状体の球形度及び如何にしてそれが血管の生来の形状に合致し維持するかを明らかにする。これは、粒子と組織との間のいくつかの空間が血栓で満たされている不規則な形状のＰＶＡ粒子とは対照的である。
【図面の簡単な説明】
【００９３】
【図１】図１〜図１２まで説明なし。
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、動物（通常はヒト）に投与するポリマー組成物に関する。このポリマーは、特に、投与の間、水分を吸水する形態を有し、体内経路を閉塞させるように使用することが好ましい。この方法は、治療に用いられることが好ましいが、診断に用いられてもよい。
【背景技術】
【０００２】
塞栓療法（embolotherapy）は、特定の血管を閉塞させるために、ある因子が放出する所望の位置に経動脈的なカテーテル手法を常時依拠する、インターベンション医療（interventional medicine）の発達しつつある分野である。この治療は、例えば、肝細胞癌などのある種の血管分布が過多した腫瘍へ血液供給を遮断するために用いられ、最近では、子宮筋腫における一般的な治療選択となっている。これは、動静脈奇形（ＡＶＭ）として知られている動脈と静脈との間の異常なシャントを治療するため、静脈奇形を治療するため、術後の出血などを予防するためなどにも用いられる。
【０００３】
押込み可能なコイル、取り外し可能なコイル、及び電気的に取り外し可能なコイルを含む多数の承認された塞栓形成装置がある。取り外し可能なバルーン製品系もある。塞栓形成部位への経カテーテル送達を必要とする寒栓性材料の使用範囲もあり、この部位で寒栓性材料が血流に放出してこの血流を遮断する。これは、小さな粒子又は球状体を用いた血管の物理的な（一般的に、血栓形成による）遮断によって達成されるか、あるいは、液状の塞栓剤の場合では、ある種の相変化又は反応が流動性材料を設置して血管のキャストを形成することを必要とする。
【０００４】
最も一般的な粒状の塞栓剤は、１９７０年代前半から使用されているポリビニルアルコール（ＰＶＡ）発泡粒子である。この材料は不規則な形状をし、塞栓形成に共通して用いられているマイクロカテーテルにおいて、凝集して閉塞を形成することができる。さらに、いくつかの場合において、ＰＶＡ粒子は、その大きさに基づいて予想されるほど遠位まで塞栓形成しないことも知られている。このＰＶＡ粒子は、血管内の使用において長年許容されているが、ＰＶＡは、十分に生体適合性を有する材料ではない。ＰＶＡは、血小板に対して反応性を有し、ＰＶＡをヘパリンで修飾してこの効果を低減させることを扱った者もいる（例えば、非特許文献１参照。）。実は、塞栓形成された血管の大部分はしばしば血栓で満たされ、血栓の形成がＰＶＡ粒子の塞栓の可能性の一因となっている。これは、凝固障害を有し得る患者が、ＰＶＡを用いた場合に容易に血栓形成することができないという不利な点を有している。さらに、長期にわたる血栓の自己溶解により、標的血管が不要にも再疎通してしまう。ＰＶＡを分解するのには数ヶ月かかるので、中等度の炎症が引き起こされる。これは、長期の疼痛及び合併症の潜在的な原因となり得る。動物研究におけるいくつかの場合において、炎症を引き起こす塞栓剤は、皮膚から細片を取り除く方法とほとんど同じ方法で、血管から「排出される」ことが分かっている（例えば、非特許文献２参照。）。この場合も、数日から数ヶ月までの間において、望ましくない再疎通が生じ得る。
【０００５】
ホスホリルコリン（ＰＣ）ベースのポリマーは、当該技術分野において周知である。塞栓療法におけるホスホリルコリン（ＰＣ）ベースのポリマーの使用についての唯一の記載は、特許文献１及び特許文献２における多イオン複合体ゲルの形態である。
【０００６】
ＰＣポリマーの粒子形態が記載されている。Ishiharaは、血流を通る薬物担体として、ＰＣポリマー凝集物の使用について記載している（例えば、非特許文献３及び特許文献３参照。）。しかしながら、これらの凝集物は、設計によってナノにサイズ化され、最もよい血液適合性を有し、塞栓を形成することもない。
【０００７】
粒子含有カラムは、材料の血栓形成性を決定するのに用いられる。この目的のため、過去に、ＰＣポリマーは溶媒蒸発技術によりクロスリンクポリ（メタクリル酸メチル）ビーズ上にコーティングされている（例えば、非特許文献４参照。）。ポリ（メタクリル酸メチル）は、水吸収性ではない。
【０００８】
さらに、Sugiyamaは、ＭＰＣが成長粒子を安定化させ、かつ、球状体中に取り込ませた表面に表出させる、乳化剤を用いない乳化重合によって一般的に作製されるホスホリルコリンを含有するミクロスフィアの調製について、広範にわたって報告している。例えば０．１〜１０mol％のＭＰＣ含量を有するスチレン、メタクリル酸メチル、メタクリル酸ｎ−ブチル、メタクリル酸ヘキシル、及びスチレンから作製されるポリマーの球状粒子が記載されている（例えば、非特許文献５、非特許文献６、及び非特許文献７参照。）。これらのアクリル／スチレン性材料は比較的硬い。それらは水中油型乳化重合プロセスにより合成され、従ってこのポリマーは、有意な水膨潤性ではないと考えられる。生成物の粒子サイズは５００nm未満であった。
【０００９】
非特許文献８には、全モノマーをベースとして５〜７０重量％のＳＰＰ濃度範囲のＮ−（３−スルホプロピル）−Ｎ−メタクリルオミジルプロピル（Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムベタイン）（ＳＰＰ）の存在下において、ペルオキソ二硫酸カリウムを用いたポリスチレンの水中油型乳化重合が記載されている。ラテックス生成物の粒子サイズは、開始剤及びベタインコモノマーレベルに依存していた。再度、重合開始前にすべてのモノマーは、水性連続相に分散した。ラテックス生成物の固体濃度は、約１０重量％であった。
【００１０】
特許文献４において、Hwaらは、水性連続相中における、メタクリル酸エチル及びアクリルアミドを用いたＮ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−メタクリロイルオキシエチル）−Ｎ−（３−スルホプロピルアンモニウム内部塩）（ＳＰＥ）の共重合を記載している。Hwaは、準安定性の水中油型生成物を生成している。彼は、ラテックスの粒子サイズを記載していない。
【００１１】
特許文献５において、本発明者らは、疎水性コモノマー、イオン性コモノマー、又は反応性コモノマーなどのコモノマーを用いた両性イオンモノマーのコポリマーの範囲を記載している。このコポリマーは、モノマー及びポリマーが可溶な溶媒中にすべてのモノマーを一緒に溶解することによって形成され、沈殿技術によって回収される。生成物はマイクロエマルジョンであってもよいことが示唆されているが、乳化重合の例は示されていない。
【特許文献１】ＷＯ−Ａ−００２９４８１
【特許文献２】ＷＯ−Ａ−００２８９２０
【特許文献３】ＪＰ−Ａ−１１−３２２９４８
【特許文献４】ＵＳ−Ａ−３４９７４８２
【特許文献５】ＷＯ−Ａ−９３／０１２２１
【非特許文献１】Sefton, M.V. et al, Biomaterials, 1992; 13(7): 421-4
【非特許文献２】T.W.Clark, oral presentation: "Embolotherapy, materials, techniques and clinical applications", June 21-22, 2002, Pasadena, CA.
【非特許文献３】Proc. Int. Symp. Controlled. Rel. Bioactive Mater., 1997,24th, 465-466
【非特許文献４】J. Biomed. Mater. Res., 24, 1069-1077, 1990
【非特許文献５】Polymer Journal (Tokyo, Japan), 1994, 26(5), 561-569
【非特許文献６】Polymer J. 1993, 25 (5), 521-527
【非特許文献７】J. Polymer Sci A: Polym. Chem. 1997, 35, 3349-3357
【非特許文献８】Zimehl et al, in Colloid Polym. Sci. (1990) 268,924-933
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、水性液体を吸収するポリマーマトリクスの粒子を含有し、この粒子は４０〜４０００μｍの範囲の直径を有し、この粒子表面は両性イオン基を表出することを特徴とする、新規な治療用組成物又は新規な診断用組成物を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
この組成物は塞栓療法に用いられ得る。塞栓療法は、子宮筋腫塞栓形成、腫瘍周囲もしくは腫瘍切除部位周囲における血管の塞栓形成、拡張蛇行静脈もしくは精索静脈瘤の塞栓形成、動静脈奇形もしくは静脈奇形の塞栓形成、胃腸管出血の止血、ならびに切除前及び切除後の塞栓形成に対するものであり得る。あるいは、この治療は、動脈瘤の充填、組織の填塞、創傷の癒合、瘻孔の閉鎖、又は括約筋填塞の適応などの他の医療用途もしくは化粧品用途において用いられ得る。この組成物の診断的な用途には、循環をモニタリングする工程を含み得る。
【００１４】
ポリマーマトリクスは、例えば以下の投与条件下において、生分解性であってもよい。生分解性組成物は、塞栓形成が一時的に必要とされる場合において有用であり得る。しかしながら、このポリマーマトリクスは、投与後の条件下において、実質的に非生分解性であることが好ましい。組成物が実質的に非生分解性である場合、この組成物は、例えば、長期塞栓療法又は組織のバルク化に使用され得る。このポリマーは、in vivo条件下又は擬似性条件下において、少なくとも２年間は分解されないことが好ましい。好適な試験方法を考案することもできる。生分解は、このポリマーの性質及び任意のクロスリンク又は他の誘導化の程度により影響されることが知られている。これらは、以下の記載に基づき、当業者が選択することができる。
【００１５】
本発明の組成物は、粒子中に吸水させる成分として水性液体のみを含有し得るが、この組成物は、粒子を懸濁するのに十分な量の連続水性媒体をさらに含有することが好ましい。水性液体は、必要に応じて生理学的なｐＨに緩衝化させた生理食塩水であることが好ましい。この組成物は、さらに調製しないで体内へ導入するのに適していることが好ましく、従って無菌であることが好ましい。この組成物は、例えばカテーテル又は皮下針を介した注射によって、体内へ直接投与することができる容器に提供され得る。
【００１６】
両性イオン基は、リン酸アンモニウム、リン酸ホスホニウム、もしくは、リン酸スルホニウム、又はリン酸エステル両性イオン基であることが好ましく、より好ましくは下記一般式ＩＩの基であり、
【化１】
式中、部分Ａ３及びＡ４は、同じであるか異なり、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、又は原子価結合、好ましくは−Ｏ−であり、Ｗ＋は、アンモニウム、ホスホニウム、又はスルホニウムカチオン基を含有する基、及び好ましくはＣ１〜１２−アルカンジイル基であるアニオン及びカチオン部分を結合している基であり、Ｗ＋は、式−Ｗ１−Ｎ＋Ｒ３３、−Ｗ１−Ｐ＋Ｒ４３、−Ｗ１−Ｓ＋Ｒ４２、又は−Ｗ１−Ｈｅｔ＋の基であることが好ましく、Ｗ１は、１つ以上のエチレン性不飽和二重もしくは三重結合、二置換アリール（アリーレン）、アルキレンアリーレン、アリーレンアルキレン、もしくはアルキレンアリールアルキレン、シクロアルカンジイル、アルキレンシクロアルキル、シクロアルキルアルキレン、又はアルキレンシクロアルキルアルキレンを任意選択により含有する１つ以上、好ましくは２〜６個の炭素原子のアルカンジイルであり、基Ｗ１は、１つ以上のフッ素置換基及び／又は１つ以上の官能基を任意選択により含有し、基Ｒ３は、同じであるか異なり、各々は、水素又は１〜４個の炭素原子のアルキル、好ましくはメチル又はフェニルなどのアリールであり、あるいは基Ｒ３の２つは、それらが結合している窒素原子と一緒に、５〜７個の原子を含有する脂肪族複素環式環を形成し、あるいは３つの基Ｒ３は、それらが結合している窒素原子と一緒に、５〜７個の原子を有する複素芳香族環を形成し、それらの複素芳香族環のいずれかの環は、各環中に５〜７個の原子を含有する別の飽和環又は不飽和環と縮合して縮合環構造を形成することができ、任意選択により基Ｒ３の１つ以上は、親水性官能基により置換され、基Ｒ４は、同じであるか異なり、各々は、Ｒ３又は基ＯＲ３であり、Ｒ３は、先に定義された通りであり、Ｈｅｔは、芳香族窒素、芳香族リン、又は芳香族硫黄、好ましくは窒素を含有する環、例えば、ピリジンである。
【００１７】
一般的には、式IIの基は、好ましくは下記一般式ＩＩＩを有し、
【化２】
式中、基Ｒ５は同じであるか異なり、各々は水素又はＣ１〜４アルキルであり、ｍは１〜４であり、基Ｒ５は好ましくは同じであり、好ましくはメチルである。
【００１８】
ホスホベタインをベースとする基において、Ｘは、下記一般式ＩＶを有することができ、
【化３】
式中、Ａ５は、原子価結合、−Ｏ−、−Ｓ−、又は−ＮＨ−、好ましくは−Ｏ−であり、Ｒ６は、原子価結合（Ａ５と一緒に）、又はアルカンジイル、−Ｃ（Ｏ）アルキレン−、もしくはＣ（Ｏ）ＮＨアルキレン、好ましくアルカンジイルであり、該アルカンジイル鎖中に１〜６個の炭素原子を含有することが好ましく、Ｗ２は、Ｓ、ＰＲ７、又はＮＲ７であり、基Ｒ７又は基Ｒ７は各々、水素又は１〜４個の炭素原子のアルキルであり、あるいは２つの基Ｒ７はそれらが結合しているヘテロ原子と一緒に５〜７個の原子の複素環式環を形成し、Ｒ８は、１〜２０個、好ましくは１〜１０個、より好ましくは１〜６個の炭素原子のアルカンジイルであり、Ａ６は、結合、ＮＨ、Ｓ、又はＯ、好ましくはＯであり、Ｒ９は、ヒドロキシル、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ１〜１２アルコキシ、Ｃ７〜１８アラルキル、Ｃ７〜１８−アラルコキシ、Ｃ６〜１８アリール、又はＣ６〜１８アリールオキシ基である。
【００１９】
一般式ＩＶの基を含有する化合物において、Ａ５は、結合であり、Ｒ６は、Ｃ２〜６アルカンジイルであり、Ｗ２は、ＮＲ７であり、各々のＲ７は、Ｃ１〜４アルキルであり、Ｒ８は、Ｃ２〜６アルカンジイルであり、Ａ６は、Ｏであり、Ｒ９は、Ｃ１〜４アルコキシであることが好ましい。
【００２０】
あるいは、Ｘは、アニオンがスルフェート基、スルホネート基、又はカルボキシレート基を含有する両性イオンであり得る。
【００２１】
このような基の一例は、下記一般式ＸＩのスルホベタイン基であり、
【化４】
式中、基Ｒ３６は同じであるか異なり、各々は水素又はＣ１〜４アルキルであり、ｓは２〜４である。
【００２２】
基Ｒ３６は、同じであることが好ましい。基Ｒ３６の少なくとも１つはメチルであることもまた好ましく、基Ｒ３６は両方ともメチルであることがより好ましい。
【００２３】
ｓは、２又は３であることが好ましく、３であることがより好ましい。
【００２４】
カルボキシレート基を有する両性イオン基の別の例は、（アミン基及びカルボン酸基が結合している）アルファ炭素原子が生体適合性ポリマーの骨格にリンカー基を介して結合しているアミノ酸部分である。このような基は、下記一般式ＸＩＩによって表すことができ、
【化５】
式中、Ａ７は、原子価結合、−Ｏ−、−Ｓ−、又は−ＮＨ−、好ましくは−Ｏ−であり、Ｒ３７は、原子価結合（任意選択によりＡ７と一緒に）、又は１〜６個の炭素原子を含有することが好ましいアルカンジイル、−Ｃ（Ｏ）アルキレン−、もしくはＣ（Ｏ）ＮＨアルキレン、好ましくはアルカンジイルであり、基Ｒ３８は同じであるか異なり、各々は水素又は１〜４個の炭素原子のアルキル、好ましくはメチルであり、あるいは基Ｒ３８の２つ又は３つは、それらが結合している窒素と一緒に、５〜７個の原子の複素環を形成するか、あるいは３つの基Ｒ３８は、それらが結合している窒素原子と一緒に、各環中に５〜７個の原子を含有する縮合環複素環式構造を形成する。
【００２５】
カルボキシレート基を有する両性イオンの別の例は、カルボキシベタイン−Ｎ＋（Ｒ３９）２（ＣＨ２）ｒＣＯＯ−であり、式中、Ｒ３９基は同じであるか異なり、各々は水素又はＲ１〜４アルキルであり、ｒは、２〜６、好ましくは２又は３である。
【００２６】
両性イオン基は、コーティング材料の成分であり得るか、又はポリマーが非両性イオン含有ポリマーで形成されるポリマーマトリクスの表面に結合し得る。例えば、コーティングは、マトリクスポリマーの表面上へ吸収されるポリマーを含有し得る。このようなコーティングは、例えば、表面に共有結合することにより、あるいはコーティングがポリマーを含有する場合には表面でクロスリンクすることにより、使用条件下で安定でなければならない。あるいは、このポリマーはマトリクスポリマーと静電結合することができる。両性イオン基は、マトリクスポリマー上の基であり得るか、あるいはマトリクスポリマーの１つであり得る。例えば、このマトリクスポリマーは、両性イオン基を含有するポリマー及び両性イオン基を含有するポリマーとは異なる第２のポリマーのブレンドであり得る。
【００２７】
一般的に、この両性イオン基は、下記一般式Ｉのモノマーを含むエチレン性不飽和モノマーから形成されるマトリクスポリマー又はコーティングポリマーのいずれかのポリマー上のペンダント基であり、
ＹＢＸ Ｉ
式中、Ｙは、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＯ−Ａ−、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−Ｃ６Ｈ４−Ａ１−、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＨ２Ａ２、Ｒ２Ｏ−ＣＯ−ＣＲ＝ＣＲ−ＣＯ−Ｏ、ＲＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−Ｏ−、ＲＣＨ＝Ｃ（ＣＯＯＲ２）ＣＨ２ＣＯ−Ｏ、
【化６】
から選択されるエチレン性不飽和基であり、Ａは、−Ｏ−又はＮＲ１であり、Ａ１は、結合、（ＣＨ２）ＩＡ２、及び（ＣＨ２）ＩＳＯ３−から選択され、Ｉは、１〜１２であり、Ａ２は、結合、−Ｏ−、Ｏ−ＣＯ−、ＣＯ−Ｏ、ＣＯ−ＮＲ１−、−ＮＲ１−ＣＯ、Ｏ−ＣＯ−ＮＲ１−、ＮＲ１−ＣＯ−Ｏ−から選択され、Ｒは、水素又はＣ１〜４アルキルであり、Ｒ１は、水素、Ｃ１〜４アルキル、又はＢＸであり、Ｒ２は、水素又はＣ１〜４アルキルであり、Ｂは、結合、又は１つ以上のフッ素置換基を任意選択により含有する直鎖分子状アルカンジイル、アルキレンオキサアルキレン、又はアルキレン（オリゴオキサルキレン）基であり、Ｘは、両性イオン基である。
【００２８】
一般式Ｉの両性イオンモノマーにおいて、エチレン性不飽和基Ｙは、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＯ−Ａ−であることが好ましいこのようなアクリル部分は、メタクリルであることが好ましく、すなわち、式中、Ｒがメチルであるか又はアクリルであり、すなわち、式中、Ｒは水素であることが好ましい。化合物は、（メタ）アクリルアミド化合物（式中、ＡはＮＲ１である）であり、この場合、Ｒ１は水素であることが好ましく、メチルはあまり好ましくなく、化合物がエステル、すなわち、式中、ＡがＯであることがで最も好ましい。
【００２９】
一般式Ｉのモノマーにおいて、Ｙが好ましい（アルク）アクリル基である場合は特に、Ｂがアルカンジイル基であることが最も好ましい。このような基の水素原子のいくつかをフッ素原子で置換することができる場合、Ｂは無置換アルカンジイル基であることが好ましく、２〜６個の炭素原子を有する直鎖基であることが最も好ましい。
【００３０】
式中のＸが一般式ＩＩ（ただし、式中、Ｗ＋は、Ｗ１Ｎ＋Ｒ３３である）で表されるモノマーは、本発明者らの先の明細書ＷＯ−Ａ−９３０１２２１に記載の通りにして製造することができる。ホスホニウム及びスルホニウムアナログは、ＷＯ−Ａ−９５２０４０７及びＷＯ−Ａ−９４１６７４９に記載されている。
【００３１】
一般式ＩＶ基を含有するモノマーは、アミノ置換モノマーとホスホランとを反応させるＪＰ−Ｂ−０３−０３１７１８に記載の方法によって製造することができる。
【００３２】
特に好ましい両性イオンモノマーは、２−メタクリロイルオキシエチル−２’−トリメチルアンモニウムエチルリン酸内部塩である。
【００３３】
エチレン性不飽和モノマーはコモノマー、例えば、下記一般式Ｖの化合物をさらに含有することができ、
【化７】
式中、Ｒ１０は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキル、及び基ＣＯＯＲ１４から選択され、Ｒ１４は、水素及びＣ１〜４アルキルから選択され、Ｒ１１は、水素、ハロゲン、及びＣ１〜４アルキルから選択され、Ｒ１２は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキル、及び基ＣＯＯＲ１４から選択されるが、但し、Ｒ１０及びＲ１２は両方ともＣＯＯＲ１４ではなく、Ｒ１３は、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ１〜２０アルコキシカルボニル、モノ−もしくはジ−（Ｃ１〜２０アルキル）アミノカルボニル、Ｃ６〜２０アリール（アルカリールを含む）、Ｃ７〜２０アラルキル、Ｃ６〜２０アリールオキシカルボニル、Ｃ１〜２０−アラルキルオキシカルボニル、Ｃ６〜２０アリールアミノカルボニル、Ｃ７〜２０アラルキル−アミノ、ヒドロキシル、又はＣ２〜１０アシルオキシ基であり、それらはいずれも、ハロゲン原子、アルコキシ、オリゴ−アルコキシ、アリールオキシ、アシルオキシ、アシルアミノ、アミン（モノアルキルアミノ及びジアルキルアミノならびにトリアルキルアンモニウムを含む、ただし、アルキル基は置換されていてもよい）、カルボキシル、スルホニル、ホスホリル、ホスフィノ、（モノアルキルホスフィン及びジアルキルホスフィンならびにトリアルキルホスホニウムを含む）、両性イオン、ヒドロキシル基、ビニルオキシカルボニル及びその他のビニル置換基又はアリル置換基、ならびにトリアルコキシシリル基などの反応性シリル又はシリルオキシ基から選択される１つ以上の置換基を有していてもよく、あるいはＲ１３及びＲ１２又はＲ１３及びＲ１１は一緒に、−ＣＯＮＲ１５ＣＯを形成し、Ｒ１５は、Ｃ１〜２０アルキル基である。
【００３４】
基Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、及びＲ１３の少なくとも２つはハロゲンであることが好ましく、又は水素原子であることがより好ましい。Ｒ１０及びＲ１１は両方とも水素原子であることが好ましい。一般式Ｖの化合物は、スチレンをベースとする化合物又はアクリルをベースとする化合物であることが特に好ましい。スチレンをベースとする化合物において、Ｒ１３は、アリール基を表し、特に置換基がアミノアルキル基、カルボキシレート基、又はスルホネート基である置換アリール基を表す。コモノマーがアクリルタイプの化合物である場合、Ｒ１３はアルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、又はアリールオキシカルボニル基である。このような化合物において、Ｒ１３は、ヒドロキシ置換基を任意選択により有するＣ１〜２０−アルコキシカルボニル基であることが最も好ましい。アクリル化合物は、一般に、式中のＲ１２がメチルであるメタクリルである。
【００３５】
コモノマーは、例えば、Ｃ１〜２４アルキル（アルク）−アクリレートもしくはアクリルアミド、モノヒドロキシ−Ｃ１〜６−アルキル（アルク）−アクリレートもしくはジヒドロキシ−Ｃ１〜６−アルキル（アルク）−アクリレート、又はアクリルアミド、オリゴ（Ｃ２〜３アルコキシ）Ｃ２〜１８−アルキル（アルク）−アクリレート、又はアクリルアミド、アクリルアミドスチレン、酢酸ビニル、又はＮ−ビニルラクタムなどの非イオン性コモノマーであることが好ましい。
【００３６】
両性イオン基がマトリクスポリマー上のコーティングの形態である場合、例えば本発明者らの先の出願ＷＯ９３／０５０８１号に記載されるグラフト重合プロセスのようにして、マトリクスポリマーの存在下でエチレン性不飽和モノマーの重合を行うことができる。あるいは、両性イオンモノマーを含有するモノマーを予めポリマーに形成し、次いで、一般的には予め形成されたマトリクスポリマーの表面上にコーティングすることによってマトリクスポリマーと一体化することができる。コーティングポリマーとしての使用に好適であり、かつ、両性イオン基を含有する安定な結合ポリマーは、本発明者らの先の出願ＷＯ９３／０１２２１に記載されている。
【００３７】
両性イオン基がマトリクスポリマー上にある場合、マトリクスポリマーは、両性イオン基を含有するポリマーのみからなることができるか、あるいは両性イオン基を含有するポリマーと第２の異なるポリマーとの混合物を含有することができる。この第２のポリマー及び両性イオン基を含有するポリマーは、重合後混合することができるか、あるいは互いにクロスリンクさせてもさせなくてもよい。ポリマーの一方は、他方の予め形成されたポリマーの存在下で重合することによって形成することができる。両性イオン基を含有するポリマーとその他のポリマーとのブレンドの例は、ＷＯ−Ａ−９４１４８９７に示され、適切な水吸収性、水不溶性、及び圧縮性を有するブレンドは、その文書に記載されるブレンドから選択され、粒子へと形成することができる。多イオン複合体は、ブレンドとみなすことができる。
【００３８】
マトリクスポリマーは、実質的にクロスリンクされていなくてもよい。例えば、ある割合の疎水性部分を有するポリマーは、このような部分の存在によって水不溶性となることができるが、それにも関わらず、水性液体を吸収することができ、本発明において有用となる。このようなマトリクスポリマーは、例えば、アルキル（アルク）−アクリレートもしくはアクリルアミド、又はあまり好ましくはないがスチレンなどの疎水性モノマーを含むエチレン性不飽和モノマーで形成することができる。しかしながら、マトリクスポリマーはクロスリンクしていることが好ましい。これによって、十分な機械的安定性、水膨潤性、及び粘着性を有する粒子の形成が可能になり、本発明において有用となる。クロスリンクは静電的であってもよい。例えば、一方の極性の電荷をいくつか有するポリマーは、対イオンによって荷電された２価以上のクロスリンク剤、一般的には、極性が反対のペンダント電荷を有するポリマーを用いてクロスリンクしていてもよい。対イオンによって荷電されたポリマーのブレンドを多イオン複合体と称することができる。
【００３９】
静電的にクロスリンクしたポリマーマトリクスの特定の一実施態様は、ペンダント両性イオン基及びペンダントアニオン基又はカチオン基を有する第１のポリマー、ならびに、場合に応じて全体のカチオン電荷：アニオン電荷の比が２：１〜１：２の範囲となるような量でブレンドされたペンダントカチオン基又はアニオン基を有する第２のポリマーで形成された多イオン複合体である。アニオン電荷及びカチオン電荷のレベルは、ポリマーの反復単位をベースとして５〜１００％の範囲であることが好ましい。溶媒の存在下で２つのポリマーを合わせてブレンドを形成し、次いで溶媒を除去することにより、このような多イオン複合体を形成することができる。水膨潤性かつ水不溶性のブレンドの形成に適切である好適なプロセスは、本発明者らの先の出願番号ＷＯ００／２９４８１に記載されている。
【００４０】
マトリクスポリマーは共有結合によりクロスリンクしていることが好ましいが、この理由は、このような粒子はより高い機械的な安定性を有しているためである。マトリクスポリマーがエチレン性不飽和モノマーから形成される場合、クロスリンクは、重合プロセス中にクロスリンクを形成するジエチレン性不飽和モノマー又は多エチレン性不飽和モノマーをエチレン性不飽和モノマー中に含有させることによってでもよい。多価クロスリンク剤は、末端を有するポリマー、好ましくはペンダントエチレン性不飽和基を有するポリマーであるマクロマーであってもよい。クロスリンクモノマーを有する両性イオンモノマー及び非イオン性コモノマーを重合することによって形成され、かつ、本発明において使用される粒子を形成するのに好適であるクロスリンクしたポリマーは、ＷＯ−Ａ−９２に記載されている。あるいは、エチレン性不飽和モノマーは、重合工程中、より好ましくは重合工程に続いて、分子間クロスリンクを形成することが可能なペンダント官能基を有する１つ以上のモノマーを含有してもよい。このような官能性モノマーは、本発明者らの先の国際公開公報ＷＯ９３／０１２２１又はＷＯ９８／３０６１５において、基底を成す表面と共有結合を形成することができるもの又は分子間クロスリンクを形成することができるものである定義されるもであれば任意のものでよい。
【００４１】
上述した通り、市販の粒子状塞栓療法用組成物は、クロスリンクしたポリビニルアルコール粒子を含有する。ドリバロン（Drivalon）の商用名で市販されている製品は、水性液体の存在下で膨潤する球状粒子を含有すると言われ、このマトリクスポリマーはアルデヒドによってクロスリンクしたポリビニルアルコールである。別のタイプの製品は、不規則な外部形状を有し、かつ、大きさが乾燥状態と吸水状態との間でほとんど変化することない発泡ポリビニルアルコールを含有する。この場合においても、ポリビニルアルコールは、例えば、グルタルアルデヒドなどのアルデヒドでクロスリンクしていると考えられている。別のポリビニルアルコールをベースとする粒子状組成物は、ＷＯ０１／６８７２０に記載されている。この粒子は、エチレン性不飽和ペンダント基の結合によって修飾された予め重合されたポリビニルアルコールをクロスリンクすることによって形成される。ペンダント基を形成するための反応は、先の米国出願公開第５５０８３１７号及び共通の優先権によるこれに関連する公表物に記載されている。エチレン性不飽和ペンダント基がラジカル開始反応によってクロスリンクして、この反応により、付加反応が分子間のエチレン性不飽和基の間で行われ、ポリビニルアルコールが水不溶性となるが水膨潤性にもなる。バルク固体としてクロスリンク生成物を粉砕することによるか、あるいは誘導体化ポリビニルアルコールを非溶媒中に分散してクロスリンクが開始される分散相を形成することによって粒子前駆体を形成するかのいずれかにより、粒子を形成することができる。この粒子は、非溶媒、例えば非極性有機溶媒から回収することができる。Thanoo et al, J. App. Biomat. (1991), 2, 67〜72に記載される方法により、分散相中でポリビニルアルコールのアルデヒドベースのクロスリンクを用いて粒子状材料を形成することもできる。
【００４２】
共有結合によりクロスリンクしたポリビニルアルコールは、予め形成した粒子を両性イオンを含有するコーティングポリマーでコーティングして安定なコーティングを形成することにより、両性イオン表面を備えることができる。コーティングプロセス及び好適なポリマーは、例えば、本発明者らの先の国際公開ＷＯ９３／０１２２１及びＷＯ９８／３０６１５に記載されている。このコーティングは、吸水形態又は乾燥形態において予め形成されたクロスリンクポリビニルアルコール粒子を用いて実施してもよい。このコーティングは、粒子状形態における粒子（すなわち、粒子が懸濁されている連続液体媒体なし）を用いて実施してもよいし、あるいは、好ましくはコーティングポリマーを含有する液体懸濁媒体中で実施してもよい。好適な例を以下に記載する。
【００４３】
粒子状塞栓療法用組成物を形成するのに用いられている他のクロスリンクしたポリマーは、クロスリンクしたヒアルロン酸及び他の多糖類である。これらのポリマーはマトリクスポリマーとしても好適である。
【００４４】
本発明において、両性イオン基は表面に表出されていなければならず、そのことは、使用中に生物学的液体に暴露される表面が両性イオン基を保有していなければならないことを意味する。この両性イオン基の効果は、表面を非血栓形成性とすることである。従って、この表面は、一般的には、血栓形成性をもたらす成分に、具体的には両性イオン基を保有している血球自体に接触可能な表面である。ポリマーマトリクスが実質的に非多孔質である場合、すなわち、血液細胞又はましてや大きな生物分子によるアクセスができるほど十分に大きな孔を有していない場合、粒子は表面周辺上のみに両性イオン基を有してもよい。しかしながら、マトリクスが多孔質である場合、例えば、ポリビニルアルコールのスポンジタイプ材料である場合、さらに孔の表面も両性イオン基を備えている。従って、多孔質材料用のコーティングプロセスでは、コーティングが孔の表面上に沈着されるように、両性イオン基を含有するコーティング材料が孔の表面と接触することが可能にならなければならない。好適なプロセスを以下に例示する。
【００４５】
本発明において、両性イオン基がないこと以外は同様である表面と比較して、表面の血栓形成性を低減するように両性イオン基を備えた粒子によって塞栓を形成することができる組成物が製造されることは驚くべきことである。上述の通り、粒子状塞栓療法用組成物は、一つには粒子が循環中で留まる血栓を引き起こすゆえに、効果的であることが従来技術により示唆されている。通常の事象の過程において血栓が破壊される場合には、再疎通が起こるであろう。本発明によって、血栓溶解（自己分解）の際の早期の再疎通の影響を受けにくいより長く持続する塞栓を生成することが可能になる。
【００４６】
本発明の組成物のさらなる利点は、塞栓部位で任意の炎症性反応を最小にすることが期待されることである。これは、体の炎症性反応によって塞栓部位からそれらの面前に排出される従来技術の組成物で経験している問題を回避するはずである。これは、このような機構に起因する再疎通率を減少すると考えられている。
【００４７】
粒子は、例えば、マトリクスポリマー材料のバルク固体又はゲルを粉砕することによってあるいはマトリクスポリマーの小さな粒子を塊状又は顆粒状にすることによって形成された不規則な形状を有することができるが、粒子は実質的に球状の形状であることが好ましい。球状粒子では、移植部位での組織による炎症性反応又は他の副作用がより少ないと考えられている。
【００４８】
組成物中の粒子サイズは、意図する用途及び送達手段に基づいて選択される。例えば、組成物が塞栓療法に用いられる場合、塞栓形成される血管の直径に応じて粒子サイズを選択することができる。現在入手できる粒子状塞栓療法用組成物で知られている通り、施術者による使用のために組成物の範囲が与えられることが好都合であり、その各々は異なるサイズの範囲内の粒子を含有する。異なるメンバーの生成物におけるサイズは重複していてもよいのに対し、生成物内の粒子が単一プロセスで製造され、かつ、製造後にサイズに基づいて分離されることで、粒子サイズ間ではほとんど重複していないことが一般的には好都合である。
【００４９】
粒子の直径は、マルバーン・マルチサイザー（Malvern Multisizer）、デジタル画像分析、光学顕微鏡の使用を含む技術により、及び較正目盛り付レンズ（calibrated graticules）の使用により又は篩分けにより測定することができる。本発明の粒子は、例えば、吸収される生理食塩水を平衡状態にしたときに約４０μｍを上回るサイズを有する。すべての粒子は、十分に水を吸水させたときに１００μｍを上回る直径を有することが好ましく、例えば１５０μｍを上回る直径を有する。粒子の最大サイズは最高で４０００μｍであることができ、実質的にすべての粒子は３０００μｍ未満であることが好ましく、例えば最高で２０００μｍのサイズである。生成物の範囲が異なる粒子サイズを有する集団を含有する場合、好適なサイズの範囲は４０〜１００μｍ、１００〜３００μｍ、３００〜５００μｍ、５００〜７００μｍ、７００〜９００μｍ、９００〜１２００μｍ、１２００〜１５００μｍ、１５００〜２０００μｍ、及び２０００〜２８００μｍである。
【００５０】
本発明は、治療又は診断のための動物投与用の組成物の製造において、本発明の第１の態様に関して上記に定義した粒子の使用をさらに提供する。
【００５１】
本発明のこの態様において、塞栓形成、例えば、子宮筋腫塞栓形成、腫瘍もしくは腫瘍切除部位周囲での血管の塞栓形成、拡張蛇行静脈もしくは精索静脈瘤の塞栓形成、動静脈奇形もしくは静脈奇形の塞栓形成、胃腸管出血の止血、瘻の塞栓形成、ならびに避妊目的でのファローピウス管及び精細管の塞栓形成方法において、この組成物を投与し得る。
【００５２】
好ましくはヒトである動物に投与される組成物は、連続液相のない膨潤したゲル粒子の形態であり得る。しかしながら、この組成物は、粒子を懸濁する連続水性液体を含有していることが好ましい。粒子は、例えば、膨潤した粒子と同じ密度（同種浮遊物）の連続水性相の使用によるか、連続相を粘稠にすることによるか、あるいは、例えば粒子をコーティングする安定剤の使用により、沈降に対して安定化することができる。動物への投与直前に、連続水性液体を乾燥又は一部吸水させた形態で供給された粒子に添加することができる。しかしながら、組成物は、使用可能な状態で提供されることが好ましく、従って一般的には無菌であり、この組成物を容器からカテーテル又は皮下針などによって直接投与することができる容器中に提供してもよい。
【００５３】
ポリマー組成物自体のいくつかは新規であってもよい。それらは、直接導入用以外の使用又は動物への投与に好適な組成物を構成するための使用を有していてもよい。本発明のさらなる態様によれば、水不溶性かつ水吸収性のポリマーのマトリクスであるコアを含有し、平衡状態で室温において生理食塩水を吸水させたときに４０〜４０００μｍの範囲の直径を有し、かつ、その外部表面上に両性イオンを表出していることにより特徴づけられる新規なミクロスフィアを提供する。
【００５４】
いくつかの実施態様の新規な組成物の製造方法は、本発明の一部でもあり、特許請求の範囲の請求項３０〜３３に記載されている。
【００５５】
本発明のこの態様において、ミクロスフィアのサイズの分布は、最も小さい粒子の直径と最も大きい粒子の直径との間の相違が５０μｍと１０００μｍとの間であり、好ましくは１００〜５００の間であり、より好ましくは１５０〜３００μｍの間となるものである。異なるサイズ範囲を有する一連の集団はキットにおいて提供されてもよい。このようなキットにおける集団のサイズの範囲は、重複していても重複していなくてもよい。
【００５６】
このミクロスフィアは、治療又は診断による動物の治療方法における使用であることが好ましい。
【００５７】
動物に投与される組成物は、本発明の態様のいずれにおいても、用途に応じて選択される追加成分を含有してもよい。この組成物は、投与後の組成物位置のモニタリングを可能とする造影剤、例えば、放射線不透過剤又は核磁気共鳴造影剤を含有してもよい。この造影剤は粒子中で結合してもよいし、連続水性懸濁液に懸濁してもよい。例えば、動物被検体へ投与する前に、ビシペイク（Visipaque）、オムニペイク（Omnipaque）、リピオドール（Lipiodol）、又は他の市販の材料などの既知の放射線不透過造影剤を本発明の組成物と混合してもよい。この造影剤は非イオン性材料であることが好ましい。あるいは、この造影剤は、Benzina, A. et al., Biomat. (1994) 15(14) 1122-1128及びJ. Biomed. Mater. Res. (1996) 32(3), 459-466によって記載される通り、例えば、２−（２’−ヨードベンゾイル）メタクリル酸エチル又は２−（２’，３’，５’−トリヨードベンゾイル）メタクリル酸エチルなどのヨウ化モノマーを他のエチレン性不飽和モノマーと共重合することにより、マトリクスポリマー材料又はコーティングポリマーと共有結合させてもよい。あるいは、この造影剤は、例えば生成中に粒子が形成される成分によって分散させることにより、ポリマーマトリクスに共有結合せずに、ポリマーマトリクスを介して単に分散させてもよい。
【００５８】
さらに又はあるいは、この組成物は、この組成物中に薬物を存在させることができる。この薬物は、粒子を取り囲む水性連続相に懸濁してもよいし、及び／又はマトリクスポリマーと共有結合させることによるか、外部表面に共有結合又は静電結合させることによるか、あるいは疎水性ドメイン中に分配することにより、溶液中又は吸水させる水性液体中のいずれかの粒子内にあってもよい。薬物が粒子内にある場合、動物被検体への投与後により長い期間にわたってこの薬物を放出することができる。粒子状塞栓療法用材料を含有する薬物送達系は既知である。薬物をこのタイプの粒子状薬物送達系に組み入れる方法に関する汎用の一般知識及びこの薬物送達系からの放出を調節するための汎用の一般知識に基づき、当業者は本発明のこの実施態様を実施することができる。適切な薬物としては、例えば、抗生物質、血栓を形成することが望ましい場合には血栓形成剤、及び／又は例えば腫瘍の化学塞栓療法（chemoembolisation）用の細胞傷害薬又は細胞増殖抑止薬が挙げられる。薬物は、抗血管形成薬であってもよい。抗血管形成薬の送達に関するミクロスフィア送達系は、ＷＯ９５／０３０３６に記載されている。その明細書に記載される薬物のいずれも、本発明において特に腫瘍又は腫瘍切除部位の治療に用いることができる。
【００５９】
この組成物は、粒子塞栓療法の送達に現在使用されている器具を用いて投与される。この器具は、カテーテル又はシリンジに取り付けられた皮下針を含み得る。この器具は、送達される組成物の粒子サイズ及び粒子のエラストマー特性に応じて選択することができる。従って、送達中に組成物が流れる導管は、粒子が遮断されることなく通過できるサイズでなければならない。
【００６０】
水が吸収された形態の粒子は、投与されたときにある程度の弾性を有する。従って、この粒子に圧縮力が供される送達中に、この粒子は器具の導管内で変形することができる。粒子が規則的な形状を有している場合、特に実質的に球状である場合、このような任意の変形後にも粒子は回復しければならない。器具を介した送達の間、環境をシミュレートしようとする速度で膨潤形態の粒子に所定の圧力を施しながら圧縮の程度を測定する方法によって、弾性特性を調べることができる。この試験は弾性限界まで行うことができ、及び／又は圧力を取り除いて回復を測定することによって逆にすることができる。本発明者らは、粒子が、十分に水を吸水した場合、すなわち、生理食塩水で平衡化させた場合に、少なくとも３０重量％、好ましくは少なくとも５０重量％の水含量を有し、良好な弾性特性を有することを見出した。
【実施例】
【００６１】
付随の実施例において本発明をさらに例示する。
【００６２】
＝＝＝参照実施例１：ＰＣ材料を用いた炎症の低減＝＝＝
ヒト血液から得られる単核細胞の接着性を見るin vitro方法を用いて、ＰＣをベースとする材料に対する潜在的な免疫応答を評価した。
【００６３】
３６歳の健康な男性ボランティア（ドナーの格差に関連する問題を排除するために１人のドナー）から得られた２４ｍＬのヒト静脈血を、５００μＬの滅菌脱イオン水に溶解している１２μｇのヘパリン（シグマ・アルドリッチ社（Sigma Aldrich）、プール、ドーセット州、英国）を含有する３０ｍＬのユニバーサル管（ビビー・スターリン社（Bibby Sterilin）、スタフォードシャー州、英国）中に回収した。次いで、ヒストペイク（Ｈistopaque）１０７７（シグマ社、プール、ドーセット州、英国）を用い、製造者の方法論に従って血液分離を行った。ヘパリン化した血液を２つに分け、２つ清浄な一般的な遠心管中で、１２．５ｍＬのヒストペイク１０７７（シグマ・アルドリッチ社、プール、ドーセット州、英国）上に注意深く層状にした。次いで、これらの管を室温（１８〜２６℃）において７００ｇで３０分間遠心した（デンレイ社（Denley）、ＢＳ４００）。遠心分離後、単核細胞を含有する各管中の区別できる不透明／グレーの層を回収し、清浄な遠心管に移した。次いで、滅菌したＰＢＳ１０ｍＬを添加し、続いて室温において２００ｇで１０分間遠心分離することにより、細胞を洗浄した。遠心分離後、上清を取り除き、ペレット化した細胞をＰＢＳに再懸濁し、次いで洗浄手順を２回繰り返した。洗浄後、最後に、１０％ヒト血清、１％ペニシリン、及びストレプトマイシン（シグマ・アルドリッチ社、プール、ドーセット州、英国）、ならびに１％Ｌ−グルタミン（シグマ・アルドリッチ社、プール、ドーセット州、英国）を補足したＲＰＭＩ１６４０培地（インビトロゲン社（Invitrogen）、ペイズリー（Paisley）、英国）１０ｍＬに細胞を再懸濁した。次いで、血球計数器（haemacytometer）を用いてこの細胞を計数した。
【００６４】
ポリ（エチレンテレフタラート）フィルムを、ＷＯ−Ａ−９８３０６１５に記載の通りにして合成したモルで２３：４７：２５：５の２−メタクリロイルオキシエチル−２’−トリメチルアンモニウムエチルリン酸内部塩（ＭＰＣ）：ｎ−ドデシルメタクリレート：ヒドロキシプロピルメタクリレート トリメトキシシリルプロピルメタクリレートの４つのポリマーの５ｇ／ｌのエタノール溶液でコーティングした。次いで、コーティングを乾燥し、加熱して、ポリマーを７０℃の温度で一晩クロスリンクさせた。
【００６５】
次いで、総体積４００μＬの補足培地中で試験材料（ポリ（エチレンテレフタラート）（ＰＥＴ）及びＰＣポリマーをコーティングしたＰＥＴを切断して１ｃｍ２の試料としたもの）上に、１試料あたり２．５×１０５個の細胞で、細胞を直接に植えつけた。濃度は、細胞接着を良好な可視化が可能になるように十分に低く選択したが、細胞間の相互作用を最小にし、細胞凝集の形成が妨げられるように十分に希釈した。次いで、プレートを湿度インキュベーター（サンヨー（Sanyo)、ジェンコンス（Jencons）ＰＬＳ、英国）中で３７℃及び５％ＣＯ２において一晩インキュベーションした。インキュベーション後、試料を滅菌ＰＢＳのアリコート０．５ｍＬで３回洗浄した。次いで、接着した細胞を、室温において２０分間、脱イオン水中で調製した４％（ｗ／ｖ）パラホルムアルデヒド（シグマ・アルドリッチ社、プール、ドーセット州、英国）０．５ｍＬを添加することによって固定した。次いで、試料を滅菌ＰＢＳのアリコート０．５ｍＬ中で再度３回洗浄した後、滅菌ＰＢＳ中で調製した４％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ（シグマ・アルドリッチ社、プール、ドーセット州、英国）０．５ｍＬとともに室温において３０分間インキュベーションした。次いで、試料を滅菌ＰＢＳ０．５ｍＬで３回洗浄した。
次いで、細胞をＰＢＳ中で調製した０．２％（ｖ/ｖ）Triton Ｘ-１００（シグマ・アルドリッチ社、プール、ドーセット州、英国）０．５ｍｌを添加することによって透過化処理し、室温において８分間インキュベーションした。次いで、試料を上記の通りに滅菌ＰＢＳ中で洗浄した。脱イオン水中で調製した９％（ｖ／ｖ）過酸化水素（シグマ・アルドリッチ社、プール、ドーセット州、英国）０．５ｍＬを各試料に添加し、４℃において一晩インキュベーションした。過酸化水素とともにインキュベーションした後、試料を滅菌ＰＢＳ中で洗浄した。次いで、湿度チャンバー（滅菌ＰＢＳ中に浸漬された濾紙（ＢＤＨラボラトリー・サプライズ社、プール、ドーセット州、英国）が並べられたペトリ皿（インビトロゲン社、ペイズリー、英国））中のパラフィルム片（ＢＤＨラボラトリー・サプライズ社（BDH Laboratory Supplies）、プール、ドーセット州、英国）の上に試料を置いた。
ＰＢＳ中で１％ＦＣＳ（インビトロゲン社、ペイズリー、英国）によって１：２０希釈したＣＤ６８（マクロファージ特異的細胞表面受容体）一次抗体（ダコー社（DAKO）、ケンブリッジシャー州（Cambridgeshire）、英国）５０μＬを各試料に添加し、１時間室温でインキュベーションして、非特異的結合を阻害した。インキュベーション後、この試料をＰＢＳ４０ｍＬ中に１０回浸漬し、この浸漬プロセスをフレッシュなＰＢＳ中で２回繰り返した。次いで、高速染色キット（シグマ・アルドリッチ社、プール、ドーセット州、英国）をキットに同梱されている指示書に従って試料に適用し、ビオチン化二次抗体（緩衝生理食塩水中のヤギ抗マウス免疫グロブリン及び０．１％ナトリウムアジド）一滴（〜５０μＬ）を各試料に添加し、室温において５分間インキュベーションした。次いで、試料を上記の通りにＰＢＳ中で洗浄した。
次いで、ペルオキシダーゼ試薬（緩衝生理食塩水中で共役されている）一滴（〜５０μＬ）を各試料に添加し、室温において５分間インキュベーションした。試料を上記の通りにＰＢＳ中で洗浄し、基質試薬５０μＬ（脱イオン水４ｍＬ、酢酸緩衝液（２．５Ｍ、ｐＨ５．０）２滴（〜１００μＬ）、ＡＥＣクロモゲン（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の３−アミノ−９−エチルカルバゾール）２滴（〜１００μＬ）、及び３％過酸化水素（脱イオン水中）１滴（〜５０μＬ））を各々試料に添加した。次いで、試料をＰＢＳ中で再度洗浄し、最後に脱イオン水中で洗浄した後、ベクタシールド試料装着用物質（Vectasheild mountant）（ベクターラボ社（Vectorlabs）、ピーターバラ州（Peterborough）、英国）約２０μＬを用いて顕微鏡スライド上に備え付けた。接着性のマクロファージ及び単球細胞の数を光学顕微鏡（ラボールラックス（Laborlux）１２、ライツ（Leitz）、ドイツ）を用いて倍率４００倍の下で１視野あたりの計数を行った。１視野あたりの細胞の平均数は、１複製試料あたり３０のランダムな視野から計数した。図１の結果は、倍率４００倍の下で観察された１視野あたりの細胞の平均数（３０の視野から得られたもの）及び１８の複製試料から得られた標準誤差を示す。
【００６６】
ＰＣ１０３６と比較して有意により多くの数の単核細胞がＰＥＴに接着することが見い出された（スチューデントのｔ検定ｐ＜０．０５、ｎ＝１８）。
【００６７】
＝＝＝参照実施例２：ＰＣ材料を用いた線維性被膜(fibrous capsule)の減少＝＝＝
上記の参照実施例１で用いたクロスリンク可能なＰＣポリマーでコーティングしたステンレス鋼ロッドをウサギの筋肉内で移植し、線維性被膜形成をＰＥネガティブコントロール移植片から得られるものと比較した。１３週目における移植片周囲での線維性被膜形成の統計分析によって、ＰＣでコーティングした移植片ではカプセルが少なく、試料はしばしば成熟した脂肪組織によって取り囲まれていることが明らかになったが、このことはこの移植片が十分に寛容され、動物に許容されていることを示している（図２ａ及び図２ｂ）。
【００６８】
カプセル形成のレベルを定義する従来のスコアリング方法を用いて、移植片を１３週目で比較し（各々についてｎ＝２０）、ＰＣコーティング試料及び対照試料ではそれぞれ０．２５及び０．７５のスコアを生じた（ｐ＝０．０１１）。ＰＣコーティング試料では、１３週目において存在するカプセルは有意に少なかった。
【００６９】
ＰＣを用いて塞栓形成剤を修飾することにより、血栓形成の予防だけではなく（ＰＣ材料に対しては周知であり、広範に報告されている）、作用物質に対するより長期の炎症応答の減少も助けられるので、参照実施例１及び２で行った観察は本発明の特許請求の範囲の記載を裏付けている。
【００７０】
＝＝＝実施例１：クロスリンクしたＰＣポリマーヒドロゲル塞栓形成粒子の調製＝＝＝
参照実施例１で用いたポリマーとしての成分を有するクロスリンク可能なＰＣポリマーをＷＯ−Ａ−９８３０６１５で概説した通りに調製して単離し、アセトン中に沈殿させて回収した。回収した材料をオーブン中で７０℃において４時間乾燥させクロスリンクさせた。一連の篩（クリスティソン社（Christison）、ゲーツヘッド（Gateshead）、英国、６３〜８３０μｍ、ステンレス鋼、直径２００ｍｍ）を用いて、粒子状材料をサイズ範囲に分けた。粒子が室温において水中で水和して平衡した場合、この粒子は５０〜５５％の範囲の水含量に達した。
【００７１】
図３の顕微鏡写真は、１８０〜３５５μｍの範囲の篩分けされたサイズ（乾式篩分け）を有する乾燥試料及び水和した粒子の試料を示している。水和した粒子の水含量は、それらを生理食塩水中で室温において２４時間水和することにより決定した。水和した粒子の試料をブロッティングし、乾燥し、次いで重量測定した。次いで、粒子をオーブン中で１００℃において１時間乾燥し、再び重量測定した。重量の違いは、報告した平衡水含量である。本実施例の粒子は、５０〜５５％の平衡水含量を有していた。
【００７２】
＝＝＝実施例２：クロスリンクしたＰＣポリマーヒドロゲル塞栓形成粒子の調製＝＝＝
ＷＯ９２／０７８８５に一般的に記載されている通り、ＭＰＣが約７モル％で存在し、クロスリンク剤は約０．５モル％の量で存在する、エチレングリコールジメタクリレートとクロスリンクした２−ヒドロキシ−エチルメタクリレート中のＭＰＣの溶液のバルク共重合により、代替のクロスリンクしたＰＣポリマーを調製した。バルクキセロゲル材料を粉砕して粒子とし、実施例１で記載した篩分け技術を用いてサイズ分けした。図４は、特定の開口の篩上で保持されているキセロゲル粒子（すなわち、水中で平衡化する前）の顕微鏡写真を示している。粒子は水和したときに急速に膨潤し、約６０％の水含量に達した。
【００７３】
＝＝＝実施例３：塞栓療法用のＰＣをベースとするミクロスフィアの調製＝＝＝
エチルセルロース（エトキシ含量４８％、アルドリッチ社）０．２５ｇを５００ｍｌの攪拌反応容器中のジクロロメタン１００ｇ及びヘキサン５０ｇの溶液に添加した。溶液を窒素で脱酸素化し、攪拌速度を２５０ｒｐｍに調整した。
【００７４】
別の容器中では、ジメチルアクリルアミド（アルドリッチ社）１７．５ｇ、メチレンビスアクリルアミド（アルドリッチ社）０．１２５ｇ、及び蒸留水４５．０ｇで溶液を構成した。この溶液にＭＰＣ７．５ｇ及び過硫酸アンモニウム（アルドリッチ社）０．１２５ｇを添加した。次いで、この透明な水溶液を攪拌反応容器に添加した。
【００７５】
テトラメチルエチレンジアミン（アルドリッチ社）０．２５ｇの添加前に、全ての内容物をさらに１０分間脱酸素化した。重合が完了した後（約１０℃の発熱）、反応容器の内容物を約２ｍｍの篩を通して注ぎ、濾過によって球状粒子を溶媒から除いた。この粒子をアセトン及び蒸留水でさらに数回洗浄し、蒸留水中で保存した。３７０μｍ〜８１０μｍの範囲で次第に減少していく開口を有する一連の篩を用いた湿式篩分け法を用いて、粒子をサイズ範囲に分けた。図５ａ〜図５ｃは、この方法により生じたいくつかの代表的な球状体を示し、図に示したマイクロメートルのサイズは粒子が保持されている篩の開口である。これらの顕微鏡写真においてそれらをより効果的に可視化するため、球状体をエオシンＹ又はリアクティブ・ブルー（Reactive Blue）などの種々の染料で染色した。水溶液中の水溶性の染料をポリマーで好適な期間コーティングし、次いで必要な場合には染料上の反応性基及びポリマーに適合する条件を施すことによって固定する。
【００７６】
＝＝＝実施例４：ＵＶクロスリンク法によるＰＣをベースとするミクロスフィアの調製＝＝＝
１ｗｔ％アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）を開始剤として用いて、エタノール中の３０ｗｔ％ＭＰＣ、５０ｗｔ％ラウリルメタクリレート、１０ｗｔ％ヒドロキシプロピルメタクリレート、及び１０ｗｔ％アリルメタクリレートを含有するモノマー枯渇フリーラジカル重合技術により、ポリマーを合成した。この溶液をアセトン中に沈殿させると８５％の白色ポリマーを生じ、これを真空中において一晩室温で乾燥させた。
【００７７】
ポリマー７．５ｇ及びダロキュア（Darocure）ＵＶ開始剤０．１ｇを激しく攪拌しながらクロロホルム１００ｇに溶解させた。２５０ｍｌの丸底容器をオーバーヘッド攪拌器に備え付け、脱イオン水２３０ｍｌを満たして過剰な渦が形成されることを回避した。攪拌水（１５０ｒｐｍ）にポリマー溶液５ｇを添加すると、この溶液は直ぐに乳化して液滴を形成した。ポリマー溶液の粘性は、形成される球状の液滴のサイズ及び質の決定に非常に重要である。すべてのポリマー溶液を完全に添加したときに、ＵＶランプのスイッチを入れ、容器を１０分間照射した。得られた液滴は、アリルペンダント基をラジカル重合して、クロスリンクＰＣポリマー球状体（spheroids）にすることによるラジカル重合によって重合し、該球状体を篩分けして３００〜９００μｍの範囲のサイズの試料を回収した。６００μｍの開口篩上で収集した球状体を図に示す。
【００７８】
＝＝＝実施例５：ＰＣをベースとする多イオン複合体塞栓形成粒子の調製＝＝＝
ポリマーをＷＯ−Ａ−００２９４８１で概説した方法に従って調製した。以下の式のアニオンポリマー及びカチオンポリマーを調製し、純水に溶解して、各々１７．５ｗｔ％溶液を生成し、続いてこの溶液を１：１の体積で十分に混合し、同じｗｔ％組成物のＰＣ多イオン複合体（ＰＩＣ）ゲルを得た：ＬＭＡは、ラウリルメタクリレート（ｎ−ドデシル）メタクリレートであり、ＤＭＡは、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミドである。カチオノマー：ＭＰＣ２５ＬＭＡ１５ＴＥＭ６０（ＴＥＭ＝コリンメタクリレートクロライド、Ｍｗ２０７）、アニオマー：ＭＰＣ３０ＤＭＡ１０ＳＳＳ６０（ＳＳＳ＝スチレンスルホン酸ナトリウム、Ｍｗ２０７）。
【００７９】
ゲルを１２０℃で一晩脱水し、得られたキセロゲルをある範囲の粒子サイズに粉砕した。実施例１で先に記載した通りに、粒子を篩分けによってサイズ範囲に分けた。図７は、分離後のキセロゲル粒子の顕微鏡写真を示し、この粒子は特定の開口サイズの篩上で保持されているものである。
【００８０】
粒子は水に暴露したときに急速に膨潤する。数時間後、粒子は一部合着して約７０％の水含量を有するゲルとなるのが見て取れる。図８は、合着したゲル及び各キセロゲルの顕微鏡写真を示している。このタイプのヒドロゲルでは、穏やかに攪拌したときにデアグロメレーションが起こらないよう、キセロゲルを使用直前に水和し、かつ、ゲルが合着する前に組成物を送達することが必要である。
【００８１】
＝＝＝実施例６：塞栓形成用のＰＣコーティングＰＶＡ発泡粒子＝＝＝
参照実施例１に記載されたクロスリンク可能なポリマーの２０ｗｔ％クロロホルム溶液中に、平均サイズ１０００ミクロンのポリビニルアルコール（ＰＶＡ）発泡粒子（コック社（Cook Inc．）、米国）を置いた。数分後、この溶液をデカントし、粒子を空気乾燥して溶媒を除去した。この粒子を７０℃のオーブン中に置いてコーティングの硬化を行った。図９は、コーティング塗布前後の粒子の目視比較を示している。粒子のサイズ及び形状は実質的に変わっていないが、コーティングは幾分目に光る表面を読み取れる。
【００８２】
図１０は、コーティングしていないＰＶＡ発泡粒のＦＴ−ＩＲスペクトルをＰＣ−コーティングしたＰＶＡ発泡粒子のものと比較している。１７２９ｃｍ−１での追加の強度のピークは、メタクリレートＰＣポリマー中のエステル結合のカルボニルに特徴的なものであり、９６７ｃｍ−１及び７８９ｃｍ−１での他のシグナチャーピークは、ポリマーに特徴的なものであり、ＰＶＡに固有のものではないことに留意しなければならない。このことによって、ＰＣポリマーによるＰＶＡ粒子のコーティングが実に上手くいったことが実証された。
【００８３】
＝＝＝実施例７：塞栓形成用のＰＣコーティングＰＶＡゲル球状体＝＝＝
吸取り紙上に詰め物をして乾燥したが脱水されていないＰＶＡゲル球状体（バイオキュア社（Biocure Inc）がＷＯ−Ａ−０１６８７２０の実施例２に従って製造したがアニオンコモノマーを含んでおり、膨潤したミクロスフィアを懸濁する連続水性液体を伴った水性組成物として供給される）を用いて、実施例６と同じ手順を繰り返した。コーティングを上記の通りにクロスリンクさせると、ゲル球状体の水和サイズが硬化工程中に約１０分の１に縮小するのが観察された。脱水された球状体のＦＴ−ＩＲは、塗布されたＰＣコーティングに特徴的なカルボニル伸縮の存在を示している（図１１）。コーティングした球状体は、水和したときにその元の寸法及び形状を回復していることが認められた。
【００８４】
＝＝＝実施例８：ヒツジ肺モデルにおけるＰＣをベースとするミクロスフィアを用いた塞栓形成の評価＝＝＝
実施例３に記載の通りに合成したＰＣをベースとするミクロスフィアを、短期ヒツジ肺塞栓形成モデルにおいてＰＶＡ粒子（コック社）と比較して評価した。
【００８５】
＝＝＝＝材料及び設備＝＝＝＝
(i)動物：３匹の妊娠していない成体Pre−Alpesヒツジ
ｉ． 体重範囲４０〜６０ｋｇ
(ii)ＰＣ球状体（実施例３に記載の通り）
(iii)ＰＶＡ粒子（コック社）
(iv)クオシナ（Qosina）又はＢＤＨポリプロピレンシリンジ及び三方向連結具
(v) ビシペイク（Visipaque）３２０造影剤
(vi)テルモ社レッジエーロ（Terumo Leggiero）診断用カテーテル
【００８６】
ＰＣ球状体を青色に染色し、５ｍｌのシリンジ中でＰＢＳ（インバークライド社（Inverclyde））に懸濁し、蒸気滅菌によってインハウスで滅菌した。ＰＶＡ粒子は滅菌して供給した。各注入前に混合物を攪拌して均一な粒子懸濁液を維持した。混合物を合わせて、最大の直径３‐Ｆのマイクロカテーテルに注入した。テルモ社レッジエーロマイクロカテーテルは、比較的大きな内腔直径であるため好ましい。
【００８７】
＝＝＝＝方法及び手順＝＝＝＝
（ｉ）麻酔
ヒツジには手順を行う前２４時間は食事を与えなかった。体重１ｋｇあたり１５ｍｇのチオペンタールナトリウム（ネスドナル社（Nesdonal）；スペシア・ローヌ−プーランク（Specia Rhone−Poulenc）、パリ、フランス）の筋内注入によって麻酔を行った。各動物を背臥位に配置し、挿管し、１．５％ハロタン（トルフィールス社（Trofiels）ツーク、スイス）及び９８．５％酸素（CFPO社、パリ、フランス）の混合物で麻酔し、ユニット（ロジック０．５；オーメダ社（Ohmeda）、スティートン（Steeton）、イングランド）で酸素供給した。呼気終末（End−tidal）ＣＯ２レベルを連続的に測定し、モニター（Ｎ１０００；ネルコール社（Nellcor）、プレザントン、カリフォルニア州）により２６ｍｍＨｇと３６ｍｍＨｇとの間で維持した。９５％より高いレベルで維持された末梢動脈酸素飽和を耳に付けられた探針によりモニタリングした。本手順の間、心電図を用いて各動物を連続的にモニタリングした。
【００８８】
（ii）塞栓形成手順
静脈大腿手法（venous femoral approach）を用いて、塞栓形成を行った。４‐Ｆ又は５‐Ｆの誘導針（introducer）のシースを大静脈中に置いた。心臓の右の腔へ大静脈の逆行性カテーテル挿入を行い、肺動脈の近位のカテーテル挿入を行った。５‐Ｆの誘導カテーテルを導入し、肺動脈分枝の非常に選択的なカテーテル挿入を行った。対照の血管造影図をとり、続いて粒子のフリーフロー中で塞栓形成する（造影剤と混合する）。繰り返し選択的な対照の血管造影図をとり、続いて非常に選択的に塞栓形成する。球状体／粒子を各々注入した後、カテーテルを食塩水２．５ｍｌでパージした。血管造影図による評価で近位の動脈流が減少したとき、塞栓形成を停止した。各試料に対して、同じ終点の塞栓形成を用いた。
【００８９】
＝＝＝＝即時評価＝＝＝＝
以下の評価を直ぐに行った：
適用及び操作の容易性、塞栓形成の有効性（血管造影図による評価：閉塞レベル、動脈閉塞の程度）、終点、注入された球状体／粒子の体積、血管の塞栓形成時間、塞栓形成時の還流又は副作用、動物の体重（含入時にすべての動物に対して体重測定する）。
【００９０】
＝＝＝＝結果＝＝＝＝
ＰＣミクロスフィア及びＰＶＡ粒子は両方とも、血管において効果的に塞栓を形成した。ＰＶＡは血管内で凝集してより近位での閉塞を生成する傾向があったのに対し、ＰＣミクロスフィアはより遠くまで移動した。ＰＶＡ粒子はカテーテル内で集塊及び凝集する傾向を有していたのに対し、圧縮性ＰＣミクロスフィアは送達に関する問題はなかった。両方とも塞栓形成剤に対して許容できる形式で扱った。観察するのが容易である造影剤を用いて、同種浮遊混合物を保持する青色のＰＣミクロスフィアがシリンジ中に容易に見られた。ＰＣ球及びＰＶＡ粒子の両方とも、塞栓形成に対して許容し得る終点を生じた。
【００９１】
＝＝＝＝組織病理学＝＝＝＝
７日後に動物を屠殺し、塞栓形成された肺組織の断面図に対して病理学的な評価及び組織学的な評価を行った。直接１０％中性緩衝化ホルマリンを気管内注入し浸漬し、２週間ホルマリンで染色することによって肺を固定した。種々の肺領域において肉眼による検査を行った。試料を一連のアルコール中で脱水し、キシレン中に設置し、パラフィン中に包埋し、３〜４μｍの切片にした。各切片を顕微鏡スライド上に備え付け、ヘマトキシリン−エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色によって染色し、光学顕微鏡下で調べた。ＰＣ球状体とＰＶＡ粒子との比較によって、ＰＣミクロスフィアでは変わった組織反応がないことが示された。図１２は、ＰＣ微小球状体及びＰＶＡ粒子を含有する塞栓形成血管由来の断面図を示している。
【００９２】
図１２における断面図は、ＰＣ微小球状体の球形度及び如何にしてそれが血管の生来の形状に合致し維持するかを明らかにする。これは、粒子と組織との間のいくつかの空間が血栓で満たされている不規則な形状のＰＶＡ粒子とは対照的である。
【図面の簡単な説明】
【００９３】
【図１】図１〜図１２まで説明なし。
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水性液体を吸収させるポリマーマトリクスの粒子を含有する治療用組成物又は診断用組成物であって、
該粒子は４０〜４０００μｍの範囲の直径を有し、
該粒子の表面は両性イオン基を表出している、
ことを特徴とする、治療用組成物又は診断用組成物。
【請求項２】
前記ポリマーマトリクスが実質的に非生分解性であることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記粒子を懸濁するのに十分な量の連続水性媒体を含有することを特徴とする、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
無菌であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
前記両性イオン基が、リン酸アンモニウム、リン酸ホスホニウム、もしくは、リン酸スルホニウムであるか、又はリン酸エステル両性イオン基、より好ましくは下記一般式ＩＩの基であり、
式中、部分Ａ３及びＡ４は、同じであるか異なり、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、又は原子価結合、好ましくは−Ｏ−であり、
Ｗ＋は、アンモニウムカチオン基、ホスホニウムカチオン基、又はスルホニウムカチオン基を含有する基、ならびに好ましくはＣ１〜１２−アルカンジイル基であるアニオン部分及びカチオン部分を結合している基であり、
Ｗ＋は、式−Ｗ１−Ｎ＋Ｒ３３、−Ｗ１−Ｐ＋Ｒ４３、−Ｗ１−Ｓ＋Ｒ４２、又は−Ｗ１−Ｈｅｔ＋の基であることが好ましく、
Ｗ１は、１つ以上のエチレン性不飽和二重もしくは三重結合、二置換アリール（アリーレン）、アルキレンアリーレン、アリーレンアルキレン、もしくはアルキレンアリールアルキレン、シクロアルカンジイル、アルキレンシクロアルキル、シクロアルキルアルキレン、又はアルキレンシクロアルキルアルキレンを任意選択により含有する１つ以上、好ましくは２〜６個の炭素原子のアルカンジイルであり、基Ｗ１は、１つ以上のフッ素置換基及び／又は１つ以上の官能基を任意選択により含有し、
該基Ｒ３は、同じであるか異なり、各々は、水素又は１〜４個の炭素原子のアルキルであり、好ましくはメチル又はフェニルなどのアリールであるか、あるいは該基Ｒ３の２つは、それらが結合している窒素原子と一緒に、５〜７個の原子を含有する脂肪族複素環式環を形成するか、あるいは３つの該基Ｒ３は、それらが結合している窒素原子と一緒に、５〜７個の原子を有する複素芳香族環を形成し、それらの複素芳香族環のいずれかの環は、各環中に５〜７個の原子を含有する別の飽和環又は不飽和環と縮合して縮合環構造を形成することができ、任意選択により１つ以上の該基Ｒ３は、親水性官能基により置換され、
該基Ｒ４は、同じであるか異なり、各々は、Ｒ３又は基ＯＲ３であり、Ｒ３は、上記に定義された通りであるか、あるいは、
Ｈｅｔは、芳香族窒素、芳香族リン、又は芳香族硫黄、好ましくは例えばピリジンなどの窒素を含有する環である、
ことを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記両性イオン基が、下記一般式IIIを有し、
式中、該基Ｒ５は、同じであるか異なり、各々は、水素又はＣ１〜４アルキルであり、ｍは１〜４であり、好ましくは該基Ｒ５が同じであり、好ましくはメチルである、
ことを特徴とする、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記両性イオン基が、下記一般式Ｉのモノマーを含有するエチレン性不飽和モノマーから形成されるポリマー上のペンダント基であり、
ＹＢＸ Ｉ
式中、Ｙは、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＯ−Ａ−、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−Ｃ６Ｈ４−Ａ１−、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＨ２Ａ２、Ｒ２Ｏ−ＣＯ−ＣＲ＝ＣＲ−ＣＯ−Ｏ、ＲＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−Ｏ−、ＲＣＨ＝Ｃ（ＣＯＯＲ２）ＣＨ２ＣＯ−Ｏ、
から選択されるエチレン性不飽和基であり、
Ａは、−Ｏ−又はＮＲ１であり、
Ａ１は、結合、（ＣＨ２）ＩＡ２、及び（ＣＨ２）ＩＳＯ３−から選択され、Ｉは、１〜１２であり、
Ａ２は、結合、−Ｏ−、Ｏ−ＣＯ−、ＣＯ−Ｏ、ＣＯ−ＮＲ１−、−ＮＲ１−ＣＯ、Ｏ−ＣＯ−ＮＲ１−、ＮＲ１−ＣＯ−Ｏ−から選択され、
Ｒは、水素又はＣ１〜４アルキルであり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜４アルキル、又はＢＸであり、
Ｒ２は、水素又はＣ１〜４アルキルであり、
Ｂは、結合、又は１つ以上のフッ素置換基を任意選択により含有する直鎖分子状アルカンジイル、アルキレンオキサアルキレン、もしくはアルキレン（オリゴオキサルキレン）基であり、
Ｘは、両性イオン基である、
ことを特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
式中、Ｙは、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＯ−Ａであり、
Ｒは、好ましくは水素又はメチルであり、
Ａは、好ましくはＯ又はＮＨである、
ことを特徴とする請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記エチレン性不飽和モノマーが、例えば下記一般式Ｖの化合物であるコモノマーをさらに含有し、
式中、Ｒ１０は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキル、及び基ＣＯＯＲ１４から選択され、
Ｒ１４は、水素及びＣ１〜４アルキルから選択され、
Ｒ１１は、水素、ハロゲン、及びＣ１〜４アルキルから選択され、
Ｒ１２は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキル、及び基ＣＯＯＲ１４から選択され、但し、Ｒ１０及びＲ１２は両方ともＣＯＯＲ１４ではなく、
Ｒ１３は、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ１〜２０アルコキシカルボニル、モノ−（Ｃ１〜２０アルキル）アミノカルボニルもしくはジ−（Ｃ１〜２０アルキル）アミノカルボニル、Ｃ６〜２０アリール（アルカリールを含む）、Ｃ７〜２０アラルキル、Ｃ６〜２０アリールオキシカルボニル、Ｃ１〜２０−アラルキルオキシカルボニル、Ｃ６〜２０アリールアミノカルボニル、Ｃ７〜２０アラルキル−アミノ、ヒドロキシル、又はＣ２〜１０アシルオキシ基であり、それらはいずれも、ハロゲン原子、アルコキシ、オリゴ−アルコキシ、アリールオキシ、アシルオキシ、アシルアミノ、アミン（モノアルキルアミノ及びジアルキルアミノならびにトリアルキルアンモニウムを含み、アルキル基は置換されていてもよい）、カルボキシル、スルホニル、ホスホリル、ホスフィノ、（モノアルキルホスフィン及びジアルキルホスフィンならびにトリアルキルホスホニウムを含む）、両性イオン、ヒドロキシル基、ビニルオキシカルボニル及びその他のビニル置換基又はアリル置換基、ならびにトリアルコキシシリル基などの反応性シリル基又はシリルオキシ基から選択される１つ以上の置換基を有していてもよく、あるいは、
Ｒ１３及びＲ１２又はＲ１３及びＲ１１は一緒に、−ＣＯＮＲ１５ＣＯを形成し、Ｒ１５は、Ｃ１〜２０アルキル基である、
ことを特徴とする、請求項７又は８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記コモノマーが、Ｃ１〜２４アルキル（アルク）−アクリレートもしくは−アクリルアミド、モノヒドロキシ−もしくはジヒドロキシ−Ｃ１〜６−アルキル（アルク）−アクリレートもしくは−アクリルアミド、オリゴ（Ｃ２〜３アルコキシ）Ｃ２〜１８−アルキル（アルク）−アクリレートもしくは−アクリルアミド、アクリルアミドスチレン、酢酸ビニル、又はＮ−ビニルラクタムなどの非イオン性コモノマーであることを特徴とする、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記マトリクスポリマーが、多イオン複合体であることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
前記ポリマーマトリクスが、共有結合によりクロスリンクしていることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
前記マトリクスポリマーが、二価以上のエチレン性不飽和モノマーを含有するエチレン性不飽和モノマーから形成されることを特徴とする、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
共有結合を形成させるために分子間反応が起こる条件が供される予め形成されたポリマー上の官能基の反応によって、共有結合によるクロスリンクが行われることを特徴とする、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
前記マトリクスポリマーが、ポリビニルアルコールをベースとすることを特徴とする、請求項１〜１４のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
前記ポリビニルアルコールが、ラジカル重合によるペンダントエチレン性不飽和クロスリンク基の反応によりクロスリンクすることを特徴とする、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
室温で生理食塩水を吸水させる場合、前記粒子が少なくとも３０重量％、好ましくは少なくとも５０重量％の水含量を有することを特徴とする、請求項１〜１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
前記粒子が実質的に球状であることを特徴とする、請求項１〜１７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１９】
十分に水を吸水させる場合、前記粒子の直径が１５０〜３０００μｍの範囲、好ましくは２００〜２０００μｍの範囲であることを特徴とする、請求項１〜１８のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
穏やかな攪拌で前記粒子が再分散しない範囲で、該粒子が合着しないような室温で貯蔵上安定であることを特徴とする、請求項１〜１９のいずれかに記載の組成物。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれかに記載の、治療又は診断のために動物に投与するための組成物を製造するためのポリマー粒子の使用方法。
【請求項２２】
前記組成物が塞栓を形成させるために投与されることを特徴とする、請求項２１に記載の使用方法。
【請求項２３】
子宮筋腫塞栓形成、腫瘍もしくは腫瘍切除部位周囲における血管の塞栓形成、拡張蛇行静脈もしくは精索静脈瘤の塞栓形成、動静脈奇形もしくは静脈奇形の塞栓形成、胃腸管出血の止血、瘻孔の塞栓形成、又は避妊目的でのファローピウス管もしくは精細管の塞栓形成のために前記組成物を投与することを特徴とする、請求項２２に記載の使用方法。
【請求項２４】
水不溶性かつ水吸収性のポリマーのマトリクスであるコアを含有し、室温において平衡状態で生理食塩水を吸水させる場合、４０〜４０００μｍの範囲の直径を有し、外部表面上に両性イオンを表出していることによって特徴づけられるミクロスフィア。
【請求項２５】
生理食塩水を十分に吸水させる場合、少なくとも３０重量％、好ましくは少なくとも５０重量％の水含量を有することを特徴とする、請求項２４に記載のミクロスフィア。
【請求項２６】
請求項２〜１７のいずれかに定義される特徴を有する、請求項２４又は２５に記載の組成物。
【請求項２７】
請求項２４又は２５に記載のミクロスフィアの複数の集団を各々別の容器に含有するキットであって、該集団は、粒子の直径の範囲で異なっていることを特徴とするキット。
【請求項２８】
室温において平衡状態で生理食塩水を吸水させる場合、前記ミクロスフィアの集団の各サイズの範囲が５０〜１０００μｍであり、好ましくは１５０〜３００μｍであることを特徴とする、請求項２７に記載のキット。
【請求項２９】
異なる前記集団の直径が、実質的に互いに重複していないことを特徴とする、請求項２８に記載のキット。
【請求項３０】
下記一般式Ｉの両性イオンモノマーを含有するエチレン性不飽和モノマーの逆懸濁重合方法であって、
ＹＢＸ Ｉ
式中、Ｙは、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＯ−Ａ−、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−Ｃ６Ｈ４−Ａ１−、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＨ２Ａ２、Ｒ２Ｏ−ＣＯ−ＣＲ＝ＣＲ−ＣＯ−Ｏ、ＲＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−Ｏ−、ＲＣＨ＝Ｃ（ＣＯＯＲ２）ＣＨ２ＣＯ−Ｏ、
から選択されるエチレン性不飽和基であり、
Ａは、−Ｏ−又はＮＲ１であり、
Ａ１は、結合、（ＣＨ２）ＩＡ２、及び（ＣＨ２）ＩＳＯ３−から選択され、Ｉは、１〜１２であり、
Ａ２は、結合、−Ｏ−、Ｏ−ＣＯ−、ＣＯ−Ｏ、ＣＯ−ＮＲ１−、−ＮＲ１−ＣＯ、Ｏ−ＣＯ−ＮＲ１−、ＮＲ１−ＣＯ−Ｏ−から選択され、
Ｒは、水素又はＣ１〜４アルキルであり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜４アルキル、又はＢＸであり、
Ｒ２は、水素、又は、Ｃ１〜４アルキルであり、
Ｂは、結合、又は１つ以上のフッ素置換基を任意選択により含有する直鎖分子状アルカンジイル、アルキレンオキサアルキレン、もしくはアルキレン（オリゴオキサルキレン）基であり、
Ｘは、両性イオン基であり、
混和製コモノマーを液状モノマー混合物として、連続液体非溶媒中に分散して分散相を形成する工程、開始剤を添加して該分散相中でラジカル重合を開始する工程、及び該分散相から形成された前記ポリマー粒子を回収する工程、
を含むことを特徴とする逆懸濁重合方法。
【請求項３１】
前記エチレン性不飽和モノマーが２価以上の官能性クロスリンクモノマーを含むことを特徴とする、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記モノマー混合物が水を含有することを特徴とする、請求項３０又は３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記モノマー混合物の添加前に、前記非溶媒が油中水型安定剤を含有していることを特徴とする、請求項３０、３１、又は３２のいずれかに記載の方法。
【請求項１】
水性液体を吸収させるポリマーマトリクスの粒子を含有する治療用組成物又は診断用組成物であって、
該粒子は４０〜４０００μｍの範囲の直径を有し、
該粒子の表面は両性イオン基を表出している、
ことを特徴とする、治療用組成物又は診断用組成物。
【請求項２】
前記ポリマーマトリクスが実質的に非生分解性であることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記粒子を懸濁するのに十分な量の連続水性媒体を含有することを特徴とする、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
無菌であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
前記両性イオン基が、リン酸アンモニウム、リン酸ホスホニウム、もしくは、リン酸スルホニウムであるか、又はリン酸エステル両性イオン基、より好ましくは下記一般式ＩＩの基であり、
式中、部分Ａ３及びＡ４は、同じであるか異なり、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、又は原子価結合、好ましくは−Ｏ−であり、
Ｗ＋は、アンモニウムカチオン基、ホスホニウムカチオン基、又はスルホニウムカチオン基を含有する基、ならびに好ましくはＣ１〜１２−アルカンジイル基であるアニオン部分及びカチオン部分を結合している基であり、
Ｗ＋は、式−Ｗ１−Ｎ＋Ｒ３３、−Ｗ１−Ｐ＋Ｒ４３、−Ｗ１−Ｓ＋Ｒ４２、又は−Ｗ１−Ｈｅｔ＋の基であることが好ましく、
Ｗ１は、１つ以上のエチレン性不飽和二重もしくは三重結合、二置換アリール（アリーレン）、アルキレンアリーレン、アリーレンアルキレン、もしくはアルキレンアリールアルキレン、シクロアルカンジイル、アルキレンシクロアルキル、シクロアルキルアルキレン、又はアルキレンシクロアルキルアルキレンを任意選択により含有する１つ以上、好ましくは２〜６個の炭素原子のアルカンジイルであり、基Ｗ１は、１つ以上のフッ素置換基及び／又は１つ以上の官能基を任意選択により含有し、
該基Ｒ３は、同じであるか異なり、各々は、水素又は１〜４個の炭素原子のアルキルであり、好ましくはメチル又はフェニルなどのアリールであるか、あるいは該基Ｒ３の２つは、それらが結合している窒素原子と一緒に、５〜７個の原子を含有する脂肪族複素環式環を形成するか、あるいは３つの該基Ｒ３は、それらが結合している窒素原子と一緒に、５〜７個の原子を有する複素芳香族環を形成し、それらの複素芳香族環のいずれかの環は、各環中に５〜７個の原子を含有する別の飽和環又は不飽和環と縮合して縮合環構造を形成することができ、任意選択により１つ以上の該基Ｒ３は、親水性官能基により置換され、
該基Ｒ４は、同じであるか異なり、各々は、Ｒ３又は基ＯＲ３であり、Ｒ３は、上記に定義された通りであるか、あるいは、
Ｈｅｔは、芳香族窒素、芳香族リン、又は芳香族硫黄、好ましくは例えばピリジンなどの窒素を含有する環である、
ことを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記両性イオン基が、下記一般式IIIを有し、
式中、該基Ｒ５は、同じであるか異なり、各々は、水素又はＣ１〜４アルキルであり、ｍは１〜４であり、好ましくは該基Ｒ５が同じであり、好ましくはメチルである、
ことを特徴とする、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記両性イオン基が、下記一般式Ｉのモノマーを含有するエチレン性不飽和モノマーから形成されるポリマー上のペンダント基であり、
ＹＢＸ Ｉ
式中、Ｙは、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＯ−Ａ−、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−Ｃ６Ｈ４−Ａ１−、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＨ２Ａ２、Ｒ２Ｏ−ＣＯ−ＣＲ＝ＣＲ−ＣＯ−Ｏ、ＲＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−Ｏ−、ＲＣＨ＝Ｃ（ＣＯＯＲ２）ＣＨ２ＣＯ−Ｏ、
から選択されるエチレン性不飽和基であり、
Ａは、−Ｏ−又はＮＲ１であり、
Ａ１は、結合、（ＣＨ２）ＩＡ２、及び（ＣＨ２）ＩＳＯ３−から選択され、Ｉは、１〜１２であり、
Ａ２は、結合、−Ｏ−、Ｏ−ＣＯ−、ＣＯ−Ｏ、ＣＯ−ＮＲ１−、−ＮＲ１−ＣＯ、Ｏ−ＣＯ−ＮＲ１−、ＮＲ１−ＣＯ−Ｏ−から選択され、
Ｒは、水素又はＣ１〜４アルキルであり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜４アルキル、又はＢＸであり、
Ｒ２は、水素又はＣ１〜４アルキルであり、
Ｂは、結合、又は１つ以上のフッ素置換基を任意選択により含有する直鎖分子状アルカンジイル、アルキレンオキサアルキレン、もしくはアルキレン（オリゴオキサルキレン）基であり、
Ｘは、両性イオン基である、
ことを特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
式中、Ｙは、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＯ−Ａであり、
Ｒは、好ましくは水素又はメチルであり、
Ａは、好ましくはＯ又はＮＨである、
ことを特徴とする請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記エチレン性不飽和モノマーが、例えば下記一般式Ｖの化合物であるコモノマーをさらに含有し、
式中、Ｒ１０は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキル、及び基ＣＯＯＲ１４から選択され、
Ｒ１４は、水素及びＣ１〜４アルキルから選択され、
Ｒ１１は、水素、ハロゲン、及びＣ１〜４アルキルから選択され、
Ｒ１２は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜４アルキル、及び基ＣＯＯＲ１４から選択され、但し、Ｒ１０及びＲ１２は両方ともＣＯＯＲ１４ではなく、
Ｒ１３は、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ１〜２０アルコキシカルボニル、モノ−（Ｃ１〜２０アルキル）アミノカルボニルもしくはジ−（Ｃ１〜２０アルキル）アミノカルボニル、Ｃ６〜２０アリール（アルカリールを含む）、Ｃ７〜２０アラルキル、Ｃ６〜２０アリールオキシカルボニル、Ｃ１〜２０−アラルキルオキシカルボニル、Ｃ６〜２０アリールアミノカルボニル、Ｃ７〜２０アラルキル−アミノ、ヒドロキシル、又はＣ２〜１０アシルオキシ基であり、それらはいずれも、ハロゲン原子、アルコキシ、オリゴ−アルコキシ、アリールオキシ、アシルオキシ、アシルアミノ、アミン（モノアルキルアミノ及びジアルキルアミノならびにトリアルキルアンモニウムを含み、アルキル基は置換されていてもよい）、カルボキシル、スルホニル、ホスホリル、ホスフィノ、（モノアルキルホスフィン及びジアルキルホスフィンならびにトリアルキルホスホニウムを含む）、両性イオン、ヒドロキシル基、ビニルオキシカルボニル及びその他のビニル置換基又はアリル置換基、ならびにトリアルコキシシリル基などの反応性シリル基又はシリルオキシ基から選択される１つ以上の置換基を有していてもよく、あるいは、
Ｒ１３及びＲ１２又はＲ１３及びＲ１１は一緒に、−ＣＯＮＲ１５ＣＯを形成し、Ｒ１５は、Ｃ１〜２０アルキル基である、
ことを特徴とする、請求項７又は８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記コモノマーが、Ｃ１〜２４アルキル（アルク）−アクリレートもしくは−アクリルアミド、モノヒドロキシ−もしくはジヒドロキシ−Ｃ１〜６−アルキル（アルク）−アクリレートもしくは−アクリルアミド、オリゴ（Ｃ２〜３アルコキシ）Ｃ２〜１８−アルキル（アルク）−アクリレートもしくは−アクリルアミド、アクリルアミドスチレン、酢酸ビニル、又はＮ−ビニルラクタムなどの非イオン性コモノマーであることを特徴とする、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記マトリクスポリマーが、多イオン複合体であることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
前記ポリマーマトリクスが、共有結合によりクロスリンクしていることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
前記マトリクスポリマーが、二価以上のエチレン性不飽和モノマーを含有するエチレン性不飽和モノマーから形成されることを特徴とする、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
共有結合を形成させるために分子間反応が起こる条件が供される予め形成されたポリマー上の官能基の反応によって、共有結合によるクロスリンクが行われることを特徴とする、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
前記マトリクスポリマーが、ポリビニルアルコールをベースとすることを特徴とする、請求項１〜１４のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
前記ポリビニルアルコールが、ラジカル重合によるペンダントエチレン性不飽和クロスリンク基の反応によりクロスリンクすることを特徴とする、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
室温で生理食塩水を吸水させる場合、前記粒子が少なくとも３０重量％、好ましくは少なくとも５０重量％の水含量を有することを特徴とする、請求項１〜１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
前記粒子が実質的に球状であることを特徴とする、請求項１〜１７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１９】
十分に水を吸水させる場合、前記粒子の直径が１５０〜３０００μｍの範囲、好ましくは２００〜２０００μｍの範囲であることを特徴とする、請求項１〜１８のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
穏やかな攪拌で前記粒子が再分散しない範囲で、該粒子が合着しないような室温で貯蔵上安定であることを特徴とする、請求項１〜１９のいずれかに記載の組成物。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれかに記載の、治療又は診断のために動物に投与するための組成物を製造するためのポリマー粒子の使用方法。
【請求項２２】
前記組成物が塞栓を形成させるために投与されることを特徴とする、請求項２１に記載の使用方法。
【請求項２３】
子宮筋腫塞栓形成、腫瘍もしくは腫瘍切除部位周囲における血管の塞栓形成、拡張蛇行静脈もしくは精索静脈瘤の塞栓形成、動静脈奇形もしくは静脈奇形の塞栓形成、胃腸管出血の止血、瘻孔の塞栓形成、又は避妊目的でのファローピウス管もしくは精細管の塞栓形成のために前記組成物を投与することを特徴とする、請求項２２に記載の使用方法。
【請求項２４】
水不溶性かつ水吸収性のポリマーのマトリクスであるコアを含有し、室温において平衡状態で生理食塩水を吸水させる場合、４０〜４０００μｍの範囲の直径を有し、外部表面上に両性イオンを表出していることによって特徴づけられるミクロスフィア。
【請求項２５】
生理食塩水を十分に吸水させる場合、少なくとも３０重量％、好ましくは少なくとも５０重量％の水含量を有することを特徴とする、請求項２４に記載のミクロスフィア。
【請求項２６】
請求項２〜１７のいずれかに定義される特徴を有する、請求項２４又は２５に記載の組成物。
【請求項２７】
請求項２４又は２５に記載のミクロスフィアの複数の集団を各々別の容器に含有するキットであって、該集団は、粒子の直径の範囲で異なっていることを特徴とするキット。
【請求項２８】
室温において平衡状態で生理食塩水を吸水させる場合、前記ミクロスフィアの集団の各サイズの範囲が５０〜１０００μｍであり、好ましくは１５０〜３００μｍであることを特徴とする、請求項２７に記載のキット。
【請求項２９】
異なる前記集団の直径が、実質的に互いに重複していないことを特徴とする、請求項２８に記載のキット。
【請求項３０】
下記一般式Ｉの両性イオンモノマーを含有するエチレン性不飽和モノマーの逆懸濁重合方法であって、
ＹＢＸ Ｉ
式中、Ｙは、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＯ−Ａ−、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−Ｃ６Ｈ４−Ａ１−、Ｈ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＨ２Ａ２、Ｒ２Ｏ−ＣＯ−ＣＲ＝ＣＲ−ＣＯ−Ｏ、ＲＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−Ｏ−、ＲＣＨ＝Ｃ（ＣＯＯＲ２）ＣＨ２ＣＯ−Ｏ、
から選択されるエチレン性不飽和基であり、
Ａは、−Ｏ−又はＮＲ１であり、
Ａ１は、結合、（ＣＨ２）ＩＡ２、及び（ＣＨ２）ＩＳＯ３−から選択され、Ｉは、１〜１２であり、
Ａ２は、結合、−Ｏ−、Ｏ−ＣＯ−、ＣＯ−Ｏ、ＣＯ−ＮＲ１−、−ＮＲ１−ＣＯ、Ｏ−ＣＯ−ＮＲ１−、ＮＲ１−ＣＯ−Ｏ−から選択され、
Ｒは、水素又はＣ１〜４アルキルであり、
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜４アルキル、又はＢＸであり、
Ｒ２は、水素、又は、Ｃ１〜４アルキルであり、
Ｂは、結合、又は１つ以上のフッ素置換基を任意選択により含有する直鎖分子状アルカンジイル、アルキレンオキサアルキレン、もしくはアルキレン（オリゴオキサルキレン）基であり、
Ｘは、両性イオン基であり、
混和製コモノマーを液状モノマー混合物として、連続液体非溶媒中に分散して分散相を形成する工程、開始剤を添加して該分散相中でラジカル重合を開始する工程、及び該分散相から形成された前記ポリマー粒子を回収する工程、
を含むことを特徴とする逆懸濁重合方法。
【請求項３１】
前記エチレン性不飽和モノマーが２価以上の官能性クロスリンクモノマーを含むことを特徴とする、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記モノマー混合物が水を含有することを特徴とする、請求項３０又は３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記モノマー混合物の添加前に、前記非溶媒が油中水型安定剤を含有していることを特徴とする、請求項３０、３１、又は３２のいずれかに記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図２】
【図３】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【公表番号】特表２００６−５０８７１０（Ｐ２００６−５０８７１０Ａ）
【公表日】平成１８年３月１６日（２００６．３．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５３９１９１（Ｐ２００４−５３９１９１）
【出願日】平成１５年９月２３日（２００３．９．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００３／００４０７５
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０２８５６９
【国際公開日】平成１６年４月８日（２００４．４．８）
【出願人】（３０３０３９７８５）バイオコンパティブルズ ユーケー リミテッド (23)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年３月１６日（２００６．３．１６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１５年９月２３日（２００３．９．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００３／００４０７５
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０２８５６９
【国際公開日】平成１６年４月８日（２００４．４．８）
【出願人】（３０３０３９７８５）バイオコンパティブルズ ユーケー リミテッド (23)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]